[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

RU2528066C2 - Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов - Google Patents

Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов Download PDF

Info

Publication number
RU2528066C2
RU2528066C2 RU2009108660/10A RU2009108660A RU2528066C2 RU 2528066 C2 RU2528066 C2 RU 2528066C2 RU 2009108660/10 A RU2009108660/10 A RU 2009108660/10A RU 2009108660 A RU2009108660 A RU 2009108660A RU 2528066 C2 RU2528066 C2 RU 2528066C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
saccharide
serogroup
kit according
saccharides
phosphate
Prior art date
Application number
RU2009108660/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2009108660A (ru
Inventor
Паоло КОСТАНТИНО
Original Assignee
Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9917070&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2528066(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. filed Critical Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л.
Publication of RU2009108660A publication Critical patent/RU2009108660A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2528066C2 publication Critical patent/RU2528066C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/04—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from fish or other sea animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
    • A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/285—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pasteurellaceae (F), e.g. Haemophilus influenza
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09F—NATURAL RESINS; FRENCH POLISH; DRYING-OILS; OIL DRYING AGENTS, i.e. SICCATIVES; TURPENTINE
    • C09F1/00—Obtaining purification, or chemical modification of natural resins, e.g. oleo-resins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09G—POLISHING COMPOSITIONS; SKI WAXES
    • C09G1/00—Polishing compositions
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Formation And Processing Of Food Products (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биохимии и представляет собой набор для профилактики или лечения бактериального менингита, содержащий: (а) конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, в лиофилизированной форме; и (b) капсулярные сахариды, происходящие из N. meningitidis серогрупп С, W135 и Y, в жидкой форме, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С превышает 1. Изобретение позволяет получать эффективные вакцины на основе указанного набора. 2 н. и 27 з.п. ф-лы, 19 ил.

Description

Техническая область
Настоящее изобретение относится к вакцинам, в частности против инфекции и болезни, вызванной менингококками.
Предпосылки к созданию настоящего изобретения
Neisseria meningitidis представляет собой грамотрицательный патоген, поражающий человека. Она колонизирует глотку, вызывая менингит и, изредка, септицемию при отсутствии менингита. Она является близкородственной по отношению к N.gonorrhoeae, хотя одним признаком, который четко дифференцирует менингококк, является наличие полисахаридной капсулы, которая имеется у всех патогенных менингококков.
На основе капсулярного полисахарида данного микроорганизма идентифицировано двенадцать серогрупп N.meningitidis (А, В, С, Н, I, К, L, 29Е, W135, X, Y и Z). Группа А представляет собой патоген, который наиболее часто является причиной болезни в Африке южнее Сахары. Серогруппы В и С ответственны за абсолютное большинство случаев в США и наиболее развитых странах. Серогруппы W135 и Y ответственны за остальные случаи в США и развитых странах.
Капсулярные полисахариды N. meningitidis обычно получают с помощью способа, включающего стадии осаждения полисахаридов (например, с использованием катионного детергента), выделение фракции этанолом, экстракцию холодным фенолом (для удаления белка) и ультрацентрифугирование (для удаления LPS) [например, ссылка 1].
Четырехвалентная вакцина из капсулярных полисахаридов серогрупп А, С, Y и W135 известна много лет [2, 3] и лицензирована для применения для людей. Несмотря на эффективность для подростков и взрослых людей она вызывает слабый иммунный ответ и короткую продолжительность защиты и не может использоваться для детей младшего возраста (например, 4]. Это происходит потому, что полисахариды представляют собой независимые от Т-клеток антигены, которые вызывают слабый иммунный ответ, который невозможно усилить. Полисахариды в указанной вакцине не конъюгированы и присутствуют в соотношении 1:1:1:1 [5]. MENCEVAX ACWY™ содержит 50 мкг каждого очищенного полисахарида после повторного растворения из его лиофилизированной формы.
Конъюгированные олигосахариды серогруппы С также разрешены для применения у людей (например, Menjugate™; ссылка 6]. Однако сохраняется необходимость улучшения конъюгированных вакцин против серогрупп A, W135 и Y и их производства.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к способу очистки бактериального капсулярного полисахарида, включающему стадии (а) осаждения указанного полисахарида с последующей (b) солюбилизацией осажденного полисахарида с использованием этанола. Полисахарид можно использовать для изготовления вакцин, таких как конъюгированные вакцины, в частности против серогрупп A, W135 и Y N.meningitidis.
Осаждение и солюбилизация с использованием этанола
Специалистам известно много методик для осаждения растворимых полисахаридов. В предпочтительных способах используют один или более катионных детергентов. Детергенты предпочтительно имеют следующую общую формулу:
Figure 00000001
где: R1, R2 и R3 являются идентичными или различаются между собой и каждый обозначает алкил или арил; или R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, a R3 обозначает алкил или арил; или R1, R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, ненасыщенное у атома азота,
R4 обозначает алкил или арил, и
X- обозначает анион.
Особенно предпочтительными детергентами для применения в данном способе являются соли тетрабутиламмония и цетилтриметиламмония (например, бромидные соли). Бромид цетилтриметиламмония («СТАВ») является особенно предпочтительным [8]. СТАВ известен также как бромид гексадецилтриметиламмония, бромид цетримония, Cetavlon и Centimide. Другие детергенты включают бромид гексадиметрина и соли миристилтриметиламмония.
Капсулярные полисахариды высвобождаются в среду во время культивирования. Соответственно, исходным материалом для осаждения обычно будет надосадочная жидкость после центрифугирования бактериальной культуры или концентрированная культура.
Стадия осаждения может быть избирательной по отношению к полисахаридам, но она обычно будет также вызывать соосаждение и других компонентов (например, белков, нуклеиновой кислоты и т.п.).
Осажденный полисахарид перед солюбилизацией можно собирать центрифугированием.
После осаждения полисахарид (обычно в форме комплекса с катионным детергентом) ресолюбилизируют. Предпочтительно использовать растворитель, который является относительно избирательным по отношению к полисахаридам, с целью свести к минимуму содержание примесей (например, белков, нуклеиновой кислоты и т.п.). Как было установлено, с этой точки зрения преимущества имеет этанол, и он является высокоизбирательным по отношению к СТАВ-полисахаридному комплексу. Можно использовать другие низшие спирты (например, метанол, пропан-1-ол, пропан-2-ол, бутан-1-ол, бутан-2-ол, 2-метилпропан-1-ол, 2-метилпропан-2-ол, диолы и т.п.)
Этанол предпочтительно добавляют к осажденному полисахариду до получения конечной концентрации этанола (на основе общего содержания этанола и воды) от 50% до 95% (например, около 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или около 90%) и, предпочтительно, от 75% до 95%. Оптимальная конечная концентрация этанола может зависеть от серогруппы бактерии, из которой получают полисахарид.
Этанол можно добавлять к осажденному полисахариду в чистой форме или в разбавленной смешиваемым растворителем форме (например, водой). Предпочтительными смесями растворителей являются смеси этанол:вода с предпочтительными соотношениями приблизительно от 70:30 до 95:5 (например, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10).
В противоположность способу, описанному в ссылке 9, в данном способе используется катионный детергент, а не анионный детергент. В отличие от способа, описанного в ссылке 10, полисахарид ресолюбилизируют с использованием этанола, а не катионного обмена с использованием солей кальция или магния. В отличие от способа, описанного в ссылке 11, осаждение не требует инертной пористой подложки. Помимо этого, в отличие от известных ранее способов, спирт используют скорее для ресолюбилизации полисахарида, чем для его осаждения.
Бактериальный капсулярный полисахарид обычно получают из Neisseria. Предпочтительно, его получают из N.meningitidis, включая серогруппы А, В, С, W135 и Y. Предпочтительными серогруппами являются A, W135 и Y.
Способ также подходит для получения капсулярного полисахарида из Haemophilus influenzae (особенно типа В или «Hib») и из Streptococcus pneumoniae (пневмококка).
Дальнейшая обработка солюбилизированного полисахарида
После ресолюбилизации полисахарид можно подвергать дальнейшей обработке для удаления примесей. Это особенно важно в тех ситуациях, когда даже минимальная контаминация является неприемлемой (например, для изготовления вакцин для человека). Обычно указанная обработка будет включать одну или более стадий фильтрации.
Можно использовать объемную фильтрацию. Это является особенно пригодным для очистки.
Можно использовать фильтрацию через активированный уголь. Это является пригодным для удаления пигментов и следовых количеств органических соединений. Данный процесс можно повторять до получения, например, ОП275нм<0,2.
Можно использовать фильтрацию по размеру или ультрафильтрацию.
После фильтрования для удаления примесей полисахарид можно осаждать для дальнейшего воздействия и/или обработки. Удобно осуществлять данный процесс с использованием обмена катионов (например, добавлением солей кальция или натрия).
Полисахарид можно химически модифицировать. Например, его можно модифицировать заменой одной или более гидроксильных групп на блокирующие группы. Это особенно пригодно для MenA [12]. Полисахариды из серогруппы В можно N-пропионилировать [13].
Полисахарид (необязательно модифицированный) обычно гидролизуют для получения олигосахаридов. Это предпочтительно осуществляют для получения конечной средней степени полимеризации (DP) в олигосахариде менее 30 (например, от 10 до 20, предпочтительно, приблизительно 10 для серогруппы А; от 15 до 25 для серогрупп W135 и Y, предпочтительно, приблизительно 15-20; и т.п.). Для использования в вакцинах олигосахариды предпочтительнее полисахаридов. DP удобно можно измерять использованием ионообменной хроматографии или колориметрических анализов [14].
Если проводят гидролиз, то гидролизат обычно разделяют по размерам с целью удаления коротких олигосахаридов. Этого можно добиваться различными путями, такими как ультрафильтрация с последующей ионообменной хроматографией. Олигосахариды со степенью полимеризации, менее или равной приблизительно 6, предпочтительно удаляют в случае серогруппы А, а те из них, которые имеют степень полимеризации менее приблизительно 4, предпочтительно удаляют в случае серогрупп W135 и Y.
Для усиления иммуногенности полисахариды или олигосахариды по настоящему изобретению предпочтительно конъюгируют с носителем (фиг.18). Конъюгация с белками-носителями является особенно пригодной для педиатрических вакцин [например, ссылка 15] и представляет собой хорошо известную методику [например, обзор в ссылках от 16 до 24 и т.п.].
Предпочтительными белками-носителями являются бактериальные токсины или анатоксины, такие как дифтерийный или столбнячный анатоксины. Дифтерийный анатоксин CRM197 [25, 26, 27] является особенно предпочтительным. Другие подходящие белки-носители включают белок внешней оболочки N.meningitidis [28], синтетические пептиды [29, 30], белки теплового шока [31, 32], коклюшные белки [33, 34], цитокины [35], лимфокины [35], гормоны [35], факторы роста [35], искусственные белки, включающие множественные человеческие CD4+ Т-клеточные эпитопы из различных полученных из патогенов антигенов [36, белок D из H.influenzae [37], токсин А или В из С.difficile [38] и т.п. Возможно использование смесей белков-носителей.
Конъюгаты с соотношением (масс./масс.) сахарид:белок от 0,5:1 (т.е. с избытком белка) до 5:1 (т.е. с избытком сахарида) являются предпочтительными, а конъюгаты с соотношением от 1:1,25 до 1:2,5 являются более предпочтительными.
Один белок-носитель может нести множество различных сахаридов [39]. Конъюгаты можно использовать в сочетании со свободным белком-носителем [40].
Можно использовать любую подходящую реакцию конъюгации с любым подходящим линкером, если это необходимо.
Сахарид обычно активируют или функционализируют перед конъюгацией. В активации могут участвовать, например, цианилирующие агенты, такие как CDAP (например, тетрафторборат 1-циан-4-диметиламинопиридиния [41, 42 и т.п.]). В других подходящих методиках используют карбодиимиды, гидразиды, активные сложные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, N-гидроксисукцинимид, S-NHS, EDC, TSTU; см. также введение в ссылке 22).
Связи посредством линкерной группы можно осуществить с помощью любой известной методики, например с помощью методик, описанных в ссылках 43 и 44. Один тип связи включает восстановительное аминирование полисахарида, связывание полученной аминогруппы с одним концом линкерной группы адипиновой кислоты, а затем связывание белка с другим концом линкерной группы адипиновой кислоты [20, 45, 46]. Другие линкеры включают В-пропионамидо [47], нитрофенилэтиламин [48], галогенацильные галогеноиды [49], гликозидные связи [50], 6-аминокапроновую кислоту [51], ADH [52], компоненты с С4-С12 [53] и т.п. В качестве альтернативы использованию линкера можно использовать прямую связь. Прямые связи с белком могут включать окисление полисахарида с последующим восстановительным аминированием с белком, как описано, например, в ссылках 54 и 55.
Способ, включающий введение аминогрупп в сахарид (например, путем замены концевых =O групп на -NH2) с последующей дериватизацией диэфиром адипиновой кислоты (например, N-гидроксисукцинимидного диэфира адипиновой кислоты) и взаимодействием с белком-носителем, является предпочтительным.
После конъюгации свободные и конъюгированные сахариды можно отделять друг от друга. Существует множество подходящих способов, включая гидрофобную хроматографию, тангенциальную ультрафильтрацию, диафильтрацию и т.п. [см. также ссылки 56 и 57 и т.п.].
Смеси и композиции, включающие сахариды
Олигосахариды, полисахариды и конъюгаты по настоящему изобретению можно смешивать с другими биологическими молекулами. Смеси сахаридов из более чем одной серогруппы N.meningitidis являются предпочтительными, например, композиции, включающие сахариды из серогрупп А+С, A+W135, A+Y, C+W135, C+Y, W135+Y, A+C+W135, A+C+Y, C+W135+Y, A+C+W135+Y и т.п. Предпочтительно, чтобы протективная эффективность отдельных сахаридных антигенов не устранялась после их объединения, хотя истинная иммуногенность (например, титры ELISA) может снижаться.
В случае когда используется сахарид из серогруппы С, он предпочтительно имеет от ~12 до ~22 повторяющихся единиц.
Сахариды из различных серогрупп N.meningitidis можно конъюгировать с одними и теми же или различными белками-носителями.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды из обеих серогрупп А и С, предпочтительно, чтобы соотношение (масс./масс.) сахарид MenА:сахарид MenС было более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более). Неожиданно было установлено, что компонент MenА обладает улучшенной иммуногенностью, когда он имеется в избытке (масса/доза) по сравнению с компонентом МеnС.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды (например, олигосахариды) из серогруппы W135 и по меньшей мере из одной из серогрупп А, С и Y, неожиданно было установлено, что иммуногенность сахарида MenW135 выше, когда его вводят в комбинации с сахаридом (сахаридами) из другой серогруппы (серогрупп), чем когда его вводят в отдельности (в той же дозировке и т.п.) [сравн. со ссылкой 58]. Таким образом, способность антигена MenW135 вызывать иммунный ответ больше, чем иммунный ответ, вызываемый эквивалентным количеством того же самого антигена после введения без ассоциации с антигенами из других серогрупп. Указанная усиленная иммуногенность может быть установлена путем введения антигена MenW135 контрольным животным, а смеси - экспериментальным животным, и сравнения титров антител против указанных двух с использованием стандартных анализов, таких как бактерицидные титры, радиоиммунный анализ и анализы ELISA и т.п. Вакцины, включающие синергические комбинации сахаридов из серогруппы W135 и других серогрупп, имеют преимущества в иммунологическом смысле. Они позволяют усилить анти-№135 ответы и/или уменьшить дозы W135.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды из серогруппы Y и один или оба из серогрупп С и W135, предпочтительно, чтобы соотношение (масс./масс.) сахарид МеnY:сахарид MenW135 было более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более), и/или соотношение (масс./масс.) сахарид МеnY:сахарид МеnС было менее 1 (например, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 или менее).
Предпочтительными соотношениями (масс./масс.) для сахаридов из серогрупп A:C:W135:Y являются: 1:1:1:1, 1:1:1:2, 2:1:1:1, 4:2:1:1, 8:4:2:1, 4:2:1:2, 8:4:1:2, 4:2:2:1, 2:2:1:1, 4:4:2:1, 2:2:1:2, 4:4:1:2 и 2:2:2:1.
Смеси могут также включать белки. Предпочтительно включать белки из серогруппы В N. meningitidis [например, ссылки с 59 по 64] или препараты OMV [например, ссылки с 65 по 68 и т.п.].
Можно включать также антигены, не имеющие отношения к менингококку и нейсерии, предпочтительно, такие, которые не уменьшают иммунный ответ против менингококковых компонентов. В ссылке 69, например, описаны комбинации олигосахаридов из серогрупп В и С N. meningitidis с сахаридом Hib. Предпочтительными являются антигены из пневмококка, вируса гепатита А, вируса гепатита В, В.pertussis, дифтерии, столбняка, Helicobacter pylori, полиомиелита и/или Н.influenzae. Особенно предпочтительные антигены, не имеющие отношения к нейсерии, включают:
- антигены из Helicobacter pylori, такие как СаgА [с 70 по 73], VacA [74, 75], NAP [76, 77, 78], НорХ [например, 79], HopY [например, 79] и/или уреазу,
- сахаридный антиген из Streptococcus pneumoniae [например, 80, 81, 82],
- антиген из вируса гепатита А, такой как инактивированный вирус [например, 83, 84],
- антиген из вируса гепатита В, такой как поверхностный и/или сердцевинный антигены [например, 84, 85], поверхностный антиген предпочтительно адсорбирован на фосфате алюминия [86],
- сахаридный антиген из Haemophilus influenzae В [например, 87], предпочтительно, неадсорбированный или адсорбированный на фосфате алюминия [88],
- антиген из вируса гепатита С [например, 89],
- антиген из N. gonorrhoeae [например, с 59 по 62],
- антиген из Chlamydia pneumoniae [например, ссылки с 90 по
96],
- антиген из Chlamydia trachomatis [например, 97],
- антиген из Porphyromonas gingivalis [например, 98],
- антиген (антигены) из вируса полиомиелита [например, 99, 100], такой как IPV,
- антиген (антигены) из вируса бешенства [например, 101], такой как лиофилизированный инактивированный вирус [например, 102, RabAvert™],
- антигены кори, эпидемического паротита и/или краснухи [например, главы 9, 10 и 11 ссылки 103],
- антиген (антигены) из вируса гриппа [например, глава 19 ссылки 103], такой как поверхностные белки гемагглютинин и/или нейраминидаза,
- антиген из Moraxella catarrhalis [например, 104],
- антиген из Streptococcus agalactiae (стрептококка группы В) [например, 105, 106],
- антиген из Streptococcus pyogenes (стрептококка группы А) [например, 106, 107, 108],
- антиген из Staphylococcus aureus [например, 109],
- антиген (антигены) из парамиксовируса, такого как респираторно-синцитиальный вирус (RSV [110, 111] и/или вирус парагриппа (PIV3 [112]),
- антиген из Bacillus anthracis [например, 113, 114, 115],
- антиген из вируса семейства flaviviridae (род flavivirus), такого как вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита, четыре серотипа вирусов Денге, вирус клещевого энцефалита, вирус лихорадки западного Нила,
- пестивирусный антиген, такой как антиген из вируса классической лихорадки свиней, вирус вирусной диареи крупного рогатого скота и/или вирус пограничной болезни,
- парвовирусный антиген, например из парвовируса В19,
- столбнячный анатоксин [например, ссылка 116],
- коклюшный голотоксин (РТ) и нитевидный гемагглютинин (FHA) из В.pertussis, необязательно также в комбинации с пертактином и/или агглютиногенами 2 и 3 [например, ссылки 117 и 118],
- клеточный коклюшный антиген.
Смесь может включать один или более. из указанных дополнительных антигенов, которые могут быть подвергнуты детоксикации, когда это необходимо (например, детоксикация коклюшного токсина химическими и/или генетическими средствам).
В случае, когда в смесь включен дифтерийный антиген, предпочтительно также включать столбнячный антиген и коклюшные антигены. Подобно этому, когда в смесь включен столбнячный антиген, предпочтительно также включать дифтерийный и коклюшный антигены. Подобно этому, когда в смесь включен коклюшный антиген, предпочтительно также включать дифтерийный и столбнячный антигены.
Антигены в смеси обычно будут присутствовать в концентрации по меньшей мере 1 мкг/мл каждый. В общих чертах, концентрация любого данного антигена будет достаточной для того, чтобы вызвать иммунный ответ против данного антигена.
В качестве альтернативы использования белковых антигенов в смеси можно использовать нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген. Белковые компоненты смеси, таким образом, можно заменять на нуклеиновую кислоту (предпочтительно, ДНК, например, в форме плазмиды), которая кодирует белок.
Поливалентные сахаридные вакцины
Настоящее изобретение относится также к вакцинам и иммуногенным композициям, включающим капсулярные сахариды по меньшей мере из двух (т.е. 2, 3 или 4) из серогрупп А, С, W135 и Y N.meningitidis, в которых указанные капсулярные сахариды конъюгированы с белком-носителем (белками-носителями) и/или представляют собой олигосахариды. В случае когда в вакцине имеются только два конъюгированных олигосахарида или полисахарида из серогрупп А, С, W135 и Y, они предпочтительно не из серогрупп А и С (сравн. со ссылками 6, 119 и 120). Предпочтительные композиции включают сахариды из серогрупп С и Y. Другие предпочтительные композиции включают сахариды из серогрупп С, W135 и Y.
Настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, включающей конъюгат олигосахарида серогруппы А и конъюгат олигосахарида серогруппы С и дополнительно включающей (i) адъювант - фосфат алюминия или гидроксид алюминия и (и) буфер. В случае когда композиция включает в качестве адъюванта фосфат алюминия, буфер предпочтительно представляет собой фосфатный буфер; в случае когда композиция включает в качестве адъюванта гидроксид алюминия, буфер предпочтительно представляет собой гистидиновый буфер.
В случае когда вакцина включает капсулярный сахарид из серогруппы А, то предпочтительно комбинировать сахарид серогруппы А с другим сахаридом (сахаридами) непосредственно перед применением, чтобы свести к минимуму его гидролиз (сравн. сахариды Hib). Удобно осуществить данный этап, если компонент серогруппы А находится в лиофилизированной форме, а компонент(ы) другой серогруппы находится (находятся) в жидкой форме и его используют для повторного растворения лиофилизированного компонента перед применением. Жидкий компонент предпочтительно включает в качестве адъюванта соль алюминия, в то время как лиофилизированный компонент серогруппы А может включать или может не включать в качестве адъюванта соль алюминия.
Таким образом, настоящее изобретение относится к набору, включающему: (а) капсулярный сахарид из серогруппы А N.meningitidis в лиофилизированной форме; и (b) капсулярный сахарид (сахариды) из одной или более (например, 1, 2, 3) серогрупп С, W135 и Y N.meningitidis в жидкой форме. Сахариды, предпочтительно, конъюгированы с белком-носителем (белками-носителями) и/или представляют собой олигосахариды. Набор может иметь форму двух флаконов.
Настоящее изобретение относится также к способу изготовления вакцинной композиции по настоящему изобретению, включающему смешивание лиофилизированного капсулярного сахарида из серогруппы А N.meningitidis с капсулярным сахаридом (сахаридами) из одной или более (например, 1, 2, 3) серогрупп С, W135 и Y, N.meningitidis, причем указанный один или более сахаридов находятся в жидкой форме.
Настоящее изобретение относится также к набору, включающему: (а) конъюгированный капсулярный олигосахарид из серогруппы А N.meningitidis в лиофилизированной форме; и (b) один или более дополнительных антигенов в жидкой форме. Дополнительный антиген может представлять собой или может не представлять собой конъюгированный капсулярный олигосахарид из серогруппы С N. meningitidis.
Иммуногенные композиции и вакцины
Полисахариды, олигосахариды и конъюгаты по настоящему изобретению являются особенно подходящими для включения в иммуногенные композиции и вакцины. Способ по настоящему изобретению может, следовательно, включать стадию изготовления из полисахарида, олигосахарида или конъюгата иммуногенной композиции или вакцины. Изобретение относится к композиции или вакцине, получаемой указанным путем.
Иммуногенные композиции и вакцины по настоящему изобретению, помимо менингококковых сахаридов, обычно будут включать «фармацевтически приемлемые носители», которые включают любой носитель, который сам по себе не вызывает выработки антител, вредных для индивидуума, которому вводят композицию. Подходящие носители обычно представляют собой большие, медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимеризованные аминокислоты, аминокислотные сополимеры, трегалоза [121], липидные агрегаты (такие как масляные капельки или липосомы) и частицы неактивного вируса. Указанные носители хорошо известны специалистам. Вакцины могут также содержать разбавители, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и т.п. Помимо этого, могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, вещества, корригирующие рН, и т.п. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых наполнителей можно найти в ссылке 122.
Иммуногенные композиции, используемые в качестве вакцин, включают иммунологически эффективное количество сахаридного антигена, а также любой другой из упомянутых выше компонентов, если это необходимо. Под «иммунологически эффективным количеством» подразумевается, что введение указанного количества индивидууму, как в виде однократной дозы, так и в виде части серии, является эффективным для лечения или профилактики.
Указанное количество варьирует в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, подвергаемого лечению, возраста, таксономической группы индивидуума, подвергаемого лечению (например, примат, не являющийся человеком, примат и т.п.), способности иммунной системы индивидуума синтезировать антитела, желательной степени защиты, состава вакцины, оценки лечащим врачом медицинской ситуации и других имеющих значение факторов. Ожидается, что количество будет заключаться в относительно обширных пределах, которые могут быть определены в ходе обычных испытаний. Схема введения может представлять собой однократную дозу или многократные дозы (например, схему, включающую бустер-дозы). Вакцину можно вводить в сочетании с другими иммунорегулирующими агентами.
Вакцина может включать адъювант. Предпочтительные адъюванты для усиления эффективности композиции включают, без ограничения: (1) алюминиевые соли (квасцы), такие как гидроксиды алюминия (включая оксигидроксиды), фосфаты алюминия (включая гидроксифосфаты), сульфат алюминия и т.п. [главы 8 и 9 в ссылке 123]; (2) эмульсионные композиции типа «масло-в-воде» (содержащие или не содержащие другие специфичные иммуностимулирующие агенты, такие как мурамиловые пептиды [мурамиловые пептиды включают N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (nor-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-БП-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин МТР-РЕ) и т.п.] или компоненты клеточной стенки бактерий), такие как, например, (a) MF59™ [глава 10 в ссылке 123; 124, 125], содержащий 5% Squalene, 0,5% Tween 80 и 0,5% Span 85 (необязательно содержащий МТР-РЕ), изготовленный в виде субмикронных частиц с использованием микрофлуидизирующего оборудования, (b) SAF, содержащий 10% Squalane, 0,4% Tween 80, 5% pluronic-блокированного полимера L121, и thr-MDP, микрофлуидизированный в субмикронную эмульсию или обработанный вихревым смешением для получения эмульсии с частицами большего размера, и (с) адъювантная система Ribi™ (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT), содержащая 2% Squalene, 0,2% Tween 80 и один или более компонентов бактериальной клеточной стенки из группы, состоящей из монофосфориллипида A (MPL), димиколята трегалозы (TDM) и скелета клеточной стенки (CWS), предпочтительно, MPL+CWS (Detox™); (3) сапониновые адъюванты [глава 22 ссылки 123], такие как QS21 или Stimulon™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), в простой форме или в форме выработанных из них частиц, таких как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы; глава 23 ссылки 123), указанные ISCOM могут быть лишены дополнительного детергента, например, ссылка 126; (4) полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA); (5) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 [127] и т.п.), интерфероны (например, гамма-интерферон), колониестимулирующий фактор макрофагов (М-CSF), фактор некроза опухолей (TNF) и т.п.; (6) монофосфориллипид A (MPL) или 3-О-деацилированный MPL (3dMPL), например, ссылки 128 и 129, необязательно, при практическом отсутствии квасцов, если используется с пневмококковыми сахаридами, например, ссылка 130; (7) комбинации , например, с QS21 и/или эмульсиями типа «масло-в-воде», например, ссылки 131, 132 и 133; (8) олигонуклеотиды, включающие мотивы CpG (Roman et al., Nat. Med., 1997, 3, 849-854; Werner et al., PNAS USA, 1997, 94, 10833-10837; Davis et al., J. Immunol., 1998, 160, 870-876; Chu et al., J. Exp.Med., 1997, 186, 1623-1631; Lipford et al., Eur. J. Immunol., 1997, 27, 2340-2344; Moldoveanu et al., Vaccine, 1988, 16, 1216-1224, Krieg et al., Nature, 1995, 374, 546-549; Klinman et al., PNAS USA, 1996, 93, 2879-2883; Ballas et al., J. Immunol., 1996, 157, 1840-1845; Cowdery et al., J. Immunol., 1996, 156, 4570-4575; Halpern et al., Cell. Immunol., 1996, 167, 72-78; Yamamoto et al., Jpn. J. Cancer Res., 1988, 79, 866-873; Stacey et al., J. Immunol., 1996, 157, 2116-2122; Messina et al., J. Immunol., 1991, 147, 1759-1764; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 4918-4925; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 5394-5402; Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 4755-4761 и Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 5898-5906; международные патентные заявки WO 96/02555, WO 98/16247, WO 98/18810, WO 98/40100, WO 98/55495, WO 98/37919 и WO 98/52581), т.е. содержащие по меньшей мере один динуклеотид CG, в котором 5-метилцитозин, необязательно, используется вместо цитозина; (8) полиоксиэтиленовый эфир или полиоксиэтиленовый сложный эфир, например, ссылка 134; (9) сложный эфир полиоксиэтилена и сорбитана как поверхностно-активный агент в комбинации с октоксинолом [135] или полиоксиэтиленалкиловый эфир или сложный эфир, как поверхностно-активный агент в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным неионным поверхностно-активным агентом, таким как октоксинол [136]; (10) сапонин и иммуностимулирующий олигонуклеотид (например, олигонуклеотид CpG) [137]; (11) иммуностимулятор и частицу соли металла, например, ссылка 138; (12) сапонин и эмульсию типа «масло-вводе», например, ссылка 139; (13) сапонин (например, QS21)+3dMPL+IL12 (необязательно,+стерол), например, ссылка 140; (14) термолабильный энтеротоксин E.coli ("LT") или его детоксифицированные мутанты, такие как мутанты К63 или R72 [например, глава 5 ссылки 141]; (15) холерный токсин («СТ») или его детоксифицированные мутанты [например, глава 5 ссылки 141]; (16) липосомы [главы 13 и 14 ссылки 123]; (17) хитозан [например, ссылка 142]; (18) двухцепочечная РНК; (19) микрочастицы (т.е. частицы диаметром от ~100 нм до -150 мкм, более предпочтительно, диаметром от ~200 нм до ~30 мкм, и, наиболее предпочтительно, диаметром от ~500 нм до -10 мкм), полученные из материалов, которые являются биоразлагаемыми и нетоксичными (например, поли(α-гидроксикислота), таких как поли(лактид-согликолид), полигидроксимасляная кислота, полиортоэфир, полиангидрид, поликапролактон и т.п.), необязательно обработанные таким образом, чтобы иметь отрицательный заряд на поверхности (например, с использованием SDS) или положительный заряд на поверхности (например, с использованием катионного детергента, такого как СТАВ); или (20) другие вещества, которые действуют как иммуностимулирующие агенты, для повышения эффективности композиции [например, глава 7 ссылки 123].
Соли алюминия (особенно фосфаты и/или гидроксиды алюминия) и MF59 являются предпочтительными для использования с сахаридными антигенами по настоящему изобретению. В случае когда используется фосфат алюминия, возможно адсорбировать один или более сахаридов на соли алюминия, но предпочтительно не адсорбировать сахариды на соли алюминия, и этому благоприятствует включение в раствор свободных фосфатных ионов (например, посредством использования фосфатного буфера). В случае когда используется гидроксид алюминия, предпочтительно адсорбировать сахариды на соли. Использование гидроксида алюминия в качестве адъюванта является особенно выгодным для сахарида из серогруппы А.
В композициях по настоящему изобретению возможно адсорбировать некоторые антигены на гидроксиде алюминия, но тогда они должны содержать другие антигены в ассоциации с фосфатом алюминия. Для четырехвалентных комбинаций серогрупп N.meningitidis, например, доступны следующие перестановки:
Серогруппа Соль алюминия (Н=гидроксид; Iр -фосфат)
А Р Н Р Н Н Н Р Р Р H Н Н Р Р Р Н
С Р Н Н Р Н Н Р Н Н Р Р Н Р Н Р Р
W135 Р Н Н Н Р Н Н Р Н Н Р Р Р Р Н Р
Y Р Н Н Н Н Р Н Н Р Р Н Р Н Р Р Р
Для трехвалентных комбинаций серогрупп N. meningitidis доступны следующие перестановки:
Серогруппа Соль алюминия (Н=гидроксид; Р=фосфат)
С Р Н Н Н Р Р Р Н
W135 Р Н Н Р Н Р Н Р
Y Р Н Р Н Н Н Р Р
После изготовления композиции по настоящему изобретению можно вводить непосредственно субъекту. Субъектами, подлежащими лечению, могут быть животные, в частности можно лечить людей.
Вакцины являются особенно пригодными для вакцинации детей и подростков. Их можно вводить системным путем и/или через слизистые оболочки.
Обычно иммуногенные композиции изготавливают в форме препаратов для инъекций, в виде жидких растворов или суспензий; также можно изготавливать твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед применением. Для усиления адъювантного эффекта препарат также можно эмульгировать или инкапсулировать в липосомы. Прямая доставка композиции обычно будет парентеральной (например, путем инъекции, подкожной, интраперитонеальной, внутривенной или внутримышечной, или путем доставки в интерстициальное пространство ткани). Композиции также можно вводить в участок повреждения. Другие способы введения включают оральное и внутрилегочное введение, суппозитории и трансдермальные или чрескожные аппликации (например, см. ссылку 14 3), иглы и гипоспреи. Схема введения может представлять собой однократную дозу или многократные дозы (например, схему, включающую бустер-дозы).
Вакцины по настоящему изобретению предпочтительно являются стерильными. Предпочтительно, они не содержат пирогенов. Предпочтительно, они содержат буфер, поддерживающий рН на уровне, например, от 6 до 8, обычно около 7. В случае когда вакцина включает соль гидроксида алюминия, предпочтительно использовать гистидиновый буфер [144].
Вакцины по настоящему изобретению могут включать детергент (например, Tween, такой как Tween 80) в малых количествах (например,<0,01%). Вакцины по настоящему изобретению могут включать сахарный спирт (например, маннит) или трегалозу, например, около 15 мг/мл, особенно, если им предстоит лиофильная сушка.
Оптимальные дозы отдельных антигенов можно оценить эмпирическим путем. Обычно, однако, сахаридные антигены по настоящему изобретению будут вводиться в дозе от 0,1 до 100 мкг каждого сахарида на одну дозу, при типичном объеме дозы 0,5 мл. Доза обычно содержит от 5 до 20 мкг сахарида на одну дозу. Указанные величины измеряют как сахарид.
Вакцины по настоящему изобретению могут быть профилактическими (т.е. для предупреждения инфекции) или терапевтическими (т.е. для лечения заболевания после инфекции), но обычно будут профилактическими.
Настоящее изобретение относится к способу получения иммунного ответа у пациента, включающему введение пациенту вакцины по настоящему изобретению. Иммунный ответ является предпочтительно защитным против менингококкового заболевания и может включать гуморальный иммунный ответ и/или клеточный иммунный ответ. Пациентом предпочтительно является ребенок.
Способ может вызывать бустерную реакцию у пациента, которому уже была сделана первая прививка от N. meningitidis.
Настоящее изобретение относится также к применению полисахарида, олигосахарида или конъюгата по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для получения иммунного ответа у животного. Лекарственное средство предпочтительно представляет собой иммуногенную композицию (например, вакцину). Лекарственное средство предпочтительно предназначено для профилактики и/или лечения заболевания, вызванного Neisseria (например, менингита, септицемии, гонореи и т.п.), H.influenzae (например, среднего отита, бронхита, пневмонии, целлюлита, перикардита, менингита и т.п.) или пневмококком (например, менингита, сепсиса, пневмонии и т.п.). Таким образом, предпочтительной является профилактика и/или лечение бактериального менингита.
Вакцины можно испытывать на обычных экспериментальных животных (например, см. ссылку 145).
Настоящее изобретение также относится к способу солюбилизации осажденного бактериального капсулярного полисахарида, при котором в качестве растворителя используется этанол.
Определения
Термин «включающий» означает «имеющий в своем составе», а также «состоящий из», например композиция, «включающая» X, может состоять исключительно из X или может иметь в своем составе еще что-либо другое, например X+Y.
Термин «приблизительно» по отношению к численной величине х означает, например, х±10%.
Краткое описание рисунков
Фиг.1 показывает влияние изменяющихся соотношений этанол:вода на солюбилизацию полисахаридов.
Фиг.2-4 показывают титры IgG, полученные у мышей против олигосахаридных антигенов: фиг.2 показывает результаты использования олигосахарида серогруппы А; фиг.3 показывает результаты для серогруппы Y; и фиг.4 показывает результаты для серогруппы W135.
Фиг.5 показывает пост-II титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп А и С: фиг.5а показывает ответы против серогруппы А, и фиг.5b показывает ответы против серогруппы С.
Фиг.6-8 показывают титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп С, W135 и Y: фиг.6 показывает ответы против серогруппы W135; фиг.7 показывает ответы против серогруппы Y; и фиг.8 показывает ответы против серогруппы С.
Фиг.9-11 показывают пост-II титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп А, С, W135 и Y: фиг.9 показывает ответы против серогруппы W135; фиг.10 показывает ответы против серогруппы Y; и фиг.11 показывает ответы против серогруппы А.
Фиг.12 представляет собой калибровочную кривую, полученную с использованием испытуемых образцов полисахарида MenА через различные промежутки времени гидролиза. Кривая показывает линейную зависимость обратной величины степени полимеризации от оптической вращательной способности.
Фиг.13 представляет собой калибровочную кривую, полученную с использованием испытуемых образцов полисахарида MenY через различные промежутки времени гидролиза. Кривая показывает линейную зависимость log степени полимеризации от KD (коэффициента распределения).
Фиг.14-16 показывают пост-II титры IgG, разделенные по подклассам IgG, полученные у мышей после иммунизации олигосахаридными конъюгатами для серогрупп (14) А; (15) С; (16) W135 и (17)Y.
Фиг.17 показывает пост-II титры IgG, разделенные по подклассам IgG, полученные у мышей после иммунизации четырехвалентной смесью олигосахаридных конъюгатов.
Фиг.18 иллюстрирует изготовление олигосахаридного конъюгата.
Фиг.19 показывает (А) анти-MenA и (В) анти-MenC GMT (±95% доверительные интервалы), полученные у морских свинок. Величины над столбиками представляют собой титры сывороточного бактериального анализа (SBA), т.е. обратные величины от величины разведения сыворотки, дающего 50% гибель бактерий.
Способы осуществления настоящего изобретения
А. Получение и очистка менингококковых полисахаридов
Менингококки серогрупп A, W135 и Y выращивали в 500 мл флаконах, содержавших 150 мл среды Franz А, в течение 12 часов при 35±1°С. Перемешивание производилось со скоростью 150 об/мин, с использованием 35 мм возвратно-поступательного шейкера. 85 мл среды затем инокулировали в 20-л ферментер, содержащий среду Watson.
Спустя 18,5 часов (W135 и Y) или 16,5 часов (А), когда ОП достигала 10, ферментацию прерывали добавлением 300 мл формалина, а затем, после 2 часов инкубации, ферментер охлаждали до 10°С. Надосадочную жидкость собирали центрифугированием с последующей фильтрацией (0,22 мкм) и ультрафильтрацией через мембрану 30 кДа.
Необработанный концентрированный полисахарид добавлением СТАВ в виде раствора 100 мг/мл воды. Добавленные объемы показаны в следующей таблице. Через 12 часов выдержки при комнатной температуре СТАВ комплексы собирали центрифугированием. СТАВ комплекс экстрагировали добавлением 95% раствора этанола при комнатной температуре в течение 16-20 ч при интенсивном перемешивании. Объем добавленного этанола показан в следующей таблице:
Серогруппа Объем СТАВ (мл) Объем 95% этанола (литры на кг сырой пасты)
А 475 от 3,5 до 6
W135 200 от 4 до 6
Y 650 3,4
Полученные суспензии фильтровали через объемный фильтр CUNO 10 SP. Фильтрат рециркулировал через картридж CUNO zetacarbon™ до достижения ОП275нм<0,2. Фильтрат угля Z затем собирали и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. В конечном итоге полисахарид осаждали из этанольной фазы добавлением 2М водного раствора СаСl2 (конечный раствор 10-12 мл/л EtOH). Очищенный полисахарид затем собирали центрифугированием, отмывали 95% этанолом и высушивали в условиях вакуума.
В других экспериментах конечную концентрацию этанола, использовавшегося для экстракции, изменяли (фиг.1). Для полисахарида серогруппы А наиболее эффективными были пределы от 80 до 95% этанола, при более низких процентных долях эффективность экстракции понижалась. Для серогруппы W135 хорошей экстракции добивались с использованием этанола в пределах от 75% до 90%, причем 95% концентрация была менее эффективной. Для серогруппы Y наилучших результатов добивались с использованием этанола в пределах от 75% до 85%, причем более высокие процентные доли (например, 90%, 95%) были менее эффективными. В целом, отмечено, что процентные доли этанола, которые были ниже, чем указанные в настоящем документе, имели тенденцию увеличивать совместную экстракцию примесей, таких как белки. Процентные доли этанола, приведенные в данном параграфе, выражены как конечная концентрация (этанол как процентная доля от общего объема этанол+вода) и основаны на содержании воды в пастах СТАВ-полисахарид, полученных центрифугированием, приблизительно 50% (т.е. 500 г Н2О на кг сырой пасты). Данную величину определили эмпирическим путем в небольших экспериментах с масштабным переходом.
В. Конъюгация полисахаридом серогруппы А
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы А подвергали гидролизу в 50 мМ буфере ацетата натрия, рН 4,7, в течение приблизительно 3 ч при 73°С. Гидролиз контролировали с целью получения олигосахаридов со средней степенью полимеризации (DP) приблизительно 10, как определено по соотношению (масс./масс.) общего органического фосфора к сложному моноэфиру фосфорной кислоты.
Соотношение DP (общего органического фосфора) и (фосфора-сложного моноэфира) является обратно пропорциональным оптической вращательной способности (а), как показано на фиг.12. Эти взаимоотношения можно использовать для мониторинга степени гидролиза более удобным образом, чем с помощью прямого измерения количеств фосфора.
b) Разделение по размерам
На данной стадии удаляют короткие олигосахариды, полученные в ходе гидролиза. Полученный выше гидролизат подвергали ультрафильтрации через мембрану с отсекающей величиной 30 кДа (12 диафильтрационных объемов 5 мМ ацетатного буфера, рН 6,5). Удержанный материал, содержащий группу высокомолекулярных соединений, удаляли; прошедший через фильтр материал загружали на колонку Q-Sepharose Fast Flow, уравновешенную в ацетатном буфере 5 мМ, рН 6,5. Затем колонку промывали 5 колоночными объемами (CV) уравновешивающего буфера, затем 10 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/125 мМ NaCl, рН 6,5, с целью удаления олигосахаридов с DP<6. Отделенный по размеру олигосахарид затем элюировали 5 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/0,5 М NaCl, рН 6,5.
Популяция элюированного олигосахарида имела среднюю DP около 15.
c) Введение первичной аминогруппы в восстанавливающийся конец
Соль аммония (ацетат или хлорид) добавляли к раствору отделенного по размеру олигосахарида до конечной концентрации 49-300 г/л, затем добавляли цианоборгидрид натрия до конечной концентрации 12-73 г/л. После доводки рН до 6-7,3 смесь инкубировали при 37°С в течение 5 дней.
Аминоолигосахариды затем очищали тангенциальной проточной ультрафильтрацией с использованием мембраны с отсекающей величиной 1 кДа или 3 кДа и 13 диафильтрационных объемов 0,5 М NaCl, с последующими 7 диафильтрационными объемами 20 мМ NaCl. Раствор очищенных аминоолигосахаридов анализировали на содержание фосфора (одну химическую активность антигена) с помощью процедуры, описанной в ссылке 14 6, и на количество введенных аминогрупп, с помощью процедуры, описанной в ссылке 147.
Очищенные олигосахариды затем сушили с использованием роторного испарителя для удаления воды.
d) Дериватизация до активного сложного эфира
Высушенные аминоолигосахариды солюбилизировали в дистиллированной воде с концентрацией аминогрупп 40 мМ, затем добавляли 9 объемов ДМСО, с последующим добавлением триэтиламина до конечной концентрации 200 мМ. К полученному раствору добавляли N-гидроксисукцинимидный диэфир адипиновой кислоты до конечной концентрации 480 мМ.
Реакционную смесь поддерживали при комнатной температуре при перемешивании в течение 2 часов, затем активированный олигосахарид осаждали ацетоном (конечная концентрация 80% об./об.). Осадок собирали центрифугированием и несколько раз промывали ацетоном для удаления непрореагировавшего N-гидроксисукцинимидного диэфира адипиновой кислоты и побочных продуктов. В конце активированный олигосахарид высушивали в условиях вакуума.
Количество активных сложноэфирных групп, введенных в структуру олигосахарида, определяли колориметрическим способом, как описано в ссылке 148.
e) Конъюгирование с CRM197
Высушенный активированный олигосахарид добавляли к раствору 45 мг/мл CRM.197 в 0,01 М фосфатном буфере с рН 7,2 до соотношения активный сложный эфир/белок (моль/моль) 12:1. Реакционную смесь полдерживали при комнатной температуре при перемешивании в течение ночи. После данного периода времени конъюгат очищали гидрофобной хроматографией или тангенциальной проточной ультрафильтрацией. Очищенный конъюгат MenA-CRM197 фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали: на содержание белка (анализ на белок microBCA Protein Assay), на содержание сахарида MenА (колориметрический анализ на фосфор), на содержание свободного сахарида, ВЭЖХ профиль (на колонке TSKgel G4000SW 7,5 мм ВД × 30 см) и SDS-PAGE. Характеристики типичных препаратов показаны в следующей таблице:
Код серии Сахарид (мг/мл) Белок (мг/мл) Гликозилирование KD
210201/А 0,257 0,864 0,3 0,489
210201/BS 0, 308 1,354 0,23 0,503
210201/BL 0,28 1, 482 0,19 0,501
351230595 0,138 0,3 0, 46  
010900 0,092 0,337 0,27  
DP29 0,105 0,245 0,43  
А1 (не отделенный по размеру) 0,08 0,291 0,27  
А2 (отделенный по размеру) 0, 446 2, 421 0,18  
С. Конъюгация полисахаридов серогруппы W135
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы W подвергали гидролизу в 50 мМ буфере ацетата натрия, рН 4,7, в течение приблизительно 3 ч при 80°С. В результате получали олигосахариды со средней DP приблизительно от 15 до 20, как определено по соотношению сиаловой кислоты (SA) к восстановленной концевой SA.
DP соотношение (общей SA) и (восстановленной концевой SA) относится к KD по результатам ВЭЖХ-SEC, как показано на фиг.13. Эти взаимоотношения можно использовать для мониторинга степени гидролиза более удобным образом, чем с помощью прямого измерения количества SA.
b) Разделение по размерам
Гидролизат подвергали ультрафильтрации через мембрану с отсекающей величиной 30 кДа (от 12 до 20 диафильтрационных объемов 5 мМ ацетатного буфера/15-30 мМ NaCl, рН 6,5). Удержанный материал, содержащий высокомолекулярные соединения, удаляли, в то время как прошедший через фильтр материал загружали на колонку Q-Sepharose Fast Flow, уравновешенную в смеси 5 мМ ацетатного буфера/15 мМ NaCl, рН 6,5. Затем колонку промывали 10 CV уравновешивающего буфера, с целью удаления олигосахаридов с DP ≤3-4 и элюировали 3 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/500 мМ NaCl, рН 6,5.
c) Введение первичной аминогруппы в восстанавливающийся конец
Хлорид или ацетат аммония добавляли к раствору отделенного по размеру олигосахарида до конечной концентрации 300 г/л, затем добавляли цианоборгидрид натрия до конечной концентрации 49 или 73 г/л. Смесь инкубировали при 50°С в течение 3 дней.
Аминоолигосахариды затем очищали тангенциальной проточной ультрафильтрацией, как описано для серогруппы А. Очищенный материал анализировали на содержание сиаловой кислоты (колориметрический способ, как описано в ссылке 149) и/или галактозы (ВЭЖХ) (химическая активность антигена MenW135). Очищенные олигосахариды затем сушили с использованием роторного испарителя для удаления воды.
d) Дериватизация до активного сложного эфира
Высушенные аминоолигосахариды дериватизировали, как описано для серогруппы А.
e) Конъюгирование с CRM197
Конъюгацию выполняли, как описано выше для серогруппы А, но для очистки конъюгата использовали диафильтрацию с мембраной 30 кДа (50 диафильтрационных объемов 10 мМ фосфатного буфера, рН 7,2). Очищенный конъюгат фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали по тем же параметрам, которые описаны выше для серогруппы А. Содержание сахарида MenW анализировали колориметрическим определением сиаловой кислоты:
Код серии Сахарид (мг/мл) Белок (мг/мл) Гликозилирование KD
Серия 1 5,73 3,52 1, 63 0,296
Серия 2/4,5 3,51 2,88 1,22 0,308
Серия 3S 2,49 2,25 1,11 0,380
Серия 3Sd 2,03 2,24 0, 91 0,394
Серия 3L 2,32 2,3 1,01 0,391
Серия 3Ld 1, 94 2,29 0,85 0,383
Серия 3S/pr.Glic6 0,363 0, 82 0,44 0,498
Серия 3S/pr.Glic9 0,424 0,739 0,57 0,447
Серия 3S/pr.Glicl2 0,479 0, 714 0, 671 0,414
D. Конъюгация полисахаридов серогруппы Y
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы Y подвергали гидролизу, как описано выше для серогруппы W135. В результате получали олигосахариды со средней DP приблизительно от 15 до 20, как определено по соотношению сиаловой кислоты (SA) к восстановленной концевой SA (измеренным косвенно, как описано в пункте С(а) выше).
b) Разделение по размерам, с) Введение аминогруппы, d) Дериватизация до активного сложного эфира и е) Конъюгирование
Данные стадии выполняли, как описано выше для серогруппы W135. Очищенный конъюгат фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали так же, как описано выше для серогруппы W135:
Код серии Сахарид (мг/мл) Белок (мг/мл) Гликозилирование KD
Серия 1А 1,16 0, 92 1,26 0,303
Серия 1 В 4,57 3,55 1,29 0,339
Серия 2/4,5 2,32 6,1 0,38 0,467
Серия 2/6 1,75 5,73 0,3 0,498
Е. Иммуногенность отдельных конъюгатов
Замороженные массы конъюгатов оттаивали. Каждый из них разбавляли при перемешивании до конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл, 5 мМ фосфата, 9 мг/мл NaCl, фосфата алюминия (до получения концентрации А13+0,6 мг/мл), рН 7,2. Смеси затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли физиологическим раствором до концентрации 4 мкг сахарида/мл для иммунизации мышей.
Вторую серию изготавливали для каждой серогруппы тем же способом, но добавление фосфата алюминия заменяли тем же объемом воды.
Десяти мышам Balb/c для каждой группы иммунизации инъецировали п/к дважды 0,5 мл вакцины на 0 и 4 неделе. Забор крови осуществляли до иммунизации, за день до второй дозы и спустя 2 недели после второй дозы. Иммунизацию проводили (a) конъюгатной вакциной, содержащей или не содержащей квасцы (b) контролем - физиологическим раствором и (с) неконъюгированным полисахаридным контролем.
Специфичные антиполисахаридные антитела IgG определяли в сыворотке крови иммунизированных животных, главным образом, как описано в ссылке 150. Сыворотку от каждой мыши анализировали с двумя повторностями с помощью титрационной кривой и для каждой группы иммунизации рассчитывали величину GMT. Титры рассчитывали в мышиных единицах по ELISA (MEU) с использованием компьютерной программы "Titerun" (FDA). Специфичность антиполисахаридных титров определяли конкурентным ELISA с соответствующим полисахаридом в качестве конкурента.
Как показано на фиг.2, конъюгат MenА индуцировал высокие титры антител у животных. Как ожидалось, неконъюгированный полисахарид не обладал иммуногенностью. Конъюгатная композиция с фосфатом алюминия в качестве адъюванта индуцировала более высокий уровень антител по сравнению с титром, полученным для конъюгата в отдельности. Сходные результаты наблюдались для MenY (фиг.3) и MenW135 (фиг.4).
Подкласс IgG пост-II иммунных ответов измеряли для различных групп.Специфичные подклассы определяли с использованием того же способа ELISA, как для определения общего титра IgG в разделе Е, выше, но с использованием антител против щелочной фосфатазы мышей -IgGl, -IgG2a, -IgG2b или -IgG3 (Zymed) в качестве вторичных антител. Титры выражали как величины OF405нм, полученные через 30 минут проявки субстрата с использованием сыворотки, разведенной 1:3200, и они показаны на фиг.14 (MenА), 15 (MenW135) и 16 (MenY). Ответы наблюдаются, главным образом, в подклассе IgGl, который представляет собой подкласс, преимущественно индуцируемый у мышей Т-зависимыми антигенами. Поскольку полисахариды по своей природе являются Т-зависимыми антигенами, которые не способны индуцировать иммунологическую память, эти данные показывают, что конъюгация обладает желательным действием.
Сыворотки с пост-II также анализировали на предмет бактерицидной активности in vitro с помощью анализа для определения опосредованного комплементом лизиса бактерий. Сыворотки с пост-II инактивировали в течение 30 минут при 56°С перед использованием в анализе, а в качестве источника комплемента использовали 25% комплемент крольчат. Бактерицидный титр выражали как величину, обратную разведению сыворотки, получая 50% гибели бактерий следующих штаммов: MenА G8238, А1, F6124; MenW135 5554(ОАс+) и 242317(ОАс-); MenY 242975(ОАс-) и 240539(ОАс+).
Результаты для MenА включали:
Носитель Поли/олигосахарид Прибл. CCDP Алюминиевый адьювант GMT Бактерицидная активность
CRM197 О 15 - 461 F8238: 2048-4096; F6124: 2048-4096
CRM197 О 15 фосфат 920 F8238: 4096; F6124: 4096
- Р - фосфат 3 F8238: 8; F6124: 128
CRM197 О 15 - 290 F8238: 512-1024
- Р - - 2 F8238:<4
CRM197 О 15 - 155 F8238: 512-1024
CRM197 O 15 - 393 F8238: 1024
CRM197 O 15 - 396 -
CRM197 O 15 фосфат 1396 F8238: 4096
CRM197 O 15 фосфат 1461 F8238: 2048-4096
CRM197 O 15 фосфат 1654 F8238: 2048
CRM197 O 29 фосфат 1053 F8238: 2048
CRM197 неразделенный по размеру O 10 фосфат 1449 F8238: 2048
CRM197 O 15 фосфат 626 F8238: 2048-4096
CRM197 O 15 - 742 -
CRM197 O 15 - 2207 -
CRM197 O 29 - 1363 -
CRM197 неразделенный по размеру O 10 - 615 -
CRM197 О 15 фосфат 1515 -
CRM197 O 15 фосфат 876 -
CRM197 О 15 фосфат 1232 -
CRM197 О 15 фосфат 852 -
CRM197 О 15 фосфат 863 F8238: 2048; А1: 2048; F6124:>2048
CRM197 О 27 фосфат 1733 F8238: 4096-8192; F6124: 4096-8192
CRM197 О 15 фосфат 172 F8238: 1024; А1: 1024-2048; F6124: 2048
CRM197 О 15 гидроксид 619 F8238: 1024; А1: 2048; F6124: 2048
Результаты для MenW135 включали:
Носитель Поли/олигосахарид ОАс Алюминиевый адъювант GMT Бактерицидная активность
CRM197 О + - 14 5554: 256-512
CRM197 О + фосфат 23 5554: 256-512
- Р   - - 5554: 4
CRM197 О + - 45 5554: 1024
CRM191 O + - 101 5554: 64-128
  O + - 80 5554: 256-512
CRM197 O + фосфат 221 5554: 1024-2048; 242317: 1024-2048
CRM197 O - - 52 5554: 512-1024
CRM197 O - фосфат 329 5554: 1024-2048; 242317: 1024-2048
CRM197 O + - 41 5554: 256-512
CRM197 O + фосфат 24 5554: 1024; 242317: 128-256
CRM197 O - - 116 5554: 256-512
CRM197 O - фосфат 185 5554: 1024; 242317: 512-1024
CRM197 O + фосфат 565 5554: 2048
CRM197 O + фосфат 328 5554: 512-1024
CRM197 O + фосфат 490 5554: 1024-2048
CRM197 O + гидроксид 189 5554: 512-1024; 242317: 512-1024
CRM197 O + фосфат 80 5554: 512-1024; 242317: 512-1024
CRM197 O + гидроксид 277 5554: 512-1024; 242317: 1024-2048
Результаты для MenY включали:
Носитель Поли/олигосахарид ССОР Алюминиевый адъювант GMT Бактерицидная активность
CRM197 O >15 - 751 242975: 8192
CRM197 O >15 фосфат 1190 242975: 8192-16384; 240539: 8192-16384
CRM197 O >15 - 284 242975: 2048-4096
CRM197 O >15 фосфат 775 242975: 2048-4096
- Р - - - 242975: 256
CRM197 O >15 - 1618 242975: 4096-8192
CRM197 O >15 - 2123 242975: 2048
CRM197 O <10 - 253 242975: 512-1024
CRM197 O <10 - 1060 242975: 256-512
CRM197 O >15 гидроксид 1167 242975: 8192; 240539: 8192-16384
CRM197 O >15 фосфат 665 242975: 8192; 240539: 8192-16384
CRM197 O >15 фосфат 328 242975: 4096; 240539: 2048-4096
CRM197 O >15 гидроксид 452 242975: 2048; 240539: 1024-2048
F. Иммуногенностъ конъюгата МеnА в комбинации с конъюгатом
MenСКонцентрированную массу CRM-MenC (от Chiron Vaccines, Италия) смешивали с концентрированной массой CRM-MenA (полученной, как описано выше), разводили и смешивали перемешиванием. Изготавливали три различных препарата. Каждый содержал 20 мкг сахарида/мл для MenА, но включал различные количества конъюгата MenС: (д.) 20 мкг сахарида/мл; (и) 10 мкг сахарида/мл; (iii) 5 мкг сахарида/мл. Таким образом, соотношения MenА:MenС (масс./масс.) были следующими: (i) 1:1; (ix) 2:1; (iii) 4:1.
Каждый препарат также содержал 5 мМ фосфата натрия, 9 мг/мл NaCl, фосфат алюминия (до концентрации А13+ 0,6 мг/мл), рН 7,2. Каждую смесь затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли 1:5 физиологическим раствором перед иммунизацией мышей.
Вторую серию вакцин изготавливали таким же способом, но добавление фосфата алюминия заменяли тем же объемом воды.
Для каждой из шести вакцин иммунизировали по десять мышей Balb/c, как описано выше. Контрольные группы получали физиологический раствор или только конъюгат MenА.
Антиполисахаридные антитела для MenА и MenС определяли, как описано выше.
Результаты, полученные для смеси конъюгатов MenА+MenС, ясно показывают, что соотношение (масс./масс.) компонентов А и С играет главную роль для иммуногенности MenА. 1
Титр специфичных анти-MenApS, полученный для конъюгата MenА, был выше (с содержанием или без содержания квасцов в качестве адъюванта), чем для комбинации MenА+MenС в той же дозе (фиг.5а). В случае когда в комбинации используется меньшее количество конъюгата MenС, компонентом MenА конъюгата индуцируется более высокий титр анти-MenApS. В то же время, титр анти-MenС остается приемлемым (фиг.5b).
Проводились также эксперименты с морскими свинками. Изготавливали три различных препарата с использованием того же самого фосфата алюминия в качестве адъюванта, как ранее (аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение PO4/AI от 0,84 до 0, 92, 0, 6 мг А13+/мл:
Препарат MenА* MenС* Соотношение MenА:MenС
А 20 мкг/мл 20 мкг/мл 1:1
В 40 мкг/мл 20 мкг/мл 2:1
С 20 мкг/мл 10 мкг/мл 1:1/2
*Выражено как сахарид
Данные препараты разбавляли 1:2 физиологическим раствором и использовали для иммунизации морских свинок. Пяти морским свинкам (линия Hartelley, самки, 450-500 граммов) для каждой группы иммунизации инъецировали п/к дважды по 0,5 мл вакцины на 0 и 28 дни. Забор крови осуществляли до первой иммунизации, а затем на 42 день. Сыворотки хранили при -70°С до анализа ELISA и анализа на бактерицидность сыворотки (против MenА штамма МК 83/94 или MenС штамма СИ). Результаты показаны на фиг.19.
G. Комбинированная вакцина для серогрупп С, W135 и Y
Конъюгаты полисахаридов из серогрупп С, W135 и Y смешивали, как описано выше, до получения конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл для каждого конъюгата. Вакцина содержала конечную концентрацию 5 мМ фосфата натрия и 9 мг/мл NaCl, рН 7,2. После хранения в течение ночи смесь разбавляли до концентрации 4 мкг сахарида/мл для каждого конъюгата для иммунизации мышей.
Иммунизации и анализ проводили, как описано выше.
Результаты показывают, что иммуногенность конъюгата MenW135 усиливалась, если его вводили в комбинации с конъюгатами MenС и MenY, по сравнению с иммуногенностью, полученной для конъюгата MenW135 в отдельности (фиг.6). Иммуногенность MenY в комбинации была сравнима с иммуногенностью, полученной для отдельного конъюгата (фиг.7) и была сравнима также с иммуногенностью конъюгата MenС (фиг.8).
H. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y
Конъюгаты полисахаридов из серогрупп А, С, W135 и Y смешивали, как описано выше, до получения конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл для конъюгатов серогрупп A, W135 и Y и 5 мкг сахарида/мл для конъюгата серогруппы С. Вакцина содержала конечную концентрацию 5 мМ фосфата натрия, 9 мг/мл NaCl, фосфата алюминия (до получения концентрации А13+ 0,6 мг/мл), рН 7,2. Смеси затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли физиологическим раствором до концентрации 4 мкг сахарида/мл для конъюгатов A, W135 и Y и 1 мкг сахарида/мл для конъюгата С. Указанную разбавленную смесь использовали для иммунизации.
Иммунизации и анализ проводили, как описано выше, с контролями, включавшими отдельные конъюгаты, за исключением серогруппы С.
Фиг.9 показывает, что, как ранее, иммуногенность конъюгата MenW135 усиливалась, если его вводили в комбинации с конъюгатами MenА, MenС и MenY. Фиг.10 показывает, что иммуногенность конъюгата MenY практически не отличалась при его доставке в комбинации с конъюгатами MenА, MenС и MenW135. Фиг.11 показывает, что иммуногенность конъюгата MenА значительно снижалась в комбинации, даже если конъюгат MenС вводили в более низкой дозе (1/4). Данная антигенная конкуренция не наблюдалась в неконъюгированной четырехвалентной (ACWY) полисахаридной вакцине [5].
I. ЛиофилизированныЙ антиген серогруппы А
Капсулярный полисахарид серогруппы А N. meningitidis является особенно чувствительным к гидролизу. Конъюгаты капсулярного олигосахарида MenА, таким образом, изготавливали в лиофилизированной форме, готовой для повторного растворения перед введением. Изготавливали лиофилизированную форму с компонентами, которые дают следующий состав после восстановления с получением единичной дозы:
Компонент Концентрация
CRM-MenA 20 мкг сахарида/мл
Буфер фосфат калия 5 мМ
Маннит 15 мг/мл
Данная композиция не содержит адъюванта. Для восстановления ее изготавливали два адъюванта:
Компонент Концентрация Концентрация
Гидроксид алюминия 0, 68 мг А1-**/мл -
Фосфат алюминия* - 0, 6 мг Аl3+/мл
Буфер фосфат натрия - 10 мМ
Гистидиновый буфер 10 мМ -
Хлорид натрия 9 мг/мл 9 мг/мл
Tween 80 0,005% 0,005%
рн 7,2±0,05 7,2±0,05
*Аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение РО4/А1 от 0,84 до 0,92

После восстановления водой для инъекций стабильность сахаридного компонента была следующей:
Время (Дни) Хранение при 2-8°С Хранение при 36-38°С
Общий сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, % Общий сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, %
0 17,72 1,04 5,9 17,72 1,04 5,9
15 17,01 0,88 5,2 16, 52 2,26 13,7
30 17,82 0,89 5,0 17,29 2, 64 15,3
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН была стабильной на уровне 7,2 как при 2-8°С, так и при 36-38°С, содержание белка было стабильным на уровне 24,5 мкг/мл, а содержание влаги было менее 2,5%.
После восстановления раствором фосфата алюминия в качестве адъюванта и хранении при 2-8°С стабильность была следующей:
Время (часы) Общий сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид,
%
0 16, 62 1,09 6, 6
24 16, 51 0, 98 5,9
48 16, 83 0, 99 5,9
J. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y (лиофилизированныЙ конъюгат серогруппы А)
Изготавливали трехвалентную смесь компонентов MenС, W135 и Y, адсорбированную на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта (2 мг/мл) или смешанную с фосфатом алюминия в качестве адъюванта (аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение PO4/AI от 0,84 до 0,92, 0,6 мг/мл А13+, в присутствии 10 мМ фосфатного буфера). Составы двух трехвалентных смесей были следующими:
Компонент Концентрация Концентрация
Гидроксид алюминия 0, 68 мг AlJ+/Mn -
Фосфат алюминия* - 0, 6 мг А^/мл
CRM-MenC 20 мкг сахарида/мл 20 мкг сахарида/мл
CRM-MenY 20 мкг сахарида/мл 20 мкг сахарида/мл
CRM-MenW135 20 мкг сахарида/мл 20 мкг сахарида/мл
Буфер фосфат натрия - 10 мМ
Гистидиновый буфер 10 мМ -
Хлорид натрия 9 мг/мл 9 мг/мл
Tween 80 0,005% 0,005%
*Аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение РO4/Аl от 0,84 до 0,92
Для гидроксидной смеси стабильность сахаридных компонентов была следующей:
Время (дни) Хранение при 2-8°С Хранение при 36-38°С
Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, % Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, %
MenС в массе
0 <1,2 <6 <1,2 <6
15 <1,2 <б <1,2 <6
30 <1,2 <6 <1,2 <6
MenС во флаконах
0 <1,2 <б <1,2 <б
15 <1,2 <6 <1,2 <б
30 <1,2 <6 1,3 6, 6
MenW135 в массе
0 2,5 12,5 2,5 12,5
15 2,3 11,4 3,4 16,8
30 2,3 11,5 3,5 17,3
MenW135 во флаконах
0 2,1 10, 6 2,1 10, 6
15 2,3 11,7 2,7 13,3
30 2,0 10,2 3,3 16, 3
MenY в массе
0 1,7 8,3 1,7 8,3
15 <1,3 <6,3 2,0 10,2
30 1,3 6,3 2,4 12,2
MenY во флаконах
0 1,4 7,1 1,4 7,1
15 1,5 7,6 2,1 10,7
30 1,3 6,3 2,9 14,3
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН была стабильной на уровне 7,15±0,05 как при 2-8°С, так и при 36-38°С.
Для фосфатной смеси стабильность сахаридных компонентов была
следующей:
Время (дни) Хранение при 2-8°С Хранение при 36-38°С
Общий сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, % Общий сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид (мкг/мл) Свободный сахарид, %
MenС в массе
0 22,8 <1,0 <5 22,8 <1,0 <5
15 17,2 <1,0 <5 18, 6 <1,0 <5
30 18,9 <1,0 <5 20,5 <1,0 <5
MenС во флаконах
0 20,5 <1,0 <5 20,5 <1,0 <5
15 18,3 <1,0 <5 23, 4 <1,0 <5
30 18,0 <1,0 <5 20, 5 <1,0 <5
MenW135 в массе
0 20,7 2,0 10, 4 20,7 2,0 10,4
15 21,9 2,3 11,6 21,2 2,1 10,3
30 19,6 2,1 10,6 21,0 2,4 11,8
MenW135 во флаконах
0 23,4 1,7 8,4 23, 4 1,7 8,4
15 21,2 1,9 9,5 20, 1 2,2 11,1
30 20,1 2,2 11,2 21,3 3,2 16,1
MenY в массе
0 19,1 <1,1 <5,3 19,1 <1,1 <5,3
15 20,1 1,4 6,8 18,7 1,3 6,4
30 18, 6 1,4 7,6 19,2 1,7 8,3
MenY во флаконах
0 21,4 <1,1 <5,3 21,4 <1,1 <5,3
15 19,6 1,4 6,8 19,0 1,5 7,4
30 17,7 1,2 6,2 18, 4 1,9 9,4
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН
была стабильной на уровне 7,05±0,05 как при 2-8°С, так и при 36-38°С.
Трехвалентные жидкие композиции разбавляли и использовали 0,5 мл для восстановления лиофилизированного конъюгата MenА. Полученную трехвалентную смесь вводили десяти мышам Balb/c (самки в возрасте 6-8 недель) в каждой группе путем подкожной инъекции на 0 и 28 день. Смесь содержала по 2 мкг каждого сахаридного конъюгата на дозу, что составляет 1/5 от однократной человеческой дозы (SHD). Контроли представляли собой физиологический раствор или неконъюгированные гомологичные полисахариды. Забор крови осуществляли до иммунизации, а затем на 42 день, и сыворотки хранили при -70°С. IgG определяли, как описано выше.
Все использованные конъюгаты для животных были безопасными и иимуногенными. Пост-II GMT титры по результатам ELISA (с 95% доверительными интервалами) были следующими:
Вакцина Адъювант А Y W135 С
MenА (лиофилизированный и суспендированный) Фосфат алюминия 172 (69-439) - - -
Гидроксид алюминия 619 (419-906) - - -
MenY Фосфат алюминия - 328 (147-731) - -
Гидроксид алюминия - 452 (344-593) - -
MenW Фосфат алюминия - - 80 (28-225) -
Гидроксид алюминия - - 277 (185-411) -
MenС Фосфат алюминия - - - 317 (152-659)
Гидроксид алюминия - - - 723 (615-851)
MenА
(лиофилизированный)+MenС, W135, Y		 Фосфат алюминия 32 (15-68) 397 (252-627) 99 (35-288) 114 (53-246)
Гидроксид алюминия 206 (112-372) 141 (97-205) 139 (76-251) 163 (122-218)
Фиг.17 показывает результаты анализа подкласса IgG для: (17А) MenА; 17(B) MenС; (17С) MenW135 и (17D) MenY. IgGl отчетливо является наиболее выраженным подклассом.
Сывороточные бактерицидные титры были следующими:
Вакцина Адъювант Анти-MenА Анти-MenY Анти-MenWI35 Анти-MenС
F8238 А1 F6124 242975 240539 5554 242317 СП
MenА (лиофилизи-рованный) Фосфат алюминия 512-1024 1024-2048 2048- - - - - -
Гидроксид алюминия 1024-2048 1024-2048 2048 - - - - -
MenY Фосфат алюминия - - - 4096 2048-4096 - - -
Гидроксид алюминия - - - 2048 1024-2048 - - -
MenW Фосфат алюминия - - - - - 512 512-1024 -
Гидроксид алюминия - - - - - 1024 1024-2048 -
MenС Фосфат алюминия - - - - - - - 2048-4096
Гидроксид алюминия - - - - - - - 4096
MenА (лиофилизи-рованный)+MenС, W135, Y Фосфат алюминия 128-256 1024 1024-2048 2048 - 256-512 1024 512
Гидроксид алюминия 512 1024-2048 1024-2048 2048-4096   256-512 1024 512-1024
К. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y (различные дозировки)
Мышей иммунизировали, как описано выше, но вакцинные композиции имели разные соотношения различных олигосахаридных конъюгатов. Дозы составляли 0,5, 1, 2 или 4 мкг на дозу и изменялись. Во всех экспериментах использовали лиофилизированный олигоконъюгат MenА.
Титры ELISA были следующими:
Количество антигена (м кг/доза) Алюминиевый адъювант GMT ELISA (95% доверительный интервал)
А С W135 Y А С W135 Y
4 2 2 2 Фосфат 177 (107-291) 367 (263-510) 239 (135-424) 239 (184-311)
4 2 2 2 Гидроксид 390 (313-486) 494 (345-706) 338 (266-430) 158 (96-260)
2 2 2 2 Фосфат 132 (59-296) 582 (268-1155) 143 (75-272) 247 (152-400)
2 2 2 2 Гидроксид 337 (239-476) 569 (462-679) 171 (117-251) 100 (59-169)
4 2 1 1 Фосфат 137 (47-397) 192 (88-421) 18 (4-75) 315 (174-571)
4 2 1 0,5 Фосфат 152 (85-271) 207 (100-428) 51
(21-125)		 220 (125-388)
4 2 1 2 Фосфат 113 (49-263) 230 (98-540) 23 (6-91) 267 (81-877)
4 2 0,5 1 Фосфат 267 (109-656) 504 (300-847) 46 (15-134) 583 (330-1030)
4 2 2 1 Фосфат 87 (49-155) 118 (51-278) 24 (8-72) 214 (140-326)
2 2 1 1 Фосфат 217 (132-355) 514 (332-796) ПО (66-183) 206 (141-300)
2 2 1 0,5 Фосфат 105 (40-279) 381 (180-808) 90 (34-236) 206 (96-445)
2 2 1 2 Фосфат 155 (71-339) 374 (196-713) 53 (28-100) 502 (335-752)
2 2 0,5 1 Фосфат 224 (125-400) 358 (223-577) 43 (14-128) 624 (426-914)
2 2 2 1 Фосфат 180 (113-288) 306 (190-492) 70 (34-146) 423 (258-696)
Сывороточные бактерицидные титры были следующими:
Количество антигена (м кг/доза) Алюминиевый Бактерицидный титр антител
А С W135 Y адъювант А С W135 Y
4 2 2 2 Фосфат 256-512 1024-2048 1024-2048 4096-8192
4 2 2 2 Гидроксид 1024-2048 256-512 1024-2048 1024-2048
2 2 2 2 Фосфат 512-1024 1024-2048 128-256 8192-16384
2 2 2 2 Гидроксид 256 1024-2048 256 512-1024
4 2 1 I Фосфат 512-1024 2048 128 2048-4096
4 2 1 0,5 Фосфат 512-1024 1024-2048 128 2048-4096
4 2 1 2 Фосфат 512-1024 2048-4096 128 8192-16384
4 2 0,5 1 Фосфат 1024-2048 8192 256-512 8192-16384
4 2 2 1 Фосфат - 2048-4096 128 4096-8192
2 2 1 1 Фосфат 1024-2048 1024-2048 256 4096-8192
2 2 1 0,5 Фосфат 1024-2048 2048-4096 256-512 2048-4096
2 2 1 2 Фосфат 512-1024 1024-2048 128 8192-16384
2 2 0,5 1 Фосфат 1024-2048 2048 256-512 4096-8192
2 2 2 1 Фосфат 128-256 512-1024 64-128 1024-2048
Вторую серию экспериментов проводили с использованием дозы сахарида 2 мкг/мл для MenА и MenС; половину указанной дозы для MenY и четверть дозы для MenW135. Титры ELISA были следующими:
Количество антигена (мкг/доза) Алюминиевый адъювант GMT ELISA (95% доверительный интервал)
А С W135 Y А С W135 Y
2 2 2 2 Фосфат 32 (15-68) 114 (53-246) 99 (35-288) 397 (252-627)
Гидроксид 206 (112-372) 163 (122-218) 139 (76-251) 141 (97-205)
2 2 1 0,5 Фосфат 96 (49-187) 238 (101-561) 42 (20-89) 315 (114-867)
Гидроксид 293 (144-597) 267 (158-451) 83 (43-163) 244 (152-392)
Сывороточные бактерицидные титры были следующими:
Количество
антигена
мкг/доза)		 Алюминиевый адъювант А С W135 Y
А С W Y F8238 А1 F6124 С11 5554 242317 242975
2 2 2 2 Фосфат 128-256 1024 1024-2048 512 256-512 1024 2048
Гидроксид 512 1024-2048 1024-2048 512-1024 256-512 1024 2048-4096
2 2 1 0,5 Фосфат 256 - 1024-2048 512 256-512 1024 2048-4096
Гидроксид 128 - 512-1024 512-1024 512-1024 1024 1024
L. Олигосахаридные конъюгаты MenА, W135 и Y
Следующая таблица показывает данные, относящиеся к конъюгатам MenА, MenW135 и MenY, подходящим для изготовления комбинированных композиций по настоящему изобретению:
  А W135 Y
DP после отделения по размеру 16, 6 21,9 21,1
Соотношение сахарид/белок 0,5 1,1 0,7
KD 0,44 0,36 0,41
Свободный сахарид 5% 10% 5%
Свободный белок <2% <2% <2%
Следует понимать, что настоящее изобретение было описано примером и что в нем можно производить изменения, оставаясь в пределах объема и идеи настоящего изобретения.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (содержание которых целиком включено в настоящий документ в качестве ссылок)
[1] Frash (1990) pp.123-145 of Advances in Biotechnological Processes vol. 13 (eds. Mizrahi & Van Wezel).
[2] Armand et al. (1982) J. Biol. Stand. 10:335-339.
[3] Cadoz et al. (1985) Vaccine 3:340-342.
[4] MMWR (1997) 46(RR-5) 1-10.
[5] Baklaic et al. (1983) Infect. Immun. 42:599-604.
[6] Costantino et al. (1992) Vaccine 10:691-698.
[7] WO 02/00249.
[8] Inzana (1987) Infect. Immun. 55:1573-1579.
[9] WO 98/32873.
[10] US patent 4,753,796.
[11] European patent 0072513.
[12] UK patent application 0207117.3.
[13] Pon et al. (1997) J Exp Med 185:1929-1938.
[14] Ravenscroft et al. (1999) Vaccine 17:2802-2816.
[15] Ramsay et al. (2001) Lancet 357(9251):195-196.
[16] Lindberg (1999) Vaccine 17 Suppl 2:S28-36.
[17] Buttery & Moxon (2000) J R Coll Physicians Lond 34:163-168.
[18] Ahmad & Chapnick (1999) Infect Dis Clm North Am 13:113-133, vii.
[19] Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47:563-567.
[20] European patent 0477508.
[21] US patent 5,306,492.
[22] WO 98/42721.
[23] Dick et al. in Conjugate Vaccines (eds. Cruse et al.) Karger, Basel, 1989, Vol.10, pp.48-114.
[24] Hermanson Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996) ISBN: 0123423368.
[25] Anonymous (Jan 2002) Research Disclosure, 453077.
[26] Anderson (1983) Infect Immun 39(1):233-238.
[27] Anderson et al. (1985) J Clin Invest 76(l):52-59.
[28] EP-A-0372501.
[29] EP-A-0378881.
[30] EP-A-0427347.
[31] WO 93/17712.
[32] WO 94/03208.
[33] WO 98/58668.
[34] EP-A-0471177.
[35] WO 91/01146.
[36] Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824.
[37] WO 00/56360.
[38] WO 00/61761.
[39] WO 99/42130.
[40] WO 96/40242.
[41] Lees et al. (1996) Vaccine 14:190-198.
[42] WO 95/08348.
[43] US patent 4,882,317.
[44] US patent 4,695,624.
[45] Mol. Immunol., 1985, 22, 907-919.
[46] EP-A-0208375.
[47] WO 00/10599.
[48] Gever et al., Med. Microbiol. Immunol, 165: 171-288 (1979).
[49] US patent 4,057,685.
[50] US patents 4,673,574; 4,761,283; 4,808,700.
[51] US patent 4,459,286.
[52] US patent 4,965,338.
[53] US patent 4,663,160.
[54] US patent 4,761,283.
[55] US patent 4,356,170.
[56] Lei et al. (2000) Dev Biol (Basel) 103:259-264.
[57] WO 00/38711; US patent 6,146,902.
[58] McLeod Griffiss et al. (1981) Infect. Immun. 34:725-732.
[59] WO 99/24578.
[60] WO 99/36544.
[61] WO 99/57280.
[62] WO 00/22430.
[63] Tettelin et al. (2000) Science 287:1809-1815.
[64] Pizza et al. (2000) Science 287:1816-1820.
[65] WO 01/52885.
[66] Bjune et al. (1991) Lancet 338(8775):1093-1096.
[67] Fukasawa et al. (1999) Vaccine 17:2951-2958.
[68] Rosenqvist et al. (1998) Dev. Biol. Stand. 92:323-333.
[69] WO 96/14086.
[70] Covacci & Rappuoli (2000) J. Exp.Med. 19:587-592.
[71] WO 93/18150.
[72] Covacci et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5791-5795.
[73] Tummuru et al. (1994) Infect. Immun. 61:1799-1809.
[74] Marchetti et al. (1998) Vaccine 16:33-37.
[75] Telford et al. (1994) J. Exp.Med. 179:1653-1658.
[76] Evans et al. (1995) Gene 153:123-127.
[77] WO 96/01272 & WO96/01273, especially SEQ ID N0:6.
[78] WO 97/25429.
[79] WO 98/04702.
[80] Watson (2000) Pediatr Infect Dis J 19:331-332.
[81] Rubin (2000) Pediatr Clin North Am 47:269-285, v.
[82] Jedrzejas (2001) Microbiol Mol Biol Rev 65:187-207.
[83] Bell (2000) Pediatr Infect Dis J 19:1187-1188.
[84] Iwarson (1995) APMIS 103:321-326.
[85] Gerlich et al. (1990) Vaccine 8 Suppl:S63-68 & 79-80.
[86] WO 93/24148.
[87] Costantino et al. (1999) Vaccine 17:1251-1263.
[88] WO 97/00697.
[89] Hsu et al. (1999) Clm Liver Dis 3:901-915.
[90] WO 02/02606.
[91] Kalman et al. (1999) Nature Genetics 21:385-389.
[92] Read et al. (2000) Nucleic Acids Res 28:1397-406.
[93] Shirai et al. (2000) J. Infect. Dis. 181(Suppl 3):S524-
S527.
[94] WO 99/27105.
[95] WO 00/27994.
[96] WO 00/37494.
[97] WO 99/28475.,
[98] Ross et al. (2001) Vaccine 19:4135-4142.
[99] Sutter et al. (2000) Pediatr Clin North Am 47:287-308.
[100] Zimmerman & Spann (1999) Am Fam Physician 59:113-118, 125-126.
[101] Dreesen (1997) Vaccine 15 Suppl:S2-6.
[102] MMWR Morb Mortal Nkly Rep 1998 Jan 16; 47(1):12, 19.
[103] Vaccines (1988) eds. Plotkin & Mortimer. ISBN 0-7216-1946-0.
[104] McMichael (2000) Vaccine 19 Suppl 1:S101-107.
[105] Schuchat (1999) Lancet 353(9146):51-6.
[106] WO 02/34771.
[107] Dale (1999) Infect Dis Clm North Am 13:227-43, vni.
[108] Ferretti et al. (2001) PNAS USA 98: 4658-4663.
[109] Kuroda et al. (2001) Lancet 357(9264): 1225-1240; see also pages 1218-1219.
[110] Anderson (2000) Vaccine 19 Suppl l:S59-65.
[111] Kahn (2000) Curr Opin Pediatr 12:257-262.
[112] Crowe (1995) Vaccine 13:415-421.
[113] J Toxicol Clm Toxicol (2001) 39:85-100.
[114] Demicheli et al. (1998) Vaccine 16:880-884.
[115] Stepanov et al. (1996) J Biotechnol 44:155-160.
[116] Wassilak & Orenstein, Chapter 4 of Vaccines (eds.
Plotkin & Mortimer), 1988.
[117] Gustafsson et al. (1996) N. Engl. J. Med. 334:349-355.
[118] Rappuoli et al. (1991) TIBTECH 9:232-238.
[119] WO 97/28273.
[120] Lieberman et al. (1996) JAMA 275:1499-1503.
[121] WO 00/56365.
[122] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th ed ISBN: 0683306472.
[123] Vaccine Design... (1995) eds. Powell & Newman. ISBN: 030644867X. Plenum.
[124] WO 90/14837.
[125] US patent 6,299,884.
[126] WO 00/07621.
[127] WO 99/44636.
[128] GB-2220221.
[129] EP-A-0689454.
[130] WO 00/56358.
[131] JEP-A-0835318.
[132] EP-A-0735898.
[133] EP-A-0761231.
[134] WO 99/52549.
[135] WO 01/21207.
[136] WO 01/21152.
[137] WO 00/62800.
[138] WO 00/23105.
[139] WO 99/11241.
[140] WO 98/57659.
[141] Del Giudice et al. (1998) Molecular Aspects of Medicine, vol. 19, number 1.
[142] WO 99/27960.
[143] WO 98/20734.
[144] UK patent application 0118249.2.
[145] WO 01/30390.
[146] Chen et al. (1956) Anal. Chem. (1956) 28:1756-1758.
[147] Habeeb et al. (1966) Anal. Biochem. 14:328-336.
[148] Miron & Wilchek (1982) Anal. Biochem. 126:433-435.
[149] Svennerholm (1957) Biochem. Biophys. Acta 24:604-61.
[150] Carlone et al (1992) J.Clin. Microbiol. 30:154-159.

Claims (28)

1. Набор для профилактики или лечения бактериального менингита, содержащий: (а) конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, в лиофилизированной форме; и (b) капсулярные сахариды, происходящие из N. meningitidis серогрупп С, W135 и Y, в жидкой форме, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С превышает 1.
2 Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов (b) конъюгированы с белком-носителем.
3. Набор по п.2, в котором белок-носитель представляет собой дифтерийный анатоксин CRM197.
4. Набор по п.1, в котором капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, конъютрован с бактериальным токсином или анатоксином.
5. Набор по п. 4, в котором бактериальный токсин или анатоксин представляет собой дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин или дифтерийный анатоксин CRM197.
6. Набор по п.1, в котором конъюгация осуществляется способом, включающим введение аминогрупп в сахарид, с последующими получением производных с помощью сложного диэфира адипиновой кислоты и реакцией с белком-носителем.
7. Набор по п.1, в котором конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, имеет соотношение сахарид: белок (масс./масс.) между 0.5:1 и 5:1.
8. Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов адсорбируется на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта.
9. Набор по п.1, в котором компонент (b) содержит соль алюминия в качестве адъюванта.
10. Набор по п.9, в котором компонент (b) содержит фосфат алюминия в качестве адъюванта.
11. Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов представляют собой олигосахарид.
12. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы А имеет среднюю степень полимеризации между 10 и 20.
13. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы W135 имеет среднюю степень полимеризации между 15 и 25.
14. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы Y имеет среднюю степень полимеризации между 15 и 25.
15. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы С имеет от 12 до 22 повторяющихся звеньев.
16. Набор по п.1, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С составляет 2:1.
17. Набор по п.1, в котором соотношение (масс./масс.) сахаридов серогрупп А: С: W135: Y представляет собой 2:1:1:1.
18. Набор по п.1, в виде двух ампул.
19. Набор по п.1, кроме того, содержащий сахаридный антиген, происходящий из Haemophilus influenzae В.
20. Набор по п.1, в котором доза находится в промежутке от 5 до 20 мг в расчете на сахарид.
21. Применение набора по п.1 для приготовления вакцины для профилактики или лечения бактериального менингита.
22. Применение по п.21, в котором соотношение (масс./масс.) сахаридов серогрупп А: С: W135: Y представляет собой 2:1:1:1.
23. Применение по п.21, в котором сахариды конъюгированы с дифтерийным анатоксином CRM197.
24. Применение по п.21, в котором конъюгация осуществляется способом, включающим введение аминогрупп в сахарид с последующими получением производных с помощью сложного диэфира адипиновой кислоты и реакцией с белком-носителем.
25. Применение по п.21, в котором один или более из сахаридов представляют собой олигосахарид.
26. Применение по п.21, в котором один или более из сахаридов адсорбируется на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта.
27. Применение по п.21, в котором вакцина содержит фосфат алюминия в качестве адъюванта.
28. Применение по п.21, в котором вакцина содержит сахаридный антиген, происходящий из Haemophilus influenzae В, белки, происходящие из N. meningitidis серогруппы В, или OMV препараты.
29. Применение по п.21, в котором доза находится в промежутке от 5 до 20 мг в расчете на сахарид.
RU2009108660/10A 2001-06-20 2009-03-11 Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов RU2528066C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0115176.0A GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-06-20 Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
GB0115176,0 2001-06-20

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004101284/13A Division RU2381814C2 (ru) 2001-06-20 2002-06-20 Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2009108660A RU2009108660A (ru) 2010-09-20
RU2528066C2 true RU2528066C2 (ru) 2014-09-10

Family

ID=9917070

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004101284/13A RU2381814C2 (ru) 2001-06-20 2002-06-20 Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины
RU2009108660/10A RU2528066C2 (ru) 2001-06-20 2009-03-11 Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004101284/13A RU2381814C2 (ru) 2001-06-20 2002-06-20 Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины

Country Status (23)

Country Link
US (9) US8753651B2 (ru)
EP (10) EP2277537B1 (ru)
JP (4) JP5075317B2 (ru)
CN (4) CN101524535B (ru)
AT (3) ATE556718T1 (ru)
AU (3) AU2002321716B2 (ru)
BE (4) BE2010C033I2 (ru)
BR (2) BRPI0210590B8 (ru)
CA (3) CA2730856C (ru)
CY (6) CY1110820T1 (ru)
DE (6) DE122010000041I1 (ru)
DK (6) DK2184071T3 (ru)
ES (9) ES2670196T3 (ru)
FR (4) FR10C0042I1 (ru)
GB (1) GB0115176D0 (ru)
LU (4) LU91732I2 (ru)
MX (1) MXPA03011462A (ru)
NL (3) NL300460I2 (ru)
NZ (2) NZ529881A (ru)
PT (6) PT2277537E (ru)
RU (2) RU2381814C2 (ru)
TR (2) TR201808026T4 (ru)
WO (1) WO2003007985A2 (ru)

Families Citing this family (120)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9928196D0 (en) 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
MXPA03006561A (es) 2001-01-23 2004-10-15 Aventis Pasteur Vacuna del conjugado proteina-polisacarido meningococico, multivalente.
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
GB0118249D0 (en) * 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
ES2616180T3 (es) * 2002-03-26 2017-06-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sacáridos modificados con estabilidad mejorada en agua para su uso como medicamento
MXPA04011249A (es) 2002-05-14 2005-06-06 Chiron Srl Vacunas mucosales con adyuvante de quitosano y antigenos meningococicos.
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
EP1524990A2 (en) * 2002-08-02 2005-04-27 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
CA2501812C (en) 2002-10-11 2012-07-10 Mariagrazia Pizza Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
EP2279746B1 (en) 2002-11-15 2013-10-02 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Surface proteins in neisseria meningitidis
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
US10272147B2 (en) * 2003-01-30 2019-04-30 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
GB0308198D0 (en) 2003-04-09 2003-05-14 Chiron Srl ADP-ribosylating bacterial toxin
JP4918356B2 (ja) * 2003-06-23 2012-04-18 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド Ｙ群髄膜炎菌ワクチン及びそれらの髄膜炎菌組合せワクチン
SI1961426T1 (sl) 2003-10-02 2011-10-28 Novartis Ag Kombinirana cepiva proti meningitisu
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
GB0408978D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines
GB0408977D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
PT1740217E (pt) 2004-04-30 2011-08-02 Novartis Ag Vacinação meningocócica conjugada
GB0410866D0 (en) 2004-05-14 2004-06-16 Chiron Srl Haemophilius influenzae
GB0411387D0 (en) * 2004-05-21 2004-06-23 Chiron Srl Analysis of saccharide length
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
CA2577920A1 (en) * 2004-08-30 2006-03-09 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
MX2007003292A (es) * 2004-09-21 2007-09-07 Sanofi Pasteur Inc Conjugados y vacuna con proteinas de polisacarido derivadas meningococales multivalentes.
GB0424092D0 (en) 2004-10-29 2004-12-01 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
GB0502096D0 (en) * 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Purification of streptococcal capsular polysaccharide
GB0502095D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Conjugation of streptococcal capsular saccharides
AU2006216844B2 (en) 2005-02-18 2012-11-08 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Immunogens from uropathogenic escherichia coli
ES2595363T3 (es) 2005-02-18 2016-12-29 J. Craig Venter Institute, Inc. Sepsis asociada a las proteínas y los ácidos nucleicos de meningitis / Escherichia coli
GB0505518D0 (en) 2005-03-17 2005-04-27 Chiron Srl Combination vaccines with whole cell pertussis antigen
CN104815327A (zh) 2005-04-08 2015-08-05 惠氏有限责任公司 多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物
CA2605179A1 (en) 2005-04-18 2006-10-26 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation
MX2007016237A (es) 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
GB0513069D0 (en) * 2005-06-27 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0513071D0 (en) * 2005-06-27 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
US8007807B2 (en) 2005-09-01 2011-08-30 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Multiple vaccination including serogroup C meningococcus
EP2208999B1 (en) * 2005-09-05 2014-08-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Serum bactericidal assay for N. meningitidis specific antisera
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
KR101947794B1 (ko) 2006-03-17 2019-02-13 더 거버먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카 에즈 레프리젠티드 바이 더 세크러테리 오브 더 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비시즈 복합 다가 면역원성 콘쥬게이트의 제조 방법
US10828361B2 (en) * 2006-03-22 2020-11-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
PT2004225E (pt) 2006-03-22 2012-05-30 Novartis Ag Regimes para imunização com conjugados meningocócicos
GB0605757D0 (en) 2006-03-22 2006-05-03 Chiron Srl Separation of conjugated and unconjugated components
TW200806315A (en) * 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
CN101081296B (zh) * 2006-05-29 2010-08-04 北京民海生物科技有限公司 一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖制备方法及其联合疫苗
US7491517B2 (en) 2006-07-19 2009-02-17 Jeeri R Reddy Method of producing meningococcal meningitis vaccine for Neisseria meningitidis serotypes A,C,Y, and W-135
US20100166788A1 (en) 2006-08-16 2010-07-01 Novartis Vaccines And Diagnostics Immunogens from uropathogenic escherichia coli
JP5260531B2 (ja) * 2006-10-10 2013-08-14 ワイス・エルエルシー 肺炎連鎖球菌３型多糖体の精製
GB0700136D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Process for manufacturing vaccines
GB0700562D0 (en) * 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
PT3406635T (pt) * 2007-03-23 2022-07-08 Wyeth Llc Processo de purificação abreviado para a produção de polissacáridos capsulares de streptococcus pneumoniae
WO2008129559A2 (en) * 2007-04-23 2008-10-30 Serum Institute Of India Ltd Antigenic polysaccharides and process for their preparation
CA2688268A1 (en) * 2007-06-04 2008-12-11 Novartis Ag Formulation of meningitis vaccines
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
EP2674169B1 (en) * 2007-09-11 2015-01-28 University Of Guelph Polysaccharide immunogens from Clostridium difficile
SI2200642T1 (sl) 2007-10-19 2012-06-29 Novartis Ag Formulacije meningokoknega cepiva
EP2886551A3 (en) 2008-02-21 2015-09-23 Novartis AG Meningococcal fhbp polypeptides
CN101724085B (zh) * 2008-10-22 2011-09-21 上海生物制品研究所 一种荚膜多糖纯化方法
WO2010049806A1 (en) 2008-10-27 2010-05-06 Novartis Ag Purification method
GB0822633D0 (en) * 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
MX2011006648A (es) 2008-12-17 2011-10-14 Novartis Ag Vacunas meningococales que incluyen receptor de hemoglobina.
CA2772104A1 (en) 2009-08-27 2011-03-03 Novartis Ag Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences
MX338753B (es) 2009-09-30 2016-04-29 Novartis Ag Conjugacion de polisacaridos capsulares de tipo 5 y de tipo 8 de staphylococcus aureus.
US20130022633A1 (en) 2009-10-27 2013-01-24 University Of Florence MENINGOCOCCAL fHBP POLYPEPTIDES
AU2010310919B2 (en) 2009-10-30 2015-05-07 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides
CN102802662A (zh) 2010-03-18 2012-11-28 诺华有限公司 用于脑膜炎球菌血清组b的含佐剂疫苗
CA2808975C (en) 2010-08-23 2018-10-30 Wyeth Llc Stable formulations of neisseria meningitidis rlp2086 antigens
EP2612148B1 (en) 2010-09-04 2019-06-12 GlaxoSmithKline Biologicals SA Bactericidal antibody assays to assess immunogenicity and potency of meningococcal capsular saccharide vaccines
ES2864635T3 (es) 2010-09-10 2021-10-14 Wyeth Llc Variantes no lipidadas de antígenos ORF2086 de Neisseria meningitidis
GB201101665D0 (en) 2011-01-31 2011-03-16 Novartis Ag Immunogenic compositions
WO2012085668A2 (en) 2010-12-24 2012-06-28 Novartis Ag Compounds
AU2012222883A1 (en) 2011-03-02 2013-10-17 Novartis Ag Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
EP2729178A1 (en) 2011-07-08 2014-05-14 Novartis AG Tyrosine ligation process
CU20110202A7 (es) 2011-11-02 2013-12-27 Inst Finlay Ct De Investigación Producción De Sueros Y Vacunas Composición inmunogénica de polisacáridos planos adyuvados y las formulaciones resultantes
CA2854934A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Novartis Ag Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen
HUE040914T4 (hu) * 2012-01-30 2019-05-28 Serum Institute Of India Pvt Ltd Immunogén készítmény
CN104159603A (zh) 2012-03-08 2014-11-19 诺华股份有限公司 带有tlr4激动剂的联合疫苗
KR101716557B1 (ko) 2012-03-09 2017-03-14 화이자 인코포레이티드 수막염균 조성물 및 이의 사용 방법
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
BR112014029313A2 (pt) 2012-05-22 2017-06-27 Novartis Ag conjugado de meningococos do sorogrupo x
CN104487086B (zh) * 2012-07-07 2019-08-30 巴拉特生物技术国际有限公司 无动物源的不含酒精的疫苗组合物及其制备方法
CN103623404B (zh) * 2012-08-28 2016-08-03 天士力制药集团股份有限公司 一种b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的制备方法
JP6324961B2 (ja) 2012-09-06 2018-05-16 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン
CN104936615B (zh) * 2012-11-21 2017-03-29 印度血清研究所私人有限公司 高产量的细菌多糖的制备
CN105007935A (zh) 2012-12-18 2015-10-28 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于保护免于白喉和/或破伤风的缀合物
ES2685894T3 (es) 2013-03-08 2018-10-15 Pfizer Inc. Polipéptidos de fusión inmunogénicos
EA201690205A1 (ru) 2013-07-11 2016-12-30 Новартис Аг Сайт-специфические химико-ферментативные модификации белков
CA2912765C (en) 2013-07-12 2018-05-01 Emd Millipore Corporation A method of determining virus removal from a sample containing a target protein using activated carbon
CA2923129C (en) 2013-09-08 2020-06-09 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US10392424B2 (en) 2014-02-28 2019-08-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified meningococcal fHbp polypeptides
US20170198004A1 (en) 2014-05-24 2017-07-13 Biological E Limited Novel semi-synthetic meningococcal conjugate vaccine
CN104548090B (zh) * 2015-01-27 2016-11-30 中国科学院过程工程研究所 一种β-葡聚糖修饰的脑膜炎多糖结合疫苗及其制备方法
MX2017010705A (es) 2015-02-19 2017-12-04 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y metodos de la misma.
CN105037579A (zh) * 2015-08-31 2015-11-11 成都欧林生物科技股份有限公司 A群脑膜炎球菌细菌荚膜粗多糖的制备工艺
WO2017175082A1 (en) 2016-04-05 2017-10-12 Gsk Vaccines S.R.L. Immunogenic compositions
CN109890413B (zh) 2016-09-02 2024-04-16 赛诺菲巴斯德股份有限公司 脑膜炎奈瑟氏菌疫苗
US12161707B2 (en) 2016-09-02 2024-12-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for Neisseria gonorrhoeae
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
CN118662649A (zh) 2016-12-30 2024-09-20 Vaxcyte公司 具有非天然氨基酸的多肽-抗原缀合物
KR102567845B1 (ko) 2017-01-31 2023-08-17 화이자 인코포레이티드 네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법
US11246918B2 (en) 2017-02-03 2022-02-15 Eva Barbara Schadeck Haemophilus influenzae saccharide-carrier conjugate compositions and uses thereof
US11400162B2 (en) 2017-02-24 2022-08-02 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
US20200061542A1 (en) * 2017-02-24 2020-02-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for improving filterability of polysaccharide-protein conjugate reactions
EP3619241A1 (en) 2017-05-05 2020-03-11 Serum Institute Of India Private Limited Method for removal of impurities from bacterial capsular polysaccharide based preparations
KR20200010321A (ko) * 2017-05-17 2020-01-30 엠에스디 웰컴 트러스트 힐레맨 랩스 피브이티. 리미티드 세균성 다당류의 정제
CN111050794A (zh) * 2017-09-07 2020-04-21 默沙东公司 将肺炎球菌多糖与载体蛋白缀合的配制方法
WO2019175900A1 (en) * 2018-03-16 2019-09-19 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. Purification of neisseria meningitidis polysaccharides
WO2020182635A1 (en) * 2019-03-08 2020-09-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa Carbocyclic derivatives and conjugated derivatives thereof, and their use in vaccines
BR112021022429A2 (pt) 2019-05-10 2022-03-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Produção de conjugados
EP4061412A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
GB202013262D0 (en) 2020-08-25 2020-10-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine Composition
CN115721709A (zh) * 2021-08-27 2023-03-03 康希诺生物股份公司 一种肺炎球菌结合疫苗制备方法
GB202115151D0 (en) 2021-10-21 2021-12-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Methods
GB202208093D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
GB202208089D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996040242A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein
RU2105568C1 (ru) * 1989-12-14 1998-02-27 Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b

Family Cites Families (144)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB207117A (en) 1923-04-05 1923-11-22 Fernand Prosper Constant Lebru Improvements in otter boards
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4123520A (en) * 1977-08-01 1978-10-31 Merck & Co., Inc. Method for preparing high molecular weight meningococcal Group C vaccine
US4134214A (en) 1977-08-05 1979-01-16 Merck & Co., Inc. Freeze-drying process for the preparation of meningococcus vaccine without degradation of potency
DE2748132A1 (de) 1977-10-27 1979-05-03 Behringwerke Ag Stabilisator fuer polysaccharid
US4220717A (en) 1977-12-22 1980-09-02 American Cyanamid Company Isolation and purification of polyribosyl ribitol phosphate from Haemophilus influenzae type b.
US4242501A (en) * 1979-08-08 1980-12-30 American Cyanamid Company Purification of pneumococcal capsular polysaccharides
US4351762A (en) 1981-03-10 1982-09-28 Bioresearch, Inc. Rapid, quantitative peptide synthesis using mixed anhydrides
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
BE889979A (fr) * 1981-08-14 1982-02-15 Smith Kline Rit Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4451446A (en) * 1982-03-04 1984-05-29 Smithkline-Rit Process for the preparation of polysaccharide-protein complexes from bacterial capsules, obtained products and immunogenic compositions containing them
US4496538A (en) 1982-07-06 1985-01-29 Connaught Laboratories, Inc. Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine
JPS59176214A (ja) * 1982-11-23 1984-10-05 ザ・ウエルカム・フアウンデ−シヨン・リミテツド 抗原性組成物
EP0109688A3 (en) * 1982-11-23 1986-12-03 The Wellcome Foundation Limited Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4762713A (en) 1983-07-05 1988-08-09 The University Of Rochester Boosting of immunogenic conjugate vaccinations by unconjugated bacterial capsular polymers
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
JPH0720878B2 (ja) * 1983-11-21 1995-03-08 ザ ウエルカム フアウンデ−シヨン リミテツド 改善された複合体、それらの製造法および該複合体を含有する製剤
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4882317A (en) 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US4814276A (en) 1986-04-25 1989-03-21 Becton, Dickinson And Company Selective medium for growth of neisseria
US4877613A (en) 1987-08-05 1989-10-31 Biotech Connections, Inc. Process for preparing veterinary acellular vaccines against gram-negative nonenteric pathogenic bacilli
US4761713A (en) * 1987-11-06 1988-08-02 North American Philips Corp. Glycol based mid-volt capacitor
GB8815795D0 (en) 1988-07-02 1988-08-10 Bkl Extrusions Ltd Glazing bead
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
EP0449958B9 (en) 1988-12-19 2003-05-28 American Cyanamid Company Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
US4963534A (en) 1989-05-19 1990-10-16 Merck & Co., Inc. Process for solubilizing polyanoinic bacterial polysaccharides in aprotic solvents
WO1990014837A1 (en) 1989-05-25 1990-12-13 Chiron Corporation Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
CA2063271A1 (en) 1989-07-14 1991-01-15 Subramonia Pillai Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
EP0471177B1 (en) 1990-08-13 1995-10-04 American Cyanamid Company Filamentous hemagglutinin of bordetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines
US5256294A (en) * 1990-09-17 1993-10-26 Genentech, Inc. Tangential flow filtration process and apparatus
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2059693C (en) 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
DE69231663T2 (de) 1991-03-12 2001-08-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Polysaccharid-protein-konjugate
CZ28694A3 (en) * 1991-08-16 1994-05-18 Merck & Co Inc Process for preparing capsular polysaccharide free of lipid and endotoxin
US5314811A (en) 1992-07-13 1994-05-24 Merck & Co., Inc. Process for converting lipid-containing bacterial capsular polysaccharide into lipid-free polysaccharide
FR2682388B1 (fr) 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
DE69334197T2 (de) 1992-03-02 2008-12-11 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Helicobacter pylori Cytotoxin verwendbar in Impfstoffe und Diagnostik
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
PT835663E (pt) 1992-05-23 2010-01-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacinas combinadas compreendendo o antigénio de superfície da hepatite b e outros antigénios
DK0671948T3 (da) 1992-06-25 1997-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccinepræparat indeholdende adjuvanser
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
AU685443B2 (en) 1993-03-23 1998-01-22 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Vaccine compositions containing 3-O deacylated monophosphoryl lipid A
ES2210262T3 (es) 1993-09-22 2004-07-01 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Procedimiento que permite activar un glucido soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir estructuras inmunogenas.
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
AU695769B2 (en) 1994-07-01 1998-08-20 Provost Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin, The Helicobacter proteins and vaccines
EP1167377B2 (en) 1994-07-15 2012-08-08 University of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
GB9422096D0 (en) 1994-11-02 1994-12-21 Biocine Spa Combined meningitis vaccine
US6696065B1 (en) * 1995-05-04 2004-02-24 Aventis Pastuer Limited Acellular pertussis vaccines and methods of preparation thereof
US5811102A (en) 1995-06-07 1998-09-22 National Research Council Of Canada Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines
US20030157129A1 (en) 1995-06-23 2003-08-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein
US20020054884A1 (en) 1995-06-23 2002-05-09 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate
SI1082965T1 (sl) 1995-06-23 2009-08-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Sestavek cepiva, ki vsebuje antigen konjugata polisaharida, adsorbiranega na aluminijevem fosfatu
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
WO1997025429A1 (en) 1996-01-04 1997-07-17 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
JP2001508758A (ja) 1996-02-01 2001-07-03 ノース・アメリカン・バクシーン・インコーポレイテッド グループｂナイセリア・メニンギチジス外膜（ｍｂ３）タンパク質の酵母からの発現およびワクチン
PT897427E (pt) * 1996-02-14 2005-01-31 Merck & Co Inc Processo de precipitacao de polissacarideos
DE19630390A1 (de) 1996-07-26 1998-01-29 Chiron Behring Gmbh & Co Proteine, insbesondere Membranproteine von Helicobacter pylori, ihre Herstellung und Verwendung
DK0939647T4 (da) * 1996-08-27 2006-10-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Neisseria Meningitidis-serogruppe B-glycokonjugat og fremgangsmåde til anvendelse deraf
ATE292980T1 (de) 1996-10-11 2005-04-15 Univ California Immunostimulierende oligonucleotidekonjugate
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
US6248334B1 (en) 1997-01-08 2001-06-19 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Process for preparing conjugate vaccines including free protein and the conjugate vaccines, immunogens, and immunogenic reagents produced by this process
KR100593466B1 (ko) 1997-01-21 2007-04-25 파스퇴르 메리오 세룸 에 박신 다당류-펩타이드접합체
DK0975790T3 (da) * 1997-01-24 2005-01-24 Berna Biotech Ag Ny fremgangsmåde til isolering af polysaccharider
US6214806B1 (en) 1997-02-28 2001-04-10 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CPC dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders
ATE441432T1 (de) 1997-03-10 2009-09-15 Ottawa Hospital Res Inst Verwendung von nicht-methyliertem cpg dinukleotid in kombination mit aluminium als adjuvantien
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
US6403306B1 (en) 1997-04-09 2002-06-11 Emory University Serogroup-specific nucleotide sequences in the molecular typing of bacterial isolates and the preparation of vaccines thereto
CA2288267A1 (en) 1997-04-24 1998-10-29 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Coupling of unmodified proteins to haloacyl or dihaloacyl derivatized polysaccharides for the preparation of protein-polysaccharide vaccines
CA2301575C (en) 1997-05-20 2003-12-23 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
DK0983342T3 (da) 1997-05-28 2008-01-07 Novartis Vaccines & Diagnostic Dyrkningsmedium med sojabönneekstrakt som aminosyrekilde og ingen proteinkomplekser af dyreoprindelse
DE69840850D1 (de) 1997-06-06 2009-07-09 Dynavax Tech Corp Inhibitoren von immunstimulatorischen dna sequenz aktivität
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
US6413520B1 (en) 1997-06-24 2002-07-02 Chiron Corporation Methods of immunizing adults using anti-meningococcal vaccine compositions
EP1007546B1 (en) * 1997-08-27 2009-01-21 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Molecular mimetics of meningococcal b epitopes
EP1279401B1 (en) 1997-09-05 2008-01-09 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
CA2671261A1 (en) 1997-11-06 1999-05-20 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Neisserial antigens
AU762606B2 (en) 1997-11-21 2003-06-26 Genset S.A. Chlamydia pneumoniae genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
GB9725084D0 (en) 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
EP2228384A1 (en) 1997-11-28 2010-09-15 Merck Serono Biodevelopment Chlamydia trachomatis genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
KR100641490B1 (ko) 1997-12-23 2006-10-31 박스터 헬쓰케어 에스.에이. 백신용도이거나 결합백신으로서 단백질에 결합되는 세균성 캡슐형 다당류의 추출 및 단리방법
CA2317815A1 (en) 1998-01-14 1999-07-22 Chiron S.P.A. Neisseria meningitidis antigens
US7018637B2 (en) * 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
GB9806456D0 (en) * 1998-03-25 1998-05-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
AU746163B2 (en) 1998-04-09 2002-04-18 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Adjuvant compositions
PT1093517E (pt) 1998-05-01 2008-06-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Antigénios e composições da neisseria msningitidis
WO1999061053A1 (en) † 1998-05-29 1999-12-02 Chiron Corporation Combination meningitidis b/c vaccines
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU771330B2 (en) 1998-08-19 2004-03-18 Baxter Healthcare Sa Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an N-acryloylated polysaccharide
US6128656A (en) * 1998-09-10 2000-10-03 Cisco Technology, Inc. System for updating selected part of configuration information stored in a memory of a network element depending on status of received state variable
MXPA01003557A (es) 1998-10-09 2004-04-05 Chiron Corp Secuencias genomicas de neisseria y metodos para su uso.
EP1126876B1 (en) 1998-10-16 2007-03-21 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Adjuvant systems and vaccines
EP1133572A4 (en) 1998-11-12 2005-06-15 Univ California GENOMIC SEQUENCE OF CHLAMYDIA PNEUMONIAE
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
HU229968B1 (hu) * 1999-03-19 2015-03-30 Smithkline Beecham Biologicals S.A Sztreptokokkusz oltóanyag
FR2791895B1 (fr) 1999-03-23 2001-06-15 Pasteur Merieux Serums Vacc Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide
WO2000061761A2 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
KR100922031B1 (ko) 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
WO2000071725A2 (en) 1999-05-19 2000-11-30 Chiron S.P.A. Combination neisserial compositions
GB9918319D0 (en) * 1999-08-03 1999-10-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US6531131B1 (en) 1999-08-10 2003-03-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for Neisseria meningitidis
AU766635B2 (en) 1999-09-24 2003-10-23 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Adjuvant comprising a polyxyethylene alkyl ether or ester and at least one nonionic surfactant
HUP0202885A3 (en) 1999-09-24 2004-07-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9925559D0 (en) 1999-10-28 1999-12-29 Smithkline Beecham Biolog Novel method
JP4948731B2 (ja) * 1999-12-02 2012-06-06 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 凍結乾燥の際に生物学的分子を安定化するための組成物および方法
EP2281570A3 (en) 2000-01-17 2012-05-09 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Outer membrane vesicle (OMV) vaccine comprising n. meningitidis serogroup B outer membrane proteins
PT2270030E (pt) 2000-02-28 2012-07-24 Novartis Vaccines & Diagnostic Expressão heteróloga de proteínas de neisseria
US6800455B2 (en) 2000-03-31 2004-10-05 Scios Inc. Secreted factors
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
IL153506A0 (en) 2000-06-29 2003-07-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Multivalent vaccine composition
EP1297005B1 (en) 2000-07-03 2009-08-26 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia pneumoniae
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU2001294898B2 (en) * 2000-09-28 2006-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostic Inc. Microparticle compositions and methods for the manufacture thereof
MXPA03003690A (es) 2000-10-27 2004-05-05 Chiron Spa Acidos nucleicos y proteinas de los grupos a y b de estreptococos.
MXPA03006561A (es) 2001-01-23 2004-10-15 Aventis Pasteur Vacuna del conjugado proteina-polisacarido meningococico, multivalente.
JP2004527524A (ja) * 2001-04-05 2004-09-09 カイロン コーポレイション 非経口初回抗原刺激後の粘膜追加免疫
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
CA2462646C (en) 2001-10-03 2013-02-12 Chiron Corporation Adjuvanted meningococcus compositions
ES2616180T3 (es) 2002-03-26 2017-06-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sacáridos modificados con estabilidad mejorada en agua para su uso como medicamento
AU2003239744B2 (en) 2002-05-14 2008-07-03 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Mucosal combination vaccines for bacterial meningitis
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
GB0220198D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
CA2501812C (en) 2002-10-11 2012-07-10 Mariagrazia Pizza Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
US10272147B2 (en) 2003-01-30 2019-04-30 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
GB0409745D0 (en) * 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
PT2004225E (pt) 2006-03-22 2012-05-30 Novartis Ag Regimes para imunização com conjugados meningocócicos
US10828361B2 (en) 2006-03-22 2020-11-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
GB0822633D0 (en) * 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB2495341B (en) * 2011-11-11 2013-09-18 Novartis Ag Fermentation methods and their products

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2105568C1 (ru) * 1989-12-14 1998-02-27 Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b
WO1996040242A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein

Also Published As

Publication number Publication date
DK1741442T3 (da) 2010-08-30
JP5380111B2 (ja) 2014-01-08
US20090130140A1 (en) 2009-05-21
BR0210590A (pt) 2004-11-09
JP5075317B2 (ja) 2012-11-21
JP2009114210A (ja) 2009-05-28
EP2277537B1 (en) 2015-03-25
CA2641585C (en) 2011-02-08
CN101524535B (zh) 2015-12-16
AU2002321716B2 (en) 2007-04-26
ES2387592T3 (es) 2012-09-26
PT2184071T (pt) 2016-11-14
EP2277537A3 (en) 2011-03-02
CY1118130T1 (el) 2017-06-28
RU2381814C2 (ru) 2010-02-20
US20090182128A1 (en) 2009-07-16
US20090117148A1 (en) 2009-05-07
EP1401489B2 (en) 2013-04-10
EP1741442A2 (en) 2007-01-10
US20090182129A1 (en) 2009-07-16
NL300460I2 (ru) 2016-12-20
DE122011000003I1 (de) 2011-05-05
LU91734I2 (fr) 2011-03-14
TR201808055T4 (tr) 2018-06-21
ATE556718T1 (de) 2012-05-15
DE122010000042I1 (de) 2010-12-16
CN101524534B (zh) 2014-05-28
AU2007203442B2 (en) 2010-08-26
EP2277537A2 (en) 2011-01-26
DE60210456D1 (de) 2006-05-18
TR201808026T4 (tr) 2018-06-21
PT2277536T (pt) 2018-03-21
EP1401489B1 (en) 2006-04-05
BRPI0210590B1 (pt) 2019-10-01
MXPA03011462A (es) 2005-04-19
ES2670219T3 (es) 2018-05-29
EP2277536A3 (en) 2011-02-23
ES2662015T3 (es) 2018-04-05
DE122010000041I1 (de) 2010-12-16
LU91733I2 (fr) 2011-03-14
JP2004536859A (ja) 2004-12-09
LU91778I2 (fr) 2011-03-14
PT2277537E (pt) 2015-06-30
CA2641585A1 (en) 2003-01-30
US8753651B2 (en) 2014-06-17
EP2263688A1 (en) 2010-12-22
EP2263688B1 (en) 2012-05-09
US20170043004A1 (en) 2017-02-16
BRPI0210590B8 (pt) 2021-05-25
CA2730856C (en) 2015-07-28
BE2010C031I2 (ru) 2021-07-19
DK1401489T3 (da) 2006-07-03
US8852606B2 (en) 2014-10-07
EP2184071B1 (en) 2016-08-31
EP2277539A3 (en) 2011-03-02
EP2229954B1 (en) 2018-03-21
EP1741442A3 (en) 2007-01-17
LU91734I9 (ru) 2019-01-07
NZ544332A (en) 2006-10-27
CN101524533A (zh) 2009-09-09
DK2263688T3 (da) 2012-07-30
DK2277536T3 (en) 2018-02-26
DE60210456T2 (de) 2006-11-16
EP2277536B1 (en) 2018-01-31
FR11C0001I2 (fr) 2017-05-19
CA2450203C (en) 2011-04-19
BR122019009186B1 (pt) 2020-05-26
FR10C0043I1 (fr) 2010-10-29
CY1113020T1 (el) 2016-04-13
JP2013007057A (ja) 2013-01-10
CY1110820T1 (el) 2012-01-25
EP2263688B2 (en) 2019-12-25
CN100482273C (zh) 2009-04-29
CY2011001I1 (el) 2012-01-25
AU2010246331A1 (en) 2010-12-09
CN101524535A (zh) 2009-09-09
DE122010000040I1 (de) 2010-12-16
AU2007203442A1 (en) 2007-08-16
CY1120499T1 (el) 2019-07-10
EP1741442B1 (en) 2010-07-21
ES2573259T3 (es) 2016-06-06
EP2184071A1 (en) 2010-05-12
FR10C0044I1 (fr) 2010-10-29
US10716841B2 (en) 2020-07-21
US9782466B2 (en) 2017-10-10
EP2277536A2 (en) 2011-01-26
BE2011C001I2 (ru) 2021-07-19
EP2189165B1 (en) 2016-03-09
WO2003007985A2 (en) 2003-01-30
CA2450203A1 (en) 2003-01-30
DE60237123D1 (de) 2010-09-02
ES2261705T5 (es) 2013-07-22
ES2347458T3 (es) 2010-10-29
LU91733I9 (ru) 2019-01-07
EP2216044A1 (en) 2010-08-11
NZ529881A (en) 2006-03-31
ATE322287T1 (de) 2006-04-15
DK1401489T4 (da) 2013-07-01
BE2010C033I2 (ru) 2021-07-19
DK2263688T4 (da) 2020-03-02
US9452207B2 (en) 2016-09-27
LU91732I9 (ru) 2019-01-07
PT1741442E (pt) 2010-10-28
JP5220658B2 (ja) 2013-06-26
US20090130147A1 (en) 2009-05-21
ES2261705T3 (es) 2006-11-16
WO2003007985A3 (en) 2003-12-24
PT2263688E (pt) 2012-08-02
NL300458I2 (ru) 2016-12-20
LU91778I9 (ru) 2019-01-07
EP1401489A2 (en) 2004-03-31
DK2184071T3 (en) 2016-11-07
RU2009108660A (ru) 2010-09-20
LU91732I2 (fr) 2011-03-14
EP2277539A2 (en) 2011-01-26
CN1518456A (zh) 2004-08-04
BR122019009186B8 (pt) 2021-07-27
US8889152B2 (en) 2014-11-18
AU2010246331B2 (en) 2012-11-08
CY1117528T1 (el) 2017-04-26
CY2011001I2 (el) 2012-01-25
US20090181049A1 (en) 2009-07-16
US20050106181A1 (en) 2005-05-19
ES2387592T5 (es) 2020-07-30
ES2603275T3 (es) 2017-02-24
DK2189165T3 (en) 2016-06-13
EP2216044B1 (en) 2018-03-21
FR11C0001I1 (ru) 2011-02-25
US20090181053A1 (en) 2009-07-16
ES2539134T3 (es) 2015-06-26
US9358278B2 (en) 2016-06-07
ATE474594T1 (de) 2010-08-15
CA2730856A1 (en) 2003-01-30
CN101524534A (zh) 2009-09-09
PT1401489E (pt) 2006-08-31
EP2189165A1 (en) 2010-05-26
GB0115176D0 (en) 2001-08-15
JP2009114211A (ja) 2009-05-28
US9782467B2 (en) 2017-10-10
BE2010C032I2 (ru) 2021-07-19
NL300459I2 (ru) 2016-12-20
DE60210456T3 (de) 2013-09-05
RU2004101284A (ru) 2005-06-27
EP2229954A1 (en) 2010-09-22
FR10C0042I1 (fr) 2010-10-29
ES2670196T3 (es) 2018-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2528066C2 (ru) Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов
AU2002321716A1 (en) Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
AU2014218428B2 (en) Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
AU2012230097A1 (en) Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines