RU2328305C2 - Вакцинная композиция - Google Patents
Вакцинная композиция Download PDFInfo
- Publication number
- RU2328305C2 RU2328305C2 RU2003114434/15A RU2003114434A RU2328305C2 RU 2328305 C2 RU2328305 C2 RU 2328305C2 RU 2003114434/15 A RU2003114434/15 A RU 2003114434/15A RU 2003114434 A RU2003114434 A RU 2003114434A RU 2328305 C2 RU2328305 C2 RU 2328305C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- amino acid
- peptides
- acid residues
- antigen
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 184
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 100
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 100
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 99
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 68
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 42
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 20
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 15
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 5
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 25
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 25
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 23
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N cathelicidin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C1=CC=CC=C1 POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N 0.000 description 11
- 108060001132 cathelicidin Proteins 0.000 description 11
- 102000014509 cathelicidin Human genes 0.000 description 11
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 4
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 3
- 229920002851 polycationic polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 2
- -1 3-mercaptopropionyl Chemical group 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 description 2
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 101500027983 Rattus norvegicus Octadecaneuropeptide Proteins 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 108010007004 cathelin Proteins 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 101710115643 Cathelicidin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 201000005019 Chlamydia pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 1
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010061523 Lip and/or oral cavity cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001442539 Plasmodium sp. Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 108010009352 antilipopolysaccharide factor (Limulus) Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004395 cytoplasmic granule Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000624 ear auricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000000285 follicular dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000012177 negative regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 208000030773 pneumonia caused by chlamydia Diseases 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и касается пептида, включающего последовательность R1-XZXZN-XZX-R2, где: N означает целое число от 3 до 7, предпочтительно 5; X означает остаток положительно заряженной обычной и/или необычной аминокислоты; Z означает остаток аминокислоты, выбранной из числа L, V, I, F и/или W; R1 и R2 выбраны независимо друг от друга из группы, состоящей из -Н, - NH2, -СОСН3, -СОН, пептидов, состоящих из 20 и меньше аминокислотных остатков, реакционноспособных групп пептидов, пептидных линкеров с пептидом или без него; X-R2 также может представлять собой амид, эфир или тиоэфир остатка С-концевой аминокислоты в качестве адъюванта для усиления иммунного ответа, по меньшей мере, на один антиген. Преимущество изобретения заключается в способности повышать иммунные ответы на антигены. 15 з.п. ф-лы, 3 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к вакцинам, включающим, по меньшей мере, один антиген и иммуностимулирующее вещество.
Уровень техники
В защите хозяина от поражающих его патогенов участвуют клеточные и гуморальные эффекторы при согласованной работе неадаптивного (врожденного) и адаптивного (приобретенного) иммунитета. Последний основывается на специфическом иммунологическом распознавании при помощи рецепторов, является недавним приобретением иммунной системы и имеется только у позвоночных. Первый возник еще до развития адаптивного иммунитета и состоит из целого ряда клеток и молекул, распределенных по всему организму с целью держать под контролем вероятные патогены (Boman Н. (2000), Zanetti M. (1997)).
В- и Т-лимфоциты являются носителями приобретенного антигенспецифичного адаптивного иммунитета, включая выработку иммунологической памяти, что является главной целью создания хорошей вакцины (Schijns V. (2000)). Антигенпрезентирующие клетки (АПК) - это высокоспециализированные клетки, которые обрабатывают антигены и презентируют их обработанные фрагменты на поверхности клетки вместе с молекулами, необходимыми для активации лимфоцитов. Это означает, что АПК имеют важное значение для запуска специфических иммунных реакций. Основные виды АПК для активации Т-лимфоцитов - дендритные клетки (ДК), макрофаги и В-клетки, тогда как основные виды АПК для В-клеток - это фолликулярные дендритные клетки. В общем, ДК являются самыми мощными из АПК в отношении запуска иммунных реакций, стимулирующих покоящиеся "наивные" и "обладающие памятью" В- и Т-лимфоциты.
Естественной задачей АПК на периферии (к примеру, ДК или клеток Лангерганса) является захват и обработка антигенов, при этом, будучи активированными, они начинают экспрессировать костимулирующие лимфоциты молекулы, мигрируют в лимфоидные органы, выделяют цитокины и презентируют антигены различным популяциям лимфоцитов, инициируя антигенспецифичные иммунные реакции. Они не только активируют лимфоциты, но в определенных обстоятельствах также индуцируют толерантность Т-клеток к антигенам (Banchereau J. (1998)).
Распознавание антигенов Т-лимфоцитами ограничивается главным комплексом гистосовместимости (МНС) по принципу МНС-рестрикции. Конкретный Т-лимфоцит распознает антиген только тогда, когда данный пептид связан с определенной молекулой МНС. В общем, Т-лимфоциты стимулируются только в присутствии собственных молекул МНС, а антигены распознаются лишь в виде пептидов, связанных с собственными молекулами МНС. Рестрикция по МНС определяет специфичность Т-лимфоцитов в отношении узнаваемого антигена и в отношении молекулы МНС, связывающей его пептидный фрагмент.
Внутриклеточные и внеклеточные антигены ставят весьма разные задачи перед иммунной системой, как в отношении распознавания, так и соответствующего ответа. Презентация антигенов Т-клеткам осуществляется двумя разными классами молекул - молекулами I класса МНС (MHC-I) и II класса МНС (MHC-II), которые используют различные пути обработки антигенов. В основном можно выделить два главных пути обработки антигенов, возникших в процессе эволюции. Пептиды, происходящие из внутриклеточных антигенов, презентируются Т-клеткам CD8+ молекулами I класса МНС, которые экспрессируются практически на всех клетках, тогда как пептиды, происходящие из внеклеточных антигенов, презентируются Т-клеткам CD4+ молекулами II класса МНС (Monaco J. (1992); Harding С. (1995)). Однако имеются определенные исключения из этого дихотолического механизма. Некоторые исследования показали, что пептиды, образовавшиеся из подвергшихся эндоцитозу, находящихся в виде частиц или растворимых белков, презентируются на молекулах MHC-I макрофагов, а также дендритных клеток (Harding С. (1996); Brossart P. (1997)). Таким образом, АПК, такие как дендритные клетки, находящиеся на периферии, обладающие высокой способностью к захвату и обработке внеклеточных антигенов и презентации их Т-лимфоцитам на молекулах MHC-I, представляют интерес как мишени для "нагрузки" их внеклеточными антигенами in vitro и in vivo.
Важная и уникальная роль АПК, включая стимулирование активности различных типов лейкоцитов, отражает их центральное положение как мишеней для соответствующих подходов при разработке хороших вакцин. Теоретически один из путей к этому состоит в усилении или стимулировании их естественной функции - захвата антигенов. После захвата соответствующих антигенов, против которых направлена вакцина, АПК должны приступить к обработке захваченных антигенов, при этом они активируются, экспрессируют молекулы, костимулирующие лимфоциты, мигрируют в лимфоидные органы, секретируют цитокины и презентируют антигены различным популяциям лимфоцитов, инициируя таким образом иммунные реакции.
Активированные Т-клетки обычно секретируют ряд эффекторных цитокинов хорошо регулируемым образом, а именно: интерлейкин 2 (IL-2), IL-4, IL-5, IL-10 и γ-интерферон (γ-IFN). Функциональный анализ ответов цитотоксических Т-лимфоцитов на специфические антигены (к примеру, раковые антигены и вообще антигены, вводимые с вакциной) обычно осуществляется методом ELISpot (точечного иммуноферментного анализа), которым можно анализировать продукцию цитокинов на уровне одной клетки. В настоящем изобретении определение стимулирующего клеточный иммунитет цитокина γ-IFN методом ELISpot применялось для слежения за специфичной активацией Т-клеток пептидами.
Ранее было показано, что поликатионы эффективно усиливают захват связанных с MHC-I пептидов раковыми клетками, и такой процесс "загрузки" пептидов или белков получил название "нагрузки антигеном, или загрузки антигена" (TRANSloading) (Buschle М. (1997)). Далее мы показали, что поликатионы способны "загружать" (TRANSload) пептиды или белки в антигенпрезентирующие клетки in vivo и in vitro (Buschle M. (1998)). Кроме того, совместное введение смеси поли-L-аргинина или поли-L-лизина вместе с соответствующим пептидом в качестве вакцины защищает животных от роста опухолей на мышиных моделях (Schmidt W. (1997)). Такая химически охарактеризованная вакцина способна индуцировать большое число специфичных к антигену/пептиду Т-клеток. Было показано, что это, по крайней мере частично, объясняется усиленным захватом пептидов в АПК, опосредованным поликатионом (Buschle М. (1998)), а это означает, что при "нагрузке" in viro антигеном АПК могут индуцировать Т-клеточный иммунитет на введенный антиген.
В отличие от адаптивного иммунитета, характеризующегося высокоспецифичным, но относительно медленным ответом, врожденный иммунитет основывается на эффекторных механизмах, которые запускаются различиями в структуре компонентов микроорганизмов по сравнению с хозяином. Такие механизмы могут вызывать достаточно быстрый первоначальный ответ, который в основном ведет к нейтрализации вредных агентов. Реакции врожденного иммунитета являются единственной оборонительной стратегией низших таксонов и сохраняются у позвоночных в качестве первой линии защиты хозяина до мобилизации адаптивной иммунной системы.
У высших позвоночных эффекторными клетками врожденного иммунитета служат нейтрофилы, макрофаги и клетки действенных киллеров (NK), а также, вероятно, дендритные клетки (Mizukawa N. (1999)), тогда как гуморальными компонентами этого пути являются белки каскада комплемента и различные другие связывающие белки (Boman H. (2000)).
Быстрым и действенным элементом врожденного иммунитета является выработка большого числа антимикробных пептидов, длина которых обычно составляет от 12 до 100 аминокислотных остатков. Уже выделено несколько сотен различных антимикробных пептидов из целого ряда организмов, от губок и насекомых до животных и человека, что указывает на широкое распростанение этих молекул. Антимикробные пептиды также вырабатываются бактериями как антагонистические соединения против конкурентов.
В ЕР 0905141 А1 раскрыт пептидный фрагмент фактора анти-LPS мечехвоста Limulus (LALF), обладающий антивирусным действием. Этот пептид LALF не повышает специфические иммунные ответы, а усиливает неспецифические защитные механизмы мононуклеарных клеток и может применяться для профилактики, кроме того, этот пептид можно местно наносить на раневые поверхности для усиления излечивания и заживления ран.
Главными источниками антимикробных пептидов являются гранулы нейтрофилов и эпителиальных клеток, выстилающих дыхательный, желудочно-кишечный и мочеполовой тракты. Обычно они находятся в анатомических структурах, наиболее подверженных вторжению микробов, и секретируются в жидкие среды организма или хранятся в цитоплазматических гранулах иммунокомпетентных фагоцитов (нейтрофилов) (Ganz Т. (1997); Ganz Т. (1998); Ganz Т. (1999); Boman H. (2000); Gudmundsson G.H. (1999)).
Ранее было показано (патентная заявка Австрии А 1416/2000), что природные антимикробные пептиды - производные кателицидина или их производные обладают иммуностимулирующим действием и поэтому являются высокоэффективными адъювантами.
Целью настоящего изобретения является получение адъюванта/ пептида-носителя, способного сильно повышать иммунные ответы на вводимые вместе с ним специфические антигены и поэтому являющегося высокоэффективным адъювантом.
Эта задача решается с помощью вакцины, включающей, по меньшей мере, один антиген и пептид, имеющий последовательность R1-XZXZNXZX-R2, где:
- N означает целое число от 3 до 7, предпочтительно 5,
- Х означает остаток положительно заряженной природной и/или неприродной аминокислоты,
- Z означает остаток аминокислоты, выбранной из числа L, V, I, F и/или W,
- R1 и R2 выбраны независимо друг от друга из группы, состоящей из -Н, -NH2, -СОСН3, -СОН, пептидов, состоящих из 20 и меньше аминокислотных остатков, реакционноспособных групп пептидов, пептидных линкеров с пептидом или без него; X-R2 также может представлять собой амид, эфир или тиоэфир остатка С-концевой аминокислоты.
Помимо природных антимикробных пептидов, были получены и исследованы синтетические антимикробные пептиды. Оказалось, что синтетический антимикробный пептид KLKLLLLLKLK-NH2 обладает значительной химиотерапевтической активностью на мышах, зараженных Staphylococcus aureus; нейтрофилы человека активировались и вырабатывали анион супероксида (О2 -) при посредстве кальретикулина на поверхности клеток. Точное число и положение К и L оказались критическими для антимикробной активности синтетического пептида (Nakajima Y. (1997); Cho J-H. (1999)).
Неожиданно в ходе настоящего изобретения было показано, что пептиды по настоящему изобретению, имеющие последовательность R1-XZXZNXZX-R2, где:
- N означает целое число от 3 до 7, предпочтительно 5,
- Х означает остаток положительно заряженной природной и/или неприродной аминокислоты,
- Z означает остаток аминокислоты, выбранной из числа L, V, I, F и/или W,
- R1 и R2 выбраны независимо друг от друга из группы, состоящей из -Н, -NH2, -СОСН3, -СОН, пептидов, состоящих из 20 и меньше аминокислотных остатков, реагирующих с пептидами групп, пептидных линкеров с пептидом или без него; X-R2, также может представлять собой амид, эфир или тиоэфир остатка С-концевой аминокислоты (в дальнейшем именуемые "пептидами А"), загружают (TRANSload) антигенные пептиды или белки в АПК намного эффективнее, чем известные адъюванты, включая природные антимикробные пептиды. Кроме того, они обладают сильной иммуностимулирующей активностью и поэтому являются высокоэффективными адъювантами.
Предпочтительно С-концевая аминокислота не модифицирована (СООН или COO-), так как эта форма даже лучше, чем амидированная форма пептида.
В рамках настоящего изобретения последовательность может быть амидирована на С-конце или нести дополнительную аминокислотную последовательность, однако предпочтительно С-конец остается свободным.
Кроме того, в рамках настоящего изобретения все Х в пептидах А могут быть представлены одним и тем же аминокислотным остатком. Однако в каждом конкретном пептиде А предпочтительно Х представлен только одним специфическим аминокислотным остатком, к примеру К или R. Тот же принцип применим в отношении Z: все Z в пептидах А могут быть представлены одной аминокислотой или же разными аминокислотами, к примеру либо L, или V. Это особенно применимо в отношении участка ZN в середине формулы, который может представлять собой, например, L5 или L3, а также LVIFW, LILFLLIW, WIF, W3L2 или любую другую комбинацию этого мотива длиной от 3 до 7 аминокислотных остатков, предпочтительно от 4 до 6 аминокислотных остатков, особенно предпочтительно 5 аминокислотных остатков. Эти остатки также предпочтительны для участков R1 и R2 (например, когда более 50%, предпочтительно более 80%, особенно предпочтительно более 90% R1 и/или R2 составляют L, I, F, V и/или W, если R1 и/или R2 являются пептидами). Предпочтительно R1 и R2 одинаковы, наиболее предпочтительно они оба представлены Н (то есть N- и С-концы свободны).
В рамках настоящего изобретения термин "неприродные" охватывает все аминокислотные остатки, которые не встречаются в природе и не встречаются в природных белках, соответственно.
Особенно предпочтителен пептид R1-KLKL5KLK-R2, однако предпочтительны также и R1-KIKL5KIK-R2, R1-KVKL5KVK-R2, R1-KFKL5KVK-R2, R1-KLKL6KLK-R2, R1-KWKW5KLK-R2, R1-KWKWL3WKWK-R2, R1-KLKL4KLK-R2 или любые перестановки в отношении положения I, F, V, W и L.
Конечно, вакцина может включать два или несколько антигенов в зависимости от требуемого иммунного ответа. Антигены могут быть модифицированы с тем, чтобы еще больше усилить иммунный ответ.
Предпочтительно в качестве антигенов используют белки или пептиды, происходящие из вирусных или бактериальных патогенов, из грибов или паразитов, а также опухолевые антигены (противораковые вакцины) или антигены, играющие вероятную роль в аутоиммунных заболеваниях (включая такие производные, как гликозилированные, липидированные, гликолипидированные или гидроксилированные антигены). Кроме того, в качестве собственно антигенов можно использовать углеводы, липиды или гликолипиды. Процесс получения производных может включать очистку данного белка или пептида из патогена, инактивацию патогена, а также протеолитическую или химическую обработку или стабилизацию такого белка или пептида. С другой стороны, в качестве антигена можно также использовать и сам патоген. Антигены предпочтительно представлены пептидами или белками, углеводами, липидами, гликолипидами или их смесями.
В предпочтительном воплощении в качестве антигена используют эпитопы Т-клеток. С другой стороны, предпочтительной может быть и комбинация из эпитопов Т-клеток и эпитопов В-клеток.
Не имеет решающего значения, какой антиген будет применяться в настоящем изобретении. Конечно, можно использовать и смеси разных антигенов по настоящему изобретению. Предпочтительно в качестве таких антигенов используют белки или пептиды, происходящие из вирусных или бактериальных патогенов, либо из грибов или паразитов (включая производные антигенов, гликозилированные или липидированные антигены, полисахариды или липиды). Другим предпочтительным источником антигенов являются опухолевые антигены. Предпочтительно патогены выбирают из числа вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусов гепатита А и В, вируса гепатита С (HCV), вируса саркомы Рауса (RSV), вируса Эпштейна-Барра (EBV), вируса гриппа, ротавируса, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumonia, Chlamydia trachomatis, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumonia, Bacillus anthracis. Vibrio cholerae, Plasmodium sp. (PI. falciparum, PI. vivax и др.), Aspergillus sp. и Candida albicans. Антигенами также могут быть молекулы, экспрессируемые раковыми клетками (опухолевые антигены). Процесс получения производных может включать очистку специфического белка или пептида из клеток патогена или раковых клеток, инактивацию патогена, а также протеолитическую или химическую обработку или стабилизацию такого белка. Точно так же можно использовать опухолевые антигены (противораковые вакцины) или аутоиммунные антигены в фармацевтической композиции по настоящему изобретению. С помощью таких композиций можно проводить вакцинацию против рака или лечение аутоиммунных заболеваний.
В случае пептидных антигенов данное изобретение включает применение пептидных мимотопов/агонистов/суперагонистов/антагонистов или пептидов, модифицированных по определенным положениям без изменения иммунологических свойств, либо непептидных мимотопов/агонистов/суперагонистов/антагонистов. Пептидные антигены также могут содержать удлинения на С-конце или N-конце пептидного антигена, которые облегчают взаимодействие с поликатионными соединениями или иммуностимуляторами. Для лечения аутоиммунных заболеваний могут применяться пептидные антагонисты.
Антигены также могут быть модифицированы включением молекул, усиливающих презентацию и таргетинг антигенов к антигенпрезентирующим клеткам.
В одном из воплощений изобретения фармацевтическая композиция служит для придания толерантности к белкам или белковым фрагментам и пептидам, вовлеченным в аутоиммунные заболевания. Используемые в этом воплощении антигены служат для индукции толерантности иммунной системы или понижающей регуляции (down-regulation) иммунных реакций против эпитопов, вовлеченных в аутоиммунные процессы.
Предпочтительно антиген представляет собой пептид, состоящий из 5-60, предпочтительно из 6-30, особенно предпочтительно из 8-11 аминокислотных остатков. Антигены такой длины оказались особенно пригодными для активации Т-клеток. К антигенам может быть присоединен дополнительный фрагмент ("хвост"), к примеру, согласно А 657/2000, US 5726292 или WO 98/01558.
Антиген может быть смешан с пептидами настоящего изобретения или представлен в виде другой специфической рецептуры, например липосом, состава для замедленного выделения и т.п. Антиген также может быть ковалентно или нековалентно связан с пептидом по настоящему изобретению. Предпочтительно антигены ковалентно связывают с пептидом как остатки R1 или R2, либо с боковыми цепями аминокислотных остатков пептида, в особенности с боковой цепью К или R.
Относительные количества ингредиентов данной композиции сильно зависят от назначения данной композиции. Предпочтительно используют от 10 нг до 1 г антигена и пептида А. Предпочтительные количества антигена/пептида А находятся в пределах от 0,1 до 1000 мкг антигена на вакцинацию и от 0,1 до 1000 мкг пептида А. Композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать вспомогательные вещества: буфера, соли, стабилизаторы, иммуностимуляторы, антиоксиданты или другие эффективные вещества, например противовоспалительные или обезболивающие лекарства.
Настоящие композиции можно вводить пациентам, к примеру, проходящим вакцинацию, в эффективном количестве, например, один раз в неделю, в две недели или в месяц. Пациенты, получающие данную композицию, могут подвергаться вакцинации несколько раз или только один раз. Предпочтительное применение настоящего изобретения - активная иммунизация, особенно людей или животных, не имеющих иммунитета против конкретного антигена.
Настоящую композицию можно вводить подкожно, внутримышечно, ректально, внутривенно, интрадермально, интрапиннально (в мочку уха), трансдермально, а также принимать внутрь.
Конечно, вакцина по настоящему изобретению может включать и другие вещества, например любые фармацевтически приемлемые носители и др. Вакцина по настоящему изобретению может быть представлена лекарственной формой, согласно известным методам, например, в виде ДНК-вакцин, вакцин для внутривенного, трансдермального, местного, интраназального применения и в виде комбинированных вакцин. Дозировку вакцин подбирают стандартными методами, исходя из известных вакцин, однако меньшие дозы могут давать ту же степень защиты, что и известные вакцины, поэтому они предпочтительны.
Предпочтительно вакцина представляется в форме, устойчивой при хранении, к примеру лиофилизованной, и необязательно в комбинации с подходящим раствором для разведения.
Аминокислотные остатки по настоящему изобретению могут представлять собой D- или L-аминокислоты. Предпочтительно все или, по меньшей мере, 80% остатков принадлежат какому-то одному виду (D или L). Наиболее предпочтительно, чтобы все аминокислоты в пептиде по настоящему изобретению были одного вида (D или L). Некоторые разновидности пептидов по настоящему изобретению также могут включать дополнительные аминокислотные остатки, встроенные в последовательность пептида А, однако гидрофобная область (Z, ZN) пептида не должна содержать остатков A, G и Т.
Предпочтительно в последовательности пептида Х означает аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из К, R, орнитина и/или гомоаргинина. Опять же Х в одном пептиде А может быть представлен различными аминокислотными остатками, выбранными из этой группы, однако предпочтительно Х представляет собой либо К, либо R, либо орнитин, либо гомоаргинин в данном пептиде А.
В предпочтительном воплощении настоящего изобретения Х в последовательности пептида является К. Было показано, что пептид А, содержащий эту аминокислоту в качестве X, вызывает особенно сильный иммунный ответ.
Предпочтительно в последовательности пептида Z выбирают из группы, состоящей из L, V, I, F и/или W. Как указано для X, также и Z в одном пептиде А может быть представлен различными аминокислотными остатками. Однако предпочтительно Z в данном пептиде А представлен остатком только одной аминокислоты, например либо L, либо V, либо I, либо F либо W, причем остатки L и I наиболее предпочтительны, а за ними следуют F, V и W (L>I>F>V>W).
Более предпочтительно Z в последовательности пептида А представляет собой L (или I, но более предпочтительно - L). При этом пептид А способен вызвать особенно сильный иммунный ответ.
Наиболее предпочтительно пептид А представляет собой H-KLKLLLLLKLK-H. Безусловно, следует иметь в виду, что эта формула охватывает и физиологические формы этого пептида (с протонированным N-концом (NH3 +) и депротонированным С-концом (СОО-)), и это относится ко всем пептидам по настоящему изобретению.
В следующем предпочтительном воплощении R1 и/или R2 в последовательности пептида состоит из 10-20 аминокислотных остатков. При этом получается пептид А такой длины, при которой индуцируется или усиливается особенно сильный иммунный ответ.
В предпочтительном воплощении настоящего изобретения аминокислотные остатки в R1 и/или R2 не являются отрицательно заряженными остатками аминокислот.
Опять же, эти аминокислотные остатки могут быть остатками природных и/или неприродных аминокислот. При добавлении не несущих отрицательный заряд остатков аминокислот на одном или на обоих концах пептида А он проявляет выраженную способность к усилению или к индуцированию иммунного ответа.
Предпочтительно R1 и/или R2 образуют гидрофобный "хвост" у пептида А. Поэтому аминокислотные остатки в R1 и/или R2 предпочтительно выбирают из группы, состоящей из L, V, I, F и/или W. Более предпочтительно аминокислотные остатки в R1 и/или R2 выбирают из группы, состоящей из L, I и/или F. Наиболее предпочтительно добавочные аминокислотные остатки представляют собой L. Такие пептиды А проявляют особенно большую способность к индуцированию сильного иммунного ответа.
В предпочтительном воплощении настоящего изобретения аминокислотные остатки в R1 и/или R2 представляют собой остатки положительно заряженных природных и/или неприродных аминокислот. Предпочтительно добавочные аминокислотные остатки выбирают из группы, состоящей из К, R, орнитина и/или гомоаргинина. Более предпочтительно аминокислотные остатки в R1 и/или R2 представляют собой К. Такие пептиды А тоже проявляют особенно большую способность к усилению иммунного ответа.
Предпочтительно аминокислотные остатки в R1 и/или R2 выбирают из первой группы (состоящей из L, V, I, F и/или W) или из второй группы (состоящей из остатков положительно заряженных аминокислот). Однако аминокислотные остатки в R1 и/или R2 также можно выбирать из обеих групп для одного и того же пептида А.
Пептид может быть соединен с сердцевинной частью пептида А настоящего изобретения посредством обычных пептидных связей либо через реагирующие с пептидами группы или пептидные линкеры. Реагирующие с пептидами группы - это химические группы, пригодные для связывания пептидов или белков. Таким образом, N- или С-конец данного пептида А может быть химически модифицирован так, чтобы он содержал химическую модификацию (например, иминотиоат, 3-меркаптопропионил), позволяющую ковалентное присоединение пептида или антигена соответственно. С другой стороны, пептид А может содержать подходящий пептидный линкер, то есть линкерную молекулу, способную образовать связь между сердцевинной частью пептида А (пептидом без R1 и/или R2) и, к примеру, присоединенным или могущим быть присоединенным к ней антигеном. Пептид по настоящему изобретению может содержать или не содержать пептид/антиген, связанный с реагирующей с пептидами группой и/или пептидным линкером. Такие химические модификации и подходящие пептидные линкеры хорошо известны специалистам в этой области.
Предпочтительно вакцина содержит еще, по меньшей мере, одно вещество, стимулирующее иммунные ответы. В качестве вещества, стимулирующего иммунные ответы, могут применяться любые вещества или молекулы, известные как активные адъюванты. Такие вещества раскрыты в WO 93/19768. Могут быть и другие вещества, например поликатионы типа полилизина или полиаргинина. Другие адъюванты могут находиться в виде частиц, например гранул силикагеля или декстрана, настолько маленьких, что они могут проникать в клетки. Включение этого дополнительного вещества, стимулирующего иммунные ответы, сделает вакцину еще более эффективной.
Предпочтительно фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, особенно в виде вакцины, дополнительно содержит поликатионный полимер, предпочтительно поликатионный пептид, в особенности полиаргинин, полилизин или антимикробный пептид.
Поликатионным соединением для использования в соответствии с настоящим изобретением может служить любое поликатионное соединение, обладающее характерным действием в соответствии с WO 97/30721. Предпочтительно поликатионные соединения выбирают из числа основных полипептидов, органических поликатионов, основных полиаминокислот и их смесей. Длина цепи таких полиаминокислот должна составлять не менее 4 аминокислотных остатков. Особенно предпочтительны вещества, содержащие пептидные связи, такие как полилизин, полиаргинин и полипептиды содержащие более 20%, в особенности более 50% основных аминокислот, в диапазоне более 8, в особенности более 20 аминокислотных остатков, либо их смеси. Другие предпочтительные поликатионы и их фармацевтические композиции описаны в WO 97/30721 (к примеру, полиэтиленимин) и WO 99/38528. Предпочтительно эти поликатионы содержат от 20 до 500 аминокислотных остатков, в особенности от 30 до 200 остатков.
Такие поликатионные соединения могут быть получены химическим путем или рекомбинантным методом либо могут происходить из природных источников.
Катионными (поли)пептидами также могут быть поликатионные антибактериальные пептиды из микроорганизмов. Эти (поли)пептиды могут иметь прокариотическое или эукариотическое происхождение либо могут быть получены химическим путем или рекомбинантным методом. Пептиды также могут принадлежать к классу природных антимикробных пептидов. Такие пептиды защитной системы хозяина также являются предпочтительной формой поликатионных полимеров по настоящему изобретению. В общем, в качестве поликатионных полимеров используют соединения, способствующие в конечном счете активации (или понижающей регуляции) адаптивной иммунной системы, предпочтительно опосредованной АПК (включая дендритные клетки).
Особенно предпочтительны в качестве поликатионных веществ по настоящему изобретению происходящие из кателицидина антимикробные пептиды или их производные (А 1416/2000, включенный в настоящее изобретение в качестве ссылки), в особенности антимикробные пептиды, происходящие из кателицидинов млекопитающих, предпочтительно человека, быка или мышей.
Кроме того, в качестве иммуностимуляторов также можно использовать нейроактивные соединения типа гормона роста (человека), как описано в WO 01/24822.
К поликатионным соединениям природного происхождения относятся катионные пептиды, происходящие из HIV-REV и HIV-TAT, пептиды Antennapedia, хитозан и другие производные хитина, а также другие пептиды, полученные из этих пептидов или белков биохимическим или рекомбинантным способом. Другие предпочтительные поликатионные соединения - кателин либо родственные или производные вещества от кателицидина, особенно кателицидина мышей, быка и особенно человека, и/или кателицидины. Родственные вещества и производные кателицидина содержат всю последовательность кателицида или ее часть с по меньшей мере 15-20 аминокислотными остатками. Получение производных может включать замещения или модификации природных аминокислот такими аминокислотами, которые не встречаются среди 20 стандартных аминокислот. Более того, в такие молекулы кателицидинов можно вводить дополнительные катионные остатки. Предпочтительно такие молекулы кателицидинов применяются в комбинации с антигеном/ вакцинной композицией по настоящему изобретению. Однако неожиданно эти молекулы кателинов также оказались эффективными как адъюванты для антигенов без добавления других адъювантов. Поэтому такие молекулы кателицидинов можно использовать в качестве эффективных адъювантов в вакцинных композициях вместе с другими иммуноактивирующими веществами и без них.
Предпочтительно веществом, стимулирующим иммунные ответы, является цитокин. Цитокины играют важную роль в активации и стимуляции В-клеток, Т-клеток и NK-клеток, макрофагов, дендритных клеток и других клеток, принимающих участие в индукции иммунного ответа. Можно использовать любые цитокины, которые способны усиливать иммунные ответы на антигены.
Предпочтительно вакцина по настоящему изобретению дополнительно содержит иммуностимуляторную/иммуногенную нуклеиновую кислоту, предпочтительно олигодезоксинуклеотид, содержащий дезоксиинозин, олигодезоксинуклеотид, содержащий дезоксиуридин, олигодезоксинуклеотид, содержащий метилированный или неметилированный мотив CG, либо содержащую инозин и цитидин молекулу нуклеиновой кислоты.
Иммуногенная нуклеиновая кислота, используемая в соответствии с настоящим изобретением, может быть синтетической или происходить из прокариот либо эукариот. В случае эукариотического источника ДНК должна происходить в соответствии с филогенетическим древом из менее эволюционно продвинутого вида (к примеру, насекомых, но можно и других). В предпочтительном воплощении изобретения иммуногенным олигодезоксинуклеотидом (ОДН) является полученная синтетическим путем молекула ДНК или смесь таких молекул. Также подходят производные или модификации ОДН типа замещенных тиофосфатом аналогов (остатки тиофосфата замещают фосфат), например, как описано в патентах США 5723335 и 5663153, а также другие производные или модификации, которые предпочтительно стабилизируют иммуностимулирующие композиции, но не изменяют их иммунологические свойства. Предпочтительно мотивом последовательности является мотив из 6 оснований ДНК, содержащий (неметилированный) динуклеотид CpG, фланкированный с 5′-конца двумя пуринами и с 3′-конца двумя пиримидинами (5′-Pur-Pur-C-G-Pyr-Pyr-3′). Мотивы CpG, содержащиеся в ОДН по настоящему изобретению, более распространены в ДНК микроорганизмов, чем в ДНК высших позвоночных, и проявляют отличия в профиле метилирования. Неожиданно последовательности, стимулирующие АПК мышей, не очень эффективны для клеток человека. Предпочтительные палиндромные и непалиндромные ОДН, которые можно использовать в настоящем изобретении, раскрыты в патентных заявках Австрии А 1973/2000, А 805/2001, ЕР 0468520 А2, WO 96/02555, WO 98/16247, WO 98/18810, WO 98/37919, WO 98/40100, WO 98/52581, WO 98/52962, WO 99/51259 и WO 99/56755, которые все включены в настоящее изобретение в качестве ссылок. Помимо стимуляции иммунной системы, определенные ОДН нейтрализируют некоторые иммунные реакции. Эти последовательности также включены в настоящее изобретение, к примеру, для лечения аутоиммунных заболеваний. ОДН/ДНК можно получить химическим путем или рекомбинантным методом либо они могут происходить из природных источников. Предпочтительными природными источниками являются насекомые.
С другой стороны, также можно использовать нуклеиновые кислоты на основе инозина и цитозина (как описано в РСТ/ЕР 01/06437) или дезоксинуклеиновые кислоты, содержащие остатки дезоксиинозина и/или дезоксиуридина (описано в патентных заявках Австрии А 1973/2000 и А 805/2001, включенных в настоящее изобретение в качестве ссылок), в качестве иммуностимуляторных нуклеиновых кислот настоящего изобретения.
Конечно, также можно использовать смеси различных иммуногенных нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением.
Другой аспект настоящего изобретения заключается в применении пептида, содержащего последовательность R1-XZXZNXZX-R2 (пептид А), определенную выше, для получения адъюванта для усиления иммунного ответа по меньшей мере на один антиген.
В предпочтительном воплощении изобретения адъювант добавляют в вакцину. Конечно, можно вводить адъювант млекопитающим непосредственно, предпочтительно перед вакцинацией. Однако проще для введения добавить адъювант в вакцину, которую после этого вводят млекопитающему в один прием.
Следующий аспект настоящего изобретения касается способа вакцинации млекопитающих, включая человека, против конкретного антигена или группы антигенов, который включает введение вакцинируемому млекопитающему, включая человека, эффективного количества вакцины по настоящему изобретению. В качестве альтернативы способ включает введение эффективного количества адъюванта, содержащего описанный выше пептид А, после чего вводится вакцина.
Изобретение будет раскрыто более подробно на следующих примерах и фигурах, однако оно не ограничивается ими.
Перечень фигур
На фигуре 1 показана способность к "нагрузке" антигеном (TRANSloading) (синтетического антимикробного) пептида KLKLLLLLKLK (SEQ ID NO 1) в сравнении с различными, описанными ранее, "пептидами-носителями".
На фигуре 2 показана эффективность вариантов пептида по настоящему изобретению в сравнении с другими пептидами.
На фигуре 3 показано содержание γ-IFN-продуцирующих клеток у мышей, вакцинированных антигенным пептидом в комбинации с (синтетическим антимикробным) пептидом KLKLLLLLKLK.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
ПРИМЕРЫ
Пример 1
"Нагрузка" антигеном (TRANSloading) макрофагов мышей с помощью синтетического антимикробного пептида в качестве "пептида-носителя"
Для проверки того, способен ли (синтетический антимикробный) пептид KLKLLLLLKLK функционировать в качестве "пептида-носителя" для антигенов и "нагружать" АПК in vitro, то есть усиливать захват антигена АПК, в качестве антигенного пептида использовали флуоресцентно меченный пептид. Его смешивали с KLKLLLLLKLK и другими описанными ранее "пептидами-носителями" в различных концентрациях, как указано.
Для сравнения эффективности доставки пептида этими различными "пептидами-носителями" измеряли захват пептида АПК, инкубируя клетки P388D1 (клеточная линия антигенпрезентирующих моноцитов-макрофагов мышей, приобретенная у АТСС (TIB-63)) в течение 1 часа при 37°С в присутствии постоянного количества меченного флуоресцеином пептида, одного или в комбинации с различными "пептидами-носителями" в указанных концентрациях. Перед анализом клеток методом проточной цитометрии их многократно отмывали для удаления свободного пептида. Измеряли относительное количество захваченного клетками меченного флуоресцеином пептида методом проточной цитометрии.
В качестве антигенного пептида использовали пептид, происходящий из гемагглютинина вируса гриппа, связывающий МНС I класса (Kd) (Buschle M. (1997)). Смешивали 2 мкг этого антигенного пептида (FL-LFEAIEGFI) с 3 различными количествами каждого из пептидов-носителей, которые тестировали в концентрациях, соответствующих 101,7, 50,9 и 5,09 нмоль положительных зарядов. На фигуре 1 показано, во сколько раз повышается захват пептида по сравнению с одним только пептидом:
пептид FL-LFEAIEGFI в смеси с:
(1) поли-L-аргинином (pR60, 60-мер)
(2) происходящим из кателицидина мышей антимикробным пептидом (mCRAMP), SEQ ID NO 2
(3) LL-37, SEQ ID NO 3
(4) L-индолицидином, SEQ ID NO 4
(5) KLKLLLLLKLK (свободный С-конец), SEQ ID NO 1
(6) линейным додекапептидом быка, SEQ ID NO 5
(7) циклическим додекапептидом быка.
Поскольку известно, что в клетках, обработанных одним только пептидом, флуоресценция очень слабая (как показано ранее), то интенсивная флуоресценция "нагруженных" антигеном (TRANSloaded) клеток была особенно заметна в клетках, подвергавшихся "загрузке" с помощью синтетического антимикробного пептида KLKLLLLLKLK в качестве "пептида-носителя", что свидетельствует о том, что он способен очень эффективно "загружать" АПК антигенным пептидом.
Пример 2
"Нагрузка" антигеном макрофагов мышей с помощью различных синтетических антимикробных пептидов в качестве "пептидов-носителей"
Тестировали, как различные синтетические антимикробные пептиды с последовательностью R1-XZXZNXZX-R2 функционируют в качестве "пептидов-носителей" для антигенов и "нагружают" антигеном (TRANSloaded) АПК in vitro, то есть усиливают захват антигена АПК. Для этого в качестве антигенного пептида использовали флуоресцентно меченный пептид. Его смешивали с пептидами, содержащими последовательность R1-XZXZNXZX-R2, и другими описанными ранее "пептидами-носителями" в различных концентрациях, как указано.
Для сравнения эффективности доставки пептида этими различными "пептидами-носителями" измеряли захват пептида АПК, инкубируя клетки P388D1 (клеточная линия антигенпрезентирующих моноцитов-макрофагов мышей, приобретенная у АТСС (TIB-63)) в течение 1 часа при 37°С в присутствии постоянного количества меченного флуоресцеином пептида, одного или в комбинации с различными "пептидами-носителями" в указанных концентрациях. Перед анализом клеток методом проточной цитометрии их многократно отмывали для удаления свободного пептида. Измеряли относительное количество захваченного клетками меченного флуоресцеином пептида методом проточной цитометрии.
В качестве антигенного пептида использовали пептид, происходящий из гемагглютинина вируса гриппа, связывающий МНС I класса (Kd) (Buschle M. (1997)). Смешивали 3 мкг этого антигенного пептида (FL-LFEAIEGFI) с 3 различными количествами каждого из пептидов-носителей, которые тестировали в концентрациях, соответствующих 101,7, 50,9 и 5,09 нмоль положительных зарядов. На фигуре 2 показано, во сколько раз повышается захват пептида по сравнению с одним только пептидом: пептид FL-LFEAIEGFI в смеси с:
(1) поли-L-аргинином (60-мер)
(2) Нр(2-20), цекропинподобным антибактериальным пептидом, происходящим из рибосомного белка LI Helicobacter pylori, SEQ ID NO 6
(3) LALF-пептидом, SEQ ID NO 7
(4) происходящим из кателицидина мышей антимикробным пептидом, SEQ ID NO 2
(5) KAKAAAAAKAK-NH2, SEQ ID NO 8
(6) KGKGGGGGKGK-NH2, SEQ ID NO 9
(7) KTKTTTTTKTK-NH2, SEQ ID NO 10
(8) KLKLVIFWKLK-NH2, SEQ ID NO 11
(9) KVKVVVVVKVK-NH2, SEQ ID NO 12
(10) KWKWWWWWKWK-NH2, SEQ ID NO 13
(11) KFKFFFFFKFK-NH2, SEQ ID NO 14
(12) RLKLLLLLKLR-NH2, SEQ ID NO 15
(13) RLRLLLLLRLR-NH2, SEQ ID NO 16
(14) KLKLLLLLKLK-NH2, SEQ ID NO 17
(15) KLKLLLLLKLK-COOH (свободный С-конец), SEQ ID NO 1.
Поскольку известно, что в клетках, обработанных одним только пептидом, флуоресценция очень слабая (как показано ранее), то интенсивная флуоресценция "нагруженных" антигеном клеток была особенно заметна в клетках, подвергавшихся "загрузке" с помощью пептидов, содержащих последовательность R1-XZXZNXZX-R2 (включая указанные выше предпочтительные воплощения) в качестве "пептида-носителя", что свидетельствует о том, что пептиды по настоящему изобретению способны очень эффективно "загружать" АПК антигенным пептидом.
Пример 3
Проверка способности усиливать индукцию пептид-специфичных ответов Т-клеток in vivo
Для проверки способности (синтетического антимикробного) пептида KLKLLLLLKLK усиливать индукцию пептид-специфичных ответов Т-клеток in vivo группам из 4 мышей (C57BL/6, самки в возрасте 8 недель, Н-2b) вводили подкожно в бок 3 раза (дни 0, 28, 56) антигенный пептид меланомы (100 мкг), происходящий из TRP-2 (родственный тирозиназе белок-2 мышей), один или в комбинации с поли-L-аргинином или синтетическим антимикробным пептидом KLKLLLLLKLK в качестве "пептида-носителя". (Синтетический антимикробный) пептид KLKLLLLLKLK использовали в 4 разных количествах, которые по концентрации соответствуют: равному количеству поли-L-аргинина по весу (100 мкг), равному (168 мкг), двойному (336 мкг) и тройному (504 мкг) количеству поли-L-аргинина по положительным зарядам. Группам мышей вводили следующие количества (на 1 мышь):
(1) 100 мкг пептида
(2) 100 мкг пептида +100 мкг поли-L-аргинина (pR 60)
(3) 100 мкг пептида + 100 мкг KLKLLLLLKLK
(4) 100 мкг пептида +168 мкг KLKLLLLLKLK
(5) 100 мкг пептида + 336 мкг KLKLLLLLKLK
(6) 100 мкг пептида + 504 мкг KLKLLLLLKLK.
Через 12 дней после 3-й вакцинации удаляли паховые лимфатические узлы, клетки лимфатических узлов (фиг.3) ex vivo активировали пептидом-производным TRP-2 (родственный тирозиназе белок-2 мышей) и определяли содержание специфических γ-IFN-продуцирующих клеток методом ELISpot (число точек "окрашенных" на γ-IFN, на 1 млн клеток лимфатических узлов).
Фиг.3 показывает, что введение мышам пептида вместе с возрастающими дозами KLKLLLLLKLK давало гораздо больше специфических γ-IFN-продуцирующих клеток, чем введение мышам одного пептида или в комбинации с поли-L-аргинином. При этом также подтверждается, что пептид KLKLLLLLKLK не вызывает образования пептид-специфичных γ-IFN-продуцирующих Т-клеток (по результатам ELISpot), то есть в данных экспериментах были получены лишь Т-клетки, не обладающие специфичностью к KLKLLLLLKLK.
Этот пример четко показывает, что (синтетический антимикробный) пептид KLKLLLLLKLK усиливает индукцию пептид-специфичных Т-клеточных ответов in vivo.
Резюмируя, (синтетический антимикробный) пептид KLKLLLLLKLK проявляет высокую эффективность в "нагрузке" антигеном (TRANSloading) и иммуностимуляции, что свидетельствует о том, что пептиды А способны "загружать" АПК антигенными пептидами in vitro и in vivo с большой эффективностью и служат хорошими адъювантами/ "пептидами-носителями" для антигенных пептидов при индукции адаптивных иммунных ответов.
ЛИТЕРАТУРА
Banchereau et al. (1998), "Dendritic cells and the control of immunity", Nature 392 (6673): 245-52.
Boman (2000), "Innate immunity and the normal microflora", Immunol. Rev. 173: 5-16.
Brossart et al. (1997), "Presentation of exogenous protein antigens on major histocompatibility complex class I molecules by dendritic cells: pathway of presentation and regulation by cytokines", Blood 90 (4): 1594-9.
Buschle et al. (1998), "Chemically defined, cell-free cancer vaccines: use of tumor antigen-derived peptides or polyepitope proteins for vaccination". Gene Therapy and Molecular Biology 1: 309-21.
Buschle et al. (1997), "Transloading of tumor antigen-derived peptides into antigen-presenting cells", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 (7): 3256-61.
Cho et al. (1999), "Activation of human neutrophils by a synthetic anti-microbial peptide, KLKLLLLLKLK-NH2, via cell surface calreticulin", Eur. J. Biochem. 266: 878-85.
Ganz et al. (1997), "Anti-microbial peptides of leukocytes", Curr. Opin. Hematol. 4 (I): 53-8.
Ganz T. (1998), " Anti-microbial peptides of vertebrates", Curr. Opin. Hematol. 10 (I): 41-4.
Ganz et al. (1999), "Antibiotic peptides from higher euckaryotes: biology and applications", Mol. Med. Today 5 (7): 292-7.
Gudmundsson et al. (1999), "Neutrophil antibacterial peptides, multifunctional effector molecules in the mammalian immune system", J. Immunol. Methods 232 (1-2): 45-54.
Harding (1995), "Phagocytic processing of antigens for presentation by MHC molecules", Trends in Cell Biology 5 (3): 105-09.
Harding (1996), "Class I MHC presentation of exogenous antigens", J. Clin. Immunol. 16 (2): 90-6.
Mizukawa et al. (1999), "Presence of defensin in epithelial Langerhans cells adjacent to oral carcinomas and precancerous lesions", Anticancer Res. 19 (4B): 2669-71.
Monaco (1992), "A molecular model of MHC class-I-restricted antigen processing", Immunol. Today 13 (5): 173-9.
Nakajima et al. (1997), "Chemotherapuetic activity of synthetic antimicrobial peptides: correlation between chemotherapeutic activity and neutrophil-activating activity", FEBS Lett. 415: 64-66.
Schijns (2000), "Immunological concepts of vaccine adjuvant activity", Curr. Opin. Immunol. 12(4): 456-63.
Schmidt et al. (1997), "Cell-free tumor antigen peptide-based cancer vaccines", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 (7): 3262-7.
Zanetti et al. (1997), "The cathelicidin family of antimicrobial peptide precursors: a component of the oxygen-independent defense mechanisms of neutrophils", Ann. N.Y. Acad. Sc. 832: 147-62.
Claims (16)
1. Применение пептида, содержащего последовательность R1-XZXZNXZX-R2, где
N означает целое число от 3 до 7, предпочтительно 5,
X означает остаток положительно заряженной природной или неприродной аминокислоты,
Z означает остаток аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L, V, I, F и/или W,
R1 и R2 выбраны независимо друг от друга из группы, состоящей из -Н, -NH2, - СОСН3, -СОН, пептидов, состоящих из 20 и меньше аминокислотных остатков, реагирующих с пептидами групп, пептидных линкеров с пептидом или без него; X-R2 также может представлять собой амид, эфир или тиоэфир остатка С-концевой аминокислоты,
в качестве адъюванта или белка-носителя для усиления иммунного ответа по меньшей мере на один антиген.
2. Применение по п.1, характеризующееся тем, что X в последовательности пептида означает остаток аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из К, R, орнитина и/или гомоаргинина.
3. Применение по п.2, характеризующееся тем, что X в последовательности пептида представляет собой К.
4. Применение по любому из пп.1-3, характеризующееся тем, что Z в последовательности пептида выбран из группы, состоящей из L, I и/или F.
5. Применение по п.4, характеризующееся тем, что Z в последовательности пептида представляет собой L.
6. Применение по п.1, характеризующееся тем, что пептид имеет последовательность H-KLKLLLLLKLK-H.
7. Применение по любому из пп.1-6, характеризующееся тем, что в последовательности пептида R1 и/или R2 состоит из 10-20 аминокислотных остатков.
8. Применение по п.7, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 не являются остатками отрицательно заряженных аминокислот.
9. Применение по п.8, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 выбраны из группы, состоящей из L, V, I, F и/или W.
10. Применение по п.9, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 выбраны из группы, состоящей из L, I и/или F.
11. Применение по п.10, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 представляют собой L.
12. Применение по любому из пп.7-11, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 представляют собой остатки положительно заряженных природных и/или неприродных аминокислот.
13. Применение по п.12, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 выбраны из группы, состоящей из К, R, орнитина и/или гомоаргинина.
14. Применение по п.13, характеризующееся тем, что аминокислотные остатки в R1 и/или R2 представляют собой К.
15. Применение по любому из пп.1-14, характеризующееся тем, что адъювант или белок-носитель усиливает захват по меньшей мере одного антигена антигенпрезентирующими клетками (АПК).
16. Применение по любому из пп.1-15, характеризующееся тем, что адъювант или белок-носитель добавляют в вакцину.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ATA1789/00 | 2000-10-18 | ||
| AT0178900A AT410635B (de) | 2000-10-18 | 2000-10-18 | Vakzin-zusammensetzung |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007146372/15A Division RU2007146372A (ru) | 2000-10-18 | 2007-12-13 | Вакцинная композиция |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003114434A RU2003114434A (ru) | 2004-09-20 |
| RU2328305C2 true RU2328305C2 (ru) | 2008-07-10 |
Family
ID=3688953
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003114434/15A RU2328305C2 (ru) | 2000-10-18 | 2001-10-18 | Вакцинная композиция |
| RU2007146372/15A RU2007146372A (ru) | 2000-10-18 | 2007-12-13 | Вакцинная композиция |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007146372/15A RU2007146372A (ru) | 2000-10-18 | 2007-12-13 | Вакцинная композиция |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US8361476B2 (ru) |
| EP (1) | EP1326634B1 (ru) |
| JP (2) | JP4227407B2 (ru) |
| KR (1) | KR100598302B1 (ru) |
| CN (1) | CN1248736C (ru) |
| AT (2) | AT410635B (ru) |
| AU (2) | AU1232602A (ru) |
| BR (1) | BRPI0114994B8 (ru) |
| CA (1) | CA2426490C (ru) |
| CZ (1) | CZ303303B6 (ru) |
| DE (1) | DE60119145T2 (ru) |
| DK (1) | DK1326634T3 (ru) |
| ES (1) | ES2263668T3 (ru) |
| HK (1) | HK1055899A1 (ru) |
| HU (1) | HU228382B1 (ru) |
| IL (2) | IL154605A0 (ru) |
| IS (1) | IS2608B (ru) |
| MX (1) | MXPA03002828A (ru) |
| NO (1) | NO330274B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ524532A (ru) |
| PL (1) | PL209016B1 (ru) |
| PT (1) | PT1326634E (ru) |
| RU (2) | RU2328305C2 (ru) |
| SI (1) | SI1326634T1 (ru) |
| SK (1) | SK287618B6 (ru) |
| WO (1) | WO2002032451A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200301465B (ru) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005004910A2 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-20 | Intercell Ag | Hcv vaccines |
| AT410635B (de) * | 2000-10-18 | 2003-06-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Vakzin-zusammensetzung |
| US7244438B2 (en) | 2001-01-05 | 2007-07-17 | Intercell Ag | Uses for polycationic compounds |
| CA2433794A1 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Intercell Ag | Uses for polycationic compounds as vaccine adjuvants |
| AT410798B (de) | 2001-01-26 | 2003-07-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen |
| EP1279404A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-01-29 | Istituto Superiore di Sanità | Use of HIV-1 tat, fragments or derivatives thereof, to target or to activate antigen-presenting cells, to deliver cargo molecules for vaccination or to treat other diseases |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| AU2003254585A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-16 | Intercell Ag | Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| JP2006504687A (ja) | 2002-09-13 | 2006-02-09 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | Ｃ型肝炎ウイルスペプチドの単離方法 |
| CN1705679B (zh) | 2002-10-15 | 2011-04-06 | 英特塞尔股份公司 | 编码b族链球菌粘着因子的核酸、b族链球菌的粘着因子和它们的用途 |
| CA2517518A1 (en) | 2003-03-04 | 2004-09-16 | Intercell Ag | Streptococcus pyogenes antigens |
| DE602004029657D1 (de) | 2003-03-24 | 2010-12-02 | Intercell Ag | Verbesserte impfstoffe |
| JP2006521321A (ja) * | 2003-03-24 | 2006-09-21 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 免疫応答を促進するためのミョウバンおよびＴｈ１免疫応答誘起アジュバントの使用 |
| ATE449177T1 (de) | 2003-03-31 | 2009-12-15 | Intercell Ag | Staphylococcus epidermidis antigene |
| AU2004230244B2 (en) | 2003-04-15 | 2011-09-22 | Intercell Ag | S. pneumoniae antigens |
| US8076059B2 (en) * | 2003-04-16 | 2011-12-13 | Duke University | Adjuvant capable of specifically activating the adaptive immune response |
| CA2522986A1 (en) | 2003-05-07 | 2004-11-18 | Intercell Ag | Streptococcus agalactiae antigens i + ii |
| JP2008500007A (ja) | 2003-05-30 | 2008-01-10 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 腸球菌抗原 |
| DE602005004014T2 (de) | 2004-03-12 | 2008-12-11 | Intercell Ag | Verfahren zur solubilisierung von peptid-mischungen |
| WO2006032697A2 (en) | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Intercell Ag | MODIFIED VPl-CAPSID PROTEIN OF PARVOVIRUS B19 |
| EP1931379B1 (en) | 2005-10-07 | 2013-05-29 | Health Protection Agency | Proteins with improved solubility and methods for producing and using same |
| TW200806315A (en) | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
| EP2402023A1 (en) | 2006-06-28 | 2012-01-04 | Statens Serum Institut | Expanding the t cell repertoire to include subdominant epitopes by vaccination with antigens delivered as protein fragments or peptide cocktails |
| CN101490083A (zh) | 2006-07-07 | 2009-07-22 | 英特塞尔股份公司 | 小化脓性链球菌抗原及其用途 |
| EP2289906A1 (en) | 2006-09-15 | 2011-03-02 | Intercell AG | Borrelia antigens |
| EP1923069A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-21 | Intercell AG | Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| EP2120984A2 (en) | 2007-01-12 | 2009-11-25 | Intercell AG | Protective proteins of s. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same |
| WO2008135446A2 (en) | 2007-05-02 | 2008-11-13 | Intercell Ag | Klebsiella antigens |
| EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
| US20100203083A1 (en) | 2007-05-31 | 2010-08-12 | Medigene Ag | Mutated structural protein of a parvovirus |
| CA2690271A1 (en) | 2007-06-18 | 2008-12-24 | Intercell Ag | Chlamydia antigens |
| JP2011514167A (ja) | 2008-03-17 | 2011-05-06 | インターセル アーゲー | 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対して保護的なペプチドならびにそれに関連する組成物、方法、および使用 |
| US8287887B2 (en) | 2008-04-02 | 2012-10-16 | The University Of Tokushima | Antigen-and-drug vehicle comprising synthetic peptide, and mucosal vaccine using the same |
| EP2650014A2 (en) | 2008-06-20 | 2013-10-16 | Wyeth LLC | Compositions and methods of use of ORF1358 from beta-hemolytic streptococcal strains |
| US20100015171A1 (en) * | 2008-07-15 | 2010-01-21 | Statens Serum Institute | Vaccines comprising tb 10.4 |
| WO2010089340A2 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Intercell Ag | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
| WO2010092176A2 (en) | 2009-02-13 | 2010-08-19 | Intercell Ag | Nontypable haemophilus influenzae antigens |
| SG10201707084SA (en) | 2009-06-22 | 2017-10-30 | Wyeth Llc | Immunogenic compositions of staphylococcus aureus antigens |
| CN102625713A (zh) | 2009-06-22 | 2012-08-01 | 惠氏有限责任公司 | 用于制备金黄色葡萄球菌血清型5和8荚膜多糖缀合物免疫原性组合物的组合物和方法 |
| WO2011024071A1 (en) | 2009-08-27 | 2011-03-03 | Novartis Ag | Adjuvant comprising aluminium, oligonucleotide and polycation |
| EP2308896A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| EP2319871A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-11 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| CA2777237A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Sanofi | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| WO2011101465A1 (en) | 2010-02-19 | 2011-08-25 | Intercell Ag | Ic31 nanoparticles |
| MX2012010609A (es) | 2010-03-18 | 2012-10-03 | Novartis Ag | Vacunas adyuvadas para meningococos serogrupo b. |
| WO2011151760A2 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Wyeth Llc | Vaccine formulations |
| DK3246044T4 (da) | 2010-08-23 | 2024-05-21 | Wyeth Llc | Stabile formuleringer af Neisseria-meningitidis-RLP2086-antigener |
| WO2012028741A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Intercell Ag | Isolated polypeptide of the toxin a and toxin b proteins of c. difficile and uses thereof |
| WO2012031760A1 (en) | 2010-09-08 | 2012-03-15 | Medigene Ag | Parvovirus mutated structural proteins comprising cross - protective b - cell epitopes of a hpv l2 protein as well as products and methods relating thereto |
| NZ607224A (en) | 2010-09-10 | 2014-11-28 | Wyeth Llc | Non-lipidated variants of neisseria meningitidis orf2086 antigens |
| WO2012085872A2 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Wyeth Llc | Stable immunogenic compositions of staphylococcus aureus antigens |
| BRPI1100857A2 (pt) * | 2011-03-18 | 2013-05-21 | Alexandre Eduardo Nowill | agente imunomodulador e suas combinaÇÕes, seu uso e mÉtodo imunoterÁpico para a recontextualizaÇço, reprogramaÇço e reconduÇço do sistema imune em tempo real |
| ITMI20111182A1 (it) | 2011-06-28 | 2012-12-29 | Canio Buonavoglia | Vaccino per coronavirus canino |
| BR112014021658A2 (pt) | 2012-03-09 | 2017-07-11 | Pfizer | composições de neisseria meningitidis e métodos das mesmas |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| CN104428411B (zh) * | 2012-05-08 | 2018-11-23 | 健康科学西部大学 | 用于cd4+t细胞群之抗原特异性扩增的标准化离体平台 |
| CA2889841C (en) * | 2012-10-29 | 2021-12-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Novel mucosal adjuvants and delivery systems |
| KR101787217B1 (ko) | 2012-12-20 | 2017-10-18 | 화이자 인코포레이티드 | 당접합 방법 |
| US9802987B2 (en) | 2013-03-08 | 2017-10-31 | Pfizer Inc. | Immunogenic fusion polypeptides |
| US20140271723A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Saint Louis University | Adjuvant compositions and methods of using thereof |
| AU2014316722B2 (en) | 2013-09-08 | 2017-09-07 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| WO2016130569A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Mj Biologics, Inc. | A composition comprising pedv antigens and methods for making and using the composition |
| AU2016221318B2 (en) | 2015-02-19 | 2020-06-25 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| MX368897B (es) | 2015-05-04 | 2019-10-21 | Pfizer | Conjugados proteina-polisacarido de estreptococo grupo b, metodos para producir conjugados, composiciones inmunogenas que comprenden conjugados y sus usos. |
| CN107441501B (zh) * | 2016-07-01 | 2020-11-10 | 四川大学 | 抗菌肽修饰的载药脂质体及其制备方法和用途 |
| US10751402B2 (en) | 2016-11-09 | 2020-08-25 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions and uses thereof |
| CA3051801A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| CN107266585B (zh) * | 2017-07-13 | 2019-08-06 | 陕西科技大学 | 一种mlh融合抗菌肽及其制备方法和应用 |
| CA3089790A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-22 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein for the treatment of autoimmune diseases |
| EP3527223A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-21 | 2A Pharma AB | Mutated parvovirus structural protein |
| CN109745556A (zh) * | 2019-03-01 | 2019-05-14 | 龙阔（苏州）生物工程有限公司 | 一种疫苗佐剂及其应用及猪繁殖与呼吸综合征疫苗 |
| MX2021013111A (es) | 2019-05-20 | 2021-11-17 | Valneva Se | Una vacuna de subunidad para el tratamiento o la prevencion de una infeccion del tracto respiratorio. |
| US20230137756A1 (en) * | 2020-03-30 | 2023-05-04 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Synthetic Soluble Receptor Mimics and Methods of Use for Treatment of COVID-19 |
| EP4136095A1 (en) | 2020-04-17 | 2023-02-22 | Regents of the University of Minnesota | Sars-cov-2 spike receptor binding domain and compositions and methods thereof |
| JP2023538736A (ja) | 2020-08-26 | 2023-09-11 | ファイザー・インク | Ｂ群レンサ球菌多糖－タンパク質コンジュゲート、コンジュゲートを生成するための方法、コンジュゲートを含む免疫原性組成物、およびそれらの使用 |
| US20240181034A1 (en) | 2021-04-09 | 2024-06-06 | Valneva Se | Human metapneumo virus vaccine |
| WO2023083964A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein against beta- and gamma-hpv |
| WO2024069420A2 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-04 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising an rsv f protein trimer |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995004542A1 (en) * | 1993-08-06 | 1995-02-16 | Cytel Corporation | Cloning and characterization of the complete mage-1 gene |
| JP3442824B2 (ja) * | 1993-08-30 | 2003-09-02 | 理化学研究所 | 抗菌性ペプチド類 |
| JP3547504B2 (ja) * | 1994-11-01 | 2004-07-28 | 独立行政法人理化学研究所 | 新規なポリペプチド及びその用途 |
| US6261568B1 (en) * | 1997-06-11 | 2001-07-17 | Institut Pasteur | Attenuated recombinant mycobacteria useful as immunogens or as vaccine components |
| DK1009386T3 (da) * | 1997-08-29 | 2005-09-19 | Corixa Corp | Hurtigt-frigivende indkapslede bioaktive midler til at inducere eller potensere et immunrespons og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| CU22700A1 (es) * | 1997-09-29 | 2001-07-31 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Formulación farmacéutica anti-viral que contiene un péptido de la proteína factor anti-lps de limulus y su uso |
| WO2005004910A2 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-20 | Intercell Ag | Hcv vaccines |
| US20020072495A1 (en) * | 2000-09-21 | 2002-06-13 | Oleg Chertov | LL-37 is an immunostimulant |
| AT410635B (de) | 2000-10-18 | 2003-06-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Vakzin-zusammensetzung |
| JP2006521321A (ja) * | 2003-03-24 | 2006-09-21 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 免疫応答を促進するためのミョウバンおよびＴｈ１免疫応答誘起アジュバントの使用 |
| DE602004029657D1 (de) | 2003-03-24 | 2010-12-02 | Intercell Ag | Verbesserte impfstoffe |
-
2000
- 2000-10-18 AT AT0178900A patent/AT410635B/de not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-10-18 JP JP2002535688A patent/JP4227407B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 WO PCT/EP2001/012041 patent/WO2002032451A1/en active IP Right Grant
- 2001-10-18 MX MXPA03002828A patent/MXPA03002828A/es active IP Right Grant
- 2001-10-18 HU HU0302117A patent/HU228382B1/hu unknown
- 2001-10-18 NZ NZ524532A patent/NZ524532A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-10-18 SK SK575-2003A patent/SK287618B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-10-18 PT PT01980496T patent/PT1326634E/pt unknown
- 2001-10-18 CZ CZ20031299A patent/CZ303303B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-10-18 AT AT01980496T patent/ATE324116T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-10-18 EP EP01980496A patent/EP1326634B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 CA CA2426490A patent/CA2426490C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 SI SI200130564T patent/SI1326634T1/sl unknown
- 2001-10-18 ES ES01980496T patent/ES2263668T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 CN CNB018171168A patent/CN1248736C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 AU AU1232602A patent/AU1232602A/xx active Pending
- 2001-10-18 US US10/399,442 patent/US8361476B2/en active Active
- 2001-10-18 RU RU2003114434/15A patent/RU2328305C2/ru active
- 2001-10-18 BR BR0114994-6 patent/BRPI0114994B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-10-18 DK DK01980496T patent/DK1326634T3/da active
- 2001-10-18 DE DE60119145T patent/DE60119145T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-18 KR KR1020037004977A patent/KR100598302B1/ko active IP Right Grant
- 2001-10-18 IL IL15460501A patent/IL154605A0/xx unknown
- 2001-10-18 AU AU2002212326A patent/AU2002212326B2/en not_active Expired
- 2001-10-18 PL PL362966A patent/PL209016B1/pl unknown
-
2003
- 2003-02-20 IS IS6722A patent/IS2608B/is unknown
- 2003-02-24 ZA ZA200301465A patent/ZA200301465B/en unknown
- 2003-02-24 IL IL154605A patent/IL154605A/en unknown
- 2003-04-08 NO NO20031595A patent/NO330274B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-11-12 HK HK03108189A patent/HK1055899A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-12-13 RU RU2007146372/15A patent/RU2007146372A/ru not_active Application Discontinuation
-
2008
- 2008-05-21 US US12/124,785 patent/US8900564B2/en active Active
- 2008-05-22 JP JP2008134215A patent/JP2008222721A/ja not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-01-16 US US13/742,500 patent/US20130216583A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BUSCHLE M. et al., Development of defined synthetic vaccines by in vivo charging of antigen presenting cell with antigen, J. Invest dermatology, 2000, v.114, №1, p.235. ALVAREZ-BRAVO J. et al., Novel synthetic antimicrobial peptides effective against methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Biochemical J., 1994, v.302, №2, pp.535-538. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2328305C2 (ru) | Вакцинная композиция | |
| AU2002212326A1 (en) | Vaccine composition comprising an antigen and a peptide having adjuvant properties | |
| JP2008222721A6 (ja) | ワクチン組成物 | |
| AU784403B2 (en) | Pharmaceutical composition for immunomodulation and preparation of vaccines comprising an antigen and an immunogenic oligodeoxynucleotide and a polycationic polymer as adjuvants | |
| JP5586717B2 (ja) | 改良型ワクチン | |
| EP1309345A2 (en) | Cathelicidins as vaccine adjuvants | |
| AU2001289813A1 (en) | A vaccine which comprises at least one antigen and a cathelididin derived antimicrobial peptide or a derivative thereof | |
| US20070041998A1 (en) | Use of alum and a th1 immune response inducing adjuvant for enhancing immune responses | |
| JP2004519452A (ja) | ポリカチオン性化合物の用途 | |
| AU2002340561B2 (en) | Use of peptide vectors to improve the immune response to antigens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20151022 |
|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20151029 |