PT792642E - Metodo pra o tratamentode disturbios com agonistas de estrogenio - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "MÉTODO PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS COM AGONISTAS DE ESTROGÉNIO"

ANTECEDENTES DO INVENTO

Foi descrito que certos agonistas de estrogénio são úteis na inibição de condições patológicas relacionadas com conjuntos de órgãos que respondem a agonistas ou antagonistas de estrogénio. Em particular, 2-fenil-3-aroilben-zotiofenos e l-(alquilaminoetoxifenil)-l-fenil-2-fenil-l-butenos, representados por raloxifeno e tamoxifeno têm largas aplicações como agonistas de estrogénio.

O raloxifeno foi descrito como sendo efectivo no tratamento do acne, U.S. 5.439.923; alopecia, EP 0659414 A2; doença de Alzheimer, EP 0659418 Al; atrofia da pele e da vagina, US 5.461.064; doenças auto-imunes, EP 0664123; cancro da mama, US 4.418.068; doença da mama, EP 0659419; degenerescência da cartilagem, US 5.418.252; problemas de CNS (post menopausicas), 94 EP 0309470; patologia de órgãos endócrinos alvo, US 4.418.068; puberdade tardia, US 5.451.589; doença de desaparecimento da mielina, US 5.434.166; dismenorreia, US 5.446.053; endometriose, US 5.461.065; infertilidade feminina, EP 659429 Al; distúrbios de fertilidade; hirsutismo, EP 0659414 A2, hipoglicemia, EP 635264 A2; aumento do libido, US 5.439.931; inibição da fertilidade, US 5.462.949; oxidação das LDL, EP 0664121 A; hipcrcolesterolémia, US 5.464.845; lupus eritematoso, EP 0664125; função dos macrófagos enfraquecidos, EP 659425 Al; infertilidade masculina, EP 0659424 Al; enfarte do miocárdio, isquemia, distúrbio trombo-embólico, inibição da trombina, EP 0664126; distúrbios menopausicos, EP 0659415; distúrbios de menstruação, US 5.462.950; obesidade, 94 EP 0309481; distúrbio de compulsão obsessiva, EP 0659428; osteoporose, US 5.457.117; disgénese ovárica, US 5.451.589; síndroma da perimenopausa, US 5.391.557; vasoconstrição periférica, US 5.470.883; síndroma da menopausa do SNC, EP 0659415; síndroma premenstrual, US 5.389.670; carcinoma da próstata; hiperplasia da próstata; hipertensão pulmonar, US 5.447.941; danos da reperfusão, J. Amer. Cardiol., 25, 189A (1993); neoplasma resistente, EP 0652004 Al; restenose, US 5.462.937; artritereumatoide, EP 0664125; seborreia, US 5.439.923; disfunção sexual; precocidade sexual, US 5.451.590; expressão da trombomodulina, EP 0659427; síndroma de Tumers, US 5.441.966; fibrose uterina, US 5.457.116; e sintomas vasomotores ( na pós-menopausa), 94 EP 0309473. O tamixofeno é empregue extensamente no tratamento do cancro da mama e foi descrito como sendo efectivo no tratamento das seguintes doenças e condições: níveis altos de lípidos, Drug Ther. 22/3, 109 (1992); cancro do ovário, J. Clin. Oncol. 11, N° 10, 1957-68 (1993); carcinoma das células renais, Br. J. Radiol. 56, N° 670, 766-7 (1983); supressão da homocisteína de factor aterogénico, Env. J. Câncer 29 Suppl. 6, SI 10 (1993); melanoma metastático, J. Clin. Oncol. 12, N° 8, 1553-60 (1994); mastalgia, Drugs 32, N° 6, 477-80, (1986); tumores pituitários secretores de prolactina, J. Endocrinol. Invest. %, 343- -3- 347 (1980); osteoporose, Proc. Annu. Meet. Am. Assoe. Câncer Res.; 33: A5G6-7 (1992); fibrose netroperitonial, Lancet 341, N° 8841,382 (1993).

Pequenas mudanças estruturais na estrutura dos agonistas de estrogénio provocam diferenças profundas nas suas propriedades biológicas. Por exemplo, o droloxifeno (3-hidroxitamoxifeno) tem uma afinidade de ligação 10 -60 vezes maior que o receptor estrogénico, quando comparado com o taximofeno. O droloxifeno não tem efeitos carcinogénicos ou mutagénicos in vivo ou in vitro, enquanto que o taximofeno provoca tumores do fígado em ratos. Hasmamu et al., Câncer Letter 84, 101-116 (1994). O droloxifeno foi descrito como sendo efectivo no tratamento do cancro da mama US 5.047.431; endometriose, US 5.455.275; baixando os níveis de colesterol, US 5.426.123; osteoporose, US 5.254.594; hiperplasia da próstata, US 5.441.986; e restinose, US 5.384.332.

SUMÁRIO DO INVENTO

Este invento diz respeito ao uso de uma quantidade efectiva de um composto da fórmula I para a manufactura de um medicamento para inibir uma condição patológica, seleccionado de um grupo consistindo da doença de Alzheimer, síndroma premenstrual, doença auto-imune e danos no miocárdio isquémico:

Um composto da fórmula I: > >

R4 é H, OH, F, ou Cl; e B e E são seleccionados independentemente deCHeN.

Os compostos especialmente preferidos são:

Cis-6-(4-fluoro-fenil)-5- {4-[2-( 1 -piperidinil)-etoxi]-fenil} -5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol; (-)-Cis-6-fenil-5-{4-[2-(l-piperidinil)-etoxi]-fenil}-5,6,7,8-tetra- hidro-2-naftalenol;

Cis-6-fenil-5-{4-[2-( 1-piperidinil)-etoxi]-fenil}-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol;

Cis-1 -[6'-pírrolodinoetoxifenil-3'-piridill-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidronaftaleno; l-(4,-PinOlodinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hidroxi-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolina; -5-

Cis-6-(4-Hidroxifenil-5-{4-[2-(l-piperidinil)-etoxi]-fenil}-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol; e 1 -(4'-Pirrolodinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolina;

DESCRICAO DETALHADA DO INVENTO O presente invento está relacionado com métodos para inibir condições patológicas que são susceptíveis ou parcialmente susceptíveis de inibição por um estrogénio, anti-estrogénio ou agonista de estrogénio. Tais condições incluem a doença de Alzheimer, o síndroma premenstrual, a doença auto-imune e danos de reperfusão no miocárdio isquémico. A doença de Alzheimer (DA) é um distúrbio degenerativo do cérebro, caracterizado por perda progressiva de memória, da cognição, de raciocínio, de discernimento ou estabilidade emocional que gradualmente leva a uma deterioração mental profunda e, por último, à morte. A DA é uma causa comum de uma falha progressiva mental (demência) em seres humano idosos e, pensa-se que represente a quarta causa mais comum de morte, só nos Estados Unidos. A DA foi observada em várias raças e grupos étnicos por todo o Mundo e representa presentemente e no futuro, um dos mais graves problemas de saúde pública. Estima-se que a doença afecte dois a três milhões de indivíduos, só nos Estados Unidos. Até ao momento, DA é incurável.

Os cérebros de indivíduos com DA exibem uma degenerescência neuronal e lesões características referidas como placas amiloidogénicas, angiopatia vascular da amiloide e nódulos neurofibrilares. Grande parte destas lesões, em particular as placas amiloidogénicas e os nódulos neurofibrilares são geralmentc encontrados em várias partes do cérebro humano de pacientes com DA, importantes para a memória e função cognitiva.. Um número menor destas lesões, numa mais restritiva distribuição anatómica, são encontrados nos cérebros dos seres humanos de idade, os quais não têm DA clínica. As placas amiloidogénicas e a angiopatia vascular da amiloide também caracterizam os cérebros de indivíduos com Trissomia 21 (Síndroma de Down) e Hemorragia Cerebral Hereditária com Amiloidose do Tipo Holandês (HCHWA-D). Até ao momento, um diagnóstico definitivo da DA, requer usualmente a observação das lesões acima mencionadas nos tecidos do cérebro de pacientes que morreram com a doença ou, mais raramente, em pequenas amostras de biópsias de tecido cerebral tiradas durante um procedimento neuro-cirúrgico invasor.

Existem vários tipos de evidência que indicam uma progressiva deposição cerebral de proteínas amiloidogénicas, proteínas β-amiloides (βΡΑ), têm um papel seminal na patogénese da DA e podem preceder sintomas cognitivos por anos ou décadas. Veja-se Selkoe. (1991) Neuron 6:487. Recentemente, foi mostrado que a βΡΑ é libertada das células neuronais, feitas crescer em cultura e está presente no fluído cerebroespinal (FCE) de, quer indivíduos normais, quer de pacientes de DA. Veja-se Seubert et al.. (1992) Nature 359:325-327.

Uma correlação possível da patologia das placas foi desenvolvida por vários grupos demonstrando uma neurotoxicidade directa da βΡΑ sobre neurónios de cultura. Foi recentemente divulgado que a neurotoxicidade directa da βΡΑ pode ser atenuado por co-tratamento com TGF-β (Chao et al, Soc. Neurosci. Abs., 19: 1251 (1993)). -7-

Mais recentemente, foi demonstrado que, para além da neurotoxicidade directa, uma resposta inflamatória no cérebro de pacientes com AD, talvez induzido por βΡΑ, contribui também para a patologia da doença. Um ensaio clínico limitado com o NSAID indometacina, revelou um retardamento da progressão da demência de Alzheimer (Rogers et al., Science. 260: 1719-1720 (1993)). A Aplicação Europeia de Patentes 0659418 Al descreve o uso de certas benzotiofenenos para a inibição da Doença de Alzheimer.

Embora se tenham feito progressos na compreensão dos mecanismos subjacentes da DA, existe ainda uma necessidade de desenvolver composições e métodos para o tratamento destas doenças. Os métodos de tratamento podem ser baseados vantajosamente em fármacos que são capazes de aumentar a expressão TGF-β no cérebro, melhorando assim a neurotoxicidade mediada pelo peptido da β-amiloide e a resposta inflamatória associada com a AD.

Em cada mês, a poucos dias antes do começo da menstruação, muito milhões de mulheres saudáveis desenvolvem sintomas de perturbações de disposição e apetite que podem ser muito parecidos com aqueles desenvolvidos por pacientes com o Distúrbio Afectivo Sazonal (DAS), obesidade devida ao desejo por carbohidratos, ou das variantes não anoréxicas da bulemia. Este síndroma foi denominado, em primeiro lugar, como "tensão premenstrual" por R. T. Frank em 1931 e é um fenómeno muito comum. De acordo com Guy Abraham da UCLA, de cada dez pacientes que entram no consultório de um genecologista, três em quatro sofrerão de tensão premenstrual e, em algumas, os sintomas serão de tal gravidade que incluirão tentativas de suicídio. Current Prouress in Obstctrics and Gvnecology. 3:5-39 (1980). -8-

As descrições iniciais do Síndroma Premenstrual (SPM) concentraram-se na sua associação com a tensão nervosa, dor de cabeça, e ganho de peso. O ganho de peso observado foi inicialmente atribuído à tensão excessiva de sal e água, que ocorre, na verdade, em algumas das pacientes em SPM. Contudo, cedo se tomou evidente que isto é consequência da tendência generalizada dos indivíduos sofrendo de PMS para desejarem e consumirem em excesso, carbohidratos, particularmente alimentos com sabor doce. SPM é agora também referido como síndroma de fase luteal tardia (ou distúrbio disfórico de fase luteal tardio). D.N.S. III. American Psiquiatric Association (1987).

Houve numerosas sugestões feitas acerca da etiologia da SPM. Por exemplo, foram divulgadas hipóteses de que a sua causa é uma toxina uterina. Outros sugeriram que é causada por consumo de doces em excesso, que presumivelmente se seguiram a uma secreção de insulina, hipoglicemia e níveis inadequados de glucose no cérebro e que originam as muitas vezes observadas depressão e ansiedade. Foi também postulado que os sintomas comportamentais resultam do edema dos tecidos muitas vezes observado e que as modificações psicológicas resultam do sentido de perda das complexidades sociais geradas pelos desconfortos da menstruação.

Contudo, nenhuma dessas teorias foi substanciada: SPM pode persistir depois da histerectomia e, assim, as toxinas uterinas não podem ser a sua causa; o hiperinsulinismo das SPM não é associado a níveis baixos de glucose e é provavelmente a consequência de aberrações comportamentais (i.e., a tendência de mulheres no estado pré-menstrual de escolherem alimentação rica em carbohidratos, os quais potenciam a secreção de insulina) em vez de ser a causa; as mudanças dc disposição e apetite de SPM são pobremente -9- correlacionadas com o inchaço dos tecidos; e os primatas sub-humanos, que sao presumivelmente isentos das complexidades psicodinâmicas ou sociais da vida humana, exibem também mudanças características comportamentais no estado pré-menstrual.

Tem havido muitos tratamentos sugeridos para ultrapassar ou redu/ir os sintomas do SPM. Estes incluem as dietas livres em carbohidratos, suplementos vitamínicos, hormonas dos ovários, agentes destoxificantes, irradiação dos ovários e pituitária e a utilização de diuréticos. Estas aproximações tiveram todas contudo, um sucesso limitado. O distúrbio disfórico de fase luteal tardio (LLPDD) é o termo corrente associado com o Síndroma Premenstrual (SPM). Muitas mulheres relatam uma variedade de mudanças físicas e emocionais associadas com fases específicas do ciclo menstrual. Para a maioria destas mulheres, estas mudanças não são graves, causam pouco desconforto e não têm efeito no funcionamento social ou ocupacional. Em contraste, a característica principal do LLPDD é um padrão significativo clinicamente de sintomas emocionais e comportamentais que ocorrem durante a última semana da fase luteal e abrandam dentro de poucos dias depois do aparecimento da fase folicular. Na maioria das mulheres, estes sintomas ocorrem na semana antes e cessam dentro de poucos dias depois do aparecimento da menstruação. LLPDD é diagnosticado somente se os sintomas são suficientes graves para causar um acentuado enfraquecimento do funcionamento social ou ocupacional e tem ocorrido durante a maioria dos ciclos menstruais no ano passado.

De entre os sintomas mais comuns registados, são a labilidade efectiva (e.g. episódios súbitos de choro, tristeza ou irritabilidade), sentimentos persistentes de irritabilidade, fúria ou tensão, sentimentos de depressão e pensamentos de auto-recriminação. Também são comuns o abaixamento do interesse nas actividades comuns, fatiga e falta de energia, um sentimento subjectivo de dificuldade em concentração, mudanças no apetite, ânsias por determinadas comidas (especialmente carbohidratos) e distúrbios de sono. Outros sintomas físicos, tais como a fragilidade ou aumento dos seios, dores de cabeça, dores nos músculos ou juntas, uma sensação de entumescimento e aumento de peso podem estar também presentes.

Geralmente os fármacos anti-inflamatórios não esteroidais são administrados a pacientes de LLPDD, mas só são efectivos para alguns dos sintomas físicos. A manifestação física de SPM, se grave, pode ser tratada sintomáticamente. A retenção da água pode ser aliviada pela dieta ou medicamentação anti-diurética, mas a gravidade da retenção da água não se correlaciona sempre com sintomas psicológicos. Estudos recentes sugeriram que a spironolactura (Adaltone, Searle) podem ser também efectivos no alívio dos acessos de depressão e choro.

Outros fármacos, incluindo a progesterona, carbonato de lítio, tiazido, diuréticos, antidepressores e bromociptome (Parlodel®, Sandoz), têm sido tentados com resultados incertos. A Patente U.S. 5.389.670 descreve o uso de certos benzotiofenos para o tratamento de LLPDD / SPM.

Devido às desvantagens e insuficiências dos métodos existentes de tratamento do SPM / LLPDD, são desejadas novas terapias.

As doenças auto-imunes envolvem uma regulação aberrante da imunidade mediada por células e humores e são frequentemente associadas com células T anormais ou activadas, células B ou funções de activação dos macrófagos, dirigidas para os auto-antigénios. Pensa-se que a activação destes componentes celulares para os auto-antigénios, se deve a quebra dos mecanismos de retomo associados com a auto-tolerância. As doenças auto-imunes abarcam um larguíssimo espectro de características clínicas e, apesar das diferenças nos tecidos alvo, têm muitas semelhanças. Estas incluem a sua preponderância em mulheres em idade de procriarem, numa razão mulher / homem variando de 50:1 na Tiroidite de Hashimoto, de 10:1 no lupus eritematoso sistémico (SLE) e de 2:1 na Miastenia gravis (Ahmed et al, Am. J. Path., 121:531 (1985)). Adicionalmente, estas doenças são todas caracterizadas pela seu caracter crónico, a tendência para afrouxamentos e súbitos agravamentos clínicos por razões pouco conhecidas, e pelo envolvimento de outros órgãos. Embora a presença de auto-anticorpos, a expressão inapropriada de antigénios da classe II, a activação de macrofagos e infliltração de células T no órgão alvo tenha sido descrita em praticamente todas as doenças auto-imunes, não são ainda conhecidos quer os mecanismos que desencadeiam a activação da doença quer a sua progressão. Deste modo, a terapia para estas doenças é muito insatisfatória e envolve o uso de sais de ouro, metotrexato, antimaláricos, glucocorticoides (metilprednisolona) e outros imunosupressores, bem como a plasmoforése e tentativas de indução da tolerância. O tratamento das doenças auto-imunes não melhorou significativamente durante a passada década e é associada essencialmente ao uso agentes de anti-inflamatórios não esteroidais e esteroidais para o tratamento dos sintomas da doença. Manifestamente, embora seja necessária a supressão da resposta imune especifica dirigida contra o hospedeiro, a imunosupressão generalizada, como acontece com os glucocorticostcroides, origina graves prejuízos em termos de perfis de efeitos secundários e da propensão do paciente sujeito à imunosupressão a sofrer riscos de padecer de outras doenças infecciosas ou não.

Os leucócitos polimorfonucleares (PMNL) exercem um papel regulador nas doenças inflamatórias. Estas células, quando activadas, sintetizam e libertam moléculas cetradas em oxigénio, quimio-atractores, e enzimas hidrolíticos. Existem evidências para que as moléculas ricas em oxigénio exercem um efeito prejudicial em várias doenças tais como as doenças inflamatórias crónicas, artrite reumatoide, SLE e outras. No caso de uma doença auto-imune, por exemplo a SLE, o desencadear da resposta inflamatória é estimulado pelos próprios antigénios, pela secreção dos neutrófilos ou PMNLs do hospedeiro de oxidantes fortes que danificam as células e tecidos.

Pensa-se que o estrogénio está envolvido nas doenças auto-imunes embora o seu papel na progressão e regressão da doença seja complexo e dependente da natureza da doença auto-imune. O estrogénio parece ter, por exemplo, efeitos benéficos na artrite reumatoide, embora tendo um efeito exarcebante no lupus sistémico (Chander & Spector; Ann. Rheum. Dis. 50:139). Como foi divulgado por Jansson (Free Rad. Res. Comms, 14(3). 195-208 (1991), aqui incorporado por referência), o estrogénio aumentou a actividade de uma enzima gerada pelos PMNLs, a mieloperoxidase, a qual regula a produção de oxidantes a partir do peroxido de hidrogénio. Esta enzima converte o peróxido de hidrogénio em ácido hipocloroso, o qual é um forte oxidante. Pelo incremento da actividade da enzima e assim da presença do ácido hipocloroso, é aumentada a probabilidade do acréscimo do stress oxidativo dos tecidos, células e várias macromoléculas nas doenças inflamatórias / auto-imunes crónicas.

Foi divulgado que os derivados da 2-fenil-3-aroilbenzotiofeno inibem a trombina; veja-se EP 0664126 Al.

Foi demonstrado que o estrogénio tem um papel supressivo na função das células T e, pelo contrário, um efeito imunoestimulante nas células B. Assim, os compostos semelhantes a estrogénio devem ser benéficos em doenças associadas com células T activadas, incluindo artrite reumatoide, esclerose múltipla, síndroma de Guillan Barre e tiroidite de Hashimoto através da inibição da função das células T (Holmadahl, J. Autoimun. 2:651 (1989).

Em adição aos efeitos supressivos de estrogénio em células T, o estrogénio pode ter funções protectoras adicionais. Marui et al., (J. Clin. Invest. 92:1866 (1993)) divulgou recentemente que os anti-oxidantes suprimem a expressão endotelial do VCAM-1. O VCAM-1 é o ligando do VLA-4, a integrina da célula T e do macrófago associada ao tráfego destas células para fora dos vasos sanguíneos e para o espaço perivascular e órgãos alvo. Como o estrogénio é um antioxidante, seria de antecipar que o estrogénio e análogos relacionados irão inibir o tráfego das células dependente do VLA-4 e assim dificultar a cascada imune, associada à doença mediada pela auto-imunidade. O estrogénio desempenha um papel nocivo em outras doenças auto-imunes, incluindo o lúpus sistémico e a glomerulonefrite, doenças que estão associadas a complexos imunes. Embora o(s) mecanismo(s) responsáveis pela progressão de doenças mediadas por estrogénio não sejam conhecidos, foi divulgada a capacidade do estrogénio em aumentar a fagocitose mediada por Fc (Friedman et al, J. Clin. Invest. 75:162 (1985), e a expressão de antigénios da classe II e a produção de IL-1 por macrófagos de roedores tratados por estrogénio (Flynn, Life Sei., 38:2455 (1986)). Seria esperado que o aumento destas funções efectoras que são mediadas pelos macrófagos, contribuísse para a cascada imune, -14- associada com a auto-destruição.

Foi divulgado na EP 664123 AI que certos 2-fenil-3-aroilben-zotiofenos são inibidores efectivos de doenças auto-imunes.

As mulheres na pré-menopausa sofrem menos riscos que os seus parceiros masculinos, de terem doenças coronárias do coração, e foi demonstrado que o tratamento com estrogénio protege as mulheres na pré-menopausa de doenças cardiovasculares. Hale e Kloner demonstraram que o pré-tratamento agudo com estradiol, reduz o enfarto de miocárdio causado pela oclusão da artéria coronária cm coelhos masculinos e femininos. J. Am. Coll. Cardiol., 25, 189A (1995). O termo "inibe" é definido para incluir o seu significado geralmente aceite, o qual inclui o tratamento profilático de um indivíduo para impedir a ocorrência de um ou mais destes estados de doença, limitando os sintomas de tais estados de doença e/ou tratando tais sintomas. Assim, o presente método inclui ambos os tratamentos médicos, quer o terapêutico quer o profilático, como for apropriado.

Os métodos deste invento são efectivados pela administração a um indivíduo necessitando de tal tratamento de uma quantidade efectiva de um composto da fórmula I.

Os compostos da fórmula I são descritos como sendo efectivos no tratamento da doença da próstata, cancro da próstata, osteoporose, endometrite, doenças cardiovasculares e hipercolesterolemia, na Aplicação de Patente dos Estados Unidos n° 08/369.954, que é de propriedade comum e na Aplicação PCT WO 96/21656, já publicada. -15- /

Os agonistas de estrogénio são aqui definidos como compostos químicos capazes de se ligarem aos sítios dos receptores de estrogénio em tecidos de mamíferos e imitar as acções do estrogénio em um ou mais tecidos.

Qualquer especialista poderá reconhecer que certos dos substituintes registados neste invento serão quimicamente incompatível com todos os outros ou com os heteroátomos existentes nos compostos, e evitará estas incompatibilidades quando seleccionar os compostos deste invento. Do mesmo modo certos grupos funcionais requerem grupos de protecção durante os procedimentos sintéticos, o que o químico possuidor de proficiência habitual, reconhecerá. O químico possuidor de proficiência habitual, reconhecerá também que certos compostos deste invento conterão átomos que poderão estar numa configuração óptica ou geométrica específica. Todos esses isómeros são incluídos neste invento; são preferidos isómeros levógiros na configuração cis. Do mesmo modo, o químico reconhecerá que vários ésteres e sais farmaceuticamente aceitáveis, poderão ser preparados por certos compostos deste invento. Todos estes ésteres e sais estão incluídos neste invento.

Os medicamentos para as condições e doenças para uso nos métodos deste invento podem ser preparados pelos métodos empregues usualmente e que empregam aditivos orgânicos e inorgânicos convencionais, tais como um excipiente (e.g., sacarose, amido, manitol, sorbitol, lactose, glucose, celulose, talco, fosfato ou carbonato de cálcio), um agente ligante (e.g., celulose, metilcelulose, hidroximetilcelulose, polipropilpirrolidona, polivinilpirrolidona, gelatina, goma arábica, polietilenoglicol, sacarose ou amido), um agente desintegrante (e.g., amido, carboximetilcelulose, hidroxipropilamido, hidroxipro- pilcelulose pouco substituída, bicarbonato de sódio, fosfato ou citrato de cálcio), um agente lubrificante (e.g., estearato de magnésio, ácido sílico leve e anidro, talco e sulfato de laurilo), um agente aromatizante (e.g., ácido cítrico, mentol, glicina ou pó de laranja), um agente preservativo (e.g., benzoato de sódio, bisulfito dc sódio, metilparaben ou propilparaben), um agente estabilizador (e.g. ácido cítrico, citrato de sódio ou ácido acético), um agente de suspensão (e.g., mctilcelulose, polivinilpirrolidona ou estearato de alumínio), um agente dispersante ( e.g. hidroxipropilmetilcelulose), um diluente (e.g. água) e uma cera de base (e.g, manteiga de cacau, petrolato branco ou polipropilenoglicol). A quantidade de ingredientes activos na composição médica pode ser a um nível que potcnciará os efeitos terapêuticos desejados; por exemplo, cerca de 0,1 mg a 50 mg numa dosagem unitária para administração quer oral, quer parenteral. O ingrediente activo pode ser administrado usualmente de uma a quatro vezes por dia, com uma dosagem unitária de 0,1 mg a 50 mg em pacientes humanos, mas a dosagem referida acima pode ser variada de modo apropriado, dependendo da idade, peso do corpo e condição médica do paciente e do tipo de administração. Uma dose preferida é de 0,25 mg a 25 mg em pacientes humanos. É preferida uma dose por dia.

Os compostos utilizados nos métodos do invento são preparados facilmente por reacções ilustradas no esquemas abaixo indicados.

Certos compostos da fórmula I são preparados convenientemente de um intermediário insaturado

por hidrogenação com um catalisador de um metal nobre, numa reacção num solvente inerte. As pressões e temperaturas não são críticas e a hidrogenação é normalmente conseguida em poucas horas, à temperatura ambiente e a pressões de 20-28 psi. O produto de hidrogenação é isolado, purificado se tal for desejável e o grupo éter é cindido com um catalisador ácido numa reacção num solvente inerte, a uma temperatura de 0 °C a 100 °C, dependendo do catalisador acido utilizado. O ácido bromídrico a temperaturas elevadas, tribrometo de boro e cloreto de alumínio, de 0 °C à temperatura ambiente, foram consideradas efectivas para esta reacção. O produto da Fórmula I é isolado e purificado por procedimentos padrão.

Os agentes intermediários da Fórmula II, em que A é CH2, e B, D, e E são CH, são descritos na Patente U.S. 3.274.213; J. Med. Chem., 10, 78 (1967); J. Med. Chem., 10, 138 (1967); e J. Med. Chem., 12, 881 (1969), a divulgação das quais está aqui incorporada como referência. Elas podem também ser preparadas pelos procedimentos descritos abaixo. -18- -18-

A preparação dos compostos da Fórmula I em que e=l, A = CH2, Z' = OCH2CH2, G = cicloalquilamina, B = CH, é mostrado no Esquema 1. Os compostos 1-2, em que DeE são CH são feitos por alquilação de 4-bromofenol com o correspondente N-cloroetilamina, utilizando carbonato de potássio como uma base num solvente aprótico polar, como a dimetilformamida, a temperaturas elevadas. A temperatura preferida é a de 100 °C. Os compostos 1-2, em que D ou E ou ambos são N, são sintetizados utilizando uma reacção de substituição nucleofílica feita em di-brometos (1-1), utilizando hidroxi-etil-cicloalquilaminas, em condições de transferência de fase, para originar bromo-aminas (1-2). Synthesis 77, 573 (1980). Depois de uma substituição halogéneo - metal, utilizando n-butilítio ou magnésio metálico, as bromo-aminas (1-2) originam os reagentes de magnésio, os quais são deixados reagir a baixas temperaturas, na presença de cloreto de césio (sem o cloreto de césio a reacção também se dá) de preferência com 6-metoxi-l-tetralona para originar quer os carbinois (1-3) ou estirenos (1-4) depois de um processamento acídico. O tratamento de quer os carbinois (1-3) ou estirenos (1-4) com um agente brominante, tal como o perbrometo de brometo de piridínio, origina bromo-estirenos (1-5). Cloretos de Zinco e arilo ou heteroarilo ou ácidos borónicos de arilo ou heteroarilo reagem com brometos (1-5) na presença de catalisadores de paládio metálico, como fosfina de tetrakis-trifenilo e paládio(O) para originar estirenos de diarilo (1-6). [Pure & Applied Chem. 63, 419 (1991) e Buli. Chem. Soc. Jpn. 61, 3008-3010, (1988)]. Para preparar os compostos preferidos, os cloretos de zinco e fenilo substituído ou os ácidos borónicos de fenilo substituído são utilizados nesta reacção. Os cloretos de zinco e heteroarilos são preparados pela paragem da reacção entre os correspondente reagente de lítio e cloreto de zinco anidro. Os ácidos borónicos de arilo, que não sejam conseguidos comercialmente, são preparados pela paragem da reacção entre os correspondente reagente de lítio e arilo com borato de trialquilo, de preferência o borato de trialquilo, de preferência o borato de trimetilo ou triisopropilo, seguida de um tratamento aquoso acídico. Acta Chemica Scan. 47, 221-230 (1993). Os reagentes de lítio que não sejam conseguidos comercialmente são preparados por um reacção de substituição halogéneo - metal do brometo ou halogeneto correspondente com n-butil ou t-butillítio. Em alternativa, o reagente de lítio é preparado por litiações facilitadas por heteroátomos, como descrito em Orgânic Reactions, Vol. 27, Chapter 1. A hidrogenação catalítica de 1-6, na presença de hidróxido de paládio ou carvão, por exemplo, origina os intermediários de dihidro-metoxilo correspondentes, os quais são subsquentemente desmetilados utilizando o tribrometo de boro a 0 °C em diclorometano ou ácido bromídrico a 48% em ácido acético, a 80 - 100 °C, para originar as estruturas alvo (1-7). Estes compostos são racémicos e podem ser resolvidos nos seus enantiómeros através da cromatografia líquida de alta pressão, utilizando uma coluna com uma fase estacionária quiral, como as colunas Chiracel OD. Altemativamente, a resolução óptica pode ser levada a cabo por recristalização dos sais diatereoisoméricos formados com ácidos puros como o hidrogenofosfato de l,l'-bi-2,2-naftildiilo (veja-se Exemplo 8).

Os compostos cis (1-7) podem ser transformados nos isómeros trans pelo tratamento com uma base (veja-se Exemplo 2).

Quando D e/ou E é azoto, os intermediários (Fórmula Π) e compostos da Fórmula I podem ser preparados dos correspondentes dihalopiridinas ou pirimidinas como ilustrado no Esquema 1 e é descrito extensivamente para o 6-feml-5-{6-[2-(l-pirrolidinil)-etoxi]-3-piridinil}-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol do Exemplo 6. 0 éter metílico do composto da Fórmula I, em que e=l, A=CH2, Z-OCH2CH2, G = pirrolidina, D, E, B = CH, Y = Fenilo, pode ser também convenientemente preparado por, num primeiro passo, a hidrogenação de nafmidina (Upjohn & Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, MI 490001) num solvente inerte à reacção, na presença de um metal nobre como catalisador. A pressão e a temperatura não são críticos; a reacção é convenientemente feita em etanol, à temperatura ambiente, em aproximadamente 20 horas a 50 psi. O segundo passo é a quebra do grupo metoxilo, a qual é convenientemente realizada à temperatura ambiente, com um catalisador acídico, tal como o tribrometo de boro num solvente inerte à reacção, ou a 80 - 100 °C, com ácido bromídrico em ácido acético. O produto é depois isolado por métodos convencionais e convertido num sal de ácido, se desejado. ·. 7/ -V C. 21 - ESQUEMA 1

ο N-On α.

1-6

1-7 -22-

Os compostos da fórmula I, em que B é azoto, sao preparados pelos processos ilustrados nos Esquemas 2 e 3 e Exemplos 3-5 e 10-12. A síntese dos compostos da Fórmula I, em que B = N, é mostrado no Esquema 2. Os cloretos de aroilo (2-1), aquando do tratamento com aminas primárias, originam amidas arílicas secundárias (2-2), que são reduzidas com hidreto de alumínio e lítio em solventes etéricos para originar aminas secundárias (2-3). A acilação subsquente de (2-3) com cloretos de aroilo leva à formação de amidas terciárias (2-4), as quais são ciclizadas em oxicloreto de fósforo quente, para originarem sais de dihidro-isoquinolínio (2-5). A redução com o borohidreto de sódio em alcoxitetrahidroisoquinolinas; seguida de desmetilação por tribrometo de boro em diclorometano, origina as estruturas alvo. *o-£l s^Nl<CHí.)eC0Cl ESQUEMA 2 ynh2

RcrÇ-Lfi(CH2)í

CONHY

ÍKCH2)eCH8NHY 2Hzr^z

1 > t H ] Compostos de Formula I 2) BBr3 B= Azoto A síntese de compostos da Fórmula I em que B = N é também descrita abaixo, no Esquema 3. As aminas secundárias (3-1), aquando da sua -23- as quais, por ciclização com oxicloreto de fósforo, originam sais de isoquinolina (3-4-). A redução pelo borohidreto de sódio de (3-4), seguida de desbenzilação com ácido clorídrico aquoso, origina isoquinolinas (3-5), as quais são alquiladas pelos cloretos possuindo as funções apropriadas e desmetiladas com tribrometo dc boro, para originar as estruturas alvo desejadas. ESQUEMA 3 C0C1

Rofi^l ♦ ifS (CHe)eCHgNHY 3-1 D^E T 3-2 0 CHgC6H5

OH

3-6 BBr3

Compostos de Formula I

Embora a forma de base livre dos compostos da fórmula I possa ser utilizada nos métodos do presente invento, é preferível preparar e utilizar uma forma de sal aceitável. Assim, os compostos utilizados nos métodos do invento formam sais de adição ácidos e básicos farmaceuticamente aceitáveis com uma extensa variedade de ácidos inorgânicos e, de preferência, ácidos orgânicos e incluem os sais fisiologicamente aceitáveis, que são muitas vezes usados na química farmacêutica. Tais sais são também parte deste invento. Ácidos inorgânicos típicos, utilizados para obter tais sais, incluem o hidroclórico, hidrobrómico, hidroiódico, nítrico, sulfurico, fosfórico, hipofosfórico e semelhantes. Podem também ser utilizados os sais derivados de ácidos orgânicos, tais como os ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanoicos substituídos com fenilo, hidroxialcanoico e hidroxialcanodióicos, ácidos aromáticos e ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos. Tais sais farmaceuticamente aceitáveis incluem assim o acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxi-benzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, isobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-l,4-dicarboxilato, hexino-1,4-dicarboxilato, caprato, caprilato, cloreto, cinamato, citrato, formato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, benze-nosulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobenzenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato, tartarato e semelhantes. O sal de citrato é um dos preferidos.

Os sais de ácidos de adição farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados pela reacção de um composto da fórmula I com uma quantidade equimolecular ou excesso de ácido. Os reagentes são geralmente combinados num solvente mútuo, tal como o éter dietílico ou benzeno. O sal precipita normalmente da solução de entre cerca de uma hora a 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser removido pelos meios convencionais.

Os sais da fórmula I farmaceuticamente aceitáveis dos composto da fórmula I, têm geralmente características melhoradas de solubilidade, quando comparados com os compostos de que são derivados e assim são mais passíveis a formulações liquidas ou emulsões.

Uma vez preparado, a base livre das formas de sal dos compostos da fórmula I pode ser administrada a um indivíduo com necessidade de tal tratamento, através dos métodos aqui descritos. Os seguintes exemplos de testes, que não são limitantes, ilustram os métodos do presente invento.

Para os métodos do presente invento, os compostos da fórmula I são administrados continuamente, ou de uma a quatro vezes por dia.

Como utilizado até aqui, o termo "quantidade efectiva" significa uma quantidade do composto dos métodos do presente invento, o qual é capaz de inibir os sintomas das condições patológicas aqui descritas. A dose específica de um composto administrado de acordo com este invento será, com certeza, determinado pelas circunstâncias particulares do caso, incluindo por exemplo, o composto administrado, a via dc administração, o estado de saúde do paciente e a gravidade da condição patológica a ser tratada. Uma dose típica conterá um nível de dosagem não tóxico de cerca de 0,25 mg a cerca de 100 mg/dia de um composto do presente invento. As doses diárias preferidas serão de cerca de 10 mg a cerca de 40 mg/dia.

Os compostos deste invento podem ser administrados por uma extensa gama de maneiras incluindo a oral, rectal, transdermal, subcutânea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Estes compostos são formulados de preferência antes da administração, e a sua selecção será deixada ao critério do médico assistente. Tipicamente, o composto da fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, é combinado com um veículo, diluente ou excipiente, farmaceuticamente aceitáveis, para formar uma formulação farmacêutica. O total dos ingredientes activos em tais formulações, compreende de 0,1% a 99,9% em peso da formulação. "Farmaceuticamente aceitável" tem como significado que o veículo, diluente, excipientes e/ou o sal devam ser compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não serem nocivos ao recipiente em que estão contidos.

As formulações farmacêuticas contendo o composto da fórmula I podem ser preparadas por procedimentos conhecidos dos especialistas na arte, utilizando ingredientes bem conhecidos e facilmente acessíveis. Por exemplo, os compostos da fórmula I podem ser formulados com excipientes, diluentes ou veículos e transformados em comprimidos, cápsulas, suspensões, pós e semelhantes. Exemplos de excipientes, diluentes ou veículos que sejam adequados para tais formulações, incluem os seguintes agentes de enchimentos e aumento tais como o amido, açucares, manitol, e derivados silílicos, agentes de ligação tais como a carboximetilcelulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina e polivinilpirrolidona; agentes humidificantes tais como o glicerol; agentes desintegrantes tais como o carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio, agentes para retardar a dissolução tais como a parafina, agentes de aceleração da reabsorpção tais como os compostos de amónio quaternário; agentes tenso-activos tais como o álcool cetílico, monoestearato de glicerol; veículos adsortivos tais como a caolina e bentonite; e lubrificantes tais como o talco, estearato dc cálcio e magnésio, e polietilglicois sólidos.

Os compostos também podem ser formulados como elixires ou soluções para conveniente administração oral ou como soluções apropriadas para administração parenteral, por exemplo, por vias intramuscular, subcutânea ou intravenosa.

Adicionalmente, os compostos são bem adequados a formulações de formas de dosagem de libertação sustida e semelhantes. As formulações podem ser constituídas de tal maneira que libertem o ingrediente activo somente ou, de preferência, numa localização fisiológica específica, possivelmente durante um certo período de tempo. Os revestimentos, invólucros e matrizes protectoras podem ser feitas, por exemplo, de substâncias poliméricas ou ceras.

Os compostos da fórmula I, podem ser geralmente administrados numa formulação conveniente. Os exemplos de formulações seguintes são somente ilustrativos e não devem ser entendidos como limitantes do âmbito do presente invento.

Nas seguintes formulações, "ingrediente activo" significa um composto da fórmula I, ou um seu sal.

Formulação 1: Cápsulas de Gelatina

As cápsulas de gelatina dura são preparadas utilizando o seguinte:

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 0,25 -100 Amido NF 0-650 Pó de Amido fluível 0-50 Fluído de Silicone de 350 centistrokes 0-15

As formulações de comprimidos seguintes ingredientes: Formulação 2: Comprimidos são preparadas utilizando os Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 0,25 - 100 Celulose microcristalina 200-650 Dióxido de silício micronizado 10-650 Ácido esteárico 5-15 -29-

Os componentes são misturados e prensados para formar comprimidos.

Em alternativa, são manufacturados comprimidos, contendo cada um 0,25 - 400 mg de ingrediente activo, da forma seguinte:

Formulação 3: Comprimidos

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 0,25-100 Amido 45 Celulose microcristalina 35 Polivinilpirrolidona 4 Carboximetilcelulose de sódio 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1 O ingrediente activo, amido e celulose são passados através de um crivo de malha 45 U.S. e misturados cuidadosamente. A solução de polivinil-pirrolidona é misturada com os pós resultantes, os quais são feitos passar através de um crivo de malha 14 U.S. Os grânulos assim produzidos são secos a 50 0 -60 °C e passados através de um crivo de malha 18 U.S. O carboximetilamido de sódio, estearato de magnésio e talco, que foram feitos passar previamente por um crivo dc malha 60 U.S., são depois adicionados aos grânulos que, depois de misturados, são prensados numa maquina de comprimidos para originar os comprimidos.

As suspensões, cada uma contendo 0,25 - 100 mg de medicamento por 5 ml de dose, são manufacturadas como se segue:

Formulação 4: Suspensões

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 0,25 -100 Carboximetilcelulose de sódio 50 Xarope 1,25 mg Solução dc ácido benzoico 0,10 ml Aroma q.b. Cor q.b. Agua purificada até 5 ml O medicamento é passado através de um crivo de malha N° 45 U.S. e misturado com carboximetilcelulose de sódio e xarope, para formar uma pasta suave. A solução do ácido benzóico, aroma e cor são diluídos com alguma da água e adicionados, com a agitação. Suficiente água é depois adicionada para produzir o volume desejado. Uma solução de aerosol é preparada, contendo os seguintes ingredientes:

Formulação 5: Aerosol

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 0,25 Etanol 25,75 Propelante 22 (clorodifluorometano) 70.00 O ingrediente activo é misturado com etanol e a mistura adicionada a uma porção do propelante 22, arrefecida a 30 °C e transferida para um dispositivo de enchimento. A quantidade requerida é então introduzida num contentor de aço inoxidável e diluída com o impulsor restante. Os sistemas de válvulas são depois fixos ao contentor.

Os supositórios são preparados como se segue:

Formulação 6: Supositórios

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 250 Ácidos gordos saturados 2.000 O ingrediente activo é passado por um crivo de malha N° 60 U.S. e suspenso nos ácidos gordos saturados, que tinham sido antes fundidos utilizando-se a menor quantidade necessária de calor. A mistura é depois introduzida num molde de supositórios de capacidade nominal de 2 g e deixada arrefecei.

Uma formulação intravenosa é preparada como se segue:

Formulação 7: Solução Intravenosa

Ingrediente Quantidade (mg / cápsula) Ingrediente activo 20 mg Solução salina isotónica 1.000 ml A solução dos ingredientes acima descritos é administrada de maneira intravenosa a um paciente à razão de cerca de 1 ml por minuto.

Análises de Inibição da Doença de Alzheimer São descritas na EP 0659418 Al, análises de compostos eficazes no tratamento da DA.

As Amilinas podem ser adquiridas de Bachem, Inc. (Torrance, Califórnia), Península Laboratories, Inc. (Belmont, Califórnia), Sigma Chemicals (St. Louis, MO). /5-Amiloide (1-40) e péptidos reversos de yff-amiloide (40-1) podem ser adquiridos de Bachem, Inc., /%-microglobulina pode ser adquirida de Sigma Chemicals (St. Louis, Missouri).

As soluções base dos péptidos (1 mM) são preparadas no momento em água livre de pirogénios e diluídas nas concentrações indicadas, no meio de cultura indicado. As culturas do hipocampo de rato (10-14 dias in vitro) são tratadas com péptidos ou veículos durante quatro dias. A viabilidade das culturas corticais do rato é analisada visualmente por microscopia de contraste de fase e quantificada pela medição da desidrogenase do lactato (LDH) libertada no meio de cultura.

Análise 1

Os neurónios do hipocampo do rato são cultivados in vitro por técnicas de cultura de células. O péptido /3-amiloide (βΑ) é adicionado às células em cultura numa concentração de 25 - 50 μΜ, que é normalmente tóxica. Depois de 4 dias de tratamento, a viabilidade é estimada pela medição da desidrogenase do lactato (LDH) libertada no meio de cultura. A desidrogenase do lactato (LDH) é medida em alíquotas de 20 μΐ de DMEM definido condicionado, utilizando uma análise de cinética de LDH padrão, a 340 nm (Catalogo da Sigma, N° 228 - 20) num formato de 96 cavidades. As análises são realizadas a 37 °C num leitor de placas "Microplate Biokinetics" EL340 (Bio-Tek Instruments), comandado por um PC e utilizando software Delta Soft II (v. 3,30B, BioMetalics, Inc.) para análise de dados. Os padrões de controle de qualidade, contendo níveis normais e elevados de LDH no soro (por exemplo, Controles de Enzima Sigma 2N e 2E) são corridos com todas as análises. Os resultados são expressos como unidades de LDH/L em que 1 unidade é definida como a quantidade da enzima que irá catalisar a formação de 1 micromole de dinucleótido de nicotinamida e adenina, por minuto, nas condições da análise. Para estudos de protecção, um composto da fórmula 1 é adicionado ás culturas antes e/ou concorrentemente com o tratamento da yS-amiloide. A actividade dos compostos da fórmula 1 é ilustrada pelo decréscimo em LDH libertado no meio (indicador neurotóxico), quando comparado com o controle.

Análise 2

Entre cinco e cinquenta ratos são submetidos a oclusão de 4 veias, durante 15 minutos, para induzir uma esquémia geral. Um composto do invento é administrado a animais experimentais e de controle antes de, em simultaneidade com e/ou várias horas depois de 15 min. de oclusão. Os animais são sacrificados 3 dias depois da agressão isquémica e danos neuronais no hipocampo e o striatum é depois analisado visualmente pelas técnicas histológicas padrão. A actividade dos compostos da fórmula 1 é ilustrada pela diminuição dos danos neuronais.

Análise 3

Cinco a cinquenta mulheres são seleccionadas para o estudo clínico. As mulheres estão no estado pós-menopausa, i.e., cessaram de ter a menstruação por 6 a 12 meses antes do inicio do estudo, foi-lhes diagnosticada a Doença de Alzheimer (DA) nos seus estádios iniciais, é esperado que os seus sintomas de AD piorem, mas, aparte isto, gozam de boa saúde geral. O estudo tem um grupo de controle de placebo, i.e., as mulheres são divididas em dois grupos, um dos quais recebe o agente activo deste invento e o outro recebe o placebo. As pacientes são feitos inquéritos sobre a sua memória, cognição, raciocínio e outros sintomas associados com a DA. As mulheres do grupo a testar recebem entre 10 - 100 mg do agente activo por dia e por via oral. Elas continuam esta terapia por 6-36 meses. São guardados registos precisos dos sintomas alvo do inquérito e, no final do estudo, esses resultados são comparados. Os resultados são comparados quer entre os membros de cada grupo e também OS resultados de cada paciente são comparados aos sintomas registados de cada paciente, antes de começar o estudo. A actividade do fármaco a testar é ilustrado por uma atenuação de um declínio cognitivo típico e/ou roturas comportamentais associadas com a DA. A utilidade dos compostos da fórmula I é evidenciado pela actividade dc, pelo menos uma das análises acima descritas.

PROCEDIMENTO DE ENSAIO PARA PMS/LLPDD

Três a cinquenta mulheres são seleccionadas para o estudo clínico. As mulheres tem menstruações regulares, estão de boa saúde geral e sofrem de um ou mais dos sintomas de PMS/LLPDD acima mencionados. Devido à natureza idiosincrática e subjectiva destes sintomas, o estudo tem um grupo de controle com um placebo, i.e., as mulheres são divididas em dois grupos, um dos quais recebe o agente activo deste invento e o outro recebe o placebo. As mulheres do grupo a testar, recebem entre 10 - 100 mg do fármaco por dia por via oral. Eles continuam esta terapia durante 1-3 meses. São mantidos registos exactos do número e gravidade dos sintomas em ambos os grupos e, no fim do estudo esses resultados são comparados. Os resultados são comparados entre membros de cada grupo e também os resultados de cada paciente são comparados com os sintomas registados para cada paciente antes do estudo ter começado. Veja-se a Patente U.S. 5.389.670. A utilidade dos compostos do invento para a inibição dos sintomas da PMS/LLPDD é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm em um ou mais dos sintomas, quando usado estudos como o acima descrito.

ANÁLISES DE DETECCÃO DA INIBICCÀO A DOENÇA AUTOIMUNE

Análise 1 São levados a cabo os procedimentos, como descritos em Holmdahl et ai, Clin. Exp. Immunol., 70,373-378 (1987) (aqui incorporado por referência). A quatro a trinta ratos fêmeas, de idades de aproximadamente 8-10 semanas, foram castrados os ovários. A administração de um composto do invento ao grupo experimental, começa dentro de três semanas depois da castração. Depois de uma semana de administração de um composto da fórmula 1, os ratos são imunizados com colagénio de rato do tipo II. Os ratos são seriados de acordo com a gravidade da artrite, como foi descrito por Holmdahl et ai, Arthritis Rheum., 29, 106 (1986), aqui incorporado por referência. O soro foi recolhido e analisado para os anticorpos reactivos a anti-colagénio do tipo II. No final da experiência, as células do baço são obtidas dos ratos para determinação da actividade das células T. A actividade é ilustrada pela redução dos níveis de anticorpos do colagénio do anti-tipo II, determinados por análise de ELISA convencional. A redução da reactividade de células T ao colagénio do tipo II, apresentada para células T esplénicas por células apresentando antigénios. Finalmente, a gravidade clínica da doença é avaliada diariamente pelo aparecimento dos primeiros sinais do eritrema e o inchaço de um ou mais membros. A análise clínica é correlacionada com a exame histológico.

Análise 1

Entre quatro a trinta ratos adultos e fêmeas, do tipo Sprague-

Dawley, sào alimentados de ração de animal e água, à vontade. O grupo experimental recebe um composto da fórmula 1 e todos os ratos recebem cordão de rato como descrito em Amason et al., Arch. Neurol., 21, 103-108 (1969), aqui incorporado como referência. Os ratos são seriados por sinais da encefalomielite alérgica experimental (EAE). Entre três e sete semanas depois do começo da administração de um composto da fórmula 1, os ratos são sacrificados, e as suas espinal-medulas são removidas e examinadas. A actividade é ilustrada pela capacidade de um composto de inibir a EAE.

Análise 3 São utilizados entre cinco e cinquenta ratos (MRL/lpr e NZB). Os parâmetros avaliados foram a redução de anticorpos anti-ADN, quantificados por ELISA, bem como as modificações do tempo de sobrevivência e exame dos rins. Os ratos são doscados com os compostos do invento e são avaliados utilizando os parâmetros de progressão da doença, acima descritos.

Análise 4 São seleccionadas entre cinco e cinquenta mulheres par o estudo clínico. As mulheres estão no estado pós-menopausa, i.e., cessaram de ter menstruação de entre 6 a 12 meses antes do início do estudo, sofrem de uma doença auto-imune com sintomas visíveis, mas aparte isto, estão de boa saúde geral. Devido à natureza idiossincrática e subjectiva destes sintomas, o estudo tem um grupo de controle com um placebo, i.e., as mulheres são divididas em dois grupos, um dos quais recebe um composto da fórmula 1 como o agente -38- Λ activo e o outro recebe o placebo. As mulheres do grupo a testar, recebem entre 50 - 200 mg do fármaco por dia por via oral. Eles continuam esta terapia durante 3-12 meses. São mantidos registos exactos do número e gravidade dos sintomas em ambos os grupos e, no fim do estudo esses resultados são comparados. Os resultados são comparados entre membros de cada grupo e também os resultados de cada paciente são comparados com os sintomas registados para cada paciente antes do estudo ter começado. A utilidade dos compostos da fórmula I é ilustrado pelo impacto positivo que têm em pelo menos uma das análises descritas aqui.

ANÁLISE PARA PROTECCÀO DO MIOCÁRDIO1SOUÉMICO CONTRA DANOS DE REPERFUSÃO

Dez coelhos machos e dez fêmeas são tratados com 1 mg de um composto da fórmula I. Depois de 15 minuto, os coelhos são anestesiados e as artérias coronárias são ocluídas por 30 minutos, a que se segue quatro horas de reperfúsão.

Grupos de controle comparáveis são tratados com o veículo. A zona de risco é analisada pelo corante azul e a zona de enfarte pela mancha de tetrazólio. Uma porção reduzida da zona do enfarto, relativamente ao controlo mostra que o composto da fórmula I é efectivo em inibir o dano de reperfúsão ao miocárdio isquémico.

Lisboa, 26 de Setembro de 2001 W K" c ......t j ALBERTO CANELAS Agente Oficia! da Propriedade industrial RUA VICTOR COROON, 14 4nnA t ic>daa

Claims (6)

1. REIVINDICAÇÕES 1. A utilização de um composto da fórmula I, ou de um seu isómero óptico ou geométrico, ou de um seu sal de adição de ácido, N-óxido, éster ou sal de amónio quaternário, não tóxicos e aceitáveis farmaceuticamente para a manufactura de um medicamento para inibir uma condição patológica seleccionada da doença de Alzheimer, síndroma premenstrual, doença auto-imune e danos provocados pela reperfusão do miocárdio isquémico:

   em que G é

   R4 é H, OH, F, ou Cl; e B e E são seleccionados independentemente de CH e N.
2. 2. A utilização, de acordo com a Reivindicação 1, em que o composto da fórmula I é seleccionado de um grupo consistindo em: Cis-6-(4-fluoro-fenil)-5-{4-[2-(l-piperidinil)-etoxi]-fenil}-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol; (-)-Cis-6-fenil-5-{4-[2-(l-piperidinil)-etoxi]-feml}-5,6,7,8-tetra- hidro-2-naftalenol; Cis-6-fenil-5- {4-[2-( 1 -piperidinil)-etoxi]-fenil} -5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol; Cis-1 - [6'-pirrolodinoetoxifenil-3'-piridil]-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidronaftaleno; 1 -(4'-Pirrolodinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina; Cis-6-(4-Hidroxifenil-5-{4-[2-(l-piperidinil)-etoxi]-fenil}-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenol; e l-(4'-Pirrolodinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-l,2,3,4-tetrahidro- isoquinolina;
3. 3. A utilização, de acordo com a Reivindicações 1 ou 2, em que a referida condição patológica é a doença de Alzheimer. -3-
4. 4. A utilização, de acordo com a Reivindicações 1 ou 2, em que a referida condição patológica é a doença auto-imune.
5. 5. A utilização, de acordo com a Reivindicações 1 ou 2, em que a referida condição patológica são os danos provocados pela reperfiisão do miocárdio isquémico.
6. 6. A utilização, de acordo com a Reivindicações 1 ou 2, em que a referida condição patológica é o síndroma premenstrual. Lisboa, 26 de Setembro de 2001

   ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA