[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

KR20240150781A - B7-h4 항체 약물 접합체를 포함하는 암 치료를 위한 병용요법 - Google Patents

B7-h4 항체 약물 접합체를 포함하는 암 치료를 위한 병용요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240150781A
KR20240150781A KR1020247030173A KR20247030173A KR20240150781A KR 20240150781 A KR20240150781 A KR 20240150781A KR 1020247030173 A KR1020247030173 A KR 1020247030173A KR 20247030173 A KR20247030173 A KR 20247030173A KR 20240150781 A KR20240150781 A KR 20240150781A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
cancer
antigen
Prior art date
Application number
KR1020247030173A
Other languages
English (en)
Inventor
엘리자베타 레오
프란시스 앤 토스토
크리스타 린 키니어
킴벌리 쿡
존 체즈브러
Original Assignee
메디뮨 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메디뮨 리미티드 filed Critical 메디뮨 리미티드
Publication of KR20240150781A publication Critical patent/KR20240150781A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

i) 항체-약물 접합체(ADC), ii) 세포독성제 및 iii) 추가 제제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 암 치료 방법이 제공되되, 추가 제제는 PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 본 개시내용은 i) 항체-약물 접합체(ADC), ii) 세포독성제 및 iii) 추가 제제를 포함하는 키트를 더 제공하되, 추가 제제는 PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다.

Description

B7-H4 항체 약물 접합체를 포함하는 암 치료를 위한 병용요법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2022년 2월 16일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/310,967호; 및 2022년 10월 4일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/378,295호의 우선권 유익을 주장하며, 이들은 본 명세서에 이들의 전문이 모든 목적을 위해 참조에 의해 원용된다.
전자적으로 제출된 자료의 참조로서의 포함
본 출원과 동시에 제출되고 다음과 같이 확인되는 컴퓨터 판독 가능한 뉴클레오타이드/아미노산 서열 목록은 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다: 2023년 2월 8일자로 생성된 파일명이 "B7H4-101-WO-PCT_SeqList.xml"인 1개의 54,907 바이트 XML 파일.
기술분야
본 개시내용은, i) 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate: ADC), ii) 세포독성제 및 iii) 추가 제제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공하되, 추가 제제는 PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 본 개시내용은 i) 항체-약물 접합체(ADC), ii) 세포독성제 및 iii) 추가 제제를 포함하는 키트를 더 제공하되, 추가 제제는 PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다.
수술, 방사선 요법 및 화학요법은 단독으로 또는 병용하여, 가장 전통적이고 널리 사용되는 암 치료 방법이다. 이러한 치료 방법은 암세포를 제거하거나 사멸시키는 데 효과적이지만, 치료받은 환자의 탈모, 빈혈, 심한 메스꺼움, 건강한 세포의 사멸과 같은 바람직하지 않은 부작용을 자주 초래한다. 이러한 한계는 혁신적이고 덜 해로운 암 치료 방법에 대한 긴급한 필요성을 제시한다.
항체 기반 암 요법은 암세포의 특정 단백질에 대한 항체-약물 접합체의 인식 및 결합에 의존한다. 항체 약물 접합체(ADC)는 접합체의 항체 부분의 특이성을 이용하여 독성이 강한 제제를 사멸시킬 세포에 직접 전달할 수 있다. 항체 또는 ADC 암 요법을 다른 소분자 기반 암 요법과 병용하여 사용하면, 한 가지 초과의 방법으로 악성 세포 및 종양을 공격하여 치료 결과를 향상시킬 수 있다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 하기를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법에 관한 것이다:
A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 절단 가능한 링커; 및
iii. 세포독성제; 및
B) PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 추가 제제. 일부 양상에서, 추가 제제는 AZD5305이다. 일부 양상에서, 추가 제제는 AZD6738이다.
상기 방법의 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함한다. 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키지 않는 암세포를 추가로 포함한다. 일부 양상에서, 암은 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암, 및 삼중 음성 유방암(TNBC)으로부터 선택되는 유방암이다. 일부 양상에서, 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암이다. 일부 양상에서, 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택된 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함한다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택된다.
상기 방법의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 각각 서열번호 33 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 각각 서열번호 43 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 각각 서열번호 46 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
v. 각각 서열번호 47 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
vi. 각각 서열번호 31 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체;
vii. 각각 서열번호 35 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체;
viii. 각각 서열번호 37 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
ix. 각각 서열번호 39 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
i. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
상기 방법의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OVCAR4 세포주에 결합한다.
상기 방법의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체이다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화된 단클론성 항체이다.
일부 양상에서, 절단 가능한 링커는 mp-PEG8-val-ala 링커이다.
일부 양상에서, 세포독성제는 국소이성질화효소 저해제이다. 일부 양상에서, 국소이성질화효소 저해제는 화학식 A*의 화합물이다:
.
상기 방법의 일부 양상에서, ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 다음의 화합물로부터 선택된다:
.
상기 방법의 일부 양상에서, ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 화합물 SG3932이다.
상기 방법의 일부 양상에서, ADC는 약 1 내지 약 8의 약물 대 항체비(drug to antibody ratio: DAR)를 갖는다. 일부 양상에서, ADC는 약 8의 DAR을 갖는다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 키트에 관한 것이다:
A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 절단 가능한 링커; 및
iii. 세포독성제; 및
B) PARP1 저해제 또는 ATR 저해제 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 추가 제제. 일부 양상에서, 추가 제제는 AZD5305이다. 일부 양상에서, 추가 제제는 AZD6738이다.
키트의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
i. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
키트의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
키트의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
키트의 일부 양상에서, 절단 가능한 링커는 mp-PEG8-val-ala 링커이다.
키트의 일부 양상에서, 세포독성제는 국소이성질화효소 저해제이다. 일부 양상에서, 국소이성질화효소 저해제는 하기 화학식 A*의 화합물이다:
.
키트의 일부 양상에서, ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 다음의 화합물로부터 선택된다:
.
키트의 일부 양상에서, ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 화합물 SG3932이다.
키트의 일부 양상에서, ADC는 약 1 내지 약 8의 약물 대 항체비(DAR)를 갖는다. 일부 양상에서, ADC는 약 8의 DAR을 갖는다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 하기를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법에 관한 것이다:
A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 하기 화학식을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합된 절단 가능한 링커 및 세포독성제:
; 및
B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
일부 양상에서, 본 개시내용은 하기를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법에 관한 것이다:
A) 하기 i 내지 ii를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
f) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
g) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
h) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
i) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
j) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 하기 화학식을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합된 절단 가능한 링커 및 세포독성제:
; 및
B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
상기 방법의 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함한다. 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키지 않는 암세포를 추가로 포함한다. 일부 양상에서, 암은 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암, 및 삼중 음성 유방암(TNBC)으로부터 선택되는 유방암이다. 일부 양상에서, 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암이다. 일부 양상에서, 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택된 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함한다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택된다.
다음의 도면은 본 명세서의 일부를 형성하고 본 개시내용의 특정 일부 양상의 예시적인 양상을 추가로 증명하기 위해 포함된다.
도 1은 B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-BRCA 야생형 세포에서 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 처리를 사용한 세포독성 활성 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 병용요법으로 처리한 DLD-1-BRCA 야생형 세포의 Bliss 상승효과 점수 매트릭스를 나타낸다.
도 3은 B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포에서 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 치료를 사용한 세포독성 활성 분석 결과를 나타낸다.
도 4는 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 병용요법으로 치료한 DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포의 Bliss 상승효과 점수 매트릭스를 나타낸다.
도 5는 MX-1 세포에서 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 치료를 사용하는 세포독성 활성 분석 결과를 나타낸다.
도 6은 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 병용요법으로 치료한 MX-1 세포의 Bliss 상승효과 점수 매트릭스를 나타낸다.
도 7은 마우스 모델에서의 개개 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 치료의 생체내 항-종양 효능을 나타낸다.
도 8은 마우스 모델에서의 E02-GL-SG3932 및 AZD5305의 병용요법의 생체내 항-종양 효능 실험 결과를 나타낸다.
도 9는 마우스 모델에서의 E02-GL-SG3932 및 AZD5305의 개개 요법 및 병용요법의 생체내 항-종양 효능 실험의 평균 종양 용적을 나타낸다.
도 10은 마우스 모델에서의 E02-GL-SG3932 및 AZD6738의 개개 요법 및 병용요법의 생체내 항-종양 효능 실험의 평균 종양 용적을 나타낸다.
도 11a 내지 도 11c는 실시예 6에 기재된 바와 같은 인간 종양에서의 B7-H4 발현 결과를 나타낸다. 도 11a: IHC는 다수의 종양 유형에 걸쳐서 B7-H4 발현을 평가하기 위해 사용되었다. 적응증에서 B7-H4 발현의 출현율은 임의의 강도로 B7-H4 양성을 발현시키는 세포 비율로 나타난다. 도 11b: 자궁내막암, 담관암종, ER+ 유방암 또는 TNBC, 및 난소암에서의 B7-H4 IHC 염색의 대표적인 영상. 도 11c: TNBC의 원발성 종양 수술적 절제, 포르말린-고정, 파라핀-포매(FFPE) 샘플(n = 196)의 각 종양 세포막에서 B7-H4 발현의 평균 광학 밀도(OD)의 분포를 나타내는 정량적 영상 분석. 각각의 절단된 바이올린 플롯은 개개 공여자 샘플을 나타낸다. 선은 중앙값을 나타낸다.
도 12a 내지 도 12f는 실시예 6에 기재된 바와 같은 TNBC PDX 모델에서 PARP1-선택적 저해제 AZD5305와 조합한 E02-GL-SG3932 항종양 효능의 결과를 나타낸다. 종양은 실시예 6에 기재된 바와 같이 확립되었고, 각 패널에 표시된 용량으로 치료가 실시되었다. ADC는 단일 볼루스 IV 주사로서 전달되었고, AZD5305는 28일 동안 1일 1회 경구 위관영양법에 의해 전달되었다. 도 12a 내지 도 12b: 높은 B7-H4-발현 BRCA WT HBCx-39 모델에서 (a) 1.25 ㎎/㎏ 또는 (b) 3.5 ㎎/㎏ ADC 치료 단독 또는 AZD5305와의 병용으로부터 초래된 항종양 효능. 도 12c 내지 도 12d: (c) 높은 B7-H4-발현 BRCA1-돌연변이체 HBCx-24 및 (d) BRCA1-저차형태(hypomorphic) HBCx-11 모델의 치료로부터 초래된 활성. 도 12e 내지 도 12f: (e) HBCx-8, BRCA1-돌연변이체 모델, 및 (f) HBCx-2, 낮은 B7-H4 발현을 갖는 BRCA WT 모델의 치료로부터 초래된 효능. 데이터는 종양 용적 평균 ± 평균의 표준 오차(그룹당 n = 4 또는 5마리 동물)를 나타낸다.
소분자 약물과 같은 제2 제제와 함께 항체-약물 접합체(ADC)의 투여를 포함하는 방법, 조합물 및 키트가 본 명세서에 개시된다. 방법, 조합물 및 키트는 본 명세서에 기재된 바와 같이 대상체의 암 치료에서 사용될 수 있다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) PARP1(폴리(ADP-리보스) 중합효소 1) 저해제를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다. 일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) ATR(FRAP-관련 단백질 1; FRP1; MEC1; SCKL; SECKL1R) 저해제를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다. 일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법을 제공한다.
암의 치료
일부 양상에서, B7-H4의 발현과 관련된 암 치료 방법이 본 명세서에 개시된다. 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함한다. 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함하는 종양 또는 다른 악성 세포 덩어리이다. 일부 양상에서, 암은 B7-H4를 발현시키지 않는 암세포를 추가로 포함한다.
B7-H4(V-세트 도메인 함유 T-세포 활성화 저해제 1로도 알려짐, VTCN1 유전자에 의해 암호화됨)는 공동자극 단백질의 B7 패밀리의 막관통 폴리펩타이드이다. B7-H4는 면역 세포의 리간드(예를 들어, CD28이 잠재적인 리간드인 T-림프구)와의 상호작용을 위해 항원-제시 세포의 표면에서 발현되는 것으로 이해된다. B7-H4는 다양한 암 유형의 세포에서 고도로 발현되는 것으로 관찰되었으며, 종양-관련 항원으로 생각된다. 또한, B7-H4 발현은 특정 암 유형에 제한되지 않으므로, 이는 광범위한 암 유형을 치료하기 위한 표적 항원을 나타낸다.
바람직한 양상에서, 본 명세서에 언급된 암은 B7-H4 분자의 발현(바람직하게는 과발현)을 특징으로 하는 암이다. 즉, 본 명세서에서 언급되는 암은 B7-H4를 발현하는 암성 세포를 포함할 수 있다. 상기 암성 세포는 종양 내에 포함될 수 있다. 다른 양상에서, B7-H4 분자는 비암세포에서의 발현 수준과 유사한 수준으로 암세포에서 발현된다. 다른 양상에서, B7-H4 분자는 비암세포에서의 발현 수준보다 낮은 수준으로 암세포에서 발현된다.
"치료"는 진단된 병리학적 상태 또는 장애를 치유하고/치유하거나, 늦추고/늦추거나, 이러한 상태 또는 장애의 증상을 경감시키고/경감시키거나, 이러한 상태 또는 장애의 진행을 중단시키는 치료적 조치를 지칭한다. 따라서, 치료를 필요로 하는 이는 이미 이러한 장애가 있는 이를 포함한다. 일부 양상에서, 대상체는 환자가, 예컨대, 이러한 질환 또는 장애(바람직하게는 암)와 관련된 증상의 전체적, 부분적, 또는 일시적 경감 또는 제거를 보이는 경우, 본 명세서에서 제공된 방법에 따라, 질환 또는 장애(바람직하게는 암)에 대해 성공적으로 "치료"된다.
일부 양상에서, 본 개시내용의 방법은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함하는 암의 발병을 예방하기 위해 사용될 수 있다. "예방"은 표적화된 병리학적 상태 또는 장애의 발생을 예방하고/예방하거나 이를 늦추는 예방적 또는 방지적 조치를 지칭한다. 따라서, 예방을 필요로 하는 이는 이러한 장애를 앓기 쉽거나 이러한 장애에 취약한 이를 포함한다. 일부 양상에서, 환자가 일시적으로 또는 영구적으로 본 개시내용의 방법을 경험한 적이 없는 환자보다, 예컨대, 질환 또는 장애와 관련하여 더 적거나 덜 심각한 증상, 또는 이러한 질환 또는 장애와 관련하여 더 늦은 증상의 개시를 발생시키는 경우, 본 명세서에서 제공된 방법에 따라, 질환 또는 장애(바람직하게는 암)가 성공적으로 예방된다.
용어 "대상체", "개체" 및 "환자"는 포유류 대상체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 호환 가능하게 사용된다. 일부 양상에서, "대상체"는 인간, 가축, 농장 동물, 스포츠 동물 및 동물원 동물, 예를 들어 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소 등이다. 일부 양상에서, 대상체는 사이노몰거스 원숭이(마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis))이다. 바람직한 양상에서, 대상체는 인간이다. 본 개시내용의 방법에서, 대상체는 암을 앓는 것으로 이전에 진단된 적이 없을 수 있다. 대안적으로, 대상체는 암을 앓는 것으로 이전에 진단된 적이 있을 수 있다. 대상체는 또한 질환 위험 인자를 나타내는 대상체 또는 암에 대해 무증상인 대상체일 수 있다. 대상체는 또한 암을 앓고 있거나 암이 발생할 위험이 있는 대상체일 수 있다. 따라서, 일부 양상에서, 본 개시내용의 방법은 대상체에서 암의 존재를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 대상체는 이전에 대체 수단으로 암으로 진단된 적이 있을 수 있다. 일부 양상에서, 대상체는 암 요법이 이전에 투여된 적이 있다.
일부 양상에서, 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택된 암을 치료하는 방법이 본 명세서에서 개시된다. 일부 양상에서, 암은 난소암이다. 유방암을 치료하기 위한 방법의 일부 양상에서, 유방암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암 또는 삼중 음성 유방암(TNBC)이다. 일부 양상에서, 유방암은 TNBC이다.
상기 방법의 일부 양상에서, 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암이다. 일부 양상에서, 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택된 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함한다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1이다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA2이다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 ATM이다.
항체 및 항원 결합 단편
본 명세서에 제공된 항체 약물 접합체는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. B7-H4의 RNA, DNA 및 아미노산 서열은 당업자에게 공지되어 있으며, 여러 데이터베이스, 예를 들어, 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information, NCBI) 및 UniProt의 데이터베이스에서 찾아볼 수 있다. UniProt에서 발견되는 이러한 서열의 예는 인간 B7-H4의 경우 Q7Z7D3(VTCN1_인간)이고, 마우스 B7-H4의 경우 Q7TSP5(VTCN1_마우스)이다. 인간 B7-H4를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 53, 더욱 바람직하게는 서열번호 54일 수 있다. 인간 B7-H4의 폴리펩타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 55이다.
일부 양상에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 명세서에서 "ZY0EPQ-E02" 또는 "EPQ-E02"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 서서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 명세서에서 "ZY0EOB-F05" 또는 "EOB-F05"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 명세서에서 "ZY0EO5-E07" 또는 "EO5-E07"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 명세서에서 "ZY0EP0-C07" 또는 "EP0-C07"로 지칭될 수 있다.
특정 양상에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다.
다시 말해서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 바람직하게는 하기를 포함할 수 있다:
i. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
v. 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 또는 이의 기능적 변이체; 및
vi. 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
v. 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 또는 이의 기능적 변이체; 및
vi. 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
v. 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 또는 이의 기능적 변이체; 및
vi. 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
v. 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 또는 이의 기능적 변이체; 및
vi. 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
ii. 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 또는 이의 기능적 변이체;
iii. 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
iv. 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 또는 이의 기능적 변이체;
v. 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 또는 이의 기능적 변이체; 및
vi. 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체.
추가로 또는 대안적으로, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)에 의해 기재될 수 있다.
(항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함할 수 있는) 적합한 가변 중쇄(VH) 서열은 아래에 개별화된 방식으로 요약되어 있다:
- 서열번호 31, 또는 이의 기능적 변이체;
- 서열번호 33, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 43, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 45, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 46, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 47, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 35, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 37, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 39, 또는 이의 기능적 변이체
(항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함할 수 있는) 특히 적합한 가변 중쇄(VH) 서열은 아래에 개별화된 방식으로 요약되어 있다:
- 서열번호 45, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 33, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 43, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 46, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 47, 또는 이의 기능적 변이체
(항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함할 수 있는) 적합한 가변 경쇄(VL) 서열은 아래에 개별화된 방식으로 요약되어 있다:
- 서열번호 32, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 34, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 36, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 38, 또는 이의 기능적 변이체
- 서열번호 40, 또는 이의 기능적 변이체
(항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함할 수 있는) 바람직한 가변 경쇄(VL) 서열은 서열번호 34의 아미노산 서열(또는 이의 기능적 변이체)을 포함할 수 있다.
예를 들어, 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 31, 33, 35, 37, 또는 39의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 서열번호 32, 34, 36, 38, 또는 40의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
예를 들어, 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
i. 서열번호 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 46, 또는 47의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 서열번호 32, 34, 36, 38, 또는 40의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
적합하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함할 수 있다:
i. 서열번호 33의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 서열번호 34의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
더 적합하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함할 수 있다:
i. 서열번호 45의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및
ii. 서열번호 34의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
- 각각 서열번호 31 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 33 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 43 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 46 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 47 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 VL, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 35 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체;
- 각각 서열번호 37 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
- 각각 서열번호 39 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 45, 33, 43, 46 또는 47의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH)(또는 이의 기능적 변이체); 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL)(또는 이의 기능적 변이체)를 포함한다. 예를 들어, 서열번호 33, 45, 46 및/ 47의 VH는 서열번호 33의 VH의 "생식계열화(germlined)" 버전에 상응할 수 있다(예를 들어, 모두 동일한 CDR 서열을 갖지만 프레임워크 변형이 있음). 유리하게는, 각각의 변이체는 동등한 결합 특성을 보유한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 "ZY0EPD-E02" 또는 "EPD-E02"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 "ZY0EOB-F05" 또는 "EOB-F05"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 "ZY0EO5-E07" 또는 "EO5-E07"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 "ZY0EP0-C07" 또는 "EP0-C07"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 상기 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 "EQD-E02_GL"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 43의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함할 수 있다.
추가로 또는 대안적으로, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이의 중쇄 및 경쇄에 의해 기재될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 44의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VL 및 불변 경쇄를 포함하는) 경쇄를 포함한다. 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VL 및 불변 경쇄를 포함하는) 경쇄를 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함할 수 있다. 이러한 중쇄는 "E02-GL-Maia-중쇄"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 49의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함할 수 있다. 이러한 중쇄는 "E02-GLY-Maia-중쇄"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 50의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함할 수 있다. 이러한 중쇄는 "E02-GLQ-Maia-중쇄"로 지칭될 수 있다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다. 더욱 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다. 이러한 중쇄는 "E02-GL-WT-중쇄"로 지칭될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 기준 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 90%, 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 더욱 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VL 및 불변 경쇄를 포함하는) 경쇄 및 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, VH 및 불변 중쇄를 포함하는) 중쇄를 포함한다.
유리하게는, 청구범위의 항체 또는 항원 결합 단편이 B7-H4를 표적화하는 것으로 보고된 기존의 (상업적으로) 입수 가능한 항체와 비교할 때 더 넓은 범위의 B7-H4 발현 세포를 표적으로 할 수 있음이 입증되었다. 따라서, 본 명세서에 개시된 항체(또는 이의 항원 결합 단편)는 임상적으로 관련있는 표적에 대해 친화도 및 특이성을 갖는 것으로 입증되었을 뿐만 아니라, 이들은 또한 이와 관련된 독특한 이점(예를 들어, 예상치 못한 기술적 효과)을 갖는 것으로 입증되었다.
바람직하게는, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 암세포의 필수 구성요소로서 B7-H4(예를 들어, 암세포의 세포막의 필수 구성요소로서 B7-H4)에 결합할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OVCAR4 세포주 및/또는 CHO 세포주(예를 들어, B7-H4를 암호화하는 외인성 핵산이 결여될 수 있음)에 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OVCAR4 세포주 및/또는 CHO 세포주(예를 들어, B7-H4를 암호화하는 외인성 핵산이 결여될 수 있음)의 B7-H4(예를 들어, B7-H4 에피토프)에 결합한다. 적합하게는, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OVCAR4 세포주 및 CHO 세포주(예를 들어, B7-H4를 암호화하는 외인성 핵산이 결여될 수 있음)에 결합할 수 있다.
용어 "에피토프"는 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편에 결합할 수 있는(예를 들어, 이에 의해 결합될 수 있는) 표적 단백질 영역(예를 들어, 폴리펩타이드)을 지칭한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 E Biosciences 14-5949 항-인간 B7H4 마우스 IgG, US biological B0000-35B 항 인간 B7H4 마우스 IgG, R and D systems AF2514 항-마우스 B7H4 염소 IgG1, Sigma SAB2500141 항 B7H4 염소 IgG1, 아이소타입 1 CAT004 SP06-003, 아이소타입 2 R 및 D 정상 염소 IgG 대조군(AB-108C), AdD serotec MCA2632, Epitomics 2516-1, eBiosciences, 145972-82, eBioscience 145970-85, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 비교할 때 더 높은 친화도로 OVCAR4 세포주 및/또는 CHO 세포주(예를 들어, B7-H4를 암호화하는 외인성 핵산이 결여될 수 있음)에 결합한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 E Biosciences 14-5949 항-인간 B7H4 마우스 IgG, US biological B0000-35B 항 인간 B7H4 마우스 IgG, R and D systems AF2514 항-마우스 B7H4 염소 IgG1 및 Sigma SAB2500141 항 B7H4 염소 IgG1, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 비교할 때 더 높은 친화도로 OVCAR4 세포주 및/또는 CHO 세포주(예를 들어, B7-H4를 암호화하는 외인성 핵산이 결여될 수 있음)에 결합할 수 있다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 E Biosciences 14-5949 항-인간 B7H4 마우스 IgG와 비교할 때 더 높은 친화도로 OVCAR4 세포주에 결합한다.
"E Biosciences 14-5949 항-인간 B7H4 마우스 IgG"에 대한 언급은 본 명세서에서 용어 "B7-H4 단클론성 항체(H74), eBioscience"와 상호 호환 가능하게 사용될 수 있다. 상기 항체는 ThermoFisher Scientific(카탈로그 번호 14-5949-82)에서 입수할 수 있다.
또 다른 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 US biological B0000-35B 항 인간 B7H4 마우스 IgG와 비교할 때 더 높은 친화도로 OVCAR4 세포주에 결합한다.
상기 친화도(예를 들어, 결합 친화도)는 본 명세서에 기재된 결합 친화도를 측정하는 임의의 적합한 방법에 의해 측정될 수 있다.
OVCAR4 세포주는 인간 난소 암종 세포주이다. OVCAR4 세포주는 암치료진단분과 종양보관소(Division of Cancer Treatment and Diagnosis Tumor Repository)에서 세포주 이전을 위해 국립암연구소(National Cancer Institute)에서 입수할 수 있다. 중국 햄스터 난소(CHO) 세포주는 중국 햄스터의 난소에서 유래한 상피 세포주로, 널리 입수 가능하다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체이다.
"단클론성 항체"(mAb)는 단일 항원 결정기 또는 에피토프의 고도로 특이적인 인식 및 결합에 관여하는 동종 항체 집단을 지칭한다. 이는 전형적으로 상이한 항원 결정기에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체와 대조적이다. 용어 "단클론성 항체"는 무손상 단클론성 항체와 전장 단클론성 항체 둘 모두와, 항체 단편(예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일쇄(scFv) 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 기타 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 더 나아가, "단클론성 항체"는 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현 및 형질전환 동물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 임의의 여러 방식으로 제조된 이러한 항체를 지칭한다.
바람직한 양상에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb)은 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 적합하게는, 상기 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG이다.
용어 "인간화된 항체"는 최소의 비-인간(예를 들어, 뮤린) 서열을 함유하도록 조작된 비-인간(예를 들어, 뮤린) 면역글로불린으로부터 유래된 항체를 나타낸다. 전형적으로, 인간화된 항체는, CDR(상보적 결정 영역)로부터의 잔기들이 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비인간 종(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 또는 햄스터)의 CDR로부터의 잔기들로 대체된 인간 면역글로불린이다(Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1534-1536). 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FW) 잔기는 원하는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 비인간 종으로부터의 항체 내 상응하는 잔기로 대체된다.
인간화된 항체는 Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내에서 추가적인 잔기들의 치환에 의해 추가 변형되어 항체 특이성, 친화도 및/또는 능력을 개선하고 최적화할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비인간 면역글로불린에 상응하는 CDR 영역을 모두, 또는 실질적으로 모두 함유하는, 적어도 하나의, 그리고 전형적으로 2개 또는 3개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것인 반면, FR 영역의 전부, 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 공통 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 인간화된 항체를 생성하는 데 사용되는 방법의 예는 미국 특허 제5,225,539호 또는 제5,639,641호에 기재되어 있다.
항체의 "가변 영역"은 단독으로 또는 조합하여 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 나타낸다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각이 초가변 영역으로도 알려진 3개의 상보적 결정 영역(CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역(FW)으로 구성된다. 각각의 쇄에서의 CDR들은 FW 영역에 의해 서로 매우 가까이 유지되고, 다른 쇄의 CDR들과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하기 위한 적어도 2가지의 기술이 있다: (1) 교차-종 서열 가변성에 기초한 접근법(즉, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구에 기초한 접근법(Al-lazikani et al. (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)). 또한, 이들 두 접근법의 조합이 당업계에서 CDR을 결정하는 데 사용되기도 한다.
"Kabat 넘버링 시스템"은 일반적으로 가변 도메인 내의 잔기(대략적으로 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 지칭할 때 사용된다(예컨대, 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]).
Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)에서 항체들의 편집물의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대하여 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 이용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 단축 또는 가변 도메인의 FW 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 더 적은 아미노산 또는 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변성 도메인은 단일 아미노산 삽입부(Kabat에 따른 잔기 52a)를 H2의 잔기 52 뒤에 포함하고, 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 중쇄 FW 잔기 82 뒤에 포함할 수 있다.
잔기의 Kabat 넘버링은 주어진 항체에 대해 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준적인" Kabat 넘버링된 서열과 정렬시킴으로써 결정할 수 있다. Chothia는 대신에 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Kabat 넘버링 체계를 이용하여 넘버링했을 때 Chothia CDRH1의 말단은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 다르다(이는 Kabat 넘버링 체계가 H35A와 H35B에 삽입물을 위치시키기 때문이다; 만일 35A와 35B가 존재하지 않는다면, 이러한 루프는 32에서 끝난다; 35A만 존재한다면, 이러한 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B 모두가 존재할 경우, 이러한 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 사이의 절충물을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. 아래 표는 각 시스템에서 항체의 가변 영역을 포함하는 아미노산의 위치를 나열한 것이다.
IMGT(ImMunoGeneTics)는 또한 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역에 대한 넘버링 시스템을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)] 참조. IMGT 넘버링 시스템은 5,000개를 초과하는 서열들의 정렬, 구조적 데이터 및 초가변 루프의 특성규명에 기반하고, 모든 종들에 대한 가변 영역 및 CDR 영역의 용이한 비교를 가능하게 한다. IMGT 넘버링 체계에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 존재하고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 존재하고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 존재하고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 존재하고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 존재하고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 존재한다.
명세서 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 기재된 VH CDR 서열들은 전통적인 Kabat 넘버링 위치에 해당하며, 즉, Kabat VH-CDR1은 위치 31 내지 35에 존재하고, VH-CDR2는 위치 50 내지 65에 존재하고, VH-CDR3은 위치 95 내지 102에 존재한다. VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3도 고전적인 Kabat 넘버링 위치, 즉, 각각 위치 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97에 해당한다.
일부 양상에서, 본 개시내용의 항체는 인간 항체이다.
용어 "인간 항체"는 인간에서 생성된 항체, 또는 당업계에서 공지된 임의의 기법을 이용함으로써 제조된, 인간에서 생성된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 가진 항체를 의미한다. 인간 항체의 이 정의는 무손상 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체, 예를 들면, 뮤린 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 포함한다.
일부 양상에서, 본 개시내용의 항체는 키메라 항체이다.
용어 "키메라 항체"는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 포유류의 한 종(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등)으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 해당하되, 불변 영역은 그 종에서 면역 반응을 유도하는 것을 막기 위해 또 다른 종(통상적으로 인간)으로부터 유래된 항체의 서열에 상응한다.
용어 "YTE" 또는 "YTE 돌연변이체"는 IgG1 Fc의 돌연변이를 나타내는데, 이는 그 돌연변이를 갖는 항체의 혈청 반감기를 개선하고 인간 FcRn에의 결합을 증가시킨다. YTE 돌연변이체는 IgG1의 중쇄에 도입된 3개의 돌연변이들의 조합, 즉, M252Y/S254T/T256E(EU numbering Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Public Health Service, National Institutes of Health, Washington, D.C.)을 포함한다. 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제7,658,921호 참조. 이러한 YTE 돌연변이체는 동일한 항체의 야생형 버전과 비교하여 항체의 혈청 반감기를 대략 4배 증가시키는 것으로 밝혀졌다(Dall'Acqua et al., J. Biol. Chem. 281:23514-24 (2006); Robbie et al., (2013) Antimicrob. Agents Chemother. 57, 6147-6153). 또한, 전체가 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제7,083,784호 참조.
적합하게는, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체가 B7-H4를 표적화하는 데 치료제 또는 진단 시약으로서 유용하도록 충분한 친화도로 B7-H4 분자에 결합한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤10 pM, ≤1 pM, 또는 ≤0.1 pM의 해리 상수(KD)로 B7-H4(바람직하게는 인간 B7-H4)에 결합한다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 0.1 nM 내지 약 40 nM, 약 0.5 nM 내지 약 30 nM, 약 1 nM 내지 약 20 nM, 또는 약 1.5 nM 내지 약 20 nM의 KD로 B7-H4(바람직하게는 인간 B7-H4)에 결합한다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 23 nM 내지 약 27 nM의 KD로 B7-H4(바람직하게는 인간 B7-H4)에 결합한다. 더욱 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 nM 내지 약 1.5 nM의 KD로 B7-H4(바람직하게는 인간 B7-H4)에 결합한다.
KD 측정(결합 친화도)은 당업계에 공지된 임의의 적합한 분석법에 의해 수행될 수 있다. 적합한 분석법은 KinExA 시스템(예를 들어, KinExA 3100, KinExA 3200 또는 KinExA 4000)(Sapidyne Instruments, Idaho) 또는 ForteBio Octet 시스템을 통해 수행할 수 있는 친화도 분석법을 포함한다.
일부 양상에서, 관련되지 않은 비 B7-H4 단백질에 대한 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 정도는 B7-H4(바람직하게는 인간 B7-H4)에 대한 항체(또는 이의 항원 결합 단편)의 결합의 약 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만(바람직하게는 약 10% 미만)이다. 상기 결합은, 예를 들어, 방사면역측정법(RIA), BIACORE®(분석물질로서 재조합 B7-H4 및 리간드로서 항체를 사용하거나 그 반대), KINEXA®, ForteBio Octet 시스템, 또는 당업계에 공지된 기타 결합 분석법에 의해 측정할 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 B7-H1 분자, 인간 B7-H2 분자, 인간 B7-H3 분자, 인간 BTN1A1 분자, 인간 HHLA2 분자, 인간 BTN3A2 분자, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상에 결합하지 않는다. 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 B7-H1 분자, 인간 B7-H2 분자, 인간 B7-H3 분자 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상에 결합하지 않는다.
용어 "결합하지 않는다"는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 상기 분자(예를 들어, 인간 B7-H1 분자, 인간 B7-H2 분자, 인간 B7-H3 분자, 인간 BTN1A1 분자, 인간 HHLA2 분자, 인간 BTN3A2 분자, 또는 이들의 조합) 중 하나 이상에 실질적으로 결합하지 않는다는 것을 의미한다. 본 명세서에서 결합의 맥락에서 사용될 때 용어 "실질적으로 없다"는 세포 배양물에서 상기 분자 중 하나 이상을 발현하는 세포의 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만이 (접촉 시) 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 결합된다는 것을 의미할 수 있다. 적합하게는, 본 명세서에서 결합의 맥락에서 사용될 때 용어 "실질적으로 없다"는 이러한 세포가 결합되지 않음을 의미할 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 B7-H1 분자, 인간 B7-H2 분자, 인간 B7-H3 분자, 인간 BTN1A1 분자, 인간 HHLA2 분자 또는 인간 BTN3A2 분자에 결합하지 않는다. 바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 B7-H1 분자, 인간 B7-H2 분자 또는 인간 B7-H3 분자에 결합하지 않는다.
일부 양상에서, B7-H4 폴리펩타이드는 B7-H4 폴리펩타이드 서열 또는 이의 단편 내에 포함된다.
"B7-H4 폴리펩타이드"는 B7-H4의 전장 폴리펩타이드 서열(예를 들어, 서열번호 55)을 포함할 수 있거나, 또는 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편에 결합할 수 있는(예를 들어, 이에 의해 결합될 수 있는) 에피토프를 포함하는, B7-H4의 전장 폴리펩타이드 서열의 임의의 길이(예를 들어, B7-H4의 전장 폴리펩타이드 서열의 5%, 15%, 25%, 35%, 45%, 55%, 65%, 75%, 85% 또는 95%의 폴리펩타이드 서열을 포함함)의 B7-H4의 단편을 포함할 수 있다. B7-H4 폴리펩타이드는 서열번호 55의 서열과 75%, 80%, 85%, 90% 또는 90%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, B7-H4 폴리펩타이드는 서열번호 55의 서열을 포함한다.
항체 및 항원 결합 단편의 특성규명
항체 또는 항원 결합 단편은 시험관 내 및 생체 내 둘 다에서 B7-H4에 대해 높은 친화도를 갖고, 따라서 B7-H4 에피토프를 검출하는 방법 및 관련 진단 방법에 유리하게 사용될 수 있다.
용어 "항체"는 (예를 들어, 원하는 생물학적 활성을 나타내는) 단클론성 항체 및 이의 단편을 포함한다. 바람직한 양상에서, 본 개시내용의 항체는 단클론성 항체이다. 더욱 바람직한 양상에서, 항체는 완전 인간 단클론성 항체이다. 일부 양상에서, 본 개시내용의 방법은 다클론성 항체를 사용할 수 있다.
특히, 항체는 적어도 1개 또는 2개의 중쇄(H) 가변 영역(본 명세서에서는 VHC로 약칭함) 및 적어도 1개 또는 2개의 경쇄(L) 가변 영역(본 명세서에서는 VLC로 약칭함)을 포함하는 단백질이다. VHC 및 VLC 영역은 "프레임워크 영역"(FR)으로 지칭되는 더욱 보존된 영역이 산재된 "상보성 결정 영역"("CDR")으로 지칭되는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 프레임워크 영역 및 CDR의 정도는 정확하게 정의되어 있다(예를 들어, 문헌[Kabat, E.A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991, and Chothia, C. et al, J. MoI. Biol. 196:901-917, 1987] 참조). 바람직하게는, 각 VHC 및 VLC는 아미노-말단에서 카르복시-말단으로, 하기의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어져 있다: FRl, CDRl, FR2, DR2, FR3, CDR3, FR4. 항체의 VHC 또는 VLC 사슬은 추가로 중쇄 또는 경쇄 불변 영역의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 항체는 2개의 중쇄 면역글로불린 사슬 및 2개의 경쇄 면역글로불린 사슬의 사량체이고, 여기서 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬은 예를 들어 이황화 결합에 의해 상호연결된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, 즉, CL로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 용어 "항체"는 유형 IgA, IgG, IgE, IgD, IgM(뿐만 아니라 이들의 하위 유형)의 무손상 면역글로불린을 포함하며, 여기서 면역글로불린의 경쇄는 카파 또는 람다 유형일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 항체는 또한 상기 언급된 마커 중 하나에 결합하는 항체의 일부, 예를 들어 하나 이상의 면역글로불린 사슬이 전체 길이는 아니지만 마커에 결합하는 분자를 지칭한다. 용어 항체 내에 포함되는 결합 부분의 예는 (i) VLC, VHC, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VHC 및 CH1 도메인으로 구성된 Fc 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VLC 및 VHC 도메인으로 구성된 Fv 단편, (v) VHC 도메인으로 구성된 dAb 단편(Ward et al, Nature 341:544-546, 1989); 및 (vi) 결합하기에 충분한 프레임워크를 갖는 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들어, 가변 영역의 항원 결합 부분을 포함한다. 경쇄 가변 영역의 항원 결합 부분과 중쇄 가변 영역의 항원 결합 부분, 예를 들어, Fv 단편의 두 도메인, VLC 및 VHC는 이들을 VLC 및 VHC 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단일 사슬 Fv(scFv)로 알려짐)를 형성하는 단일 단백질 사슬로 만들어지게 하는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있다(단일쇄 Fv(scFv)로 알려짐; 예를 들어, 문헌[Bird et al. (1988) Science lAl-ATi-Alβ; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. ScL USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 사슬 항체 또한 용어 항체에 포함된다. 이들은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득될 수 있고, 부분은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대하여 선별된다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 뮤린 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 단클론성 항체, 다클론 항체, 재조합 항체, 다중특이적 항체, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상이다.
일부 양상에서, 항원 결합 단편은 Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, dsFv 단편, scFv 단편, sc(Fv)2 단편, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상이다.
일부 양상에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb)은 scFV이다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종에 걸쳐서 B7-H4 분자에 결합할 수 있고, 예를 들어 항체 또는 단편은 마우스 B7-H4, 래트 B7-H4, 토끼, 인간 B7-H4 및/또는 사이노몰거스 원숭이 B7-H4에 결합할 수 있다. 일부 양상에서, 항체 또는 단편은 인간 B7-H4 및 사이노몰거스 원숭이 B7-H4에 결합할 수 있다. 일부 양상에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 또한 마우스 B7-H4에 결합할 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 B7-H4, 예를 들어 인간 B7-H4 및 사이노몰거스 원숭이 B7-H4에 특이적으로 결합할 수 있지만, 인간 B7-H1, B7-H2 및/또는 B7-H3에 특이적으로 결합하지 않는다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 및 VL 이외에도, 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 이러한 중쇄 불변 부위는 인간 중쇄 불변 부위, 예컨대, 인간 IgG 불변 부위, 예컨대, 인간 IgG1 불변 부위이다. 일부 양상(바람직하게는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제제(agent), 예컨대, 세포독성제에 접합되는 경우)에서, 시스테인 잔기는 IgG1의 CH2 영역의 아미노산 S239와 V240 사이에 삽입된다. 이 시스테인은 "239 삽입" 또는 "239i"로 지칭된다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
"E02-GL" 항체는 ZY0EQD-E02의 CDR 서열(예를 들어 이에 상응함)을 갖는다("GL"은 항체가 생식계열화되었음을 의미함). 예를 들어, E02-GL은 서열번호 45의 VH 쇄 서열, 예를 들어, 서열번호 43의 생식계열 형태, 및 서열번호 34의 VL 쇄 서열을 포함할 수 있다. E02-GL은 또한 서열번호 51의 중쇄 서열 및 서열번호 44의 경쇄 서열을 포함할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 국소이성질화효소 I 페이로드 SG3932에 접합된 "E02-GL"은 "E02-GL-SG3932"로 지칭된다. 일 양상에서, 클론 E02-GL은 8의 평균 약물 항체비(DAR)에서 국소이성질화효소 I 페이로드 SG3932에 접합된다.
일부 양상에서, 중쇄 불변 부위 또는 이의 단편, 예컨대, 인간 IgG 불변 부위 또는 이의 단편은 야생형 IgG 불변 도메인에 대해 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있는데, 이때, 이러한 변형된 IgG는 야생형 IgG 불변 도메인을 갖는 IgG의 반감기와 비교할 때 증가된 반감기를 갖는다. 예를 들어, IgG 불변 도메인은 251 내지 257, 285 내지 290, 308 내지 314, 385 내지 389 및 428 내지 436번 위치의 아미노산 잔기의 하나 이상의 아미노산 치환을 함유할 수 있는데, 이때, 이러한 아미노산 위치 넘버링은 Kabat에 기재된 EU 지표에 따른 것이다. 일부 양상에서, 이러한 IgG 불변 도메인은 Kabat 252번 위치의 아미노산의 티로신(Y), 페닐알라닌(F), 트립토판(W), 또는 트레오닌(T)으로의 치환, Kabat 254번 위치의 아미노산의 트레오닌(T)으로의 치환, Kabat 256번 위치의 아미노산의 세린(S), 아르기닌(R), 글루타민(Q), 글루탐산(E), 아스파르트산(D), 또는 트레오닌(T)으로의 치환, Kabat 257번 위치의 아미노산의 류신(L)으로의 치환, Kabat 309번 위치의 아미노산의 프롤린(P)으로의 치환, Kabat 311번 위치의 아미노산의 세린(S)으로의 치환, Kabat 428번 위치의 아미노산의 트레오닌(T), 류신(L), 페닐알라닌(F) 또는 세린(S)으로의 치환, Kabat 433번 위치의 아미노산의 아르기닌(R), 세린(S), 이소류신(I), 프롤린(P) 또는 글루타민(Q)으로의 치환, 또는 Kabat 434번 위치의 아미노산의 트립토판(W), 메티오닌(M), 세린(S), 히스티딘(H), 페닐알라닌(F) 또는 티로신으로의 치환 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 바람직한 양상에서, IgG 불변 도메인은 Kabat 252번 위치의 아미노산의 티로신(Y)으로의 치환, Kabat 254번 위치의 아미노산의 트레오닌(T)으로의 치환 및 Kabat 256번 위치의 아미노산의 글루탐산(E)으로의 치환을 포함하는, 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 아미노산 치환을 함유할 수 있다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄를 포함하고, 중쇄는 인간 IgG1 YTE 돌연변이체이다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 및 VL 이외에도, 선택적으로 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편, 경쇄 불변 영역 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 경쇄 불변 영역은 카파 람다 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 불변 영역 또는 인간 람다 불변 영역이다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 양상에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 본 명세서에 제시된 서열과 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 유사성을 가질 수 있다. 일부 양상에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 1, 2, 3, 4, 5개 이상의 치환, 예를 들어 본 명세서에 제시된 서열에 비해 보존적 치환을 포함할 수 있다. VH 영역 또는 VL 영역에 대해 특정 백분율 유사성을 나타내거나, 하나 이상의 치환, 예컨대, 보존적 치환을 갖는 VH 및 VL 영역을 갖는 B7-H4 항체는 본 명세서에 기재된 VH 및/또는 VL 영역을 암호화하는 핵산 분자들의 돌연변이유발(예컨대, 부위 특이적 또는 PCR 매개성 돌연변이유발)에 이어, 암호화된 변경된 항체의 B7-H4에 대한 결합 시험 및 선택적으로 본 명세서에 기재된 기능적 분석법을 이용한 보유된 기능 시험에 의해 수득될 수 있다.
항원에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 친화도 또는 결합력은 당업계에 잘 알려져 있는 임의의 적절한 방법, 예컨대, 유동 세포분석법, 효소결합 면역흡착 측정법(ELISA) 또는 방사성면역분석법(RIA), 또는 동력학(예컨대, KINEXA® 또는 BIACORE™ 분석)을 이용하여 실험적으로 결정할 수 있다. 직접적인 결합 분석법뿐만 아니라, 경쟁적 결합 분석법 형식이 용이하게 활용될 수 있다. (예를 들어, 문헌[Berzofsky et al., Antibody-Antigen Interactions, In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, N.Y. (1984); Kuby, Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992)]; 및 본 명세서에 기재된 방법 참조.) 측정된 특정 항체-항원 상호작용의 친화도는 상이한 조건(예컨대, 염 농도, pH, 온도) 하에서 측정되었다면 다를 수 있다. 따라서, 친화도 및 기타 항원 결합 파라미터(예컨대, KD 또는 Kd, Kon, Koff)의 측정은 당업계에 공지된 바와 같이, 표준화된 항체 및 항원 용액, 그리고 표준화된 완충액을 이용하여 이루어진다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 500 nM 미만, 약 350 nM 미만, 약 250 nM 미만, 약 150 nM 미만, 약 100 nM 미만, 약 75 nM 미만, 약 60 nM 미만, 약 50 nM 미만, 약 40 nM 미만, 약 30 nM 미만, 약 20 nM 미만, 약 15 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 500 pM 미만, 약 350 pM 미만, 약 250 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 75 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM 미만, 약 15 pM 미만, 약 10 pM 미만, 또는 약 5 pM 미만의 IC50으로 B7-H4 발현 세포에 결합할 수 있다. 바람직하게는, 상기 IC50은 유세포분석법에 의해 측정된다.
절단 가능한 링커 및 세포독성제
본 명세서에 개시된 항체-약물 접합체의 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커에 의해 세포독성제에 연결된다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커에 의해 세포독성제에 접합된다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "접합된"은 공유 결합 또는 이온 결합을 통해 연결된 것을 의미한다. 세포독성제는 본 명세서에서 "제제" 또는 "활성제"로 지칭될 수 있다. 일부 양상에서, 세포독성제는 약물이다.
일부 양상에서, ADC(때때로 "탄두"로도 지칭됨) 상의 세포독성제는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된 국제 특허 출원 공개 WO2020/200880에 개시된 세포독성제 중 하나이다.
세포독성제 또는 세포독소는 세포의 기능을 저해하거나 방해하고/하거나, 세포의 파괴(세포 사멸)를 야기하고/하거나, 항-신생물/항-증식 효과를 발휘하는 당업계에 공지된 임의의 분자일 수 있다. 여러 부류의 세포독성제가 ADC 분자에서 잠재적인 유용성을 갖고 있다고 알려져 있다. 이들은 국소이성질화효소 I 저해제, 아마니틴, 아우리스타틴, 다우노마이신, 독소루비신, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 에네디인, 렉시트롭신, 탁산, 퓨로마이신, 메이탄시노이드, 빈카 알칼로이드, 튜불라이신 및 피롤로벤조디아제핀(PBD)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 세포독성제의 예는 AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, 아우리스타틴 E, 파클리탁셀, 도세탁셀, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 돌라스타틴-10, 에키노마이신, 콤브레타스타틴, 칼리케아미신, 메이탄신, DM-1, 빈블라스틴, 메토트렉세이트 및 네트롭신, 및 이의 유도체 및 유사체이다. ADC에 사용하기에 적합한 세포독소와 관련된 추가적인 개시는 예를 들어, 전체가 본 명세서에 참조로 포함된, 국제 특허출원 공개번호 WO 2015/155345 및 WO 2015/157592에서 찾아볼 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 국소이성질화효소 I 저해제, 튜불라이신 유도체, 피롤로벤조디아제핀, 항미생물제, 치료제, 전구약물, 펩타이드, 단백질, 효소, 지질, 생물학적 반응 변형제, 약제, 림포카인, 이종 항체, 이종 항체의 단편, 검출 가능한 표지, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 방사성 동위원소 또는 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 이종 제제에 접합된다.
일부 양상에서, 항체 항원 결합 단편은 국소이성질화효소 I 저해제, 튜불라이신 유도체, 피롤로벤조디아제핀 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 세포독소에 접합된다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 국소이성질화효소 I 저해제 SG3932, SG4010, SG4057 또는 SG4052(이의 구조는 아래에 제공됨); 튜불라이신 AZ1508, 피롤로벤조디아페진 SG3315, 피롤로벤조디아페진 SG3249, 또는 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 세포독소에 접합된다.
바람직한 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 국소이성질화효소 I 저해제에 접합된다. 국소이성질화효소 저해제는 정상 세포 주기 동안 DNA 가닥의 포스포다이에스테르 골격의 파단 및 재결합에 촉매작용을 함으로써 DNA 구조의 변화를 제어하는 효소인 국소이성질화효소(국소이성질화효소 I 및 II)의 작용을 차단하는 화학적 화합물이다.
적합한 국소이성질화효소 I 저해제의 일반적인 예는 다음 화합물 A*로 표시된다:
이는 본 명세서에서 "약물 단위(Drug Unit)"로 지칭될 수 있다.
화합물(예를 들어, A*)은 바람직하게는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편("리간드 단위"로 지칭될 수 있음)에 연결(바람직하게는 접합)하기 위한 링커와 함께 제공된다. 적합하게, 링커는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노 잔기, 예를 들어 아미노산에 절단 가능한 방식으로 부착(예를 들어, 접합)된다.
더욱 특별하게는, 적합한 국소이성질화효소 I 저해제의 예는 하기 화학식 "I"의 화합물 및 이의 염 및 용매화물로 표시된다:
[화학식 I]
여기서 RL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결하기 위한 링커이고, 상기 링커는 바람직하게는 다음으로부터 선택된다:
(ia):
상기 식에서,
Q는 이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 다이펩타이드 잔기, 트라이펩타이드 잔기 또는 테트라펩타이드 잔기가 되도록 하는 것이고;
X는 이며,
식 중, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c1 = 0 또는 1이고, c2 = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0(즉, b1과 b2 중 하나만 0이 아닐 수 있음)이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0(즉, c1과 c2 중 하나만 0이 아닐 수 있음)이고;
GL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결하기 위한 링커이거나; 또는
(ib):
식 중, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1이다.
당업자라면 상기 제제(들)(예를 들어, 국소이성질화효소 I 저해제) 중 하나 초과가 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합될 수 있음을 이해할 것이다.
예를 들어, 본 개시내용의 접합체(예를 들어, 항체-약물 접합체)는 일반식 IV의 접합체:
L - (DL)p (IV)
또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 용매화물일 수 있고, 여기서 L은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)이고, DL은 화학식 III의 링커(예를 들어, 약물 링커 단위)를 갖는 국소이성질화효소 I 저해제이다:
[화학식 III]
.
RLL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결된 링커이고, 여기서 링커는 바람직하게는 하기로부터 선택된다:
(ia'):
(Q 및 X는 상기에 정의된 바와 같고, GLL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결된 링커임); 및
(ib'):
(RL1 및 RL2는 상기에 정의된 바와 같고;
p는 1 내지 20의 정수임).
약물 로딩은 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)당 국소이성질화효소 I 저해제(들)(예를 들어, 약물 단위)의 수인 p로 표시된다. 약물 로딩의 범위는 리간드 단위당 1 내지 20의 약물 단위(D)일 수 있다. 조성물의 경우, p는 조성물에서 접합체의 평균 약물 로딩을 나타내고, p의 범위는 1 내지 20이다.
따라서, 본 명세서에 개시된 ADC의 양상은 적어도 하나의 국소이성질화효소 I 저해제(예를 들어, 상기 예시된 A*와 같은 약물 단위)에 공유 연결된 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)을 포함하는 접합체를 포괄한다. 상기 저해제는 바람직하게는 RL 및/또는 RLL로서 상기 기재된 링커와 같은 링커(예를 들어, 링커 단위)에 의해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된다. 다시 말해서, 본 명세서에 개시된 ADC의 양상은 바람직하게는 링커(예를 들어, 약물-링커 단위)를 통해 부착된 1종 이상의 국소이성질화효소 I 저해제를 갖는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)을 포괄한다. 상기에서 보다 충분히 설명된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(리간드 단위를 나타냄)은 표적 모이어티에 결합하는 표적화제이다. 더욱 특별하게는, 이 리간드 단위는 예를 들어 약물 단위가 전달되는 표적 세포 상의 B7-H4에 특이적으로 결합할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 방법은, 예를 들어, ADC에 의한 다양한 암 및 기타 장애(예를 들어, B7-H4를 발현하는 세포, 바람직하게는 암성 세포의 존재와 관련된 암/장애)의 치료를 위해 사용될 수 있다.
상기 기재된 국소이성질화효소 I 저해제의 특정 특징이 특히 바람직하며 하기에 제시된 바와 같이 보다 상세하게 정의될 수 있다. 예를 들어, (예를 들어, 전술한 1a의 링커 내의) 특징 QX의 바람직한 양상이 개략적으로 설명될 것이다.
다음의 선호사항은 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법, 조합 및 키트의 모든 양상에 적용될 수 있거나, 또는 단일 양상에 관한 것이다. 바람직한 예는 임의의 조합으로 함께 조합될 수 있다.
QX
일부 양상에서, Q는 아미노산 잔기이다. 아미노산은 천연 아미노산 또는 비천연 아미노산일 수 있다. 예를 들어, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp로부터 선택될 수 있고, Cit는 시트룰린이다.
일부 양상에서, Q는 다이펩타이드 잔기를 포함한다. 다이펩타이드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 양상에서, 다이펩타이드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 다이펩타이드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 이어서, 다이펩타이드는 카텝신에 대한 인식 부위이다.
일부 양상에서, Q는,
NH -Phe-Lys-C=O,
NH -Val-Ala- C=O,
NH -Val-Lys- C=O,
NH -Ala-Lys- C=O,
NH-Val-Cit- C=O,
NH-Phe-Cit- C=O,
NH-Leu-Cit- C=O,
NH-Ile-Cit- C=O,
NH-Phe-Arg- C=O,
NH-Trp-Cit- C=O 및
NH -Gly-Val- C=O로부터 선택되며;
여기서, Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, Q는,
NH-Phe-Lys- C=O,
NH-Val-Ala- C=O,
NH-Val-Lys- C=O,
NH-Ala-Lys- C=O 및
NH-Val-Cit- C=O로부터 선택된다.
더 바람직하게는, Q는 NH-Phe-Lys- C=O, NH-Val-Cit- C=O 또는 NH-Val-Ala- C=O로부터 선택된다.
기타 적합한 다이펩타이드 조합물은 하기를 포함한다:
NH -Gly-Gly- C=O,
NH -Gly-Val- C=O
NH -Pro-Pro- C=O 및
NH -Val-Glu- C=O.
본 명세서에 참조로 포함되는 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869]에 기재된 것을 포함하여 다른 다이펩타이드 조합물이 사용될 수 있다.
일부 양상에서, Q는 트라이펩타이드 잔기이다. 트라이펩타이드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 양상에서, 트라이펩타이드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 트라이펩타이드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 이어서, 트라이펩타이드는 카텝신에 대한 인식 부위이다. 특히 관심 대상인 트라이펩타이드 링커는 다음과 같다:
NH-Glu-Val-Ala-C=O
NH-Glu-Val-Cit-C=O
NH-αGlu-Val-Ala-C=O
NH-αGlu-Val-Cit-C=O.
일부 양상에서, Q는 테트라펩타이드 잔기이다. 테트라펩타이드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 양상에서, 테트라펩타이드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 테트라펩타이드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 즉, 테트라펩타이드는 카텝신에 대한 인식 부위이다. 특히 관심 대상인 테트라펩타이드 링커는 다음과 같다:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
일부 양상에서, 테트라펩타이드는 하기와 같다:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O.
펩타이드 잔기의 상기 표현에서, NH-는 N-말단을 나타내고, -C=O는 잔기의 C-말단을 나타낸다. C-말단은 A*의 NH에 결합한다.
Glu는 글루탐산의 잔기, 즉:
를 나타내고,
αGlu는 α-사슬을 통해 결합될 때의 글루탐산의 잔기, 즉:
를 나타낸다.
일부 양상에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호기는 상기 논의된 바와 같은 기일 수 있다. 보호된 아미노산 서열은 효소에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기를 포함하는 다이펩타이드 서열은 카텝신에 의해 절단될 수 있다.
아미노산의 측쇄에 대한 보호기는 당업계에 잘 알려져 있고 Novabiochem 카탈로그에 기재되어 있으며, 전술한 바와 같다.
G L
GL은 하기로부터 선택될 수 있다:
식 중, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타내고, X'은 C1-4 알킬을 나타낸다.
일부 양상에서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택된다. 일부 이러한 양상에서, GL은 GL1-1이다.
G LL
GLL은 하기로부터 선택될 수 있다:
식 중, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타내고, X는 C1-4 알킬을 나타낸다.
일부 양상에서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택된다. 일부 이러한 양상에서, GLL은 GLL1-1이다.
X
X는 바람직하게는 다음과 같다:
,
식 중, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0이다.
a는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, a는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, a는 0 또는 1이다. 추가 양상에서, a는 0이다.
b1은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 양상에서, b1은 0 내지 12이다. 일부 이러한 양상에서, b1은 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다.
b2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 양상에서, b2는 0 내지 12이다. 일부 이러한 양상에서, b2는 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다. 바람직하게는, b1과 b2 중 하나만 0이 아닐 수 있다.
c1은 0 또는 1일 수 있다. c2는 0 또는 1일 수 있다. 바람직하게는, c1 및 c2 중 하나만이 0이 아닐 수 있다.
d는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, d는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, d는 1 또는 2이다. 추가 양상에서, d는 2이다. 추가 양상에서, d는 5이다.
X의 일부 양상에서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 1이고, c2는 0이고, d는 2이고, b2는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5, 또는 8이다. X의 일부 양상에서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 0이고, b1은 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b1은 0, 2, 3, 4, 5, 또는 8이다. X의 일부 양상에서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 1이고, b2는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5, 또는 8이다. X의 일부 양상에서, b1은 0이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, a와 d 중 하나는 0이다. a와 d 중 다른 하나는 1 내지 5이다. 일부 이러한 양상에서, a와 d 중 다른 하나는 1이다. 다른 이러한 양상에서, a와 d 중 다른 하나는 5이다. X의 일부 양상에서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 1이고, d는 2이고, b1은 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5, 또는 8이다.
일부 양상에서, RL은 화학식 Ib의 RL이다. 일부 양상에서, RLL은 화학식 Ib'의 RLL이다.
RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성할 수 있다.
일부 양상에서, RL1과 RL2는 둘 다 H이다. 일부 양상에서, RL1은 H이고, RL2는 메틸이다. 일부 양상에서, RL1과 RL2는 둘 다 메틸이다.
일부 양상에서, RL1과 RL2는 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌기를 형성한다. 일부 양상에서, RL1과 RL2는 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸렌기를 형성한다.
Ib 기에서, 일부 양상에서, e는 0이다. 다른 양상에서, e는 1이고, 나이트로기는 고리의 임의의 이용 가능한 위치에 있을 수 있다. 일부 이러한 양상에서, 이는 오르토 위치에 있다. 다른 이러한 양상에서, 이는 파라 위치에 있다.
일부 양상에서, 본 명세서에 기재된 화합물이 단일 거울상이성질체 또는 거울상이성질체 풍부 형태로 제공되는 경우에, 거울상이성질체 풍부 형태는 60:40, 70:30; 80:20 또는 90:10 초과의 거울상이성질체비를 갖는다. 추가 양상에서, 거울상이성질체비는 95:5, 97:3 또는 99:1보다 크다.
일부 양상에서, RL은 하기로부터 선택된다:
.
일부 양상에서, RLL은 위의 RL 기로부터 유래된 기이다.
바람직한 예를 상기에서 개략적으로 설명하였으므로, 이제 특정 바람직한 국소이성질화효소 I-링커(예를 들어, 약물 링커 단위) 화학식을 설명한다.
일부 양상에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I P 의 화합물 및 이의 염 및 용매화물이다:
[화학식 IP]
;
여기서 RLP는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결하기 위한 링커이고, 상기 링커는 다음으로부터 선택된다:
(ia)
,
(식 중,
QP는 이고, QXP는 QP가 아미노산 잔기, 다이펩타이드 잔기 또는 트라이펩타이드 잔기가 되도록 하는 것이고;
XP는 이고,
aP = 0 내지 5이고, bP = 0 내지 16이고, cP = 0 또는 1이고, dP = 0 내지 5이고;
GL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
,
(식 중, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
aP는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, aP는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, aP는 0 또는 1이다. 추가 양상에서, aP는 0이다.
bP는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 양상에서, b는 0 내지 12이다. 일부 이러한 양상에서, bP는 0 내지 8이고, 0, 2, 4 또는 8일 수 있다.
cP는 0 또는 1일 수 있다.
dP는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, dP는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, dP는 1 또는 2이다. 추가 양상에서, dP는 2이다.
XP의 일부 양상에서, aP는 0이고, cP는 1이고, dP는 2이고, bP는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, bP는 0, 4 또는 8이다.
화학식 I의 화합물에 대한 상기 QX에 대한 바람직한 예는 (예를 들어, 적절한 경우) QXP에 적용될 수 있다.
화학식 I의 화합물에 대한 상기 GL, RL1, RL2 및 e에 대한 바람직한 예는 화학식 I P 의 화합물에 적용될 수 있다.
일부 경우에, 화학식 IV의 접합체는 하기 화학식 IV P 의 접합체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
L - (DLP)p (IV P )
식 중, L은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)이고, DLP는 화학식 IIIP의 국소이성질화효소 I 저해제(예를 들어, 약물 링커 단위)이다:
[화학식 IIIP]
;
RLLP는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결된 링커이고, 여기서 상기 링커는 다음으로부터 선택된다:
(ia'):
(식 중, QP 및 XP는 상기에 정의된 바와 같고, GLL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, 리간드 단위에 연결된 링커임); 및
(ib'):
(식 중, RL1 및 RL2는 상기에 정의된 바와 같고;
p는 1 내지 20의 정수임).
일부 양상에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I P2 의 화합물 및 이의 염 및 용매화물이다:
[화학식 IP2]
;
식 중, RLP2는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결하기 위한 링커이고, 상기 링커는 다음으로부터 선택된다:
(ia):
(식 중,
Q는 이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 다이펩타이드 잔기, 트라이펩타이드 잔기 또는 테트라펩타이드 잔기가 되도록 하는 것이고;
XP2는 이고,
식 중, aP2 = 0 내지 5이고, b1P2 = 0 내지 16이고, b2P2 = 0 내지 16이고, cP2 = 0 또는 1이고, dP2 = 0 내지 5이고, 적어도 b1P2 또는 b2P2 = 0이고(즉, b1과 b2 중 하나만 0이 아닐 수 있음);
GL은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
Figure pct00040
(식 중, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
aP2는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, aP2는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, aP2는 0 또는 1이다. 추가 양상에서, aP2는 0이다.
b1P2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 양상에서, b1P2는 0 내지 12이다. 일부 이러한 양상에서, b1P2는 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다.
b2P2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 양상에서, b2P2는 0 내지 12이다. 일부 이러한 양상에서, b2P2는 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다.
바람직하게는, b1P2 및 b2P2 중 하나만이 0이 아닐 수 있다.
cP2는 0 또는 1일 수 있다.
dP2는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 양상에서, dP2는 0 내지 3이다. 일부 이러한 양상에서, dP2는 1 또는 2이다. 추가 양상에서, dP2는 2이다. 추가 양상에서, dP2는 5이다.
XP2의 일부 양상에서, aP2는 0이고, b1P2는 0이고, cP2는 1이고, dP2는 2이고, b2P2는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b2P2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다. XP2의 일부 양상에서, aP2는 1이고, b2P2는 0이고, cP2는 0이고, dP2는 0이고, b1P2는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b1P2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다. XP2의 일부 양상에서, aP2는 0이고, b1P2는 0이고, cP2는 0이고, dP2는 1이고, b2P2는 0 내지 8일 수 있다. 일부 이러한 양상에서, b2P2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다. XP2의 일부 양상에서, b1P2는 0이고, b2P2는 0이고, cP2는 0이고, aP2와 dP2 중 하나는 0이다. aP2와 d 중 다른 하나는 1 내지 5이다. 일부 이러한 양상에서, aP2와 d 중 다른 하나는 1이다. 다른 이러한 양상에서, aP2와 dP2 중 다른 하나는 5이다.
화학식 I의 화합물에 대한 상기 QX에 대한 바람직한 예는 (예를 들어, 적절한 경우) 화학식 IaP2의 QX에 적용될 수 있다.
화학식 I의 화합물에 대한 상기 GL, RL1, RL2 및 e에 대한 바람직한 예는 화학식 I P2 의 화합물에 적용될 수 있다.
일부 경우에, 화학식 IV의 접합체는 화학식 IV P2 의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
L - (DLP2)p (IV P2 )
식 중, L은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)이고, DLP2는 화학식 IIIP2의 국소이성질화효소 I 저해제(예를 들어, 약물 링커 단위)이다:
[화학식 IIIP2]
;
RLLP2는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)에 연결된 링커이고, 상기 링커는 다음으로부터 선택된다:
(ia'):
(식 중, Q 및 XP2는 상기에 정의된 바와 같고, GLL은 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 링커임); 및
(ib'):
(RL1 및 RL2는 상기에 정의된 바와 같고;
p는 1 내지 20의 정수임).
일부 양상에서, 링커는 mp-PEG8-val-ala 링커이다. 명칭에 나타나는 바와 같이, mp-PEG8-val-ala 링커는 세포독성제에 부착된 8개의 연속 폴리에틸렌 글리콜 단위 다음에 발린-알라닌(val-ala) 다이펩타이드를 갖는다.
일부 양상에서, 링커 및 세포독성제는 함께 하기 화합물들 중 하나를 포함한다:
.
일부 양상에서, 링커 및 세포독성제는 함께 SG3932를 포함한다:
.
약물 항체비
제제는 전형적으로 항체 또는 항원 결합 단편에 연결되거나 "로딩"된다. 제제 로딩(p)은 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, 리간드 단위)당 제제(들)의 평균 수이다.
접합 반응으로부터의 ADC 제제에서 항체(또는 항원 결합 단편)당 제제의 평균 개수는 UV, 역상 HPLC, HIC, 질량 분광분석법, ELISA 분석 및 전기영동과 같은 통상의 수단에 의해 특성화될 수 있다. 또한 p의 측면에서 ADC의 정량적 분포가 결정될 수 있다. ELISA에 의해 ADC의 특정 제제에서 p의 평균값을 결정할 수 있다(Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). 일부 예에서, p가 다른 약물 로딩을 갖는 ADC로부터의 특정한 값인 경우, 균질한 ADC의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다. 이러한 기술은 또한 다른 유형의 접합체에도 적용될 수 있다.
시스테인 아미노산은 항체(또는 이의 항원 결합 단편) 내의 반응성 부위에서 조작될 수 있고, 이것은 바람직하게는 쇄간 또는 분자간 이황화 결합을 형성하지 않는다(문헌[Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729]; 미국 특허 제7521541호; 미국 특허 제7723485호; WO2009/052249호). 조작된 시스테인 티올은 말레이미드 또는 알파-할로 아미드와 같은 티올-반응성 친전자성기를 가질 수 있는 제제(예를 들어, 하기 화학식 I의 제제) 내의 링커와 반응하여 시스테인 조작된 항체를 갖는 ADC를 형성할 수 있다. 따라서, 약물 단위의 위치가 설계, 제어 및 공지될 수 있다. 조작된 시스테인 티올기는 일반적으로 약물-링커 시약과 높은 수율로 반응하기 때문에 약물 로딩이 제어될 수 있다. IgG 항체의 조작으로 중쇄 또는 경쇄 상의 단일 부위에서의 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입하는 것은 대칭 항체 상에 2개의 새로운 시스테인을 제공한다. 2에 가까운 약물 로딩이 달성되고, 접합 산물 ADC의 균질성에 접근할 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편의 복수개의 친핵성 또는 친전자성기가 제제와 반응하는 경우, 생성된 생성물은 예를 들어, 1, 2, 3개 등의 항체에 부착된 제제 단위의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물일 수 있다. 중합체 역상(PLRP) 및 소수성 상호작용(HIC)과 같은 액체 크로마토그래피 방법은 제제 로딩값에 의해 혼합물에서 화합물을 분리할 수 있다. 단일 제제 로딩값(p)을 갖는 ADC의 제제가 단리될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체 조성물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 하나 이상의 제제 모이어티를 갖고 제제 모이어티가 다양한 아미노산 잔기에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착될 수 있는 경우에 항체-약물 접합체의 혼합물을 포함할 수 있다.
일부 양상에서, 항체(또는 이의 항원-결합 단편)당 제제의 평균 수는 1 내지 20의 범위이다. 일부 양상에서 범위는 1 내지 10, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6 및 4 내지 10으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 항체(또는 이의 항원-결합 단편)당 하나의 제제가 있다. 일부 양상에서, 항체(또는 이의 항원-결합 단편)당 제제의 수는 제제(즉, 약물) 대 항체의 비율로 표현될 수 있다. 이 비율은 약물 대 항체비(DAR)로 지칭된다. DAR은 각 항체에 연결된 약물(즉, 제제)의 평균 수이다. 본 개시내용의 일부 양상에서, DAR은 1 내지 20의 범위이다. 일부 양상에서, DAR의 범위는 1 내지 10, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6 및 4 내지 10으로부터 선택된다. 일부 양상에서, DAR은 약 1 내지 약 8이다. 본 개시내용의 특정 양상에서, DAR은 약 8이다. 본 개시내용의 특정 양상에서, DAR은 8이다.
ADC에 대한 투여 및 약제학적으로 허용 가능한 화합물
일부 양상에서, ADC는 불리한 세포 집단의 부위에 직접 전달된다(예를 들어, 이에 의해 질병에 걸린 조직의 치료제에 대한 노출을 증가시킨다). 일부 양상에서, 예컨대, 흡입 또는 비강내 투여에 의해 기도에 직접 투여된다.
본 명세서에 기재된 ADC는 약제학적 조성물 내에 포함될 수 있다. 약제학적 조성물은 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제(들)를 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한, 비독성, 멸균 담체, 예컨대, 생리 식염수, 비독성 완충제, 보존제 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 치료적 방법에 사용하기에 적합한 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 22nd ed., Ed. Lloyd V. Allen, Jr. (2012)]에 기술되어 있다.
일부 양상에서, 본 개시내용의 ADC 약제학적 조성물은 캡슐, 정제, 수성 현탁액, 용액, 비강 에어로졸, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 제형 내에 포함될 수 있다.
일부 양상에서, ADC 약제학적 조성물은 1가지를 초과하는 유형의 ADC를 포함한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 상이한 항체, 이의 항원-결합 단편, 링커 또는 세포독성제, 또는 이들의 상이한 조합을 갖는 둘 이상의 ADC를 포함할 수 있다.
용어 항체 또는 항원 결합 단편의 "약제학적 유효량"은 표적에 대한 유효한 결합을 달성하고 예를 들어, 질환 또는 병태의 증상을 완화시키거나 물질 또는 세포를 검출하는 것과 같은 이익을 달성하기에 충분한 양을 의미한다.
일부 양상에서, 약제학적 조성물은 완충제(예를 들어, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트), 선택적으로 안정화제(예를 들어, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다.
항체 제제
본 개시내용의 항체는 당업자에게 알려진 통상적인 기술 및 통상적인 결합 연구에 의해 확인된 이의 유용성을 사용하여 수득될 수 있다(예시적인 방법은 실시예 2에 기재되어 있다). 예로서, 단순 결합 분석은 항원 발현 세포를 항체와 함께 인큐베이션하는 것이다. 항체가 형광단으로 태그된 경우, 항원에 대한 항체의 결합은 FACS 분석에 의해 검출할 수 있다.
본 개시내용의 항체는 마우스, 래트, 토끼, 염소, 양, 원숭이 또는 말을 비롯한 다양한 동물에서 생성될 수 있다. 항체는 개별 협막 다당류 또는 복수의 협막 다당류로 면역화한 후 생성될 수 있다. 이 동물로부터 단리된 혈액은 동일 항원에 결합하는 다중 항체인 다클론성 항체를 포함한다. 또한 난황에서의 다클론성 항체의 생성을 위해 항원을 닭에 주입할 수 있다. 항원의 단일 에피토프에 특이적인 단클론성 항체를 얻기 위해, 항체-분비 림프구를 동물로부터 단리하고 상기 림프구와 암세포주의 융합에 의해 불멸화한다. 융합된 세포는 하이브리도마로 지칭되며, 배양에서 지속적으로 성장하고 항체를 분비한다. 단일 하이브리도마 세포를 희석 클로닝에 의해 단리하여 동일한 항체를 모두가 생산하는 세포 클론을 생성하며; 이러한 항체는 단클론성 항체로 칭해진다. 단클론성 항체를 생성하는 방법은 당업자에게 알려진 통상적인 기술이다(예를 들어, 문헌[Making and Using Antibodies: A Practical Handbook. GC Howard. CRC Books. 2006. ISBN 0849335280] 참조). 다클론성 및 단클론성 항체는 종종 단백질 A/G 또는 항원 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 문헌[Kohler and Milstein, Nature 256:495 (1975)]에 기재된 것과 같은 하이브리도마 방법을 사용하여 제조될 수 있는 단클론성 항-B7-H4 항체로서 제조될 수 있다. 이러한 하이브리도마 방법을 이용하여 마우스, 햄스터 또는 기타 적절한 숙주 동물을 위에 기재된 바와 같이 면역화시켜 면역화 항원에 특이적으로 결합할 항체의 림프구에 의한 생성을 유발한다. 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수도 있다. 면역화 후, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 림프구를 단리시키고 적합한 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한 후, 이 하이브리도마 세포를 융합되지 않은 림프구 및 골수종 세포로부터 선별할 수 있다. 그 다음, 면역침전, 면역블롯팅 또는 시험관 내 결합 분석법, 예를 들면, 방사성면역분석법(RIA) 또는 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)으로 결정된 바에 따라, 선택된 항원에 대해 특이적으로 유도된 단클론성 항체를 생성하는 하이브리도마를, 표준 방법(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986)을 이용하여 시험관 내 배양물에서 증식시킬 수 있거나 동물에서 복수 종양으로서 생체 내에서 증식시킬 수 있다. 그 후, 공지된 방법을 이용하여 배양 배지 또는 복수액으로부터 단클론성 항체를 정제할 수 있다.
대안적으로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 단클론성 항체로서)은 또한 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 단클론성 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 예컨대, 이러한 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자를 특이적으로 증폭시키는 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 이용한 RT-PCR에 의해 성숙한 B 세포 또는 하이브리도마 세포로부터 단리되고, 이의 서열은 통상적인 절차를 이용하여 결정된다. 그 후, 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드는 적합한 발현 벡터 내로 클로닝되며, 이것으로 이콜라이(E. coli) 세포, 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생성하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포를 형질감염시키는 경우 단클론성 항체가 숙주 세포에 의해 생성된다. 또한, 원하는 종의 재조합 단클론성 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)]; 및 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)]에 기재된 바와 같이 원하는 종의 CDR들을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 이러한 폴리뉴클레오타이드(들)를 재조합 DNA 기술을 이용하여 다수의 상이한 방식으로 더 변형시켜 대안적인 항체를 생성할 수 있다. 일부 양상에서, 예를 들면, 마우스 단클론성 항체의 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인들은 (1) 키메라 항체를 생성하기 위해 예를 들면, 인간 항체의 이들 부위들 대신에 치환될 수 있거나, (2) 융합 항체를 생성하기 위해 비 면역 글로불린 폴리펩타이드 대신에 치환될 수 있다. 일부 양상에서, 이러한 불변 부위들은 단클론성 항체의 원하는 항체 단편을 생성하기 위해 절두되거나 제거된다. 가변 영역의 부위 특이적 또는 고밀도 돌연변이유발이 단클론성 항체의 특이성, 친화도 등을 최적화하는 데 이용될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 직접적으로 제조될 수 있다. 표적 항원에 대해 유도된 항체를 생성하는, 시험관 내에서 면역화되었거나 면역화된 개체로부터 단리된 불멸화된 인간 B 림프구가 생성될 수 있다. 예컨대, 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer et al., J. Immunol. 147 (1):86-95 (1991)]; 미국 특허 제5,750,373호 참조.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 파지 라이브러리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 파지 라이브러리는, 예를 들어, 문헌[Vaughan et al., Nat. Biotech. 14:309-314 (1996); Sheets et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:6157-6162(1998); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227:381(1991); 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581(1991)]에 기재된 바와 같이 인간 항체를 발현시킨다. 항체 파지 라이브러리의 생성 및 사용 기술은 또한 미국 특허 제5,969,108호, 제6,172,197호, 제5,885,793호, 제6,521,404호; 제6,544,731호; 제6,555,313호; 제6,582,915호; 제6,593,081호; 제6,300,064호; 제6,653,068호; 제6,706,484호; 및 제7,264,963호; 및 문헌[Rothe et al., J. Molec. Biol. 376:1182-1200 (2008)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.
친화도 성숙 전략 및 사슬 셔플링 전략은 당업계에 공지되어 있으며, 고친화도 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위하여 이용될 수 있다. 전문이 참조에 의해 원용된 문헌[Marks et al., BioTechnology 10:779-783(1992)]을 참조한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 단클론성 항체)은 인간화된 항체일 수 있다. 비인간 또는 인간 항체를 조작하거나, 인간화하거나 재표면화하는(resurfacing) 방법이 또한 이용될 수 있고, 당업계에 잘 공지되어 있다. 인간화, 재표면화 또는 유사하게 조작된 항체는 비인간, 예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 비인간 영장류 또는 기타 포유류(그러나 이들로 제한되지 않음)인 공급원으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 전형적으로, 공지된 인간 서열의 "이입(import)" 가변, 불변 또는 기타 도메인으로부터 취한 "이입" 잔기라 종종 지칭되는 잔기들로 대체된다. 이러한 이입된 서열들은 당업계에 공지되어 있는 바와 같이 면역원성을 감소시키거나, 결합성, 친화성, 결합 속도, 해리 속도, 결합력, 특이성, 반감기 또는 임의의 기타 적합한 특성을 감소시키거나, 향상시키거나 변형시키기 위하여 이용될 수 있다. 적합하게는, CDR 잔기는 B7-H4 결합에 영향을 주는 것에 직접적이면서 가장 실질적으로 관여할 수 있다. 따라서, 비인간 또는 인간 CDR 서열의 일부 또는 전부는 유지되는 반면, 가변 및 불변 영역의 비인간 서열은 인간 또는 기타 아미노산으로 대체될 수 있다.
또한, 항체는 B7-H4 항원에 대한 높은 친화도 및 기타 유리한 생물학적 성질을 보유하도록 선택적으로 인간화, 재표면화, 조작 또는 인간 항체 조작될 수 있다. 이 목표를 달성하기 위해, 인간화(또는 인간) 또는 조작된 항-B7-H4 항체 및 재표면화 항체는 모 서열, 조작된 서열 및 인간화된 서열의 3차원적 모델을 이용하여 모 서열 및 다양한 개념적인 인간화된 및 조작된 생성물들을 분석하는 과정에 의해 선택적으로 제조될 수 있다. 3차원적 면역글로불린 모델이 흔히 이용될 수 있고, 당업자에게 친숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원적 입체배좌 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 이들 디스플레이의 검사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉 후보 면역글로불린이 이의 항원, 예컨대, B7-H4에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 가능하게 한다. 이러한 방식으로, FW 잔기가 원하는 항체 특성, 예컨대, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 공통 서열 및 이입 서열로부터 선택되어 조합될 수 있다.
본 개시내용의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 인간화, 재표면화 또는 조작은 문헌[Jones et al., Nature 321:522(1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323(1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988); Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901(1987); Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623(1993)]; 미국 특허 제5,639,641호, 제5,723,323호; 제5,976,862호; 제5,824,514호; 제5,817,483호; 제5,814,476호; 제5,763,192호; 제5,723,323호; 제5,766,886호; 제5,714,352호; 제6,204,023호; 제6,180,370호; 제5,693,762호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,225,539호; 제4,816,567호, 제7,557,189호; 제7,538,195호; 및 제7,342,110호; 국제 특허 출원 PCT/US98/16280; PCT/US96/18978; PCT/US91/09630; PCT/US91/05939; PCT/US94/01234; PCT/GB89/01334; PCT/GB91/01134; PCT/GB92/01755; 국제 공개 WO90/14443; WO90/14424; WO90/14430; 및 유럽 특허 공보 EP 229246에 기재된 것과 같은, 그러나 이들로 제한되지 않는 임의의 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있으며, 이들 각각은 그 안에 인용된 참고문헌을 포함하여 전체적으로 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
항-B7-H4 인간화된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 내인성 면역글로불린 생성 부재 하에서 면역화 시 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 인간 면역글로불린 좌위를 포함하는 형질전환 마우스에서도 제조될 수 있다. 이 접근법은 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호에 기재되어 있다.
일부 양상에서, 항체(예를 들어, 항-B7-H4 항체)의 단편(예를 들어, 항체 단편)이 제공된다. 항체 단편 생성을 위한 다양한 기술이 공지되어 있다. 전통적으로, 이들 단편은 예를 들어, 문헌[Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth. 24:107-117 (1993) 및 Brennan et al., Science 229:81(1985)]에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질 용해성 분해를 통해 유래된다. 일부 양상에서, 항-B7-H4 항체 단편은 재조합에 의해 생성된다. Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편을 모두 이콜라이 또는 다른 숙주 세포에서 발현시키고 이로부터 분비시킴으로써 다량의 이러한 단편의 생성을 허용할 수 있다. 이러한 항-B7-H4 항체 단편은 위에서 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수도 있다. 이러한 항-B7-H4 항체 단편은 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같이 선형 항체일 수도 있다. 항체 단편의 생산을 위한 기타 제조 기법은 당업자에게 자명할 것이다.
본 개시내용에 따르면, B7-H4에 특이적인 단일 쇄 항체의 생산 기법이 채택될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호 참조. 또한, B7-H4에 대한 원하는 특이성을 가진 단클론성 Fab 단편, 또는 이의 유도체, 단편, 유사체 또는 상동체의 신속하고 효과적인 확인을 가능하게 하기 위해 Fab 발현 라이브러리를 구축하는 방법이 채택될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Huse et al., Science 246:1275-1281(1989)]을 참조한다. 항체 단편은 또한 당업계에 공지된 기술에 의해 제조될 수 있으며, 이는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다: 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생성된 F(ab')2 단편; F(ab')2 단편의 이황화 가교를 감소시킴으로써 생성된 Fab 단편; 항체 분자를 파파인 및 환원제로 처리하여 생성된 Fab 단편; 또는 Fv 단편.
일부 양상에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이의 혈청 반감기를 증가시키기 위하여 변형될 수 있다. 이것은 예를 들면, 항체 또는 항체 단편의 적절한 영역의 돌연변이로 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프를 항체 또는 항체 단편 내로 도입하거나, (예를 들면, DNA 또는 펩타이드 합성으로) 어느 한 말단 또는 중간에서 항체 또는 항체 단편에 융합되는 펩타이드 태그 내로 에피토프를 도입함으로써, 또는 YTE 돌연변이에 의해 달성될 수 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 혈청 반감기를 증가시키는 기타 방법, 예를 들면, 이종 분자, 예컨대, PEG와의 접합이 당업계에 공지되어 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같은 변형 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이러한 항체 또는 폴리펩타이드의 B7-H4와의 회합을 제공하는 임의의 유형의 가변 영역을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 이러한 가변 영역은 체액성 반응을 시작하고 원하는 항원에 대한 면역글로불린을 생성하도록 유도될 수 있는 임의의 유형의 포유류를 포함하거나 이러한 포유류로부터 유래될 수 있다. 따라서, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 가변 영역은 예를 들어, 인간, 뮤린, 비인간 영장류(예컨대, 사이노몰거스 원숭이, 마카크 등) 또는 이리 유래의 것일 수 있다. 일부 양상에서, 변형된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 가변 부위와 불변 부위 모두는 인간이다. 일부 양상에서, (보통 비인간 공급원으로부터 유래된) 양립 가능 항체의 가변 영역은 조작되거나 특이적으로 맞추어져 이러한 분자의 면역원성을 감소시키거나 결합 특성을 개선시킬 수 있다. 이와 관련하여, 본 개시내용에 유용한 가변 영역은 인간화되거나 그렇지 않으면 이입된 아미노산 서열의 포함을 통해 변경될 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 하나 이상의 CDR들의 적어도 부분적인 대체 및/또는 부분적인 프레임워크 영역 대체 및 서열 바꿈에 의해 변경된다. 이러한 CDR은 프레임워크 영역이 유래된 항체와 동일한 부류의 항체 또는 심지어 이러한 항체의 하위 부류로부터 유래될 수 있지만, CDR은 상이한 부류로부터, 그리고 특정 일부 양상에서는 상이한 종의 항체로부터 유래될 것임이 예상된다. 하나의 가변 도메인의 항원 결합 능력을 또 다른 가변 도메인에 전달하기 위해 공여자 가변 영역의 모든 CDR을 완전한 CDR로 대체할 필요는 없다. 오히려, 항원 결합 부위의 활성을 유지하는 데 필요한 잔기를 옮기는 것만이 필요하다. 미국 특허 번호 5,585,089, 5,693,761 및 5,693,762에 기재된 설명을 고려하면, 통상적인 실험을 수행하여 면역원성이 감소된 기능성 항체를 수득하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 해당할 것이다.
가변 영역에 대한 변경에도 불구하고, 당업자는 본 개시내용의 변형 항체 또는 이의 항원 결합 단편이, 불변 영역 도메인들 중 하나 이상의 적어도 일부분이 결실되었거나 그렇지 않으면 변경되어 원했던 생화학적 특성, 예컨대, 천연의 또는 변경되지 않은 불변 영역을 포함하는 대략 동일한 면역원성의 항체에 비해 증가된 종양 편재화 또는 감소된 혈청 반감기를 제공하는 항체(예컨대, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편)를 포함할 것임을 인식할 것이다. 일부 양상에서, 변형된 항체의 이러한 불변 부위는 인간 불변 부위를 포함할 것이다. 본 개시내용과 양립가능한 불변 영역에 대한 변형은 하나 이상의 도메인에서의 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환을 포함한다. 즉, 본 명세서에 개시된 변형 항체는 3가지 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 하나 이상의 도메인이 부분적으로 또는 전체적으로 결실된 변형된 불변 부위가 고려된다. 일부 양상에서, 변형된 항체는 전체 CH2 도메인이 제거된 도메인 결실 작제물 또는 변이체(ΔCH2 작제물)를 포함할 것이다. 일부 양상에서, 누락된 불변 영역 도메인은 그 부재 불변 영역에 의해 전형적으로 부여되는 분자 가요성의 일부를 제공하는 짧은 아미노산 스페이서(예를 들어, 10개의 잔기)로 대체될 수 있다.
이들의 입체배치 외에도, 이러한 불변 영역이 몇몇 효과기 기능을 매개한다는 것이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 항체는 세포의 Fc 수용체(FcR)와 결합하는 항체 Fc 영역의 Fc 수용체 부위를 이용하여, Fc 영역을 통해 세포와 결합한다. IgG(감마 수용체), IgE(에타 수용체), IgA(알파 수용체) 및 IgM(뮤 수용체)를 비롯한 다양한 부류의 항체에 대해 특이적인 Fc 수용체가 다수 존재한다. 세포 표면의 Fc 수용체에 대한 항체의 결합은 항체 코팅된 입자의 포식 및 파괴, 면역 복합체의 제거, 살해 세포에 의한 항체 코팅된 표적 세포의 용리(항체 의존적 세포 매개성 세포독성, 또는 ADCC라 함), 염증 매개자의 방출, 태반 통과 및 면역글로불린 생산 제어를 포함한 다수의 다양한 생물학적 반응을 촉발한다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 결국 투여된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 생물학적 프로파일에 영향을 미치는, 변경된 효과기 기능을 제공한다. 예를 들어, (점 돌연변이 또는 기타 수단을 통한) 불변 영역 도메인의 결실 또는 불활성화는 순환하는 변형된 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시킬 수 있다. 다른 경우, 본 개시내용과 일치하는 불변 부위 변형은 보체 결합을 완화시켜, 혈청 반감기 및 접합된 세포독소의 비특이적 결합을 감소시킬 수 있다. 불변 영역의 또 다른 변형을 이용하여, 항원 특이성 또는 항체 가요성 증가로 인한 향상된 국재화를 가능하게 하는 이황화 결합 또는 올리고당 모이어티를 제거할 수 있다. 이와 유사하게, 본 발명에 따른 불변 영역에의 변형은 충분히 당업자의 범위 내인 잘 알려진 생화학 또는 분자 조작 기술을 이용하여 용이하게 이루어질 수 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 효과기 기능을 나타내지 않는다. 예를 들어, 일부 양상에서, 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC) 활성 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC) 활성을 나타내지 않는다. 일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fc 수용체 및/또는 보체 인자와 결합하지 않는다. 일부 양상에서, 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 어떠한 효과기 기능도 나타내지 않는다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 조작하여 CH3 도메인을 각각의 변형된 항체 또는 이의 단편의 힌지 영역에 직접 융합시킬 수 있다. 다른 작제물에서, 힌지 영역과 변형된 CH2 및/또는 CH3 도메인 사이에 펩타이드 스페이서가 삽입될 수 있다. 예를 들어, CH2 도메인이 결실되고, 남은 CH3 도메인(변형되거나 변형되지 않음)이 5 내지 20개의 아미노산 스페이서를 이용하여 힌지 영역에 연결된 적합한 작제물이 발현될 수 있다. 이러한 스페이서를 첨가하여, 예를 들어, 불변 도메인의 조절 요소를 자유롭고 접근 가능하게 유지하거나, 또는 힌지 영역을 유연하게 유지할 수 있다. 아미노산 스페이서는 일부 경우에 면역원성인 것으로 판명되어, 이러한 작제물에 대해 원치 않는 면역 반응을 유발할 수 있다. 일부 양상에서, 이러한 구축물에 첨가되는 임의의 스페이서는 상대적으로 비 면역원성이거나, 또는 심지어 변형된 항체의 원하는 생화학적 품질을 유지하도록 전부 생략될 수 있다.
전체 불변 영역 도메인의 결실 이외에도, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 불변 영역의 몇 개의 또는 심지어 단일한 아미노산의 부분적 결실 또는 치환에 의해 변형될 수 있다. 예를 들어, CH2 도메인의 선택된 영역의 단일 아미노산의 돌연변이는 실질적으로 Fc 결합을 감소시켜 종양 편재화를 증가시키기에 충분할 수 있다. 마찬가지로, 효과기 기능(예컨대, 보체 C1Q 결합)을 제어하는 하나 이상의 불변 영역 도메인을 완전히 또는 부분적으로 결실시킬 수 있다. 불변 영역의 이러한 부분 결실은 대상 불변 영역 도메인과 관련된 기타 바람직한 기능을 온전하게 둔 채 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 선택된 특징(예컨대, 혈청 반감기)을 개선할 수 있다. 게다가, 항체 및 이의 항원 결합 단편의 불변 영역을, 생성된 작제물의 프로파일을 증진시키는 하나 이상의 아미노산의 돌연변이 또는 치환을 통해 변형시킬 수 있다. 이와 관련하여, 변형 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 입체배치 및 면역원성 프로파일을 실질적으로 유지하면서, 보존된 결합 부위에 의해 제공되는 활성(예를 들어, Fc 결합성)을 파괴하는 것이 가능하다. 일 양상에서, 불변 영역에 하나 이상의 아미노산을 부가하여 바람직한 특성을 증진시킬 수 있거나(예컨대 효과기 기능의 감소 또는 증가), 세포독소 또는 탄수화물의 더 큰 부착성을 제공할 수 있다. 일부 양상에서, 선택된 불변 부위 도메인으로부터 유래된 특정 서열을 삽입 또는 복제하는 것이 바람직할 수 있다.
본 명세서에 기재된 방법, 조합물 및 키트는 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, 뮤린, 키메라, 인간화된 또는 인간 항체, 또는 이의 항원 결합 단편)과 실질적으로 상동성인 변이체 및 등가물을 포괄한다. 이들은, 예를 들어 보존적 치환 돌연변이, 즉, 유사한 아미노산에 의한 하나 이상의 아미노산의 치환을 함유할 수 있다. 예를 들어, 보존적 치환은 아미노산을 동일한 일반 부류 내의 다른 아미노산으로 치환하는 것, 예를 들어 하나의 산성 아미노산을 다른 산성 아미노산으로, 하나의 염기성 아미노산을 다른 염기성 아미노산으로, 또는 하나의 중성 아미노산을 다른 중성 아미노산으로 치환하는 것을 의미한다. 보존적 아미노산 치환이 의미하는 바는 당업계에 잘 알려져 있다.
일부 양상에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 보통은 이러한 단백질의 일부분이 아닌 추가적인 화학적 모이어티를 포함하도록 더 변형될 수 있다. 이러한 유도체화된 모이어티는 이러한 단백질의 용해도, 생물학적 반감기 또는 흡수성을 향상시킬 수 있다. 또한, 이러한 모이어티는 이러한 단백질 등의 임의의 바람직한 부작용을 감소시키거나 제거할 수 있다. 이러한 모이어티에 대한 개요는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 22nd ed., Ed. Lloyd V. Allen, Jr. (2012)]에서 찾을 수 있다.
정의
다음의 정의는 특히 상기 국소이성질화효소 I 저해제의 설명에 관한 것으로, 더욱 특별하게는 "추가 바람직한 예"라는 표제 부문에 관한 것일 수 있다.
C5-6 아릴렌: 본 명세서에서 사용되는 용어 "C5-6 아릴렌"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거하여 수득되는 2가 모이어티에 관한 것이다.
이러한 맥락에서, 접두사(예를 들어, C5-6)는 탄소 원자이든 헤테로원자이든, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자 수의 범위를 나타낸다.
고리 원자는 "카보아릴렌기"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있고, 이 경우 기는 페닐렌(C6)이다.
대안적으로, 고리 원자는 "헤테로아릴렌기"에서와 같이, 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 헤테로아릴렌기의 예는 하기로부터 유래된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다:
N1: 피롤(아졸)(C5), 피리딘(아진)(C6);
O1: 퓨란(옥솔)(C5);
S1: 티오펜(티올)(C5);
N1O1: 옥사졸(C5), 이소옥사졸(C5), 이소옥사진(C6);
N2O1: 옥사다이아졸(퓨라잔)(C5);
N3O1: 옥사트라이아졸(C5);
N1S1: 티아졸(C5), 이소티아졸(C5);
N2: 이미다졸(1,3-다이아졸)(C5), 피라졸(1,2-다이아졸)(C5), 피리다진(1,2-다이아진)(C6), 피리미딘(1,3-다이아진)(C6)(예를 들어, 사이토신, 티민, 유라실), 피라진(1,4-다이아진)(C6); 및
N3: 트라이아졸(C5), 트라이아진(C6).
C1-4 알킬: 본 명세서에서 사용되는 용어 "C1-4 알킬"은, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화(예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "C1-n 알킬"은, 1 내지 n개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화(예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)일 수 있다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에서 논의되는 하위 부류인 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 등을 포함한다.
포화 알킬기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), 프로필(C3) 및 부틸(C4)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
포화 선형 알킬기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), n-프로필(C3) 및 n-부틸(C4)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
포화 분지 알킬기의 예는 이소-프로필(C3), 이소-부틸(C4), sec-부틸(C4) 및 tert-부틸(C4)을 포함한다.
C2-4 알케닐: 본 명세서에서 사용되는 용어 "C2-4 알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알케닐기의 예는 에테닐(비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CH-CH3), 2-프로페닐(알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐(1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2) 및 부테닐(C4)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
C2-4 알킨일: 본 명세서에서 사용되는 용어 "C2-4 알키닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알키닐기의 예는 에티닐(-C≡CH) 및 2-프로피닐(프로파길, -CH2-C≡CH)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
C3-4 사이클로알킬: 본 명세서에서 사용되는 용어 "C3-4 사이클로알킬"은 사이클릴기이기도 한 알킬기에 관한 것으로; 즉, 사이클릭 탄화수소(카보사이클릭) 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티이고, 모이어티는 3 내지 7개의 고리 원자를 포함하는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다.
사이클로알킬기의 예는 하기로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
포화 단환식 탄화수소 화합물:
사이클로프로판(C3) 및 사이클로부탄(C4); 및
불포화 단환식 탄화수소 화합물:
사이클로프로펜(C3) 및 사이클로부텐(C4).
연결 표시: 화학식 에서, 위첨자 표시 C(=O) 및 NH는 원자가 결합되는 기를 나타낸다. 예를 들어, NH 기는 (예시된 모이어티의 일부가 아닌) 카르보닐에 결합되는 것으로 표시되고, 카르보닐은 (예시된 모이어티의 일부가 아닌) NH기에 결합되는 것으로 표시된다.
염
활성 화합물/제제의 상응하는 염, 예를 들어 약제학적으로 허용 가능한 염을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염의 예는 문헌[Berge, et al., J.　Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)]에 논의되어 있다.
예를 들어, 화합물이 음이온성이거나, 음이온성일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예를 들어, -COOH는 -COO-일 수 있음), 적합한 양이온을 사용하여 염이 형성될 수 있다. 적합한 무기 양이온의 예는 Na+ 및 K+와 같은 알칼리 금속 이온, Ca2+ 및 Mg2+와 같은 알칼리토류 양이온, 및 Al+3과 같은 기타 양이온을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 유기 양이온의 예는 암모늄 이온(즉, NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온(예를 들어, NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 적합한 치환된 암모늄 이온의 예는 에틸아민, 다이에틸아민, 다이사이클로헥실아민, 트라이에틸아민, 부틸아민, 에틸렌다이아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민 및 트로메타민뿐만 아니라 아미노산, 예컨대, 라이신 및 아르기닌으로부터 유래된 것들이다. 일반적인 4차 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온성이거나, 양이온성일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예를 들어, -NH2는 -NH3 +일 수 있음), 적합한 음이온을 사용하여 염이 형성될 수 있다. 적합한 무기 음이온의 예는 다음의 무기산으로부터 유래된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아인산.
적합한 유기 음이온의 예는 하기 유기산으로부터 유래된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 2-아세틸옥시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캄포르설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루셉톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 하이드록시말레산, 하이드록시나프탈렌 카복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 뮤신산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산, 트라이플루오로아세트산 및 발레르산. 적합한 고분자 유기 음이온의 예는 탄닌산, 카르복시메틸 셀룰로스와 같은 고분자 산으로부터 유래된 것들을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용매화물
활성 화합물의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 용질(예를 들어, 활성 화합물, 활성 화합물의 염)과 용매의 복합체를 지칭하는 통상적인 의미로 본 명세서에서 사용된다. 용매가 물인 경우, 용매화물은 편의상 수화물, 예를 들어 일수화물, 이수화물, 삼수화물 등으로 지칭될 수 있다.
이성질체
본 개시내용의 특정 화합물/제제는 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t- 및 r-형태; 엔도- 및 엑소-형태; R-, S- 및 메소-형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 에놀- 및 에놀레이트-형태; syn- 및 안티-형태; 향사- 및 배사-형태; α- 및 β-형태; 축상 및 수평방향 형태; 보트-, 의자-, 꼬임-, 봉투- 및 반의자-형태; 및 이들의 조합을 포함하는(이들로 제한되지 않음), 하나 이상의 특정한 기하, 광학, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 에피머, 아트로프, 입체이성질체, 호변이성질체, 배좌 또는 아노머 형태로 존재할 수 있고, 이하에서는 통칭하여 "이성질체"(또는 "이성질체 형태")로 지칭한다.
용어 "키랄"은 거울상 상대의 중첩할 수 없는 성질을 갖는 분자를 지칭하고, 반면, 용어 "비키랄"은 거울상 상대에 중첩될 수 있는 분자를 지칭한다.
용어 "입체이성질체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 공간 내의 원자 또는 기의 배열에 있어서 상이한 화합물을 지칭한다.
"부분입체이성질체"는 2개 이상의 키랄 중심을 갖고 분자가 서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성체는 융점, 비등점, 분광 특성 및 반응성과 같은 물리적 성질이 다르다. 부분입체이성질체의 혼합물은 고해상도 분석 절차, 예컨대 전기영동 및 크로마토그래피로 분리될 수 있다.
"거울상이성질체"는 서로 중첩되지 않는 거울상인, 화합물의 2개의 입체이성질체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 입체화학적 정의 및 관례는 일반적으로 문헌[S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 및 Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]에 따른 것이다. 본 개시내용의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 포함할 수 있으므로, 서로 다른 입체이성체 형태로 존재한다. 본 개시내용의 화합물의 모든 입체이성체 형태(부분입체이성체, 거울상이성체, 및 회전장애이성체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않음) 뿐만 아니라, 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물도 본 개시내용의 일부를 형성하는 것으로 의도된다. 많은 유기 화합물은 광학적으로 활성인 형태로 존재하는데, 즉 이들은 평면-편광의 평면을 회전시킬 수 있는 능력을 갖는다. 광학적으로 활성인 화합물을 설명함에 있어서, 이의 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 배열을 나타내기 위해 접두사 D 및 L, 또는 R 및 S가 사용된다. 화합물에 의한 평면-편광 회전의 부호를 나타내기 위해 접두사 d 및 I 또는 (+) 및 (-)가 사용되며, (-) 또는 I는 화합물이 좌선성임을 의미한다. (+) 또는 d가 접두사로 붙은 화합물은 우선성이다. 제시된 화학 구조에 있어서, 이러한 입체이성질체는 서로 거울상이라는 점을 제외하면 동일하다. 특정 입체이성질체는 또한 거울상이성질체로서 지칭될 수 있고, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상이성질체 혼합물로 불린다. 거울상이성질체의 50:50 혼합물은 화학 반응 또는 과정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우에 발생할 수 있는 라세미 혼합물 또는 라세미체로 지칭된다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학적 활성이 없는, 2개의 거울상이성질체 종의 등몰 혼합물을 지칭한다.
"거울상이성질체 풍부 형태"는 거울상이성질체 비율이 50:50 초과 100:0 미만인 키랄 물질의 샘플을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 호변이성질체 형태에 대해 이하에 논의되는 것을 제외하고는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "이성질체"로부터 구체적으로 구조(또는 구성) 이성질체(즉, 단지 공간내 원자의 위치가 아닌 원자들 간의 연결이 상이한 이성질체)는 제외된다. 예를 들어, 메톡시기 -OCH3에 대한 언급은 이의 구조 이성체인 하이드록시메틸기 -CH2OH에 대한 언급으로 해석되어서는 안 된다. 마찬가지로, 오르토-클로로페닐에 대한 언급은 이의 구조 이성질체인 메타-클로로페닐에 대한 언급으로 해석되어서는 안 된다. 그러나, 구조 부류를 언급할 경우, 해당 부류에 속하는 구조 이성질체 형태를 적절히 포함할 수 있다(예를 들어, C1-7 알킬은 n-프로필 및 이소-프로필을 포함하며; 부틸은 n-, 이소-, sec- 및 tert-부틸을 포함하고; 메톡시페닐은 오르토-, 메타- 및 파라-메톡시페닐을 포함한다).
상기 제외는 예를 들어, 다음 호변이성질체 쌍에서와 같은 호변이성체 형태, 예를 들어 케토-, 에놀- 및 에놀레이트-형태에 적용되지 않는다: 케토/에놀(아래에 설명됨), 이민/엔아민, 아미드/이미노 알코올, 아미딘/엔다이아민, 니트로소/옥심, 티오케톤/엔티올, N-니트로소/히드록시아조 및 니트로/아시-니트로.
용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환될 수 있는 상이한 에너지를 갖는 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변이성질체(양성자 이전성 호변이성질체로도 알려져 있음)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 원자가 호변이성질체는 결합 전자 중 일부 전자의 재편성에 의한 상호전환을 포함한다.
용어 "이성질체"에 하나 이상의 동위원소 치환을 갖는 화합물이 구체적으로 포함된다는 점에 주의한다. 예를 들어, H는 1H, 2H(D) 및 3H(T)를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있고; C는 12C, 13C 및 14C를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있으며; O는 16O 및 18O를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있다.
본 개시내용의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소, 및 요오드의 동위원소, 예컨대 2H(중수소, D), 3H(삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl 및 125I를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용의 다양한 동위원소 표지 화합물은, 예를 들어, 3H, 13C 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 화합물이다. 이러한 동위원소 표지 화합물은 대사 연구, 반응 동력학 연구, 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 포함하여 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영(SPECT)과 같은 검출 또는 이미징 기법, 또는 환자의 방사선 치료에 유용할 수 있다. 본 개시내용의 중수소 표지되거나 치환된 치료 화합물은 분포, 대사, 및 배설(ADME)과 관련하여, 개선된 DMPK(약물 대사 및 약동학) 특성을 가질 수 있다. 중수소와 같은 보다 무거운 동위원소에 의한 치환은 보다 큰 대사 안정성으로 얻어지는 특정 치료적 이점(예를 들어, 생체 내 반감기 증가 또는 필요 투약량 감소)을 제공할 수 있다. 18F로 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 유용할 수 있다. 본 개시내용의 동위원소 표지 화합물 및 이의 프로드럭은 일반적으로 동위원소 비표지 시약을 용이하게 입수할 수 있는 동위원소 표지 시약으로 대체함으로써 하기 기재된 반응식 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행하여 제조될 수 있다. 또한, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소(즉, 2H 또는 D)에 의한 치환은 보다 더 큰 대사 안정성으로 얻어지는 특정 치료적 이점, 예를 들어 생체 내 반감기의 증가 또는 투약 요건의 감소 또는 치료지수의 개선을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 치환기로 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본 개시내용의 화합물에서 특정 동위원소로 구체적으로 지정되지 않은 임의의 원자는 그 원자의 임의의 안정한 동위원소를 나타내는 것으로 의도된다.
달리 명시되지 않는 한, 특정 화합물에 대한 언급은 (전체적으로 또는 부분적으로) 라세미 및 이의 다른 혼합물을 포함하는 상기 모든 이성질체 형태를 포함한다. 상기 이성질체 형태의 제조방법(예를 들어, 비대칭 합성) 및 분리 방법(예를 들어, 분별 결정화 및 크로마토그래피 방식)은 당업계에 공지되어 있거나, 본 명세서에 교시된 방법 또는 공지된 방법을 공지된 방식으로 적용함으로써 용이하게 수득된다.
PARP1 저해제
일부 양상에서, 본 명세서에 기재된 ADC는 PARP1((폴리(ADP-리보스) 중합효소 1)의 저해제와 병용하여 투여된다. 일부 양상에서, PARP1의 저해제는 AZD5305이다. "저해하다", "저해" 또는 "저해하는"이라는 표현은 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 감소를 포함한다.
용어 "AZD5305"는 화학명이 5-[4-[(7-에틸-6-옥소-5H-1,5-나프티리딘-3-일)메틸]피페라진-1-일]-N-메틸-피리딘-2-카르복스아미드이고,
하기에 도시된 구조를 갖는 화합물을 지칭한다:
.
AZD5305의 제조는 미국 특허 공개 US 2021/0040084 A1에 개시되고, 이의 개시내용은 전문이 참조에 의해 원용된다. 일부 양상에서, AZD5305의 유리 염기가 대상체에게 투여된다. 일부 양상에서, AZD5305의 약제학적으로 허용가능한 염이 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 결정질 AZD5305가 대상체에게 투여된다. 일부 양상에서, 결정질 형태 A AZD5305가 대상체에게 투여된다.
AZD5305를 포함하는 "약제학적 조성물"은 활성 성분 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 포함하되, 활성 성분은 AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다.
ATR 저해제
일부 양상에서, 본 명세서에 기재된 ADC는 ATR의 저해제(FRAP-관련 단백질 1; FRP1; MEC1; SCKL; SECKL1R로도 알려짐)와 병용하여 투여된다. 일부 양상에서, ATR의 저해제는 AZD6738이다. "저해하다", "저해" 또는 "저해하는"이라는 표현은 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 감소를 포함한다.
용어 "AZD6738"은 ATR(FRAP-관련 단백질 1; FRP1; MEC1; SCKL; SECKL1R)저해제, 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)사이클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘을 지칭하며; 하기 화학식 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 표시된다:
ATR 저해제의 추가 예는 미국 특허 제8,252,802호에서 찾을 수 있으며, 이는 본 명세서에 모든 목적을 위해 이의 전문이 참조에 의해 원용된다.
AZD6738을 포함하는 "약제학적 조성물"은 활성 성분 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 포함하되, 활성 성분은 AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다.
조합물
본 개시내용은 암 치료를 위한 ADC와 PARP1 저해제 또는 암 치료를 위한 ADCdhk ATR 저해제의 조합물을 추가로 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료를 위해, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) PARP1(폴리(ADP-리보스) 중합효소 1) 저해제의 조합물을 제공한다. 일부 양상에서, 본 개시내용은 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료를 위해, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) ATR 저해제의 조합물을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료를 위해, A) i. B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 조합물을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료를 위해, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 조합물을 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료를 위해, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, ADC; 및 B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 조합물을 제공한다.
본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, 치료될 암은 본 명세서에 기재된 바와 같은 암이다. 일부 양상에서, 암은 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 암은 난소암이다. 유방암을 치료하기 위한 방법의 일부 양상에서, 유방암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암 또는 삼중 음성 유방암(TNBC)이다. 일부 양상에서, 유방암은 TNBC이다.
일부 양상에서, 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암이다. 일부 양상에서, 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택된 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함한다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택된다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA1이다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 BRCA2이다. 일부 양상에서, 돌연변이된 HRD 유전자는 ATM이다.
본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 가질 수 있다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 링커를 가질 수 있다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 세포독성제를 가질 수 있다.
본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 SG3932, SG4010, SG4057, SG4052 또는 이들의 조합물과 접합된 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 SG3932와 접합된 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 링커-세포독성제 분자 SG3932, SG4010, SG4057 및 SG4052는 본 명세서의 다른 곳에 기재되어 있다.
키트
일 양상에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 ADC 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 PARP1 저해제를 포함하는 키트가 제공된다. 일 양상에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 ADC 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 ATR 저해제를 포함하는 키트가 제공된다. 본 개시내용의 방법에서 상기 키트의 사용이 추가로 포함된다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 키트를 제공한다.
일부 양상에서, 본 개시내용은, A) i. a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체; b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는 e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; ii. 절단 가능한 링커, 및 iii. 세포독성제를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC); 및 B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 키트를 제공한다.
본 명세서에 제공된 키트의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 가질 수 있다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 링커를 가질 수 있다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 세포독성제를 가질 수 있다.
본 명세서에 제공된 키트의 일부 양상에서, ADC는 SG3932, SG4010, SG4057, SG4052 또는 이들의 조합물과 접합된 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 명세서에 제공된 조합물의 일부 양상에서, ADC는 SG3932와 접합된 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 링커-세포독성제 분자 SG3932, SG4010, SG4057 및 SG4052는 본 명세서의 다른 곳에 기재되어 있다.
일부 양상에서, 키트는 본 명세서에 기재된 바와 같은 단리된(예를 들어, 정제된) 항원 또는 항체 결합 단편을 포함한다. 일부 양상에서, 키트는 본 명세서에 기재된 바와 같은 단리된(예를 들어, 정제된) ADC를 포함한다. 일부 양상에서, 키트는 하나 이상의 용기를 포함한다. 키트는 항원 또는 항체 결합 단편 및 링커 및/또는 세포독성제를 개별적으로 제공할 수 있고(예를 들어, 제제는 항원 또는 항체 결합 단편에 접합되지 않지만, 이에 대한 접합에 적합한 형태임); 선택적으로 키트에는 제제를 항원 또는 항체 결합 단편에 접합시키기 위한 지침 및/또는 시약이 추가로 제공된다. 일부 양상에서, 키트는 ADC와 PARP1 저해제의 조합물을 대상체에게 투여하는 데 필요하고/하거나 충분한 모든 구성성분을 포함한다. 일부 양상에서, 키트는 ADC와 PARP1 저해제의 조합물을 대상체에게 투여하는 데 필요하고/하거나 충분한 모든 지침을 포함한다.
실시예
본 명세서에 개시된 병용 요법은 이제 하기 비제한적인 실시예를 참고하여 추가로 설명할 것이다.
실시예 1 - B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-BRCA WT 세포를 이용한 세포독성 분석
B7-H4를 발현시키는 사멸 DLD-1-BRCA 야생형(WT) 세포의 조합된 B7-H4-TOP1i ADC(E02-GL-SG3932) 및 PARP1 선택적 저해제(AZD5305) 요법 효능을 결정하기 위해, 세포독성 분석을 수행하였다. B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-BRCA WT 세포(Horizon Discovery)를 10% 열-비활성화 FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 1,000개 세포/웰의 파종 밀도로 96-웰 플레이트에서 플레이팅하였다. 다음 날, 세포를 증가된 농도의 E02-GL-SG3932, 즉, 아이소타입-매칭 대조군 ADC(0.003052 내지 200nM) 또는 AZD5305(0.4 내지 10 μM)로 개별적으로 또는 조합하여 처리하였다. 세포를 처리 후 7일 동안 인큐베이션시켰고, 존재하는 아데노신 삼인산염(ATP)의 양에 기반하여 세포 생존도를 정량화하는 CellTiter-Glo 분석(Promega)을 사용하여 세포생존도를 측정하였다. 결과는 각각의 증가된 농도에서, 조합된 E02-GL-SG3932와 AZD5305 치료가 다른 치료: E02-GL-SG3932 개개, AZD5305 개개, 아이소타입-매칭 대조군 ADC, 및 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 AZD5305보다 더 빠른 속도로 B7-H4를 발현시키는 더 많은 WT 세포를 사멸시켰다는 것을 나타낸다(도 1).
2-약물 병용 효과와 약리학적 상승작용(Bliss 점수 > 0) 또는 E02-GL-SG3932 ADC와 조합한 AZD5305의 길항적(Bliss 점수 < 0) 반응을 추정하기 위해 Bliss 상승작용 모델을 사용하였고, Combenefit 소프트웨어(Cancer Research UK Cambridge Institute)를 사용하여 결정하였다. 문헌[Veroli et al Bioinformatics. 2016 Sep 15; 32(18): 2866-2868]. 도 2에 나타낸 바와 같이, 조합 치료에서의 증가된 투약량은 10 보다 더 큰 Bliss 에너지 점수를 초래하였고(청색), 이는 증가된 투약량에서 E02-GL-SG3932와 AZD5305 사이의 치료 상승작용을 나타낸다.
실시예 2 - B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포를 이용한 세포독성 분석
B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포를 사용하여 사멸 표적 세포에서의 조합 E02-GL-SG3932와 AZD5305 치료의 효능을 평가하였다. DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포는 종양 억제자로서 작용하는 단백질을 제조하기 위한 지침을 제공하는 BRCA2 유전자를 결여한다. B7-H4를 발현시키도록 조작된 DLD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포(Horizon Discovery)를 10% 열-비활성화 FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 1,000개 세포/웰의 파종 밀도로 96-웰 플레이트에서 플레이팅하였다. 다음 날, 세포를 증가된 농도의 E02-GL-SG3932, 즉, 아이소타입-매칭 대조군 ADC(0.0001 내지 6.7nM) 또는 AZD5305(0.04 내지 1nM)로 개별적으로 또는 조합하여 처리하였다. 세포를 처리 후 7일 동안 인큐베이션시켰고, CellTiter-Glo 분석(Promega)을 사용하여 세포생존도를 측정하였다. 도 3에서 알 수 있는 바와 같이, 1 nM 조합 치료는 E02-GL-SG3932 개개, AZD5305 개개, 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 AZD5305의 다른 치료보다 더 빠른 속도로 B7-H4를 발현시키는 더 많은 LD-1-XMAN-BRCA2-/- 세포를 사멸시켰다.
2-약물 병용 효과와 약리학적 상승작용(Bliss 점수 > 0) 또는 E02-GL-SG3932 ADC와 조합한 AZD5305의 길항적(Bliss 점수 < 0) 반응을 추정하기 위해 Bliss 상승작용 모델을 사용하였고, Combenefit 소프트웨어(Cancer Research UK Cambridge Institute)를 사용하여 결정하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, AZD5305(0.04 nM, 0.2 nM 및 1nM)와 조합한 E02-GL-SG3932(0.02 nM)의 투약량은 10보다 큰 Bliss 에너지 점수를 초래하였고(청색), 이는 E02-GL-SG3932와 AZD5305 사이의 치료 상승작용을 나타낸다.
실시예 3 - B7-H4를 발현시키도록 조작된 MX-1 세포를 이용한 세포독성 분석
유방 암종 조직의 MX-1 종양 이종이식 모델로부터의 시험관내 배양물을 사용하여 사멸 표적 세포에서의 조합 E02-GL-SG3932와 AZD5305 치료의 효능을 평가하였기 때문에 MX-1 세포를 확립하였다. 10% 열-비활성화 FBS를 함유하는 DMEM 배지에서 1,500개 세포/웰의 파종 밀도로 MX-1 세포를 96-웰 플레이트에서 플레이팅하였다. 다음 날, 세포를 증가된 농도의 E02-GL-SG3932, 즉, 아이소타입-매칭 대조군 ADC (0.001 내지 400 nM) 또는 AZD5305(0.2 또는 1nM)로 개별적으로 또는 조합하여 처리하였다. 세포를 처리 후 7일 동안 인큐베이션시켰고, CellTiter-Glo 분석(Promega)을 사용하여 세포생존도를 측정하였다. 도 5는 0.2 nM 및 1 nM 농도의 조합 E02-GL-SG3932 및 AZD5305 치료가 E02-GL-SG3932 개개, AZD5305 개개, 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 AZD5305의 다른 치료보다 더 많은 양으로 MX-1 세포를 사멸시키는 능력을 나타낸다.
2-약물 병용 효과와 약리학적 상승작용(Bliss 점수 > 0) 또는 E02-GL-SG3932 ADC와 조합한 AZD5305의 길항적(Bliss 점수 < 0) 반응을 추정하기 위해 Bliss 상승작용 모델을 사용하였고, Combenefit 소프트웨어(Cancer Research UK Cambridge Institute)를 사용하여 결정하였다. 도 6은 AZD5305(1nM)와 조합한 E02-GL-SG3932(0.128 내지 3.2 nM 및 400 nM)의 투약량이 16 이하이고 10보다 큰 Bliss 에너지 점수를 초래하였고(청색), 이것이 이러한 조합에서 E02-GL-SG3932와 AZD5305 간의 치료 상승작용을 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 4 - MDA-MB-468 유방암 이종이식 모델
인간 에스트로겐-독립적 MDA-MB-468 유방암의 이종이식편을 보유하는 마우스에서 E02-GL-SG3932와 AZD5305 치료의 항-종양 효능을 측정하기 위한 생체내 실험을 수행하였다. MDA-MB-468 세포를 암컷 CB-17 SCID 마우스의 유방 지방 패드에 마우스당 5×106개로 주사하였다. 종양이 평균 150 내지 200 ㎣에 도달되었을 때 아이소타입-ADC, E02-GL-SG3932, AZD5305, 또는 조합물의 투약을 개시하였다. 아이소타입 대조군 ADC 및 E02-GL-SG3932를 1일차에만 단일 IV 꼬리 정맥 주사로 투여하고, 병용 연구를 위해, 28일 동안 AZD5305의 1일 1회 경구 투여로 이 주사가 이어졌다. 연구 지속기간 동안 1주 2회 종양 및 체중 측정을 기록하였다. 비히클(대조군), AZD5305 개개(0.1 ㎎/㎏ 및 1㎎/㎏), 아이소타입-매칭 대조군 ADC(0.5 ㎎/㎏), 아이소타입-매칭 대조군 ADC 및 AZD5305(1㎎/㎏), 및 E02-GL-SG3932 개개(0.1 ㎎/㎏ 및 1㎎/㎏)로 처리한 마우스에서 시간에 따라서 측정한 종양은 크기가 증가되거나 유지되었는데, 이는 이러한 치료 방법이 생체내에서 항-종양 활성의 거의 내지 전혀 나타내지 않는다는 것을 나타낸다(도 7).
E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏) 및 AZD5305(0.1 ㎎/㎏), 및 E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏) 및 AZD5305(1㎎/㎏) 치료는 높은 항-종양 활성을 나타냈다. 도 8에 나타낸 바와 같이, E02-GL-SG3932와 AZD5305의 조합 치료는 마우스에서 대략 67%의 종양의 성장을 저해하는 데 효과적이었다. 마우스에서 다양한 치료 조합 효능의 추가적인 비교 분석을 도 9에 나타낸다. E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏)와 AZD5305(0.1 ㎎/㎏), 및 E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏)와 AZD5305(1㎎/㎏)로 처리한 마우스에서의 평균 종양 용적은 다른 치료 방법의 평균 종양 용적보다 유의미하게 더 작았다.
실시예 5 - MDA-MB-468 유방암 이종이식 모델
인간 에스트로겐-독립적 MDA-MB-468 유방암의 이종이식편을 보유하는 마우스에서 E02-GL-SG3932와 AZD6738 치료의 항-종양 효능을 측정하기 위한 생체내 실험을 수행하였다. MDA-MB-468 세포를 암컷 CB-17 SCID 마우스의 유방 지방 패드에 마우스당 5×106개로 주사하였다. 아이소타입 대조군 ADC 및 E02-GL-SG3932를 1일차에만 단일 IV 꼬리 정맥 주사로 투여하고, 병용 연구를 위해, 14일 동안 AZD6738의 1일 2회(BID) 경구 투여로 이 주사가 이어졌다. 연구 지속기간 동안 1주 2회 종양 및 체중 측정을 기록하였다. 비치료(대조군), AZD6738 개개(25 ㎎/㎏), 아이소타입-매칭 대조군 ADC(0.5 ㎎/㎏), E02-GL-SG3932 개개(0.5 ㎎/㎏), 및E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏) 및 AZD6738 (25 ㎎/㎏)로 처리한 마우스에서 시간에 따라 측정한 종양을 도 10에 나타낸다.
도 10에 나타낸 바와 같이, E02-GL-SG3932와 AZD6738의 조합 치료는 마우스의 종양 성장을 추가로 저해하는 데 효과적이었다. E02-GL-SG3932(0.5 ㎎/㎏)와 AZD6738(25 ㎎/㎏)로 처리한 마우스의 평균 종양 용적은 다른 치료 방법의 평균 종양 용적보다 유의미하게 더 작았다.
실시예 6 - PARP1-선택적 저해제와 조합한 B7-H4-지향 항체-약물 접합체의 전임상 평가
본 연구는 전임상 모델에서 폴리-ADP 리보스 중합효소 1(PARP1)-선택적 저해제 AZD5305와 조합한 신규한 국소이성질화효소 I 저해제(TOP1i) 페이로드를 보유하는 B7-H4-지향 항체-약물 접합체(ADC)인 E02-GL-SG3932의 활성을 평가하였다. 인간 종양에서의 B7-H4 출현율 및 종양내 이질성 평가의 종합적 분석을 수행하였다. E02-GL-SG3932 치료에 대한 차세대 PARP1-선택적 저해제 AZD5305의 첨가는 PARP 저해에 저항성인 후천적 또는 선천적 메커니즘을 나타내는 상동성-복구(homologous-proficient) 모델을 포함하여, 낮은 B7-H4-발현 PDX 종양을 감작시켰다. 이러한 결과는 PARP 저해제로 이미 치료된 적이 있는 대상체 및 PARP 저해제에 의한 치료에 저항성인 대상체에서조차 항-B7H4 ADC와 PARP 저해제의 조합물의 실행을 뒷받침한다.
재료 및 방법
항체
SKBR3 세포와 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌에 화학적으로 접합된 마우스 B7-H4 세포외 도메인에 의한 교번의 면역화에 의해 VelocImmune V2 마우스에서 인간 B7-H4를 표적화하는 항체를 생성하였다. 인간 및 사이노몰거스 원숭이 B7-H4에 대한 특이성 및 교차 반응성에 기반하여 리드 항체를 선택하였고, 항체 프레임워크를 가장 가까운 인간 생식계열로 돌연변이시켰다.
세포주
HT29 및 MDA-MB-468 세포를 각각 독일생물자원센터(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, GmbH)(독일 브라운슈바이크 소재) 및 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection)(미국 메릴랜드주 록빌 소재)로부터 얻었고, 10% 열-비활성화 소 태아 혈청(FBS)(Thermo Fisher Scientific, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)을 함유하는 RPMI 1640 배지에서 배양시켰다. MX-1 세포를 미국 국립 암 연구소(National Cancer Institute)(미국 메릴랜드주 베세즈다 소재)로부터 얻었고, 10% FBS 및 2 mM L-글루타민을 함유하는 둘베코 변형 필수/F12 배지(Thermo Fisher Scientific)에서 배양시켰다. 인간 B7-H4(HT29-huB7-H4)를 안정적으로 발현시키는 HT29 클론 세포주를 pPACK H1 HIV 렌티벡터 패키징 키트(System Biosciences, 미국 캘리포니아주 팔로알토 소재)로 제조한 렌티바이러스 발현 벡터에 의해 생성한 후에, 형질도입, 게네티신 선택 및 항-B7-H4-PE 항체(US Biological, 미국 매사추세츠주 세일럼 소재)로 직접 염색을 통해 형광-활성화 세포 분류에 의한 단리가 이어졌다. 모든 세포주를 37℃의 온도에서 5% CO2의 습한 분위기하에 배양시켰고, 짧은 탠덤 반복부 DNA 프로파일링(IDEXX BioResearch Laboratories, 미국 미주리주 컬럼비아 소재)에 의해 입증되었고, 중합효소 연쇄 반응 및 MycoSEQ 마이코플라스마 검출 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)에 의해 마이코플라스마(Mycoplasma)에 대해 음성인 것이 발견되었다.
면역조직화학
자동 Leica Bond RX IHC 염색 플랫폼(Leica Biosystems, Nussloch, 독일 소재)에 의해 4-㎛ 포르말린-고정, 파라핀-포매 종양 또는 조직 절편 상에서 B7-H4의 면역조직화학(IHC) 검출을 수행하였다. 인간 정상 및 종양 조직 절편을 항-인간 B7-H4 마우스 면역글로불린 G1(IgG1)(클론 ZY0EYT-D11; AstraZeneca, 영국 캠브리지 소재)로 염색하였고, 환자-유래 이종이식편(PDX)으로부터 유래된 종양 조직 절편을 항-인간 B7-H4 토끼 IgG1로 염색하였다. 다양한 알려진 B7-H4-발현 세포주, B7-H4 형질감염 세포주(HT29-huB7H4) 및 인간 유방 종양 조직(MX-1 및 MDA-MB-468)에 의한 IHC에서의 사용을 위해 항체를 둘 다 철저히 검증하여 특이성과 민감성을 보장하였다(표 1). B7-H4 음성 HT29 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다. 포르말린-고정, 파라핀-포매 세포 펠릿을 IHC에 의한 B7-H4 발현의 직교 분석을 위해 동일한 세포로부터 준비하였다. 커버를 덮고 장착한 후에, Leica Aperio Scanscope AT2 슬라이드 스캐너로 슬라이드를 스캔하고, 이어서, 병리학자가 검토하고 점수를 매겼다. B7-H4 수용체 밀도의 척도인 항체 결합 능력을 Bangs Laboratories로부터의 Quantum Simply Cellular 키트(Fisher, 미국 인디애나주 소재)를 이용한 정량적 유세포분석에 의해 측정하였다.
ADC의 제조
다양한 TOP1i 탄두는 PEG8 스페이서 유무와 상관없이 val-ala(VA) 또는 Gly-Gly-Phe-Gly(GGFG) 펩타이드 링커를 통해 항체의 천연 시스테인에 공유결합되어, 대략의 약물-대-항체비(DAR)가 8인 4개의 별개의 ADC를 생성하였다: SG3932, SG4057, SG4010 및 SG4052. 이러한 ADC의 제조는 또한 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된 WO2022053650에 기재되어 있다. 비슷한 DAR을 갖는 아이소타입-매칭 항체를 사용함으로써 동일한 방식으로 비표적화 아이소타입 대조군 ADC(Iso-ADC)를 합성하였다. E02-GL-SG3932 항체 약물 접합체는 SG3932 탄두에 접합된 E02-GL 항체이다.
PBS 및 1 mM 에틸렌다이아민테트라아세트산 및 10 ㎎/㎖의 최종 항체 농도를 함유하는 환원 완충제 중 E02-GL 항체(3.6 g, 24.0 마이크로몰)에 PBS 중 TCEP[트리스(2-카르복시에틸)포스핀]의 100 mM 용액을 첨가하였다(12.5 몰 당량/항체, 0.3 m㏖). 반응 혼합물을 오비탈 진탕기에서 가볍게(60 rpm) 진탕하면서 (또는 완전한 환원이 초고성능 액체 크로마토그래피[UPLC]에 의해 관찰될 때까지) 37℃에서 2시간 동안 가열하였다. 환원 항체를 인큐베이션으로부터 제거하였고, 실온으로 냉각시켰다. 이 혼합물에, SG3932, SG4057, SG4010 또는 SG4052 링커-페이로드를 10%(v/v) 최종 DMSO 농도를 위해 다이메틸 설폭사이드(DMSO) 용액(11 내지 14 몰 당량/항체, 26.4 내지 33.6 마이크로몰)으로서 첨가하였다. 용액을 1시간 동안 25℃에서 진탕시켰고, 이어서, 접합을 N-아세틸 시스테인(100 mM 저장액으로서 페이로드와 비교되는 5× 과량)으로 중단시켰다. 표면적이 375 ㎠인 MidiKros 30-kDa 섬유 필터인 mPES를 사용하여 접선 흐름 여과 장치를 통해 30 ㎜ 히스티딘, 30 mM 아르기닌, pH 6.8을 함유하는 완충액으로 과량의 유리 약물을 제거하였다. 유리 약물 제거 정도를 순수 접합체를 사용하여 UPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물의 완전한 제거 후에(11 내지 16 DV), 항체-약물 접합체(ADC)를 20 mM 히스티딘, 240 mM 수크로스, pH 6.0(5 DV)으로 제형화하고, 얻어진 ADC를 멸균 분위기 하에 0.22-㎛ 필터로 여과시켰다. 환원된 접합체를 이용하는 UPLC-RP에 의해 약물-대-항체비(DAR)를 계산하였고, 순수 접합체를 이용하는 UPLC-크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 단량체 순도를 측정하였다.
생체내 효능 연구
모든 동물 실험을 아스트라제네카 동물실험윤리위원회(AstraZeneca's Institutional Animal Care and Use Committee)의 가이드라인 및 적절한 동물 연구 승인하에서 국제실험동물관리평가인증협회(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care)에 의해 공인된 시설에서 수행하였다. 암컷 CB-17 마우스(Envigo, 미국 메릴랜드주 프레더릭 소재)의 우측 유방 지방 패드(MX-1, MDA-MB-468) 또는 좌측 옆구리(HT29, HT29-huB7-H4) 중 하나에서 50% Matrigel(Corning, Corning, 미국 뉴욕주 소재) 중 세포의 피하 이식을 통해 세포주 이종이식 모델을 확립하였다. 종양 용적이 150 내지 200 ㎣에 도달되었을 때, 마우스를 무작위화하고, 비히클 대조군(20 mM 히스티딘, pH 6; 240 mM 수크로스; 0.02% PS-80) 또는 ADC의 단일 정맥내(IV) 주사를 제공하였다. 체중 및 종양 측정을 1주 1회 또는 2회 결정하였고, 하기 식을 이용하여 종양 용적을 계산하였다
.
인간 TNBC의 PDX 모델을 무흉선 누드 마우스(Envigo, 프랑스 리옹 소재)의 옆구리에 종양 단편의 피하 이식을 통해 확립하였고, Xentech(Evry, France)에서 시험하였다. 동물을 종양 용적에 따라 매칭하였고, 이어서, 비히클 대조군 또는 ADC를 단일 IV 주사로서 투여하였다. 사용할 때, PARP1-선택적 저해제 AZD5305(AstraZeneca)를 물/HCl pH 3.5 내지 4 중에서 제형화하였고, 28일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 최종 용량 용적으로 경구 위관영양법에 의해 투여하였다. 항종양 활성을 마지막 날에 결정하였고, 이때에, 비치료 대조군의 모든 마우스는 연구에 남아있었다. 처리군의 최종 종양 용적(ETV)이 최초 종양 용적(ITV)보다 적다면, 하기 식을 사용함으로써 기준선으로부터의 항종양 반응을 그룹 평균으로부터 계산하였다:
.
다르게는, 항종양 반응을 치료 아암에서의 종양 용적의 변화 백분율 대 비치료 대조군 아암에서의 종양 용적의 변화 백분율로서 표현하였고, 하기 식으로 계산하였다:
.
약력학 및 약동학 연구를 위해, HT29 또는 HT29-huB7-H4 종양(250 내지 300 ㎣)을 보유하는 마우스에 비히클 대조군 또는 ADC의 단일 IV 주사를 투여하였다. 종양의 일부가 포르말린 중에 고정되고 IHC 분석을 위해 파라핀 블록에 포매시키고, 액체 크로마토그래피-질량분석법에 의해 총 단클론성 항체, ADC 및 자유 탄두의 분석을 위해 남아있는 부분을 순간 냉동시켰을 때, 표시된 시점에 혈장 및 종양 샘플을 수집하였다.
통계학적 분석
데이터를 평균±표준 편차 또는 평균±평균의 표준 오차로서 제시한다. PDX 모델에서 반응 대 비반응의 연관성을 평가하기 위해, R 통계학적 프로그래밍 환경(버전 4.1)에서 그룹 비교를 위한 Wilcoxon 검정을 수행하였다. P < 0.05는 통계학적으로 유의미한 것으로 간주하였다.
종양 조직에서의 B7-H4 발현 및 출현율
B7-H4는 여러 종양 유형에서 발현되었고, 자궁내막암종(94%), 담관암종(89%), 유방암(HER2+ 78%, TNBC 74%, ER+ 74%), 및 난소 암종(77%)에서 가장 일반적이었다(도 11a, 도 11b). 대조적으로, B7-H4는 제한된 수의 정상 인간 조직, 예컨대, 나팔관, 폐, 유방 및 전립선에서 검출되었고, 일반적으로 샘플의 전체 세포 중 10% 미만에서 발견되었으며, 유관 또는 관상피로 제한되었고, 주로 정점 내강막 상에 위치되었다(표 2).
ADC 활성에 영향을 미치는 중요한 인자인 개개 종양 내의 B7-H4 종양내 이질성을 이해하기 위해, 조직학적으로 주석이 달린 TNBC의 샘플(n = 196)의 별도의 수집물을 염색하고, 딥-러닝-기반 영상 분석 알고리즘을 사용하여 디지털 분석하고, 개개 종양 상피 세포를 검출하고 절편화하고, 각 세포막 상의 B7-H4 발현 수준을 정량화하였다. 이 접근은 세포당 기준으로 B7-H4 발현 분포의 연구를 가능하게 하였는데, 이는 코호트에 걸쳐 각 환자 샘플 내의 이질적 B7-H4 발현의 범위를 나타낸다(도 11c). B7-H4 발현 및 발현의 이질성은 약하게 상관관계가 있었다(r = -0.84, P < 0.01).
E02-GL-SG3932와 차세대 PARP1-선택적 저해제 AZD5305와의 조합
PARP1은 TOP1 절단 복합체의 절단 및 수선을 향상시킴으로써 TOP1i의 세포독성을 제한한다. 따라서, E02-GL-SG3932는 PARP 후 저항성 메커니즘을 포함한 BRCA WT 종양 및 모델을 포함한 HRP PDX 모델의 수집에서 차세대 PARP1-선택적 저해제인 AZD5305와의 조합물로 시험하였다. 높은 B7-H4-발현, BRCA WT HBCx-39 모델에서, AZD5305는 1.25 ㎎/㎏ E02-GL-SG3932의 단일, 차선 용량에 대해 종양을 감작시켜, E02-GL-SG3932 단일요법 아암에서 관찰된 24.5% TGI와 대조적으로 5마리의 마우스 중 5마리에서 종양 퇴행을 초래하였다(도 12a). 또한 더 고용량(3.5 ㎎/㎏)의 E02-GL-SG3932에 의해 조합 치료의 더 큰 활성이 관찰되어, 반응의 지속기간을 E02-GL-SG3932 단일요법의 지속기간보다 연장시켰다(도 12b). PARPi 저항성은 BRCA1 프로모터 메틸화를 통해 유발될 가능성이 있는 BRCA1-돌연변이체 HBCx-24 모델을 포함하는 다른 높은 B7-H4-발현 모델(도 12c) 및 BRCA1 저차형태이고 PARPi에 저항성인 HBCx-11 모델(도 12d)에서 유사한 결과가 얻어졌다. HBCx-39 및 HBCx-11에서 관찰된 조합 이점은, 이러한 모델이 BRCA WT(HBCx-39) 또는 PARPi-저항성 상황(HBCx-11)을 나타낼 뿐만 아니라 SLFN11 음성을 나타내기 때문에 흥미롭다. SLFN11 손실은 TOP1i와 PARPi 둘 다에 대한 제안된 저항성 바이오마커이기 때문에, 이러한 모델에서 관찰된 강력한 조합 활성은 예상치 못한 것이다. 또한 B7-H4 발현이 매우 낮고 PARPi에 저항성인 BRCA1-돌연변이체 HRP 모델인 HBCx-8로 조합 이익이 연장되었다는 것은 놀랍다(도 12e). 이 모델에서, 단일 용량의 1.25 ㎎/㎏ E02-GL-SG3932는 보통의 항종양 활성(32.9% TGI)을 제공한 반면, AZD5305와의 조합물은 5마리의 마우스 중 5마리에서 종양 퇴행을 제공하였다. ADC의 용량이 증가됨에 따라 개선된 활성이 관찰되었기 때문에 낮은 B7-H4-발현 BRCA WT 모델인 HBCx-2에서 유사한 조합 이익이 관찰되었다(도 12f).
DNA 손상 반응 경로의 약리학적 저해는 TOP1i-ADC에 대한 반응을 최대화하는 매력적인 접근이고, 더 큰 항종양 활성을 제공한다. 본 연구는 E02-GL-SG3932와 AZD5305의 조합을 평가하였고, 강력한 PARP1-선택적 저해제는 비-선택적 PARPi와 비교할 때 전임상 모델에서 감소된 혈액학적 독성을 입증한다. E02-GL-SG3932와 AZD5305의 조합은 단일요법보다 더 큰 항 종양 활성을 제공하여, 낮은 B7-H4 발현을 갖는 모델에서조차 더 큰 종양 퇴행 또는 개선된 반응의 지속기간을 초래하였다. 이 조합 이익은 낮은, 차선 용량의 E02-GL-SG3932에 의해서 뿐만 아니라 PARPi 저항성의 메커니즘을 나타내는 HRP BRCA1 WT 또는 BRCA1-돌연변이체 모델에 의해 관찰되었다. 이러한 결과는 이 조합이 PARPi-저항성 상황에서 효과적일 수 있다는 것과 이 메커니즘을 활용하기 위해 최대 ADC 활성을 달성할 필요는 없다는 것을 시사한다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (54)

  1. 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법으로서,
    A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate: ADC)
    i. 하기를 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    f) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
    g) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    h) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    i) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
    j) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    ii. 절단 가능한 링커;
    iii. 세포독성제; 및
    B) PARP1 저해제 또는 ATR 저해제인, 추가 제제
    를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추가 제제는 AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추가 제제는 AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함하는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 암은 B7-H4를 발현시키지 않는 암세포를 더 포함하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택되는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암 및 삼중 음성 유방암(TNBC)으로부터 선택되는 유방암인, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택된 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함하는, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 HRD 유전자의 돌연변이는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택되는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
    ii. 각각 서열번호 33 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
    iii. 각각 서열번호 43 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
    iv. 각각 서열번호 46 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
    v. 각각 서열번호 47 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 또는 이의 기능적 변이체;
    vi. 각각 서열번호 31 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체;
    vii. 각각 서열번호 35 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체.
    viii. 각각 서열번호 37 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
    ix. 각각 서열번호 39 및 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체
    를 포함하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    i. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 OVCAR4 세포주에 결합하는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  19. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체인, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화된 단클론성 항체인, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 절단 가능한 링커는 mp-PEG8-val-ala 링커인, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포독성제는 국소이성질화효소 저해제인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 국소이성질화효소 저해제는 하기 화학식 A*의 화합물인, 방법:
    .
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ii) 절단 가능한 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 하기 화합물로부터 선택된, 방법:

  26. 제25항에 있어서, 상기 ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 화합물 SG3932인, 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 1 내지 약 8의 약물 대 항체 비(drug to antibody ratio: DAR)를 갖는, 방법.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 8의 DAR을 갖는, 방법.
  29. 키트로서,
    A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
    i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
    b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
    e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    ii. 절단 가능한 링커;
    iii. 세포독성제; 및
    B) PARP1 저해제 또는 ATR 저해제인, 추가 제제
    를 포함하는, 키트.
  30. 제29항에 있어서, 상기 추가 제제는 AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 키트.
  31. 제29항에 있어서, 상기 추가 제제는 AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 키트.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    i. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 키트.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    i. 각각 서열번호 45 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 VL 쇄, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 키트.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 키트.
  35. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 키트.
  36. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 키트.
  37. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 키트.
  38. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 키트.
  39. 제29항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 절단 가능한 링커는 mp-PEG8-val-ala 링커인, 키트.
  40. 제29항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포독성제는 국소이성질화효소 저해제인, 키트.
  41. 제40항에 있어서, 상기 국소이성질화효소 저해제는 하기 화학식 A*의 화합물인, 키트:
    .
  42. 제29항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ii) 절단 가능한 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 하기 화합물로부터 선택된, 키트:

    .
  43. 제42항에 있어서, 상기 ii) 링커 및 iii) 세포독성제는 함께 화합물 SG3932인, 키트.
  44. 제29항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 1 내지 약 8의 약물 대 항체 비(DAR)를 갖는, 키트.
  45. 제29항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ADC는 약 8의 DAR을 갖는, 키트.
  46. 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법으로서,
    A) 하기 i 내지 iii을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
    i. 다음을 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
    b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
    e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 및
    ii. 하기 화학식을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합된 절단 가능한 링커 및 세포독성제:
    ; 및
    B) AZD5305 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염
    을 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  47. 암 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 암 치료 방법으로서,
    A) 하기 i 및 ii를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
    i. 하기를 포함하는 B7-H4 폴리펩타이드에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 중쇄 CDR3(HCDR3), 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3), 또는 이의 기능적 변이체;
    b) 각각 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    c) 각각 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체;
    d) 각각 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 또는
    e) 각각 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 또는 이의 기능적 변이체; 및
    ii. 하기 화학식을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합된 절단 가능한 링커 및 세포독성제:
    ; 및
    B) AZD6738 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염
    을 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  48. 제46항 또는 제47항에 있어서, 상기 암이 B7-H4를 발현시키는 암세포를 포함하는, 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 암은 B7-H4를 발현시키지 않는 암세포를 더 포함하는, 방법.
  50. 제46항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 혈액암, 자궁내막암, 담관암종, NSCLC(편평 및/또는 선암종), 위장암, 예컨대, 위암 및 결장직장암, 및 폐암으로부터 선택되는, 방법.
  51. 제46항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 호르몬 수용체-양성(HR+) 유방암, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성(HER2+) 유방암, 및 삼중 음성 유방암(TNBC)으로부터 선택되는 유방암인, 방법.
  52. 제46항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 상동성 재조합 결핍(HRD) 암인, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 암은 BRCA1, BRCA2, ATM, BRIP1, BARD1, CDK12, CHEK1, CHEK2, FANCL, PALB2, PPP2R2A, RAD51B, RAD51C, RAD51D 및 RAD54L로부터 선택되는 HRD 유전자에 돌연변이를 갖는 하나 이상의 세포를 포함하는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 HRD 유전자의 돌연변이는 BRCA1, BRCA2 및 ATM으로부터 선택되는, 방법.
KR1020247030173A 2022-02-16 2023-02-15 B7-h4 항체 약물 접합체를 포함하는 암 치료를 위한 병용요법 KR20240150781A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202263310967P 2022-02-16 2022-02-16
US63/310,967 2022-02-16
US202263378295P 2022-10-04 2022-10-04
US63/378,295 2022-10-04
PCT/EP2023/053720 WO2023156434A1 (en) 2022-02-16 2023-02-15 Combination therapies for treatment of cancer comprising b7-h4 antibody drug conjugate

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240150781A true KR20240150781A (ko) 2024-10-16

Family

ID=85283493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247030173A KR20240150781A (ko) 2022-02-16 2023-02-15 B7-h4 항체 약물 접합체를 포함하는 암 치료를 위한 병용요법

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20230310636A1 (ko)
KR (1) KR20240150781A (ko)
AU (1) AU2023221516A1 (ko)
CO (1) CO2024012148A2 (ko)
IL (1) IL314797A (ko)
MX (1) MX2024009972A (ko)
TW (1) TW202348252A (ko)
WO (1) WO2023156434A1 (ko)

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
DE3588239T3 (de) 1985-03-30 2007-03-08 Kauffman, Stuart A., Santa Fe Verfahren zum Erhalten von DNS, RNS, Peptiden, Polypeptiden oder Proteinen durch DMS-Rekombinant-Verfahren
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1990014443A1 (en) 1989-05-16 1990-11-29 Huse William D Co-expression of heteromeric receptors
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
ATE249840T1 (de) 1991-12-13 2003-10-15 Xoma Corp Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
US6696248B1 (en) 1995-08-18 2004-02-24 Morphosys Ag Protein/(poly)peptide libraries
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
EP1133565B1 (en) 1999-07-02 2010-09-22 MorphoSys AG Generation of specific binding partners binding to (poly)peptides encoded by genomic dna fragments or ests
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
SI1578446T1 (sl) 2002-11-07 2015-07-31 Immunogen, Inc. Protitelesa proti-cd33 in metoda za zdravljenje akutne mieloidne levkemije z uporabo istega
KR101270829B1 (ko) 2004-09-23 2013-06-07 제넨테크, 인크. 시스테인 유전자조작 항체 및 접합체
EP2144628B1 (en) 2007-05-08 2012-10-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
AU2008312457B2 (en) 2007-10-19 2014-04-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
WO2015155345A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Medimmune Limited Antibodies and antibody-drug conjugates
TW201542594A (zh) 2014-04-11 2015-11-16 Medimmune Llc 雙特異性ｈｅｒ２抗體
EP3191518B1 (en) * 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor
WO2018195302A1 (en) * 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
CN117263948A (zh) 2019-03-29 2023-12-22 免疫医疗有限公司 化合物及其缀合物
TWI837403B (zh) 2019-07-19 2024-04-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 化學化合物
AR123480A1 (es) 2020-09-11 2022-12-07 Medimmune Ltd Moléculas de unión terapéuticas

Also Published As

Publication number Publication date
MX2024009972A (es) 2024-08-26
CO2024012148A2 (es) 2024-09-30
AU2023221516A1 (en) 2024-09-19
US20230310636A1 (en) 2023-10-05
TW202348252A (zh) 2023-12-16
WO2023156434A1 (en) 2023-08-24
IL314797A (en) 2024-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2024102229A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体及び抗体薬物コンジュゲート
ES2905315T3 (es) Anticuerpos terapéuticos y sus usos
US20180243435A1 (en) Anti-dll3 antibody drug conjugates and methods of use
JP2019069983A (ja) 新規抗体コンジュゲートおよびその使用
JP2024026234A (ja) 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
CA3027045A1 (en) Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
US20190083645A1 (en) Novel anti-claudin antibodies and methods of use
JP2018524349A (ja) 抗ｃｄ１２３抗体、ならびにその複合体及び誘導体
JP2016531914A (ja) 操作された抗ｄｌｌ３コンジュゲートおよび使用方法
AU2015253422A1 (en) Anti-PTK7 antibody-drug conjugates
KR20190083654A (ko) Asct2에 특이적인 결합 분자 및 이의 용도
JP2017500028A (ja) 新規の抗ｄｐｅｐ３抗体および使用方法
CA2946308A1 (en) Novel anti-rnf43 antibodies and methods of use
CA2959705A1 (en) Novel anti-mfi2 antibodies and methods of use
US20180327506A1 (en) Novel anti-emr2 antibodies and methods of use
CA3118542A1 (en) Cdcp1-targeted therapies
KR20180073675A (ko) Asct2에 특이적인 결합 분자 및 이의 용도
TW202233251A (zh) 抗體藥物綴合物
JP2019534267A (ja) 抗ｃ ｍｅｔ抗体‐細胞傷害性薬物複合体の医学的使用
US20190016812A1 (en) Novel anti-tnfsf9 antibodies and methods of use
AU2016250537A1 (en) Calicheamicin constructs and methods of use
US20230310636A1 (en) Combination therapies for treatment of cancer with therapeutic binding molecules
CA3023088A1 (en) Novel anti-tnfrsf21 antibodies and methods of use
CA3021098A1 (en) Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
CN118715245A (zh) 包含b7-h4抗体药物缀合物的用于治疗癌症的组合疗法