PT2405911E - Utilização de lactóis de atorvastatina como medicamentos - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE LACTÓIS DE ATORVASTATINA COMO MEDICAMENTOS" A presente invenção refere-se a lactóis de atorvastatina. Em particular, a presente invenção refere-se à utilização de lactóis de atorvastatina no fabrico de um medicamento para o tratamento de certas condições. As condições que são tratáveis utilizando os compostos da presente invenção incluem as condições que são moduladas pela enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase). A inibição da enzima, por conseguinte, representa uma terapia viável para uma série de doenças. Os compostos utilizados na invenção são derivados de 6-(pirrol-l-ilo 3- ou 4-carboxamido-substituido)-4-hidroxi-3,5-di-hidropiran-2-ol.

Os compostos de trans-6-[2-(pirrol-l-ilo 3- ou 4-carboxamido-substituido)alquil]-4-hidroxipiran-2-ona são lactonas que foram descritas pela primeira vez no documento US 4,681,893. Este documento também divulgou os seus equivalentes ácidos de anel aberto correspondente. As lactonas, aparentemente, não possuem atividade intrínseca própria. No entanto, os equivalentes de ácido de anel aberto correspondentes são úteis como inibidores da biossíntese do colesterol. Também divulgado no documento 4,681,893 estão vários métodos de fabrico de tais compostos. A atorvastatina, que é a forma R do ácido de anel aberto de trans-5-(4-fluorofenil)-2-(1-metil-etil)-N, 4-difenil-l- [2-tetra-hidro-4-hidroxi-6-oxo-2H-piran-2-il)-etil]-1H-pirrole-3-carboxamida, e o seu uso na inibição da 2 biossíntese de colesterol foi divulgado pela primeira vez no documento EP 0409281. A atorvastatina, tanto na forma racémica como na forma do seu isómero [R-(R*,R*)] é um potente inibidor da enzima HMG-CoA.

Clin Invest Med, Volume 24, N° 5, pág. 258-72, 2001 (Baker e Tamopolsky) divulga que, embora as estatinas com uma conformação aberta de ácido estejam ativas, a lactona, o análogo de anel fechado está inativa. A hidrólise hepática a um pH alcalino interrompe o ciclo e, por conseguinte, ativa a lactona de lovastatina e simvastatina nos pró-fármacos in vivo. No entanto, um problema com estes compostos é que o metabolismo extenso da primeira via leva à rápida eliminação destas estatinas.

Da mesma forma, Trends in Pharmacological Sciences, Volume 19, Publicação 1, 1 janeiro de 1998, páginas 26-37 divulga que as lactonas inativas têm de ser metabolizadas para as suas formas de ácido hidroxi abertas correspondentes, a fim de inibir a HMG-CoA redutase. A forma de lactona, e também a forma ativa de anel aberto, podem sofrer problemas em termos de estabilidade durante um período de tempo prolongado. Isto representa um problema significativo, durante o fabrico de um princípio ativo, ou durante a armazenagem prolongada do mesmo numa farmácia. Por exemplo, pode ocorrer a perda do grupo hidroxi numa reação de desidratação. O produto de decomposição resultante pode ter uma ligação dupla que está conjugada com o grupo carbonilo da lactona e isto pode tender a favorecer a formação do produto de decomposição. De igual modo, na forma de anel aberto, um dos possíveis produtos de decomposição também poderia ter uma ligação dupla 3 conjugada com o grupo carbonilo do ácido. É portanto um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de inibir a HMG-CoA redutase. A atorvastatina é um inibidor muito potente da HMG-CoA redutase. Também é, por conseguinte, um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de inibir a HMG-CoA redutase, que tenham um valor de IC50 comparável ou melhor do que o da atorvastatina. Idealmente, estes compostos terão uma boa estabilidade e biodisponibilidade relativa à atorvastatina. É, portanto um objetivo fornecer compostos que tenham uma estabilidade melhorada.

Idealmente, os compostos terão um prazo de validade prolongado. É, portanto, um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de inibir a HMG-CoA redutase, que tenham uma semivida aumentada. É, portanto, um objetivo da presente invenção proporcionar novos compostos capazes de inibir a HMG-CoA redutase e que possuam uma biodisponibilidade melhorada. É também um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de inibir a HMG-CoA redutase e aumentar a promoção da lipoproteina de alta densidade (HDL) . É também um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de reduzir a lipoproteina de baixa densidade (LDL) e aumentar a promoção de lipoproteina de alta densidade (HDL). Especificamente, é um objetivo da presente invenção proporcionar compostos capazes de reduzir a lipoproteina de baixa densidade (LDL) e aumentar a promoção da lipoproteina de alta densidade (HDL) em mais de 10%, preferivelmente até 15% ou mais. A invenção visa assim proporcionar terapias para a inibição da biossintese do colesterol. A invenção visa também tratar uma variedade de doenças em que a formação do colesterol é inibida. 4 A presente invenção proporciona compostos que atingem um ou mais dos objetivos acima referidos.

De acordo com um aspeto, a presente invenção proporciona uma utilização de um composto da Fórmula I e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo: OR ,5

no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma condição que é modulada pela enzima 3-hidroxi-3- metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), de acordo com as reivindicações, em que: R1, R4 e um de R2 e R3 são selecionados independentemente de entre o grupo que consiste em: hidrogénio, halogéneo, alquilo Ci_6, alquenilo C2-6 r cicloalquilo C3-6, arilo, alquil-arilo Ci_4, heterociclilo, e alquil-heteroarilo Ci-4; o outro de R2 e R3 é -CONR9R10 onde R9 e R10 são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: hidrogénio, alquilo Ci_6, alquenilo C2-6r arilo, alquil-arilo Ci-4, heteroarilo, heteroarilo Ci_4; R5 e R6 são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci-6, haloalquilo Ci-6, alquenilo C2-6* cicloalquilo C3-6, arilo, alquil-arilo C1-6, 5 alcanoil-arilo Ci-6, heteroarilo, alcanoil-heteroarilo Ci-6, e alquil-heteroarilo Ci-β; desde que nem R5 nem R6 sejam hidrogénio; R7 e R8 são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, alquilo C1-4 e halo; X é - (CRaRb)m (CRa=CRb) n (CRaRb) o em que Ra e Rb são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, metilo, etilo e halo em, n e o são independentemente 0, 1, 2, ou 3, desde que m + n + o não seja superior a 3; e em que cada um dos grupos acima R1 a R10 pode, quando quimicamente possível, ser independentemente opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos escolhidos independentemente em cada ocorrência, de entre os grupos constituídos por: halo, alquilo Ci_3, halo-alquilo Ci_3, alcoxi Ci_3, haloalcoxi Ci_3, hidroxi, e ciano.

Normalmente, as condições que são moduladas pela HMG-CoA redutase, são as condições de acordo com as reivindicações as quais seriam tratadas pela inibição da enzima utilizando um composto da presente invenção.

De acordo com outro aspeto, a presente invenção proporciona um composto da Fórmula I e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo: 6 OR5

para uso no tratamento de uma condição tratável por meio da inibição da enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), de acordo com as reivindicações, em que R1 - R10, Ra, Rb, X, m, n e o são como definidos acima.

Os compostos têm atividade, por direito próprio, ou podem, em certos casos ter anel aberto sob condições fisiológicas, nos correspondentes compostos com atividade inibidora.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (1) incluem a adição de ácido e sais de base dos mesmos.

Os sais de adição de ácido adequados são formados a partir de ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, cloridrato/cloreto, hidro-brometo/brometo, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 1,5-naftalenodissulfonato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrogénio/dihidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tartarato, tosilato e trifluoroacetato. 7

Os sais de base adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais de alumínio, arginina, benzatina, cálcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnésio, meglumina, olamina, potássio, sódio, trometamina e zinco. Hemisais de ácidos e bases podem também ser formados, por exemplo, sais de hemissulfato e hemicálcio. Para uma revisão sobre sais adequados, consultar o "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002).

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (1) podem ser preparados por um ou mais de três métodos: (i) por reação do composto da fórmula (1) com o ácido ou base desejado; (ii) por remoção de um grupo protetor de lábil de base ou ácida a partir de um precursor adequado do composto da fórmula (1) ou por abertura de anel de um precursor cíclico adequado, por exemplo, uma lactona ou lactama, utilizando o ácido ou a base pretendidos; ou (iii) por conversão de um sal do composto da fórmula (1) num outro por reação com um ácido ou base apropriado ou por meio de uma coluna de permuta de iões apropriada.

Todas as três reações são tipicamente realizadas em solução. O sal resultante pode precipitar e ser recolhido por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. O grau de ionização no sal resultante pode variar de completamente ionizado a quase não-ionizado.

Os compostos da invenção podem existir em ambas as formas solvatada e não solvatada. 0 termo "solvato" é usado neste documento para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma quantidade estequiométrica de uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. 0 termo "hidrato" é empregue quando o referido solvente é água.

Incluídos no âmbito da invenção estão os complexos tais como clatratos, complexos de inclusão de fármaco-hospedeiro em que, em contraste com os solvatos acima mencionados, o fármaco e hospedeiro estão presentes em quantidades estequiométricas ou não estequiométricas. Também estão incluídos os complexos do fármaco contendo dois ou mais componentes orgânicos e/ou inorgânicos, que podem ser em quantidades estequiométricas ou não estequiométricas. Os complexos resultantes podem ser ionizados, parcialmente ionizados, ou não-ionizados. Para uma revisão de tais complexos, ver J Pharm Sei, 64 (8), 1269-1288 por Haleblian (agosto 1975).

Daqui em diante todas as referências a compostos da fórmula (1) incluem referências aos seus sais, solvatos e complexos, e aos solvatos e complexos dos seus sais.

Os compostos da invenção incluem compostos da fórmula (1) tal como anteriormente definidos, incluindo todos os hábitos polimorfos e cristalinos dos mesmos, isómeros óticos, geométricos e tautoméricos tal como a seguir definidos. Os compostos marcados isotopicamente da fórmula (1) são também presentemente divulgados. 9

Antes da purificação, os compostos da presente invenção podem existir como uma mistura de enantiómeros, dependendo do processo de síntese utilizado. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem existir como uma mistura de enantiómeros com uma razão entre 2:1 e 3:1, embora possam também ocorrer em outras razões. Os enantiómeros podem ser separados por técnicas convencionais conhecidas na arte. Assim, a invenção cobre enantiómeros individuais, bem como as suas misturas. Quando as estruturas químicas aqui divulgadas incluírem um pretende-se que o composto seja uma mistura de enantiómeros com uma razão entre 2:1 e 3:1.

Para alguns dos passos do processo de preparação dos compostos da fórmula (1), pode ser necessário proteger potenciais funções reativas que não se deseja reagir e clivar os referidos grupos protetores em consequência. Em tal caso, qualquer radical protetor compatível pode ser utilizado. Em métodos particulares de proteção e desproteção, podem ser usados aqueles tais como os descritos por T.W. GREENE (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981) ou por P.J. Kocienski (Protecting groups, Georg Thieme Verlag, 1994) . Todas as reações anteriores e as preparações de novos materiais de partida, utilizados nos métodos anteriores, são reagentes convencionais e apropriados e as condições de reação para a sua realização ou preparação, bem como os procedimentos para isolar os produtos desejados, serão bem conhecidos dos peritos na arte com referência a precedentes da literatura e aos exemplos e preparações do presente documento.

Além disso, os compostos da fórmula (1), bem como o 10 intermediário para a sua preparação podem ser purificados de acordo com diversos métodos bem conhecidos, tais como, por exemplo, a cristalização ou a cromatografia.

Numa forma de realização, R é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci-6, alquenilo C2-e ou cicloalquilo C3-6· Numa forma de realização, R1 é selecionado de entre o grupo consistindo de: alquenilo C2-6 ou cicloalquilo C3-6. Numa forma de realização alternativa, R1 é alquilo Ci_6. Numa forma de realização, R1 é metilo, etilo, propilo ou butilo. Numa forma de realização, R1 é i-propilo.

Numa forma de realização, R2 é -CONR9R10.

Numa forma de realização, R3 é selecionado de entre o grupo consistindo de: arilo, alquil-arilo Ci_4, e heteroarilo e alquil-heteroarilo Ci_4. Numa forma de realização, R3 é selecionado de entre o grupo consistindo de: arilo e alquil-arilo Ci-4. Numa forma de realização, R3 é arilo. Numa forma de realização, R3 é fenilo.

Numa forma de realização, R4 é selecionado de entre o grupo consistindo de: arilo, alquil-arilo Ci-4, heteroarilo e alquil-heteroarilo Ci-4, em que cada um dos grupos acima referidos pode ser opcionalmente substituído, como discutido acima em relação ao primeiro aspeto. Numa forma de realização, R4 é selecionado de entre 0 grupo consistindo de: arilo e alquil-arilo Ci- -4. Numa forma de realização, R4 é arilo. Numa forma de realizaçao, R4 é fenilo. Numa forma de realização, R4 é substituído por halo, opcionalmente em que halo é flúor. Numa forma de realização, R4 é 4-fluorofenilo. 11

Numa forma de realização, R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci-6, arilo, alquil-arilo Ci-4, heteroarilo e alquil-heteroarilo C1-4. Numa forma de realização, R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquil-arilo C1-4, e alquil-heteroarilo C1-4. Numa forma de realização, R5 é alcanoíl-heteroarilo C1-6, por exemplo, metanoil-heteroarilo. Numa forma de realização preferida, R5 é metanoil-piridilo, por exemplo, 2-metanolil piridina, 3-metanolil piridina, ou 4-metanolil piridina, de preferência de 3-metanolil piridina. Numa forma de realização, R5 é hidrogénio. Numa forma de realização alternativa, R5 é alquil-arilo Ci_4, por exemplo, alquil-Ph -Ci, alquil-Ph -C2, alquil-Ph -C3, ou alquil-Ph -C4. Numa forma de realização, R5 é benzilo.

Numa forma de realização, R6 é o mesmo que R5.

Numa forma de realização adicional, R6 é selecionado de entre o grupo consistindo de: alquilo Ci-6, alquenilo C2-61 cicloalquilo C3-6 e arilo. Numa forma de realização preferida, R6 é alquilo Ci-6· Numa outra forma de realização preferida, R6 é metilo, etilo, n-propilo, i-propilo ou t-butilo. Numa outra forma de realização preferida, R6 é alquenilo C2-6. Numa outra forma de realização preferida, R6 é alilo. Numa outra forma de realização preferida, R6 é cicloalquilo C3-6. Numa outra forma de realização preferida, R6 é ciclohexilo. Numa outra forma de realização, R6 é arilo, tal como fenilo opcionalmente substituído.

Numa forma de realizaçao, R e H. 8 ✓

Numa forma de realização, R e H. 12

Numa forma de realização, R9 é hidrogénio, ou alquilo C1-4. Numa forma de realização, R9 é hidrogénio.

Numa forma de realização, R10 é selecionado de entre o grupo consistindo de: arilo, alquil-arilo C1-4, e heteroarilo e alquil-heteroarilo C1-4. Numa forma de realização, R10 é selecionado de entre o grupo consistindo de: arilo e alquil-arilo C1-4. Numa forma de realização alternativa, R10 é selecionado de entre o grupo consistindo de: heteroarilo e alquil-heteroarilo C1-4. Numa forma de realização, R10 é fenilo.

Numa forma de realização, n é 0. Numa forma de realização, m = 1, n : 1-1 11 0 Q) 0 II ou m = 2, n = 0 e 0 = 0 ou m = 0, n 0 e 0 = 2 . Numa forma de realização alternativa, m = 3, n 0 e 0 = 0 . Numa forma de realização alternativa, m = 1, n 0 e 0 = 0 . Numa forma de realização alternativa m = 1, n 1 e 0 = 0 ou m = 0, n = 1 e 0 = 1.

Numa forma de realização, Ra é H, em cada ocorrência.

Numa forma de realização, Rb é H, em cada ocorrência.

Numa outra forma de realização, cada Ra é H, cada Rb é H e m = 2, n=0eo=0.

Os grupos arilo incluem sistemas de anéis aromáticos compreendendo 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 átomos de carbono no anel. Os grupos arilo podem ser constituídos por um único anel, mas podem incluir um sistema de anéis policíclicos, tendo dois ou mais anéis, pelo menos um dos quais é aromático. Os grupos arilo 13 incluem: grupos fenilo, naftilo, fluorenilo, azulenilo, indenilo e antrilo.

Numa forma de realização, o grupo arilo é fenilo.

Os grupos heteroarilo incluem sistemas de anéis heterociclicos aromáticos com 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 átomos no anel com 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente de azoto, oxigénio e enxofre. O grupo pode ser um sistema de anéis policiclicos, tendo dois ou mais anéis, pelo menos um dos quais é aromático, mas sendo mais frequentemente monociclicos. Os grupos heteroarilo preferidos são os grupos monociclicos com 5 ou 6 átomos no anel. Os grupos heteroarilo incluem: pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, pirazinilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, furilo, tiofenilo, piridilo, pirimidilo, benzimidazolilo, indolilo, isoquinolilo, quinoxalinilo e quinolilo.

Numa forma de realização, o grupo heteroarilo é selecionado a partir do grupo consistindo de: piridina, pirimidina, pirazina, pirazole, e oxazole. De preferência, o grupo heteroarilo é piridina.

Quando um ou mais dos grupos acima é opcionalmente substituído, cada substituinte opcional é de preferência um átomo halo escolhido de forma independente. Entre halo, são preferidos cloro e flúor. De preferência, os átomos de halo são os mesmos quando há mais do que um.

Numa forma de realização, R1 é alquilo C1-4, preferivelmente i-propilo, e R4 é arilo opcionalmente substituído, de preferência, 4-fluorofenilo. 14

Numa outra forma de realização, R2 é -CONR9R10 em que R9 é arilo opcionalmente substituído, de preferência fenilo; R10 é hidrogénio; e R3 é arilo opcionalmente substituído, de preferência fenilo.

Numa outra forma de realização, R1 é alquilo C1-4, preferivelmente i-propilo; R2 é -CONR9R10 em que R9 é arilo opcionalmente substituído, de preferência fenilo, R10 é hidrogénio; R3 é arilo opcionalmente substituído, de preferência fenilo; e R4 é arilo opcionalmente substituído, de preferência, 4-fluorofenilo. A relação entre os grupos R5 e R6 é importante para a atividade dos compostos. Assim, tanto R5 como R6 não podem ser hidrogénio. Numa forma de realização, R5 não é hidrogénio. Numa forma de realização, R6 não é hidrogénio.

Numa outra forma de realização, R5 é benzilo opcionalmente substituído e R6 é alquilo Ci-β opcionalmente substituído. Nesta forma de realização, de preferência o grupo alquilo é propilo ou butilo, de preferência, isopropilo ou terc-butilo. Numa outra forma de realização, R5 é benzilo opcionalmente substituído e R6 é alquenilo C2-6 opcionalmente substituído. Nesta forma de realização, de preferência o grupo alquenilo é alilo.

Numa outra forma de realização, R5 é H e R6 é alquilo C1-6 opcionalmente substituído. Nesta forma de realização, de preferência o grupo alquilo é propilo. Numa outra forma de realização, R5 é H e R6 é cicloalquilo C3-e · Nesta forma de realização, de preferência o grupo cicloalquilo é ciclohexilo. Numa outra forma de realização, R5 é H e R6 é 15 arilo opcionalmente substituído. Nesta forma de realização, de preferência, o arilo opcionalmente substituído é fenilo opcionalmente substituído, por exemplo, fenilo substituído por alcoxi (por exemplo metoxi).

Numa outra forma de realização, R5 é alcanoil-heteroarilo Ci-6 e R6 é alquilo Ci-6 opcionalmente substituído. Nesta forma de realização, o grupo alquilo é de preferência metilo e o grupo alcanoil-heteroarilo Ci_6 é preferencialmente metanoil heteroarilo, (por exemplo piridina metanoil) .

Numa forma de realização, o composto tem uma estrutura selecionada a partir de: o A l φ '% H' O \ £ v, S>. V ,v.. 1 *\

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Como mencionado acima, as estatinas com uma conformação de ácido hidroxi aberta são conhecidas por terem um efeito inibidor sobre a HMG-CoA redutase. É também sabido que a 17 lactona, o anel fechado análogo de tais ácidos hidroxi, é inativa no que diz respeito à inibição da HMG-CoA redutase e que a desciclização da lactona é necessária para ativar a lactona. No entanto, verificou-se que os lactóis funcionalizados da presente invenção têm um efeito inibitório significativo sobre a HMG-CoA redutase, por direito próprio. Isto é surpreendente tendo em vista o facto de estas moléculas serem conformacionalmente constrangidas em forma de anel fechado.

Exemplos de condições que podem ser tratadas pela inibição da HMG-CoA redutase incluem a hipercolesterolemia, aterosclerose e hiperlipidemia. As estatinas têm sido utilizadas na prevenção secundária de doenças cardiovasculares, ou na prevenção primária da doença cardiovascular, quando o risco de doença cardiovascular é significativamente aumentado. Portanto, espera-se que o composto da presente invenção tenha utilidade no tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares, devido à sua atividade inibidora. Exemplos de doenças cardiovasculares que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção incluem: a doença cardíaca coronária, enfarte do miocárdio, acidente vascular cerebral e doença arterial periférica. Além disso, estes compostos podem também ter um efeito benéfico no tratamento da inflamação, demência, cancro, cataratas nucleares, diabetes e hipertensão.

As condições que podem ser tratadas pela inibição da HMG-CoA redutase podem ser uma condição do corpo humano ou animal. Estes compostos são destinados, em particular, para pacientes humanos. 18

Os derivados de atorvastatina da presente invenção podem ser testados utilizando o seguinte procedimento no qual o nivel de triglicéridos no plasma é medido após o tratamento de um rato com um composto do presente invento (ou com atorvastatina). A alteração nos níveis de triglicéridos no plasma de ratos é considerada como sendo um teste equitativo para determinar a atividade da HMG CoA redutase. 0 procedimento utilizado é o seguinte: ratos SD machos (Harlan) são alojados em grupos de 6, sob um ciclo de luz escura de 12h (luzes acesas às 07 : 00 h) , com acesso livre à comida (ração normal de laboratório) e água. Os animais entre 148-183 g são divididos em grupos de tratamento de 8, em termos de peso corporal e os tratamentos são equilibrados em gaiolas. São realizadas soluções, incluindo de 5 mg/mL de análogos de atorvastatina (por exemplo, em 10% de PEG300/10% cremofor/80% de metilcelulose (0,5%)) e uma suspensão incluindo 5mg/kg de atorvastatina (formulada em 0,5% de Tween em 0,5% de metilcelulose%).

Os ratos são doseados oralmente com um dos análogos de atorvastatina (25mg/kg) ou atorvastatina (25 mg/kg po), BID durante 3 ou 5 dias.

Dezasseis horas após o último tratamento, são recolhidas amostras de plasma terminal, sendo armazenadas a -20 °C, e transportadas em gelo seco para a análise dos níveis de triglicéridos.

Os dados para cada ponto de tempo sao analisados por ANOVA 19 de 1 via e teste de post-hoc de Dunnett.

Os processos para o fabrico dos compostos da presente invenção são descritos em W02005/012246, em especial, nos exemplos. A presente divulgação também inclui a síntese de todos os compostos farmaceuticamente aceitáveis isotopicamente marcados da fórmula (I) em que um ou mais átomos são substituídos por átomos que têm o mesmo número atómico mas uma massa atómica ou um número de massa diferente da massa atómica ou número de massa usualmente encontrado na natureza.

Exemplos de isótopos apropriados para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, tais como 2H e 3H, carbono, tais como 41C, 13C e 14C, cloro, tal como 36C1, flúor, tal como 18F, iodo, tal como 123I e 125I, azoto, tal como 13N e 15N, oxigénio, tal como 150, 170 e 180, fósforo, tal como 32P, e enxofre, tal como 35S.

Certos compostos marcados isotopicamente, por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioativo, são úteis nos estudos de distribuição no tecido do fármaco e/ou substrato. Os isótopos radioativos de trítio, isto é 3H, e carbono-14, isto é, 14C, são particularmente úteis para esta finalidade, tendo em conta a sua facilidade de incorporação e meios rápidos de deteção. A substituição por isótopos mais pesados tais como deutério, isto é 2H, pode produzir certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, uma semivida in vivo aumentada ou necessidades 20 de dosagem reduzidas e, portanto, podem ser preferidas em algumas circunstâncias. A substituição por isótopos emissores de positrões, como 13Ό, 18F, 150 e 13N, pode ser útil em estudos de Topografia de Emissão de Positrões (PET) para o exame de ocupação do recetor do substrato.

Os compostos marcados isotopicamente podem ser geralmente preparados por meio de técnicas convencionais conhecidas dos peritos na arte ou por processos análogos aos descritos utilizando um reagente isotopicamente marcado adequado em lugar do reagente não-marcado previamente empregue.

Ao longo da descrição e das reivindicações da presente especificação, as palavras "compreende" e "contém" e as variações das palavras, por exemplo "compreendendo" e "compreende" significam "incluindo mas não limitado a", e não se destinam a excluir (e não excluem) outras quantidades, aditivos, componentes, números inteiros ou etapas.

Ao longo da descrição e reivindicações da presente especificação, o singular inclui o plural a menos que o contexto imponha interpretação diferente. Em particular, quando o artigo indefinido é usado, a especificação deve ser entendida como contemplando a pluralidade, bem como a singularidade, a menos que o contexto exija de outra forma.

Caracteristicas, números inteiros, propriedades, compostos, quantidades ou grupos químicos descritos em conjunto com um aspeto particular, forma de realização ou exemplo da 21 invenção, são para ser entendidos como aplicáveis a qualquer outro aspeto, forma de realização ou exemplo aqui descritos, a menos que incompatível com os mesmos.

Procedimento Geral

Todos os testes foram realizados num tampão de reação contendo 100 nM de KXPC>4 a um pH 7,2, 1 mM de EDTA, 50 0 mM de KC1 e 1 mg/mL de BSA. As concentrações de NADPH e de HMG-CoA foram ambas de 200 μΜ. A concentração de enzimas utilizada é desconhecida, embora esta concentração seja 10 vezes mais baixa do que a da solução em stock adquirida. Os inibidores foram dissolvidos em 75% de DMSO. Quando os inibidores demonstraram ser insolúveis ou apenas parcialmente solúveis em 75% de DMSO, usou-se 100% de DMSO. As reações foram ativadas através da adição de enzimas e agitadas durante 12 segundos após a adição. As leituras de absorvância foram então feitas a cada 20 segundos durante 600 segundos. Nos testes iniciais, a concentração de cada inibidor foi estabelecida em 50 nM para identificar que compostos foram os melhores inibidores, em comparação com o inibidor conhecido de Pravastatina. Após estes terem sido identificados, os ensaios foram realizados fazendo variar as suas concentrações de 0 nM para 50 nM para permitir que os valores de IC50 fossem calculados.

Exemplo 1 O seguinte procedimento foi seguido utilizando um kit de ensaio de inibidores da HMG-CoA Redutase obtido a partir de Sigma-Aldrich (número de catálogo CS1090). O ensaio baseia-se na medição espetrofotométrica do decréscimo da 22 absorvância a 340 nm em solução de NADPH. Uma diminuição na absorvância é causada pela oxidação do NADPH pela subunidade catalítica de HMGR, na presença da HMG-CoA do substrato. A inibição eficaz da HMG-CoA conduz a uma redução da oxidação do NADPH, que por sua vez leva a uma menor redução na absorvância a 340 nm ao longo do tempo. Isto é ilustrado no seguinte esquema de reação:

HMG-CoA + 2NADPH + 2H+ - mevalonato + 2NADP+ + CoA-SH

Os compostos que mostram a melhor ação inibidora são aqueles que menos reduzem a absorvância.

Preparação da solução de teste Água ultrapura (17 ΜΩ-cm ou equivalente foi utilizada para a preparação de reagentes e ao longo do processo.

Em primeiro lugar, uma solução de tampão de ensaio foi preparada utilizando o seguinte método: 0,2 mL de tampão de ensaio, 5x (número de catálogo A5981) foram diluídos com 0,8 mL de água ultrapura. A solução tampão resultante foi mantida em gelo ou armazenada a -20 °C para posterior utilização.

Em seguida, 25 mg de NADPH (número de catálogo N6505) foram reconstituídos com 1,5 mL da solução tampão. O NADPH reconstituído foi armazenado em alíquotas de trabalho a -20 °C. A solução de substrato de HMG-CoA (número de catálogo S7447), HMG-CoA redutase (número de catálogo H8789) e solução de inibidor (por exemplo, a pravastatina, número de 23 catálogo 15909) foram mantidas em gelo durante todo o processo. 1. Antes de começar, o espetrómetro foi fixado em 37 °C e 340 nm, com um programa de cinética: 1 mL de amostra, lida a cada 20 segundos durante até 10 minutos. 2. Os volumes adequados das soluções de reação foram adicionados de acordo com a Tabela 1 (1 mL de ensaio).

Tabela 1

Volumes de reação para amostras de 1 mL Amostra 1 x Tanpão de Ensaio Conposto de Teste/ Pravastatina NADPH HMG-CoA HGMG Em branco 920 pL - 20 pL 60 pL - Atividade 915 pL - 20 pL 60 pL 5 pL Inibição 910 pL 5 pL 20 pL 60 pL 5 pL

Os reagentes foram adicionados à reação na seguinte ordem: a. Adição de um tampão a todas as amostras. b. Adição do inibidor (composto de teste/Pravastatina) à amostra de inibição. c. Adição do NADPH reconstituído a todas as amostras. d. Adição da Solução de Substrato (HMG-CoA) a todas as amostras. e. Adição da HMG-CoA Redutase (HMGR) às amostras de Atividade e de Inibição. f. Mistura das amostras completamente. 3. O programa de cinética foi iniciado imediatamente. A atividade do produto foi calculada de acordo com a seguinte equação: 24

Unidades/mgP — (AA34o/minamostra _ AA34o/minCOntroio) x TV

12,44 x V x 0,6 x LP em que: 12,44 = - o coeficiente de extinção para NADPH a 340 nm é 6,22 mM^cm-1. 12,44 representa o 2 NADPH consumido na reação. TV = volume total da reação em mL (1 mL por cuvete) V = volume de enzimas usadas no ensaio (mL)

0,6 = concentração de enzimas em mg-proteína (mgPO/mL (0,55-0,65 mg P/mL) LP = caminho da luz em cm (1 por cuvete).

Exemplo 2 A tabela abaixo apresenta os valores de IC50 para determinados compostos de atorvastatina da presente invenção.

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Lisboa,

Claims (18)

1. 27 REIVINDICAÇÕES solvatos Um composto da Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo: or :'··γ'ν< I | Jzsssyf' ^ % para uso no tratamento de uma condição tratável por meio da inibição da enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), em que a condição tratável através da inibição de HMG-CoA redutase é selecionada a partir do grupo constituído por: hipercolesterolemia, aterosclerose, hiperlipidemia, doença cardiovascular, doença cardíaca coronária, enfarte do miocárdio, acidente vascular cerebral, doença arterial periférica, inflamação, demência, cancro, cataratas nucleares, diabetes e hipertensão ainda em que R1, R4 e um de R2 e R3 são selecionados independentemente de entre o grupo que consiste em: hidrogénio, halo, alquilo Ci-6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, arilo, alquil-arilo C1-4, heterociclilo, e alquil-heteroarilo C1-4; o outro de R2 e R3 é -CONR9R10 onde R9 e R10 são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, arilo, alquil-arilo C1-4, heteroarilo, heteroarilo Ci^4; R5 e R6 são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci_6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, 28 arilo, alquil-arilo Ci-6, alcanoil-arilo Ci_6, heteroarilo, alcanoil-heteroarilo Ci_6, e alquil- heteroarilo Ci_6; desde que tanto R1 como R2 nunca sejam hidrogénio; R3 e R8 são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, alquilo C1-4 e halo; X é - (CRaRb)m(CRa=CRb)n(CRaRb)o em que Ra e Rb são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de: H, metilo, etilo e halo em, n e o são independentemente 0, 1, 2 ou 3, desde que m + n + o não seja mais do que 3; e em que cada um dos grupos acima R1 a R10 pode, quando quimicamente possível, ser independentemente opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos escolhidos independentemente em cada ocorrência, de entre os grupos constituídos por: halo, alquilo C1-3, halo-alquilo C1-3, alcoxi C1-3, haloalcoxi C1-3, hidroxi, e ciano.
2. 2. Um composto para utilização de acordo com reivindicação 1, em que R1 é alquilo Ci-6.
3. 3. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que R2 é - CONR9R10 em que R9 é H e R10 é arilo.
4. 4. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que R3 é arilo. 1 Um composto para utilização de acordo com qualquer uma 2 das reivindicações anteriores, em que R e arilo 3 opcionalmente substituído. 29
5. 6. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R1 é i-propilo, R2 é -CONHPh, R3 é fenilo e R4 é 4-fluorofenilo.
6. 7. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R5 é selecionado a partir do grupo consistindo de: hidrogénio, arilo, alquil-arilo Ci-6, alcanoil-arilo Ci_6, heteroarilo, alcanoil-heteroarilo Ci-6, e alquil-heteroarilo Ci-6·
7. 8. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que R5 é hidrogénio.
8. 9. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que R5 é selecionado a partir do grupo consistindo de: alquil-Ph -Ci, alquil-Ph -C2, alquil-Ph -C3, e alquil-Ph -C4; opcionalmente, em que R5 é benzilo.
9. 10. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que R5 é alcanoil-piridina Ci-eí opcionalmente em que R5 é 3-metanoil piridina.
10. 11. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo C1-6r haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, arilo opcionalmente substituído e alquil-arilo C1-6.
11. 12. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-e e arilo opcionalmente substituído; opcionalmente em que R6 é selecionado de entre o grupo 30 consistindo de: metilo, etilo, propilo, butilo, ciclohexilo e alilo.
12. 13. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que R6 é arilo opcionalmente substituído; opcionalmente em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: alcoxi Ci-6 fenilo substituído; opcionalmente em que R6 é 2,4- dimetoxifenilo.
13. 14. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a reivindicação 6, em que R5 é hidrogénio e R3 é um alquilo Ci_6, cicloalquilo C3-6, ou um arilo opcionalmente substituído.
14. 15. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a reivindicação 6, em que R5 é um benzilo opcionalmente substituído e R6 é um alquilo Ci-6 opcionalmente substituído, ou um alquenilo C2-6 opcionalmente substituído.
15. 16. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a reivindicação 6, em que R5 é um alcanoil-heteroarilo Ci_6 e R6 é um alquilo Ci_6 opcionalmente substituído.
16. 17. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R7 é H e R8 é H.
17. 18. Um composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que cada Ra é H, cada RbéHem=2, n=0eo=0.
18. 19. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 1, que tem uma estrutura selecionada a partir de: 31 .,Χ XV 11 * \Χ V..,·- X 0 Α Χκ Ν' -' Μ Η Λ Vx X ,Λ ¥ χχ f X/ ο % .«ίχ ‘•.^'>· :|Χ: ^ Η -Α Vs i \ // x< ΥΛ } Γ··\ ': \ "ο’ να Χχ. ο XΑ, °χη. jt f 1. χχν ν, ν··Ά .Α ,·' X. Λ'ν V<-v · Ο * χΑ /X, \ ;Γ X GM V / X,/ V / _ Cs \. $ $ κ,. ,,-ν „Α, .α. Μ '·' 0 * -Α'α χ /- -Λ ti X / S. s; < V # F Α ^χΑ©·^ rx χαχ r% # η \J "-'X 32 e JtX & N>" Ο X. U H \. < O | Λ Lisboa,