RU2021122362A

RU2021122362A - Молекула олигомерной нуклеиновой кислоты и ее применение

Info

Publication number: RU2021122362A
Application number: RU2021122362A
Authority: RU
Inventors: Лунчэн ЛИ; Моорим КАН
Original assignee: Рактиджен Терапьютикс
Priority date: 2018-12-29
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2023-01-31

Claims

1. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты, в которой одна цепь молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по крайней мере на 75% гомологична или комплементарна непрерывной нуклеотидной последовательности длиной от 16 до 35 нуклеотидов в промоторной области гена SMN2 от -1639 до -1481 (SEQ ID №: 476), области от -1090 до -1008 (SEQ ID №: 477), области от -994 до -180 (SEQ ID №: 478) или области от -144 до -37 (SEQ ID №: 479) выше сайта начала транскрипции гена SMN2.

2. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 1, содержащая фрагмент смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмент антисмысловой нуклеиновой кислоты, в которой фрагмент смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмент антисмысловой нуклеиновой кислоты содержат комплементарные области, и при этом комплементарные области образуют структуру двухцепочечной нуклеиновой кислоты, которая может активировать экспрессию гена SMN2 в клетках.

3. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 2, в которой фрагмент смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмент антисмысловой нуклеиновой кислоты находятся в двух разных цепях нуклеиновой кислоты.

4. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 2, в которой фрагмент смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмент антисмысловой нуклеиновой кислоты находятся в одной и той же цепи нуклеиновой кислоты, предпочтительно в форме «шпильки», образованной одной цепью нуклеиновой кислоты, причем комплементарные области фрагмента смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмента антисмысловой нуклеиновой кислоты образуют структуру двухцепочечной нуклеиновой кислоты.

5. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 3, в которой как минимум одна цепь имеет «липкий» 3'-конец длиной от 0 до 6 нуклеотидов.

6. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 5, в которой обе цепи имеют «липкий» 3'-конец длиной от 2 до 3 нуклеотидов.

7. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по пп. 2-6, в которой фрагмент смысловой нуклеиновой кислоты и фрагмент антисмысловой нуклеиновой кислоты независимо имеют длину от 16 до 35 нуклеотидов.

8. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 1, в которой одна цепь молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по крайней мере на 75% гомологична или комплементарна последовательности нуклеотидов, выбранной из SEQ ID №: 315-471.

9. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 8, в которой смысловой фрагмент молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по крайней мере на 75% гомологичен последовательности нуклеотидов, выбранной из SEQ ID №: 1-157, а антисмысловой фрагмент молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по крайней мере на 75% гомологичен последовательности нуклеотидов, выбранной из SEQ ID №: 158-314.

10. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 9, в которой смысловой фрагмент молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеотидов, выбранную из SEQ ID №: 1-157, или идентичен ей, а антисмысловой фрагмент молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеотидов, выбранную из SEQ ID №: 158-314, или идентичен ей.

11. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-10, в которой как минимум один нуклеотид является химически модифицированным.

12. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 11, в которой химически модифицированный нуклеотид имеет как минимум одну из следующих модификаций:

модификация фосфодиэфирной связи, соединяющей нуклеотиды в нуклеотидной последовательности молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты;

модификация 2'-OH рибозы в нуклеотидной последовательности молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты; и

модификация основания в нуклеотидной последовательности молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты.

13. Молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-12, где молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты активирует/стимулирует экспрессию гена SMN2 как минимум на 10%.

14. Нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-10.

15. Нуклеиновая кислота по п. 14, где нуклеиновая кислота является молекулой ДНК.

16. Клетка, содержащая молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, или нуклеиновая кислота по п. 14 или 15.

17. Композиция, содержащая молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, или нуклеиновая кислота по п. 14 или 15 и, опционально, фармацевтически приемлемый носитель.

18. Композиция по п. 17, в которой фармацевтически приемлемый носитель выбран из водного носителя, липосомы, высокомолекулярного полимера или полипептида.

19. Композиция по п. 17 или 18, где композиция содержит молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты в концентрации 1-150 нМ.

20. Способ терапии заболевания или состояния, вызванного недостаточной экспрессией белка SMN, мутацией или делецией гена SMN1 или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN1 и/или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN2, у индивидуума, который включает введение индивидууму терапевтической дозы молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, нуклеиновой кислоты по п. 14 или 15, или композиции по любому из пп. 17-19.

21. Способ по п. 20, где заболевание или состояние является наследственным нервно-мышечным заболеванием, предпочтительно спинальной мышечной атрофией.

22. Способ по п. 20 или 21, где индивидуум является млекопитающим, предпочтительно человеком.

23. Применение молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, нуклеиновой кислоты по п. 14 или 15, или композиции по любому из пп. 17-19 для приготовления препарата для лечения заболевания или состояния, вызванного недостаточной экспрессией белка SMN, мутацией или делецией гена SMN1 или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN1 и/или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN2 у индивидуума.

24. Применение по п. 23, где заболевание или состояние является наследственным нервно-мышечным заболеванием, предпочтительно спинальной мышечной атрофией.

25. Применение по п. 23 или 24, где индивидуум является млекопитающим, предпочтительно человеком.

26. Применение молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, нуклеиновой кислоты по п. 14 или 15 или композиции по любому из пп. 17-19 для приготовления препарата для активации/стимуляции экспрессии гена SMN2 в клетке.

27. Применение по п. 26, где молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты, нуклеиновая кислота по п. 14 или 15 или композиция по любому из пп. 17-19 вводится непосредственно в клетку.

28. Применение по п. 26, где молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты производится в клетке из нуклеотидной последовательности, кодирующей молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты, введенной в клетку.

29. Применение по любому из пп. 26-28, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, предпочтительно человека.

30. Применение по п. 29, где клетка находится в организме человека.

31. Применение по п. 30, где организм человека является пациентом, у которого имеется симптом, вызванный недостаточной экспрессией белка SMN, мутацией или делецией гена SMN1 или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN1 и/или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN2, причем молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты, нуклеиновая кислота или композиция вводится в количестве, достаточном для лечения симптома.

32. Применение по п. 31, где при этом симптом, вызванный недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN, является наследственным нервно-мышечным заболеванием, предпочтительно спинальной мышечной атрофией.

33. Изолированный целевой сайт молекулы короткой нуклеиновой кислоты, активирующей SMN2, где целевой сайт содержит от 16 до 35 постоянных нуклеотидов в последовательности, выбранной из SEQ ID №: 476-479.

34. Целевой сайт молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по п. 33, где целевой сайт представляет собой последовательность нуклеотидов, выбранную из SEQ ID №: 315-471.

35. Способ активации/стимуляции экспрессии гена SMN2 в клетке, включающий введение в клетку молекулы короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, нуклеиновой кислоты по п. 14 или 15 или композиции по любому из пп. 17-19.

36. Способ по п. 35, где молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, нуклеиновая кислота по п. 14 или 15 или композиция по любому из пп. 17-19 вводится непосредственно в клетку.

37. Способ по п. 35, где молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты производится в клетке из нуклеотидной последовательности, кодирующей молекулу короткой активирующей нуклеиновой кислоты, введенной в клетку.

38. Способ по любому из пп. 35-37, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, предпочтительно человека.

39. Способ по п. 38, где клетка находится в организме человека.

40. Способ по п. 39, где организм человека является пациентом, у которого имеется симптом, вызванный недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN, мутацией или делецией гена SMN1 или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN1 и/или недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN2, причем молекула короткой активирующей нуклеиновой кислоты, нуклеиновая кислота или композиция вводится в количестве, достаточном для лечения симптома.

41. Способ по п. 40, где симптом, вызванный недостаточной экспрессией полноразмерного белка SMN, является наследственным нервно-мышечным заболеванием, предпочтительно спинальной мышечной атрофией.