PT1511764E - Peptídeo útil para inibir a actividade do receptor de prostaglandina f2alfa - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

PEPTÍDEO ÚTIL PARA INIBIR A ACTIVIDADE DO RECEPTOR DE

PROSTAGLANDINA F2ALFA

Campo da invenção O objecto da presente invenção refere-se a um peptídeo inibidor do receptor de prostaglandina F2a (FP). Além disso, a invenção refere-se também a composições farmacêuticas que contêm dito inibidor do receptor FP para a sua utilização em métodos de tratamento de parto prematuro e dismenorreia.

Antecedentes

As prostaglandinas derivam-se da oxigenação de ácido araquidônico por prostaglandina sintases. As prostaglandinas mediam uma ampla variedade de acções fisiológicas, tais como vasomotricidade, ciclo sono-vigilia, secreção intestinal, lipólise, filtração glomerular, desgranulação de mastócitos, neurotransmissão, agregação plaquetária, luteólise, contracção miometrial e parto, inflamação e artrite, conduto arterioso persistente, diferenciação e crescimento celular (Coleman, R.A., Smith, W.L. e Narumiya, S. 1994. Pharmacol. Rev. 46: 205-229; Goetzl, E.J., An, S. e Smith, W.L. 1995. FASEB J. 9: 1051-10585). Os prostanóides mediam as suas acções através da união a distintos receptores que pertencem à superfamilia de receptores de sete hélices transmembrana similares à rodopsina. Estes receptores acoplam-se a proteínas G heterotriméricas compostas por subunidades α, β e γ que, após a activação, provocam alterações no cálcio celular, iniciam a hidrólise de fosfoinositídeos ou a promoção ou repressão da síntese de adenosina monofosfato 1 cíclico (Strader C. D. et al., 1994 Ann. Rev. Biochem. 63: 101-132).

Dos cinco receptores prostanóides farmacologicamente distintos para PGE2, PGI2, PGD2, PGF2a e TxA2 e as suas muitas isoformas, o receptor para PGE2a, também denominado receptor FP, mostra uma distribuição tissular limitada, expressa-se de maneira predominante em corpos lúteos, miométrio uterino, malha trabecular do olho e em menor medida em músculo liso vascular. A iniciação do parto está marcada por um grande aumento nos níveis de PGF2a e um aumento na contractilidade uterina. A utilização estendida de análogos de PGF2a para induzir o parto na indústria veterinária sinala o papel principal de PGF2q e o seu receptor no parto. Isto é enfatizado pelo facto de que os ratos que carecem do receptor FP não experimentam o parto (Sugimoto et al., Science, 277: 81-83, 1997) . Frente aos custos crescentes acarretados como resultado de nascimentos prematuros e complicações associadas ao recém-nascido, tais como hemorragia intraventricular, displasia broncopulmonar e leucomalácia periventricular que conduzem a paralisia cerebral, a prolongação da gestação detendo o parto prematuro é uma terapia preventiva eficaz. O sucesso relativo de fármacos anti-inflamatórios não esteróides como terapia em curto prazo para a prevenção do parto prematuro baseia-se nas suas acções inibidoras após a síntese de prostaglandinas, particularmente PGE2 e PGF2a. Contudo, a inibição da primeira está associada com graves complicações para o feto tais como o fechamento do conduto arterioso, insuficiência renal e hipertensão pulmonar. Portanto, há uma necessidade terapêutica de encontrar antagonistas do receptor FP para tratar o parto prematuro. 2 A outro nível, atribuiu-se a PGF2a um papel fundamental na dismenorreia, um estado que afecta a 5%-7% das mulheres pré-menopáusicas. Um aumento pré-menstrual nos níveis de PGF2a que resulta em espasmos miometriais subjaz na patogenia deste transtorno. A falta de antagonistas do receptor FP eficazes para a terapia prolongada dificultou os avances na prevenção do parto prematuro e as sequelas associadas, e a provisão de tais antagonistas é o objecto deste pedido. 0 receptor FP humano é uma glicoproteína de membrana integral de 45 kDa, que consiste em 359 aminoácidos e comparte só 47% de identidade de sequência com o receptor EPi, e em menor medida com outros receptores prostanóides (Abramovitz et al. 1994. J. Biol. Chem. 269: 2632-2636). A união de PGF2a ao receptor FP está seguida pela activação do complexo Gapy, o aumento da união a GTP pela subunidade Ga, a estimulação da actividade fosfolipase Οβ, a libertação de inositol fosfatos, o aumento do cálcio intracelular e os fenómenos de transdução de sinais posteriores que conduzem em última instância à contracção do músculo liso (Coleman, R.A. et al. 1994. Pharmacol. Rev. 46: 205-229). Posto que o ligando natural, PGF 2Π e os compostos baseados em ligandos têm reatividade cruzada com outros receptores prostanóides e até a data, não se revelaram antagonistas do receptor FP selectivos e eficazes, é de relevância terapêutica imediata no parto pré-termo e a dismenorreia proporcionar antagonistas de FP, tal como realiza-se nesta presente invenção. A modificação do ligando natural do receptor FP, PGF2a, produziu agonistas potentes e selectivos do receptor, contudo não se revelaram antagonistas selectivos e potentes por estes enfoques. Mostrou-se que dois compostos, floretina (Kitanaka 3 J et al 1993 J Neurochem 60: 704-708) e AL8810 (Griffin BW et al 1999. J. Pharmacol. Exp. Ther. 290 (3): 1278-1284) têm actividade antagonista frente ao receptor FP. A floretina, que também mostrou que tem efeitos antagonistas sobre o transporte de glucose (Lefevre PG 1961. Pharmacol Rev 13: 39-70) é um antagonista débil do receptor FP (CI50 de 20 μΜ) e não selectivo com respeito a PGE2. Mostra-se que AL8810, um derivado de ll-fluoro-15 (2-indanilo) de PGF2a, é um agonista parcial débil do receptor FP, embora encontra-se que antagoniza selectivamente o receptor FP em presença de um fluprostenol, um agonista completo do receptor FP (Griffin BW et al 1999. J. Pharmacol. Exp. Ther. 290 (3): 1278-1284). O documento WO 00/017348 descreve um agonista ou antagonista de receptores de proteínas G que se une especificamente aos elementos estruturais extracelulares de justamembrana do receptor acoplado a proteínas G de uma maneira diferente à do ligando natural, agonista ou antagonista que altera a transdução de um sinal intracelular.

Portanto, há uma necessidade de proporcionar antagonistas altamente selectivos e potentes, frente ao receptor FP com vistas a desenvolver formulações terapêuticas para deter o parto prematuro e a dismenorreia. Da maneira mais importante, as formas de realização da presente invenção contêm inibidores do receptor FP, e a demonstração da acção inibidora de ditos peptídeos sobre a actividade biológica do receptor FP. As formas de realização a modo de exemplo incluem a utilidade dos inibidores peptídicos para reduzir a intensidade da contracção uterina, sendo dita contracção um mecanismo central envolvido na iniciação e progressão do parto assim como a dor menstrual. 4

Sumario da invenção A invenção refere-se a um peptídeo que consiste na sequência ilgh(cit)dyk (SEQ ID NO: 32).

Esta invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, imidas, ésteres e amidas biohidrolizáveis das mesmas.

Numa realização preferida, o peptídeo inibe substancialmente o receptor FP.

Numa realização preferida, o receptor FP procede de um mamífero.

Numa realização preferida, o mamífero é um ser humano.

Numa realização preferida, mede-se a inibição do receptor FP de acordo com a contracção microvascular de retina suína frente a prostaglandina F2a, sendo a inibição pelo menos 50% da produzida pelo ligando na ausência do peptídeo.

Numa realização preferida, o peptídeo tem uma inibição do receptor FP medida de acordo com a contracção microvascular de retina suína frente a prostaglandina F2a»· sendo a inibição pelo menos 50% da produzida pelo ligando na ausência do peptídeo. A invenção refere-se também a uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo de SEQ ID NO 32, em associação com um portador farmaceuticamente aceitável. 5

Numa realizaçao preferida, a quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo é de 0,1-100 mg/kg de peso corporal.

Numa realização preferida, o peptídeo utiliza-se sozinho ou em combinação com um portador farmaceuticamente aceitável, para inibir o receptor FP.

Numa realização preferida, a composição farmacêutica utiliza-se para a preparação de um medicamento para deter o parto pré-termo.

Numa realização preferida, a composição farmacêutica utiliza-se para a preparação de um medicamento para o tratamento de dismenorreia.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A figura 1 é uma representação gráfica da resposta à dose de THG113 sobre a contracção microvascular de retina suína. A figura IA representa a inibição dependente da dose da contracção produzida por PGF2a mediante THG113. A figura 1B representa a determinação da CI50 de THG113 neste ensaio. A figura 2 representa a caracterização bioquímica de THG113. A figura 2A representa a união específica de [125I ] -THG113 a células que expressam o receptor hFP. A figura 2B representa o deslocamento de [3H]-PGF2a unido por PGF2a ou THG113 no ensaio de células FP/293 completas. A figura 2C representa o deslocamento de [1251 ] -THG113 unido por THG113 no ensaio de células FP/293 completas. A figura 2D representa a hidrólise de fosfoinositídeos mediada por PGF2a em células FP/293. A figura 2E representa a hidrólise de fosfoinositídeos mediada 6 por PGF2α em células FP/293 em resposta a dose incrementais de THG113 na presença de PGF2α 1 μΜ. A figura 2F é um histograma dos efeitos de THG113 sobre a hidrólise de fosfoinositídeos induzida por PGF2a em células FP/293. A figura 3 representa o efeito de THG113 sobre a contractilidade de tiras de útero de rato imediatamente após a parturição. A figura 3A é um polígrafo que grava as respostas contrácteis. As setas sinalam o tempo de adição de THG113 ou PGF2a. As figuras 3B E 3C mostram um histograma de alterações temporais na tensão basal (parte superior) e induzida por PGF2a (1 μΜ).

As figuras 4A e 4B representam o efeito tocolítico de THG113 num modelo de rato de parto pré-termo relacionado com infecção. A figura 5 mostra as curvas de dose-resposta da contractilidade microvascular, a figura 5A frente a PGF2a na presença/ausência de THG113 e os seus derivados (10 μΜ) num ensaio com copa ocular suína. Todos os compostos inibiram as respostas induzidas por PGF2a inclusive a altas concentrações do agonista. A figura 5B, a resposta inibidora de doses crescentes de THG113 e os seus derivados na contractilidade ocular suína induzida por PGF2a 1 μΜ.

As figuras 6A-F mostram o efeito de THG113. 31 sobre as propriedades contrácteis (duração e tensão média da contracção) de tiras de útero obtidas de ratas que recentemente deram a luz em resposta a PGF2a 1 μΜ no ensaio de banho de órgãos. 7 A figura 7 mostra o efeito tocolitico de THG113.31 num modelo de endotoxina de parto pré-termo de rato. A figura 7A mostra o tempo médio (h) de parturição após a administração de LPS. A figura 7B mostra a percentagem de animais que deram a luz às 15, 24, 48 e 72 h após a administração de LPS.

Descrição detalhada da invenção

Com vistas a proporcionar antagonistas específicos do receptor FP, realizou-se uma selecção de bibliotecas de D-peptídeos curtos em ensaios ex vivo de contracção microvascular. Baseando-se nesta selecção, seleccionou-se um peptídeo, THG 113 (SEQ ID N0.1, tabela 4) . Com o fim de identificar um análogo mais potente de THG113, realizaram-se diferentes substituições de aminoácidos e determinaram-se os efeitos biológicos de estas substituições em ensaios de contractilidade microvascular. A partir destes experimentos, identificaram-se vários análogos potentes de THG113. A invenção refere-se a um peptídeo que consiste na sequência ilgh(cit)dyk) SEQ ID NO 32).

Esta invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, imidas, ésteres e amidas biohidrolizáveis das mesmas.

Numa realização preferida, o peptídeo inibe substancialmente o receptor FP.

Numa realização preferida, o receptor FP procede de um mamífero.

Numa realização preferida, o mamífero é um ser humano.

Numa realizaçao preferida, mede-se a inibição do receptor FP de acordo com a contracção microvascular de retina suína frente a prostaglandina F2ar sendo a inibição pelo menos 50% da produzida pelo ligando na ausência do inibidor.

Numa realização preferida, o peptídeo tem uma inibição do receptor FP medida de acordo com a contracção microvascular de retina suína frente a prostaglandina F2a, sendo a inibição pelo menos 50% da produzida pelo ligando na ausência do inibidor. A invenção refere-se também a uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo de SEQ ID NO 32, em associação com um portador farmaceuticamente aceitável.

Numa realização preferida, a quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo é de 0,1-100 mg/kg de peso corporal.

Numa realização preferida, o peptídeo utiliza-se sozinho ou em combinação com um portador farmaceuticamente aceitável, para inibir o receptor FP.

Numa realização preferida, a composição farmacêutica utiliza-se para a preparação de um medicamento para deter o parto pré-termo.

Numa realização preferida, a composição farmacêutica utiliza-se para a preparação de um medicamento para o tratamento de dismenorreia.

Qualquer união amida no peptídeo pode substituir-se por um resto cetometileno, hidroxietilo, etilamida/amida reduzida, 9 tioamida ou restos de amida invertida, por exemplo (-C=0)-CH2-), (-CHOH) -CH2-) , (CH2-CH2-), (-C=S)-NH-) OU (-NH-(-C=0) para (-C=0)-NH-). A presente invenção entender-se-á mais facilmente a fazer referência aos seguintes exemplos que se proporcionam para ilustrar a invenção mais que para limitar seu escopo.

Os seguintes exemplos ilustram a potência e eficácia farmacológica do antagonismo de THG113 sobre o receptor FP e as suas respostas bioquímicas e fisiológicas.

Resposta à dose de THG113 sobre a contracção microvascular de retina suína (só para referência)

Com o fim de observar se THG113 poderia inibir a função do receptor FP num sistema ex vivo, elegeu-se o modelo de copa ocular suína, um ensaio ex vivo de constrição vascular em retinas suínas que se descreveu e validou previamente (Li et al. 1996 J Pharmacol Exp Ther. 2 78 (1):370-7). Posto que as densidades do receptor FP na vasculatura de recém-nascidos são mínimas devido à regulação por diminuição mediante altos níveis de prostaglandinas circulantes no período perinatal, trataram-se os porcos recém-nascidos com um bloqueador de prostaglandina sintase, ibuprofeno (30 mg/kg de peso corporal/8 h durante 24 h) para aumentar a densidade dos receptores assim como os seus efeitos vasomotores. Ao inibir as prostaglandinas circulantes, pôde-se mostrar a potente inibição da síntese de segundos mensageiros mediada pelo receptor FP assim como a constrição vascular mediada por FP neste modelo de copa ocular. 10

Para preparar as copas oculares, realizou-se uma incisão circular a 3-4 mm de maneira posterior à ora serrata para retirar o segmento interior e o corpo vítreo com mínima manipulação da retina. Fixou-se a copa ocular restante com pinos a uma base de cera num banho de tecido de 20 ml que continha 20 ml de tampão de Kreb (pH 7,35-7,45) e equilibrou-se com 21% de oxigénio e 5% de dióxido de carbono a 37°C. Permitiu-se que se estabilizassem as preparações durante 30 min. Adicionaram-se peptídeos a 100 μΜ e continuou-se com a incubação durante 20 min. antes da adição de PGF2a.

Construíram-se as curvas de concentração-resposta acumulativas de PGF2a ou os antagonistas (de 10~10 a 10“5 M) . Para avaliar a reversibilidade dos antagonistas, lavaram-se meticulosamente as copas oculares (o que eliminaria por lavado o peptídeo) com meio de incubação e determinaram-se as curvas de concentração-resposta para PGF2a· Registou-se o diâmetro do vaso exterior com uma videocâmara montada sobre um microscópio de dissecção (Zeiss M 400) e quantificaram-se as respostas mediante um analisador de imagens digitais (Sigma Scan Software, Jandel Scientific, Corte Madera, CA). Registou-se o diâmetro vascular antes e 5 min. depois da aplicação tópica do agonista. Repetiu-se cada medição três vezes e mostrou uma variabilidade <1%.

Tal como se mostra na figura 1, teve uma inibição dependente da dose da contracção produzida por PGF2a (0,1 μΜ, concentração fisiológica) mediante THG113, e a THG113 100 μΜ nem sequer níveis suprafisiológicos de PGF2a produziram uma resposta contráctil (figura IA) . A CI50 calculada de THG113 neste ensaio é de 340 nM (figura 1B). 11

Avaliou-se a selectividade de THG113 frente ao receptor FP medindo as respostas contrácteis microvasculares frente a vários receptores acoplados a proteínas G (GPCR) (entre parêntesis) para PGF2a (FP) , PGE2 (EPi) , TxA2 (TP) , fenilefrina (alfa-l-adrenérgico) , endotelina (ETA) , angiotensina II (AT2) e acetilcolina (subtipos não caracterizados) na presença de THG113 0,1 mM; utilizou-se BHQ para mostrar que as dinâmicas de Ca2+ intracelular permaneciam inalteradas mediante THG113 (tabela 3). A uma concentração 0,1 μΜ dos agonistas, a inibição de THG113 era selectiva só para o receptor FP.

Tabela 3

Selectividade da inibição de THG113 frente ao receptor FP

Agonista % de 10"6 M inibição 10"7 M PGF 2a (FP) 90, 4 85 17-fenil-trinor-PGE2 (EP2) 16, 7 <1 U46619 (TP) <1 C-PAF <1 <1 Fenilefrina (ai-AR) <1 Urotensina <1 Endotelina (ETA) <1 Angiotensina II <1 Acetilcolina <1 BHQ (inibidor Ca2+-ATPase de SR) <1 12

Caracterização bioquímica de THG113 (só para referência) A caracterização bioquímica de THG113 mostra-se na figura 2. Produziu-se [ 125I]-THG113 marcando o resíduo de tirosina com [1251] a utilizar o método da lactoperoxidase (Thorell et al. 1971 Biochim. Biophys. Acta 28, 251(3): 363-369). Incubaram-se células HEK293 que expressavam de maneira ectópica o receptor FP humano clonado, FP/293, (105) com [125I] -THG113 (106 cpm) durante 1 h; separaram-se os ligandos unidos e não unidos mediante filtração sobre filtros de fibra de vidro. Contou-se a radioactividade sobre os filtros mediante espectrofotometria de cintilação. Para um método detalhado da união e o deslocamento de ligandos, veja-se Li et al. (1996) . Observou-se uma união muito pouco específica de [ 125I]-THG113 a células HEK293 parentais e uma união 27 vezes mais específica a células FP/293 (figura 2A) , o que sugere que THG113 se une especificamente à proteína FP humana. A utilizar células FP/293 clonadas em ensaios de união (veja-se Li et al. para um método de ensaio de deslocamento de ligandos), investigou-se a união específica de THG113 à proteína FP. Deslocou-se completamente a união de [3H]PGF2a por PGF2« frio (figura 2B) , mas detectou-se um escasso deslocamento de [3H]PGF2a por THG113 (figura 2C).

Marcaram-se as células FP/293 com [3H]-mioinositol durante 24 h e estimularam-se com PGF2a (figura 2D) ou THG113 (figura 2E) na presença de PGF2a 100 nM durante 30 min. Recolheram-se os fosfoinositídeos mediante cromatografia de intercâmbio aniônico com formiato de amónio 1 M/ácido fórmico 0,1 N. Obteve-se uma resposta à dose sigmoide da hidrólise IP frente a PGF2a com uma CE50 de 2 0 nM (D) . THG113 inibiu de maneira 13 dependente da dose a hidrólise de fosfoinositideos estimulada por PGF2d (E e F) .

Efeito de THG113 sobre a contractilidade de tiras de útero de rato imediatamente após a parturição (só para referência)

Dissecaram-se tiras de miométrio (1 cm) de ratas prenhas imediatamente após a parturição (quando o útero está ainda não quiescente) e suspenderam-se em banhos de órqãos que continham 10 ml de tampão de KREB borbulhado com 90% de oxigénio. Registaram-se as respostas contrácteis a utilizar transductores de pressão conectados a um polígrafo Gould. As setas sinalam o tempo de adição de THG113 ou PGF2a. Tal como se mostra no painel da esquerda, diminuíram-se tanto as respostas espontâneas assim como as contrácteis induzidas por PGF2a (1 μΜ) dentro de 20 min. após a adição de THG113 100 μΜ. O painel da direita mostra as alterações temporais na tensão basal (parte superior) e induzida por PGF2a (1 μΜ) .

Efeito tocolítico de THG113 num modelo de rato de parto pré-termo relacionado com infecção (compostos 1-31 só para referência)

Adquiriram-se ratas CD-I prenhas de maneira programada (a gestação média era de 19,2 dias) e no dia 17, implantaram-se cirurgicamente bombas Alzet que continham THG113 em solução salina na lombada dos animais. Estas bombas administram de maneira contínua o inibidor a 1 mg/dia. Injectou-se lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli (50 μg por via i.p. duas vezes a intervalos de 3 h) no dia 15. Os animais tratados com solução salina deram a luz dentro de 15 h desde a administração de LPS, enquanto que o tratamento com THG113 14 atrasou o parto em 60% de animais passadas 15 h; o tempo médio de parturição nos animais tratados com THG113 foi de 36 h (figura 5).

Efeitos de derivados de THG113 no ensaio de contracção microvascular suína (compostos 1-31 só para referência)

Os efeitos de derivados de THG113 sobre a contracção microvascular de retina suína mostram-se na tabela 4. A inibição em percentagem (%) indica a contracção de microvasos oculares suínos em resposta a PGF2a 100 nM na presença de peptídeo 0,1 mM, em relação com a mesma na ausência do peptídeo, expressado como percentagem.

Tabela 4

Efeitos dos inibidores do receptor FP no ensaio de contracção microvascular suina N. 0 de Nome do Sequência % de inibição composto peptídeo (de N a C) 1 THG113 ilghrdyk 80 2 THG113.1 g h r d y k 37 3 THG113.2 ilgardyk 10 4 THG113.3 ilghadyk 38 5 THG113.4 ilghrayk 0 6 THG113.5 ilgHrayk 65 7 THG113.6 ilghRdek 0 8 THG113.7 ilghrDyk 36 9 THG113.8 ilahrdyk 76 10 THG113.9 ilAhrdyk 53 11 THG113.10 ilghrdyw 23 12 THG113.11 ilghrdek 0 15

Tabela 4 (continuação)

Efeitos dos inibidores do receptor FP no ensaio de contracção microvascular suina N. 0 de Nome do Sequência % de inibição composto peptídeo (de N a C) 13 THG113.12 i 1 g f r d y k 87 14 THG113.13 i 1 g h r e y k 43 15 THG113.14 i 1 g h k d y k 63 16 THG113.15 i 1 g h r n y k 60 17 THG113.16 i 1 g h r d y 13 18 THG113.17 i 1 P h r d y k 45 19 THG113.18 i 1 h r d y k 13 20 THG113.19 i 1 g h q d y k 70 21 THG113.20 i 1 g h r s y k 25 22 THG113.21 i 1 g h r d y - 50 amida 23 THG113.22 i 1 g h r d y k - 54 amida 24 THG113.23 i 1 g w r d y k 83 25 THG113.24 i 1 g y r d y k 49 26 THG113.25 i 1 g - (cha)- r d y 94 k 27 THG113.26 i 1 g (cha) q d y k 21 28 THG113.27 i 1 g (cha) r n y k 54 29 THG113.28 k y d r h g 1 1 47 30 THG113.29 i 1 g h - (3PA) - q >85 d y k 31 THG113.30 i 1 g h -(4PA) -d y >85 k 32 THG113.31 i 1 g h (cit) d y k >85 16

Letras minúsculas: D-aminoácidos; letras maiúsculas: L-aminoácidos; cha: D-ciclohexilalanina; PA: L-piridilalanina; cit: D-citrulina.

Dose-resposta de contractilidade microvascular frente a PGF2a na presença e ausência de inibidores (compostos 1-31 só para referência)

Determinaram-se as curvas dose-resposta de contractilidade microvascular frente a PGF2a na presença/ausência de THG113 e os seus derivados (10 μΜ) no ensaio de copa ocular suína (Li et al. 1996) (figura 6A) . Todos os compostos inibiram as respostas induzidas por PGF2a inclusive a altas concentrações do agonista. A resposta inibidora da dose crescente de THG113 e seus derivados na contractilidade ocular suína induzida por PGF2a 1 μΜ mostra-se na figura 6B. Ambos derivados, 113.29 e 113.31, eram mais potentes que o peptídeo original (CI50: 27 e 13 nM respectivamente).

Efeito de THG113.31 sobre as propriedades contrácteis de tiras de útero

Observou-se uma redução dependente da dose das respostas contrácteis uterinas (duração da contracção e força média da contracção), induzida pelo agonista de FP natural, PGF20u em tiras de útero obtidas de ratas que recentemente deram a luz em resposta a PGF2a 1 μΜ num ensaio de banho de órgãos (figura 7). Estes dados confirmaram que THG113.31, como o composto líder original foi eficaz na diminuição da contractilidade no miométrio no estado de parto activo. Obtiveram-se reduções de magnitude similar em tiras de miométrio obtidas de animais bovinos e ovinos. Estes dados sublinham a eficácia da 17 várias espécies universal do inibição de THG113 em miométrios de relacionadas de maneira distante e a importância receptor FP na contractilidade miometrial.

Efeito tocolítico de THG113.31 num modelo de endotoxina de parto pré-termo de rato

Administrou-se LPS de E. coli (50 μρ duas vezes separadas por três horas, por via i.p.) a ratas CD-I (peso mediano: 50 g) no dia 15 de gestação. Quatro horas depois de que se administrasse LPS, implantaram-se cirurgicamente bombas osmóticas Alzet que forneceram 0,1, 0,4 ou 0,8 mg/kg/dia do fármaco nas lombadas dos animais. A gestação normal nesta estirpe é de 19,2 dias. Representam-se graficamente os resultados como tempo médio (h) de parturição após a administração de LPS (figura 8A) e a percentagem de animais que deram a luz às 15, 24, 48, 72 h após a administração de LPS (figura 8B). Todos os animais tratados com solução salina deram a luz dentro de 15 h após a administração de LPS, enquanto que menos de 30% e 15% dos animais aos que se lhes administraram 0,1 mg e 0,8 mg, deram a luz respectivamente. Teve um atraso dependente da dose na parturição. Contudo, as diferenças no atraso entre as doses de 0,4 e 0,8 mg não foram estatisticamente significativas. A doses de 0,4 e 0,8 mg, menos de 50-60% dos animais deram a luz às 48 h após a administração de LPS. Estes dados enfatizam que THG113.31 é um potente tocolítico num modelo animal em que se imitou o componente infeccioso do parto pré-termo humano. 02-11-2012 18

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Peptídeo que consiste na sequência ilgh(cit)dyk, em que todos os aminoácidos são D-aminoácidos e (cit) é D-citrulina.
2. 2. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em associação com um portador farmaceuticamente aceitável.
3. 3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2, em que dita quantidade terapeuticamente eficaz de dito peptídeo é de 0,1-100 mg/kg de peso corporal.
4. 4. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, sozinho ou em combinação com um portador farmaceuticamente aceitável, para a sua utilização em medicina e/ou medicina veterinária.
5. 5. Utilização da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, para a preparação de um medicamento para deter o parto pré-termo.
6. 6. Utilização da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, para a preparação de um medicamento para o tratamento de dismenorreia.
7. 7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, para a sua utilização num método de detenção do parto pré-termo que compreende administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de dita composição. 1
8. 8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, para a sua utilização num método para tratar dismenorreia que compreende administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de dita composição.
9. 9. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, inibindo substancialmente dito peptídeo o receptor FP. 02-11-2012 2