PT1313853E

PT1313853E - Modulation of fas and fasl expression by a synthetic phosphodiester oligonucleotide and an anti-fas antibody

Info

Publication number: PT1313853E
Application number: PT01947067T
Authority: PT
Inventors: Nigel C Phillips; Mario C Filion
Original assignee: Bioniche Life Sciences Inc
Priority date: 2000-08-29
Filing date: 2001-06-12
Publication date: 2012-05-29
Also published as: ES2383671T3; DK1313853T3

Description

ΕΡ 1 313 853/ΡΤΕΡ 1 313 853 / ΡΤ

DESCRIÇÃO "Modulação da expressão de Fas e FasL por um oligonucleótido fosfodiéster sintético e um anticorpo anti-Fas"Modulation of Fas and FasL expression by a synthetic phosphodiester oligonucleotide and an anti-Fas antibody "

CAMPO DO INVENTO O presente invento refere-se a composições úteis para modulação da expressão de Fas e ligando de Fas em células e para modulação da eficácia de agentes terapêuticos.FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to compositions useful for modulating the expression of Fas and Fas ligand in cells and for modulating the efficacy of therapeutic agents.

ANTECEDENTES A WO 01/44465 descreve oligonucleótidos sintéticos terapeuticamente úteis bem como a sua utilização, inter alia, para o tratamento de cancro. 0 sistema de Fas (Apo-1, CD95) e ligando de Fas (FasL, CD95L) é um dos sistemas de morte celular melhor estudados. A Fas é uma proteína de membrana de tipo I expressa abundantemente por células em vários tecidos e, particularmente, em células T activadas, células cardíacas, células de rim e hepatócitos. A FasL é uma proteína transmembrana tipo II expressa particularmente em células T activadas e células assassinas naturais (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999), e é expressa constitutivamente em locais priveligiados imunitariamente tais como, por exemplo, o olho e os testículos (Griffith et al., Science 270:630, 1995).BACKGROUND WO 01/44465 describes therapeutically useful synthetic oligonucleotides as well as their use, inter alia, for the treatment of cancer. The Fas system (Apo-1, CD95) and Fas ligand (FasL, CD95L) is one of the best studied cell death systems. Fas is a type I membrane protein abundantly expressed by cells in various tissues and particularly in activated T cells, cardiac cells, kidney cells and hepatocytes. FasL is a type II transmembrane protein expressed particularly in activated T cells and natural killer cells (Nagata, S. Ann., Rev. Gen., 33: 29, 1999), and is constitutively expressed in immunologically preferable sites such as, for example, the eye and the testicles (Griffith et al., Science 270: 630, 1995).

As interacções Fas e FasL (Fas/FasL) desempenham um papel essencial na regulação de células imunitárias e na eliminação de células autorreactivas (Sabelko-Downes et al. Curr. Opin. Immunol. 12:330, 2000). Adicionalmente, Fas/FasL medeiam a morte de células de cancro e de células infectadas por vírus (Famularo et al. Med. Hypoth. 53:50, 1999; Owen-Fas and FasL interactions play a key role in the regulation of immune cells and in the elimination of autoreactive cells (Sabelko-Downes et al., Curr. Opin. Immunol, 12: 330, 2000). In addition, Fas / FasL mediated the killing of cancer cells and virus-infected cells (Famularo et al., Med. Hypoth 53:50, 1999; Owen-

Schaub et al. Int. J. Oncol. 17:5, 2000). Em contraste, aSchaub et al. Int. J. Oncol. 17: 5, 2000). In contrast, the

FasL, expressa em células de cancro, pode atacar células do sistema imunitário (0'Connell, J. Exp. Med. 184:1075, 1996) ou facilitar a invasão local do tumor ao matar o tecido circundante (Yoong et al. Am. J. Pathol. 154:693, 1999). A FasL, expressa em células T activadas, pode também participar na danificação de tecidos em hepatite fulminante e na doença 2FasL, expressed in cancer cells, can attack cells of the immune system (O'Connell, J. Exp. Med. 184: 1075, 1996) or facilitate local tumor invasion by killing the surrounding tissue (Yoong et al., Am. J. Pathol., 154, 693, 1999). FasL, expressed on activated T cells, may also participate in tissue damage in fulminant hepatitis and in disease 2

ΕΡ 1 313 8 5 3/PT de enxerto- versus-hospedeiro (Kondo et al. Nature Med. 3:409, 1997; Braun et al, J. Exp. Med. 183:657, 1996). A ligação de FasL a Fas, ou a ligação cruzada de Fas com anticorpos agonistas, induz a apoptose (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999) que resulta em morte celular. A apoptose é um processo de morte celular activa caracterizado por alterações morfológicas distintivas que incluem condensação de cromatina nuclear, contracção celular, desintegração nuclear, formação de bolhas (blebbing) na membrana plasmática e a formação de corpos apoptóticos ligados a membrana (Wyllie et al. Int. Rev. Cytol. 68:251, 1980). Uma marca molecular de apoptose é a degradação de ADN nuclear celular em fragmentos de comprimento oligonucleossómico como resultado da activação de endonucleases endógenas (Wyllie A. Nature 284:555, 1980). As caspases (proteases específicas de cisteína-aspartilo) têm sido implicadas como enzimas chave na execução do estado tardio de apoptose. A ligação de FasL a Fas activa uma cascata de caspases através de um adaptador FADD (proteína associada a Fas com um domínio de morte) , que conduz à clivagem de vários substratos celulares e à fragmentação de ADN (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999).(Kondo et al., Nature Med 3: 409, 1997, Braun et al., J. Exp. Med. 183: 657, 1996). FasL binding to Fas, or Fas cross-linking with agonist antibodies, induces apoptosis (Nagata, S. Ann. Rev. Genet., 33: 29, 1999) which results in cell death. Apoptosis is an active cell death process characterized by distinctive morphological changes including nuclear chromatin condensation, cell contraction, nuclear disintegration, plasma membrane blebbing, and the formation of membrane bound apoptotic bodies (Wyllie et al. Int. Rev. Cytol., 68: 251 (1980)). One molecular mark of apoptosis is the degradation of cellular nuclear DNA into oligonucleo-long length fragments as a result of the activation of endogenous endonucleases (Wyllie A. Nature 284: 555, 1980). Caspases (cysteine-aspartyl-specific proteases) have been implicated as key enzymes in the late-stage apoptosis. FasL to Fas binding activates a caspase cascade through a FADD adapter (Fas associated protein with a death domain), which leads to the cleavage of various cell substrates and DNA fragmentation (Nagata, S. Ann. Rev. Genet, 33: 29, 1999).

Os oligonucleótidos sintéticos são sequências polianiónicas que podem ser internalizados por células (Vlassov et al. Biochim. Biophys. Acta 1197:95, 1994) e ligam-se selectivamente a ácidos nucleicos (Wagner, R. Nature: 372:333, 1994), a proteínas celulares específicas (Bates et al. J. Biol. Chem. 274:26369, 1999) e a proteínas nucleares específicas (Scaggiante et al. Eur. J. Biochem. 252:207, 1998), e inibem a proliferação celular. A proliferação é o culminar da progressão de uma célula através do ciclo celular, resultando na divisão de uma célula em duas células. Ocorrem alterações na progressão do ciclo celular em todos os cancros e podem resultar da sobre-expressão de genes, mutação de genes reguladores ou abrogação de pontos de controlo da danificação de ADN (Hochhauser D. Anti-Câncer Chemotherapeutic Agents 8:903, 1997).Synthetic oligonucleotides are polyanionic sequences that can be internalized by cells (Vlassov et al., Biochim, Biophys, Acta 1197: 95, 1994) and selectively bind to nucleic acids (Wagner, R. Nature: 372: 333, 1994), to specific cellular proteins (Bates et al., J. Biol. Chem. 274: 26369, 1999) and to specific nuclear proteins (Scaggiante et al., Eur. J. Biochem, 252: 207, 1998), and inhibit cell proliferation. Proliferation is the culmination of a cell's progression through the cell cycle, resulting in the division of a cell into two cells. Changes occur in cell cycle progression in all cancers and may result from gene over-expression, regulatory gene mutation, or abrogation of DNA damaging control points (Hochhauser D. Anti-Cancer Chemotherapeutic Agents 8: 903, 1997) .

Foi noticiado que oligonucleótidos de fosforotioato sintéticos contendo dinucleótidos CpG não metilados, flanqueados por duas purinas 5' e duas pirimidinas 31 3It has been reported that synthetic phosphorothioate oligonucleotides containing unmethylated CpG dinucleotides flanked by two 5 'purines and two pyrimidine 313

ΕΡ 1 313 8 5 3/PT (motivos CpG), induzem a síntese de citoquinas por macrófagos e células B, aumentam a actividade de células NK e linfócitos citotóxicos T e melhoram T-Natl. Acad. Sei. USA 93:2879, 1996; Lipford et al. Eur. J. Immunol. 27:2340, 1997). Foi noticiado que um motivo CpG sintético de 20 bases bloqueia a expressão de Fas em células B activadas e bloqueia a apoptose induzida por anticorpos monoclonais anti-Fas (Wang et al. Cell. Immunol. 180:162, 1997). Foi noticiado que a irradiação regula de modo ascendente a expressão de Fas em células de cancro (Sheard et al. Int J. Câncer 73:757, 1997; Nishioka et al. Int. J. Mol. Med. 3:275, 1999). A capacidade para modular o sistema Fas/FasL tem muitas aplicações clínicas para utilização em doenças incluindo, mas não limitadas a, doenças neoplãsicas, autoimunes, degenerativas e cardiovasculares. Contudo, a maioria dos agentes de modulação de Fas/FasL anteriores tem provado ser menos do que adequada em aplicações clínicas. Além disso, muitos destes agentes são ineficientes, tóxicos ou têm efeitos adversos significativos.(CpG motifs), induce the synthesis of cytokines by macrophages and B cells, increase the activity of NK cells and T cytotoxic lymphocytes and enhance T-Natl. Acad. Know. USA 93: 2879, 1996; Lipford et al. Eur. J. Immunol. 27: 2340, 1997). It has been reported that a synthetic 20 base CpG motif blocks the expression of Fas on activated B cells and blocks apoptosis induced by anti-Fas monoclonal antibodies (Wang et al., Cell, Immunol, 180: 162, 1997). It has been reported that irradiation upregulates the expression of Fas in cancer cells (Sheard et al., Int. Cancer 73: 757, 1997; Nishioka et al., Int. J. Mol. Med. 3: 275, 1999) . The ability to modulate the Fas / FasL system has many clinical applications for use in diseases including, but not limited to, neoplastic, autoimmune, degenerative and cardiovascular diseases. However, most of the previous Fas / FasL modulating agents have proven to be less than adequate in clinical applications. In addition, many of these agents are inefficient, toxic or have significant adverse effects.

Por conseguinte, existe uma necessidade continuada de novas composições e métodos que modulem a expressão de Fas e FasL em células. Existe também uma necessidade de novas composições e métodos que modulem a eficácia de agentes moduladores de Fas e FasL em caso de doença. Existe também uma necessidade de novas composições e métodos que modulem a expressão de Fas e FasL em células de modo a tratar doenças em animais ou humanos, associadas à expressão alterada de Fas ou FasL nas células.Therefore, there is a continuing need for novel compositions and methods that modulate the expression of Fas and FasL in cells. There is also a need for novel compositions and methods that modulate the efficacy of Fas and FasL modulating agents in the event of disease. There is also a need for novel compositions and methods that modulate the expression of Fas and FasL in cells in order to treat diseases in animals or humans, associated with altered expression of Fas or FasL in cells.

SUMÁRIO DO INVENTO O presente invento refere-se pois â utilização de uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 e de um anticorpo anti-Fas para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença seleccionada entre uma doença neoplásica, uma doença autoimune, uma doença inflamatória, uma doença proliferativa, uma doença linfoproliferativa, uma doença degenerativa, uma doença neurodegenerativa, uma doença cardiovascular, uma rejeição de 4 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ enxerto ou uma infecção, onde o anticorpo anti-Fas é para administração numa dose de 0,003 a 3 mg/kg, e onde a sequência de oligonucleótido modula a eficácia do anticorpo anti-Fas. 0 presente invento refere-se ainda a uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 e a um anticorpo anti-Fas para utilização no tratamento de uma doença seleccionada entre uma doença neoplásica, uma doença autoimune, uma doença inflamatória, uma doença proliferativa, uma doença linfoproliferativa, uma doença degenerativa, uma doença neurodegenerativa, uma doença cardiovascular, uma rejeição de enxerto ou uma infecção, onde o anticorpo anti-Fas está numa dose de 0,003 a 3 mg/kg, e onde a sequência de oligonucleótido modula a eficácia do anticorpo anti-Fas. O presente invento satisfaz estas necessidades proporcionando uma nova utilização que emprega composições compreendendo um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição está entre 2 e 10, preferivelmente 4 a 8, mais preferivelmente 5 a 7, e muito preferivelmente 6, nomeadamente composições compreendendo uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID NO:1 a SEQ ID NO:18. O presente invento proporciona novas utilizações para estas composições.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention therefore relates to the use of a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18 and an anti-Fas antibody for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from a neoplastic disease, an autoimmune disease, an inflammatory disease, a proliferative disease, a lymphoproliferative disease, a degenerative disease, a neurodegenerative disease, a cardiovascular disease, a rejection of 4 ΕΡ 1 313 853 / ΡΤ graft or an infection, wherein the anti-Fas antibody is for administration at a dose of 0.003 to 3 mg / kg, and wherein the oligonucleotide sequence modulates the effectiveness of the anti-Fas antibody. The present invention further relates to a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18 and an anti-Fas antibody for use in the treatment of a disease selected from a neoplastic disease, an autoimmune disease, an inflammatory disease, a proliferative disease, a lymphoproliferative disease, a degenerative disease, a neurodegenerative disease, a cardiovascular disease, a graft rejection or an infection, wherein the anti-Fas antibody is in a dose of 0.003 to 3 mg / kg, and wherein the oligonucleotide sequence modulates the efficacy of the anti-Fas antibody. The present invention satisfies these needs by providing a novel use employing compositions comprising a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter " sequence ") selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, where n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is between 2 and 10, preferably 4 to 8, more preferably 5 to 7, and most preferably 6, in particular compositions comprising a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18. The present invention provides novel uses for these compositions.

Esta composição é também combinada com um transportador farmaceuticamente aceitável, e é administrada a um animal ou um humano possuindo uma doença numa quantidade eficaz para modular a expressão de Fas e FasL de modo a tratar a doença no animal ou no humano. Esta composição é também administrada a um animal ou humano para modular a eficácia de agentes moduladores de Fas e FasL, compreendendo a administração da 5This composition is also combined with a pharmaceutically acceptable carrier, and is administered to an animal or a human having a disease in an amount effective to modulate the expression of Fas and FasL in order to treat the disease in the animal or in the human. This composition is also administered to an animal or human to modulate the efficacy of Fas and FasL modulating agents, comprising administering the 5

ΕΡ 1 313 8 5 3/PT composição numa quantidade eficaz para modular eficácia de agentes moduladores de Fas e FasL para modular Fas e FasL, ou para tratar um animal ou um humano possuindo uma doença. Uma nova utilização para esta composição do presente invento é para modular, e preferencialmente potenciar, a eficácia de um agente terapêutico para tratar uma doença, compreendendo a administração da composição num transportador farmaceuticamente aceitável em combinação com um agente terapêutico, numa quantidade eficaz para modular a eficácia do agente terapêutico administrado a um animal ou um humano. As composições do presente invento podem ser administradas em qualquer momento antes, durante ou após administração do agente terapêutico, de modo a modular a eficácia do agente terapêutico. As composições do presente invento podem também ser administradas in vitro, por exemplo a células ou tecidos de um animal ou humano. A composição utilizada no presente invento compreende uma sequência seleccionada entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações desde que o número total de bases na composição seja 6, nomeadamente uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID N0:1 a SEQ ID NO:18. Noutra concretização preferida, a composição do presente invento compreende esta sequência de 6 bases em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável. A composição do presente invento compreende esta sequência de 6 bases em combinação com um agente terapêutico, nomeadamente um anticorpo anti-Fas e opcionalmente com um transportador farmaceuticamente aceitável. Estas composições podem ser utilizadas em qualquer dos métodos descritos nos parágrafos precedentes e ao longo do fascículo. A capacidade inesperada e surpreendente das sequências do presente invento é dirigida a uma necessidade não satisfeita nas especialidades médicas e proporciona um importante benefício para animais, incluindo humanos. É aqui descrita uma composição compreendendo um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, 6 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição é 2 a 10. É adicionalmente descrita uma composição compreendendo um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT) n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição é 4 a 8. É adicionalmente descrita uma composição compreendendo um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT) n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição é 5 a 7. É adicionalmente descrita uma composição compreendendo um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(0C)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição é 6. São adicionalmente descritas composições compreendendo qualquer das sequências aqui descritas, em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável. São aqui proporcionadas composições compreendendo qualquer das sequências SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 em combinação com um agente terapêutico, nomeadamente um anticorpo anti-Fas e opcionalmente um transportador farmaceuticamente aceitável. É aqui proporcionada a utilização de qualquer destas composições para o fabrico de um medicamento. 7 ΕΡ 1 313 853/ΡΙThe invention relates to a composition in an amount effective to modulate the effectiveness of Fas and FasL modulating agents to modulate Fas and FasL, or to treat an animal or a human having a disease. A novel use for this composition of the present invention is to modulate, and preferably to potentiate, the efficacy of a therapeutic agent for treating a disease comprising administering the composition to a pharmaceutically acceptable carrier in combination with a therapeutic agent in an amount effective to modulate efficacy of the therapeutic agent administered to an animal or a human. The compositions of the present invention may be administered at any time before, during or after administration of the therapeutic agent, in order to modulate the efficacy of the therapeutic agent. The compositions of the present invention may also be administered in vitro, for example to cells or tissues of an animal or human. The composition used in the present invention comprises a sequence selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, where n is an integer between 1 and 3 and a and b and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, provided that the total number of bases in the composition is 6, namely a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18. In another preferred embodiment, the composition of the present invention comprises this 6 base sequence in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. The composition of the present invention comprises this 6 base sequence in combination with a therapeutic agent, namely an anti-Fas antibody and optionally with a pharmaceutically acceptable carrier. These compositions may be used in any of the methods described in the preceding paragraphs and throughout the specification. The unexpected and surprising ability of the sequences of the present invention is directed to an unmet need in medical specialties and provides a significant benefit to animals, including humans. Described herein is a composition comprising a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter, SE 6133 853 / ΡΤ ") sequence selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a GA) nb and a (GC) nb, where n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is 2 to 10. A composition comprising a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter, " sequence) selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, wherein n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is 4 to 8 A composition comprising a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter, " sequence ") is further disclosed. (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, wherein n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is 5 to 7. A composition comprising a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter, " sequence) group (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (OC) nb, where n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is 6. Further comprising compositions comprising any of the sequences described herein, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. Provided herein are compositions comprising any of the sequences SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18 in combination with a therapeutic agent, namely an anti-Fas antibody and optionally a pharmaceutically acceptable carrier. There is provided herein the use of any of these compositions for the manufacture of a medicament. 7 Ε 1 313 853 / ΡΙ

Um objectivo do presente invento é proporcionar novas utilizações para estas composições. É aqui descrito um método para modular a expressão de Fas em células. É ainda descrito um método para modular a expressão de FasL em células. É ainda descrito um método para modular a expressão de Fas em células imunitárias. É ainda descrito um método para modular a expressão de FasL em células imunitárias. É ainda descrito um método para modular a expressão de Fas em células de cancro. É ainda descrito um método para modular a expressão de FasL em células de cancro.It is an aim of the present invention to provide novel uses for these compositions. Described herein is a method for modulating Fas expression in cells. Also described is a method for modulating FasL expression in cells. Also described is a method for modulating Fas expression in immune cells. There is further described a method for modulating FasL expression in immune cells. There is further described a method for modulating Fas expression in cancer cells. There is further described a method for modulating FasL expression in cancer cells.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença num animal, incluindo um humano.Another object of the present invention is to provide a method for treating a disease in an animal, including a human.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença neoplásica.Yet another object of the present invention is to provide a method for treating a neoplastic disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença autoimune.Yet another object of the present invention is to provide a method for treating an autoimmune disease.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença inflamatória.Another object of the present invention is to provide a method for treating an inflammatory disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença proliferativaYet another object of the present invention is to provide a method of treating a proliferative disease

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença linfoproliferativa. 8 ΕΡ 1 313 853/ΡΤAnother object of the present invention is to provide a method for treating a lymphoproliferative disease. 8 Ε 1 313 853 / ΡΤ

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença degenerativa.Yet another object of the present invention is to provide a method for treating a degenerative disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença neurodegenerativa.Yet another object of the present invention is to provide a method for treating a neurodegenerative disease.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma doença cardiovascular.Another object of the present invention is to provide a method for treating cardiovascular disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar uma rejeição de enxerto.Yet another object of the present invention is to provide a method for treating graft rejection.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método eficaz para tratar uma infecção.Another object of the present invention is to provide an effective method for treating an infection.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que modula o efeito de um agente terapêutico para tratar uma doença.Yet another object of the present invention is to provide a method that modulates the effect of a therapeutic agent for treating a disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente terapêutico para tratar uma doença.Yet another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of a therapeutic agent for treating a disease.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente de modulação de Fas .Yet another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of a Fas modulating agent.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente de modulação de FasL.Another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of a FasL modulating agent.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente antineoplãsico.Yet another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of an antineoplastic agent.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente imunoestimulador.Another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of an immunostimulatory agent.

Ainda outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente imunossupressor.Yet another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of an immunosuppressive agent.

Outro objectivo do presente invento é proporcionar um método que potência o efeito de um agente anti-inflamatório. 9 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ É ainda descrita uma composição que é simples de preparar. É ainda descrita uma composição que é minimamente tóxica para o recipiente.Another object of the present invention is to provide a method that potentiates the effect of an anti-inflammatory agent. A composition which is simple to prepare is further described. There is further disclosed a composition which is minimally toxic to the container.

Estes e outros objectivos, particularidades e vantagens do presente invento tornar-se-ão evidentes após uma revisão da descrição detalhada seguinte da concretização revelada e das reivindicações apensas.These and other objects, features and advantages of the present invention will become apparent upon a review of the following detailed description of the disclosed embodiment and the appended claims.

DESCRIÇÃO DETALHADA O presente invento satisfaz estas necessidades proporcionando composições e novos métodos de utilização destas composições. As composições compreendem um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético (aqui depois, "sequência") seleccionado entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações, onde o número total de bases na composição está entre 2 e 10, preferivelmente 4 a 8, mais preferivelmente 5 a 7, e muito preferivelmente 6, nomeadamente uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID NO:l a SEQ ID NO: 18. As composições do presente invento compreendem adicionalmente qualquer destas sequências em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável. As composições utilizadas no presente invento compreendem qualquer destas sequências em combinação com um agente terapêutico, nomeadamente em anticorpo anti-Fas e opcionalmente com um transportador farmaceuticamente aceitável. O presente invento proporciona novas utilizações para estas composições. Esta composição é combinada com um transportador farmaceuticamente aceitável, e é administrada a um animal ou um humano numa quantidade eficaz para modular a expressão de Fas e FasL no animal ou no humano. Esta composição é também combinada com um transportador farmaceuticamente aceitável, e é administrada a um animal ou 10 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ um humano possuindo uma doença numa quantidade eficaz para modular a expressão de Fas e FasL de modo a tratar a doença no animal ou no humano. Esta composição é também administrada a um animal ou humano para modular a eficácia de agentes moduladores de Fas e FasL, compreendendo a administração da composição numa quantidade eficaz para modular eficácia de agentes moduladores de Fas e FasL para modular Fas e FasL, ou para tratar um animal ou um humano possuindo uma doença. Outra nova utilização para esta composição do presente invento é para modular, e preferencialmente potenciar, a eficácia de um agente terapêutico para tratar uma doença. A sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético em combinação com um agente terapêutico, numa quantidade eficaz para modular eficácia do agente terapêutico, nomeadamente um anticorpo anti-Fas, é administrada a um animal ou um humano. A composição do presente invento pode ser administrada em qualquer momento antes, durante ou após administração do agente terapêutico, de modo a modular a eficácia do agente terapêutico. A composição utilizada no presente invento compreende uma sequência seleccionada entre o grupo consistindo de (GG)n, (GT)n, a(GT)nb, a(GA)nb e a(GC)nb, onde n é um inteiro entre 1 e 3, e a e b são independentemente ou nenhum ou um ou mais As, Cs, Gs ou Ts, ou suas combinações desde que o número total de bases na composição seja 6, nomeadamente uma sequência de oligonúcleótido fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada entre o grupo consistindo de SEQ ID NO:l a SEQ ID NO:18. Noutra concretização preferida, a composição do presente invento compreende esta sequência de 6 bases em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável. A composição do presente invento compreende esta sequência de 6 bases em combinação com um agente terapêutico, nomeadamente um anticorpo anti-Fas e opcionalmente com um transportador farmaceuticamente aceitável. Estas composições podem ser utilizadas em qualquer dos métodos descritos neste pedido de patente.DETAILED DESCRIPTION The present invention satisfies these needs by providing compositions and novel methods of using such compositions. The compositions comprise a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester (hereinafter, " sequence) selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, where n is an integer from 1 to 3, and a and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, wherein the total number of bases in the composition is between 2 and 10, preferably 4 to 8, more preferably 5 to 7, and most preferably 6, namely a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 18. The compositions of the present invention further comprise any of these sequences in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. The compositions used in the present invention comprise any of these sequences in combination with a therapeutic agent, in particular in anti-Fas antibody and optionally with a pharmaceutically acceptable carrier. The present invention provides novel uses for these compositions. This composition is combined with a pharmaceutically acceptable carrier, and is administered to an animal or a human in an amount effective to modulate the expression of Fas and FasL in the animal or in the human. This composition is also combined with a pharmaceutically acceptable carrier, and is administered to a human or animal having a disease in an amount effective to modulate the expression of Fas and FasL in order to treat disease in the animal or not human. This composition is also administered to an animal or human to modulate the efficacy of Fas and FasL modulating agents, comprising administering the composition in an amount effective for modulating efficacy of Fas and FasL modulating agents to modulate Fas and FasL, or to treat a animal or a human having a disease. Another novel use for this composition of the present invention is to modulate, and preferably potentiate, the efficacy of a therapeutic agent for treating a disease. The synthetic oligonucleotide phosphodiester oligonucleotide in combination with a therapeutic agent in an amount effective to modulate the therapeutic agent, in particular an anti-Fas antibody, is administered to an animal or a human. The composition of the present invention may be administered at any time prior to, during or after administration of the therapeutic agent in order to modulate the efficacy of the therapeutic agent. The composition used in the present invention comprises a sequence selected from the group consisting of (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb and a (GC) nb, where n is an integer between 1 and 3 and a and b and b are independently or none or one or more As, Cs, Gs or Ts, or combinations thereof, provided that the total number of bases in the composition is 6, namely a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of of SEQ ID NO: SEQ ID NO: 18. In another preferred embodiment, the composition of the present invention comprises this 6 base sequence in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. The composition of the present invention comprises this 6 base sequence in combination with a therapeutic agent, namely an anti-Fas antibody and optionally with a pharmaceutically acceptable carrier. These compositions may be used in any of the methods described in this application.

Como aqui utilizada a palavra "sequência" refere-se a um oligodesoxinúcleótido fosfodiéster sintético constituído de adenina (A) , citosina (C) , guanina (G) e timina (T) , com um 11 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ número total de bases de 2 a 10, preferivelmente 4 a 8, mais preferivelmente 5 a 7 e muito preferivelmente 6.As used herein the word " sequence " refers to a synthetic oligodeoxynucleotide phosphodiester consisting of adenine (A), cytosine (C), guanine (G) and thymine (T), with a total number of bases of 2 to 10, preferably 4 to 8, more preferably 5 to 7 and most preferably 6.

Como aqui utilizada, a palavra "expressão" refere-se â concentração de Fas ou de FasL na superfície celular.As used herein, the word " expression " refers to the concentration of Fas or FasL on the cell surface.

Como aqui utilizada, a palavra "resposta" refere-se a regulação ascendente (aumento) ou regulação descendente (diminuição) da expressão de Fas ou de Fas L.As used herein, the word " response " refers to upward regulation (increase) or down regulation (decrease) of Fas or Fas L expression.

Como aqui utilizada, a palavra "modula" refere-se a alterações na expressão de Fas ou de FasL. Estas alterações incluem regulação ascendente e regulação descendente da expressão de Fas ou de FasL. A palavra modular é também utilizada para descrever a capacidade das novas sequências do o presente invento para modular a eficácia de agentes terapêuticos, incluindo agentes de modulação de Fas e FasL, para tratar uma doença ou para modular a expressão de Fas ou FasL.As used herein, the word " modulate " refers to changes in Fas or FasL expression. These changes include upward regulation and downward regulation of Fas or FasL expression. The word modular is also used to describe the ability of the novel sequences of the present invention to modulate the efficacy of therapeutic agents, including Fas and FasL modulating agents, to treat disease or to modulate Fas or FasL expression.

Como aqui utilizadas, as expressões "terapeuticamente eficaz", "quantidade eficaz" e "quantidade eficaz para" referem-se a uma quantidade de uma sequência eficaz para modular a expressão de Fas ou de FasL.As used herein, the terms " therapeutically effective " " effective amount " and " effective amount for " refer to an amount of a sequence effective to modulate Fas or FasL expression.

Como aqui utilizada, a palavra "doença" refere-se a uma condição onde a saúde corporal está debilitada.As used herein, the word " disease " refers to a condition where body health is impaired.

Como aqui utilizada, a expressão "agente terapêutico" é qualquer agente aprovado por uma agência reguladora de um país ou de um governo estadual ou referido na Farmacopeia dos E.U.A. ou noutra farmacopeia geralmente reconhecida, para utilização no tratamento de uma doença num animal, incluindo um humano.As used herein, the term " therapeutic agent " is any agent approved by a regulatory agency of a state or state government or referred to in the U.S. Pharmacopoeia or other generally recognized pharmacopoeia for use in the treatment of a disease in an animal, including a human.

Como aqui utilizada, a palavra "antineoplãsica" refere-se à prevenção do desenvolvimento, maturação, proliferação ou alastramento de células de cancro.As used herein, the word " antineoplastic " refers to the prevention of the development, maturation, proliferation or spread of cancer cells.

Como aqui utilizada, a palavra "potência" refere-se a um grau de sinergismo que é mais do que aditivo. 12 ΕΡ 1 313 853/ΡΤAs used herein, the word " potency " refers to a degree of synergism that is more than additive. 12 Ε 1 313 853 / ΡΤ

Como aqui utilizada, a palavra "sinergismo" refere-se â acção coordenada de dois ou mais agentes. A administração de uma quantidade eficaz de uma sequência do presente invento a um animal, incluindo um humano, é um tratamento terapêutico que previne, trata ou elimina uma doença incluindo, mas não limitada a, uma doença neoplãsica, autoimune, proliferativa, linfoproliferativa, degenerativa e cardiovascular; infecção; inflamação; e rejeição de enxerto, tecido e células.As used herein, the word " synergism " refers to the coordinated action of two or more agents. Administration of an effective amount of a sequence of the present invention to an animal, including a human, is a therapeutic treatment that prevents, treats or eliminates a disease including, but not limited to, a neoplastic, autoimmune, proliferative, lymphoproliferative, degenerative disease and cardiovascular; infection; inflammation; and rejection of graft, tissue, and cells.

Composições compreendendo uma ou mais sequências e um transportador farmaceuticamente aceitável são preparadas colocando em associação, uniformemente e intimamente, a sequência e o transportador farmaceuticamente aceitável. Composições compreendendo uma ou mais sequências, um agente terapêutico e um transportador farmaceuticamente aceitável são preparadas colocando em associação, uniformemente e intimamente, a sequência, o agente terapêutico e o transportador farmaceuticamente aceitável. Transportadores farmaceuticamente aceitáveis incluem transportadores líquidos, transportadores sólidos ou ambos. Transportadores líquidos são transportadores aquosos, transportadores não aquosos ou ambos e incluem, mas não estão limitados a, soluções, suspensões e emulsões. Emulsões incluem, mas não estão limitadas a, emulsões de óleo, emulsões de água em óleo, emulsões de água em óleo em água, emulsões específicas de locais. Transportadores longos são transportadores biológicos, transportadores químicos ou ambos e incluem, mas não estão limitados a, sistemas de vector virai, plasmídeos, partículas, micropartículas, nanopartículas, microesferas, nanoesferas, paredes de células bacterianas, minibombas e polímeros naturais ou sintéticos, biodegradáveis ou não biodegradáveis, que permitem a libertação prolongada das sequências.Compositions comprising one or more sequences and a pharmaceutically acceptable carrier are prepared by uniformly and intimately pooling the sequence and the pharmaceutically acceptable carrier. Compositions comprising one or more sequences, a therapeutic agent and a pharmaceutically acceptable carrier are prepared by uniformly and intimately bringing together the sequence, the therapeutic agent and the pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers include liquid carriers, solid carriers or both. Liquid carriers are aqueous carriers, non-aqueous carriers or both and include, but are not limited to, solutions, suspensions and emulsions. Emulsions include, but are not limited to, oil emulsions, water-in-oil emulsions, water-in-oil emulsions in water, site-specific emulsions. Long transporters are biological carriers, chemical carriers or both and include, but are not limited to, viral vector systems, plasmids, particles, microparticles, nanoparticles, microspheres, nanospheres, bacterial cell walls, minipumps, and synthetic or biodegradable polymers or non-biodegradable, which allow prolonged release of the sequences.

Transportadores aquosos preferidos incluem, mas não estão limitados a, água, solução salina e tampões farmaceuticamente aceitáveis. Transportadores não aquosos preferidos incluem, mas não estão limitados a, um óleo mineral ou um óleo neutro incluindo, mas não limitado a, um diglicérido, um triglicérido, um fosfolípido, um lípido, um 13 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ óleo e suas misturas, onde o óleo contém uma mistura apropriada de ácidos gordos poli-insaturados e saturados. Opcionalmente, podem ser incluídos agentes estabilizantes e excipientes, independentemente do transportador farmaceuticamente aceitável utilizado para apresentar a sequência às células. A eficácia terapêutica de uma sequência pode ser aumentada por métodos incluindo, mas não limitados a, modificação química do esqueleto de base, açúcar ou fosfato, suplementação química ou amplificação biotecnológica das sequências utilizando plasmídeos bacterianos contendo as sequências apropriadas, complexação das sequências a transportadores biológicos ou químicos ou acoplamento das sequências a ligandos ou anticorpos dirigidos a determinados tipos de tecidos ou tipos de células. A composição do presente invento compreende uma composição compreendendo uma sequência e um agente terapêutico, nomeadamente um anticorpo anti-Fas, onde, quando a sequência e o agente terapêutico são combinados com um transportador farmaceuticamente aceitável e administrados a um animal ou humano possuindo uma doença, a sequência modula e preferencialmente potência o efeito do agente terapêutico na doença. Agentes terapêuticos em general incluem, mas não estão limitados a, agentes antineoplásicos, anti-inflamatórios, antiautoimunes, antidegenerativos, moduladores de Fas e moduladores de FasL, ou qualquer sua combinação, e terapia de radiação, ou uma combinação de terapia de radiação com agentes terapêuticos. Estes agentes terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, agentes biológicos, fármacos, fármacos quimioterapêuticos, imunoestimulantes, imunomoduladores, imunoterapêuticos, antivirais, anti-infecciosos, antibióticos, citoquinas, antigénios, anticorpos, ácidos nucleicos, vacinas, aptabases, ácidos nucleicos, ácidos nucleicos antessentido, inibidores de telomerase, agentes de caspase produzidos biologicamente por engenharia e sintetizados quimicamente, e agentes que visam as moléculas de morte celular para activação ou inactivação. Fármacos quimioterapêuticos incluem, mas não estão limitados a, agentes de danificação de ADN, alquilação de ADN, reticulação de ADN, antibióticos antitumor, inibição de 14 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ topoisomerase, inibição de purina, inibição de pirimidina, estabilização de microtúbulo, desestabilização de microtúbulo, antimetabólicos, antagonistas de hormona, inibição de proteína-quinase, inibição de HMG-CoA, inibição de metaloproteinase, inibição de CDK, inibição de ciclina, inibição de angiogénese, diferenciação, melhoria e agentes moleculares virais, bacterianos e exotóxicos biologicamente modificados.Preferred aqueous carriers include, but are not limited to, water, saline and pharmaceutically acceptable buffers. Preferred non-aqueous carriers include, but are not limited to, a mineral oil or a neutral oil including, but not limited to, a diglyceride, a triglyceride, a phospholipid, a lipid, an oil, and mixtures thereof , where the oil contains an appropriate mixture of polyunsaturated and saturated fatty acids. Optionally, stabilizing agents and excipients may be included, independently of the pharmaceutically acceptable carrier used to present the sequence to the cells. The therapeutic efficacy of a sequence can be augmented by methods including, but not limited to, chemical modification of the backbone, sugar or phosphate, chemical supplementation or biotechnological amplification of the sequences using bacterial plasmids containing the appropriate sequences, complexing the sequences to biological carriers or coupling of the sequences to ligands or antibodies directed to certain types of tissues or cell types. The composition of the present invention comprises a composition comprising a sequence and a therapeutic agent, namely an anti-Fas antibody, wherein, when the sequence and therapeutic agent are combined with a pharmaceutically acceptable carrier and administered to an animal or human having a disease, the sequence modulates and preferably potentiates the effect of the therapeutic agent on the disease. Therapeutic agents in general include, but are not limited to, antineoplastic, antiinflammatory, antiautoimmune, antidegenerative agents, Fas modulators and FasL modulators, or any combination thereof, and radiation therapy, or a combination of radiation therapy with agents therapies. Such therapeutic agents include, but are not limited to, biological agents, drugs, chemotherapeutic drugs, immunostimulants, immunomodulators, immunotherapeutics, antivirals, antiinfectives, antibiotics, cytokines, antigens, antibodies, nucleic acids, vaccines, aptabases, nucleic acids, acids nucleoside reverse transcriptase inhibitors, telomerase inhibitors, chemically synthesized and chemically synthesized caspase agents, and agents targeting cell death molecules for activation or inactivation. Chemotherapeutic drugs include, but are not limited to, DNA damaging agents, DNA alkylation, DNA crosslinking, antitumor antibiotics, inhibition of topoisomerase, inhibition of purine, inhibition of pyrimidine, stabilization of microtubule, microtubule destabilization, antimetabolites, hormone antagonists, protein kinase inhibition, inhibition of HMG-CoA, inhibition of metalloproteinase, inhibition of CDK, inhibition of cyclin, inhibition of angiogenesis, differentiation, enhancement and biologically active viral, bacterial and exotoxic molecular agents modified.

Vias de administração incluem, mas não estão limitados a, oral, tópica, subcutânea, transdérmica, subdérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravesical, intra-articular, intraprostãtica, intra-arterial, intravenosa, intradérmica, intracraniana, intralesional, intratumoral, intra-ocular, intrapulmonar, intraespinal, colocação no interior de cavidades corporais, inalação nasal e impressão na pele. Deve ser entendido que a administração das composições do presente invento pode ocorrer in vivo, ex vivo ou in vitro. Por exemplo, as composições do presente invento podem ser administradas a células ou tecidos animais ou humanos in vitro. Doses apropriadas para administração in vitro são cerca de 1 nM a 1 mM, preferivelmente cerca de 10 hM a 100 μΜ, e mais preferivelmente cerca de 100 nM a 10 μΜ.Route of administration includes, but is not limited to, oral, topical, subdermal, transdermal, subdermal, intramuscular, intraperitoneal, intravesical, intraarticular, intraprosthetic, intraarterial, intravenous, intradermal, intracranial, intralesional, intratumoral, intraocular , intrapulmonary, intraspinal, placement inside body cavities, nasal inhalation and skin imprinting. It is to be understood that the administration of the compositions of the present invention may occur in vivo, ex vivo or in vitro. For example, the compositions of the present invention may be administered to human or animal cells or tissues in vitro. Doses suitable for in vitro administration are about 1 nM to 1 mM, preferably about 10 h to 100 μ, and most preferably about 100 nM to 10 μ.

Dependendo da via de administração, o volume por dose é preferivelmente cerca de 0,001 a 100 ml por dose, mais preferivelmente cerca de 0,01 a 50 ml por dose e muito preferivelmente cerca de 0,1 a 30 ml por dose. Uma sequência num transportador farmaceuticamente aceitável, ou uma sequência mais agente terapêutico num transportador farmaceuticamente aceitável, podem ser administrados num tratamento de uma única dose, em tratamentos de múltiplas doses ou perfundidos continuamente num programa e durante um período de tempo apropriado para a doença que está a ser tratada, para a condição do receptor e para a via de administração. Além disso, o agente terapêutico pode ser administrado antes, concorrentemente com ou após administração da sequência.Depending on the route of administration, the volume per dose is preferably about 0.001 to 100 ml per dose, more preferably about 0.01 to 50 ml per dose and most preferably about 0.1 to 30 ml per dose. A sequence on a pharmaceutically acceptable carrier, or a sequence plus a therapeutic agent on a pharmaceutically acceptable carrier, may be administered in a single dose treatment, in multiple dose treatments or perfused continuously in a program and for a suitable period of time for the disease being to be treated, to the condition of the recipient and to the route of administration. In addition, the therapeutic agent may be administered prior to, concurrent with or after administration of the sequence.

Preferivelmente, a quantidade de sequência administrada por dose é de cerca de 0,001 a 100 mg/kg, mais preferivelmente de cerca de 0,01 a 10 mg/kg e muito 15Preferably, the amount of sequence administered per dose is from about 0.001 to 100 mg / kg, more preferably from about 0.01 to 10 mg / kg and

ΕΡ 1 313 8 5 3/PT preferivelmente de cerca de 0,1 a 5 mg/kg. A sequência modula, e preferencialmente potência, o efeito do agente terapêutico. Preferivelmente, a quantidade de agente terapêutico administrada por dose é de cerca de 0,001 a 1000 mg/m2 ou de cerca de 0,01 a 1000 mg/kg, mais preferivelmente de cerca de 0,01 a 500 mg/m2 ou cerca de 0,01 a 500 mg/kg e muito preferivelmente de cerca de 0,1 a 100 mg/m2 ou cerca de 0,1 a 100 mg/kg. De acordo com o invento, numa concretização de um agente terapêutico, utilizam-se anticorpos anti-Fas e são administrados numa dose de cerca de 0,003 a cerca de 0,3 mg/kg, preferivelmente 0,01 a cerca de 0,1 mg/kg. A sequência particular e o agente terapêutico particular administrado, a quantidade por dose, o programa de dosagem e a via de administração deverão ser decididos pelo praticante utilizando métodos conhecidos dos peritos na especialidade e dependerão do tipo de doença, da gravidade da doença, da localização da doença e de outros factores clínicos tais como o tamanho, peso e condição física do recipiente. Além disso, podem-se utilizar opcionalmente ensaios in vitro para ajudar a identificar intervalos óptimos para a administração da sequência e da sequência mais agente terapêutico.Preferably from about 0.1 to 5 mg / kg. The sequence modulates, and preferably potentiates, the effect of the therapeutic agent. Preferably, the amount of therapeutic agent administered per dose is from about 0.001 to 1000 mg / m 2 or from about 0.01 to 1000 mg / kg, more preferably from about 0.01 to 500 mg / m 2 or about 0 , 01 to 500 mg / kg and most preferably from about 0.1 to 100 mg / m 2 or about 0.1 to 100 mg / kg. According to the invention, in one embodiment of a therapeutic agent, anti-Fas antibodies are used and are administered at a dose of about 0.003 to about 0.3 mg / kg, preferably 0.01 to about 0.1 mg / kg. The particular sequence and the particular therapeutic agent administered, the amount per dose, the dosing schedule and the route of administration should be decided by the practitioner using methods known to those skilled in the art and will depend upon the type of disease, the severity of the disease, disease and other clinical factors such as the size, weight and physical condition of the recipient. In addition, in vitro assays may optionally be used to help identify optimal ranges for delivery of the sequence and the sequence plus therapeutic agent.

Os exemplos seguintes servirão para ilustrar adicionalmente o presente invento sem ao mesmo tempo constituir porém uma qualquer sua limitação. Pelo contrário, deve ser claramente entendido que pode-se recorrer a várias outras concretizações, modificações e seus equivalentes que, após leitura da presente descrição, possam ser sugeridas por si só aos peritos na especialidade sem sair do espírito do invento.The following examples will serve to further illustrate the present invention without at the same time constituting any limitation thereof. On the contrary, it should be clearly understood that various other embodiments, modifications and their equivalents may be invoked which, after reading the present disclosure, may be suggested to the person skilled in the art without departing from the spirit of the invention.

Exemplo 1Example 1

Preparação de sequência3Sequence preparation3

As sequências de fosfodiéster foram preparadas pela Sigma-Genosys (Woodlands, TX) utilizando tecnologia de síntese segmentada Abacus. A não ser que declarado de outro modo, as sequências foram dispersas em água desionizada tratada em autoclave ou num tampão farmaceuticamente 16 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ aceitável tal como, mas não limitada a, solução salina, imediatamente antes do uso.The phosphodiester sequences were prepared by Sigma-Genosys (Woodlands, TX) using Abacus segmented synthesis technology. Unless stated otherwise, the sequences were dispersed in autoclaved deionized water or in a pharmaceutically acceptable buffer such as, but not limited to, saline solution immediately prior to use.

Exemplo 2 CélulasExample 2 Cells

Todas as linhas de células foram obtidas na American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) e foram cultivadas no meio recomendado pela ATCC. A Tabela 1 mostra as linhas de células, as suas origens e as suas propriedades.All cell lines were obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) and cultured in the medium recommended by the ATCC. Table 1 shows the cell lines, their origins and their properties.

Tabela 1Table 1

Linhas de células LINHA DE CÉLULAS ORIGEM PROPRIEDADES JURKAT Leucemia de células T de humano Modelo de tumor em suspensão; Resistência multi-fármaco atípica associada a proteína pl90-MRP UMUC-3 Cancro da bexiga de humano Sobre-expressão de P-glicoproteína T- 24 Cancro da bexiga de humano p53 mutado LNCaP Cancro da próstata de humano Modelo de tumor sólido; metastático; negativo em receptor de TGF-beta 1; dependente de androgénio OVC AR- 3 Cancro do ovário de humano Modelo de tumor sólido; metastático; p53 mutado; p21/waf-1/Cip-l apagado SK-OV-3 Cancro do ovário de humano Modelo de tumor sólido; metastático; negativo em receptor de TGF-beta 1; dependente de androgénio MCF-7 Cancro da mama de humano Modelo de tumor sólido; não metastático; negativo em Caspase 3; dependente de estrogénio 17 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ Células mononucleares de sangue periférico (aqui depois, "PBMCs") foram isoladas a partir de sangue humano por centrifugação de gradiente de densidade Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Baie d'Urfée, Québec, Canadá).Cell lines CELL LINE ORIGIN JURKAT PROPERTIES Human T cell leukemia Model of tumor in suspension; Atypical multi-drug resistance associated with protein p90-MRP UMUC-3 Human bladder cancer Overexpression of P-glycoprotein T-24 Human bladder cancer of mutated p53 LNCaP Human prostate cancer Model of solid tumor; metastatic; negative on TGF-beta 1 receptor; androgen dependent OVC AR-3 Human ovarian cancer Model of solid tumor; metastatic; p53 mutated; p21 / waf-1 / Cip-1 deleted SK-OV-3 Human ovarian cancer Model of solid tumor; metastatic; negative on TGF-beta 1 receptor; androgen-dependent MCF-7 human breast cancer solid tumor model; not metastatic; negative in Caspase 3; (hereinafter, " PBMCs ") were isolated from human blood by Ficoll-Hypaque density gradient centrifugation (Amersham Pharmacia Biotech, Baie d'Urfée, Québec, Canada).

Semearam-se células de cancro e PBMCs em microplacas de 6 poços de fundo plano e mantiveram-se a 37°C numa atmosfera de 5% de C02 - A não ser que indicado de outro modo, incubaram-se 2 x 105 células/ml durante 48 h com 0 pg/ml (controlo) ou 100 pg/ml (5,5 μΜ) (tratadas) das sequências.Cancer cells and PBMCs were seeded in 6-well flat bottom microplates and maintained at 37øC in a 5% CO2-A atmosphere unless otherwise noted, 2 x 105 cells / ml for 48 h with 0 pg / ml (control) or 100 pg / ml (5.5 μg) (treated) of the sequences.

Exemplo 3Example 3

Medição de Fas e de FasL na superfície celularMeasurement of Fas and FasL on the cell surface

Mediu-se a expressão de Fas e FasL por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais anti-Fas conjugados com FITC e anticorpos monoclonais anti-FasL conjugados com PE num citómetro de fluxo FACScalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, E.U.A.) utilizando o programa CELLQuest (Becton Dickinson).Expression of Fas and FasL was measured by flow cytometry using FITC-conjugated anti-Fas monoclonal antibodies and PE-conjugated anti-FasL monoclonal antibodies on a FACScalibur flow cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) using the program CELLQuest (Becton Dickinson).

Os resultados são expressos como aumento em percentagem (%) na expressão de FasThe results are expressed as percentage increase (%) in Fas expression

Exemplo 4 (comparativo)Example 4 (comparative)

Modulação de Fas e FasL em células T de leucemia JurkatModulation of Fas and FasL in Jurkat leukemia T cells

As células T de leucemia de humano Jurkat são um modelo de células de tumor de humano em suspensão, resistentes a múltiplos fãrmacos, atípicas. Incubaram-se células T com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 2. 18 ΕΡ 1 313 853/ΡΤJurkat human leukemia T cells are a model of atypical, multi-drug resistant, human tumor cells. T cells were incubated with the 6-base sequences shown in Table 2. 18 Ε 1 1373 853 / ΡΤ

Tabela 2Table 2

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células T de leucemia de humano Jurkat SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID N0:1 - (6 bases) 52 93 GTGTGT SEQ ID N0:2 - (6 bases) 52 43 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 258 497 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 61 22 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 150 145 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 126 140 AAGTAA SEQ ID N0:7 - (6 bases) -4 -21 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 107 151 TGGTTG SEQ ID NO:9 - (6 bases) 362 952 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 246 393 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 203 413 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 121 75 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 99 86 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 67 88 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 75 41 GGGGGG SBQ ID NO:16 - (6 bases) 118 49 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 77 91 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 208 356Percent Increase of Fas and FasL in Jurkat Human Leukemia T Cells SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 52 93 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 52 43 TTTGTT SEQ ID NO: NO: 3 - (6 bases) 258 497 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 61 22 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 150 145 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 126 140 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) -4-CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 107 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 362 952 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases ) 246 393 CTGTCT SEQ ID NO: 11 - (6 bases) 203 413 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 121 75 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 99 86 GGAAGG SEQ ID NO: 14 - ( 6 bases) 67 88 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 75 41 GGGGGG SBQ ID NO: 16 - (6 bases) 118 49 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 77 91 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 208 356

Exemplo 5 (comparativo)Example 5 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em PBMCsModulation of Fas and FasL in PBMCs

Incubaram-se PBMCs com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 3. 19PBMCs were incubated with the 6 base sequences shown in Table 3. 19

ΕΡ 1 313 8 5 3/PTΕΡ 1 313 8 5 3 / EN

Tabela 3Table 3

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em PBMCs SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO:l - (6 bases) 126 260 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 94 99 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 1165 1528 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 57 59 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 3 -20 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 338 441 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) 13 -26 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 1046 1147 TGGTTG SEQ ID NO:9 - (6 bases) 1043 1322 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 377 457 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 310 476 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 597 847 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) -3 -32 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 112 162 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 6 -29 GGGGGG SBQ ID NO:16 - (6 bases) 38 42 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 266 356 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 523 850Percent increase of Fas and FasL in PBMCs SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 94 99 TTTGTT SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 126 260 GTGTGT bases) 1165 1528 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 57 59 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 3 -20 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 338 441 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) 13 -26 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 1046 1147 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 1043 1322 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases) 377 457 CTGTCT SEQ ID NO: 11 - (6 bases) 310 476 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 597 847 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) -3-32 GGAAGG SEQ ID NO: 14 - (6 bases) 112 (6 bases) 38 42 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 266 356 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 6 -29 GGGGGG SEQ ID NO: bases) 523 850

Exemplo 6 (comparativo)Example 6 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro da bexiga T-24Modulation of Fas and FasL in T-24 bladder cancer cells

As células de cancro da bexiga T-24 são uma linha de células de humano p53 mutada. Incubaram-se células T-24 (1,0 x 105 células/ml) com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 4. 20T-24 bladder cancer cells are a mutated p53 human cell line. T-24 cells (1.0 x 10 5 cells / ml) were incubated with the 6 base sequences shown in Table 4.

ΕΡ 1 313 8 5 3/PTΕΡ 1 313 8 5 3 / EN

Tabela 4Table 4

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro da bexiga T-24 SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO:1 - (6 bases) 84 213 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 93 77 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 279 549 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 106 29 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 80 13 TTGTIT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 116 152 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) 16 -10 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 282 459 TGGTTG SEQ ID NO:9 - (6 bases) 180 397 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 90 150 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 107 165 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 105 74 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 75 25 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 46 14 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 56 18 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) 35 -14 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 124 75 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 139 205Percent increase of Fas and FasL in bladder cancer cells T-24 SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 84 213 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 93 77 TTTGTT SEQ SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 279 549 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 106 29 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 80 13 TTGTIT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 116 152 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) 16 -10 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 282 459 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 180 397 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases ) 90 150 CTGTCT SEQ ID NO: 11 - (6 bases) 107 165 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 105 74 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 75 25 GGAAGG SEQ ID NO: 14 - ( 6 bases) 46 14 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 56 18 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) 35 -14 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 124 75 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 139 205

Exemplo 7 (comparativo)Example 7 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro da bexiga UMUC-3Modulation of Fas and FasL in UMUC-3 bladder cancer cells

As células de cancro da bexiga UMUC-3 são uma linha de células de humano sobre-expressando P-glicoproteína. Incubaram-se células UMUC-3 (1,0 x 105 células/ml) com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 5. 21 ΕΡ 1 313 853/ΡΤUMUC-3 bladder cancer cells are a human cell line overexpressing P-glycoprotein. UMUC-3 cells (1.0 x 10 5 cells / ml) were incubated with the 6-base sequences shown in Table 5. 21 Ε 1 313 853 / ΡΤ

Tabela 5Table 5

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro da bexiga UMUC-3 SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID N0:1 - (6 bases) 72 112 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 72 154 TTTGTT SEQ ID N0:3 - (6 bases) 108 231 GGTGGG SEQ ID N0:4 - (6 bases) 62 113 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 67 143 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases). 57 132 AAGTAA SEQ ID N0:7 - (6 bases) 6 -1 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 55 149 TGGTTG SEQ ID N0:9 - (6 bases) 143 300 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 42 95 CTGTCT SEQ ID NO:ll - (6 bases) 45 156 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 47 112 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 47 98 GGAAGG SBQ ID NO:14 - (6 bases) 1 8 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 23 58 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) -5 10 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 39 106 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 72 250Percent increase of Fas and FasL in bladder cancer cells UMUC-3 SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 72 112 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 72 154 TTTGTT SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 108 231 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 62 113 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 67 143 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - (6 bases). SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 55 149 TGAGTT SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 143 300 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - ( 6 bases) 42 95 CTGTCT SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 45 156 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 47 112 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 47 98 GGAAGG SBQ ID NO: 14 - (6 bases) 1 8 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 23 58 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) -5 10 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 39 106 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 72 250

Exemplo 8 (comparativo)Example 8 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro de ovário OVCAR-3Modulation of Fas and FasL in ovarian cancer cells OVCAR-3

As células de cancro OVCAR-3 são um modelo de tumor sólido de humano metastático de p53 mutado, p21/waf-l/Cip apagado. Incubaram-se as células OVCAR-3 com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 6. 22 ΕΡ 1 313 853/ΡΤOVCAR-3 cancer cells are a mutated p53, p21 / waf-1 / Cip deleted, metastatic human solid tumor template. The OVCAR-3 cells were incubated with the 6-base sequences shown in Table 6. 22 Ευ¹ 313 853 / ΡΤ

Tabela 6Table 6

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro de ovário OVCAR-3 SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO:l - (6 bases) 64 70 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 77 69 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 193 341 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 41 14 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 43 9 TTGTIT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 65 98 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) 16 -2 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 83 95 TGGTTG SEQ ID NO:9 - (6 bases) 221 270 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 93 114 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 52 93 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 126 224 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 22 10 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 15 1 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 19 -2 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) -1 7 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 49 59 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 65 142Percent increase of Fas and FasL in ovarian cancer cells OVCAR-3 SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 64 70 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 77 69 TTTGTT SEQ SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 193 341 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 41 14 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 43 9 TTGTIT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 65 98 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) 16 -2 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 83 95 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 221 270 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases ) 93 114 CTGTCT SEQ ID NO: 11 - (6 bases) 52 93 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 126 224 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 22 10 GGAAGG SEQ ID NO: 14 - ( 6 bases) 15 1 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 19-2 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) -1 7 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 49 59 GGGCGG SEQ ID NO : 18 - (6 bases) 65 142

Exemplo 9 (comparativo)Example 9 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro de ovário SK-OV-3Modulation of Fas and FasL in ovarian cancer cells SK-OV-3

As células de cancro de ovário SK-OV-3 são um modelo de tumor sólido de humano metastático de p53 mutado, p21/waf-1/Cip apagado, pl51Ilk4B,pl61Ilk4 apagado. Incubaram-se as células SK-OV-3 (1,0 x 105 células/ml) com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 7. 23 ΕΡ 1 313 853/ΡΤSK-OV-3 ovary cancer cells are a template of human putative p53 metastatic solid tumor, p21 / waf-1 / Cip deleted, p51Ilk4B, deleted p61I4k4. SK-OV-3 cells (1.0 x 10 5 cells / ml) were incubated with the 6-base sequences shown in Table 7. 23 Ε 1 313 853 / ΡΤ

Tabela 7Table 7

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro de ovário SK-OV-3 SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO:l - (6 bases) 49 37 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 60 24 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 108 103 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) -1 -17 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 3 -31 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 41 24 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) -12 -22 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 58 32 TGGTTG SEQ ID N0:9 - (6 bases) 63 53 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 34 33 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 15 26 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 9 -3 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 16 -3 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) -15 -31 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 0 -27 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) -14 -28 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) -6 -16 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 29 42Percent increase of Fas and FasL in ovarian cancer cells SK-OV-3 SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 49 37 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 60 24 TTTGTT SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 108 103 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) -1 -17 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 3 -31 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - ( 6 bases) 41 24 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) -12 -22 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 58 32 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) ATGTAT SEQ ID NO : - (6 bases) 34 33 CTGTCT SEQ ID NO: 11 - (6 bases) 15 26 TCGTTC SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 9-3 GGTTGG SEQ ID NO: GGAAGG SEQ ID NO: 14 - (6 bases) -15 -31 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 0 -27 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) -14 -28 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) -6 -16 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 29 42

Exemplo 10 (comparativo)Example 10 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro da próstata LNCaPModulation of Fas and FasL in LNCaP prostate cancer cells

As células de cancro da próstata LNCaP são um modelo de tumor sólido de humano metastático, negativas em receptor de TGF-beta 1, independentes de androgénio. Incubaram-se as células LNCaP com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 8. 24 ΕΡ 1 313 853/ΡΤLNCaP prostate cancer cells are an androgen-independent, TGF-beta 1 receptor negative, metastatic human solid tumor model. LNCaP cells were incubated with the 6-base sequences shown in Table 8. 24 Ευ¹ 313 853 / ΡΤ

Tabela δTable δ

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro da próstata LNCaP SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID N0:1 - (6 bases) 29. 40 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 34 5 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 199 344 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 21 8 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 15 -1 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 40 73 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) 0 -16 CCGTCC SEQ ID N0:8 - (6 bases) 0 311 TGGTTG SEQ ID N0:9 - (6 bases) 184 241 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 44 68 CTGTCT SEQ ID NO:ll - (6 bases) 17 55 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 111 171 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 23 -3 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 26 -4 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 12 -4 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) 6 13 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 48 55 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 55 126Percent increase of Fas and FasL in prostate cancer cells LNCaP SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 29. 40 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 34 5 TTTGTT SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 199 344 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 21 8 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 15 -1 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 40 73 AAGTAA SEQ ID NO: 7 - (6 bases) 0 -16 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 0 311 TGGTTG SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 184 241 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases ) 44 68 CTGTCT SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 23 55 GGTAG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) (6 bases) 26 -4 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 12 -4 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) 6 13 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 48 55 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 55 126

Exemplo 11 (comparativo)Example 11 (comparative)

Modulação de Fas e de FasL em células de cancro da mama MCF-7Modulation of Fas and FasL in MCF-7 breast cancer cells

As células de cancro da mama de humano MCF-7 são um modelo de tumor sólido de humano metastático, negativas em caspase-3, dependentes de estrogénio. Incubaram-se as células MCF-7 (1 x 105 células/ml) com as sequências de 6 bases que se mostram na Tabela 9. 25 ΕΡ 1 313 853/ΡΤMCF-7 human breast cancer cells are an estrogen-dependent caspase-3 negative solid metastatic human tumor model. MCF-7 cells (1 x 10 5 cells / ml) were incubated with the 6-base sequences shown in Table 9. 25 Ε 1 1373 853 / ΡΤ

Tabela 9Table 9

Aumento em percentagem de Fas e de FasL em células de cancro da mama MCF-7 SEQUÊNCIA AUMENTO % Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO:l - (6 bases) 122 121 GTGTGT SEQ ID NO:2 - (6 bases) 155 135 TTTGTT SEQ ID NO:3 - (6 bases) 361 528 GGTGGG SEQ ID NO:4 - (6 bases) 106 110 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 93 81 TTGTTT SEQ ID NO:6 - (6 bases) 143 159 AAGTAA SEQ ID NO:7 - (6 bases) 12 21 CCGTCC SEQ ID NO:8 - (6 bases) 200 322 TGGTTG SEQ ID NO:9 - (6 bases) 255 481 ATGTAT SEQ ID NO:10 - (6 bases) 129 214 CTGTCT SEQ ID NO:11 - (6 bases) 73 128 TCGTTC SEQ ID NO:12 - (6 bases) 56 98 GGTTGG SEQ ID NO:13 - (6 bases) 99 83 GGAAGG SEQ ID NO:14 - (6 bases) 62 84 GGCCGG SEQ ID NO:15 - (6 bases) 63 78 GGGGGG SEQ ID NO:16 - (6 bases) -7 18 GGGAGG SEQ ID NO:17 - (6 bases) 127 194 GGGCGG SEQ ID NO:18 - (6 bases) 165 322Percent increase of Fas and FasL in breast cancer cells MCF-7 SEQUENCE INCREASE% Fas FasL TGTGTG SEQ ID NO: 1 - (6 bases) 122 121 GTGTGT SEQ ID NO: 2 - (6 bases) 155 135 TTTGTT SEQ SEQ ID NO: 3 - (6 bases) 361 528 GGTGGG SEQ ID NO: 4 - (6 bases) 106 110 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 93 81 TTGTTT SEQ ID NO: 6 - (6 bases) 143 159 AAGTAA SEQ ID NO: 9 - (6 bases) 255 481 ATGTAT SEQ ID NO: 10 - (6 bases) SEQ ID NO: 7 - (6 bases) 12 21 CCGTCC SEQ ID NO: 8 - (6 bases) 200 322 TGGTTG SEQ ID NO: SEQ ID NO: 12 - (6 bases) 56 98 GGTTGG SEQ ID NO: 13 - (6 bases) 99 83 TCGTTC SEQ ID NO: 14 - (6 bases) bases) 62 84 GGCCGG SEQ ID NO: 15 - (6 bases) 63 78 GGGGGG SEQ ID NO: 16 - (6 bases) -7 18 GGGAGG SEQ ID NO: 17 - (6 bases) 127 194 GGGCGG SEQ ID NO: 18 - (6 bases) 165 322

Exemplo 12 (comparativo)Example 12 (comparative)

Inibição da expressão de Fas em células T de leucemia de humano Jurkat por ciclo-heximida Células T de leucemia de humano Jurkat foram pré-incubadas com 0,0 pg/ml (-CHX) ou com 0,1 pg/ml de ciclo-heximida (+CHX) durante 1 h. Adicionaram-se 10 pg/ml ou 100 pg/ml de SEQ ID NO: 5 de 6 bases (GGGTGG) a ambas as células 26Inhibition of Fas expression in Jurkat human leukemia T cells by cycloheximide Jurkat human leukemia T cells were preincubated with 0.0 pg / ml (-CHX) or 0.1 pg / ml cyclo- heximide (+ CHX) for 1 h. 10 pg / ml or 100 pg / ml of 6-base SEQ ID NO: 5 (GGGTGG) were added to both 26

ΕΡ 1 313 8 5 3/PT -CHX e +CHX e continuou-se a incubação durante 24 horas e durante 48 horas (Tabela 10).CHX and + CHX and incubation was continued for 24 hours and for 48 hours (Table 10).

Tabela 10Table 10

Aumento em percentagem de Fas em células T de leucemia de humano Jurkat SEQUÊNCIA AUMENTO % 24 h 48 h -CHX +CHX -CHX +CHX GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 10 pg/ml 63 5 91 51 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 100 pg/ml 62 22 150 115Percent Increase of Fas in Jurkat Human Leukemia T Cells SEQUENCE INCREASE% 24h 48h -CHX + CHX -CHX + CHX GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 10 pg / ml 63 5 91 51 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 100 pg / ml 62 22 150 115

Como se mostra na Tabela 10, a SEQ ID NO: 5 regulou de modo ascendente a expressão de Fas em células T Jurkat. Com 10 pg/ml de SEQ ID NO: 5, a ciclo-heximida diminuiu a expressão de Fas 92% após 24 h e 44% após 48 h. Com 100 pg/ml de SEQ ID NO:5, a ciclo-heximida diminuiu a expressão de Fas 65% após 24 h e 23% após 48 h. Estes dados sugerem que a SEQ ID NO:5 de 6 bases estimula a síntese de novo de Fas.As shown in Table 10, SEQ ID NO: 5 up-regulated the expression of Fas on Jurkat T cells. At 10 pg / ml of SEQ ID NO: 5, cycloheximide decreased expression of Fas 92% after 24 h and 44% after 48 h. At 100 pg / ml of SEQ ID NO: 5, cycloheximide decreased the expression of Fas 65% after 24 h and 23% after 48 h. These data suggest that SEQ ID NO: 5 of 6 bases stimulates the de novo synthesis of Fas.

Exemplo 13Example 13

Efeito sinêrgico da SEQ ID NO:5 (GGGTGG) e de anticorpos anti-Fas agonistas na inibição da proliferação de células de cancro da bexiga UMUC-3 Células de cancro da bexiga UMUC-3 foram incubadas durante 48 horas com 0,00, 0,02 e 0,20 pg/ml de anticorpos monoclonais anti-Fas agonistas (clone CH-11: Coulter-Immunotech, Marselha, França) + 0 ou 10 pg/ml de SEQ ID NO:5. A proliferação celular foi medida utilizando redução de dimetiltiazol-difeniltetrazólio (MTT) (Mosman et al. J. Immunol. Methods 65:55, 1983). Mediu-se o MTT para um comprimento de onda de 570 nm utilizando um leitor espectrofotométrico multiplaca (ELX800, Bio-TEK Instruments Inc., Winooski, VT). 27 ΕΡ 1 313 853/ΡΤSynergistic effect of SEQ ID NO: 5 (GGGTGG) and anti-Fas agonist antibodies on inhibition of proliferation of bladder cancer cells UMUC-3 UMUC-3 bladder cancer cells were incubated for 48 hours with 0.00, , 02 and 0.20 pg / ml of anti-Fas agonist monoclonal antibodies (clone CH-11: Coulter-Immunotech, Marseille, France) + 0 or 10 pg / ml of SEQ ID NO: 5. Cell proliferation was measured using reduction of dimethylthiazole-diphenyltetrazolium (MTT) (Mosman et al., J. Immunol Methods 65:55, 1983). The MTT was measured at a wavelength of 570 nm using a multi-plate spectrophotometric reader (ELX800, Bio-TEK Instruments Inc., Winooski, VT). 27 Ε 1 313 853 / ΡΤ

Tabela 11 SEQUÊNCIA % INIBIÇÃO Anti- -Fas anticorpos 0,0 ug/ml 0,02 pg/ml 0,2 ug/ml Nenhuma sequência 0 7 17 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 23 38 44 10 ug/mlTable 11 SEQUENCE% INHIBITION Anti-Fas antibodies 0.0æg / ml 0.02 pg / ml 0.2æg / ml No sequence 0 7 17 GGGTGG SEQ ID NO: 5 - (6 bases) 23 38 44 10æg / mL

Inibição da proliferação de células de cancro da bexiga UMUC- 3Inhibition of proliferation of UMUC-3 bladder cancer cells

Como se mostra na Tabela 11, a SEQ ID NO: 5 de 6 bases potenciou a actividade inibidora de 0,02 e 0,2 pg/ml de anticorpos anti-Fas agonistas na proliferação de células UMUC-3.As shown in Table 11, SEQ ID NO: 5 of 6 bases potentiated the inhibitory activity of 0.02 and 0.2 pg / ml of anti-Fas agonist antibodies on the proliferation of UMUC-3 cells.

Exemplo 14Example 14

Efeito aditivo de SEQ ID NO:5 (GGGTGG) e anticorpos anti-Fas agonistas na inibição da proliferação de células T de 1eucemia Jurkat. Células T de leucemia Jurkat foram incubadas durante 48 horas com 0,00, 0,02 e 0,20 ug/ml de anticorpos monoclonaisAdditive effect of SEQ ID NO: 5 (GGGTGG) and anti-Fas agonist antibodies in inhibiting Jurkat 1eeuemia T cell proliferation. Jurkat leukemia T cells were incubated for 48 hours with 0.00, 0.02 and 0.20æg / ml of monoclonal antibodies

anti-Fas agonistas (clone CH-11) +0 e 10 ug/ml de SEQ ID NO:5. A proliferação celular foi medida como no Exemplo 13.anti-Fas agonists (clone CH-11) +0 and 10æg / ml of SEQ ID NO: 5. Cell proliferation was measured as in Example 13.

Tabela 12Table 12

Inibição da proliferação de células T de leucemia Jurkat SEQUÊNCIA % INIBIÇÃO Anticorpos anti-Fas 0,0 Ug/ml 0,02 Ug/ml 0,2 Ug/ml Nenhuma sequência 0 16 33 GGGTGG SEQ ID NO:5 - (6 bases) 10 ug/ml 16 28 48 28Inhibition of Jurkat leukemia T cell proliferation SEQUENCE% INHIBITION Anti-Fas antibodies 0.0 Ug / ml 0.02 Ug / ml 0.2 Ug / ml No sequence 0 16 33 GGGTGG SEQ ID NO: 5- (6-bases) 10æg / ml 16 28 48 28

ΕΡ 1 313 8 5 3/PTΕΡ 1 313 8 5 3 / EN

Como se mostra na Tabela 12, os efeitos da SEQ ID NO: 5 de 6 bases e de 0,02 e 0,2 pg/ml de anticorpos anti-Fas agonistas na proliferação de células T Jurkat foram aditivas.As shown in Table 12, the effects of SEQ ID NO: 5 of 6 bases and 0.02 and 0.2 pg / ml of anti-Fas agonist antibodies on the proliferation of Jurkat T cells were additive.

Exemplo 15Example 15

Efeito de sequências de 6 bases e de anticorpos anti-Fas agonistas em células de linfoma T murino EL-4 Células de linfoma T murino EL-4 são implantadas em C57BL6 lpr/Ipr (ratinhos Fas negativos) . Dividem-se os ratinhos em 30 grupos de 10 ratinhos. Ao dia 0, os ratinhos do grupo 1 receberam solução salina, os ratinhos do grupo 2 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 5, ratinhos do grupo 3 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 16, os ratinhos do grupo 4 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:17, os ratinhos do grupo 5 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:18, os ratinhos do grupo 6 receberam anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 7 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:5 + anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 8 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 16 + anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 9 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:17 + anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 10 receberam 1. 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:18 + anticorpos anti-Fas. Nestes diferentes grupos, os anticorpos anti-Fas são administrados em qualquer dose na gama de cerca de 0,003 a cerca de 0,3 mg/kg. Os ratinhos do grupo 1 têm a maior massa de tumor, os ratinhos dos grupos 2, 3, 4, 5 e 6 ratinhos têm menos massa de tumor do que os ratinhos do grupo 1, e os ratinhos dos grupos 7, 8, 9 e 10 têm a menor massa de tumor. A eficácia da SEQ. ID NO:5, da SEQ. ID NO:16 e da SEQ. ID NO:17 é dependente da dose.Effect of 6-base sequences and anti-Fas agonist antibodies on murine T-cell lymphoma EL-4 murine T-cell lymphoma cells EL-4 are implanted in C57BL6 lpr / Ipr (Fas negative mice). The mice are divided into 30 groups of 10 mice. At day 0, the mice in group 1 received saline, the mice in group 2 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 5, mice in group 3 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 16, the mice in group 4 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 17, the mice in group 5 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 18, the mice in group 6 received anti-Fas antibodies, the mice in group 7 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 5 + anti-Fas antibodies, the mice in group 8 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 16 + anti-Fas antibodies, the mice in group 9 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 17 + anti-Fas antibodies, the mice in group 10 received 1.10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 18 + anti-Fas antibodies. In these different groups, the anti-Fas antibodies are administered at any dose in the range of about 0.003 to about 0.3 mg / kg. Mice in group 1 have the largest tumor mass, mice in groups 2, 3, 4, 5 and 6 mice have less tumor mass than the mice in group 1, and mice in groups 7, 8, 9 and 10 have the smallest tumor mass. The efficacy of SEQ. SEQ ID NO: 5. SEQ ID NO: 16 and SEQ. ID NO: 17 is dose dependent.

Exemplo 16Example 16

Ratinhos F1 (SJL/J x PL/J) fêmeas são injectados subcutaneamente em ambas as regiões femorais com uma emulsão contendo 0,5 mg de proteína básica mielina (MBP) misturada com adjuvante completo de Freund. Após 24 h, administram-se intraperitonealmente 400 ng de toxina de Bordetella pertussis. No dia de início (dia 0), os ratinhos do grupo 1 receberam solução salina, os ratinhos do grupo 2 receberam 1, 29 ΕΡ 1 313 853/ΡΤ 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 5, os ratinhos do grupo 3 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:16, os ratinhos do grupo 4 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 17, os ratinhos do grupo 5 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:18, os ratinhos do grupo 6 receberam anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 7 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:5 + anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 8 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO: 16 + anticorposFemale F1 (SJL / J x PL / J) mice are injected subcutaneously into both femoral regions with an emulsion containing 0.5 mg of myelin basic protein (MBP) mixed with complete Freund's adjuvant. After 24 h, 400 ng of Bordetella pertussis toxin is administered intraperitoneally. On the day of onset (day 0), the mice in group 1 received saline, the mice in group 2 received 1.29æg -1 313 853 / ΡΤ 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 5, the mice in group 3 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 16, the mice in group 4 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 17, the mice in group 5 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 18, the mice in group 6 received anti-Fas antibodies, the mice in group 7 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 5 + anti-Fas antibodies, the mice in group 8 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 16 + antibodies

anti-Fas, os ratinhos do grupo 9 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:17 + anticorpos anti-Fas, os ratinhos do grupo 10 receberam 1, 10 ou 100 mg/kg da SEQ. ID NO:18 + anticorpos anti-Fas durante 3 dias por administração intracisternal (20 pg/dias). Nestes diferentes grupos, os anticorpos anti-Fas são administrados em qualquer dose na gama de cerca de 0,003 a cerca de grupos de ratinhos 1, 2, 3, 4 e 5. Os ratinhos dos grupos 7, 8, 9 e 10 mostram a menor progressão de EAE. A eficácia da SEQ. ID NO:5, da SEQ. ID NO:16 e da SEQ. ID NO:17 é dependente da doseanti-Fas mice, the mice in group 9 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 17 + anti-Fas antibodies, the mice in group 10 received 1, 10 or 100 mg / kg of SEQ. ID NO: 18 + anti-Fas antibodies for 3 days by intracisternal administration (20 pg / day). In these different groups, the anti-Fas antibodies are administered at any dose in the range of about 0.003 to about groups of mice 1, 2, 3, 4 and 5. The mice in groups 7, 8, 9 and 10 show the lowest progression of EAE. The efficacy of SEQ. SEQ ID NO: 5. SEQ ID NO: 16 and SEQ. ID NO: 17 is dose-dependent

Lisboa, 2012-05-22Lisbon, 2012-05-22

Claims

The use of a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18 and an anti-Fas antibody to the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from a neoplastic disease, an autoimmune disease, an inflammatory disease, a proliferative disease, a lymphoproliferative disease, a degenerative disease, a neurodegenerative disease, a cardiovascular disease, a graft rejection or an infection where the anti-Fas antibody is for administration at a dose of 0.003 to 3 mg / kg, and wherein the oligonucleotide sequence modulates the effectiveness of the anti-Fas antibody.

Use according to claim 1, wherein the anti-Fas antibody is for administration in a dose of 0.01 to 0.1 mg / kg.

Use according to claim 1 or 2, for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer.

Use according to claim 3, wherein the cancer is selected from the group consisting of ovarian, prostate, breast, bladder and leukemia cancer.

Use according to any one of claims 1 to 4 of a synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 and SEQ ID NO : And an anti-Fas antibody for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer.

A synthetic 6-base phosphodiester oligonucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 18 and an anti-Fas antibody for use in the treatment of a disease selected from a neoplastic disease, an autoimmune disease, an inflammatory disease, a proliferative disease, a lymphoproliferative disease, a degenerative disease, a neurodegenerative disease, a cardiovascular disease, a graft rejection or an infection, wherein the anti-Fas antibody is at a dose of 0.003 to 3 mg / kg, and where the oligonucleotide sequence modulates the effectiveness of the anti-Fas antibody. Lisbon, 2012-05-22