Claims (9)
1. Трансплантат для восстановления дефектов соединительной ткани, характеризующийся тем, что он содержит клеточные культуры мононуклеаров костного мозга и (или) мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и (или) фибробластов человека и матрицу-носитель, которая представляет собой субстрат с развитой поверхностью на основе коллагена, или желатина, или деминерализованного костного матрикса.1. A transplant for repairing defects of connective tissue, characterized in that it contains cell cultures of bone marrow mononuclear cells and (or) multipotent mesenchymal stromal cells and (or) human fibroblasts and a carrier matrix, which is a substrate with a developed surface based on collagen, or gelatin, or demineralized bone matrix.
5. Трансплантат по п.1, где матрица-носитель выполнена в форме геля, измельченной губки, пленки и трехмерной конструкции, соответствующей дефекту соединительной ткани.5. The graft according to claim 1, where the carrier matrix is made in the form of a gel, a crushed sponge, a film and a three-dimensional structure corresponding to a defect in connective tissue.
2. Трансплантат по п.1, где матрица-носитель дополнительно включает матриксные белки, выбранные из группы коллаген, энтегрин, фибронектин, ламинин в концентрации от 0,1 до 100 мкг/мл.2. The graft according to claim 1, where the matrix carrier further includes matrix proteins selected from the group of collagen, integrin, fibronectin, laminin in a concentration of from 0.1 to 100 μg / ml.
3. Трансплантат по п.1, где матрица-носитель дополнительно включает антисептики, выбранные из группы ионы серебра, меди, золота и антибиотики широкого спектра действия.3. The graft according to claim 1, where the carrier matrix further includes antiseptics selected from the group of silver, copper, gold ions and broad-spectrum antibiotics.
4. Трансплантат по п.1, где матрица-носитель дополнительно включает факторы роста фибропластов, и/или трансформирующий фактор роста α и β, и/или фактор роста, выделяемый тромбоцитами, и/или фактор роста гепатоцитов в концентрации от 1 до 300 нг/мл.4. The graft according to claim 1, where the carrier matrix further includes fibroblast growth factors, and / or transforming growth factor α and β, and / or platelet-derived growth factor, and / or hepatocyte growth factor in a concentration of from 1 to 300 ng / ml
5. Трансплантат по п.1, где матрица-носитель выполнена в форме геля, измельченной губки, пленки и трехмерной конструкции, соответствующей дефекту соединительной ткани.5. The graft according to claim 1, where the carrier matrix is made in the form of a gel, a crushed sponge, a film and a three-dimensional structure corresponding to a defect in connective tissue.
6. Трансплантат по п.1, где источником мононуклеаров является взвесь костного мозга, полученная путем пункции заднего или переднего гребня подвздошной кости или грудины, в том числе при оперативных вмешательствах.6. The graft according to claim 1, where the source of mononuclear cells is a suspension of bone marrow obtained by puncture of the posterior or anterior crest of the ilium or sternum, including during surgical interventions.
7. Трансплантат по п.1, где мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга или жировой ткани получены из аутологичного или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют; далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут, избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы.7. The transplant according to claim 1, where the multipotent mesenchymal stromal cells of bone marrow or adipose tissue are obtained from autologous or donor material, while the tissue is disaggregated; they are then cultured in the form of attached colonies in a growth medium containing fetal calf serum and glutamine, then they are repeatedly passaged in low density with a change in the composition of the medium, and cultivation is carried out, avoiding the accumulation of mature stromal cells in the culture.
8. Трансплантат по п.1, где источником фибробластов являются кожа и слизистые оболочки, и полученные при помощи липоаспирации или биопсии.8. The transplant according to claim 1, where the source of fibroblasts are the skin and mucous membranes, and obtained by lipoaspiration or biopsy.
9. Способ получения трансплантата для восстановления дефектов соединительной ткани, характеризующийся тем, что матрицу-носитель получают смешиванием всех его компонентов при температуре 0 - 4°С, при этом при необходимости в основные компоненты вносят матриксные белки, факторы роста, антибиотики и/или антисептики, далее на субстраты с развитой поверхностью наслаивают клеточную суспензию из расчета 5-10 млн. клеток на 1 см3 субстрата из аллогенной или аутогенной клеточной культуры фибробластов, мононуклеаров костного мозга, мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга, жировой ткани и субстраты с прикрепившимися клетками промывают в среде Хенкса9. A method of producing a graft for repairing defects in connective tissue, characterized in that the carrier matrix is prepared by mixing all its components at a temperature of 0-4 ° C, with matrix proteins, growth factors, antibiotics and / or antiseptics being added to the main components, if necessary , then on a substrate with a developed surface layered cell suspension at the rate of 5-10 million cells per 1 cm 3 substrate from allogeneic or autogenous cell culture of fibroblasts, bone marrow mononuclear cells, multipotent bone marrow, adipose tissue mesenchymal stromal cells and adherent substrates are washed in Hanks medium