PL228024B1 - Zestaw wektorów ekspresyjnych - Google Patents
Zestaw wektorów ekspresyjnychInfo
- Publication number
- PL228024B1 PL228024B1 PL414704A PL41470415A PL228024B1 PL 228024 B1 PL228024 B1 PL 228024B1 PL 414704 A PL414704 A PL 414704A PL 41470415 A PL41470415 A PL 41470415A PL 228024 B1 PL228024 B1 PL 228024B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- sequence
- expression
- vectors
- protein
- recombinant protein
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca region promotorowy lub region linkerowy, zestaw wektorów ekspresyjnych oraz sposób produkcji białek rekombinowanych przy pomocy wektorów ekspresyjnych, pozwalający na łatwą optymalizację ekspresji białek rekombinowanych.
Opisano cząsteczki kwasu nukleinowego wykorzystywane w produkcji białek rekombinowanych, w szczególności zaś kodujące regiony promotorowe służące regulacji ekspresji białek rekombinowanych, region polilinkerowy wykorzystywany w klasycznym klonowaniu w wektorach plazmidowych, zawierający specyficzne sekwencje rozpoznawane przez enzymy restrykcyjne oraz regiony linkerowe wykorzystywane w modułowej syntezie wektorów ekspresyjnych. Niniejszy wynalazek ujawnia także wektory ekspresyjne, zawierające opisywane cząsteczki kwasu nukleinowego, komórki bakteryjne zawierające wspominane wektory ekspresyjne, sposób wytwarzania wektorów ekspresyjnych w oparciu o opisywane cząsteczki, sposób prowadzenia testów ekspresji z wykorzystaniem opisywanych wektorów, sposób oznaczania białka rekombinowanego wyprodukowanego przy pomocy opisywanych wektorów, w tym zwłaszcza przy pomocy znaczników fluorescencyjnych lub sposób uwalniania białka rekombinowanego wykorzystujący dowolny enzym rozpoznający ujawnioną sekwencję.
Stan techniki
W chwili obecnej białka rekombinowane znajdują szerokie zastosowanie w różnych dziedzinach nauki, przemysłu biotechnologicznego i farmacji. Wśród bardziej istotnych wymienić można badania podstawowe zmierzające do poznania struktury i właściwości białek oraz badania określające możliwe interakcje z cząsteczkami chemicznymi, co ma kluczowe znaczenie w procesie opracowywania nowych leków. Białka rekombinowane znajdują także zastosowanie, jako tzw. biofarmaceutyki, przykładem czego są hormony, interferony, interlueukiny lub czynniki hematopoetyczne (1). Mając na uwadze stale rosnący potencjał branży life-science należy spodziewać się coraz większego zapotrzebowania na preparaty białkowe o wysokiej jakości. Pomimo istnienia bardziej zaawansowanych technicznie metod, produkcja białek w skali laboratoryjnej zwykle przeprowadzana jest w systemie prokariotyc znym, zwłaszcza w Gram-ujemnych bakteriach Escherichia coli. System ten jest powszechnie uważany za najszybszy, najłatwiejszy i najbardziej korzystny pod względem ekonomicznym (2). Co za tym idzie produkcja białek rekombinowanych w tych bakteriach jest powszechnie stosowana na potrzeby wczesnych etapów analizy, niewymagających uwzględnienia profilu glikozylacji oraz na potrzeby produkcji w małej skali (3).
Bakterie E. coli charakteryzują się dynamicznym wzrostem, w odpowiednio dobranych warunkach podziały komórkowe następują co 20 minut. Oznacza to, że do osiągnięcia stacjonarnej fazy hodowli wystarcza czas rzędu kilku lub kilkunastu godzin. Szybka produkcja biomasy pozwala zdecydowanie skrócić czas produkcji białek rekombinowanych (4). Dodatkową zaletą E. coli jest szybka i wydajna procedura transformacji pozwalająca na wprowadzenie pożądanego konstruktu genetycznego do komórki bakteryjnej (5).
Zasadniczą wadą procesu produkcji białek rekombinowanych w E. coli jest jego chimeryczny charakter. Wydajność i jakość produkcji zależy od warunków hodowli, kontekstu genetycznego a przede wszystkim od charakteru produkowanego białka. Czynniki takie jak skład pożywek, temperatura, warunki napowietrzania, czas trwania kultury bakteryjnej lub warunki indukcji ekspresji białek mają istotne znaczenie w tym procesie. Z kolei wydajność i efektywność podyktowana czynnikami genetycznymi zależy od genotypu bakterii i właściwościami wektora ekspresyjnego. Obecnie na rynku dostępnych jest kilkanaście różnych szczepów bakterii E. coli, wśród tych dedykowanych produkcji białek rekombinowanych wymienić można szczepy DH10B, TOP10 lub BL21. Obok genotypu bakterii istotną rolę odgrywa dobór elementów genetycznych wykorzystanych w wektorze ekspresyjnym.
W przypadku E. coli transformacja genetyczna przeprowadzana jest za pomocą plazmidów, będących krótkimi, niezależnymi od głównego chromosomu bakteryjnego, cząsteczkami DNA zdolnymi do autonomicznej replikacji. W warunkach laboratoryjnych do produkcji białek rekombinowanych wykorzystywane są zmodyfikowane plazmidy zawierające miejsce inicjacji replikacji, gen odporności na wybrany antybiotyk, region promotorowy często zawierający także metki fuzyjne oraz miejsca rozpoznawane przez proteazy. Ze względów technicznych dodawany jest także polilinker zawierający miejsca rozpoznawane przez enzymy restrykcyjne, co ułatwia procedurę klonowania molekularnego.
Miejsca inicjacji replikacji są odpowiedzialne za utrzymanie odpowiedniej liczby kopii plazmidu w komórce bakteryjnej. Z jednej strony wysoka liczba kopii plazmidu sprzyja nadprodukcji białka
PL 228 024 B1 rekombinowanego, z drugiej strony może prowadzić do obciążenia metabolizmu komórki, co z kolei przekłada się negatywnie na wydajność produkcji. Dostępne na rynku plazmidy zawierają kilka typów miejsc inicjacji replikacji, jedno z nich pMBI obecne w powszechnie wykorzystywanej serii wektorów pET zapewnia od 15 do 60 kopii plazmidu w komórce (6). Zmodyfikowana wersja regionu pMBI obecna w wektorach serii pUC zwiększa liczbę kopii plazmidu do 500-700 na komórkę (7). Obok nich dostępne są miejsca inicjacji replikacji występujące w środowisku naturalnym jak ma to miejsce w wektorach pQE (Qiagen). Jeśli istnieje konieczność, by w komórce znajdowały się dwa plazmidy możliwe jest wykorzystanie miejsca p15A obecnego w wektorach pacy i pad zapewniając liczbę kopii 10-15 (8, 9).
Ze względu na konieczność przeprowadzenia selekcji w wektorach ekspresyjnych stosuje się moduły zapewniające oporność na antybiotyki. Najczęściej stosowane markery selekcyjne zapewni ając odporność na ampicylinę, chloramfenikol, kanamycynę i tetracykli nę najczęściej stosowane markery selekcyjne wykorzystywane w plazmidach ekspresyjnych.
W wektorach ekspresyjnych powszechnie wykorzystuje się dwa rodzaje promotorów, czyli sekwencji rozpoznawanych przez polimerazy RNA, enzymy konieczne do przeprowadzenia transkrypcji. Innymi słowy ich działanie ma kluczowe znaczenie w wydajnej ekspresji białka. Promotory konstytutywne warunkujące stałą ekspresję białka w komórkach bakteryjnych. W przeciwieństwie do nich promotory indukowalne będące drugą grupą są powszechnie używane w systemach do heterologicznej produkcji białek rekombinowanych. Ich cechą charakterystyczną jest niski poziom ekspresji w waru nkach braku indukcji oraz wysoki poziom ekspresji w obecności induktora. W ich przypadku konieczne jest dołączenie elementów zapewniających regulację ekspresji. Jest to szczególnie potrzebne, gdy produkowane białka mają toksyczny wpływ na komórki bakteryjne. Powszechnie stosowanym rozwiązaniem zapewniającym kontrolę ekspresji jest wykorzystanie elementów operonu laktozowego. Ekspresja danego białka znajdującego się pod kontrolą represora operonu laktozowego wymuszana jest przez dodatek induktora IPTG (lzopropylo-3-D-1-thiogalaktopyranozyd), cząsteczki chemicznej przypominającej laktozę.
Suboptymalne działanie promotora powoduje niską wydajność procesu produkcji białek, jednocześnie zbyt silne działanie może spowolnić metabolizm lub być przyczyną problemów z poprawnym fałdowaniem i rozpuszczalnością białka. Do promotorów obecnych w dostępnych komercyjnie należą indukowalne fagowe promotory T5 i T7 (10, 11), syntetyczny promotor Trc (12), bakteryjny promotor lac lub jego zmodyfikowana wersja lacUV5 (13, 14).
Obok składników regulatorowych ważne jest uwzględnienie elementów poprawiających rozpuszczalność produkowanych białek, ich późniejszą detekcję i oczyszczanie białka na drodze chrom atografii powinowactwa. Realizowane jest to poprzez dodatek metek fuzyjnych, czyli cząsteczek białka lub peptydów umiejscowionych na C lub N końcu białka rekombinowanego. Jednymi z najczęściej stosowanych metek fuzyjnych w celach oczyszczania są metka polihistydynowa oraz transferaza gl utationowa (ang. Glutathione S-transferase). Metka polihistydynowa pozwala na szybkie oczyszczenie białka metodą powinowactwa na złożu niklowym (15). Transferaza glutationowa będąca białkiem o długości 223 aminokwasów i masie cząsteczkowej 26 kDa jest wykorzystywana do oczyszczania białek na podstawie powinowactwa do glutationu (16). Inne stosowane metki fuzyjne to polipeptydy poliargininowe lub FLAG a także niewielkie białka jak białka wiążące maltozę, ang. maltose binding protein (17) dodatkowo zapobiegające pojawianiu się ciałek inkluzyjnych.
Podczas etapu oczyszczania metki fuzyjne mogą zostać odcięte przy wykorzystaniu proteaz (18), w takim przypadku cząsteczka metki fuzyjnej musi być oddzielona od docelowego białka przez krótką sekwencję aminokwasów rozpoznawanych przez proteazy takie jak TEV, trombina, czynnik Xa lub proteazę Clean-Cut.
Dodatkowo metody ekspresji rekombinowanego białka w E. coli, można podzielić na trzy rodzaje. Pierwszy z nich polega na produkcji rekombinowanego białka w postaci rozpuszczalnej w cytoplazmie komórek E. coli. Drugi polega na ekspresji białek w formie nierozpuszczalnej w postaci ciałek inkluzyjnych. Możliwa jest też produkcja białek do przestrzeni periplazmatycznej. Produkcja białka w przestrzeni periplazmatycznej wymaga uwzględniania odpowiedniej sekwencji sygnalnej.
Ponieważ ekspresja białka transformowanych E. coli zależy od wielu czynników konieczne jest ustalenie optymalnych warunków hodowli pozwalających na maksymalizację wydajności produkcji. Ze względu na swoją złożoność proces produkcji białek rekombinowanych powinien być poprzedzony testami ekspresji, mającymi na celu dobór takich warunków kultury bakteryjnej, by ekspresja białka była możliwie najwyższa. Zakładając, że w testach ekspresji brane są pod uwagę dwa różne czasy
PL 228 024 B1 hodowli, dwie różne temperatury, cztery media hodowlane i dwa różne stężenia induktora konieczne jest porównanie 32 warunków hodowli. O ile dobór takich warunków jest możliwy do przeprowadzenia o tyle optymalizacja kontekstu genetycznego jest procesem zdecydowanie bardziej skomplikowanym a przez to często zaniedbywanym. Standardowe testy ekspresji polegają na określeniu poziomu białka rekombinowanego we frakcji rozpuszczalnej i w frakcji nierozpuszczalnej za pomocą elektroforezy SDS-PAGE. Obecność białka może być także określona za pomocą przeciwciał rozpoznających metki fuzyjne jak western-blot lub za pomocą immunoenzymatycznego testu ELISA.
Dostępne systemy ekspresyjne dedykowane E. coli składają się zazwyczaj z wektora ekspresyjnego wraz z niezbędnymi elementami koniecznymi do przeprowadzenia klonowania molekularnego. W skład takich zestawów wchodzi często ligaza, bufor reakcyjny, odczynniki do przeprowadzenia kontroli pozytywnej, startery, bakterie kompetentne i pożywki do transformacji. Wśród produktów dostępnych na rynku wymienić można zestawy pozwalające na odczyt w trzech ramkach odczytu jak FLAG-Shift Expression Vectors (Sigma-Aldrich). Alternatywnie dostępne są zestawy pozwalające na otrzymanie rekombinowanej cząsteczki wektora ekspresyjnego w oparciu o system klonowania niezależny od ligazy (ang. ligase independent cloning). Przykładem takiego systemu jest aLICator Ligation Independent Cloning and Expression System oferowany przez Thermo Scientific. W literaturze fachowej dostępne są także liczne procedury umożliwiające otrzymanie rekombinowanej cząsteczki wektora ekspresyjnego bez konieczności użycia ligazy (19-23). Część z nich oferowana jest w postaci zestawów komercyjnych jak EZ Cloning (GenScript).
Celem wynalazku jest umożliwienie uzyskiwania w pojedynczej metodzie klonowania konstruktów genetyczne zapewniających zróżnicowane warunki genetyczne dla produkcji białek rekombinowanych, pozwalających dzięki temu na łatwą optymalizację warunków ekspresji. Nieoczekiwanie tak określony cel wynalazku został osiągnięty w niniejszym wynalazku.
Istota wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca region promotorowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr 1-3;
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca region linkerowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr 4-12, korzystnie region polilinkerowy posiadający sekwencję nr 4.
Przedmiotem wynalazku jest zestaw wektorów ekspresyjnych charakteryzujący się tym, że składa się z różnych wektorów ekspresyjnych, przy czym każdy z wektorów zawiera:
- połączone funkcjonalnie region promotorowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr od 1 do 3 oraz region linkerowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr 4 do 12,
- region inicjacji replikacji określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr od 13 do 15, przy czym wektory wchodzące w skład zestawu obejmują wszystkie kombinacje wspomnianych wariantów regionu promotorowego z wspomnianymi wariantami regionu inicjacji replikacji.
Korzystnie, wektor ekspresyjny zawiera ponadto sekwencję kwasu nukleinowego kodującą cząsteczkę reporterową, korzystnie białko zielonej fluorescencji lub białko różowej fluorescencji.
Korzystnie, wektor ekspresyjny jest cząsteczką liniową.
Korzystnie, wektor ekspresyjny koduje region odpowiadający aminokwasom WELQ rozpoznawanym przez proteazę Clean-Cut;
Korzystnie, poniżej sekwencji odpowiadającej aminokwasom WELQ znajduje się miejsce inicjacji transkrypcji.
Korzystnie, powyżej sekwencji WELQ znajduje się sekwencja odpowiadająca aminokwasom MIHHHHHH.
Korzystnie, zestaw według wynalazku zawiera wektory o sekwencjach nr od 16 do 24. Korzystnie, zestaw według wynalazku zawiera wektory o sekwencjach nr od 25 do 33.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób produkcji białek rekombinowanych charakteryzujący się tym, że komórki E.coli transformuje się zestawem wektorów ekspresyjnych według wynalazku zdefiniowanym powyżej, zawierających sekwencję kodującą białko rekombinowane, prowadzi się próbną hodowlę uzyskanych transformantów w ustalonych warunkach hodowli, określa się poziom ekspresji uzyskiwanej dla różnych transformantów, a następnie prowadzi się ostateczną hodowlę produkcyjną szczepu transformanta dającego najwyższy poziom ekspresji i izoluje się białko rekombinantowe z brzeczki hodowlanej.
PL 228 024 B1
Korzystnie, do uwalniania białka rekombinowanego wykorzystywana jest proteaza Clean-Cut.
Korzystnie, do procesu odcinania metki fuzyjnej i uwalniania N-końca białka rekombinowanego oraz/lub procesu dowolnego kształtowania N-końca białka rekombinowanego wykorzystywana jest proteaza Clean-Cut.
Szczegółowy opis wynalazku
W skład opisywanego systemu wchodzi szereg nowatorskich wektorów ekspresyjnych zawierających unikalne sekwencje nukleotydowe odpowiadające regionom promotorowym (sekwencje: 1-3), polilinker (sekwencja: 4), linkerom służącym do łączenia fragmentów modułów DNA (sekwencja: 5-12) oraz miejsca rozpoznawanym przez proteazę Clean-Cut odpowiadającą aminokwasom WELQ. Zgłaszane wektory dostępne w dwóch konformacjach, kolistej zawierającej polilinker oraz liniowej zakończonej 15 bp linkerami, w piśmiennictwie anglojęzycznym określanymi jako tzw. overhangs.
Plazmidy pBCM dostępne w formie kolistej przeznaczone są do klasycznego klonowania molekularnego wykorzystującego enzymy restrykcyjne i ligazę. W takim przypadku docelowy fragment DNA włączany jest do wektora pomiędzy miejsca restrykcyjne zawarte w polilinkerze. Formy liniowe nazywane inaczej otwartymi wektorami ekspresyjnymi dedykowane są do klonowania niezależnego od ligazy. W przeciwieństwie do form kolistych nie zawierają polilinkera, jego miejsce zajmowane jest przez docelowy fragment DNA zawierający 15 nukleotydowe regiony linkerowe odpowiadające końcom otwartego wektora. Moduły linkerowe zaprojektowano tak, by pozwalały na łączenie docelowego insertu z cząsteczką wektora na zasadzie, druga wersja dedykowana jest metodzie LIC (ang. ligation independent cloning) przeprowadzanej przy użyciu polimerazy DNA faga T4.
Na Figurze 1 przedstawiona została schematyczna reprezentacja polilinkera z zaznaczeniem miejsc restrykcyjnych wraz z pozycją miejsca rozpoznawanego przez proteazę Clean-Cut. Wektory zostały opracowane w wersji minimalistycznej. Oznacza to, że pomiędzy modułami niezbędnymi do poprawnego działania wektora i do klonowania nie zawiera dodatkowych sekwencji. Jedynym wyją tkiem są 15 nukleotydowe sekwencje linkerowe wykorzystane w syntezie wektorów. Moduły zawarte w wektorach to:
• Moduł odporności na antybiotyk pozwalający na selekcję transformantów. Występuje w dwóch wersjach zapewniających odporność na ampicylinę i kanamycynę.
• Moduł syntezy represora operonu laktozowego występujący w każdym wektorze.
• Moduł inicjacji replikacji występuje w trzech wersjach zapewniających liczbę kopii plazmidu na poziomie od 10 do 15, od 15 do 50 oraz 500 do 700 kopii plazmidu na komórkę.
• Moduł promotorowy występuje w trzech wersjach odpowiadających zmodyfikowanym promotorom BCMT5, BCMT7 i BCMTrc.
• Moduł polilinkerowy występuje tylko w wektorach przeznaczonych do klasycznego klonowania przy użyciu enzymów restrykcyjnych i ligazy.
Wektory dostępne są jako mieszanina zawierająca równo-molowe stosunki dziewięciu wektorów różniących się kombinacją miejsc inicjacji replikacji (3x) i regionów promotorowych (3x). Moduły o dpowiedzialne za zapewnienie odporności na antybiotyk i produkcję represora operonu laktozowego są obecne w każdej cząsteczce wektora. Dzięki temu w pojedynczej metodzie klonowania mogą powstać konstrukty genetyczne zapewniające zróżnicowane warunki genetyczne dla produkcji białek rekomb inowanych. Dzięki temu podczas procesu transformacji do komórki bakteryjnej mogą trafić plazmidy różniące się typem miejsca inicjacji replikacji i siłą promotora. Alternatywnie dostępna jest mieszanina modułów, która w trakcie procedury klonowania niezależnego od ligacji utworzy serię wektorów ekspresyjnych. W takim doświadczeniu kluczową role odgrywają regiony linkerowe odpowiedzialne za utworzenie kompletnej cząsteczki wektora. Wykorzystanie modułów określane jest mianem podejścia kombinatorycznego.
Dodatkowo wektory pBCM występują w wersjach zawierających transferazę glutationową (GST) lub białko zielonej fluorescencji (GFP) zawartą w module promotorowym. Elementy te usytuowane są powyżej docelowego białka i oddzielone miejscem rozpoznawanym przez proteazę Clean-Cut. Dzięki temu powstające białko rekombinowane będzie mogło zostać uwolnione przez proteazę Clean-Cut od znajdujących się na jego N końcu białka transferazy glutationowej lub białka zielonej fluorescencji.
W przypadku serii wektorów zawierających białko zielonej fluorescencji testy ekspresji będą przeprowadzone poprzez pomiar fluorescencji przy długości fali wzbudzenia i długości fali emisji właściwej dla białka GFP dla kultury bakterii E. coli. W systemie pBCM białka rekombinowane są produ6
PL 228 024 Β1 kowane z dołączonym białkiem zielonej fluorescencji, z tego względu poziom fluorescencji bezpośrednio odpowiada poziomowi białka rekombinowanego w kulturze.
W przypadku serii wektorów zawierających transferazę glutationową testy ekspresji powinny zostać przeprowadzone przy pomocy analizy elektroforegramów SDS-PAGE frakcji rozpuszczalnej lub nierozpuszczalnej otrzymanej dla kultury E. coli lub dalej poprzez analizę western-blot z przeciwciałami specyficznymi do transferazy glutationowej.
Ujawniono cząsteczki kwasu nukleinowego określone sekwencjami nr 1-3, odpowiadające regionom promotorowym.
Korzystnie, gdy ekspresja docelowego białka jest powiązana funkcjonalnie z regionami promotorowym i.
Korzystnie, gdy regiony promotorowe zapewniają stabilną lub przejściową ekspresję.
Ponadto ujawniona została cząsteczka kwasu nukleinowego określona sekwencją nr 4, odpowiadającą regionowi polilinkerowemu.
Korzystnie, gdy wykorzystywana jest w klonowaniu z użyciem enzymów restrykcyjnych i ligazy.
Szczególną realizację wynalazku stanowią cząsteczki kwasu nukleinowego określone sekwencjami nr 5-12, odpowiadające regionom linkerowym.
Korzystnie, gdy wykorzystywane są w klonowaniu z użyciem metod niezależnych od ligazy.
Korzystnie, gdy wykorzystywane są do syntezy cząsteczki wektora w podejściu kombinatorycznym.
Korzystnie, gdy zawierają miejsce rozpoznawane przez proteazę Clean-Cut.
Korzystnie, gdy sekwencja kodująca docelowe białko jest połączona funkcjonalnie.
Korzystnie, gdy w procedurze klonowania wykorzystywana jest polimeraza DNA faga T4.
Kolejną realizację wynalazku stanowi cząsteczka kwasu nukleinowego odpowiadająca aminokwasom WELQ rozpoznawanym przez proteazę Clean-Cut.
Korzystnie, gdy powyżej nukleotydów odpowiadającym aminokwasom WELQ znajduje się gen kodujący transferazę glutationową.
Korzystnie, gdy grupę białek lub peptydów znajdujących się powyżej stanowią te pozwalające na oczyszczanie produktu ekspresji na drodze chromatografii powinowactwa.
Korzystnie, gdy powyżej nukleotydów odpowiadającym aminokwasom WELQ znajduje się gen kodujący białko zielonej fluorescencji GFP.
Korzystnie, gdy grupę białek fluorescencyjnych stanowią także białka CFP, RFP lub YFP.
Korzystnie, gdy powyżej nukleotydów odpowiadającym aminokwasom WELQ znajduje się miejsce inicjacji transkrypcji.
Korzystnie, gdy pomiędzy miejscem inicjacji transkrypcji a nukleotydom odpowiadającym aminokwasom WELQ znajdują się nukleotydy kodujące izoleucynę.
Przykładowe wektory według wynalazku, przedstawione w załączonym wykazie sekwencji, zostały wymienione w tabeli poniżej.
| wektor | promotor | tag fuzyjny | liczba kopii | marker | nr sekw |
| pBCMIML | T5 | HIS | -500 | AMP | 16 |
| pBCM2ML | T7 | HIS | -500 | AMR | 17 |
| pBCM3ML | TRC | HIS | -500 | AMP | 18 |
| pBCM4ML | T5 | HIS | -20-30 | AMP | 19 |
| pBCMSML | T7 | HIS | -20-30 | AMP | 20 |
| pBCMBML | TRC | HIS | -20-30 | AMP | 21 |
| pBCM7ML | T5 | HIS | -10 | AMP | 22 |
| pBCMSML | T7 | HIS | -10 | AMP | 23 |
| pBCM9ML | TRC | HIS | -10 | AMP | 24 |
| pBCMIMLG | T5 | HIS/GST | -500 | AMP | 25 |
| pBCM2MLG | T7 | HIS/GST | -500 | AMP | 26 |
| pBCM3MLG | TRC | HIS/GST | -500 | AMP | 27 |
| PBCM4MLG | T5 | HIS/GST | -20-30 | AMP | 28 |
| pBCM5MLG | T7 | HIS/GST | -20-30 | AMP | 29 |
| PBCM6MLG | TRC | HIS/GST | -20-30 | AMP | 30 |
| pBCM7MLG | T5 | HIS/GST | -10 | AMP | 31 |
| pBCM3MLG | T7 | HIS/GST | -10 | AMP | 32 |
| pBCM9MLG | TRC | HIS/GST | -10 | AMP | 33 |
PL 228 024 B1
Kolejną realizację wynalazku stanowi komórka bakteryjna zawierająca wektor plazmidowy określony powyżej.
Kolejną realizację wynalazku stanowi sposób otrzymywania białka rekombinowanego w bakteriach E. coli charakteryzujący się tym, że do komórki bakterii - gospodarza, wprowadza się materiał genetyczny stanowiący wektor plazmidowy określony powyżej.
Kolejną realizację wynalazku stanowi zastosowanie cząsteczek kwasu nukleinowego określonych powyżej do konstrukcji wektora, który zapewnia produkcję białka rekombinowanego w komórce bakterii E. coli.
Korzystnie, gdy otrzymane białko rekombinowane będące białkiem fuzyjnym lub niefuzyjnym wykazuje zwiększoną wydajność produkcji.
Kolejną realizację wynalazku stanowi sposób określenia stężenia białka rekombinowanego obecnego w komórkach bakterii oparty na pomiarze fluorescencji.
Korzystnie, gdy do określenia wykorzystywane jest białko zielonej fluorescencji.
Kolejną realizację wynalazku stanowi sposób wyboru klonu bakterii E. coli zawierającej opisany powyżej wektor plazmidowy, do produkcji białek rekombinowanych oparty na wynikach pomiarów fluorescencji lub innych testach ekspresji.
Kolejną realizację wynalazku stanowi sposób uwalniania białka rekombinowanego przy pomocy proteazy Clean-Cut.
Korzystnie, gdy proteaza Clean-Cut jest wykorzystywana do dowolnego kształtowania N-końca białka rekombinowanego.
W celu lepszego wyjaśnienia istoty wynalazku został on również zilustrowany poniższymi przykładami, które nie powinny być jednak utożsamiane z pełnym zakresem wynalazku.
Przedstawione przykłady prezentują sposób produkcji ludzkiej dehydrogenazy alkoholowej (ADH1; M 12963.1) przy pomocy systemu wektorów ekspresyjnych pBCM. Dehydrogenaza alkoholowa jest białkiem wybranym dla przedstawienia działania wynalazku.
P r z y k ł a d I
Przygotowanie konstruktów ADH1:pBCM przy użyciu enzymów restrykcyjnych i ligazy
Do amplifikacji genu kodującego dehydrogenazę alkoholową (ADH1) metodą PCR użyto plazmidowego DNA zawierającego pożądaną sekwencję dostarczonego przez firmę GenScript. Startery zaprojektowano tak by pozwoliły na powielenie sekwencji genu oraz wprowadziły miejsca cięcia dla enzymów restrykcyjnych BamHI i XhoI:
• ADH1F: CTCGGATCCGATGCACTTGAGCAGG • ADH1R: GGGCTCGAGAAGAAGGAAGGTTTATTGGC
Przygotowano reakcję PCR o składzie 1x KOD Hot Start Master Mix (Merck Millipore), 6 pM mieszaniny starterów, 20 ng plazmidowego DNA. Reakcja przebiegała według następującego profilu termicznego: 95°C - 2 min.; 35x(95°C - 20 sek.; 62°C - 10 sek.; 70°C - 25 sek.). Produkty reakcji PCR rozdzielono w żelu agarozowym w celu weryfikacji poprawnego przebiegu reakcji. Po pozytywnej weryfikacji reakcję PCR oczyszczono na kolumnach ze złożem krzemionkowym DNA Sequencing Clean-up Kit (Zymo Research) zgodnie z procedurą producenta. Następnie produkty reakcji PCR poddano trawieniu restrykcyjnemu przy użyciu enzymów BamHI, XhoI i DpnI (New England Biolabs) w temperaturze 37°C przez 60 minut, bufory reakcyjne dobrano według instrukcji producenta. Po zakończonym trawieniu reakcje ponownie oczyszczono na kolumnach ze złożem krzemionkowym i poddano analizie w żelu agarozowym.
W międzyczasie mieszaninę wektorów pBCM poddano trawieniu wykorzystując do tego enzymy BamHI, XhoI i Hindlll (New England Biolabs) w temperaturze 37°C przez 60 minut, bufory reakcyjne dobrano według instrukcji producenta. Po zakończonym trawieniu reakcje ponownie oczyszczono na kolumnach ze złożem krzemionkowym i poddano analizie w żelu agarozowym. Reakcje ligacji przeprowadzono z wykorzystaniem mieszaniny insertu ADH1 i wektorów pBCM w stosunku molowym 3:1. Reakcja została przeprowadzona przy pomocy zestawu Quick Ligation (New Engalnd Biolabs) zgo dnie z instrukcją producenta. Mieszaninę ligacyjną wykorzystano do transformacji bakterii E. coli szczep BL21 (New England Biolabs) wykorzystując do tego metodę szoku cieplnego. Bakterie wysiano na podłoże agarowe, zawierające odpowiedni antybiotyk i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C.
Kolejnym krokiem była izolacja plazmidowego DNA z uzyskanych kolonii bakteryjnych namnożonych uprzednio w całonocnej hodowli. Izolacja została przeprowadzona przy pomocy zestawu Plasmid DNA purification (Zymo Research) zgodnie z protokołem producenta. Otrzymane plazmidy zostały poddane analizie w żelu agarozowym, stężenie DNA określono spektrofotometrycznie poprzez
PL 228 024 B1 pomiar absorbancji przy długości fali 260 i 280 nm. Następnie otrzymane klony zostały poddane s ekwencjonowaniu DNA z użyciem dideoksypochodnych nukleotydów.
P r z y k ł a d II
Przygotowanie konstruktów ADH1:pBCM przy pomocy metod niezależnych od ligazy
Do amplifikacji genu kodującego dehydrogenazę alkoholową (ADH1) metodą PCR użyto plazmidowego DNA zawierającego pożądaną sekwencję dostarczonego przez firmę GenScript. Startery zaprojektowano tak by pozwoliły na powielenie sekwencji genu oraz wprowadziły 15 nukleotydowe sekwencje linkerowe.
ADH1F: TGGGAACTGCAGATGGATGCACTTGAGCAGG
ADH1 R: TCGGGGAAATTTCCCAAGAAGGAAGGTTTATTGGC
Przygotowano reakcję PCR o składzie 1x KOD Hot Start Master Mix (Merck Millipore), 6 μM mieszaniny starterów, 20 ng plazmidowego DNA. Reakcja przebiegała według następującego profilu termicznego: 95°C - 2 min.; 35x(95°C - 20 sek.; 62°C - 10 sek.; 70°C - 25 sek.). Produkty reakcji PCR rozdzielono w żelu agarozowym w celu weryfikacji poprawnego przebiegu reakcji. Następnie produkty reakcji PCR poddano trawieniu restrykcyjnemu przy użyciu enzymów DpnI (New England Biolabs) w temperaturze 37°C przez 60 minut, enzym dodano bezpośrednio do mieszaniny reakcyjnej PCR.
Mieszaninę do transformacji metodą PIPE (20) przygotowano poprzez zmieszanie równych objętości mieszaniny reakcji PCR i roztworu otwartych wektorów ekspresyjnych pBCM, mieszaninę inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Następnie wykorzystano ją do transformacji bakterii E. coli szczep BL21 (New England Biolabs) wykorzystując do tego metodę szoku cieplnego. Bakterie wysiano na podłoże agarowe zawierające odpowiedni antybiotyk i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C.
Kolejnym krokiem była izolacja plazmidowego DNA z uzyskanych kolonii bakteryjnych namnożonych uprzednio w całonocnej hodowli. Izolacja została przeprowadzona przy pomocy zestawu Plasmid DNA purification (Zymo Research) zgodnie z protokołem producenta.
Otrzymane plazmidy zostały poddane analizie w żelu agarozowym, stężenie DNA określono spektrofotometrycznie poprzez pomiar absorbancji przy długości fali 260 i 280 nm. Następnie otrzymane klony zostały poddane sekwencjonowaniu z użyciem dideoksypochodnych nukleotydów.
P r z y k ł a d III
Testy ekspresji oparte na fluorescencji GFP
Przedmiotem testów ekspresji są kolonie bakterii E. coli otrzymane w wyniku klonowania z użyciem systemu pBCM. Analizie poddane są kolonie charakteryzujące się zieloną fluorescencją na podłożu hodowlanym LB zawierającym 1 mM IPTG. Podstawą testów ekspresji jest założenie, że białko rekombinowane i białko zielonej fluorescencji produkowane są jako białko fuzyjne, zatem poziom fluorescencji jest zależny od poziomu białka rekombinowanego. Dodatkowo poszczególne kolonie mogą różnić się pomiędzy sobą wektorami wymuszającymi ekspresję białek rekombinowanych. Dostępne są następujące warianty testów ekspresji:
1. Analizowane kolonie są zawieszane w 100 μl pożywki hodowlanej LB zawierającej odpowiedni antybiotyk i 1 mM IPTG w 96-dołkowej płytce titracyjnej. Następnie próbki są inkubowane w temperaturze 37°C z wytrząsaniem 200 rpm przez 1 godzinę. Po okresie inkubacji przeprowadzany jest pomiar gęstości optycznej przy długości fali 600 nm oraz pomiar fluorescencji przy długości fali właściwej dla białka zielonej fluorescencji. Wyniki pomiaru fluorescencji są normalizowane względem wartości gęstości optycznej. W międzyczasie przeprowadzane są testy PCR pozwalające zweryfikować, czy dane klony zawierają pożądany insert. Dalsze etapy produkcji białka rekombinowanego przeprowadzane są na próbie lub próbach dających najkorzystniejsze wyniki w znormalizowanym pomiarze fluorescencji.
2. Analizowane kolonie są zawieszane w 100 μl pożywki hodowlanej LB, zawierającej odpowiedni antybiotyk i analizowane pod kątem obecności pożądanego insertu przy pomocy metody PCR. Pozytywnie zweryfikowane kolonie są zawieszane w 2 ml podłoża hodowlanego i inkubowane w 12-dołkowej płytce titracyjnej w 37°C przy wytrząsaniu 200 rpm do osiągnięcia gęstości optycznej przy długości fali 600 nm rzędu 0,6-0,8. Po osiągnięciu tej wartości dodawany jest induktor IPTG w stężeniu ustalonym przez osobę przeprowadzającą doświadczenie (np. 1 mM IPTG). Odczyt fluorescencji i gęstości optycznej następuje po 6-12 godzinach po indukcji. Wyniki pomiaru fluorescencji
PL 228 024 B1 są normalizowane względem wartości gęstości optycznej. Dalsze etapy produkcji białka rekombinowanego przeprowadzane są na próbie lub próbach dających najkorzystniejsze wyniki w znormalizowanym pomiarze fluorescencji.
Literatura
1. S. Mitragotri, P. A. Burke, R. Langer, Overcoming the challenges in administering biopharmaceuticals: formulation and delivery strategies. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 655-672 (2014).
2. G. L. Rosano, E. A. Ceccarelli, Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges. Front. Microbiol. 5 (2014), doi:10.3389/fmicb.2014.00172.
3. S. Sahdev, S. K. Khattar, K. S. Saini, Production of active eukaryotic proteins through bacterial expression systems: a review of the existing biotechnology strategies. Mol. Cell. Biochem. 307, 249-264 (2008).
4. G. Sezonov, D. Joseleau-Petit, R. D'Ari, Escherichia coli Physiology in Luria-Bertani Broth. J. Bacteriol. 189, 8746-8749 (2007).
5. S. N. Cohen, A. C. Y. Chang, L. Hsu, Nonchromosomal Antibiotic Resistance in Bacteria: Genetic Transformation of Escherichia coli by R-Factor DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. 69, 2110— 2114 (1972).
6. F. Bolivar et al., Construction and characterization of new cloning vehicles. II. A multipurpose cloning system. Gene. 2, 95-113 (1977).
7. N. P. Minton, Improved plasmid vectors for the isolation of translational lac gene fusions. Gene. 31,269-273 (1984).
8. A. C. Chang, S. N. Cohen, Construction and characterization of amplifiable multicopy DNA cloning vehicles derived from the P15A cryptic miniplasmid. J. Bacteriol. 134, 1141 -1156 (1978).
9. L. M. Guzman, D. Belin, M. J. Carson, J. Beckwith, Tight regulation, modulation, and high-level expression by vectors containing the arabinose PBAD promoter. J. Bacteriol. 177, 4121-4130 (1995).
10. R. Gentz, H. Bujard, Promoters recognized by Escherichia coli RNA polymerase selected by function: highly efficient promoters from bacteriophage T5. J. Bacteriol. 164, 70-77 (1985).
11. F. W. Studier, B. A. Moffatt, Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes. J. Mol. Biol. 189, 113-130 (1986).
12. J. Brosius, M. Erfle, J. Storella, Spacing of the -10 and -35 regions in the tac promoter. Effect on its in vivo activity. J. Biol. Chem. 260, 3539-3541 (1985).
13. B. Gronenborn, Overproduction of phage Lambda repressor under control of the lac promotor of Escherichia coli. Mol Gen. Genet. MGG. 148, 243-250 (1976).
14. B. L. Wanner, R. Kodaira, F. C. Neidhardt, Physiological regulation of a decontrolled lac operon. J. Bacteriol. 130, 212-222 (1977).
15. K. Terpe, Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentalste commercial systems. Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533 (2003).
16. D. B. Smith, K. S. Johnson, Single-step purification of polypeptides expressed in Escherichia coli as fusions with glutathione S-transferase. Gene. 67, 31 -40 (1988).
17. R. B. Kapust, D. S. Waugh, Escherichia coli maltose-binding protein is uncommonly effective at promoting the solubility of polypeptides to which it is fused. Protein Sci. Publ. Protein Soc. 8, 1668-1674 (1999).
18. D. S. Waugh, An overview of enzymatic reagents for the removal of affinity tags. Protein Expr. Purif. 80, 283-293 (2011).
19. W. H. Eschenfeldt, L. Stols, C. S. Millard, A. Joachimiak, M. I. Donnelly, A Family of LIC Vectors for High-Throughput Cloning and Purification of Proteins. Methods Mol. Biol. Clifton NJ. 498, 105-115 (2009).
20. H. E. Klock, S. A. Lesley, in High Throughput Protein Expression and Purification, S. A. Doyle, Ed. (Humana Press, 2009; http://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-59745-196-3_6), Methods in Molecular Biology, pp. 91 -103.
PL 228 024 B1
21. A. Matsumoto, T. Q. Itoh, Self-assembly cloning: a rapid construction method for recombinant molecules from multiple fragments. Bio Techniques. 51, 55-56 (2011).
22. J. Quan, J. Tian, Circular Polymerase Extension Cloning of Complex Gene Libraries and Pathways. PLoS ONE. 4, e6441 (2009).
23. Y. Zhang, U. Werling, W. Edelmann, SLiCE: a novel bacterial cell extract-based DNA cloning method. Nucleic Acids Res. 40, e55-e55 (2012).
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt SEQUENCE LISTING <110> Selvita S.A.
<120> Zestaw wektorów ekspresyjnych <130> PK./3420/RW <160> 33 <17O> Patentin version 3.5 <2l0> 1 <211> 147 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> promotor BCMTS <400> 1
| ctggagatcc tgataaaatc | atgaaaaatt | tatttgcttt | gtgagcggat | aacaattata | 60 |
| atatgtggaa ttgtgagcgc | tcacaattcc | acataaggag | gtaaaaaaat | gatacatcat | 120 |
| catcatcatc attgggaact | gcagatg | 147 | |||
| <210> 2 <211> 120 <212> DNA <213> artificial | |||||
| <22O> <223> promotor BCMT7 | |||||
| <400> 2 ctggagatcc tgatataata | cgactcacta | taggggtgtg | gaattgtgag | cgctcacaat | 60 |
| tccacataag gaggtaaaaa | aatgatacat | catcatcatc | atcattggga | actgcagatg | 120 |
| <210> 3 <211> 143 <212> DNA <213> artificial | |||||
| <220> <223> promotor BCMTrc | |||||
| <400> 3 ctggagatcc tgataattct | gaaatgagct | gttgacaatt | aatcatccgg | ctcgtataat | 60 |
| gtggaattgt gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgata | catcatcatc | 120 |
| atcatcattg ggaactgcag | atg | 143 | |||
| <210> 4 <211> 163 <212> DNA <213> artificial | |||||
| <220> <223> Polilinker | |||||
| <400> 4 tgggaactgc agatgaattc | gagctcggat | ccaagatctt | ctagacatat | gatcgataag | 60 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt cttgatatcg gtaccaccat ggtcgacctc gagcccgggg ctagcataac cccttggggc 120 ctctaaacgg gtcttgaggg gttttttggg gaaatttccc ega 163
| <210> | 5 |
| <211> | 15 |
| <212> | DNA |
| <213> | arti fi ci al |
| <220> | |
| <223> | OKI OH |
| <400> | 5 |
| gggaaatttc cccga | |
| <210> | 6 |
| <211> | 15 |
| <212> | DNA |
| <213> | arti fi ci al |
| <220> | |
| <223> | Prom OH |
| <400> | 6 |
| ctggagatcc tgata | |
| <210> | 7 |
| <211> | 15 |
| <212> | DNA |
| <213> | arti fi ciał |
| <220> | |
| <223> | RES OH |
| <400> | 7 |
| tttgegatag gtaaa | |
| <210> | 8 |
| <211> | 15 |
| <212> | DNA |
| <213> | artifi ciał |
| <220> | |
| <223> | Res oh |
| <400> | 8 |
| tgggaactgc agatg | |
| <210> | 9 |
| <211> | 18 |
| <212> | DNA |
| <213> | arti fi ciał |
| <220> | |
| <223> | Expr OH LIC |
| <400> | 9 |
| aggaccaagc aageagat |
<210> 10 <211> 18
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt <212> DNA <213> artificial <22 0>
<223> Ori OH LIC <400> 10 ctgcttctct ggtgctta 18 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> Prom OH LIC <400> 11 ttgcttgtcc tgtgcgta 18 <210> 12 <211> 18 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> Res oh lic <400> 12 gaacggcaag agcacaat 18 <210> 13 <211> 819 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> puc ori <400> 13 gggaaatttc cccgactcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttacgcgc gcgtcgttcc 60 actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc 120 gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg 180 atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa 240 atactgttct tctagtgtag ccgtagttag cccaccactt caagaactct gtagcaccgc 300 ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt 360 gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa 420 cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc 480 tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc 540 cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct 600 ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat 660 gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 720 tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 780
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctc 819 <210> 14 <211> 620 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pMBl on’ <400> 14 agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa 60 aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc 120 cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt 180 agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac ataccrcgct ctgctaatcc 240 tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac 300 gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg getgaacggg gggttcgtgc acacagccca 360 gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg 420 ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag 480 gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt 540 ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat 600 ggaaaaacgc cagcaacgcg 620 <210> 15 <211> 837 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> pl5A ori <400> 15 ttaataagat gatcttcttg agatcgtttt ggtctgcgcg taatctcttg ctctgaaaac 60 gaaaaaaccg ccttgcaggg cggtttttcg aaggttctct gagctaccaa ctctttgaac 120 cgaggtaact ggcttggagg agcgcagtca ccaaaacttg tcctttcagt ttagccttaa 180 ccggcgcatg acttcaagac taactcctct aaatcaatta ccagtggctg ctgccagtgg 240 tgcttttgca tgtctttccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg 300 gtcggactga acggggggtt cgtgcataca gtccagcttg gagcgaactg cctacccgga 360 actgagtgtc aggcgtggaa tgagacaaac gcggccataa cagcggaatg acaccggtaa 420 accgaaaggc aggaacagga gagcgcacga gggagccgcc agggggaaac gcctggtatc 480 tttatagtcc tgtcgggttt cgccaccact gatttgagcg tcagatttcg tgatgcttgt 540 caggggggcg gagectatgg aaaaacggct ttgccgcggc cctctcactt ccctgttaag 600 tatcttcctg gcatcttcca ggaaatctcc gccccgttcg taagccattt ccgctcgccg 660 cagtcgaacg accgagcgta gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaatata tcctgtatca 720
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt eatattctgc tgacgcaccg gtgcagcctt ttttctcctg ccacatgaag cacttcactg 780 acaccctcat cagtgccaac atagtaagcc agtatacact ccgctagcgc tgaggtc 837 <21O> 15 <211> 3320 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> pBCMlML <400> 16
| ctggagatcc | tgataaaatc | atgaaaaatt | tatttgcttt | gtgagcggat | aacaattata | 60 |
| atatgtggaa | ttgtgagcgc | tcacaattcc | acataaggag | gtaaaaaaat | gtggaattgt | 120 |
| gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgata | catcatcatc | atcatcattg | 180 |
| ggaactgcag | atgaattcga | gctcggatcc | aagatcttct | agacatatga | tcgataagct | 240 |
| tgatatcggt | accaccatgg | tcgacctcga | gcccggggct | agcataaccc | cttggggcct | 300 |
| ctaaacgggt | cttgaggggt | tttttgggga | aatttccccg | agggaaattt | ccccgactca | 360 |
| tgaccaaaat | cccttaacgt | gagttacgcg | cgcgtcgttc | cactgagcgt | cagaccccgt | 420 |
| agaaaagatc | aaaggatctt | cttgagatcc | tttttttctg | cgcgtaatct | gctgcttgca | 480 |
| aacaaaaaaa | ccaccgctac | cagcggtggt | ttgtttgccg | gatcaagagc | taccaactct | 540 |
| ttttccgaag | gtaactggct | tcagcagagc | gcagatacca | aatactgttc | ttctagtgta | 600 |
| gccgtagtta | gcccaccact | tcaagaactc | tgtagcaccg | cctacatacc | tcgctctgct | 660 |
| aatcctgtta | ccagtggctg | ctgccagtgg | cgataagtcg | tgtcttaccg | ggttggactc | 720 |
| aagacgatag | ttaccggata | aggcgcagcg | gtcgggctga | acggggggtt | cgtgcacaca | 780 |
| gcccagcttg | gagcgaacga | cctacaccga | actgagatac | ctacagcgtg | agctatgaga | 840 |
| aagcgccacg | cttcccgaag | ggagaaaggc | ggacaggtat | ccggtaagcg | gcagggtcgg | 900 |
| aacaggagag | cgcacgaggg | agcttccagg | gggaaacgcc | tggtatcttt | atagtcctgt | 960 |
| cgggtttcgc | cacctctgac | ttgagcgtcg | atttttgtga | tgctcgtcag | gggggcggag | 1020 |
| cctatggaaa | aacgccagca | acgcggcctt | tttacggttc | ctggcctttt | gctggccttt | 1080 |
| tgctcacatg | ttctttcctg | cgttatcccc | tgattctgtg | gataaccgta | ttaccgcctt | 1140 |
| tgagtgagct | gataccgctc | tttgcgatag | gtaaaggcgc | gccatcgaat | ggcgcaaaac | 1200 |
| ctttcgcggt | atggcatgat | agcgcccgga | agagagtcaa | ttcagggtgg | tgaatggtgg | 1260 |
| tgaatgtgaa | accagtaacg | ttatacgatg | tcgcagagta | tgccggtgtc | tcttatcaga | 1320 |
| ccgtttcccg | cgtggtgaac | caggccagcc | acgtttctgc | gaaaacgcgg | gaaaaagtgg | 1380 |
| aagcggcgat | ggcggagctg | aattacattc | ccaaccgcgt | ggcacaacaa | ctggcgggca | 1440 |
| aacagtcgtt | gctgattggc | gttgccacct | ccagtctggc | cctgcacgcg | ccgtcgcaaa | 1500 |
| ttgtcgcggc | gattaaatct | cgcgccgatc | aactgggtgc | cagcgtggtg | gtgtcgatgg | 1560 |
| tagaacgaag | cggcgtcgaa | gcctgtaaag | cggcggtgca | caatcttctc | gcgcaacgcg | 1620 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tcagtgggct | gatcattaac | tatccgctgg | atgaccagga | tgccattgct | gtggaagctg | 1680 |
| cctgcactaa | tgttccggcg | ttatttcttg | atgtctctga | ccagacaccc | atcaacagta | 1740 |
| ttattttctc | ccatgaagac | ggtacgcgac | tgggcgtgga | gcatctggtc | gcattgggtc | 1800 |
| accagcaaat | cgcgctgtta | gcgggcccat | taagttctgt | ctcggcgcgt | ctgcgtctgg | 1860 |
| ctggctggca | taaatatctc | actcgcaatc | aaattcagcc | gatagcggaa | cgggaaggcg | 1920 |
| actggagtgc | catgtccggt | tttcaacaaa | ccatgcaaat | gctgaatgag | ggcatcgttc | 1980 |
| ccactgcgat | gctggttgcc | aacgatcaga | tggcgctggg | cgcaatgcgc | gccattaccg | 2040 |
| agtccgggct | gcgcgttggt | gcggatatct | cggtagtggg | atacgacgat | accgaagaca | 2100 |
| gctcatgtta | tatcccgccg | tcaaccacca | tcaaacagga | ttttcgcctg | ctggggcaaa | 2160 |
| ccagcgtgga | ccgcttgctg | caactctctc | agggccaggc | ggtgaagggc | aatcagctgt | 2220 |
| tgcccgtctc | actggtgaaa | agaaaaacca | ccctggcgcc | caatacgcaa | accgcctctc | 2280 |
| cccgcgcgtt | ggccgattca | ttaatgcagc | tggcacgaca | ggtttcccga | ctggaaagcg | 2340 |
| ggcagtgagc | gcaactttgc | gataggtaaa | tttttctaaa | tacattcaaa | tatgtatccg | 2400 |
| ctcatgagac | aataaccctg | ataaatgctt | caataatatt | gaaaaaggaa | gagtatgagt | 2460 |
| attcaacatt | tccgtgtcgc | ccttattccc | ttttttgcgg | cattttgcct | tcctgttttt | 2520 |
| gctcacccag | aaacgctggt | gaaagtaaaa | gatgctgaag | atcagttggg | tgcacgagtg | 2580 |
| ggttacatcg | aactggatct | caacagcggt | aagatccttg | agagttttcg | ccccgaagaa | 2640 |
| cgttttccaa | tgatgagcac | ttttaaagtt | ctgctatgtg | gcgcggtatt | atcccgtatt | 2700 |
| gacgccgggc | aagagcaact | cggrcgccgc | atacactatt | ctcagaatga | cttggttgag | 2760 |
| tactcaccag | tcacagaaaa | gcatcttacg | gatggcatga | cagtaagaga | attatgcagt | 2820 |
| gctgccataa | ccatgagtga | taacactgcg | gccaacttac | ttctgacaac | gatcggagga | 2880 |
| ccgaaggagc | taaccgcttt | tttgcacaac | atgggggatc | atgtaactcg | ccttgatcgt | 2940 |
| tgggaaccgg | agctgaatga | agccatacca | aacgacgagc | gtgacaccac | gatgcctgta | 3000 |
| gcaatggcaa | caacgttgcg | caaactatta | actggcgaac | tacttactct | agcttcccgg | 3060 |
| caacaattaa | tagactggat | ggaggcggat | aaagttgcag | gaccacttct | gcgctcggcc | 3120 |
| cttccggctg | gctggtttat | tgctgataaa | tctggagccg | gtgagcgtgg | gtctcgcggt | 3180 |
| atcattgcag | cactggggcc | agatggtaag | ccctcccgta | tcgtagttat | ctacacgacg | 3240 |
| gggagtcagg | caactatgga | tgaacgaaat | agacagatcg | ctgagatagg | tgcctcactg | 3300 |
| attaagcatt | ggtaactgtc | 3320 |
<2lO> 17 <211> 3293 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> PBCM2ML
PL 228 024 Β1
5EQLTXT.txt
| <400> 17 | ||||||
| ctggagatcc | tgatataata | cgactcacta | taggggtgtg | gaattgtgag | cgctcacaar | 60 |
| tccacataag | gaggtaaaaa | aatgtggaat | tgtgagcgct | cacaattcca | cataaggagg | 120 |
| taaaaaaatg | atacatcatc | atcatcatca | ttgggaactg | cagatgaatt | cgagctcgga | ISO |
| tccaagatct | tctagacata | tgatcgataa | gcttgatatc | ggtaccacca | tggtcgacct | 240 |
| cgagcccggg | gctagcataa | ccccttgggg | cctctaaacg | ggtcttgagg | ggttttttgg | 300 |
| ggaaatttcc | ccgagggaaa | tttccccgac | tcatgaccaa | aatcccttaa | cgtgagttac | 360 |
| gcgcgcgtcg | ttccactgag | cgtcagaccc | cgtagaaaag | atcaaaggat | cttcttgaga | 420 |
| tccttttttt | ctgcgcgtaa | tctgctgctt | gcaaacaaaa | aaaccaccgc | taccagcggt | 480 |
| ggtttgtttg | ccggatcaag | agctaccaac | tctttttccg | aaggtaactg | gcttcagcag | 540 |
| agcgcagata | ccaaatactg | ttcttctagt | gtagccgtag | ttagcccacc | acttcaagaa | 600 |
| ctctgtagca | ccgcctacat | acctcgctct | gctaatcctg | ttaccagtgg | ctgctgccag | 660 |
| tggcgataag | tcgtgtctta | ccgggttgga | ctcaagacga | tagttacegg | ataaggcgca | 720 |
| gcggtcgggc | tgaacggggg | gttcgtgcac | acagcccagc | ttggagcgaa | cgacctacac | 780 |
| cgaactgaga | tacctacagc | gtgagctatg | agaaagcgcc | acgcttcccg | aagggagaaa | 840 |
| ggcggacagg | tatccggtaa | gcggcagggt | cggaacagga | gagcgcacga | gggagcttcc | 900 |
| agggggaaac | gcctggtatc | tttatagtcc | tgtcgggttt | cgccacctct | gacttgagcg | 960 |
| tcgatttttg | tgatgctcgt | caggggggcg | gagcctatgg | aaaaacgcca | gcaacgcggc | 1020 |
| ctttttacgg | ttcctggcct | tttgctggcc | ttttgctcac | atgttctttc | ctgcgttatc | 1080 |
| ccctgattct | gtggataacc | gtattaccgc | ctttgagtga | gctgataccg | ctctttgcga | 1140 |
| taggtaaagg | cgcgccatcg | aatggcgcaa | aacctttcgc | ggtatggcat | gatagcgccc | 1200 |
| ggaagagagt | caattcaggg | tggtgaatgg | tggtgaatgt | gaaaccagta | acgttatacg | 1260 |
| atgtcgcaga | gtatgccggt | gtctcttatc | agaecgtttc | ccgcgtggtg | aaccaggcca | 1320 |
| gccacgtttc | tgcgaaaacg | cgggaaaaag | tggaagcggc | gatggcggag | ctgaattaca | 1380 |
| ttcccaaccg | cgtggcacaa | caactggcgg | gcaaacagtc | gttgctgatt | ggcgttgcca | 1440 |
| cctccagtct | ggccctgcac | gcgccgtcgc | aaattgtcgc | ggcgattaaa | tcrcgcgccg | 1500 |
| atcaactggg | tgccagcgtg | gtggtgtcga | tggtagaacg | aagcggcgtc | gaagcctgta | 1560 |
| aagcggcggt | gcacaatctt | ctcgcgcaac | gcgtcagtgg | gctgatcatr | aactatccgc | 1620 |
| tggatgacca | ggatgccatt | gctgtggaag | ctgcctgcac | taatgttccg | gcgttatttc | 1680 |
| ttgatgtctc | tgaccagaca | cccatcaaca | gtattatttt | ctcccatgaa | gacggtacgc | 1740 |
| gactgggcgt | ggagcatctg | gtcgcattgg | gtcaccagca | aatcgcgctg | ttagcgggcc | 1800 |
| cattaagttc | tgtctcggcg | cgtctgcgtc | tggctggctg | gcataaatat | ctcactcgca | 1860 |
| atcaaattca | gccgatagcg | gaacgggaag | gcgactggag | tgccatgtcc | ggttttcaac | 1920 |
| aaaccatgca | aatgctgaat | gagggcatcg | ttcccactgc | gatgctggtt | gccaacgatc | 1980 |
| agatggcgct | gggcgcaatg | cgcgccatta | ccgagtccgg | gctgcgcgtt | ggtgcggata | 2040 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tctcggtagt | gggatacgac | gataccgaag | acagctcatg | ttatatcccg | ccgtcaacca | 2100 |
| ccatcaaaca | ggattttcgc | ctgctggggc | aaaccagcgt | ggaccgcttg | ctgcaactct | 2160 |
| ctcagggcca | ggcggtgaag | ggcaatcagc | tgttgcccgt | ctcactggtg | aaaagaaaaa | 2220 |
| ccaccctggc | gcccaatacg | caaaccgcct | ctccccgcgc | gttggccgat | tcattaatgc | 2280 |
| agctggcacg | acaggtttcc | cgactggaaa | gcgggcagtg | agcgcaactt | tgcgataggt | 2340 |
| aaatttttct | aaatacattc | aaatatgtat | ccgctcatga | gacaataacc | ctgataaatg | 2400 |
| cttcaataat | attgaaaaag | gaagagtatg | agtattcaac | atttccgtgt | cgcccttatt | 2460 |
| cccttttttg | cggcattttg | ccttcctgtt | tttgctcacc | cagaaacgct | ggtgaaagta | 2520 |
| aaagatgctg | aagatcagtt | gggtgcacga | gtgggttaca | tcgaactgga | tctcaacagc | 2580 |
| ggtaagatcc | ttgagagttt | tcgccccgaa | gaacgttttc | caatgatgag | cacttttaaa | 2640 |
| gttctgctat | gtggcgcggt | attatcccgt | attgacgccg | ggcaagagca | actcggtcgc | 2700 |
| cgcatacact | attctcagaa | tgacttggtt | gagtactcac | cagtcacaga | aaagcatctt | 2760 |
| acggatggca | tgacagtaag | agaattatgc | agtgctgcca | taaccatgag | tgataacact | 2820 |
| gcggccaact | tacttctgac | aacgatcgga | ggaccgaagg | agctaaccgc | ttttttgcac | 2880 |
| aacatggggg | atcatgtaac | tcgccttgat | cgttgggaac | cggagctgaa | tgaagccata | 2940 |
| ccaaacgacg | agcgtgacac | cacgatgcct | gtagcaatgg | caacaacgtt | gcgcaaacta | 3000 |
| ttaactggcg | aactacttac | tctagcttcc | cggcaacaat | taatagactg | gatggaggcg | 3060 |
| gataaagttg | caggaccact | tctgcgctcg | gcccttccgg | ctggctggtt | tattgctgat | 3120 |
| aaatctggag | ccggtgagcg | tgggtctcgc | ggtatcattg | cagcactggg | gccagatggt | 3180 |
| aagccctccc | gtatcgtagt | tatctacacg | acggggagtc | aggcaactat | ggatgaacga | 3240 |
| aatagacaga | tcgctgagat | aggtgcctca | ctgattaagc | attggtaact | gtc | 3293 |
<210> 13 <211> 3316 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCM3ML <400> 18 ctggagatcc tgataattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat 60 gtggaattgt gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgtgg aattgtgagc 120 gctcacaatt ccacataagg aggtaaaaaa atgatacatc atcatcatca tcattgggaa 180 ctgcagatga attcgagctc ggatccaaga tcttctagac atatgatcga taagcttgat 240 atcggtacca ccatggtcga cctcgagccc ggggctagca taaccccttg gggcctctaa 300 acgggtcttg aggggttttt tggggaaatt tccccgaggg aaatttcccc gactcatgac 360 caaaatccct taacgtgagt tacgcgcgcg tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa 420 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca 480
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| aaaaaaccac | cgctaccagc | ggtggtttgt | ttgccggatc | aagagctacc | aactcttttt | 540 |
| ccgaaggtaa | ctggcttcag | cagagcgcag | ataccaaata | ctgttcttct | agtgtagccg | 600 |
| tagttagccc | accacttcaa | gaactctgta | gcaccgccta | catacctcgc | tctgctaatc | 660 |
| ctgttaccag | tggctgctgc | cagtggcgat | aagtcgtgtc | ttaccgggtt | ggactcaaga | 720 |
| cgatagttac | cggataaggc | gcagcggtcg | ggctgaacgg | ggggttcgtg | cacacagccc | 780 |
| agcttggagc | gaacgaccta | caccgaactg | agatacctac | agcgtgagct | atgagaaagc | 840 |
| gccacgcttc | ccgaagggag | aaaggcggac | aggtatccgg | taagcggcag | ggtcggaaca | 900 |
| ggagagcgca | cgagggagct | tccaggggga | aacgcctggt | atctttatag | tcctgtcggg | 960 |
| tttcgccacc | tctgacttga | gcgtcgattt | ttgtgatgct | cgtcaggggg | gcggagccta | 1020 |
| tggaaaaacg | ccagcaacgc | ggccttttta | cggttcctgg | ccttttgctg | gccttttgct | 1080 |
| cacatgttct | ttcctgcgtt | atcccctgat | tctgtggata | accgtattac | cgcctttgag | 1140 |
| tgagctgata | ccgctctttg | cgataggtaa | aggcgcgcca | tcgaatggcg | caaaaccttt | 1200 |
| cgcggtatgg | catgatagcg | cccggaagag | agtcaattca | gggtggtgaa | tggtggtgaa | 1260 |
| tgtgaaacca | gtaacgttat | acgatgtcgc | agagtatgcc | ggtgtctctt | atcagaccgt | 1320 |
| ttcccgcgtg | gtgaaccagg | ccagccacgt | ttctgcgaaa | acgcgggaaa | aagtggaagc | 1380 |
| ggcgatggcg | gagctgaatt | acattcccaa | ccgcgtggca | caacaactgg | cgggcaaaca | 1440 |
| gtcgttgctg | attggcgttg | ccacctccag | tctggccctg | cacgcgccgt | cgcaaattgt | 1500 |
| cgcggcgatt | aaatctcgcg | ccgatcaact | gggtgccagc | gtggtggtgt | cgatggtaga | 1560 |
| acgaagcggc | gtcgaagcct | gtaaagcggc | ggtgcacaat | cttctcgcgc | aacgcgtcag | 1620 |
| tgggctgatc | attaactatc | cgctggatga | ccaggatgcc | attgctgtgg | aagctgcctg | 1680 |
| cactaatgtt | ccggcgttat | ttcttgatgt | ctctgaccag | acacccatca | acagtattat | 1740 |
| tttctcccat | gaagacggta | cgcgactggg | cgtggagcat | ctggtcgcat | tgggtcacca | 1800 |
| gcaaatcgcg | ctgttagcgg | gcccattaag | ttctgtctcg | gcgcgrctgc | gtctggctgg | 1860 |
| ctggcataaa | tatctcactc | gcaatcaaat | tcagccgata | gcggaacggg | aaggcgactg | 1920 |
| gagtgccatg | tccggttttc | aacaaaccat | gcaaatgctg | aatgagggca | tcgttcccac | 1980 |
| tgcgatgctg | gttgccaacg | atcagatggc | gctgggcgca | atgcgcgcca | ttaccgagtc | 2040 |
| cgggctgcgc | gttggtgcgg | atatctcggt | agtgggatac | gacgataccg | aagacagctc | 2100 |
| atgttatatc | ccgccgtcaa | ccaccatcaa | acaggatttt | cgcctgctgg | ggcaaaccag | 2160 |
| cgtggaccgc | ttgctgcaac | tctctcaggg | ccaggcggtg | aagggcaatc | agctgttgcc | 2220 |
| cgtctcactg | gtgaaaagaa | aaaccaccct | ggcgcccaat | acgcaaaccg | cctctccccg | 2280 |
| cgcgttggcc | gattcattaa | tgcagctggc | acgacaggtt | tcccgactgg | aaagcgggca | 2340 |
| gtgagcgcaa | ctttgcgata | ggtaaatttt | tctaaataca | ttcaaatatg | tatccgctca | 2400 |
| tgagacaata | accctgataa | atgcttcaat | aatattgaaa | aaggaagagt | atgagtattc | 2460 |
| aacatttccg | tgtcgccctt | attccctttt | ttgcggcatt | ttgccttcct | gtttttgctc | 2520 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt acceagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt 2580 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt 2640 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg 2700 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact 2760 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg 2820 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga 2880 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg 2940 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa 3000 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac 3060 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc 3120 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca 3180 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga 3240 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta 3300 agcattggta actgtc 3316 <210> 19 <211> 3121 <212> DMA <213> artificial <220>
<223> pBCM4ML <400> 19 ctggagatcc tgataaaatc atgaaaaatt tatttgcttt gtgagcggat aacaattata 60 atatgtggaa ttgtgagcgc tcacaattcc acataaggag gtaaaaaaat gtggaattgt 120 gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgata catcatcatc atcatcattg 180 ggaactgcag atgaattcga gctcggatcc aagatcttct agacatatga tcgataagct 240 tgatatcggt accaccatgg tcgacctcga gcccggggct agcataaccc cttggggcct 300 ctaaacgggt cttgaggggt tttttgggga aatttccccg aagatcaaag gatcttcttg 360 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc 420 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag 480 cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa 540 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc 600 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga egatagttac cggataaggc 660 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta 720 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag 780 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct 840 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga 900
PL 228 024 Β1
5EQLTXT.txt
| gcgtcgartt | ttgtgatgct | cgtcaggggg | gcggagccta | tggaaaaacg | CCagcaacgc | 960 |
| gtttgcgata | ggtaaaggcg | cgccatcgaa | tggcgcaaaa | cctttcgcgg | tatggcatga | 1020 |
| tagcgcccgg | aagagagtca | attcagggtg | gtgaatggtg | gtgaatgtga | aaccagtaac | 1080 |
| gttatacgat | gtcgcagagt | atgccggtgt | ctcttatcag | accgtttCCC | gcgtggtgaa | 1140 |
| ccaggccagc | cacgtttctg | cgaaaacgcg | ggaaaaagtg | gaagcggcga | tggcggagct | 1200 |
| gaattacatt | cccaaccgcg | tggcacaaca | actggcgggc | aaacagtcgt | tgctgattgg | 1260 |
| cgttgccacc | tccagtctgg | ccctgcacgc | gccgtcgcaa | attgtcgcgg | cgattaaatc | 1320 |
| tcgcgccgat | caactgggtg | ccagcgtggt | ggtgtcgatg | gtagaacgaa | gcggcgtcga | 1380 |
| agcctgtaaa | gcggcggtgc | acaatcttct | cgcgcaacgc | gtcagtgggc | tgatcattaa | 1440 |
| ctatccgctg | gatgaccagg | atgccattgc | tgtggaagct | gCCtgcacta | atgttccggc | 1500 |
| gttatttctt | gatgtctctg | accagacacc | catcaacagt | attattttct | cccatgaaga | 1560 |
| cggtacgcga | ctgggcgtgg | agcatctggt | cgcattgggt | caccagcaaa | tcgcgctgtt | 1620 |
| agcgggccca | ttaagttctg | tctcggcgcg | tctgcgtctg | gctggctggc | ataaatatct | 1680 |
| cactcgcaat | caaattcagc | cgatagcgga | acgggaaggc | gactggagtg | ccatgtctgg | 1740 |
| ttttcaacaa | accatgcaaa | tgctgaatga | gggcatcgtt | cccactgcga | tgctggttgc | 1800 |
| caacgatcag | atggcgctgg | gcgcaatgcg | cgccattacc | gagtccgggc | tgcgcgttgg | 1860 |
| tgcggatatc | tcggtagtgg | garacgacga | taccgaagac | agctcatgtt | atatcccgcc | 1920 |
| gtcaaccacc | atcaaacagg | attttcgcct | gctggggcaa | accagcgtgg | accgcttgct | 1980 |
| gcaactctct | cagggccagg | cggtgaaggg | caatcagctg | ttgcccgtct | cactggtgaa | 2040 |
| aagaaaaacc | accctggcgc | ccaatacgca | aaccgcctct | ccccgcgcgt | tggccgattc | 2100 |
| artaatgcag | ctggcacgac | aggtttcccg | actggaaagc | gggcagtgag | cgcaactttg | 2160 |
| cgataggtaa | atttttctaa | atacattcaa | atatgtatcc | gctcatgaga | caataaccct | 2220 |
| gataaatgct | tcaataatat | tgaaaaagga | agagtatgag | tattcaacat | ttccgtgtcg | 2280 |
| cccttattcc | cttttttgcg | gcattttgcc | ttcctgtttt | tgctcaccca | gaaacgctgg | 2340 |
| tgaaagtaaa | agatgctgaa | gatcagttgg | gtgcacgagt | gggttacatc | gaactggatc | 2400 |
| tcaacagcgg | taagatcctt | gagagttttc | gccccgaaga | acgttttcca | atgatgagca | 2460 |
| cttttaaagt | tctgctatgt | ggcgcggtat | tatcccgtat | tgacgccggg | caagagcaac | 2520 |
| tcggtcgccg | catacactat | tctcagaatg | acttggttga | gtactcacca | gtcacagaaa | 2580 |
| agcatcttac | ggatggcatg | acagtaagag | aattatgcag | tgctgccata | accatgagtg | 2640 |
| ataacactgc | ggccaactta | cttctgacaa | cgatcggagg | accgaaggag | ctaaccgctt | 2700 |
| ttttgcacaa | catgggggat | catgtaactc | gccttgatcg | ttgggaaccg | gagctgaatg | 2760 |
| aagccatacc | aaacgacgag | cgtgacacca | cgatgcctgt | agcaatggca | acaacgttgc | 2820 |
| gcaaactatt | aactggcgaa | ctacttactc | tagcttcccg | gcaacaatta | atagactgga | 2880 |
| tggaggcgga | taaagttgca | ggaccacttc | tgcgctcggc | ccttccggct | ggctggttta | 2940 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| ttgctgataa | atctggagcc | ggtgagcgtg | ggtctcgcgg | tatcattgca | gcactggggc | 3000 |
| cagatggtaa | gccctcccgt | atcgtagtta | tctacacgac | ggggagtcag | gcaactatgg | 3060 |
| atgaacgaaa | tagacagatc | gctgagatag | gtgcctcact | gattaagcat | tggtaactgt | 3120 |
| c | 3121 | |||||
| <210> 20 <211> 3094 <212> DNA <213> artificial | ||||||
| <220> <223> pBCMSML | ||||||
| <400> 20 ctggagatcc | tgatataata | cgactcacta | taggggtgtg | gaattgtgag | cgctcacaat | 60 |
| tccacataag | gaggtaaaaa | aatgtggaat | tgtgagcgct | cacaattcca | cataaggagg | 120 |
| taaaaaaatg | atacatcatc | atcatcatca | ttgggaactg | cagatgaatt | cgagctcgga | 180 |
| tccaagatct | tctagacata | tgatcgataa | gcttgatatc | ggtaccacca | tggtcgacct | 240 |
| cgagcccggg | gctagcataa | ccccttgggg | cctctaaacg | ggtcttgagg | ggttttttgg | 300 |
| ggaaatttcc | ccgaagatca | aaggatcttc | ttgagatcct | ttttttctgc | gcgtaatctg | 360 |
| ctgcttgcaa | acaaaaaaac | caccgctacc | agcggtggtt | tgtttgccgg | atcaagagct | 420 |
| accaactctt | tttccgaagg | taactggctt | cagcagagcg | cagataccaa | atactgtcct | 480 |
| tctagtgtag | ccgtagttag | gccaccactt | caagaactct | gtagcaccgc | ctacatacct | 540 |
| cgctctgcta | atcctgttac | cagtggctgc | tgccagtggc | gataagtcgr | gtcttaccgg | 600 |
| gttggactca | agacgatagt | taccggataa | ggcgcagcgg | tcgggctgaa | cggggggttc | 660 |
| gtgcacacag | cccagcttgg | agcgaacgac | ctacaccgaa | ctgagatacc | tacagcgtga | 720 |
| gctatgagaa | agcgccacgc | ttcccgaagg | gagaaaggcg | gacaggtatc | cggtaagcgg | 780 |
| cagggtcgga | acaggagagc | gcacgaggga | gcttccaggg | ggaaacgcct | ggtatcttta | 840 |
| tagtcctgtc | gggtttcgcc | acctctgact | tgagcgtcga | tttttgtgat | gctcgtcagg | 900 |
| ggggcggagc | ctatggaaaa | acgccagcaa | cgcgtttgcg | ataggtaaag | gcgcgccatc | 960 |
| gaatggcgca | aaacctttcg | cggtatggca | tgatagcgcc | cggaagagag | tcaattcagg | 1020 |
| gtggtgaatg | gtggtgaatg | tgaaaccagt | aacgttatac | gatgtcgcag | agtatgccgg | 1080 |
| tgtctcttat | cagaccgttt | cccgcgtggt | gaaccaggcc | agccacgttt | ctgcgaaaac | 1140 |
| gcgggaaaaa | gtggaagcgg | cgatggcgga | gctgaattac | attcccaacc | gcgtggcaca | 1200 |
| acaactggcg | ggcaaacagt | cgttgctgat | tggcgttgcc | acctccagtc | tggccctgca | 1260 |
| cgcgccgtcg | caaattgtcg | cggcgattaa | atctcgcgcc | gatcaactgg | gtgccagcgt | 1320 |
| ggtggtgtcg | atggtagaac | gaagcggcgt | cgaagcctgt | aaagcggcgg | tgcacaatct | 1380 |
| tctcgcgcaa | cgcgtcagtg | ggctgatcat | taactatccg | ctggatgacc | aggatgccat | 1440 |
| tgctgtggaa | gctgcctgca | ctaatgttcc | ggcgttattt | cttgatgtct | ctgaccagac | 1500 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| acccatcaac | agtattattt | tctcccatga | agacggtacg | cgactgggcg | tggagcatct | 1560 |
| ggtcgcattg | ggtcaccagc | aaatcgcgct | gttagcgggc | ccattaagtt | ctgtctcggc | 1620 |
| gcgtctgcgt | ctggctggct | ggcataaata | tctcactcgc | aatcaaattc | agccgatagc | 1680 |
| ggaacgggaa | ggcgactgga | gtgccatgtc | cggttttcaa | caaaccatgc | aaatgcrgaa | 1740 |
| tgagggcatc | gttcccactg | cgatgctggt | tgccaacgat | cagatggcgc | tgggcgcaat | 1800 |
| gcgcgccatt | accgagtccg | ggctgcgcgt | tggtgcggat | atctcggtag | tgggatacga | 1860 |
| cgataccgaa | gacagctcat | gttatatccc | gccgtcaacc | accatcaaac | aggattttcg | 1920 |
| cctgctgggg | caaaccagcg | tggaccgctt | gctgcaactc | tctcagggcc | aggcggtgaa | 1980 |
| gggcaatcag | Ctgttgcccg | tctcactggt | gaaaagaaaa | accaccctgg | cgcccaatac | 2040 |
| gcaaaccgcc | tctccccgcg | cgttggccga | ttcattaatg | cagctggcac | gacaggtttc | 2100 |
| ccgactggaa | agcgggcagt | gagcgcaact | ttgcgatagg | taaatttttc | taaatacatt | 2160 |
| caaatatgta | tccgctcatg | agacaataac | cctgataaat | gcttcaataa | tattgaaaaa | 2220 |
| ggaagagtat | gagtattcaa | catttccgtg | tcgcccttat | tccctttttt | gcggcarttt | 2280 |
| gccttcctgt | ttttgctcac | ccagaaacgc | tggtgaaagt | aaaagatgct | gaagatcagt | 2340 |
| tgggtgcacg | agtgggttac | atcgaactgg | atctcaacag | cggtaagatc | cttgagagtt | 2400 |
| ttcgccccga | agaacgtttt | ccaatgatga | gcacttttaa | agttctgcta | tgtggcgcgg | 2460 |
| tattatcccg | tattgacgcc | gggcaagagc | aactcggtcg | ccgcatacac | tattctcaga | 2520 |
| atgacttggt | tgagtactca | ccagtcacag | aaaagcatct | tacggatggc | atgacagtaa | 2580 |
| gagaattatg | cagtgctgcc | ataaccatga | gtgataacac | tgcggccaac | ttacttctga | 2640 |
| caacgatcgg | aggaccgaag | gagctaaccg | cttttttgca | caacatgggg | gatcatgtaa | 2700 |
| ctcgccttga | tcgttgggaa | ccggagctga | atgaagccat | accaaacgac | gagcgtgaca | 2760 |
| ccacgatgcc | tgtagcaatg | gcaacaacgt | tgcgcaaact | attaactggc | gaactactta | 2820 |
| ctctagcttc | ccggcaacaa | ttaatagact | ggatggaggc | ggataaagtt | gcaggaccac | 2880 |
| ttctgcgctc | ggcccttccg | gctggctggt | ttattgctga | taaatctgga | gccggtgagc | 2940 |
| gtgggtctcg | cggtatcatt | gcagcactgg | ggccagatgg | taagccctcc | cgtatcgtag | 3000 |
| ttatctacac | gacggggagt | caggcaacta | tggatgaacg | aaatagacag | atcgctgaga | 3060 |
| taggtgcctc | actgattaag | cattggtaac | tgtc | 3094 |
<210> 21 <211> 3117 <212> DNA <213> artificial <220>
<22 3> pBCMfiML <400> 21 ctggagatcc tgataattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat 60 gtggaattgt gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgtgg aattgtgagc 120
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| gctcacaatt | ccacataagg | aggtaaaaaa | atgatacatc | atcatcatca | tcattgggaa | 180 |
| ctgcagatga | attcgagctc | ggatccaaga | tcttctagac | atatgatcga | taagcttgat | 240 |
| atcggtacca | ccatggtcga | cctcgagccc | ggggctagca | taaccccttg | gggcctctaa | 300 |
| acgggtcttg | aggggttttt | tggggaaatt | tccccgaaga | tcaaaggatc | ttcttgagat | 360 |
| ccttrttttc | tgcgcgtaat | ctgctgcttg | caaacaaaaa | aaccaccgct | accagcggtg | 420 |
| gtttgtttgc | cggatcaaga | gctaccaact | ctttttccga | aggtaactgg | cttcagcaga | 480 |
| gcgcagatac | caaatactgt | ccttctagtg | tagccgtagt | taggccacca | cttcaagaac | 540 |
| tctgtagcac | cgcctacata | cctcgctctg | ctaatcctgt | taccagtggc | tgctgccagt | 600 |
| ggcgataagt | cgtgtcttac | cgggttggac | tcaagacgat | agttaccgga | taaggcgcag | 660 |
| cggtcgggct | gaacgggggg | ttcgtgcaca | cagcccagct | tggagcgaac | gacctacacc | 720 |
| gaactgagat | acctacagcg | tgagctatga | gaaagcgcca | cgcttcccga | agggagaaag | 7S0 |
| gcggacaggt | atccggtaag | cggcagggtc | ggaacaggag | agcgcacgag | ggagcttcca | 840 |
| gggggaaacg | cctggtatct | ttatagtcct | gtcgggtttc | gccacctctg | acttgagcgt | 900 |
| cgatttttgt | gatgctcgtc | aggggggcgg | agcctatgga | aaaacgccag | caacgcgttt | 960 |
| gcgataggta | aaggcgcgcc | atcgaatggc | gcaaaacctt | tcgcggtatg | gcatgatagc | 1020 |
| gcccggaaga | gagtcaattc | agggtggtga | atggtggtga | atgtgaaacc | agtaacgtta | 1080 |
| tacgatgtcg | cagagtatgc | cggtgtctct | tatcagaccg | tttcccgcgt | ggtgaaccag | 1140 |
| gccagccacg | tttctgcgaa | aacgcgggaa | aaagtggaag | cggcgatggc | ggagctgaat | 1200 |
| tacattccca | accgcgtggc | acaacaactg | gcgggcaaac | agtcgttgct | gattggcgtt | 1260 |
| gccacctcca | gtctggccct | gcacgcgccg | tcgcaaattg | tcgcggcgat | taaatctcgc | 1320 |
| gccgatcaac | tgggtgccag | cgtggtggtg | tcgatggtag | aacgaagcgg | cgtcgaagcc | 1380 |
| tgtaaagcgg | cggtgcacaa | tCttCtcgcg | caacgcgtca | gtgggctgat | cattaactat | 1440 |
| ccgctggatg | accaggatgc | cattgctgtg | gaagctgcct | gcactaatgt | tccggcgtta | 1500 |
| tttcttgatg | tctctgacca | gacacccatc | aacagtatta | ttttctccca | tgaagacggt | 1560 |
| acgcgactgg | gcgtggagca | tctggtcgca | ttgggtcacc | agcaaatcgc | gctgttagcg | 1620 |
| ggcccattaa | gttctgtctc | ggcgcgtctg | cgtctggctg | gctggcataa | atatctcact | 1680 |
| cgcaatcaaa | ttcagccgat | agcggaacgg | gaaggcgact | ggagtgccat | gtccggtttt | 1740 |
| caacaaacca | tgcaaatgct | gaatgagggc | atcgttccca | ctgcgatgct | ggttgccaac | 1800 |
| gatcagatgg | cgctgggcgc | aatgcgcgcc | attaccgagt | ccgggctgcg | cgttggtgcg | 1860 |
| gatatctcgg | tagtgggata | cgacgatacc | gaagacagct | catgttatat | cccgccgtca | 1920 |
| accaccatca | aacaggattt | tcgcctgctg | gggcaaacca | gcgtggaccg | cttgctgcaa | 1980 |
| ctctctcagg | gccaggcggt | gaagggcaat | cagctgttgc | ccgtctcact | ggtgaaaaga | 2040 |
| aaaaccaccc | tggcgcccaa | tacgcaaacc | gcctctcccc | gcgcgttggc | cgattcatta | 2100 |
| atgcagctgg | cacgacaggt | ttcccgactg | gaaagcgggc | agtgagcgca | actttgcgat | 2160 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| aggtaaattt ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata | 2220 |
| aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct | 2280 |
| tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa | 2340 |
| agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa | 2400 |
| cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt | 2460 |
| taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg | 2520 |
| tcgccgcata cactattctc agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca | 2580 |
| tcttacggat ggcatgacag taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa | 2640 |
| cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt | 2700 |
| gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc | 2760 |
| cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa | 2820 |
| actattaact ggcgaactac ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga | 2880 |
| ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc | 2940 |
| tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga | 3000 |
| tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga | 3060 |
| acgaaataga cagatcgctg agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtc | 3117 |
<210> 22 <211> 3338 <212> DNA <213> artifi ciał <220>
<223> pBCM7ML <400> 22 ctggagatcc tgataaaatc atgaaaaatt tatttgcttt gtgagcggat aacaattata 60 atatgtggaa ttgtgagcgc tcacaattcc acataaggag gtaaaaaaat gtggaattgt 120 gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgata catcatcatc atcatcattg 180 ggaactgcag atgaattcga gctcggatcc aagatcttct agacatatga tcgataagct 240 tgatatcggt accaccatgg tcgacctcga gcccggggct agcataaccc cttggggcct 300 ctaaacgggt cttgaggggt tttttgggga aatttccccg attaataaga tgatcttctt 360 gagatcgttt tggtctgcgc gtaatctctt gctctgaaaa cgaaaaaacc gccttgcagg 420 gcggtttttc gaaggttctc tgagctacca actctttgaa ccgaggtaac tggcttggag 480 gagcgcagtc accaaaactt gtcctttcag tttagcctta accggcgcat gacttcaaga 540 ctaactcctc taaatcaatt accagtggct gctgccagtg gtgcttttgc atgtctttcc 600 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcggactg aacggggggt 660 tcgtgcatac agtccagctt ggagcgaact gcctacccgg aactgagtgt caggcgtgga 720 atgagacaaa cgcggccata acagcggaat gacaccggta aaccgaaagg caggaacagg 780
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| agagcgcacg | agggagccgc | cagggggaaa | cgcctggtat | ctttatagtc | ctgtcgggtt | 840 |
| tcgccaccac | tgatttgagc | gtcagatttc | gtgatgcttg | tcaggggggc | ggagcctatg | 900 |
| gaaaaacggc | tttgccgcgg | ccctctcact | tccctgttaa | gtatcttcct | ggcatcttcc | 960 |
| aggaaatctc | Cgccccgttc | gtaagccatt | tccgctcgcc | gcagtcgaac | gaccgagcgt | 1020 |
| agcgagtcag | tgagcgagga | agcggaatat | atcctgtatc | acatattctg | ctgacgcacc | 1080 |
| ggtgcagcct | tttttctcct | gccacatgaa | gcacttcact | gacaccctca | tcagtgccaa | 1140 |
| catagtaagc | cagtatacac | tccgctagcg | ctgaggtctt | tgcgataggt | aaaggcgcgc | 1200 |
| catcgaatgg | cgcaaaacct | ttcgcggtat | ggcatgatag | cgcccggaag | agagtcaatt | 1260 |
| cagggtggtg | aatggtggtg | aatgtgaaac | cagtaacgtt | atacgatgtc | gcagagtatg | 1320 |
| ccggtgtctc | ttatcagacc | gtttcccgcg | tggtgaacca | ggccagccac | gtttctgcga | 1380 |
| aaacgcggga | aaaagtggaa | gcggcgatgg | cggagctgaa | ttacattccc | aaccgcgtgg | 1440 |
| cacaacaact | ggcgggcaaa | cagtcgttgc | tgattggcgt | tgccacctcc | agtctggccc | 1500 |
| tgcacgcgcc | gtcgcaaatt | gtcgcggcga | ttaaatctcg | cgccgatcaa | ctgggtgcca | 1560 |
| gcgtggtggt | gtcgatggta | gaacgaagcg | gcgtcgaagc | ctgtaaagcg | gcggtgcaca | 1620 |
| atcttctcgc | gcaacgcgtc | agtgggctga | tcattaacta | tccgctggat | gaccaggatg | 1680 |
| ccattgctgt | ggaagctgcc | tgcactaatg | ttccggcgtt | atttcttgat | gtctctgacc | 1740 |
| agacacccat | caacagtatt | attttctccc | atgaagacgg | tacgcgactg | ggcgtggagc | 1800 |
| atctggtcgc | attgggtcac | cagcaaatcg | cgctgttagc | gggcccatta | agttctgtct | 1860 |
| cggcgcgtct | gcgtctggct | ggctggcata | aatatctcac | tcgcaatcaa | attcagccga | 1920 |
| tagcggaacg | ggaaggcgac | tggagtgcca | tgtccggttt | tcaacaaacc | atgcaaatgc | 1980 |
| tgaatgaggg | carcgttccc | actgcgatgc | tggttgccaa | cgatcagatg | gcgctgggcg | 2040 |
| caatgcgcgc | cattaccgag | tccgggctgc | gcgttggtgc | ggatatctcg | gtagtgggat | 2100 |
| acgacgatac | cgaagacagc | tcatgttata | tcccgccgtc | aaccaccatc | aaacaggatt | 2160 |
| ttcgcctget | ggggcaaacc | agcgtggacc | gcttgctgca | actctctcag | ggccaggcgg | 2220 |
| tgaagggcaa | tcagctgttg | cccgtctcac | tggtgaaaag | aaaaaccacc | ctggcgccca | 2280 |
| atacgcaaac | cgcctctccc | cgcgcgttgg | ccgattcatt | aatgcagctg | gcacgacagg | 2340 |
| tttcccgact | ggaaagcggg | cagtgagcgc | aactttgcga | taggtaaatt | tttctaaata | 2400 |
| cattcaaata | tgtatccgct | catgagacaa | taaccctgat | aaatgcttca | ataatattga | 2460 |
| aaaaggaaga | gtatgagtat | tcaacatttc | cgtgtcgccc | ttattccctt | ttttgcggca | 2520 |
| ttttgccttc | ctgtttttgc | tcacccagaa | acgctggtga | aagtaaaaga | tgctgaagat | 2580 |
| cagttgggtg | cacgagtggg | ttacatcgaa | ctggatctca | acagcggtaa | gatccttgag | 2640 |
| agttttcgcc | ccgaagaacg | ttttccaatg | atgagcactt | ttaaagttct | gctatgtggc | 2700 |
| gcggtattat | cccgtattga | cgccgggcaa | gagcaactcg | gtcgccgcat | acactattct | 2760 |
| cagaatgact | tggttgagta | ctcaccagtc | acagaaaagc | atcttacgga | tggcatgaca | 2820 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt 2880 ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcrtttt tgcacaacat gggggatcat 2940 gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt 3000 gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta 3060 ettactetag cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga 3120 ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc tggagccggt 3180 gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc 3240 gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct 3300 gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtc 3338 <210> 23 <211> 3311 <2I2> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCM8ML <4Q0> 23
| ctggagatcc | tgatataata | cgactcacta | taggggtgtg | gaattgtgag | cgctcacaat | 60 |
| tccacataag | gaggtaaaaa | aatgtggaat | tgtgagcgct | cacaattcca | cataaggagg | 120 |
| taaaaaaatg | atacatcatc | atcatcatca | ttgggaactg | cagatgaatt | cgagctcgga | 180 |
| tccaagatct | tctagacata | tgatcgataa | gcttgatatc | ggtaccacca | tggtcgacct | 240 |
| cgagcccggg | gctagcataa | ccccttgggg | cctctaaacg | ggtcttgagg | ggttttttgg | 300 |
| ggaaatttcc | ccgattaata | agatgatctt | cttgagatcg | ttttggtctg | cgcgtaatct | 360 |
| cttgctctga | aaacgaaaaa | accgccttgc | agggcggttt | ttcgaaggtt | ctctgagcta | 420 |
| ccaactcttt | gaaccgaggt | aactggcttg | gaggagcgca | gtcaccaaaa | cttgtccttt | 480 |
| cagtttagcc | ttaaccggcg | catgacttca | agactaactc | ctctaaatca | attaccagtg | 540 |
| gctgctgcca | gtggtgcttt | tgcatgtctt | tccgggttgg | actcaagacg | atagttaccg | 600 |
| gataaggcgc | agcggtcgga | ctgaaegggg | ggttcgtgca | tacagtccag | cttggagcga | 660 |
| actgcctacc | cggaactgag | tgtcaggcgt | ggaatgagac | aaacgcggcc | ataacagcgg | 720 |
| aatgacaccg | gtaaaccgaa | aggcaggaac | aggagagcgc | acgagggagc | cgccaggggg | 780 |
| aaacgcctgg | tatctttata | gtcctgtcgg | grttcgccac | cactgatttg | agcgtcagat | 840 |
| ttcgtgatgc | ttgtcagggg | ggcggagcct | atggaaaaac | ggctttgccg | cggccctctc | 900 |
| acttccctgt | taagtatctt | cetggcatct | tccaggaaat | ctccgccccg | ttcgtaagcc | 960 |
| atttccgctc | gccgcagtcg | aacgaccgag | cgtagcgagt | cagtgagcga | ggaagcggaa | 1020 |
| tatatcctgt | atcacatatt | ctgctgacgc | accggtgcag | ccttttttct | cctgccacat | 1080 |
| gaagcacttc | actgacaccc | tcatcagtgc | caacatagta | agccagtata | cactccgcta | 1140 |
| gcgctgaggt | ctttgcgata | ggtaaaggcg | cgccatcgaa | tggcgcaaaa | cctttcgcgg | 1200 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tatggcatga | tagcgcccgg | aagagagtca | attcagggtg | gtgaatggtg | gtgaatgtga | 1260 |
| aaccagtaac | gttatacgat | gtcgcagagt | atgccggtgt | ctcttatcag | accgtttccc | 1320 |
| gcgtggtgaa | ccaggccagc | cacgtttctg | cgaaaacgcg | ggaaaaagtg | gaagcggcga | 1380 |
| tggcggagct | gaattacatt | cccaaccgcg | tggcacaaca | actggcgggc | aaacagtcgt | 1440 |
| tgctgattgg | cgttgccacc | tccagtctgg | ccctgcacgc | gccgtcgcaa | attgtcgcgg | 1500 |
| cgattaaatc | tcgcgccgat | caactgggtg | ccagcgtggt | ggtgtcgatg | gtagaacgaa | 1560 |
| gcggcgtcga | agcctgtaaa | gcggcggtgc | acaatcttct | cgcgcaacgc | gtcagtgggc | 1620 |
| tgatcattaa | ctatccgctg | gatgaccagg | atgccattgc | tgtggaagct | gcctgcacta | 1680 |
| atgttccggc | gttatttctt | gatgtctctg | accagacacc | catcaacagt | attattttct | 1740 |
| cccatgaaga | cggtacgcga | ctgggcgtgg | agcatctggt | cgcattgggt | caccagcaaa | 1800 |
| tcgcgctgtt | agcgggccca | ttaagttctg | tctcggcgcg | tctgcgtctg | gctggctggc | 1860 |
| ataaatatct | cactcgcaat | caaattcagc | cgatagcgga | acgggaaggc | gactggagtg | 1920 |
| ccatgtccgg | ttttcaacaa | accatgcaaa | tgctgaatga | gggcatcgtt | cccactgcga | 1980 |
| tgctggttgc | caacgatcag | atggcgctgg | gcgcaatgcg | cgccattacc | gagtccgggc | 2040 |
| tgcgcgttgg | tgcggatatc | tcggtagtgg | gatacgacga | taccgaagac | agctcatgtt | 2100 |
| atatcccgcc | gtcaaccacc | atcaaacagg | attttcgcct | gctggggcaa | accagcgtgg | 2160 |
| accgcttgct | gcaactctct | cagggccagg | cggtgaaggg | caatcagctg | ttgcccgtct | 2220 |
| cactggtgaa | aagaaaaacc | accctggcgc | ccaatacgca | aaccgcctct | ccccgcgcgt | 2280 |
| tggccgattc | attaatgcag | ctggcacgac | aggtttcccg | actggaaagc | gggcagtgag | 2340 |
| cgcaactttg | cgataggtaa | atttttctaa | atacattcaa | atatgtatcc | gctcatgaga | 2400 |
| caataaccct | gataaatgct | tcaataatat | tgaaaaagga | agagtatgag | tattcaacat | 2460 |
| ttccgtgtcg | cccttattcc | cttttttgcg | gcattttgcc | ttcctgtttt | tgctcaccca | 2520 |
| gaaacgctgg | tgaaagtaaa | agatgctgaa | gatcagttgg | gtgcacgagt | gggttacatc | 2580 |
| gaactggatc | tcaacagcgg | taagatcctt | gagagttttc | gccccgaaga | acgttttcca | 2640 |
| atgargagca | cttttaaagt | tctgctatgt | ggcgcggtat | tatcccgtat | tgacgccggg | 2700 |
| caagagcaac | tcggtcgccg | Catacactat | tctcagaatg | acttggttga | gtactcacca | 2760 |
| gtcacagaaa | agcatcttac | ggatggcatg | acagtaagag | aattatgcag | tgctgccata | 2820 |
| accatgagtg | ataacactgc | ggccaactta | cttctgacaa | cgatcggagg | accgaaggag | 2880 |
| ctaaccgctt | ttttgcacaa | catgggggat | catgtaactc | gccttgatcg | ttgggaaccg | 2940 |
| gagctgaatg | aagccatacc | aaacgacgag | cgtgacacca | cgatgcctgt | agcaatggca | 3000 |
| acaacgttgc | gcaaactatt | aactggcgaa | ctacttactc | tagcttcccg | gcaacaatta | 3060 |
| atagactgga | tggaggcgga | taaagttgca | ggaccacttc | tgcgctcggc | ccttccggct | 3120 |
| ggctggttta | ttgctgataa | atctggagcc | ggtgagcgtg | ggtctcgcgg | tatcattgca | 3180 |
| gcactggggc | cagatggtaa | gccctcccgt | atcgtagtta | tctacacgac | ggggagtcag | 3240 |
PL 228 024 Β1
5EQLTXT.txt gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat 3300 tggtaactgt c 3311 <210> 24 <211> 3334 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> PBCM9ML <400> 24
| ctggagatcc | tgataattct | gaaatgagct | gttgacaatt | aatcatccgg | ctcgtataat | 60 |
| gtggaattgt | gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgtgg | aattgtgagc | 120 |
| gctcacaatt | ccacataagg | aggtaaaaaa | atgatacatc | atcatcatca | tcattgggaa | 180 |
| ctgcagatga | attcgagetc | ggatccaaga | tcttctagac | atatgatcga | taagcttgat | 240 |
| atcggtacca | ccatggtcga | cctcgagccc | ggggctagca | taaccccttg | gggcctctaa | 300 |
| acgggtcttg | aggggttttt | tggggaaatt | tccccgatta | ataagatgat | cttcttgaga | 360 |
| tcgttttggt | ctgcgcgtaa | tctcttgctc | tgaaaacgaa | aaaaccgcct | tgcagggcgg | 420 |
| tttttcgaag | gttctctgag | ctaccaactc | tttgaaccga | ggtaactggc | ttggaggagc | 480 |
| gcagtcacca | aaacttgtcc | tttcagttta | gccttaaccg | gcgcatgact | tcaagactaa | 540 |
| ctcctctaaa | tcaattacca | gtggctgctg | ccagtggtgc | ttttgcatgt | ctttccgggt | 600 |
| tggactcaag | acgatagtta | ccggataagg | cgcagcggtc | ggactgaacg | gggggttcgt | 660 |
| gcatacagtc | cagcttggag | cgaactgcct | acccggaact | gagtgtcagg | cgtggaatga | 720 |
| gacaaacgcg | gccataacag | cggaatgaca | ccggtaaacc | gaaaggcagg | aacaggagag | 780 |
| cgcacgaggg | agccgccagg | gggaaacgcc | tggtatcttt | atagtcctgt | cgggtttcgc | 840 |
| eaccactgat | ttgagcgtca | gatttcgtga | tgcttgtcag | gggggcggag | cctatggaaa | 900 |
| aacggctttg | ccgcggccct | ctcacttccc | tgttaagtat | cttcctggca | tcttccagga | 960 |
| aatctccgcc | ccgttcgtaa | gccatttccg | ctcgccgcag | tcgaacgacc | gagcgtagcg | 1020 |
| agtcagtgag | cgaggaagcg | gaatatatcc | tgtatcacat | attctgctga | cgcaccggtg | 1080 |
| cagccttttt | tctcctgcca | catgaagcac | ttcactgaca | ccctcatcag | tgccaacata | 1140 |
| gtaagccagt | atacactccg | ctagcgctga | ggtctttgcg | ataggtaaag | gcgcgccatc | 1200 |
| gaatggcgca | aaacctttcg | cggtatggca | tgatagcgcc | cggaagagag | tcaattcagg | 1260 |
| gtggtgaatg | gtggtgaatg | tgaaaccagt | aacgttatac | gatgtcgcag | agtatgccgg | 1320 |
| tgtctcttat | cagaccgttt | cccgcgtggt | gaaccaggcc | agccacgttt | ctgcgaaaac | 1380 |
| gcgggaaaaa | gtggaagcgg | cgatggcgga | gctgaattac | attcccaacc | gcgtggcaca | 1440 |
| acaactggcg | ggcaaacagt | cgttgctgat | tggcgttgcc | acctccagtc | tggccctgca | 1500 |
| cgcgccgtcg | caaattgtcg | cggcgattaa | atctcgcgcc | gatcaactgg | gtgccagcgt | 1560 |
| ggtggtgtcg | atggtagaac | gaagcggcgt | cgaagcctgt | aaagcggcgg | tgcacaatct | 1620 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tctcgcgcaa | cgcgtcagtg | ggctgatcat | taactatccg | ctggatgacc | aggatgccat | 1680 |
| tgctgtggaa | gctgcctgca | ctaatgttcc | ggcgttattt | cttgatgtct | ctgaccagac | 1740 |
| acccatcaac | agtattattt | tctcccatga | agacggtacg | cgactgggcg | tggagcatct | 1800 |
| ggtcgcattg | ggtcaccagc | aaatcgcgct | gttagcgggc | ccattaagtt | ctgtctcggc | 1860 |
| gcgtctgcgt | ctggctggct | ggcataaata | tctcactcgc | aatcaaattc | agccgatagc | 1920 |
| ggaacgggaa | ggcgactgga | gtgccatgtc | cggttttcaa | caaaccatgc | aaatgctgaa | 1980 |
| tgagggcatc | gttcccactg | cgatgctggt | tgccaacgat | cagatggcgc | tgggcgcaat | 2040 |
| gcgcgccatt | accgagtccg | ggctgcgcgt | tggtgcggat | atctcggtag | tgggatacga | 2100 |
| cgataccgaa | gacagctcat | gttatatccc | gccgtcaacc | accatcaaac | aggattttcg | 2160 |
| cctgctgggg | caaaccagcg | tggaccgctt | gctgcaactc | tctcagggcc | aggcggtgaa | 2220 |
| gggcaatcag | ctgttgcccg | tctcactggt | gaaaagaaaa | accaccctgg | cgcccaatac | 2280 |
| gcaaaccgcc | tctccccgcg | cgttggccga | ttcattaatg | cagctggcac | gacaggtttc | 2340 |
| ccgactggaa | agcgggcagt | gagcgcaact | ttgcgatagg | taaatttttc | taaatacatt | 2400 |
| caaatatgta | tccgctcatg | agacaataac | cctgataaat | gcttcaataa | tattgaaaaa | 2460 |
| ggaagagtat | gagtattcaa | catttccgtg | tcgcccttat | tccctttttt | gcggcatttt | 2520 |
| gccttcctgt | ttttgctcac | ccagaaacgc | tggtgaaagt | aaaagatgct | gaagatcagt | 2580 |
| tgggtgcacg | agtgggttac | atcgaactgg | atctcaacag | cggtaagatc | cttgagagtt | 2640 |
| ttcgccccga | agaacgtttt | ccaatgatga | gcacttttaa | agttctgcta | tgtggcgcgg | 2700 |
| tattatcccg | tattgacgcc | gggcaagagc | aactcggtcg | ccgcatacac | tattctcaga | 2760 |
| atgacttggt | tgagtactca | ccagtcacag | aaaagcatct | tacggatggc | atgacagtaa | 2820 |
| gagaattatg | cagtgctgcc | ataaccatga | gtgataacac | tgcggccaac | ttacttctga | 2880 |
| caacgatcgg | aggaccgaag | gagctaaccg | cttttttgca | caacatgggg | gatcatgtaa | 2940 |
| ctcgccttga | tcgttgggaa | ccggagctga | atgaagccat | accaaacgac | gagcgtgaca | 3000 |
| ccacgatgcc | tgtagcaatg | gcaacaacgt | tgcgcaaact | attaactggc | gaactactta | 3060 |
| ctctagcttc | ccggcaacaa | ttaatagact | ggatggaggc | ggataaagtt | gcaggaccac | 3120 |
| ttctgcgctc | ggcccttccg | gctggctggt | ttattgctga | taaatctgga | gccggtgagc | 3180 |
| gtgggtctcg | cggtatcatt | gcagcactgg | ggccagatgg | taagccctcc | cgtategtag | 3240 |
| ttatctacac | gacggggagt | caggcaacta | tggatgaacg | aaatagacag | atcgctgaga | 3300 |
| taggtgcctc | actgattaag | cattggtaac | tgtc | 3334 |
<210> 25 <211> 4034 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCMlMLG
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.tXt
| <400> 25 | ||||||
| ctggagatcc | tgataaaatc | atgaaaaatt | tatttgcttt | gtgagcggat | aacaattata | 60 |
| atatgtggaa | ttgtgagcgc | tcacaartcc | acataaggag | gtaaaaaaat | gtggaattgt | 120 |
| gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgata | catcarcatc | atcatcatat | ISO |
| gtcccctata | ctaggttatt | ggaaaattaa | gggccttgtg | caacccactc | gacttctttt | 240 |
| ggaatatctt | gaagaaaaat | atgaagagca | tttgtatgag | cgcgatgaag | gtgataaatg | 300 |
| gcgaaacaaa | aagtttgaat | tgggtttgga | gtttcccaat | cttccttatt | atattgatgg | 360 |
| tgatgttaaa | ttaacacagt | ctatggccat | catacgttat | atagctgaca | agcacaacat | 420 |
| gttgggtggt | tgtccaaaag | agcgtgcaga | gatttcaatg | cttgaaggag | cggttttgga | 480 |
| tattagatac | ggtgtttcga | gaattgcata | tagtaaagac | tttgaaactc | tcaaagttga | 540 |
| ttttcttagc | aagctaccrg | aaatgctgaa | aatgttcgaa | gatcgtttat | gtcataaaac | 600 |
| atatttaaat | ggtgatcatg | taacccatcc | tgacttcatg | ttgtatgacg | ctcttgatgt | 660 |
| tgttttatac | atggacccaa | tgtgcctgga | tgcgttccca | aaattagttt | gttttaaaaa | 720 |
| acgtattgaa | gctatcccac | aaattgataa | gtacttgaaa | tccagcaagt | atatagcatg | 780 |
| gcctttgcag | ggctggcaag | ccacgtttgg | tggtggcgac | catcctccaa | aatcggatct | 840 |
| ggttccgcgt | ggatccccag | gaattcccgg | gtcgactcga | gcggccgcat | cgtgggaact | 900 |
| gcagatgaat | tcgagctcgg | atccaagatc | ttctagacat | atgatcgata | agcttgatat | 960 |
| cggtaccacc | atggtcgacc | tcgagcccgg | ggctagcata | accccttggg | gcctctaaac | 1020 |
| gggtcttgag | gggttttttg | gggaaatttc | cccgagggaa | atttccccga | ctcatgacca | 1080 |
| aaatccctta | acgtgagtta | cgcgcgcgtc | gttccactga | gcgtcagacc | ccgtagaaaa | 1140 |
| gatcaaagga | tcttcttgag | atcctttttt | tctgcgcgta | atctgctgct | tgcaaacaaa | 1200 |
| aaaaccaccg | ctaccagcgg | tggtttgttt | gccggatcaa | gagctaccaa | ctctttttcc | 1260 |
| gaaggtaact | ggcttcagca | gagcgcagat | accaaatact | gttcttctag | tgtagccgta | 1320 |
| gttagcccac | cacttcaaga | actctgtagc | accgcctaca | tacctcgctc | tgctaatcct | 1380 |
| gttaccagtg | gctgctgcca | gtggcgataa | gtcgtgtctt | accgggttgg | actcaagacg | 1440 |
| atagttaccg | gataaggcgc | agcggtcggg | ctgaacgggg | ggttcgtgca | cacagcccag | 1500 |
| cttggagcga | acgacctaca | ccgaactgag | atacctacag | cgtgagctat | gagaaagcgc | 1560 |
| cacgcttccc | gaagggagaa | aggcggacag | gtatccggta | agcggcaggg | tcggaacagg | 1620 |
| agagcgcacg | agggagcttc | cagggggaaa | cgcctggtat | ctttatagtc | ctgtcgggtt | 1680 |
| tcgccacctc | tgacttgagc | gtcgattttt | gtgatgctcg | tcaggggggc | ggagcctatg | 1740 |
| gaaaaacgcc | agcaacgcgg | cctttttacg | gttcctggcc | ttttgctggc | cttttgctca | 1800 |
| catgttcttt | cctgcgttat | cccctgattc | tgtggataac | cgtattaccg | cctttgagtg | 1860 |
| agctgatacc | gctctttgcg | ataggtaaag | gcgcgccatc | gaatggcgca | aaacctttcg | 1920 |
| cggtatggca | tgatagcgcc | cggaagagag | tcaattcagg | gtggtgaatg | gtggtgaatg | 1980 |
| tgaaaccagt | aacgttatac | gatgtcgcag | agtatgccgg | tgtctcttat | cagaccgttt | 2040 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| cccgcgtggt | gaaccaggcc | agccacgttt | ctgcgaaaac | gcgggaaaaa | gtggaagcgg | 2100 |
| cgatggcgga | gctgaattac | attcccaacc | gcgtggcaca | acaactggcg | ggcaaacagt | 2160 |
| cgttgctgat | tggcgttgcc | acctccagtc | tggccctgca | cgcgccgtcg | caaattgtcg | 2220 |
| cggcgattaa | atctcgcgcc | gatcaactgg | gtgccagcgt | ggtggtgtcg | atggtagaac | 2280 |
| gaagcggcgt | cgaagcctgt | aaagcggcgg | tgcacaatct | tctcgcgcaa | cgcgtcagtg | 2340 |
| ggctgatcat | taactatccg | ctggatgacc | aggatgccat | tgctgtggaa | gctgcctgca | 2400 |
| ctaatgttcc | ggcgttattt | cttgatgtct | ctgaccagac | acccatcaac | agtattattt | 2460 |
| tctcccatga | agacggtacg | cgactgggcg | tggagcatct | ggtcgcattg | ggtcaccagc | 2520 |
| aaatcgcgct | gttagcgggc | ccattaagtt | ctgtctcggc | gcgtctgcgt | ctggctggct | 2580 |
| ggcataaata | tctcactcgc | aatcaaattc | agccgatagc | ggaacgggaa | ggcgactgga | 2640 |
| gtgccatgtc | cggttttcaa | caaaccatgc | aaatgctgaa | tgagggcatc | gttcccactg | 2700 |
| cgatgctggt | tgccaacgat | cagatggcgc | tgggcgcaat | gcgcgccatt | accgagtccg | 2760 |
| ggctgcgcgt | tggtgcggat | atctcggtag | tgggatacga | cgataccgaa | gacagctcat | 2820 |
| gttatatccc | gccgtcaacc | accatcaaac | aggattttcg | cctgctgggg | caaaccagcg | 2880 |
| tggaccgctt | gctgcaactc | tctcagggcc | aggcggtgaa | gggcaatcag | ctgttgcccg | 2940 |
| tctcactggt | gaaaagaaaa | accaccctgg | cgcccaatac | gcaaaccgcc | tctccccgcg | 3000 |
| cgttggccga | ttcattaatg | cagctggcac | gacaggtttc | ccgactggaa | agcgggcagt | 3060 |
| gagcgcaact | trgcgatagg | taaatttttc | taaatacatt | caaatatgta | tccgctcatg | 3120 |
| agacaataac | cctgataaat | gcttcaataa | tattgaaaaa | ggaagagtat | gagtattcaa | 3180 |
| catttccgtg | tcgcccttat | tccctttttt | gcggcatttt | gccttcctgt | ttttgctcac | 3240 |
| ccagaaacgc | tggtgaaagt | aaaagatgct | gaagatcagt | tgggtgcacg | agtgggttac | 3300 |
| atcgaactgg | atctcaacag | cggtaagatc | cttgagagtt | ttcgccccga | agaacgtttt | 3360 |
| ccaatgatga | gcacttttaa | agttctgcta | tgtggcgcgg | tattatcccg | tattgacgcc | 3420 |
| gggcaagagc | aactcggtcg | ccgcatacac | tattctcaga | atgacttggt | tgagtactca | 3480 |
| ccagtcacag | aaaagcatct | tacggatggc | atgacagtaa | gagaattatg | cagtgctgcc | 3540 |
| ataaccatga | gtgataacac | tgcggccaac | ttacttctga | caacgatcgg | aggaccgaag | 3600 |
| gagctaaccg | cttttttgca | caacatgggg | gatcatgtaa | ctcgccttga | tcgttgggaa | 3660 |
| ccggagctga | atgaagccat | accaaacgac | gagcgtgaca | ccacgatgcc | tgtagcaatg | 3720 |
| gcaacaacgt | tgcgcaaact | attaactggc | gaactactta | ctctagcttc | ccggcaacaa | 3750 |
| ttaatagact | ggatggaggc | ggataaagtt | gcaggaccac | ttctgcgctc | ggcccttccg | 3840 |
| gctggctggt | ttattgctga | taaatctgga | gccggtgagc | gtgggtctcg | cggtatcatt | 3900 |
| gcagcactgg | ggccagatgg | taagccctcc | cgtatcgtag | ttatctacac | gacggggagt | 3960 |
| caggcaacta | tggatgaacg | aaatagacag | atcgctgaga | taggtgcctc | actgattaag | 4020 |
cattggtaac tgtc
4034
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.tXt <210> 26 <211> 4007 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCM2MLG <400> 26
| ctggagatcc | tgatataata | cgactcacta | taggggtgtg | gaattgtgag | cgctcacaat | 60 |
| tccacataag | gaggtaaaaa | aatgtggaat | tgtgagcgct | cacaattcca | cataaggagg | 120 |
| taaaaaaatg | atacatcatc | atcatcatca | tatgtcccct | atactaggtt | attggaaaat | 180 |
| taagggcctt | gtgcaaccca | ctcgacttct | tttggaatat | cttgaagaaa | aatatgaaga | 240 |
| gcatttgtat | gagcgcgatg | aaggtgataa | atggcgaaac | aaaaagtttg | aattgggttt | 300 |
| ggagtttccc | aatcttcctt | attatattga | tggtgatgtt | aaattaacac | agtctatggc | 360 |
| catcatacgt | tatatagctg | acaagcacaa | catgttgggt | ggttgtccaa | aagagcgtgc | 420 |
| agagatttca | atgcttgaag | gagcggtttt | ggatattaga | tacggtgttt | cgagaattgc | 480 |
| atatagtaaa | gactttgaaa | ctctcaaagt | tgattttctt | agcaagctac | ctgaaatgct | 540 |
| gaaaatgttc | gaagatcgtt | tatgtcataa | aacatattta | aatggtgatc | atgtaaccca | 600 |
| tcctgacttc | atgttgtatg | acgctcttga | tgttgtttta | tacatggacc | caatgtgcct | 660 |
| ggatgcgttc | ccaaaattag | tttgttttaa | aaaacgtatt | gaagctatcc | cacaaattga | 720 |
| taagtacttg | aaatccagca | agtatatagc | atggcctttg | cagggctggc | aagccacgtt | 780 |
| tggtggtggc | gaccatcctc | caaaatcgga | tctggttccg | cgtggatccc | cz ci a ci L L cz | 840 |
| cgggtcgact | cgagcggccg | catcgtggga | actgcagatg | aattcgagct | cggatccaag | 900 |
| atcttctaga | catatgatcg | ataagcttga | tatcggtacc | accatggtcg | acctcgagcc | 960 |
| cggggctagc | ataacccctt | ggggcctcta | aacgggtctt | gaggggtttt | ttggggaaat | 1020 |
| ttccccgagg | gaaatttccc | cgactcatga | ccaaaatccc | ttaacgtgag | ttacgcgcgc | 1080 |
| gtcgttccac | tgagcgtcag | accccgtaga | aaagatcaaa | ggatcttctt | gagatccttt | 1140 |
| ttttctgcgc | gtaatctgct | gcttgcaaac | aaaaaaacca | ccgctaccag | cggtggtttg | 1200 |
| tttgccggat | caagagctac | caactctttt | tccgaaggta | actggcttca | gcagagcgca | 1260 |
| gataccaaat | actgttcttc | tagtgtagcc | gtagttagcc | caccacttca | agaactctgt | 1320 |
| agcaccgcct | acatacctcg | ctctgctaat | cctgttacca | gtggctgctg | ccagtggcga | 1380 |
| taagtcgtgt | cttaccgggt | tggactcaag | acgatagtta | ccggataagg | cgcagcggtc | 1440 |
| gggctgaacg | gggggttcgt | gcacacagcc | cagcttggag | cgaacgacct | acaccgaact | 1500 |
| gagataccta | cagcgtgagc | tatgagaaag | cgccacgctt | cccgaaggga | gaaaggcgga | 1560 |
| caggtatccg | gtaagcggca | gggtcggaac | aggagagcgc | acgagggagc | ttccaggggg | 1620 |
| aaacgcctgg | tatctttata | gtcctgtcgg | gtttcgccac | ctctgacttg | agcgtcgatt | 1680 |
| tttgtgatgc | tcgtcagggg | ggcggagcct | atggaaaaac | gccagcaacg | cggccttttt | 1740 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| acggttcctg | gccttttgct | ggccttttgc | tcacatgttc | tttcctgcgt | tatcccctga | 1800 |
| ttctgtggat | aaccgtatta | ccgcctttga | gtgagctgat | accgctcttt | gcgataggta | 1860 |
| aaggcgcgcc | atcgaatggc | gcaaaacctt | tcgcggtatg | gcatgatagc | gcccggaaga | 1920 |
| gagtcaattc | agggtggtga | atggtggtga | atgtgaaacc | agtaacgtta | tacgatgtcg | 1980 |
| cagagtatgc | cggtgtctct | tatcagaccg | tttcccgcgt | ggtgaaccag | gccagccacg | 2040 |
| tttctgcgaa | aacgcgggaa | aaagtggaag | cggcgatggc | ggagctgaat | tacattccca | 2100 |
| accgcgtggc | acaacaactg | gcgggcaaac | agtcgttgct | gattggcgtt | gccacctcca | 2160 |
| gtctggccct | gcacgcgccg | tcgcaaattg | tcgcggcgat | taaatctcgc | gccgatcaac | 2220 |
| tgggtgccag | cgtggtggtg | tcgatggtag | aacgaagcgg | cgtcgaagcc | tgtaaagcgg | 2280 |
| cggtgcacaa | tcttctcgcg | caacgcgtca | gtgggctgat | cattaactat | ccgctggatg | 2340 |
| accaggatgc | cattgctgtg | gaagctgcct | gcactaatgt | tccggcgtta | tttcttgatg | 2400 |
| tctctgacca | gacacccatc | aacagtatta | ttttctccca | tgaagacggt | acgcgactgg | 2460 |
| gcgtggagca | tctggtcgca | ttgggtcacc | agcaaatcgc | gctgttagcg | ggcccattaa | 2520 |
| gttctgtctc | ggcgcgtctg | cgtctggctg | gctggcataa | atatctcact | cgcaatcaaa | 2580 |
| ttcagccgat | agcggaacgg | gaaggcgact | ggagtgccat | gtccggtttt | caacaaacca | 2640 |
| tgcaaatgct | gaatgagggc | atcgttccca | ctgcgatgct | ggttgccaac | gatcagatgg | 2700 |
| cgctgggcgc | aatgcgcgcc | attaccgagt | ccgggctgcg | cgttggtgcg | gatatctcgg | 2760 |
| tagtgggata | cgacgatacc | gaagacagct | catgttatat | cccgccgtca | accaccatca | 2820 |
| aacaggattt | tcgcctgctg | gggcaaacca | gcgtggaccg | cttgctgcaa | ctctctcagg | 2880 |
| gccaggcggt | gaagggcaat | cagctgttgc | ccgtctcact | ggtgaaaaga | aaaaccaccc | 2940 |
| tggcgcccaa | tacgcaaacc | gcctctcccc | gcgcgttggc | cgattcatta | atgcagctgg | 3000 |
| cacgacaggt | ttcccgactg | gaaagcgggc | agtgagcgca | actttgcgat | aggtaaattt | 3060 |
| ttctaaatac | attcaaatat | gtatccgctc | atgagacaat | aaccctgata | aatgcttcaa | 3120 |
| taatattgaa | aaaggaagag | tatgagtatt | caacatttcc | gtgtcgccct | tattcccttt | 3180 |
| tttgcggcat | tttgccttcc | tgtttttgct | cacccagaaa | cgctggtgaa | agtaaaagat | 3240 |
| gctgaagatc | agttgggtgc | acgagtgggt | tacatcgaac | tggatctcaa | cagcggtaag | 3300 |
| atccttgaga | gttttcgccc | cgaagaacgt | tttccaatga | tgagcacttt | taaagttctg | 3360 |
| ctatgtggcg | cggtattatc | ccgtattgac | gccgggcaag | agcaactcgg | tcgccgcata | 3420 |
| cactattctc | agaatgactt | ggttgagtac | tcaccagtca | cagaaaagca | tcttacggat | 3480 |
| ggcatgacag | taagagaatt | atgcagtgct | gccataacca | tgagtgataa | cactgcggcc | 3540 |
| aacttacttc | tgacaacgat | cggaggaccg | aaggagctaa | ccgctttttt | gcacaacatg | 3600 |
| ggggatcatg | taactcgcct | tgatcgttgg | gaaccggagc | tgaatgaagc | cataccaaac | 3660 |
| gacgagcgtg | acaccacgat | gcctgtagca | atggcaacaa | cgttgcgcaa | actattaact | 3720 |
| ggcgaactac | ttactctagc | ttcccggcaa | caattaatag | actggatgga | ggcggataaa | 3780 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt gttgcaggac cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct 3840 ggagccggtg agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc 3900 tcccgtatcg tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga 3960 cagatcgctg agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtc 4007 <210> 27 <211> 4030
| <212> DNA <213> artifi ciał | ||||||
| <220> <223> pBCM3MLG | ||||||
| <400> 27 ctggagatcc | tgataattct | gaaatgagct | gttgacaatt | aatcatccgg | ctcgtataat | 60 |
| gtggaattgt | gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgtgg | aattgtgagc | 120 |
| gctcacaatt | ccacataagg | aggtaaaaaa | atgatacatc | atcatcatca | tcatatgtcc | 180 |
| cctatactag | gttattggaa | aattaagggc | cttgtgcaac | ccactcgact | tcttttggaa | 240 |
| tatcttgaag | aaaaatatga | agagcatttg | tatgagcgcg | atgaaggtga | taaatggcga | 300 |
| aacaaaaagt | ttgaattggg | tttggagttt | cccaatcttc | cttattatat | tgatggtgat | 360 |
| gttaaattaa | cacagtctat | ggccatcata | cgttatatag | ctgacaagca | caacatgttg | 420 |
| ggtggttgtc | caaaagagcg | tgcagagatt | tcaatgcttg | aaggagcggt | tttggatatt | 480 |
| agatacggtg | tttcgagaat | tgcatatagt | aaagactttg | aaactctcaa | agttgatttt | 540 |
| cttagcaagc | tacctgaaat | gctgaaaatg | ttcgaagatc | gtttatgtca | taaaacatat | 600 |
| ttaaatggtg | atcatgtaac | ccatcctgac | ttcatgttgt | atgacgctct | tgatgttgtt | 660 |
| ttatacatgg | acccaatgtg | cctggatgcg | ttcccaaaat | tagtttgttt | taaaaaacgt | 720 |
| attgaagcta | tcccacaaat | tgataagtac | ttgaaatcca | gcaagtatat | agcatggcct | 780 |
| ttgcagggct | ggcaagccac | gtttggtggt | ggcgaccatc | ctccaaaatc | ggatctggtt | 840 |
| ccgcgtggat | ccccaggaat | tcccgggtcg | actcgagcgg | ccgcatcgtg | ggaactgcag | 900 |
| atgaattcga | gctcggatcc | aagatcttct | agacatatga | tcgataagct | tgatatcggt | 960 |
| accaccatgg | tcgacctcga | gcccggggct | agcataaccc | cttggggcct | ctaaacgggt | 1020 |
| cttgaggggt | tttttgggga | aatttccccg | agggaaattt | ccccgactca | tgaccaaaat | 1080 |
| cccttaacgt | gagttacgcg | cgcgtcgttc | cactgagcgt | cagaccccgt | agaaaagatc | 1140 |
| aaaggatctt | cttgagatcc | tttttttctg | cgcgtaatct | gctgcttgca | aacaaaaaaa | 1200 |
| ccaccgctac | cagcggtggt | ttgtttgccg | gatcaagagc | taccaactct | ttttccgaag | 1260 |
| gtaactggct | tcagcagagc | gcagatacca | aatactgttc | ttctagtgta | gccgtagtta | 1320 |
| gcccaccact | tcaagaactc | tgtagcaccg | cctacatacc | tcgctctgct | aatcctgtta | 1380 |
| ccagtggctg | ctgccagtgg | cgataagtcg | tgtcttaccg | ggttggactc | aagacgatag | 1440 |
| ttaccggata | aggcgcagcg | gtcgggctga | acggggggtt | cgtgcacaca | gcccagcttg | 1500 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| gagcgaacga | cctacaccga | actgagatac | ctacagcgtg | agctatgaga | aagcgccacg | 1560 |
| cttcccgaag | ggagaaaggc | ggacaggtat | ccggtaagcg | gcagggtcgg | aacaggagag | 1620 |
| cgcacgaggg | agcttccagg | gggaaacgcc | tggtatcttt | atagtcctgt | cgggtttcgc | 1680 |
| cacctctgac | ttgagcgtcg | atttttgtga | tgctcgtcag | gggggcggag | cctatggaaa | 1740 |
| aacgccagca | acgcggcctt | tttacggttc | ctggcctttt | gctggccttt | tgctcacatg | 1800 |
| ttctttcctg | cgttatcccc | tgattctgtg | gataaccgta | ttaccgcctt | tgagtgagct | 1860 |
| gataccgctc | tttgcgatag | gtaaaggcgc | gccatcgaat | ggcgcaaaac | ctttcgcggt | 1920 |
| atggcatgat | agcgcccgga | agagagtcaa | ttcagggtgg | tgaatggtgg | tgaatgtgaa | 1980 |
| accagtaacg | ttatacgatg | tcgcagagta | tgccggtgtc | tcttatcaga | ccgtttcccg | 2040 |
| cgtggtgaac | caggccagcc | acgtttctgc | gaaaacgcgg | gaaaaagtgg | aagcggcgat | 2100 |
| ggcggagctg | aattacattc | ccaaccgcgt | ggcacaacaa | ctggcgggca | aacagtcgtt | 2160 |
| gctgattggc | gttgccacct | ccagtctggc | cctgcacgcg | ccgtcgcaaa | ttgtcgcggc | 2220 |
| gattaaatct | cgcgccgatc | aactgggtgc | cagcgtggtg | gtgtcgatgg | tagaacgaag | 2280 |
| cggcgtcgaa | gcctgtaaag | cggcggtgca | caatcttctc | gcgcaacgcg | tcagtgggct | 2340 |
| gatcattaac | tatccgctgg | atgaccagga | tgccattgct | gtggaagctg | cctgcactaa | 2400 |
| tgttccggcg | ttatttcttg | atgtctctga | ccagacaccc | atcaacagta | ttattttctc | 2460 |
| ccatgaagac | ggtacgcgac | tgggcgtgga | gcatctggtc | gcattgggtc | accagcaaat | 2520 |
| cgcgctgtta | gcgggcccat | taagttctgt | ctcggcgcgt | ctgcgtctgg | ctggctggca | 2580 |
| taaatatctc | actcgcaatc | aaattcagcc | gatagcggaa | cgggaaggcg | actggagtgc | 2640 |
| catgtccggt | tttcaacaaa | ccatgcaaat | gctgaatgag | ggcatcgttc | ccactgcgat | 2700 |
| gctggttgcc | aacgatcaga | tggcgctggg | cgcaatgcgc | gccattaccg | agtccgggct | 2760 |
| gcgcgttggt | gcggatatct | cggtagtggg | atacgacgat | accgaagaca | gctcatgtta | 2820 |
| tatcccgccg | tcaaccacca | tcaaacagga | ttttcgcctg | ctggggcaaa | ccagcgtgga | 2880 |
| ccgcttgctg | caactctctc | agggccaggc | ggtgaagggc | aatcagctgt | tgcccgtctc | 2940 |
| actggtgaaa | agaaaaacca | ccctggcgcc | caatacgcaa | accgcctctc | cccgcgcgtt | 3000 |
| ggccgattca | ttaatgcagc | tggcacgaca | ggtttcccga | ctggaaagcg | ggcagtgagc | 3060 |
| gcaactttgc | gataggtaaa | tttttctaaa | tacattcaaa | tatgtatccg | ctcatgagac | 3120 |
| aataaccctg | ataaatgctt | caataatatt | gaaaaaggaa | gagtatgagt | attcaacatt | 3180 |
| tccgtgtcgc | ccttattccc | ttttttgcgg | cattttgcct | tcctgttttt | gctcacccag | 3240 |
| aaacgctggt | gaaagtaaaa | gatgctgaag | atcagttggg | tgcacgagtg | ggttacatcg | 3300 |
| aactggatct | caacagcggt | aagatccttg | agagttttcg | ccccgaagaa | cgttttccaa | 3360 |
| tgatgagcac | ttttaaagtt | ctgctatgtg | gcgcggtatt | atcccgtatt | gacgccgggc | 3420 |
| aagagcaact | cggtcgccgc | atacactatt | ctcagaatga | cttggttgag | tactcaccag | 3480 |
| tcacagaaaa | gcatcttacg | gatggcatga | cagtaagaga | attatgcagt | gctgccataa | 3540 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc 3600 taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg 3660 agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa 3720 caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa 3780 tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg 3840 gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag 3900 cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg 3960 caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt 4020 ggtaactgtc 4030 <210> 28 <211> 3835 <212> DNA <213> artificial <22O>
<223> pBCM4MLG <400> 28 ctggagatcc tgataaaatc atgaaaaatt tatttgcttt gtgagcggat aacaattata 60 atatgtggaa ttgtgagcgc tcacaattcc acataaggag gtaaaaaaat gtggaattgt 120 gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgata catcatcatc atcatcatat 180 gtcccctata ctaggttatt ggaaaattaa gggccttgtg caacccactc gacttctttt 240 ggaatatctt gaagaaaaat atgaagagca tttgtatgag cgcgatgaag gtgataaatg 300 gcgaaacaaa aagtttgaat tgggtttgga gtttcccaat cttccttatt atattgatgg 360 tgatgttaaa ttaacacagt ctatggccat catacgttat atagctgaca agcacaacat 420 gttgggtggt tgtccaaaag agcgtgcaga gatttcaatg cttgaaggag cggttttgga 480 tattagatac ggtgtttcga gaattgcata tagtaaagac tttgaaactc tcaaagttga 540 ttttcttagc aagctacctg aaatgctgaa aatgttcgaa gatcgtttat gtcataaaac 600 atatttaaat ggtgatcatg taacccatcc tgacttcatg ttgtatgacg ctcttgatgt 660 tgttttatac atggacccaa tgtgcctgga tgcgttccca aaattagttt gttttaaaaa 720 acgtattgaa gctatcccac aaattgataa gtacttgaaa tccagcaagt atatagcatg 780 gcctttgcag ggctggcaag ccacgtttgg tggtggcgac catcctccaa aatcggatct 840 ggttccgcgt ggatccccag gaattcccgg gtcgactcga gcggccgcat cgtgggaact 900 gcagatgaat tcgagctcgg atccaagatc ttctagacat atgatcgata agcttgatat 960 cggtaccacc atggtcgacc tcgagcccgg ggctagcata accccttggg gcctctaaac 1020 gggtcttgag gggttttttg gggaaatttc cccgaagatc aaaggatctt cttgagatcc 1080 tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt 1140 ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc 1200
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta | ggccaccact | tcaagaactc | 1260 | |||
| tgtagcaccg | cctacatacc | tcgctctgct | aatcctgtta | ccagtggctg | ctgccagtgg | 1320 |
| cgataagtcg | tgtcttaccg | ggttgaactc | aagacgatag | ttaccggata | aggcgcagcg | 1380 |
| gtcgggctga | acggggggtt | cgtgcacaca | gcccagcttg | gagcgaacga | cctacaccga | 1440 |
| actgagatac | ctacagcgtg | agctatgaga | aagcgccacg | cttcccgaag | ggagaaaggc | 1500 |
| ggacaggtat | ccggtaagcg | gcagggtcgg | aacaggagag | cgcacgaggg | agcttccagg | 1560 |
| gggaaacgcc | tggtatcttt | atagtcctgt | cgggtttcgc | cacctctgac | ttgagcgtcg | 1620 |
| atttttgtga | tgctcgtcag | gggggcggag | cctatggaaa | aacgccagca | acgcgtttgc | 1680 |
| gataggtaaa | ggcgcgccat | cgaatggcgc | aaaacctttc | gcggtatggc | atgatagcgc | 1740 |
| ccggaagaga | gtcaattcag | ggtggtgaat | ggtggtgaat | gtgaaaccag | taacgttata | 1800 |
| cgatgtcgca | gagtatgccg | gtgtctctta | tcagaccgtt | tcccgcgtgg | tgaaccaggc | 1860 |
| cagccacgtt | trtgcgaaaa | cgcgggaaaa | agtggaagcg | gcgatggcgg | agctgaatta | 1920 |
| cattcccaac | cgcgtggcac | aacaactggc | gggcaaacag | tcgttgctga | ttggcgttgc | 1980 |
| cacctccagt | ctggccctgc | acgcgccgtc | gcaaattgtc | gcggcgatta | aatctcgcgc | 2040 |
| cgatcaactg | ggtgccagcg | tggtggtgtc | gatggtagaa | cgaagcggcg | tcgaagcctg | 2100 |
| taaagcggcg | gtgcacaatc | ttctcgcgca | acgcgtcagt | gggctgatca | ttaactatcc | 2160 |
| gctggatgac | caggatgcca | ttgctgtgga | agctgcctgc | actaatgttc | cggcgttatt | 2220 |
| tcttgatgtc | tctgaccaga | cacccatcaa | cagtattatt | ttctcccatg | aagacggtac | 2280 |
| gcgactgggc | gtggagcatc | tggtcgcatt | gggtcaccag | caaatcgcgc | tgttagcggg | 2340 |
| cccattaagt | tctgtctcgg | cgcgtctgcg | tctggctggc | tggcataaat | atctcactcg | 2400 |
| caatcaaatt | cagccgatag | cggaacggga | aggcgactgg | agtgccatgt | ccggttttca | 2460 |
| acaaaccatg | caaatgctga | atgagggcat | cgttcccact | gcgatgctgg | ttgccaacga | 2520 |
| tcagatggcg | ctgggcgcaa | tgcgcgccat | taccgagtcc | gggctgcgcg | ttggtgcgga | 2580 |
| tatctcggta | gtgggatacg | acgataccga | agacagctca | tgttatatcc | cgccgtcaac | 2640 |
| caccatcaaa | caggattttc | gcctgctggg | gcaaaccagc | gtggaccgct | tgctgcaact | 2700 |
| ctctcagggc | caggcggtga | agggcaatca | gctgttgccc | gtctcaetgg | tgaaaagaaa | 2760 |
| aaccaccctg | gcgcccaata | cgcaaaccgc | ctctccccgc | gcgttggccg | attcattaat | 2820 |
| gcagctggca | cgacaggttt | cccgactgga | aagcgggcag | tgagcgcaac | tttgcgatag | 2880 |
| gtaaattttt | ctaaatacat | tcaaatatgt | atccgctcat | gagacaataa | ccctgataaa | 2940 |
| tgcttcaata | atattgaaaa | aggaagagta | tgagtattca | acatttccgt | gtcgccctta | 3000 |
| ttcccttttt | tgcggcattt | tgccttcctg | tttttgctca | cccagaaacg | ctggtgaaag | 3060 |
| taaaagatgc | tgaagatcag | ttgggtgcac | gagtgggtta | catcgaactg | gatctcaaca | 3120 |
| gcggtaagat | ccttgagagt | tttcgccccg | aagaacgttt | tccaatgatg | agcactttta | 3180 |
| aagttctgct | atgtggcgcg | gtattatccc | gtattgacgc | cgggcaagag | caactcggtc | 3240 |
PL 228 024 Β1
5EQLTXT.txt
| gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc | 3300 |
| ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca | 3360 |
| ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc | 3420 |
| acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca | 3480 |
| taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac | 3540 |
| tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg | 3600 |
| cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg | 3660 |
| ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg | 3720 |
| gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac | 3780 |
| gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtc | 3835 |
<210> 29 <211> 3808 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> PBCM5MLG <400> 29
| ctggagatcc | tgatataata cgactcacta taggggtgtg gaattgtgag cgctcacaat | 60 |
| tecacataag | gaggtaaaaa aatgtggaat tgtgagcgct cacaattcca cataaggagg | 120 |
| taaaaaaatg | atacatcatc atcatcatca tatgtcccct atactaggtt attggaaaat | 180 |
| taagggcctt | gtgcaaccca ctcgacttct tttggaatat cttgaagaaa aatatgaaga | 240 |
| gcatttgtat | gagcgcgatg aaggtgataa atggcgaaac aaaaagtttg aattgggttt | 300 |
| ggagtttccc | aatcttcctt attatattga tggtgatgtt aaattaacac agtctatggc | 360 |
| catcatacgt | tatatagctg acaagcacaa catgttgggt ggttgtccaa aagagcgtgc | 420 |
| agagatttca | atgcttgaag gagcggtttt ggatattaga tacggtgttt cgagaattgc | 480 |
| atatagtaaa | gactttgaaa ctctcaaagt tgattttctt agcaagctac ctgaaatgct | 540 |
| gaaaatgttc | gaagatcgtt tatgtcataa aacatattta aatggtgatc atgtaaccca | 600 |
| tcctgacttc | atgttgtatg acgctcttga tgttgtttta tacatggacc caatgtgcct | 660 |
| ggatgcgttc | ccaaaattag tttgttttaa aaaacgtatt gaagctatcc cacaaattga | 720 |
| taagtacttg | aaatccagca agtatatagc atggcctttg cagggctggc aagccacgtt | 780 |
| tggtggtggc | gaccatcctc caaaatcgga tctggttccg cgtggatccc caggaattcc | 840 |
| cgggtcgact | cgagcggccg catcgtggga actgcagatg aattcgagct cggatccaag | 900 |
| atcttctaga | catatgatcg ataagcttga tatcggtacc accatggtcg acctcgagcc | 960 |
| cggggctagc | ataacccctt ggggcctcta aacgggtctt gaggggtttt ttggggaaat | 1020 |
| ttccccgaag | atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt | 1080 |
| gcaaacaaaa | aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac | 1140 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tctttttccg | aaggtaactg | gcttcagcag | agcgcagata | ccaaatactg | tccttctagt | 1200 |
| gtagccgtag | ttaggccacc | acttcaagaa | ctctgtagca | ccgcctacat | acctcgctct | 1260 |
| gctaatcctg | ttaccagtgg | ctgctgccag | tggcgataag | tcgtgtctta | ccgggttgga | 1320 |
| ctcaagacga | tagttacegg | ataaggcgca | gcggtcgggc | tgaacggggg | gttcgtgcac | 1380 |
| acagcccagc | ttggagcgaa | cgacctacac | cgaactgaga | tacctacagc | gtgagctatg | 1440 |
| agaaagcgcc | acgcttcccg | aagggagaaa | ggcggacagg | tatccggtaa | gcggcagggt | 1500 |
| cggaacagga | gagcgcacga | gggagcttcc | agggggaaac | gcctggtatc | tttatagtcc | 1560 |
| tgtcgggttt | cgccacctct | gacttgagcg | tcgatttttg | tgatgctcgt | caggggggcg | 1620 |
| gagcctatgg | aaaaacgcca | gcaacgcgtt | tgcgataggt | aaaggcgcgc | catcgaatgg | 1680 |
| cgeaaaacct | ttcgcggtat | ggeatgatag | cgcccggaag | agagtcaatt | cagggtggtg | 1740 |
| aatggtggtg | aatgtgaaac | cagtaacgtt | ataegatgtc | gcagagtatg | ccggtgtctc | 1800 |
| ttatcagacc | gtttcccgcg | tggtgaacca | ggccagccac | gtttctgcga | aaacgcggga | 1860 |
| aaaagtggaa | gcggcgatgg | cggagctgaa | ttacattccc | aaccgcgtgg | cacaacaact | 1920 |
| ggcgggcaaa | cagtcgttgc | tgattggcgt | tgccacctcc | agtctggccc | tgcacgcgcc | 1980 |
| gtcgcaaatt | gtegeggega | ttaaatctcg | cgccgatcaa | ctgggtgcca | gcgtggtggt | 2040 |
| gtcgatggta | gaacgaagcg | gcgtcgaagc | ctgtaaagcg | gcggtgcaca | atcttctcgc | 2100 |
| gcaacgcgtc | agtgggctga | tcattaacta | tccgctggat | gaccaggatg | ccattgctgt | 2160 |
| ggaagctgcc | tgcactaatg | ttccggcgtt | atttettgat | gtctctgacc | agacacccat | 2220 |
| caacagtatt | attttctccc | atgaagacgg | tacgcgactg | ggcgtggagc | atctggtcgc | 2280 |
| attgggtcac | cagcaaatcg | cgctgttagc | gggcccatta | agttctgtct | cggcgcgtct | 2340 |
| gcgtctggct | ggctggcata | aatatctcac | tcgcaatcaa | atteageega | tagcggaacg | 2400 |
| ggaaggcgac | tggagtgcca | tgtccggttt | tcaacaaacc | atgcaaatgc | tgaatgaggg | 2460 |
| catcgttccc | actgcgatgc | tggttgccaa | egateagatg | gcgctgggcg | caatgcgcgc | 2520 |
| cattaccgag | tccgggctgc | gcgttggtgc | ggatateteg | gtagtgggat | acgacgatac | 2580 |
| cgaagacagc | teatgttata | tcccgccgtc | aaccaccatc | aaacaggatt | ttcgcctgct | 2640 |
| ggggcaaacc | agcgtggacc | gettgetgea | actctctcag | ggccaggcgg | tgaagggcaa | 2700 |
| tcagctgttg | cccgtctcac | tggtgaaaag | aaaaaccacc | ctggcgccca | atacgcaaac | 2760 |
| cgcctctccc | cgcgcgttgg | ccgattcatt | aatgcagctg | gcacgacagg | tttcccgact | 2820 |
| ggaaagcggg | cagtgagcgc | aactttgcga | taggtaaatt | tttctaaata | cattcaaata | 2880 |
| tgtatccgct | catgagacaa | taaccctgat | aaatgcttca | ataatattga | aaaaggaaga | 2940 |
| gtatgagtat | tcaacatttc | cgtgtcgccc | ttattccctt | ttttgcggca | ttttgccttc | 3000 |
| ctgtttttgc | tcacccagaa | acgctggtga | aagtaaaaga | tgctgaagat | cagttgggtg | 3060 |
| cacgagtggg | ttacatcgaa | ctggatctca | acagcggtaa | gatccttgag | agttttcgcc | 3120 |
| ccgaagaacg | ttttccaatg | atgagcactt | ttaaagttct | gctatgtggc | gcggtattat | 3180 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat acactattct cagaatgact 3240 tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat 3300 tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt ctgacaacga 3360 tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc 3420 ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga 3480 tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta cttactctag 3540 cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga ccacttctgc 3600 gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaate tggagccggt gagcgtgggt 3660 ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct 3720 acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct gagataggtg 3780 cctcactgat taagcattgg taactgtc 3808 <210> 30 <211> 3831 <212> DNA <213> arfificial <220>
<223> pBCM6MLG <400> 30
| ctggagatcc | tgataattct | gaaatgagct | gttgacaatt | aatcatccgg | ctcgtataat | 60 |
| gtggaattgt | gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgtgg | aattgtgagc | 120 |
| gctcacaatt | ccacataagg | aggtaaaaaa | atgatacatc | atcatcatca | tcatatgtcc | 180 |
| cctatactag | gttattggaa | aattaagggc | cttgtgcaac | ccactcgact | tcttttggaa | 240 |
| tatcttgaag | aaaaatatga | agagcatttg | tatgagcgcg | atgaaggtga | taaatggcga | 300 |
| aacaaaaagt | ttgaattggg | tttggagttt | cccaatcttc | cttattatat | tgatggtgat | 360 |
| gttaaattaa | cacagtctat | ggccatcata | cgttatatag | ctgacaagca | caacatgttg | 420 |
| ggtggttgtc | caaaagagcg | tgcagagatt | tcaatgcttg | aaggagcggt | tttggatatt | 480 |
| agatacggtg | tttcgagaat | tgcatatagt | aaagactttg | aaactctcaa | agttgatttt | 540 |
| cttagcaagc | tacctgaaat | gctgaaaatg | ttcgaagatc | gtttatgtca | taaaacatat | 600 |
| ttaaatggtg | atcatgtaac | ccatcctgac | ttcatgttgt | atgacgctct | tgatgttgtt | 660 |
| ttatacatgg | acccaatgtg | cctggatgcg | ttcceaaaat | tagtttgttt | taaaaaacgt | 720 |
| attgaagcta | tcccacaaat | tgataagtac | ttgaaatcca | gcaagtatat | agcatggcct | 780 |
| ttgcagggct | ggcaagccac | gtttggtggt | ggcgaccatc | ctccaaaatc | ggatctggtt | 840 |
| ccgcgtggat | ccccaggaat | tcccgggtcg | actcgagcgg | ccgcatcgtg | ggaactgcag | 900 |
| atgaattcga | gctcggatcc | aagatcttct | agacatatga | tcgataagct | tgatatcggt | 960 |
| accaccatgg | tcgacctcga | gcccggggct | agcataaccc | cttggggcct | ctaaacgggt | 1020 |
| cttgaggggt | tttttgggga | aatttccccg | aagatcaaag | gatcttcttg | agatcctttt | 1080 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| tttctgcgcg | taatctgctg | cttgcaaaca | aaaaaaccac | cgctaccagc | ggtggtttgt | 1140 |
| ttgccggatc | aagagctacc | aactcttttt | ccgaaggtaa | ctggcttcag | cagagcgcag | 1200 |
| ataccaaata | ctgtccttct | agtgtagccg | tagttaggcc | accacttcaa | gaactctgta | 1260 |
| gcaccgccta | catacctcgc | tctgctaatc | ctgttaccag | tggctgctgc | cagtggcgat | 1320 |
| aagtcgtgtc | ttaccgggtt | ggactcaaga | cgatagttac | cggataaggc | gcagcggtcg | 1380 |
| ggctgaacgg | ggggttcgtg | cacacagccc | agcttggagc | gaacgaccta | caccgaactg | 1440 |
| agatacctac | agcgtgagct | atgagaaagc | gccacgcttc | ccgaagggag | aaaggcggac | 1500 |
| aggtatccgg | taagcggcag | ggtcggaaca | ggagagcgca | cgagggagct | tccaggggga | 1560 |
| aacgcctggt | atctttatag | tcctgtcggg | tttcgccacc | tctgacttga | gcgtcgattt | 1620 |
| ttgtgatgct | cgtcaggggg | gcggagccta | tggaaaaacg | ccagcaacgc | gtttgcgata | 1680 |
| ggtaaaggcg | cgccatcgaa | tggcgcaaaa | cctttcgcgg | tatggcatga | tagcgcccgg | 1740 |
| aagagagtca | attcagggtg | gtgaatggtg | gtgaatgtga | aaccagtaac | gttatacgat | 1800 |
| gtcgcagagt | atgccggtgt | ctcttatcag | accgtttccc | gcgtggtgaa | ccaggccagc | 1860 |
| cacgtttctg | cgaaaacgcg | ggaaaaagtg | gaagcggcga | tggcggagct | gaattacatt | 1920 |
| cccaaccgcg | tggcacaaca | actggcgggc | aaacagtcgt | tgctgattgg | cgttgccacc | 1980 |
| tccagtctgg | ccctgcacgc | gccgtcgcaa | attgtcgcgg | cgattaaatc | tcgcgccgat | 2040 |
| caactgggtg | ccagcgtggt | ggtgtcgatg | gtagaacgaa | gcggcgtcga | agcctgtaaa | 2100 |
| gcggcggtgc | acaatcttct | cgcgcaacgc | gtcagtgggc | tgatcattaa | ctatccgctg | 2160 |
| gatgaccagg | atgccattgc | tgtggaagct | gcctgcacta | atgttccggc | gttatttctt | 2220 |
| gatgtctctg | accagacacc | catcaacagt | attattttct | cccatgaaga | cggtacgcga | 2280 |
| ctgggcgtgg | agcatctggt | cgcattgggt | caccagcaaa | tcgcgctgtt | agcgggccca | 2340 |
| ttaagttctg | tctcggcgcg | tctgcgtctg | g ct g g ct g g c | ataaatatct | cactcgcaat | 2400 |
| caaattcagc | cgatagcgga | acgggaaggc | gactggagtg | ccatgtccgg | ttttcaacaa | 2460 |
| accatgcaaa | tgctgaatga | gggcatcgtt | cccactgcga | tgctggttgc | caacgatcag | 2520 |
| atggcgctgg | gcgcaatgcg | cgccattacc | gagtccgggc | tgcgcgttgg | tgcggatatc | 2580 |
| tcggtagtgg | gatacgacga | taccgaagac | agctcatgtt | atatcccgcc | gtcaaccacc | 2640 |
| atcaaacagg | attttcgcct | gctggggcaa | accagcgtgg | accgcttgct | gcaactctct | 2700 |
| cagggccagg | cggtgaaggg | caatcagctg | ttgcccgtct | cactggtgaa | aagaaaaacc | 2760 |
| accctggcgc | ccaatacgca | aaccgcctct | ccccgcgcgt | tggccgattc | attaatgcag | 2820 |
| ctggcacgac | aggtttcccg | actggaaagc | gggcagtgag | cgcaactttg | cgataggtaa | 2880 |
| atttttctaa | atacattcaa | atatgtatcc | gctcatgaga | caataaccct | gataaatgct | 2940 |
| tcaataatat | tgaaaaagga | agagtatgag | tattcaacat | ttccgtgtcg | cccttattcc | 3000 |
| cttttttgcg | gcattttgcc | ttcctgtttt | tgctcaccca | gaaacgctgg | tgaaagtaaa | 3060 |
| agatgctgaa | gatcagttgg | gtgcacgagt | gggttacatc | gaactggatc | tcaacagcgg | 3120 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.tXt
| taagatcctt | gagagttttc | gccccgaaga | acgttttcca | atgatgagca | cttttaaagt | 3180 |
| tctgctatgt | ggcgcggtat | tatcccgtat | tgacgccggg | caagagcaac | tcggtcgccg | 3240 |
| catacactat | tctcagaatg | acttggttga | gtactcacca | gtcacagaaa | agcatcttac | 3300 |
| ggatggcatg | acagtaagag | aattatgcag | tgctgccata | accatgagtg | ataacactgc | 3360 |
| ggccaactta | cttctgacaa | cgatcggagg | accgaaggag | ctaaccgctt | ttttgcacaa | 3420 |
| catgggggat | catgtaactc | gccttgatcg | ttgggaaccg | gagctgaatg | aagccatacc | 3480 |
| aaacgacgag | cgtgacacca | cgatgcctgt | agcaatggca | acaacgttgc | gcaaactatt | 3540 |
| aactggcgaa | ctacttactc | tagcttcccg | gcaacaatta | atagactgga | tggaggcgga | 3600 |
| taaagttgca | ggaccacttc | tgcgctcggc | ccttccggct | ggctggttta | ttgctgataa | 3660 |
| atctggagcc | ggtgagcgtg | ggtctcgcgg | tatcattgca | gcactggggc | cagatggtaa | 3720 |
| gccctcccgt | atcgtagtta | tctacacgac | ggggagtcag | gcaactatgg | atgaacgaaa | 3780 |
| tagacagatc | gctgagatag | gtgcctcact | gattaagcat | tggtaactgt | c | 3831 |
<210> 31 <211> 4052 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCM7MLG <400> 31
| ctggagatcc | tgataaaatc | atgaaaaatt | tatttgcttt | gtgagcggat | aacaattata | 60 |
| atatgtggaa | ttgtgagcgc | tcacaattcc | acataaggag | gtaaaaaaat | gtggaattgt | 120 |
| gagcgctcac | aattccacat | aaggaggtaa | aaaaatgata | catcatcatc | atcatcatat | 180 |
| gtcccctata | ctaggttatt | ggaaaattaa | gggccttgtg | caacccactc | gacttctttt | 240 |
| ggaatatctt | gaagaaaaat | atgaagagca | tttgtatgag | cgcgatgaag | gtgataaatg | 300 |
| gcgaaacaaa | aagtttgaat | tgggtttgga | gtttcccaat | cttccttatt | atattgatgg | 360 |
| tgatgttaaa | ttaacacagt | ctatggccat | catacgttat | atagctgaca | agcacaacat | 420 |
| gttgggtggt | tgtccaaaag | agcgtgcaga | gatttcaatg | cttgaaggag | cggttttgga | 480 |
| tattagatac | ggtgtttcga | gaattgcata | tagtaaagac | tttgaaactc | tcaaagttga | 540 |
| ttttcttagc | aagctacctg | aaatgctgaa | aatgttcgaa | gatcgtttat | gtcataaaac | 600 |
| atatttaaat | ggtgatcatg | taacccatcc | tgacttcatg | ttgtatgacg | ctcttgatgt | 660 |
| tgttttatac | atggacccaa | tgtgcctgga | tgcgttccca | aaattagttt | gttttaaaaa | 720 |
| acgtattgaa | gctatcccac | aaattgataa | gtacttgaaa | tccagcaagt | atatagcatg | 780 |
| gcctttgcag | ggctggcaag | ccacgtttgg | tggtggcgac | catcctccaa | aatcggatct | 840 |
| ggttccgcgt | ggatccccag | gaattcccgg | gtcgactcga | gcggccgcat | cgtgggaact | 900 |
| gcagatgaat | tcgagctcgg | atccaagatc | ttctagacat | atgatcgata | agcttgatat | 960 |
| cggtaccacc | atggtcgacc | tcgagcccgg | ggctagcata | accccttggg | gcctctaaac | 1020 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| gggtcttgag | gggttttttg | gggaaatttc | cccgattaat | aagatgatct | tcttgagatc | 1080 |
| gttttggtct | gcgcgtaatc | tcttgctctg | aaaacgaaaa | aaccgccttg | cagggcggtt | 1140 |
| tttcgaaggt | tctctgagct | accaactctt | tgaaccgagg | taactggctt | ggaggagcgc | 1200 |
| agtcaccaaa | acttgtcctt | tcagtttagc | cttaaccggc | gcatgacttc | aagactaact | 1260 |
| cctctaaatc | aattaccagt | ggctgctgcc | agtggtgctt | ttgcatgtct | ttccgggttg | 1320 |
| gactcaagac | gatagttacc | ggataaggcg | cagcggtcgg | actgaacggg | gggttcgtgc | 1380 |
| atacagtcca | gcttggagcg | aactgcctac | ccggaactga | gtgtcaggcg | tggaatgaga | 1440 |
| caaacgcggc | cataacagcg | gaatgacacc | ggtaaaccga | aaggcaggaa | caggagagcg | 1500 |
| cacgagggag | ccgccagggg | gaaacgcctg | gtatctttat | agtcctgtcg | ggtttcgcca | 1560 |
| ccactgattt | gagcgtcaga | tttcgtgatg | cttgtcaggg | gggcggagcc | tatggaaaaa | 1620 |
| cggctttgcc | gcggccctct | cacttccctg | ttaagtatct | tcctggcatc | ttccaggaaa | 1680 |
| tctccgcccc | gttcgtaagc | catttccgct | cgccgcagtc | gaacgaccga | gcgtagcgag | 1740 |
| tcagtgagcg | aggaagcgga | atatatcctg | tatcacatat | tctgctgacg | caccggtgca | 1800 |
| gccttttttc | tcctgccaca | tgaagcactt | cactgacacc | ctcatcagtg | ccaacatagt | 1860 |
| aagccagtat | acactccgct | agcgctgagg | tctttgcgat | aggtaaaggc | gcgccatcga | 1920 |
| atggcgcaaa | acctttcgcg | gtatggcatg | atagcgcccg | gaagagagtc | aattcagggt | 1980 |
| ggtgaatggt | ggtgaatgtg | aaaccagtaa | cgttatacga | tgtcgcagag | tatgccggtg | 2040 |
| tctcttatca | gaccgtttcc | cgcgtggtga | accaggccag | ccacgtttct | gcgaaaacgc | 2100 |
| gggaaaaagt | ggaagcggcg | atggcggagc | tgaattacat | tcccaaccgc | gtggcacaac | 2160 |
| aactggcggg | caaacagtcg | ttgctgattg | gcgttgccac | ctccagtctg | gccctgcacg | 2220 |
| cgccgtcgca | aattgtcgcg | gcgattaaat | ctcgcgccga | tcaactgggt | gccagcgtgg | 2280 |
| tggtgtcgat | ggtagaacga | agcggcgtcg | aagcctgtaa | agcggcggtg | cacaatcttc | 2340 |
| tcgcgcaacg | cgtcagtggg | ctgatcatta | actatccgct | ggatgaccag | gatgccattg | 2400 |
| ctgtggaagc | tgcctgcact | aatgttccgg | cgttatttct | tgatgtctct | gaccagacac | 2460 |
| ccatcaacag | tattattttc | tcccatgaag | acggtacgcg | actgggcgtg | gagcatctgg | 2520 |
| tcgcattggg | tcaccagcaa | atcgcgctgt | tagcgggccc | attaagttct | gtctcggcgc | 2580 |
| gtctgcgtct | ggctggctgg | cataaatatc | tcactcgcaa | tcaaattcag | ccgatagcgg | 2640 |
| aacgggaagg | cgactggagt | gccatgtccg | gttttcaaca | aaccatgcaa | atgctgaatg | 2700 |
| agggcatcgt | tcccactgcg | atgctggttg | ccaacgatca | gatggcgctg | ggcgcaatgc | 2760 |
| gcgccattac | cgagtccggg | ctgcgcgttg | gtgcggatat | ctcggtagtg | ggatacgacg | 2820 |
| ataccgaaga | cagctcatgt | tatatcccgc | cgtcaaccac | catcaaacag | gattttcgcc | 2880 |
| tgctggggca | aaccagcgtg | gaccgcttgc | tgCaactctc | tcagggccag | gcggtgaagg | 2940 |
| gcaatcagct | gttgcccgtc | tcactggtga | aaagaaaaac | caccctggcg | cccaatacgc | 3000 |
| aaaccgcctc | tccccgcgcg | ttggccgatt | cattaatgca | gctggcacga | caggtttccc | 3060 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| gactggaaag | cgggcagtga | gcgcaacttt | gcgataggta | aatttttcta | aatacattca | 3120 |
| aatatgtatc | cgctcatgag | acaataaccc | tgataaatgc | ttcaataata | ttgaaaaagg | 3180 |
| aagagtatga | gtattcaaca | tttccgtgtc | gcccttattc | ccttttttgc | ggcattttgc | 3240 |
| cttcctgttt | ttgctcaccc | agaaacgctg | gtgaaagtaa | aagatgctga | agatcagttg | 3300 |
| ggtgcacgag | tgggttacat | cgaactggat | ctcaacagcg | gtaagatcct | tgagagtttt | 3360 |
| cgccccgaag | aacgttttcc | aatgatgagc | acttttaaag | ttctgctatg | tggcgcggta | 3420 |
| ttatcccgta | ttgacgccgg | gcaagagcaa | ctcggtcgcc | gcatacacta | ttctcagaat | 3480 |
| gacttggttg | agtactcacc | agtcacagaa | aagcatctta | cggatggcat | gacagtaaga | 3 540 |
| gaattatgca | gtgctgccat | aaccatgagt | gataacactg | cggccaactt | acttctgaca | 3600 |
| acgatcggag | gaccgaagga | gctaaccgct | tttttgcaca | acatggggga | tcatgtaact | 3660 |
| cgccttgatc | gttgggaacc | ggagctgaat | gaagccatac | caaacgacga | gcgtgacacc | 3720 |
| acgatgcctg | tagcaatggc | aacaacgttg | cgcaaactat | taactggcga | actacttact | 3780 |
| ctagcttccc | ggcaacaatt | aatagactgg | atggaggcgg | ataaagttgc | aggaccactt | 3840 |
| ctgcgctcgg | cccttccggc | tggctggttt | attgctgata | aatctggagc | cggtgagcgt | 3900 |
| gggtctcgcg | gtatcattgc | agcactgggg | ccagatggta | agccctcccg | tatcgtagtt | 3960 |
| atctacacga | cggggagtca | ggcaactatg | gatgaacgaa | atagacagat | cgctgagata | 4020 |
| ggtgcctcac | tgattaagca | ttggtaactg | tc | 4052 |
<210> 32 <211> 4025 <212> DNA <213> artifi ciał <220>
<223> pBCM8MLG <400> 32 ctggagatcc tgatataata cgactcacta taggggtgtg gaattgtgag cgctcacaat 60 tccacataag gaggtaaaaa aatgtggaat tgtgagcgct cacaattcca cataaggagg 120 taaaaaaatg atacatcatc atcatcatca tatgtcccct atactaggtt attggaaaat 180 taagggcctt gtgcaaccca ctcgacttct tttggaatat cttgaagaaa aatatgaaga 240 gcatttgtat gagcgcgatg aaggtgataa atggcgaaac aaaaagtttg aattgggttt 300 ggagtttccc aatcttcctt attatattga tggtgatgtt aaattaacac agtctatggc 360 catcatacgt tatatagctg acaagcacaa catgttgggt ggttgtccaa aagagcgtgc 420 agagatttca atgcttgaag gagcggtttt ggatattaga tacggtgttt cgagaattgc 480 atatagtaaa gactttgaaa ctctcaaagt tgatcttctt agcaagctac ctgaaatgct 540 gaaaatgttc gaagatcgtt tatgtcataa aacatattta aatggtgatc atgtaaccca 600 tcctgacttc atgttgtatg acgctcttga tgttgtttta tacatggacc caatgtgcct 660 ggatgcgttc ccaaaattag tttgttttaa aaaacgtatt gaagctatcc cacaaattga 720
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| taagtacttg | aaatccagca | agtatatagc | atggcctttg | cagggctggc | aagccacgtt | 780 |
| tggtggtggc | gaccatcctc | caaaatcgga | tctggttccg | cgtggatccc | caggaattcc | 840 |
| cgggtcgact | cgagcggccg | catcgtggga | actgcagatg | aattcgagct | cggatccaag | 900 |
| atcttctaga | catatgatcg | ataagcttga | tatcggtacc | accatggtcg | acctcgagcc | 960 |
| cggggctagc | ataacccctt | ggggcctcta | aacgggtctt | gaggggtttt | ttggggaaat | 1020 |
| ttccccgatt | aataagatga | tcttcttgag | atcgttttgg | tctgcgcgta | atctcttgct | 1080 |
| ctgaaaacga | aaaaaccgcc | ttgcagggcg | gtttttcgaa | ggttctctga | gctaccaact | 1140 |
| ctttgaaccg | aggtaactgg | cttggaggag | cgcagtcacc | aaaacttgtc | ctttcagttt | 1200 |
| agccttaacc | ggcgcatgac | ttcaagacta | actcctctaa | atcaattacc | agtggctgct | 1260 |
| gccagtggtg | cttttgcatg | tctttccggg | ttggactcaa | gacgatagtt | accggataag | 1320 |
| gcgcagcggt | cggactgaac | ggggggttcg | tgcatacagt | ccagcttgga | gcgaactgcc | 1380 |
| tacccggaac | tgagtgtcag | gcgtggaatg | agacaaacgc | ggecataaca | gcggaatgac | 1440 |
| accggtaaac | cgaaaggcag | gaacaggaga | gcgcacgagg | gagccgccag | ggggaaacgc | 1500 |
| ctggtatctt | tatagtcctg | tcgggtttcg | ccaccactga | tttgagcgtc | agatttcgtg | 1560 |
| atgcttgtca | gagggscgga | gcctatggaa | aaacggcttt | gccgcggccc | tctcacttcc | 1620 |
| ctgttaagta | tcttcctggc | atcttccagg | aaatctccgc | cccgttcgta | agccatttcc | 1680 |
| gctcgccgca | gtcgaacgac | cgagcgtagc | gagtcagtga | gcgaggaagc | ggaatatatc | 1740 |
| ctgtatcaca | tattctgctg | acgcaccggt | gcagcctttt | ttctcctgcc | acatgaagca | 1800 |
| cttcactgac | accctcatca | gtgccaacat | agtaagccag | tatacactcc | gctagcgctg | 1860 |
| aggtctttgc | gataggtaaa | ggcgcgccat | cgaatggcgc | aaaacctttc | gcggtatggc | 1920 |
| atgatagcgc | ccggaagaga | gtcaattcag | ggtggtgaat | ggtggtgaat | gtgaaaccag | 1980 |
| taacgttata | cgatgtcgca | gagtatgccg | gtgtctctta | tcagaccgtt | tcccgcgtgg | 2040 |
| tgaaccaggc | cagccacgtt | tctgcgaaaa | cgcgggaaaa | agtggaagcg | gcgatggcgg | 2100 |
| agctgaatta | cattcccaac | cgcgtggcac | aacaactggc | gggcaaacag | tcgttgctga | 2160 |
| ttggcgttgc | cacctccagt | ctggccctgc | acgcgccgtc | gcaaattgtc | gcggcgatta | 2220 |
| aatctcgcgc | cgatcaactg | ggtgccagcg | tggtggtgtc | gatggtagaa | cgaagcggcg | 2280 |
| tcgaagcctg | taaagcggcg | gtgcacaatc | ttctcgcgca | acgcgtcagt | gggctgatca | 2340 |
| ttaactatcc | gctggatgac | caggatgcca | ttgctgtgga | agctgcctgc | actaatgttc | 2400 |
| cggcgttatt | tcttgatgtc | tctgaccaga | cacccatcaa | cagtattatt | ttctcccatg | 2460 |
| aagacggtac | gcgactgggc | gtggagcatc | tggtcgcatt | gggtcaccag | caaatcgcgc | 2520 |
| tgttagcggg | cccattaagt | tctgtctcgg | cgcgtctgcg | tctggctggc | tggcataaat | 2580 |
| atctcactcg | caatcaaatt | cagccgatag | cggaacggga | aggcgactgg | agtgccatgt | 2640 |
| ccggttttca | acaaaccatg | caaatgctga | atgagggcat | cgttcccact | gcgatgctgg | 2700 |
| ttgccaacga | tcagatggcg | ctgggcgcaa | tgcgcgccat | taccgagtcc | gggctgcgcg | 2760 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| ttggtgcgga tatctcggta gtgggatacg acgataccga agacagctca tgttatatcc | 2820 |
| cgccgtcaac caccatcaaa caggattttc gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct | 2880 |
| tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg | 2940 |
| tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg | 3000 |
| attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac | 3060 |
| tttgcgatag gtaaattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa | 3120 |
| ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt | 3180 |
| gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg | 3240 |
| ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg | 3300 |
| gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg | 3360 |
| agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag | 3420 |
| caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca | 3480 |
| gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg | 3540 |
| agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc | 3600 |
| gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg | 3660 |
| aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg | 3720 |
| ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac | 3780 |
| tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg | 3840 |
| tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg | 3900 |
| gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact | 3960 |
| atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa | 4020 |
ctgtc 4025 <210> 33 <211> 4048 <212> DNA <213> artificial <220>
<223> pBCM9MLG <400> 33 ctggagatcc tgataattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat 60 gtggaattgt gagcgctcac aattccacat aaggaggtaa aaaaatgtgg aattgtgagc 120 gctcacaatt ccacataagg aggtaaaaaa atgatacatc atcatcatca tcatatgtcc 180 cctatactag gttattggaa aattaagggc cttgtgcaac ccactcgact tcttttggaa 240 tatcttgaag aaaaatatga agagcatttg tatgagcgcg atgaaggtga taaatggcga 300 aacaaaaagt ttgaattggg tttggagttt cccaatcttc cttattatat tgatggtgat 360 gttaaattaa cacagtctat ggccatcata cgttatatag ctgacaagca caacatgttg 420
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.tXt
| ggtggttgtc | caaaagagcg | tgcagagatt | tcaatgcttg | aaggagcggt | tttggatatt | 480 |
| agatacggtg | tttcgagaat | tgcatatagt | aaagactttg | aaactctcaa | agttgatttt | 540 |
| cttagcaagc | tacctgaaat | gctgaaaatg | ttcgaagatc | gtttatgtca | taaaacatat | SOO |
| ttaaatggtg | atcatgtaac | ccatcctgac | ttcatgttgt | atgacgctct | tgatgttgtt | 660 |
| ttatacatgg | acccaatgtg | cctggatgcg | ttcccaaaat | tagtttgttt | taaaaaacgt | 720 |
| attgaagcta | tcccacaaat | tgataagtac | ttgaaatcca | gcaagtatat | agcatggcct | 780 |
| ttgcagggct | ggcaagccac | gtttggtggt | ggcgaccatc | ctccaaaatc | ggatctggtt | 840 |
| ccgcgtggat | ccccaggaat | tcccgggtcg | actcgagcgg | ccgcatcgtg | ggaactgcag | 900 |
| atgaattcga | gctcggatcc | aagatcttct | agacatatga | tcgataagct | tgatatcggt | 960 |
| accaccatgg | tcgacctcga | gcccggggct | agcataaccc | cttggggcct | ctaaacgggt | 1020 |
| Cttgaggggt | tttttgggga | aatttccccg | attaataaga | tgatcttctt | gagatcgttt | 1080 |
| tggtctgcgc | gtaatctctt | gctctgaaaa | cgaaaaaacc | gccttgcagg | gcggtttttc | 1140 |
| gaaggttctc | tgagctacca | actctttgaa | ccgaggtaac | tggcttggag | gagcgcagtc | 1200 |
| accaaaactt | gtcctttcag | tttagcctta | accggcgcat | gacttcaaga | ctaactcctc | 1260 |
| taaatcaatt | accagtggct | gctgccagtg | gtgcttttgc | atgtctttcc | gggttggact | 1320 |
| caagacgata | gttaccggat | aaggcgcagc | ggtcggactg | aacggggggt | tcgtgcatac | 1380 |
| agtccagctt | ggagcgaact | gcctacccgg | aactgagtgt | caggcgtgga | atgagacaaa | 1440 |
| cgcggccata | acagcggaat | gacaccggta | aaccgaaagg | caggaacagg | agagcgcacg | 1500 |
| agggagccgc | cagggggaaa | cgcctggtat | ctttatagtc | ctgtcgggtt | tcgccaccac | 1560 |
| tgatttgagc | gtcagatttc | gtgatgcttg | tcaggggggc | ggagcctatg | gaaaaacggc | 1620 |
| tttgccgcgg | ccctctcact | tccctgttaa | gtatcttcct | ggcatcttcc | aggaaatctc | 1680 |
| cgccccgttc | gtaagccatt | tccgctcgcc | gcagtcgaac | gaccgagcgt | agcgagtcag | 1740 |
| tgagcgagga | agcggaatat | atcctgtatc | acatattctg | ctgacgcacc | ggtgcagcct | 1800 |
| tttttctcct | gccacatgaa | gcacttcact | gacaccctca | tcagtgccaa | catagtaagc | 1860 |
| cagtatacac | tccgctagcg | ctgaggtctt | tgcgataggt | aaaggcgcgc | catcgaatgg | 1920 |
| cgcaaaacct | ttcgcggtat | ggcatgatag | cgcccggaag | agagtcaatt | cagggtggtg | 1980 |
| aatggtggtg | aatgtgaaac | cagtaacgtt | atacgatgtc | gcagagtatg | ccggtgtctc | 2040 |
| ttatcagacc | gtttcccgcg | tggtgaacca | ggccagccac | gtttctgcga | aaacgcggga | 2100 |
| aaaagtggaa | gcggcgatgg | cggagctgaa | ttacattccc | aaccgcgtgg | cacaacaact | 2160 |
| ggcgggcaaa | cagtcgttgc | tgattggcgt | tgccacctcc | agtctggccc | tgcacgcgcc | 2220 |
| gtcgcaaatt | gtcgcggcga | ttaaatctcg | cgccgatcaa | ctgggtgcca | gcgtggtggt | 2280 |
| gtcgatggta | gaacgaagcg | gcgtcgaagc | ctgtaaagcg | gcggtgcaca | atcttctcgc | 2340 |
| gcaacgcgtc | agtgggctga | tcattaacta | tccgctggat | gaccaggatg | ccattgctgt | 2400 |
| ggaagctgcc | tgcactaatg | ttccggcgtt | atttcttgat | gtctctgacc | agacacccat | 2460 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| caacagtatt | attttctccc | atgaagacgg | tacgcgactg | ggcgtggagc | atctggtcgc | 2520 |
| attgggtcac | cagcaaatcg | cgctgttagc | gggcccatta | agttctgtct | cggcgcgtct | 2580 |
| gcgtctggct | ggctggcata | aatatetcac | tcgcaatcaa | attcagccga | tagcggaacg | 2640 |
| ggaaggcgac | tggagtgcca | tgtccggttt | tcaacaaacc | atgcaaatgc | tgaatgaggg | 2700 |
| catcgttccc | actgcgatgc | tggttgccaa | cgatcagatg | gcgctgggcg | caatgcgcgc | 2760 |
| cattaccgag | tccgggctgc | gcgttggtgc | ggatatctcg | gtagtgggat | acgacgatac | 2820 |
| cgaagacagc | tcatgttata | tcccgccgtc | aaccaccatc | aaacaggatt | ttcgcctgct | 2880 |
| ggggcaaacc | agcgtggacc | gcttgctgca | actctctcag | ggccaggcgg | tgaagggcaa | 2940 |
| tcagctgttg | cccgtctcac | tggtgaaaag | aaaaaccacc | ctggcgccca | atacgcaaac | 3000 |
| Cgcctctccc | cgcgcgttgg | ccgattcatt | aatgcagctg | gcacgacagg | tttcccgact | 3060 |
| ggaaagcggg | cagtgagcgc | aactttgcga | taggtaaatt | tttctaaata | cattcaaata | 3120 |
| tgtatccgct | catgagacaa | taaccctgat | aaatgcttca | ataatattga | aaaaggaaga | 3180 |
| gtatgagtat | tcaacatttc | cgtgtcgccc | ttattccctt | ttttgcggca | ttttgccttc | 3240 |
| ctgtttttgc | tcacccagaa | acgctggtga | aagtaaaaga | tgctgaagat | cagttgggtg | 3300 |
| cacgagtggg | ttacatcgaa | ctggatctca | acagcggtaa | gatccttgag | agttttcgcc | 3360 |
| ccgaagaacg | ttttccaatg | atgagcactt | ttaaagttct | gctatgtggc | gcggtattat | 3420 |
| cccgtattga | cgccgggcaa | gagcaactcg | gtcgccgcat | acactattct | cagaatgact | 3480 |
| tggttgagta | ctcaccagtc | acagaaaagc | atcttacgga | tggcatgaca | gtaagagaat | 3540 |
| tatgcagtgc | tgccataacc | atgagtgata | acactgcggc | caacttactt | ctgacaacga | 3600 |
| tcggaggacc | gaaggagcta | accgcttttt | tg cacaacat | gggggatcat | gtaactcgcc | 3660 |
| ttgatcgttg | ggaaccggag | ctgaatgaag | ccataccaaa | cgacgagcgt | gacaccacga | 3720 |
| tgcctgtagc | aatggcaaca | acgttgcgca | aactattaac | tggcgaacta | cttactctag | 3780 |
| cttcccggca | acaattaata | gactggatgg | aggcggataa | agttgcagga | ccacttctgc | 3840 |
| gctcggccct | tccggctggc | tggtttattg | ctgataaatc | tggagccggt | gagcgtgggt | 3900 |
| ctcgcggtat | cattgcagca | ctggggccag | atggtaagcc | ctcccgtatc | gtagttatct | 3960 |
| acacgacggg | gagtcaggca | actatggatg | aacgaaatag | acagatcgct | gagataggtg | 4020 |
cctcactgat taagcattgg taactgtc
4048
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.tXt
| ggtggttgtc | caaaagagcg | tgcagagatt | tcaatgcttg | aaggagcggt | tttggatatt | 480 |
| agatacggtg | tttcgagaat | tgcatatagt | aaagactttg | aaactctcaa | agttgatttt | 540 |
| cttagcaagc | tacctgaaat | gctgaaaatg | ttcgaagatc | gtttatgtca | taaaacatat | 600 |
| ttaaatggtg | atcatgtaac | ccatcctgac | rtcatgttgt | atgacgctct | tgatgttgtt | 660 |
| ttatacatgg | acccaatgtg | cctggatgcg | ttcccaaaat | tagtttgttt | taaaaaacgt | 720 |
| attgaagcta | tcccacaaat | tgataagtac | ttgaaatcca | gcaagtatat | agcatggcct | 780 |
| ttgcagggct | ggcaagccac | gtttggtggt | ggcgaccatc | ctccaaaatc | ggatctggtt | 840 |
| ccgcgtggat | ccccaggaat | tcccgggtcg | actcgagcgg | ccgcatcgtg | ggaactgcag | 900 |
| atgaattcga | gctcggatcc | aagatcttct | agacatatga | tcgataagct | tgatatcggt | 960 |
| accaccatgg | tcgacctcga | gcccggggct | agcataaccc | cttggggcct | ctaaacgggt | 1020 |
| cttgaggggt | tttttgggga | aatttccccg | attaataaga | tgatcttctt | gagatcgttt | 1080 |
| tggtctgcgc | gtaatctctt | gctctgaaaa | cgaaaaaacc | gccttgcagg | gcggtttttc | 1140 |
| gaaggttctc | tgagctacca | actctttgaa | ccgaggtaac | tggcttggag | gagcgcagtc | 1200 |
| accaaaactt | gtcctttcag | tttagcctta | accggcgcat | gacttcaaga | ctaactcctc | 1260 |
| taaatcaatt | accagtggct | gctgccagtg | gtgcttttgc | atgtctttcc | gggttggact | 1320 |
| caagacgata | gttaccggat | aaggcgcagc | ggtcggactg | aacggggggt | tcgtgcatac | 1380 |
| agtccagctt | ggagcgaact | gcctacccgg | aactgagtgt | caggcgtgga | atgagacaaa | 1440 |
| cgcggccata | acagcggaat | gacaccggta | aaccgaaagg | caggaacagg | agagcgcacg | 1500 |
| agggagccgc | cagggggaaa | cgcctggtat | ctttatagtc | ctgtcgggtt | tcgccaccac | 1560 |
| tgatttgagc | gtcagatttc | gtgatgcttg | tcaggggggc | ggagcctatg | gaaaaacggc | 1620 |
| tttgccgcgg | ccctctcact | tccctgttaa | gtatcttcct | ggcatcttcc | aggaaatctc | 1680 |
| cgccccgttc | gtaagccatt | tccgctcgcc | gcagtcgaac | gaccgagcgt | agcgagtcag | 1740 |
| tgagcgagga | agcggaatat | atcctgtatc | acatattctg | ctgacgcacc | ggtgcagcct | 1800 |
| tttttctcct | gccacatgaa | gcacttcact | gacaccctca | tcagtgccaa | catagtaagc | 1860 |
| cagtatacac | tccgctagcg | ctgaggtctt | tgcgataggt | aaaggcgcgc | catcgaatgg | 1920 |
| cgcaaaacct | ttcgcggtat | ggcatgatag | cgcccggaag | agagtcaatt | cagggtggtg | 1980 |
| aatggtggtg | aatgtgaaac | cagtaacgtt | atacgatgtc | gcagagtatg | ccggtgtctc | 2040 |
| ttatcagacc | gtttcccgcg | tggtgaacca | ggccagccac | gtttctgcga | aaacgcggga | 2100 |
| aaaagtggaa | gcggcgatgg | cggagctgaa | ttacattccc | aaccgcgtgg | cacaacaact | 2160 |
| ggcgggcaaa | cagtcgttgc | tgattggcgt | tgccacctcc | agtctggccc | tgcacgcgcc | 2220 |
| gtcgcaaatt | gtcgcggcga | ttaaatctcg | cgccgatcaa | ctgggtgcca | gcgtggtggt | 2280 |
| gtcgatggta | gaacgaagcg | gcgtcgaagc | ctgtaaagcg | gcggtgcaca | atcttctcgc | 2340 |
| gcaacgcgtc | agtgggctga | tcattaacta | tccgctggat | gaccaggatg | ccattgctgt | 2400 |
| ggaagctgcc | tgcactaatg | ttccggcgtt | atttcttgat | gtctctgacc | agacacccat | 2460 |
PL 228 024 Β1
SEQLTXT.txt
| caacagtatt | attttctccc | atgaagacgg | tacgcgactg | ggcgtggagc | atetggtcgc | 2520 |
| attgggtcac | cagcaaatcg | cgctgttagc | gggcccatta | agttctgtct | cggcgcgtct | 2580 |
| gcgtctggct | ggctggcata | aatatctcac | tcgcaatcaa | attcagccga | tagcggaacg | 2640 |
| ggaaggcgac | tggagtgcca | tgtccggttt | tcaacaaacc | atgcaaatgc | tgaatgaggg | 2700 |
| catcgttccc | actgcgatgc | tggttgccaa | cgatcagatg | gcgctgggcg | caatgcgcgc | 2760 |
| cattaccgag | tccgggctgc | gcgttggtgc | ggatatctcg | gtagtgggat | acgacgatac | 2820 |
| cgaagacagc | tcatgttata | tcccgccgtc | aaccaccatc | aaacaggatt | ttcgcctgct | 2880 |
| ggggcaaacc | agcgtggacc | gcttgctgca | actctctcag | ggccaggcgg | tgaagggcaa | 2940 |
| tcagctgttg | cccgtctcac | tggtgaaaag | aaaaaccacc | ctggcgccca | atacgcaaac | 3000 |
| cgcctctccc | cgcgcgttgg | ccgattcatt | aatgcagctg | gcacgacagg | tttcccgact | 3060 |
| ggaaagcggg | cagtgagcgc | aactttgcga | taggtaaatt | tttctaaata | cattcaaata | 3120 |
| tgtatccgct | catgagacaa | taaccctgat | aaatgcttca | ataatattga | aaaaggaaga | 3180 |
| gtatgagtat | tcaacatttc | cgtgtcgccc | ttattccctt | ttttgcggca | ttttgccttc | 3240 |
| ctgtttttgc | tcacccagaa | acgctggtga | aagtaaaaga | tgctgaagat | cagttgggtg | 3300 |
| cacgagtggg | ttacatcgaa | ctggatctca | acagcggtaa | gatccttgag | agttttcgcc | 3360 |
| ccgaagaacg | ttttccaatg | atgagcactt | ttaaagttct | gctatgtggc | gcggtattat | 3420 |
| cccgtattga | cgccgggcaa | gagcaactcg | gtcgccgcat | acactattct | cagaatgact | 3480 |
| tggttgagta | ctcaccagtc | acagaaaagc | atcttacgga | tggcatgaca | gtaagagaat | 3540 |
| tatgcagtgc | tgccataacc | atgagtgata | acactgcggc | caacttactt | ctgacaacga | 3600 |
| tcggaggacc | gaaggagcta | accgcttttt | tgcacaacat | gggggatcat | gtaactcgcc | 3660 |
| ttgatcgttg | ggaaccggag | ctgaatgaag | ccataccaaa | cgacgagcgt | gacaccacga | 3720 |
| tgcctgtagc | aatggcaaca | acgttgcgca | aactattaac | tggcgaacta | cttactctag | 3780 |
| cttcccggca | acaattaata | gactggatgg | aggcggataa | agttgcagga | ccacttctgc | 3840 |
| gctcggccct | tccggctggc | tggtttattg | ctgataaatc | tggagccggt | gagcgtgggt | 3900 |
| ctcgcggtat | cattgcagca | ctggggccag | atggtaagcc | ctcccgtatc | gtagttatct | 3960 |
| acacgacggg | gagtcaggca | actatggatg | aacgaaatag | acagatcgct | gagataggtg | 4020 |
cctcactgat taagcattgg taactgtc
Claims (13)
1. Cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca region promotorowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr 1-3;
2. Cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca region linkerowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr 4-12, korzystnie region polilinkerowy posiadający sekwencję nr 4.
3. Zestaw wektorów ekspresyjnych, znamienny tym, że składa się z różnych wektorów ekspresyjnych, przy czym każdy z wektorów zawiera:
- połączone funkcjonalnie region promotorowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr od 1 do 3 oraz region linkerowy określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr od 4 do 12,
- region inicjacji replikacji określony sekwencją wybraną spośród sekwencji nr od 13 do 15, przy czym wektory wchodzące w skład zestawu obejmują wszystkie kombinacje wspomnianych wariantów regionu promotorowego z wspomnianymi wariantami regionu inicjacji replikacji.
4. Zestaw według zastrz. 3, znamienny tym, że wektor ekspresyjny zawiera ponadto sekwencję kwasu nukleinowego kodującą cząsteczkę reporterową, korzystnie białko zielonej fluorescencji lub białko różowej fluorescencji.
5. Zestaw według zastrz. 3, znamienny tym, że wektor ekspresyjny jest cząsteczką liniową.
6. Zestaw według zastrz. 3, znamienny tym, że wektor ekspresyjny koduje region odpowiadający aminokwasom WELQ rozpoznawanym przez proteazę Clean-Cut;
7. Zestaw według zastrz.6, znamienny tym, że poniżej sekwencji odpowiadającej aminokwasom WELQ znajduje się miejsce inicjacji transkrypcji.
8. Zestaw według zastrz. 6, znamienny tym, że powyżej sekwencji WELQ znajduje się sekwencja odpowiadająca aminokwasom MIHHHHHH.
9. Zestaw według zastrz. 6, znamienny tym, że zawiera wektory o sekwencjach nr 16 do 24.
10. Zestaw według zastrz. 6, znamienny tym, że zawiera wektory o sekwencjach nr 25 do 33.
11. Sposób produkcji białek rekombinowanych, znamienny tym, że komórki E.coli transformuje się zestawem wektorów ekspresyjnych określonym w zastrz. od 3 do 10 zawierających sekwencję kodującą białko rekombinowane, prowadzi się próbną hodowlę uzyskanych transformantów w ustalonych warunkach hodowli, określa się poziom ekspresji uzyskiwanej dla różnych transformantów, a następnie prowadzi się ostateczną hodowlę produkcyjną szczepu transformanta dającego najwyższy poziom ekspresji i izoluje się białko rekombinantowe z brzeczki hodowlanej.
12. Sposób według zastrzeżenia 11, znamienny tym, że do uwalniania białka rekombinowanego wykorzystywana jest proteaza Clean-Cut.
13. Sposób według zastrzeżeń 11-12, znamienny tym, że do procesu odcinania metki fuzyjnej i uwalniania N-końca białka rekombinowanego oraz/lub procesu dowolnego kształtowania N-końca białka rekombinowanego wykorzystywana jest proteaza Clean-Cut.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414704A PL228024B1 (pl) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Zestaw wektorów ekspresyjnych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414704A PL228024B1 (pl) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Zestaw wektorów ekspresyjnych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL414704A1 PL414704A1 (pl) | 2017-05-08 |
| PL228024B1 true PL228024B1 (pl) | 2018-02-28 |
Family
ID=58643853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL414704A PL228024B1 (pl) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Zestaw wektorów ekspresyjnych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL228024B1 (pl) |
-
2015
- 2015-11-06 PL PL414704A patent/PL228024B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL414704A1 (pl) | 2017-05-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU774643B2 (en) | Compositions and methods for use in recombinational cloning of nucleic acids | |
| KR102451510B1 (ko) | Pd-1 호밍 엔도뉴클레아제 변이체, 조성물 및 사용 방법 | |
| DK2768848T3 (en) | METHODS AND PROCEDURES FOR EXPRESSION AND SECRETARY OF PEPTIDES AND PROTEINS | |
| KR20210149060A (ko) | Tn7-유사 트랜스포존을 사용한 rna-유도된 dna 통합 | |
| KR101982360B1 (ko) | 콤팩트 tale-뉴클레아제의 발생 방법 및 이의 용도 | |
| KR102683284B1 (ko) | 세균 감염의 치료를 위한 살세균제와 라이소좀향성 알칼리화제와의 조합물 | |
| CN108753824A (zh) | 用于治疗视网膜营养不良的病毒载体 | |
| CN107849583B (zh) | 使用细胞分裂基因座控制细胞增殖的工具和方法 | |
| US20200188531A1 (en) | Single-vector gene construct comprising insulin and glucokinase genes | |
| CN112912112A (zh) | 肝特异性核酸调节元件以及其方法及用途 | |
| KR20210005146A (ko) | 유전자 편집된 t 세포에서의 인간 foxp3의 발현 | |
| KR102409420B1 (ko) | 형질전환 생물체 선별용 마커 조성물, 형질전환 생물체 및 형질전환 방법 | |
| CN101835798A (zh) | 将感兴趣蛋白靶向宿主细胞包膜的方法和组合物 | |
| KR20220142502A (ko) | 근육 특이적 핵산 조절 요소 및 이의 방법 및 용도 | |
| US20030059870A1 (en) | Recombinant bacterial strains for the production of natural nucleosides and modified analogues thereof | |
| CN107988259B (zh) | SmartBac杆状病毒表达系统及其应用 | |
| CN116323942A (zh) | 用于基因组编辑的组合物及其使用方法 | |
| PL228024B1 (pl) | Zestaw wektorów ekspresyjnych | |
| KR102729768B1 (ko) | 트랜스제닉 선택 방법 및 조성물 | |
| RU2781083C2 (ru) | Варианты, композиции и методы применения хоминг-эндонуклеазы pd-1 | |
| KR20200064129A (ko) | 트랜스제닉 선택 방법 및 조성물 | |
| TW202403048A (zh) | 用於治療龐貝症之具有訊號肽修飾之以密碼子最佳化核酸編碼α-葡萄糖苷酶(GAA)之治療性腺相關病毒 | |
| KR20220156462A (ko) | Cd133 넉인 형광 리포터 벡터 시스템, 그 형질전환된 세포 및 이를 이용한 암줄기세포 검출방법 | |
| US20040259122A1 (en) | Autocatalysis/yeast two-hybrid assay |