PT94128A - Processo para a preparacao de derivados de purina contendo fosforo - Google Patents

Description

MQVOS COMPOSTOS tando actividade antivirai, com processos para a sua preparação i com a sua ufcilizac-So como agentes farmacêuticos·. íBeechara Group cromatoq? grupo de oe ΓΓι__Λ _*“*t -Ί ·“! is Li H í,*tí.*tuí. delgada) descreve um substituinte 9"-hidro>;iâlca>;i, e η 1 r rM * ·*·’ — - derivados da quanina tendo um possuindo actividade anfciviral» estrutural— 1mente descobert uma c í asse nov

Fo nisn te distinta, iÍ8 3. c c. i. V idade antivii ral composta tendo omposb :i7i presente invento proporciona um ou um seu sal farmaCêuticamente LJoi tsBujttentcfsifente , o composto com a fórmula (I) ac e x t a v e .1.«

ou and. no ^

I l|/°*5 ch2p xor6 ©m que e R. são £} X Π Li © pOP[d ©Π í 10 Ή!-·~ X ©CC X O nados da entre ...-hidrogénio» Ο Ι al oux.l d •fe © fenilo substituído facu .1 tativamentes ou R~.· e R» em Cui ξ junta sSo lí -ch2 oNo 11/ ch2p \ or6 em que l*"\ í Γ.ί L U*. ,{· T Li J. Lí br I rL I Ϊ Á Lí L>

Uuaudcj R.| é hidroííi s R.7 é aminog □ composto com a fórmula (I) é· um derivado da adeninas

Quando R, é assino e R,-, fórmula íl) é uiTs derivado da adenxnar.

Uaanuo tòrmula í I) ê usí

R, è- hidroxi e ri.- é hidrogénio, o composto cpm 1 z

Quando R. e R._, são ambos grupos smino, o composto com a fórmula íl) é um derivado da 29ó—díaminopurina» í-requen temente., d composto com quanina ou um derivado da guanina. f ^rmula (ί í s; uma

Exemplos apropriados do grupo aci lo em R-^ quando " * .Ji aciloximetilo» incluem acilo carboxílico, tal como C.. alcanoilo e bensoilo substituída facultativamente no anel fenilo tal coma é definido a seguir paira R^/R, „ Bruços acilo preferidos incluem acetilo, propionilo5 butirilo, heptanoilo e haxanoílo =

Exemplos apropriados de s Rc incluem hidrogénio., meti lo 5 etilos n- e iso--propilo, n-5 ssc- , iso- e tarc-fau tilo.·, s fenilo substituído facultativamente por um;i dois· ou tr'&'s grupos ou átomos selsccionados de entre halogénio. claro, bromoh e C., ,, i-4 alquilo é seleccionad-sR5/]V Exemplos de sais separação„ AItsrnativamente, ta. l coma t i. uara alquilo ou u., ^ a Icokí L efTi que a Hietad' do 8Πtro ss indi c ad .¾¾ ante· normente par .L:zí·: individuais oodem ssr preparados por síntese assimétrica usando intermediários quirais.-. metal Os compostos coíi! a. T órmu 1 - ai* i«CvX Xííw pjycrw T ΟΓ* mar so como niaratos

é hidroKi na ρ rs d cm i n a.n te com a estrutura. í IΆ) 2 irá tomado em consideração que? quando K. I Oí* i <Sv α coíbdqsco exi5rs na forma tautomerica 0

(IA)

0 invento também proporciona um processo para a preparação de um composto com a fórmula (I)3 ou um seu sal farmaCãuti-camente aceitávels processo esse que compreende ou i) encerramento tio -anel imidscole de um C I I ) !! imposto com rmu 1 a

fcMSi -U LÃS Λ & Uífl grupo capaz da c ic i izar- a fim de í oniisj Uil! i m i d a z ο I e ? t a. 1 COlTtO um derivado amino ou imino* por S -· formilaminou ou· ii) encerraiísento do anel pirimidina de f-np* a f

COY

NH2 (III) 8 -

e® que Y é amino ou slcoxi, com um agente de condensação capaz de ciciizar para famar um anel pirimidina tendo i.un substitui π te 2-R,, 3 para dar origem a um composto com a fórmula i I> em que Ré hidroiíi e R.~, é aminos; du j. .C. iii) condensação de um composto com a fórmula CIv>s

(IV) com uma cadeia intermediária com a fórmula <V)§ QCHQCHR_'SR4' Cv) em que 0 é um grupo separável § e em que9 nas fórmulas (II) a <V> 5 R* , R^ s R, e R„ são R,s 5 K-? R-,- e Rj_ respectivamente= ou grupos ou átomos neles converti-veie5 e em seguida* quando desejado ou necessário? conversão de ? í í / R1 ? R.-, ? R-K e/ou 5 quando diferentes de R, s R,?s R^. e/ou R,,

a”.Rl> R2> k~ e/ou R_ respectivamente* e/ou conversão de Ró R'2 i‘ R- e/ou Râ quando R1 * R.?s R^ e/ou R^, em outros R, * R e/ou

V χ·-\\ Ο processa i> pode ser realizada, de preferencia quando X é formilamino, usando um agente de condensação, tal como acetato de dietoximetilo ou ortoformato de trietilo, ou por fusão 0 processo ii) ê de preferencia realizado de acordo com os métodos descritos em EP-A-242482, cujo tema é aqui incorporado c. orna re f e rã n c i a 0 processo iii# pode ser realizado com valores apropriados para Q incluindo halo, tal como cloro, bromo e iodo, de preferãneia iodo? ou outros grupos rápidamente deslocáveis por nucleofilcss, tais como mesiloxi ou tosiloxi» A reacção tem lugar de preferãneia num solvente inerte, tal como dimetilformamida na presença de uma base, tal como carbonata de potássio, a 0-5@°C, de preferãneia à temperatura ambiente» AIternativamente, Q pode ser OH, caso essa em que a reacção tem lugar na presença de um catalisador de deshidrataçSlo, tal como azodiearboKilsto de distilo na presença de trifenilfosfína»

Exemplos de conversões de grupos variáveis são como se segue s ±

-R a) Um grupo hidroxi R^ pode ser convertido em R_. ê cloro, por clorinaçSo usande? um reagente tal como oxicloreto de fósforo, de preferãneia na presença de cloreto de tetraetilamónio e dimetil-anilina íco/no aceitador de ácida) em CH-^CN a temperaturas de refluxo, de acordo com a método descrito por M„J» Robiris e B« Qzanski Can.= J. Chem, 59, 2601 (1981).

ί© -., ' ^ ;· V ' b) Um grupo cloro Rf pode ser convertido em é hidroni por hidrólise usando ácido mineral aquoso, tal como ácido clorídrico, ou com maior preferência, usando um ácida orgânico, tal como ácido térmico a uma temperatura, elevada, apropriadamente 7©-Í5©‘"‘C, de preferência á volta ds 1ΘΘ0ϋ» : c) Um grupo cloro R_. pode ser convertido em R, é amino por a) HidroKi ou hidroxímstilo podem ser convertidos em aciloxi ou aciloKimetilo respectivsmente por processos de acilaçlo convencionais = b) Hidroni protegido ou hidroximetilo protegido pode ser convertida em hidroni ou hidroximetilo por métodos de desprotec-çSo convencionais»

Exemplos apropriados ds grupos protectores s sua remoção, sãc? tal como foram descriros em EP-A-242482. Um grupo protector particularmente apropriado é o grupo acetilo removível por h i d ré1í se* ^ ^ - ^ são diferentes de hidrogénio, eles

Quando R,_ e R, em R

D podem ser convertidos em R,_ e R_, são hidrogénio, usando um reagente de desesterificaçaío, tal como brometo de trimetilsililo num solvente aprático tal como diclorometano ou. dimetilforínamida à temperatura ambiente, tal como é descrito por C»E» McKenna et» al« J.C.S» Chern» Goram», 1979, 739» η conversão seiectiva de um oe entre K5 ^ Bfii hidrogénio, pode ser realícada por tratamento com iSo hidróxido, tal como é descrito por Rabinowitz JACB 196©, 82, 4564» 11 11

'w'

Fosfonatos cíclicos em que R~, s Rfl são reunidas entre sí tal cama foi definida? podem ser preparados a partir do correspondente composto com a fórmula Cl) em que R,_ ou R, ê *J €3 hidrogénio e R^ á hidroxi? por reacção com N?N--diciclohexil-4-morfolinoearboxamidina e um reagente de dsshidraiaçao;i tal como d i c i c 1 o be κ i i c a r bod i i m i d a„

Será tomado em consideração que as conversões atrás referidas -podem ter lugar em qualquer ordem desejada ou necessárias tendo como objectivo o desejado composto final com a fórmula <I).

Us intermediários com a fórmula (II) podem ser preparados a partir do correspondente composto com a fórmula (VI)s (VI) e por meio de intermediários com a fórmula (V) em que D é OH,, tal como foi aqui anteriormente definido, de acordo com os métodos descritos em EP-A—242482 isto é por conversão do composto com a fórmula (V) em que Q é OH no derivado ftalimidooxi. seguinda—se reacçSo com meti 1 hidra? ina,.

Ο composta com a fórmula (VI) em que R1 é claro e R._= é amina. é um composto conhecido tal como foi descrito por Templ· et al» ϋ. Org. Chem., 4Θ (21)3 3141s 1975. ê exara Q composto com a fórmula (VI) em que é hidrogénio á um comoosto comercializado.

Intermediários com a fórmula íIII> podem ser preparados de acordo com os métodos geralmente descritos em EP—A—242482. uuffljjoscom : a fórmula \ ív) sSo preparados iítil C foi deesrito em EP—A—Sl r“p_s\_ 319-228 5 a partir de OCHTipOS COíTí a fórmula (VI) em qub d gru pO 5-ãilíifl :D B forsTill ,arfo;i com R_ ,QNH„ em que ! R_ é um grupo protector. para dar igsm a UM COfi riposto com a f órmul a (VII)s

(VII) por que pode ser ciclizado com acetato de dietoximetilo. para dar origem a um composto com a fórmula <IV) em que o grupo OH é protegido, valores apropriados para E— incluem bsnzilo, removível por hidrogenaçãOf. e o grupo tetrahidropiran—2-iIo removível tratamento com ácido -acético a 8<3%« á temperatura ambiente.

r preparados fazendi presença de uma basi >ϊ num sol vente inert •ição 1 aqui êã U. X Γ" ;e FU é hidr onimetí1 rea gir o R„ Cl apn tal como hitíreto di tal como tstrahidr pode então ser preparado como se segue;

PhCH20

PhCH20

cf3(so2)2o

HO

HO

sr4' « H2/PdC MeOH/HCl

Quando Ru hidrοκimstilo, é rsqusrida po..j tec o jsc selectiva de um dos grupos hidro;<i na cadeia lateral interiTiediá· ist.o é conseguido por rsscçao tust ortoxurs;-sto é.C ido ria da fórmula <V> de trimetilo na presença de um catalisador ácido,, tal can p-to1uenessu1fónico« 14

- · / : ; ·

Podem ser preparados sais farmacêuticamente aceitáveis de um modo convencional ? por exemplo, no caso de sais de adie ao de ácido, por reacção cora o ácido orgânico ou inorgânico apropriado .

Será tomado era consideração que o invento proporciona um processa para a preparação de um composto com a fórmula íI) em que R~. è hidroxímetilo processo esse que compreende desprotecção de um composto correspondente com a fórmula íI) em que Bu é hidroxímetilo protegido. Métodos preferidos para desprotecçSo, tal como foi aqui anteriormente descrito., incluem remoção do grupo acetilo» 0 invento proporciona também um processo para a prepa- ração de um composto com a fórmula < I > sm que H_. s FL são ambos hidrogénio, processa esse que compreende a dese-sterificação de um composto correspondente com a fórmula Cl) em que R,_ e R, são o D t? mesmo grupo alquila ou fenilo substituído faeuliativamenta„ '

Os compostos do invento são potencialmente utiliçáveis no tratamento de infecções causadas por vírus, sm particular v.lru.3 e retrovírus ftDN.Exemplos de vírus AON incluem o vírus do herpes tais como os tipos 1 e 2 do herpes siínplex, vírus vari-cela—2pster? vírus Epstain_Barr e vírus de inclusão eitomegá-lica»Exemplos de retrovírus incluem lentivírus tais como vírus visna b o vírus do síndroma de imunudsficifncia adquirida humana {estirpes 1 e 2).

Os compostos podem também ser inihidores dos vírus tumorogénicos e/ou ser potencialmente uti1 içados no tratamento de doenças neoplásicas, isto ê do cancro.

Os compostos do invento podem ser formulados para utilização numa composição farmacêutica* Consequentemente, num outro as-pecta do invento, proporciona-se uma composição farmacêutica que compreende um composto com a fórmula. íl) ou um seu sal farmacêuticamente aceitável juntamente com um veículo ou axci-plente farmacêuticamente aceitável.

Uma composição que pode ser administrada pela via oral a seres humanos pode ser composta sob a forma de um xarope* comprimido ou cápsula» Quando a composição se -apresenta sob a forma de comprimidos pode ser usado qualquer veiculo farmacêutico apropriado para a formulação dessas composições sólidas» por exemplo estearato de magnésio» amido, lactose, glucose» arroz5 farinha e cal» A composição pode também apresentar-se sob a forma de uma cápsula ingerível, por exemplo de gelatina» para conter o composto, ou sob a forma de um xarope, uma solução ou uma suspensão» Veículos farmacêuticos líquidos apropriados incluem álcool etílico» glicerina, solução salina e água aos quais se pode adicionar agentes de aromatízação ou de coloração a fim de -formar xaropes» Os compostos podem também ser apresentados com um veiculo líquido estéril para injeeeão* A composição pode também ser formulada para aplicação tópica è pele ou aos olhos*

Para aplicação tópica á pela, a composição pode apresentar-se sob a forma de um creme, loçlo ou unguento» Estas formulações podem ser formulações convencionais bem conhecidas nesta técnica, por exemplo-, cosmo é decrilo em livros padrão sobre industria farmacêutica e cosmética, tal como Harry s Cosmético™ logy publicado por Leonard Hili Books e a British Pharm.acopaeia» A composição para aplicação aos alhos pode ser uma composição convencional de gotas para os olhos bem conhecida nesta técnica5 ou uma composição sob a forma de unguento*

De preferência, a composição deste invento apresenta-se sob a forma de unidade de dosagem ou sob qualquer outra forma que possa ser administrada numa dose simples* Uma unidade de dosagem apropriada pode conter ds 5A mg a i g de ingrediente activo» por exemplo 1ΘΘ a 5ΘΘ mg*

Essas doses podem ser administradas i a 4 vezes por dia ou. ínais usual mente 2 ou 3 vezes por dia* A dose eficaz do composto variará em geral entre Ι,Θ e 2Θ mg/kg do peso corporal por dia ou ma .is usual mente entre 2, © e 1© mg/kg por dia* NSo se verificaram quaisquer efeitos tóxicos não aceitáveis com os níveis de dosagem descritos anteriormente* 0 invento também proporciona um método para o tratamento de infscçSss a vírus no animal humano ou não humano, o qual compreende a administração ao animal de uma quantidade não tóxica3 eficaz de um composto com a fórmula íl) ou de um seu sal f.armac's'u.ticamente aceitável * 0 invento também proporciona um composto com a fórmula Cl) ou um seu. sal farmacêuticaments aceitável para utilização como uma substância terapêutica activa, em particular para o tratamento de infscçSes a vírus»

Pensa-se também que os compostos do invento apresentam um efeito anti-virai sinergístico em conjunto com interferons? e produtos os combinação compreendendo estes dois componentes para

administração sequencial ou concomitante·, pelas mesmas ou difo ap?

Os e x empIos que se seguem ilustram o invent descrições que se seguem ilustram a 5*f P** CT; S 5·*“ !Z> r* Si f**t st £- í-/ w- : ^ w. w dos or intermediários„

Descrição í (Intermediário <V) para Exemplos 1-4) 2~Hirfrpxiet.il tiofnettlfosf anato ds distilo

Adicionou-se hidrato de sódio (1,5 g, 8®%, 5® mmol) fraccionadamenie a uma solução agitada, de tioetanol (3,9 g, 5® mmol) em teirahidrofurano seco (5® ml) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante ©,5 hora sendo então de há pouco molda e adicionou-se iodeto de potássio <®,,5 g, 3,® mmol), scaguindo-se dietilclorometilfosfonato (9,3 g, 5® mmol) em tetra-hitírof urano seco (25 ml) durante 5 minutos <reacção exotérmica, a temperatura subiu para 5®*C>= A mistura da reacçlo foi anilo agitada ε aquecida até 8® °C durante 18 horas. A rsacção arrefecida foi evaporada até à sscura in vácuo, e q resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre gel de sílica f azendo-ss? a eluiçSo com clorofórmio, a fim de dar origem ao composto do título sob a forma de um óleo (8.® q, 79%)§ nu (Película) ',· ' f»ã;i 338®, 298®, 29®®, 286®, 1475 e 144® cm"*-? S (CDCL^) 1,35 (6H, t, 3 7Hz, 2 x CH.^>, 2,8® C2H, d, 3 13Hz, PCH2S) , 2,87 C2H, t, J 5Hz, SCH.-.CK-,) . 3,8 (214, br s, CR_jOH> , 3,92 (IN, br s, Εν,Ο permutável, OH), 4,2 (4H, m, 2 x CH^OP), (Encontrados: C, 35,43: H, 7,64%, MH’1' NH^ Cl 229. C7H1704PS.0»5H70 requere C, 35,46| H, 7,64%, M* 228).

Descrição 2 (Intermediário (II) para Exemplos 1 s 2> a) t.ox i f t a 1 i mid a

Adicionou-se azodicarboxilato de distilo (3,8 g, 22 mfflol) a uma soluçlo agitada ds 2-hidroxietiltiometilfosfonato de dietilo (4,5 g, 2® mmol), N-hidroxiftalimida <3,26 g, 2® mmol) e cri.renx 1 tosfina (5,78 g, 22 mmol) em dimetilformamida seca (5®

ml) a @?50C„ A mistura foi então agitada à temperatura ambiente durante 18 horas» 0 solvente foi removido in vacuo e d resíduo

foi dissolvido em Éter dietilico (75 ml) e arrefecido até e~-5*C durante 5 horas» 0 sólida foi separada por filtração ε o filtrado foi evaporada até à secura in. vácuosendo o resíduo purificado por cromatografia de coluna sobre gel de sílica fazendo-se a eluiçlo com éter dietilico». para dar origem ao composto da título (5,3 q, 71%) sob a forma de um óleo claros nu (Película) 297Θ,, .. max 292®5 29005 Í730s 146® e 1435 ca»'" $ $ CCDC1„> 1,35 Í6H, t? ,7 7Hz, 2 κ CH^)5 2s85 (2H, d, J 13Hz, PCH^S), 3,13 <2H, t, J 6,5Hz, OLS), 4520 (4H5 a», 2 x CH^P), 4,42 Í2H, t, J 6,5Hz, CH^ON), 7580 C4H, m, Ar) CEncontradosíM' 373,075! C^H^NO^SP requere r! * 373,0749> „ b> 2-AminooKietiltiometiifosfonato de distilo

Adicionou-se metil nidrazxna <0,56 g, 12 mmal) a urna solução de N—Í2—distiloxifosforilsnetiltio)etoxiftalimida <3,® q, 8 mmolí em diclorometana seco a. 0-5C!C,; A mistura foi agitada durante 2 horas, sendo então filtrada, e o solvente foi evaporado in vácuo» 0 resídua foi purificado por cromatograf ia -sobre gel de sílica fazendo-se a eluição com -acetato de eti los metanol (97 s3> para dar origem ao composto do título sob a forma de um óleo (1,6 g, 84%>s nu (película) 3460,3300, 298®, 2890, 159®, 147®,

1440, 1385, e 1365 cm'1; S rcD3J2S03 1?24 tj J 6?5^z? 2 K CH3), 2,83 (2H, t, J 6,5Hz, CH^) , 2,90 <2H, d, ã 13Hz PCrLS), 3,69 (2H;, t, 3 6,5Hz, CH20NH2>, 4,03 (4H, m 2 x CH20P), 6,Θ (2H, br»s Dz0 permutável, ΝΗ2>. (Encontrados* C, 34,95; Η, 7,4® | U, 5,63% C7H1BN04PS requere C, 34,56| H, 7,45? N, 5,76%)» *·- ^ / \ ο 4-C1 oro-6-L,12rdietD.x i f. ρΜϊΤΟΙεΜ ij t. io >,e.t oxil^, aminp"-2 5-~rfif ormamidopirimidina

Uma solução de 2-aminoov.ietiltiometiIfosf anato de distilo (1,6 g, 6,6 mmol), 4,6-dicloro—2,5—diformamidopirimidina (1,54 q 5 6 = 5 Uol) e diísopropi lati lamina (1,7 g, 13 m/nol) ant diglima. seca (1® ml > foi aquecida até 1@®*C durante 2,5 horas» A reacção arrefecida foi então filtrada e o solvente foi evaporado in vácuo, sendo o resíduo purificado por eromatografia de coluna sol:>re gsl ds sílica fazendo-se a eluiçSo com diclorometariosmeta-nol (97s3) para dar origem ao composto do título sob a forma de um éleo amarelo.. (6 = 9 g, 3®% , nu (MeOH) 226 e 2B7 irim (€ 975® e ! · iHâíí 12656)j nu____ (Película) 32®®, 297®, 292®, 17®®, 169®, 1585, 1475 e 1415 επΓ~§ §u ECD-J^SDj 1,23 (6H, t, J 6,5Hs, 2 x CH„> , 2,9 ri o 2.'. * * o <4H, m, PCH2S e CH2S>, 4,® (6H, m 2 x CH^OP s CH,QN), 8,14 Í1H, s, ONH), 9,26 QH, br.s, CHO>, 9,4 (1H, br.s, permutável NH), 1 ® ? 8 <2H, m, Do0 permutável NH * CHO)= (Encontrados; M‘, 4415®633« C1 ~H«-1N*.0^SPC1 requere M+ 441,®639).

Descrição 3 í intermediária (v) para Exemplos 5--9) > Íj. 3r^Ãbenz iloKipropan-2-ρκ i-1 r i f 1 uor ometanessul f onato

Uma solução de 1,3-dibenziloxipropanol (5=4 g, 2® mmol) s imeti 1 aoimopirxdina (3,® g, 2® mmol) ess diclorometsno seco foi tratada com anidrido trifluorometanessulfónico (6,7 g, 24 mmol) a ®-5°C« A mistura foi. agitada durante i hora sendo então lavada com agua fria, seca (MgSO^), filtrada, e sendo o solvente ©vaporado in vácuo= O resíduo foi purificado por eromatografia ds coluna sobre gel ds sílica, usando acetato de etiloshexano (5®s5® cama eluente, para dar origem ao composto do titulo sob a forma de um óleo claro (6,6 g, 82,51) ç (película), 3®9®, 3®é®, 3®2®, 287®, 161®, 159®, 150®, 1455, 141® eflf1? £H (CDCl^) 3,65 ϊ

ί4Η, d, J 7Hz , 2 X oC-i-L) 4,5 <4H;i s, PhCR,) , 5,1 <1H, quintet J 7Hz, CH) ρ 7»3 (1ΘΗ, si5 ArH), b) 1„5-D1henzi1oxipr opan—2—tismsti1fosfcriato de dietilo..

Uma solução de dietilmetilfasfanata (1,1 g, 6 mmol) em tatrabidrofurano sscd (20 ml) foi tratada com hidrato de sódio (0,15 g, 6,25 mraal) a 0-5 °C agitada durante 1 hora à temperatura ambiente» A solução foi então arrefecida até 0-5*0 e tratada com uma saiuçãe< de 1,3-dihenzi 1 oxipropan-2-oxi—triflucrometanessu 1 fo-

nata (2,65 g, 6,5 mmol) em tetrabidrofurano seco (10 ml)» A mistura da reacção foi então agitada à temperatura ambiente durante 3 horas» 0 solvente foi removido in vacao e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica, usando acetato de etiloshexano (60540), para dar origem ao composto do título sob a forma de um óleo incolor (1,9 q» 74%) § nu. (Pelí™ max cuia) 306©, 3015, 2980, 2905, 2860, 1960, 1875, 1810, 1605, 1590, 1495, 1475, 1450, 1390, e 1365 cnf1 * $u (CDC1T) 1,3 Í6H, t, J 7Hz, 2 x CH,.}, 2,85 (2H, d, Ú 13Hz, PCH^S), 3,4 (1H, m, CH), 3,7 C4H, d, J 7Hz, 2 κ CHJ3), 4,15 C4H, m, 2 x CH„), 4,5 <4H, 5, Cí-LPh) 5 e 7,3 Í10H, m, Ar H) íEncontradoss C, 60,41¾ H, 7,33%« OsrrPS requere C, 60,25,¾ H, 7,12%)» ,L^ziabjJ.02i<j^Eggmr2"-tiometi,lfPsfonato de dietilo

Uma solução de í,3—dibenziloxiprapan-2-tiometilfasfana-to de dietilo (1,5 g, 3,4 mmol) em metanol (20 ml) foi tratada com cloreto de hidrogénio metanólico (0,5 ml) e hidroqenada a 8=1=P» sobre 10% de paládio sobre carvão (1,7 g> atê cessar a libertação de hidrogénio (libertação de 122 ml H.-, + 36 ml de cataiisadar)» A mistura da reacção foi. filtrada e o solvente foi evaporado in vácuo» 0 resíduo foi purificado por eromatografia de coluna sobre sílica utilizando diclorometanosmetanol <95s5) como

eluenta para dar origem ao composto do título sob a forma de um óleo incolor (0,7 o, 80%)¾ nu = (Película) 34®θ= 299®,, 294Θ? ma κ __ f 28803 10503 14725 1445, 132® e 139Θ cn» " 5 *H C(CD)^SD1 1,24 <6H, t, J 7Hz 2 x CH.-), 2,9 <2H, d, J 13Hz PCH2S) , 2,91 Í1H, m, CH), 336 í4-H3 íu3 2 κ CH,7OH) , 4,® (4HS m, 2 x CH^> , 4,7 (2H? t, J 5,5Hz - JL 4. D^Q permutável 2 κ OH) (Encontradoss U, -56=-59 = H, / ,òõ%;; MH , 259 = Θ766Π CpHqQbPS requere C, 37,2β§ H, 7,417.§ Mif, 259 = 0769) = d> lrrft.ce.tg κ i-3- hidroxip ropan - 2-1 i orne t i_ 1 f osf 00 ato _de dietilo

Uma soluçSo de 1s3~dihidroxipropan-2-tiometilfosfanato de dietilo (2,1 g, 831 mmolí em tetrahidrofurano seco (3® ml> foi tratada com ortoformato de dietilo <3,7 g, 3# mmol) e ácido p-talusnessulfónico (9,2 q , 1 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. Adicionou-se, ácido clorídrico 5M (5 gotas) e a agitação foi mantida durante mais 2Θ minutos, 0 solvente foi evaporado in_ vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre si 1íca, usando clorofórmio como eluente, para dar origem ao composto da titulo sob s. forma de um óleo incolor (1,8 g, 75%) j nu„u (Película) 34ΘΘ, 2980, 2930 = 1740? 144Θ3 13805 e 1240 cm *5 5H C(CD?)^SQ1 1,24 <6H, t, J 7Hz, •J» jÍ * 2 x CH^), 230 (3H5 s, CH-,-), 2,95 C2H, ds J 13, PCH„S), 3,2 <1H, m, CH), 3 = 6 <2H, m, CH20H), 4,1 <4H'S ffl5 2 x CH0>, 4,2 <2H, m, CH-sOAc) 4,9 í1H3 t, J 5,5Hz permutável com 0.-,0, OH), Encontrados =: C, 39,39:1 H, 7,23%= Ο^Η^,Ο^ΡΒ requere C, 4Θ,ΘΘ| H, 7,057.) «

Descriçgg 4 (Intermediário (V) para Exemplos 12 e 13) a} i£>l±^eDZj.Lg.«i=3=±=by± ildif enilsi 1 i loKipropan-2-ol

Uma so1ução de (8)--1-ben z i1osi-3-t-buti1di feni1si Ii1o-xiρropan-2-α1 (5 g, 11,9 mmol), trifenilfosfina (3,93 g, 15 mmol)

e ácida fár-tnica (Φ?7 g, 0,57 ml „ 15,2 mmol) em tstrahídrafurano seco (50 ml) foi arrefecida até Φ a 5°C e tratada com uma solução de azodicarboíiilato de distilo (2.)61 g, 2=35 mi, 15 mmol) em tetrahidrofura.no seco (15 ml 5 = ft solução foi agitada durante a. noite à temperatura ambiente sendo então tratada com 35% de amónia aquosa para levar o pH até 11 (5 ml). A solução foi agitada durante a noite e o solvente foi evaporado in vácuo e purificado por cromatografia de coluna sobre sílica, fazendo-se a eluição com 5% de acetona em hsxano (rendimento 4,7 g)Foi detestada em lH RMN uma pequena quantidade (5%) de material re-arranjado (resultante da migração de si li lo para o grupo hidroxilo secundário)» A mistura foi dissolvida em tetrahidrofu-rano seco (3 ml) s adicionou-se imidazole (Θ,07 6 g,· 1, i mmol). A mistura foi então tratada cdír cloreto de t-fautiidifenilsililo (Θ, 3 g ;I 151 mmol) e -agitada â temperatura ambiente durante 3 horas» 0 solvente foi evaporados o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica, fazendo-se a eluição com hexano/acetato de stilo (9Θ= 10) pairai dar origem ao composto do título sob a forma de um óleo incolor (4,2 g, 84%)« nu____ (peli- cuia) 345Θ, 306Θ, 2920, 2860, 1470, 1450, 143Θ, 1390, 136® e 1110 cm""·1! ΧΗ RMNs $HE(00^),803 0,97 (9H, s, CH, κ 3), 3,45 C1H, m, CH de CH?), 3,85 CÍH, m, CH de CK7), 3,66 <2H, m, CH,) 3,77 Í1H, m, CH), 4,5 (1H, s, CH\,>, 4,85 (1H, d, J ~ 5Hz, D.-,Ο permutável, DH) , 7,25-7,5 C i1H, m, ArH), 7,7© C4H, m, ArH>» Encontrados? C, 74,16^ H, 7,57%? C^H-^O^Si requeres C, 74,24| H, 7,67%= MS. (70 ©V) m/2 421 (MH-1') s íaln2° =4- 1,9° (CHCU) . b) ÍB> Ρ» 1.5) -1 -hep z i 1 ο κ 1.--.5-1~ fau i i l d í f en i I ~s i 1 i i ο κ i pr opan-z- _Clfa^luorgmgtanessul f onato

Uma solução de ÍR) ou <b> —i-faenziloxi-j.-t-hutildifenil-siIi1oxipropan-2-o1 (4,2 g, 10 mmol) e 4-dimetilaminopiridina

(15,35 q, íí mmo 1) sm dicIarometapo seco (5Θ ml) foi tratada com anidrido trifluoromeiansssulfónico <3,í g, ií mmol) a 0-5°C« A mistura foi agitada durante 1 hora sendo então lavada com água fria (2 ii 50 fiil) e seca CMgBlLK Após filtração e evaporação in vácuo o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre gel da sílica,, facendo·—se a eluição com acetato ds etilo/hexano (5ií95) para dar origem ao composto do título -sob a forma de um óleo incolor <4,4 g, 80¾). nu_ , (película) 2956, 2935, 286β,

JL. ? *’ iifâ K 1253, 1181 e 1079 cm " § iH RMN CCDCU) 1,04 <9H, s, x 3), H ‘ o 3,74 (2H, d 5 J = 5Hz, CHo0>, 3,87 (2H, dd, J = 5 e 2Hz, CH,0), 453 (2H, s Ph CH.-J3) , 5,©4 (iH, m, CH) 7.25 - 7,8 U5H, m, ArH) p

OS jL

Cedi5^' " (CHU1 ) enantiómero— (a> = -4,8°, enantiómsro-íR) = * 5,4'-*. c > l"-B.engi.loKÍr3"t-butildif 2zÈAoM&tn±o$fmata... de. JR)ou CS) distilo

Uma solução de tiometllfosfonato de distilo (1,33 g, 7,2 mmol) em tetrah.idrofu.rano seco (5Θ ml) foi tratada com hidreto de sódio (0,175 g, 7,2 mmol) a 0-5° e agitada -à temperatura ambiente durante 1 hora» A solução foi então arrefecida até 0-5° b adicionou-se gota a gota durante 10 minutos uma solução de CR> ou (S) -1 -benzi 1 oxi-3-t-butiIdifeni 1 si 1 iloxipropan-2-trif 1 uo-~ rornstanessulfonato (4,0 g, 7,2 mmol) em tetrahitírofurano seco (24 ml), A mistura da reacçSo foi então agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido in vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica, fazendo-se a eluiçlo com acetato de atilo/hexano <2Θϊ80> para dar origem ao composta do título sob s forma ds um óleo incolor (2,8 99 ò6%>? numa)í (Película) 3967, ^2977, 2929, 2856, 1471, 1453, 1427, 1389,. 1361, 1253 e 1112 cm”1? $H (CDC1 _) 1,01 <9H, s, CH^ x 3), 1,29 (6H, t, J = 7Hz 2 x 2,75 (2H, dd, J - 13,5 e 2Hz, PCH2S), 3,24 (IH, m, CH), 3,78 (2H, ra, CH?), 3,9 C2H, m, CH2), 4,11 (4H, m, 2 x ' 4,53 <2H, s, P!iÇH2), 7,25 - 7,5

(11H ? ffi 5 ArH) 7 s 68 í 4H , m , ArH) . (hncon trados- s C63 ? 45 ρ H 7,447« 5 MS. C70eV> s fli/2 = 587 <MH+). C^H-^O^PSSi requere 0, 63,45s H, --*A 40· v-í 7338%) La(CHC1?) ensntiómero-<R> = +1,@3°ρ ervsn t icknero-íS> -- d> 3--t--ButiIdlfsnllsil.iIsKl~5-hidroHlprDean.--2- fcl orne til fpsfonato de. 1B.).....ou.......<S) ~diet.il q. A uma solução de benzIlDXÍ-3~t~butiIdifenilsiIiloxi~2~ -tiometi1fosfonato ds ÍR> ou (S5-distilo íi5l g, 1,8 mmol) em 95% de metanol/água (3Θ ml) adicionou-se 10% ds paládio sobre carbono (3 -g) sob uma atmosfera, de azoto. A mistura foi então hidroganada sob temperatura e pressão padrões até cessar a libertação de hidrogénio. A solução foi filtrada, s o solvente foi removido in vácuo. 0 resíduo foi então purificado por cromatogra-fia ds coluna sobre sílica., fazenda—se a. eluição com hsxano/ace— tato de etilo í 9Θ“10) para dar origem aos compostos do título sob a. forma, de óleos incolores. (® =,56 g? £-€>%} p nu (película) 340©, 293®3 28503 14703 1425. 1390, 124Θ s Ui® cnfS * (CDCl^J 1,©5 '9I-Ss s, CH^ x 3), 1.332 C6H3 t, J = 7Hz, CH_CH2 x 2) 2,75 <2HS m, PCH2S), 331 (1HS ffi, CH) .3 3575 - 4,0 (4H, m, CrU x 2) 4,1 <4H, em CH^CH-, >* 2)5 73 ~ 75 (óH? m, ArH) s 7«65 <4H3 m., ArH). (Encontrados s C, 57,98; H;i 6,97% CO4H^70C;PSSi_requeres C, 58,03ρ H, 735i%p MS í7Θ eV) s m/z ~ 497 (MH*) « CS 3^ (CHC1X> enantiámero--(R) = +8,5C:p enantióínero-(S) = -6.,9°.

COfltpPS 'Lo / g Bh R-,. --è Εκ „ Mo. i B EtO ϊ \ ; í h. ti O .-V i 1.-¾ t s 2 ! S-, Πϋ fí Π ~rt A EtO H Et 4 P. i-i HO * t l i H 5 G EtO CH^OH Et á U HO CHo0H H / A r 4. r* Ty CH^OAc jt. T“ *_ g- i. S H EtO CHo0H r· j- i- '7 A. HO L-n0Uh H X *C·’ .Λ, -0CHo“ !i!,. IMíà ii Θ —OQH._.~ Ma 1 ·"' HO U i :· G 13

CHrjijH Cf-UOH w isóatera--· (R) X õ il\ 0!” CS— í S )

Ejje.gLB.lQ.....1. íf qs f p r jj. me t i I . tj. ole to j<i 3.gy-5Q. in.a a) Uma solução ds 4-clora-ó-C (2—dietaxitosfarilmetil tio)stoxi3-amino-2,5~diformamidopirimidina ;Θ,9 q, 2,Θ mmol) em acetato de dietoximsti lo (2 ml) foi aquecida até 122 °C durante 2,3 horas» 0 resíduo foi dissolvido em metanol (5 ml>, tratado com solução de amónia (0,380, Iml) e deixada repousar durante 15 minutes à. temperatura ambiente» 0 solvente foi evaporado in vacuo e o resídua foi purificada par cromaiogrsfia de coluna sobre gel de sílica fazendo a eluição com diclorometanosmetanol (98;2) seguin— do-se cristalizaçSo a partir de éter dietílico/acstona para dar origem a 6~cloro-9-Ε<2-dIstoKi fosíori imeti1 tio)etoxi 3~2~formami-dopurina <0=8 g, 93%) sob a forma ds cristais incolores, p»f„ 74—5°Π§ " max (iisOH) 232, 255 e 292 nm (£ 10,454, 3556 e 41Θ3) , max <KBr> 3200, 3100, 2960, 29ΦΦ, 1685, 1600, 1S7Ô, 1500, 1473 e*1430

c«fAi «H t(CD_)2S03 1,23 (6H, t, 0 6,5Hz 2 κ CH^5, 3,0 (2H, d, J 13 Hz, PCH^S), 3,1 (2H, t, ã 6,5 Hz, CH„S), 4,® <4H, m, 2 κ CH20P), 4,6 (2H, t, J 6,5 Hz, CH^DN) 8,7 (1H, s, 8~H>, 9,4 Í1H, br.s, CHO) , 11,3 ílB, br.s, D.^O permutável MH) íEncontradoss C, 36,58? H, 4,51? N, 16,17%? H+ 423.0527, C H^N^PSCl requere C, 36,84? H, 4,52? N, 16,52%? fT 423,0533)» 28

h) uma solução de 6~cIoro~9~C2“(dietoKifosfQrilmetiltÍQ>etoxi3-··· 2-farmamidapurina (®,7 g, 1,65 ramal} em 8©% de ácido fórmisco (10 ml) foi aquecida a 80 °C durante 1,5 horas» A solução arrefecida foi evaporada in vácuo e o resíduo foi dissolvido em metanol, tratado com a,83© de amónia í1 ml> e deixada repousar durante 15 minutos à temperatura ambiente,. 0 solvente foi evaporado in vácuo s σ resíduo foi purificado por cromatografia sobre gel de sílica, fazendo-se a eluiçSo com tíiclorometanosmetanol (95=5), seguindo-~se cristalização a partir de metanol/água para dar origem ao composto do título sob a forma de cristais incolores <β?4 g, 64%), p„f, 190-91*05 gama (EtOH) 255 nm (€ 14,,391)¾ nu

max ní-B.K (KBr) 3320, 3150, 297®, 287®, 284®, 273®, 169®, 164®, 16®®, 157®, 153® e 147® cm-1 §H CÍCDT)^S03 1,23 (6H, t, J 7Hz, 2 κ CH^), 3,01 <2H, t, J 6,5 Hz, SCH„>, 3,03 (2H, d, J 13Hz PCH^S), 4,63 <4H, m, 2 x CH.-,ΟΡ) , 4,5 (2H, t, 3 6,5Hz, CH20N>, 6,6 Í2H, br.s, D„0 permutável NH.-J » 7,9 C1H, s, 8-H) , 1®,6 (1H, br.B, D._,0 permutável WH), (Encontradoss C, 37,41, H, 5,22ρ N, 18,29%, m/z (iioglice-rol) 378 (MH* 16®%)» C^R^N^-SP. 0,5H,O requere C, 37,3®s H, 5,40.5 N, 18,12%).,

Exemplo 2 2rJ£mímmetiltia..) e t o X13 q uan i n a Méstio-J,

Adicionou-se brometo de trimetilsililo (1,62 q, 10,6 ffiflíol) a uma solução de 9—C2—(dietoxifosforilínetii tio)etoxi3guani — na (0,4 g, 1,66 ramol) è. temperatura ambiente e a mistura da rsacção foi deixada repousar durante 3 horas» 0 solvente foi evaporada in. vácuo e o resíduo foi dissolvido em metanol, deixado repousar durante 5 minutos. 0 metanoI foi evaporado in. vácuo e α resíduo foi solidificado e cristalizado a partir de água para dar origem ao composto do título sob a forma de cristais incolores ίθ,®8 q , 23%) p« f« 253-3°C5 gama CEtOH) 255 niti C€ 11,857)? max nu CKBr > 3310, 3120, 2900, 2740, 1745, 1705, 1660, 1630, 1550, 147®, e 141® cm"1? S,,E ÍCD-,>„S03' 2,7 <2H, d, J J3Hz PCH^S), 3,® η O ‘ ' i Í2H, t, α 6,5Hz, CH.-J3), 4,4 (2H, t, ã 6,6Hz, CO-.ON) , 6,6 ΐ2H, br.s, D^O permutável MH) (Encontrados? C, 30,23? Η, 3,96? M, 21,63%. CgH^N.-OgSP requere C, 29,9θρ Η, 3,76? N, 21,8®%). Método 2 a) Uma soluçSo de 2—di—t—butoxicarbonílamino—9-hitíroxi—6-meto— xipurina í®35 g3 1,3 mmol), 2-h.idroxietiltiometilfosfonato de distilo (Θ,3 g,, 1,3 mmol) s. trifsnilfosf ina C©,37 g, 1,4 mmol) em tetrshidrofurano seco (2Θ m1) foi arrefecida até 0-5°C e tratada com azodicarboxilato de distilo C®s25 g, 1,4 mmol). A mistura da rsacçSo foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 solvente foi removido in_ vácuo s o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre gel de sílica fazendo-se a eluiçlo com acetato de etilo para dar origem a 9-C(2-dietoxifosforilme-ti 1tio)etoxi3—2—di-t-butoxicarbonil-6—metoxipurina sob a forma de uma goma (0,51 g, 65%) ? nu_ (Película) 296®, 2899, 285®, 179®,

1760, 169®, 147®, 139® e 1365 cnfS S.t C<CD^)„S03 1,22 (6H, t, J S i v> 7Hz 2 x CH-,>, 1,4 U8H, s, 6 x CH_.), 3,® Í2H, d, J 13Hz PCH^S) , 3,®6 Í2H, t, J 7Hz CH2CH2S), 4,05 <4H, m, CtU QP>, 4,07 /3H,~ s, 8CH-J-) , 4,6 <2H,· t, J 7Hz 0CH^CH._S3 8,7 í 1H, S 8—H> (Encontradass C, 46,20p H, 6,56? N, 11,34%. C^H^NgO^SP requere C, 46,69? H, 6,47? N, 11,84%). h> lima solução de 9-C2-(dietoxifosforiImstiltia}etaKi32"di-t--foutoKicarbonilamino-ó-metoKipurina í © s 51 q „ 0,84 mraol) em diclorometano seca (10 ml) â temperatura ambiente foi tratada com brometo de trimstilsililo \2 ,57 g, 16,3 mmol) e a mistura foi agitada durante 3 horas a temperatura ambiente. 0 solvente fai removida in vácuo s o resíduo foi dissolvido em metanol r- evaporado até â secura e o resíduo foi cristalisada e. partir da água para dar origem ao composto do titulo (Φt2 g, 77%) p = f™ 253-55 £>;emolo 3 ^I^ÍM.^OMÃxasíor 1 lme. t i 11 í o) e toKt ladenina. a) Uma mistura de 9-hidroKi-è-f talimidopurina <Θ?5 g, 2,2 mmc3l > 3 2-hidrDÍiietiltiometilfosfonato de distilo í®?45 g, 2 mmol) e trifenilfosfina (©,52 g5 2 mmol) foi dissolvida em tetrahidro-furano seco (20 ml> e arrefecida até 0-5°C« Uma solução de asodicarboxilato de dietilo (0,348 g , 2,0 mmol) em tetrahidrofu— rano seco (10 ml) foi adicionada gota a gota com agitação., e depois da adição ficar completa a rsacção foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 solvente foi entSo removido in vscuo* e o resíduo foi purificada par craroatografia de coluna sobre sílica usando acetato de etilosmetanol (98s2) como eluente para dar origem a9-t 2--{dietoxifosforiIxneti 1 tio)etoxij-6-ftalimi-dopurina (0,45 g, 56%) sob a forma de um sólido branco após cristalização a partir de acetona/éter dietilico, p„f. 1 i5-116°C; gamamax (EtOH) 271 mm (€ 14Θ20) nuimM (KBr) 3100, 3®6βΡ 296®, 2900, 1780 5 1725, 1650, 1600» 158®, 1453, 1400, 1380, 1360, 1320, 1280, 124©, e 1200 cm"1? ECCD^l^SOl 1,25 (6H, t, J 7Hz 2 x CH3), 3,0 (2H, d, J 13Hz, F'CH?S>, 3,1 Í2H, t, 3 7Hz CH^D, 4,0 <4H? m, 2 x CH2>, 4,7 (2H, t, 3 7Hz, CH2S), 8,1 (4H, m, Ar H>, 9,0 (1H, 5j 2H>, 9,1 (1B, s, 8-H)» (Encontrados C, 48,65¾ H, 7 7 45551 Ν, 14., 25%) . 14,23%. C^H2^Ns0aPS requere C, 48,87§ H, 4,51? N, b) Uma solução ds 9--L2-(dietOKÍfosforilmetiltio)etOKÍ3~6-ftali- midopurina (0,56 g, 1=1 mmol) foi arrefecida até Θ~5°0 s tratada com N-rnstilhidrasina <@,B6 g, 1,8 mmol). A mistura foi agitada durante í hora, sendo então filtrada e o solventes foi removida in vácuo. D residuo foi purificado por cromatografia de coluna sobre gel de sílica, usando diclorometano:metanol í 97 s 3 > como eluente, para dar origem ao composto do título (0,3 gs 75%) sob a forma de cristais incolores após cristalisacrão a partir da acetona, p.f. 93-95°Cs qama <MeOH) 260 nm C€ 12670)i nu {KBr) 3360, 32ΒΦ, • - maK · raax

3140, 2995, 1685, 161Θ, 1570, 14B0, 1410, 1370, 1330, 1300 e 126® cm-1s 5,, [(CD^)oB0a 1,25 (6H, t, 3 8Hz 2 x CH,), 3,Θ (2H, d, J π ·-> .-i ‘ 13Hz PCH.-,S) , 3,1 .(2H, t, J 7Hz, CH^O) , 4,1 (4H, m, 2 x CH„) , 4,6 si ’ é. <2H, t, J 7Hz, CH.-,Β) , 7,4 (2H, br.s, permutável com Et,O, WH,,) , -«i. ai. 8,15 Í1H, s, Ξ-Η>, 8,4 (1H, s, B-H) (Encontradoss C, 39,84? H, 5,511 N, 19,267-5 M‘, 361 ..09S1. C_.^Η,,,,Ν^Ο^ΡΒ requere C, 39,885 H, 5,58? N, 19,38%? M+, 361,0974). gr:I2zlFgsf opomet i 1 ti p,) stox i 3 aden ina

Uma solução de 9-C2-(dieioxifosforilmeti1 tio)etoxi3ade~ nina (0.1 g, 0,27 fiimol > em d iclorometano seco è. temperatura ambiente foi tratada com bromotrimetilsilano Í0,46 g, 30 mmol) e deixada repousar durante 3 horas» 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvida em metanol e deixado repousar durante 5 minutos» 0 solvente foi removido in_ vácua e o resíduo foi cristalizado a partir de água para dar origem ao composto do título (0,06 g, 71%) sob a forma ds cristais incolores, p.f, 21 l~13°Cp nu__ (KBr) 3®ê®, 2960, 1695, 16ΘΘ, 1555,

147Θ, 1450, 14ΘΘ, 135® e 130® cm 1;í l(CB (,)^80^2,7 O» Z. <2H, d J 13Hz. PCI-US>, 3,1 (2H, t, J 6,5Hz = CH„0), 4,6 <2H, t. J 6,5Hs CH0S> , 7,4 Í2H, br u S* ç permutável com Ef-,0, MH,), 8,15 Í1H, s, 2-H), 8,4 (1H, s, 8—H ) . <Encontradoss C, 31,58? H, 3,29 g N,

23526%= CrH17M_04PS requere C, 3t,47f H, 3,96? N, 22,95%). EiiSfflS.ÍO-5 gHIJgHlidrQKi^^ietoKi f osf or i lmeti 1 tio) propQKÍ,.35ua.nina a) Uraa solução de 2-bis-t~butOMíesrboniiaffiina~9™hídraKi-6-~meio~ kí-purina (0,7 o, 1,8 mmol), 1 -~scetοκi~3~hidroκipropan-2~tΐ,ome~ tilfosfonato de distilo í ® g 55 g, i,8 ramal) e trifenilfosfina (0,,75 g, 2,-8 mmol) em tetrahidrof urano seco < 2® ml) foi arrefecida até 0-5*0 com asodicarboxilato de distilo <0,48 g, 2,75 mmal). A solução foi agitada durante a noite sendo então o solvente removido in vácuo. 0 resídua foi purificado por cromatografia. de coluna sobre sílica, usando acetato de etilo como eluente, para dar origem a 9-L3-scstoKÍ-2-(dietoxifosforiImsti1 tio)propoxij~2~ -di-t-butoKicarbonilamino-ò-metoKipurina sob a forma de um óleo amarela (1,0 g, 85%), qansa (EtOH) 256 nra <S 1241Θ)? nu • mâK · masí (Película) 3110, 299®, 294®, 1795, Í75®, 172®, lè®®3 1475, 146®, 14255 Í395 e 137Θ caf 8 C<CDT),S03 1,21 <6H, t, u 7 Hz 2 κ )(H.,r) 1,4 <18H, s, 6 s CH^j 2,03 Í3H, s, C0CH„)s 3,1 <2H, d, J 13Hz PCH^S), 3,6 <1H, m, CH), 4,Θ1 í4H, m, 2 K CH„), 4,07. C3H, s, 2. ' * * GCH.,) , 4,4 <2H, o? CH..?0Ac), 4,6 Í2H, ra, CH0). (Encontrados C, 47,25^ H5 6,37| N, 10,4®%« iPS requere C, 47,Φ5, H, 6,38, N, 10,55%), b) Uma solução de 9-E3--acetoKi-2~ídietoKifosforilmetiltio)prQ-ρο>ίi32~di—t—butoxicarbon.11 amino—6—metoxipurina (®,6 g, 0,9 mmol) em etanol foi tratada com 0,5 ml de ácido clorídrico 5N sendo

então aquecida sob refluxo durante 5 horas» A solução foi arretecida 5 neutralizada com resina AMBERLITE IR 240H, filtrada sendo o solvente removido in vácuo» 0 resíduo foi purificado por cromato— grafia de coluna sobre sílica, usando metanol sdicloromsta.no <2©s8ô) como eluenfce, seguindo-ss cristalização a partir de metanol/acetona para dar origem ao composto do título sob a forma de cristais incolores <Θ,15 a» 41"/», p.f» Í44-4é°C>s gama - - ' max (EtOH) 254 <€ 19.200), 265 nm <€ 16.150)? nu____ (KBr) 3326, 3160, 2980, 29205 2360, 223®, 1690, 1650, 1600, 1580, 1535, 1470, 1380, a 133Θ cm”1% Su tí CEM „803 1,25 C6H, t, J 7,0Hz 2 x CrU>, 3,0 í2H, d, J 13s7Hz = PChUS), 3,75 Í2H, m, CH2DH>, 4,1 <4B, m, 2 x CS-U>:! 4,4 <2H, m, 0CH2>, 5,Θ (1H, t, J = 5,5Hz, CH2CH), 6,6 <2H, br.s, permutável com D.-/0, Nl-L,) 7,9 <1H, s, 8---H), 10,6 <1H, br.s, permutável com .0.-,0, NH), m/z (f.a.b. + ião MoBA) 408 (MH'> (Encontradoss C, 37,93? H, 5,40? N, 17,22¾. Ο, ^Η.-,,-ΖΝ^Ο^ΡΒ requere C, 38,24? H, 5,44? N, 17,19%).

Exemplo 6 > proponi Iguan ina

Orna solução tíe 9— C3“hidraxi—2-í dietoxifosf ori Imeti 1--tio)propoKilguanina (0,15 g, 0,36 mmol) em dimeti1formamitía seca (2Θ ml) à temperatura ambiente, foi tratada com bromometilsilano (1 ml, 7,5 mmol) e a reacção foi agitada durante 3 horas. 0 solvente foi removido in. vacuo e o resíduo foi dissolvido em metanol (2Θ ml) e evaporado in. vacuo para dar origem s uma goma transparente. Esta foi purificada por cromatografia de coluna sobre sílica C-”' usando água como eluente, as fracçSes importantes foram concentradas in vacuo a o produto foi cristalizado a partir de água para dar origem ao composto do título (0,05 g, 4 i %), p.f. 201 -263°C 5 gama__K (H20 ) 253 nm <€ 13.140)? nu,_3V (KBr) 3300, 3130, 2900, 232Θ, 1710, 1640, 1590, 1450, & 137®

Í1H5 m, cm 'S Sw L(CD^)„SOj 2,75 C2H, dd? ã 14 e 2Hz PGH^Bl, 3,3 CH>, 3=7 C 2H, m, CH7D>, 4,4 C2H, m, CH.-J3H) , 6,6 C2H, br = s. permutável com D705 NH9), 7,9 (1H, s, 8“H) , 1®,7 CíH, br.,s. permutável com D„0, NH> m/z íf.a.b. + •li ião V5 t i og 1 i c ero 1) -όοΞ (Encontradoss 0, 30,ΦΘρ H, 4s19p N, 19, 49%. C9H14W5D6PS“ ©jbH,-=0 requere C, 30,771 H, 4,Θí f N, 1V, v3%5 =

EhsííípIo 7 ^"IS-ftgetGK ir.2nlo ietoitjjfpslorÃl^t i 11 io) grοροκ i 3 adenina a) Uma .mistura de 9-hidroxi-è-ftalimidopurina <0,53 g, 1,8 mmol) 5 distii“l~acetoKÍ“3--hidroKipuran-2~tiDmetiIfosíonato í®,56 y? i,8 mmol)= e trifenilfosfina (©,56 g, 2„1 mmol) em dimetilfor- mamids seca (2® ml) foi arrefecida até θ-5'-0 e tratada coai aecdicarbOKilato de distilo (©,,37 g5 2,1 mmol)= A rsacção foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas= sendo então o solvente removido in vácuo, 0 residuo foi purificado por cromato- grafia de coluna em sílica usando acetato de etilo e em seguida acetato de etilosmetanol s 95s5, para dar origem a 9 -· Γ. 3 -- a c e t o x i - 2 --- -- (dietoK if osf ori Imeti 1 tio) ρτοροκΐ 3-6-f tal imidopurina sob a f orma de um óleo amarelo (0,7 g, 7Θ73=: qama íEtOH) 271 nm (€ • ma;·; 14=815)5nu (Película) 3580, 3450, 3100, 3050, 297®, 2920, 179®, 1730a 1595, 1575, 145®, 14®© e 13©© cm"1* E(CD,)„S03 tí O·

1322 <6H, t, J 7Hz, 2 >í CH^), 2,1 í3H, s, CH^CO), 3,2 (2H, dd, J ·—* ·_* 14 e 2HZ, PCH^S), 3,7 <1H, ai, CK) , 4,1 (4H, *11, 2 κ CHO , 4,5 (2H ms CH20)s 4,75 (2H, m, CRgPAe), 8,1 (4H, m, ArH) 9,© UH, s 2-H), 9,1 í ÍH, s, 8-H)„ <Encontradoss C, 49,21? H, 4,93? N 12,24% 5 if% 563=1267= C^R^N^O^PS requere C, 49,©25 H, 4,65? N 12,43%ί M? 563,124©) =

b> Uma solução de 9~ C3-acstox±--2-< d is toxiforf arilmst.il tio) pra~ poxi3-~6~-f talimidopurina (©,7 g, 1,24 mmol) em dicloromeiano foi arrefecida até ©-5^0 e tratada com N-me t i 1 h i d r a z i π a (© , ©85 g, 1584 mmol). A solução foi agitada 2 horas, filtrada, e o solvente foi evaporado in vácuo,, 0 resíduo foi purificado por cramatogra-· fia de colunai sobre sílica, para dar origem a 9~E3~acsioKi-2-Cdie-~ toxifosdoriliiietiltio)propoMi]é--ftalimidopurina < © r, 4 g, 75%) sob a formai de uma qoma incolor? qama (ΕΤοΗ) 260 nm <€ 13.820)? • " max nu (Película) 3330, 3190, 2990, 2910. 1745, 1640, 1600, 1470, max * _, · Í4505 1412, 1390. s 133© cm ECCD^SOJ 1,2 ÍÓH, t, J 7Hz 2 x CH^Í, 2,1 <3H, s, CHT>, 2,1 <3H, s, CH^CO), 3,1 <2H, d, J 13ç5Bz, PCH.~,S), 3,6 UH, m, CH), 4,0 (4H, m, 2 x CR-,) , 4,4 <2H, m, CH„0), 4,6 (2H, m, CH._OAc), 7,4 C2H, hr.,s, permutável com D_Q„ NH.-,) 8,1 (1H, s, 2~H>, 8,4 <1H, s, 8-H) (Encontradoss C, 41,07¾ H, 5,72? N, 15,67%, K+, 433=1196, C^H^R-thPS requere C, 41,56¾ H, 5,58, N, 16,167.| 433,1185).

iumalo-Q

Vz^3dlÍiÍQ3>LÍr^r:..( dijs tox i fosfori 1 me t il t ia) p.ropox i 3 arisn ina

Uma solução de 9-C3-acetoxi—2-í dietoxif osforilmeti 1--tio)prapoxi3adenina (0,4 g, 0,92 mmol) em etanol (1® ml> foi tratada com solução de ácido clorídrico 511 (0,4 ml, 2,0 mmol) e aquecida sob refluxo durante 5 horas. A solução arrefecida foi neutralizada com resina AHB-ERLITE IR 45 OH s a solução foi filtrada e evaporada iJl vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica, usando clorofórmiosmetanal-(85s5) como eluente, para dar origem ao composto do título (0,3 q, 83%) sob a forma de uma goma incolor| ga(Bam=v CEtOH) 26© nm <€ 13=700)¾ numaK (Película) 3320, 3180, 2970, 2800, 1649, 1590,

1460, 1405, 1386, 132Θ a 129© cm” A? é?„ C(80-.)^803 1=2 <6H, t, J 7Hs, 2 x CH3), 3,i (2H, d, J 13,5Hz, PCH2S(, 3,7 (1H, m, CH ou "V-S.;

CR-, ΟΗ) 5 3,9 QH, m, CH de CH^OH), 4,0 Í4H, m, 2 x CH^), 4,6 (2H a, CHV,0), 5,2 UH,t, J 5,5Hz, permutável com D^O, OH), 7,4 <2H, br»s, permutável com D.-,ϋ, NH.-j , 8,2 (1H, s, 2H) , 8,4 <1H, s, 8—H)| (Encontrados C, 38,7β, H, 5,75, N, 18,00%¾ M* 391,1082= C^H^N^O^PS requere C, 39?9β5 H, 5,66, N, 17,90%? rf 391,1079) . E>y5mplo_9 9r^dj.idrQK.Ír.2r..t _f. gsf onometi 1 tio) proppKlladgnlpa

Uma solução de 9-C3—hidroxi—2-ídietoxifosforiImsti1~ t j.o) propOKÍ 1-adenina (0,265 g, 0,67 mmol > em diclorometa.no seco (20 ml) foi. tratada com faromotrimetilsilano (1,53 q, ίθ mmol) â temperatura ambiente e foi deixada repousar durante ò horas» O solvente foi removido sab pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em metanol, antes de ser deixado repousar durante 5 minutos = A solução foi evaporada até á secura sota pressão reduzida, re-dissolvida em metanol, neutralizada com resina AMBERLITE IR 45 OH s filtrada e evaporada in vácuo,, 0 resíduo foi cristalizado a partir de água para dar origem ao composto do título <180 mg, 8=0%) sob a forma ds cristais incolores, p„ f „ i95—97°C« gama (H„0) 26Θ nm í€ 14=060) nu (KBr) 3320- 3Í10- 2920- í»aítísk · *

172Θ, 1595, 1556, 1496, 1466, 1405, 1346 e 1300 cm"1? S CÍCD3)2S03 2,70 (2H, d, J 13Hz, PCH2S), 3,3 Í1H, m, CH), 3,7 <1H, m5 CH da CH2QH) , 3,8 <1H, m, CH de CH._.OH) , 4,6 <2H, m, CH^O) , 7,6 Í2H, br s5 permutável com D20, NH,), 8,2 CiH, s, 2-H), 8,46 <1H, s, 8—H)= >/ -ν' t&SBalgLlÃ

?- L (2-Híd TDK ΐ·-2“-σκο·-1„ 4.,2-0 xa t ia f os for i nanr^il.) joetoxi 2=. ãÊmÀLMLz-^ãã^âSL^éâiR

Uma solução de 9-E3~hidroKÍ~2-<fosfonometiltio)propo-xiladenins <θ,2 q, β.,59 mmol) e N?N-diciclahaKÍl-4“-morfQlinoc:ar-boxamidina < ® , 175 g , 0,59 mmol) em 7-butanoságua 50s50 (3® ml) foi aquecida até refluxo suave.. Adicionou-se então gota a gota durante 0,5 hora uma solução de N, M~ d i c i c X o be κ i 1 c ar ood i i m i d a (0,615 g5 2,98 mrool) em t-butanol (13 ml) e dimetilformamida <2 ml). A mistura da reacção foi então aquecida e agitada durante mais 5,5 horas. A mistura da reacção arrefecida foi então evaporada in vacuo e o resíduo foi dissolvido em água e filtrado. 0 filtrado foi evaporado in_ vacuo e o resíduo foi purificado por cromatogrsfia de coluna sobre Sephadex (DEAE, forma HCD..,.), fazendo-se a eluiçao com um gradiente linear de tampão carbonato de irietilamónio C©,©©!-© ,21-1) i foram recolhidas fracçSas de 15 ml e as fracções 36-42 foram reunidas e evaporadas in vacuo. 0 resídua foi co—evaporado com etanol (2® ml) até não se poder detectar qualquer vestígio de trietilamina (3 x), sendo o resíduo ,.v dissolvido em água e tratado com resina Dowsx 50 XA (forma Na') para dar origem ao sal de sódio» Após filtração o solvente foi concentrado in. vacuo e liofilizada para dar origem ao composto do titulo sob a forma de um pó incolor (0,140 g, 69%), p*f„>300°C; gamamaK (H20< 260,4 nm (14.350) ; nulj(JíV ÍKBr) 3200, 2950, 2895, 17Θ0, 161Θ, 1470, 1415, 1340, 1305 e 1190 csifSlt l(CD_US03

f"! zD 2,60 (1H, t, J * 15,4Hz, H da PCH^S), 3,02 <ÍH, dd, J * 11,2 e 10,2Hz, H de PCH2S), 4,5-4,75 (4H, ffl, 0CH2 e OCH^CH) , 7,46 <2H, 3,26; N, 5, D20 permutável NH.-J, 8,16 <1H, s,' 2-H>, 8,44 C1H, s, 8--H) , m/z (FAB + ião ve, tioglicerol), 340 (MH5) (Encontrados; C, 32,22? H, 3,49? M, 20,31% CQH.jM^O^PSMA requeres C, 31,86; H, 26,64%).

Sal de sódio de 9-C (2~hidroxi~2~Qxo-l,4,2-oxatiafoMprioan~5~il)- matQKiIguanina

Uma solução de 9~lC3-hidroxi-2-<fosfonometlltiolpropo-xilguanina <0,2 g, @,56 mmol > e NsM“dicicloheííil-4~morfolinocar~ boxamidina <0,165 g, ¢3,56 mmol > em t—butanol ságua 50s50, foi aquecida até refluxo suave, Adicionou-se então gota a gota durante 0,5 hora uma solução de N,Ki~d i c i c 1 d he κ i 1 c a r bod i i m i d -a <0,58 g, 2,8 fliiTíOl) em t-butanol <13 ml) e dimetilformamida (2 ml). A mistura foi então agitada e aquecida sdurante mais 5,5 horas, A reaeção arrefecida foi evaporada in. vácuo e o resíduo foi dissolvido em égua e filtrado, 0 filtrado foi evaporado in vácuo e o resíduo foi purificado por cromatoarafia de coluna sobra DEAE Sephadex <HCO fazendo—se a eluição cam um gradiente linear de tampão carbonata de tristilamónia <0,061 - #,2511} ? foram recolhidas fracções de 15 ml , e as fracçSes 35-48 foram reunidas e evaporadas até -à secura in. vácuo, 0 resíduo foi co—evaporado com etanol <2# ml) até não se deteciar qualquer porção vestigial de tristiiamina <3 x) sendo então dissolvido em água (25 ml 5 e tratado com resina Dowex 5ΘΧΑ (forma Ma'’’5 para dar origem ao sal de sódio. Após filtração o solvente foi concentrado ML vácuo, de acordo com o composto do título sob a forma de sais incolores <0,156 g, 74%), pcf„ >300°C| gama CK-,0) 253,5 e 266 nm <957® e 761Θ) $ nu___ ÍKBr> 3396, 17##, 1610, 1466=, 137Θ, Í21#, ^ lt?C\ Λ .... e 1170 cm "p SR ECCD^SOj 2,16 C1H, t, J ~ 14Hz, H de PCH0S>, 2,6 < 1H, dd, J = 14 e 14Hz, H de PCH2&>, 2,85 UH, m, CHS), 4,35-4,/ <4H, ffi, OCH^ e 0CH.7CH) , 7,95 C1H, s, 8—H>p m/z íFAB ·*· ião vs tioglicerol) ? 356 Íflr-Γ) (Encantradoss C, 28,48? H, 3,67? N, 18,44%« CfHiiwg05 PSIMa. 1,5H20 requeres C, 28,27p H, 3,66? W, 18,32%)

(R) ou (8)~?~ C.3-Hid,ro.Kl"2"_<fosfonometi11io)-prpgoM..Myanina a) Uma solução de 2~t~butaMÍcsrhonilamino-9~hidraKi~6~metOíd.pu---rina <®?39 g, 1,Ô2 mmol >, ÍR>- ou CB>-dietiI~3~-t~butildifeniIsi·- l. llGí\i-l~hidro>iipropans-2-tio5ãstl 1 f os tona to (0,5 g, 1,0 mmol) s trifenilfosfina <0,32 g, 1,22 mmol) em tetrahídrofurano seco <2© ml) foi arrefecida até ®-50C, e adicionou-se uma solução ds azodicarboKilato de distilo <0,21 g, 1,2 mmol) em tetrahidrofura— no seco. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas, sendo então o solvente evaporado in_ vácuo e o resíduo purificada por cromatagrafia de coluna sobre sílica, fazendo-se a eluição com acetato de etilo/hexano í3®s7$> para dar origem a CR) ou < S / 9- C 3—t - bu t i 1 d i f en i 1 s i 1 i 1 o >í i - 2- < d i e to?; i f as f o r i 1 me t i 11 i o) - propoKÍ.3 di-t-butoKicarbonilamino-è-metoKipurina sob a forma ds um óleo amarelo claro (0,5 q, 587)= nu (Película). 3070, 2980, 2930, 2860, 1795, 1760, 159®, 1470, 1425, 139®, 1365, e 125® cm~li *H RMN $H CCDCI.^) 1,06 C9H, s, CH^ x 3), 1,3 <6H, t, J = 7Hz, CH_CH2k2>, 1,43 (18H, s, CH^ κ 6), 2,75 C2H, m, PCH^S), 3,5 (1H, m, CH), 3,9 ~ 4,2 i9H, m, CH^Ca, «2 + DCPU + CH^> 4,7 (2H, m, CH2>, 7,3 - 7,5 (6H, m, ArH, 7,6 - 7,7 Í4H, m, ArH), 8,® C1H, s, 8-H)« (Encontrados;: C, 55,36? H, 6,865 N, 8,11% = C40H58N5Q10PSSi C, 55,861? H, 6,795 N, 8,14%), C«ln25 snetióinera-íR) = *· l,8°| enetiémero—íS) = ~i52°| MS« (7® sv) s m/z = 86® (MH*) . b} < r >~ ou (S)—9-C3—t—bufcildifenilsililoxi-2-CdietoKifosforil-meti 11io) propoM i 3 d i-t-buia>; icarbon i lamino-6—metox i pu riria (®, 45 g,, ®,52 mmol) foi adicionada a uma mistura de água (1,5 ml) e ácido trifluoroacático (4,5 ml), s a mistura foi agitada à temperatura smoissnte durante -5 horas, ft solução foi então tratada com solução de amónia etanélica para levar o pH até 11» A solução foi 40 - 40 - smtraída com clorofórmio (_.

~Η.·τ $ m - 'Λ--. . . ;< 50 ml) e as camadas' orgânicas foram combinadas e secas (ngBO^),, Após filtração s evaporação in vácuo o resíduo foi purificado por cromãtografia de coluna sobre sílica3 fazendo-se a eluiçSo com clorofórmio = metanol (95x5) para dar origem a CR> ou CS>-2~AíBino-9-i2~Cdietoxifosforilmeiiltio)-3--hidroxipropil1-6-ffisioxipurIna sob a forma de uma goma incolor (0,16 q, 72%). nu (película) 3340, 3220, 312Θ, 298®, 162®,

15853 1500p 1480, 1450* 1390* 133Θ e 126® cm"11 *H RliN Γ.<CD)-/303 1,22 Í6H, t, J 6Hzs GH^ x 2) 3,06 (2H, d5 j = 12,5Hz, PCÍ-Í-.S), 3,35 {1H, ffl, CH de CH,) , 3,66 (1H, ffl5 CH de CH,), 3,8 <1H, ffi, CH)? 3,96 <3H, s, OCH^i, 4,®2 <4H, m, CH,x2), 4,46 (2H, m, CH,), 5 , 06 (iH, t, õ = 5,5Hz, D,D permutável OH), 6,6 (2H, brs, D.-t0 permutável NH'^), 8,1 <1H, s, 8-H)s íEncontrados? C, ώ 4. ‘ * 383031 H, 5,7®? U, 15,89%= C, «H^N^O^PS (®,5 H,0) requere? C, 39, ®6 % Η, 5,8Θ? N, 16,24%? MS, (7® eV) s m/z = 422 (MH'1')? Cctl^ CCHCl,) enantiómero—(S> = -5-1,8°? enantiómera— CR) - -1,3°, c) Uma solução de (R>~ du CS)-2~aminD~9~E2-(bietoxífosforiime-ti!tio)--3~hidroxipropil3-6-flietoMi--purina <€>,14 g, €5,33 mmol) em diclorometano seco (20 ml) foi tratada com bromotrimstilsilano C®, 86 ml, 1,0 g, 6,5 mmol) e a solução foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 4 horas, 0 solvente foi evaporado in vacuo s o resíduo foi então purificado usando cromatografia com Sephadsx, fazendo—se a eluição com um gradiente linear de tampão carbonato de trietilamónio C©,Θ© 1 — 0,6!1) seguindo—se cristalização s partir de metanolságua í95s5), para dar origem ao composto do titulo sob a forma de cristais incolores <©,1®5 g, 9®%)= p0f= >30®°C? gamamax (H20) 254 nm (12,563)? ÍKBr) 3320, 314ê, 172®, 164®, 160®, 1460, 139®, s 1370c«f1 | lH RMN Su CÍCD^)^S03 2,75 (2H, dd, J = 13,5 e 2HZ, PCH28), 3,3 ÍÍH, m, CH), 3,6 <1H, m» CH de CH2), 3,8 (1H, m, CH de CH2), 4,4 (2H, m, CH20) 6,6 (2H, br = s, D20 permutável NH2), 7,9 Í1H, s, 8-H), 10',6 Í1H, br = s, D,Q permutável NH)? (Encontrados? C, 35,82? H, 5,55? N, 19,57%= C0H1 yjNj-O^PS (&55 Et^N) requeres C, 35,86? H, 5,37? N, 19,1/7.) | Mb ¢70 eV) ffl/z = 352 (MH+>5 (H^O) enantíómero-CS) = 0°s enantiómero-CR) = 0o»

^tivMi^..-âoJUxirâI 1 = Teste... de Inibição de CPE j,ÇÉ,Ktlas_dê_BeBlÍ£agIo^ Células MRC-5 (em MEM de Eagle contendo 5% de soro de vitelo recém-nascido) foram infectadas em suspensão com vírus 1 do berpes simplex, estirpe SC16 (sproxlmadaménte uma partícula infecciosa por íê células·) = Cem micro!itros da suspensão de 4 células infectadas (contendo aproximadamen is 2 x lo células) foram introduzidos em cada recipiente de uma placa de microtitu-lação de 96 recipientes contendo um volume igual do composto do teste em meio (MEM de Eagle contendo 5% de soro de vitelo recém-—nascido) em concentrações variando entre 2Θ® s 0s06pg/ml preparadas em passos de diluição repetida 3 vezes? assim as concentrações finais variaram entre 100 e ®s®3ug/ml. As placas foram então incubadas a 37*C numa atmosfera humidificada contendo 5% de CO^ durante 3 dias altura em que α efeito citopático (CPE) induzida pelo vírus nos recipientes de controlo atingiu os 10®%, As placas tarara fixadas em solução salina de formo1 s coradas com carbol fucsina» As placas foram antio examinadas a fim de encontrar a concentração da composta da teste q-us reduziu o CPE induzido pelo vírus em 5®% CCIc·^,) . As- placas de células nSo infectadas foram avaliadas paraleiamente a fim de determinar a concentração mínima do composto do teste que causou cito toxicidade.. Λ *- Ο Λ 2. teste.....da,,JKgdustQ_da.....Placa.....,ga,r,a...... Células- HRC-5 foram feitas crescer até à confluência eu multi-placas com 24 recipientes (diâmetro do recipiente = lsS cm), As monocamadas d® células drenadas- foram, cada uma de 1 as, infectadas com aproxiraadamente 5Θ partículas infecciosas de vírus 2 do herpes simplex íHSV-2:; estirpe MS) em 16®al de soluçSo salina tamponada com fosfato, 0 vírus foi adsorvido durante 1 hora à temperatura ambiente» Após a adsorçSo, d ínóculo residual foi removido de cada recipiente a substituído com 0,5 ml de HEM de Eagle contendo 57« de soro de vitelo recém-nascido e @s9% de agarose <A37), Uma vez introduzida a agarose? diluições do composto do teste,, que tinham sido preparadas em HEM de Eagle (contendo 5% de soro de vitelo recém-nascida) foram adicionadas,, recebendo cada recipiente 0,5 ml da camada superior líquida, O composto do teste foi diluido para dar origem à seguinte série de concentraçõess 2©®? ó©, 2®,, è= „ = „©,6pg/ml q as concentrações finais, no ensaio variaram, assim, entre !©Θμρ/ίηΙ e ©,©3[jq/m 1 „ As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidificada de 5% de COf2 até as Placas sere® claramente visíveis (usualmente i dia), 3 Igstg_da,...RMuçlo...da Placa para o......Vírus... Zoster da Varicela Células HRC-5 foram feitas crescer até â confluência em mui ti-placas- com 24 recipientes (diâmetro do recipiente = 1 ,5 cm) , As monocamadas de células- drenadas foram, cada uma delas,, infectada com aproximadamente 5® partículas infecciosas de vírus-soster da varicela (VZV)g estirpe Ellen) em ΙΘΦμΙ de soiuçSo salina tamponada com fosfato, u vírus foi adsorvido durante i hora à temperatura ambiente. Após adsorçSo, o inóculo residual foi removido de cada recipiente e substituído por «3,5 ml de MEM de Eagle contenda 5% de sara de vitela fetal inactivado pelo calor e 0,9% de agarose (A37), Uma vez introduzida a aqarose. . Ο Ο ' diluiçSes da composta do teste, que tinham sido preparadas em MEM de Eagle (contando 5% de soro de vitelo fetal inaetivado pelo calor)5 foram adicionadas, recebendo cada recipiente ©,5 ml da camada superior líquida» 0 composto do teste foi diluído para dar origem á seguinte série de concentrações s 200„ 60* 20* ò„ »»„®;!0èpg/ml jf as concentrações finais no ensaio variaram assim, entre ίθθμα/ίίίΐ e Ôs03pg/ral, As culturas infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera humidificada ds 5% de CO,, até as placas &Z. serem claramente visíveis <5 ou 6 dias)»

As culturas dos testes 2 e 3 foram ficadas em solução salina normal, sendo as camadas de agarose cuidadosamente eliminadas por lavagem, e sendo então as monocamadas ds células coradas com carbol fucsina» Foi uti1 içado um microscópio estéreo para a contagem das placas.» A CI^ (concentração da droga que inibe o número de placas formadas em 5Θ% em relação ao número de placas observadas para o controlo do vírus nas monocamadas) do composto do teste foi calculada» Além disso, as monocamadas foram examinadas quanto à evidência ds citotoxicidade induzida pela droga? foi registada a concentração mínima com a qual se registou c i to to x ic id ade... 4 !este_deJgedusgo......da......Placa em relação ... ao Vírus de

InçlujsiQ......Cl. tomagâl ica Células HRC-5 foram feitas crescer até à confluência em muiti—placas com 24 recipientes (diâmetro da recipiente = 1,5 cm) « As monocamadas de células drenadas foram, cada uma. delas, inrestadas com aproximadamente 5Θ partículas infecciosas de vírus de inclusão citomegálíea CCliVs estirpe AD-ÍÓ9) em 1Φ& μϊ de solução saima tamponsda com fosfato» 0 vírus foi adsorvido durante 1 hora è. temperatura ambiente. Após a absorção, o inóculo residual foi removido de cada recipiente e substituído por J. ml ·· 9. ΐ γ< ο >.. de HEM de Eagle contenda t@% de sara de vitelo fetal ínactivado pelo calor e 0,9% de aqarose £A37í= Uma ves introduzida a agaro-se, diluições da composta da teste, que tinham sido preparadas em MEm de Eagle (contendo i®% de soro de vitelo inactivado pelo calor), foram adicionadas, recebendo cada recipiente 1 ml da camada» superior liquida» 0 composto do teste foi diluído para dar origem à seguinte série de concentrações? 2Θ0 , 60, 2Θ, 6» » » »®0é;{..!g/ml | as concentrações finais- no ensaio variam, assim, entre l®0pg/ml e €>503pg/ml = As culturais infectadas foram incubadas a 37°C numa atmosfera húmida contendo 5% de CD._ até as placas serem claramente visíveis (cerca de 12 dias)» As culturas são « fixadas em solução salina de formol ? sendo as camadas de agarose eli minadas cuidadosamente por lavagem, e sendo então as mortoca— madas de células coradas com carbol fucsina* Foi usado um microscópio estereo para. a contagem das placas» A (concentração da droga que inibe o número de placas formadas em 5Θ% em relação ao número de placas observadas nss monocamadas de controlo do vírus; do cosa posto do teste foi calculada.» Além disso, as monocamadas foram examinadas quanto a evidência de citotoxicidade induzida pela droga| foi registada a concentração mínima com a qual ocorreu citotoxicidade» o. . ifton oc ama d a ^statelecida) para.

Lentivirus 4 o x 10 células do plexo coroidsu de carneiro (SCP) foram formadas em placas em recipientes individuais de uma placa de microtitulação com 96 recipientes em ΙόΦμΙ de HEM de Eagle com 107» de soro de vitelo fetal CFCS) inactivado pelo calor contendo sais de Hank» Quando as monocamadas ficaram estabelecidas (após 1 ou 2 dias de crescimento) elas foram lavadas com 2θθμΙ de meio de manutenção (Htn de Eagle com €5,5% de FCS contendo sais de Hank) e infectadas com !®Φμ3. de vírus visna (estirpe Kí84) em meio de ,ί Õ ' manutenção (30 TCID^/ml >. As amostras do teste foram diluídas com meio de manutenção em sais outras placas de microtxtuIaçSo com 96 recipientes com a variação entre 2®θ~-β3θόμ9/ίί;1 por meio de passos com diluição realizada 3 vezes. ΙβΘμΧ das amostras dilui-das foram então transferidos directamente para monocamadas infectadas com vírus (concentração final variando assim entre 100-0503pg/ml) e incubadas numa atmosfera humidificada contendo 5% de CD? até CPE induzido pelo vírus ter um valor máximo nos controlos infectados com vírus não tratados (usualmente 12-14 dias). As placas foram fixadas com solução salina com formal e coradas com violeta cristal. CPE induzido pelo vírus foi então registado microscopicamente e a concentração mínima da amostra dando protecção completa das monocamadas de células- (C1M) foi determinada, 6, Teste para o Vírus de Imunodeficitncia Humana (H1V) s) Teste da Citotoxicidade .Celular

Linfocitos humanos periféricos foram isolados por centrifugação de gradiente de densidade a partir de colheitas feitas em dadores de sangue voluntários normais. As fracçSes "camada amareiada,! destes donativos foram proporcionadas pelos centros de dadores de sangue.

A camada amarelada doi diluida Isl com solução salina iamponada com fosfato estéril CPBSjj fosfato de sódio 5® mH, pH 7. ?4p cloreto de sódio 0,9%) e subsequentemente colocada em camada sobre Ficoll. A seguir à centrifugação (30 minutos a 4ΘΘ % g) o produto flutuante foi eliminado e a interfa.se contendo os lintácitos foi recuperada, Ds linfocitos foram lavados, duas- vezes em PBS e foram suspensos ds novo finalmente no meio de cultura celular„ á ^

... «·. > 0 ^

Foi real.içada uma coloração ds viabilidade por maio do método de exclusão de corante azul tripan= A concentração das células em suspensão © a. percentagem de células viáveis foram claculadas. Subsequentemente, a suspensão celular foi ajustada para uma concentração de 1x10' células/ml= Esta suspensão celular foi transferida para frascos de cultura de tecidoss Dois terços da suspensão celular foram activados policlonalmente pela adição de fitobemaglutinina (concentração final 5 pg.ml) Um terço da suspensão permaneceu não estimulada»

Os linfocitos foram cultivados numa incubadora com uma atmosfera humidificada e 5% de C0._, durante 48 a 64 horas a 37°C,-. A seguir a este período de incubaçãos as células foram colhidas por centrifugação, suspensas de novo em meio de cultura celular e contadas» As células estimuladas e não estimuladas foram combinadas numa relação de 2s1 e ajustadas para uma concentração de 2x1 Θ'"' células/ml com cneio de cultura celular que continha, auicionalments, 10 unidades/ml de interleuquina-2 recombinante humana»

Apenas aquelas preparações de linfocitos foram utilizadas para o teste de controlo em que mais de 70% dos linfocitos estimulados expressavam o antigénio CD 25 e mais de 45% dos linfocitos expressavam do antigénio CD 4»

Adicionaram-se ΙΘΘμρ desta suspensão de linfocitos a cada recipiente das placas de microtitu1ação contendo os compostos do teste uiluidos seriadamente entre ΙΘΘμΜ e Θ,ΙμΜ» Subse-quentemente, as placas de microtitulação foram cultivadas durante 4 dias a 37°C« A sobrevivência e a proliferação dos linfocitos que cresceraiTi na presença do composto foram medidas por meio de um • ·. -7 • . χ - -λ 30 >ν ensaio coloriísátrico quantitativo. As células viáveis cultivadas na presença do corante ΜΎΤ 13-4·.,5~di me t i 11 i a z o 1--2--i 1)-3P5-dits~ ni. 1 tetrasaiio5 reduze® este substrato amarelo claro pela activi-dade das suas deshidrogenases mifcocondriais a um formazan de cSr púrpura. A quantidade de produto que é tuna função do número celular e da actividade celular metabólica foi quantificada fotométricamente. Por meio deste ensaio, os efeitos potenciais citotóKicD e citostático dos compostos em relação aos linfocitos foram detectados com precisão.

As placas de mierotitulação foram centrifugadas durante 5 minutos a 9ΘΘ x g« Q produto flutuante foi eliminado e as células de cada recipiente foram suspensas de novo em 5Θμ1 de meio -de cultura celular contendo 2 mg/ml de MTT„ Após quatro horas de incubação a 37°C adicionaram~se 1®Θ μΐ de solvente (isopropanol com HCX ®„®4 N e 1©% Cv/v5 de Triton 1ΘΘ) a cada recipiente. Por agitação tía.s placas de micro titulação o formazan foi solubilizado» Subsequentemente, as placas foram avaliadas em fotómetro ELISA no modo de comprimento de onda duplo (comprimento de onda medidos 55® nm|'comprimento de onda de referências 69® nm).

Para cada recipiente foi calculada a diferença na absorção (abs. 55© nm — abs. 69® nm). Estes dados proporcionaram a base para posterior avaliação do teste citotóxico» Foi calculada, a CDgpj aproximada (dose cito tóxica semi-máxima) de cada composto =

b> leste, de... Supressão dg H1V a

Foram preparados, cultivados, linfocitos humanos periféricos., e foram colhidos como anteriormente. Seguindo ΐγ

tisterminação dos marcadores da superfície das linfacitos? células não estimuladas e estimuladas por mitogênio foram combinadas numa re1aç3o da 1s 2 =

Em condições de segurança estas células são infectadas com uma preparação padrão de Hl v. As células são sedimentadas por centrifugação·, 0 produto flutuante foi eliminado e as células foram suspensas de novo no inóculo de HíV,

Este inóculo é uma suspensão liquida da estirpe HIV-Í do vírus? pré-testada e ajustada até um título que resulta numa síntese de proteina do núcleo virai p24 de >1ΘΘ ng/ml no dia quatro a seguir à infeeçao dos linfocitos humanos de acordo com α protocolo„

R 3 κ i0ÍJ linfocitos foram suspensos de novo em 1 ml de inóculo de HIV e incubados a 37°C durante &Φ minutos. Su.bsequ.en-tementsj as células foram lavadas duas vezes com 5Θ ml de meio de cultura e suspensas de novo em meio de cultura contendo 1Θ unidades/ml de interleuqu.ina.-2 recombinante humana para proporcionar uma concentração celular de 2wi0w célulss/ml» Adicionaram-—se ΙΘΘμΙ desta suspensão celular a cada recipiente das placas de microtitulação contendo as soluções diluídas dos compostos. As placas de microtitulação foram cultivadas num incubador com urna atmosfera humidificada e 5% de CO- a 37°C»

Consequentemente, uma fracção de linfocitos foi infectada em simulação com a mesma preparação de vírus que foi inactivatía pelo calor f3ê minutos a 5ó*C> antes da infeeçao.

Em cada um dos dias 2, 3 e 4 após a infseção uma das placas de microtitulação que tinha sido estabelecida em triplicada foi preparada para determinação da replicação virai3 0 RNA

ί *Ί I

virai é determinada na interior das células enquanto que a proteína p24 do núcleo virai foi deiectada no produto flutuante da cultura de 1infocitos»

Consequentemente* foram removidos 15θμ1 de produto flutuante de cada recipiente s transferidos para α recipiente de uma placa de microtitulação contendo 5θμ1/recipiente de SDB (dodecilsulfato de sódio* Θ5Θ8%>5 Estas placas foram armazenadas congeladas. Adicionou-se às células que permaneceram em cada recipiente 5Θ μΐ de solução de paragem <1% SDS, acetato de sódio 20mM, pH 550.s e 2ΘΘ pç/ml de heparina). As placas foram armacenadas congeladas. A concentração de p24 sintetícado pelas células infectadas com f-íIV foi determinada por meia de um ELISA sandwich, enquanto que a concentração de SNA virai foi avaliado quantitativamente por hibridicaç-ão de ácido nucleico, usando um sxsíbs da E=2 DNA marcado com p em relação à região gag/ραΐ do genoma virai. Os níveis absolutos do antlgénia virai e do RNA nas amostras tratadas com droga foram comparados com controlos nso tratados,, infectados com vírus e foi calculada a percentagem de Inibição»

Os resultados dos testes i a 5 foram os seguintesu— 4 ί’Λ' ^

ώί— Τ' vidade Antivirai contra DNA dos Virus Cl,-.-. í uQ/ml) ww V í rus Virus Vírus Herpes Zoster Inclusí Si rn.pl εκ \J i f~ ga1 --ç- C i tomsg-ã s-· 1|.· ,··. « Nd « Tido 1 Tipo 2 — — Estirpe tíClés fcstirps MS Estirpe Eilen Estirpe i em Células em Células- em Cé 1 u 1 as- em Célul· M.RC-5 MRC-5 MRC-5 s Si V v_- ·._} Ό- ·-* 3 O 1 ,.5 õ 2Θ yiΘΘ D q O D 5 D 11 y 100 y i Φ0 .-{1.0 £=;sr DD Ί. 2 2Θ MT /1 βΐ T "T g ·_= Η foi

citotÓK concentrações abaixo de 3βμα/ίη1, cd para as monoc amadas- celulares nenhum do*S CuíUpOStO usadas nos testes. 0 1 - ί

*- ;· ι ·'

Activídatís Anfcíviral contra «

iM Δ 9 1 00 1 13. : r. i vidane

An t i v ,1 ra I c on t f

l·! IV a/ /m niuicâp nos Si as -3 e 4 anos mTBCcãí EX » No :: CuilLI ί α ( U"1 )

An t igán io i rs. 1 kNA Dia 3 Dia 4 D.ia 3 ΓΗ =s ia 4 10 1 >?3 56 N-a concentração testada citocóxico em rslacSo a linfocitos infectados» numan os os r x ΐ'-α I Ui. nao

Claims (1)

1. A A

   REIVIMDICAí lê» · PrDi_es*“-D para fórmula (I), ou da um seu sal a preparação de luíi composto coiís *f a ríBacou t xc auiei 3 ia acsi. uavj™l i

   H1 é hidroKi ou aminofi é hidrogénio ou aminop Rrr ê hidrogénios hidroKimeiilo ou aciloxímetilop Kj, iâ um grupo cosn a U Urt^ li / íiK feffn C!Uís sSo independentemente seleccionados de entre hidrogén 1 feri lo substituído f acul tcítivarnsí!ΐ;ε s uu ·' > *

   K„ em conjunto sSos Íi?5í! uLU5 0 0

   Ur\ i: 1 como foi definido anteriormentei caracterizado por compreenders

   am que X é: uni grupo capaz d® c ic "IxzãçSo a fim de formar um anel imidaz olsj 'cal como amino qu. um derivado de aminos por exemplo* formil fiflUfiO 5 ou exemplos i · t *. 1 0 fecho da anel1 a c I ϊ I > %

   pirimxtíina de um composto com a Tormu" COY

   (III sm que Y è arninD ou Ca i c ο κ i f. com um agente de condensação capas de ciclisaçSo a fim de formar um anel pirimidina tendo um substituinte 2—s para dar origem a um composto com a fórmula (I) em que R_: é hidroxi e R.-: é aminos ou iii) s. condensação de um camoosto com a fórmula íiV)s

   (IV! ϊ» uma xntermedi.=*.riu de cadeia lacerai dum a iòrmula (v} GCH^CHR-· ·'. SR ' (V) em que u é um prupo separável? -i * y 4

   e em que nas formulas (II) R-j. e K« respectivamentss ou. grupos ou átomos neles convertíveis ~ R e gjflj sequida, quando desejado ou necessário3 a. conversão de R-, e/ou R. em R, , R._/ <, R_.' e/ou Re'' =, quando diferentes de Ri 5 R.-; ;i FU. R.-, s H_, e/ou R e/ou R., respectivamen te, e/ou a conversão de quanao R_._ r_ e/ou R,,, em outros R. R_ - K_ VΟ Ή· ‘ 1 ' o R-, " ? . R? * e/ou. R« Processo de acordo com a reivindicação 1 tericado por Fu ser hidroxi e R.-, ser mino. "Jt* ~ Processo de su n o o n g 3 a Tsíiv indica^ Lj.-~U3 1 ? r ara terisa do por RU ser amin 1 o s R___ ser hidi rogénio » 4ã„ — Processo de acorda com qualqu er uma das r si V ind cações 1 a 3 c -S r -5 c i Ex r x z ado fJ0T Πΐ—j. ser hidrox imetil· D» 5i. — p: f" PC B~r SO de acordo com á PU er uma d-SB r e *? v ind caçoes 1 a 4 ? c a racteri z ado Dor R_ e R , serem ambos hid roqén io. D us /-,¾ — Processo de acordo com a rei.v indica ção 15 c ara tensa Li O por* se prepara r eiTf c om pos tos seieco ionado s d e ent re grupo consist Indo QíTí % 9-E2-Í dÍ0ÍQX X f os f d r i 1 me t a. i lio í fcftuK. L3gu 9-C2-í fosfonometi 1 tio) etoxi 3 ou-ani na , '. 2- (d í e ta x i fosfori Imeti 1 tio) eto x i 3 ad sn i n a „ 9—Lá— í fosfonorneti 11io)etoxi3adenina íHS uXltXU {dÍ8’CuKl I Qco i urii }propoxx jguanina? 56

   9~C3~hidraxi-2-< fosfonomstí 1 tio) propox.1 Iguanina , 9~ L 3--ac e to i-2- (d isto x i f os for i 1 me t i 11 i o > p r opo κ i 1 ad en in a , 9-E3-hidroxi-2-< d ietoxi fosfori1metiI tio> propoxi1aden ina , 9-C3-hidroxi~2-í fosfonomet11 tio)propoxi 3adenina, 9-tí2—hidroxi-2-oxo-l.,4,2-oxatiafosforinan-5-ilImetoxi3adenina? sal de sódio, 9-Γ. <2-hidraxi-2-oxo-i ,4s2-oxatiafo5farinan-5—i 1 )metoxi3gutanina, sal de sódio. (R) -9--C3-hidroxi“2~ ( f osf onomet i 1 tio) propox i D guan ina e í S) —9-C 3-hidrox i-2-í f osf anoinet.il tio) propox! 3 guan ina = 71= - Processo para a preparaçao de um medicamento para utilização no tratamento de infecções a vírus ou de doenças neoplásicas, caractericado por se incluir no referido medicamento um composto com a fórmula (I) tal como foi definido sm qualquer uma das reivindicações i a- ò, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, juntamente com um veiculo ou excipiente farmacêutica.--· mente aceitável= Lisboa, 23 de Maio de 199Θ

   RUA VICTOa CORD®N, 10-A, 1.· 1200 U6B@&