KR20240162566A - Zip12 항체 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 ZIP12 항체에 관한 것이다. 본 발명은 약학 조성물 및 키트를 포함한, 상기 항체를 포함하는 조성물로 확장된다. 본 발명은 또한 예를 들어 폐 고혈압 및 암과 같은 저산소증-관련 질환의 치료 및 진단에서 상기 항체를 제조하고 사용하는 방법에까지 확장된다.
Description
본 발명은 ZIP12 항체에 관한 것이다. 본 발명은 약학 조성물 및 키트를 포함한, 항체를 포함하는 조성물로 확장된다. 본 발명은 또한 예를 들어 폐 고혈압(pulmonary hypertension) 및 암과 같은 저산소증-관련 질환(hypoxia-related diseases)의 치료 및 진단에서 항체를 제조하고 사용하는 방법에까지 확장된다.
폐 고혈압(Pulmonary hypertension, PH)은 상승된 폐동맥압 및 구조적으로 리모델링된 폐 혈관을 특징으로 하는 병리학적 병태이다. 폐 고혈압에 대한 현재의 치료법은 혈관 활성 인자에 의해 사용되는 신호 전달 메커니즘의 약리학적 조작에 중점을 두고 있으며 치료적 이점이 제한적이다. 이러한 잠재적으로 치명적인 병태(lethal condition)에 대한 새로운 치료제 및 진단제에 대한 상당한 미충족된 의료적 필요성이 존재한다.
저산소 환경에 대한 성인 포유동물의 폐 순환의 전형적인 반응은 혈관수축 및 폐동맥의 구조적 리모델링이며, 이는 폐동맥압 (폐 고혈압) 및 우심실 비대의 만성적 상승을 유도한다. 그러나, 일부 포유동물은 저산소증-유도된 폐 고혈압에 대한 유전적 저항성을 나타낸다[WILKINS, M. R. 등의 「Pathophysiology and treatment of high-altitude pulmonary vascular disease. Circulation. 2015, 131, 582-590」; ZHAO, L. 등의 「Right ventricular hypertrophy secondary to pulmonary hypertension is linked to rat chromosome 17: evaluation of cardiac ryanodine Ryr2 receptor as a candidate. Circulation. 2001, 103, 442-447」; RHODES, J.의 「Comparative physiology of hypoxic pulmonary hypertension: historical clues from brisket disease. Journal of applied physiology. 2005, 98, 1092-1100」 참조]. 본 발명자들은 피셔 344(Fisher 344, F344) 래트 균주가 위스타 교토(Wistar Kyoto, WKY) 균주에 비해 저산소증-유도된 폐 고혈압에 대해 저항성임을 이전에 보고하였다(ZHAO, L. 등의 「Right ventricular hypertrophy secondary to pulmonary hypertension is linked to rat chromosome 17: evaluation of cardiac ryanodine Ryr2 receptor as a candidate. Circulation. 2001, 103, 442-447」 참조). 그러나, 이러한 저항성의 원인은 전혀 확인되지 않았다.
본 발명자들은 또한 이전에 유사유전자 번식 프로그램(congenic breeding program) 및 비교 유전체학(comparative genomics)을 이용하여 상기 래트에서 이러한 변이를 개발하였고, 저산소증-유도된 폐 혈관 리모델링의 주요 조절인자로서 유전자, Slc39a12를 확인하였다. Slc39a12는 아연 수송체 ZIP12를 암호화한다. 이들은 ZIP12 발현이 저산소증-유도된 폐 고혈압에 민감한 래트, 소 및 인간의 리모델링된 폐동맥에서 내피, 평활근 및 간질 세포를 포함하는 많은 세포 유형에서 증가된다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 폐 혈관 평활근 세포에서 ZIP12 발현이 저산소증-의존적(hypoxia-dependent)이고, ZIP12의 표적화된 억제가 저산소증-노출된 폐 혈관 평활근 세포에서 세포내 불안정한 아연의 상승 및 배양에서의 이들의 증식을 억제한다는 것을 보여주었다. 본 발명자들은 또한 ZIP12 발현의 유전적 파괴가 저산소증 환경에 수용된 래트에서 폐 고혈압의 발달을 약화시킨다는 것을 이전에 입증하였다.
그러나, 지금까지 ZIP12 단백질을 표적화하는 특정 치료법은 없으며, 본 발명자들은 이것이 폐 고혈압을 치료하는 개선된 수단을 제공할 수 있다고 믿는다. 또한, 폐 고혈압의 진단은 종종 침습적 절차, 예를 들어 우측 심장 카테터 삽입(right heart catheterisation) 및 심초음파검사를 필요로 한다. 따라서, 간단하고 덜 침습적인 절차를 통해 측정될 수 있는 폐 고혈압의 새로운 마커의 확인이 또한 바람직하다.
본 발명자들은 ZIP12 억제가 시험관내 저산소증-유도된 폐 혈관 평활근 세포(Pulmonary Vascular Smooth Muscle Cells; PVSMC) 증식 및 생체외 폐 혈관신생(pulmonary angiogenesis)을 방지할 수 있다고 가정하였다. 이는 ZIP12가 폐 고혈압의 기저 질환 메카니즘의 치료를 위한 잠재적인 새로운 치료 표적임을 확인하며, 이는 이의 기능을 억제하기 위해 ZIP12의 세포외 도메인을 표적화할 수 있는 항체를 개발하는 본 발명자의 추가 연구를 유도하였다. 이들 항체의 항-ZIP12 활성은 이들이 그들 자체로 치료제로서 유용하고, 임의의 저산소증-유도된 또는 저산소증-연관 병태, 특히 비제한적으로 폐 고혈압의 치료, 개선 또는 예방에 사용될 수 있다는 것을 의미한다.
따라서, 본 발명의 제 1 측면에서, ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 252), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프, 또는 바람직하게는 LLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 1), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다.
또 다른 측면에서, ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, LLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 1), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다.
실시예에 제시된 바와 같이(및 실시예 8에 제시된 바와 같이), 본 발명자들은 ZIP12 단백질의 세포외 영역 또는 도메인 상의 신규한 에피토프가 ZIP12 단백질 기능의 핵심임을 확인하여 ZIP12 기능에 결합하고 억제할 수 있는 항체를 개발하였다. 예를 들어 도 9b에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 이들이 이러한 세포외 에피토프를 특이적으로 표적화하고 ZIP12 기능을 억제하는 것으로 입증된 다수의 항체를 개발하였다.
바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12 기능을 억제할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 저산소증 노출된 폐 혈관 평활근 세포에서 세포내 불안정한 아연의 상승 및 배양 중 그의 증식이 억제되도록 ZIP12 기능을 억제할 수 있다.
에피토프는 본원에서 하기 서열번호 252로 제공될 수 있다:
[서열번호 252]
ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS
바람직하게는, 에피토프는 본원에서 하기 서열번호 1로 제공될 수 있다:
[서열번호 1]
LLQVLSAGDHPPHNHSRS
도 10c에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 서열 ADLLQ(서열번호 253)이 여러 후보 에피토프에서 발견된 공통 모티프임을 확인하였다.
따라서, 바람직하게는 에피토프는 본원에서 하기 서열번호 253으로 제공될 수 있다:
[서열번호 253]
ADLLQ
따라서, 한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ADLLQ(서열번호 253), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식한다.
한 구현예에서, ZIP12는, 본원에서 하기 서열번호 2로 제공되는, Genbank ID No: NP-001138667로 표시될 수 있다:
[서열번호 2]
MCFRTKLSVSWVPLFLLLSRVFSTETDKPSAQDSRSRGSSGQPADLLQVLSAGDHPPHNHSRSLIKTLLEKTGCPRRRNGMQGDCNLCFEPDALLLIAGGNFEDQLREEVVQRVSLLLLYYIIHQEEICSSKLNMSNKEYKFYLHSLLSLRQDEDSSFLSQNETEDILAFTRQYFDTSQSQCMETKTLQKKSGIVSSEGANESTLPQLAAMIITLSLQGVCLGQGNLPSPDYFTEYIFSSLNRTNTLRLSELDQLLNTLWTRSTCIKNEKIHQFQRKQNNIITHDQDYSNFSSSMEKESEDGPVSWDQTCFSARQLVEIFLQKGLSLISKEDFKQMSPGIIQQLLSCSCHLPKDQQAKLPPTTLEKYGYSTVAVTLLTLGSMLGTALVLFHSCEENYRLILQLFVGLAVGTLSGDALLHLIPQVLGLHKQEAPEFGHFHESKGHIWKLMGLIGGIHGFFLIEKCFILLVSPNDKQGLSLVNGHVGHSHHLALNSELSDQAGRGKSASTIQLKSPEDSQAAEMPIGSMTASNRKCKAISLLAIMILVGDSLHNFADGLAIGAAFSSSSESGVTTTIAILCHEIPHEMGDFAVLLSSGLSMKTAILMNFISSLTAFMGLYIGLSVSADPCVQDWIFTVTAGMFLYLSLVEMLPEMTHVQTQRPWMMFLLQNFGLILGWLSLLLLAIYEQNIKI
항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 2의 일부인, 에피토프, 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합할 수 있다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1의 아미노산 서열에 함유된 에피토프에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1에서 하나 이상의 아미노산, 또는 이의 변이체 또는 단편에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편에 존재하는 임의의 5, 6, 또는 7개의 아미노산에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편에 존재하는 임의의 8, 9, 또는 10개의 아미노산에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편에 존재하는 임의의 11, 12, 또는 13개의 아미노산에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편에 존재하는 임의의 14, 15, 또는 16개의 아미노산에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편에 존재하는 임의의 17 또는 18개의 아미노산에 결합한다.
에피토프는 선형 또는 구조적(conformational)일 수 있다. 용어 "선형 에피토프"는 단백질 항원의 1차 서열에서 함께 서열을 형성하는 아미노산 잔기를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프, 즉 순차적(sequential) 또는 연속적인(continuous) 에피토프를 의미할 수 있다. 선형 에피토프는 폴딩된(folded) ZIP12 상에 존재할 수 있다.
용어 "구조적 에피토프(conformational epitope)"는 아미노산 잔기로 구성된 에피토프를 의미할 수 있으며, 이의 적어도 일부는 단백질 항원의 1차 서열에서 다른 것과 분리되어 있지만 3D 구조로 함께 조립되어 항체, 즉 불연속적 또는 비순차적 에피토프에 의해 인식된다.
본 발명자들은 도 8에서 얻은 데이터로부터 항체 또는 항원-결합 단편의 에피토프가 적어도 부분적으로 선형인 것으로 여겨진다. 실제로, 항체는 주로 선형 에피토프와 결합할 가능성이 높다. 그러나, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1의 아미노산 중의 어느 하나에도 결합하지 않을 수 있다.
ZIP12, ZIP13 및 ZIP4는 모두 아연 수송체(zinc transporters)이다. 그러나, ZIP4는 폐 고혈압의 발병에 관여하지 않지만, 조직 항상성, 대사, 발달 및 면역성에 중요한 역할을 한다. 또한, ZIP13은 세포내 아연 및 스마드(smad) 신호 전달을 조절하는 것으로 나타났으며, 이는 BMP/TGF-베타 신호 전달에 중요하다(Fakuda 등의 문헌 「J Biol Inorg Chem, 2011」 참조). 손상된 BMP 신호 전달은 Morrell 등의 「Nature Reviews Cardiology, 2015」에 나타낸 바와 같이 폐 고혈압과 연관되는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 아연 농도를 낮추는 ZIP13의 억제는 BMP 신호 전달을 손상시킬 수 있고, 이를 치유하지 않으면서 폐 고혈압을 유발할 수 있다.
따라서, ZIP12를 표적화하는 본 발명의 항체는 이와 같이 특이적으로 ZIP13 및/또는 ZIP4와 교차 반응성을 갖지 않거나 거의 갖지 않는 것이 중요한데, 이는 이것이 유의한 원치않는 오프-타겟 효과를 초래할 수 있기 때문이다.
따라서, 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 ZIP13에 실질적으로 결합하지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 ZIP13과 교차 반응성(cross-reactivity)을 갖지 않는다.
한 구현예에서, ZIP13은 Gene ID No: 91252로 표시될 수 있으며, 이는 본원에서 하기 서열번호 3으로 제공된다:
[서열번호 3]
MPGCPCPGCGMAGPRLLFLTALALELLERAGGSQPALRSRGTATACRLDNKESESWGALLSGERLDTWICSLLGSLMVGLSGVFPLLVIPLEMGTMLRSEAGAWRLKQLLSFALGGLLGNVFLHLLPEAWAYTCSASPGGEGQSLQQQQQLGLWVIAGILTFLALEKMFLDSKEEGTSQAPNKDPTAAAAALNGGHCLAQPAAEPGLGAVVRSIKVSGYLNLLANTIDNFTHGLAVAASFLVSKKIGLLTTMAILLHEIPHEVGDFAILLRAGFDRWSAAKLQLSTALGGLLGAGFAICTQSPKGVVGCSPAAEETAAWVLPFTSGGFLYIALVNVLPDLLEEEDPWRSLQQLLLLCAGIVVMVLFSLFVD
따라서, 바람직하게는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 3에 제시된 서열, 또는 이의 변이체 또는 단편에 결합하지 않는다.
또한, 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 ZIP4에 실질적으로 결합하지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 ZIP4와 교차 반응성을 갖지 않는다.
한 구현예에서, ZIP14는 Gene ID No: NP-570901로 표시될 수 있으며, 이는 본원에서 하기 서열번호 4로 제공된다:
[서열번호 4]
MASLVSLELGLLLAVLVVTATASPPAGLLSLLTSGQGALDQEALGGLLNTLADRVHCANGPCGKCLSVEDALGLGEPEGSGLPPGPVLEARYVARLSAAAVLYLSNPEGTCEDARAGLWASHADHLLALLESPKALTPGLSWLLQRMQARAAGQTPKTACVDIPQLLEEAVGAGAPGSAGGVLAALLDHVRSGSCFHALPSPQYFVDFVFQQHSSEVPMTLAELSALMQRLGVGREAHSDHSHRHRGASSRDPVPLISSSNSSSVWDTVCLSARDVMAAYGLSEQAGVTPEAWAQLSPALLQQQLSGACTSQSRPPVQDQLSQSERYLYGSLATLLICLCAVFGLLLLTCTGCRGVTHYILQTFLSLAVGALTGDAVLHLTPKVLGLHTHSEEGLSPQPTWRLLAMLAGLYAFFLFENLFNLLLPRDPEDLEDGPCGHSSHSHGGHSHGVSLQLAPSELRQPKPPHEGSRADLVAEESPELLNPEPRRLSPELRLLPYMITLGDAVHNFADGLAVGAAFASSWKTGLATSLAVFCHELPHELGDFAALLHAGLSVRQALLLNLASALTAFAGLYVALAVGVSEESEAWILAVATGLFLYVALCDMLPAMLKVRDPRPWLLFLLHNVGLLGGWTVLLLLSLYEDDITF
따라서, 바람직하게는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 서열번호 4에 실질적으로 제시된 서열, 또는 이의 변이체 또는 단편에 결합하지 않는다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 및/또는 사이노몰거스 ZIP12에 결합한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 개(canine) 및/또는 돼지(porcine) ZIP12에 결합하지 않는다.
본 발명은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편에 대한 면역특이성을 갖는 전체 항체(즉, 면역글로불린) 둘 다, 뿐만 아니라 대응하는 전장 항체(full-length antibody)의 항원-결합 단편 또는 영역으로 확장된다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. 1가 항체는 경쇄(L)와 이황화 다리(disulphide bridge)에 의해 연결된 중쇄(H)를 포함하는 이량체(HL)이다. 2가 항체는 적어도 하나의 이황화 다리에 의해 연결된 2개의 이량체를 포함하는 사량체(H2L2)이다. 다가 항체는 또한, 예를 들어 다수의 이량체를 연결함으로써 생성될 수 있다. 항체 분자의 기본 구조는 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어지며, 이들은 비공유적으로 연결하고 이황화 결합에 의해 연결될 수 있다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 약 110개의 아미노산의 아미노-말단 가변 영역, 및 상기 쇄의 나머지 부분에 불변 서열을 함유한다. 가변 영역은 항체 분자의 항원-결합 부위를 형성하고, 항원에 대한 이의 특이성, 즉 ZIP12의 세포외 부분, 또는 이의 변이체 또는 단편(예를 들어 에피토프)을 결정하는 몇몇 초가변 영역, 또는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 중쇄 및 경쇄의 CDR의 양쪽 면에는 프레임워크 영역이 있으며, 이는 CDR을 고정시키고 배향시키는 아미노산의 비교적 보존된 서열이다. 항체 단편은 이중특이적 항체(BsAb) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함할 수 있다.
중쇄 불변 영역은 전형적으로 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 전형적으로 경쇄 가변(VL) 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 전형적으로 CL로 약칭되는 하나의 도메인을 포함한다.
각각의 중쇄 및 경쇄는 일반적으로 하기 순서로(N-말단에서 C-말단으로) 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. CDR은 항원 결합에 관여하고, 항체에 항원 특이성 및 결합 친화도를 부여한다. Kabat 등의 문헌 「Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD」을 참조하며, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
임의의 척추동물 종으로부터의 중쇄는 5개의 상이한 부류(또는 이소형): IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중의 하나에 할당될 수 있다. 이들 부류는 또한 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 명명된다. IgG 및 IgA 부류는 서열 및 기능의 차이에 기초하여 하위 부류로 추가로 분류된다. 인간은 다음과 같은 하위 부류를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2.
임의의 척추동물 종으로부터의 경쇄는 불변 도메인의 서열에 기초하여 카파 및 람다로 불리우는 2가지 유형 중의 하나로 명명될 수 있다.
불변 영역은 5개의 중쇄 서열(μ, γ, ζ, α, 또는 ε) 중의 하나 및 2개의 경쇄 서열(κ 또는 λ) 중의 하나로 구성된다. 중쇄 불변 영역 서열은 항체의 이소형 및 분자의 이펙터 기능을 결정한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리되거나 정제된다.
하나의 바람직한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다클론 항체(polyclonal antibody) 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 토끼, 마우스 또는 래트에서 생성될 수 있다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 숙주 동물을, 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편으로 면역화시킨 다음, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 수집함으로써 수득된다. 숙주 동물은 토끼일 수 있다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 인간 항체이다. 본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 ZIP12의 세포외 부분에 대한 면역특이성을 나타내는 특정 인간 항체, 또는 이의 변이체 또는 단편에서 발견되는 바와 실질적으로 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열을 포함하는 항체, 예를 들어 단일 클론 항체를 의미할 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 CDR과 실질적으로 동일한 아미노산 서열은 참조 서열과 비교할 때 상당한 양의 서열 동일성을 나타낸다. 이러한 동일성은 특정 인간 항체의 아미노산 서열을 나타내는 것으로 확실히 공지되거나 인식가능하다. 실질적으로 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열은, 예를 들어 아미노산의 소수의 변형 또는 보존적 치환을 가질 수 있다. 이러한 인간 항체는 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편에 선택적으로 결합하는 이의 기능을 유지한다.
용어 "인간 단일 클론 항체"는, 예를 들어 파지 라이브러리에 의한 생성, 림프구에 의한 생성 또는 하이브리도마 세포에 의한 생성과 같은 재조합 방법에 의해 생성된, 실질적으로 또는 완전히 인간 CDR 아미노산 서열을 갖는 단일 클론 항체를 포함할 수 있다.
용어 "단일 클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터의 항체를 지칭한다. 실질적으로 균질한 항체의 집단은 실질적으로 유사하고 동일한 에피토프(들)에 결합하는 항체를 포함하며, 단일 클론 항체의 생성 동안 정상적으로 발생할 수 있는 변이체를 제외한다. 이러한 변이체는 일반적으로 단지 소량으로 존재한다. 단일 클론 항체는 전형적으로 복수의 항체로부터의 단일 항체의 선택을 포함하는 공정에 의해 수득된다. 예를 들어 선택 공정은 복수의 클론, 예를 들어 하이브리도마 클론(hybridoma clones), 파지 클론, 효모 클론, 박테리아 클론 또는 다른 재조합 DNA 클론의 풀로부터의 독특한 클론의 선택일 수 있다. 선택된 항체는 예를 들어 표적에 대한 친화도를 개선시키기 위해 (소위 "친화도 성숙"에 의해), 항체를 인간화하기 위해, 세포 배양물에서 그의 생성을 개선시키기 위해, 및/또는 대상체에서 그의 면역원성을 감소시키기 위해 추가로 변경될 수 있다.
용어 "인간화된 항체"는 단백질 서열이 인간에서 천연적으로 생성된 항체와의 그의 유사성을 증가시키도록 변형된 비-인간 종(예를 들어 마우스 또는 토끼)으로부터의 항체를 의미할 수 있다.
항체는 재조합 항체일 수 있다. 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성된 인간 항체를 포함할 수 있다.
용어 "항원-결합 영역"은 그의 표적 항원에 대한 특이적 결합 친화도를 갖는 항체의 영역, 예를 들어 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편을 의미할 수 있다. 바람직하게는, 단편은 에피토프이다. 항원-결합 영역은 초가변 CDR 또는 이의 기능적 부분일 수 있다. 용어 CDR의 "기능적 부분"은 표적 항원에 대한 특이적 친화도를 나타내는 CDR 내의 서열을 의미할 수 있다. CDR의 기능적 부분은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편에 특이적으로 결합하는 리간드를 포함할 수 있다.
용어 "CDR"은 중쇄 및 경쇄 가변 쇄 내의 초가변 영역을 의미할 수 있다. 항체의 중쇄 및 경쇄 각각에는 1, 2, 3개 또는 그 초과의 CDR이 존재할 수 있다. 일반적으로, 함께 구성될 때, 항원-결합 부위, 즉 항원이 결합하거나 특이적으로 반응하는 3차원 결합 부위를 형성하는 각각의 쇄 상에 적어도 3개의 CDR이 존재한다. 그러나, 일부 항체의 중쇄에 4개의 CDR이 있을 수 있는 것으로 가정하였다.
CDR의 정의는 또한 서로에 대해 비교할 때 아미노산 잔기의 중첩(overlapping) 또는 하위세트를 포함한다. 특정 CDR 또는 이의 기능적 부분을 포괄하는 정확한 잔기 번호는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당업자는 항체의 가변 영역 아미노산 서열이 주어지면 어떤 잔기가 특정 CDR을 포함하는지를 일상적으로 결정할 수 있다.
CDR의 아미노산 서열 경계는 Kabat 등의 문헌 「supra ("Kabat" numbering scheme)」; Al-Lazikani 등의 문헌 「1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 ("Chothia" numbering scheme)」; MacCallum 등의 문헌 「1996, J. Mol. Biol. 262:732-745 ("Contact" numbering scheme)」; Lefranc 등의 문헌 「Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 ("IMGT" numbering scheme)」; 및 Honegge 및 Pluckthun 등의 「J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 ("AHo" numbering scheme)」에 기재된 것을 포함한 다수의 공지된 넘버링 스킴 중 임의의 것을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 항체의 "기능적 단편"은 기능적 활성을 보유하는 항체의 부분을 의미할 수 있다. 기능적 활성은, 예를 들어 항원 결합 활성 또는 특이성일 수 있다. 기능적 활성은 또한 예를 들어 항체 불변 영역에 의해 제공되는 이펙터 기능일 수 있다. 용어 "기능적 단편"은 또한 예를 들어 인간 단일 클론 항체의 프로테아제 소화 또는 환원에 의해 및 당업자에게 공지된 재조합 DNA 방법에 의해 생성된 단편을 포함하도록 의도된다. 인간 단일 클론 항체 기능적 단편은, 예를 들어 개별 중쇄 또는 경쇄 및 그의 단편, 예를 들어 VL, VH 및 Fd; 1가 단편, 예를 들어 Fv, Fab, 및 Fab'; 2가 단편, 예를 들어 F(ab')2; 단일쇄 Fv (scFv); 및 Fc 단편을 포함한다.
용어 "VL 단편"은 CDR을 포함한 경쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 인간 단일 클론 항체의 경쇄의 단편을 의미할 수 있다. VL 단편은 경쇄 불변 영역 서열을 더 포함할 수 있다.
용어 "VH 단편"은 CDR을 포함한 중쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 인간 단일 클론 항체의 중쇄의 단편을 의미할 수 있다.
용어 "Fd 단편"은 제 1 중쇄 불변 영역, 즉 VH 및 CH-1에 커플링된 중쇄 가변 영역을 의미할 수 있다. 상기 "Fd 단편"은 중쇄의 경쇄 또는 제 2 및 제 3 불변 영역을 포함하지 않는다.
용어 "Fv 단편"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 전부 또는 일부, 및 중쇄 및 경쇄의 불변 영역의 부재를 포함하는, 인간 단일 클론 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미할 수 있다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은, 예를 들어 CDR을 포함한다. 예를 들어 Fv 단편은 중쇄 및 경쇄 둘 다의 약 110개의 아미노산의 아미노 말단 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함한다.
용어 "Fab 단편"은 Fv 단편보다 큰 인간 단일 클론 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미할 수 있다. 예를 들어 Fab 단편은 가변 영역, 및 중쇄 및 경쇄의 제 1 불변 도메인의 전부 또는 일부를 포함한다. 따라서, Fab 단편은, 예를 들어 중쇄 및 경쇄의 약 110 내지 약 220개의 아미노산 잔기를 더 포함한다.
용어 "Fab' 단편"은 Fab 단편보다 큰 인간 단일 클론 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미할 수 있다. 예를 들어 Fab' 단편은 경쇄의 전부, 중쇄의 가변 영역의 전부, 및 중쇄의 제 1 및 제 2 불변 도메인의 전부 또는 일부를 포함한다. 예를 들어 Fab' 단편은 중쇄의 220 내지 330개의 아미노산 잔기의 일부 또는 전부를 더 포함할 수 있다.
용어 "F(ab')2 단편"은 인간 단일 클론 항체의 2가 항원-결합 단편을 의미할 수 있다. F(ab')2 단편은, 예를 들어 2개의 중쇄- 및 2개의 경쇄의 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄의 제 1 불변 도메인의 전부 또는 일부를 더 포함할 수 있다.
용어 "단쇄 Fv(scFv)"는 짧은 링커 펩티드와 연결된 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합을 의미할 수 있다.
용어 "이중특이적 항체(BsAb)"는 더 짧게 연결된 펩티드에 의해 서로 연결된 2개의 scFv를 포함하는 이중특이적 항체를 의미할 수 있다.
당업자는 단편이 기능적 활성을 유지하는 한, 항체 단편의 정확한 경계가 중요하지 않다는 것을 알고 있다. 잘 알려진 재조합 방법을 사용하여, 당업자는 특정한 적용을 위해 원하는 임의의 종점을 갖는 기능적 단편을 발현하도록 폴리뉴클레오티드 서열을 조작할 수 있다. 항체의 기능적 단편은 인간 항체와 실질적으로 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 단편을 포함하거나 이로 구성될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 제 1 측면에 대한 이의 항원-결합 단편은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편에 대해 면역특이적이다. 이의 항원-결합 단편은 VH, VL, Fd, Fv, Fab, Fab', scFv, F(ab')2 및 Fc 단편으로 구성된 군으로부터 선택된 임의의 단편을 포함하거나 이로 구성될 수 있다.
이의 항원-결합 단편은 달리 '나노바디(nanobody)'로 지칭되는 단일 도메인 항체(sdAb)일 수 있으며, 이는 당업자가 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 구성된 항체 단편임을 이해할 것이다.
이의 항원-결합 단편은 VL의 항원 결합 영역 서열 중의 어느 하나, VH의 항원 결합 영역 서열 중의 어느 하나, 또는 인간 항체의 VL 및 VH 항원 결합 영역의 조합을 포함하거나 이로 구성될 수 있다. VH 및 VL 항원 결합 영역 서열의 적절한 수 및 조합은 원하는 친화도 및 특이성 및 항원-결합 단편의 의도된 용도에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 항체의 기능적 단편 또는 항원-결합 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 용이하게 생성 및 단리될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어 단백질분해 방법, 재조합 방법 및 화학적 합성을 포함한다. 기능적 단편의 단리를 위한 단백질 분해 방법은 출발 물질로서 인간 항체를 사용하는 것을 포함한다. 인간 면역글로불린의 단백질 분해에 적합한 효소는 예를 들어 파파인 및 펩신을 포함할 수 있다. 적절한 효소는 예를 들어 1가 또는 2가 단편이 요구되는지 여부에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 예를 들어 파파인 절단(papain cleavage)은 항원 및 Fc 단편에 결합하는 2개의 1가 Fab' 단편을 생성한다. 펩신 절단(pepsin cleavage)은 예를 들어 2가 F(ab') 단편을 생성한다. 본 발명의 F(ab')2 단편은 예를 들어 DTT 또는 2-메르캅토에탄올을 사용하여 추가로 환원되어 2개의 1가 Fab' 단편을 생성할 수 있다.
단백질 분해에 의해 생성된 항체의 기능적 또는 항원-결합 단편은 친화도 및 칼럼 크로마토그래피 공정에 의해 정제될 수 있다. 예를 들어 소화되지 않은 항체(undigested antibodies) 및 Fc 단편은 단백질 A에 대한 결합에 의해 제거될 수 있다. 추가로, 기능적 단편은 예를 들어 이온 교환 및 겔 여과 크로마토그래피를 이용하여 그의 전하 및 크기에 의해 정제될 수 있다. 이러한 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 재조합 방법에 의해 생성될 수 있다. 바람직하게는, 항체 중쇄 및 경쇄의 원하는 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 초기에 분리한다. 이러한 영역은, 예를 들어 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 영역은 특히 중쇄 및 경쇄의 항원 결합 영역, 바람직하게는 항원 결합 부위, 가장 바람직하게는 CDR을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당업자에게 알려진 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당업계에 알려진 올리고뉴클레오티드 합성 방법에 의해 직접 합성될 수 있다. 대안적으로, 더 작은 단편이 합성되고 결합되어 당업계에 알려진 재조합 방법을 사용하여 더 큰 기능적 단편을 형성할 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "면역특이성"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합 영역이 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편과 특이적으로 결합함으로써 ZIP12의 세포외 부분과 면역반응할 수 있음을 의미할 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대략 10-5 내지 10-13 M-1, 바람직하게는 10-6 내지 10-9 M-1, 더욱 바람직하게는 10-10 내지 10-12 M-1의 친화도 상수로 항원(즉, 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편)과 선택적으로 상호작용할 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 바람직하게는 ZIP4 및/또는 ZIP13에 실질적으로 결합하지 않아서, 친화도 상수가 대략 10-10 M-1, 10-9 M-1, 10-8 M-1, 10-7 M-1, 또는 10-6 M-1 초과, 바람직하게는 10-5 M-1, 10-4M-1 또는 10-3M-1 초과, 더욱 더 바람직하게는 10-2M-1 10-1M-1 또는 10-2M-1 초과, 가장 바람직하게는 10+1M-1 , 10+2M-1 또는 10+3M-1 초과가 되도록 한다.
용어 "면역반응"은 서열번호 252 및/또는 서열번호 1을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프 또는 이의 변이체 또는 단편과의 결합시 결합 영역이 면역 반응을 유발할 수 있음을 의미할 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합 영역을 유발하고 이와 조합하는 능력을 갖는 항원의 임의의 영역을 의미할 수 있다.
따라서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄는 IgA; IgD; IgE; IgG 및 IgM으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 중쇄는 IgG이다. 바람직하게는, 중쇄는 IgA이다.
중쇄는 IgG1일 수 있다. 중쇄는 IgG2일 수 있다. 중쇄는 IgG3일 수 있다. 중쇄는 IgG4일 수 있다. 중쇄는 IgA1일 수 있다. 중쇄는 IgA2일 수 있다.
실시예에서 기술되고 도 1에서 도시된 바와 같이, 본 발명자들은 본원에서 51B12로 지칭되는, ZIP12의 세포외 도메인에 결합하는, 항체를 개발하였으며, 이는 ZIP12을 표적화하고 그의 기능을 억제할 수 있었다. 이른바 '51B12-모' 항체의 6개의 CDR, VH 및 VL 서열은 도 9a에 나타낸 표에 요약되어 있다. 이어서 본 발명자들은 신규한 변이체 또는 돌연변이를 생산하기 위해 "51B12-모" 항체를 친화성 성숙에 적용하였다.
실시예 1에 기재된 바와 같이, 3개의 중쇄 및 경쇄 CDR에서 CDR 잔기 당 8개 또는 9개의 돌연변이를 설계하였다. 가변 중쇄(VH) CDR 변이체의 경우, 가변 영역을 합성하여 Fc 널 인간(null human) IgG1을 함유하는 발현 벡터에 클로닝하였다. 가변 경쇄(VL) CDR 변이체의 경우, 가변 영역을 합성하여 인간 카파 경쇄 불변 영역(human kappa light chain constant region)을 포함하는 발현 벡터에 클로닝하였다.
도 9b는 "51B12 모"로부터 유래된 친화성 성숙 항체의 26개의 상이한 구현예의 서열을 요약한 표이다. 상기 표에서 제 1 열(row)은 "H3_W99H_L1"로 지칭되는 51B12 모의 친화성 성숙 변이체에 대한 상응하는 서열(6개의 CDR, VH 및 VL)을 나타내며, 여기서 상기 CDR-H3 서열은 W99H 아미노산 스와프를 제외한 모의 서열과 동일하고, CDR-L1 CDR은 다음과 같다. 상기 표에서 제 2 열은 "H3_W99H_L2"로 지칭되는 51B12 모의 친화성 성숙 변이체에 대한 상응하는 서열을 나타내며, 여기서 상기 CDR-H3 서열은 W99H 아미노산 스와프를 제외한 모의 서열과 동일하고, CDR-L2 CDR은 도시된 바와 같으며, 기타 등등이다.
이러한 친화성 성숙 변이체 각각은 이제 이들의 서열 측면에서 설명될 것이다.
H3_W99H_L1
따라서, 한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_W99H_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 13에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 14에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 15에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 19에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 16에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 17에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 18에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 20에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H3_W99H_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_W99H_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 21에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 22에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 23에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 27에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 24에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 25에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 26에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 25을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 28에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H3_W99H_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_W99H_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 29에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 30에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 31에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 35에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 32에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 33에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 34에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 36에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T56H_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T56H_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 37에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 38에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 39에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 43에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 40에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 41에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 42에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 44에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 41을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T57H_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T57H_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 45에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 46에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 47에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 51에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 48에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 49에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 50에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 52에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 47을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_Y60K_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_Y60K_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 53에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 54에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 55에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 59에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 56에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 57에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 58에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 60에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T63Y_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T63Y_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 61에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 62에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 63에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 67에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 64에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 65에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 66에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 68에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_K65P_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_K65P_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 69에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 70에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 71에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 75에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 72에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 73에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 74에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 76에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 76을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_G66Q_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_G66Q_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 77에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 78에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 79에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 83에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 80에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 81에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 82에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 84에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H3_M105P_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_M105P_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 85에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 86에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 87에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 91에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 88에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 89에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 90에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 89을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 89을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 92에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 89을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
51B12_VH_L1
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 51B12_VH_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 93에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 94에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 95에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 99에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 96에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 97에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 98에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 100에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 99를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 100을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T56H_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T56H_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 101에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 102에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 103에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 101을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 102를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 103을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 101을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 102를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 103을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 107에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 104에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 105에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 106에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 104를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 105를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 106을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 104를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 105를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 106을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 108에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 101을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 102를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 103을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 104를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 105를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 106을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 107을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 108을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T57H_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T57H_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 109에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 110에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 111에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 109를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 110을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 111을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 109를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 110을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 111을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 115에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 112에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 113에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 114에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 112를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 113을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 114를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 112를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 113을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 114를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 116에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 109를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 110을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 111을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 112를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 113을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 114를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 115를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 116을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_Y60K_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_Y60K_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 117에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 118에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 119에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 117을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 118을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 119를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 117을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 118을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 119를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 123에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 120에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 121에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 122에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 120을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 121을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 122를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 120을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 121을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 122를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 124에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 117을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 118을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 119를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 120을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 121을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 122를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 123을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 124를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T63Y_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T63Y_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 125에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 126에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 127에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 125를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 126을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 127을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 125를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 126을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 127을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 131에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 128에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 129에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 130에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 128을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 129를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 130을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 128을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 129를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 130을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 132에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 125를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 126을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 127을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 128을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 129를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 130을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 131을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 132를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H3_M105P_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_M105P_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 133에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 134에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 135에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 133을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 134를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 135를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 133을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 134를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 135를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 139에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 136에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 137에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 138에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 136을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 137을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 138을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 136을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 137을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 138을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 140에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 133을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 134를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 135를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 136을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 137을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 138을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 139를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 140을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_K65P_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_K65P_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 141에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 142에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 143에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 서열번호 141을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 142를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 143을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 서열번호 141을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 142를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 143을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 147에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 144에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 145에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 146에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은서열번호 144를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 145를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 146을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은서열번호 144를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 145를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 146을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 148에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 서열번호 141을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 142를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 143을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인,서열번호 144를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 145를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 146을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 147을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 148을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_G66Q_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_G66Q_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 149에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 150에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 151에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 149를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 150을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 151을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 149를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 150을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 151을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 155에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 152에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 153에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 154에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 152를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 153을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 154를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 152를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 153을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 154를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 156에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 149를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 150을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 151을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 152를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 153을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 154를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 155를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 156을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H3_M105P_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_M105P_L2로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 157에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 158에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 159에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 157을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 158을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 159를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 157을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 158을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 159를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 163에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 160에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 161에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 162에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 164에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 157을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 158을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 159를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 10을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
51B12_VH_L2
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H3_W99H_L1로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 165에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 166에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 167에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 171에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 168에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 169에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 170에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 169을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 169을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 172에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 167을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 169을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T56H_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T56H_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 173에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 174에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 175에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 179에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 176에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 177에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 178에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 180에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T57H_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T57H_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 181에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 182에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 183에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 187에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 184에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 185에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 186에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 184을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 188에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_Y60K_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_Y60K_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 189에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 190에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 191에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 195에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 192에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 193에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 194에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 194를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 194를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 196에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 194를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 195를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 196을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_T63Y_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_T63Y_VL-par으로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 197에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 198에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 199에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 197을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 198을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 199를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 197을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 198을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 199를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 203에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 200에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 201에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 202에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 200을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 201을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 202를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 200을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 201을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 202를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 204에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 197을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 198을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 199를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 200을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 201을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 202를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 203을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 204를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_K65P_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_K65P_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 205에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 206에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 207에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 205를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 206을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 207을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 205를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 206을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 207을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 211에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 208에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 209에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 210에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 212에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 205를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 206을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 207을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 212을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
H2_G66Q_VL-par
한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 H2_G66Q_VL-par로 지칭된다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 213에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 214에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 215에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및/또는 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 및 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 219에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 216에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 217에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 실질적으로 서열번호 218에 제시된 서열 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및/또는 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다. 그러나, 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 220에 실질적으로 제시된 서열을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 CDR-H3을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인을 포함한다.
바람직하게는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 220을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 제 2 측면에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되되, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12에 특이적으로 결합하며, 도 9b에 도시된 각각의 항체에 대해 제시된 6개의 CDR 서열을 포함한다.
예를 들어, 한 구현예에서 항체 또는 항원-결합 단편은 바람직하게는 도 9b에 도시된 바와 같이, "H3_W99H_L1"로 지칭되는 상기 항체에 대해 제시된 6개의 CDR 서열, 즉 CDR-H1 = 서열번호 13; CDR-H2 = 서열번호 14; CDR-H3 = 서열번호 15; CDR-L1 = 서열번호 16; CDR-L2 = 서열번호 17; 및 CDR-L3 = 서열번호 18을 포함한다.
또한, 항체 또는 항원-결합 단편은 바람직하게는 도 9b에 도시된 각각의 항체에 대해 제시된 VH/VL 서열 쌍을 포함한다. 예를 들어, 한 구현예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 바람직하게는, 도 9b에 도시된 바와 같이, "H3_W99H_L1"로 지칭되는 항체 클론에 대해 제시된 VH/VL 서열, 즉 VH = 서열번호 19; VL = 서열번호 20을 포함한다. 도 9b에 도시된 다른 항체 각각에 대한 다른 VH/VL 서열 쌍에도 동일하게 적용된다.
본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 도 9a에 도시된 "51B12 모"로 지칭되는 항체 클론에 대해 제시된 6개의 CDR 서열(또는 VH/VL 서열)을 포함하지 않을 수 있다.
제 2 측면의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 252), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식한다. 바람직하게는, 제 2 측면의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, LLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 1), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식한다. 항체 또는 항원-결합 단편의 에피토프는 제 1 측면과 관련하여 정의된 것일 수 있다.
유리하게는, 본 발명의 제 1 측면 및 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 항-ZIP12 활성은 이것이 그 자체로 치료제로서 유용성을 갖는다는 것을 의미하고, 저산소증-유도된 또는 저산소증-관련 병태, 특히 폐 고혈압의 치료, 개선 또는 예방에 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 제 3 측면에서, 요법에 사용하기 위한, 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다.
본 발명의 제 4 측면에서, 저산소증-관련 병태를 치료, 예방 또는 개선하는 데 사용하기 위한, 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다.
본 발명의 제 5 측면에 따르면, 대상체에서 저산소증-관련 병태를 치료, 예방 또는 개선하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하거나 투여한 것을 포함한다.
저산소증-관련 병태는 허혈-재관류 손상(IRI), 심혈관 질환, 허혈성 심장 질환, 허혈성 뇌 병태, 황반 변성, 안구 허혈 증후군, 허혈성 시신경병증(ION), 당뇨병성 망막병증, 관절염, 염증, 패혈증, 패혈증-유도 쇼크, 신장 질환, 조직 섬유증, 위장 질환, 신경변성 질환, 호흡 곤란 증후군, 기관지폐 이형성증(bronchopulmonary dysplasia), 폐 고혈압, 저산소증 폐 고혈압, 중증 폐 고혈압, COPD, 특발성 폐섬유증(IPF), 당뇨병성 망막병증, 당뇨병, 각막 신생혈관형성, 병원성 혈관 성장, 암 및 근골격 장애로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명자들은 종양의 저산소증 코어가 저산소증-자극 신생혈관형성의 부위이고(Zhao 등의 문헌 「2015, The zinc transporter, ZIP12, regulates pulmonary vascular response to chronic hypoxia, Nature, Vol:524, ISSN:0028-0836, Pages:356-360」 참조), 저산소증이 종양의 보편적 특징으로 알려져 있고 방사선 및 화학요법에 대한 저항성에 기여한다는 것을 입증하였다. 따라서, 본 발명자들이 저산소증 병태에서 상향조절되고 질환 진행에서 핵심 인자인 것으로 입증한 ZIP12는 본 발명자들에 의해 암에 대한 이상적인 치료 표적으로서 확인되었다. 종양 미세환경에서 ZIP12의 억제는 종양에 대한 혈액 공급을 제한할 수 있고 따라서 종양 성장을 제한하고/하거나 저산소증 종양 세포 사멸을 유도할 수 있다.
따라서, 한 구현예에서, 저산소증-관련 병태는 암이다.
바람직하게는, 암을 치료, 예방 또는 개선하는데 있어서의 용도 또는 방법은 혈관신생을 억제하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 용도 또는 방법은 종양에 대한 혈액 공급을 제한하는 것을 포함한다.
그러나, 바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 폐 고혈압이다. 가장 바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 저산소증 폐 고혈압이다.
본 발명에 따른 항체, 그의 단편(총괄적으로 본원에서 "제제"로 지칭됨)은 저산소증-관련 병태, 및 바람직하게는 폐 고혈압을 치료, 개선 또는 예방하기 위한 단일요법(예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 단편 단독의 사용)에서 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 대안적으로, 본 발명에 따른 제제는 저산소증-관련 병태, 바람직하게는 폐 고혈압을 치료, 개선 또는 예방하기 위한 공지된 요법, 예를 들어 항응고제, 예를 들어 와파린(warfarin), 이뇨제(diuretics), 디곡신(digoxin), 엔도텔린 수용체 길항제(endothelin receptor antagonists), 예를 들어 보센탄(bosentan), 암브리센탄(ambrisentan) 및 마시텐탄(macitentan), 포스포디에스테라제(phosphodiesterase) 5 억제제, 예를 들어 실데나필(sildenafil) 및 타달라필(tadalafil), 프로스타글란딘(prostaglandins), 예를 들어 에포프로스테놀(epoprostenol), 일로프로스트(iloprost) 및 트레프로스티닐(treprostinil), 가용성 구아닐레이트 시클라제 자극제(soluble guanylate cyclase stimulators), 예를 들어 리오시구아트(riociguat) 및 칼슘 채널 차단제(calcium channel blockers), 니페디핀(nifedipine), 딜티아젬(diltiazem), 니카르디핀(nicardipine) 및 암로디핀(amlodipine)에 대한 보조제로서 또는 이들과 조합되어 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 제제는 특히 조성물이 사용되는 방식에 따라 다수의 상이한 형태를 갖는 조성물 중에서 조합될 수 있다. 따라서, 예를 들어 조성물은 분말, 정제, 캡슐, 액체, 연고, 크림, 겔, 히드로겔, 에어로졸, 스프레이, 미셀 용액(micellar solution), 경피 패치(transdermal patch), 리포솜 현탁액의 형태 또는 치료를 필요로 하는 인간 또는 동물에게 투여될 수 있는 임의의 다른 적합한 형태일 수 있다. 본 발명에 따른 의약의 비히클은 그것이 제공되는 대상체에 의해 잘 허용되는 비히클이어야 한다는 것을 인식할 것이다.
본 발명의 제제를 포함하는 의약은 다수의 방식으로 사용될 수 있다. 예를 들어 경구 투여가 요구될 수 있으며, 이 경우에 제제는 예를 들어 정제, 캡슐 또는 액체의 형태로 경구로 섭취될 수 있는 조성물 내에 함유될 수 있다. 본 발명의 제제 및 의약을 포함하는 조성물은 흡입에 의해 (예를 들어 비강내로) 투여될 수 있다. 조성물은 또한 국소 사용을 위해 제제화될 수 있다. 예를 들어 크림 또는 연고가 피부에 도포될 수 있다.
본 발명에 따른 제제 및 의약은 또한 서방성- 또는 지연성-방출 장치 내에 혼입될 수 있다. 이러한 장치는, 예를 들어 피부 상에 또는 피부 아래에 삽입될 수 있고, 의약은 수주 또는 심지어 수개월에 걸쳐 방출될 수 있다. 장치는 적어도 치료 부위에 인접하게 위치될 수 있다. 이러한 장치는 본 발명에 따라 사용되는 제제를 사용한 장기 치료가 필요하고 일반적으로 빈번한 투여(예를 들어 적어도 매일 주사)를 필요로 할 때 특히 유리할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 제제 및 약제는 혈류 내 주사에 의해 또는 치료를 필요로 하는 부위 내로 직접적으로 대상체에게 투여될 수 있다. 주사는 정맥내(볼루스 또는 주입) 또는 피하(볼루스 또는 주입), 또는 피내(볼루스 또는 주입)일 수 있다.
요구되는 항체 및 단편(즉, 제제)의 양은 그의 생물학적 활성 및 생체이용률에 의해 결정되며, 이는 투여 방식, 제제의 물리화학적 특성, 및 단일요법으로서 또는 병용 요법으로 사용되는지의 여부에 교대로 의존한다는 것을 이해할 것이다. 투여 빈도는 또한 치료되는 대상체 내의 제제의 반감기에 의해 영향을 받을 것이다. 투여되는 최적의 투여량은 당업자에 의해 결정될 수 있고, 사용되는 특정 제제, 약학적 조성물의 강도, 투여 방식 및 폐 고혈압의 진행에 따라 달라질 것이다. 치료되는 특정 대상체에 따라 추가적인 인자는 대상체의 연령, 체중, 성별, 식이 및 투여 시간을 포함한 투여량을 조정할 필요성을 초래할 것이다.
일반적으로, 본 발명에 따른 제제의 0.01 ㎍/kg(체중) 내지 100 mg/kg(체중)의 1일 투여량은 어떤 제제에 따라 병태, 예를 들어 폐 고혈압(pulmonary hypertension)을 치료, 개선 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 제제의 1일 투여량은 1 ㎍/kg(체중) 내지 100 mg/kg(체중), 더욱 바람직하게는 10 ㎍/kg(체중) 내지 1 mg/kg(체중), 가장 바람직하게는 대략 100 ㎍/kg(체중) 내지 10 mg/kg(체중)이다.
상기 제제는 폐 고혈압의 개시 전, 개시 동안 또는 개시 후에 투여될 수 있다. 1일 투여량은 단일 투여(예를 들어 1일 단일 주사)로서 제공될 수 있다. 대안적으로, 상기 제제는 하루 동안 2회 이상의 투여를 필요로 할 수 있다. 예로서, 상기 제제는 0.07 ng 내지 700 mg(즉, 70 kg의 체중을 가정함)의 1일 투여량으로 2회(또는 치료되는 폐 고혈압의 중증도에 따라 더 많이) 투여될 수 있다. 치료를 받는 환자는 깨어날 때 제 1 용량을 취한 다음, 저녁에 또는 그 후에 3 또는 4시간 간격으로 제 2 용량을 취할 수 있다(2회의 용량 요법으로). 대안적으로, 서방형 장치를 사용하여 반복 용량을 투여할 필요 없이 환자에게 본 발명에 따른 제제의 최적 용량을 제공할 수 있다. 약학 산업에 의해 통상적으로 사용되는 것과 같은 공지된 절차(예를 들어 생체내 실험, 임상 시험 등)는 본 발명에 따른 제제의 특정 제형 및 정확한 치료 요법(예를 들어 제제의 1일 투여량 및 투여 빈도)을 형성하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 제 6 측면에서, 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 비히클을 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
상기 약학 조성물은 바람직하게는 항-고혈압성, 즉 폐 고혈압의 치료적 개선, 예방 또는 치료에 사용되는 약학 제형이다.
본 발명은 또한 제 7 측면에서, 제 6 측면에 따른 약학 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 제 1 또는 제 2 측면에서 정의된 바와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 약학적으로 허용가능한 비히클과 결합하는 단계를 포함한다.
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제 1 또는 제 2 측면에 대해 정의된 바와 같을 수 있다.
상기 "대상체"는 척추동물, 포유동물, 또는 가축일 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 약제는 임의의 포유동물, 예를 들어 가축(예를 들어 말), 애완동물을 치료하는 데 사용될 수 있거나, 다른 수의학적 용도로 사용될 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 대상체는 인간이다.
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 "치료적 유효량"은 대상체에게 투여될 때, 폐 고혈압을 치료하거나 목적하는 효과를 생성하는 데 필요한 제제의 양인 임의의 양이다.
예를 들어 사용되는 항체 또는 이의 단편의 치료적 유효량은 약 0.1 ng/kg 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 약 1 ng/kg 내지 약 10 mg/kg일 수 있다. 상기 항체 또는 단편의 양은 약 10 ng/kg 내지 약 10 mg/kg, 가장 바람직하게는 약 50 ng/kg 내지 약 5 mg/kg의 양인 것이 바람직하다.
본원에서 언급되는 "약학적으로 허용가능한 비히클"은 약학 조성물을 제형화하는데 유용한 것으로 당업자에게 공지된 임의의 공지된 화합물 또는 공지된 화합물의 조합이다.
한 구현예에서, 상기 약학적으로 허용가능한 비히클은 고체일 수 있고, 상기 조성물은 분말 또는 정제의 형태일 수 있다. 고체 약학적으로 허용가능한 비히클은 향미제, 윤활제, 가용화제, 현탁화제, 염료, 충전제, 활택제, 압축 보조제, 불활성 결합제, 감미제, 보존제, 염료, 코팅제, 또는 정제-붕해제로서 또한 작용할 수 있는 하나 이상의 물질을 포함할 수 있다. 상기 비히클은 또한 캡슐화 물질일 수 있다. 분말에서, 상기 비히클은 본 발명에 따른 미분된 활성제와 혼합된 미분된 고체이다. 정제에서, 상기 활성제는 적합한 비율로 필요한 압축 특성을 갖고 목적하는 형상 및 크기로 압축된 비히클과 혼합될 수 있다. 상기 분말 및 정제는 바람직하게는 활성제의 99% 이하를 함유한다. 적합한 고체 비히클은, 예를 들어 칼슘 포스페이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 당, 락토스, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 셀룰로스, 폴리비닐피롤리딘, 저융점 왁스 및 이온 교환 수지를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 약학적 비히클은 겔일 수 있고, 상기 조성물은 크림 등의 형태일 수 있다.
그러나, 상기 약학적 비히클은 액체일 수 있고, 상기 약학 조성물은 용액의 형태이다. 상기 액체 비히클은 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 엘릭시르 및 가압 조성물을 제조하는데 사용된다. 본 발명에 따른 활성제는 약학적으로 허용가능한 액체 비히클, 예를 들어 물, 유기 용매, 둘 다의 혼합물 또는 약학적으로 허용가능한 오일 또는 지방에 용해되거나 현탁될 수 있다. 상기 액체 비히클은 다른 적합한 약학 첨가제, 예를 들어 가용화제, 유화제, 완충제, 보존제, 감미제, 향미제, 현탁화제, 증점제, 색상, 점도 조절제, 안정화제 또는 삼투압-조절제를 함유할 수 있다. 경구 및 비경구 투여를 위한 액체 비히클의 적합한 예는 물(상기와 같은 첨가제, 예를 들어 셀룰로스 유도체, 바람직하게는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스 용액을 부분적으로 함유함), 알코올(일가 알코올 및 다가 알코올, 예를 들어 글리콜을 포함함) 및 그의 유도체, 및 오일(예를 들어 분별된 코코넛 오일 및 아라키스 오일)을 포함한다. 비경구 투여를 위해, 상기 비히클은 또한 오일성 에스테르, 예를 들어 에틸 올리에이트 및 이소프로필 미리스테이트일 수 있다. 상기 멸균 액체 비히클은 비경구 투여를 위한 멸균 액체 형태 조성물에 유용하다. 가압된 조성물을 위한 액체 비히클은 할로겐화 탄화수소 또는 다른 약학적으로 허용가능한 추진약(propellant)일 수 있다.
멸균 용액 또는 현탁액인 액체 약학 조성물은, 예를 들어 근육내, 척수강내, 경막외, 복강내, 정맥내 및 특히 피하 주사에 의해 이용될 수 있다. 상기 제제는 멸균수, 염수 또는 다른 적절한 멸균 주사가능한 매질을 사용하여 투여 시점에 용해 또는 현탁될 수 있는 멸균 고체 조성물로서 제조될 수 있다.
본 발명의 제제 및 조성물은 다른 용질 또는 현탁화제(예를 들어 용액을 등장성으로 만들기에 충분한 염수 또는 글루코스), 담즙 염, 아카시아, 젤라틴, 소르비탄 모노올리에이트, 폴리소르베이트 80(소르비톨의 올리에이트 에스테르 및 에틸렌 옥시드와 공중합된 그의 무수물) 등을 함유하는 멸균 용액 또는 현탁액의 형태로 경구로 투여될 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 제제는 또한 액체 또는 고체 조성물 형태로 경구로 투여될 수 있다. 경구 투여에 적합한 조성물은 고체 형태, 예를 들어 환제, 캡슐, 과립, 정제 및 분말, 및 액체 형태, 예를 들어 용액, 시럽, 엘릭시르 및 현탁액을 포함한다. 비경구 투여에 유용한 형태는 멸균 용액, 에멀젼 및 현탁액을 포함한다.
본 발명은 또한 제 1 또는 제 2 측면의 항체 및 그와 같이 생성된 항체를 생성하는 방법에까지 확장된다.
제 8 측면에서, 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다:
(i) 서열번호 252 또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12 세포외 에피토프로 숙주 유기체(host organism)를 면역화시키는 단계; 및
(ii) 상기 숙주로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 수집하는 단계.
상기 숙주는 포유동물일 수 있으며, 인간, 토끼 또는 마우스일 수 있다.
에피토프는 선형 또는 구조적일 수 있다. 에피토프는 변성되거나 폴딩될 수 있다. 그러나, 폴딩된 에피토프를 사용하여 숙주를 면역화시키는 것이 바람직하다.
바람직하게는, 상기 방법은 숙주 동물을 출혈시킨 다음, 바람직하게는 혈액, 가장 바람직하게는 혈청으로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 수집하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 상기 혈청은 공유 결합된 펩티드-지지체를 갖는 중력 칼럼을 통과시킨다. 세척 후, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 바람직하게는 산성 완충액(acidic buffer)인 완충액에서 용출되고, 이어서 상기 용액은 중화될 수 있다. 상기 방법은 적합한 완충액(예를 들어 PBS) 및 선택적으로 동결건조에 대한 투석을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 제 9 측면에서, 상기 제 1 또는 제 2 측면에 정의된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열이 제공된다.
본 발명의 제 10 측면에서, 상기 제 9 측면에 따른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 카세트(expression cassette)가 제공된다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열은 바람직하게는 재조합 벡터, 예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성을 가능하게 하기 위해 관심 숙주 세포 내로 전달하기 위한 재조합 벡터에서 수거된다.
따라서, 본 발명의 제 11 측면에서, 상기 제 10 측면에 따른 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터가 제공된다.
제 1 또는 제 2 측면의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 벡터는 예를 들어 플라스미드(plasmid), 코스미드(cosmid) 또는 파지(phage)일 수 있고/있거나 바이러스 벡터일 수 있다. 이러한 재조합 벡터는 뉴클레오티드 서열로 세포를 형질전환(transforming)시키기 위한 본 발명의 전달 시스템에서 매우 유용하다. 뉴클레오티드 서열은 바람직하게는 DNA 서열일 수 있고, 이는 제 1 또는 제 2 측면의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 형성하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 서열을 암호화하는 DNA 서열이다.
제 1 또는 제 2 측면의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 재조합 벡터는 또한 다른 기능적 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어 이들은 숙주 세포 내로 벡터의 도입 시 전이유전자 발현(transgene expression)을 개시하기 위한 적합한 프로모터를 포함하는 다양한 다른 기능적 요소를 더 포함할 수 있다. 예를 들어 벡터는 바람직하게는 숙주 세포의 핵에서 자율 복제할 수 있다. 이 경우에, DNA 복제를 유도하거나 조절하는 요소가 재조합 벡터에서 요구될 수 있다. 대안적으로, 재조합 벡터는 숙주 세포의 게놈 내로 통합되도록 설계될 수 있다. 이 경우에, 표적화 통합(예를 들어 상동성 재조합에 의함)을 선호하는 DNA 서열이 고려된다. 적합한 프로모터는 SV40 프로모터, CMV, EF1a, PGK, 바이러스 긴 말단 반복부, 뿐만 아니라 유도성 프로모터, 예를 들어 테트라사이클린 유도성 시스템을 예로서 포함할 수 있다. 카세트 또는 벡터는 또한 터미네이터, 예를 들어 베타 글로빈, SV40 폴리아데닐화 서열 또는 합성 폴리아데닐화 서열을 포함할 수 있다. 재조합 벡터는 또한 필요에 따라 핵산의 발현을 제어하기 위한 프로모터 또는 조절인자 또는 인핸서를 포함할 수 있다.
벡터는 또한 클로닝 과정에서 선택가능한 마커로서 사용될 수 있는, 즉 형질감염되거나 형질전환된 세포의 선택을 가능하게 하고, 이종 DNA를 혼입하는 벡터를 이용하는 세포의 선택을 가능하게 하는 유전자를 암호화하는 DNA를 포함할 수 있다. 예를 들어 암피실린, 네오마이신, 푸로마이신 또는 클로람페니콜 내성이 예상된다. 대안적으로, 선택가능한 마커 유전자는 전이유전자를 함유하는 벡터와 동시에 사용되는 상이한 벡터에 존재할 수 있다. 카세트 또는 벡터는 또한 뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 것과 관련된 DNA를 포함할 수 있거나, 발현된 폴리펩티드를 숙주 세포의 특정 부분으로 표적화하기 위한 DNA를 포함할 수 있다.
정제된 벡터는 적합한 수단, 예를 들어 직접적인 세포내이입 흡수(direct endocytotic uptake)에 의해 숙주 세포 내로 직접 삽입될 수 있다. 벡터는 형질감염, 감염, 전기천공, 미세주입(microinjection), 세포 융합, 원형질체 융합(protoplast fusion), 칼슘 포스페이트, 양이온성 지질-기반 리포펙션(cationic lipid-based lipofection), 중합체 또는 덴드리머(dendrimer)-기반 방법 또는 탄도 충격(ballistic bombardment)에 의해 숙주 세포(예를 들어 진핵 또는 원핵 세포) 내로 직접 도입될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 벡터는 입자 총을 사용하여 숙주 세포 내로 직접 도입될 수 있다.
대안적으로, 전달 시스템은 벡터 내에 혼입되지 않으면서 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 제공할 수 있다. 예를 들어 핵산 분자는 리포솜 또는 바이러스 입자 내에 혼입될 수 있다. 대안적으로, "네이키드(naked)" 폴리뉴클레오티드는 적합한 수단, 예를 들어 직접적인 세포내이입 흡수에 의해 숙주 세포 내로 삽입될 수 있다.
본 발명의 제 12 측면에서, 상기 제 9 측면에 따른 폴리뉴클레오티드 서열, 상기 제 10 측면에 따른 발현 카세트, 또는 상기 제 11 측면에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다.
숙주 세포는 진핵 또는 원핵 숙주 세포일 수 있다. 바람직하게는, 숙주 세포는 진핵 숙주 세포이다. 더욱 바람직하게는, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포, 예를 들어 NS0 뮤린 골수종 세포(murine myeloma cells), PER.C6® 인간 세포, 인간 배아 신장 293 세포 또는 차이니즈 햄스터 난소(Chinese hamster ovary; CHO) 세포이다. 가장 바람직하게는, 숙주 세포는 CHO 세포이다.
제 13 측면에서, 상기 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 항원-결합 단편의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은:
(a) 제 11 측면의 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계; 및
(b) 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 항원-결합 단편의 생성을 초래하는 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계;
를 포함한다.
단계 (a)의 숙주 세포는 진핵 또는 원핵 숙주 세포일 수 있다. 바람직하게는, 숙주 세포는 진핵 숙주 세포이다. 더욱 바람직하게는, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포, 예를 들어 NS0 뮤린 골수종 세포, PER.C6® 인간 세포, 인간 배아 신장 293 세포 또는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 가장 바람직하게는, 숙주 세포는 CHO 세포이다.
상기 방법은 (c) 세포 배양 배지를 수확, 원심분리 및/또는 여과하여 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 세포 배양 상청액을 수득하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 방법은 (d) 세포 배양 상청액으로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 분리 및 정제하는 단계를 더 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 정제는 적어도 하나의 크로마토그래피 단계에 의해 수행된다.
적합한 크로마토그래피 단계는 친화성 크로마토그래피 및/또는 이온 교환 크로마토그래피를 포함한다. 바람직하게는, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피이다. 이온 교환 크로마토그래피는 음이온 교환 크로마토그래피 및/또는 양이온 교환 크로마토그래피일 수 있다.
바람직하게는, 상기 단계 (d)는:
(i) 단백질 A 크로마토그래피;
(ii) 음이온 교환 크로마토그래피; 및/또는
(iii) 양이온 교환 크로마토그래피
에 의해 세포 배양 상청액으로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 분리 및 정제하는 단계를 포함한다.
상기 방법은 (e) 단계 (d)로부터 생성된 정제된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 여과하는 단계를 더 포함할 수 있다. 바람직하게는, 단계 (e)는 바이러스 여과를 포함한다. 따라서, 바람직하게는 단계 (d)로부터 생성된 정제된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 바이러스 여과 막을 사용하여 여과된다. 적합한 막은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있을 것이다.
본원에서 논의된 바와 같이, ZIP12 발현은 저산소증-유도된 폐 고혈압에 민감한 래트, 소 및 인간의 리모델링된 폐동맥에서 내피, 평활근 및 간질 세포를 포함하는 많은 세포 유형에서 증가된다. 따라서, 본 발명의 항체가 서열번호 252 및/또는 서열번호 1 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12의 세포외 에피토프에 결합할 수 있다는 것을 고려하면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12의 존재를 검출하고, 그의 농도를 결정함으로써 강력한 진단 도구로서 사용될 수 있다.
따라서, 제 14 측면에서, 진단 또는 예후에 사용하기 위한 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 항원-결합 단편이 제공된다.
본 발명의 제 15 측면에 따르면, 저산소증-관련 병태를 진단 또는 예후에 사용하기 위한 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 항원-결합 단편이 제공된다.
제 16 측면에 따르면, 상기 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 항원-결합 단편을 사용하여 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 ZIP12를 검출하는 것을 포함하는, 대상체에서 저산소증-관련 병태를 진단 또는 예후하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 허혈-재관류 손상(ischemic-reperfusion injury; IRI), 심혈관 질환, 허혈성 심장 질환, 허혈성 뇌 병태, 황반 변성, 안구 허혈성 증후군, 허혈성 시신경병증(ischemic optic neuropathy; ION), 당뇨병성 망막병증, 관절염, 염증, 패혈증, 패혈증-유도된 쇼크, 신장 질환, 조직 섬유증, 위장 질환, 신경변성 질환, 호흡 곤란 증후군, 기관지폐 이형성증, 폐 고혈압, 저산소증 폐 고혈압, 중증 폐 고혈압, COPD, 특발성 폐 섬유증(idiopathic pulmonary fibrosis; IPF), 당뇨병성 망막병증, 당뇨병, 각막 혈관신생, 병원성 혈관 성장 및 근골격계 장애로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 암 또는 폐 고혈압이다. 가장 바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 폐 고혈압이다.
상기 방법은 시험관내 또는 생체외 방법일 수 있다. 바람직하게는, 방법은 시험관내 방법이다.
상기 용도 또는 방법은 대상체에서 ZIP12의 발현 수준을 결정하는 것을 포함할 수 있고, 바람직하게는 건강한 대조군 집단으로부터의 참조 농도와 비교할 때 생물학적 샘플에서 ZIP12의 농도의 증가는 폐 고혈압 또는 불량한 예후를 나타낸다.
한 구현예에서, 폐에서 ZIP12의 존재는 폐 고혈압 또는 불량한 예후를 나타내는 것으로 간주될 수 있다. ZIP12의 존재는 면역세포화학에 의해 검출될 수 있다.
한 구현예에서, 건강한 대조군 집단으로부터의 참조와 비교할 때 ZIP12의 1배 증가는 폐 고혈압 또는 불량한 예후를 나타낸다. 한 구현예에서, 건강한 대조군 집단으로부터의 참조와 비교할 때 ZIP12의 2배, 3배, 4배 또는 5배 증가는 폐 고혈압 또는 불량한 예후를 나타낸다. 한 구현예에서, 건강한 대조군 집단으로부터의 참조와 비교할 때 ZIP12의 10배, 50배 또는 100배 증가는 폐 고혈압 또는 불량한 예후를 나타낸다.
본 발명의 제 17 측면에 따르면, 저산소증-관련 병태를 앓고 있는 대상체를 진단하기 위한, 또는 대상체의 병태의 예후를 제공하기 위한 키트가 제공되며, 상기 키트는 시험 대상체 유래 샘플에서 ZIP12를 검출하기 위한 제 1 또는 제 2 측면에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
상기 키트는 사용 지침 및/또는 대상체 유래 생물학적 샘플을 수득하기 위한 리셉터클(receptacle)을 더 포함할 수 있다.
바람직하게는, 저산소증-관련 병태는 본원에서 정의된 바와 같고, 바람직하게는 폐 고혈압이다.
예후는 폐 고혈압으로 진단된 대상체에서 치료 결과를 결정하는 것과 관련될 수 있다. 예후는 대상체에서 폐 고혈압의 진행 속도 또는 개선 및/또는 지속 기간, 생존 확률 및/또는 다양한 치료 요법의 효능을 예측하는 것과 관련될 수 있다. 따라서, 불량한 예후는 폐 고혈압 진행, 낮은 생존 확률 및 치료 요법의 감소된 효능을 나타낼 수 있다. 좋은 예후(favourable prognosis)는 폐 고혈압 해결, 높은 생존 확률 및 치료 요법의 증가된 효능을 나타낼 수 있다.
바람직하게는, 샘플은 생물학적 샘플을 포함한다. 상기 샘플은 단백질이 수득가능한 대상체로부터 수득가능한 임의의 물질일 수 있다.
생물학적 샘플은 조직 또는 생물학적 유체일 수 있다. 상기 생물학적 샘플은 내피, 평활근 및/또는 간질 세포가 수득될 수 있는 대상체로부터 수득가능한 임의의 물질일 수 있다. 또한, 상기 샘플은 혈액, 혈장, 혈청, 척수액, 소변, 땀, 타액, 눈물, 유방 흡인물(breast aspirate), 모유(breast milk), 전립선액, 정액, 질액, 대변, 자궁경부 찰과상, 간세포, 양수, 안구내액, 점액, 호흡 중 수분(moisture in breath), 동물 조직, 세포 용해물, 종양 조직, 모발, 피부, 구강 스크랩(buccal scrapings), 림프, 간질액, 손톱, 골수, 연골, 음식, 골 분말, 귀 왁스, 림프, 육아종, 암 생검 또는 이들의 조합일 수 있다.
샘플은 액체 흡인물일 수 있다. 예를 들어 샘플은 기관지 폐포 세척(bronchial alveolar lavage; BAL), 복수, 흉막 세척, 또는 심막 세척일 수 있다.
샘플은 혈액, 소변, 조직 등을 포함할 수 있다. 하나의 바람직한 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액 샘플을 포함한다. 혈액은 정맥 또는 동맥 혈액일 수 있다. 혈액 샘플은 즉시 검정될 수 있다. 대안적으로, 혈액 샘플은 저온에서, 예를 들어 냉장고에 저장될 수 있거나, 심지어 상기 방법이 수행되기 전에 동결될 수 있다. 대안적으로, 혈액 샘플은 상기 방법이 수행되기 전에 실온에서, 예를 들어 18℃ 내지 22℃에 저장될 수 있다. 혈액 샘플은 혈청을 포함할 수 있다. 혈액 샘플은 혈장을 포함할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 검출은 전혈 상에서 수행되고, 가장 바람직하게는 혈액 샘플은 말초 혈액이다.
혈액은 본 발명의 항체와 접촉되기 전에 추가로 가공될 수 있다. 예를 들어 항응고제, 예를 들어 시트레이트(예를 들어 시트르산나트륨), 히루딘, 헤파린, PPACK, 또는 플루오르화나트륨이 첨가될 수 있다. 따라서, 샘플 수집 용기는 혈액 샘플이 응고되는 것을 방지하기 위해 항응고제를 함유할 수 있다.
바람직하게는, 샘플은 내피, 평활근 및/또는 간질 세포, 바람직하게는 폐 내피, 평활근 및/또는 간질 세포를 포함할 수 있다.
본 발명은 임의의 핵산 또는 펩티드 또는 이의 변이체, 유도체 또는 유사체로 확장되며, 이는 본원에 언급된 임의의 서열의 아미노산 또는 핵산 서열(이의 변이체 또는 단편 포함)을 실질적으로 포함하는 것으로 이해될 것이다. 용어 "실질적으로 아미노산/뉴클레오티드/펩티드 서열", "변이체" 및 "단편"은 본원에서 언급된 서열 중의 임의의 하나의 아미노산/뉴클레오티드/펩티드 서열과 적어도 40%의 서열 동일성, 예를 들어 본원에서 확인된 임의의 서열과 40%의 동일성을 갖는 서열일 수 있다.
언급된 서열 중의 임의의 것과 65% 초과, 보다 바람직하게는 70% 초과, 보다 더 바람직하게는 75% 초과, 보다 더 바람직하게는 80% 초과의 서열 동일성을 갖는 아미노산/폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열이 또한 고려된다. 바람직하게는, 아미노산/폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열은 본원에서 언급된 서열 중의 임의의 것과 적어도 85%의 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 90%의 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 92%의 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%의 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 97%의 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%의 동일성, 가장 바람직하게는 적어도 99%의 동일성을 갖는다.
숙련가는 2개의 아미노산/폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열 사이의 백분율 동일성을 계산하는 방법을 이해할 것이다. 2개의 아미노산/폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열 사이의 백분율 동일성을 계산하기 위해, 2개의 서열의 정렬이 먼저 준비된 후, 서열 동일성 값을 계산해야 한다. 2개의 서열에 대한 백분율 동일성은 하기 (i) 내지 (ii)에 따라 상이한 값을 취할 수 있다: - (i) 서열을 정렬하는데 사용되는 방법, 예를 들어 ClustalW, BLAST, FASTA, Smith-Waterman(상이한 프로그램으로 구현됨), 또는 3D 비교로부터의 구조적 정렬; 및 (ii) 상기 정렬 방법에 의해 사용되는 파라미터, 예를 들어 국소 대 글로벌 정렬(global alignment), 사용되는 페어-스코어 행렬(pair-score matrix)(예를 들어 BLOSUM62, PAM250, Gonnet 등), 및 갭-불량(gap-penalty), 예를 들어 기능적 형태 및 상수.
정렬을 수행하는 경우, 2개의 서열 사이의 백분율 동일성을 계산하는 많은 상이한 방법이 있다. 예를 들어 하기 (i) 내지 (iv)에 의해 동일성의 수를 나눌 수 있다: (i) 최단 서열의 길이; (ii) 정렬의 길이; (iii) 서열의 평균 길이; (iv) 비-갭 위치의 수; 또는 (v) 오버행을 제외한 평형 위치의 수. 또한, 백분율 동일성은 또한 강력하게 길이 의존적이라는 것이 이해될 것이다. 따라서, 서열의 쌍이 더 짧을수록, 서열 동일성이 더 높을수록 우연히 발생할 것으로 예상될 수 있다.
따라서, 단백질 또는 DNA 서열의 정확한 정렬은 복잡한 과정이라는 것을 이해할 것이다. 인기있는 다중 정렬 프로그램 ClustalW(Thompson 등의 문헌 「1994, Nucleic Acids Research, 22, 4673-4680; Thompson et al., 1997, Nucleic Acids Research, 24, 4876-4882」 참조)는 본 발명에 따른 단백질 또는 DNA의 다중 정렬을 생성하기 위한 바람직한 방법이다. ClustalW에 적합한 파라미터는 다음과 같을 수 있다: DNA 정렬의 경우: 갭 오픈 페널티 = 15.0, 갭 확장 페널티 = 6.66, 및 매트릭스 = 동일성. 단백질 정렬의 경우: 갭 오픈 페널티 = 10.0, 갭 확장 페널티 = 0.2, 및 매트릭스 = 곤넷(Gonnet). DNA 및 단백질 정렬의 경우: ENDGAP = -1, 및 GAPDIST = 4. 당업자는 최적의 서열 정렬을 위해 이들 및 다른 파라미터를 변화시킬 필요가 있을 수 있다는 것을 인식할 것이다.
바람직하게는, 2개의 아미노산/폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열 사이의 동일성 백분율의 계산은 수학식 (N/T)*100으로서 이러한 정렬로부터 계산될 수 있으며, 여기서 N은 서열이 동일한 잔기를 공유하는 위치의 수이고, T는 갭을 포함하고 오버행을 포함하거나 또는 제외한 비교된 위치의 총 수이다. 바람직하게는, 오버행은 계산에 포함된다. 따라서, 2개의 서열 사이의 동일성 백분율을 계산하기 위한 가장 바람직한 방법은 (i) 예를 들어 상기에 제시된 바와 같은 적합한 파라미터 세트를 사용하여 ClustalW 프로그램을 사용하여 서열 정렬을 제조하는 단계; 및 (ii) N 및 T의 값을 하기 수학식에 삽입하는 단계를 포함한다: - 서열 동일성 = (N/T)*100.
유사한 서열을 확인하기 위한 대안적인 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열은 엄격한 조건 하에 DNA 서열 또는 이의 상보체에 혼성화하는 서열에 의해 암호화될 것이다. 엄격한 조건에 의해, 본 발명자들은 뉴클레오티드가 대략 45℃의 3x 염화 나트륨/시트르산 나트륨(SSC)에서 필터-결합된 DNA 또는 RNA에 혼성화한 후, 대략 20 내지 65℃의 0.2x SSC/0.1% SDS에서 적어도 1회 세척하는 것을 의미한다. 대안적으로, 실질적으로 유사한 폴리펩티드는 예를 들어 아미노산 서열인 본원에서 제시된 임의의 서열과 적어도 1개, 그러나 5, 10, 20, 50 또는 100개 미만의 아미노산만큼 상이할 수 있다.
유전 암호(genetic code)의 축퇴성으로 인해, 본원에 기재된 임의의 핵산 서열은 그에 의해 암호화된 단백질의 서열에 실질적으로 영향을 미치지 않으면서 변화 또는 변경되어 그의 기능적 변이체를 제공할 수 있다는 것이 명백하다. 적합한 뉴클레오티드 변이체는 서열 내의 동일한 아미노산을 암호화하는 상이한 코돈의 치환에 의해 변경된 서열을 갖는 것이며, 따라서 침묵 (동의(synonymous)) 변화를 생성한다. 다른 적합한 변이체는 보존적 변화를 생성하기 위해, 그것이 치환하는 아미노산에 대해 유사한 생물물리학적 특성의 측쇄를 갖는 아미노산을 암호화하는 상이한 코돈의 치환에 의해 변경된, 상동성 뉴클레오티드 서열을 갖지만 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 것이다. 예를 들어 작은 비-극성, 소수성 아미노산은 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프롤린 및 메티오닌을 포함한다. 큰 비-극성, 소수성 아미노산은 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신을 포함한다. 극성 중성 아미노산은 세린, 트레오닌, 시스테인, 아스파라긴 및 글루타민을 포함한다. 양으로 하전된 (염기성) 아미노산은 리신, 아르기닌 및 히스티딘을 포함한다. 음으로 하전된 (산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 따라서, 어떤 아미노산이 유사한 생물물리학적 특성을 갖는 아미노산으로 대체될 수 있는지가 이해될 것이며, 숙련된 기술자는 이들 아미노산을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 알 것이다.
본원에 기재된 모든 특징 (임의의 첨부된 청구범위, 요약 및 도면 포함), 및/또는 그렇게 개시된 임의의 방법 또는 공정의 모든 단계는 임의의 조합으로 상기 측면 중 임의의 것과 조합될 수 있지만, 이러한 특징 및/또는 단계 중 적어도 일부가 상호 배타적인 조합을 제외하고는 임의의 조합으로 조합될 수 있다.
본 발명의 보다 원활한 이해를 위해, 그리고 그의 구현예가 어떻게 수행될 수 있는지를 보여주기 위해, 이제 첨부된 도면을 예로서 참조할 것이다.
도 1은 본원에 기술된 항체의 구현예의 개발에 사용된 친화성 성숙 전략을 보여준다(Rajpal 등, 2005, PNAS 102:24 8466-8471). 9개의 아미노산, 즉 알라닌, 세린, 히스티딘, 류신, 프롤린, 티로신, 아스파르트산, 글루타민 및 라이신을 선택하여 각각의 CDR 잔기를 치환하였다. 중쇄 가변 사슬(VH) 및 경쇄 가변 사슬(VL) 또한 박스에서 강조 표시된 이들 각각의 CDR과 관련하여, 즉 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3에 도시된다.
도 2는 HTRF 및 ELISA 분석에서 51B12-모 VH-CDR 돌연변이 생산 상청액 스크리닝의 결과를 보여준다. 희석된 생산 상청액을 시험하였다. ELISA를 위해 항체 결합을 항-인간-IgG-HRP로 검출하고 TMB로 시각화하였다. 반응성 데이터는 CDR에서의 위치를 기준으로 좌측에서 우측으로 x-축 상에 플롯팅하였고 CDR 잔기 위치 내에서 알파벳으로 분류하였다(CDR 잔기 당 n=8 또는 9개의 돌연변이). 점선은 51B12-모 항체의 평균 HTRF 신호를 나타낸다.
도 3은 HTRF 및 ELISA 분석에서의 51B12-모 VL-CDR 돌연변이 생산 상청액 스크리닝의 결과를 보여준다. 희석된 생산 상청액을 시험하였다. ELISA를 위해 항체 결합을 항-인간-IgG-HRP로 검출하고 TMB로 시각화하였다. 반응성 데이터는 CDR에서의 위치를 기준으로 좌측에서 우측으로 x-축 상에 플롯팅하였고 CDR 잔기 위치 내에서 알파벳으로 분류하였다(CDR 잔기 당 n=8 또는 9개의 돌연변이). 점선은 51B12-모 항체의 평균 HTRF 신호를 나타낸다.
도 4는 HTRF 억제 분석에서 반응성 프로파일을 보여주는 선택된 항체 클론의 예시적인 오버레이를 보여준다.
도 5는 대조군 모 항체에 대한 평균 데이터를 보여준다.
도 6은 3.12nM-800nM huZIP12-ECD-GST를 이용한 단일 사이클 동력학 스크린에 대한 데이터를 보여준다.
도 7은 2.34nM-600nM huZIP12-ECD-GST를 이용한 선택된 변이체의 단일 사이클 동력학 선별 자료를 보여준다.
도 8은 51B12 항체의 에피토프 맵핑을 보여준다.
도 9a는 "51B12-모" 항체의 6개의 CDR, VH 및 VL 서열을 요약한 표이다. 도 9b는 본원에 기재된 친화성 성숙 항체의 26개의 상이한 구현예의 6개의 CDR, VH 및 VL 서열을 요약한 표이다.
도 10은 친화성 성숙된 51B12 W99H_L1(H3_W99H_L1이라고도 함)의 에피토프 맵핑을 보여준다. 도 10a는 저농도(5 ng/ml)에서의 결합을 나타내고, 도 10b는 고농도(1 ㎍/ml)에서의 결합을 나타낸다. 도 10c는 51B12_W99H_L1에 대한 에피토프 후보자 목록을 보여준다.
도 11은 ZIP12를 과발현하는 CHO-K1 세포에 대한 항체 51B12, 63A11, 6B11, 38F02, 75E05 및 68G01의 결합(도 11a), 및 직접 접합을 이용하여 측정하였을 때 항체 51B12 및 63A11의 내재화(도 11b)를 나타낸다.
도 12는 인간, 사이노몰거스 원숭이, 개나 및 돼지 ZIP12-ECD-GST에 대한 51B12_W99H_L1의 결합에 대한 평균 자료를 보여준다.
도 13은 51B12_W99H_L1 투여가 폐동맥 고혈압 병리의 역전(reversal)에 미치는 영향을 분석하기 위해 사용된 수겐 모델(Sugen model)의 결과를 보여주는 일련의 히스토그램을 보여준다. 바(bars)는 6마리 동물의 평균 활동을 나타낸다.
도 14는 이소타입 대조군과 51B12_W99H_L1 처리군에서 51B12_W99H_L1 처리시 리모델링 및 폐색 혈관의 수(도 14a)와 리모델링 및 폐색 혈관의 대표 이미지, 그들의 역전(reversal)(도 14b)를 보여준다.
도 1은 본원에 기술된 항체의 구현예의 개발에 사용된 친화성 성숙 전략을 보여준다(Rajpal 등, 2005, PNAS 102:24 8466-8471). 9개의 아미노산, 즉 알라닌, 세린, 히스티딘, 류신, 프롤린, 티로신, 아스파르트산, 글루타민 및 라이신을 선택하여 각각의 CDR 잔기를 치환하였다. 중쇄 가변 사슬(VH) 및 경쇄 가변 사슬(VL) 또한 박스에서 강조 표시된 이들 각각의 CDR과 관련하여, 즉 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3에 도시된다.
도 2는 HTRF 및 ELISA 분석에서 51B12-모 VH-CDR 돌연변이 생산 상청액 스크리닝의 결과를 보여준다. 희석된 생산 상청액을 시험하였다. ELISA를 위해 항체 결합을 항-인간-IgG-HRP로 검출하고 TMB로 시각화하였다. 반응성 데이터는 CDR에서의 위치를 기준으로 좌측에서 우측으로 x-축 상에 플롯팅하였고 CDR 잔기 위치 내에서 알파벳으로 분류하였다(CDR 잔기 당 n=8 또는 9개의 돌연변이). 점선은 51B12-모 항체의 평균 HTRF 신호를 나타낸다.
도 3은 HTRF 및 ELISA 분석에서의 51B12-모 VL-CDR 돌연변이 생산 상청액 스크리닝의 결과를 보여준다. 희석된 생산 상청액을 시험하였다. ELISA를 위해 항체 결합을 항-인간-IgG-HRP로 검출하고 TMB로 시각화하였다. 반응성 데이터는 CDR에서의 위치를 기준으로 좌측에서 우측으로 x-축 상에 플롯팅하였고 CDR 잔기 위치 내에서 알파벳으로 분류하였다(CDR 잔기 당 n=8 또는 9개의 돌연변이). 점선은 51B12-모 항체의 평균 HTRF 신호를 나타낸다.
도 4는 HTRF 억제 분석에서 반응성 프로파일을 보여주는 선택된 항체 클론의 예시적인 오버레이를 보여준다.
도 5는 대조군 모 항체에 대한 평균 데이터를 보여준다.
도 6은 3.12nM-800nM huZIP12-ECD-GST를 이용한 단일 사이클 동력학 스크린에 대한 데이터를 보여준다.
도 7은 2.34nM-600nM huZIP12-ECD-GST를 이용한 선택된 변이체의 단일 사이클 동력학 선별 자료를 보여준다.
도 8은 51B12 항체의 에피토프 맵핑을 보여준다.
도 9a는 "51B12-모" 항체의 6개의 CDR, VH 및 VL 서열을 요약한 표이다. 도 9b는 본원에 기재된 친화성 성숙 항체의 26개의 상이한 구현예의 6개의 CDR, VH 및 VL 서열을 요약한 표이다.
도 10은 친화성 성숙된 51B12 W99H_L1(H3_W99H_L1이라고도 함)의 에피토프 맵핑을 보여준다. 도 10a는 저농도(5 ng/ml)에서의 결합을 나타내고, 도 10b는 고농도(1 ㎍/ml)에서의 결합을 나타낸다. 도 10c는 51B12_W99H_L1에 대한 에피토프 후보자 목록을 보여준다.
도 11은 ZIP12를 과발현하는 CHO-K1 세포에 대한 항체 51B12, 63A11, 6B11, 38F02, 75E05 및 68G01의 결합(도 11a), 및 직접 접합을 이용하여 측정하였을 때 항체 51B12 및 63A11의 내재화(도 11b)를 나타낸다.
도 12는 인간, 사이노몰거스 원숭이, 개나 및 돼지 ZIP12-ECD-GST에 대한 51B12_W99H_L1의 결합에 대한 평균 자료를 보여준다.
도 13은 51B12_W99H_L1 투여가 폐동맥 고혈압 병리의 역전(reversal)에 미치는 영향을 분석하기 위해 사용된 수겐 모델(Sugen model)의 결과를 보여주는 일련의 히스토그램을 보여준다. 바(bars)는 6마리 동물의 평균 활동을 나타낸다.
도 14는 이소타입 대조군과 51B12_W99H_L1 처리군에서 51B12_W99H_L1 처리시 리모델링 및 폐색 혈관의 수(도 14a)와 리모델링 및 폐색 혈관의 대표 이미지, 그들의 역전(reversal)(도 14b)를 보여준다.
실시예
ZIP12는 병태와 연관된 ZIP12의 발현 증가와 함께 폐 고혈압의 발병에 관련되어 있다. 따라서, 본 발명자들은 폐 고혈압의 치료 및 진단을 개선하기 위해 ZIP12에 특이적으로 결합하고 이의 기능을 억제할 수 있는 항체를 개발하고자 하였다. 본 발명자들은 51B12 모로 지칭되는 ZIP12-결합 항체를 이용하여 모에 비해 개선된 특성을 나타내는 신규한 변이체를 생산하기 위해 친화성 성숙을 거쳤다.
물질 및 방법
클로닝 및 발현
51B12 친화성 성숙된 변이체의 클로닝
항체를 암호화하는 DNA 발현 구조체는 포유동물 발현 벡터로의 클로닝을 위한 제한 부위를 포함하는 중첩 올리고뉴클레오티드 뿐만 아니라 인간 신호 서열의 구축에 의해 신규로 제조하였다. HindIII 및 SpeI 제한 부위를 변형된 Fc 널(null) 인간 γ1 불변 영역을 함유하는 포유동물 발현 벡터로의 클로닝을 위한 신호 서열을 함유하는 VH 도메인을 틀에 도입하였다. HindIII 및 BsiWI 제한 부위를 인간 카파 불변 영역을 함유하는 포유동물 발현 벡터로의 클로닝을 위한 신호 서열을 함유하는 VL 도메인을 틀에 도입하였다.
재조합 항체의 발현(항체 정량화를 포함)
각각 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 플라스미드를 HEK 293 6E 세포로 일시적으로 공동-형질감염시키고, 소규모로 발현시켜 항체를 생성하였다. 항체를 ELISA에 의해 정량화하였다. ELISA 플레이트를 1 mg/ml의 항 인간 IgG(시그마 I3382)로 코팅하고, 차단 용액(트리스 완충 식염수 중의 4% BSA)으로 차단하였다. 조직 배양 상청액의 다양한 희석액을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 공지된 표준 항체의 희석액을 또한 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 TBST 중에서 세척하고, 차단 용액 중의 1/1,000의 희석액에서 과산화 표지된 항 인간 카파 경쇄 항체(시그마 A7164)의 첨가에 의해 결합을 검출하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, TBST 중에서 세척하였다. 플레이트를 OPD 기질(시그마 P9187)의 첨가에 의해 현상하고, 2M H2SO4의 첨가에 의해 발색을 중단시켰다. 흡광도를 490 nm에서 측정하고, 공지된 표준 희석액에 대한 데이터를 사용하여 플롯팅된 표준 곡선을 사용하였다. 표준 곡선을 사용하여 조직 배양 상청액 중의 항체의 농도를 추정하였다. 더 큰 규모의 항체 제제를 단백질 A를 사용하여 정제하고, 농도를 나노드롭(Nanodrop)(Thermo Scientific)을 사용하여 측정하였다.
분석
재조합 인간 ZIP12 단백질에 대한 ZIP12 항체의 결합을 보여주는 ELISA 실험
hZIP12-ECD-GST(5 ㎍/ml)를 ELISA 플레이트에 코팅하고, 차단하고 반-로그 희석 시리즈(semi-log dilution series)의 항체와 함께 인큐베이션하였다. 항-인간 IgG-HRP 및 TMB를 이용하여 항체 결합을 검출하였다. 단백질 코팅은 항-ZIP12를 사용하여 검정하고 항-토끼 IgG-HRP 및 TMB 염색과 함께 인큐베이션하였다.
모(parent)와 친화성 성숙 항체 사이의 재조합 인간 ZIP12 단백질에 대한 경쟁을 보여주는 HTRF 실험
균일한 시간 분해 형광(HTRF; Homogeneous Time Resolved Fluorescence(HTRF) assay) 분석을 이용하여 항체를 분석하였다. 테르븀-표지된 항체(terbium labeled-antibody)와 hZIP12-ECD-GST의 결합을 검정하기 위해 체커보드 분석(checkerboard assay)을 수행하였다. 테르븀-표지된 51B12-모의 일련의 희석액(1000 ng/ml에서 시작, 반-로그 희석액)을 hZIP12-ECD-GST의 일련의 희석액(5000 ng/ml에서 시작, 반-로그 희석액)과 함께 인큐베이션한 후, 항-GST-XL665와 함께 인큐베이션하였다. 여기(320 nm) 후, 발광 신호를 얻고 HTRF 비를 계산하였다(665 nm/615 nm, Panel A). HTRF 비(배경 신호로서 0 ng/ml hZIP12-ECD-GST)로부터 신호/배경 비(S/B)를 계산하여 Tb-51B12-모 농도에 대해 플롯팅하였다. 경쟁 분석을 위해 500 ng/ml hZIP12-ECD-GST + 50 ng Tb-Ab, 150 ng/ml hZIP12-ECD-GST + 50 ng Tb-Ab, 50 ng/ml hZIP12-ECD-GST + 50 ng Tb-Ab의 조합을 범위로 선택하였다. HTRF 분석을 위해 150 ng/ml hZIP12-ECD-GST + 30 ng/ml Tb-51B12를 선택하였다.
SPR 실험 - 단일 사이클 동력학(Single Cycle Kinetics, SCK)
단일 주기 동력학(SCK)은 먼저 mAb를 단백질 A 센서 표면에 포집한 후 최저 농도에서 시작하여 최고 농도로 끝나는 표면에 일련의 huZIP12-ECD-GST 농도를 순차적으로 주입하는 것을 포함한다. 최종 농도는 해리 단계로 완충액만을 표면에 통과시킨 후 재생하여 나머지 결합된 huZIP12-ECD-GST를 10 mM 글리신 pH 1.5와 50 mM NaOH 용액을 주입하여 표면에서 제거한다. 각각의 단일 클론 항체에 대해 SCK를 반복하여 중복 데이터를 제공하고 각각의 상호작용의 동력학을 Biacore 소프트웨어로 평가하였다.
주입 농도 범위는 선행 연구에서 확립된 대조군 mAb의 친화도를 기준으로 선택하였다.
각각의 mAb에 대한 데이터를 검토하였다. 이상적으로 huZIP12-ECD-GST의 농도 시리즈는 ~80% 포화에 도달해야 한다. 시험된 huZIP12-ECD-GST의 최고 농도에서 mAb 샘플의 일부로 포화가 관찰되었다. 이 경우 huZIP12-ECD-GST의 농도 시리즈를 낮추어 최적의 결합 동력학 데이터를 얻었다.
모 클론 51B12_VH_VL-par을 SCK 시리즈의 각각의 사이클 시작 시점에 양성 대조군으로 스크리닝하여 17시간 동안 2회 중복하여 포함시켜 17시간 동안 샘플의 안정성을 측정하였다.
에피토프 맵핑(Epitope Mapping)
ZIP12 세포외 도메인의 서열에 상응하는 펩티드 서열을 직접 합성하기 위해 하이드로겔 매트릭스를 갖는 지지체를 사용하였다. 이것은 고감도 어레이를 결과하며, 심지어 가장 약한 결합 신호를 신뢰성 있게 검출할 수 있다. 이러한 고정된 펩티드 어레이는 재사용이 가능하며 여러 번 시험할 수 있다. 이에 따라 단일 어레이 상에서 일련의 항체 또는 혈청을 선별할 수 있게 되어 최적의 후보 선택, 항체 특성화, 항체 프로파일링 및 추가 개발을 위한 빠르고 비용 효과적인 옵션으로 선형 에피토프 맵핑을 가능하게 한다.
실시예 1: 친화성 성숙 변이체의 생성
본 발명자들은 신규 변이체 또는 돌연변이를 생산하기 위해 51B12 모(또는 51B12 par)라고 지칭되는 후보 모 항체를 섭취하고 친화성 성숙에 적용시키고, 이를 통해 모 항체가 모 항체와 비교하여 개선된 특성을 나타낼 수 있도록 하였다.
3개의 중쇄 및 경쇄 CDR에서 CDR 잔기당 8 또는 9개의 돌연변이를 문헌 (Rajpal 등, 2005)에 기재된 방법을 이용하여 도 1에 도시된 바와 같이 설계하였다. 가변 중쇄(VH) CDR 변이체의 경우, 가변 영역을 합성하여 Fc 널 인간 IgG1을 함유하는 발현 벡터에 클로닝하였다. 가변 경쇄(VL) CDR 변이체의 경우, 가변 영역을 합성하여 인간 카파 경쇄 불변 영역을 함유하는 발현 벡터에 클로닝하였다.
도 9a는 51B12 모에 대한 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, VH 및 VL 각각에 대한 아미노산 서열을 나타낸다. 도 9b는 51B12 모로부터 유래된 친화성 성숙 항체의 26가지 상이한 구현예의 서열을 요약한 표를 나타낸다. 표의 제 1 열은 51B12 모의 친화성 성숙 변이체에 대한 상응하는 서열인 H3_W99H_L1을 나타내며, CDR-H3 서열은 W99H 아미노산 스왑을 제외한 모의 서열과 동일하고, CDR-L1 CDR은 나타낸 바와 같다. 표의 제 2 열은 51B12 모의 친화성 성숙 변이체에 대한 해당 서열인 H3_W99H_L2를 나타내며, CDR-H3 서열은 W99H 아미노산 스왑을 제외한 모의 서열과 동일하고, CDR-L2 CDR은 도시된 바와 같은 서열 등이다.
실시예 2: 51B12 변이체/돌연변이의 스크리닝
도 2 및 3을 참조하면, HTRF 및 ELISA 분석에서 51B12-모 VH-CDR(도 2) 및 VL-CDR(도 3) 돌연변이 생산 상청액을 스크리닝한 결과를 나타내었다. 희석된 생산 상청액을 시험하였다. ELISA를 위해 항체 결합을 항-인간-IgG-HRP로 검출하고 TMB로 시각화하였다. 반응성 데이터는 CDR 내 위치를 기준으로 좌측에서 우측으로 x-축 상에 플롯팅하였고, CDR 잔기 위치 내에서 알파벳으로 분류하였다(CDR 잔기 당 n=8 또는 9개의 돌연변이). 점선은 51B12-모 항체의 평균 HTRF 신호를 나타낸다.
스크리닝 결과 중쇄 CDR의 아미노산 G33, Y50, S53, W99, T100, Y103 및 D106이 표적 에피토프 인식에 특히 중요한 것으로 나타났는데, 이는 이들 아미노산을 치환한 여러 클론이 ELISA 및 HTRF 분석 포맷에서 표적 인식을 상실하였기 때문이다. 경쇄 CDR에서 아미노산 A24, V29, Y36, H94, S95 및 P99 또한 표적 인식에 특히 중요한 것으로 보였는데, 이는 이들 아미노산을 치환한 여러 클론이 다시 ELISA 및 HTRF 분석 포맷에서 표적 인식을 상실하였기 때문이다.
광범위한 스크리닝 결과 투여량 반응 스크리닝을 위해 78개의 돌연변이를 선택하였다. 이 결정은 HTRF 기반 항체 농도 분석과 HTRF 경쟁 분석의 실험 자료를 기반으로 하였다.
실시예 3: 투여량 반응 HTRF 분석에서 51B12 변이체/돌연변이의 스크리닝
도 4는 HTRF 억제 검정에서 선택된 항체 클론의 반응성 프로파일을 보여주는 예시적인 오버레이를 보여준다.
클론 H3_W99H_VL-par 및 H2_Y60K_L2는 51B12_VH_VL-par에 비해 HTRF에서 더 강한 억제를 나타냈다. 클론 H3_M105P_L2 및 H2_T63Y_VL-par는 51B12_VH_VL-par에 비해 HTRF에서 약간 적은 억제를 나타냈다. 클론 H3_W99H_VL-par은 3가지 분석 모두에서 개선된 반응성 프로파일을 보였다. 이후 중쇄 및 경쇄 서열을 선택하여 결합하여 27개의 친화성 성숙 항체를 제조한 후 SPR 분석으로 시험하였다.
실시예 4: SPR 분석에서 정제된 친화성 성숙된 항체의 스크리닝
도 5를 참조하면, 대조군 51B12_VH_VL-모 항체에 대한 평균 데이터가 나타나 있다.
도 6을 참조하면, 3.12 nM 내지 800 nM huZIP12-ECD-GST로 스크리닝하였을 때 모든 항체 변이체에 대해 얻은 동력학적 파라미터가 나타나 있다. 데이터는 변이체 H3_W99H_L1, H3_W99H_L2 및 H3_W99H_par의 온 속도(on rates)(ka)가 모 항체인 51B12_par(도 5에 나타냄; 2.75e+04)보다 우수함을 보여준다. 항체 H2_T57H_L1, H2_Y60K_L1, H2_T63Y_L1, H2_K65P_L1, H2_G66Q_L1, H3_M105P_L1, 51B12_VH_L1, H2_T57H_L2, H2_Y60K_L2, H2_G66Q_L2, H2_T57H_VL_par, H2_Y60K_VL_par, H2, T63Y_VL_par 및 H2_G66Q_VL_par의 온 속도 또한 모 항체보다 우수하였다. 친화도. 도 6에 수록된 모든 항체는 오프-속도 동력학(kd)이 우수하였다. 특히, 항체 H3_W99H_L1, H3_W99H_L2 및 H3_W99 H_par은 KD(M)로 정의되는 결합 친화도가 우수하였다.
알 수 있는 바와 같이, 3종의 항체 변이체인 H3_W99H_L1, H3_W99HL2 및 H3_W99H_VL_par은 모두 약 500pM의 높은 친화도(KD)를 갖는 것으로 나타났다.
보다 높은 친화도의 항체 변이체의 선택은 결합 동력학의 보다 우수한 평가를 얻을 목적으로 해리 시간을 연장하여 보다 낮은 농도 시리즈에서 재시험하였다. 이제 도 7을 참조하면, 결합 동력학 데이터를 최적화하기 위해 재시험한 단일 클론 항체에 대한 데이터가 나타나 있다. 다시 한번, 3종의 항체 변이체인 H3_W99H_L1, H3_W99HL2 및 H3_W99H_VL_par은 모두 모 항체보다 높은 친화도를 갖는 것으로 나타났다. 온 속도(ka), 오프 속도(kd) 및 전체 친화도 측정값(KD)은 모두 51B12 VH_VL_par 모 항체에 비해 개선되었다. 친화도 성숙 변이체에 대해 모 항체인 1.1 nM(도 7의 KD 컬럼)에 비해 약 300pM의 친화도를 얻었다.
실시예 5: 에피토프 맵핑
이어서, 본 발명자들은 항체 변이체가 결합하는 ZIP12 단백질의 세포외 서열 상의 정확한 에피토프를 결정하기 위해 설정하였다. 도 8에 도시된 플롯은 동일한 조건(PBST 완충액)에서 샘플의 결합 프로파일(51B12 변이체 항체, 청색 막대로 표시되는 상호작용의 강도, 이소형 대조군 샘플(인간 IgG1 Fc 널, 적색 막대로 표시되는 상호작용의 강도)을 비교한 것이다.
인간 ZIP12 세포외 도메인 서열을 기반으로 선형(linear)(LIN10, LIN15) 및 루프형(looped)(LOOP10, LOOP15) 중첩 펩티드(및 HELix 19 및 BETa 시트 22)를 생성하였고, 이를 하이드로겔 매트릭스 상에 고정화하였다. 펩티드는 다음과 같이 정의된다:
LLIN10 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 10 mer 선형 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-10을 커버하므로 마지막 잔기 수는 10 등이다.
LLIN15 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 15 mer 선형 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-15를 커버하므로 마지막 잔기 수는 15 등이다.
LOOP10 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 10 mer 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-10을 커버하므로 마지막 잔기 수는 10 등이다. LOOP 펩티드는 CLIPS 스캐폴드 기술(Pepscan)을 이용하여 구조적으로 정의된 단일 루프 구조로 고정되어 있기 때문에 LIN 펩티드와 다르다.
LOOP15 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 15 mer 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-15를 커버하므로 마지막 잔기 수는 15 등이다. LOOP 펩티드는 CLIPS 스캐폴드 기술(Pepscan)을 이용하여 구조적으로 정의된 단일 루프 구조로 구조적으로 고정화되어 있기 때문에 LIN 펩티드와 다르다.
HEL19 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 19 mer 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-19를 커버하므로 마지막 잔기 수는 19 등이다. HEL 펩티드는 CLIPS 스캐폴드 기술(Pepscan)을 이용하여 구조적으로 정의된 알파 나선형 구조(alpha helix structure)로 구조적으로 고정화되어 있기 때문에 LIN 펩티드와 다르다.
BET22 = ZIP12 세포 외 도메인의 위치 1에서 시작하는 19 mer 펩티드. 도 8에서 y축 상의 위치는 펩티드의 마지막 잔기 수로 정의된다. 예를 들어 펩티드 1은 아미노산 1-22를 커버하므로 마지막 잔기 수는 22 등이다. HEL 펩티드는 CLIPS 스캐폴드 기술(Pepscan)을 이용하여 구조적으로 정의된 베타 시트 구조(beta sheet structure)로 구조적으로 고정화되어 있기 때문에 LIN 펩티드와 다르다.
선형 펩티드 및 구조적으로 정의된 펩티드를 모두 사용하여 선형 및 구조적 에피토프를 모두 탐색하였다. 각 펩티드에 대한 항체 결합을 측정하여 도 8에서 플롯팅하였다. 샘플 51B12 항체의 경우 아미노산 46-63 사이의 선형 펩티드(LIN10 및 LIN15) 뿐만 아니라 구조적 펩티드(LOOP10, LOOP15, HEL19, BET22) 모방체에서 강한 결합 피크가 관찰되었고 이소타입에는 존재하지 않았다. 도 8에서 얻은 데이터로부터 51B12 항체 변이체의 에피토프가 적어도 부분적으로 선형임을 확인할 수 있다. 도 8의 이소타입 대조군보다 높은 강도를 보이는 펩티드는 51B12 항체의 에피토프 후보물질이다. 이 항체는 Zn FLIPR 분석에서 기능적으로 활성이므로 Zn2+ 수송을 억제한다는 것을 보여준다.
에피토프의 서열은 ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS 서열[서열번호 252]이다.
더욱 바람직하게는, 에피토프의 서열은 LLQVLSAGDHPPHNHSRS[서열번호 1]이다.
실시예 6: 친화성 성숙 항체의 에피토프 맵핑
표적 분자의 에피토프를 재구성하기 위해 Fmoc-기반 고체-상 펩티드 합성을 이용하여 펩티드-기반 모방체의 라이브러리를 합성하였다. 아미노 관능화된 폴리프로필렌 지지체는 독점 친수성 중합체 제형으로 그래프팅한 후 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)를 사용하여 N-하이드록시벤조트리아졸(HOBt)과 반응시킨 다음 트리플루오로아세트산(TFA)을 사용하여 Boc-기를 절단하여 t부틸옥시카르보닐-헥사메틸렌디아민(BocHMDA)과 반응시켜 얻었다. 표준 Fmoc-펩티드 합성을 이용하여 맞춤 변형된 JANUS 액체 취급 스테이션(Perkin Elmer)에 의해 아미노-관능화된 고체 지지체 상의 펩티드를 합성하였다.
서로 다른 펩티드 세트를 다음과 같이 설계하였다:
합성된 펩티드 각각에 대한 항체의 결합을 펩티드-기반 ELISA로 시험하였다. 펩티드 어레이를 1차 항체 용액(4℃에서 밤새)과 함께 인큐베이션하였다. 세척 후, 펩티드 어레이를 적절한 항체 퍼옥시다제 접합체의 1/1000 희석액과 함께 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 20% H2O2 20 μl/ml를 첨가하였다. 1시간 후에 색상 전개를 측정하였다. 색상 전개는 전하 커플링된 장치 카메라 및 영상 처리 시스템으로 정량화되었다.
샘플 907672.1(51B12 W99H_L1, H3_W99H_L1이라고도 함)을 다양한 조건에서 스크리닝하였다. 아미노산 영역 35-48에서 다양한 스크리닝에서 특이 결합제가 일관되게 관찰되었다. 샘플은 극히 낮은 농도 예를 들어 5 ng/ml에서도 펩티드의 이러한 특정 영역에 강한 결합을 보였다(도 10a). 영역 35-48에서 확인된 고강도 결합제는 LIN10 및 LOOP10 펩티드 모방체에서 각각 10개의 잔기로 구성된 펩티드를 포함하는 뚜렷한 피크를 보이지 않았다(도 10a). 더 높은 농도에서는 이소타입 대조군과 구별되는 선형 및 구조적 맵핑에 의해 여러 추가적인 결합 피크가 관찰되었다(도 10b). 이러한 피크는 훨씬 높은 농도에서만 나타나기 때문에 소수의 에피토프 후보로 결정된다. 이러한 결합제는 비특이적일 수 있다.
시료에 특이적인 결합제를 확인하기 위해 유사한 조건에서 이소타입 대조군을 스크리닝하였다. 이소타입 대조군과 구별되는 결합 피크는 샘플 펩티드 강도가 대조군 펩티드 강도의 최소 4배여야 한다는 기준을 기준으로 선택하였다. 영역 35-48에서 확인된 고강도 결합제는 LIN10 및 LOOP10 펩티드 모방체에서 각각의 10개의 잔기로 구성된 펩티드를 포함하는 뚜렷한 피크를 보이지 않았다(도 10a).
도 10c는 51B12_W99H_L1에 대한 에피토프 후보자 목록을 보여준다.
실시예 7: ZIP12 전장 길이 단백질을 과발현하는 세포에서의 51B12_W99H_L1 내재화
항체의 내재화를 직접 접합 유세포 분석을 이용하여 시간 경과에 따라 측정하였다. 내재화를 위해 다음과 같은 항체를 선택하여 시험하였다: 51B12, 63A11, 6B11, 38F02, 75E05 및 68G01.
도 11a는 ZIP12를 과발현하는 CHO-K1 세포에 대한 항체 51B12, 63A11, 6B11, 38F02, 75E05 및 68G01의 결합을 보여준다. 비-억제제 75E05와 68G01은 기대했던 바와 같이 CHO-K1 세포와 결합하지 않았다. 이들 항체는 더 이상 시험하지 않았다.
도 11b는 직접 접합을 이용하여 측정하였을 때 항체 51B12 및 63A11의 내재화를 보여준다. 내재화 비율의 차이는 51B12와 63A11 사이에서 작은 차이만이 관찰될 수 있었다. 직접 접합을 이용한 내재화는 6B11 또는 38F02에 대해서는 관찰할 수 없었다.
실시예 8: 51B12_W99H_L1은 인간 및 사이노몰거스 원숭이 ZIP12-GST-ECD에 결합하지만 개 또는 돼지 단백질과 교차 반응하지 않는다.
표면 플라즈몬 공명(SPR)은 생체 분자 상호작용을 직접 측정할 수 있는 표지가 필요 없는 생물물리학적 기술이다. 인간, 사이노(cyno), 돼지 및 개 ZIP12 융합 단백질에 대한 항체 결합을 특성화하기 위해 단일 사이클 동력학(SCK) SPR 직접 결합 분석법을 개발하였다. 이 분석법을 이용하여 4개의 단백질(kon, koff, KD로 정의됨) 각각에 대한 단일 클론 항체 51B12_W99H_L1의 결합 동력학을 특성화하였다. 단일 사이클 동력학(SCK)은 먼저 mAb를 단백질 A 센서 표면에 포집한 후 최저 농도에서 시작하여 최고 농도로 끝나는 표면에 일련의 농도의 ZIP12-ECD-GST를 순차적으로 주입하는 것을 포함한다. 최종 농도는 완충액만 표면을 통과한 후 재생하는 해리 단계가 뒤따르며, 나머지 결합된 huZIP12-ECD-GST는 10 mM 글리신 pH 1.5 및 50 mM NaOH 용액을 주입하여 표면에서 제거한다. SCK는 각 단일 클론 항체에 대해 반복하여 중복 데이터를 제공하고 각각의 상호작용의 동력학을 Biacore 소프트웨어로 평가한다.
도 12는 인간, 사이노몰거스 원숭이, 개 및 돼지 ZIP12-ECD-GST에 대한 51B12_W99H_L1의 결합에 대한 평균 자료를 보여준다. 51B12_W99H_L1은 인간 및 사이노몰거스 원숭이 단백질(각각 4.02x10-9 및 6.31x10-9)과 유사한 ka, kd 및 KD로 결합하였다.
실시예 9: 51B12_W99H_L1은 폐 리모델링의 수겐 모델에서 폐동맥 고혈압(PAH) 병리를 역전시킨다.
도 13은 51B12_W99H_L1 투여가 폐동맥 고혈압 병리의 역전에 미치는 영향을 분석하기 위해 사용된 수겐 모델의 결과를 보여주는 세트의 히스토그램을 보여준다. 인간화된 ZIP12 스프라그-다울리 래트를 20 mg/kg Sugen5416으로 처리하여 산소 농도가 10%인 저산소 챔버에 넣었다. 래트는 24일 동안 체임버에 둔 후 또 다른 8일 동안 실내 공기로 되돌아갔다. 이 시간 이후, PAH 병리학이 발생할 것으로 예상된다. 이후 래트를 무작위로 2군으로 나누어 10 mg/kg 인간 IgG1 이소타입 대조군 항체(대조군) 또는 10 mg/kg 51B12_W99H_L1로 처리하였다. PAH 병리의 반전을 정량화하기 위해 다수의 지혈 역학을 측정하였다. 바는 6마리 동물의 평균 활동을 나타낸다.
도 13은 51B12_W99H_L1로 처리된 인간화된 래트가 이소타입 대조군에 비해 평균 폐동맥압(mPAP)이 감소한 것을 보여준다. 51B12_W99H_L1을 처리한 래트에서도 이소타입 대조군을 처리한 래트에 비해 우심실 비대가 감소하였다.
도 14a는 51B12_W99H_L1로 처리하면 리모델링과 폐색 혈관의 수가 줄어든다는 것을 보여준다. 리모델링 혈관은 혈관벽의 두꺼워짐을 보이는 폐혈관계 혈관으로 정의하고, 폐색 혈관은 폐색 혈관으로 정의한다.
도 14b는 이소타입 대조군과 51B12_W99H_L1 처리군에서 리모델링 혈관과 폐색 혈관의 대표적인 예 및 그의 역전을 보여준다. 리모델링 혈관은 폐색 화살표로 표시하고, 폐색 혈관은 개방 화살표로 표시한다.
결론
요약하면, 본 발명자들은 51B12 모(parent)로 지칭되는 ZIP12 결합 항체를 사용하여 친화성 성숙을 거쳐 일련의 26종의 신규 변이체들을 생산하였다. 도 8에 나타난 바와 같이, 본 발명자들은 에피토프 맵핑을 이용하여 이들 항체가 각각 결합하는 ZIP12의 세포외 도메인 상의 에피토프를 정확하게 결정하였다. 또한, 변이체 항체들은 이 에피토프에 대해 놀라울 정도로 높은 결합 친화도를 가지며, 온 속도(on-rate)(ka), 오프 속도(kd) 및 전체 친화도(KD)에서 개선이 나타났다. 또한, 변이체들은 Zn FLIPR 분석에서 기능적으로 활성이므로 이들이 아연 이온 수송을 억제한다는 것을 보여준다. 그 결과, 이들 항체는 저산소증-관련 질환, 예를 들어 폐고혈압 또는 암의 치료, 예방 또는 개선에 사용하기 위한 강력한 치료 후보물질일 것이다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (25)
- 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 252), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) LLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 1), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프; 또는
(ii) ADLLQ(서열번호 253), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프;
를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 ZIP4 및/또는 ZIP3에 실질적으로 결합하지 않는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 3 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열번호 13을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 14를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 15를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 16을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 17을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 18을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(ii) 서열번호 21을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 22를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 23을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 24를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 25를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 26을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(iii) 서열번호 29를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 30을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 31을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 32를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 33을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 34를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(iv) 서열번호 37을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 38을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 39를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 40을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 41를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 42를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(v) 서열번호 45를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 46을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 47를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 48을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 49를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 50을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(vi) 서열번호 53을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 54를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 55를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 56을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 57을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 58을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(vii) 서열번호 61을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 62를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 63을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 64를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 65를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 66을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(viii) 서열번호 69를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 70을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 71을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 72를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 73을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 74를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(ix) 서열번호 77을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 78을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 79를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 80을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 81을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 82를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(x) 서열번호 85를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 86을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 87을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 88을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 89를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 90을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xi) 서열번호 93을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 94를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 95를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 96을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 97을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 98을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xii) 서열번호 101을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 102를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 103을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 104를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 105를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 106을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xiii) 서열번호 109를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 110을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 111을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 112를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 113을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 114를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xiv) 서열번호 117을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 118을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 119를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 120을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 121을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 122를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xv) 서열번호 125를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 126을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 127을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 128을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 129를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 130을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xvi) 서열번호 133을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 134를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 135를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 136을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 137을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 138을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xvii) 서열번호 141을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 142를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 143을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 144를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 145를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 146을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xviii) 서열번호 149를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 150을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 151을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 152를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 153을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 154를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xix) 서열번호 157을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 158을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 159를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 160을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 161을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 162를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xx) 서열번호 165를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 166을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 167를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 168을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 169를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 170을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xxi) 서열번호 173을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 174를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 175를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 176을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 177을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 178을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xxii) 서열번호 181을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 182를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 183을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 184를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 185를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 186을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xxiii) 서열번호 189를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 190을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 191을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 192를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 193을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 194를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xxiv) 서열번호 197을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 198을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 199를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 200을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 201을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 202를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
(xxv) 서열번호 205를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 206을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 207을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 208을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 209를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 210을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인; 또는
(xxvi) 서열번호 213을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H1 도메인, 서열번호 214를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H2 도메인, 서열번호 215를 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-H3 도메인, 서열번호 216을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L1 도메인, 서열번호 217을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L2 도메인, 및 서열번호 218을 포함하거나 또는 이로 구성된 CDR-L3 도메인;
을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 4 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열번호 19를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 20을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(ii) 서열번호 27을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 28을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(iii) 서열번호 35를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 36을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(iv) 서열번호 43을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 44를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(v) 서열번호 51을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 52를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(vi) 서열번호 59를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 60을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(vii) 서열번호 67을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 68을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(viii) 서열번호 75를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 76을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(ix) 서열번호 83을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(x) 서열번호 91을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 92를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xi) 서열번호 99를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 100을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xii) 서열번호 107을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 108을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xiii) 서열번호 115를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 116을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xiv) 서열번호 123을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 124를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xv) 서열번호 131을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 132를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xvi) 서열번호 139를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 140을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xvii) 서열번호 147을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 148을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xviii) 서열번호 155를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 156을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xix) 서열번호 163을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 164를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xx) 서열번호 171을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 172를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xxi) 서열번호 179를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xxii) 서열번호 187을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 188을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xxiii) 서열번호 195를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 196을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xxiv) 서열번호 203을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 204를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
(xxv) 서열번호 211을 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 212를 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역; 또는
(xxvi) 서열번호 219를 포함하거나 또는 이로 구성된 중쇄 가변 영역 및 서열번호 220을 포함하거나 또는 이로 구성된 경쇄 가변 영역;
을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12에 특이적으로 결합하고, 도 9b에 도시된 각각의 항체에 대해 제시된 6개의 CDR 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 6 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 도 9b에 도시된 각각의 항체에 대해 제시된 VH/VL 서열 쌍을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, ADLLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 252)를 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 8 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 ZIP12의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, LLQVLSAGDHPPHNHSRS(서열번호 1), 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 에피토프를 인식하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
요법에 사용하기 위한 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
저산소증-관련 질환(hypoxia-related diseases)을 치료, 예방 또는 개선하는 데 사용하기 위한 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 11 항에 있어서,
상기 저산소증-관련 질환은 폐 고혈압 또는 암인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 약학 조성물로서,
제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 비히클을 포함하는, 약학 조성물. - 제 13 항에 따른 약학 조성물을 제조하는 방법으로서,
상기 방법은 치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 정의된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 약학적으로 허용가능한 비히클과 결합하는(combining) 것을 포함하는, 방법. - 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열번호 252 또는 서열번호 1, 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 구성된 ZIP12 세포외 에피토프로 숙주 유기체(host organism)를 면역화하는 단계; 및
(ii) 상기 숙주로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 수집하는 단계;
를 포함하는 방법에 의해 수득된 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 정의된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열.
- 제 16 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 카세트(expression cassette).
- 제 17 항에 따른 발현 카세트를 포함하는 재조합 벡터(recombinant vector).
- 제 16 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열, 제 17 항에 따른 발현 카세트, 또는 제 18 항에 따른 벡터를 포함하는, 숙주 세포.
- 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은:
(a) 제 18 항의 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계; 및
(b) 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건하에 상기 숙주 세포를 배양하는 단계;
를 포함하는, 방법. - 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
진단 또는 예후에 사용하기 위한 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
저산소증-관련 병태를 진단 또는 예후하는 데 사용하기 위한 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 대상체에서 저산소증-관련 병태를 진단 또는 예후하는 방법으로서,
상기 방법은 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서 ZIP12을 검출하는 것을 포함하는, 방법. - 저산소증-관련 병태를 앓는 대상체를 진단하거나, 또는 상기 대상체의 병태의 예후를 제공하기 위한 키트(kit)로서,
상기 키트는 시험 대상체 유래의 샘플에서 ZIP12을 검출하기 위한 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 키트. - 제 21 항, 제 23 항 또는 제 24 항에 있어서,
상기 저산소증-관련 병태는 폐 고혈압 또는 암인, 용도, 방법 또는 키트.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB2204023.2 | 2022-03-22 |
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