PT101734B

PT101734B - Processo para a preparacao de derivados de naftoquinonas e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT101734B
Application number: PT101734A
Authority: PT
Inventors: Victoria Susan Latter; Winston Edward Gutteridge; Alan Thomas Hudson
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1988-08-16
Filing date: 1995-07-06
Publication date: 1997-08-29
Also published as: AU633836B2; HU911004D0; EP0580185A1; CA1329621C; AU3994889A; IL91308A0; FI893835A; LV11273B; SA95160138B1; DE68928964T2; IL91308A; LV11273A; EP0580185B1; HK103395A; DE68914930D1; SG23618G; NZ230313A; JP2804302B2; DK399989A; EP0362996A3

Description

A presente invenção refere-se ao tratamento e profilaxia de infecções provocadas por Pneumocystis carinii. Mais particularmente a presente invenção relaciona-se com a utilização de naftoquinonas no tratamento e profilaxia de infecções provocadas por Pneumocystis carinii, com a utilização desses compostos para a preparação de medicamentos para o tratamento e profilaxia de infecções provocadas por P.Carinii, e com novas formulações que incorporam esses compostos.

Pneumocystis carinii é uma parasita cujo habitat natural é o tecido pulmonar. Num hospedeiro que pcssua um sistema imunológico normal o P.Carinii não é considerado patogénico. Todavia, no caso de o sistema imunológico ser deficiente o P.Carinii é susceptível de causar pneumonia. Existe uma diversidade de circunstâncias nas quais o sistema imunológico pode ser defeituoso ou deficiente. Assim, por exemplo, o sistema imunológico deficiente é vulgar em crianças imaturas ou prematuras (recém-nascidos) essa deficiência pode ser originada também pela supressão provocada por alguns fármacos, a qual pode ser deliberada, por exemplo nos pacientes que recebam transplantação de orgãos ou inevitável, por exemplo como efeito secundário da quimioterapia do cancro. 0 desenvolvimento desordenado de uma ou de várias partes constituintes do sistema imunológico por exemplo como sucede em algumas formas de cancro, pode originar também imunodeficiência.

-1Além disso a imunodeficiência pode ser provocada por infecções virais, incluindo o virus do imunodeficiência humana (HIV). Foi já descrito Hughes, W.T. (1987) Treatment and Prophylaxis of Pneumocystis carinii pneumonia, Parasitology Today 3(11) 332-335 que pelo menos 60% de pacientes com o sidroma da imunodeficiência adquirida (SIDA) sofrem de pneumonia provocada por Pneumocystis carinii.

Na presente memória descritiva o termo hospedeiro imunoafectado será utilizado para descrever hospedeiros com sistema imunológico deficiente ou defeituoso.

Nos hospedeiros imunoafectados a pneumonia provocada por Pneumocystis carinii é quase sempre fatal sem tratamento. Os tratamentos mais amplamente utilizados para este estado de saúde são trimetoprim-sulfametoxazole (Cotrimoxazole) e a pentamidina. Verificou-se todavia que os tratamentos com os dois compostos apenas são eficazes a 50-70 % em paciente de SIDA e que origina uma incidência de reacções adversas muito superior à usual (cerca de 50 %) (Wofsy, C.B. Antimicrobial Agents Annual, 1986, Vol. 1, p377-400) . Deste modo existe a necessidade de novos agentes, especialmente para a profilaxia da pneumonia provocada por P.Carinii.

Conhece-se na especialidade uma ampla variedade de naftoquinonas. Esses compostos têm sido descritos como possuidores de actividade anti-malária, anti-coccidiana e anti-teileriana. Alguns compostos encontram-se descritos como possuidores de actividade contra parasitas externos. Assim, Fieser e outros. J. Amer. Chem. Soc. 1948, 70 , 3156-3165 (e referências ali citadas) descreve um grande número de 2substituido-3-hidroxi-l,4-naftoquinonas, como possuidores de actividade anti-malária. Alguns destes compostos encontram-se descritos também no pedido de Patente Norte Americana n° . 2 553 648. Há outras classes 2-substituido-3-hidroxi-1,4naftoquinonas possuidoras de actividade anti-malária, anticoccidiana e/ou anti-teileriana que se encontram descritos nas

-2Patentes Norte-Americanas N°s. 3 367 830 e 3 347 742, no pedido de Patente Inglesa N°. 1553424 e nos pedidos de Patente

Europeus Nos.2228, 77551 e 77550.

O pedido de Patente Europeu N°. 123239 descreve combinações sinérgicas anti-protozoanas de naftoquinonas e de

4-piridinois ou de seus ésteres alcanóicos, as quais se consideram especialmente úteis para o tratamento ou profilaxia da malária.

A Patente Europeia N°. 123238 descreve 2substituido-3-hidroxi-1,4-naftoquinonas de fórmula (I)

(I) em que R¹ representa hidrogénio e R² é seleccionado entre alcoxi (Cj,-Cg) , aralcoxi, alquil (C^-Cg)-alcoxi(C^-Cg), fenilo substituído por um ou dois grupos seleccionados entre halogéneo e alquilo (C^-Cg) , halogéneo e per-halo-alquilo (C]_Cg),ou R¹ e R² representam ambos alquilo (C]_-Cg) ou fenilo, e n representa o inteiro 0 ou 1, e seus sais fisiològicamente aceitáveis. Os compostos de fórmula (I) em que n representa zero são activos contra o parasita da malária nos seres humanos. Plasmodium falciparum e também contra as espécies de Eimeria tais como E, tenella e E. acervulina. as quais são organismos causadores de coccidiose. Os compostos de fórmula (I) em que n representa 1 são activos contra protozoários do género Theileria, em particular T.annulata e T.parva.

Descobriu-se agora que existe uma diversidade de naftoquinonas activas em ratazanas in vivo contra infecções provocadas por Pneumocystis carinii pneumonia. Demonstrou-se

-3também a actividade in vitro utilizando uma preparação de P.

Carinii.

Num primeiro aspecto a presente invenção proporciona uma naftoquinona para utilização no tratamento e/ou profilaxia de infecções provocadas por Pneumocvstis carinii (por exemplo a Pneumocystis carinii pneumonia) nos mamíferos (incluindo os seres humanos).

Noutro aspecto a presente invenção proporciona a utilização de uma naftoquinona para a preparação de um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de infecções provocadas por Pneumocystis carinii em mamíferos (incluindo os seres humanos).

De acordo com um aspecto adicional a presente invenção proporciona um método para o tratamento e/ou prevenção de infeções provocadas por Pneumocystis carinii num mamífero, o qual consiste em administrar a um mamífero (incluindo os seres humanos) susceptível de infecção com P.Carinii pneumonia uma quantidade eficaz de uma naftoquinona.

A prevenção de infecções provocadas por P. Carinii é particularmente importante num hospedeiro imunoafectado, conforme anteriormente referido. No caso de imuno-supressão resultante de uma infecção com HIV, pode ser necessária a profilaxia nos casos diagnosticados como seropositivos para HIV, e ainda nos casos com linfadenopatia generalizada progressiva (PGL) ou nos casos do complexo associado à SIDA (ARC) , assim como em paciente que sofram de SIDA.

As naftoquinonas para utilização de acordo com a presente invenção englobam as 1,4-naftoquinonas de fórmula geral (II) :

(li) em que

R⁸ representa um resíduo hidrocarboneto não aromático C4-C35 opcionalmente substituído por um ou vários substituintes, seleccionado entre halo, alcoxi (C]_-Cg) , hidroxi, fenilo, fenil-alcoxi (C]_-Cg) e fenil-alquilo(C^-Cg) , sendo esse grupo ou radical fenilo substituído opcionalir.ente por um ou vários grupos seleccionados entre alcoxi(C^-Cg), alquilo(C^-Cg), alcoxi(C^-Cg)-alquilo(C^-Cg), hidroxi, halogéneo, halo-alquilo(C^-Cg),amino, e mono- ou di- alquil(C1-C4)-amino; e

R⁴ representa hidroxi; halogéneo;

um grupo OCOR⁸ em que R⁵ representa um grupo alquilo (C1-C10) , um grupo ciclo-alquilo (C3-C]_q) , um grupo alcoxi (C]_-

C]_q) , um grupo fenilo ou naftilo, sendo esse grupe R⁵opcionalmente substituído por exemplo por mono-ou dialquil(C1-C4)-amino, carboxi ou hidroxi;

um grupo OR⁸ ou SR⁸ em que R⁸ representa um crupo alquilo(Cx-Ciq), ciclo-alquilo(03-040), fenilo ou naftilo opcionalmente substituído, conforme definido para R⁵; ou um grupo NR⁷R⁸ em que R⁷ e R⁸ representam individual e independentemente hidrogénio ou alquilo(C4-C4), ou um grupo NR⁷R⁸ representa um anel heterociclico saturado de 5-7 membros, o qual pode conter opcionalmente um heteroátomo adicional seleccionado entre azoto, oxigénio ou enxofre;

e seus sais fisiologicamente aceitáveis e outros derivados fisiològicamente funcionais.

-5Um resíduo R³ hidrocarboneto não aromático CqC35 pode ser um grupo de cadeia linear ou ramificada CqCi4,por exemplo alquilo (Cj_-Cg), ou C2^_c14' P^or exemplo alquenilo(C2-Cg) ou um grupo C3-C4Q, por exemplo cicloalquilo (C3 -Cg ) , podendo cada um deles suportar opcionalmente um grupo C3-C40/ por exemplo ciclo-alquilo(C3-C5), e cada um dos grupos ciclo-alquilo anteriormente referidos suporta opcionalmente um grupo Cq-Cqg, por exemplo alquilo(C1-C4).0 resíduo R³ hidrocarboneto não aromático contem preferencialmente entre 1 e 20 átomos de carbono, por exemplo entre 1 e 14 átomos de carbono. Os resíduos R³ adequados englobam ciclo-alquilo (C3-C4Q)-alquilo (Cg_-Cg) , alquilc(CqCiq) - ciclo-alquilo (C3 -C]_q) , alquilo (C^-C^q) -ciclo-alquilo (C3 C^q)-alquilo (C]_-Ciq) e ciclo-alquilo (C3-C^q)-ciclo-alquilc (C3Ciq) ·

Os compostos de fórmula (II) que contêm um grupo carboxi ou hidroxi ácido, tais como os compostos em que R⁴ representa hidroxi, podem formar sais com bases, e os compostos (II) que contêm um grupo amino alcalino podem formar sais com ácidos. Os sais de bases adequados englobam os sais de bases inorgânicas tais como os sais de metais alcalinos (por exemplo sódio e potássio) e os sais de metais alcalinoterrosos (por exemplo cálcio); sais de bases orgânicas, por exemplo sais de fenil-etil-benzil-amina, dibenzil-etilenodiamina, etanol-amina e dietanol-amina; e sais de aminoácidos, por exemplo lisina e arginina. Os sais de adição de ácido adequados englobam os formados a partir dos ácidos clorídrico, bromidrico, nítrico, perclórico, sulfúrico, cítrico, tartárico, fosfórico, láctico, glutâmico, oxálico, aspártico, pirúvico, acético, succinico, fumárico, maleico, oxaloacético, isetiónico, esteárico, ftálico, metano-sulfonico, p-tolueno-

sulfónico,	benzeno-sulfónico, lactobiónico e glucurónico. Sem pretender ficar limitado pela teoria,
admite-se	que os compostos de fórmula (II) em que R⁴

representa um grupo - OCOR⁵, OR⁶, SR⁶ ou NR⁷R⁸, podem actuar como pro-fármacos ou biopercursores que se convertem in vivo,

-6quer por acção de hospedeiro quer por acção do parasita, num composto de fórmula (II) em que R⁴ representa hidroxi. Esses compostos serão designados daqui em diante como derivados fisiologicamente funcionais. Esses compostos podem possuir também actividade biológica intrínseca.

A presente invenção engloba no seu âmbito a utilização de isómeros de compostos de fórmula (II) e de mistura desses isómeros. Os compostos de fórmula (II) podem existir numa forma tautomérica na qual o grupo hidroxilo dá o seu protão a um dos grupos oxo, considerando-se a utilização dessas formas talcoméricas incluida no âmbito da presente invenção. Todavia admite-se que a forma é a representada pela fórmula (II) .

Um grupo preferido de compostos para utilização de acordo com a presente invenção é representado pela fórmula (III) :

em que R⁹ representa um grupo alquilo (C]_-C^q);

um grupo ciclo-alquilo(C5-C7) (o qual pode ser opcionalmente substituído por um grupo alquilo (C]_-Cg) de cadeia linear ou ramificada, um grupo halo-alquilo(C^-Cg), um grupo alcoxi (C]_-Cg) ou grupo fenilo, sendo o próprio grupo fenilo opcionalmente substituído por um ou vários substituintes seleccionados entre alquilo(C^-Cg) e halogéneo; ou um grupo alquil (C^-C]_q)-ciclo-alquilo (C5-C7) , em que o radical ciclo-alquilo pode ser opcionalmente substituído

-7conforme anteriormente definido para o grupo ciclo-alquilo(C5C7) ; e seus sais fisiológicamente aceitáveis e outros derivados fisiológicamente funcionais.

Um grupo de compostos que se pode utilizar de acordo com a presente invenção possui a fórmula (IV)

em que R¹® representa um grupo alquilo de 1 a 10 átomos de carbono e m representa 0 ou 1, e seus sais fisiológicamente aceitáveis e outros derivados fisiologicamente funcionais.

Nos compostos de fórmula (IV) , R¹⁰ representa adequadamente um grupo alquilo (C4-C4) de cadeia linear, preferencialmente metilo

Outro grupo de compostos que se pode utilizar de acordo com a presente invenção é representado pela fórmula (I) anteriormente definida e pelos seus sais fisiológicamente aceitáveis e outros derivados fisiológicamente funcionais.

Os compostos preferidos de fórmula (I) para utilização de acordo com a presente invenção englobam aqueles em que n representa 0, em que R¹ representa hidrogénio e R²representa fenil substituído por um ou dois grupos seleccionados entre halogéneo e alquilo(Cg-Cg) preferencialmente halogéneo.

-8Os compostos particularmente preferidos para utilização de acordo com a presente invenção são:

2- (4-£.-butil-ciclo-hexil) -3-hidroxi-l, 4-naf toquinona

2-(4-t-butil-ciclo-hexil-metil)-3-hidroxi-l,4-naftoquinona

2-[4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3-cloro-l, 4-naf toquinona e seus sais fisiológicamente aceitáveis e derivados físiologicamente funcionais.

Um composto especialmente preferido para utilização de acordo com a presente invenção é 2-[4-(4-clorofenil) ciclo-hexil]-3-hidroxi-l, 4-naf toquinona, pela fórmula (V) :

e seus sais fisiológicamente aceitáveis e outros derivados fisiológicamente funcionais.

Deste modo num aspecto preferencial a presente invenção proporciona o composto de formula (V) e seus sais físiologicamente aceitáveis e utros derivados fisiológicamente funcionais para utilização no tratamento e/ou profilaxia de infecções provocadas por Pneumocystis carinii (por exemplo P.carinii pneumonia) em mamíferos (incluindo os seres humanos).

Noutro aspecto preferencial a presente invenção proporciona a utilização dos compostos de fórmula (V) e seus sais fisiologicamente aceitáveis e outros derivados físiologicamente funcionais, para a preparação de um

-9medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de infecções provocadas por Pneumocvstis carinii nos mamíferos (incluindo os seres humanos).

De acordo com outro aspecto preferencial a presente invenção proporciona um método de tratamento e/ou prevenção de infecções provocadas por Pneumocystis carinii, o qual consiste em administrar a um mamífero (incluindo os seres humanos) susceptível de infecção P.carinii pneumonia uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (V) ou de um seu sal físiologicamente aceitável ou outro derivado físiologicamente funcional.

Faz-se notar que os compostos de fórmula (I) em que R¹ representa hidrogénio e os compostos de fórmulas (IV) e (V) podem existir como isómeros cis ou trans, significando isto que o anel do ciclo-hexilo pode ser substituído na configuração cis ou trans por núcleos de naftoquinona e pelo substituinte no anel do ciclo-hexilo (no caso da fórmula (V) , o grupo cloro-fenilo). Os isómeros cis e trans e respectivas misturas podem ser utilizados em quaisquer proporções de acordo com a presente invenção. Em geral, quando o composto existir na forma de uma mistura de isómeros, o isómero trans estará presente numa quantidade próxima de 50% ou será o isómero predominante, mas a utilização de misturas em que predomina o isómero cis também está englobada no âmbito da presente invenção. A proporção especifica de isómeros pode variar conforme necessário; as misturas típicas são aquelas em que a proporção entre isómeros cis/trans é aproximadamente 1:1; 40:60 e 5:98. Para utilização de acordo com a presente invenção é preferível o isómero trans do composto de fórmula (V) ou uma mistura dos seus isómeros cis e trans contendo pelo menos 95% por exemplo 99%, do isómero trans.

Os derivados físiologicamente funcionais do composto de formula (V) são caracterizados pela fórmula (VI)

-10R11

em que rH e R¹^ representam individualmente =0 e a linha a traço interrompido representa uma ligação dupla entre as posições 2 e 3 do anel da quinona, representando nesse caso R¹³ um grupo -OCOR⁵; um grupo OR⁶ ou CR⁶ ou grupo NR⁷R⁸, em que R⁵, R⁶, R⁷, e R⁸ possuem as significações anteriormente definidas; ou então a linha a traço interrompido representa ligações duplas para as posições 1,2 e 3,4 do anel do quinol e RH, r!2 _e r13 representam individualmente um grupo -OCCR⁴⁴, em que R¹⁴ representa um grupo alquilo(Cq-CiQ) opcionalmente substituído.

Admite-se que os compostos de fórmula (VI) sejam novos pelo que constituem um aspecto adicional da presente invenção.

Descobriu-se que os compostos de fórmula (VI) exibem actividade in vitro contra o parasita Plasmcdium falciparum e in vivo contra o parasita Plasmodium voelli.

conforme adiante ilustrado. Consequentemente estes compostos podem ser úteis para o tratamento e/ou profilaxia da malária.

composto preferencial de fórmula (VI) é 2acetoxi-3-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-l, 4naftoquinona.Este composto possui a vantagem de apresentar uma melhor solubilidade em água quando comparado com o composto original de fórmula (V).

Outro composto preferencial de fórmula (VI) é

2-[trans-4- (4-cloro-fenil) - ciclo - hexil]-l, 3,4-triacetoxinaftaleno. Este composto é incolor em contraste com o composto

-11(V) que é amarelo, possuindo consequentemente vantagens em termos de formulação e de apresentação.

Outros derivados utilizados de acordo com a do composto presente (V) que podem invenção são ser os representados pela formula (VII) em que exemplo um átomo átomo de cloro.

X representa de cloro,

átomo de halogéneo, bromo ou iodo, de preferência um por composto de fórmula (VII) em que X representa cloro foi anteriormente descrito como um intermediário para a preparação do composto de fórmula (I), mas não se lhe atribuiu qualquer actividade biológica. Em consequência constitui um aspecto adicional da presente invenção proporcionar um composto de formula (VII) para utilização como medicamento, por exemplo como agente anti-protozoano, ou como medicamento para o tratamento de infecções provocadas por Pneumocystis Carinii,

Pode efectuar-se a síntese de compostos das formulas (I) a (VII) por processos já conhecidos e descritos na literatura química (por exemplo nos pedidos de patente anteriormente referidos) ou por preocessos análogos. Em particular é possível preparar os novos compostos de fórmula (VI) utilizando os processos seguintes que constituem um aspecto adicional da presente invenção:

(a) reacção de um composto de fórmula (V) ou (VII) com um composto que sirva para introduzir o necessário grupo R¹³, e quando apropriado os grupos R¹¹ e R¹², (b) reacção de um composto de fórmula (VIII)

(VIII) em que R13 possui as significações anteriormente definidas, com um composto doador que sirva para introduzir o grupo 4-(4cloro-fenil)ciclo-hexilo.

Tomando como referencia o processo (a) é possível preparar os compostos (VI) em que R¹¹ e R¹³representam =0 e R¹³ representa um grupo OCOR⁵ por esterificação do composto (V) . Pode efectuar-se a esterificação por um processo convencional utilizando um ácido R⁵COOH apropriado ou derivado do ácido, por exemple um anidrido do ácido, cloreto do ácido ou um éster activado tal como um haloformato de alquilo, por exemplo um cloroformato de alquilo. Para se preparar um composto de fórmula (VI) em que R¹¹, r12 _{e r}13 representam individualmente um grupo -OCOR⁴, efectua-se a esterificação na presença de um agente reduto, por exemplo zinco.

Ê possível preparar os compostos de fórmula (VI) em que R¹³ representa um grupo OR⁶ ou SR⁶ a partir de um composto (VII) em que X representa um átomo de halogéneo. Assim, por exemplo, é possível introduzir o grupo OR⁶ por reacção com um álcool apropriado, por exemplo metanol ou etanol, na presença de sódio, e é possível introduzir um grupo SR⁶ por reacção com o correspondente tiol R⁸SH.

Ê possível preparar os compostos de fórmula (VI) em que R¹³ representa -NR⁷R⁸ fazendo a redução do composto correspondente em que R¹³ representa azido,

-13utilizando por exemplo hidreto de alumínio litio em tetrahidrofurano, seguindo-se quando necessário e/ou desejado a alquilação do grupo amino resultante. É possível preparar o composto de azido a partir de um composto de fórmula (VII) em que X representa hologéneo, por reacção com azida de sódio, por exemplo.

Ê possível preparar os compostos de fórmula (VII) utilizando por exemplo um processo análogo ao processo (b) a seguir descrito.

Tomando como referência o processo (b) um composto doador adequado e o correspondente ácido cicloalcano-carboxilico que pode sofrer descarboxilação oxidante. Por exemplo considera-se conveniente para esse objectivo a utilização de per-sulfato com um catalizador tal como os iões de prata (c.f. Jacobson, N., e outros, Annelen, 1972, 763. 135 e Acta Chem, Scand, 1973, 27., 3211). Convenientemente pode utilizar-se com agente oxidante o per-sulfato de amónio sendo o catalizador o nitrato de prata. No pedido de patente Europeu n° 123238 encontram-se descritos mais pormenores deste processo. É possível preparar um composto de fórmula (VIII), utilizando como material inicial, a partir do correspondente composto de 3-halo utilizando processos análogos ao processo (a) .

Daqui em diante as naftoquinonas activas centra P.carinii, incluindo os compostos mais particularmente descritos pelas formulas (I) e (VI) e os seus sais físiologicamente aceitáveis e outros derivados fisiológicamente funcionais, serão designadas simplesmente por naftoquinona. Faz-se observar que a quantidade de naftoquinona necessária para utilização no tratamento ou profilaxia de P.Carinii dependerá inter alia da actividade do composto particular, da vias de administração, da idade e peso do paciente e da gravidade do estado que se pretende tratar. Em geral, para administração a um ser humano para o tratamento de infecções provocadas por P.carinii pneumonia considera-se adequada uma dose compreendida entre 0,1 mg e 200 mg por

-14quilograma do peso do corpo por dia, por exemplo desde 1 mg/kg até 100 mg/kg, particularmente entre 10 e 50 mg/kg. Para administração inalação a dose pode situar-se convenientemente entre 0,1 e 200 mg/kg/dia, por exemplo desde 0,5 até 10 mg/kg/dia. Faz-se observar que para administração a recémnascidos pode ser necessário utilizar doses inferiores.

Para o tratamento profiláctico pode administrar-se também a naftoquinona menos frequentemente, por exemplo, como dose simples em dias alternados, uma ou duas vezes por semana ou uma ou duas vezes por mês. Para tratamento profiláctico a dosagem dependerá inter alia da actividade da naftoquinona, da frequência de administração e quando se utilizar uma preparação para implantação ou uma formulação de libertação controlada, dependerá também da velocidade de libertação do ingrediente activo. Deste modo, para uma administração semanal considera-se adequada uma dose profiláctica compreendida entre 0,05 e 100 mg/kg, por exemplo entre 0,05 e 50 mg/kg, particularmente entre 5 e 50 mg/kg.

As dosagens adequadas de um composto de fórmula (VI) para o tratamento ou profilaxia da malária nos seres humanos estão também compreendidas nos intervalos de variação anteriormente indicados para o tratamento e/ou profilaxia de P.Carinii pneumonia.

Para utilização de acordo com a presente invenção apresenta-se a naftoquinona preferencialmente com formulação farmacêutica.

As formulações farmacêuticas são constituídas pela naftoquinona ou por um seu sal físiologicamente aceitável ou outro derivado físiologicamente funcional, em conjunto com um ou vários veículos farmaceuticamente aceitáveis, e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos e/ou profilácticos. Dizer que o veiculo deve ser aceitável -15significa que deve ser compatível com os outros ingredientes da fórmula, e não deve ser nocivo para o paciente.

Pode apresentar-se convenientemente a naftoquinona como formulação farmacêutica numa forma de dosagem unitária. Uma formulação para dose unitária conveniente contém uma quantidade de naftoquinona compreendida entre 10 mg e 3 g, por exemplo entre 10 mg e 1 g.

As formulações farmacêuticas abrangem as que são adequadas para administração oral, tópica (incluindo dermal, bucal e sublingual) rectal ou parenteral (incluindo a subcutânea, intradermal, intramuscular e intravenosa), nasal e pulmonar, por exemplo por inalação. Quando apropriado pode apresentar-se a formulação convenientemente em unidades de dosagem discretas sendo possível efectuar a sua preparaçãc por quaisquer métodos bem conhecidos na especialidade farmacêutica. Todos esses métodos englobam o passo de associar a naftoquinona com veículos líquidos ou com veículos sólidos finamente divididos ou com ambos e depois, se necessário, dar forma ao produto de acordo com a formulação desejada.

As formulações farmacêuticas adequadas para administração oral em que o veículo é um sólido apresentam-se mais preferencialmente em formulações de dosagem unitária tais como pílulas grandes, cápsulas ou pastilhas, contendo individualmente uma quantidade predeterminada da naftoquinona. Pode preparar-se uma pastilha por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou vários ingredientes acessórios. As pastilhas comprimidas podem ser preparadas por compressão, numa máquina adequada, da naftoquinona numa forma que flua livremente tal. como o pó ou grânulos misturados opcionalmente com um ligante, lubrificante, diluente inerte, agente de lubrificação, agente tensio-activo ou agente dispersante. As pastilhas moldadas podem ser preparadas utilizando um diluente inerte. Opcionalmente as pastilhas podem ser revestidas e se não forem revestidas podem ser opcionalmente entalhadas. É

-16possível preparar cápsulas utilizando a naftoquinona, isolada ou misturada com um ou vários ingredientes acessórios, para encher os invólucros da cápsula e procedendo depois à sua vedação por um processo habitual. Os comprimidos são análogos às cápsulas, sendo a naftoquinona conjuntamente com qualquer ingrediente acessório vedados depois de envolvidos por papel de arroz. Também se pode formular o composto de naftoquinona na fórmula de grânulos dispersiveis os quais podem ser utilizados, por exemplo, para a preparação de uma suspensão em água antes da administração, ou polvilhados sobre os alimentos. Os grânulos podem ser embalados, por exemplo, em bolsinhas. As formulações adequadas para administração oral em que o veículo é um liquido podem ser apresentadas na forma de solução ou de suspensão num liquido aquoso ou num líquido não aquoso, ou como emulsão liquida do tipo óleo-em-água.

As formulações para administração oral englobam as formas de dosagem de libertação controlada, por exemplo pastilhas em que a naftoquinona é formulada numa matriz apropriada para controlar a libertação, ou é revestida corr. uma película adequada para controlar a libertação. Essas formulações podem ser particularmente convenientes para utilização profiláctica.

As formulações farmacêuticas adequadas para administração rectal em que o veículo é um sólido apresentamse mais preferencialmente como supositórios de dosagem unitária. Os veículos adequados englobam a manteiga de cacau e outros materiais vulgarmente utilizados na especialidade. Os supositórios podem ser formados convenientemente misturando a naftoquinona com o veiculo amolecido ou fundido, seguindo-se o arrefecimento e a formação em moldes.

As formulações farmacêuticas adequadas para a administração parenteral englobam as soluções ou suspensões esterilizadas de naftoquinona em veiculos aquosos ou oleaginosos. As preparações injectaveis podem ser adaptadas

-17para injecção por seringa ou por infusão continua. Essas preparações são apresentadas convenientemente em recipientes de dose unitária ou de dose múltipla, os quais são vedados após introdução da formulação, até ser necessária a sua utilização. Em alternativa a naftoquinona pode estar na forma de pó preparando-se a formulação com um veículo adequado tal como a água esterilizada livre de pirogénio, antes de utilização

A naftoquinona também pode ser formulada como preparação de aglomeração de longo período de acção, a qual pode ser administrada por injecção intramuscular ou por implantação, por exemplo subcutânea ou intramuscularmente. As preparações de aglomeração podem incorporar, por exemplo, materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados ou resinas de permuta iónica. Essas formulações de longo período de acção são particularmente convenientes para utilização profiláctica.

As formulações adequadas para administração pulmonar através da cavidade bucal são apresentadas de tal modo que as partículas que contêm a naftoquinona e que possuem desejavelmente um diâmetro compreendido entre 0,5 e 7 micra, são fornecidas ao interior das ramificações brônquicas do paciente. Essas formulações podem estar na forma pós finamente fragmentados que se podem apresentar convenientemente numa cápsula perfurável, por exemplo de gelatina, para utilização num dispositivo de inalação, ou numa formulação autopropulsora (referida também como formulação para aerosol) constituída pela naftoquinona, por um propulsor liquido ou gasoso adequado e opcionalmente por outros ingredientes tais como um agente tensio-activo e/ou um diluente sólido. Os propulsores líquidos adequados englobam o propano e os clorofluoro-carbonos, e os propulsores gasosos adequados englobam o dióxido de carbono. Os agentes tensio-activos adequados englobam o trioleato de sorbitano (o qual se encontra disponível, por exemplo, sob o nome comercial Arlacel 85), polisobrato 20 e ácido oleico. Também se pode utilizar formulações auto-propulsores quando o ingrediente activo é

-18fornecido sob a forma de gotículas de solução ou de suspensão.

A formulação auto-propulsora contém o ingrediente activo tipicamente numa proporção compreendida entre 0,05 e 20 mg/ml, por exemplo entre 0,1 e 5 mg/ml.

Essas formulações auto-propulsora são análogos às conhecidas na especialidade e podem ser preparadas de acordo com procedimentos normalizados. São adequadam.ente apresentadas num recipiente dotado com uma válvula de acção manual ou automática possuindo as desejadas caracteristicas de aspersão, vantajosamente a válvula é do tipo calibrador fornecendo um volume fixo, por exemplo, 25 a 100 microlitros de cada vez que é accionada.

Como possibilidade adicional a naftoquinona pode estar na forma de uma solução ou suspensão para utilização num atomizador ou nebulisador, pelo que se utiliza agitação ultrasonica ou uma corrente de ar acelerada para proporcionar uma névoa de gotículas finas para inalação. Essas soluções ou suspensões podem incorporar, para além da naftoquinona e dos solventes, ingredientes opcionais tais como agentes tensio-activos. Os agentes tensio-activos adequados englobam os anteriormente descritos para as formulações autopropulsoras. A solução ou suspensão contem naftoquinona tipicamente na proporção de 0,05 a 20 mg/ml, por exemplo 0,1 a 5 mg/ml. Quando se utilizar uma suspensão de naftoquinona, este composto encontra-se preferencialmente numa forma finamente dividida, por exemplo numa forma nicronizada.

As formulações adequadas para administração nasal são geralmente apresentadas com um aspecto idêntico ao anteriormente descrito para administração pulmonar. Ao serem utilizadas essas formulações deverão possuir desejavelmente partículas com diâmetros compreendidos no intervalo entre 10 e 200 micra para permitir a retenção na cavidade nasal; quando adequado, isto pode ser conseguido utilizando um pó constituído por partículas de dimensões adequadas ou

-19escolhendo uma válvula apropriada. Outras formulações adequadas são constituídas por pós grossos que possuem partículas com diâmetros compreendidos no intervalo entre 20 e 500 micra, para administração por inalação rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente mantido próximo do nariz, e por gotas nasais contendo entre 0,2 e 5% p/v de naftoquinona numa solução ou suspensão aquosa ou oleosa.

Deve subentender-se que para além dos ingredientes veiculares anteriormente referidos as formulações farmacêuticas para as diversas vias de administração descritas podem incorporar, quando apropriado, um ou vários ingredientes veiculares adicionais tais como diluentes, tampões, agentes aromatizantes, ligantes, agentes tensio-activos, espessantes, lubrificantes, conservantes (incluindo anti-oxidantes) e semelhantes, e ainda outras substâncias cujo objectivo é o de tornar a formulação isotónica com o sangue do paciente visado.

Nenhuma das referências anteriormente indicadas prevê a administração dos compostos de formula (II) por via nasal ou pulmonar ou possui qualquer sugestão de que esses compostos, se forem administrados por esse processo, serão eficazes para o tratamento dos estados ali referenciados: idênticamente aquelas referências não contêm nenhuma descrição de qualquer formulação adequada para administração por via nasal ou pulmonar.

compostos de via nasal constituindo

Admite-se que fórmula (II) dos ou pulmonar por isso um adaptadas para administraçao por representem novas formulações aspecto adicional da presente invenção.

Também é de fórmula utilização constituindo possível formular os novos compostos processo anteriormente no tratamento e/ou profilaxia essas formulações outro aspecto (VI) pelo descrito para da malária, adicional da presente invenção.

-20As naftoquinonas anteriores também podem ser utilizadas de acordo com a presente invenção em combinação ou em concorrência com outros agentes terapêuticos, por exemplo, agentes utilizados no tratamento de paciente imunoafectados, incluindo agentes anti-cancro tais como os interferões, por exemplo os interferões alfa; agentes anti-virais tais como a azidotimidina (AZT, zidovudina), imuno-estimuladores e imunomoduladores. Também se pode administrar a naftoquinona em combinação com um composto de 4-piridinol, conforme descrito no pedido de patente Europeu n° 123239, por exemplo, 3,5dicloro-2,6-dimetil-piridinol (meticlorpindol).

Os exemplos seguintes não limitativos ilustram inter alia os aspectos seguintes da presente invenção:

a utilização de naftoquinonas no tratamento e profilaxia de infecções provocadas por P.Carinii,· infecções provocadas por P. Carinii ,· novas formulações farmacêuticas;

novos compostos de fórmula (VI).

EXEMPLO 1 - Preparação do composto (V)

2-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3-hidroxi-l. 4naftoquinona

a) Ácido 4-(4-cloro-fenil)ciclo-hexano-l-carboxilico

Agitou-se conjuntamente cloreto de acetilo (30

g) e cloreto de alumínio (60 g) finamente pulverizado, em disulfeto de carbono (120 ml) e depois arrefeceu-se para -50°C num banho de C02/oxitol. Durante 10 minutos adicionou-se ciclo-hexeno (30 g) previamente arrefecido para -50°C, enquanto se mantinha a temperatura da mistura da reacção inferior a -20°C. Agitou-se a mistura a -50°C durante mais 60 minutos e depois decantou-se o solvente para proporcionar um complexo gumoso cor de laranja. Adicionou-se um pouco de cloro-benzeno e aqueceu-se o material à temperatura ambiente; adicionou-se o resto do cloro-benzeno (total de 300 ml), aqueceu-se a solução assim obtida a 40 °C durante 3 horas com agitação, verteu-se numa mistura de gelo e de ácido clorídrico concentrado e separou-se a camada orgânica, lavou-se com ácido clorídrico 2M, com hidroxido de sódio 2M e com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se até à secura. Destilou-se o produto in vacuo recolheu-se a fracção cujo ponto de ebulição está compreendido entre 140-154°C (0,1 mm Hg) , diluiu-se com igual volume de éter do petróleo (40-60), arrefeceu-se para -6°C e fez-se borbulhar uma corrente contínua de azoto, e depois recuperou-se o sólido incolor separado.

Adicionou-se bromo (2,8 ml) a uma solução de hidróxido de sódio (6,2 g) em água (42 ml) a 0°C. Dissolveu-se a hexa-hidro-acetofenona (3,1 g) anteriormente obtida em dioxano (15 ml) e depois adicionou-se uma solução de hipobrometo frio, mantendo-se a mistura de reacção a uma temperatura inferior a 20°C. Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 6 horas e depois deixou-se em repouso durante a noite. Adicionou-se meta-bi-sulfito de sódio para destruir o excesso de hipobromito, arrefeceu-se a mistura e depois acidificou-se para proporcionar um sólido incolor. Filtrou-se o sólido, lavou-se com água, secou-se e recristalizou-se a partir de etanol para proporcionar o ácido 4-(4-cloro-fenil)ciclo-hexano-l-carboxilico, p.f. 254-256°C.

b) 2-[4-(4-cloro-fenil)ciclo-hexill-3-cloro-1,4-naftoquinona

Com vigorosa agitação aqueceu-se ao refluxo uma mistura de 2-cloro-l,4-naftoquinona (3,95 g; 0,02 mol) de ácido 4-(4-cloro-fenil)ciclo-hexano-l-carboxilico (4,9 g ; 0,02 mol) e de nitrato de prata em pó (1,05 g: 0,0062 mol), em 40 ml de acetonitrilo. Durante 1 hora adicionou-se gota a gota uma solução de per-sulfato de amónio (12,0 g; 0,0525 mol) em

-22’ί í*‘ ml de água. Levou-se depois arrefeceu-se com filtrou e extraiu-se o clorofórmio em ebulição

Removeu-se o a mistura ao refluxo durante 3 horas e gelo durante 30 minutos, após o que se sólido viscoso residual duas vezes com para se remover o material inorgânico, clorofórmio por evaporação para proporcionar um sólido amarelo-acastanhado (cerca de 2,7 g). Dissolveu-se este sólido em um ml de acetonitrilo em ebulição; removeu-se por pouco de material insolúvel. Ao composto em epígrafe na forma de mg), p.f. 172-175°C.

8.05 (2H,

s.,PhH), arrefecer separou-se amarelos (550

RMN,δΗ(dg-DMSO) 8.05 (2H, mult.,β-naft), 7.85(2H, naft) , 7.30 (4H, s.,PhH), 3.30 (1H, t.lr., CH),2.67 lr., CH) 1.2-2.4 (8H, mult., 4xCH₂).

cristais mult., a(1H, t.

c) 2-[4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3-hidroxi-1.4-naftoquinona

Com o produto do passo (b) preparou-se uma l ml de metanol em ebulição e adicionou-se gota minutos, 0,55 g de hidróxido de potássio em Levou-se a mistura ao refluxo até se formar suspensão em 10 a gota, durante

5,5 ml de água.

uma solução vermelho escuro (após aproximadamente 6 horas) e depois adicionou-se cuidadosamente, gota a gota, 2 ml de ácido clorídrico concentrado. Arrefeceu-se lavou-se muito bem o resíduo sólido lavagem com água foram acidificados filtração. A dos resíduos

EXEMPLO 2 a mistura e filtrou-se e com água.

novamente fez-se a

Os produtos de e procedeu-se à recristalização 200-209°C, para partir de acetonitrilo sólidos combinados (500 produto em epígrafe na forma de isómero trans

216-219°C.

2-metoxi-3-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-1,4naftoquinona

Dissolveu-se sódio (0,3 g: 0,013 mol) em 20 ml de metanol e adicionou-se o composto do Exemplo 1 (b) (1,5 g: 0,004 mol). Aqueceu-se a mistura ao refluxo durante 4 horas e depois evaporou-se sob pressão reduzida. O sólido vermelho

-23escuro remanescente

Lavou-se a camada foi repartido entre água e clorofórmio, de clorofórmio com hidróxido de sódio diluído e arrefecido de depois amarelo secou-se e (900 mg). acetonitrilo para p.f.117-120°C, o qual com gelo, seguindo-se a adição evaporou-se para proporcionar

Este produto recristalizou a proporcionar o produto impuro recristalizou a partir de etanol para um água e sólido sr-g.

j proporcionar o composto em epígrafe (600 mg), p.f.120-122°C.

RMN,δΗ(dg-DMSO) 8.0 (2H, mult.,β-naft), 7.85(2H, mult., anaft), 7.35 (4H, s.,PhH), 4.0 (3H, s, OMe),3.1 (1H, t.lr.,

CH), 2.6 (1H, t.lr., CH), 1.5-2.2 (8H, m, 4xCH₂)·

EXEMPLO 3

2-amino-3-[trans-4- (cloro-fenil) ciclo-hexil]-l. 4-naf toquinona

a) 2-azido-3-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-l, 4- naftoquinona

Adicionou-se uma solução de azida de sódio (0,42 g; 0,006 mol) em 6 ml de água a uma suspensão do composto do Exemplo 1 (b) (1,1 g 0,003 mol) em 15 ml de etanol. Aqueceu-se a mistura ao refluxo com agitação e depois adicionou-se mais 15 ml de etanol e 6 ml de água. Manteve-se o aquecimento ao refluxo durante 4 horas seguindo-se o arrefecimento num frigorifico durante 1 hora. Fez-se a filtração dos cristais amarelos resultantes e lavou-se com água e com etanol para proporcionar o composto em epígrafe impuro (0,9 g) , p.f. 130-135°C. Utilizou-se este material no passo seguinte sem purificação adicional.

b) 2-amino-3-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-l 4- naftoquinona

Dissolveu-se o produto impuro do passo (a) (0,9

g) em tetra-hidrofurano seco (THF) e adicionou-se gota a gota a uma suspensão de hidreto de aluminio-litio (2,0 g) em THF. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora e depois adicionou-se cuidadosamente, gota a gota, 2,0 ml de

-24água. Fez-se uma corrente de ar através da mistura durante 1 hora e depois adicionou-se 0,7 g de hidroxido de sódio em 6 ml de água. Filtrou-se a mistura e lavou-se com THF. Evaporcu-se o filtrado até à secura proporcionando um material amorfo cor de laranja que se triturou com SVM tendo-se formado depois cristais cor de laranja. Filtrou-se este produto, lavou-se bem com SVM e secou-se bem para proporcionar uma primeira colheita de produto (200 mg) p.f. 210-215°C, repetiu-se a reacção para proporcionar mais uma colheita de produto (300 mg), p..f. 200210°C. Fez-se a combinação das duas colheitas e submeteu-se a cromatografia eluindo com clorofórmio para proporcionar o composto em epígrafe (350 mg), p.f. 212-215°C.

RMN,ÔH(dg-DMSO) 8.0 (2H, mult.,naft), 7.8 (2H, mult., naft), 7.35 (4H, q.,PhH), 6.7 (2H, s, NH₂) , 2.6-3.0 (2H, mult. , CH) , 1.5-2.4 (8H, mult.,CH₂).

EXEMPLO 4

Cloridrato_____de_____2-[trans-4- (cloro-fenil) ciclo-hexil]-3- (3dimetil-amino-propoxi)-1,4-naftoquinona

Dissolveu-se sódio (0,10 g; 4,5 mmol) em 3dimetil-amino-propan-l-ol (1,55 g; 5 eq.) e arrefeceu-se e depois adicionou-se o composto do exemplo 1 (b) (1,15 g; 3 mmol) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora após o que se adicionou ácido acético (1 ml) e diluiu-se a mistura com tolueno (30 ml) . Lavou-se a solução com água (4 x 20 ml), secou-se (MgSO,^) e evaporou-se in vácuo para proporcionar um semi-sólido cor de purpura. Extraiu-se com acetona e adicionou-se uma mistura de éter dietilico e de ácido clorídrico até à solução de cor de purpura ficar cor de laranja. Evaporou-se a solução in vacuo até à secura e lavouse diversas vezes com tolueno para proporcionar um sólido amarelo/bege o qual recristalizou a partir de etanol/tolueno (1:99) para proporcionar o composto em epígrafe na forma de um sólido cristalino amarelo/esverdeado (0,92 g), p.f. 191-194°C.

-25RMN,δΗ (CDC1₃) 8.60 (2H, mult.,β-naft) , 7.74 (2H, mult.,anaft) , 7.25 (4H,mult.,PhH), 4.28 (2H, t, OCH₂), 3.48 (2H, t.,NCH₂), 2.95 (6H, s.,2xMe), 3.17 (1H, t. Ir. , CH) 2.6 7 (1H, t.lr.,CH), 2.54 (2H, mult.,CH₂) 1.4-2.3.(8H, mult.,4xCH₂).

EXEMPLO 5

2-acetoxi-3-[trans-4-(4-cloro-fenil)ciclo-hexil]-l, 4 naftoquinona

Colocou-se o composto do Exemplo 1 (c) (1,5 g; 0,004 mol) em suspensão em anidrido acético (3 ml) e adicionou-se algumas gotas de ácido sulfurico concentrado, com agitação vigorosa. Adicionou-se mais uma quantidade de anidrido acético (3 ml) agitou-se a mistura durante 30 minutos e depois verteu-se em 15 ml de água provocando uma reacção vigorosa. Arrefeceu-se com gelo a mistura resultante e filtrou-se para proporcionar cristais amarelo ténue que se lavaram com água e depois secou-se para proporcionar o produto impuro (1,6 g) p.f. 149-152°C. Este produto recristalizou a partir de 100 ml SVM para proporcionar o composto em epígrafe (1,3 g), p.f. 158-160°C.

RMN,ÔH (dg-DMSO) 8.1 (2H, m, β-naft) , 7.9 (2H, m, α-naft) , 7.35 (4H, s.,PhH), 3.1 (lH,t.lr., CH),2.6 (1H, t.lr., CH), 2.5 (3H, s, COMe), 1.5-2.0 (8H, m, CH₂).

EXEMPLO 6

2-etoxi-carboniloxi-3-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-1,4naftoquinona

Agitou-se o composto do Exemplo 1 (c) (1,1 g: 0,003 mol) e piridina (0,24 g; 0,003 mol) em 5 ml de tolueno e arrefeceu-se em banho de água enquanto se adicionava gota a gota 4 ml de cloroformato de etilo durante um período de 15 minutos. Agitou-se a mistura durante mais 30 minutos e depois verteu-se numa mistura de acetato de etilo e de água. Separouse a camada orgânica, secou-se e evaporou-se para proporcionar um sólido amarelo que recristalizou a partir de clorofórmio/gasolina para proporcionar o produto impuro (850

-26mg), p.f. 145-149°C. Dissolveu-se este material em clorofórmio, lavou-se diversas vezes com hidróxido de sódio 0,1 N arrefecido com gelo e depois lavou-se com água. Seccu-se a camada orgânica e evaporou-se para proporcionar o prcduto (450 mg), p.f. 147-149°C. Repetiu-se a reacção à mesma escala, combinou-se o produto com o material anteriormente referido e depois recristalizou-se a partir de cloroformio/gasolina para proporcionar o composto em epígrafe (1,3 g), p.f. 153-155°C. RMN,ôH (dg-DMSO) 8.1 (2H, m, β-naft), 7.9 (2H, m, α-naft), 7.4 (4H, s.,PhH), 4.3 (2H, q. , OCH₂) , 3.1 (1H, t.lr., CH) , 2.6 (1H,

t. lr.,CH), 1.5-2.0 (8H, m, CH₂), 1.4 (3H, t, Me).

EXEMPLO 7

-2-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3- (4-dimetil-aminobenzoiloxi)-1,4-naftoquinona

Agitou-se à temperatura ambiente o composto 1 (c) (2,0 g; 5,4 mmol) em tolueno seco (50 ml) contendo piridina seca (0,44 g; 1 eq) . Durante 15 minutos adicionou-se gota a gota cloreto de 4-dimetil-amino-benzoilo (1 g; 1 eq) em tolueno seco (25 ml) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora, aqueceu-se ao refluxo durante 10 horas, deixou-se em repouso durante 38 horas e depois levou-se ao refluxo durante mais 7 horas. A seguir arrefeceu-se a mistura, lavou-se com água, com uma solução de bicarbonato de sódio e novamente com água, secou-se (MGSO4) e evaporou-se in vacuo para proporcionar um sólido amarelo que recristalizou a partir de etanol para proporcionar o composto em epígrafe (1,25 g), p.f. 117-121°C (amolece acima de 113°C).

RMN,ÔH (CDCI3) 8.1, 6.75 (4H, mult., β-naft + a-Me₂N-Ph) , 7.72 (2H, mult.,a- naft), 7.18 (4H,mult.,PhH) , 6.72 (2H, ά,β-Μθ₂ΝPh) 3.18 (1H, t. Ir, CH₂) , 3.14 (6H, s.,2xMe), 2.52 (1H,

t.lr.,CH),1.4-2.2 (8H, mult.,4xCH₂).

EXEMPLO 8

-27-2-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-l, 3,4-triacetoxinaftaleno

Durante 24 horas agitou-se à temperatura ambiente o composto do exemplo 1 (c) (1,0 g) e zinco em pó (1,0) em anidrido acético (6 ml) com uma gota TEA. Filtrou-se a mistura de reacção e adicionou-se a água (50 ml) e agitou-se durante 1 hora. Filtrou-se o precipitado resultante lavou-se com água (4 x 20 ml) e secou-se para proporcionar o composto em epígrafe (0,4 g), p.f. 177-179°C.

RMN,ÔH (dg-DMSO) 7.87 (2H, mult. , β-naf t) , 7.63 (2H, mult.,anaft), 7.35 (4H, s., Ph. H), 2.95 (1H, t. Ir, CH), 2.64 (1H, t.lr., CH) 2.62 (3H, s.,OAc), 2.49 (3H, s.,0Ac) 1.4-2.3 (8H, mult., 4xCH2).

EXEMPLO 9

Os exemplos seguintes ilustram formulações farmacêuticas convencionais que é possível utilizar de acordo com a presente invenção:

A. Solução injectável

Ê possível preparar uma solução para injecção intramuscular misturando:

Composto do exemplo 1	9,5 partes em peso
Dimetil-sulfóxido	19,0 partes em peso
Mono-oleato de sorbitano	4,5 partes em peso
Óleo de milho	67.0 partes em peso
	100,0

B Solução injectável

Composto do exemplo 1	5,0	partes	em	peso
N-Metil-pirrolidona	48,3	partes	em	peso
Tween 80	2,0	partes	em	peso
Span 80	4,7	partes	em	peso
Miglyol 812	40,0	partes	em	peso

-28100, ο

C. Pastilha

Composto do Exemplo 1	25,0 mg
Lactose BP	48,5 mg
Celulose microcistalina BP	10,0 mg
(Avicel PH 101)
Hidroxi-propilo substituído	10,0 mg
Celulose BP (LHPC LH-11)
Glicolato de amido de sódio BP	3,0 mg
(Explotab)
Povidona BP (K30)	3,0 mg
Estearato de magnésio BP	0,5 ma

100,0 mg

D. Suspensão oral

Composto do exemplo 1	50 mg
Avicel RC 591	75 mg
Xarope de sacarose	3.5 mg
Hidroxibenzoato de metilo	5 mg
Corante	0,01% w/v
Sabor de cereja	0,01% v/v
Tween 80	0,2% v/v
Água	até 5 ml

E. Suspensão injectável

Composto do exemplo 1 Polivinil-pirrolidona (PVP) Tweeeen 80

Hidroxibenzoato de metilo

Água para injecções

0 mg

0,2 % v/v

0,1 % w/v até 3 ml

F. Cápsula

Composto do exemplo 1

Amido 1500

Estearato de magnésio

0 mg

150 mg

2,5 mg

Colocado numa cápsula de gelatina dura

EXEMPLO 10

Os exemplos seguintes ilustram novas formulações farmacêuticas de acordo com a presente invenção.

A Suspensões para Nebulização

a) Composto do exemplo 1, esterilizado 1,0 mg

Água para injecções até 10,0 ml

Faz-se a dispersão da naftoquinona em água para injecções previamente esterilizada num recipiente esterilizado. Procedeu-se ao enchimento de ampolas de vidro esterilizadas, 10 ml/ampola sob condições acéticas e faz-se a vedação de cada ampola por fusão do vidro.

b) Preparou-se a suspensão seguinte:

Composto do exemplo 1, micronizado 1,0 g Polisorbato 20 0,1 % p/v

Água para injecções até 10 ml

Faz-se uma dispersão de Polisurbato 20 em água para injecções e adiciona-se o composto do Exemplo 1. Com esta suspensão procede-se ao enchimento de ampolas de vidro esterilizadas, de 10 ml/ampola sob condições acéticas, e procede-se à vedação das ampolas por fusão do vidro.

B. Formulações para aerosol

a) Composto do exemplo 1, micronizado 1,0 g propulsor para aerosol até 5,0 ml

Com a naftoquinona micronizada faz-se uma suspensão no propulsor para aerosol. Com esta suspensão procede-se ao enchimento de recipientes para aerosol, 5 ml por recipiente sob pressão, através do orifício da válvula.

b) Composto do exemplo 1, micronizado 1,0 mg

Arlacel 85 0,1 % p/v

Propulsor para aerosol até 5 ml

Dispersa-se o Arlacel 85 no propulsor para aerosol e depois adiciona-se o composto do Exemplo 1. Com a suspensão procede-se ao enchimento do recipiente para aerosol, 5 ml/recipiente sob pressão através do orifício da válvula.

C. Pó para inalação

Composto do Exemplo 1, micronizado 1,0 mg

Lactose 29,0 mg

Tritura-se e mistura-se a naftoquinona micronizada com a lactose. Com a mistura resultante procedese ao enchimento de invólucros de cápsulas de gelatina dura, 30 mg por cápsula.

D. Gotas nasais

Composto do exemplo 1 Hidroxibenzoato de metilo Água para injecções

100,0 mg

10,0 mg até 10,0 ml

Dispersa-se a naftoquinona e o hidroxibenzoato de metilo em água para injecções. Com esta suspensão procedese ao enchimento de frascos conta-gotas adequados, 10

-31ml/frasco, e fecha-se fixando a agulheta conta gotas e a cobertura do frasco.

RESULTADOS DO ENSAIO BIOLOGICO

EXEMPLO 11

Actividade contra Pneumocystis Carinii

Compostos ensaiados

A: 2-[trans-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3-hidroxi-l, 4naftoquinona

B: 2-[cis-4- (4-cloro-fenil) ciclo-hexil]-3-hidroxi-1,4naftoquinona

C: 2 -[4 - (4 - cloro - f enil) ciclo-hexil]-3-cloro-1,4 naftoquinona

D: 2-(4-t-butil-ciclo-hexil)- 3-hidroxi-1,4-naftoquinona

E: 2-(4-t-butil-ciclo-hexil-metil)-3-hidroxi-1,4naftoquinona

a) Profilaxia

Fez-se o tratamento de grupos de 10 ratazanas com dexametazona para permitir que a infecção latente por Pneumocystis carinii se desenvolve-se. Administrou-se também tetraciclina para protecção contra infecções bacterianas. Administrou-se o composto A de ensaio através de um tubo inserido no estômago, a partir do quarto dia após o tratamento com dexametazona, numa dose de 100 mg/kg/dia. Foram tratados dois grupos de ratazanas de controlo com dexametazona e com tetraciclina apenas. A outro grupo de ratazanas administrou-se cotrimoxazole (trimetoprim + sulfametoxazol, 50 + 250 mg/kg/dia, oralmente) em vez do composto de ensaio.

No fim do período de ensaio os animais foram sacrificados e procedeu-se â realização das autópsias. Fez-se a remoção dos pulmões e procedeu-se à bisseção do pulmão

-32direito. Fez-se uma preparação sobre diapositivos para microscópio e colorou-se com azul de toluidiana. Coloccu-se metade do pulmão em formalina, fez-se o processamento em blocos de parafina, seccionou-se e colorou-se pelo método de Gomori com metanamina/nitrato de prata.

Após a autópsia fez-se a avaliação da pneumonia originada por P.Carinii de acordo com um estudo codificado atribuindo-se os valores nenhum senão se observou qualquer organismo; 1 + se foram observados quistos de P.Carinii esparsamente distribuídos para uma amplificação de campo de 25% (h.p.f.); 2 + se as áreas focais de pneumonia originada por P,Carinii se encontravam envolvidas por 10 a 25 h.p.f. do pulmão normal e 3+ se o pulmão se encontrava difusa e extensivamente envolvido com organismos para todos os valores de h.p.f.

RESULTADOS

	N° de ratazanas	Mortes precoces ou canibalização	N°de ratazanas com pneumonia originada por P.Carinii	N° de ratazanas com PCP/N° de ratazanas testadas
Nenhuma	1 +	2 +	3 +
Composto ensaiado
A	10	2*	8	0	0	0	0/8
Controlo (1)	10	2	0	1	2	5	8/8
Controlo (2)	10	0	0	0	2	8	10/10
TMP/SMZ	10	0					0/10

* com a morte precose, eventualmente devido ao tubo de alimentação, uma canibalização.

B. Profilaxia

Efectuou-se outra série de ensaios utilizando o mesmo método geral anteriormente descrito. Administrou-se o -33composto A de ensaio em diversos níveis de dosagem, utilizando um tubo de alimentação e na dieta.

Os resultados estão indicados no Quadro 2

QUADRO 2

Extensão de P.Carinii (após a profilaxia:

histopatologia de secções pulmonares (coloração de Gomori-Grocott)

No.com p.carinii Pneumonitis

Grupo Dose por kg/dia g - alimentação por tubo r - rações	N° de ratazazanas testadas por grupo	N° .de ratazanas* avaliadas	Nenhuma	1 +	2 +	3 +	N° total
CONTROLO:nenhum fármaco	10	9	0	1	0	8	9/9
A: 200 mg (r)	10	9	9	0	0	0	0/9
A: 100 mg (r)	10	10	10	0	0	0	0/10
A: 100 mg (g)	10	9	8	1	0	0	1/9
A: 100 mg (g)	15	9	9	0	0	0	0/9
A: 50 mg (g)	10	9	7	0	1	1	2/9
A: 25 mg (g)	10	8	1	2	1	4	7/3
A: 10 mg (gG)	10	10	1	1	0	8	9/10
TMP/SMZ:50/250 mg (r)	10	10	10	0	0	0	0/10

* - Excluem-se as mortes acidentais (aplicação do tubo no estomago) e as ratazanas canibalizadas.

C. Tratamento

Fez-se o tratamento de grupos de 10 ratazanas com dexametazona e com tetraciclina durante 4-6 semanas,

-34conforme descrito na experiência (a) anterior. Estes grupos de ratazanas foram tratadas com o composto A de ensaio, com inicio decorridas 4 semanas de imuno-supressão, quando a Pneumocvstis carinii pneumonia (PCP) se tinha já desenvolvido. Outro grupo de ratazanas, num estudo paralelo, foi tratado com o composto A de ensaio decorridas 6 semanas de imunosupressão, quando a infecção de PCP se encontrava já num estado avançado. Os resultados estão indicados no Quadro 3.

QUADRO 3

Extensão de P.Carinii (após a profilaxia: histopatologia de secções pulmonares (coloração de Gomori-Grocott)

No.com p.carinii Pneumonitis

Grupo Dose por kg/dia	N° de ratazazanas testadas por grupo	N° .de ratazanas* avaliadas	Nenhuma	1 +	2 +	3 +	N° total
g - r -	alimentação por tubo rações
(a)	A: 100 mg (g) X3 wk	10	8	8	0	0	0	0/8
(a)	A: 5 0 mg (g) x3 wk	10	9	2	0	3	4	7/9
(a)	A: 25 mg (g) X3 wk	10	8	1	0	1	6	7/8
CONTROLO: nenhum fármaco*	10	10	0	1	3	6	10/10
CONTROLO: nenhum fármaco	10	9	0	1	0	8	9/9
TMP/SMZ: 50/250 mg (r) X3 wk	10	10	8	1	1	0	2/10
(b)	A: 10 0 mg X2 wk	5	5	4	1	0	0	1/5
CONTROLO: nenhum fármaco	5	5	0	1	3	1	5/5

-35* 5/10 ratazanas sacrificadas às 4 semanas de imuno-supressão, momento em que se inicia a terapia com os fármacos.

Durante toda a experiência com os animais manteve-se a administração de dexametazona e de tetraciclina.

a) O tratamento com o composto de ensaio começou após 4 semanas de administração de dexametazona.

b) 0 tratamento com o composto de ensaios começou após 6 semanas de administração de dexametazona.

S

D. Tratamento

Fez-se o tratamento de grupos de 15 ratazanas com dexametazona e com tetraciclina durante 4 semanas, conforme descrito na experiência (a) anterior. Administrou-se os compostos de ensaio (A) - (E) oralmente através do tubo inserido no estômago, a partir do inicio da 5^a semana e até ao fim da 7^a semana.

Em paralelo com o composto de ensaio administrou-se Celacol a um grupo de ratazanas de controlo. Os resultados encontram-se no Quadro 4.

QUADRO 4

Composto de ensaio	Grupo (dose/ kg/dia)	Classificação	No.infectado No.examinado	% de in- fectados
	0	1	2	3	4
A	Celacol	1	0	1	2	6	9/10	90
50mg/kg	1	3	3	5	0	11/12	92
75mg/kg	2	5	2	1	2	10/12	83
lOOmg/kg	4	7	1	1	0	9/13	69

A	Celacol	0	8	7	0	12/15	100
25mg/'kg	3	7	4	1	12/15	80
50mg/kg	1	6	4	2	12/13	92
lOOmg/kg	4	6	2	0	8/12	67

Celacol	0	8	7	0	0	15/15	100
25mg/'kg	1	8	5	1	0	14/15	93 .
50mg/'kg	3	6	4	0	2	12/15	80
lOOmg/kg	2	6	2	4	0	12/14	86

C	Celacol	0	8	7	0	15/15	100
25mg/kg	0	5	6	3	14/14	100
50mg/'kg	0	8	5	2	15/15	100
lOOmg/kg	4	6	4	1	11/15	73

D	Celacol	0	8	2	3	2	15/15	100
25mg/kg	0	7	7	1	0	15/15	100
50mg/kg	1	8	4	1	0	13/14	93
lOOmg/kg	3	8	3	0	1	12/15	80

E	Celacol	0	8	2	3	2	15/15	100
25mg/kg	1	3	2	4	4	13/14	93
50mg/kg	0	2	6	4	2	14/14	100
lOOmg/kg	1	4	2	6	0	12/13	92

EXEMPLO 12

Actividade anti-malária dos Compostos (VI)

Métodos de ensaio

Actividade contra Plasmodium Falciparum in vitro método de ensaio utilizado foi uma modificação do método descrito por Desjardins e outros, Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 1979, 16 710-718. Os compostos foram dissolvidos em etanol numa concentração de 4,8

-37χ 10³M e diluiu-se para valores de lxlO~⁴M. As soluções farmacológicas foram diluídas sequencialmente utilizando meio RPMI 1640 + 105 de plasma humano em placas de microtitulação. Adicionou-se glóbulos vermelhos parasitados e recentes, em conjunto com G-³ H-hipoxantina, em meio RPMI 1640 + 10% de plasma humano e fez-se a incubação das culturas durante 48 horas. Depois fez-se a colheita das culturas e recolheu-se o conteúdo de partículas ínfimas sobre papel de filtro de fibra de vidro e lavou-se abundantemente com água. Procedeu-se à secagem dos papeis de filtro e mediu-se a radioactividade utilizando um contador de centilação. As culturas não tratadas infectadas e as culturas não tratadas não infectadas incluídas como elementos de controlo. Os resultados encontram-se no Quadro 5.

Actividade contra Plasmodium voelii in vivo

Utilizou-se a naftoquinona para preparar uma suspensão em 0,25 (p/v) de celacol em água, triturando-se durante 16-24 horas a 26°C. Depois as suspensões foram diluídas sequencialmente com 0,25 % (p/v) de celacol em água.

No momento 0 injectou-se intravenosamente uma suspensão de 5 χ 10θ glóbulos vermelhos parasitados por p.voelii/ml de solução salina de fosfato, em nurganhos de 1520 g, através de uma veia da cauda. Grupos de 5 nurganhos por tratamento, foram doseados oralmente decorridas 6, 22, 30, 46, 54, 70 e 76 horas com 0,2 ml de suspensão farmacológica. O composto do Exemplo 4 foi também administrado intravenosamente. Fez-se a recolha dos resíduos sanguíneos da cauda decorridas 96 horas, colorou-se com Giemsa e determinouse a percentagem de glóbulos vermelhos infectados e fez-se a comparação com as células de controlo infectadas e não tratadas. Estabeleceu-se a correlação entre a percentagem de inibição e a dose para se obterem os valores ^50 resultados encontram-se no Quadro 5 seguinte.

-38QUADRO 5

Actividade anti-malária in vitro e in vivo

Composto do Exemplo No.	in vitro CI₅₀(uM)	in vivo
^DE50 oral	mg/kg i . v.
1C	0.002	0.03
2	0.36	5.8
33	1.14	1.26
4	0.059	0.61	2.08
		0.68
5	0.068	0.12
6	0.080	0.09
7	0.22	0.12

Lisboa, 6 de Julho de 1995

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para a preparação de um composto de fórmula geral (VI) na qual cada um dos símbolos R¹¹ e R¹² representa =0 e a linha a traço interrompido e representa uma ligação dupla entre aa posições 2 e 3 do anel da quinona, representando r.este caso o símbolo R¹³ um grupo de fórmula OCOR⁵ em que o símbolo R⁵ representa um grupo alquilo(Cq-Cqg)/ um grupo cicloalquilo(C3-C₁₀), um grupo alcoxi(Cq-Cqo) ^{ou um} grupo fenilo ou naftilo, sendo cada um desses grupos representados pelo símbolo R⁸ facultativamente substituído, por exemplo, por um grupo amino, mono- ou dialquíl(Cq-Cq)-amino, carboxi ou hidroxi;

um grupo de fórmula geral OR⁶ ou SR⁶' em que o símbolo R⁶representa um grupo facultativamente substituído alquilo (Cq-Cqg), um grupo cicloalquilo(C3-CqQ), ou um grupo fenilo ou naftilo tal como definido para o símbolo R⁵; ou um grupo de fórmula geral NR⁷R⁸, em que cada um dos símbolos R⁷ e R⁸ representa independentemente o átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (Cq-C^ , ou o grupo de formula geral NR⁷R⁸ representa um anel heterociclico saturado que possui entre 5 e 7 lados, o qual pode conter

-1facultativamente outro heteroátomo seleccionado entre os átomos de azoto, oxigénio ou enxofre;

ou a linha traço interrompido representa ligações duplas nas posições 1,2 e 3,4 do anel do quinol e cada um dos símbolos rH, R¹² θ r13 representa um grupo de fórmula geral -OCOR¹⁴, em que o símbolo R¹⁴ representa um grupo alquilo (C^l-Ciq) facultativamente substituído, caracterizado pelo facto de (a) se fazer reagir um composto de fórmula geral (V) (VII) λ

} em que o símbolo X representa um átomo de halogéneo, com um composto que serve para introduzir o necessário grupo representado pelo símbolo R^² _e, _se necessário ou desejado, os grupos representados pelos símbolos R¹¹ e R¹²; ou (b) se fazer reagir um composto de formula geral (VIII) com ο composto dador que serve para introduzir o grupo 4 (4-clorofenil)-ciclo-hexilo.
2. Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado pelo facto de se incorporar como ingrediente activo um composto de fórmula geral (VI) quando preparado de acordo com a reivindicação 1 em associação com um veículo adequado farmaceuticamente aceitável.