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KR20230154317A - 항-cldn6 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항-cldn6 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20230154317A
KR20230154317A KR1020237033643A KR20237033643A KR20230154317A KR 20230154317 A KR20230154317 A KR 20230154317A KR 1020237033643 A KR1020237033643 A KR 1020237033643A KR 20237033643 A KR20237033643 A KR 20237033643A KR 20230154317 A KR20230154317 A KR 20230154317A
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KR
South Korea
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sequence
seq
antibody
amino acids
antigen
Prior art date
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Pending
Application number
KR1020237033643A
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English (en)
Inventor
리앙 두
홍옌 장
리나 진
얄리 첸
팅팅 완
리우리우 쉬
지준 위엔
Original Assignee
상하이 젠베이스 바이오테크놀로지 씨오., 엘티디.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 상하이 젠베이스 바이오테크놀로지 씨오., 엘티디. filed Critical 상하이 젠베이스 바이오테크놀로지 씨오., 엘티디.
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Abstract

항-CLDN6 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 이를 암호화하는 핵산 분자; 면역접합체, 이중 특이적 분자, 키메라 항원 수용체 및 이를 포함하는 약학 조성물; 및 종양의 예방 및/또는 치료를 위한 이들의 용도가 제공된다.

Description

항-CLDN6 항체 및 이의 용도
본 발명은 질병 치료 및 면역학 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 항-CLDN6 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이를 암호화하는 핵산 분자, 면역 접합체, 이중 특이적 분자, 키메라 항원 수용체 및 이를 포함하는 약학 조성물, 및 종양을 예방 및/또는 치료하기 위한 이의 용도에 관한 것이다.
난소암(Ovarian cancer, OC)은 흔한 부인과 악성 종양으로, 장액성 암종, 자궁내막양 암종, 투명 세포 암종 및 점액성 암종을 포함하여, 다양한 조직학적 아형(subtype)과 유전적 및 생물학적 특징을 가진 매우 이질적인 상피 종양이다. 전 세계적으로, 매년 310,000 건의 난소암이 새로 발병하고, 200,000 명 이상이 사망한다. 난소암의 약 75%는 5년 생존율이 35%인 장액성 암종으로, 이는 악성도가 강한 암의 일종이며 진행 단계(advanced stage)에서 주로 진단된다. 이 유형의 종양은 매우 공격적인(aggressiveness) 성향을 보인다. 표적 치료제의 경우, 임상적으로 장액성 난소암 3 내지 4기 환자의 무진행 생존기간(progression-free survival)을 개선하는 것으로 입증된 항-혈관 신생 요법 외에도 진행성 장액성 난소암은 초기에 백금-기반 화학요법에 반응하지만, 초기 반응 후 곧 재발하며, 약 70% 내지 80%의 케이스의 경우 일차 치료는 수술이다. 최근, 난소암의 발병(pathogenesis)과 분자적 특성에 대한 연구들은 난소암의 표적 치료에 대한 더 많은 과학적 근거와 통찰력을 제공하였다. 난소암의 약 90%는 TP53의 자발적인 체세포 돌연변이와 관련이 있으며, 더 중요하게는, 세포의 악성 변형의 주요 원인인 상동 DNA 복구의 유전적 불안정성과 동형 접합 결함을 유발하는 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이와 관련이 있다. 이러한 연구들은 폴리 ADP-리보스 중합효소(PARP)를 표적으로 하는 약물로 난소암을 치료할 수 있는 근거를 제공하지만, 실제 효과는 아직 임상적으로 입증되지 않았다.
클라우딘(CLDN)은 상피 세포와 내피 세포의 긴밀한 접합부에 위치한 막 단백질인 막 관통 단백질이다. CLDN 패밀리 단백질의 분포는 조직과 기관에 특이적이며, 주요 기능은 세포 간 접착, 세포 극성 유지, 세포 주변 투과성 조절, 세포 증식 및 분화 조절에 참여하는 것이다. 최근 연구에 따르면 CLDN 패밀리의 일부 구성원은 발암 과정에서 상향 조절되고, 정상적으로 분포되지 않은 조직의 발암 과정에서 이소적으로(ectopically) 활성화되며, 이러한 특징은 과학자들로 하여금 종양 표적으로서 CLDN 단백질의 가능성을 추가로 고려하게 했다. 2016년 미국임상종양학회(ASCO)에서는 CLDN 18.2를 표적으로 하는 단일클론항체 약물인 졸베툭시맙(Zolbetuximab)의 2상 임상연구를 보고했으며, 졸베툭시맙과 화학요법제를 병용 투여한 결과 전체 생존기간 및 무진행 생존 기간이 유의하게 증가했으며, 해당 약물은 현재 위암에 대해 임상 3상, 췌장암에 대해 임상 2상을 진행중이다. CLDN 18.2를 표적으로 하는 약물의 성공은 종양 표적으로서 CLDN 패밀리 구성원에 대한 과학자들의 확신을 더욱 강화하였다.
TCGA의 많은 연구 데이터에 따르면 난소암 환자는 CLDN6의 레벨(level)이 정상 난소 조직에 비해 현저하게 상향 조절되는 것으로 나타났다. 정상 난소 조직에서의 CLDN6의 레벨은 0 TPM (백만 개당 전사체(transcripts per million), n=88)인 반면, 난소 종양에서 CLDN6의 레벨은 31.4 TPM (n=426)이다. 또한, CLDN6는 배아 발달 중에만 높게 발현되며 정상 성인 조직에서는 발현되지 않는다. 정상 성인 조직 중 고환은 가장 높은 CLDN6의 발현을 보이지만, 그 발현 레벨은 0.83 TPM에 불과하다. 난소암에서의 높은 발현율 외에도, CLDN6는 고환암 (159.9 TPM, n=137), 자궁육종 (8.4 TPM, n=57), 일부 자궁내막암, 위암, 및 폐암에서도 높게 발현되었다. 연구에 따르면 자궁내막암에서 CLDN6의 높은 발현은 여러 임상병리학적 요인과 관련이 있으며, 독립적인 예후 인자이다. 카플란-마이어 분석결과, CLDN6 고발현 군과 저발현 군 간 전체 생존율과 무재발 생존율(recurrence-free survival rate)에 유의미한 차이가 있었으며, CLDN6 고발현 군의 5년 생존율은 약 30%, 저발현 군의 5년 생존율은 89%였다. 자궁내막암 외에도, CLDN6의 고 발현은 위암 및 요로상피암의 예후와도 음의 상관관계가 있다. 정상 조직에서는 발현되지 않고, 종양 조직에서는 높게 발현되며, 종양 예후와 음의 상관관계가 있는 CLDN6은 이상적인 종양 표적이다.
CLDN6 단백질은 4개의 막 관통 소수성 영역과 2개의 세포 외 고리를 가진 4중 막 관통 단백질이다. 재조합 단백질을 발현시키는 것은 매우 어렵기 때문에, 면역접종에 적합한 단백질 항원이 존재하지 않고, 이는 CLDN6에 대한 항체 스크리닝과 면역접종을 어렵게 한다. 또한, CLDN 패밀리 단백질은 높은 상동성을 가진다. CLDN6를 표적으로 삼을 때는, 정상 조직에서 널리 발현되고 CLDN6와 상동성이 높은 CLDN3 및 CLDN4와의 결합은 피함으로써, 독성 문제를 일으킬 수 있는 교차-결합(cross-binding) 가능성을 피할 필요가 있다. 위 내용들은 항-CLDN6 항체 개발의 2가지 주요 어려움이다.
CLDN9은 CLDN 패밀리에서 CLDN6와 상동성이 가장 높은 단백질이다. TCGA 데이터에 따르면 CLDN9은 췌장에서 낮게 발현되고 (4.23 TPM, n=4), 신장에서 낮게 발현되고 (1.99 TPM, n=25), 기타 정상 조직에서는 거의 발현되지 않는다(가장 높은 발현 레벨을 보이는 것은 담관이며, 이는 0.82 TPM, n=9). 동시에, CLDN9은 난소암에서 상향 조절되고 (5.68 TPM, n=426), 담관암종에서 상향 조절되었다 (8.44 TPM, n=36).
따라서, 암 환자들에게 더 많은 약물 선택지를 제공하기 위해, 특이성이 높고 독성 및 부작용이 낮은 항-CLDN6 항체와 항-CLDN6 및/또는 항-CLDN9 항체의 개발이 시급하고 필요하다.
본 발명의 항체는 인간 CLDN6 및/또는 인간 CLDN9을 특이적으로 인식/결합할 수 있으며, ADCC 및/또는 CDC를 통해 CLDN6를 발현하는 세포(예를 들어, 종양 세포)의 사멸을 유도할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 종양의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있는 잠재력을 가지며, 따라서 임상적으로 큰 가치를 갖는다.
본 발명의 항체
따라서, 일 측면에서, 본 발명은 CLDN6에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 4 또는 33, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되는 것이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되는 것이다.
일부 바람직한 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 4에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 33에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체(rearranged antibody) 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명은 CLDN6에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 4, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의된다.
일부 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 4에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 생물학적 기능 중 하나 이상을 갖는다:
(a) 5 μg/ml 이하(예를 들어, 3 μg/ml 이하)의 EC50으로 인간 CLDN6에 결합함;
(b) 인간 CLDN3, CLDN4 및 CLDN9에는 결합하지 않음;
(c) 항체 의존성 세포 매개 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포(예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(d) 보체 의존성 세포독성(complement-dependent cytotoxicity, CDC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포(예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(e) 대상체(subject)의 종양(예를 들어, CLDN6-발현 종양)을 예방 및/또는 치료하는 것.
예시적인 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열;
(ⅱ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅲ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
및/또는
(b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열;
(ⅴ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅵ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 2에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명은 CLDN6에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 33, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 33에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
예시적인 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열;
(ⅱ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅲ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
및/또는
(b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열;
(ⅴ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅵ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 20에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 14 또는 23, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 16 또는 24, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 16에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 24에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 14, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 16, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 16에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 생물학적 기능 중 하나 이상을 갖는다:
(a) 5 μg/ml 이하 (예를 들어, 3 μg/ml 이하)의 EC50으로 인간 CLDN6에 결합함;
(b) 인간 CLDN3 및 CLDN4에는 결합하지 않음;
(c) 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포 (예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(d) 보체 의존성 세포독성(CDC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포(예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(e) 대상체의 종양(예를 들어, CLDN6-발현 종양)을 예방 및/또는 치료하는 것.
예시적인 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열;
(ⅱ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅲ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
및/또는
(b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열;
(ⅴ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅵ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 11에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 12에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함한다.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 23, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 24, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
(ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
(ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가).
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 하기 3개의 중쇄 CDR: SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 하기 3개의 경쇄 CDR: SEQ ID NO: 24에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열(예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 생물학적 기능 중 하나 이상을 갖는다:
(a) 5 μg/ml 이하 (예를 들어, 3 μg/ml 이하)의 EC50으로 인간 CLDN6에 결합함;
(b) 인간 CLDN3 및 CLDN4에는 결합하지 않음;
(c) 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포 (예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(d) 보체 의존성 세포독성(CDC)을 통해 인간 CLDN6를 발현하는 세포 (예를 들어, CLDN6를 발현하는 종양세포와 같은 종양세포)의 사멸을 유도함;
(e) 대상체의 종양 (예를 들어, CLDN6-발현 종양)을 예방 및/또는 치료하는 것.
예시적인 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원결합 단편은 다음을 포함한다:
(a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
(ⅰ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열;
(ⅱ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅲ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
및/또는
(b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
(ⅳ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열;
(ⅴ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
(ⅵ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 9에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 10에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 된 것이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 인간 면역 글로불린에서 유래한 중쇄 가변 영역(VH) 프레임워크 영역(FR)을 포함하고/하거나, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 인간 면역 글로불린에서 유래한 경쇄 가변 영역(VL) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 이러한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 상기 중쇄 가변 영역 FR 및/또는 상기 경쇄 가변 영역 FR은 하나 이상의 비인간 (예를 들어, 뮤린(murine)) 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 중쇄 프레임워크 영역 FR 및/또는 상기 경쇄 프레임워크 영역 FR은 상응하는 뮤린 아미노산 잔기에 있는 하나 이상의 역돌연변이(back mutation)를 포함할 수 있다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 더 포함한다:
(a) 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체의 중쇄 불변 영역(CH), 상기 변이체는 그것이 유래된 야생형(wild-type) 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가(예를 들어, 최대 20개, 최대 15개, 최대 10개 또는 최대 5개 아미노산의 치환, 결실 또는 추가; 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가)된 것; 및
(b) 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체의 경쇄 불변 영역(CL), 상기 변이체는 그것이 유래된 야생형 서열과 비교하여 최대 20개의 아미노산이 보존적 치환(예를 들어, 최대 15개, 최대 10개 또는 최대 5개 아미노산의 보존적 치환; 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 보존적 치환)된 것.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 중쇄 불변 영역은 IgGl, IgG2, IgG3 또는 IgG4 중쇄 불변 영역과 같은 IgG 중쇄 불변 영역이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21에 명시된 중쇄 불변 영역(CH)을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 경쇄 불변 영역은 κ 또는 λ 경쇄 불변 영역이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 22에 명시된 경쇄 불변 영역(CL)을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', (Fab')2, Fv, 다이설파이드-결합 Fv, scFv, 디아바디(diabody) 및 단일 도메인 항체(sdAb)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것; 이고/이거나, 상기 항체는 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 이중 특이적 항체 또는 다중 특이적 항체이다.
본 발명에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 그것이 유래한 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 아미노산의 보존적 치환(예를 들어, 최대 20개, 최대 15개, 최대 10개 또는 최대 5개 아미노산의 보존적 치환)만이 상이한 변이체를 포함할 수 있으며, 이러한 변이체는 그것이 유래한 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 비교했을 때 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 나타내며, 상기 서술한 것처럼 그것이 유래한 항체 또는 항원 결합 단편의 생물학적 기능을 실질적으로 유지한다.
항체의 제조
본 발명의 항체는 당업자에게 공지된 다양한 방법, 예를 들어, 유전 공학 및 재조합 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄 유전자를 암호화하는 DNA 분자는 화학적 합성 또는 PCR 증폭에 의해 얻어진다. 생성된 DNA 분자를 발현 벡터에 삽입한 다음 숙주세포에 형질감염(transfection)시킨다. 그 다음, 형질감염된 숙주세포를 적절한 조건에서 배양하여 본 발명의 항체를 발현시킨다.
본 발명의 항원 결합 단편은 온전한 항체 분자를 가수분해하여 얻을 수 있다(Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Methods 24: 107-117 (1992) 및 Brennan et al., Science 229: 81 (1985) 참조). 아니면, 이러한 항원 결합 단편은 재조합 숙주세포에 의해 직접 생산될 수도 있다(Hudson, Curr. Opin. Immunol. 11: 548-557 (1999); Little et al., Immunol. Today, 21: 364-370 (2000)에서 검토됨). 예를 들어, Fab' 단편은 숙주세포에서 직접 얻을 수 있으며; Fab' 단편은 화학적으로 결합하여 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., Bio/Technology, 10: 163-167 (1992)). 또한, 재조합 숙주세포의 배양액에서 Fv, Fab 또는 F(ab')2 단편을 직접 분리할 수도 있다. 이러한 항원 결합 단편들을 제조하는 다른 기술들은 당업자에게 잘 알려져 있다.
그에 따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 분리된 핵산 분자는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터 (예를 들어, 클로닝 벡터 또는 발현 벡터)를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 벡터는, 예를 들어, 플라스미드, 코스미드, 파지 등이다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 벡터는 대상체 (예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)에서 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 분리된 핵산 분자 또는 본 발명의 벡터를 포함하는 숙주세포를 제공한다. 상기 숙주세포는 E. coli 세포와 같은 원핵 세포, 효모 세포와 같은 진핵 세포, 곤충 세포, 식물 세포 및 동물 세포 (예를 들어, 마우스 세포, 인간 세포 등 포유동물 세포)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 숙주세포는 CHO와 같은 포유동물 세포 (예를 들어, CHO-K1, CHO-S, CHO DG44)이다.
다른 측면에서, 본 발명의 숙주세포를 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 발현될 수 있는 조건에서 배양하고, 배양된 숙주세포의 배양액으로부터 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법이 제공된다.
유도체화된 항체
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어, 다른 분자 (예를 들어, 다른 폴리펩티드 또는 단백질)에 연결되어 유도체화할 수 있다. 전형적으로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 유도체화 (예를 들어, 라벨링)는 CLDN6 및/또는 CLDN9, 특히 인간 CLDN6 및/또는 인간 CLDN9에 대한 결합에 부정적 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이러한 유도체화된 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다른 항체 (예를 들어, 이중 특이적 항체 형성), 검출 시약, 약제 시약, 및/또는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 다른 분자(예를 들어, 아비딘 또는 폴리히스티딘 태그)의 결합을 매개할 수 있는 단백질 또는 폴리펩티드와 같은 하나 이상의 다른 분자 모이어티에 기능적으로 연결 (화학적 결합, 유전적 융합, 비공유 결합, 또는 다른 방식으로 연결)될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 메틸 또는 에틸 또는 글리코실과 같은 화학 그룹으로 유도체화될 수도 있다. 이 그룹은 혈청 반감기를 늘리는 등 상기 항체의 생물학적 특성을 개선하는 데 사용할 수 있다.
따라서, 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 라벨링 된다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 효소, 방사성핵종, 형광염료, 발광물질(예를 들어, 화학 발광물질) 또는 비오틴과 같은 검출 가능한 라벨을 포함한다. 본 발명의 검출 가능한 라벨은 형광, 분광, 광화학, 생화학, 면역학, 전기, 광학 또는 화학적 수단으로 검출 가능한 임의의 물질일 수 있다. 상기 라벨은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 그 예로 효소(예를 들어, 호스래디쉬 과산화효소, 알칼리성 인산분해효소, β-갈락토시데이즈, 우레아제, 포도당 산화효소 등), 방사성핵종(예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C, 또는 32P), 형광염료(플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레세인, 테트라메틸로다민 이소티오시아네이트(TRITC), 피코에리트린(PE), 텍사스 레드, 로다민, 양자점 또는 시아닌 염료 유도체 (예를 들어, Cy7, Alexa 750)), 발광물질 (예를 들어, 아크리디늄 에스터 화합물과 같은 화학 발광물질), 마그네틱 비드 (예를 들어, Dynabeads®), 콜로이드 금 또는 컬러 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드와 같은 열량 측정 마커, 및 상기에서 언급한 라벨 변형 아비딘 (예를 들어, 스트렙타비딘)에 결합하는 비오틴을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상기 라벨의 용도에 대해서 교시하는 특허는 US 특허 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; 및 4,366,241(이들 전체 내용은 여기에 참조로 포함됨)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 서술한 것과 같이 검출 가능한 라벨은 당업자에게 알려진 방법으로 검출될 수 있다. 예를 들어, 방사성 라벨은 사진 필름이나 섬광 계수기를 사용하여 검출할 수 있으며, 형광 라벨은 방출된 빛을 감지하는 광 검출기를 사용하여 검출할 수 있다. 효소 라벨은 일반적으로 기질을 제공하고 상기 기질에 효소가 작용하여 생산되는 생산물을 검출하는 방식으로, 온도측정 라벨(thermometric labels)은 컬러 라벨을 단순히 시각화하여 검출하는 방식으로 검출한다. 특정 구현예에서, 상기 라벨은 면역학적 검출 (예를 들어, 효소 결합 면역 흡착 분석, 방사성 면역 분석, 형광 면역 분석, 화학 발광 면역 분석 등)에 사용되도록 조정될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 기술한 검출 가능한 라벨은 잠재적인 입체 장애(steric hindrance)를 감소시키기 위해 다양한 길이의 링커를 통해 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착될 수 있다.
이중특이적 또는 다중특이적 분자
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자를 형성하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자의 일부일 수 있고, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자는 결합 특이성이 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 상이한 제2 기능 모듈 (예를 들어, 제2 항체(second antibody))을 포함하여, 적어도 2개의 상이한 결합 부위 및/또는 표적 분자에 결합할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 병용 요법의 잠재적 표적이 될 수 있는 임의의 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결될 수 있다. 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자를 생성하기 위해, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 다른 결합 분자 (예를 들어, 추가적인 항체, 항체 단편, 펩티드 또는 결합 모방체)에 연결 (예를 들어, 화학적 접합, 유전자 융합, 비공유 결합 또는 다른 방식으로 연결)될 수 있다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자를 제공한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자는 CLDN6에 특이적으로 결합하고 추가적으로 하나 이상의 다른 표적에 특이적으로 결합한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자는 제2 표적에 대한 제2 결합 특이성을 갖는 적어도 하나의 분자 (예를 들어, 제2 항체)를 더 포함한다.
면역접합체
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 면역접합체를 형성하기 위해 치료제와 결합될 수 있다. 하나 이상의 치료제를 표적 조직 (예를 들어, CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양과 같은 종양 관련 항원)에 선택적으로 전달하는 면역접합체의 능력으로 인해, 면역접합체는 질병 (예를 들어, 암)의 치료에서 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 효능을 향상시킬 수 있다.
따라서, 다른 측면에서 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 면역접합체 및 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 결합된 치료제를 제공한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 면역접합체는 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate, ADC)이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 치료제는 세포독성 제제이다. 본 발명에서, 상기 세포독성 제제는 세포에 유해한 (예를 들어, 세포를 사멸시키는) 임의의 제제를 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 치료제는 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성핵종 제제 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 알킬화제의 예로는, 질소 머스터드 (예를 들어, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 시클로포스파미드 등), 에틸렌이민 (예를 들어, 티오테파 등), 황산 에스터 및 폴리올 (예를 들어, 부설판, 디브로모만니톨), 니트로소우레아 (예를 들어, 카무스틴, 로무스틴 등), 백금 기반 항종양제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴 등) 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 유사분열 억제제의 예로는, 메이탄시노이드 (예를 들어, 메이탄신, 메이탄시놀, 메이탄시놀의 C-3 에스터 등), 탁산 (예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀 또는 나노입자 파클리탁셀 등), 빈카 알칼로이드 (예를 들어, 빈데신 설페이트, 빈크리스틴, 빈블라스틴 또는 비노렐빈 등)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 항암항생제의 예로는, 악티노마이신, 안트라사이클린 (예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신 등), 칼리케아미신, 듀오카르마이신 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 항대사물질의 예로는, 엽산 길항제 (예를 들어, 메토트렉세이트 등), 피리미딘 길항제 (예를 들어, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 시타라빈, 카페시타빈, 젬시타빈 등), 퓨린 길항제 (예를 들어, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌 등), 아데노신 데아미나제 억제제 (예를 들어, 클라드리빈, 플루다라빈, 넬라라빈, 펜토스타틴 등)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 토포이소머라제 억제제의 예로는, 캠토테신 및 그 유도체 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸 등), 암사크린, 다우노마이신, 아드리아마이신, 에피포도필로톡신, 엘립티신, 에피루비신, 에토포사이드, 라족산, 테니포사이드 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 티로신 키나아제 억제제의 예로는, 엑시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 엘로티닙, 게피티닙, 이매티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙(), 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙, 반데타닙 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 면역접합체에 사용될 수 있는 방사성핵종의 예로는, 131I, 111In, 90Y, 177Lu 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
특정 예시적인 구현예에서, 상기 치료제는 백금 기반 항신생물제(antineoplastic), 안트라사이클린 항생제, 탁산 화합물, 뉴클레오시드 유사체, 캠토테신 화합물 및 이들의 유사체 또는 동족체 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 선택적으로 링커를 통해 상기 치료제에 접합된다.
본 발명에서, 상기 세포독성 제제는 당업계에 존재하는 링커 기술을 사용하여 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합될 수 있다. 세포독성 제제를 항체에 접합하는 데 사용되는 링커 유형의 예로는 히드라존, 티오에테르, 에스터, 다이설파이드, 펩티드 함유 링커 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 선택된 링커는 리소좀 구획 내의 낮은 pH 또는 단백질분해효소 (예를 들어, 카텝신 B, C, D 등의 카텝신과 같이 종양 조직에서 우선적으로 발현되는 단백질분해효소)에 의해 절단되기 쉽다.
세포독성 제제의 유형, 링커 및 치료제를 항체에 접합하는 방법에 대한 자세한 논의는 Saito, G. et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 199-215; Trail, P.A. et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother.52: 328-337; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3: 207-212; Allen, T.M. (2002) Nat. Rev. Cancer 2: 750-763; Pastan, I. and Kreitman, R.J. (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3: 1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J. (2001) Adv. Drug Deliv.Rev.53: 247-264에서도 확인할 수 있다.
키메라 항원 수용체
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 키메라 항원 수용체(CAR)를 제조하는 데 사용될 수 있으며, 상기 CAR는, 막 관통 도메인에 연결되고, 하나 이상의 세포 내 T 세포 신호 전달 도메인(intracellular T cell signaling domain)에 연결되어 있는, CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있는 세포 외 항원 결합 도메인 (예를 들어, scFv)을 포함한다. 세포 내 T 세포 신호 전달 도메인은, 예를 들어, T 세포 수용체 신호 전달 도메인, T 세포 공동 자극 신호 전달 도메인(T cell co-stimulatory signaling domain) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기 T 세포 수용체 신호 도메인은 T 세포 수용체의 세포 내 도메인 (예를 들어, CD3ζ 단백질의 세포 내 부분)을 포함하는 CAR의 일부를 지칭한다. 상기 공동 자극 신호 전달 도메인은 공동 자극 분자의 세포 내 도메인을 포함하는 CAR의 일부를 말하며, 상기 공동 자극 분자는 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응을 위해 필요한 항원 수용체 또는 그 리간드 이외의 세포 표면 분자이다.
본 발명의 CAR의 특징은, 비-MHC 제한적인 방식(non-MHC-restricted manner)으로 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 세포 (예를 들어, 종양 세포)에 대한 T 세포 특이성 및 반응성을 유도하는 능력을 포함한다. 상기 비-MHC 제한적인 CLDN6 및/또는 CLDN9 인식 능력은 본 발명의 CAR를 발현하는 T 세포에 항원 처리와 무관하게 항원을 인식하는 능력을 부여한다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 도메인은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 도메인은 scFv이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 (예를 들어, scFv)을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포)에 의해 발현된다.
특정 바람직한 구현예에서, 폴리펩티드 서열을 포함하는 스페이서(spacer) 도메인은 CAR의 상기 항원 결합 도메인과 상기 막 관통 도메인 사이에 존재할 수 있다. 스페이서 도메인은 최대 300개의 아미노산, 바람직하게는 10 내지 100개의 아미노산, 가장 바람직하게는 25 내지 50개의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서 도메인은 면역 글로불린 도메인, 예를 들어, 인간 면역 글로불린 서열을 포함할 수 있다. 특정 예시적인 구현예에서, 상기 면역 글로불린 도메인은 면역 글로불린 CH2 및 CH3 도메인 서열을 포함한다. 이러한 구현예에서, 특정 이론에 제한되지 않고, 상기 CH2 및 CH3 도메인은 CAR 발현 세포의 막으로부터 CAR의 항원 결합 도메인을 연장(extend)하고, 네이티브 TCR(native TCR)의 크기 및 도메인 구조를 보다 정확하게 모방하는 것으로 여겨진다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 막 관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된 것일 수 있다. 이러한 구현예에서, 상기 도메인은 임의의 막 결합 또는 막 관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 CAR에 유용한 막 관통 도메인의 예로는 적어도 T 세포 수용체의 α, β 또는 ζ 사슬의 막 관통 영역을 포함할 수 있으며, 상기 T 세포 수용체는 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CDS, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 또는, 상기 막 관통 도메인은 합성된 것일 수 있으며, 이 경우 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 주로 포함할 것이다.
특정 예시적인 구현예에서, 상기 막 관통 도메인은 T 세포 수용체의 막 관통 도메인, 예를 들어 CD8 막 관통 도메인을 포함한다.
특정 예시적인 구현예에서, 상기 막 관통 도메인은 T 세포 공동 자극 분자 (예를 들어, CD137 또는 CD28)의 막 관통 도메인을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, CAR에 유용한 세포 내 T 세포 도메인의 예로는 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열(cytoplasmic sequences) 및 공동 자극 분자를 포함하며, 여기서 T 세포 수용체(TCR) 세포질 서열 및 공동 자극 분자는 항원 수용체 결합 후 신호 전달을 개시하기 위해 협력하고, 이들 서열의 임의의 유도체 또는 변이체 및 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 CAR의 세포 내 영역은 자극 방식으로 작용하는 일차 세포질 신호 서열을 포함할 수 있으며, 이는 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티프 또는 ITAM 신호 모티프로 알려진 것을 포함할 수 있다. 상기 CAR에 포함될 수 있는 주요 세포질 신호 서열을 포함하는 ITAM의 예로는 CD3ζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CDS, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d 단백질의 ITAM이 포함된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 CAR의 세포 내 영역은 일차 세포질 신호 전달 도메인 (예를 들어, CD3ζ) 자체 또는 CAR의 맥락에서 사용 가능한 임의의 다른 원하는 세포질 도메인과 함께 포함하는 ITAM을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 CAR의 세포질 도메인은 CD3ζ 사슬 부분과 세포 내 공동 자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 상기 공동 자극 신호 전달 도메인은 상기 공동 자극 분자의 세포 내 도메인을 포함하는 CAR의 일부를 의미한다. 상기 공동 자극 분자는 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응에 필요한 항원 수용체 또는 그 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 이러한 분자들의 예로는, CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134), CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능 관련 항원 1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C 및 B7-H3을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 CAR은 CD3ζ 신호 전달 도메인, CD8 신호 전달 도메인, CD28 신호 전달 도메인, CD137 신호 전달 도메인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. CAR 상의 하나 이상의 T 세포 신호 전달 도메인의 순서는 필요에 따라 당업자에 의해 변경될 수 있다.
키메라 항원 수용체를 생산하는 방법, 그러한 수용체를 포함하는 T 세포, 및 이들의 용도 (예를 들어, 암 치료 용도)는 당업자에게 알려져 있으며, 예를 들어, Brentjens et al., 2010, Molecular Therapy, 18: 4,666-668; Morgan et al., 2010, Molecular Therapy, published online February 23, 2010, pp. 1-9; Till et al., 2008, Blood, 112: 2261-2271; Park et al., Trends Biotechnol., 29: 550-557,2011; Grupp et al., NEnglJMed., 368: 1509-1518, 2013; Han et al., J.Hematol Oncol., 6: 47, 2013; PCT 특허 공보 WO2012/079000, WO2013/126726; 및 U.S. 특허 공보 2012/0213783에 기재되어 있으며, 전체 내용은 본 명세서에 참조로 포함되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 키메라 항원 결합 수용체를 암호화하는 핵산 분자는 CAR을 생성하기 위하여 T 세포와 같은 숙주세포에서의 발현을 위한 발현 벡터 (예컨대, 렌티바이러스 벡터)에 포함될 수 있다. 특정 예시적인 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체를 사용하는 방법은 대상체로부터 T 세포를 분리하고, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 발현 벡터 (예를 들어, 렌티바이러스 벡터)로 T 세포를 형질전환시키고, 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 T 세포를 대상체에게 치료를 위해, 예를 들어 대상체의 종양 치료를 위해 투여하는 것을 포함한다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 분리된 핵산 분자는 본 발명의 키메라 항원 수용체를 암호화한다.
다른 측면에서, 본 발명은 상술한 바와 같이 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터 (예를 들어, 클로닝 벡터 또는 발현 벡터)를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 벡터는, 예를 들어, 플라스미드이다.
다른 측면에서, 본 발명은 상술한 바와 같이 분리된 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 숙주세포를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 숙주세포는 T 세포이다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 숙주세포는 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T)이다.
치료 방법 및 약학 조성물
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포를 사멸시키기 위해 CLDN6 및/또는 CLDN9에 결합함으로써 ADCC 및/또는 CDC를 유도할 수 있으며, 따라서 종양을 예방 및/또는 치료하는 데 사용될 수 있다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 면역접합체와 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 약학 조성물은 추가적인 약리 활성제(pharmaceutically active agent)를 더 포함할 수 있다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 추가적인 약리 활성제는 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성핵종 제제, 방사선 민감물질 (예를 들어, 젬시타빈, 5-플루오로우라실, 탁산, 시스플라틴 등), 항혈관신생제, 사이토카인 (예를 들어, GM-CSF, IL-7, IL- 12. IL-15, IL-18, IL-21 등), 분자 표적 약물 (예를 들어, 리툭시맙과 같은 CD20 항체, 트라스투주맙과 같은 Her2 항체, 베바시주맙과 같은 VEGF 항체, 세툭시맙과 같은 EGFR 항체 등), 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, PD-1 항체, PD-L1 항체, CTLA-4 항체, LAG-3 항체 등), 종양 용해 바이러스 등과 같이 항종양 활성을 가진 약물이다.
특정 바람직한 구현예에서, 약학 조성물에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자 또는 면역접합체 및 추가적인 약리 활성제는 별도의 구성요소로 제공되거나 동일한 조성물의 구성요소로 제공된다. 따라서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자 또는 면역접합체와 추가적인 약리 활성제는 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
특정 예시적 구현예에서, 상기 약학 조성물은 멸균 주사액 (예를 들어, 수성 또는 비수성 현탁액 또는 용액)를 포함한다. 특정 예시적 구현예에서, 상기 멸균 주사액은 주사용수(WFI), 주사용 정균수(BWFI), 염화나트륨 용액 (예를 들어, 0.9% (w/v) NaCl), 덱스트로스 용액 (예를 들어, 5% 덱스트로스), 계면활성제 함유 용액 (예를 들어, 0.01% 폴리소르베이트 20), pH 완충 용액 (예를 들어, 인산염 완충 식염수), 링거 용액 및 이들의 임의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 발명은 세포 표면에서 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현을 감소시키는 방법을 제공하는데, 이는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체 또는 약학 조성물과 세포를 접촉시켜 세포 표면에서 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현이 감소되도록 하는 것을 포함하며; 여기서 상기 세포는 세포 표면에서 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 세포는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 비진단적 목적으로 생체 외(in vitro)에서 세포 표면의 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현을 감소시키는 데 사용된다.
다른 측면에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체 또는 약학 조성물의, 세포 표면의 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현을 감소시키기 위한 약제의 제조에 있어서의 용도가 제공된다.
다른 측면에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체 또는 약학 조성물은 세포 표면에서 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현을 감소시키기 위해 제공된다.
다른 측면에서, 본 발명은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하고/하거나 종양 세포를 사멸시키는 방법을 제공하며, 이는 상기 종양세포를, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T))의 유효량과 접촉시키는 것을 포함한다.
상기 방법은 치료 목적 또는 비치료(non-therapeutic) 목적으로 사용할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 비치료적 목적으로 사용될 수 있으며, 상기 방법은 생체 외(in vitro)에서 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하고/하거나 종양 세포를 사멸시키는 데 사용될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하고/하거나 종양 세포를 사멸시키는 약제의 제조에 있어서 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 단백질, 숙주세포 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T))의 용도를 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 단백질, 숙주세포 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T))는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하고/하거나 종양 세포를 사멸시키기 위해 제공된다.
다른 측면에서, 본 발명은 대상체 (예를 들어, 인간)에서 종양을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T))를 투여하는 단계를 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양 세포를 의미한다. 특정한 바람직한 구현예에서, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9는 종양 세포의 표면에서 발현된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 (예를 들어, 위암 전이, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주 세포 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T))는 항종양 활성이 있는 추가적인 약물과 조합하여 사용된다. 상기 항종양 활성을 갖는 추가 약물은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, CAR-T)의 투여 전, 동시에 또는 투여 후에 투여될 수 있다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, CAR-T)는 추가 요법과 조합하여 투여된다. 상기 추가 요법은 수술, 화학요법, 방사선 요법, 표적 요법, 면역요법, 호르몬 요법, 유전자 요법 또는 완화 요법과 같이 종양에 사용되는 것으로 알려진 모든 요법일 수 있다. 상기 추가 요법은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, CAR-T)의 투여 전, 동시에 또는 투여 후에 투여되는 것일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, T 세포)는 의학 분야에 공지된 임의의 투여 형태로 제형화될 수 있고, 예를 들어, 상기 투여 형태로는 정제, 환제, 현탁제, 유제, 용액제, 겔제, 캡슐제, 산제, 과립제, 엘릭서제, 로젠지, 좌제, 주사제 (액상, 멸균 주사용 분말 및 농축 주사액 포함), 흡입제, 스프레이제 등이 있다. 바람직한 투여 형태는 투여 방식 및 치료 용도에 따라 달라진다. 본 발명의 약학 조성물은 멸균되어야 하며, 제조 및 보관 조건 하에서 안정해야 한다. 바람직한 투여 형태는 주사제이다. 상기 주사제는 멸균된 주사액일 수 있다. 예를 들어, 멸균 주사액은 본 발명의 항체의 필요량을 적절한 용매에서 혼합하고, 동시에 선택적으로 다른 원하는 성분 (pH 조절제, 계면활성제, 보조제, 이온강도 강화제, 등장화제, 방부제, 희석제 또는 이들의 조합을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않음)을 혼합한 뒤, 필터 멸균하여 준비될 수 있다. 또한, 상기 멸균 주사액은 보관 및 사용의 용이성을 위해 멸균 동결건조 분말 (예를 들어, 진공 건조 또는 동결 건조 방법으로 제조된 것)로 제조될 수 있다. 상기 멸균 동결건조 분말은 사용 전에, 예컨대, 주사용수(WFI), 주사용 정균수(BWFI), 염화나트륨 용액 (예를 들어, 0.9%(w/v) NaCl), 덱스트로스 용액 (예를 들어, 5% 덱스트로스), 계면활성제 함유 용액 (예를 들어, 0.01% 폴리소르베이트 20), pH 완충 용액 (예를 들어, 인산염 완충 식염수), 링거 용액 및 이들의 임의의 조합과 같은 적합한 비히클에 분산시킬 수 있다.
또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, T 세포)는 투여 용이성을 위해 단위 투여(unit dosage) 형태로 약학 조성물에 존재할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체, 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, T 세포)는 당업계에 알려진 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구, 협측, 설하, 안구, 국소, 비경구, 직장, 척수강 내, 세포질내 세망, 서혜부, 방광내, 국소 (예를 들어, 분말, 연고 또는 점적용 제제) 또는 비강 경로로 투여되는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 그러나, 많은 치료 용도의 경우, 바람직한 투여 경로/방식은 비경구 (예를 들어, 정맥 내 또는 볼루스(bolus) 주사, 피하 주사, 복강 주사, 근육 주사)이다. 당업자는 투여 경로 및/또는 투여 방식이 의도된 목적에 따라 달라짐을 이해할 것이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, T 세포)는 정맥 내 또는 볼루스 주사로 투여된다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 면역접합체, 약학 조성물, 키메라 항원 수용체 또는 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 숙주세포 (예를 들어, T 세포)의 "치료 유효량(therapeutically effective amount)" 또는 "예방 유효량(prophylactically effective amount)"을 포함할 수 있다. "예방 유효량"은 질병의 발병을 예방, 정지 또는 지연시키기에 충분한 양을 의미한다. "치료 유효량"은 이미 질병을 앓고 있는 환자의 질병 및 그 합병증을 치료하거나 적어도 부분적으로 예방하기에 충분한 양을 의미한다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 유효량은 치료할 질병의 중증도, 환자 자신의 면역체계의 전반적인 상태, 및 연령, 체중, 성별, 투여 방식, 동시 투여되는 다른 치료법 등의 환자의 전반적인 상태에 따라 다를 수 있다.
본 발명에서, 상기 투여 요법은 최적의 원하는 반응 (예를 들어, 치료 또는 예방 반응)을 얻기 위해 조절될 수 있다. 예를 들어, 단일 용량이 투여될 수 있거나, 시간이 지남에 따라 다중 용량이 투여될 수 있거나, 상기 용량은 치료 상황의 긴급성에 따라 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다.
본 발명에서, 상기 대상체는 인간과 같은 포유동물일 수 있다.
검출방법 및 키트
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 샘플 내 CLDN6 및/또는 CLDN9의 존재 또는 레벨을 검출하는 데 사용될 수 있다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 키트를 제공한다. 특정 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 키트는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 특이적으로 인식하는 제2 항체를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 제2 항체는 검출가능한 라벨을 더 포함한다.
본 발명에서, 상기 검출 가능한 라벨은 형광, 분광, 광화학적, 생화학적, 면역학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출될 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 상기 라벨은 면역학적 분석 (예를 들어, ELISA, 방사성 면역분석, 형광 면역분석, 화학발광 면역분석 등)에 사용하기에 적합한 것이 특히 바람직하다. 상기 라벨은 당업계에 잘 알려진 것으로, 효소 (예를 들어, 호스래디쉬 과산화효소, 알칼리성 인산분해효소, β-갈락토시데이즈, 우레아제, 포도당 산화효소 등), 방사성핵종 (예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C, 또는 32P), 형광염료 (플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레세인, 테트라메틸로다민 이소티오시아네이트(TRITC), 피코에리트린(PE), 텍사스 레드, 로다민, 양자점 또는 시아닌 염료 유도체 (예를 들어, Cy7, Alexa 750)), 발광물질 (예를 들어, 아크리디늄 에스터 화합물과 같은 화학 발광 물질), 마그네틱 비드 (예를 들어, Dynabeads®), 콜로이드 금 또는 컬러 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드와 같은 열량 측정 마커, 및 상기에서 언급한 라벨 변형 아비딘 (예를 들어, 스트렙타비딘)에 결합하는 비오틴을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 라벨의 용도를 교시하는 특허는 미국 특허 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; 및 4,366,241 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다 (전체 내용이 본 명세서에 참조로 포함되어 있음). 상술한 바와 같은 검출가능한 라벨은 당업계에 공지된 방법에 의해 검출될 수 있다. 예를 들어, 방사성 라벨은 사진 필름이나 섬광 계수기를 사용하여 검출할 수 있으며, 형광 라벨은 광 검출기를 사용하여 방출된 빛을 검출할 수 있다. 효소 라벨은 일반적으로 기질을 제공하고 상기 기질에 효소가 작용하여 생산된 생산물을 검출함으로써 검출되며, 온도측정 라벨은 컬러 라벨을 단순히 시각화하여 검출하는 방식으로 검출한다. 특정 구현예에서, 상술한 바와 같은 검출가능한 라벨은 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 링커를 통해 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 샘플에서 CLDN6 및/또는 CLDN9의 존재 또는 양을 검출하는 방법을 제공하며, 다음 단계를 포함한다:
(1) 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 상기 샘플과 접촉시키는 단계;
(2) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN6 및/또는 CLDN9를 포함하는 복합체(complex)의 형성을 검출하거나, 또는 상기 복합체의 양을 검출하는 단계.
상기 복합체의 형성은 CLDN6 및/또는 CLDN9의 존재 또는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 세포의 존재를 나타낸다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 샘플은 세포 샘플, 즉 세포 (예를 들어, 종양 세포)를 포함하는 샘플이다. 이러한 구현예에서, 바람직하게는, 상기 복합체는 샘플 내 세포에 의해 발현되는 CLDN6 및/또는 CLDN9와 항체, 항원 결합 단편 또는 접합체 사이에 형성된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 추가로 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 단계 (2)에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출 가능한 라벨을 포함하는 제제를 사용하여 검출된다.
상기 방법은 진단 목적 또는 비진단 목적 (예를 들어, 상기 샘플이 환자의 샘플이 아닌 세포 샘플인 경우)으로 사용될 수 있다. 특정한 바람직한 구현예에서, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9는 인간 CLDN6 및/또는 CLDN9이다.
다른 측면에서, 샘플에서 CLDN6 및/또는 CLDN9의 존재 또는 양을 검출하기 위한 키트의 제조에 있어서 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도가 제공된다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9는 인간 CLDN6 및/또는 CLDN9이다.
다른 측면에서, 본 발명은 종양이 CLDN6 및/또는 CLDN9를 표적으로 하는 항-종양 치료법에 의해 치료될 수 있는지 여부를 결정하는 방법을 제공하며, 이는 다음 단계를 포함한다:
(1) 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 상기 종양의 세포를 포함하는 샘플과 접촉시키는 단계;
(2) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN6 및/또는 CLDN9를 포함하는 복합체의 형성을 검출하는 단계.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 복합체는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 샘플 내 종양 세포에 의해 발현되는 CLDN6 및/또는 CLDN9 간에 형성된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 샘플은 종양을 갖고 있거나, 갖는 것으로 의심되거나, 종양을 가질 위험이 있는 대상체로부터 얻는다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 샘플은 조직 또는 기관이 암이 아닐 때 세포가 CLDN6 및/또는 CLDN9를 실질적으로 발현하지 않는 조직 또는 기관으로부터 얻는다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 조직은 위 조직, 폐 조직, 식도 조직, 췌장 조직 또는 유방 조직으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조직은 선택적으로 육안 검사 또는 조직이나 기관 세포의 배양 검사에 의해 암에 걸린 것으로 진단된 것이다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 조직은 위 조직을 제외한 조직이다. 특정 바람직한 구현예에서, 상기 조직은 폐 조직, 식도 조직, 췌장 조직 또는 유방 조직이다. 이러한 구현예에서, CLDN6 및/또는 CLDN9, 또는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 세포가 있고/있거나 CLDN6 및/또는 CLDN9, 또는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 세포의 양이 기준 수준 (예를 들어, 종양성 질환이 없는 환자와 비교하여)보다 증가했을 때, 상기 대상체가 CLDN6 및/또는 CLDN9를 표적으로 하는 항-종양 요법에 적합하다는 것을 나타낸다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 더 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, 단계 (2)에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함하는 제제를 사용하여 검출된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9는 인간 CLDN6 및/또는 CLDN9이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 (예를 들어, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이 등의 위암 전이)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 종양이 CLDN6 및/또는 CLDN9를 표적으로 하는 항-종양 요법에 의해 치료될 수 있는지 여부를 결정하기 위한 키트의 제조에 있어서 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도가 제공된다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함한다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9는 인간 CLDN6 및/또는 CLDN9이다.
특정 바람직한 구현예에서, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 (예를 들어, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이 등의 위암 전이)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
용어 정의
본 발명에 있어서, 달리 명시하지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 과학 및 기술 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 또한, 본 명세서에서 사용된 세포 배양, 생화학, 핵산 화학, 면역학 실험실에서의 작업 단계는 모두 해당 분야에서 널리 사용되는 일상적인 단계이다. 한편, 본 발명의 이해를 돕기 위해 관련 용어의 정의 및 설명이 하기에 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CLDN6(Claudin 6)"은 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가지고, 이는 클라우딘 패밀리에 속하며, 상피와 내피의 밀착연접(tight junction)에 있는 막 관통 단백질로서, 자가포식에 관여할 수 있다. CLDN6의 서열은 당업계에 잘 알려져 있으며, NCBI 데이터베이스 등록 번호 P56747을 참조할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "CLDN9(Claudin 9)"은 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가지며, 이는 클라우딘 패밀리에 속하며, 상피와 내피 사이의 밀착연접에 있는 막 관통 단백질이다. CLDN9의 서열은 당업계에 잘 알려져 있으며, NCBI 데이터베이스 등록 번호 O95484를 참조할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "항체"는 일반적으로 두 쌍의 폴리펩티드 사슬 (각 쌍은 하나의 경쇄(LC)와 하나의 중쇄(HC)를 가짐)로 구성된 면역글로불린 분자를 의미한다. 항체 경쇄는 κ(카파) 경쇄와 λ(람다) 경쇄로 분류될 수 있다. 중쇄는 μ, δ, γ, α 또는 ε로 분류할 수 있으며, 항체의 동종형(isotype)은 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의될 수 있다. 상기 경쇄와 중쇄에서, 가변 영역과 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산으로 구성된 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 3개 이상의 아미노산으로 구성된 "D" 영역을 포함한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH)과 중쇄 불변 영역(CH)으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL)과 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 CL이라는 하나의 도메인으로 구성된다. 불변 영역은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지는 않으나, 고전적인 보체 시스템의 첫 번째 구성요소(C1q)에 면역체계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포)가 결합하는 것을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자와 면역 글로불린의 상호작용을 매개하는 다양한 이펙터(effector) 기능을 나타낸다. VH 및 VL 영역은 또한 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 보다 보존된 영역이 산재되어 있는 높은 가변성의 영역 (상보성 결정 영역(CDR)이라고도 함)으로 세분될 수 있다. VH 및 VL은 각각 아미노 말단부터 카복시 말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 각 중쇄/경쇄 쌍의 가변 영역(VH 및 VL)은 각각 항원 결합 부위를 형성한다. 영역 또는 도메인에 아미노산 값을 지정하는 것은 Kabat의 Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), 또는 Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917; definition by Chothia et al. (1989) Nature 342:878-883를 따를 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항원 결합을 담당하는 항체의 가변 영역 내의 아미노산 잔기를 지칭한다. 중쇄와 경쇄의 가변 영역은 각각 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지정된 3개의 CDR을 포함한다. 이들 CDR의 정확한 경계는 카바트 넘버링 체계(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991), 코티아 넘버링 체계(Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342: 878-883), 또는 IMGT 넘버링 체계(Lefranc et al. al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003)와 같이 당업계에 공지된 다양한 넘버링 체계에 따라 정의될 수 있다. 주어진 항체에 대해, 당업자는 각 넘버링 체계에 의해 정의된 CDR을 쉽게 식별할 수 있을 것이다. 또한, 상기 서로 다른 넘버링 체계 사이의 대응은 당업자에게 잘 알려져 있다 (예를 들어, Lefranc et al., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003 참조).
본 발명에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 포함된 CDR은 당업계에 공지된 다양한 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 바람직하게는 카바트, 코티아 또는 IMGT 넘버링 체계에 의해 식별되는 CDR을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 바람직하게는 IMGT 넘버링 체계에 의해 식별되는 CDR을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 상기 정의된 CDR 잔기 이외의 항체 가변 영역 내의 아미노산 잔기를 의미한다.
용어 "항체"는 항체를 생산하는 임의의 특정 방법에 제한되지 않는다. 예를 들어, 항체는 재조합 항체, 단일 클론 항체, 다클론 항체 등이 포함된다. 상기 항체는 다른 동종형일 수 있으며, 예를 들어 IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위 유형), IgAl, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM 항체일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 항체의 "항원 결합 단편"은 전장 항체(full-length antibody)가 결합하는 동일한 항원에 특이적으로 결합하고/하거나 항원에 특이적으로 결합하는 것에 대해 전장 항체와 경쟁하는 능력을 보유하는 전장 항체의 단편의 폴리펩티드와 같은 항체의 단편의 폴리펩티드를 지칭하는 것으로, "항원 결합 모이어티(antigen-binding moiety)"라고도 한다. 일반적으로, Fundamental Immunology, Ch. 7, Paul, W., ed., 제2판, Raven Press, N.Y. (1989)를 참조하며, 이의 전체 내용이 모든 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다. 항체의 항원 결합 단편은 재조합 DNA 기술 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 단편의 비제한적 예에는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일 사슬 항체 (예를 들어, scFv), 키메라 항체, 디아바디, 선형 항체, 나노바디 (Domantis의 기술), 도메인 항체 (Alynx의 기술) 및 폴리펩티드에 특정 항원 결합 능력을 부여하기에 충분한 항체의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 조작된 항체 변이체는 Holliger et al., 2005; Nat Biotechnol, 23: 1126-1136에서 검토되었다.
본 명세서에서 사용된 용어 "전장 항체"는 2개의 "전장 중쇄" 및 2개의 "전장 경쇄"로 구성된 항체를 의미한다. 여기서, "전장 중쇄"는 N-말단에서 C-말단의 방향으로 중쇄 가변 영역(VH), 중쇄 불변 영역 CH1 도메인, 힌지 영역(HR), 중쇄 불변 영역 CH2 도메인, 중쇄 불변 영역 CH1 도메인, 중쇄 불변 영역 CH3 도메인으로 구성된 폴리펩티드 사슬을 의미하고; 전장 항체가 IgE 동종형인 경우, 이는 선택적으로 중쇄 불변 영역 CH4 도메인을 포함한다. 바람직하게는, "전장 중쇄"는 N-말단에서 C-말단 방향으로 VH, CH1, HR, CH2 및 CH3으로 구성된 폴리펩티드 사슬이다. "전장 경쇄"는 N-말단에서 C-말단 방향으로 경쇄 가변 영역(VL)과 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된 폴리펩티드 사슬이다. 두 쌍의 전장 항체 사슬은 CL과 CH1 간의 다이설파이드 결합과 두 전장 중쇄의 HR 간의 다이설파이드 결합에 의해 함께 연결된다. 본 발명의 전장 항체는 인간과 같은 단일 종으로부터 유래될 수 있고; 이는 또한 키메라 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 본 발명의 전장 항체는 각각 동일한 항원을 특이적으로 인식/결합하는 VH 및 VL 쌍으로 형성된 2개의 항원 결합 부위를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "Fd"는 VH 및 CH1 도메인으로 구성된 항체 단편을 의미한다; 용어 "dAb 단편"은 VH 도메인들로 구성된 항체 단편을 의미한다 (Ward et al., Nature 341:544 546 (1989)); 용어 "Fab 단편"은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인들로 구성된 항체 단편을 의미한다; 용어 "F(ab')2 단편"은 힌지 영역에서 다이설파이드 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편들을 포함하는 항체 단편을 의미한다; 용어 "Fab' 단편"이란 온전한(intact) 경쇄 및 중쇄 Fd 단편 (VH 및 CH1 도메인들로 구성됨)으로 구성되며, F(ab')2 단편 중 두 개의 중쇄 단편을 연결하는 다이설파이드 결합을 환원시켜 얻어지는 단편을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "Fv"는 항체의 한쪽 팔(one-armed) VL 및 VH 도메인들로 구성된 항체 단편을 의미한다. Fv 단편은 일반적으로 온전한 항원 결합 부위를 형성할 수 있는 가장 작은 항체 단편으로 여겨진다. 일반적으로 6개의 CDR들이 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 것으로 여겨진다. 그러나 가변 영역 (예를 들어, 3개의 항원-특이적 CDR들만 포함하는 Fd 단편)도 온전한 결합 부위보다 친화력이 낮을 수 있지만 항원을 인식하고 결합할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "Fc"는 제1 중쇄의 제2 및 제3 불변영역이 제2 중쇄의 제2 및 제3 불변영역에 다이설파이드 결합으로 결합되어 형성된 항체 단편을 의미한다. 항체의 Fc 단편은 다양한 기능을 가지고 있지만 항원 결합에는 관여하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 용어 "scFv"는 VL 및 VH 도메인을 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬을 의미하며, 여기서 VL 및 VH는 링커에 의해 연결된다 (예를 들어, Bird et al., Science 242:423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988); 및 Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Eds. Roseburg and Moore, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)) 참조). 이러한 scFv 분자는 일반 구조로 NH2-VL-링커-VH-COOH 또는 NH2-VH-링커-VL-COOH를 가질 수 있다. 선행 기술의 적합한 링커는 반복된 GGGGS 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 구성된다. 예를 들어, 아미노산 서열(GGGGS)4을 갖는 링커 및 이의 변이체(Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448)가 사용될 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 다른 링커는 Alfthan et al. (1995), Protein Eng. 8:725-731, Choi et al. (2001), Eur. J. Immunol. 31:94-106, Hu et al. (1996), Cancer Res. 56:3055-3061, Kipriyanov et al. (1999), J. Mol. Biol. 293:41-56 and Roovers et al. (2001), Cancer Immunol에 기재되어 있다. 어떤 경우에는, scFv의 VH와 VL 간에 다이설파이드 결합이 존재할 수도 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "디아바디(diabody)"는 VH 및 VL 도메인들이 단일 폴리펩티드 사슬 상에서 발현되지만 동일한 사슬의 두 도메인 간에 쌍을 이룰 수 없을 만큼 짧은 링커를 사용하여 도메인이 다른 사슬의 상보적인 도메인과 쌍을 이루도록 하여 두 개의 항원 결합부위를 생성한 것을 의미한다 (예를 들어, Holliger P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993) 및 Poljak R. J. et al., Structure 2:1121-1123 (1994) 참조).
본 명세서에서 사용된 용어 "단일-도메인 항체(sdAb)"는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가지며, 전장 항체가 결합하는 것과 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 단일 단량체 가변 항체 도메인 (예를 들어, 단일 중쇄 가변 항체 도메인)으로 구성된 항체 단편을 의미한다. 단일 도메인 항체는 나노바디라고도 한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "프로바디(probody)"는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가지며, 이는 건강한 조직에서는 불활성으로 남아 있지만 질병 환경에서는 특이적으로 활성화 (예를 들어, 질병 환경에 풍부하거나 특이적인 단백질 분해효소에 의한 단백질 분해)되는 차폐된(masked) 항체를 의미한다. 이에 대한 상세한 설명은, 예를 들어, Desnoyers et al., Sci. Transl. Med., 5: 207ra144, 2013에서 찾을 수 있다. 유사한 차폐(masking) 기술이 본 명세서에 기술된 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 함께 사용될 수 있다.
상기 각 항체 단편은 전장 항체가 결합하는 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 갖고/갖거나 항원에 특이적으로 결합하는 것에 대해 전장 항체와 경쟁한다.
항체의 항원 결합 단편 (예를 들어, 상술한 항체 단편)은 당업자에게 알려진 통상적인 기술 (예를 들어, 재조합 DNA 기술 또는 효소적 또는 화학적 절단 방법)을 사용하여 주어진 항체 (예를 들어, 본 발명의 항체)로부터 얻을 수 있고, 항체의 항원 결합 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 특이성을 스크리닝할 수 있다.
본 명세서에서 문맥상 달리 명시되지 않는 한, 용어"항체"는 온전한 항체뿐만 아니라 상기 항체의 항원 결합 단편도 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 "단일 클론 항체", "McAb", "mAb"라는 용어는 동일한 의미를 가지며 상호 교환적으로 사용되며, 자연적으로 발생할 수 있는 자연 돌연변이를 제외한 고도로 상동적인 항체 분자 집단, 즉 동일한 항체 분자 집단에서의 하나의 항체 또는 하나의 항체 단편을 지칭한다. 단일 클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 매우 특이적이다. 다클론 항체는 단일 클론 항체와 상대적인 용어로, 일반적으로 항원의 다른 에피토프를 인식하는 적어도 두 개 이상의 서로 다른 항체를 포함한다. 또한, "단일 클론"이라는 수식어는 항체가 고도로 상동성이 높은 항체 집단에서 얻은 것임을 나타내는 것일 뿐이며, 항체를 제조하는 데 임의의 특정 방법이 필요한 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 발명의 단일 클론 항체는 하이브리도마 기술 (예를 들어, Kohler et al. Nature, 256:495, 1975 참조), 재조합 DNA 기술 (예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조) 또는 박테리오파지 항체 라이브러리 기술 (예를 들어, Clackson et al. Nature 352: 624-628, 1991, 또는 Marks et al. J. Mol. Biol. 222: 581-597, 1991 참조)과 같은 다양한 기술로 제조할 수 있다.
상기 항체는 단백질 A 또는 단백질 G를 사용한 친화성 크로마토그래피와 같은 알려진 기술로 정제될 수 있다. 그 이후에 또는 다른 방법으로서, 특정 항원 (항체에 의해 인식되는 표적 분자) 또는 그 에피토프를 컬럼에 고정하고 면역 특이적 항체를 면역친화성 크로마토그래피로 정제할 수 있다. 상기 면역 글로불린의 정제는, 예를 들어, D. Wilkinson (The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia Pa., Vol.14, No.8 (Apr.17, 2000), pp.25-28)을 참조할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "키메라 항체"는 경쇄 및/또는 중쇄가 부분적으로 특정 항체 (특정 종에서 유래하거나 특정 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속한 것일 수 있음)에서 유래하고, 상기 경쇄 및/또는 중쇄의 다른 부분이 다른 항체 (위와 동일하거나 다른 종에서 유래하거나, 위와 동일하거나 다른 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속한 것일 수 있음)에서 유래하지만, 어떠한 경우에도 여전히 표적 항원에 대한 결합 활성을 유지하는 항체를 의미한다 (U.S.P 4,816,567 to Cabilly et al.; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851 6855 (1984)). 예를 들어, 용어 "키메라 항체"는 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 제1 항체 (예를 들어, 뮤린 항체)로부터 유래되고, 항체의 중쇄 및 경쇄 불변 영역이 제2 항체 (예를 들어, 인간 항체)로부터 유래되는 항체 (예를 들어, 인간-마우스 키메라 항체)를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "인간화 항체"는 인간 항체의 서열과 상동성을 높이기 위해 아미노산 서열이 변형된 유전자 조작된 비인간 항체(genetically engineered non-human antibody)를 의미한다. 일반적으로 인간화 항체의 CDR 전부 또는 일부는 비인간 항체 (공여자 항체(donor antibody))에서 유래하고, 비-CDR 영역 (예를 들어, 가변 FR 및/또는 불변 영역)의 전부 또는 일부는 인간 면역글로불린 (수용체 항체(receptor antibody))에서 유래된다. 인간화 항체는 일반적으로 항원 특이성, 친화성, 반응성 등을 포함하되 이에 국한되지 않는 공여자 항체의 예상되는 특성을 유지한다. 상기 공여자 항체는 예상되는 특성 (예를 들어, 항원 특이성, 친화성, 반응성 등)을 가진 마우스, 렛트, 토끼 또는 비인간 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이) 항체일 수 있다.
본 명세서에서, 본 발명의 항체의 예상되는 특성은 다음을 포함한다: (1) CLDN6 및/또는 CLDN9 (특히 인간 CLDN6 및/또는 인간 CLDN9)에 대한 특이적 인식/결합, (2) CLDN6 내재화 매개, (3) 항체 의존적 세포 매개 세포 독성(ADCC)을 통한 인간 CLDN6 발현 세포 사멸 유도, (4) 보체 의존적 세포 독성(CDC)을 통한 인간 CLDN6 발현 세포 사멸 유도, (5) 종양을 예방하고/하거나 치료하는 능력. 본 발명의 항체는 상술한 바람직한 특성 중 하나 이상을 갖는다.
본 발명의 키메라 항체 또는 인간화 항체는 상기 제조된 마우스 단일 클론 항체의 서열에 따라 제조될 수 있다. 중쇄와 경쇄를 암호화하는 DNA는 표적 뮤린 하이브리도마에서 얻을 수 있으며 표준 분자생물학 기술을 사용하여 비-뮤린 (예를 들어, 인간) 면역글로불린 서열을 포함하도록 조작될 수 있다.
상기 키메라 항체를 제조하기 위해, 뮤린 면역글로불린 가변 영역은 당업자에게 알려진 방법 (예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호, Cabilly 등, 참조)을 사용하여 인간 면역글로불린 불변 영역에 연결될 수 있다. 예를 들어, VH를 암호화하는 DNA는 중쇄 불변 영역을 암호화하는 다른 DNA 분자와 작동 가능하게 연결되어 전장(full-length) 중쇄 유전자를 얻는다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업자에게 알려져 있으며 (예를 들어, Kabat, E.A. 등 (1991), 면역학적 관심 단백질의 서열, 제5판, 미국 보건복지부, NIH 간행물 제91-3242호 참조), 이러한 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭을 통해 얻을 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있지만, 일반적으로는 IgGl 또는 IgG4 불변 영역이 바람직하다. 예를 들어, VL을 암호화하는 DNA는 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 다른 DNA 분자와 작동 가능하게 연결되어 (Fab 경쇄 유전자뿐만 아니라) 전장 경쇄 유전자를 얻는다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업자에게 알려져 있으며 (예를 들어, Kabat, E.A. 등 (1991), 면역학적 관심 단백질의 서열, 제5판, 미국 보건복지부, NIH 간행물 제91-3242호 참조), 이러한 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭을 통해 얻을 수 있다. 상기 경쇄 불변 영역은 κ 또는 λ 불변 영역일 수 있지만, 일반적으로 그리고 바람직하게는 κ 불변 영역일 수 있다.
인간화 항체를 제조하기 위해, 당업자에게 알려진 방법을 사용하여 인간 프레임워크 서열에 뮤린 CDR들이 삽입될 수 있다 (Winter, 미국 특허 제5,225,539호; Queen et al., 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호; 및 Lo, Benny, K.C., editor, in Antibody Engineering: Methods and Protocols, 248권, Humana Press, 뉴저지, 2004 참조). 대안적으로는, 면역 접종 후 내인성 면역글로불린을 생산하지 않고 완전한 인간 항체 레퍼토리를 생산할 수 있는 형질전환 동물도 활용될 수 있다. 예를 들어, 키메라 및 생식선 돌연변이 마우스에서 항체 중쇄 결합 영역 (JH) 유전자의 동형 접합 결실이 내인성 항체 생성을 완전히 억제할 수 있으며, 인간 생식선 면역 글로불린 유전자 어레이를 생식선 돌연변이 마우스로 옮기고, 상기 마우스가 항원 자극에 따라 인간 항체를 생성할 것이라고 보고되었다 (예를 들어, Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551; Jakobovits et al., 1993, Nature 362:255-258; Bruggermann et al., 1993, Year in Immunology 7:33; 및 Duchosal et al., 1992, Nature 355:258 참조). 형질전환 동물의 비제한적인 예로는, 재배열되지 않은 인간 중쇄 (μ 및 γ) 및 κ 경쇄 면역글로불린 서열을 암호화하는 인간 면역글로불린 유전자 미니로시(miniloci) 및 내인성 μ 및 κ 사슬 좌위를 비활성화하는 표적 돌연변이를 포함하는 HuMAb 마우스 (Medarex, Inc.) (예를 들어, Lonberg et al. (1994), Nature 368(6474):856-859 참조); 또는 인간 중쇄 형질전환 유전자(transgene) 및 인간 경쇄 형질전환 염색체(transchromosome)를 보유한 "KM 마우스 TM" (특허 출원 제WO02/43478호 참조)이 포함된다. 항체를 인간화하기 위한 다른 방법은 파지 디스플레이 기술을 포함한다 (Hoogenboom et al., 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., J. Mol. Biol. 1991, 222:581-597; Vaughan et al. Man, 1996, Nature Biotech 14:309).
본 명세서에서 사용되는 용어 "생식선 항체 유전자(germline antibody gene)" 또는 "생식선 항체 유전자 분절(germline antibody gene segment)"은 특정 면역 글로불린의 발현으로 이어지는 유전자 재배열 및 돌연변이의 성숙 과정을 거치지 않은 유기체의 게놈에 존재하는 면역글로불린을 암호화하는 서열을 지칭한다. 본 발명에서, "중쇄 생식선 유전자"라는 표현은 면역 글로불린 중쇄를 암호화하는 생식선 항체 유전자 또는 유전자 단편으로서, V 유전자 (가변), D 유전자 (다양성), J 유전자 (결합) 및 C 유전자 (불변)를 포함하는 생식선 항체 유전자 또는 유전자 단편을 의미하며; 유사하게, "경쇄 생식선 유전자"라는 표현은 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 생식선 항체 유전자 또는 유전자 단편으로서, V 유전자(가변), J 유전자(결합) 및 C 유전자(불변)를 포함하는 생식선 항체 유전자 또는 유전자 단편을 의미한다. 본 발명에서, 상기 생식선 항체 유전자 또는 생식선 항체 유전자 단편에 의해 암호화되는 아미노산 서열을 "생식선 서열(germline sequence)"이라고도 한다. 생식선 항체 유전자 또는 생식선 항체 유전자 단편 및 그에 대응하는 생식선 서열은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 전문 데이터베이스 (예를 들어, IMGT, UNSWIg, NCBI 또는 VBASE2)에서 얻거나 쿼리(query)할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적 결합(specific binding)"은 항체와 항체가 표적으로 삼는 항원 간의 반응과 같이 두 분자 간의 비-임의적(non-random) 결합 반응을 의미한다. 특이적 결합 상호작용의 강도 또는 친화도는 해당 상호작용에 대한 평형 해리 상수(KD)로 표현될 수 있다. 본 발명에서, 용어 "KD"는 특이적 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 의미하며, 이는 항체와 항원 간의 결합 친화도를 설명하는 데 사용된다. 평형 해리 상수가 작을수록 항체-항원 결합이 더 단단해지며, 상기 항체와 상기 항원 간의 친화도가 높아진다. 특정 구현예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 (또는 항원에 특이적인 항체)는 항체가 약 10-9 M 미만, 예컨대 약 10-9 M 미만, 10-10 M, 10-11 M 또는 10-12 M 이하의 친화도(KD)로 항원에 결합하는 것을 의미한다. 두 분자 간의 특이적 결합 특성은 당업계에 잘 알려진 방법, 예를 들어, BIACORE 기기에서 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance, SPR)을 사용하여 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포독성 제제"은 화학요법 약물, 박테리아 독소, 식물 독소, 방사성 동위원소 등 세포에 해로운 (예를 들어, 세포를 사멸시키는) 모든 물질을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "벡터(vector)"는 폴리뉴클레오티드가 삽입될 수 있는 핵산 전달체(delivery vehicle)를 지칭한다. 상기 벡터가 삽입된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 단백질을 발현할 수 있는 경우, 해당 벡터를 발현 벡터라고 한다. 벡터는 형질 전환(transformation), 형질 도입(transduction) 또는 형질감염(transfection)을 통해 숙주세포에 도입될 수 있으며, 이에 따라 운반된 유전 물질 요소가 숙주세포에서 발현될 수 있다. 벡터는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 플라스미드; 파지미드; 코스미드; 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래 인공 염색체(PAC)와 같은 인공 염색체; λ 파지 또는 M13 파지와 같은 파지; 동물 바이러스 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 벡터로 사용될 수 있는 동물 바이러스에는 레트로바이러스 (렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스 (예를 들어, 단순 포진 바이러스), 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 유두종바이러스, 파포바바이러스 (예를 들어, SV40)가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소(selection element) 및 리포터 유전자 등의 발현을 조절하는 다양한 요소들을 포함할 수 있으나, 상기 요소들은 위 예시들로 제한되지 않는다. 또한, 상기 벡터에는 복제 기점 부위(origin of replication site)도 포함될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "숙주세포"는 벡터를 도입할 수 있는 세포를 의미하며, 여기에는 대장균(Escherichia coli) 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 원핵 세포, 효모 세포 또는 아스퍼질러스(Aspergillus)와 같은 진균 세포, S2 초파리(S2 Drosophila) 세포 또는 Sf9와 같은 곤충 세포, 또는 섬유아세포, CHO 세포, COS 세포, NSO 세포, HeLa 세포, BHK 세포, HEK 293 세포, 인간 세포와 같은 동물 세포가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "동일성(identity)"은 두 개의 폴리펩티드 간 또는 두 개의 핵산 간의 서열 매칭을 지칭하는 데 사용된다. 비교 대상인 두 서열 상 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 하위 단위에 의해 점유되는 경우 (예를 들어, 두 DNA 분자 각각의 위치가 아데닌에 의해 점유되거나, 두 폴리펩티드 각각의 위치가 라이신에 의해 점유되는 경우), 각 분자는 해당 위치에서 동일하다. 두 서열 간의 "동일성 백분율(percent identity)"은 두 서열이 공유하는 일치하는 위치의 수를 비교된 위치의 수로 나누고 100을 곱한 값의 함수이다. 예를 들어, 두 서열의 경우, 10개의 위치 중 6개가 일치하면 상기 두 시퀀스의 동일성은 60%이다. 예를 들어, DNA 서열 CTGACT와 CAGGTT의 동일성은 50%이다 (총 6개 위치 중 3개 위치가 일치). 일반적으로, 비교는 최대 동일성을 위해 두 서열이 정렬(align)될 때 수행된다. 이러한 정렬은, 예를 들어, Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453의 방법을 사용하여 수행될 수 있으며, 이는 Align 프로그램(DNAstar, Inc.)과 같은 컴퓨터 프로그램을 통해 편리하게 수행될 수 있다. ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합된 E. Meyers와 W. Miller의 알고리즘(Comput. Appl Biosci., 4:11-17 (1988)) 도 사용할 수 있으며, 이 알고리즘은 갭 길이 페널티가 12이고 갭 페널티가 4인 PAM120 중량잔기표(weight residue table)을 사용하여 두 아미노산 서열 간의 동일성 백분율을 결정할 수 있다. 또한, GCG 소프트웨어 패키지 (www.gcg.com 에서 이용 가능)에 통합된 GAP 프로그램에서 Needleman과 Wunsch(J MoI Biol. 48:444-453 (1970))의 알고리즘이 사용될 수 있으며, 여기서 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치와 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 가진 Blossum 62 행렬 또는 PAM250 행렬을 사용하여 두 아미노산 서열 간의 동일성 백분율을 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "보존적 치환"은 아미노산 서열을 포함하는 단백질/폴리펩티드의 의도된 특성에 악영향을 미치거나 이를 변경하지 않는 아미노산 치환을 의미한다. 예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 및 PCR 매개 돌연변이 유발과 같이 당업계에 알려진 표준 기술을 통해 보존적 치환이 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 치환하는 것, 예를 들어 해당 아미노산 잔기와 물리적 또는 기능적으로 유사한 잔기로 치환하는 것 (예를 들어, 크기, 모양, 전하, 공유 결합 또는 수소 결합 형성 능력을 포함한 화학적 특성 등이 유사함)을 포함한다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 이러한 아미노산 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비전하 극성 측쇄 (예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β 분지 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 가진 아미노산 잔기들을 포함한다. 따라서, 해당 아미노산 잔기를 동일한 측쇄 패밀리의 다른 아미노산 잔기로 대체하는 것이 바람직하다. 아미노산의 보존적 치환을 식별하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999) 및 Burks et al. Proc. Natl Acad. Set USA 94:412-417 (1997), 본 명세서에 참조로 통합됨).
본 명세서에 언급된 20개의 기존 아미노산은 통상적인 용법에 따라 작성되었다. 예를 들어, 본 명세서에 참조로 포함되어 있는 Immunology-A Synthesis (제2판, E. S. Golub 및 D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))를 참고할 수 있다. 본 발명에서, "폴리펩티드"와 "단백질"이라는 용어는 동일한 의미를 가지며 상호 교환적으로 사용된다. 그리고 본 발명에서, 아미노산은 일반적으로 당업자에게 잘 알려진 한 글자 및 세 글자 약어로 표시된다. 예를 들어, 알라닌은 A 또는 Ala로 표시할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "키메라 항원 수용체(CAR)"는 T 세포 수용체의 하나 이상의 세포 내 신호 전달 도메인에 접합된 세포 외 항체 유래 표적 도메인 (예를 들어, scFv)을 갖는 조작된 T 세포 수용체를 지칭한다. 본 발명에서, 용어 "키메라 항원 수용체 T 세포"는 CAR를 발현하고 CAR의 표적 도메인에 의해 결정되는 항원 특이성을 갖는 T 세포를 의미한다. CAR (예를 들어, 암 치료용)를 생산하는 방법은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어, Park et al., Trends Biotechnol., 29: 550-557, 2011; Grupp et al., NEnglJMed., 368: 1509-1518, 2013; Han et al., J. Hematol Oncol., 6: 47, 2013; PCT 특허 공보 WO2012/079000, WO2013/059593; 및 미국 특허 공보 2012/0213783 등을 참고 할 수 있으며, 이 모든 내용은 전체적으로 본 명세서에 참조로 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제"는 대상체 및 활성 성분(active ingredient)과 약리학적 및/또는 생리적으로 상용되는 담체 및/또는 부형제를 의미한다. 이는 당업계에 잘 알려져 있고 (예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences. Edited by Gennaro AR, 제19판. Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1995 참조), pH 조절제, 계면활성제, 보조제, 이온강도 강화제, 희석제, 삼투압 유지제, 흡수 지연제, 방부제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, pH 조절제에는 인산염 완충액이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 계면활성제는 양이온성, 음이온성 또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 Tween-80을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이온강도 강화제는 염화나트륨을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 방부제는 p-하이드록시 벤조에이트 에스터, 클로레톤(chloretone), 페놀, 소르빈산 등과 같은 다양한 항균 및 항진균제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 삼투압 유지제에는 당, NaCl 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 흡수 지연제는 모노스테아레이트염과 젤라틴을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 희석제는 물, 수성 완충액 (예를 들어, 완충 식염수), 알코올 및 폴리올 (예를 들어, 글리세롤) 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 방부제는 티메로살, 2-페녹시에탄올, 파라벤, 클로레톤, 페놀, 소르빈산 등과 같은 다양한 항균 및 항진균제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 안정제는 당업자에게 일반적으로 이해되는 의미를 가지며, 약물에서 활성 성분의 원하는 활성을 안정화시킬 수 있는 것으로, 글루타민산나트륨, 젤라틴, SPGA, 당류 (예를 들어, 솔비톨, 만니톨, 전분, 자당, 유당, 글루칸 또는 포도당), 아미노산 (예를 들어, 글루탐산, 글라이신), 단백질 (예를 들어, 건조 유청, 알부민 또는 카제인) 또는 이의 분해 생성물 (예를 들어, 락트알부민 가수분해물) 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 예시적인 구현예에서, 상기 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제는 멸균 주사액(예를 들어, 수성 또는 비수성 현탁액 또는 용액)을 포함한다. 특정 예시적인 구현예에서, 이러한 멸균 주사액은 주사용수(WFI), 주사용 정균수(BWFI), 염화나트륨 용액 (예를 들어, 0.9% (w/v) NaCl), 덱스트로스 용액 (예를 들어, 5% 덱스트로스), 계면활성제 함유 용액 (예를 들어, 0.01% 폴리소르베이트 20), pH 완충 용액 (예를 들어, 인산염 완충 식염수), 링거 용액 및 이들의 임의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예방"은 대상체의 질병 또는 장애 또는 증상 (예를 들어, 종양)의 발생을 예방하거나 지연시키기 위해 수행되는 방법을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 유익하거나 바람직한 임상 결과를 얻기 위해 수행되는 방법을 의미한다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 바람직한 임상 결과는 증상의 완화, 질병의 정도 감소, 질병 상태의 안정화 (즉, 악화되지 않음), 질병의 진행 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선 또는 완화, 감지 가능하거나 감지 불가능한 (일부 또는 전체) 증상의 완화를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, "치료"는 치료를 받지 않을 경우의 예상 생존 기간과 비교하여 생존 기간을 연장하는 것을 의미할 수도 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어"대상체(subject)"는 인간과 같은 영장류 포유류와 같은 포유동물을 의미한다. 특정 구현예에서, 대상체 (예를 들어, 인간)는 종양 (예를 들어, CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양)을 가지고 있거나 상기 질병에 걸릴 위험이 있는 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량(effective amount)"은 원하는 효과를 얻거나 적어도 부분적으로 얻기에 충분한 양을 의미한다. 예를 들어, 질병 (예를 들어, 종양)을 예방하기 위한 유효량은 질병 (예를 들어, 종양)의 발병을 예방, 억제 또는 지연시키기에 충분한 양을 의미하며; 질병을 치료하기 위한 유효량은 질병을 가진 환자의 질병 및 이의 합병증을 치료하거나 적어도 부분적으로 예방하기에 충분한 양을 의미한다. 이러한 유효량을 결정하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 예를 들어, 치료 용도를 위한 유효량은 치료하고자 하는 질병의 중증도, 환자 자신의 면역 체계의 전반적인 상태, 연령, 체중, 성별 등 환자의 전반적인 상태, 약물 투여 방식, 동시에 투여되는 다른 치료법 등에 따라 달라진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 이펙터 세포(immune effector cell)"는 조혈 기원(hematopoietic origin)을 가지며 면역 반응에서 기능하는 세포, 예를 들어, B 세포와 T 세포와 같은 림프구; 자연 살해 세포; 단핵구, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 호염기구 및 과립구와 같은 골수 세포;를 포함한다. 특정 바람직한 구현예에서, 면역 이펙터 세포는 T 세포이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "전이"는 암세포가 원래의 부위에서 신체의 다른 부위로 퍼지는 것을 의미한다. 전이의 형성은 매우 복잡한 과정이며, 원발성 종양(primary tumor)에서 악성 세포의 분리, 세포 외 기질 침입, 내피 기저막의 침투를 통한 체강 및 혈관으로의 침입, 및 혈액에 의한 운반 후 표적 장기의 후속 침윤에 따라 달라진다. 마지막으로는, 표적 부위에서 새로운 종양 (즉, 이차성 종양 또는 전이성 종양)의 성장은 혈관신생(angiogenesis)에 따라 달라진다. 종양 세포나 구성요소가 남아 전이 가능성을 키울 수 있기 때문에, 원발성 종양의 절제 후에도 종양 전이가 종종 발생한다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 용어 "전이"는 원발성 종양 및 국소 림프절 시스템으로부터의 전이와 관련된 "원격 전이(distant metastasis)"에 관한 것이다. 이차성 또는 전이성 종양의 세포는 원래 종양의 세포와 유사하다. 즉, 예를 들어 난소암이 간으로 전이된 경우, 이 이차성 종양은 (비정상적인 간 세포가 아닌) 비정상적인 난소 세포로 구성된다. 따라서, 이 때 간에서 발생한 종양을 전이성 난소암 (간암이 아님)이라고 한다.
본 발명의효과
종래 기술과 비교하여, 본 발명의 기술적 해결수단은 다음과 같은 유익한 효과를 갖는다:
본 발명의 항체는 CLDN6 및/또는 CLDN9를 특이적으로 인식/결합할 수 있으며, ADCC 및/또는 CDC를 통해 CLDN6를 발현하는 세포 (예를 들어, 종양 세포)의 사멸을 유도할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 종양 (특히 CLDN6을 발현하는 종양)의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있는 잠재력을 갖는다. 본 발명의 인간화 항체는 모항체(parent antibody)의 기능 및 특성을 유지할 뿐만 아니라 인간화 정도가 높아 면역원성 반응을 일으키지 않고 안전하게 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 특히, 본 발명의 항체는 CLDN 패밀리의 다른 단백질 (예를 들어, CLDN3 및 CLDN4)에는 거의 결합하지 않는다. 따라서, 본 발명의 항체 (특히 인간화 항체)는 임상적으로 큰 가치를 갖는다.
이하, 본 발명의 구현예를 도면 및 실시예를 참조하여 상세히 설명하되, 당업자는 하기 도면 및 실시예가 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니라 본 발명을 설명하기 위한 것임을 이해할 수 있을 것이다. 본 발명의 다양한 목적과 이점은 첨부된 도면과 바람직한 구현예에 대한 다음의 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백해질 것이다.
도 1은 각각 다른 세포 표면 CLDN 단백질에 대한 항-CLDN6 뮤린 항체 15H2의 결합 활성 검출 결과를 보여준다. 도 1의 A: CHOS-hCLDN6; 도 1의 B: CHOS-CLDN3; 도 1의 C: CHOS-CLDN4; 도 1의 D: CHOS-CLDN9.
도 2는 각각 다른 세포 표면 CLDN 단백질에 대한 항-CLDN6 뮤린 항체 9H3의 결합 활성 검출 결과를 보여준다. 도 2의 A: CHOS-hCLDN6; 도 2의 B: CHOS-CLDN3; 도 2의 C: CHOS-CLDN4; 도 2의 D: CHOS-CLDN9.
도 3은 인간화 항체 7008-01과 7008-03이 인간 CLDN6을 자연적으로 발현하는 4개의 종양 세포에 결합한 결과를 보여준다. 도 3의 A: OV90; 도 3의 B: NEC8; 도 3의 C: NTERA2; 도 3의 D: Bewo.
도 4는 인간 CLDN6을 자연적으로 발현하는 4개의 종양 세포에서 인간화 항체 7008-01 및 7008-03에 의해 유도된 이펙터 세포의 항체 의존적 세포 독성 결과를 보여준다. 도 4의 A: OV90; 도 4의 B: NEC8; 도 4의 C: NTERA2; 도 4의 D: Bewo.
도 5는 인간 CLDN6을 자연적으로 발현하는 NTERA2 종양 세포에 대해 인간화 항체 7008-01 및 7008-03에 의해 유도된 보체의 보체 의존적 세포 독성 효과를 실험한 결과를 보여준다.
도 6은 각각 다른 CLDN6 발현 종양 세포에 대한 핫스팟(hotspot) 돌연변이가 있는 항체의 결합 결과를 보여준다. 도 6의 A: 핫스팟 돌연변이가 있는 15H2 항체의 NEC8 결합 결과; 도 6의 B: 핫스팟 돌연변이가 있는 15H2 항체의 Bewo 결합 결과; 도 6의 C: 핫스팟 돌연변이가 있는 9H3 항체의 NEC8 결합 결과; 도 6의 D: 핫스팟 돌연변이가 있는 9H3 항체의 Bewo 결합 결과.
서열 정보
본 발명과 관련된 일부 서열에 대한 정보는 하기 표와 같다.
본 발명을 실시하기 위한 구체적인 모델
이하, 본 발명을 한정하는 것이 아니라, 본 발명을 예시하는 것을 목적으로 하는 하기 실시예를 참조하여 본 발명을 설명한다.
달리 명시되지 않는 한, 본 발명에 사용된 분자 생물학 실험 방법 및 면역 분석 방법은 기본적으로 J. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제2판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, 및 F. M. Ausubel et al., Molecular Biology Experimental Guide, 제3판, John Wiley & Sons, Inc., 1995에서 설명하는 방법을 참조하였다; 제한 효소는 제품 제조업체에서 권장하는 조건에 따라 사용되었다. 당업자는 실시예가 본 발명을 예시적으로 설명하는 것이며 청구된 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아님을 이해할 것이다.
실시예 1: 항-CLDN6 뮤린 항체의 생산
렌티바이러스 감염 방법 (MOI=3-10, 5μg/ml 폴리브렌)으로 각각 HEK293 세포 (ATCC)와 CHOS 세포 (Invitrogen)에 인간 CLDN6(hCLDN6) 또는 마우스 CLDN6(mCLDN6), 인간 CLDN3(CLDN3), 또는 인간 CLDN4(CLDN4) 또는 인간 CLDN9(CLDN9)를 과발현시켰다. 렌티바이러스는 상하이 제네켐(Shanghai Genechem Co., Ltd.)에서 제공되었다. 72 시간 감염 후, 상기 세포를 대응하는 항생제와 함께 2 내지 4주 배양하고 증폭 및 동결하여 총 9개의 세포주 (HEK293-hCLDN6, HKE293-mCLDN6, HEK293-CLDN3, HEK293-CLDN4, HEK293-CLDN9, CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4, 및 CHOS-CLDN9)를 얻어 후속 실험에 사용했다.
항-인간 CLDN6 항체를 얻기 위해, 인간 CLDN6를 과발현하는 제작된 CHOS-hCLDN6 세포를 사용하여 Balb/c 마우스 (베이징 Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, strain code: 216)에 면역주사하였다; 1차 면역접종을 위한 보조제는 완전한 프로인트 보조제 CFA (InvivoGen Company, Art. No.: vac-cfa-60)를 사용하였고, 이후 사용한 면역보조제는 모두 IFA (InvivoGen Company, Art. No.: vac-ifa-60)를 사용하였다; 면역접종 경로는 다지점 피하(multi-point subcutaneous) 경로였다. 다중 면역접종 후, 면역화된 마우스의 비장세포를 폴리에틸렌 글리콜 방법을 사용하여 마우스 골수종 세포 SP2/0과 융합시켜 항체를 발현하고 시험관 내에서 무한히 증식할 수 있는 B 세포 융합체(fusion)를 얻고 이를 HAT 선택 배양 배지에서 배양하였다. 융합된 하이브리도마 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 플레이팅하고, 세포 수준에서 CLDN3/4/6/9에 결합하는 상층액 중의 항체의 능력을 검출함으로써 관심있는 양성 클론 (CLDN6에 결합할 수 있고, CLDN3/4/9에는 결합하지 않는 항체; 동시에 CLDN6/9에는 결합할 수 있지만 CLDN3/4에는 결합하지 않는 항체)를 2-3 라운드의 서브클로닝을 위해 스크리닝하였다.
세포에 결합하는 마우스 항체 레벨에 대한 고처리량(high-throughput) 스크리닝: 스크리닝에서, 인간 CLDN3/4/6/9 (CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4, CHOS-CLDN9)을 발현하는 세포를 별도로 플레이팅하였다. 10,000개의 세포를 100 μL의 완전배지에 희석하고 바닥이 평평한 96-웰 플레이트를 사용하여 세포를 밤새 웰의 벽에 부착시키거나 웰 바닥에 가라앉힌 후 상층액을 다음날 제거하였다. 스크리닝할 하이브리도마 상층액 100 μL를 세포 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상층액을 제거한 후 2차 항체(secondary antibody) (DyLight488 염소 항-마우스 IgG(Abcam, Cat. No.: ab97015))를 각 웰에 100 μL 첨가하고, 농도는 5 μg/mL로 하여 실온에서 0.5시간 동안 인큐베이션하였다. 염색이 완료된 후, 상기 상층액을 버리고 DPBS 100 μL를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트는 판독을 위해 기계에 로딩되었다. 전체 필드 세포 스캐닝 분석기 (Nexcelom, 모델 Celigo® Image Cytometer)를 사용하여 실험 플레이트를 측정하고 판독했다. 측정 시 제2 항체에 상응하는 형광 채널과 명시야 채널을 동시에 선택하여 웰 내 세포의 고속 스캐닝 이미징을 수행했다. 형광 채널을 통해 이미징을 얻는 경우, 형광 라벨된 세포 형태 및 형광 강도의 설정 매개변수에 따라 항체에 결합된 세포를 계수한 반면, 명시야 채널을 통해 이미징을 얻는 경우, 부착된 세포를 세포 형태의 설정 매개변수에 따라 계수하고, 두 세트의 데이터를 나누어 총 세포 수에 대해 항체에 결합되어 형광을 나타내는 세포의 백분율을 구했다. 이 백분율에 따라, CLDN3/4/6/9를 발현하는 세포에 대한 융합 종양 상층액(fusion tumor supernatant) 내 항체의 결합 효과를 결정하였다.
CLDN3/4/6/9에 대한 마우스 항체 결합의 유세포 분석 평가: 500,000개의 CLDN6 발현 세포 (CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4, CHOS-CLDN9)를 FACS 완충액 (PBS+2% FBS)/웰에 넣고, 테스트할 마우스 항체를 첨가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 원심분리로 상층액이 제거되고, FACS 완충액으로 2회 세척한 후 2차 항체 (DyLight488 염소 항-마우스 IgG, Abcam, Cat. No.: ab97015) 를 첨가하고 4℃에서 0.5시간 동안 인큐베이션하였다. 염색 후, 원심분리로 상층액이 제거되고, FACS 완충액으로 2회 세척된 후, 세포는 FACS 완충액으로 재현탁된 후 판독을 위해 기계에 로딩되었다. 유세포 분석기(BD사, 모델 CantoII)가 사용되어 실험 세포를 측정하고 판독했다. 측정시, 먼저 FCS와 SSC에 따라 세포의 위치를 파악한 후, 제2 항체와 SSC에 해당하는 형광 채널을 선택하여 세포를 분석하였다.
CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4 및 CHOS-CLDN9에 결합하는 뮤린 항체 15H2의 결과를 도 1에 나타내었다. 도면에 나타난 바와 같이, 동종형 대조군 항체 ISO (Beyotime, CatA7028)는 CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4, CHOS-CLDN9 세포에는 결합하지 못한 반면, 항체 15H2는 CHOS-hCLDN6 세포에 결합할 수 있었으며, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4 및 CHOS-CLDN9 세포에는 거의 결합하지 않았다; CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4 및 CHOS-CLDN9에 결합하는 뮤린 항체 9H3의 결과를 도 2에 나타내었다. 도면에 나타난 바와 같이, 동종형 대조군 항체 ISO는 CHOS-hCLDN6, CHOS-CLDN3, CHOS-CLDN4, CHOS-CLDN9 세포에는 결합하지 못한 반면, 항체 9H3은 CHOS-hCLDN6 및 CHOS-CLDN9 세포에 결합할 수 있었으며, CHOS-CLDN3 및 CHOS-CLDN4 세포에는 거의 결합하지 않았다.
실시예 2: 항-CLDN6 뮤린 항체의 가변 영역 서열 결정
하이브리도마 세포를 원심분리하여 수집하고, 5~10Х106 세포당 TRIzol 1ml와 클로로포름 0.2ml를 첨가하고 15초 동안 세게 흔든 후 실온에서 3분간 방치한 후 원심분리하여 수상(aqueous phase)을 채취하고 이소프로판올 0.5ml를 첨가하고 실온에서 10분간 방치한 후, 침전물을 모아 에탄올로 세척하고 건조하여 RNA를 얻었다. 빙욕(ice-bath)에 있는 냉각된 원심분리관에 주형 RNA(template RNA)와 프라이머를 넣고, 프라이머와 주형이 정확하게 짝을 이룬 후 역전사 과정을 진행한 후 PCR 증폭을 진행했다. 2.5μl의 dNTP/ddNTP 혼합물을 4개의 마이크로원심분리관 각각에 첨가하고, 나중에 사용하기 위해 혼합물을 37℃에서 5분간 배양했다. 빈 마이크로원심분리관에 PCR 증폭 이중나선 DNA 1 pmol, 시퀀싱 프라이머 10 pmol, 5X 시퀀싱 완충액 2 μl를 넣고 총 부피가 10 μl가 되도록 2차 증류수를 넣어, 96℃에서 8분간 가열한 후, 빙욕에서 1분간 식힌 후, 4℃, 10000g에서 10초간 원심분리하였다. 사전 냉각된 라벨링 혼합물 (dCTP, dGTP, dTTP, 각 0.75μmol/L) 2μl, 0.1mol/L DDT 1μl, 2U 시퀀스 효소를 첨가하고, 15μl가 되도록 물을 첨가하여 잘 섞은 후 새로 합성된 DNA 가닥을 라벨링하기 위해 얼음 위에 2분 동안 두었다. 3.5 μl의 라벨링 반응 혼합물은 준비된 4개의 미세원심분리관에 첨가되고 37℃에서 5분간 인큐베이션한 후 4 μl의 정지 용액(stop solution)이 각 튜브에 첨가되었다. 상기 샘플을 80℃ 수욕에서 5분 동안 열 변성시킨 후 시퀀싱 겔에 각 레인당 2μl씩 첨가하고 전기영동으로 단편을 분리하여 서열 정보를 수집했다.
2개의 뮤린 항체의 VH 및 VL 서열은 표 1과 같다. 더 나아가, 2개의 뮤린 단일 클론 항체의 CDR 서열은 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정되었다.
[표 1]: 뮤린 항체들의 서열 정보
실시예 3: 키메라 항-CLDN6 항체의 재조합 발현
항체 유전자 서열을 확인한 후, 마우스 항체의 가변영역을 인간 항체 (인간 IgG1)의 불변영역에 연결하고, 항체 유전자가 포함된 발현 플라스미드를 포유동물 세포에 형질감염시켰다. 항체 클론을 포함한 배양 플라스크에서 배양한 포유동물 세포의 상층액을 회수하고, 단백질 A 컬럼으로 정제한 후, pH 3.0에서 100mM 아세트산을 이용하여 항체 단백질을 용출시켰다. 이어서 정제된 항체 단백질을 추가 분리 및 정제를 위해 크기 배제 크로마토그래피 컬럼에 로딩했다. 단량체에 해당하는 항체 단백질을 20% 글리세롤이 보충된 PBS 완충액에 제제화했다.
실시예 4: 마우스 항-인간 CLDN6 항체의 인간화 및 번역 후 변형 핫스팟 돌연변이
후보 항체와 인간 항체 사이의 서열 상동성을 높이고 인간에 대한 항체의 면역원성을 감소시키기 위해, 상기 실시예에서 제조된 뮤린 항체를 인간화 항체로 설계하고 제조할 수 있으며, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 뮤린 CDR 영역을 인간 프레임워크 서열에 삽입할 수 있다 (Winter, 미국 특허 제5,225,539호; Queen et al., 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호; 및 Lo, Benny, K.C., editor, in Antibody Engineering: Methods and Protocols, 248권, Humana Press, 뉴저지, 2004 참조).
구체적으로, 뮤린 항체 15H2 및 9H3의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역은 각각 해당 인간화 주형의 FR 프레임워크 상에 구축되었으며, 인간화 주형의 FR 영역 내 아미노산 잔기의 일련의 역 돌연변이(back mutation)가 수행되어, 인간화 항체가 뮤린 항체의 항원 결합 능력을 최대한 유지하도록 하였다.
동시에, 15H2 HCDR2의 아스파르테이트 이성질화 핫스팟 DG, 9H3 HCDR2의 아스파르테이트 이성질화 핫스팟 DG, 9H3 LCDR1의 탈아미노화 핫스팟 NG 등의 뮤린 항체의 CDR 영역에서 가능한 번역 후 변형 핫스팟(post-translational modification hotspots, PTM hotspot)을 고려하여, 이러한 핫스팟은 당업계에 알려진 방법에 의해 돌연변이되었다. 예를 들어, 아스파르테이트 이성질화 핫스팟 DG의 D가 E/S/G 등으로 돌연변이되거나, DG의 G가 A/S/D 등으로 돌연변이되거나, 탈아미노화 핫스팟 NG의 N이 Q/S/A로 돌연변이되거나 또는 NG의 G가 A/S/D 등으로 돌연변이되었다. 위에 언급된 돌연변이의 대부분은 CLDN6 발현 세포에 결합하는 항체의 능력을 변화시키지 않거나(예를 들어, 15H2 HCDR2 DG는 EG/SG/GG로 돌연변이되었고; 9H3 LCDR1 NG는 QG/NA/SG로 돌연변이되었고; 9H3 LCDR1 NG가 QG로 돌연변이되었고 동시에 HCDR2 DG가 DA로 돌연변이 됨), 3회 이내에 변경됨 (9H3 LCDR1 NG가 NA로 돌연변이 되었고 동시에 HCDR2 DG가 DA로 돌연변이됨; 9H3 LCDR1 NG가 SG로 돌연변이 되었고 동시에 HCDR2 DG는 DA로 돌연변이됨)이 실험에 의해 확인되었다. 도 6의 A 및 B는 CLDN6 발현 종양 세포 NEC8/Bewo에 결합하는 15H2의 일부 핫스팟 돌연변이 항체의 결과를 보여주고, 도 6의 C 및 D는 CLDN6 발현 종양 세포 NEC8/Bewo에 결합하는 9H3의 일부 핫스팟 돌연변이 항체의 결과를 보여준다.
상기 방법에 따라, 본 발명자들은 뮤린 항체 15H2와 뮤린 항체 9H3의 일련의 인간화 핫스팟 돌연변이 항체를 제조하고, CLDN6 발현 세포에 결합하는 능력을 스크리닝한 뒤, 각 마우스 항체에 대해 7008-01 (이의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 SEQ ID NO: 19 및 20에 명시됨) 및 7008-03 (이의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 SEQ ID NO: 9 및 10에 명시됨)으로 명명되는, 하나의 인간화 항체와 하나의 핫스팟 돌연변이 항체가 있는 것이 바람직했다. 각 항체에 대해 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 21에 기재되어 있고, 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 22에 기재되어 있다.
실시예 5: 인간화 항-CLDN6 항체의 항원 결합 활성 평가
500,000개의 CLDN6-자연(CLDN6-naturally) 발현 종양 세포 (OV90, ATCC; NEC8, JCRB; NTERA2, Nanjing Cobioer Biosciences Co., Ltd; Bewo, Nanjing Cobioer Biosciences Co., Ltd)를 나중에 사용하기 위해 FACS 완충액에 넣었으며, 여기에는 둥근 바닥 저 흡수성 96-웰 플레이트(round-bottom low-adsorption 96-well plates)가 사용되었다. 항체 샘플을 FACS 완충액으로 연속 희석하였다. 희석된 항체를 세포 플레이트에 첨가하고, 상응하는 음성 대조군 웰에 FACS 완충액을 첨가한 후 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 원심분리하여 상층액을 제거한 후, FACS 완충액으로 2회 세척한 후 2차 항체(DyLight488 염소 항-인간 IgG, Abcam, Cat. No.: ab97003) 를 각 웰에 첨가하고 4℃에서 0.5시간 동안 인큐베이션하였다. 염색 후 원심분리로 상층액을 제거하고 FACS 완충액으로 2회 세척한 후, 각 웰에 FACS 완충액을 첨가하여 세포를 재현탁시킨 후 판독을 위해 기계에 로딩하였다. 유세포 분석기 (BD사, 모델 CantoII)가 실험 플레이트의 세포를 측정하고 판독하는데 사용되었다. 측정 시 먼저 FCS와 SSC에 따라 세포의 위치를 파악한 후, 제2 항체와 SSC에 해당하는 형광 채널을 선택하여 세포를 분석하였다. 데이터 분석에 GraphPad가 사용되었고, 가로축은 항체 농도의 로그값을, 세로축은 평균 형광강도 값을 사용하였다. 곡선도표에 따라, 항-CLDN6 항체의 EC50이 피팅(fitting)되었다.
인간 CLDN6을 자연적으로 발현하는 4개의 종양 세포 (OV90/NEC8/NTERA2/Bewo)에 결합하는 인간화 항체 7008-01 및 7008-03의 결과를 도 3에 나타내었다. 표 2는 종양 세포에 결합하는 두 항체의 EC50 및 최대 결합 값(Top MFI)을 보여준다. 결과는 인간화 항체 7008-01 및 7008-03이 막 표면 CLDN6에 대해 우수한 결합 활성을 가짐을 보여주었다.
[표 2]. CLDN6-양성 종양 세포에 대한 항체 결합 결과
실시예 6: 항체-유도 ADCC(항체 의존적 세포독성(Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity))의 효과
CLDN6-자연 발현 종양 세포 (OV90, ATCC; NEC8, JCRB; NTERA2, Nanjing Kebai Bio; Bewo, Nanjing Kebai Bio)를 표적 세포로 사용하였고, 자체 제작하고 안정적으로 형질감염된 CD16 수용체 및 NFAT (활성화된 T 세포의 핵 인자(Nuclear Factor of Activated T-cells)) 반응 요소가 포함된 Jurkat-NFAT-Luc-CD16 세포주가 이펙터 세포로 사용되었다. 실험은 96-웰 편평 바닥 세포 플레이트 (Corning 3903)에서 수행되었다. 연속적으로 희석된 항체를 표적 세포에 첨가하고 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 표적 세포 10,000개당 이펙터 세포 60,000개를 첨가하고, 37℃에서 4-6시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 형광 발색을 위해 One-GloTM 시약(Promega, E6110)을 첨가하였고, 세포 플레이트의 발광값(luminescence values)을 측정하기 위해 Tecan Spark10 마이크로플레이트 판독기가 이용되었다. 데이터 분석은 GraphPad를 사용하였으며, 가로축은 항체 농도의 로그값이, 세로축은 대응하는 웰의 발광값이 사용되어, 곡선 도표를 피팅하여 항-CLDN6 항체의 항체 의존적 세포독성의 EC50이 계산되었다.
인간화 항체 7008-01 및 7008-03은 도 4에서 나타낸 것과 같이, 4개의 인간 CLDN6-자연 발현 종양 세포 (OV90/NEC8/NTERA2/Bewo)에 대한 이펙터 세포의 항체 의존성 세포독성을 유도하였다. 표 3은 서로 다른 종양 세포의 ADCC에서 두 항체의 EC50 값과 최대값(Top Lum)을 보여준다. 이러한 결과는 인간화 항체 7008-01 및 7008-03 둘 다 이펙터 세포가 CLDN6을 발현하는 종양 세포를 사멸하도록 효과적으로 유도할 수 있음을 보여주었다.
[표 3]. CLDN6-양성 종양 세포에 대한 항체의 ADCC 효과
실시예 7: 항체-유도 CDC(보체 의존성 세포독성) 효과
CLDN6-자연 발현 종양 세포 NTERA2를 표적 세포로 사용하였다. 표적 세포를 EuTDA 세포독성 검출 키트의 BATDA 형광-강화 리간드 시약 (PerkinElmer, AD0116)과 ml당 1Х106개 세포의 비율로 미리 혼합하고 37°C에서 20분간 인큐베이션했다; 처리된 표적 세포 (5Х103)를 다양한 농도의 항체 및 보체 공급원인 인간 혈청 (TPCS, A515)과 1:8의 비율로 혼합하고, 96-웰 둥근 바닥 플레이트(Coring, GLS3799)에서 37℃로 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 96웰 둥근 바닥 플레이트의 상층액을 유로퓸 용액 (PerkinElmer, AD0116)이 첨가된 96-웰 평면 바닥 플레이트(Coring, Cat. No. 3903) 로 옮기고 실온에서 추가로 15분 동안 인큐베이션하였다. 다기능 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 에너지가 각 웰에서 세포 사멸 후 상층액으로 방출되는 형광 공여체(fluorescent donor)를 여기(excitation)시킨 다음 수용체로 전달한 후에 수용체에서 방출되는 방출광(emission light)을 측정하였다(여기: 320/340nm, 방출: 615nm).
세포독성은 다음 공식을 사용하여 계산되었다: 세포독성 백분율 = 100 Х [1 - (Max - Data)/(Max - Min)]
여기서, Data는 실험 값 (세포는 항체 및 보체와 함께 인큐베이션되었다), Min은 최소 세포독성, 즉 실험의 배경 값(세포는 배지 및 보체와 함께 인큐베이션되었다), Max는 최대 세포독성(세포는 용해물(lysate) 및 보체와 함께 인큐베이션되었다)이다. 데이터 분석은 GraphPad가 사용되었고, 가로축에는 항체 농도의 로그값이, 세로축에는 대응하는 웰의 형광값이 사용되었으며, 항-CLDN6 항체의 보체 의존적 세포독성 효과의 EC50이 곡선도표 피팅에 따라 계산되었다.
인간 CLDN6-자연 발현 NTERA2 종양 세포에 대한 보체의 인간화 항체 7008-01 및 7008-03 유도 보체 의존성 세포독성 효과는 도 5에 나타나 있다. 결과는 인간화 항체 7008-01 및 7008-03 둘 다 보체가 CLDN6을 발현하는 종양 세포를 사멸하도록 효과적으로 유도할 수 있음을 보여주었다.
실시예 8: 항-CLDN6 항체에 의해 매개되는 CLDN6 내재화(internalization)
본 실시예에서는 CLDN6의 항-CLDN6 항체 매개 내재화를 유세포 분석법으로 테스트했다. 항체에 의해 유발된 내재화와 시간 사이의 관계를 측정하기 위해 CLDN6-자연 발현 종양 세포 (OV90/Bewo)들이 37℃/4℃에서 서로 다른 시간 동안 10 μg/Ml의 항체와 함께 인큐베이션되었다. 2% FBS가 포함된 PBS로 여러 번 세척한 후 10 μg/mL의 2차 항체를 첨가하여 4℃에서 30분간 염색한 후 유세포 분석법으로 세포 내 CLDN6의 발현을 분석하였다.
MFI37은 37℃에서 인큐베이션된 샘플의 MFI였으며; MFI4는 4℃에서 인큐베이션된 샘플의 MFI로, 결합만 발생하고 세포내이입(endocytosis)은 발생하지 않았다. MFI 배경(background)은 제2 항체만의 MFI였다. 항체 매개 세포 표면 CLDN6 세포내이입의 백분율은 다음 식으로 계산되었다:
내재화된 CLDN6의 백분율 = 100 - 100 Х (MFI4 - MFI37)/MFI4
결과는 표 4에 나타내었다. 인간화 항체 7008-01 및 7008-03은 종양 세포 표면에서 CLDN6의 내재화를 다양한 정도로 매개했다.
[표 4]: 종양 세포 표면 상의 항체 매개 CLDN6 내재화율(%)
본 발명을 실시하기 위한 구체적인 모델이 상세하게 설명되어 있지만, 당업자는 공개된 모든 교시들에 따라, 세부 사항들에 대해 다양한 수정 및 변경이 이루어질 수 있으며 이러한 변경은 모두 본 발명의 보호 범위 내에 속한다는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 전체 범위는 여기에 첨부된 청구범위 및 이의 임의의 등가물에 의해 제공된다.
SEQUENCE LISTING <110> SHANGHAI GENBASE BIOTECHNOLOGY CO., LTD. <120> ANTI-CLDN6 ANTIBODY AND USE THEREOF <130> IEC210075PCT <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 heavy chain variable region <400> 1 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Phe Ser Ile Ile Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Phe Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 light chain variable region <400> 2 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly 1 5 10 15 Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Thr 20 25 30 Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln 85 90 95 His Tyr Asn Ala Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 HCDR1 <400> 3 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr 1 5 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 HCDR2 <400> 4 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 HCDR3 <400> 5 Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 LCDR1 <400> 6 Gln Ser Leu Leu Asn Thr Asn Asn Gln Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 LCDR2 <400> 7 Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15H2 LCDR3 <400> 8 Gln Gln His Tyr Asn Ala Pro Arg Thr 1 5 <210> 9 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-03 heavy chain variable region <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Arg Asp Ala Ser Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Leu Gly Asp Asn Asp Arg Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-03 light chain variable region <400> 10 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Val His Val 20 25 30 Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 11 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 heavy chain variable region <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Leu Gly Asp Asn Asp Arg Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 light chain variable region <400> 12 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Val His Val 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 HCDR1 <400> 13 Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Gly 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 HCDR2 <400> 14 Ile Ser Arg Asp Gly Ser Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 HCDR3 <400> 15 Val Arg Leu Gly Asp Asn Asp Arg Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 LCDR1 <400> 16 Gln Ser Val Val His Val Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 LCDR2 <400> 17 Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9H3 LCDR3 <400> 18 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 19 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-01 heavy chain variable region <400> 19 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 20 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-01 light chain variable region <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Thr 20 25 30 Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln 85 90 95 His Tyr Asn Ala Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 21 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 heavy chain constant region <400> 21 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human kappa light chain constant region <400> 22 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-03 HCDR2 <400> 23 Ile Ser Arg Asp Ala Ser Tyr Thr 1 5 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-03 LCDR1 <400> 24 Gln Ser Val Val His Val Asn Ala Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 25 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 15H2 heavy chain variable region <400> 25 gatgtacagc ttcaggagtc aggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60 acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag 120 tttccaggaa acaaactgga atggatgggc tacataagct acgacggtag caataactac 180 aacccatctc tcaaaaatcg attctccatc attcgtgaca catctaagaa ccagtttttc 240 ctgaagttca attctgtgac tactgaggac acagctacat attactgcgc cagggggggg 300 tactactttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348 <210> 26 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 15H2 light chain variable region <400> 26 gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctggctatgt cagtaggaca gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta aatactaaca atcaaaagaa ctatttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180 gagtctgggg tccctgatcg cttcataggc agtggatctg ggacagattt cactcttacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gattacttct gtcaacaaca ttataacgct 300 cctcggacgt tcggtggagg caccaagctg gaaatcaaa 339 <210> 27 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 9H3 heavy chain variable region <400> 27 gaggtgcagc tggtggaatc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt atctatggca tgtcttgggt tcgccagagt 120 ccagacagga ggctggaatg ggtcgcaacc attagtcgtg atggtagtta cacctacttt 180 ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtat 240 ttgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagactgggt 300 gataacgaca ggggctatgc tatggactac tggggtcaag gaacttcagt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 28 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 9H3 light chain variable region <400> 28 gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagtgttgta catgttaatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaagg ctcctgatct acaaagtttc caaccgcttt 180 cctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaggatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300 cggacgttcg gtggaggcac caacctggaa atcaaa 336 <210> 29 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 7008-01 heavy chain variable region <400> 29 caggtgcagc tgcaggagag cggccccgga ctggtgaagc cctcagagac actgagcctg 60 acatgcacag tgagcggcta ctccattaca agcggctact actggaactg gatcagacag 120 ccccccggca agggcctgga atggatgggc tatatctcct acagcggcag caacaactac 180 aaccccagcc tgaagaacag ggtgaccatc tctcgcgaca cctccaagaa ccagttctcc 240 ctgaagctga gtagcgtgac tgccgctgac accgccgtgt actattgcgc cagaggcggc 300 tactacttcg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagc 348 <210> 30 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 7008-01 light chain variable region <400> 30 gacattgtga tgacccagag ccccgactcc ctggccgtga gcctgggaga aagagccacc 60 atcaactgca agagcagcca gagcctgctg aacaccaaca accagaaaaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg ccagcccccc aaactgctga tctacttcgc ctccacccgc 180 gagtccggcg tgcctgatag attctccggc agcggcagcg gcaccgactt caccctgact 240 atcagcagcc tgcaggctga ggacgtggcc gtgtacttct gccagcagca ttacaacgct 300 cccagaacct ttggaggagg caccaaggtg gaaatcaag 339 <210> 31 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 7008-03 heavy chain variable region <400> 31 gaggtgcagc tggtggagag cgggggggga ctggtgcagc caggaggaag cctgagactg 60 agctgtgccg ccagcgggtt tacatttagc atttatggga tgtcctgggt gagacaggcc 120 cccggaaaag gactggagtg ggtggctact atcagcagag acgctagcta cacctacttc 180 cccgattccg tgaagggcag attcacaatc agcagagata acgctaagaa cagcctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac acagccgtgt attactgcgt gaggctgggc 300 gacaacgata gaggatacgc catggactac tgggggcagg gaacactggt gaccgtgagc 360 agc 363 <210> 32 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding 7008-03 light chain variable region <400> 32 gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccctgggaca gcccgctagt 60 atcagctgca gaagcagcca gagcgtggtg cacgtgaacg ccaacacata tctggagtgg 120 tatcagcaga ggcctggaca gagccccaga ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180 ccaggcgtgc cagacagatt ctctggaagc ggcagcggaa cagactttac cctgaagatc 240 tccagagtgg aggccgagga cgtgggagtg tactactgct tccagggcag ccacgtgccc 300 agaacattcg gcggcggcac caaagtggag atcaaa 336 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 7008-01 HCDR2 <400> 33 Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asn 1 5

Claims (32)

  1. CLDN6에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 4 또는 33, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가);을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 4에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하거나,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 33에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체(rearranged antibody) 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 4, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가);을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 4에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제2항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열;
    (ⅱ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅲ) SEQ ID NO: 1에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
    및/또는
    (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열;
    (ⅴ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅵ) SEQ ID NO: 2에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열; 을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 2에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 3, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 33, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 5, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 6, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 7, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 8, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 3에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 33에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 5에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 6에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 7에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 8에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은
    (a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열;
    (ⅱ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅲ) SEQ ID NO: 19에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
    및/또는
    (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열;
    (ⅴ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅵ) SEQ ID NO: 20에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열; 을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 20에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. CLDN6 및/또는 CLDN9에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 14 또는 23, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 16 또는 24, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가);을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 16에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하거나,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 24에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 14, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 16, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 16에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열;
    (ⅱ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅲ) SEQ ID NO: 11에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
    및/또는
    (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열;
    (ⅴ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅵ) SEQ ID NO: 12에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열; 을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 11에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 12에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제6항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기 3 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR1: SEQ ID NO: 13, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅱ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR2: SEQ ID NO: 23, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅲ) 다음의 서열로 이루어진 VH CDR3: SEQ ID NO: 15, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가);
    및/또는
    (b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR1: SEQ ID NO: 24, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가),
    (ⅴ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR2: SEQ ID NO: 17, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가), 및
    (ⅵ) 다음의 서열로 이루어진 VL CDR3: SEQ ID NO: 18, 또는 이와 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가);을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 카바트(Kabat), IMGT 또는 코티아(Chothia) 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 (ⅰ) 내지 (ⅵ) 중 어느 하나에 기재된 CDR은 IMGT 넘버링 체계에 따라 정의되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    하기 3개의 중쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 13에 명시된 서열을 갖는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23에 명시된 서열을 갖는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 15에 명시된 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
    하기 3개의 경쇄 CDR:
    SEQ ID NO: 24에 명시된 서열을 갖는 VL CDR1, SEQ ID NO: 17에 명시된 서열을 갖는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 18에 명시된 서열을 갖는 VL CDR3;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간-유래 프레임워크 영역 서열 (예를 들어, 인간 면역 글로불린의 FR 서열)을 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 인간 면역 글로불린은 인간 재배열 항체 서열 또는 인간 생식선 항체 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제9항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH):
    (ⅰ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열;
    (ⅱ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅲ) SEQ ID NO: 9에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;
    및/또는
    (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL):
    (ⅳ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열;
    (ⅴ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열과 비교하여 한 개 또는 여러 개의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 서열 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가); 또는
    (ⅵ) SEQ ID NO: 10에 명시된 서열과 비교하여 서열 동일성이 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%인 서열;을 포함하고,
    바람직하게는, 상기 (ⅱ) 또는 (ⅴ)에 기재된 치환은 보존적 치환이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 9에 명시된 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 10에 명시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은
    (a) 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체의 중쇄 불변 영역(CH)으로서, 상기 변이체는 그것이 유래된 야생형(wild-type) 서열과 비교하여 한 개 이상의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가 (예를 들어, 최대 20개, 최대 15개, 최대 10개 또는 최대 5개 아미노산의 치환, 결실 또는 추가; 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 치환, 결실 또는 추가)된 것인, 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체 중쇄 불변 영역(CH); 및
    (b) 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체의 경쇄 불변 영역(CL)으로서, 상기 변이체는 그것이 유래된 야생형 서열과 비교하여 최대 20개의 아미노산이 보존적 치환 (예를 들어, 최대 15개, 최대 10개 또는 최대 5개 아미노산의 보존적 치환; 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산의 보존적 치환)된 것인, 인간 면역글로불린 또는 이의 변이체의 경쇄 불변 영역(CL);을 더 포함하고,
    바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 IgGl, IgG2, IgG3 또는 IgG4 중쇄 불변 영역과 같은 IgG 중쇄 불변 영역이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21에 명시된 중쇄 불변 영역(CH)을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 경쇄 불변 영역은 κ 또는 λ 경쇄 불변 영역이고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 22에 명시된 경쇄 불변 영역(CL)을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 또는 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', (Fab')2, Fv, 다이설파이드-결합 Fv, scFv, 디아바디(diabody) 및 단일 도메인 항체(sdAb)로 이루어진 군으로부터 선택되고/되거나;
    상기 항체는 뮤린(murine) 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 이중 특이적 항체 또는 다중 특이적 항체인 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 라벨(label)을 포함하고; 바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 효소 (예를 들어, 호스래디쉬 과산화효소), 방사성핵종, 형광염료, 발광물질 (예를 들어, 화학 발광물질) 또는 비오틴과 같은 검출가능한 라벨을 포함하는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는, 분리된 핵산 분자.
  15. 제14항에 기재된 분리된 핵산 분자를 포함하는, 벡터로서, 바람직하게는, 상기 벡터는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터인, 벡터.
  16. 제14항에 기재된 분리된 핵산 분자 또는 제15항에 기재된 벡터를 포함하는 숙주세포.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은, 제16항에 기재된 숙주세포를 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 발현될 수 있는 조건 하에서 배양하고, 배양된 숙주세포의 배양액으로부터 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
  18. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자로서,
    바람직하게는, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자는 CLDN6에 특이적으로 결합하고 추가로 하나 이상의 다른 표적에 특이적으로 결합하며;
    바람직하게는, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자는 제2 표적에 대해 제2 결합 특이성을 갖는 적어도 하나의 분자 (예를 들어, 제2 항체)를 더 포함하는, 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자.
  19. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합된 치료제를 포함하는, 면역접합체로서,
    바람직하게는, 상기 치료제는 세포독성 제제로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 치료제는 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성핵종 제제, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    바람직하게는, 상기 면역접합체는 항체-약물 접합체(ADC)인, 면역접합체.
  20. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제18항에 기재된 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 제19항에 기재된 면역접합체와 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는, 약학 조성물로서,
    바람직하게는, 상기 약학 조성물은 추가적인 약리 활성제를 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 추가적인 약리 활성제는 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성 핵종 제제, 방사선 민감물질, 항혈관신생제, 사이토카인, 분자 표적 약물, 면역 체크포인트 억제제 또는 종양 용해 바이러스와 같은 항종양 활성을 가진 약물이며;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자 또는 상기 면역접합체와 상기 추가적인 약리 활성제가 별도의 구성요소로 제공되거나 동일한 조성물의 구성요소로 제공되는 것인, 약학 조성물.
  21. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 키트로서,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 효소 (예를 들어, 호스래디쉬 과산화효소), 방사성핵종, 형광 염료, 발광 물질 (예를 들어, 화학발광 물질) 또는 비오틴과 같은 검출가능한 라벨을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 키트는 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 특이적으로 인식하는 제2 항체를 추가로 포함하며;
    바람직하게는, 상기 제2 항체는 효소 (예를 들어, 호스래디쉬 과산화효소), 방사성핵종, 형광염료, 발광물질 (예를 들어, 화학발광 물질) 또는 비오틴과 같은 검출가능한 라벨을 더 포함하는 것인, 키트.
  22. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체로서,
    바람직하게는, 상기 항원 결합 도메인은 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 항원 결합 도멘인은 scFv이며;
    바람직하게는, 상기 키메라 항원 수용체는 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 항원 결합 단편을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 키메라 항원 수용체는 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포)에 의해 발현되는 것인, 키메라 항원 수용체.
  23. 제22항에 기재된 키메라 항원 수용체를 암호화하는, 분리된 핵산 분자.
  24. 제23항에 기재된 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터로서, 바람직하게는, 상기 벡터는 키메라 항원 수용체 T 세포의 제조에 사용되는 것인, 벡터.
  25. 제23항에 기재된 분리된 핵산 분자 또는 제24항에 기재된 벡터를 포함하는, 숙주세포로서,
    바람직하게는, 상기 숙주세포는 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)이고;
    바람직하게는, 상기 숙주세포는 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T)인, 숙주세포.
  26. 세포 표면의 CLDN6 및/또는 CLDN9의 발현을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은, 상기 세포를 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18항에 기재된 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 제19항에 기재된 면역접합체, 또는 제20항에 기재된 약학 조성물, 또는 제22항에 기재된 키메라 항원 수용체, 또는 제25항에 기재된 숙주세포와 접촉시켜 상기 세포 표면의 CLDN6 및/또는 CLDN9 발현을 감소시키는 것을 포함하고; 여기서, 상기 세포는 세포 표면에서 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하며;
    바람직하게는, 상기 세포는 CLDN6 및/또는 CLDN9을 발현하는 종양세포인 것인, 방법.
  27. CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양세포의 성장을 억제하고/하거나 상기 종양세포를 사멸시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 종양세포를 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18항에 기재된 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 제19항에 기재된 면역접합체, 또는 제20항에 기재된 약학 조성물, 또는 제22항에 기재된 키메라 항원 수용체, 또는 제25항에 기재된 숙주세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  28. 대상체(subject), 예를 들어, 인간의 종양을 예방 및/또는 치료하는 방법으로서, 상기 방법은,
    유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18항에 기재된 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 제19항에 기재된 면역접합체, 또는 제20항에 기재된 약학 조성물, 또는 제22항에 기재된 키메라 항원 수용체, 또는 제25항에 기재된 숙주세포를 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하고;
    바람직하게는, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하며;
    바람직하게는, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양세포를 포함하고; 바람직하게는, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9은 상기 종양세포의 표면에 발현되며;
    바람직하게는, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 (예를 들어, 위암 전이, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 대상체는 인간과 같은 포유류이며;
    바람직하게는, 상기 방법은 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성핵종 제제, 방사선 민감물질, 항혈관신생제, 사이토카인, 분자 표적 약물, 면역 체크포인트 억제제 또는 종양 용해 바이러스와 같은 항암활성이 있는 추가적인 약물을 투여하는 단계를 더 포함하고;
    바람직하게는, 상기 방법은 수술, 화학요법, 방사선 요법, 표적 요법, 면역 요법, 호르몬 요법, 유전자 요법 또는 완화 요법과 같은 추가적인 항종양 요법(antineoplastic therapy)을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  29. 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18항에 기재된 이중 특이적 또는 다중 특이적 분자, 또는 제19항에 기재된 면역접합체, 또는 제20항에 기재된 약학 조성물, 또는 제22항에 기재된 키메라 항원 수용체, 또는 제25항에 기재된 숙주세포의 용도로서, 상기 약제는 대상체, 예를 들어, 인간의 종양 예방 및/또는 치료를 위해 사용되고;
    바람직하게는, 상기 약제는 추가적인 약리 활성제를 더 포함하며;
    바람직하게는, 상기 추가적인 약리 활성제는 알킬화제, 유사분열 억제제, 항암항생제, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 방사성 핵종 제제, 방사선 민감물질, 항혈관신생제, 사이토카인, 분자 표적 약물, 면역 체크포인트 억제제 또는 종양 용해 바이러스와 같은 항종양 활성을 가진 약물이고;
    바람직하게는, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하며;
    바람직하게는, 상기 종양은 CLDN6 및/또는 CLDN9를 발현하는 종양세포를 포함하고; 바람직하게는, 상기 CLDN6 및/또는 CLDN9은 상기 종양세포의 표면에 발현되며;
    바람직하게는, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 - 예를 들어, 위암 전이, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이 - 로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    바람직하게는, 상기 대상체는 인간과 같은 포유류인 것인, 용도.
  30. 샘플에서 CLDN6 및/또는 CLDN9 (예를 들어, 인간 CLDN 및/또는 인간 CLDN9)의 존재 또는 양을 검출하는 방법으로, 상기 방법은,
    (1) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 상기 샘플과 접촉시키는 단계; 및
    (2) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN6 및/또는 CLDN9를 포함하는 복합체의 형성을 검출하거나, 또는 상기 복합체의 양을 검출하는 단계;를 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함하며;
    바람직하게는, 상기 CLDN6는 인간 CLDN6이고;
    바람직하게는, 상기 CLDN9는 인간 CLDN9인 것인, 방법.
  31. 종양이 CLDN6 및/또는 CLDN9를 표적으로 하는 항-종양 요법으로 치료될 수 있는지 여부를 결정하는 방법으로, 상기 방법은,
    (1) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 상기 종양의 세포를 포함하는 샘플과 접촉시키는 단계; 및
    (2) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN6 및/또는 CLDN9를 포함하는 복합체의 형성을 검출하는 단계;를 포함하고,
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함하며;
    바람직하게는, 상기 CLDN6는 인간 CLDN6이고;
    바람직하게는, 상기 CLDN9는 인간 CLDN9이며;
    바람직하게는, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 - 예를 들어, 위암 전이, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이 - 로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  32. 키트의 제조에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도로서, 상기 키트는 종양이 CLDN6 및/또는 CLDN9를 표적으로 하는 항-종양 요법으로 치료될 수 있는지 여부를 결정하는데 사용되고;
    바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 검출가능한 라벨을 포함하며;
    바람직하게는, 상기 CLDN6는 인간 CLDN6이고;
    바람직하게는, 상기 CLDN9는 인간 CLDN9이며;
    바람직하게는, 상기 종양은 난소암, 고환암, 위암, 자궁내막암, 폐암, 식도암, 췌장암, 기관지암, 유방암, 이비인후(ENT)암, 대장암, 간암, 두경부암, 담낭암 및 이의 전이 - 예를 들어, 위암 전이, 크루켄버그 종양, 복막 전이 또는 림프절 전이 - 로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 용도.
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