Claims (17)
1. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (rAAV), содержащий вектор rAAV, отличающийся тем, что вектор rAAV содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую собачий полипептид HAS2, функционально связанную с промотором. 1. Recombinant adeno-associated virus (rAAV) containing the rAAV vector, characterized in that the rAAV vector contains a nucleic acid sequence encoding a canine HAS2 polypeptide operably linked to a promoter.
2. rAAV по п. 1, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид HAS2, имеет, по меньшей мере, 90% идентичность с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:3, или нуклеиновая кислота кодирует полипептид HAS2, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, или в котором полипептид HAS2 содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2; и/или рекомбинантная плазмида содержит pCBA-HI-cHAS2-BGHpA. 2. rAAV according to claim 1, in which the nucleic acid sequence encoding the HAS2 polypeptide has at least 90% identity with the sequence shown in SEQ ID NO:3, or the nucleic acid encodes the HAS2 polypeptide containing the amino acid sequence of at least 90% identical to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, or in which the HAS2 polypeptide contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2; and/or the recombinant plasmid contains pCBA-HI-cHAS2-BGHpA.
3. rAAV, содержащий вектор rAAV, при этом вектор rAAV содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую укороченный собачий лубрицин и функционально связанную с промотором.3. An rAAV containing an rAAV vector, wherein the rAAV vector contains a nucleic acid sequence encoding a truncated canine lubricin and operably linked to a promoter.
4. rAAV по п. 3, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая лубрицин, имеет, по меньшей мере, 90% идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 6, или данная нуклеиновая кислота кодирует лубрицин, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7. 4. rAAV according to claim 3, in which the nucleic acid sequence encoding lubricin has at least 90% identity with the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 6, or this nucleic acid encodes lubricin containing the amino acid sequence of at least 90% identical to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7.
5. rAAV по п. 3 или 4, в котором полипептид лубрицин имеет аминокислотную последовательность, как установлено в SEQ ID NO: 7.5. An rAAV according to claim 3 or 4, wherein the lubricin polypeptide has the amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO: 7.
6. rAAV по любому из пп. 3-5, в котором вектор rAAV содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8. 6. rAAV according to any one of paragraphs. 3-5, in which the rAAV vector contains the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 8.
7. rAAV по любому из пп. 1-6, в котором промотор выбирают из группы, состоящей из промотора CMV IE, промотора RSV, промотора HSV-1 TK, раннего промотора SV40, позднего промотора SV40, промотора гена фосфоглицераткиназы, промотора гена металлотионеина, промотора гена α-1 антитрипсина, промотора гена альбумина, промотора гена коллагеназы, промотора гена эластазы I, промотора CBA, промотора гена β-актина, промотора гена β-глобина, промотора гена γ-глобина, промотора гена α-фетопротеина и промотора гена мышечной креатинкиназы. 7. rAAV according to any one of paragraphs. 1-6, wherein the promoter is selected from the group consisting of CMV IE promoter, RSV promoter, HSV-1 TK promoter, SV40 early promoter, SV40 late promoter, phosphoglycerate kinase gene promoter, metallothionein gene promoter, antitrypsin α-1 gene promoter, promoter albumin gene, collagenase gene promoter, elastase I gene promoter, CBA promoter, β-actin gene promoter, β-globin gene promoter, γ-globin gene promoter, α-fetoprotein gene promoter, and muscle creatine kinase gene promoter.
8. rAAV по любому из пп. 1-7, в котором rAAV содержит капсид AAV2 или капсид AAV5. 8. rAAV according to any one of paragraphs. 1-7, in which rAAV contains an AAV2 capsid or an AAV5 capsid.
9. rAAV по п. 8, в котором rAAV содержит капсид AAV5.9. The rAAV of claim 8, wherein the rAAV contains an AAV5 capsid.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая rAAV по любому из пп. 1-9, и необязательно, по меньшей мере, один фармацевтически или с точки зрения ветеринарии приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. 10. Pharmaceutical composition containing rAAV according to any one of paragraphs. 1-9, and optionally at least one pharmaceutically or veterinarily acceptable carrier, excipient or diluent.
11. Способ лечения субъекта-млекопитающего, страдающего от остеоартрита (OA), включающий внутрисуставное введение указанному субъекту-млекопитающему терапевтически эффективного количества рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую защищающий кость или восстанавливающий кость полипептид, функционально связанную с промотором, при этом полипептид экспрессируется in vivo у субъекта-млекопитающего в количестве, эффективном для облегчения симптомов OA;11. A method of treating a mammalian subject suffering from osteoarthritis (OA), comprising intra-articular administration to said mammalian subject of a therapeutically effective amount of a recombinant adeno-associated virus (rAAV) containing a nucleic acid encoding a bone-protecting or bone-restoring polypeptide operably linked to a promoter, when wherein the polypeptide is expressed in vivo in a mammalian subject in an amount effective to alleviate the symptoms of OA;
согласно которому полипептид является гиалуронсинтазой (HAS), лубрицином, антагонистом рецептора интерлейкина-1 (IL-1R), инсулиноподобным фактором роста 1 (IGF-1), фактором роста фибробластов 2 (FGF-2), трансформирующим ростовым фактором бета 1 (TGFβ1), костным морфогенетическим белком 7 (BMP7), глюкозамин-фруктозо-6-фосфат аминотрансферазой (GFAT), интерлейкином 10 (IL-10), гемоксигеназой-1 HO-1, их биологически активными укороченными вариантами или их комбинациями. according to which the polypeptide is hyaluron synthase (HAS), lubricin, interleukin-1 receptor (IL-1R) antagonist, insulin-like growth factor 1 (IGF-1), fibroblast growth factor 2 (FGF-2), transforming growth factor beta 1 (TGFβ1) , bone morphogenetic protein 7 (BMP7), glucosamine-fructose-6-phosphate aminotransferase (GFAT), interleukin 10 (IL-10), heme oxygenase-1 HO-1, their biologically active truncated variants, or combinations thereof.
12. Способ по п. 11, согласно которому полипептид является полипептидом HAS2. 12. The method of claim 11, wherein the polypeptide is a HAS2 polypeptide.
13. Способ по п. 11 или 12, согласно которому полипептид HAS2 содержит аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2, или ее фрагмент, вариант или гомолог, который демонстрирует активность HAS2 in vivo у субъекта. 13. The method according to claim 11 or 12, wherein the HAS2 polypeptide comprises an amino acid sequence having at least 90% identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, or a fragment, variant, or homologue thereof that exhibits activity HAS2 in vivo in a subject.
14. Способ по любому из пп. 11-13, согласно которому полипептид HAS2 содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. 14. The method according to any one of paragraphs. 11-13, according to which the HAS2 polypeptide contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
15. Способ по любому из пп. 11-14, согласно которому нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид HAS2, имеет нуклеотидную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3; и15. The method according to any one of paragraphs. 11-14, according to which the nucleic acid encoding the HAS2 polypeptide has a nucleotide sequence having at least 90% identity with the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 3; and
согласно которому rAAV содержит геном вектора rAAV, содержащий в порядке от 5’ к 3’ следующие элементы: 5’ инвертированный концевой повтор (ITR) AAV, «лишний» участок нуклеиновой кислоты, промотор, интрон (IN), кодон-оптимизированную кДНК cHAS2, сигнал полиаденилирования (pA) и 3’ ITR AAV.according to which rAAV contains the genome of the rAAV vector, containing in the order from 5' to 3' the following elements: 5' inverted terminal repeat (ITR) of AAV, "extra" nucleic acid region, promoter, intron (IN), codon-optimized cHAS2 cDNA, polyadenylation signal (pA) and 3' ITR AAV.