RU2536295C2

RU2536295C2 - Композиция, содержащая комбинацию по меньшей мере одного протеолитического фермента и по меньшей мере одного липолитического фермента, для применения в предотвращении синтеза триглицеридов

Info

Publication number: RU2536295C2
Application number: RU2012126983/15A
Authority: RU
Inventors: Макс РОМБИ
Original assignee: Имарко Рисёч С.А.
Priority date: 2010-10-29
Filing date: 2011-10-28
Publication date: 2014-12-20
Also published as: US20130216518A1; MX2012007670A; AU2011322462C1; JP5834027B2; AU2011322462B9; US20130323219A1; MX340828B; FR2966734B1; CA2785887A1; CN102811731A; CA2785887C; FR2966734A1; EP2504026B1; PL2504026T3; JP2013521262A; AU2011322462B2; AU2011322462A1; ES2537716T3; EP2504026A1; US9375461B2

Abstract

Группа изобретений относится к композиции, содержащей смесь по меньшей мере одного протеолитического фермента, такого как субтилизин или наттокиназа, и по меньшей мере одного липолитического фермента, выбранного из группы, включающей липазу Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum, Candida rugosa или смесь этих липаз, для применения в предотвращении синтеза триглицеридов путем расщепления 2-моноацилглицерина в кишечнике и к комбинированному продукту указанных ферментов того же назначения. Технический результат состоит в предотвращении образования триглицеридов в организме под действием заявленной комбинации субтилизина и липаз, причем сниженный уровень липопротеинов сохранялся в крови через 8 суток после её приема. Изобретения можно использовать в качестве лекарственного средства, косметического агента, медицинского средства, пищевой композиции, пищевой добавки или нутрицевтика для предупреждения или лечения ожирения, атеросклероза, для предупреждения или снижения избыточной массы. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей комбинацию по меньшей мере одного протеолитического фермента, такого как субтилизин, и по меньшей мере одного липолитического фермента, для применения в предотвращении синтеза триглицеридов преимущественно путем расщепления 2-моноацилглицерина в кишечнике. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению содержит несколько липаз. Изобретение также относится к такой композиции для применения в качестве лекарственного средства, косметического агента, медицинского средства, пищевой композиции, пищевой добавки или нутрицевтика, а именно для применения в профилактике или лечении ожирения, атеросклероза, диабета 2 типа или для применения в профилактике или снижении избыточной массы.

В настоящее время общеизвестно, что увеличение частоты встречаемости избыточной массы и ожирения, диабета 2 типа, сердечно-сосудистого заболевания и упадка сил у многих людей в промышленно развитых странах является результатом неудовлетворительного использования калорий, содержащихся в продуктах, которые мы потребляем, которые большей частью содержат очень много жира. Этот метаболический дефицит или метаболический синдром затрагивает около 50 миллионов американцев (примерно одного взрослого американца из четырех) и приблизительно 30 миллионов европейцев. Приблизительно 7% взрослых в возрасте от 20 до 30 лет и 40% взрослых старше 40 лет удовлетворяют критериям развития этого синдрома.

Метаболический синдром означает совокупность факторов, которые наблюдаются одновременно и увеличивают риск сердечно-сосудистого заболевания, инсульта и диабета 2 типа. Наличие только одного из этих факторов - увеличение кровяного давления, высокий уровень инсулина, избыточный жир в области талии или аномальный уровень холестерина - увеличивает риск развития тяжелой болезни; когда несколько факторов объединяются, риск еще больше увеличивается.

Жиры, благодаря их физическим, химическим и физиологическим свойствам, играют важную роль в питании человека. В дополнение к жирам, потребляемым человеком в форме пищи, организм сам по себе производит липиды.

Пищевые жиры и жиры из жировой ткани состоят в основном из триглицеридов. Триглицерид представляет собой молекулу глицерина с тремя жирными кислотами, связанными с ним. Триглицериды классифицируются как липиды (жиры), но только три жирные кислоты являются жирами, поскольку глицерин представляет собой полиол, который относится скорее к классу углеводов. Например, глицерин растворим в воде, а не в масле; таким образом, глицерин не является жиром.

Различия в структуре жирных кислот, связанных с глицерином, делают эти жиры различными и влияют на их состояние вязкости. Поэтому существует большое разнообразие триглицеридов в пищевых продуктах, таких как оливковое, подсолнечное и соевое масла, сливочное масло, твердый животный жир, лярд, маргарин и т.д.

Эти жирные кислоты усваиваются в кишечнике с помощью процесса, общего для всех триглицеридов, которые не усваиваются сами по себе.

Они должны расщепляться на диглицериды, моноглицериды и свободные жирные кислоты под действием липаз в пищеварительном тракте; только эти различные продукты способны усваиваться, в отличие от триглицеридов.

Липолитические липазы или ферменты представляют собой ферменты, секретируемые в полости рта, желудке и поджелудочной железе, которые расщепляют Триглицериды (TAG) на достаточно маленькие молекулы, пригодные для усвоения. К сожалению, липазы атакуют Триглицериды (TAG) только в положениях 1 и 3 глицерина, что приводит к образованию свободных жирных кислот и 2-моноацилглицерина (молекула глицерина, содержащая одну жирную кислоту, связанную в положении 2).

Если липазная активность увеличивается, то можно получить еще больше свободных жирных кислот и глицерина. Все эти молекулы способны усваиваться организмом.

Но именно здесь возникают осложнения: как только эти продукты усвоятся, организм вновь синтезирует (повторно образует) в эпителиальных клетках кишечника (энтероцитах) Триглицериды, которые были расщеплены в значительной мере на свободные жирные кислоты и 2-моноацилглицерин липазами, такими как панкреатические липазы (см. Фиг.1, на которой представлено разложение триглицеридов (триацилглицерин, TAG) липазами, затем повторное образование триглицеридов в клетках кишечника).

Это повторное образование триглицеридов (TAG) достигается, в частности, благодаря активности четырех ферментов (ацил-КоА-синтетаза, моноглицерид-трансацилаза, диглицерид-трансацилаза и диглицерид-синтетаза), которые действуют на некоторых стадиях синтеза.

Свободные жирные кислоты затем будут связываться с 2-моноацилглицерином в положениях 1 и 3, что приведет к образованию триглицеридов. Эти триглицериды, которые не растворимы в крови, будут вынуждены объединяться в хиломикроны, которые будут включаться в VLDL (липопротеины очень низкой плотности), LDL (липопротеины низкой плотности) и HDL (липопротеины высокой плотности) и будут транспортировать по всему организму триглицериды (TAG), холестерин и фосфолипиды.

Эти новые триглицериды, таким образом, будут связываться в липопротеинах и запасаться в адипоцитах (жировые клетки). Триглицериды, ассимилированные организмом, после расщепления на жиры меньших размеров снова запасаются в виде триглицеридов. Таким образом, организм не использует их энергию немедленно, поскольку они запасаются в адипоцитах. Организм не может метаболизировать жирные кислоты, когда они связаны с глицерином, в триглицеридах. Для того чтобы метаболизироваться, жирные кислоты должны быть свободными.

Этот метаболический дефект, который некоторые называют геном ожирения (James V. Neel - Diabetes Mellitus: a "thrifty" genotype rendered detrimental by "progress" - American Journal of Human Genetics - vol.14 - pages 353-362 (Сахарный диабет: "экономичный" генотип, ставший вредным в результате "прогресса")), который приводит к повторному образованию и накоплению триглицеридов, был преимуществом для раннего человека, тысячи лет назад. Действительно, эта способность запасать жиры была необходимой для выживания. Во время благоприятных периодов, когда охота позволяла убивать диких животных, человек много ел и сохранял жиры в запасе. Человек, запасая жир таким путем, затем мог переживать длительные периоды голода, расходуя свои жировые запасы в эти тяжелые времена.

Все это было хорошо объяснено Stephen Cunnane в его книге "The survival of the fattest," ("Выживание жирнейших") (The Key to Human Brain Evolution, World Scientific Publishing Co, New Jersey, United States, 2005, www.worldscibooks.com), который объясняет, что люди с наибольшими жировыми запасами лучше переживали длительные периоды нехватки пищи.

Это те же люди, которые обогащали свой головной мозг омега-3 жирными кислотами и которые стали более разумными и более развитыми, чем их собратья. Таким образом, во время этого периода метаболический дефект был эволюционным преимуществом и был также преимуществом с точки зрения естественного отбора. Это представляет собой, в частности, ситуацию, при которой Homo sapiens возник из первобытных видов Homo.

Наглядным является пример меланезийцев. Эти люди покинули Тайвань на аутригерах и затем заселили все тихоокеанские острова. Те, кто преодолел морское путешествие, были людьми с наибольшими запасами жира.

Естественный отбор содействовал выживанию самых толстых, кто затем имел детей с геном ожирения. Поэтому 60-70% меланезийцев являются диабетиками 2 типа.

Но в настоящее время в развитых странах, где голод удовлетворяется возможно в избытке, эта способность к накоплению стала катастрофой. Действительно, ресинтез триглицеридов в энтероцитах или клетках кишечника имеет катастрофические последствия для здоровья человеческих существ. В частности, это повторное образование триглицеридов индуцирует:

- увеличение размера и количества хиломикронов, которые транспортируют триглицериды, холестерин и фосфолипиды в крови,

- увеличение рисков атеросклероза, облегчение образования артериальной бляшки и часто артериального тромбоза благодаря тому, что все жирные кислоты "захвачены" триглицеридами и не метаболизируются организмом,

- увеличение уровня "плохого" холестерина в кровотоке,

- увеличение количества и размера жировых клеток и, таким образом, увеличение массы или развитие ожирения.

Кроме того, избыточные триглицериды в крови снижают количество свободных жирных кислот, доступных для метаболизма; таким образом, недостаток энергии.

Поэтому в некоторых тяжелых случаях, когда ген ожирения является совершенно очевидным, даже после еды есть чувство нехватки питательных веществ, имеющихся в крови. Это неприятное чувство создает желание перекусить, постоянное чувство голода, которое побуждает к потреблению пищи и напитков для улучшения самочувствия.

Этот метаболический дефект, факт неспособности использовать калории, содержащиеся в жирных кислотах, которые мы усваиваем, но которые в триглицеридной форме не утилизируются, поскольку жирные кислоты "улавливаются" ею, приводит к совокупности осложнений, названных Ривеном (Reaven) синдромом Х или Капланом (Kaplan) "смертельным квартетом":

- G.M.Reaven - Stanford University School of Medicine - Division of Endocrinology, Gerontology and Metabolism, Department of Veterans Affairs Medical Center. Palo Alto, CA, USA - Syndrome X: 6 years later - Journal of Internal Medicine 1994; 236 (Supplement 736): 13-22; G.M.Reaven - Simon & Schuster - Rockefeller Center, 1230 Avenue of the Americas - New York, NY 10020 - Syndrome X - Overcoming the silent killer that can give you a heart attack - Copyright 2000 G.M. Raven, T. Strom and B. Fox;

- Norman M. Kaplan MD - The Deadly Quartet-Arch Inter. Med - vol 149, July 1989:1514-1520.

Чтобы получить энергию, в которой он нуждается, наш организм, лишенный жирных кислот, доступных для метаболизма, будет использовать глюкозу, которая присутствует везде в организме. Это то, что заставляет нас говорить, что люди являются гибридными носителями. Но глюкоза, в отличие от жирных кислот, имеет много недостатков:

- при сжигании она высвобождает только четыре калории на грамм, тогда как жирные кислоты высвобождают девять калорий на грамм,

- но самое главное, глюкоза, необходимая для использования и для проникновения в клетки, нуждается в гормоне инсулине. Кроме того, для того, чтобы глюкоза проникла во все его клетки, организм должен секретировать еще больше инсулина, сверх своих способностей, и в экстремальных условиях. Таким образом, в какой-то момент времени организм и, в частности, поджелудочная железа больше не может секретировать так много инсулина, что является причиной феномена инсулинорезистентности; глюкоза накапливается в крови и не может больше проникать в клетки. Это называется непереносимостью глюкозы; организм становится инсулинорезистентным.

Эта гиперинсулинемия имеет перверсивные эффекты; слишком много инсулина препятствует выходу жирных кислот из жировых клеток, который называется липолизом. Таким образом, имеется еще больший дефицит жирных кислот, доступных для использования; поскольку жирные кислоты больше не покидают жировые клетки, нет никакой возможности потери массы, особенно для лиц, страдающих от ожирения. Таким образом, дефицит имеющихся жирных кислот становится еще большим, и глюкоза используется еще более интенсивно в метаболизме, откуда возникают еще и другие осложнения, такие как повышение триглицеридемии и холестеринемии.

Все эти метаболические расстройства приводят к дислипидемии, гипертензии, гиперурикемии и уровню глюкозы выше нормы, поскольку глюкоза плохо проникает в клетки и накапливается в крови, вызывая гипергликемию.

Все эти метаболические осложнения затем могут привести к диабету 2 типа, который сохраняется в течение длительного времени. Накопление жира в жировых клетках, в частности, в животе и около линии талии у мужчин и в ягодицах у женщин также будет сохраняться в течение длительного времени.

Все эти метаболические проблемы будут оказывать влияние на настроение индивидуума, которое поэтому часто падает до низшей точки, что может привести к эмоциональной неустойчивости или нервному срыву у указанного индивидуума, страдающего от этих метаболических расстройств, с особенно сильным чувством неудовлетворенности и постоянного голода.

Более того, головной мозг при этом плохо снабжается. Избыточный инсулин нарушает многие параметры крови: адипоцитокины, TNPβ, IL-6, PAI 1, адипозин, ангиотензиноген, лептин, адипонектин, резистин, MCSF, TGFL и т.д. повышаются в крови. Все эти воспалительные продукты усугубляют биологическую неустойчивость и дестабилизируют липидный и углеводный метаболизм у индивидуума.

В предшествующей работе искали новые пути обхода синтеза триглицеридов и преодоления этого метаболического дефекта.

Таким образом, были обнаружены различные способы сокращения запасов жировых клеток и обеспечения биодоступности жирных кислот, запасенных в этих жировых клетках.

Вещества, больше всего используемые для этой цели, включают в себя богатый флавоноидами чайный экстракт для блокирования фермента O'-метилтрансферазы, которая разлагает адреналин, или богатый флаван-3-олом экстракт виноградных косточек и богатую биофлавоноидами сосновую кору, причем последние оба увеличивают термогенез, т.е. высвобождение жирных кислот из жировых клеток; аналогично, полифенолы, экстрагированные из какао, оказывают такой же эффект.

Он состоял в облегчении высвобождения жиров, заключенных в жировых клетках, для чего интенсивно использовали амфетамины и другие изомеры или медиатор. Но эти продукты были очень опасными и все в настоящее время запрещены.

Предприняли также попытку «замкнуть» жировые клетки конъюгированной линолевой кислотой (CLA), которая не вступает в цикл синтеза триацилглицерина (TAG), и среднецепочечными маслами, которые сжигаются без прохождения через жировые клетки.

Заявитель пытался найти наилучший способ противостояния метаболическому синдрому, борьбы с геном ожирения и использования энергии жиров, в то же время не стимулируя образование жировых отложений.

Заявитель отметил, что многие лаборатории предложили применение липаза-блокирующих агентов с целью предотвращения разложения и повторного образования TAG.

Но заявитель неожиданно обнаружил, что антилипазные продукты были абсолютно не эффективными в потере массы и в действительности оказывали вредное воздействие на организм посредством увеличения количества TAG, остающегося в кишечнике.

Решение, предложенное в настоящем изобретении, заключается в ингибировании, снижении и/или предотвращении повторного образования триглицеридов в энтероцитах или клетках кишечника организма путем применения комбинации протеолитического фермента или протеазы по меньшей мере с одним липолитическим ферментом или липазой.

Путем введения таких протеолитических ферментов, особенно липаз, повторного синтеза (ресинтеза) триглицеридов избегают изящным способом и без какой-либо опасности для организма.

Таким образом, заявитель обнаружил, что:

- протеолитические ферменты препятствуют активности четырех ферментов (ацил-КоА-синтетаза, моноглицерид-трансацилаза, диглицерид-трансацилаза и диглицерид-синтетаза) в энтероците, которые облегчают ресинтез триглицеридов,

- но особенно, если используют конкретные липазы, которые действуют преимущественно в положении 2 на триглицеридах из кишечника, снижается продукция 2-моноацилглицерина, который является ключевым элементом ресинтеза триглицеридов. Этот метаболический путь известен всем биохимикам как представляющий собой путь синтеза 80% триглицеридов; другой менее эффективный путь представляет собой ресинтез из глицерин-3-фосфата и дает только 20% триглицеридов.

Таким образом, предметом изобретения является композиция, содержащая комбинацию по меньшей мере одного протеолитического фермента или протеазы и по меньшей мере одного липолитического фермента или липазы, для ее применения в предотвращении синтеза или повторного образования триглицеридов, особенно в энтероцитах или клетках кишечника, преимущественно путем расщепления 2-моноацилглицерина.

Предпочтительно, согласно настоящему изобретению протеолитический фермент выбран из группы, включающей субтилизин, нагарсе (nagarse), наттокиназу, химотрипсин, трипсин, эластазу, термолизин, серрапептазу и их смеси.

В особенно предпочтительном воплощении согласно настоящему изобретению протеолитический фермент представляет собой субтилизин или наттокиназу или смесь субтилизина или наттокиназы с одним или более другими протеолитическими ферментами.

Согласно конкретному признаку настоящего изобретения протеолитический фермент присутствует в количестве 5-30 мас.%, в характерном случае 10-20 мас.% относительно общей массы композиции.

Согласно другому особому признаку настоящего изобретения липолитический фермент присутствует в соотношении 70-95 мас.%, в характерном случае 80-90 мас.% относительно общей массы композиции.

Предпочтительно, согласно настоящему изобретению композиция обеспечивает введение суточной дозы протеолитического фермента, варьирующейся от 10 мг до 200 мг, более конкретно от 10 мг до 100 мг, в характерном случае от 20 мг до 100 мг, например от 50 мг до 100 мг.

Предпочтительно, согласно настоящему изобретению композиция обеспечивает введение суточной дозы липолитического фермента, варьирующейся от 100 мг до 400 мг, более конкретно от 100 мг до 300 мг, в характерном случае от 100 мг до 200 мг или от 200 мг до 300 мг.

В конкретном примере осуществления настоящего изобретения композиция приготовлена для перорального введения.

Предпочтительно, согласно настоящему изобретению композиция предложена в форме твердой или мягкой капсулы, таблетки, гранулы, порошка или перорального раствора.

Согласно конкретному признаку настоящего изобретения композиция предложена в форме твердой или мягкой капсулы или гастрорезистентной таблетки.

Предпочтительно, композиция является гастрорезистентной, так что композиция высвобождает протеолитический фермент и липолитический фермент в кишечнике.

В предпочтительном воплощении согласно настоящему изобретению композиция представляет собой фармацевтическую, косметическую, нутрицевтическую или пищевую композицию, пищевую добавку или медицинское средство и может содержать любой носитель или подходящий эксципиент, приемлемый с фармацевтической, косметической, пищевой или нутрицевтической точки зрения, а также традиционные добавки, известные специалисту в данной области.

В предпочтительном воплощении согласно настоящему изобретению композиция содержит по меньшей мере одну липазу, такую как липаза, экстрагированная из Thermomyces lanuginosus, Rhizopus niveus, Penicillium roqueforti, Penicillium camemberti, Geotrichum candidum, Candida rugosa, Candida lipolytica, Candida parapsilosis, Aspergillus niger, Rhizopus oryzae, Mucor javanicus, или липазу из Candida anthartica, Geotrichum candidum или липазу, экстрагированную из овса, а также их смеси.

В особенно предпочтительном воплощении композиция содержит несколько липаз.

Предпочтительно, липазы, используемые в контексте настоящего изобретения, являются активными в положении 2 на триглицеридах и будут снижать уровень 2-моноацилглицерина и предотвращать повторное образование триглицеридов: путь, который продуцирует 80% триглицеридов.

Согласно конкретному признаку изобретения композиция содержит по меньшей мере одну липазу, выбранную из группы, включающей липазу Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum, Candida rugosa и двойную или тройную смеси этих липаз. В характерном случае, композиция содержит смесь Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum и Candida rugosa.

В конкретном примере осуществления композиция по настоящему изобретению предназначена для применения в предупреждении или снижении избыточной массы, липогенеза или избыточного холестерина или в качестве антицеллюлитного агента, в характерном случае в косметической композиции или медицинском устройстве.

В другом конкретном примере осуществления композиция или продукт по настоящему изобретению предназначены для применения в предупреждении или лечении ожирения или атеросклероза, или сердечно-сосудистых расстройств, или диабета 2 типа, и в общем того, что называют метаболическим синдромом, для борьбы с геном ожирения.

Предметом изобретения также является композиция или продукт, содержащий:

- по меньшей мере один протеолитический фермент, такой как субтилизин, и

- по меньшей мере одну липазу, такую как липаза Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum, липаза из Candida rugosa или двойную или тройную смесь этих липаз,

в виде комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения для предотвращения синтеза триглицеридов преимущественно путем расщепления 2-моноацилглицерина в кишечнике.

Предпочтительно, согласно настоящему изобретению протеолитический фермент выбран из группы, включающей субтилизин, нагарсе, наттокиназу, химотрипсин, трипсин, эластазу, термолизин, серрапептазу и их смеси.

В предпочтительном воплощении согласно настоящему изобретению липаза экстрагирована из Thermomyces lanuginosus, Rhizopus niveus, Penicillium roqueforti, Penicillium camemberti, Geotrichum candidum, Candida rugosa, Candida lipolytica, Candida parapsilosis, Aspergillus niger, Rhizopus oryzae, Mucor javanicus или экстрагирована из Candida anthartica, Geotrichum candidum или из овса.

Протеазы в характерном случае вводят в форме желатиновой капсулы. Протеазы предпочтительно вводят от двух до трех раз в сутки, одну желатиновую капсулу с каждой едой.

В характерном случае, продукт содержит по меньшей мере одну липазу из Candida anthartica, такую как липаза Cal A или Cal B из Candida anthartica, липазу из Geotrichum candidum, липазу из Candida rugosa и/или липазу, экстрагированную из овса. Это является особенно предпочтительным, поскольку эти липазы действуют в положении 2 на триглицеридах и таким образом расщепляют 2-моноацилглицерин и помогают протеазам предотвращать повторное образование триглицеридов в организме. Без 2-моноацилглицерина ресинтез TAG является гораздо более трудным (вспомните, что этот путь продуцирует 80% TAG в организме).

Липазы в характерном случае вводят в форме желатиновой капсулы. Липазы предпочтительно вводят три раза в сутки, одну желатиновую капсулу с каждой едой.

В конкретном примере осуществления композиция или продукт по настоящему изобретению предназначены для применения в качестве лекарственного средства, косметического агента, медицинского средства, пищевой композиции, нутрицевтика или пищевой добавки.

В конкретном примере осуществления композиция или продукт по настоящему изобретению предназначены для их применения в предупреждении или снижении избыточной массы, липогенеза или избыточного холестерина или в качестве антицеллюлитного агента.

В другом конкретном примере осуществления композиция или продукт по настоящему изобретению предназначены для их применения в предупреждении или лечении ожирения, атеросклероза, сердечно-сосудистых расстройств или диабета 2 типа, и в общем того, что называют метаболическим синдромом, для борьбы с геном ожирения.

Следующие примеры предназначены для иллюстрации изобретения без ограничения его объема каким-либо образом.

Пример 1: Исследование активности, индуцированной путем введения комбинации протеолитических Ферментов, таких как субтилизин, и липолитических Ферментов, таких как липаза Cal А из Candida anthartica, Geotrichum candidum и липаза из Candida ruaosa, для предотвращения синтеза триглицеридов.

Исследование активности и тестируемых доз проводили с использованием крыс. Этих крыс делили на три группы (условия тестирования) из 10.

Первое условие: контрольная группа, не получала активного продукта.

Два других условия, каждое из которых включает группы из 10 крыс, которые получали в течение 8 суток (один раз в сутки) соответственно смесь 50 мг субтилизина и 100 мг липазы Cal А из Candida anthartica для группы 1, и смесь 50 мг субтилизина и 50 мг липазы из Geotrichum candidum, а также 50 мг липазы из Candida rugosa для группы 2.

Через 8 суток все крысы, включая контрольную группу, получали дозу оливкового масла, эквивалентную столовой ложке для человека (15 мл).

После этого введения оливкового масла всем крысам брали образцы крови от всех животных через 1 час, 2,5 часа и 5 часов после введения оливкового масла. Уровни триглицеридов затем рассчитывали из образцов крови.

У контрольных крыс обнаружили высокое количество TAG в крови для трех образцов (1 ч, 2,5 ч и 5 ч).

Группы 1 и 2 не имели TAG в крови.

Оливковое масло затем снова вводили дважды с интервалом в одну неделю - условия 1 и 2, в то же время продолжая давать субтилизин в комбинации с липазами, упомянутыми выше.

Результаты были такими же, как и эти два других раза.

TAG не образовывался вновь в группах 1 и 2, тогда как контрольная группа имела высокую концентрацию TAG в крови для трех образцов.

Таким образом, можно заключить, что комбинация субтилизина и липаз предотвращала образование триглицеридов (TAG).

Пример 2: Исследование 10 миниатюрных свиней

Исследование проводили на 10 миниатюрных свиньях.

Этих свиней разделяли на четыре группы:

- одна контрольная свинья

- три свиньи в группе 1

- три свиньи в группе 2

- три свиньи в группе 3

Контрольная свинья не получала фермент.

В трех других условиях свиньи получали три формулы ферментов.

Формула 1 состояла из 10 мг субтилизина и 300 мг липазы Cal А, а также панкреатина. Ее вводили свиньям из группы 1 в дозе 20 мг/кг.

Формула 2 состояла из 10 мг субтилизина и 300 мг липазы из Candida rugosa, а также панкреатина. Ее вводили свиньям из группы 2 в дозе 40 мг/кг.

Формула 3 состояла из 10 мг субтилизина и 300 мг липазы из Geotrichum candidum, а также панкреатина. Ее вводили свиньям из группы 3 в дозе 40 мг/кг.

Формулы давали в течение 8 суток, один раз в сутки.

Результаты (уровни триглицеридов) измеряли в образцах крови, которые брали каждые 2 часа в течение 2 суток.

Результаты данного исследования показали, что контрольная свинья продуцировала большое количество триглицеридов, тогда как свиньи в трех других условиях продуцировали относительно мало триглицеридов (см. Фиг.2).

Второе исследование проводили через 8 суток, используя на этот раз в качестве контрольных животных одну свинью из каждого условия, упомянутого выше (одна свинья из группы 1, одна свинья из группы 2 и одна свинья из группы 3).

Две оставшиеся свиньи на партию получали такие же ферментные формулы, как и свиньи, упомянутые выше.

Затем отметили, что ни одна из свиней не продуцировала много триглицеридов, включая контрольных свиней. Таким образом, можно заключить, что ферменты, которые давали за 8 суток до этого, все еще были активны в крови с замедленным эффектом, и что липопротеины снижались у контрольных животных, которые получали ферменты за 8 суток до этого.

Claims

1. Композиция, содержащая смесь по меньшей мере одного протеолитического фермента, такого как субтилизин или наттокиназа, и по меньшей мере одного липолитического фермента, выбранного из группы, включающей липазу Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum, Candida rugosa или смесь этих липаз, для применения в предотвращении синтеза триглицеридов путем расщепления 2-моноацилглицерина в кишечнике.

2. Композиция по п.1 для применения в качестве лекарственного средства.

3. Композиция по п.1 для применения в качестве медицинского средства.

4. Композиция по п.1 для применения в качестве косметического агента, пищевой композиции, нутрицевтика или пищевой добавки.

5. Композиция по п.4 для применения в профилактике или снижении избыточной массы, липогенеза или избыточного холестерина или в качестве антицеллюлитного агента.

6. Композиция по п.2 для применения в профилактике или снижении избыточной массы, липогенеза или избыточного холестерина или в качестве антицеллюлитного агента.

7. Композиция по п.3 для применения в профилактике или снижении избыточной массы, липогенеза или избыточного холестерина или в качестве антицеллюлитного агента.

8. Композиция по п.2 для применения в профилактике или лечении ожирения или атеросклероза.

9. Композиция по п.3 для применения в профилактике или лечении ожирения или атеросклероза.

10. Композиция по п.1, приготовленная для перорального введения.

11. Композиция по п.2, приготовленная для перорального введения.

12. Композиция по п.3, приготовленная для перорального введения.

13. Композиция по п.4, приготовленная для перорального введения.

14. Композиция по п.5, приготовленная для перорального введения.

15. Композиция по п.6, приготовленная для перорального введения.

16. Композиция по п.7, приготовленная для перорального введения.

17. Композиция по п.8, приготовленная для перорального введения.

18. Композиция по п.9, приготовленная для перорального введения.

19. Композиция по любому из пп.1-18, приготовленная в форме твердой или мягкой капсулы, таблетки, гранулы, порошка или перорального раствора.

20. Композиция по п.19, приготовленная в форме желатиновой капсулы или гастрорезистентной таблетки.

21. Композиция по любому из пп.1-18, отличающаяся тем, что содержит 50-100 мг протеолитического фермента.

22. Композиция по любому из пп.1-18, отличающаяся тем, что содержит 200-300 мг липолитического фермента.

23. Продукт, содержащий:
- по меньшей мере один протеолитический фермент, такой как субтилизин или наттокиназа, и
- по меньшей мере одну липазу, выбранную из группы, включающей липазу Cal А или Cal В из Candida anthartica, Geotrichum candidum, липазу из Candida rugosa или смесь этих липаз,
в виде комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения для предотвращения синтеза триглицеридов путем расщепления 2-моноацилглицерина в кишечнике.