RU2521711C1 - Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа - Google Patents
Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2521711C1 RU2521711C1 RU2013105360/28A RU2013105360A RU2521711C1 RU 2521711 C1 RU2521711 C1 RU 2521711C1 RU 2013105360/28 A RU2013105360/28 A RU 2013105360/28A RU 2013105360 A RU2013105360 A RU 2013105360A RU 2521711 C1 RU2521711 C1 RU 2521711C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sample
- urine
- nitrosodimethylamine
- gas
- nitrosodiethylamine
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения N-нитрозаминов в биологических жидкостях, в частности в моче. Способ количественного определения N-нитрозаминов в моче заключается в том, что производят отбор пробы мочи. Далее осуществляют подготовку пробы мочи к анализу, для этого добавляют к ней сульфат натрия при соотношении: 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия, смесь нагревают на водяной бане до установления фазового равновесия, в дальнейшем производят отбор образовавшейся парогазовой пробы и вводят эту пробу в капиллярную колонку газохроматографа. Осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику. Техническим результат является расширение спектра определения нитрозоаминов в моче, повышение чувствительности и точности, при одновременном упрощении стадии пробоподготовки. 3 з.п. ф-лы, 4 табл.
Description
Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения N-нитрозаминов в биологических жидкостях, в частности в моче.
Из патентной литературы известны способы определения N-нитрозаминов в воде (Патент РФ №2090864 и Авт. свид. СССР №1259187). Согласно первому патенту, выполняют колориметрический анализ природных и сточных вод, загрязненных высокотоксичными химическими веществами, такими как диметилгидразин и продукт его окисления - нитрозодиметиламин (НДМА). При анализе известным способом водный раствор НДМА смешивают с цинком в присутствии гидроокиси натрия в течение 1-3 мин при соотношении воды к гидроокиси натрия и к цинку, равном 1:(0,013-0,047):(0,005-0,15) соответственно, в реакционный раствор после отделения цинка вносят гидроксиламин солянокислый при массовом соотношении раствор: гидроксиламин солянокислый 1: 0,02 и гидроксид натрия при массовом соотношении воды к общему содержанию гидроокиси натрия, равном 1:(0,23-0,33), с последующей отдувкой образовавшегося несимметричного диметилгидразина в смесь паранитробензальдегида, этиленгликоля и уксусной кислоты с последующим его колориметрированием.
А согласно техническому решению по Авт.свид. СССР №1259187 проводят газохроматографическое определение летучих аминов и нитрозоаминов в пищевых продуктах и в других объектах окружающей среды. При реализации этого способа производят подготовку пробы путем экстракции и последующей обработки ее соляной кислотой и щелочью, и последующий газохроматографический анализ.
Недостатком указанного известного способа определения N-нитрозаминов в воде (Патент РФ №2090864 и Авт.свид. СССР №1259187) является неспецифичность и неселективность колориметрического метода. Это физический метод химического анализа, основанный на определении концентрации вещества по интенсивности окраски растворов. Невозможно сравнивать интенсивность окраски раствора в присутствии других окрашенных мешающих веществ. Мешающие вещества снижают чувствительность метода.
Также из уровня техники известен ряд методов определения нитрозоаминов в биосредах. Например, для определения N-нитрозодиметиламина в биосредах (Pylypiw НМ Jr., Zimmerman F, Harrington GW, et al. 1985. Apparatus for trace determination of volatile N-nitrosamines in small samples. Anal Chem 57:2996-2997) используется метод газовой хроматографии с термоэнергетическим анализом. Для этого в объем 2 см образцов крови или мочи добавляют серную кислоту и антивспениватель. Затем проводят экстракцию образцов крови или мочи хлористым метиленом в экстракторе. Биологические образцы концентрируют и анализируют методом газовой хроматографии с термоэнергетическим анализатором. Предел обнаружения N-нитрозодиметиламина в биологической среде этим известным способом составил 0,1 мкг/л.
Недостатком указанного известного способа является высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды и невозможность определения N-нитрозодиэтиламина. При этом для осуществления этого процесса используется дорогостостоящее оборудование - термоэнергетический анализатор.
В известном способе [Preussmann R. 1984. Occurrence and exposure to N-nitroso compounds and precursors. IARC Sci Publ. 57:3-15. Spiegelhalder B, Eisenbrand G, Preussmann R. 1982. Urinary excretion of N-nitrosamines in rats and humans. IARC Sci Publ 41:443-449] проводили качественное определение N-диметилнитрозамина в моче методом тонкослойной хроматографии. Для исследований использовали силикагель-гель, нанесенный на стеклянные пластины. В качестве растворителя применяли смесь N-гексан-эфир и дихлорметан в соотношениях 4:3 и 2:2. Положительный фиолетовый цвет на пластинах подтвердил присутствие нитрозаминов в моче.
В статье «Метод непрерывной твердофазной экстракции для определения аминов в моче человека с кислотным гидролизом в микроволновой печи» [Beatriz Jurado-Sanchez, Evaristo Ballesteros and Mercedes Gallego. Continuous solid-phase extraction method for the determination of amines in human urine following on-line microwave-assisted acid hydrolysis. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY Volume 396, Number 5, 1929-1937, DOI: 10.1007/s00216-009-3395-3] предложен метод для определения N-нитрозаминов, анилинов и хлоранилинов в моче человека с помощью кислотного гидролиза в микроволновой печи. После этого амины концентрировались с использованием метода твердофазной экстракции. Разделение и определение выполнялось методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии, работающей в режиме контроля заданных ионов. Метод имеет низкий предел обнаружения (2-26 нг/л), хорошую точность (относительное стандартное отклонение менее 7%).
Однако все указанные выше способы характеризуются следующими недостатками:
- большие затраты времени на исследования, ввиду сложности выполнения пробоподготовки;
- высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды и невозможность определения N-нитрозодиэтиламина;
- применение дорогостоящего оборудования;
- неспецифичность и неселективность метода.
Также известен метод газовой хроматографии и масс спектрометрии количественного определения нитрозодиметиламина и нитрозопролина в моче человека, описанный в статье «Выделение нитрозодиметиламина и нитрозопролина с мочей у человека: межличностные и внутрииндивидуальные различия, эффект от назначения аскорбиновой кислоты и альфа-токоферола» [William A. Garland, 1 Wolfgang Kuenzig, Felix Rubio, Halyna Kornychuk, Edward P. Norkus, 2 and Allan H. Conney. Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine and Nitrosoproline in Humans: Interindividual and Intraindividual Differences and the Effect of Administered Ascorbic Acid and a-Tocopherol. CANCER RESEARCH 46, 5392-5400, October 1986]. Согласно известному способу производили отбор пробы мочи, ее пробоподготовку и выполнение газохроматографического анализа. Сущность указанного известного способа состоит в следующем: в пробу мочи объемом 20 мл или контрольный водный образец добавляли 40 мкл НДМА с меченным I5N2-. Затем пробу переливали в 50 мл центрифужные пробирки, центрифугировали на вортексе и оставили стоять в течение 30 мин. После этого в пробу добавляли 1 мл 1 молярного боратного буфера (61,8 г борной кислоты и 74,7 хлорида калия растворяли в 1 дм3 дистиллированной воды и титровали этот раствор до рН=10 с 1 м карбоната натрия) и экстрагировали в течение 30 мин 20 мл гексана. Образец центрифугировали в течение 15 мин. Гексан удаляли с помощью аспирации и добавляли 10 мл дихлорметана. Проба перемешивалась и центрифугировалась способом, описанным выше, при этом слой дихлорметана разливали на 2 пробирки по 5 мл. Объем дихлорметана был уменьшен при комнатной температуре до 50 мкл под потоком аргона, вторично очищенного через ловушку с концентрированной серной кислотой.
Две пробы по 5 мкл раствора дихлорметана вводили в стеклянную колонку (1,9-м × 2 мм, 10% SP-1000 на 100/120 гранулы очищенного кислотой Chromosorb W) газового хроматографа. Температура колонки - 102°C, температура испарителя 150°C. В качестве газа носителя использовался водород (1,6 кг/см). Время удерживания для НДМА и НДМА с меченным l5N2 составило 90 с. Эффлюент из газохроматографической колонки через 45 с после введения направлялся в стеклянный сепаратор масс-спектрометра высокого разрешения с источником химически ионизированных ионов. Разрешающая способность масс-спектрометра составила М/ΔМ=10,000, ионы с m/z 75.0558 (МН+ от НДМА) и m/z 77.0499 (МН+ от 15N2-меченных НДМА) генерируются положительной химической ионизацией. Температура сепаратора и источника ионов составила 150°C. В пробу вводился изобутан через химическую ионизацию для обеспечения давления 20 Па. Небольшое количество изобутанола (МН+=75,0810) добавлялось в ионный источник для настройки и калибровки.
Отношение иона (y) с m/z 75 к m/z 77 в экспериментальном образце было вычислено и преобразовано в концентрацию НДМА из формулы x=(y-b)/m, где m-наклон и b-точка пересечения - это константы из среднеквадратичного линейнорегрессионного анализа отношения иона (ордината) против концентрации (абсцисса). Данные анализа дублировались на водных образцах (20 мл). В каждую пробу добавлялось 2000 пг 15N2-меченных НДМА или по 0, 200, 400, 800, 1600 пг НДМА. Количество НДМА, выделенное с мочой, вычислялось с поправкой на разбавление водой, морфолином и растворами азида натрия, которые добавлялись в контейнеры с мочой. Предел определения известным способом для НДМА составил 5 пг/мл (1 пг=10-12 грамма). Это очень высокая чувствительность достигается в результате использования хромато-масс-спектрометра высокого разрешения, ориентировочная стоимость которого около 20 млн. рублей.
Недостатками указанного известного способа являются:
- сложность подготовки образцов мочи к количественному определению, которую осуществляют путем длительной экстракции и перемешивания;
- в известном способе в моче определяют только НДМА;
- применение дорогостоящего оборудования - хромато-масс-спектрометр высокого разрешения с химической ионизацией молекул;
- применение дорогих стандартных образцов (изотоп меченных I5N2).
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения N-нитрозодиметиламина в биологической среде, описанный в статье Raymond Koseniauskas и Eric S. Burak «Reduced Blood Clearance and Increased Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine in Patas Monkeys Exposed to Ethanol or Isopropyl Alcohol 1». American Association for Cancer Research. 52,1463-1468, March 15, 1992. Согласно этому способу выполняют пробоподготовку отобранной биологической среды. Для этого рекомендуется использовать реакцию окисления с пентафлуоробензойной кислотой. Затем в биологический образец добавляют буфер, при рН 10 экстрагируют растворителем, затем растворитель концентрируют и проводят определение изучаемого соединения на газовом хроматографе с детектором электронного захвата.
Недостатком указанного известного способа является:
- недостаточная чувствительность, т.к. детектор электронного захвата обладает меньшей чувствительностью, чем, например, термоэнергетический анализ и требует более тщательной очистки биологического образца;
- невозможность определения N-нитрозодиэтиламина;
- неспецифичность и неселективность метода.
Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в расширении спектра определения нитрозоаминов в моче, в повышении чувствительности и точности, при одновременном упрощении стадии пробоподготовки.
Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа, включающим отбор пробы мочи, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа, при этом новым является то, что подготовку пробы мочи к анализу производят путем добавления к ней сульфата натрия при соотношении: 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия, с последующим нагревом смеси на водяной бане до установления фазового равновесия, последующего отбора образовавшейся парогазовой пробы и введения этой пробы в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику.
Газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина осуществляют с использованием газового хроматографа с термоионным детектором на капиллярной колонке DB-624
- 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3.
Нагрев смеси на водяной бане осуществляют в течение 5 минут. Отбор образовавшейся парогазовой пробы производят шприцом, нагретым до температуры 60±5°C.
Поставленный технический результат достигается за счет следующего.
Следует пояснить, что для повышения полноты извлечения изучаемых соединений из мочи используется прием высаливания, который является фактором, понижающим растворимость вещества в моче и повышающим его экстрагируемость из биологических жидкостей [Токсикологическая химия: учебник для вузов/ под ред. Плетеневой. - 2-е изд., испр. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 512 с]. Высаливание или выделение вещества из биологической жидкости путем введения вещества-высаливателя, как правило, хорошо растворимого в данном растворителе, приводит к разрушению связей между веществами и заряженными группами белков мочи [Михайлов В.А., "Ж. физ. химии", 1962, т.36, №2, с.306-13; Высаливание-всаливание веществ из растворов, Каунас, 1970]. В процессе высаливания извлекаемые вещества могут выделяться в виде новой фазы - твердого осадка, жидкой или газовой фазы. В предлагаемом способе в качестве вещества-высаливателя рекомендуется использовать сульфат натрия в виде порошка или, иными словами, в виде твердой фазы. Механизм высаливания заключается во взаимодействии анионов (SO4 2-) и катионов (Na+) соли с заряженными группами белков мочи (группы NH4 + и COO-). В результате заряд белка исчезает и одновременно резко уменьшается гидратная оболочка, т.к. ионы соли притягивают поляризованные молекулы воды. Количество воды, взаимодействующей с белком, уменьшается, поскольку при высоких концентрациях солей количество ионов соли огромно по сравнению с заряженными группами белков. А так как растворимость белков в воде зависит от образования гидратной оболочки вокруг гидрофильных ионных групп, перемещение молекул воды к другим ионам снижает растворимость белка. Все это приводит к "слипанию" молекул белка, их осаждению, высвобождению извлекаемых веществ и появлению их в моче в более высоких концентрациях.
При пробоподготовке производился последующий нагрев смеси мочи с сульфатом натрия в дозаторе равновесного пара (преимущественно, в течение 5 минут) до установления фазового равновесия. При этом при отработке оптимальных условий подготовки биопробы (моча) к парофазному анализу учитывали такие параметры как температура и давление, создаваемые в замкнутой гетерогенной системе жидкость-газ. Для исключения влияния изменений температуры и общего давления на точность парофазного анализа при количественных измерениях применяли технику пневматического парофазного дозирования биопроб в капиллярную колонку хроматографа дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER.
Цикл дозирования представляет собой механические операции, выполняемые дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER для переноса газовой фазы из виалы в газохроматографическую колонку. В процессе исследований были отработаны оптимальные параметры цикла дозирования проб мочи: температура термостата - 80°C; узла дозирования - 130°C; переходной линии - 135°C; время инкубации, мин - 25; расход газа-носителя - 60 мл/мин; оптимальное давление наддува - 0,2 bar.
Кроме того, вышеуказанные операции, по-видимому, обеспечивают снижение нижнего предела обнаружения и повышение чувствительности определений N-нитрозодиметиламина (НДМА) и N-нитрозодиэтиламина (НДЭА) в моче за счет их концентрирования с помощью метода селективной экстракции (методом анализа равновесной паровой фазы) из мочи N-нитрозаминов.
Экспериментальным путем были также подобраны оптимальные условия хроматографического процесса для четкого разделения пиков НДМА и НДЭА от пиков других соединений на аппаратно-программном комплексе "Кристалл 5000" с применением стандартных образцов. В процессе исследований были апробированы следующие капиллярные колонки различной длины и толщины пленки неподвижной фазы: DB-624, HP-FFAP, HP-Plot/U, HP-VOC. Качественное разделение N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) с близкими по физико-химическими свойствам соединениями было достигнуто на капиллярной колонке серии DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3. Это позволило расширить спектр определения нитрозоаминов в моче (два компонента вместо одного в прототипе) и повысить чувствительность и точность их определения.
Таким образом, благодаря совокупности и последовательности указанных операций предлагаемого способа, их режимам и обеспечивается высокая степень точности и чувствительности.
Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:
- проводят отбор пробы мочи в количестве примерно 10 см3;
- в виалы помещают по 5 см3 образца мочи и 16 г сульфата натрия (т.е. при соотношении 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия);
- виалы помещают в дозатор равновесного пара (пневматический парофазный дозатор биопроб);
- после установления фазового равновесия при оптимальных параметрах цикла дозирования проб мочи (температура термостата - 80°С, узла дозирования - 130°C, переходной линии - 135°C, время инкубации мин - 25, расход газа-носителя - 60 мл/мин, оптимальное давление наддува - 0,2 bar) парогазовая проба вводится в капиллярную колонку газохроматографа через испаритель и анализируют в условиях: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 -30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) - 20 см3/мин; количественное содержание N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина устанавливают по градуировочным графикам, которые строятся посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб мочи (дети проживают на экологически безопасной территории, и их пробы мочи не содержат нитрозамины) и стандартных растворов N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина.
Градуировочный график строится следующим образом.
Сначала осуществляют приготовление исходного раствора. Для этого в мерную пробирку объемом 10 см3 дозатором добавляют бидистиллированную воду в объеме 10 см3, вводят микрошприцем по 0,2 мм3 N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламин и N-нитрозодиэтиламин) (вводят по отдельности в одну мерную колбу. Строят отдельно график для первого и для второго). Весовое содержание компонентов в исходном стандартном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): N-нитрозодиметиламин - 0,2 мкг/см3, N-нитрозодиэтиламин - 0,19 мкг/см3. Срок хранения раствора 12 часов.
Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах N-нитрозоаминов методом абсолютной градуировки. Приготовленные стандартные растворы хроматографируют на капиллярной колонке не менее 5 раз. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий растворов для градуировки строят градуировочную характеристику. Она выражает зависимость площади пика исследуемого вещества на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от концентрации (мкг/см3). Каждая серия состоит из 6 растворов. Градуировочные растворы N-нитрозаминов готовят в мерных пробирках объемом 10 см3. Для этого в каждую пробирку дозатором вносят по 10 см бидисстилированной воды и добавляют исходный стандартный раствор для градуировки в соответствии с таблицей 1 и тщательно перемешивают.
| Таблица 1 | ||||||
| Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентраций N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламин, N-нитрозодиэтиламин) | ||||||
| Градуировочный раствор | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Объем исходного стандартного раствора, мм3 | 1 | 2 | 3 | 5 | 10 | 15 |
| Концентрация N-нитрозодиметиламина, мкг/см3 | 0,04 | 0,08 | 0,12 | 0,2 | 0,4 | 0,6 |
| Концентрация N-нитрозодиэтиламина, мкг/см3 | 0,038 | 0,076 | 0,114 | 0,19 | 0,38 | 0,57 |
Для построения градуировочного графика используют мочу, не содержащую исследуемые компоненты. В виалы помещают по 5 см3 образца мочи со стандартной смесью (таблица 1) и 16 г сульфата натрия и ставят в пневматический дозатор равновесного пара. После установления фазового равновесия при оптимальных параметрах цикла дозирования проб мочи (температура термостата - 80°C, узла дозирования - 130°C, переходной линии - 135°C, время инкубации мин - 25, расход газа-носителя - 60 мл/мин, оптимальное давление наддува - 0,2 bar) парогазовая проба вводится в капиллярную колонку газохроматографа через испаритель и анализируют в условиях: температуру термостата колонок 50-200°C при скорости нагревания 10°C/мин; расход газа-носителя (азот) - 1,4 см3/мин; деление потока 1:14,3 (часть парообразной пробы поступает в колонку, но основная часть пробы выводится из системы. Использование делителя потока гарантирует получение узких зон пробы на входе в колонку).
Для получения достоверных результатов анализ каждой градуировочной смеси проводят не менее 2-х раз. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора.
Отработка оптимальных газохроматографических параметров для определения N-нитрозаминов в моче осуществлялась с использованием аппаратно-программного комплекса на базе газового хроматографа "Кристалл-5000" с термоионным детектором (ТИД). Высокая эффективность метода достигнута путем подбора оптимальных условий газохроматографического анализа: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) -20 см3/мин.
Учитывая, что не любой высаливатель пригоден для определения N-нитрозоаминов в моче, в процессе исследований для извлечения N-нитрозоаминов из мочи предлагаемым способом при выборе высаливателя
применяли нейтральные соли щелочных и щелочноземельных металлов (Na2S04, К2НРО4, NaCl, NH4HPO4), а также смесь солей хлорида калия, К2НРО, Na2S04. Прецизионность анализа и эффективность извлечения N-нитрозаминов из мочи устанавливали экспериментально способом «введено-найдено» с применением стандартных растворов. Средние значения полноты экстракции N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина из мочи методом анализа равновесной паровой фазы с применением нейтральных солей при п=5 (п-число проб) и с вероятностью р=0,95 представлены в таблице 2.
Таблица 2
Средние значения полноты экстракции N-нитрозоаминов из образца мочи с добавлением различных солей (высаливателей)
| Высаливатель | Введено | Найдено | Степень экстракции, % |
| ГМ-нитрозодиметиламин (концентрация, мкг/см-5) | |||
| l.Na2S04 | 0,2±0,015 | 0,180±0,042 | 90,0 |
| 2. К2НРО4 | 0,2±0,022 | 0,107±0,039 | 53,5 |
| 3. NaCl | 0,2±0,025 | 0,053±0,028 | 26,5 |
| 4. NH4HPO4 | 0,2±0,019 | 0,120±0,084 | 60,0 |
| 5. Смесь солей хлорида калия, К2НРО, Na2S04. | 0,2±0,020 | 0,120±0,084 | 60,0 |
| N-нитрозодиэтиламин (концентрация, мкг/см-*) | |||
| l.Na2SO4 | 0,2±0,015 | 0,192±0,064 | 96,0 |
| 2. K2HPO4 | 0,2±0,022 | 0,168±0,045 | 84,0 |
| 3. NaCl | 0,2±0,025 | 0,133±0,014 | 66,5 |
| 4. NH4HPO4 | 0,2±0,019 | 0,180±0,133 | 90,0 |
| 5. Смесь солей хлорида калия, К2НРО, Na2SO4 | 0,2±0,020 | 0,170±0,133 | 85,0 |
Данные, приведенные в таблице 2, показывают, что наибольшая
полнота экстракции N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче обеспечивается использованием в предлагаемом способе в качестве высаливателя - сульфата натрия.
Проведенные исследования показали все-таки недостаточно высокую полноту экстракции N-нитрозосоединений из мочи при отработанных параметрах пробоподготовки. Поэтому были проведены дополнительные исследования по изучению полноты экстракции из образца мочи изучаемых соединений с использованием различной массы сульфата натрия в качестве высаливающего реагента. Полученные результаты представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||||
| Средние значения полноты экстракции N-нитрозосоединений из образца мочи с использованием различной массы сульфата натрия (на 5 см3 мочи) | ||||
| Масса высаливающего реагента, г | Соотношение объемного количества мочи к массе сульфата натрия | Введено | Найдено | Степень экстракции, % |
| N-нитрозодиметиламин (концентрация, мкг/см3) | ||||
| 5 | 1:1 | 0,2±0,014 | 0,10±0,009 | 50 |
| 8 | 1:1,6 | 0,2±0,019 | 0,18±0,075 | 90 |
| 16 | 1:3,2 | 0,2±0,060 | 0,198±0,075 | 99 |
| N-нитрозодиэтиламин (концентрация, мкг/см3) | ||||
| 5 | 1:1 | 0,2±0,06 | 0,140±0,028 | 70 |
| 8 | 1:1,6 | 0,2±0,045 | 0,198±0,085 | 99 |
| 16 | 1:3,2 | 0,2±0,039 | 0,20±0,035 | 100 |
В процессе проведенных исследований установлено, что наибольшая степень извлечения N-нитрозоаминов из мочи методом анализа равновесной паровой фазы достигается при соотношении: 1 объемная часть пробы мочи к 3,2 массовой части сульфата натрия, и составила для N-нитрозодиметиламина - 99%, для N-нитрозодиэтиламина-100%.
Таким образом, результаты исследований доказывают, что благодаря совокупности и последовательности операций предлагаемого способа, их режимам и достигается высокая степень точности и чувствительности определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа.
При проведении исследований также проводили анализы проб мочи у детей (группа обследования), проживающих в условиях экологического неблагополучия с возможным влиянием N-нитрозаминов на организм ребенка. Пробы мочи обрабатывали предлагаемым способом и по калибровочному графику определяли содержание компонентов в пробах. Полученные результаты приведены в таблице 4.
| Таблица 4 | |||
| Содержание N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче детей группы обследования, проживающих в условиях экологического неблагополучия, установленных предлагаемым способом | |||
| № пробы | N-нитрозодиметиламин | N-нитрозодиэтиламин | |
| Концентрация, мкг/см3 | |||
| 1 | 0 | 0,023 | |
| 2 | 0,003 | 0,005 | |
| 3 | 0,0022 | 0,0028 | |
| 4 | 0 | 0,0015 | |
| 5 | 0 | 0,0021 | |
| 6 | 0,0026 | 0,002 | |
Исследования показали, что предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности и чувствительности выполнять определение N-нитрозоаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в моче в диапазоне концентраций от 0,04 до 0,6 мкг/см3 (концентрация N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина табл.4 в моче детей определена на уровне нижнего предела определения, который составляет для методики 0,002 мкг/см3), при погрешности метода 23,5% при оптимальных параметрах газохроматографического анализа и пробоподготовки. Установлено, что наибольшая степень извлечения N-нитрозоаминов из мочи методом анализа равновесной паровой фазы (предлагаемым способом) достигается при использовании высаливающего реагента сульфата натрия, при соотношении: 1 объемная часть пробы мочи к 3,2 массовой части сульфата натрия, и составила для N-нитрозодиметиламина - 99%, для N-нитрозодиэтиламина - 100%.
Claims (4)
1. Способ количественного определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа, включающий отбор пробы мочи, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа, отличающийся тем, что подготовку пробы мочи к анализу производят путем добавления к ней сульфата натрия при соотношении 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия, с последующим нагревом смеси на водяной бане до установления фазового равновесия, последующего отбора образовавшейся парогазовой пробы и введения этой пробы в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина осуществляют с использованием газового хроматографа с термоионным детектором на капиллярной колонке DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что нагрев смеси на водяной бане осуществляют в течение 5 минут.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбор образовавшейся парогазовой пробы производят шприцом, нагретым до температуры 60±5°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105360/28A RU2521711C1 (ru) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105360/28A RU2521711C1 (ru) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2521711C1 true RU2521711C1 (ru) | 2014-07-10 |
Family
ID=51217053
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013105360/28A RU2521711C1 (ru) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2521711C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104535694A (zh) * | 2015-01-21 | 2015-04-22 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种气相色谱-串联质谱检测卷烟侧流烟气中4种烟草特有亚硝胺(TSNAs)的方法 |
| CN104569267A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种检测啤酒中n-二甲基亚硝胺含量的方法 |
| RU2578026C1 (ru) * | 2015-03-25 | 2016-03-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии |
| RU2613303C1 (ru) * | 2015-10-27 | 2017-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения N-нитрозаминов в детских кашах |
| CN109060984A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-21 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种检测缬沙坦及其制剂中n-二甲基亚硝胺含量的方法 |
| WO2020010516A1 (zh) * | 2018-07-07 | 2020-01-16 | 浙江华海药业股份有限公司 | 一种n-亚硝基二甲胺杂质的检测方法 |
| CN113009005A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-06-22 | 珠海润都制药股份有限公司 | 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4295856A (en) * | 1980-04-21 | 1981-10-20 | Tracor, Inc. | Nitrosamine specificity for electrolytic conductivity detector |
| RU2241219C1 (ru) * | 2003-05-20 | 2004-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова | Способ определения токсичности 1-нитрозоаминов в пищевых продуктах |
| CN102721768A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-10-10 | 云南烟草科学研究院 | 用于卷烟烟气亚硝胺测定的样品前处理装置及处理方法 |
-
2013
- 2013-02-07 RU RU2013105360/28A patent/RU2521711C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4295856A (en) * | 1980-04-21 | 1981-10-20 | Tracor, Inc. | Nitrosamine specificity for electrolytic conductivity detector |
| RU2241219C1 (ru) * | 2003-05-20 | 2004-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова | Способ определения токсичности 1-нитрозоаминов в пищевых продуктах |
| CN102721768A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-10-10 | 云南烟草科学研究院 | 用于卷烟烟气亚硝胺测定的样品前处理装置及处理方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Raymond Koseniauskas и Eric S. Burak "Reduced Blood Clearance and Increased Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine in Patas Monkeys Exposed to Ethanol or Isopropyl Alcohol 1". American Association for Cancer Research. 52,стр. 1463-1468, 15.04.1992. * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104569267A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种检测啤酒中n-二甲基亚硝胺含量的方法 |
| CN104535694A (zh) * | 2015-01-21 | 2015-04-22 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种气相色谱-串联质谱检测卷烟侧流烟气中4种烟草特有亚硝胺(TSNAs)的方法 |
| RU2578026C1 (ru) * | 2015-03-25 | 2016-03-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии |
| RU2613303C1 (ru) * | 2015-10-27 | 2017-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения N-нитрозаминов в детских кашах |
| WO2020010516A1 (zh) * | 2018-07-07 | 2020-01-16 | 浙江华海药业股份有限公司 | 一种n-亚硝基二甲胺杂质的检测方法 |
| CN112639463A (zh) * | 2018-07-07 | 2021-04-09 | 浙江华海药业股份有限公司 | 一种n-亚硝基二甲胺杂质的检测方法 |
| US11519890B2 (en) | 2018-07-07 | 2022-12-06 | Zhejiang Huahai Pharmaceutical Co., Ltd | Detection method for n-nitrosodimethylamine impurities |
| CN109060984A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-21 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种检测缬沙坦及其制剂中n-二甲基亚硝胺含量的方法 |
| CN113009005A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-06-22 | 珠海润都制药股份有限公司 | 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法 |
| CN113009005B (zh) * | 2020-12-18 | 2022-05-10 | 珠海润都制药股份有限公司 | 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2521711C1 (ru) | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа | |
| Zhu et al. | Determination of quinolone antibiotics in environmental water using automatic solid-phase extraction and isotope dilution ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry | |
| CN106124646A (zh) | 一种检测水中极性苯酚类氯代/溴代消毒副产物的方法 | |
| CN108822078A (zh) | 一种基于聚集诱导效应汞离子荧光探针及其制备和应用 | |
| RU2738166C1 (ru) | Способ измерений массовых концентраций мышьяка, кадмия, свинца, ртути в мясных и мясосодержащих продуктах методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой | |
| CN114236032B (zh) | 双电离扫描模式-液相色谱串联质谱联用测定水体中草甘膦的方法 | |
| Chen et al. | Flow injection on-line photochemical reaction coupled to spectrofluorimetry for the determination of thiamine in pharmaceuticals and serum | |
| CN108181393B (zh) | 一种塑料制品中羟乙基六氢均三嗪的检测方法 | |
| El Shiekh et al. | Spectrophotometric estimation of vardenafil HCl and tadalafil in pure forms and tablets using cerium (IV) ammonium sulphate | |
| Liawruangrath et al. | A simple flow injection spectrophotometric procedure for the determination of diazepam in pharmaceutical formulation | |
| Ahmed et al. | Flow Injection–Chemiluminescence Method for Determination of Hyoscine Butylbromide Using Silver (III) as Oxidizing Agent | |
| CN115047093B (zh) | 一种无水咖啡因中硫酸二甲酯检测方法 | |
| Themelis et al. | Flow injection manifold for the direct spectrophotometric determination of bismuth in pharmaceutical products using Methylthymol Blue as a chromogenic reagent | |
| CN108593830B (zh) | 一种氟吡菌胺及其代谢产物的hplc-ms/ms检测方法 | |
| Zou et al. | Rapid and sensitive on-line monitoring 6 different kinds of volatile organic compounds in aqueous samples by spray inlet proton transfer reaction mass spectrometry (SI-PTR-MS) | |
| Ulu | Spectrophotometric determination of glimepiride in pharmaceutical preparations based on the formation of charge-transfer and ion-pair complexes | |
| CN110082450A (zh) | 一种减肥类中成药及保健食品中胡椒碱的检测方法 | |
| Kamino et al. | Spectrophotometric determination of aluminum with m-carboxyphenylfluorone, a novel chemical probe, and its application | |
| RU2578026C1 (ru) | Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии | |
| Hafez et al. | Simple spectrophotometric methods for the determination of two phosphodiesterase type 5-inhibitors in pure and tablets dosage forms using N-bromosuccinimide as an oxidant | |
| Zhao et al. | A new LC-MS/MS method for fast determination of formaldehyde in the air of public places | |
| CN113484437B (zh) | 一种测定环境水样中超痕量卤卡班的方法及其用途 | |
| RU2318208C1 (ru) | Способ газохроматографического определения микроконцентраций диметиламина в воде | |
| RU2492471C2 (ru) | Способ количественного определения производных бигуанидов | |
| Bulska et al. | ETAAS determination of lead with on-line preconcentration using a flow-through electrochemical microcell |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150208 |