RU2410424C1 - Culture medium for growing microorganism - Google Patents
Culture medium for growing microorganism Download PDFInfo
- Publication number
- RU2410424C1 RU2410424C1 RU2009119823/10A RU2009119823A RU2410424C1 RU 2410424 C1 RU2410424 C1 RU 2410424C1 RU 2009119823/10 A RU2009119823/10 A RU 2009119823/10A RU 2009119823 A RU2009119823 A RU 2009119823A RU 2410424 C1 RU2410424 C1 RU 2410424C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium
- microorganisms
- distilled water
- nutrient medium
- agar
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к питательным средам для культивирования микроорганизмов, и может быть использовано при промышленном приготовлении бактерийных вакцин.The invention relates to biotechnology, in particular to nutrient media for the cultivation of microorganisms, and can be used in the industrial preparation of bacterial vaccines.
Уровень техникиState of the art
Известна питательная среда следующего состава г/л: агар-агар - 20,0; гидролизат говяжьего мяса, содержащий аминный азот - 0,12%; натрий хлористый - 5,0; 20% гидроокись натрия - 0,002; дистиллированная вода до 1 л (см. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, Биргер М.О., 1972 г., с.53).Known nutrient medium of the following composition g / l: agar-agar - 20.0; hydrolyzed beef meat containing amine nitrogen - 0.12%; sodium chloride - 5.0; 20% sodium hydroxide - 0.002; distilled water up to 1 liter (see the Handbook of microbiological and virological research methods, Birger M.O., 1972, p. 53).
Недостатком данной среды является ее высокая себестоимость, низкое качество.The disadvantage of this environment is its high cost, low quality.
Известна питательная среда для культивирования широкого спектра микроорганизмов, включающая, г/л: гидролизат кильки панкреатический - 17,9; натрий хлорид - 7,7±0,3; агар микробиологический - 11,2±1,2; рН 7,3±0,2, дистиллированную воду (см. справочник по микробиологическим питательным средам, Меджидов М.М., 2003 г., с.26).A known nutrient medium for the cultivation of a wide range of microorganisms, including, g / l: pancreatic sprat hydrolyzate - 17.9; sodium chloride - 7.7 ± 0.3; microbiological agar - 11.2 ± 1.2; pH 7.3 ± 0.2, distilled water (see the reference book on microbiological culture media, M. Medzhidov, 2003, p. 26).
Питательная среда должна обеспечивать на всех засеянных чашках рост тест-штаммов: Shigella flexneri la 8516 и Shigella sonnei «S. Form» при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10-6 через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1)°С в виде бесцветных прозрачных круглых колоний диаметром (1,5±0,5) мм; тест-штаммов Pseudomonas aeruginosa 27/99 и Serratia marcescens-1 с образованием сине-зеленого и красного пигментов соответственно через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1)°С - для Р. aeruginosa 27/99 и (22±2)°С для S. marcescens-1 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси, соответствующей 10 единицам по ОСО 42-28-59-85 (Фармакопейная статья №42-3520-98., с.3).The culture medium should ensure the growth of test strains on all seeded plates: Shigella flexneri la 8516 and Shigella sonnei "S. Form ”when sowing 0.1 ml of the microbial suspension of each test strain from a 10 -6 dilution after 18-20 hours of incubation at a temperature of (37 ± 1) ° C in the form of colorless transparent round colonies with a diameter of (1.5 ± 0.5 ) mm; test strains Pseudomonas aeruginosa 27/99 and Serratia marcescens-1 with the formation of blue-green and red pigments, respectively after 18-20 hours of incubation at a temperature of (37 ± 1) ° С - for P. aeruginosa 27/99 and (22 ± 2 ) ° С for S. marcescens-1 when sowing 0.1 ml of microbial suspension corresponding to 10 units according to OCO 42-28-59-85 (Pharmacopoeia article No. 42-3520-98., P.3).
Недостатком данной среды является ее высокая себестоимость, низкое качество.The disadvantage of this environment is its high cost, low quality.
Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятая авторами за прототип является питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая питательную основу, натрий хлористый, агар микробиологический, дистиллированную воду, при этом она дополнительно содержит натрий фосфорнокислый 2-замещенный и сульфит натрия, а в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат молок лососевых рыб при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The closest in technical essence and the achieved positive effect and adopted by the authors for the prototype is a nutrient medium for the cultivation of microorganisms, including a nutrient base, sodium chloride, microbiological agar, distilled water, while it additionally contains sodium phosphate 2-substituted and sodium sulfite, and as a nutrient base contains an enzymatic hydrolyzate of salmon milk in the following ratio of ingredients, g / l:
(см. пат. №2348686, кл. C12N 1/20, C12Q 1/04, опубл. 10.03.2009 г.).(see US Pat. No. 2348686, class C12N 1/20, C12Q 1/04, published March 10, 2009).
Недостатком данной питательной среды является высокая ее себестоимость.The disadvantage of this nutrient medium is its high cost.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Задачей предлагаемого изобретения является разработка получения качественной и дешевой питательной среды для культивирования микроорганизмов.The task of the invention is the development of high-quality and cheap nutrient medium for the cultivation of microorganisms.
Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к повышению качества и удешевлению получения питательной среды.The technical result, which can be obtained using the present invention, is to improve the quality and cost of obtaining a nutrient medium.
Технический результат достигается с помощью питательной среды для культивирования микроорганизмов, включающей питательную основу, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, сульфит натрия, агар микробиологический и дистиллированную воду, при этом в качестве питательной основы используют ферментативный гидролизат калифорнийских червей при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The technical result is achieved using a nutrient medium for the cultivation of microorganisms, including a nutrient base, sodium chloride, sodium phosphate 2-substituted, sodium sulfite, agar microbiological and distilled water, while the enzymatic hydrolyzate of California worms is used as a nutrient base in the following ratio of ingredients, g / l:
Сущность получения питательной среды для культивирования микроорганизмов заключается в следующем.The essence of obtaining a nutrient medium for the cultivation of microorganisms is as follows.
Питательную среду готовят на основе ферментативного гидролизата из биомассы калифорнийских червей для выращивания микроорганизмов следующим образом. Биомассу калифорнийских червей в количестве 0,5 кг соединяют с 1 л водопроводной воды и кипятят в течение 10 мин. Затем червей отделяют от бульона и измельчают в гомогенизаторе до однородной массы. Бульон остужают до температуры 45-50°С, подщелачивают Na2CO3 до рН 8,2 по фенолфталеину. Фарш калифорнийских червей помещают в трехлитровый стеклянный баллон, заливают готовым остывшим бульоном, добавляют 150 г поджелудочной железы КРС. К общему объему содержимого баллона вливают 2% хлороформа, закрывают плотно ватно-марлевым тампоном с пергаментом. Баллон помещают в термокамеру при температуре 37°С. Выдерживают в течение 14 суток, встряхивают в течение первых суток через каждые 15 минут по 5 минут, а в последующие дни через каждые два часа по 5 минут. Ежедневно измеряют уровень аминного азота. В конце переваривания жидкость фильтруют через ткань Белтинга и 4 слоя фильтровальной бумаги. Измеряют аминный азот. В фильтрат добавляют 2% хлороформа, пробкуют и хранят при температуре от 2 до 8°С.The nutrient medium is prepared on the basis of an enzymatic hydrolyzate from the biomass of California worms for growing microorganisms as follows. The biomass of California worms in an amount of 0.5 kg is combined with 1 liter of tap water and boiled for 10 minutes. Then the worms are separated from the broth and ground in a homogenizer to a homogeneous mass. The broth is cooled to a temperature of 45-50 ° C, alkalized with Na 2 CO 3 to a pH of 8.2 by phenolphthalein. Stuffed California worms are placed in a three-liter glass container, poured with prepared cooled broth, 150 g of cattle pancreas are added. 2% chloroform is poured to the total volume of the contents of the balloon, covered with a tight cotton-gauze swab with parchment. The cylinder is placed in a heat chamber at a temperature of 37 ° C. It is aged for 14 days, shaken during the first day every 15 minutes for 5 minutes, and on the following days every two hours for 5 minutes. The level of amino nitrogen is measured daily. At the end of the digestion, the liquid is filtered through a Belting cloth and 4 layers of filter paper. Amine nitrogen is measured. 2% chloroform is added to the filtrate, poured and stored at a temperature of 2 to 8 ° C.
При биохимическом исследовании в ферментативном гидролизате из биомассы калифорнийских червей были обнаружены органические кислоты (яблочная, аскорбиновая, янтарная, пировиноградная), незаменимые аминокислоты (аргинин солянокислый, треонин, пролин, метионин, лизин солянокислый, валин), витамины (РР, А, С, B1, B2), макро- и микроэлементы (Zn, Fe, Na, К, Mg, Ca), углеводы (глюкоза, гликоген, лактоза). Эти данные подтверждают его высокую питательную ценность, затем ферментативный гидролизат калифорнийских червей разбавляют дистиллированной водой до показания аминного азота 0,14 мг % - 200 мл; натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный - 4,0; дистиллированная вода - остальное, нагревают до 60°С, затем добавляют 20% NaOH до рН 8,2 и 2% активированного угля марки «ОУ-А» к объему, кипятят в течение 10 минут. Фильтруют через фильтровальное полотно и двенадцать слоев фильтровальной бумаги, в прозрачный, охлажденный фильтрат добавляют агар микробиологический 12,0, варят 10 минут.During a biochemical study in an enzymatic hydrolyzate from the biomass of California worms, organic acids (malic, ascorbic, succinic, pyruvic), essential amino acids (hydrochloric arginine, threonine, proline, methionine, hydrochloric acid lysine, valine), vitamins (PP, A, C, PP, A, R) were found B 1 , B 2 ), macro- and microelements (Zn, Fe, Na, K, Mg, Ca), carbohydrates (glucose, glycogen, lactose). These data confirm its high nutritional value, then the enzymatic hydrolyzate of California worms is diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.14 mg% - 200 ml; sodium chloride - 5.0; 2-substituted sodium phosphate - 4.0; distilled water - the rest, heated to 60 ° C, then add 20% NaOH to a pH of 8.2 and 2% activated carbon brand "OU-A" to the volume, boil for 10 minutes. Filter through a filter cloth and twelve layers of filter paper, add microbiological agar 12.0 to a transparent, cooled filtrate, cook for 10 minutes.
Измеряют рН, значение которого должно соответствовать 7,3±0,2. В случае отклонения значения рН от заданного показателя, его корректируют с помощью 20% раствора натрия гидроокиси (если рН ниже заданного значения) или раствором соляной кислоты в разведении 1:1 (если рН выше заданного значения). Затем добавляют натрий сернистокислый 0,004 г/л (400 мг). Профильтрованный агар должен быть прозрачным (определение проводят визуально). Агар разливают в флаконы, стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 минут.Measure the pH, the value of which should correspond to 7.3 ± 0.2. In the event that the pH value deviates from the set point, it is corrected with a 20% sodium hydroxide solution (if the pH is lower than the set value) or with a 1: 1 dilution of hydrochloric acid (if the pH is higher than the set value). Then add sodium sulfide 0.004 g / l (400 mg). Filtered agar should be transparent (determination is carried out visually). Agar is poured into vials, sterilized at 0.5 atm for 30 minutes.
Примеры конкретного получения питательной среды для культивирования микроорганизмов.Examples of specific production of a nutrient medium for the cultivation of microorganisms.
В качестве исходного сырья используют биомассу калифорнийских червей. Наиболее важной составной частью сырья животного происхождения, в том числе и червей, являются белки - высокомолекулярные азотистые органические вещества.The source material used is the biomass of California worms. The most important component of raw materials of animal origin, including worms, are proteins - high-molecular nitrogenous organic substances.
В качестве примера испытывают культуры тест-штаммов S. sonnei S. «form», S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E.coli CA-18, которые выращивают на пластинках 2% агара Хоттингера рН 7,2 при температуре 37°С. Затем готовят микробную взвесь 1-суточную культуру тест-штаммов: S. sonnei S. «form», S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E.coli CA-18 no оптическому стандарту мутности ОСО, ГИСК им. Л.А. Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводят до содержания в 1 мл 1000 м.к.; 100 м.к. Из каждого разведения взвеси культур высевают стерильной пипеткой по 0,01 мл в три чашки Петри, стерильным шпателем распределяют взвесь по поверхности испытуемого агара. Учет результатов проводят через 24-48 часов.As an example, cultures of test strains S. sonnei S. "form", S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E. coli CA-18, which are grown on plates of 2% Hottinger agar pH 7.2 at a temperature of 37 ° C. Then a microbial suspension is prepared of a 1-day culture of test strains: S. sonnei S. "form", S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E. coli CA-18 no optical standard turbidity TOC, GISK them. L.A. Tarasevich, then serial ten-fold dilutions in physiological saline in a volume of 4.5 ml are adjusted to a content of 1 ml 1000 mk; 100 mk From each dilution, culture suspensions are seeded with a sterile pipette of 0.01 ml into three Petri dishes, and the suspension is distributed with a sterile spatula over the surface of the test agar. Analysis is carried out after 24-48 hours.
Пример 1. Тест-штаммы S. sonnei S. «form», S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E.coli CA-18 выращивают на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат калифорнийских червей 100,0; натрий хлористый 3,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 2,0; агар микробиологический 10,0; сульфит натрия 0,2; дистиллированная вода - до 1 литра. При таком соотношении ингредиентов наблюдается типичный рост микроорганизмов в количестве 3-х колоний диаметром 1,0 мм.Example 1. Test strains S. sonnei S. "form", S. flexneri, S. faecalis-602, S. typhi H-901, E. coli CA-18 are grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of California worms 100.0; sodium chloride 3.0; 2-substituted sodium phosphate 2.0; microbiological agar 10.0; sodium sulfite 0.2; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, a typical growth of microorganisms is observed in the amount of 3 colonies with a diameter of 1.0 mm.
Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но тест-штаммы, указанные выше, выращивают на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат калифорнийских червей 150,0; натрий хлористый 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 3,0; агар микробиологический 11,0; сульфит натрия 0,3; дистиллированная вода - до 1 литра. При таком соотношении ингредиентов наблюдается типичный рост микроорганизмов в количестве 3-х колоний диаметром 1,1 мм.Example 2. Carried out analogously to example 1, but the test strains indicated above are grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of California worms 150.0; sodium chloride 4.0; 2-substituted sodium phosphate 3.0; microbiological agar 11.0; sodium sulfite 0.3; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, a typical growth of microorganisms is observed in the amount of 3 colonies with a diameter of 1.1 mm.
Пример 3. Проводят аналогично примеру 1, но тест-штаммы, указанные выше, выращивают на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат калифорнийских червей 200,0; натрий хлористый 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 4,0; агар микробиологический 12,0; сульфит натрия 0,4; дистиллированная вода - до 1 литра. При таком соотношении ингредиентов наблюдается типичный рост микроорганизмов в количестве 30 колоний диаметром 1,5 мм.Example 3. Carried out analogously to example 1, but the test strains indicated above are grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of California worms 200.0; sodium chloride 5.0; 2-substituted sodium phosphate 4.0; microbiological agar 12.0; sodium sulfite 0.4; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, a typical growth of microorganisms is observed in the amount of 30 colonies with a diameter of 1.5 mm.
Пример 4. Проводят аналогично примеру 1, но тест-штаммы, указанные выше, выращивают на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат калифорнийских червей 250,0; натрий хлористый 6,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 5,0; агар микробиологический 13,0; сульфит натрия 0,6; дистиллированная вода - до 1 литра. При таком соотношении ингредиентов наблюдается типичный рост микроорганизмов в количестве 15 колоний диаметром 1,2 мм.Example 4. Carried out analogously to example 1, but the test strains indicated above are grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of California worms 250.0; sodium chloride 6.0; 2-substituted sodium phosphate 5.0; microbiological agar 13.0; sodium sulfite 0.6; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, a typical growth of microorganisms is observed in the amount of 15 colonies with a diameter of 1.2 mm.
Пример 5. Проводят аналогично примеру 1, но тест-штаммы, указанные выше, выращивают на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат калифорнийских червей 300,0; натрий хлористый 7,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 6,0; агар микробиологический 14,0; сульфит натрия 0,7; дистиллированная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов наблюдается типичный рост микроорганизмов в количестве 6 колоний диаметром 1,0 мм.Example 5. Carried out analogously to example 1, but the test strains indicated above are grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of California worms 300.0; sodium chloride 7.0; 2-substituted sodium phosphate 6.0; microbiological agar 14.0; sodium sulfite 0.7; distilled water - the rest. With this ratio of ingredients, a typical growth of microorganisms is observed in the amount of 6 colonies with a diameter of 1.0 mm.
Оценка ростовых качеств питательной среды при высеве тест-штамов на питательную среду представлены в таблице.Assessment of the growth qualities of the nutrient medium when seeding test strains for the nutrient medium are presented in the table.
Таким образом, заявляемая питательная среда, приготовленная на основе ферментативного гидролизата из биомассы калифорнийских червей, вполне может заменить питательную среду на основе из говяжьего мяса и кильки панкреатической.Thus, the claimed nutrient medium, prepared on the basis of an enzymatic hydrolyzate from biomass of California worms, may well replace the nutrient medium based on beef meat and sprat pancreatic.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:The invention in comparison with the prototype and other known technical solutions has the following advantages:
- повышение качества питательной среды;- improving the quality of the nutrient medium;
- удешевление получения питательной среды;- the cost of obtaining a nutrient medium;
- возможность широкого использования для культивирования микроорганизмов.- the possibility of widespread use for the cultivation of microorganisms.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009119823/10A RU2410424C1 (en) | 2009-05-25 | 2009-05-25 | Culture medium for growing microorganism |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009119823/10A RU2410424C1 (en) | 2009-05-25 | 2009-05-25 | Culture medium for growing microorganism |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009119823A RU2009119823A (en) | 2010-11-27 |
| RU2410424C1 true RU2410424C1 (en) | 2011-01-27 |
Family
ID=44057371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009119823/10A RU2410424C1 (en) | 2009-05-25 | 2009-05-25 | Culture medium for growing microorganism |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2410424C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2681499C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-06 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium on basis of secondary product of beef hydrolyzate for cultivation of microorganisms |
-
2009
- 2009-05-25 RU RU2009119823/10A patent/RU2410424C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2681499C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-06 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium on basis of secondary product of beef hydrolyzate for cultivation of microorganisms |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2009119823A (en) | 2010-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2412240C1 (en) | Culture medium for growing legionella | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| RU2410424C1 (en) | Culture medium for growing microorganism | |
| RU2523606C1 (en) | STRAIN Gluconacetobacter sucrofermentans - PRODUCER OF BACTERIAL CELLULOSE | |
| RU2415923C1 (en) | Method for production of fermentative hydrolysate of fresh white cabbage and nutritive medium for cultivation lactobacteria based thereon | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| RU2348686C2 (en) | Nutrient medium for microorganism cultivation | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| RU2245362C2 (en) | Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain | |
| RU2460774C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| RU2681499C1 (en) | Nutrient medium on basis of secondary product of beef hydrolyzate for cultivation of microorganisms | |
| RU2701343C1 (en) | Nutrient medium for detection of lactic acid bacteria (versions) | |
| RU2380409C1 (en) | Nutrient medium for pestilential microbe cultivation | |
| RU2360962C2 (en) | Nutrient base production method and nutrient base for yersinia and vibrio microorganisms fermentation | |
| RU2415922C1 (en) | Nutrient medium for lactic acid bacilli cultivation | |
| RU2460768C1 (en) | Solid nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2301256C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio | |
| RU2425871C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2333948C2 (en) | Nutritional medium for growing causative agent of tularemia | |
| RU2708029C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev | |
| RU2260620C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing plague microorganism of vaccine strain eb | |
| RU2722071C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130526 |