PT650480E - 1-arilsulfonil-3-fenil-1,4,5,6-tetrahidropiridazinas - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "1-ARILSULFONIL-3-FENIL-1,4,5,6-TETRAHIDROPIRlDAZINAS"

ÁREA DA INVENÇÃO A presente invenção refere—se a novos compostos de 1—fenilsulfonil-3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina e a novos métodos psrs a preparaçao dos compostos. Os novos compostos são úteis como contraceptivos e no tratamento da osteoporose. A presente invenção refere-se ainda a composições farmacêuticas nas quais um composto de acordo com a presente invenção é o ingrediente activo.

ESTADO DA TÉCNICA

A 3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina não acilada, A é descrita por J-L. Aubagnac et al., Buli. Chem. Soc. France, 7. 2868, (1972). Descrevem-se também uma quantidade de derivados acilados em 1.

A W. Jones et al., J. Het. Chem., 21, 889 (1984) descreve que a tiocarbamoilação de A com isotiocianato de metilo produz o derivado tiocarbamida correspondente, B. Não está descrita qualquer actividade biológica. l\ / f~ Κ V —.** >

•- V

S. J. Clarke et al., J. Chem. Research (S) 310 (1985) descreve derivados de carbamato, carbamida e para-tolueno sulfonamida de A (o derivado sulfonamida é C), que são preparados via reacções de cicloadição. De novo, não está descrita qualquer actividade biológica.

R1 R3 R4 R5 Rs H H H OEt H H H Me OEt H H Me H OEt H H H H OMe Me fM O s H H OEt H fM O S5 H H OMe Me Br H H OEt H Br H Me OEt H Br Me H OEt H Br H H OMe Me 2

R. Faragher et al.f in J. Chem soc. Perkin Trans. I, 249 (1979), descreve derivados de para-tolueno sulfonamida e carbamato de A (o derivado sulfonamida é 4), cujos compostos são também preparados via reacções de cicloadição. Como mencionado

acima, não estã descrita qualquer actividade biológica.

Kalyanam et al.f Syntetic Communications, 18 (16 & 17), (1988) descreve compostos com a fórmula:

CHC1 2 em que n é 1 ou 2, como sendo anti-amebiana. 3

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em resumo, de acordo com a presente invenção, são providenciados compostos, que podem ser efectivos agonistas da progestina, com a fórmula:

em que:

W está ausente ou é -CH=CH-; r! são independentemente seleccionados do grupo que consiste de halogéneo, -CF3 e NO2 ou ambos R1 podem ser associados para formar um radical duplo que é -CH=CHCH=CH-; R3 são independentemente seleccionados do grupo constituído por hidrogénio, (C^)alquilo ramificado ou linear, halogéneo e -CF3, com aminoácidos com a condição de que R3 na posição 3 deve ser H em que R3 na posição 4 é H ou ambos R3 podem ser associados para 4 7

formar um radical duplo seleccionado do grupo que consiste em —CH=CHCH=CH-, -C (N (Cx_4) alquilo2) =CHCH=CH- e -(CH2)4-; r5 é seleccionado a partir do grupo que consiste em H e Me; com a condição de que apenas um de R* e r3 forma radicais duplos fundidos; e os estereoisómeros.

Também providenciados pela presente invenção são compostos, que podem ser efectivos antogonistas da progestina, os compostos com a fórmula geral:

em que A é

W está ausente ou é -CH=CH—; 5 Γ',

^rJçlL 7 r! é seleccionado a partir do grupo que consiste em halogéneo, —CF3 e -N02, ou ambos podem ser associados para formar um radical duplo que consiste em -CH=CHCH=CH-; r3 é hidrogénio, halogéneo, -CF3, (C^) alquilo, carboxi(C1-4) alquilo, (C^Jalcóxi carbonil(C1_4)alcóxi com a condição de que R^ na posição 2 não é hidrogénio ou R^ pode ser associado para formar um radical duplo que consiste em CH=CHCH=CH- ligados nas posições 2 e 3;

Ra são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio ou halogéneo com a condição de que cada um pode ser halogéneo em que r3 é seleccionado apenas do grupo halogéneo; r5 g seleccionado do grupo que consiste em hidrogénio e metilo ou alternativamente R5 pode ser associado com o hidrogénio em posição 6 para formar um radical duplo que consiste em (5)—CH2CH=CH-(6); com a condição de que apenas um de R^, e R^ forma o radical duplo; e os estereoisómeros e sais farmaceuticamente aceitáveis e ésteres derivados.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser fabricados no que é basicamente, um processo em dois passos. No primeiro passo e como se encontra demonstrado nos esquemas 1 e 2 forma-se um intermediário 3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina. No segundo passo e como se encontra demonstrado no esquema 3 este intermediário 3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina é ligado na 6 C'

posição 1 com o radical fenilo ou tienilo apropriadamente substituído. Em casos especiais, como se encontra exemplificado no esquema 4, encontram-se disponíveis processos vantajosos para certos padrões de substituição. Claro, os substituintes dos compostos finais podem ser obtidos apropriadamente, partindo dos materiais de partida ou através da modificação dos substituintes precurssores num intermediário ou produto final. No entendimento das reacções particulares sugeridas aqui, pessoas competentes na matéria ficam prontamente capazes de determinar a melhor forma de obter um dado substituinte.

Os substituintes R1*, R3* e R5* como foi empregue nos esquemas 1-4 pretendem incluir não apenas os substituintes de R3, r3 e r5 como foi descrito acima para os compostos preferidos, mas também incluir outros substituintes nos seus anéis respectivos de compostos aqui descritos. Subscritos w, y e z empregues de acordo com os mesmos esquemas apresentam valores que variam de 0-5, 0-3 e 0-5 respectivamente e pretendem mostrar que não apenas os padrões de substituição dos compostos descritos acima podem ser fabricados por este método. Os compostos que contêm R1*, R3* e r5* e compostos em que w, y e z são 0-5, 0-3 e 0-5 respectivamente são incluídos na presente invenção. Finalmente, os esquemas 1-4 são exemplificados empregando fenilo o substituinte na última posição 3 em 1,4,5,6-tetrahidropiridazina. Em cada esquema, um material de partida no qual o fenilo é substituído pelo tienilo apropriado poderia por fim, produzir, através do mesmo método, um substituinte 3-tienilo na 1,4,5,6-tetrahidropiridazina. Desta forma, os esquemas 1-4 exemplificam o fabrico do substituinte 3-fenilo, o substituinte 3-fenilo produzido de forma semelhante. 7

Referente ao Esquema 1, Γλ

Γ\

a 3-fenil-l,4,5,6- tetrahidropiridazina, intermediário 1-C, é formada em dois passos de reacção. Numa reacção de adição inicial, o material de partida inicial dicetona 1-A é colocado em refluxo num solvente alcoólico com um excesso de hidrazina para originar o composto 6-oxo 1-B. Solvente alcoólicos adequados incluem metanol, etanol, etc., com o refluxo a durar de 1 a 24 horas. Esta adição encontra-se ainda descrita por S. Gabriel et ai., Ber., 32, 395 (1879), W. Curran ESQUEMA 1

1-A 1-B

1-C et al., J. Med. Chem., 17 (3), 273 (1974) e nas Patentes E.U. Nos. 4 766 118 e 4 721 784, que são incorporados aqui para referência. Subsequentemente, o composto 6-oxo 1-B é reduzido ao intermediário 1-C na presença de um agente redutor. Agentes redutores adequados incluem diborano, hidreto de litio-aluminio e hidreto de di-i-butil-alumínio. Quando se emprega o hidreto de litio-aluminio, a reacção deve ser levada a cabo a temperaturas reduzidas num solvente tal como THF. Esta redução é ainda descrita por J.L. Aubagnac et al., Buli Chem. Soc. France, 2859 (1972). De facto, é claro que o intermediário 1-C não pode ter R5* como substituinte na posição 6. 8

Referente ao Esquema 2, a 3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina, intermediário 2-C é formada em quatro passos de reacção. Numa primeira reacção, o sal fosfónio apropriado é desprotonizado em solvente etéreo (éter, tetrahidrofurano, dioxano) com base forte (tal como alquillítio, hidreto de sódio ou potássio ou lítio diisopropil amida) e agitado a temperatura baixa sob uma atmosfera de gás inerte. 0 aldeído 2-A é adicionado à solução fria a a mistura agitada durante várias horas à temperatura ambiente. O reagente em excesso é retirado (com água ou um álcool), e a solução é filtrada, seca em Na2S04 (ou MgS04, CaCl2, CaS04, K2C03, ou outros agentes de secantes semelhantes), filtrada de novo e o solvente é retirado para originar o dieno 2-A' que é utilizado sem outra purificação. Num segundo passo, o 4—fenilurazolo é dissolvido em DMSO e arrefecido num aparelho de secagem, adiciona-se tosilisocianato como oxidante e continua-se a agitar. 0 dieno 2-A' é adicionado puro e a reacção continuada durante cerca de 30 minutos. A solução é vertida num solvente halogenado (clorofórmio, tetrahidrocloreto de carbono, cloreto de metileno, dicloroetano) e lavada com base aquosa (tal como NaOH, KOH, NaHC03, Na2C03 ou K2C03). A solução é seca sobre Na2S04 (ou MgS04, CaCl2, CaS04, K2C03, ou outros agentes de secagem semelhantes) e o solvente é retirado para originar 2-B. Num terceiro passo, a redução de 2-B é efectuada por agitação com gás H2 (1-3 atm) e Pd/C (5-10%) num solvente orgânico tal como etanol, acetato de etilo, ácido acético ou tetrahidrofurano até a quantidade teórica de hidrogénio ser consumida. O catalizador é retirado por filtração e o solvente é evaporado para originar 2-B'. Alternativamente, 2-B é reduzido num solvente etéreo (éter, tetrahidrofurano, dioxano) com diborano seguido por tratamento com ácido carboxílico a temperatura elevada. O ácido em excesso é 9 <Γ"- ν Λ 0 J \ Ί* Γ> Â^.v^ (pfi '? neutralizado e a solução é lavada. A solução é seca sobre Na2S04 (ou MgS04, CaCl2/ CaS04, K2C03, ou outros agentes secantes semelhantes) filtrado e o solvente retirado. No passo final, o urazolo 2-B' é hidrolizado com base tal como NaOH, KOH ou LiOH num solvente alcoólico tal como (metanol, etanol, etilenoglicol, propilenoglicol) a temperaturas elevadas. A oxidação ao ar do produto desejado 2-C ocorre espontaneamente. A solução é diluída com álcool, lavada com um solvente orgânico tal como éter ou cloreto de metileno e seca sobre Na2S04 (ou outro agente secante semelhante), filtrada e o solvente retirado. De facto, é claro que o intermediário 2-C pode ter substituintes R5* em qualquer das posições 4, 5 e 6. 10 ESQUEMA 2

Referente ao esquema 3, o intermediário 1-C ou 2-C é convertido no produto final numa acilação a um passo. A reacção de arilação, a 3-aril-l,4,5,6-tetrahidropiridazina apropriadamente substituída, intermediário 1-C ou 2-C é adicionada ao agente de acilação apropriado, i.e. haleto de fenilsulfonilo a uma base orgânica tal como piridina ou colidina, ou a um solvente orgânico tal como THF, cloreto de metileno ou tolueno com uma base tal como dmap ou trietilamina ou a uma base aquosa tal como hidróxido de sódio ou potássio.

'' <R5*) y

A parte haleto do agente de acilação pode ser qualquer haleto reactivo mas preferidos são cloro e bromo. O produto é isolado vertendo a mistura de reacção numa solução de ácido diluida tal como uma solução de ácido bromídrico ou clorídrico e extraindo com um solvente orgânico tal como cloreto de metileno 12

n (:, J-Â/U· “7 ou acetato dc etilo. A camada orgânica é então concentrada e o resíduo recristalizado ou cromatografado utilizando, por exemplo, cloreto de metileno e/ou éter e/ou acetato de etilo e/ou metanol em sílica gel. As fracções que contêm o produto são vaporadas e o resíduo recristalizado a partir de um solvente apropriado tal como acetona, éter, acetato de etilo, metanol ou hexano para originar os compostos 3-D e 3-G acilados desejados.

Por exemplo, para preparar as arilsulfoniltetrahidro-piridazinas 3-D, o cloreto de fenilsulfonilo apropriado é adicionado a cerca da temperatura ambiente à solução do intermediário 1-C ou 2-C num solvente orgânico tal como piridina ou uma solução de 4-N,N-dimetilaminopiridina em cloreto de metileno e a mistura resultante é agitada durante cerca de 1 hora a cerca de 72 horas. A mistura de reacção é então tratada com um solução acídica tal como diluir a HC1 ou HBr 6N, seguido de lavagens sucessivas com um solvente orgânico tal como clorofórmio ou cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados são secos com um agente secante tal como sulfato de sódio, sulfato de magnésio ou carbonato de potássio, concentrado e cromatografado utilizando por exemplo cloreto de metileno e/ou éter e/ou acetato de etilo e/ou metanol em sílica gel. As fracções desejadas são recristalizadas a partir de um solvente orgânico adequado tal como éter, acetato de etilo, metanol ou hexano para originar o fenilsulfoniltetrahidropiridazina 3-D.

Os agentes de acilação apropriados são bem conhecidos de pessoas competentes na matéria e podem ser preparados da seguinte forma: haleto de benzenossulfonilo; (Beilatine 11, 34; haleto de feniletenilsulfonilo, M. Culbertson, et al., J. Chem. Soc. (C) 992, (1968) e Beilstein 11, 2; haleto de fenilmetilsulfonilo, Beilstein 11, 116. 13

Referente ao esquema 4, os compostos da presente invenção nos quais r5* é um radical bivalente alquilo ou alenilo ligado à posição 5- e 6- são preparados favoravelmente via uma cicloadição entre um azoalqueno apropriado e um alqueno rico em electrões, e.g., dienos, incluindo ciclopentadieno. O azoalqueno é formado in situ por: (1) reagindo a fenilsulfonilhidrazida apropriada com um α-bromo- ou a-cloro-alquilarilcetona, e.g., cloroacetofenona, para originar a hidrazona 4-A correspondente; e (2) tratando a hidrazona 4-A com uma base tal como hidróxido de sódio, carbonato de potássio, carbonato de sódio ou bicarbonato de sódio para produzir o produto final 4-B. Esta reacção é ainda descrita por Clarke et al., J. Chem. Research (S), 310 (1985) e Faragher et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 249 (1979).

Por exemplo, adiciona-se uma 1-fenilsulfonil hidrazida a uma solução de α-cloroacetofenona num solvente orgânico tal como THF ou éter. A mistura é aquecida em refluxo durante cerca de 2 horas e então concentrada. Após arrefecimento a cerca de 14

,Lv' ^ Θ7 sr Λ-· / 0°C, produz-ee um resíduo sólido. O precipitado é lavado com um solvente orgânico tal como éter ou hexano e seco para originar a hidrazona 4-A' correspondente. Um dieno ou alqueno 4-A" rico em electrões (preferencialmente destilado de novo) tal como indeno, 1-metoxiciclohexeno, diciclopentadieno ou ciclopentadieno num solvente orgânico tal como éter ou THF é adicionado a uma solução da hidrazona, seguido da adição de uma base tal como carbonato de potássio ou bicarbonato de sódio. A mistura é agitada a uma temperatura próxima da ambiente durante cerca de 12 horas e então filtrada através de, por exemplo, florisil ou Celite. 0 filtrado é concentrado. 0 resíduo resultante é arrefecido a cerca de 0°C e triturado com um álcool tal como metanol ou etanol. Um sólido é precipitado da mistura, recolhido e lavado com um solvente orgânico tal como éter ou hexano para originar um composto de acordo com a presente invenção 4-B. Quando o alqueno empregue é um dieno, produz-se um produto que contém um resíduo insaturado, e.g., um radical duplo fundido R->* tal como —CH2-CH=CH-, O composto com o resíduo insaturado pode ser tratado com H2 e uma quantidade catalítica de um metal tal como óxido de platina ou paládio em carbono num álcool tal como isopropanol, metanol ou etanol para originar o composto correspondente em que o radical duplo insaturado é hidrogenado (saturado), i.e., o radical fundido —CH2-CH=CH- é convertido a —(CH2)3-. A reacção é efectuada por agitação de uma suspensão do composto com o resíduo insaturado num sistema de agitação Parr sob atmosfera de H2 durante cerca de 1 a 3 horas, a cerca de 20 a 50 psi, filtrado e concentrado. O produto de redução resultante é purificado através da cristalização num solvente orgânico tal como éter, hexano, etanol ou acetato de etilo.

Um método alternativo através do qual se pode produzir um intermediário do tipo 1-C e 2-C pode encontrado em N. Kalianam 15

C\ \U rt ____ ν-^Λν^ et al., synthetic Coiranunications, 18 (16 e 17) (1988). Neste método, um intermediário apropriado 1-C ou 2-C é preparado directamente a partir de uma 4-halobutiloarilcetona apropriada. A invenção também se refere ao racemato, estereoisõmeros e suas misturas. Os isómeros são isolados por técnicas de resolução padrão incluindo cristalização fraccionada e cromatografia em colunas quirais. O composto de acordo com a presente invenção também inclui sais e ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Embora o anel base de tetrahidropirizinas aciladas não forme sais ou ésteres, os seus substituintes, que incluem grupos carboxi ou amino, podem formar. No caso dos sais, há sais de adição ácida com substituintes contendo amina e sais básicos ou sais de metais alcalinos com substituintes contendo carboxi. Sais de adição ácida adequados podem ser formados através da combinação de substituintes contendo amina com cloretos, tal como cloridrato; sulfatos, tal como hidrosulfato; acetatos tal como ácido acético; etc. Sais básicos ou sais de metais alcalinos adequados podem ser formados através da combinação de substituintes contendo carboxi com bases contendo azoto, tais como, dimetilamina; bases contendo metais alcalinos, tais como hidróxido de sódio, hidróxido de litio ou carbonato de potássio. Pessoas competentes na matéria estão bem familiarizadas com estes sais. No caso de ésteres, substituintes contendo carboxi podem formar compostos desejados como ésteres com metilo, etilo, propilo, butilo, etc.

Espécies preferidas apresentando actividade agonista da progestina encontram-se ligadas a compostos seleccionados no grupo que consiste em: 3-(naft-2-il)-l-(4-iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4-diclorofenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6- 16

V

*7 tetrahidropiridasina; 3-(3,4-diclorofenil)-l-(4-diclorofenil)-1- (4-clorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2-naftilenosulfonil)-1-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4- bromobenzenossulfonil)-1-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4-metilbenzenossulfonil)-1-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4- trifluorometilbenzenossulfonil)-1-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4-bromobenzenossulfonil)-1- 1.4.5.6- tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)- 1-(4-iodobenzenossulfonil)-1-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; (R, S) 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-6-metil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina e (R,S) 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-l-(4-iodobenzenossulfonil)-6-metil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina.

Espécies preferidas apresentando actividade antagonista da progestina encontram-se ligadas a compostos seleccionados no grupo que consiste em: 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2,3- diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2,5-diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2(3- carbometoxipropoxi)-5-bromobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(2,5-diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; e (R,S) 3—(3,4-diclorofenil)-1-(2,5-diclorobenzenossulfonil)-5-metil- 1.4.5.6- tetrahidropiridazina.

Os compostos da invenção apresentam actividade in vivo e podem ser uteis no tratamento de doenças biológicas e condições que são agonisticamente ou antagonisticamente moduladas por esteróides, e.g. contracepção, menopausa, endometriose, cancro do 17

peito, sincronia cíclica, fibróides uterinas, dilação cervical, osteoporose e condições do sistema nervoso central.

Composições farmacêuticas que são úteis no tratamento de doenças biológicas ou condições compreendem os compostos de acordo com a presente invenção como os ingredientes activos em mistura completa com um suporte farmacêutico podem ser preparadas de acordo com técnicas de misturas farmacêuticas convencionais. O suporte pode tomar uma grande variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração, e.g., intravenosa, oral, transdérmica, intravaginal, supositórios ou parental. A composição pode também ser administrada através de um aerossol. Na preparação de composições na forma de dosagem oral, podem-se empregar qualquer das formas de meios farmacêuticos, tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, alcoóis, agentes aromatizantes, conservantes, corantes e semelhantes no caso de preparações líquidas orais (tais como, por exemplo, suspensões, elixires e soluções); ou suportes tais como amidos, açúcares, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, ligantes, desagregantes e semelhantes no caso de preparações sólidas orais (tais como, por exemplo, pós, cápsulas e comprimidos). Devido à facilidade de administração, os comprimidos e cápsulas representam a forma de dosagem unitária oral mais vantajosa, em cujo caso os suportes farmacêuticos sólidos são obviamente empregues. Se for desejado, os comprimidos podem ser revestidos com açúcar ou com revestimento entérico por técnicas padrão. Para parenterais, o suporte geralmente compreende água esterilizada, embora outros ingredientes, por exemplo, para melhorar a solubilidade ou para fins de conservação, podem ser incluídos, suspensões injectáveis podem também ser preparadas, em cujo caso suportes líquidos apropriados, agentes estabilizantes e semelhantes podem ser empregues. As composições farmacêuticas 18

< ' ο

Rr 7 tomam geralmentc a forma de uma unidade de dosagem, e.g. comprimido, cápsula, pó, injecção, uma colher de chá e semelhantes, de cerca de 1 μςΑς a cerca de 100 μg/kg, e preferencialmente de cerca de 20 μg/kg a cerca de 20 mg/kg dos ingredientes activos.

Portanto, os compostos podem ser úteis como contaceptivos, e no tratamento da menopausa, endometrise, cancro do peito, sincronia do ciclo, fibrose uterina, dilatação cervical e osteoporose.

Os exemplos experimentais seguintes descrevem a invenção em grande pormenor e pretendem ser uma forma de ilustração mas não limitar a invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1 6-(4-Clorofenil)piridazina-3-ona

Adicionou-se hidrazina (8,9 ml, 0,28 moles) a uma suspensão de ácido 3-(4-clorobenzoil)propiónico (30,0 g, 0,14 moles) em EtOH. A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 1 hora, agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e arrefecida num banho de gelo. O composto do título precipitou desta mistura (23,85 g, 81%) sob a forma de um sólido amarelo: p.f. 175-176°C.

As piridazin-3-onas listadas no Quadro 1 foram preparadas essencialmente através do procedimento acima, utilizando os materiais de partida apropriados. 19

QUADRO 1 (^)2 I (R5)2

tf— NH

Comp. R1 R5 p.f. 1-1 4-C1 H 175-176 1-2 3-C1 H 148-150 1-3 4-Br H 165-166 1-4 H H 192-194 1-5 4-NMe2 H 1-6 4-OMe H 148-149 1-7 H H 150-151 1-8 3-C1,4-Cl H 168-169 1-9 3-CF3,4-C1 H 191-192 1-10 4-n-Bu H 1-11 3-Br,4-NH2 H 1-12 3-Br,5-Br H 1-13 3,4-(CH2)4- H 1-14 3,4-0(CH2)20- H 20

r\ u í J Γ Λ.-»- ~n—7 1-15 3,4-CH=CHCH=CH- H 209-210 1-16 2,3-CH=CHCH=CH- H 135-136 1-17 3,4-N(Me)C(0)CH2S(0)2- H 300-301 1-18 3,4-N(Me)C(0)CH2S- H 241-242 1-19 4-SCH3 H 1-20 4-S02CH3 H 1-21 H 5-CH3 155-158 1-22 H 5-CH3,5-CH3 166-167 1-23 4-Ph H 295-300 Exemplo 2 (4-Clorofenil)piridazina

Adicionou-se uma solução de hidreto de lítio alumínio/THF (1 Molar, 173 ml) gota-a-gota a uma suspensão de piridazin-3-ona 1B (Ri = 4-C1; 12,0 g, 57,5 mmoles) em THF a 0°C. A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 1 hora, e arrefecida a 0°C. Adicionou-se água (6,5 ml) a esta mistura, seguida da adição sucessiva de NaOH (IN, 6,5 ml), e de água (12 ml). O precipitado resultante foi retirado da solução mãe seguido do tratamento da referida solução mãe com carbonato de potássio. A solução orgânica resultante foi adicionada de dihaleto de arilfosfonilo concentrado para originar o composto do título sob a forma de um óleo espesso (9,65, 87%) 21 7 7

Via: Ρη

As piridazinas seguintes listadas no Quadro 2 foram preparadas essencialmente pelo procedimento acima, utilizando os materiais de partida apropriados. Todos os produtos são óleos. QUADRO 2

Comp. (^>2 (R5)2 Ó-Λ y=/ tf-NH R1 R5 2-1 4-C1 H 2-2 3-C1 H 2-3 H H 2-4 4-NHMe2 H 2-5 4-OMe H 2-6 H H 2-7 H 5-CH3 2-8 H 5-CH3,5-CH3 2-9 3-C1,4-C1 H 2-10 3-CF3,4-C1 H 2-11 4-n-Bu H 22

\ji ί> · - Γ

2-12 3-Br,4-NH2 H 2-13 3-Br,5-Br H 2-14 3,4-CH=CHCH=CH- H 2-15 3,4-0(CH2)20- H 2-16 3,4-CH=CHCH=CH- H 2-17 3,4-N(Me)C(0)CH2S— H 2-18 3,4-N(Me)C(0)CH2S(O)2- H 2-19 4-SCH3 H 2-20 4-S02CH3 H 2-21 4-Ph H

Exemplo 3 3-(4-Cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 1)

Adicionou-se cloreto de 4-iodobenzenossulfonilo (1 ,18 g, 5,03 mmoles) à temperatura ambiente a uma solução de piridazina (1C) (Rl = 3-CF3, 4- Cl: 0,62 g, 2,36 mmoles) em piridina e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. Adicionou-se HCl 2N à mistura de reacção seguida de lavagens sucessivas com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram secos (K2C03), adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado e passou-se através de uma coluna de sílica gel. As fracções desejadas foram recristalizadas a partir 23

de acetato de etilo/éter para originar o composto do título sob a forma de um sólido (0,30 g): p.f. 153-154°C.

Anal. Calculado: C^Hi^C^I^C^S: C, 38,61; H, 2,48; N, 5,30

Encontrado: C, 38,81; H, 2,44; N, 5,32

As piridazinas aciladas seguintes listadas no Quadro 3, Quadro 3a e Quadro 4 foram preparadas essencialmente pelo procedimento acima, utilizando os materiais de partida apropriados. QUADRO 3

I

Análise

Cpd R1 R3 p.f. : (°C) C H N 1 3-CF3, 4-C14-I 153-154 38,81 2,44 5,32 2 H 4-Me 160-161 65,00 5,72 9,05 3 4-OMe 4-Me 141-142 62,50 5,69 8,13 4 4-C1 4-N02 164-165 50,73 3,58 11,15 5 4-C1 2-Cl,5-C1 148-149 47,67 3,16 6,91 6 4-Cl 4-C1 170-171 52,14 3,68 7,52 7 4-F 4-C1 151-152 54,31 3,84 8,08 8 4-C1 4-Me 157-158 58,57 4,86 8,01 9 4-F 4-Me 139-140 61,42 4,96 8,45 10 4-F 4-NO 2 152-153 52,78 3,69 11,34 24

11 4-F 2-C1,5-Cl 122-123 49,50 3,14 7,16 12 4-ci,: 3-C14-C1 153-154 48,61 3,23 7,16 13 4-C1 4-Br 178-180 46,50 3,18 6,56 14 4-Cl 3-NO 2 162-163 50,66 3,51 10,86 15 4-C12 ,3-CH=CHCH=CH- 148-149 62,62 4,07 7,27 16 4-Cl 4-1 162-163 41,93 2,80 5,98 17 4-Cl 4-F 159-160 54,57 3,77 8,07 18 4-F 4-F 147-148 57,18 3,87 8,55 19 4-F 4-Br 157-158 48,34 3,23 6,87 20 4-F 4-1 150-151 43,27 2,90 6,04 21 4-F 4-F,3-N02 149-150 52,88 3,60 11,37 22 4-Cl, 3-Cl2-Cl,5-Cl 176-177 43,88 2,68 6,22 23 4-F 2-N02,4-N02 149-150 46,85 3,11 13,71 24 4-F 2-NO 2 159-160 52,48 3,76 11,44 25 4-F 3, ,4-CH=CHCH=CH- 179-180 65,14 4,63 7,64 26 4-F 2-C02Me 150-151 57,22 4,51 7,40 27 4-Cl 2-N02 182-183 50,68 3,74 11,34 28 4-Cl 2-N02,4-N02 186-187 45,22 2,97 13,20 29 4-Cl 2-C02Me 153-154 55,15 4,22 7,12 30 4-Cl 3-C1,4-Cl 163-164 47,63 3,18 7,08 31 4-Cl 3-C1,5-Cl 149-150 47,70 3,14 6,93 32 4-Cl 2-F,4-F 115-116 52,11 3,46 7,51 33 4-Cl 3-CF3,5-CF3 154-155 45,99 2,66 5,75 34 4-Cl 3-NO 2 187-188 46,24 3,12 10,10 35 4-Cl 3-CF 3 178-179 50,76 3,47 6,93 36 4-Cl 4-CF 3 126-127 50,97 3,38 6,90 37 4-Cl H 203-204 57,38 4,37 8,35 38 4-Cl, 3-C14-N02 174-175 46,54 3,14 10,18 39 4-Cl, 3-Cl4-Br 175-176 42,42 2,99 6,43 40 4-Cl, 3-C14-I 184-185 39,24 2,67 5,76 41 4-Cl, 3-Cl4-Me 150-151 53,65 4,17 7,29 42 4-Cl, 3-C13,4-CH=CHCH= =CH-136-137 57,49 3,79 6,74 25 Í~Í7 Γ\ V ·, 43 4- Cl, 3-C1H 160-161 52,00 3,88 7,75 44 4- C1 2,3-CH=CHCH=CH- 195-196 62,35 4,39 7,30 45 4- -Cl,3-C1 4-n-Bu 140-141 61,39 5,90 7,21 46 4- -Cl,3-C1 3,4-C(NMe2) =CHCH=CH- 164-165 61,80 5,36 9,89 47 4- -Cl,3-C1 2-C02Me 121-122 50,63 3,75 6,49 48 Η 4-Cl 153-154 57,24 4,34 8,66 49 Η 4-Br 145-146 50,65 3,64 7,68 50 Η 4-1 143-144 44,99 3,15 6,70 51 Η 3,4-CH=CHCH=CH- 137-138 68,37 5,19 8,28 52 Η 2-C1,5-C1 140-141 51,93 3,59 7,16 53 Η 4-N02 170-171 55,88 3,97 11,77 54 Η 4-F 125-126 60,54 4,45 8,39 55 Η 4-n-Bu 84-85 67,34 6,46 7,52 56 Η 2,3-CH=CHCH=CH- 177-178 68,23 5,10 7,91 57 Η3,4-C(NMe2)=CHCH=CH- 139-140 67,04 5,66 10,39 58 Η 4-Cl,3-N02 127-128 50,50 3,45 10,98 59 Η 2-F,4-F 120-121 56,97 3,84 8,30 60 Η 3-C1,4-Cl 140-141 51,99 3,54 7,55 61 Η 4-CF 3 155-156 55,77 3,94 7,67 62 Η 3-N02 173-174 55,61 3,99 11,90 63 4- -OMe 4-Cl 164-165 56,11 4,47 7,61 64 4- -OMe H 185-186 61,85 5,22 8,45 65 4- -OMe3,4-CH=CHCH=CH- 145-147 66,28 5,22 7,40 66 Η H 167-168 64,04 5,29 9,32 67 4- -Cl 4-Cl,4-N02 186-187 46,51 3,31 10,22 69 4- -n-Bu 2-Cl,5-Cl 95-97 56,41 5,22 6,59 70 4- -n-Bu 3-N02 119-120 59,91 5,61 10,31 71 4- -n-Bu 4-1 121-122 49,65 4,69 5,63 72 4- -n-Bu3,4-CH=CHCH=CH- 140-141 70,87 6,33 6,74 73 4- -n-Bu 4-Cl 108-109 61,32 5,74 7,04 74 4- -n-Bu 4-Me 106-107 68,10 7,01 7,58 75 4- -n-Bu 4-n-Bu 102-103 69,66 7,79 6,83 26 Γ\ λ___ bj-~^· 76 4-n-Bu H 109-110 67,24 6,71 7,93 77 3-CF3,4-C14-C1 134-135 46,78 2,91 6,47 78 3-CF3,4-C13,4-(CH2) 4- 130-131 38,81 2,44 5,32 79 3-CF3,4-C12-C1,5-C1 160-161 55,56 3,44 6,26 80 3-CF3,4-C13-C1,5-C1 124-125 43,42 2,54 6,02 81 3-CF3,4-C13-C1,4-C1 138-139 43,27 2,52 5,87 82 3-CF3,4-C14-Me 136-137 43,77 2,55 6,10 83 3-CF3,4-C1H 155-156 52,21 3,73 6,80 84 4-Ph 4-Cl 194-195 64,08 4,62 6,78 85 4-Ph3,4-CH=CHCH=CH- 193-194 73,28 5,07 6,52 86 4-Ph H 204-205 69,92 5,34 7,42 87 3,4-(CH2)4'4-Me 143-144 68,43 6,81 7,46 88 3,4-(CH2 ) 4"4-Cl 165-166 61,72 5,57 7,11 89 3,4-(CH2)4'2-Cl, 5-C1 153-153 56,75 4,60 6,56 90 3,4-(CH2)4"H 151-153 67,52 6,37 7,91 91 3-C1 2-Cl,5-C1 115-116 47,64 3,01 6,82 92 3-C1 4-Me 129-130 58,53 4,91 8,07 93 3-Cl 4-Cl 123-124 51,95 3,66 7,53 94 3-C13,4-CH=CHCH=CH- 154-155 51,95 3,66 7,53 95 3-C1 H 129-130 57,22 4,37 8,36 96 3-Cl 4-1 131-132 41,75 2,98 6,04 97 4-Cl,3-C14-CF3 139-141 46,48 2,92 6,46 98 4-Cl,3-C13-CF3 185-186 46,64 2,76 6,18 99 4-Br 4-Cl 182-183 46,13 3,18 6,38 100 4-Br 4-Br 192-193 41,80 2,96 5,73 101 4-Br 4-Me 175-176 51,94 4,29 6,90 102 4-Br 2-C1,5-C1 168-169 42,56 2,86 5,99 103 4-Br H 205-206 50,59 3,92 7,09 104 4-Cl,3-C13-C1,5-C1 142-143 43,76 2,59 6,10 105 4-Cl,3-C12-C1,3-Cl 142-144 43,81 2,66 6,25 106 4-Cl,3-C14-F 141-142 49,52 3,30 7,03 108 4-Cl,3-C14-n-Bu 128-129 56,43 5,18 6,28 27

109 4-Cl, 3-C13-C1 189-190 47,49 3,23 6,62 110 4-Cl, 3-CL12,3-CH=CHCH=CH- -150-151 57,16 3,81 6,46 111 4-Cl, 3-C13-N02, 4-C1 157-158 42,93 2,60 8,98 112 3,4-C(OMe)H=CHCH=CH- 4-1 143-145 50,19 3,68 5,37 113 3,4-(CH2)4-4-1 170-172 50,03 4,47 5,86 114 4-Cl,3-CI 3,4-(CH2)4- 135-136 56,59 4,53 6,55 115 3-CF3, 4-C14-Br 139-140 42,45 2,70 5,82 116 3-CF3, 4-C14-n-Bu 95-96 54,97 4,79 6,04 117 3,4-CH=CHCH=CH- 4-C1 160-161 62,38 4,30 7,24 118 3,4-CH=CHCH=CH- 2-C1,5-C1 158-159 57,26 3,72 6,69 119 3,4-CH=CHCH=CH- 4-1 169-170 50,27 3,48 5,67 120 3,4-CH=CHCH=CH- 4-Me 153-154 69,27 5,26 7,73 121 4-CI, 3-C14-n-Hex 96-97 58,17 5,63 6,10 122 2,3-CH=CHCH=CH- 4-Me 159-163 61,99 4,25 7,09 123 3,4-0(CH2)20- 2-C1, 5-C1 147-148 50,61 3,53 6,56 124 3,4-0(CH2)20- 4-C1 143-145 55,21 4,04 7,17 125 3-CF3, 4-C14-CF3 104-106 46,30 2,54 2,65 126 3-CF3, 4-C13-CF3 144-145 45,88 2,72 5,84 127 3-CF3, 4-C13-N02 149-150 45,58 2,82 9,19 128 3-CF3, 4-C14-N02 172-173 45,66 2,81 8,98 129 3,4-CH=CHCH=CH- 4-CF3 166-167 60,08 3,74 6,67 130 3,4-CH=CHCH=CH- 3-CF3 154-155 60,14 3,79 6,66 131 3,4-CH=CHCH=CH- H 198-200 68,39 5,01 8,00 132 3,4-CH=CHCH=CH- 3,4-CH=CHCH=CH- 173- 174 71, 634,67 6,91 133 H 4-OCH3 115-117 61,89 5,41 8,15 134 4-SCH3 4-CH3 159-161 60,02 5,56 7,74 135 4-SCH3 4-1 177-179 43,39 3,57 5,84 136 4-C1,3-C1 2-0(CH2)3C02Me, 5-B 76-79 45,66 4,06 4,61 137 4-Ome 2-0(CH2)gC02Me, 5 -Br 96-97 51,20 5,01 5,12 138 3,4-N(Me)C(0)CH2S- 4-1 199-203 43,62 3,09 7,65 139 3,4-N(Me)C(0)CH2S- 4-1 127-131 39,97 3,01 7,02 140 H 4-SCH3 120-121 58,89 5,26 7,99 28 QUADRO 3a \.]

ν' (^>2

I ΠΛ / \ (R3)2 -O.

^=7 lí—N ^so.

Análise

Comp. R1 R3 68 4-C1 2-Cl,4- -Cl 107 4-C1,3-C1 2-C1,4- -Cl

Ra p. f. : (°C) C Η N 5-Cl 151-152 43,87 2,83 6,42 5-Cl 184-185 40,602,34 5,85 QUADRO 4

Análise

Comp. R1 R3 R5 p.f : (0| C) C H N 141 H 3-CF3 5-Me 30- •131 56,37 4,14 7,32 142 H 4-Br 5-Me 34- 135 52,00 4,26 7,11 143 H 4-Me 5-Me 38- -139 65,55 6,24 8,48 144 H 2-Cl, 5-C1 5-Me 54- -155 53,25 4,00 7,24 29 \ Γ\

Mj- s.<~ '-'7

Exemplo 4 3-(Dibenzofuran-3-il)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 145)

Adicionou-se cloreto de 4-iodobenzenossulfonilo (0,54 g, 2,16 mmoles) à temperatura ambiente a uma solução de ácido 4-oxo-4-(dibenzofurano-4-il)butírico (0,65 g, 2,16 mmoles) em piridina e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. Adicionou-se HC1 2N à mistura de reacção seguida de lavagens sucessivas com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram secos (K2C03), adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado e passou-se através de uma coluna de sílica gel. As fracções desejadas foram recristalizadas a partir de acetato de etilo/éter para originar o composto do título sob a forma de um sólido (0,14 g): p.f. 166-169°C.

Anal. Calculado: C22H17IN2O3S: C, 51,17; H, 3,32; N, 5,43

Encontrado: C, 51,27; H, 3,30; N, 5,23

Exemplo 5 3-(Dibenzofuran-3-il)-1-(4-clorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 146) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 4 com o ácido 4-oxo-4-(dibenzofurano-4-il)butírico (0,54 g, 2,16 mmoles) de partida em cloreto de 4-clorobenzenossulfonilo (0,46 ml, 2,16 mmoles) para originar um sólido: p.f. 163-166°C. 30

Anal. Calculado: C22H17CIN2O3S: C, 69,10; H, 5,49; N, 8,95 Encontrado: C, 69,31; H, 5,35; N, 9,02

Exemplo 6 1-(4-Metilsulfinilbenzenossulfonil)-3-fenil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 147)

Adicionou-se MCPBA (0,,63) à temperatura ambiente a uma solução de 3-fenil-l-(4-tiometilbenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (1,0 g) em cloreto de metileno. A mistura resultante foi agitada e monitorada por TLC até a piridazina de partida ser consumida. A mistura foi adicionada de dihaleto de arilfosfonilo concentrado e purificada através de cromatografia em coluna de sílica gel utilizando cloreto de metileno como eluente para originar um sólido: p.f. 137-139°C.

Anal. Calculado: C17H18N2O3S2: C, 56,33; H, 5,00; N, 7,73

Encontrado: C, 56,37; H, 4,87; N, 7,54

Exemplo 7 1-(4-Iodobenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 148)

Adicionou-se uma solução de l-(4-iodobenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (1,27 g, 2,69 mmoles) em metanol (450 ml) a uma solução de periodato de sódio (0,61 g, 2,82 mmoles) em água (6 ml) e agitada a uma temperatura reduzida durante 16 horas. A mistura resultante foi filtrada, adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado e 31

purificou-se através de cromatografia em coluna de sílica gel utilizando éter/cloreto de metileno como eluente para originar o composto do título sob a forma de um sólido: p.f. 191-193°C.

Anal. Calculado: C17H17IN2O3S2: C, 41,81; H, 3,52; N, 5,73

Encontrado: C, 42,21; H, 3,77; N, 5,46

Exemplo 8 1-(4-Metilbenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 149) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 7 com l,4,5,6-tetrahidro-l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-piridazina (1,0 g, 2,77 mmoles) e periodato de sódio (0,62 g, 2,91 mmoles) em água (5,82 ml) para originar um sólido: p.f. 212-213°C.

Anal. Calculado: CigH2()N203S2:. C, 57,42; H, 5,37; N, 7,44

Encontrado: C, 57,32; H, 5,45; N, 7,52

Exemplo 9 1-(4-Metilbenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 150) 0 composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 6 com l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (0,5 g, 1,33 mmoles) e MCPBA (0,28 g, 1,33 mmoles) para originar um sólido: p.f. 229-230°C. 32

I, » t- .Λ x-

Anal. Calculado: C2gH20N2°4®2: C, 55,08; H, 5,15; N, 7,13

Encontrado C, 54,73; H, 5,28; N, 6,82

Exemplo 10 1-(4-Iodobenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfonilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 151) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 6 começando com l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-(4-metilsulfinilfenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (0,5 g, 1,02 mmoles) e MCPBA (0,22 g, 1,02 mmoles) para originar um sólido: p.f. 198-204°C.

Anal. Calculado: C18H20IN2O4S2: C, 40,48; H, 3,40; N, 5,55 Encontrado: C, 40,45; H, 3,07; N, 5,44

Exemplo 11 3-(4-Fluorofenil)-1-(pentafluorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 152) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 3 começando com piridazina (1C) (Ri=4-F) e cloreto de pentafluorobenzenossulfonilo para originar um sólido: p.f. 140-141°C.

Anal. Calculado: CigHigFg^C^S'· C, 47,06; H, 2,47; N, 686 Encontrado: C, 47,14; H, 2,32; N, 6,85 33

Γ\ Λ

/

Exemplo 12 1-(4-Aminobenzenossulfonil)-3-(4-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 153)

Suspendeu-se (4-clorofenil)-1-(4-nitrobenzenossulfonil) —1,4,5,6-tetrahidropiridazina (2,12 g, 5,60 mmoles) em ácido acético a 80°C. Adicionou-se limalha de ferro (3,0 g) a esta suspensão e a mistura de reacção resultante foi aquecida a 80°C durante 30 minutos e filtrada. Após arrefecimento o composto do titulo precipitou nesta mistura sob a forma de um sólido: p.f. 205-206°C.

Anal. Calculado: C^HigCl^C^S: C, 54,92; H, 4,61; N, 12,01

Encontrado: C, 54,92; H, 4,64; N, 12,17

Exemplo 13 1-(4-Aminoacetilbenzenossulfonil)-3-(4-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 154)

Dissolveu-se 1-(4-aminoacetilbenzenossulfonil)-3-(4- clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (0,52 g) em anidrido acético e agitou-se à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Após arrefecimento o composto do título precipitou nesta mistura sob a forma de um sólido: p.f. 247-248°C.

Anal. Calculado: C18H18C1N303S: C, 55,16; H, 4,64; N, 10,72

Encontrado: C, 55,34; H, 4,60; N, 10,74 34

Exemplo 14 3-Penil-l-(4-metilbenzenossulfonil)-4,4a,5,7a-tetrahidro-lH-ciclopenta[c]piridazina (Composto 155)

Adicionou-se 4-toluenosulfonilhidrazida (5 g) a uma solução de alfa-cloroacetofenona (4,55 g) em éter. A mistura foi aquecida a refluxo durante 2 horas e adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado. Arrefeceu-se o resíduo resultante a 0°C. Produziu-se um precipitado sólido que foi lavado com hexano e seco para originar a hidrazona (4A1) (X=C1, Ri=H, R3=4-CH3; 5,3 g) sob a forma de um sólido:

Adicionou-se ciclopentadieno (3 ml) destilado recentemente a uma solução de hidrazona (4A’) (X=C1, Ri=H, R3=4-CH3; 1,5 g) em THF, seguido da adição de bicarbonato de sódio (2,5 g). A mistura foi agitada a 22°C durante 12 horas e filtrada através de celite. O filtrado foi adicionado de dihaleto de arilfosfonilo concentrado e o resíduo resultante foi arrefecido com gelo e triturado com etanol. O sólido que precipitou nesta mistura foi recolhido e lavado com hexano para originar o composto do título sob a forma de um sólido: p.f. 163-165°C.

Anal. Calculado: C20H20N2°2S: cr 68,15; H, 5,73; N, 7,94

Encontrado: C, 67,97; H, 5,94; N, 8,26 35

Cjx

Exemplo 15 4,4a,5,7a-Hexahidro-3-fenil-1-(4-metilbenzenossulfonil)-1H-ciclopenta[c]piridazina (Composto 156)

Adicionou-se uma quantidade catalítica de paládio em carbono a uma solução de 3-fenil-1(4-tolilsulfonil)-4,4a,5,7a-tetrahidro-lH-ciclo[c]piridazina (0,5 g) em etanol. A suspensão foi colocada num agitador Parr sob atmosfera de H2 (40 PSI) e agitada durante 3 horas. A mistura foi filtrada através de celite e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por recristalização em acetato de etilo para originar o composto do título sob a forma de um sólido: p.f. 171-176°C.

Anal. Calculado: C20^22^2^2^: C, 67,76; H, 6,27; N, 7,90

Encontrado: C, 67,63; H, 6,38; N, 7,99

Exemplo 16 4,4a,5,7a-Tetrahidro-l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-fenil-biciclo[2,2,1]hept-7-enil[5,6-a]ciclopenta-[1,2-e]piridazina (Composto 157) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 14 utilizando diciclopentadieno (5,5 ml) em vez de ciclopentadieno para originar um sólido: p.f. 155-159°C.

Anal. Calculado: ¢25^26^2^2^5 C, 71,73; H, 6,27; N, 6,69

Encontrado: C, 71,75; H, 6,32; N, 6,60 36 7

I___Í-;

Exemplo 17

Hemihidrato de 1,4,4a,9a-tetrahidro-4-(4-metilbenzenossulfonil)-2-fenil-3,4-diazafluoreno (Composto 158) 0 composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 14 utilizando indeno (3,45 ml) em vez de ciclopentadieno para originar um sólido: p.f. 180-181°C.

Anal. Calculado: C24H22N2O2S: C, 70,04; H, 5,40; N, 6,80

Encontrado: C, 70,05; H, 5,56; N, 6,93

Exemplo 18 1,4,4a,5,6,7,8,8a-Octahidro-8a-metoxi-l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-fenil-1,2-diazanaftaleno (Composto 159) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 14 utilizando metoxiciclohexeno (2,7 g) em vez de ciclopentadieno para originar um sólido: p.f. 112-114°C.

Anal. Calculado: C22H26N2°3S: c, 66,30; H, 6,60; N, 7,03

Encontrado: C, 66,07; H, 6,34; N, 6,94

Exemplo 19 3-(4-Clorofenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-4,4a,5,7a-tetrahidro-lH-ciclopenta[c]piridiazina (Composto 160) O composto do título foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 14 começando com 4-iodobenzenossulfonil 37

λ _

hidrazida (2 g), 2-bromo-41-cloroacetofenona (1,57 g) © ciclopentadieno para originar um sólido: p.f. 112-114°C.

Anal. Calculado: C^gH^gClI^Í^S: C, 45,75; H, 3,24; N, 5,61

Encontrado: C, 45,72; H, 3,05; N, 5,46

Exemplo 20 1,4,4a,9a-Tetrahidro-l-(4-metilbenzenossulfonil)-3-(3-bromofenil)biciclo[2,2,1]hept-7-enil[5,6-a Jciclopenta[1,2-elpiridazina (Composto 161) O composto do titulo foi preparado de acordo com o descrito no Exemplo 14 começando com 4-toluenosulfonil hidrazida (8,8 g), 2-bromo-3'-bromoacetofenona (13,17 g) e diciclopentadieno (8,8 ml) para originar um sólido: p.f. 159-161°C.

Anal. Calculado: ¢25^25^^202^ C, 60,36; H, 5,08; N, 5,63 Encontrado: C, 60,45; H, 4,95; N, 5,46

Exemplo 21 4,4-Dibromo-3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 162)

Adicionou-se bromo (5 g) em ácido acético (5 ml) a uma solução de 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-l-(4-

iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (1,0 g) em ácido acético (50 ml). A mistura foi agitada a 25°C durante 3 horas e adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado. O 38

resíduo foi recristalizado em éter para originar o composto do título sob a forma de um sólido: p.f. 148-150°C.

Anal. Calculado: Ci7HnBr2ClF3lN202: C, 29,74; H, 1,62; N, 4,08

Encontrado: C, 30,02; H, 1,63; N, 4,00

Exemplo 22 [2-(3-Clorofenileteno)sulfonil]-3-(4-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 163)

Adicionou-se 3-cloreto de cloroestirenosulfonilo (1,07 g, 4,5 mmoles) à temperatura ambiente a uma solução de piridazina (1C) (Ri=4-Cl, 3-Cl: 0,88 g, 4,5 mmoles) em piridina e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas. Adicionou-se HC1 2N á mistura de reacção e seguido de lavagens sucessivas com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram secos (K2C03), adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado e foram purificados através de cromatografia em coluna em sílica gel. As fracções desejadas foram recristalizadas em acetato de etilo/éter para originar o composto do título sob a forma de um sólido (0,33 g): p.f. 142-143°C.

Anal. Calculado: CigH16c-*-2N202S: c> 54,67; H, 4,09; N, 7,08

Encontrado: C, 54,67; H, 4,09; N, 7,08

As piridazinas aciladas seguintes listadas no quadro 5 foram preparadas essencialmente através do procedimento descrito acima, utilizando os materiais de partida apropriados. Os sulfonilcloretos de estireno substituídos utilizados para preparar os compostos desejados foram sintetizados utilizando o 39

Γ\ V* fi ,^'\Κ__-Λ procedimento descrito em Culbertson, M et ai., J. Chem. Soc. (C) 992 (1968). QUADRO 5

Cpd, R1 R3 pf:(°C) 164 4-03,4-CH=CHCH: =CH- 167-168 165 4-0 4-C1 161-162 166 4-Cl H 148-149 167 4-C1,3-C1H 139-140 168 4-C1,3-ClPh 171-172 169 4-Cl,3-C14-Me 138-139 170 4-C1,3-C14-C1 157-158 171 4-Cl, 3-C1 3,4-( CH=CHCH=CH- 209-210 172 4-Cl,3-C13-C1 131-132 173 4-Cl,3-C12-0 154-155 174 3,4-CH=CHCH=CH - H 158-159 175 3,4-CH=CHCH=CH - 4-Me 121-122 176 3,4-(CH2)4- H 153-155 177 3-CF3,4-Cl 3,4 -CH=CHCH=CH 160-161 178 3-CF3,4-Cl 4- Cl 167-168 276 3-CF3,4-Cl H 131-132

Análise C H N 64,36 4,67 6,83 54,59 3,93 7,13 60,90 4,84 7,49 54,75 4,04 7,05 61,34 4,02 5,78 55,79 4,44 6,75 50,23 3,54 6,44 59,48 3,97 6,30 50,33 3,35 6,52 50,16 3,30 6,52 70,26 5,01 7,33 70,82 5,52 7,08 69,45 6,54 7,31 57,57 3,79 5,79 49,08 3,07 5,93 53,20 3,73 6,54 40

Exemplo 23 3-(3,4-Diclorofenil)-1-(4- pentafluoroetilbenzenossulfonil)—1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 272)

Uma pasta de 3-(3,4-diclorofenil)-l-(4- iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (2,28 g), iodeto de cobre (1,8 g), pentafluoropropionato de sódio (1,58 g) e DMF (20 ml) em tolueno (20 ml) foi destilada a 120°C, até a maior parte do tolueno ser removida. A mistura resultante foi aquecida a 155°C durante 2 horas, arrefecida, vertida em água e extraída com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução salina, secos com K2C03 e adicionou-se dihaleto de arilfosfonilo concentrado. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna em sílica gel utilizando cloreto de metileno/hexano como eluente para originar o composto do título sob a forma de vim sólido: p.f. 158-160°C.

Exemplo 24 1-(4-Iodobenzenossulfonil)-3-(4-dimetilaminofenil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 209)

Adicionou-se cloreto de 4-iodobenzenossulfonilo a uma solução de piridazina (1C) (Ri=4-N(Me)2: 0,67 g, 3,25 mmoles) em piridina. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas, seca e concentrada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica gel utilizando cloreto de metileno como eluente, seguido por recristalização das fracções desejadas em acetato de etilo para originar o composto desejado sob a forma de um sólido: p.f. 203-205°C. 41

JU jr Pp

Anal. Calculado: C19H20IN3O: C, 46,06; H, 4,30; N, 8,95 Encontrado: C, 46,07; H, 4,18; N, 8,56

As piridazinas aciladas seguintes listadas no quadro 7 foram preparadas essencialmente através do procedimento descrito acima, utilizando os materiais de partida apropriados. QUADRO 7

(RX)2 I

Análise

Comp. R1 R3 p. f.: (°C) C Η N 209 4-NMe2 4-1 203-205 46,07 4,18 8,56 210 4-NMe2 4—F 181-182 59,46 5,32 11,25 212 4-NMe2 4-C1 172-174 66,41 5,72 12,01 213 4-NMe2 4-Br 188-200 50,88 4,64 9,56 42

Exemplo 25 1-(4-Iodobenzenossulfonil)-3-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-6-metil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 281)

Dissolveu-se 4-fenilurazolo (4,74 g, 0,027 mmoles) em DMSO seco e arrefeceu-se a 10°C sob atmosfera de azoto. Adicionou-se isocianato de tosilo (5,39 g, 0,027 mmoles) e permitiu-se que a mistura atingisse a temperatura ambiente. Adicionou-se 4-cloro-3-trifluorometilfenil-1,3-pentadieno lentamente enquanto que a solução foi arrefecida a 15°C. Após 30 minutos a reacção foi diluída com clorofórmio (500 ml) e lavada com solução 5% de NaOH. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio e filtrada. 0 solvente foi retirado a pressão reduzida e o resíduo foi utilizado no passo seguinte. O resíduo acima (3,0 g) foi dissolvido em THF e adicionou-se um equivalente de diborano lentamente a 0°C. Após a adição, a mistura foi aquecida a 45°C durante 2 h. Adicionou-se ácido propiónico e a temperatura aumentou a 80°C durante 1,5 h. Adicionaram-se água e solução saturada de NaHC<>3 e a mistura foi extraída com éter e diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2S04, filtradas e evaporadas à secura. 0 resíduo acima (1 g) foi dissolvido em etilenoglicol e cinco equivalentes de hidróxido de potássio e aquecido a 110°C durante 3 h. Adicionou-se água (400 ml) e a mistura foi extraída com éter e diclorometano. Após secagem (Na2S04) e filtração, retirou-se o solvente a pressão reduzida para originar 700 mg de produto.

Combinou-se 3-(3-trifluorometil-4-clorofenil)-6-metil-1,4,5,6-tetrahidropiridazina (700 mg) com cloreto de 43

4—iodobenzenossulfonilo (558 mg) e aqueceu-se a 105°C durante 3 h. Adicionou-se diclorometano e a solução lavada com água, 10% HCL, NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi seca (Na2S04), filtrada e o solvente retirado a pressão reduzida para originar um resíduo que foi recristalizado em acetona/hexano para originar 148 mg do composto do título com p.f. 157-158°C.

Anal. Calculado: C18H15ClF3lN202S: C, 39,83; H, 2,79; N, 5,16

Encontrado: C, 39,56; H, 2,65; N, 5,19

Exemplo 26 1-(4-Iodobenzenossulfonil)-3-(3,4-diclorofenil)-6-metil-l,4,5,6-tetrahidropiridazina (Composto 282) O método de acordo com o exemplo 30 foi empregue utilizando 3,4-diclorofenil-l,3-pentadieno para originar o produto desejado com p.f. 194-196°C.

Anal. Calculado para C17H15CI2IN2O2S: C, 40,10; H, 2,97; N, 5,50

Encontrado: C, 39,97; H, 2,80; N, 5,46

MÉTODOS PARA A DETERMINAÇÃO DA ACTIVIDADE PROGESTACIONAL OU

ANTIPROGESTACIONAL

LIGAÇÃO AO RECEPTOR DE PROGESTINA A progestina inicia uma resposta biológica ligando-se em primeiro lugar a um receptor de progestina. A afinidade para os receptores de progestina foi determinada através da capacidade dos compostos para deslocar um radioligando de progestina 44

daqueles receptores in vitro. Os receptores da progestina citosólica foram obtidos por mistura de tecido uterino de coelho com tampão Tris [0,1 M Tris-HCl, Na2EDTA 1 mM, ditiotreotol 1 mM, molibdato de sódio 1 mM, glicerol 1%, pH 7,4]. A mistura tecido/tampãofoi homogeneizada em gelo. O homogeneizado foi então centrifugado e o sobrenadante (preparação de citosol) foi decantado e armazenado a —70°C sendo descongelado antes da utilização. O ensaio de ligação competitivo foi executado através da mistura de 3H-R5020, um radioligando de progestina, com a preparação de citosol e várias concentrações dos compostos de ensaio (preparadas em DMSO com uma concentração final de DMSO de 5%). A mistura foi então incubada a 4°C durante cerca de 18 horas. A ligação não-específica foi determinada utilizando um ligando não marcado em excesso. Após o período de incubação, a ligação do radioligando ao receptor foi separado do radioligando livre utilizando carvão revestido com dextrano. A quantidade do radioligando ligado foi então determinado através de contagem por cintilação líquida. Os dados foram expressos como a concentração do composto de ensaio que desloca 50% do radioligando do receptor (IC50).

Aspectos da aplicação utilizada neste procedimento são descritos na referência seguinte: J. L. McGuire et ai., Biochemistry 13, 319, 1974.

TESTE PROGESTACIONAL EX VIVO A actividade progestacional dos compostos foi determinada pela sua capacidade de estimular a proliferação de células de carcinoma do peito humanas. A proliferação foi medida

pela capacidade de estimular a incorporação de 3H-timidina nestas células in vitro . Células de carcinoma do peito humanas T47D 45

(Colecção de Tecidos Tipo Americana #133-HTB) foram mantidas em meios consistindo em RPMI 1640 ssuplementados com 10% de soro bovino fetal, 10 μς/ml de insulina, 10 U/ml de penicilina, 100 μ9/πι1 de estreptomicina e 2 mM de L-glutamina. Culturas de células em monocamadas foram tripsinizadas e lavadas em meio de ensaio constituído por RPMI 1640 isento de vermelho de fenol suplementado com 5% de carvão activado, soro bovino fetal e os outros ingredientes listados acima. As células foram então cultivadas numa placa de 96 poços. Após um período de incubação de 48 horas a 37°C, o meio condicionado foi retirado e substituído por meio fresco contendo os compostos de ensaio em DMSO (concentração final de DMSO 0,1%). As culturas celulares foram incubadas durante 18 a 20 horas a 37°C. Adicionou-se então ^H-timidina em cada poço e as culturas celulares foram incubadas a 37eC durante mais 4 horas. A marcação foi terminada por adição de uma timidina marcada. As culturas foram lavadas duas vezes, tripsinizadas e então recolhidas numa membrana filtrante. A %-timidina incorporada foi medida através de contagem por cintilação líquida. Os dados foram expressos como a percentagem de estimulação acima do nível de controlo que foi estabelecido a 100%. Calculou-se um valor SC200 Çfuamto para uma concentração do material de ensaio necessária para estimular a incorporação de ^H-timidina a 200% do controlo.

Aspectos da aplicação do procedimento utilizado são descritos nas referências seguintes: C. Christensen, D. Gunter, D. Saunders e V. Malviya, Gynecol. Oncol., 28, 25 (1987); J. Puzas, R. Drivdahl, G. Howard e D. Baylink, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 166, 113 (1981); e I. Keydar, 1. Chen, S. Karby, F. Weiss, J. Delarea, M. Raduy, S. Chaitcik e H. Brenner, Eur. J. Câncer, 15, 659 (1979). 46

TESTE ANTIPROGESTACIONAL EX VIVO O mesmo sistema de ensaio descrito acima pode ser utilizado para determinar a actividade antiprogestacional induzindo uma resposta positiva com uma quantidade apropriada de uma progestina padrão tal como R5020 e diminuindo essa resposta com o aumento das concentrações de uma antiprogestina. A concentração de antiprogestina necessária para reduzir 50% da actividade progestacional é designada concentração ED50. TESTE PROGESTACIONAL IN VIVO (TESTE McCINTY) A actividade progestacional foi medida in vivo através da capacidade de estimular o endométrio de coelho após injecção na trompa uterina.

Coelhos fêmea New Zealand White imaturos foram injectados subcutaneamente durante 6 dias com 5,0 pg de 17β-estradiol por dia. No sétimo dia os coelhos foram anestesiados, o abdómen foi aberto e a trompa uterina exposta. Duas ligaduras com o comprimento de 3-4 cm foram colocadas à volta de um segmento do útero, deixando os vasos sanguíneos principais fora dos nós. A ligadura superior foi ligada firmemente, e a inferior foi deixada solta. Injectou-se uma agulha ligada a uma seringa no útero debaixo da segunda ligadura e para cima na área entre as duas ligaduras. Quando o material de ensaio foi injectado, a ligadura foi apertada e mantida justa de forma que a agulha seja retirada sem perda de fluido. A segunda ligadura foi mantida e o abdómen fechado.

Os coelhos foram sacrificados aproximadamente 72 horas após a injecção. O útero foi retirado, fixado em formalina 47

tamponada a 10%, seccionada a 6 μ, e corada com hematoxilina e eosina. A avaliação da proliferação endométrica foi efectuada de acordo com um index de McPhail. Cada lâmina foi classificada para cada coelho numa escala de 0 (sem resposta) — 4 (resposta máxima). Os compostos activos neste ensaio encontram-se no Quadro 13.

Aspectos da aplicação do procedimento utilizado são descritos nas referências seguintes: D. McGinty, C. Anderson e N. McCullogh, Endocrinology, 24, 829 (1939); M. McGinty, J. Physiol., 82, 145 (1934); e G. Pincus e N. Werthessen, Am. J. Physiol., 120, 100 (1937). TESTE PROGESTACIONAL IN VIVO (TESTE CLAUBERG) A actividade progestacional foi também medida in vivo através da capacidade de estimular o endométrio de coelho após tanto administração oral como parenteral.

Coelhos fêmea New Zealand White imaturos foram sujeitos a injecção subcutânea diária durante 6 dias com 5,0 microgramas de 17p-estradiol em óleo de sésamo. Começando no sétimo dia forneceu-se aos coelhos o material de ensaio diariamente durante cinco dias. Os coelhos foram sacrificados aproximadamente 24 horas após a última administração e o útero foi retirado, cortado e pesado. Pedaços de ambas as trompas uterinas foram fixados em formalina neutra a 10%, seccionados a 6 μ, e corados com hematoxilina e eosina. A avaliação da actividade progestacional foi efectuada como descrita acima no ensaio McCinty. Os compostos activos neste ensaio encontram-se no Quadro 13. 48

Γ' t.—

Aspectos da aplicação do procedimento utilizado são descritos nas referências seguintes: Μ. K. McPhail, J.

Physiology, 83:145 (1934).

MÉTODO PARA A DETERMINAÇÃO DA ACTIVIDADE DO CRESCIMENTO ÓSSEO PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS OSTEOBLÁSTICAS

Os compostos da presente invenção tem utilidade no tratamento da osteoporose através do aumento da calcificação óssea em lugar das abordagens tradicionais que geralmente envolvem a inibição da degeneração óssea ou resorpção. Os compostos da presente invenção tem sido avaliados como estimulantes da proliferação das células osteoblásticas e a cultura do orgão da calote de pinto que é prevista a partir do aumento da massa óssea e a formação de osso in vivo. A acção dos compostos seleccionados para estimular o crescimento osteoblástico foi medida em cultura estimando a taxa de síntese de ADN através da taxa de incorporação de ^H-timidina no ADN. Apenas células em mitose sitetizam ADN novo e desta forma apenas estas células incorporaram timidina específica do ADN radiomarcado. A estimulação da proliferação e diferenciação das células formadoras do osso, osteoblastos, foi um pré-requisito para um aumento da formação do osos e da massa óssea. A capacidade dos agentes em aumentar a proliferação e diferenciação dos osteoblastos pode ser prevista a partir da sua acção em culturas de linhas celulares de osteoblastos in vitro. Neste ensaio, linhas celulares de osteoblastos de rato (MC3T3-E1) e humanas (ΤΕ-85) (Colecção de Tecidos Tipo Americana #CRL 1543, Rockville, Md. clonadas por Sudo et al., koriyama, Japão) foram cultivadas in vitro e testou-se o efeito de vários agentes na proliferação de células osteoblastos. As células foram recolhidas 49

Cl de frascos de cultura grandes onde foi permitido crescerem até perto da confluência utilizando tripsina. As células foram plaqueadas em placas de cultura com 96 poços, 1600 células em 100 μΐ por poço com Meio Eagle Modificado de Dulbencos (MEMD) com 25 mM de tampão HEPES, L-glutamina (584 mg/1); D-glucose (4,5 g/1) suplementado com soro bovino fetal (10%); penicilina (100 unidades/ml) e estreptomicina (100 mcg/ml); piruvato de sódio (concentração final 10 μΜ). As células foram deixadas plaqueadas até ao dia seguinte em MEMD contendo 10% de soro bovino fetal a 37°C numa atmosferaa de 5% C02/95% ar. Segue-se a colocação de todas as linhas celulares de osteoblastos em placas de cultura de 96 poços, tanto as linhas celulares MC3T3-E1 ou TE-85, permaneceram um periodo adicional de pré-incubação de 24 horas em meio contendo apenas 0,1% de soro bovino fetal.

No dia seguinte os compostos de ensaio foram adicionados e seleccionados a concentrações na gama de 10"14 a 10-16 M dependendo do estudo. Vinte horas mais tarde, adicionou-se

uma alíquota de 20 μΐ de meio contendo 0,4 μΟί de ^H-timidina a cada poço de cultura. As células foram então incubadas durante mais 4 horas. A incubação foi terminada por aspiração dos meios e lavagem com HBSS (Solução Salina Equilibrada de Bank). As células foram então tratadas com 100 μΐ de uma solução 0,5% de tripsina e 5,3 mM de EDTA durante 30 minutos à temperatura ambiente. As células foram então aspiradas num filtro de fibra de vidro e lavadas com água. A radioactividade nos filtros foi medida foi quantificada através de espectroscopia de cintilação líquida. A taxa de incorporação de Sg-timidina no ADN foi então utilizado como o index de proliferação celular. Os resultados estão apresentados no Quadro 13 expresso como % vezes o controlo em que o controlo é 100%. Um valor superior a 110 foi considerado 50

estatisticamente significativo, e (providenciar mais valores preferidos).

Aspectos da aplicação do procedimento utilizado são descritos nas referências seguintes: J. E. Puzas, R. H. Drivdahl, A. G. howard e D. J. Baylink, Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 166, 113 (1981); e (providenciar mais referências). RECEPTOR DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL LIGAÇÃO (35S-TBPS(t-BUTILFOSFOTIONATO)

O ensaio biológico utilizado para produzir dados envolve a ligação de um ligando a um local no receptor GABA^. O ligando é 3H-TBPS(ter-Butilfosfotionato), que se liga ao local dentro do canal Cl", domínio do receptor. Os esteróides afectam a ligação de 3H-TBPS a este local induzindo uma modificação conformacional pode tanto aumentar como diminuir a ligação de TBPS. 0 próprio GABA é conhecido por apresentar efeitos semelhantes na ligação do TBPS. O efeito de um esteróide particular na ligação do TBPS às preparações de membranas do Sistema Nervoso Central (SNC) depende de que região são derivadas as membranas (receptores) do SNC. Para mais o GABA pode afectar marcadamente a actividade de um esteróide. Se o GABA aumenta a potência (afinidade) de um esteróide, isto é interpretado como indicação que o esteróide possui um efeito modulatório positivo na actividade do GABA. Espera-se que tal composto seja útil terapeuticamente para o tratamento da ansiedade ou epilépsia. 0 procedimento utilizado para ensaiar os compostos da presente invenção é essencialmente o de R. P. Shank e W. J. Baldy, J. Neurochem., 55, 541 (1990). 51

PROCEDIMENTO

Foram utilizados ratos Wistar machos, Charles River (livres de vírus) (160-200 g). Os ratos foram agrupados durante aproximadamente uma semana e foram fornecidos de alimento e água ad libitum. Os animais tinham horas iguais de escuridão e luz (12-12).

Os compostos de ensaio (aproximadamente 1 mg) foram dissolvidos no volume apropriado de água destilada para produzir uma solução mãe 0,2 mM. Os compostos que não eram solúveis em água foram dissolvidos em DMF (e/ou NaOH ou HC1) a uma concentração de 20 mM, e então diluídos à concentração mãe de 0,2 mM em água destilada. As soluções mãe foram então diluídas em água destilada para originar as concentrações de trabalho utilizadas na experiência.

Os ratos foram sacrificados por deslocação cervical e os cérebros foram rapidamente retirados para uma caixa de Petri, em gelo e coberta com parafilme. Tecido de três áreas do cérebro foram tipicamente usada: córtex cerebral, cerebelum e tronco cerebral (mesocéfalo, medula e ponto de Valore). O tecido de cada área foi homogeneizado em 20-40 volumes de NaHEPES (10 mM) numa solução de sacarose tamponada (0,3 M) (feita de novo em cada semana) com seis movimentos completos de um homogeneizador accionado por motor com pás de teflon/vidro. O homogeneizado foi então centrifugado a 1000 x g durante 10 minutos e o sobrenadante resultante foi recentrifugado a 42 000 x g durante 10 minutos. O sobrenadante desta centrifugação foi eliminado. O centrifugado resultante foi resuspendido em 20-40 volumes de tampão fosfato e pré-incubado durante 1 hora a 23°C. Após a incubação, o homogeneizado foi centrifugado a 48 000 x g durante 10 minutos. O centrifugado resultante foi resuspendido em 25-30 volumes de 52 .1

tampão fosfato 3 mM (feito de novo semanalmente misturando K2HP04 1 M (6 ml) em 1,5 1 de água destilada, ajustando um pH 7,4 com K2HP04 1 M e completando a 2 1) e mantido em gelo.

PROCEDIMENTO DE INCUBAÇÃO

Cada tubo de vidro 13 x 100 mm recebeu 1,25 ml de tampão fosfato, 0,2 ml de NaCl, 0,1 ml de água destilada, 0,1 ml de 35g_TBPS (concentração de trabalho de aproximadamente 3 nM (4,5-5,0 x 104 DPM/0,1 ml)), 0,1 ml do composto de ensaio e 0,25 ml da suspensão de membranas para um volume total de 2 ml. As amostras ensaiadas na presença de GABA receberam 0,1 ml de 0,02 mM GABA (feito recentemente) e na ausência de água. Tipicamente, metade das amostras receberam GABA. As amostras controlo receberam 0,1 ml adicionais de água em vez do composto de ensaio, e os brancos receberam 0,1 ml da solução 0,2 mM de GABA (feita recentemente). A reacção foi iniciada através da adição do material da membrana. As amostras, em grupos de 12, são então imediatamente sujeitas a vortex e incubadas a 25°C durante 10 minutos. A reacção foi terminada por filtração a vácuo rápida através de membranas filtrantes LKB FG/B pré-pesadas montadas num recolhedor de células Skatron designado para operar com o sistema LKB Betaplate. As amostras foram lavadas duas vezes com aproximadamente 2 ml de tampão de lavagem NaHEPES (feito de novo semanalmente), 10 mM, gelado. Após a filtração, as membranas filtrantes foram secas num forno micro-ondas (3 minutos de cada lado). Adicionou-se o fluido de cintilação (0,1 ml) LKB Betaplate a cada um dos 96 locais de colocação de amostra no Filtermat que foi então colocado num saco de plástico resistente a solvente, selado ao calor, e contado num contador de cintilações LKB Betaplate. 53

ANÁLISE DE DADOS A ligação específica varia com a área do cérebro, e tipicamente representa aproximadamente 78% da ligação total do córtex, 64% no cerebelo sem a presença de GABA, 55% no cerebelo na presença de GABA e 52% no tronco cerebral. A ligação não específica foi determinada utilizando 10 μΜ de GABA. As contagens por minuto (CPM) no branco são a média e subtrai-se das amostras e controlos. As CPM para as amostras e controlos são depois representados pela média.

CÁLCULO DA PERCENTAGEM DE INIBIÇÃO A percentagem de inibição é calculada de acordo com a equação:

%I CPM para o composto de ensaio x 100 CPM para o controlo QUADRO 12

Proliferação de células de osteoblasto1 GABA2 Efeito Progestacional 10‘6 10'7 10'8 IO-9 lO-io IC503 T47D4 ED505In vivo6 1 Γ** 00 1,33 4 6 C,M 2 105 119 99 91 77 >11 3000 3 92 110 115 138 118 10000 4 108 111 155 153 158 201 5 89 106 124 108 114 5,3 81 6 81 97 106 114 121 15 9 65 94 128 102 119 362 10 91 90 123 115 139 1050 11 106 135 156 131 154 20 54

,, _~r- ( . y,. 12 118 115 114 131 135 0,7 1 153 C,M 13 88 109 114 109 152 9 14 96 109 118 136 139 7 15 94 108 114 123 123 6,2 10000 16 4,2 17 48 18 204 19 61 20 56 21 42 10000 22 86 78 66 59 40 0,54 10000 154 23 3000 24 308 25 87 106 101 99 90 49 26 451 27 65 28 3140 29 244 30 22 31 4 32 89 103 105 111 118 45 33 96 107 117 127 152 9 34 87 102 105 114 114 3 Μ 35 82 101 123 150 154 3,01 M 36 11,5 37 12,9 38 76 73 54 49 37 5,29 545 39 92 94 84 115 99 3,2 0,7 100 C,M 40 78 90 71 58 53 1,18 26 C,M 41 138 158 166 144 116 1,96 4000 M 55

ΛΛ^ 42 135 144 155 146 166 0,97 321 43 93 92 99 98 85 3,3 44 86 107 105 95 87 30,8 45 108 97 123 135 95 14,2 46 15,0 47 109 112 113 115 123 20,1 48 266 49 127 50 316 51 119 120 144 126 158 203 52 42 53 2198 54 780 5 5 21,9 56 85,2 57 189 58 444 59 455 60 191 61 435 62 157 63 101 103 99 77 97 118 64 116 115 121 128 137 >11 550 65 90 98 94 88 80 57 66 375 67 126 68 13,4 69 >11 10000 10000 70 >11 10000 71 110 114 99 103 98 0,77 10000 72 113 119 129 120 123 >11 10000 73 3,4 10000 10000 Μ 56 ί—-

74 75 76 77 78 79 80 81 110 119 119 128 82 83 84 108 119 130 127 122 85 99 80 76 54 48 86 100 114 94 103 101 87 120 115 125 117 127 88 97 109 89 74 62 89 115 97 113 106 98 90 90 95 68 68 42 91 92 93 94 110 85 90 110 130 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 2,2 10000 10000 0,21 10000 1,1 10000 1,47 286 C, Μ 2,44 10000 C,M 0,9 10000 406 0,79 85 Μ 16,5 2,95 608 Μ 4,83 >11 1000 1000 >11 228 82,2 1,08 10,2 21,6 >11 71,7 2,39 115 23,9 11,1 14,6 10,2 10000 12,1

0,99 92 C 2,5 21 23 195 9 149 0,85 76 1,87 1070 125 57

106 107 108 109 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 125 7,11 7,45 3,35 1,09 1620 16 10000 10000 109 91 134 1169 119 371 66 94 102 102 90 27,6 6,5 2,09 72 8,77 4,97 5,56 2,53 868 13,3 831 120 123 122 120 181 47 557 10 6,66 166

C 126 127 128 129 130 131 132 7,14 4,04 14,2 4,94 2,31 >11 17,4 >11 7,5 779 58

QUADRO 6

Proliferação de células de osteoblasto1 GABA2 Efeito Progestacional IO-6 10~7 10~8 10'9 IO"10 136 138 141 142 143 - 144 145 146 112 122 117 108 152 87 123 124 149 161 153 85 115 83 99 103 154 97 111 ’ 107 124 115 156 127 124 126 136 183 157 107 108 113 111 128 158 105 102 122 114 119 159 160 97 100 91 97 105 161 162 76 95 113 122 112 167 126 109 136 144 165 168 67 82 82 76 109 169 128 131 133 134 195 170 68 98 108 108 108 171 72 110 121 118 129 172 174 175 134 108 103 106 113 >11 2,15 4000 IC503 T47D4 ED50sIn vivo6 70 75 341 396 1620 1380 71,7 100 1000 175 636 819 1000 750 3000 1383 32 3000 3 5,93 32 22,8 10000 6,2 59 176 59 94 109 113 109 >11

177 528 178 5,18 164 272 329 273 3,4 274 204 275 145 153 128 136 276 53,9 278 1,0 85 C 281 0,02 10 C 282 0,2 10,5 C 1. Expresso em % de aumento na incorporação de 3H-timidina sobre o controlo (100%) 2. Afinidade de ligação para o receptor de GABAa do cérebro de rato em μΜ. 3. Afinidade de ligação para o receptor de progestina do útero de coelho em μΜ. 4. Concentração para causar um aumento de 200% na proliferação células humanas da mama T47D. 5. Concentração para bloquear a acção de 0,15 nM R5020 em 50%. 6. C=Activo no Ensaio de Clauberg; M=Activo no Ensaio de McGinty

)oa, 6 de Dezembro de 2001 ENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims (14)

1. i—ΠV- REIVINDICAÇÕES Compostos com a fórmula:

   R3 em que:

   W está ausente ou é -CH=CH-; r! são independentemente seleccionados do grupo que consiste de halogéneo, -CF3 e NO2 ou ambos R* podem ser associados para formar um radical duplo que é -CH=CHCH=CH-; r3 são independentemente seleccionados do grupo constituído por hidrogénio, (C^)alquilo ramificado ou linear, halogéneo e -CF3, com a condição de que r3 na posição 3 deve ser H em que r3 na posição 4 é H ou ambos r3 podem ser associados para 1

   formar um radical duplo seleccionado do grupo que consiste em —CH=CHCH=CH-, -C (N (Cj.4) alquilo2) =CHCH=CH- e -(CH2)4-; R5 é seleccionado a partir do grupo que consiste em H e Me; com a condição de que apenas um de R* e r3 forma radicais duplos fundidos; e os estereoisómeros.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o referido A é 4-R*, 3-Rl-fenilo.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R3 é um mono- substituinte na posição 4 e seleccionado no grupo que consiste de (C^)alquilo ramificado ou linear, halogénio e -CF3.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado no grupo que consiste em: 3-(naft-2-il)-1-(4- iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4- diclorofenil)—1-(4-trifluorometilbenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)—1-(4- iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4-clorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2- naftilenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4- diclorofenil)-1-(4-bromobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(4- metilbenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3- (4- cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4- trifluorometilbenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4- bromobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3- (4- 2

   cloro-3-trifluorometilfenil)-1-(4- iodobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; (R g) 3 (3,4-diclorofenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-6-metil_ 1.4.5.6- tetrahidropiridazina e (R,S) 3~(4-cloro-3 trifluorometilfenil)-1-(4-iodobenzenossulfonil)-6-metil_ 1.4.5.6- tetrahidropiridazina.
5. 5. Compostos de fórmula geral:

   W está ausente ou é -CH=CH—; Rl é seleccionado a partir do grupo que consiste em halogéneo, -CF3 e -N02, ou ambos R1 podem ser associados para formar um radical duplo que consiste em -CH=CHCH=CH-; 3 R3 é hidrogénio, halogéneo, -CF3, (Cj.,) alquilo, carboxi (C^) alquilo, (Ci.Jalcóxi carbonilíCj.^alcóxi com a condição de que R3 na posição 2 não é hidrogénio ou R3 pode ser associado para formar um radical duplo que consiste em —CH=CHCH=CH- ligados nas posições 2 e 3; Ra são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio ou halogéneo com a condição de que cada um pode ser halogéneo em que R3 é seleccionado apenas do grupo halogéneo; r5 é seleccionado do grupo que consiste em hidrogénio e metilo ou alternativamente R5 pode ser associado com o hidrogénio em posição 6 para formar um radical duplo que consiste em (5)—CH2CH=CH-(6); 13 5 com a condição de que apenas vim de R , R e R forma o radical duplo; e os estereoisómeros e sais f armaceuticamente aceitáveis e ésteres derivados.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que o referido A é 4-R1, S-R^fenilo.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que R3 é um mono- substituinte na posição 2 e seleccionado no grupo que consiste de halogénio CF3, (C^) alquilo, (C^Jalcoxi, carboxi (C^) alquilo e C^—alcoxi carboniltC^Jalcoxi.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 5, seleccionado no grupo que consiste de: 3-(3,4-diclorofenil)-l-(2,3- diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3—(3,4-diclorofenil)-1-(2,5-diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(3,4-diclorofenil)-1-(2—(3- 4 * I Κ

   c arbometox ipropoxi)-5-bromobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; 3-(4-cloro-3-trifluorometilfenil)-l- (2,5-diclorobenzenossulfonil)-1,4,5,6-tetrahidropiridazina; e (R, S) 3—(3,4-diclorofenil)-1-(2,5-diclorobenzenossulfonil)-5-metil-1,4,5,6-tetrahidropiridazina.
9. 9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, para ser utilizado num método de tratamento de uma desordem ou condição biológica.
10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que a desordem ou condição biológica é modelada agonisticamente ou antiagonisticamente por esteróides.
11. 11. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, na produção de um medicamento para o tratamento de uma desordem ou condição biológica.
12. 12. Utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a desordem ou condição biológica é modelada agonisticamente ou antiagonisticamente por esteróides.
13. 13. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, completamente misturado com um veículo farmacêutico.
14. 14. Método para a preparação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, compreendendo (i) formação de um intermediário 3-fenil-1,4,5,6—tetrahidropiridazina, 5 (ii) junção do intermediário do passo (i) na posição 1 com uma entidade fenilo ou tienilo substituida com sulfonilo. (ii) Lisboa, 6 de Dezembro de 2001

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