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KR20230019889A - Il-2 서열 및 이의 용도 - Google Patents

Il-2 서열 및 이의 용도 Download PDF

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KR20230019889A
KR20230019889A KR1020227046425A KR20227046425A KR20230019889A KR 20230019889 A KR20230019889 A KR 20230019889A KR 1020227046425 A KR1020227046425 A KR 1020227046425A KR 20227046425 A KR20227046425 A KR 20227046425A KR 20230019889 A KR20230019889 A KR 20230019889A
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KR
South Korea
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formula
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seq
group
moiety
Prior art date
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KR1020227046425A
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Inventor
니나 군나르손
마티스 말레키스
데이비드 비 로젠
Original Assignee
아센디스 파마 온콜로지 디비전 에이/에스
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Publication date
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Abstract

본 발명은 화학식 Ala - SEQ A - Cys* - SEQ B (I)의 IL-2 단백질 서열(여기서, SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94% 서열 동일성을 갖고; SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94% 서열 동일성을 갖고; Ala는 알라닌 잔기이고; Cys*는 시스테인 잔기임); 이의 접합체 및 암의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.

Description

IL-2 서열 및 이의 용도
본 발명은 화학식 Ala - SEQ A - Cys* - SEQ B (I)의 IL-2 단백질 서열(여기서, SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고; SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고; Ala는 알라닌 잔기이고; Cys*는 시스테인 잔기임); 이의 접합체 및 세포 증식 장애의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.
건강한 인간에서, 면역계는 대개 건강한 세포와 암성 세포 사이를 구별할 수 있다. 소정의 세포를 암성으로 확인 시, 면역계는 통상적으로 이를 제거한다. 그러나, 면역계가 예를 들면 급성 결함 또는 만성 결함으로부터 손상되거나 지배될 때, 암은 손상된 면역계가 암 세포를 구별하고 이후에 이를 제거하지 못하는 것으로부터 생겨 발생할 수 있다. 암을 겪는 환자에서, 환자에 대한 면역조절 단백질의 투여는 환자의 면역계를 활성화하는 것을 도울 수 있어서 암 세포를 제거하는 면역계의 능력은 향상된다. 바이러스 감염을 겪는 환자에서, 환자에 대한 면역조절 단백질의 투여는 환자의 면역계를 활성화하는 것을 도울 수 있어서 바이러스 감염을 제거하는 면역계의 능력은 향상된다. 유사하게, 건강한 환자에서도 백신에 대한 면역 반응은 이러한 면역 조절 단백질의 첨가에 의해 향상될 수 있다.
소정의 암을 겪는 환자의 치료에 사용된 하나의 이러한 면역조절 단백질은 인터류킨-2(IL-2)이다. IL-2는 면역 효과기 세포의 생성, 분화, 생존 및 항상성에서 중요한 역할을 한다. IL-2는 활성화된 CD4+ 헬퍼 T 세포에 의해 합성되고, 차등적 수용체 상호작용을 통해 IL-2는 면역력 또는 관용성을 향한 면역 반응을 조절한다.
IL-2는 IL-2 수용체(IL-2R)에 대한 결합에 의해 작용한다. α-(CD25), β-(CD122) 및 공통 γ-(γc, CD132) 아단위는 삼합체성 고친화도 IL-2R을 생성시킨다. 이합체 중간 친화도 IL-2Rβγ는 β-아단위 및 γ-아단위로 이루어지고, 50배 더 낮은 친화도로 IL-2에 결합한다. CD25는 IL-2 신호전달에 필요하지 않고, 삼합체 수용체의 높은 친화도 결합을 부여하는 반면, β-아단위 및 γ-아단위는 신호 전달을 매개한다. IL-2Rβγ는 NK 세포, 단핵구, 거대세포, γδ T 세포 및 휴지 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 발현되는 반면, IL-2Rαβγ는 활성화된 T 및 NK 세포에서 일시적으로 유도되고, T 조절 세포뿐만 아니라 2형 선천성 림프구 세포(ILC2), 호산구 및 내피 세포에서 구성적으로 발현된다. 선천성 및 적응성 효과기 세포를 확대하고 활성화하는 IL-2의 능력은 이의 항종양 활성의 기초이다.
환자에서, IL-2는 높은 용량(즉, 인간에서 사이클당 14 이하 용량에 매일 3회 600,000 내지 720,000 IU/kg)으로 주어질 때 효과기 T 및 NK 세포를 포함하는 세포독성 림프구의 증가를 특징으로 하는 종양 효능을 자극할 수 있다. 아마도 이 치료 동안 모든 T 세포는 고용량이 투여된 후 IL-2에 의해 자극되고, 치료 사이클이 종료될 때뿐만 아니라 임의의 개별 용량 및 IL-2 수준이 일부 점에서 떨어진 후 나중의 시점에 IL-2는 제한이 될 것이고, IL-2Rαβγ를 발현하는 T 조절(Treg) 세포는 남은 야생형 IL-2에 대한 IL-2Rβγ를 발현하는 효과기 T 세포를 능가할 것이다.
그러나, IL-2의 항종양 면역력은 심각한 심혈관 부작용, 폐 부작용, 간 부작용, 위장 부작용, 신경학적 부작용 및 혈액학적 부작용에 의해 용량 제한되어서, 특수 센터에서 환자에게 오직 주어진다. 많은 이들 부작용은 모세혈관 누출 증후군으로도 공지된 혈관 누출 증후군(VLS: vascular leak syndrome)을 특징으로 한다. VLS를 야기하는 몇몇 제안된 기전이 있고, 이들 중 많은 것은 IL-2와 IL-2Rαβγ 발현 세포, 예컨대 ILC2, 호산구 및 내피 세포 사이의 상호작용을 수반한다.
항종양 면역 반응을 유의미하게 향상시키는 효과기 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδ T 세포, 특히 Vγ9Vδ2 T 세포 및 NK 세포는 IL-2R의 IL-2Rβγ 형태를 우선적으로 발현한다. 이와 같이, IL-2Rβγ에 결합하고, 이에 대한 효능제인 화합물의 투여는 (예를 들면, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδ T 세포, 특히 Vγ9Vδ2 T 세포 및 NK 세포의 증식 및 효과의 활성을 증가시킴으로써) 종양에 대한 면역 반응을 향상시키는 것으로 기대될 수 있다.
이와 같이, 이렇게 하는 것이 폐 부종과 같은 전신 혈관 누출 부작용을 감소시켜서 개선된 치료학적 윈도우를 제공하는 것으로 기대되므로 (IL-2Rα에 대한 감소된 결합 또는 무결합 또는 IL-2Rβγ에 대한 향상된 결합을 갖는) IL-2Rβγ 선택적 효능제의 투여는 소정의 암을 겪는 환자에게 유리할 것이다.
IL-2Rβγ에 우선적으로 결합하는 이러한 바이어싱된 IL-2, 즉 IL-2 단백질을 합성하는 하나의 방식은 예를 들면 이것을 시스테인으로 대체함으로써 IL-2Rα에 대한 결합에 관여된 소정의 아미노산을 돌연변이시키는 것이다. 이러한 시스테인은 소정의 모이어티를 이것에 접합시키도록 선택적으로 사용될 수 있고, 이는 훨씬 더 비-IL-2Rα 결합을 향상시킬 수 있다.
그러나, 추가 시스테인에 의한 IL-2와 같은 단백질의 제조는 문제가 될 수 있는데, 왜냐하면 이러한 단백질이 응집하는 경향을 가질 수 있고, 이것이 충분한 품질 및 충분한 양으로 이러한 단백질의 적절한 원형재현을 보장하는 것이 어렵거나 불가능할 수 있기 때문이다.
따라서, 본 발명의 목적은 상기 언급된 단점을 적어도 부분적으로 극복하는 것이다.
이 목적은 화학식 (I)의 IL-2 단백질 서열에 의해 달성된다:
Ala - SEQ A - Cys* - SEQ B (I)
상기 식 중,
SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
Ala는 알라닌 잔기이고;
Cys*는 시스테인 잔기이다.
N 말단 알라닌 잔기의 첨가가 이러한 N 말단 알라닌이 없는 상응하는 IL-2 서열과 비교하여 이러한 IL-2 단백질이 예를 들면 포유류 발현 시스템 또는 효모 발현 시스템에서 가용성 단백질로서 발현될 때 수율을 상당히 개선하였다는 것이 놀랍게도 발견되었다. 별표로 표시된 시스테인은 유리 시스테인, 즉 티올이 디설파이드 결합의 일부가 아닌 것일 수 있거나, 이것은 디설파이드 브릿지를 통해 티올 포함 화합물, 예컨대 시스테인에 커플링될 수 있다.
화학식 (I)의 이러한 IL-2는 바이어싱된 IL-2일 수 있다.
본 발명 내에 하기와 같은 의미를 갖는 용어가 사용된다.
일반적으로, 용어 "인터류킨-2" 또는 "IL-2"는 바람직하게는 포유류 종, 더 바람직하게는 영장류 종 및 가장 바람직하게는 인간으로부터의 모든 IL-2 단백질뿐만 아니라, 림프구 생성, 생존 및 항상성에서 중요한 역할을 하는 것을 특징으로 하는 이들의 변이체, 유사체, 오솔로그, 동족체, 및 이의 유도체 및 단편을 지칭하고, 또한 IL-2의 자연 발생 변이체, 예를 들면 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "인터류킨-2" 및 "IL-2"는 화학식 (I)의 서열을 갖는 단백질을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "바이어싱된 IL-2"는 IL-2Rα에 대한 상기 바이어싱된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 바이어싱된 IL-2의 KD의 비가 IL-2Rα에 대한 서열 번호 15의 알데스류킨의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD의 비보다 큰 변형된 IL-2를 지칭한다. 이는 하기 식에 의해 기재된다:
Figure pct00001
상기 식 중,
Figure pct00002
여기서
"KD 바이어싱된 IL-2 대 IL-2Rα"는 IL-2Rα에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD이고,
"KD 바이어싱된 IL-2 대 IL-2Rβ"는 IL-2Rβ에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD이고,
"KD 알데스류킨 대 IL-2Rα"는 IL-2Rα에 대한 알데스류킨의 KD이고,
"KD 알데스류킨 대 IL-2Rβ"는 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD이다.
알데스류킨(서열 번호 15)은 하기 서열을 갖는다:
PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
IL-2Rα에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD, IL-2Rβ에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD, IL-2Rα에 대한 알데스류킨의 KD 및 IL-2Rβ의 알데스류킨의 KD를 결정하는 데 필요한 결합 친화도/동역학은 하기와 같이 Biacore 장치(GE Healthcare)에서 측정된 표면 플라스몬 공명(SPR)을 사용하여 평가될 수 있다: CM5(또는 대안적으로 C1 또는 CM4) 칩에서 인간 Fc 포획 표면은 항-인간 Fc 항체에 의한 공유 코팅에 의해 제조될 수 있거나, 대안적으로 단백질 칩이 사용된다. 다음에, IL-2Rβ-Fc 또는 IL2-Rα-Fc는 칩에서 부동화된다. 친화도/동역학 상수를 측정하기 위해, 분석물질의 연속 희석은 IL-2 화합물에 대해 예를 들면 1 nM 내지 2 μM 또는 30 nM 내지 500 nM에서 시작하여 이루어진다. 분석물질은 각각 예를 들면 2분 또는 3분일 수 있는 적합한 시간 동안, 예컨대 1분 내지 30분 동안 수용체 개질된 칩에 노출되고, 이후 예를 들면 10분일 수 있는 적합한 시간, 예컨대 2분 내지 60분 동안 세척될 수 있다. 연속 희석으로부터의 생성된 결합 곡선은 관찰된 반응 단위(R)를 결합 속도 상수 및 해리 속도 상수, ka 및 kd와 상관시키도록 1:1 동역학 모델로 적합화된다:
Figure pct00003
상기 식 중,
t는 시간이고;
C는 분석물질의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 능력이다.
해리 속도 및 결합 속도의 비는 동역학 1:1 모델을 통해 결정되면 평형 해리 상수 KD를 제공한다.
대안적으로, 희석 시리즈로부터의 생성된 결합 곡선은 분석물질 농도(C)에 대해 정상 상태 결합 수준(Req)의 선도로부터 1:1 상호작용에 대한 KD를 계산하는 1:1 정상 상태 상호작용 모델로 적합화된다:
Figure pct00004
상기 식 중,
Req는 정상 상태 결합 수준이고;
C는 분석물질의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 능력이다.
모든 계산 방법이 모든 바이어싱된 IL-2 분자에 가능하지 않을 수 있다고 이해된다. 예를 들면, 반응이 너무 빠르면, 1:1 동역학 모델을 사용하는 것이 가능하지 않을 수 있고, 1:1 정상 상태 상호작용 모델이 사용될 수 있다. 예를 들면, 평형이 얻어지지 않으면, 1:1 상호작용 모델을 사용하는 것이 가능하지 않을 수 있고, 1:1 동역학 모델이 사용될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "친화도"는 분자(예컨대, 수용체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예컨대, 리간드) 사이의 비공유 상호작용의 합의 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 것과 같은 "친화도"는 결합 쌍의 구성원 사이의(예컨대, 수용체와 리간드 사이의) 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 평형 해리 상수(KD)로 표시될 수 있고, 이는 평형 상태에서 측정된 해리 속도 상수 및 결합 속도 상수(각각 kd 및 ka)의 비이다. 이와 같이, 등가 친화도는 속도 상수의 비가 동일하게 있는 상이한 속도 상수를 포함할 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것을 포함하는 당해 분야에 공지된 잘 확립된 방법에 의해 측정될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "IL-2 수용체의 α-아단위" 및 "IL-2Rα"는 인간 CD25를 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "IL-2 수용체의 β-아단위" 및 "IL-2Rβ"는 인간 CD122를 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "IL-2 수용체의 γ-아단위" 및 "IL-2Rγ"는 인간 CD132를 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "패턴 인식 수용체 효능제"("PRRA: pattern recognition receptor agonist")는 면역 세포 활성화 및/또는 병원균 또는 손상 유도된 염증성 반응으로 이어지는 병원균 연관된 분자 패턴(PAMP: pathogen-associated molecular pattern) 또는 손상 연관된 분자 패턴(DAMP: damage-associated molecular pattern)을 인식하는 하나 이상의 면역 세포 연관된 수용체에 결합하고 이를 활성화하는 분자를 지칭한다. 패턴 인식 수용체는 선천성 면역계의 세포, 예컨대 단핵구, 거대세포, 수지상 세포(DC), 호중구 및 상피 세포뿐만 아니라, 적응 면역계의 세포에 의해 통상적으로 발현된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "세포독성제" 및 "화학치료제"는 동의어로 사용되고, 세포 파괴/사멸로 이어지는 세포 복제 또는 성장을 방지하는 세포에 독성인 화합물을 지칭한다. 세포독성제의 예는 화학치료제 및 독소, 예컨대 소분자 독소 또는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 및 합성 유사체 및 이의 유도체를 포함한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "면역 관문 억제제" 및 "면역 관문 길항제"는 동의어로 사용되고, 수용체 활성화 시 염증성 면역 세포를 억제하는 세포막 발현된 수용체를 통해 신호전달을 유도하는 리간드의 기능을 방해하고 이의 결합을 억제하는 화합물을 지칭한다. 이러한 화합물은 예를 들면 생물제, 예컨대 항체, 항체 단편, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, Fynomer®, 쿠니츠(Kunitz) 도메인 펩타이드, 모노바디, 나노CLAMP, 사이클릭 펩타이드, 펩타이드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체 또는 Nanobodies®, 단일 사슬 가변 단편(scFv), 이들 수용체 또는 소분자 억제제에 대한 자연 또는 변형된 리간드 또는 결합 파트너일 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "면역 활성화 효능제"는 세포막 발현된 관문 수용체를 직접적으로 또는 간접적으로 활성화하는 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "면역 활성화 수용체 효능제"는 활성화 또는 동시자극 수용체 활성화에 대한 면역 세포 기능을 자극하는 화합물을 지칭한다. 이러한 자극 수용체의 예는 CD3 아단위 CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ(CD247), T 세포 수용체(TCR) 아단위 TCRα, TCRβ, TCRγ 및 TCRδ, B 세포 수용체(BCR) 사슬 또는 신호전달 단위 CD79a 또는 CD79b, CD2, CD4, CD8, CD16, CD32a, CD64, CD27, CD28, CD134(OX40), CD137(41BB), CD244(2B4), CD278(ICOS), CD357(GITR), CRACC(CS1), LFA-1, NKG2D, NKG2C, NKp30, NKp46, NKp44, NKp80, NTB-A, 활성화 숏 폼 KIR(KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1), CD40, SIRP-β, 덱틴-1, 덱틴-2, TREM1, TREM2, ILT1, ILT6, ILT7, ILT8, LIR-6, MDL1, 및 면역티로신 수용체 기반 활성화 모티프(ITAM)를 사용하거나 PI3K, JAK/STAT, MyD88, IRF, NFKB 또는 JNK/AP1 경로를 통해 신호전달을 유도하는 다른 면역 수용체를 포함한다. 많은 다중특이적 약물은 면역 활성화 수용체 효능제의 유형이다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "다중특이적" 및 "다중특이적 약물"은 2개 이상의 상이한 항원에 동시에 결합하고, 표적 의존적 방식으로 길항제성, 효능제성 또는 특이적 항원 결합 활성을 매개할 수 있는 화합물을 지칭한다. 이 맥락에서, 용어 "동시에"는 시간적 또는 공간적 의존성을 지칭하지 않고, 단일 다중특이적 약물이 동일하거나 상이한 시점에 동일하거나 상이한 위치에서 2개 이상의 항원을 결합시킬 수 있다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "항체-약물 접합체"(ADC: antibody-drug conjugate)는 통상적으로 생물학적 활성 세포독성 페이로드에 연결된 항체, 방사선치료 또는 세포독성제를 종양 환경에 전달하도록 설계된 다른 약물로 이루어진 화합물을 지칭한다. ADC는 상당한 전신 독성 없이 종양 부담을 감소시키는 데 특히 효과적이고, 관문 억제제 항체에 의해 유도된 면역 반응의 유효성을 개선시키도록 작용할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "항체-아쥬반트 접합체"(AAC: antibody-adjuvant conjugate)는 직접적으로 또는 링커를 통해 생물학적 활성 아쥬반트에 연결된 항체로 이루어진 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "아쥬반트"는 항원에 대한 신체의 면역 반응을 향상시키는 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "볼트바디"는 (a) (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 모이어티, (b) 아쥬반트 모이어티, 및 (c) 에틸렌 글리콜 기 또는 글리신 잔기를 포함하는 링커를 포함하는 항체-아쥬반트 접합체를 지칭하고, 각각의 아쥬반트 모이어티는 링커를 통해 항체 모이어티에 공유 결합되고, 링커는 절단 가능하거나 절단 불가능할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "방사선핵종"은 세포 파괴/사멸로 이어지는 이온화 방사선을 방출하는 방사성 동위원소를 지칭한다. 종양 표적화 담체에 접합된 방사선핵종은 "표적화된 방사선핵종 치료제"라 칭해진다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "DNA 손상 보수 억제제"는 예를 들면 CHK1, CHK2, ATM, ATR 및 PARP와 같은 DNA 손상 보수 요소를 표적화하는 약물을 지칭한다. 소정의 암은 기존의 돌연변이 또는 경로 변경으로 인한 이들 경로의 표적화, 예컨대 합성 치사의 개념으로 인해 PARP 억제제에 대한 BRCA1 돌연변이된 환자 또는 상동성 재조합 경로 결핍 환자에 더 민감하다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "종양 대사 억제제"는 면역 세포 기능을 억제할 수 있는 대사 중간체를 생성하는 종양 환경에서 발현된 하나 이상의 효소의 기능을 방해하는 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "단백질 키나제 억제제"는 하나 이상의 단백질 키나제의 활성을 억제하는 화합물을 지칭한다. 단백질 키나제는 결국 단백질 기능을 조절할 수 있는 단백질을 인산화하는 효소이다. 단백질 키나제 억제제가 하나 초과의 키나제를 표적화 할 수 있고, 본원에 사용된 단백질 키나제 억제제에 대한 임의의 분류가 주요한 또는 가장 많이 규명된 표적을 지칭한다고 이해된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "케모카인 수용체 및 주화인자 수용체 효능제"는, 매우 다양한 세포에서 발현되고 세포 이동성(주화성 또는 화학운동성)을 조절하는 데 주로 관여된, 케모카인 또는 주화인자 수용체, G-단백질 결합 수용체 또는 G-단백질 결합 유사 수용체의 하위집단을 활성화하는 화합물을 지칭한다. 이들 수용체는 또한 비세포 이동 과정, 예컨대 혈관신생, 세포 성숙 또는 염증에 관여할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "사이토카인 수용체 효능제"는 면역 세포 활성화 및 증식을 조절하는 가용성 단백질을 지칭한다. 사이토카인은 예를 들면 인터페론, 인터류킨, 림포카인 및 종양 괴사 인자를 포함한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "사멸 수용체 효능제"는 하나 이상의 사멸 수용체, 예컨대 DR4(TRAIL-R1) 또는 DR5(TRAIL-R2)를 통한 아폽토시스촉진 신호전달을 유도할 수 있는 분자를 지칭한다. 사멸 수용체 효능제는 항체, 사멸 리간드, 사이토카인, 사멸 수용체 효능제 발현 벡터, 펩타이드, 소분자 효능제, 사멸 수용체 효능제를 발현하는 세포(예를 들면, 줄기 세포 등) 및 사멸 리간드의 발현을 유도하는 약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 CD4 T 세포 상의 T 세포 수용체로 MHC 클래스 II 분자를 통한 가공된 항원 펩타이드를 제시하는 거대세포, B 세포 또는 수지상 세포와 같은 세포를 지칭한다. APC는 유세포분석법과 같은 표현형 기법을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다. APC를 확인하기 위해 사용된 표현형 마카는 종 및 조직에 의해 변할 수 있지만, 골수성 또는 수지상 세포 표면 마커(예를 들면, CD11b, CD11c, CD14, CD16, CD33, CD34, CD68, CD206, MHC-II, CD163, Ly6C, Ly6G, GR-1, F4/80) 또는 B 세포 표면 마커(예를 들면, CD19, CD20, B220)를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "MHCII"는 골수성 세포, 수지상 세포 및 B 세포와 같은 항원 제시 세포에서 오직 보통 발견되는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자의 종류를 지칭한다. MHCII는 CD4 T 세포 상의 T 세포 수용체로 가공된 항원 펩타이드를 제시한다. MHCII 발현은 유세포분석법과 같은 단백질 발현 프로파일링 기법을 사용하여 당업자에 의해 측정될 수 있다. MHCII 발현의 변화는 관심 있는 특정 세포 하위집단에서 MHCII의 중앙치 형광 강도 신호 또는 MHCII에 대해 양성인 세포의 백분율의 변화를 분석함으로써 결정될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "T 세포"는 적응 면역 반응에서 중추 역할을 하는 면역 세포의 유형을 지칭한다. T 세포는 이의 세포 표면에서 αβ 또는 γδ T 세포 수용체(TCR) 중 어느 하나의 존재에 의해 다른 면역 세포와 구별된다. T 세포는 또한 TCR 신호전달에 중요한 단백질 복합체인 CD3을 발현한다. αβ T 세포는 CD4, CD8 또는 CD4/CD8 이중 음성 하위집단 중 어느 하나로 나눠질 수 있다. CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 CD4 및 CD8의 높은 표면 밀도로 인해, CD4 및 CD8 단독은 대개 각각 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 확인하도록 사용될 수 있다. γδ T 세포는 αβ TCR과 같이 항원 인식 및 세포 활성화에 중요한 γ 사슬 및 δ 사슬로 이루어진 TCR이 구비된다. 이 TCR은 Vδ1 및 Vδ2인 γδ T 세포의 상이한 하위집단 사이를 구별하도록 또한 사용된다. Vδ1 T 세포는 소수(5% 미만)이고, 소염 기능 및 염증촉진 기능 둘 다를 갖는 γδ T 세포의 불균질한 집단이다. Vδ2 T 세포는 순환 시 γδ T 세포의 약 95%를 구성하는 Vγ9Vδ2 (Vδ2) T 세포의 단일의 비교적 균질한 T 세포 집단이다. 이의 TCR 및 추가 선천성 면역 수용체의 고유한 특성으로 인해, Vδ2 T 세포는 면역치료에 이용될 수 있는 강력한 항종양 특성이 부여된다. MHC 분자에 의해 제시된 동족 항원의 TCR 인식을 통한 활성화 후에, T 세포는 성숙이고 효과기 또는 기억 T 세포를 생성하도록 나눠질 수 있다. 기억 T 세포는 이의 동족 항원에 이전에 마주치고 반응한 T 세포의 하위집단이다. 이러한 T 세포는 병원균성 항원, 예컨대 박테리아 또는 바이러스로부터 유래된 항원뿐만 아니라 암 연관된 항원을 인식할 수 있다. T 세포는 유세포분석법과 같은 표현형 기법을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다. T 세포를 확인하기 위해 사용된 표현형 마커는 일반적으로 포유류에서 보존되고, CD3, TCRα, TCRβ, TCRδ, CD4 및 CD8을 포함한다. 기억 T 세포를 확인하기 위해 사용된 표현형 마커는 종 및 조직에 의해 변할 수 있지만, CD45RO, LY6C, CD44, 및 CD95와 같은 세포 표면 마커를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "에피토프 확산"은 동일한 단백질(분자내 확산) 또는 다른 단백질(분자간 확산)에서 초기 포커싱된 우세한 에피토프 특이적 면역 반응으로부터 준우세한 및/또는 크립틱 에피토프로의 에피토프 특이성의 다양성을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "지수 종양"은 수술 시편에서 가장 광범위한 종양 면적, 즉 가장 큰 결절을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 제2 모이어티에 대한 제1 모이어티의 부착과 관련하여 용어 "가역적", "가역적으로", "분해 가능한" 또는 "분해 가능하게"는 상기 제1 모이어티 및 제2 모이어티를 연결하는 연결이 1시간 내지 3개월, 예컨대 1시간 내지 2개월, 3시간 내지 1개월, 12시간 내지 3주 또는 24시간 내지 2주 범위의 반감기로 pH 7.4, 37℃에서 수성 완충액인 생리학적 조건 하에 절단 가능하다는 것을 의미한다. 절단은 효소적 또는 비효소적일 수 있고, 소정의 실시형태에서 비효소적이다. 따라서, 제2 모이어티에 대한 제1 모이어티의 부착에 관한 용어 "안정한" 또는 "영구적인"은 상기 제1 모이어티 및 제2 모이어티를 연결하는 연결이 생리학적 조건 하에 3개월 초과의 반감기로 절단 가능하다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "변형 모이어티"는 소정의 실시형태에서 치환기 또는 중합체성 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "디설파이드 브릿징"은 디설파이드 브릿지의 2개의 황 원자 사이의 모이어티의 삽입을 지칭한다. 이는 2개의 티올 반응성 작용기 사이에 상기 모이어티를 갖는 시약을 사용하고, 모이어티가 디설파이드 결합의 이전의 환원 후 상기 황 원자 사이에 삽입되도록 각각의 티올 반응성 작용기를 디설파이드 브릿지의 황 원자 중 하나와 반응시킴으로써 달성된다. 하나 초과의 설파이드 브릿지가 펩타이드 또는 단백질에 존재하면, 디설파이드 브릿지는 하나의 설파이드 브릿지의 황 원자 사이에 삽입될 수 있거나 상이한 디설파이드 브릿지로부터의 황 원자 사이에 삽입될 수 있다. 이러한 디설파이드 브릿지는 펩타이드 또는 단백질에서 자연 발생일 수 있거나, 예를 들면 기존의 아미노산 모이어티를 펩타이드 또는 단백질로 대체함으로써 또는 시스테인 모이어티를 펩타이드 또는 단백질에 첨가함으로써 인공적으로 도입될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "시약"은 또 다른 화학 화합물 또는 약물의 작용기와 반응을 위한 적어도 하나의 작용기를 포함하는 화학 화합물을 의미한다. 작용기(예컨대, 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실 작용기)를 포함하는 약물이 또한 시약이라고 이해된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "모이어티"는 상응하는 시약과 비교하여 하나 이상의 원자(들)가 부족한 분자의 일부를 의미한다. 예를 들면, 화학식 "H-X-H"의 시약이 또 다른 시약과 반응하고 반응 생성물의 일부가 되면, 반응 생성물의 상응하는 모이어티는 "H-X-" 또는 "-X-"를 갖는 반면, 각각의 "-"는 또 다른 모이어티에 대한 부착을 나타낸다. 따라서, 약물 모이어티는 약물로서 가역적 연결로부터 방출된다.
원자의 그룹의 순서 또는 화학 구조가 제공되고, 원자의 그룹이 2개의 모이어티에 부착하거나 모이어티 사이에 개재하면, 상기 순서 또는 화학 구조는 달리 명확히 기술되지 않는 한 어느 한 배향으로 2개의 모이어티에 부착될 수 있다고 이해된다. 예를 들면, 모이어티 "-C(O)N(R1)-"가 2개의 모이어티에 부착되거나 모이어티 사이에 "-C(O)N(R1)-" 또는 "-N(R1)C(O)-" 중 어느 하나로서 개재할 수 있다. 유사하게, 모이어티
Figure pct00005
는 2개의 모이어티에 부착될 수 있거나 모이어티 사이에
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
중 하나로서 개재할 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "치환된"은 분자 또는 모이어티의 하나 이상의 -H 원자(들)가 "치환기"라 칭해지는 상이한 원자 또는 원자의 그룹에 의해 대체된다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "치환기"는 소정의 실시형태에서 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 지칭하고; -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)- 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
-Rx1, -Rx1a, -Rx1b는 -H, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-; -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)- 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
각각의 T0은 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T0은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Rx2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)2N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO2, -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)2Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Rx3, -Rx3a, -Rx4, -Rx4a, -Rx4b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 선택적으로 치환된 분자의 최대 6개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 예를 들면 5개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 4개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 3개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 2개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 1개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "지방 산"은 4개 내지 28개의 탄소 원자를 포함할 수 있는 지방족 꼬리를 갖는 포화 또는 불포화 모노카복실산을 지칭한다. 지방 산은 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형일 수 있다. 용어 "지방 산 변이체"는 소정의 탄소 원자가 다른 원자 또는 원자의 그룹에 의해 대체될 수 있고, 치환될 수 있는 변형된 지방 산을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "펩타이드"는 펩타이드(아미드) 연결에 의해 연결된 적어도 2개 및 50개(포함) 이하의 아미노산 단량체 모이어티의 사슬을 지칭한다. 용어 "펩타이드"는 또한 펩티도미메틱, 예컨대 D-펩타이드, 펩토이드 또는 베타-펩타이드를 포함하고, 50개(포함) 이하의 단량체 모이어티를 갖는 이러한 펩티도미메틱 사슬을 포괄한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "단백질"은 펩타이드 연결에 의해 연결된, 여기서 소정의 실시형태에서 12000개 이하의 아미노산 단량체, 예컨대 10000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티, 8000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티, 5000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티 또는 2000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티가 펩타이드 연결에 의해 연결된 "아미노산 잔기"라 또한 칭해질 수 있는 50개 초과의 아미노산 단량체 모이어티의 사슬을 지칭한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "약"은 숫자 값과 조합되어 상기 숫자 값의 플러스 및 마이너스 25% 이하, 소정의 실시형태에서 상기 숫자 값의 플러스 및 마이너스 20% 이하 및 소정의 실시형태에서 상기 숫자 값의 플러스 및 마이너스 10% 이하의 숫자 값을 포함하여 이들에 이르는 범위를 나타내도록 사용된다. 예를 들면, 구절 "약 200"은 200 ± 25%를 포함하여 이에 이르는, 즉 150 내지 250을 포함하여 이에 이르는; 소정의 실시형태에서, 200 ± 20%, 즉 160 내지 240을 포함하여 이에 이르는; 그리고 소정의 실시형태에서, 200 ± 10%를 포함하여 이에 이르는, 즉 180 내지 220을 포함하여 이에 이르는 범위를 의미하도록 사용된다. "약 50%"로서 주어진 백분율이 "50% ± 25%", 즉 25% 내지 75%를 포함하여 이에 이르는 것을 의미하지 않고, "약 50%"가 37.5% 내지 62.5%을 포함하여 이에 이르는 것, 즉 50인 숫자 값의 플러스 및 마이너스 25%를 의미한다고 이해된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "중합체"는 합성 또는 생물학적 기원이거나 둘 다의 조합일 수 있는 반복 구조 단위, 즉 선형, 원형, 분지형, 가교결합된 또는 덴드리머 방식으로 화학 결합에 의해 연결된 단량체를 포함하는 분자를 의미한다. 중합체가 또한 예를 들면 하나 이상의 작용기(들)와 같은 하나 이상의 다른 화학 그룹(들) 및/또는 모이어티/모이어티들을 포함할 수 있다고 이해된다. 마찬가지로, 개별 아미노산 잔기의 측쇄가 상이할 수 있더라도 또한 펩타이드 또는 단백질이 중합체라고 이해된다. 소정의 실시형태에서, 가용성 중합체는 분자량이 적어도 0.5 kDa, 예를 들면 분자량이 적어도 1 kDa, 분자량이 적어도 2 kDa, 분자량이 적어도 3 kDa 또는 분자량이 적어도 5 kDa이다. 중합체가 가용성이면, 이것이 소정의 실시형태에서 분자량이 최대 1000 kDa, 예컨대 최대 750 kDa, 예컨대 최대 500 kDa, 예컨대 최대 300 kDa, 예컨대 최대 200 kDa, 예컨대 최대 100 kDa이다. 불용성 중합체, 예컨대 하이드로겔에 대해, 의미 있는 분자량 범위가 제공될 수 없다고 이해된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "중합체성"은 하나 이상의 중합체(들) 또는 중합체 모이어티/모이어티들을 포함하는 시약 또는 모이어티를 의미한다. 중합체성 시약 또는 모이어티는 선택적으로 또한 소정의 실시형태에서 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 다른 모이어티/모이어티들을 포함할 수 있다:
Figure pct00008
C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐 및 테트랄린; 및
Figure pct00009
하기를 포함하는 군으로부터 선택된 연결:
Figure pct00010
상기 식 중,
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
당업자는 중합 반응으로부터 얻은 중합 생성물이 모두 동일한 분자량을 갖지 않고, 오히려 분자량 분포를 나타낸다고 이해한다. 결과적으로, 본원에 사용된 것과 같이, 중합체에서의 단량체의 분자량 범위, 분자량, 수의 범위 및 중합체에서의 단량체의 수는 수 평균 분자량 및 단량체의 수 평균, 즉 중합체 또는 중합체성 모이어티의 분자량의 산술 평균 및 중합체 또는 중합체성 모이어티의 단량체의 수의 산술 평균을 지칭한다.
따라서, "x" 단량체 단위를 포함하는 중합체성 모이어티에서 "x"에 대해 주어진 임의의 정수는 따라서 단량체의 산술 평균 수에 상응한다. "x"에 대해 주어진 정수의 임의의 범위는 단량체의 산술 평균 수가 있는 정수의 범위를 제공한다. "약 x"로서 주어진 "x"에 대한 정수는 단량체의 산술 평균 수가 x ± 25%, 바람직하게는 x ± 20% 및 더 바람직하게는 x ± 10%의 정수의 범위에 있다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "수 평균 분자량"은 개별 중합체의 분자량의 보통의 산술 평균을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "PEG-기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 PEG를 포함한다는 것을 의미한다. 소정의 실시형태에서, PEG-기반 모이어티 또는 시약은 적어도 10%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 20%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 30%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 40%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 50%(w/w), 예컨대 적어도 60%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 70%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 80%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 90%(w/w)의 PEG, 예컨대 적어도 95%를 포함한다. PEG-기반 모이어티 또는 시약의 남은 중량 백분율은 소정의 실시형태에서 하기 모이어티 및 연결로부터 선택된 다른 모이어티이다:
Figure pct00011
C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐 및 테트랄린; 및
Figure pct00012
하기를 포함하는 군으로부터 선택된 연결:
Figure pct00013
상기 식 중,
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
용어 "히알우론산-기반"이 따라서 사용된다.
본원에 사용된 것과 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "적어도 X%의 PEG를 포함하는 PEG-기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 적어도 X%(w/w)의 에틸렌 글리콜 단위(-CH2CH2O-)를 포함한다는 것을 의미하고, 여기서 에틸렌 글리콜 단위는 블록 방식으로 교대하여 배열될 수 있거나, 모이어티 또는 시약 내에 무작위로 분포될 수 있고, 소정의 실시형태에서, 상기 모이어티 또는 시약의 모든 에틸렌 글리콜 단위는 하나의 블록으로 존재하고; PEG-기반 모이어티 또는 시약의 남은 중량 백분율은 소정의 실시형태에서 하기 모이어티 및 연결로부터 선택된 다른 모이어티이다:
Figure pct00014
C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐 및 테트랄린; 및
Figure pct00015
하기를 포함하는 군으로부터 선택된 연결:
Figure pct00016
상기 식 중,
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
용어 "적어도 X%의 히알우론산을 포함하는 히알우론산-기반"이 따라서 사용된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "하이드로겔"은 소수성 상호작용, 수소 결합, 이온성 상호작용 및/또는 공유 화학 가교결합의 존재로 인해 불용성인 단독중합체 또는 공중합체로 이루어진 친수성 또는 양친매성 중합체 망상구조를 의미한다. 소정의 실시형태에서, 하이드로겔은 공유 화학 가교결합의 존재로 인해 불용성이다. 일반적으로, 가교결합은 망상 구조 및 물리적 통합성을 제공한다.
용어 "개재된"은 모이어티가 2개의 탄소 원자 사이에 또는 - 모이어티의 말단 중 하나에 삽입이 있으면 - 탄소 또는 이종원자와 수소 원자 사이에 삽입된다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C1-4 알킬"은 단독으로 또는 조합으로 1개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하면, 직쇄 또는 분지형 C1-4 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-4 알킬에 의해 연결되면, 이러한 C1-4 알킬 기에 대한 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-이다. C1-4 알킬 탄소의 각각의 수소는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-4 알킬은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C1-6 알킬"은 단독으로 또는 조합으로 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하면, 직쇄 및 분지형 C1-6 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-6 알킬 기에 의해 연결되면, 이러한 C1-6 알킬 기에 대한 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)- 및 -C(CH3)2-이다. C1-6 탄소의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-6 알킬은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, "C1-10 알킬", "C1-20 알킬" 또는 "C1-50 알킬"은 각각 1개 내지 10개, 1개 내지 20개 또는 1개 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 알킬 사슬을 의미하고, C1-10, C1-20 또는 C1-50 탄소의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 선택적으로 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-10 또는 C1-50 알킬은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C2-6 알케닐"은 단독으로 또는 조합으로 2개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하면, 예는 -CH=CH2,
-CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 및 -CH=CH-CH=CH2이다. 분자의 2개의 모이어티가 C2-6 알케닐 기에 의해 연결되면, 이러한 C2-6 알케닐에 대한 예는 -CH=CH-이다. C2-6 알케닐 모이어티의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, C2-6 알케닐은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, 용어 "C2-10 알케닐", "C2-20 알케닐" 또는 "C2-50 알케닐"은 단독으로 또는 조합으로 2개 내지 10개, 2개 내지 20개 또는 2개 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C2-6 알키닐"은 단독으로 또는 조합으로 2개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하면, 예는 -C≡CH, -CH2-C≡CH, -CH2-CH2-C≡CH 및 CH2-C≡C-CH3이다. 분자의 2개의 모이어티가 알키닐 기에 의해 연결되면, 예는 -C≡C-이다. C2-6 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 발생할 수 있다. 선택적으로, C2-6 알키닐은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C2-10 알키닐", "C2-20 알키닐" 및 "C2-50 알키닐"은 단독으로 또는 조합으로 각각 2개 내지 10개, 2개 내지 20개 또는 2개 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 발생할 수 있다. 선택적으로, C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐은 하기 정의된 것과 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
상기 언급된 것처럼, C1-4 알킬, C1-6 알킬, C1-10 알킬, C1-20 알킬, C1-50 알킬, C2-6 알케닐, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐, C2-50 알케닐, C2-6 알키닐, C2-10 알키닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알키닐은 바람직하게는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티에 의해 선택적으로 개재될 수 있다:
Figure pct00017
상기 식 중,
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 -H, 및 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 포화 또는 불포화될 수 있는 3개 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 환형 알킬 사슬, 예를 들면 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐 또는 사이클로데실을 의미한다. C3-10 사이클로알킬 탄소의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 또한 노르보르난 또는 노르보르넨과 같은 브릿징된 이환식을 포함한다.
용어 "8원 내지 30원 카보폴리사이클릴" 또는 "8원 내지 30원 카보폴리사이클"은 8개 내지 30개의 고리 원자를 갖는 2개 이상의 고리의 사이클릭 모이어티를 의미하고, 여기서 2개의 이웃하는 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유하고, 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있다(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리). 바람직하게는 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴은 2개, 3개, 4개 또는 5개의 고리, 더 바람직하게는 2개, 3개 또는 4개의 고리의 사이클릭 모이어티를 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "3원 내지 10원 헤테로사이클릴" 또는 "3원 내지 10원 헤테로사이클"은 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 고리 원자를 갖는 고리(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하고, 여기서 적어도 1개의 고리 원자 내지 4개 이하의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2-를 포함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 이종원자에 의해 대체되고, 고리는 탄소 원자 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된다. 3원 내지 10원 헤테로사이클에 대한 예는 아지리딘, 옥시란, 티이란, 아지린, 옥시렌, 티이렌, 아제티딘, 옥세탄, 티에탄, 푸란, 티오펜, 피롤, 피롤린, 이미다졸, 이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 옥사졸, 옥사졸린, 이속사졸, 이속사졸린, 타이졸, 티아졸린, 이소티아졸, 이소티아졸린, 티아디아졸, 티아디아졸린, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 티아디아졸리딘, 설폴란, 피란, 디하이드로피란, 테트라하이드로피란, 이미다졸리딘, 피리딘, 피리다진, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 테트라졸, 티아졸, 트리아졸리딘, 테트라졸리딘, 디아제판, 아제핀 및 호모피페라진을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 3원 내지 10원 헤테로사이클릴 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릭 기의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴" 또는 "8원 내지 11원 헤테로바이사이클"은 8개 내지 11개의 고리 원자를 갖는 2개의 고리의 헤테로사이클릭 모이어티를 의미하고, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 고리 둘 다에 의해 공유되고, 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있고(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리), 적어도 1개의 고리 원자 내지 6개 이하의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2-를 포함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 이종원자에 의해 대체되고, 고리는 탄소 원자 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된다. 8원 내지 11원 헤테로바이사이클에 대한 예는 인돌, 인돌린, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이속사졸, 벤조티아졸, 벤즈이소티아졸, 벤즈이미다졸, 벤즈이미다졸린, 퀴놀린, 퀴나졸린, 디하이드로퀴나졸린, 퀴놀린, 디하이드로퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 데카하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 데카하이드로이소퀴놀린, 테트라하이드로이소퀴놀린, 디하이드로이소퀴놀린, 벤자제핀, 푸린 및 푸테리딘이다. 용어 8원 내지 11원 헤테로바이사이클은 또한 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데칸과 같은 2개의 고리의 스피로 구조 또는 8-아자-바이사이클로[3.2.1]옥탄과 같은 브릿징된 헤테로사이클을 포함한다. 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴 또는 8원 내지 11원 헤테로바이사이클 탄소의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 것과 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다.
유사하게, 용어 "8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴" 또는 "8원 내지 30원 헤테로폴리사이클"은 8개 내지 30개의 고리 원자를 갖는 2개 이상의 고리, 바람직하게는 3개, 4개 또는 5개의 고리의 헤테로사이클릭 모이어티를 의미하고, 여기서 2개의 이웃하는 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유하고, 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있고(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리), 적어도 1개의 고리 원자 내지 10개 이하의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2-를 포함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함)의 군으로부터 선택된 이종원자에 의해 대체되고, 고리는 탄소 원자 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된다.
구조
Figure pct00018
의 모이어티와 관련하여 구절 "쌍 Rx/Ry가 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성한다"는 Rx 및 Ry가 하기 구조를 형성한다는 것을 의미한다고 이해된다:
Figure pct00019
상기 식 중, R은 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴이다.
구조
Figure pct00020
의 모이어티와 관련하여 구절 "쌍 Rx/Ry가 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 고리 A"를 형성한다"는 Rx 및 Ry가 하기 구조를 형성한다는 것을 의미한다고 또한 이해된다:
Figure pct00021
.
본원에 사용된 것과 같이, "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다. 할로겐이 플루오로 또는 클로로인 것이 바람직하다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "작용기"는 원자의 다른 그룹과 반응할 수 있는 원자의 그룹을 의미한다. 예시적인 작용기는 예를 들면 카복실산(-(C=O)OH), 1차 또는 2차 아민(-NH2, -NH-), 말레이미드, 티올(-SH), 설폰산(-(O=S=O)OH), 카보네이트, 카바메이트(-O(C=O)N<), 하이드록실(-OH), 알데하이드(-(C=O)H), 케톤(-(C=O)-), 하이드라진(>N-N<), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 인산(-O(P=O)OHOH), 포스폰산(-O(P=O)OHH), 할로아세틸, 알킬 할라이드, 아크릴로일, 아릴 플루오라이드, 하이드록실아민, 디설파이드, 설폰아미드, 황산, 비닐 설폰, 비닐 케톤, 디아조알칸, 옥시란 및 아지리딘이다.
본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체가 하나 이상의 산성 기 또는 염기성 기를 포함하는 경우에, 본 발명은 또한 이의 상응하는 약학적으로 또는 독성학적으로 허용 가능한 염, 특히 이의 약학적으로 이용 가능한 염을 포함한다. 이와 같이, 산성 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체는 예를 들면 알칼리 금속 염, 알칼리 토금속 염 또는 암모늄염으로서 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 이러한 염의 더 정확한 예는 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 또는 암모니아 또는 예를 들면 에틸아민, 에탄올아민, 트리에탄올아민 또는 아미노산과 같은 유기 아민과의 염을 포함한다. 하나 이상의 염기성 기, 즉 양성자화 될 수 있는 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체는 존재할 수 있고, 무기 산 또는 유기 산과의 이의 부가염의 형태로 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적합한 산에 대한 예는 염화수소, 브롬화수소, 인산, 황산, 질산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 옥살산, 아세트산, 타르타르산, 락트산, 살리실산, 벤조산, 포름산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 숙신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 말산, 설파민산, 페닐프로피온산, 글루콘산, 아스코르브산, 이소니코틴산, 시트르산, 아디프산 및 당업자에게 공지된 다른 산을 포함한다. 당업자에 대해 양전하 암모늄 기 및 염의 적절한 반대 이온을 생성시키는 아민 기의 알킬화와 같은 양이온으로 염기성 기를 전환하기 위한 추가의 방법이 공지되어 있다. 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체가 동시에 산성 기 및 염기성 기를 포함하면, 본 발명은 또한 언급된 염 형태 이외에 내부 염 또는 베타인(양쪽성 이온)을 포함한다. 각각의 염은 당업자에게 공지된 종래의 방법 등에 의해, 예를 들면 용매 또는 분산제 중에 이들 프로드럭을 유기 또는 무기 산 또는 염기외 접촉시킴으로써 또는 다른 염에 의한 음이온 교환 또는 양이온 교환에 의해 얻어질 수 있다. 본 발명은 또한 낮은 생리학적 상용성으로 인해 의약품에서 사용하기에 직접적으로 적합하지 않지만, 예를 들면 화학 반응에 대한 중간체로서 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 제조를 위해 사용될 수 있는 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체의 염을 포함한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한"은 환자에게 투여될 때 해를 야기하지 않는 물질을 의미하고, 바람직하게는 동물에서의 사용을 위해, 예컨대 인간에서의 사용을 위해 규제 기관, 예컨대 EMA(유럽) 및/또는 FDA(미국) 및/또는 임의의 다른 국가 규제 기관에 의해 허가됨을 의미한다.
본원에 사용된 것과 같이, 용어 "부형제"는 치료제, 예컨대 약물 또는 프로드럭이 투여된 희석제, 아쥬반트 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 약제학적 부형제는 비제한적인 예로서 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등을 포함하는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것을 포함하는 물 및 오일과 같은 멸균 액체일 수 있다. 약학 조성물이 경구로 투여될 때 물은 바람직한 부형제이다. 약학 조성물이 정맥내로 투여될 때 식염수 및 수성 덱스트로스는 바람직한 부형제이다. 주사용 용액에 대해 액체 부형제로서 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 바람직하게는 사용된다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 약학 조성물은 원하면 또한 예를 들면 아세테이트, 숙시네이트, 트리스, 카보네이트, 포스페이트, HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산), MES(2-(N-모르폴리노)에탄설폰산)과 같은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제를 소량 함유할 수 있거나, Tween, 폴록사머, 폴록사민, CHAPS, Igepal과 같은 세제 또는 예를 들면 글리신, 리신 또는 히스티딘과 같은 아미노산을 함유할 수 있다. 이들 약학 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 서방 제형 및 기타의 형태를 취할 수 있다. 약학 조성물은 전통적인 결합제 및 부형제, 예컨대 트리글리세라이드와 좌제로서 제형화될 수 있다. 경구 제형은 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등의 약제학적 등급과 같은 표준 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 환자에 대한 적절한 투여를 제공하도록 적합한 양의 부형제와 함께 치료학적 유효량의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 함유할 것이다. 제형은 투여 방식에 적합해야 한다.
일반적으로, 용어 "포함한다" 또는 "포함하는"은 "이루어진다" 또는 "이루어지는"을 또한 포함한다.
화학식 (I)의 SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖는다. 서열 번호 1은 하기 서열을 갖는다:
PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLT
화학식 (I)의 SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖는다. 서열 번호 2는 하기 서열을 갖는다:
MLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
달리 기술되지 않는 한 본원에 주어진 모든 아미노산 위치는 각각 서열 번호 1 또는 서열 번호 2에 기초한다.
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 1과 비교하여 2개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 서열 SEQ A는 서열 번호 1과 비교하여 1개의 아미노산 변화를 포함한다. 이러한 아미노산 변화는 아미노산 결실, 아미노산 부가 또는 하나의 아미노산의 또 다른 아미노산에 대한 교환, 즉 돌연변이일 수 있다. 이러한 돌연변이는 또한 단백질성 아미노산의 비단백질성 아미노산에 대한 교환 또는 단백질성 아미노산의 D-입체이성질체에 대한 교환일 수 있다.
소정의 실시형태에서, SEQ A는 위치 K34에서 1개의 아미노산 변화를 포함하는 서열 번호 1의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 이러한 아미노산 변화는 소정의 실시형태에서 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타민, 글루탐산, 아스파라긴 및 아스파르트산으로 이루어진 군으로부터 선택된 또 다른 아미노산에 대한 아미노산, 이 경우에는 리신의 교환이다. 소정의 실시형태에서, 위치 K34에서의 상기 아미노산 변화는 K34A(서열 번호 3), K34C(서열 번호 4), K34G(서열 번호 5), K34S(서열 번호 6), K34T(서열 번호 7), K34Q(서열 번호 8), K34E(서열 번호 9), K34N(서열 번호 10) 및 K34D(서열 번호 11)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 따라서, 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 3: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPALT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 4: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPCLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 5: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPGLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 6: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPSLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 7: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPTLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 8: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPQLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 9: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPELT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 10. PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPNLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 11: PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPDLT의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 1의 서열을 갖는다.
SEQ A의 위치 K34에서 아미노산 변화를 도입하는 것이 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 용해도 및 재폴딩을 개선했다는 것이 놀랍게도 발견되었다.
소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 1개 내지 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 1개 내지 4개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 4개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 3개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 2개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 1개의 아미노산 변화를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2와 비교하여 아미노산 변화를 포함하지 않는다. 이러한 아미노산 변화는 아미노산 결실, 아미노산 부가 또는 하나의 아미노산의 또 다른 아미노산에 대한 교환, 즉 돌연변이일 수 있다. 이러한 돌연변이는 또한 단백질성 아미노산의 비단백질성 아미노산에 대한 교환 또는 단백질성 아미노산의 D-입체이성질체에 대한 교환일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타민, 글루탐산 및 아스파라긴으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 알라닌으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 시스테인으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 글리신으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 세린으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 트레오닌으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 글루타민으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 글루탐산으로 대체한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 아미노산을 아스파라긴으로 대체한다.
소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 서열 번호 2의 M1, T3, F4, K5, F6, Y7, E24, E30, L34 및 C87로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 발생하는 아미노산 변화로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 M1에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 T3에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 F4에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 K5에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 F6에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 Y7에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 E24에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 E30에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 L34에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화 중 1개는 서열 번호 2의 위치 C87에서 발생한다.
소정의 실시형태에서, 상기 1개 내지 4개의 아미노산 변화는 서열 번호 2의 서열에 기초하여 M1A, M1C, M1G, M1S, M1T, M1Q, M1E, M1N, T3A, T3C, T3G, T3S, T3Q, T3E, T3N, F4A, F4C, F4G, F4S, F4T, F4Q, F4E, F4N, K5A, K5C, K5G, K5S, K5T, K5Q, K5E, K5N, F6A, F6C, F6G, F6S, F6T, F6Q, F6E, F6N, Y7A, Y7C, Y7G, Y7S, Y7T, Y7Q, Y7E, Y7N, E24A, E24C, E24G, E24S, E24T, E24Q, E24N, E30A, E30C, E30G, E30S, E30T, E30Q, E24N, L34A, L34C, L34G, L34S, L34T, L34Q, L34E, L34N, C87A, C87G, C87S, C87T, C87Q, C87E 및 C87N으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 용어 "M1A"가 1번 위치에서의 메티오닌이 알라닌에 의해 대체되고, 다른 용어가 따라서 사용된다는 것을 의미한다고 이해된다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 M1N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 T3N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F4N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 K5N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F5S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 F6N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 Y7N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E24N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 E30N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34C 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 L34N 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87A 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87G 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87S 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87T 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87Q 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 C87N 돌연변이를 포함한다.
소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다.
소정의 실시형태에서, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다:
MLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 1의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 13의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 1의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 14의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 3의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 22의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPALTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 3의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 23의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPALTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 4의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 24의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPCLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 4의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 25의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPCLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 5의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 26의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPGLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 5의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 27의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPGLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 6의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 28의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPSLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 6의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 29의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPSLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 7의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 30의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPTLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 7의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 31의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPTLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 8의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 32의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPQLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 8의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 33의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPQLTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 9의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 34의 서열을 갖는다:
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPELTCMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 9의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 35의 서열을 갖는다:
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소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 10의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 36의 서열을 갖는다:
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소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 10의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 37의 서열을 갖는다:
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소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 11의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 38의 서열을 갖는다:
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소정의 실시형태에서, SEQ A는 서열 번호 11의 서열을 갖고, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열 번호 39의 서열을 갖는다:
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또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 이러한 올리고뉴클레오타이드 서열은 DNA, RNA 및 cDNA 서열로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 DNA 서열이다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 RNA 서열이다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 cDNA 서열이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드는 원핵 시스템, 진핵 시스템 또는 무세포 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 원핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 진핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 무세포 시스템에서의 발현을 위한 것이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 에스체리치아 콜라이(Escherichia coli); 바실러스 종(Bacillus sp.), 예컨대 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis); 코리네박테륨 종(Corynebacterium sp.), 예컨대 코리네박테륨 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum); 및 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)로 이루어진 군으로부터 선택된 박테리아 시스템과 같은 원핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 플라스미드의 형태의 DNA 서열이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 효모, 예컨대 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae) 또는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris); 섬질 진균, 예컨대 아스페르길루스(Aspergillus), 트리초데르마(Trichoderma) 또는 마이셀리오프토라 써모필로스(Myceliophthora thermophila); 바큘로바이러스 감염된 세포, 예컨대 바큘로바이러스 감염된 곤충 세포, 예컨대 Sf9, Sf21, Hi-5 균주 또는 바큘로바이러스 감염된 포유류 세포, 예컨대 HeLa, 인간 배아 신장 세포 HEK 293 또는 중국 햄스터 난소 세포(CHO); 포유류 시스템, 예컨대 마우스 골수종 림프아구성(예컨대, NS0 세포), 마우스 섬유아세포(예컨대, NIH3T3 세포), CHO 세포 및 완전 인간 세포, 예컨대 HEK 293 세포, 인간 배아 망막 세포(예컨대, Crucell의 Per.C6) 및 인간 양수세포 세포(예컨대, Glycotope 및 CEVEC); 및 비용해성 곤충 세포 발현 시스템, 예컨대 Sf9, Sf21, Hi-5, 슈나이더 2 세포 또는 슈나이더 3 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 진핵 시스템과 같은 진핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 포유류 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 17의 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 플라스미드의 형태의 DNA 서열이다. 소정의 실시형태에서, 플라스미드는 서열 번호 20의 서열을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 발현을 위한 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 a) 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 발현하는 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 b) 숙주 세포 배양물로부터 관심 있는 상기 재조합 IL-2 단백질을 분리하는 단계를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 원핵 세포, 예컨대 박테리아 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 에스체리치아 콜라이; 바실러스 종, 예컨대 바실러스 서브틸리스; 코리네박테륨 종, 예컨대 코리네박테륨 글루타미쿰; 및 슈도모나스 플루오레센스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 에스체리치아 콜라이이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바실러스 종이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 코리네박테륨 종이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 슈도모나스 플루오레센스이다.
소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 효모, 예컨대 사카로마이세스 세레비시아에 또는 피치아 파스토리스; 섬질 진균, 예컨대 아스페르길루스, 트리초데르마 또는 마이셀리오프토라 써모필로스; 바큘로바이러스 감염된 세포, 예컨대 바큘로바이러스 감염된 곤충 세포, 예컨대 Sf9, Sf21, Hi-5 균주 또는 바큘로바이러스 감염된 포유류 세포, 예컨대 HeLa, 인간 배아 신장 세포 HEK 293 또는 중국 햄스터 난소 세포(CHO); 포유류 시스템, 예컨대 마우스 골수종 림프아구성(예컨대, NS0 세포), 마우스 섬유아세포(예컨대, NIH3T3 세포), CHO 세포 및 완전 인간 세포, 예컨대 HEK 293 세포, 인간 배아 망막 세포(예컨대, Crucell의 Per.C6) 및 인간 양수세포 세포(예컨대, Glycotope 및 CEVEC); 및 비용해성 곤충 세포 발현 시스템, 예컨대 Sf9, Sf21, Hi-5, 슈나이더 2 세포 또는 슈나이더 3 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 효모 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 사카로마이세스 세레비시아에 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 피치아 파스토리스 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 섬질 진균의 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 아스페르길루스 종의 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 트리초데르마 종의 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 마이셀리오프토라 써모필라 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 세포, 예컨대 바큘로바이러스 감염된 곤충 세포 또는 바큘로바이러스 감염된 포유류 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 Sf9 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 Sf21 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 Hi-5 균주의 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 HeLa 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 인간 신장 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 Sf9 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염된 CHO 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 포유류 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 마우스 골수종 림프아구성 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 마우스 섬유아세포 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 CHO 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 HEK 293 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 인간 배아 망막 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 인간 양수세포 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 마우스 섬유아세포 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 비용해성 곤충 세포 발현 시스템이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 Sf9 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 Sf21 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 Hi-5 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 슈나이더 2 세포이다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 슈나이더 3 세포이다.
사용된 숙주 세포에 기초하여 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 번역후 변형, 예컨대 글리코실화, 특히 O-연결된 글리코실화 및 N-연결된 글리코실화를 포함할 수 있다고 이해된다. 명확히 언급되진 않더라도, 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 이러한 번역후 변형을 포함할 수 있고, 이러한 변형된 IL-2 단백질이 또한 본 발명에 의해 다뤄질 수 있다고 이해된다. 이러한 번역후 변형에 대한 하나의 예는 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 CHO 세포에서 발현될 때 서열 번호 1의 2번 위치에서 트레오닌의 O-연결된 글리코실화이다. O-연결된 글리칸은 예를 들면 N1(NeuAc(a2-3)Gal(b1-3)GalNAc-ol) 또는 N2(NeuAc(a2-3)Gal(b1-3)(NeuAc(a2-6))GalNAc-ol)일 수 있고, 여기서 NeuAc는 N-아세틸뉴라민산(시알산)이고, Gal은 갈락토스이고, GalNac-ol은 아세틸갈락토사미니톨이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 소정의 실시형태에서 적어도 하나의 O-연결된 N1 글리칸, 적어도 하나의 O-연결된 N2 글리칸, 적어도 하나의 O-연결된 N1과 적어도 하나의 O-연결된 N2 글리칸의 조합을 포함할 수 있거나, 비글리코실화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나의, 예컨대 하나의, O-연결된 N1 글리칸을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나의, 예컨대 하나의, O-연결된 N2 글리칸을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나의, 예컨대 하나의, O-연결된 N1 글리칸과 적어도 하나의, 예컨대 하나의, O-연결된 N2 글리칸의 조합을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 비글리코실화된다. N1 대 N2 글리칸의 비는 예를 들면 1:1일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 진핵 세포, 예컨대 CHO 세포에서 발현되고, 1번 내지 8번 아미노산에 상응하는 N 말단 끝의 적어도 80%는 O-글리코실화된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 진핵 세포, 예컨대 CHO 세포에서 발현되고, 1번 내지 8번 아미노산에 상응하는 N 말단 끝의 적어도 90%는 O-글리코실화된다.
진핵 발현 시스템, 예컨대 CHO 세포의 사용이 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 용해도 및 분비를 개선시켰다는 것이 놀랍게도 발견되었다. CHO 세포에서의 발현이 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 N 말단 끝(1번 내지 8번 아미노산)의 효과적인 O-글리코실화를 생성시켰다는 것이 발견되었다. 이러한 O-글리코실화는 단백질 응집을 방지하고 적절한 분비를 보장함으로써 용해도 및 분비에 대한 긍정적인 효과를 가질 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 예를 들면 봉입체와 같은 주로 불용성인 형태로 발현된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 가용성 단백질로서 발현된다. 가용성 단백질로서 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 발현하는 것은 되돌림 단계(renaturing step)가 필요하지 않다는 이점을 갖는다. 이러한 가용성 단백질은 세포 내에 머물 수 있거나, 이것은 배양 배지로 또는 그람 양성 박테리아의 경우에는 혈장주변 공간으로 분비될 수 있다.
단백질 서열에서의 유리의 짝을 짖지 않은 시스테인의 존재는 봉입체 기반 전략 또는 가용성 분비 전략을 선택하든 재조합 산물에 대한 도전을 제시한다.
따라서, 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 봉입체에서 제조된다. 이러한 발현 방법은 가용성 단백질 중의 가용화의 단계 및 시험관내 재폴딩의 단계를 추가로 수반한다. 재폴딩 동안 정확한 디설파이드 브릿지를 달성하기 위해, 임의의 기존의 디설파이드 브릿지 없이 가용화된 재폴딩된 단백질로부터 시작하는 것이 보통 유리하다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 상기 방법은 가용화 동안 환원제의 첨가를 추가로 수반한다.
유리 시스테인을 함유하는 단백직의 재폴딩 동안 통상적인 도전은 유리의 환원된 형태의 유리의 쌍을 짖지 않은 시스테인을 유지하면서 시스테인의 의도된 쌍(들) 사이에 정확한 디설파이드 브릿지 형성을 달성하는 것이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 가용성 IL-2 단백질의 분비에 의해 제조된다. 가용성인 분비된 형태의 유리의 쌍을 짖지 않은 시스테인을 함유하는 단백질을 발현할 때, 생성된 분비된 정확하게 폴딩된 단량체성 단백질은 대개 "시스테인 캡핑"이라고도 칭하는 디설파이드 브릿지를 통해 이의 유리의 쌍을 짖지 않은 시스테인에 커플링된 시스테인과 같은 추가 티올 포함 화합물을 보유한다. 이와 같이, 분비를 통해 가용성 형태의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 합성하는 방법에서 하나의 단계는 유리 시스테인의 선택적인 캡핑이다. 시스테인에 의한 캡핑은, 디설파이드 브릿징에 대해 기질로서 배양 배지로부터 생기는, 티올 포함 화합물, 예컨대 시스테인, 시스틴 또는 글루타티온에 의한 관심 있는 단백질의 분비 후 세포외 발생할 수 있다. 대안적으로, 이것은 세포내 발생할 수 있고, 이 경우에 캡핑에 사용된 티올 함유 화합물, 예컨대 시스테인은 세포의 대사, 예컨대 아미노산 대사로부터 생긴다.
부산물로서, 관심 있는 단백질에서의 유리 시스테인은 반응하여 분자 사이에 디설파이드 브릿지를 형성하여 관심 있는 단백질의 이합체를 형성할 수 있다. 시스테인과 같은 티올 포함 화합물에 의해 캐핑된 정확하게 폴딩된 단량체의 양은 배지에서 세포 배양 조건을 최적화함으로써, 예를 들면 시스테인의 산화된 이합체 형태인 시스틴의 농도를 변화시킴으로써 증가될 수 있다. 배지 중의 글루타티온의 농도를 변형시킴으로써 시스테인보다 글루타티온에 의해 유리 시스테인의 캡핑을 얻는 것이 또한 가능하다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 시스테인으로 캡핑된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 글루타티온으로 캡핑된다.
디설파이드 연결된 고분자량 응집체 및 다합체는 유리 시스테인을 함유하는 단백질을 발현할 때 대개 생성된다. 더욱이, 시스테인의 의도되지 않은 쌍 사이의 부정확한 디설파이드 결합 형성(분자간 및 분자내), 즉 디설파이드 결합의 "스크램블링"이 발생할 수 있다. 분비 동안 디설파이드 브릿지의 스크램블링 및 응집체 및 다합체의 형성은 예를 들면 분비를 지시하도록 사용된 리더의 서열 또는 신호 서열을 최적화하거나 완전히 상이한 리더 서열을 선택함으로써, 폴딩 샤페론 및 단백질 디설파이드 아이소머라제 효소의 발현을 증가시킴으로써, 다른 유기체로부터 폴딩 샤페론 및 단백질 디설파이드 아이소머라제 효소를 발현시킴으로써, 합성 폴딩 샤페론 및 단백질 디설파이드 아이소머라제를 발현시킴으로써, 온도를 변경함으로써, 단쇄 지방 산 보충제를 배양 배지에 첨가함으로써 또는 항산화제를 배지에 첨가함으로써 환원될 수 있다.
유리 시스테인을 함유하는 단백질의 분비에 대해 상기 기재된 도전은 대개 배지로 분비되는, 정확하게 폴딩된, 시스테인 캡핑된 단량체 단백질의 낮은 수율을 생성시킨다.
관심 있는 분비된 단백질의 수율을 증가시키는 하나의 방식은 분비를 위해 단백질을 지시하는 신호 또는 리더 서열을 절단하는 기전을 개선시키는 것이다. 신호 또는 리더 서열의 정확한 가공은 이것이 성숙 분비된 단백질의 N 말단을 방출하고 효과적인 분비를 달성하기 위해 보통 필요하므로 분비 경로에서 중요한 단계이다. 일부 경우에 불완전한게 가공된 생성물이 또한 분비될 수 있지만, 신호 또는 리더 서열의 부정확한 절단은 통상적으로 단백질의 세포내 축적으로 이어진다.
대부분의 발현 시스템에서, 분비되는 단백질의 N 말단에 융합되고, 분비 전에 또는 분비와 함께 숙주 세포의 효소를 특이적 가공함으로써 절단된 분비 신호 펩타이드에 의해 분비는 지도된다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 분비 전에 또는 이와 함께 소정의 실시형태에서 분비 신호 펩타이드로 발현되고, 이것은 숙주 세포의 특이적 가공 효소에 의해 절단된다.
포유류 발현 시스템에서, 신호 펩타이드는 소정의 실시형태에서 임의의 자연 분비된 단백질의 신호 펩타이드이다. 소정의 실시형태에서, 포유류 발현 시스템에 대한 신호 펩타이드는 소정의 실시형태에서 이와 같이 자연적으로 분비된 단백질의 신호 펩타이드이다. 소정의 실시형태에서, 포유류 발현 시스템에 대한 신호 펩타이드는 분비를 효과적으로 지도하는 것으로 인 실리코 설계되거나 실험적으로 발견된 서열분석된 비천연 합성 신호이다.
이. 콜라이에서, 단백질을 혈장주변 분비로 지도하는 신호 서열은 혈장주변으로 자연 분비된 임의의 박테리아의 신호 펩타이드일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이. 콜라이에서의 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 발현을 위한 신호 펩타이드는 phoA, dsbA, gllI, mal, OmpA, OmpC, OmpT, pelB, torA, torT, EOX, STII, SfmC, lamB, MglB, MmAp 및 tolB로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 신호 펩타이드는 분비를 효과적으로 지도하는 것으로 인 실리코 설계되거나 실험적으로 발견된 비천연 서열이다.
효모 발현 시스템, 예컨대 에스. 세레비시아에 및 피치아 파스토리스에서, 발현을 지도하는 리더 서열은 신호 서열 및 프로펩타이드를 포함할 수 있고, 이들의 신호 서열은 분비되는 단백질을 ER로 지도하고, ER로의 수송과 함께 절단되고, 프로펩타이드는 성장 배지로의 분비 전에 Kex2 효소에 의해 골지체에서 절단된다. 리더 서열은 자연 분비된 효소 또는 페로몬의 리더 서열일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 효모 발현 시스템에서 발현을 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 리더 서열은 이와 같이 에스. 세레비시아에 메이팅 인자 알파 리더 서열, SUC2 리더 서열 및 VOA1 리더 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 리더 서열은 또 다른 효모 또는 섬질 균주로부터의 분비된 단백질 기원이거나, 이것은 인 실리코 설계된 비천연 리더 서열일 수 있거나, 이것은 폴딩 및 분비를 효과적으로 지도하는 것으로 실험적으로 발견된 리더 서열일 수 있다. 리더 서열은 예를 들면 랜덤 아미노산 치환의 많은 조합을 포함하는 리더 서열의 큰 라이브러리를 형성하는 것으로 실험적으로 또한 확인될 수 있다.
숙주 세포의 내인성 가공 효소에 의한 신호 또는 리더 서열의 정확한 절단은 성숙 가공된 및 분비된 재조합 단백질의 N 말단을 구성하는 절단 부위의 바로 뒤의 아미노산 서열에 의존적이다. 관심 있는 단백질의 특이적 N 말단 아미노산 서열 이외에, 관심 있는 폴딩된 단백질에서의 N 말단의 접근 가능성은 신호 서열 또는 리더가 얼마나 효과적으로 가공되는지에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들면, 묻힌 N 말단은 가공 프로테아제에 접근 불가능할 수 있고, 따라서 분비 전략에 문제가 될 것이다.
이용 가능한 실험 데이터에 구축된 예측 모델을 사용하여, 신호 펩티다제 복합체에 의한 소정의 아미노산 서열의 절단의 확률이 계산될 수 있다. 이러한 도구는 온라인에서 이용 가능하여서 당업자가 진핵생물 및 박테리아에서 신호 펩타이드의 정확한 가공의 가능성을 예측하게 한다. 효모 발현 시스템에서, 리더 서열은 통상적으로 ER에서 신호 펩티다제 복합체에 의해 절단된 신호 서열 및 골지에서 Kex2 푸린 프로테아제에 의해 절단된 프로펩타이드 둘 다를 포함한다. Kex2에 대한 인식 부위인, KR은 효모 종에 걸쳐 Kex2 기질 사이에 잘 보존된다. 음으로 하전된 아미노산이 Kex2 기질의 P1', P2' 및 P4' 위치에서 과표현될 수 있다고 공지되어 있다. 그러나, Kex2에 의한 가능한 절단은 통상적으로 사례 대 사례 기준으로 실험적으로 조사될 필요가 있다.
신호 또는 리더 서열의 정확한 가공이 정확하게 폴딩되고 가용성인 단백질의 효과적인 분비에 필요한 몇몇 특성의 하나라는 것이 당업자에게 잘 공지되어 있다. 중요한 특징의 예는 전사 및 번역의 적절한 속도, ER로의 동시번역 또는 번역후 전좌, ER에서 정확한 디설파이드 브릿지의 폴딩 및 형성, 및 세포로부터의 소포 수송이다. 분비 효율의 임의의 컴퓨터 보조 예측의 실험적 검증은 따라서 필수적이다.
부정확하게 폴딩되거나 응집된 단백질의 세포내 축적은 가능하게는 스트레스 반응을 유도하고, 감소된 성장 속도 및 세포 적합성을 야기하면서 숙주 세포의 생리학에 부정적으로 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 신호 또는 리더 서열의 가공을 개선함으로써 세포내 축적을 피하는 것은 증가된 성장 속도, 세포 밀도 및 세포 질량 생산성을 발생시켜서 관심 있는 단백질의 전체 생산성에 긍정적으로 영향을 미칠 수 있다. 게다가, 더 적합한 세포주는 아마도 더 규모 및 배양 조건에 걸쳐 강건하게 수행되고, 가공 방해와 잘 협력할 것이다. 더욱이, 정상 성장 속도 및 세포 적합성을 갖는 세포주가 생성물의 세포내 축적과 같은 전이유전자 발현의 효과로부터 생긴 감소된 성장 속도 및 세포 적합성을 갖는 세포주보다 더 낮은 불안정성 위험을 갖는다고 당업자에 의해 일반적으로 인식된다. 전이유전자 발현에 의해 부여된 감소된 성장 속도를 갖는 세포주에 대해, 전이유전자 발현을 감소시키는 사건(예를 들면, 유전자 침묵화 사건, 돌연변이 또는 지시-반복 재조합을 통한 전이유전자의 회로화)의 발생은 경쟁적 성장 이점을 발생시킬 수 있다. 발현이 감소된 세포는 높은 수준에서 전이유전자를 여전히 발현하는 집단에서 다른 세포를 신속히 능가하여 불안정한 발현 표현형을 생성시킬 것이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 발현하는 숙주 세포는 이의 게놈 내에 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 관한 것이다.
소정의 실시형태에서, 상기 접합체는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에서 별표로 표시된 시스테인에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 선택적으로, 추가 모이어티 Mmod는 다른 위치에서 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 접합될 수 있고, 추가 모이어티 Mmod는 동일하거나 상이할 수 있다. 이러한 추가 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2 단백질의 N 말단, C 말단, 아미노산 측쇄 또는 내부 부위에 있을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 N 말단에 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 C 말단에 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 추가 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 내부 부위, 예컨대 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 아미노산 측쇄에 있다. 하나 초과의 추가 모이어티 Mmod가 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 부착되면, 부착은 N 말단, C 말단 및 내부 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 부착 부위의 임의의 조합에서 발생할 수 있다. Mmod에 대한 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다. 선택적으로, 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z는 모이어티 Mmod에 접합될 수 있고, 여기서 -L1-, -L2- 및 Z는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인에 접합된 모이어티 Mmod에 접합된다.
Mmod에 대한 특정한 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 접합체는 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00022
Figure pct00023
상기 식 중,
-D는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하고;
-L1-은 -D에 공유로 및 가역적으로 부착된 링커 모이어티이고;
-L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
-Z는 중합체성 모이어티 또는 치환된 지방 산 모이어티이고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
y는 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 및 화학식 (Ib)의 접합체는 화학식 (I)의 바이어싱된 IL-2 모이어티 또는 바이어싱된 IL-2 단백질을 방출하고, 비바이어싱된 IL-2 대 비알데스류킨의 비는 1 초과, 바람직하게는 2 초과, 바람직하게는 3 초과, 바람직하게는 4 초과 및 훨씬 더 바람직하게는 5 초과이다. 소정의 실시형태에서, 비바이어싱된 IL-2 대 비알데스류킨의 비는 10 초과, 20 초과, 50 초과, 70 초과, 100 초과 또는 150 초과이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -D는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에서 별표로 표시된 시스테인 잔기의 티올에 접합된 변형 모이어티 Mmod를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 모이어티 Mmod는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에서 별표로 표시된 시스테인 잔기의 티올에 안정하게 접합된다. 선택적으로, -D는 동일하거나 상이한 모이어티 Mmod일 수 있는 -D에 안정하게 접합된 하나 이상의 추가의 모이어티 Mmod를 포함할 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 추가의 모이어티 -L1-L2-Z는 Mmod에 접합된다.
일 실시형태에서, Mmod는 치환기이다. 바람직하게는, 이러한 치환기는 15 Da 내지 1 kDa 범위의 분자량을 갖는다.
이러한 모이어티 Mmod는 일 실시형태에서 디설파이드 브릿징, 예컨대 1개가 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인인 2개의 시스테인 잔기의 티올 기 사이에 형성된 디설파이드 브릿지의 형태로 도입될 수 있다. 디설파이드 브릿징의 다른 시스테인 잔기는 자연 발생 시스테인 잔기일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 다른 시스테인은 자연에서 발생하지 않고, 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 첨가되거나 삽입되거나, 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 자연 발생 아미노산 잔기를 대체한다. 이러한 디설파이드 브릿징을 얻는 방식은 문헌[Jones et al. (J. Am. Chem. Soc., 2012, 134(3), pp 1847-1852)], WO2011/018611, WO2011/018612 및 WO2011/018613에 개시되어 있다.
또 다른 실시형태에서, Mmod는 중합체성 모이어티이다. 이러한 중합체성 모이어티는 선형, 분지형 또는 멀티-아암 중합체를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 중합체는 선형 중합체이다. 또 다른 실시형태에서, 중합체는 분지형 중합체이다. 이러한 분지형 중합체는 소정의 실시형태에서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 분지 점을 갖는다. 각각의 분지 점으로부터 2개, 3개 또는 4개의 중합체 아암이 연장할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 중합체는 멀티-아암 중합체이다. 이러한 멀티-아암 중합체는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 중합체성 아암을 가질 수 있다.
Mmod가 중합체성 모이어티이면, 이러한 중합체성 모이어티는 소정의 실시형태에서 0.5 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대 1 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대 2 kDa 내지 500 kDa, 3 kDa 내지 200 kDa, 5 kDa 내지 120 kDa 또는 7 kDa 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 0.5 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 1 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 2 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 3 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 4 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 5 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 약 7.5 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 10 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 15 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 20 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 30 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 40 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 50 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 70 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 80 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 90 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 약 100 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 0.5 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 1 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 2 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 3 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 4 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 5 kDa이다. 일 실시형태에서, 이러한 중합체는 분자량이 7.5 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 10 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 15 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 20 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 30 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 40 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 50 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 70 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 80 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 90 kDa이다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 중합체성 모이어티는 분자량이 100 kDa이다.
Mmod가 중합체성 모이어티이면, 이러한 중합체성 모이어티는 소정의 실시형태에서 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알우론산 및 유도체, 작용기화된 히알우론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물-기반 중합체, 자일란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
일 실시형태에서, Mmod는 PEG-기반 중합체이다.
또 다른 실시형태에서, Mmod는 히알우론산-기반 중합체이다.
또 다른 실시형태에서, Mmod는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 화학적으로 접합될 수 있는 펩타이드 또는 단백질 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 IL-2 또는 IL-2-모이어티의 단편이 아니다.
펩타이드 또는 단백질 모이어티의 형태의 Mmod는 합성 또는 자연 단백질 모이어티 또는 이의 일부 또는 변이체일 수 있다. 예시적인 펩타이드 및 단백질은, 각각 이의 자연 발생 형태의 또는 이의 변이체 또는 단편으로서의, 알부민; 면역글로불린의 항체 도메인, 예컨대 Fc 도메인 또는 항원 결합 도메인; CTP 및 CD25를 포함한다.
화학식 (I)의 IL-2 단백질에 대한 Mmod의 부착은 안정한 연결을 통해서이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질과 모이어티 Mmod 사이의 연결은 아미드를 통해서이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질과 모이어티 Mmod 사이의 연결은 모이어티
Figure pct00024
를 통해서이다.
본 발명의 접합체는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에서 별표로 표시된 시스테인에 접합된 모이어티 Mmod를 포함할 수 있고, 선택적으로 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 접합된 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod를 포함할 수 있다.
이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2 단백질의 단백질성 또는 비단백질성 아미노산 잔기에 있을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 단백질성 아미노산에서 발생한다. 이러한 단백질성 아미노산 잔기는 소정의 실시형태에서 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 리신, 트리토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 비단백질성 아미노산에서 발생한다. 이 경우에 이러한 비단백질성 아미노산 잔기가 화학식 (I)의 IL-2 단백질로 인공적으로 도입된다고 이해된다. 이러한 비단백질성 아미노산 잔기는 Mmod를 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 접합하는 데 이용 가능한 작용기를 갖는 임의의 비단백질성 아미노산 잔기일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 비단백질성 아미노산은 카보닐; 카보닐 유도체, 예컨대 카보닐 유사, 표시된 카보닐 및 보호된 카보닐 기; 아지드; 옥심; 및 하이드록실아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 이의 측쇄에서 작용기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 이러한 비단백질성 아미노산은 본원에 참고로 포함된 WO2006/069246A2에 기재된 것과 같은 비단백질성 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, 비단백질성 아미노산은 WO2006/069246A2의 [00265] 내지 [00283]에서의 화학식 (I), [00284]에서의 화학식 (XXX), [00285]에서의 화학식 (XXX-A), [00286]에서의 화학식 (XXX-B), [00287]에서의 화학식 (XXXI), [00288]에서의 화학식 (XXXI-A), [00289]에서의 화학식 (XXXI-B), [00290]에서의 화학식 (XXXII), [00291]에서의 화학식 (XXXII-A), [00292]에서의 화학식 (XXXII-B), [00293]에서의 화학식 (XXXX), [00294]에서의 화학식 (XXXXI), 잘못 표지된 문단 [0100], 즉 문단 [00294]와 [00295] 사이의 화학식 (XXXXII), [00295] 및 [00296]에서의 화학식 (XXXXIII), [00302] 내지 [00305]에서의 화학식 (XIV), [00306] 및 [00307]에서의 화학식 (XV), [00310] 내지 [00312]에서의 화학식 (XI), [00313]에서의 화학식 (XII), [00314] 및 [00315]에서의 화학식 (XII), [00316]에서의 화학식 (XIV), [00317]에서의 화학식 (XVI), [00318] 및 [00319]에서의 화학식 (XVI), [00320] 및 [00321]에서의 화학식 (XVIII) 또는 [00530]에서의 화학식 (XXIX)에 기재된 것과 같은 구조를 갖고, 비단백질성 아미노산은 본원에 참고로 포함된다.
소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 리신 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 트레오닌 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 세린 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 티로신 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 히스티딘 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 트립토판 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 아스파르트산 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 글루탐산 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 아르기닌 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 별표로 표시된 것 이외의 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 시스테인 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 메티오닌 잔기에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 글루타민 잔기에서 발생한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체가 아미노산 잔기의 하나 초과의 유형, 예컨대 추가 시스테인 및 리신에 부착된 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod를 가질 수 있다고 이해된다.
소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 IL-2Rα에 대한 결합에 관여된 것으로 공지된 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 아미노산 위치에서 발생한다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 알데스류킨과 비교하여 IL-2Rαβ에 대한 화학식 (I)의 IL2 단백질의 감소된 친화도를 생성시키고, 즉 바이어싱된 IL-2 모이어티를 생성시킨다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 1의 K34, 서열 번호 2의 M1, 서열 번호 2의 T3, 서열 번호 2의 F4, 서열 번호 2의 K5, 서열 번호 2의 F6, 서열 번호 2의 Y7, 서열 번호 2의 E24, 서열 번호 2의 E30, 서열 번호 2의 L34, 서열 번호 12의 M1, 서열 번호 12의 T3, 서열 번호 12의 F4, 서열 번호 12의 K5, 서열 번호 12의 F6, 서열 번호 12의 Y7, 서열 번호 12의 E24, 서열 번호 12의 E30 및 서열 번호 12의 L34로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 F4, 서열 번호 2의 Y7, 서열 번호 2의 E24, 서열 번호 2의 E30 및 서열 번호 2의 L34로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 F4, 서열 번호 12의 Y7, 서열 번호 12의 E24, 서열 번호 12의 E30 및 서열 번호 12의 L34로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 1의 K34에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 M1에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 T3에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 F4에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 K5에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 F6에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 Y7에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 E24에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 E30에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 2의 L34에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 M1에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 T3에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 F4에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 K5에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 F6에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 Y7에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 E24에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 E30에서 발생한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 하나 이상의 추가 모이어티 Mmod 중 적어도 하나의 부착은 서열 번호 12의 L34에서 발생한다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1)를 갖는다:
Figure pct00025
상기 식 중,
-FG-는 연결이고;
-SP-는 스페이서 모이어티이고;
-POL은 중합체이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는 화학식 (FG-1a)를 갖는다:
Figure pct00026
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 부착 SP를 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는 화학식 (FG-1b)를 갖는다:
Figure pct00027
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
a1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1b)의 a1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는 화학식 (FG-1c)를 갖는다:
Figure pct00028
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
a2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (FG-1c)의 a2는 6이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 구조 FG-1a에 따라 연결을 생성시키는 상기 시스테인의 티올과 말레이미드 작용기의 반응을 통해 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인 잔기에 접합된다. 생성된 티오숙신이미드 고리는 Mmod의 방출을 야기할 수 있는 레트로-마이클 반응을 겪을 수 있다. 이 반응은 이러한 티오숙신이미드 또는 이의 유도체, 예컨대 브롬화된 티오숙신이미드를 포함하는 화합물을 5원 고리를 개환시키는 가수분해를 발생시키는 조건으로 처리함으로써 최소화되거나 회피될 수 있다. 생성된 선형 티오에테르는 상당히 더 안정하고, 이는 Mmod의 방출의 위험을 감소시킨다. 티오숙신이미드의 가수분해가 산성 pH에서 천천히 발생하지만, 이는 중성 또는 염기성 pH 및 상승된 온도에서 상당히 더 빠르다. 몇시간 동안 상승된 pH 및 상승된 온도에서의 항온처리가 화학식 (FG-1d) 및 화학식 (FG-1e)에 도시된 것과 같은 연결을 발생시켜서, 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인 잔기에 대한 Mmod의 안정한 연결을 발생시킨다.
소정의 실시형태에서, 모이어티 Mmod를 포함하는 접합체를 몇 시간, 예컨대 적어도 10시간 또는 적어도 12시간 동안 상승된 pH, 예컨대 pH 9 및 상승된 온도, 예컨대 25℃에서 항온처리한다.
따라서, 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는 화학식 (FG-1d)를 갖는다:
Figure pct00029
상기 식 중, 별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 부착 -SP-를 나타낸다.
따라서, 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는 화학식 (FG-1e)를 갖는다
Figure pct00030
상기 식 중, 별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 부착 -SP-를 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)-의 SP-는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11aR11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R10, -R10a, -R11, -R11a 및 -R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -SP-는 C1-20 알킬이고, C1-20 알킬은 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬은 -O-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고; 각각의 -R9는 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 각각의 -R10 및 -R10a는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -SP-는 C1-10 알킬이고, C1-10 알킬은 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬은 -O-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고; 각각의 -R9는 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 각각의 -R10 및 -R10a는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 PEG-기반 중합체이다. 소정의 실시형태에서, -POL은 화학식 (A-1i)를 갖는다:
Figure pct00031
상기 식 중,
점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
p는 12 내지 22700 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 m은 0이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 m은 1이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 화학식 (A-1ii)를 갖는다:
Figure pct00032
상기 식 중,
점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
FG는 작용기이고;
m은 0 또는 1이고;
p는 12 내지 22700 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (A-1)의 모이어티 Mmod가 추가의 모이어티, 예컨대 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z에 접합되면, 모이어티 -POL이 작용기로 끝나면 유리하다. -POL이 화학식 (A-1ii)를 가지면, 이러한 화합물은 시약이고, 이러한 하나 이상의 모이어티, 예컨대 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z의 상기 시약의 작용기에 대한 접합 후, FG는 더 이상 존재하지 않고, 하나 이상의 추가의 모이어티의 시약 형태로 존재하는 적합한 작용기에 의해 연결을 형성한다고 이해된다.
Mmod에 접합되는 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z에 대한 다른 부착이 또한 가능할 수 있다고 또한 이해된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 m은 0이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 m은 1이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 6이다.
추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z가 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되면, 모이어티 -POL은 화학식 (A-1iii), 화학식 (A-1iv), 화학식 (A-1v) 또는 화학식 (A-1vi)를 가질 수 있다:
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
m, p 및 q는 화학식 (A-1i)에 정의된 것과 같이 사용된다.
소정의 실시형태에서, 추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1iii)의 -POL의 모이어티를 생성시킨다. 소정의 실시형태에서, 추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1iv)의 -POL의 모이어티를 생성시킨다. 소정의 실시형태에서, 추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1v)의 -POL의 모이어티를 생성시킨다. 소정의 실시형태에서, 추가의 모이어티, 예컨대 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1vi)의 -POL의 모이어티를 생성시킨다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 히알우론산-기반 중합체이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1a)를 갖는다:
Figure pct00037
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1b)를 갖는다:
Figure pct00038
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
c1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
c2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
c3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1b)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1b)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1c)를 갖는다:
Figure pct00039
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
d1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
d2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
d3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540, 114 내지 2700 또는 160 내지 900 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1cd)의 d3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1c)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1c)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1d)를 갖는다:
Figure pct00040
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b2는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1d)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1d)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1d)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, Mmod는 화학식 (A-1e)를 갖는다:
Figure pct00041
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b2는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 23 내지 227000, 예컨대 45 내지 11300 또는 69 내지 4540 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 680이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 900이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 1130이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 1350이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 1590이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 1800이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 2045이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 2275이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 450이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 12이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 23이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 46이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 68이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 90이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 170이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 227이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-1e)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1e)의 b2는 2이고, 화학식 (A-1e)의 b3은 약 450이다.
복수의 IL-2 접합체에서, 모이어티 Mmod는 모이어티 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 포함하는 혼합물로서 존재한다. 이는 IL-2 접합체의 소정의 백분율이 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod에 접합되고 소정의 백분율이 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod에 접합된다는 것을 의미한다. 선택적으로, IL-2 접합체의 소정의 백분율은 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod에 접합된다. 이러한 IL-2 접합체에서 티오숙신이미드 고리의 가수분해가 발생하지 않는다고 이해된다. 이러한 복수의 IL-2 접합체는 예를 들면 이러한 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 존재할 수 있다.
복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 소정의 실시형태에서 혼합물로서 존재하고, 모이어티 Mmod의 적어도 70%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다. 복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 소정의 실시형태에서 혼합물로서 존재하고, 모이어티 Mmod의 적어도 80%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다. 복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 소정의 실시형태에서 혼합물로서 존재하고, 모이어티 Mmod의 적어도 90%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다.
복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 화학식 (A1-a), 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)의 모이어티를 포함하는 혼합물로서 존재한다. 복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 화학식 (A1-a), 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)의 모이어티를 포함하는 혼합물로서 존재하고, Mmod의 적어도 70%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다. 복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 화학식 (A1-a), 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)의 모이어티를 포함하는 혼합물로서 존재하고, Mmod의 적어도 80%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다. 복수의 IL-2 접합체에서 모이어티 Mmod는 화학식 (A1-a), 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)의 모이어티를 포함하는 혼합물로서 존재하고, Mmod의 적어도 90%는 화학식 (A-1d) 및 화학식 (A-1e)를 갖는다.
화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 IL-2 접합체는 적어도 하나의 공유로 및 가역적으로 부착된 중합체성 모이어티 및/또는 치환된 지방 산 모이어티 -Z를 포함한다.
이러한 적어도 하나의 공유로 및 가역적으로 부착된 중합체성 모이어티 및/또는 치환된 지방 산 모이어티는 선택적으로 존재하는 모이어티 Mmod에 의해 제공된 연장을 넘어 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 순환 반감기를 연장시키지만, 이의 가역적 부착은 충분한 약학적 활성을 보장한다.
일 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ia)를 갖고, 치환된 지방 산 또는 중합체성 모이어티 중 어느 하나인 하나의 모이어티 -Z를 포함한다. 일 실시형태에서, -Z는 치환된 지방 산이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 중합체성 모이어티이다.
또 다른 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)를 갖고, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 -Z를 포함한다. 일 실시형태에서, 모이어티 -Z 둘 다는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방 산이다. 또 다른 실시형태에서, 모이어티 -Z 둘 다는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, 하나의 모이어티 -Z는 치환된 지방 산이고, 다른 모이어티 -Z는 중합체성 모이어티이다.
또 다른 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)를 갖고, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 -Z를 포함한다. 일 실시형태에서, 모든 3개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방 산이다. 또 다른 실시형태에서, 모든 3개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, 1개 또는 2개의 모이어티 -Z는 치환된 지방 산이고, 남은 모이어티/모이어티 -Z는 중합체성 모이어티이다.
또 다른 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)를 갖고, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 -Z를 포함한다. 일 실시형태에서, 모든 4개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방 산이다. 또 다른 실시형태에서, 모든 4개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, 1개, 2개 또는 3개의 모이어티 -Z는 치환된 지방 산이고, 남은 모이어티/모이어티들 -Z는 중합체성 모이어티이다.
화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z가 치환된 지방 산 모이어티이면, 이것은 바람직하게는 본원에 참고로 포함된 WO 2005/027978 A2 및 WO 2014/060512 A1에 개시된 치환된 지방 산 모이어티이다.
화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z가 중합체성 모이어티이면, 이러한 중합체성 모이어티는 소정의 실시형태에서 분자량이 1 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대 2 kDa 내지 500 kDa, 3 kDa 내지 200 kDa, 5 kDa 내지 120 kDa, 10 kDa 내지 100 kDa 또는 15 kDa 내지 80kDa의 범위이다. 일 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 2 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 5 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 10 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 15 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 20 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 30 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 40 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 50 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 60 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 70 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 80 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 90 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 약 100 kDa인 중합체성 모이어티이다. 일 실시형태에서, -Z는 분자량이 2 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 5 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 10 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 15 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 20 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 30 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 40 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 50 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 60 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 70 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 80 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 90 kDa인 중합체성 모이어티이다. 또 다른 실시형태에서, -Z는 분자량이 100 kDa인 중합체성 모이어티이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알우론산 및 유도체, 작용기화된 히알우론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물-기반 중합체, 자일란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함하는 중합체성 모이어티이다.
일 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 펩타이드 또는 단백질 모이어티이다. 바람직하게는, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 IL-2-모이어티 또는 이의 단편이 아니다. 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합될 수 있거나, 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역으로 융합될 수 있고, 이 경우에 -L1-은 펩타이드 또는 단백질 모이어티이고, -L2-는 바람직하게는 화학 결합이다. 일 실시형태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합된다. 또 다른 실시형태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역으로 융합될 수 있고, 이 경우에 -L1-은 펩타이드 또는 단백질 모이어티이고, -L2-는 바람직하게는 화학 결합이다. 이러한 펩타이드 또는 단백질 가역적 링커 모이어티 -L1-이 효소적으로 또는 비효소적으로 분해 가능하다고 이해된다. 효소 분해를 수월하게 하기 위해 -L1-은 프로테아제 인식 부위를 포함할 수 있다.
화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z가 펩타이드 또는 단백질 모이어티이면, 이것은 소정의 실시형태에서 본원에 참고로 포함된 US 2012/0035101 A1에 기재된 것과 같은 융모성 고나도트로핀의 카복실 말단 펩타이드를 포함하는 모이어티; 알부민 모이어티; 랜덤 코일 단백질 모이어티 및 Fc 융합 단백질 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 랜던 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 적어도 25개의 아미노산 잔기 및 최대 2000개의 아미노산, 예컨대 30개의 아미노산 내지 1500개의 아미노산 잔기 또는 50개 내지 500개의 아미노산 잔기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 전체 수의 적어도 80%, 예컨대 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌 및 프롤린으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 전체 수의 적어도 10%, 그러나 75% 미만, 예컨대 65% 미만은 프롤린 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 본원에 그 전체가 참고로 포함된 WO 2011/144756 A1에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, -Z는 WO2011/144756에 개시된 것과 같은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17, 서열 번호 51 및 서열 번호 61로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 본원에서 "PA" 또는 "PA 모이어티"라 칭해진다.
따라서, 일 실시형태에서 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 PA 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 전체 수의 적어도 80%, 예컨대 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌, 세린 및 프롤린으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 전체 수의 적어도 4%, 그러나 40% 미만은 프롤린 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 본원에 참고로 포함된 WO 2008/155134 A1에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, -Z는 WO 2008/155134 A1에 개시된 것과 같은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 46, 서열 번호 50, 서열 번호 52, 서열 번호 54 및 서열 번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 세린 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 본원에서 "PAS" 또는 "PAS 모이어티"라 칭해진다.
따라서, 일 실시형태에서 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 PAS 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 전체 수의 적어도 80%, 예컨대 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 본원에 참고로 포함된 WO 2010/091122 A1에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, -Z는 WO2010/091122A1에 개시된 것과 같은 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184; 서열 번호 185, 서열 번호 186, 서열 번호 187, 서열 번호 188, 서열 번호 189, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 서열 번호 195, 서열 번호 196, 서열 번호 197, 서열 번호 198, 서열 번호 199, 서열 번호 200, 서열 번호 201, 서열 번호 202, 서열 번호 203, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208, 서열 번호 209, 서열 번호 210, 서열 번호 211, 서열 번호 212, 서열 번호 213, 서열 번호 214, 서열 번호 215, 서열 번호 216, 서열 번호 217, 서열 번호 218, 서열 번호 219, 서열 번호 220, 서열 번호 221, 서열 번호 759, 서열 번호 760, 서열 번호 761, 서열 번호 762, 서열 번호 763, 서열 번호 764, 서열 번호 765, 서열 번호 766, 서열 번호 767, 서열 번호 768, 서열 번호 769, 서열 번호 770, 서열 번호 771, 서열 번호 772, 서열 번호 773, 서열 번호 774, 서열 번호 775, 서열 번호 776, 서열 번호 777, 서열 번호 778, 서열 번호 779, 서열 번호 1715, 서열 번호 1716, 서열 번호 1718, 서열 번호 1719, 서열 번호 1720, 서열 번호 1721 및 서열 번호 1722로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 본원에서 "XTEN" 또는 "XTEN 모이어티"라 칭해진다.
따라서, 소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 XTEN 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 히알우론산-기반 중합체이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 PEG-기반 모이어티, 예컨대 선형, 분지형 또는 멀티-아암 PEG-기반 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, -Z는 분지형 PEG-기반 모이어티, 예컨대 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 분지 점을 갖는 분지형 PEG-기반 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, -Z는 1개, 2개 또는 3개의 분지 점을 갖는 분지형 PEG-기반 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, -Z는 1개의 분지 점을 갖는 분지형 PEG-기반 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, -Z는 2개의 분지 점을 갖는 분지형 PEG-기반 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, -Z는 3개의 분지 점을 갖는 분지형 PEG-기반 모이어티이다.
각각의 분지 점은 -N<, -CH< 및 >C<로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 (Ib)의 -Z는 화학식 (A)의 모이어티를 포함한다:
Figure pct00042
상기 식 중,
-BP1<, -BP2<, -BP3<은 서로 독립적으로 -N< 및 -C(R8)<로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R8은 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 40%의 PEG를 함유하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이고;
-C1-, -C2-는 서로 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11aR11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R10, -R10a, -R11, -R11a 및 -R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 50%의 PEG를 함유하고, 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이다. 소정의 실시형태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 60%의 PEG를 함유하고, 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이다. 소정의 실시형태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 70%의 PEG를 함유하고, 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이다. 소정의 실시형태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 80%의 PEG를 함유하고, 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 모이어티 P1, P2, P3 및 P4의 분자량은 서로 독립적으로 5 내지 30 kDa, 예컨대 5 내지 25 kDa 또는 8 내지 20 kDa의 범위이다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 5 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 7 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 분자량 of 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 10 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 12 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 15 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 20 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 25 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 약 30 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 7 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 10 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 12 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 15 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 20 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 25 kDa일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 30 kDa일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 P1, P2, P3 및 P4는 동일한 구조를 갖는다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 BP1은 -N<이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 BP2 및 BP2는 동일한 구조를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 BP2 및 BP2는 둘 다 -CH<이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 동일한 구조를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 -O-, -C(O)N(R10)- 및 3원 내지 10원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된 군의 하나 이상에 의해 개재된 C1-50 알킬이고; 3원 내지 10원 헤테로사이클릴은 적어도 하나의 옥소(=O)로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 화학식 (A-a)를 갖는다:
Figure pct00043
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 BP1에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 각각 BP2 또는 BP3에 대한 부착을 나타내고;
q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q4는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4, 5, 6, 7, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5, 6 및 7로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 7이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 8이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 5이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3, 4, 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 7이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 8이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 3이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A)의 P1, P2, P3 및 P4는 서로 독립적으로 화학식 (A-b)를 갖는다:
Figure pct00044
상기 식 중,
점선은 -Z의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
p는 70 내지 900 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 m은 0이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 m은 1이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-b)의 q는 6이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함한다:
Figure pct00045
상기 식 중,
p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-c)의 p1, p2, p3와 p4는 동일하다. 소정의 실시형태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다.
일 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 본원에 참고로 포함된 WO 2012/02047 A1에 개시된 것과 같은 모이어티이다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 -Z는 본원에 참고로 포함된 WO 2013/024048 A1에 개시된 것과 같은 모이어티이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 접합체는 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 적어도 하나의 모이어티 Z'에 접합된 화학식 (I)의 상기 IL-2 단백질인 복수의 모이어티 -D를 포함하고, 모이어티 -L1-은 가역적 연결을 통해 -D에 접합되고, 모이어티 -L2-는 Z'에 접합되고, -L1- 및 -L2-는 화학식 (Ia) 및 화학식 (Ib)에 대해 정의된 것과 같이 사용되고, Z'는 수불용성 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, 이러한 하이드로겔 Z'는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대 폴리(에틸렌 글리콜) 및 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알우론산 및 유도체, 작용기화된 히알우론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물-기반 중합체, 잘란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
소정의 실시형태에서, Z'는 폴리(알킬렌 글리콜)-기반 또는 히알우론산-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 폴리(프로필렌 글리콜)-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 PEG-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 본원에 참고로 포함된 WO2011/012715A1 또는 WO2014/056926A1에 개시된 것과 같은 PEG-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 히알우론산-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 본원에 참고로 포함된 WO2018/175788A1에 개시된 것과 같은 히알우론산-기반 하이드로겔이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 WO2013/036847 A1에 개시된 것과 같은 하이드로겔이다. 특히, 소정의 실시형태에서, Z'는 적어도 제1 반응성 중합체를 절단 가능한 가교결합제 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 하이드로겔이고, 상기 절단 가능한 가교결합제 화합물은 제1 반응성 중합체와 반응하는 제1 작용기 -Y1을 포함하고, 생리학적 조건 하에 제거에 의해 절단된 모이어티를 추가로 포함하고, 상기 모이어티는 제2 반응성 중합체와 반응하는 제2 작용기 -Y2를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 화학식 (PL-1)을 갖는다:
Figure pct00046
상기 식 중,
m은 0 또는 1이고;
-X는 생리학적 조건 하에 제거에 수정 가능한 반응성 중합체에 연결할 수 있는 작용기 및 상기 제2 작용기 -Y2를 포함하고;
-R1, -R2 및 -R5 중 적어도 하나는 중합체에 연결할 수 있는 상기 제1 작용기 -Y1을 포함하고;
-R1 및 -R2 중 하나 및 오직 하나는 -H, 알킬, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
선택적으로, -R1 및 -R2는 3원 내지 8원 고리를 형성하도록 연결될 수 있고;
-R1 및 -R2 중 적어도 하나 또는 둘 다는 -CN, -NO2, 아릴, 헤테로아릴, 알케닐, 알키닐, -COR3, -SOR3, -SO2R3 및 -SR4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R3은 -H, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -NR9 2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 -H, 알킬, 알케닐알킬, 알키닐알킬, (OCH2CH2)pO-알킬(p는 1 내지 1000 범위의 정수임), 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -R9는 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되거나, -R9는 둘 다 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
화학식 (PL-1)의 모이어티는 선택적으로 추가로 치환된다.
하기 문단은 이러한 하이드로겔을 더 자세히 기재한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 숙신이미딜 카보네이트, 설포숙신이미딜 카보네이트 할라이드, 티오에테르, 에스테르, 니트로페닐 카보네이트, 클로로포르메이트, 플루오로포르메이트, 선택적으로 치환된 페놀 및 화학식 (PL-2)로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00047
상기 식 중,
점선은 화학식 (PL-1)의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
-T*-는 -O-, -S- 및 -NR6-으로 이루어진 군으로부터 선택되고,
z는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
-X'-는 부재하거나, -OR7- 및 -SR7-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2는 반응성 중합체와 연결할 수 있는 작용기이고;
-R6은 -H, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R7은 알킬렌, 페닐렌 및 (OCH2CH2)p(p는 1 내지 1000 범위의 정수임)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 활성화된 카보네이트, 예컨대 숙신이미딜 카보네이트, 설포숙신이미딜 카보네이트 또는 니트로페닐 카보네이트를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 카보닐 할라이드, 예컨대 O(C=O)Cl 또는 O(C=O)F이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 화학식 (PL-2)를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 -OR7 또는 -SR7이고, -R7은 선택적으로 치환된 알킬렌, 선택적으로 치환된 페닐렌 또는 (OCH2CH2)p이고, p는 1 내지 1000이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-2)의 p는 1 내지 100 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-2)의 p는 1 내지 10 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1)의 -Y1 및 화학식 (PL-2)의 -Y2는 독립적으로 -N3, -NH2, -NH-CO2 tBu, -SH, -StBu, 말레이미드, -CO2H, -CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 푸란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하고, -tBu는 tert-부틸이고, -Y1 또는 -Y2 중 하나가 -N3을 포함할 때, 다른 것은 알킨 또는 사이클로옥틴을 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 -SH를 포함할 때, 다른 것은 말레이미드, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 -NH2를 포함할 때, 다른 것은 -CO2H를 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 1,3-디엔 또는 사이클로펜타디엔을 포함할 때, 다른 것은 푸란을 포함하지 않는다.
소정의 실시형태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 화학식 (PL-3)을 갖는다:
Figure pct00048
상기 식 중,
m은 0 또는 1이고;
n은 1 내지 1000으로부터 선택된 정수이고;
s는 0, 1 또는 2이고;
t는 2, 4, 8, 16 및 32로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-W-는 -O(C=O)O-, -O(C=O)NH-, -O(C=O)S-, -O(C=O)NR6CH2O- 및 -O(C=O)NR6S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Q는 절단 가능한 가교결합 화합물의 다수의 아암을 연결하는 원자가=t를 갖는 코어 기이고,
t는 2, 4, 8, 16 및 32로부터 선택된 정수이고,
-R1, -R2 및 -R5는 화학식 (PL-1)에서처럼 정의된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 8이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 16이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 32이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는
Figure pct00049
,
Figure pct00050
및
Figure pct00051
으로 이루어진 군으로부터 선택된 구조를 갖고, 여기서 점선은 절단 가능한 가교결합제 화합물의 나머지에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-i)의 구조를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-ii)의 구조를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-iii)의 구조를 갖는다.
소정의 실시형태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 화학식 (PL-3)을 갖고, 여기서 m은 0이고, n은 대략 100이고, s는 0이고, t는 4이고, -W-는 -O(C=O)NH-이고, -Q는 (PL-3i)의 구조를 갖고, -R2는 -H이고, 하나의 -R5는 -H이고, 다른 -R5는 -(CH2)5N3이고, -R1은 (4-클로로페닐)SO2, -SO2로 치환된 페닐, 모르폴리노-SO2 또는 -CN이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-3)의 -Y1은 -N3, -NH2, -NH-CO2 tBu, -SH, -StBu, 말레이미드, -CO2H, -CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 푸란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하고, -tBu는 tert-부틸이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-1) 또는 (PL-3)의 각각의 -Y1 및 화학식 (PL-2)의 -Y2는 독립적으로는 -N3, -NH2, -NH-CO2 tBu, -SH, -StBu, 말레이미드, -CO2H, -CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 푸란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함한다.
소정의 실시형태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 아지드이고, 다른 것은 아세틸렌, 사이클로옥틴 및 말레이미드로 이루어진 군으로부터 선택된 반응성 작용기이다. 소정의 실시형태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 티올이고, 다른 것은 말레이미드, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 비닐설폰, 비닐설폰아미드 및 할로카보닐로 이루어진 군으로부터 선택된 반응성 작용기이다. 소정의 실시형태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 아민이고, 다른 것은 카복실산 및 활성화된 카복실산으로부터 선택된 선택적 반응성 작용기이다. 소정의 실시형태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 말레이미드이고, 다른 것은 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔 및 푸란으로 이루어진 군으로부터 선택된 선택적 반응성 작용기이다.
소정의 실시형태에서, 제1 중합체 및 임의의 제2 중합체는 단독중합체성 또는 공중합체성 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리(N-비닐피롤리돈), 폴리메타크릴레이트, 폴리포스파젠, 폴리락타이드, 폴리아크릴아미드, 폴리글리콜레이트, 폴리에틸렌 이민, 아가로스, 덱스트란, 젤라틴, 콜라겐, 폴리리신, 키토산, 알기네이트, 히알우로난, 펩틴 및 카라기난으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이들 중 어느 하나는 적합한 반응성 작용기를 갖거나, 화학식 [Y3-(CH2)s(CH2CH2O)n]tQ를 갖고, 여기서 -Y3은 반응성 작용기이고, s는 0, 1 또는 2이고, n은 10 내지 1000 범위의 군으로부터 선택된 정수이고, -Q는 원자가 t를 갖는 코어 기이고, t는 2, 4, 8, 16 및 32로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 멀티-아암 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 3개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 4개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 5개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 6개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 7개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 적어도 8개의 아암을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 멀티-아암 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 3개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 4개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 5개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 6개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 7개의 아암을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 적어도 8개의 아암을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 2-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 4-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 8-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 16-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 중합체는 32-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 2-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 4-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 8-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 16-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 중합체는 32-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 제1 반응성 중합체 및 제2 반응성 중합체는 순차적으로 또는 동시에 상기 절단 가능한 가교결합제 화합물과 반응한다.
소정의 실시형태에서, 제1 작용기 및 제2 작용기는 동일하다.
오직 화학식 (PL-1), (PL-2) 및 (PL-3)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "생리학적 조건 하에 제거에 의해 절단될 수 있는 모이어티"는 기 H-C-(CH=CH)m-C-X'를 포함하는 구조를 지칭하고, 여기서 m은 0 또는 1이고, X'는 이탈 기이고, HX'의 요소를 제거하기 위한 상기 기재된 것과 같은 제거 반응은 반응의 반감기가 pH 및 온도의 생리학적 조건 하에 1시간 내지 10,000시간인 속도로 발생할 수 있다. 바람직하게는, 반응의 반감기는 pH 및 온도의 생리학적 조건 하에 1시간 내지 5,000시간 및 더 바람직하게는 1시간 내지 1,000시간이다. pH 및 온도의 생리학적 조건이란 7 내지 8의 pH 및 30℃ 내지 40℃의 온도를 의미한다
용어 "반응성 중합체 및 반응성 올리고머"는 가장 바람직하게는 펩타이드, 단백질, 및 다른 생물분자의 안정성 요건과 적합한 온화한 조건 하에 다른 작용기에 대해 반응성인 작용기를 포함하는 중합체 또는 올리고머를 지칭한다. 반응성 중합체에서 발견된 적합한 작용기는 말레이미드, 티올 또는 보호된 티올, 알코올, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 아민 또는 보호된 아민, 카복실산 또는 보호된 카복실산, 아지드, 사이클로알킨을 포함하는 알킨, 사이클로펜타디엔 및 푸란을 포함하는 1,3-디엔, 알파-할로카보닐 및 N-하이드록시숙신이미딜, N-하이드록시설포숙신이미딜 또는 니트로페닐 에스테르 또는 카보네이트를 포함한다.
용어 "반응성 중합체에 연결할 수 있는 작용기"는 중합체에 공유 결합을 형성하도록 반응성 중합체의 상응하는 작용기와 반응하는 작용기를 지칭한다. 반응성 중합체에 연결할 수 있는 적합한 작용기는 말레이미드, 티올 또는 보호된 티올, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 아민 또는 보호된 아민, 카복실산 또는 보호된 카복실산, 아지드, 사이클로알킨을 포함하는 알킨, 사이클로펜타디엔 및 푸란을 포함하는 1,3-디엔, 알파-할로카보닐 및 N-하이드록시숙신이미딜, N-하이드록시설포숙신이미딜 또는 니트로페닐 에스테르 또는 카보네이트를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환기 기를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다. 치환기 기는 일반적으로 -F, -CI, -Br 및 -I를 포함하는 할로겐; 선형, 분지형 및 고리형을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬 및 요오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; -OH; 선형, 분지형 및 고리형을 포함하는 저급 알콕시; -SH; 선형, 분지형 및 고리형을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬실릴, 알콕시실릴 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카보닐; 카복실산, 카복실산 에스테르, 카복실산 아미드; 아미노카보닐; 아미노아실; 카바메이트; 우레아; 티오카바메이트; 티오우레아; 케톤; 설폰; 설폰아미드; 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 피롤, 이미다졸, 푸란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘, 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴 및 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴을 포함하는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
-R1 및 -R2의 특성은 전자 공여 또는 전자 끌기 치환기의 선택적 첨가에 의해 조절될 수 있다. 용어 "전자 공여 기"란 R1R2CH의 산성을 감소시키는 치환기이고; 전자 공여 기는 통상적으로 음수의 Hammett σ 또는 Taft σ* 상수와 연관되고, 물리적 유기 화학의 분야에 잘 공지되어 있다. (Hammett 상수는 아릴/헤테로아릴 치환기를 지칭하고, Taft 상수는 비방향족 모이어티에서의 치환기를 지칭한다.) 적합한 전자 공여 치환기의 예는 하급 알킬, 하급 알콕시, 하급 알킬티오, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노 및 실릴을 포함한다.
용어 "전자 끌기 기"는 R1R2CH 기의 산성을 증가시키는 치환기를 지칭하고; 전자 끌기 기는 통상적으로 양수의 Hammett σ 또는 Taft σ* 상수와 연관되고, 물리적 유기 화학의 분야에 잘 공지되어 있다. 적합한 전자 끌기 치환기의 예는 할로겐, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 니트로, 시아노, C(=O)-Rx(여기서, -Rx는 H, 하급 알킬, 하급 알콕시 또는 아미노 또는 S(O)mRY이고, m은 1 또는 2이고, -RY는 하급 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴임)를 포함한다. 당해 분야에 잘 공지된 것처럼, 치환기 기의 전자 영향은 치환기의 위치에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 아릴 고리의 오르토-위치 또는 파라-위치에서의 알콕시 치환기는 전자 공여이고, 음수의 Hammett σ 상수를 특징으로 하는 반면, 아릴 고리의 메타-위치에서의 알콕시 치환기는 전자 끌기이고, 양수의 Hammett σ 상수를 특징으로 한다.
용어 "알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 1개 내지 8개의 탄소 또는 1개 내지 6개의 탄소 또는 1개 내지 4개의 탄소의 선형, 분지형 또는 고리형 탄화수소 기를 포함하고, 알킬은 포화 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 기술되지 않는 한, 이들은 1개 내지 6개의 탄소를 함유한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 및 유사한 것과 같은 기를 포함하는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리를 포함한다.
용어 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오드를 포함한다.
용어 "말레이미도"는 화학식
Figure pct00052
의 기이다.
소정의 실시형태에서, Z'는 WO2020/206358 A1에 개시된 것과 같은 하이드로겔이다. 특히, 소정의 실시형태에서, Z'는
(a) 멀티-아암 중합체 -P2를 포함하는 제1 프리폴리머를 제공하는 단계(여기서, 상기 제1 프리폴리머는 화학식 (PL-4)를 갖고,
Figure pct00053
(상기 식 중,
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이고;
r은 2 초과의 정수이고;
-Y는 상기 제1 프리폴리머를 제2 프리폴리머에 연결하기 위한 반응성 작용기이고;
-R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끌기 기, 알킬 또는 -H이고, -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 전자 끌기 기이고;
각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나, 2개의 -R4는 이것이 부착된 탄소 원자와 함께 3원 내지 6원 고리를 형성하고;
-W-는 부재하거나,
Figure pct00054
이고,
상기 식 중, 별표로 표시된 점선은 -NH-에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 -P2에 대한 부착을 나타내고;
각각의 x, y 및 z는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이고;
-B'는 -NH2, -ONH2, 케톤, 알데하이드, -SH, -OH, -CO2H, 카복사미드 기 또는 사이클로옥틴 또는 바이사이클로노닌을 포함하는 기이고;
-C*은 카복사미드, 티오에테르, 티오숙신이미딜, 트리아졸 또는 옥심임);
(b) 멀티-아암 중합체 -P1을 포함하는 제2 프리폴리머를 제공하는 단계(여기서, 각각의 아암은 단계 (a)의 -Y와 반응하는 반응성 작용기 -Y"에 의해 종료됨);
(c) -Y 및 -Y"가 반응하여 연결 -Y*-을 형성하는 조건 하에 단계 (a) 및 단계 (b)의 2개의 프리폴리머를 혼합하는 단계; 및 선택적으로
(d) 생성된 하이드로겔을 단리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 하이드로겔이다.
따라서, -Z'는 상기 기재된 방법으로부터 얻을 수 있는 하이드로겔이다. 소정의 실시형태에서, 이전의 방법에 의해 제조된 하이드로겔은 분해 가능하다.
소정의 실시형태에서, -Y 및 -Y"는 단계 (c) 하에 반응하여 화학식 (PL-4')의 가교결합을 포함하는 불용성 하이드로겔 메트릭스를 형성한다:
Figure pct00055
상기 식 중, n, r, -P1, -Y*-, -R4, -R1, -R2, -W- 및 -P2는 상기 정의된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 0, 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4)의 n은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 3이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 멀티-아암 -P2는 r-아암의 중합체이고, r은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 8이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 1 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 100 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 80 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 60 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 40 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 20 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 10 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 5 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 20 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 40 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 60 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 분자량이 1 내지 80 kDa이다.
소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 2이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 4이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 6이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 -P1은 r-아암의 중합체이고, r은 8이다.
소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 -P1은 분자량이 적어도 1 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 100 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 80 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 60 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 40 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 20 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 10 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 5 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 20 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 40 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 60 kDa이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 멀티-아암 중합체 -P1은 분자량이 1 내지 80 kDa이다.
소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG), 폴리(에틸렌 옥사이드)(PEO), 폴리(에틸렌 이민)(PEI), 덱스트란, 히알우론산 또는 이들의 공중합체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 PEG-기반 중합체이다. 소정의 실시형태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 히알우론산-기반 중합체이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끌기 기, 알킬 또는 -H이고, -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 전자 끌기 기이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -CN, -NO2, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, -COR3, -SOR3 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 선택적으로 치환된 알킬이거나, -R8 기 둘 다는 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성함); 또는 -SR9(여기서, -R9는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬임)이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -CN이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -NO2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 6개 내지 10개의 탄소를 함유하는 선택적으로 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 선택적으로 치환된 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 선택적으로 치환된 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 또는 인데닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 알케닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 알키닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -COR3, -SOR3 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 -H, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 알킬이거나, -R8 기 둘 다는 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성함)이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -SR9(여기서, -R9는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬임)이다. 소정의 실시형태에서, -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SOR3 또는 -SO2R3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 또는 -NR8 2임)이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SO2N(CH3)2, -SO2CH3, -SO2로 치환된 페닐, -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐, -SO2N(CH2CH2)2O, -SO2CH(CH3)2, -SO2N(CH3)(CH2CH3) 또는 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나 함께 취해져 3원 내지 6원 고리를 형성할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R4 둘 다는 메틸이다.
소정의 실시형태에서, -Y 및 -Y"는 아민, 아미노옥시, 케톤, 알데하이드, 말레이미딜, 티올, 알코올, 아지드, 1,2,4,6-테트라지닐, 트랜스-사이클로옥테닐, 바이사이클로노니닐, 사이클로옥티닐 및 이들의 보호된 변이체로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, Y 및 Y"는 선택적인 방식에서처럼 서로 반응할 수 있다. 예를 들면, -Y가 아민일 때, -Y"는 아미드 또는 카바메이트인 잔류 연결 작용기 -Y*-을 생성하는 카복실산, 활성 에스테르 또는 활성 카보네이트이다. 또 다른 예에서, -Y가 아지드일 때, -Y"는 1,2,3-트리아졸인 잔류 연결 작용기 -Y*-을 생성하는 알키닐, 바이사이클로노니닐 또는 사이클로옥티닐이다. 또 다른 예에서, -Y가 -NH2O일 때, -Y"는 옥심인 잔류 연결 작용기 -Y*-을 생성하는 케톤 또는 알데하이드이다. 또 다른 예에서, -Y가 -SH일 때, -Y"는 티오숙신이미딜 또는 티오에테르인 잔류 연결 작용기 -Y*-을 생성하는 말레이미드 또는 할로카보닐이다. 유사하게, -Y 및 -Y"의 이들 역할은 반대의 배향이 -Y*-을 생성하도록 역전될 수 있다.
소정의 실시형태에서, -Y*-은 아미드, 옥심, 1,2,3-트리아졸, 티오에테르, 티오숙신이미드 또는 에테르를 포함한다. 소정의 실시형태에서, -Y*-은 -L2-이다.
이들 접합 반응은 예를 들면 -Y가 아지드이고, -Y"가 사이클로옥틴일 때 당해 분야에 공지된 조건 하에 수행될 수 있고, 수성 용액이 더 양호한 반응 속도를 보여준다고 알려져 있지만, 접합은 임의의 용매에서 발생하고, 성분 둘 다는 적합한 용해도를 보여준다. -Y 및 -Y"가 아지드/사이클로옥틴일 때 2 내지 7의 pH 또는 -Y 및 -Y"가 활성화된 에스테르 및 아민일 때 6 내지 9의 pH에서 적절한 용매, 통상적으로 수성 완충액 중에 혼합될 때, -Y 및 -Y" 기는 화학식 (PL-4')의 가교결합을 포함하는 불용성 하이드로겔 매트릭스를 형성하도록 반응한다. 이 공정은 마이크로입자 현탁액, 예컨대 주사에 적합한 마이크로구를 형성하도록 벌크 상에서 또는 혼합 유기/수성 시스템에서 유화의 조건 하에 수행될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 하이드로겔 Z'를 포함하는 접합체는 는 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
(a) 화학식 (PL-4)의 제1 프리폴리머를 제공하는 단계,
(b) 화학식 (PL-5)의 -Y가 화학식 (PL-4)의 -B'와 반응하도록 화학식 (PL-4)의 프리폴리머를 화학식 (PL-5)의 링커-약물과 반응시키는 단계,
Figure pct00056
(상기 식 중,
n, -R1, -R2, -R4 및 -Y는 화학식 (PL-4)에 정의된 것과 같고;
-D는 약물 모이어티이고;
-X-는 -D가 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 부재하거나, -X-는 -D가 페놀, 알코올, 티올, 티오페놀, 이미다졸 또는 비염기성 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 -N(R6)CH2-이고; -R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴임);
(c) 멀티-아암 중합체 -P1을 포함하는 제2 프리폴리머를 제공하는 단계(여기서, 각각의 아암은 단계 (a)의 -Y와 반응하는 반응성 작용기 -Y"에 의해 종료되고, -P1에 대한 실시형태는 상기 정의된 것과 같음);
(d) -Y 및 -Y"가 반응하여 잔류 연결 작용기 -Y*-을 형성하는 조건 하에 단계 (a) 및 단계 (b)의 2개의 프리폴리머를 혼합하는 단계; 및 선택적으로
(e) 생성된 하이드로겔을 단리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
소정의 실시형태에서, 접합체는 하이드로겔 Z'를 화학식 (PL-5)의 링커-약물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 얻어지고, 여기서 하이드로겔 Z'에서의 -B'는 화학식 (PL-5)의 -Y와 반응한다.
오직 화학식 (PL-4), 화학식 (PL-4') 및 화학식 (PL-5)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 1개 내지 20개, 1개 내지 12개, 1개 내지 8개, 1개 내지 6개 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 알킬은 선형 또는 분지형이다. 선형 또는 분지형 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐 및 n-데실을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 알킬은 환형이다. 환형 알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜타디에닐 및 사이클로헥실을 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시 및 사이클로부톡시를 포함하는 산소에 결합된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 용어 "헤테로아릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리, 예컨대 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 및 인데닐을 지칭한다.
소정의 실시형태에서, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬 연결을 통해 분자의 나머지에 커플링될 수 있다. 이 상황 하에, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬이라 칭해질 것이고, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이 커플링된 분자 사이라는 것을 나타낸다.
용어 "할로겐" 또는 "할로"는 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클릭 고리" 또는 "헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3원 내지 15원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로푸라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 헤테로사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릴은 비방향족이다. 소정의 실시형태에서, 헤테로사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릴은 방향족이다.
용어 "선택적으로 치환된"은 비치환되거나 동일하거나 상이할 수 있는 치환기의 1개 이상(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개)에 의해 치환될 수 있는 기를 지칭한다. 치환기의 예는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, -CN, -ORaa, -SRaa, -NRaaRbb, -NO2, -C=NH(ORaa), -C(O)Raa, -OC(O)Raa, -C(O)ORaa, -C(O)NRaaRbb, -OC(O)NRaaRbb, -NRaaC(O)Rbb, -NRaaC(O)ORbb, -S(O)Raa, -S(O)2Raa, -NRaaS(O)Rbb, -C(O)NRaaS(O)Rbb, -NRaaS(O)2Rbb, -C(O)NRaaS(O)2Rbb, -S(O)NRaaRbb, -S(O)2NRaaRbb, -P(O)(ORaa)(ORbb), 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴을 포함하고, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 및 아릴은 각각 독립적으로 -Rcc에 의해 선택적으로 치환되고, -Raa 및 -Rbb는 각각 독립적으로 -H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴이거나, -Raa 및 -Rbb는, 이들이 부착된 질소 원자와 함께 취해져, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 -CN에 의해 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴을 형성하고, 각각의 -Rcc는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 아릴, -CN 또는 -NO2이다.
모이어티 -L1-은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티를 통해, 특히 상기 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기 또는 -D에 존재하는 변형 모이어티 Mmod를 통해 -D에 부착될 수 있다. 일 실시형태에서 -L1-은 IL-2 모이어티를 통해, 특히 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기를 통해 -D에 부착된다. 또 다른 실시형태에서, -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티 Mmod를 통해 -D에 부착된다. 하나 이상의 모이어티 -L1-이 모이어티 Mmod에 부착될 수 있다고 이해된다. 소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 하나의 아미노산 잔기에 부착된 모이어티 -L1-을 포함할 수 있고, 모이어티 Mmod에 부착된 모이어티 -L1-을 포함할 수 있다.
일 실시형태에서, IL-2 접합체에 존재하는 모든 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착된다.
-L1-이 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기에 부착되면, 이러한 아미노산 잔기는 -D의 단백질성 또는 비단백질성 아미노산 잔기일 수 있다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 비단백질성 아미노산 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-의 부착은 단백질성 아미노산 잔기에 대한 것이다. 부착이 단백질성 아미노산 잔기에서 발생하면, 상기 단백질성 아미노산 잔기는 소정의 실시형태에서 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 리신, 트리토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 단백질성 아미노산 잔기는 시스테인, 히스티딘, 리신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 시스테인 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 히스티딘 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 리신 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 트립토판 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 세린 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 트레오닌 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 티로신 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아스파르트산 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 글루탐산 잔기에 부착된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아르기닌 잔기에 부착된다.
소정의 실시형태에서, 적어도 하나의 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착되고, 하나 이상의 추가 모이어티 -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티에 부착된다.
모이어티 -L1-은 임의의 연결 유형을 통해 -D에 연결될 수 있고, 단 이것은 가역적이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아미드, 에스테르, 카바메이트, 아세탈, 아미날, 이민, 옥심, 하이드라존, 디설파이드 및 아실구아니딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 연결을 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아미드, 에스테르, 카바메이트 및 아실구아니딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 연결을 통해 -D에 연결된다. 이 연결이 특히 가역적이 아닐 수 있지만, 가역성이 -L1-에 존재하는 원자 또는 모이어티의 소정의 그룹의 효과일 수 있다고 이해된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 에스테르 연결을 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 카바메이트 연결을 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아실구아니딘을 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 아미드 연결을 통해 -D에 연결된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 리신 잔기 또는 N 말단의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 리신 잔기 또는 N 말단의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결되고, -D와 -L1- 사이의 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 리신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 리신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결되고, -D와 -L1- 사이에 형성된 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 N 말단의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결된다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 -D의 N 말단의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결되고, -D와 -L1- 사이에 형성된 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 WO 2009/095479 A2에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (II)를 갖는다:
Figure pct00057
점선은 아미드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
-X-는 -C(R4R4a)-; -N(R4)-; -O-; -C(R4R4a)-C(R5R5a)-; -C(R5R5a)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-O-; -O-C(R4R4a)-; 또는 -C(R7R7a)-이고;
X1은 C; 또는 S(O)이고;
-X2-는 -C(R8R8a)-; 또는 -C(R8R8a)-C(R9R9a)-이고;
=X3은 =O; =S; 또는 =N-CN이고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R4, -R4a, -R5, -R5a, -R6, -R8, -R8a, -R9, -R9a는 -H; 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R3, -R3a는 -H; 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 단 -R3, -R3a 중 하나 또는 둘 다가 -H가 아닌 경우에, 이들은 이들이 SP3-혼성화된 탄소 원자를 통해 부착된 N에 연결되고;
-R7은 -N(R10R10a); 또는 -NR10-(C=O)-R11이고;
-R7a, -R10, -R10a, -R11은 서로 독립적으로 -H; 또는 C1-6 알킬이고;
선택적으로, 쌍 -R1a/-R4a, -R1a/-R5a, -R1a/-R7a, -R4a/-R5a, -R8a/-R9a 중 하나 이상은 화학 결합을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R4/-R4a, -R5/-R5a, -R8/-R8a, -R9/-R9a 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬; 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7a, -R4/-R5, -R4/-R6, -R8/-R9, -R2/-R3 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 고리 A를 형성하고;
선택적으로, R3/R3a는 이들이 부착된 질소 원자와 연결되어 3원 내지 10원 헤테로사이클을 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄린; C3-10 사이클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-L1-은 적어도 하나의 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환되고, 단 화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식 (II)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
일 실시형태에서, 화학식 (II)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
화학식 (II)의 -R3/-R3a가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 연결되어 3원 내지 10원 헤테로사이클을 형성하면, 질소에 직접 부착된 원자가 SP3-혼성화된 탄소 원자인 오직 이러한 3원 내지 10원 헤테로사이클이 형성될 수 있다. 바꾸어 말하면, 이들이 부착된 질소 원자와 함께 -R3/-R3a에 의해 형성된 이러한 3원 내지 10원 헤테로사이클은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00058
상기 식 중,
점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
고리는 적어도 하나의 질소를 포함하는 3개 내지 10개의 원자를 포함하고;
R# 및 R##는 SP3-혼성화된 탄소 원자를 나타낸다.
3원 내지 10원 헤테로사이클이 추가로 치환될 수 있다고 또한 이해된다.
이들이 부착된 질소와 함께 화학식 (II)의 -R3/-R3a에 의해 형성된 적합한 3원 내지 10원 헤테로사이클의 예시적인 실시형태는 하기이다:
Figure pct00059
,
Figure pct00060
,
Figure pct00061
,
Figure pct00062
,
Figure pct00063
,
Figure pct00064
및
Figure pct00065
상기 식 중,
점선은 분자의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II)의 -L1-은 선택적으로 추가로 치환될 수 있다. 일반적으로, 임의의 치환기는 절단 원칙이 영향을 받지 않는 한 사용될 수 있고, 즉 화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소가 대체되지 않고, 화학식 (II)의 모이어티
Figure pct00066
의 질소가 1차, 2차 또는 3차 아민의 일부로서 남아 있고, 즉 -R3 및 -R3a가 서로 독립적으로 -H이거나 SP3-혼성화된 탄소 원자를 통해 -N<에 연결된다.
화학식 (II)의 -L1-에 연결된 -D의 질소는 소정의 실시형태에서 1차, 2차 또는 3차 아민 기일 수 있는 아민 작용기의 질소이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (II)의 -L1-에 연결된 -D의 질소는 1차 또는 2차 아민 기인 아민 작용기의 질소이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (II)의 -L1-에 연결된 -D의 질소는 1차 아민 작용기의 질소이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (II)의 -L1-에 연결된 -D의 질소는 1차 아민 작용기의 질소이다. 화학식 (II)의 -L1-이 -D(여기서, -D는 단백질 또는 펩타이드 약물 모이어티임)에 접합되면, 아민 작용기는 소정의 실시형태에서 N 말단 아민 작용기 또는 리신 부위 사슬의 아민 작용기일 수 있다. 화학식 (II)의 -L1-이 -D(여기서, -D는 단백질 또는 펩타이드 약물 모이어티임)에 접합되면, 아민 작용기는 소정의 실시형태에서 N 말단 아민 작용기일 수 있다.
일 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R1 또는 -R1a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R2 또는 -R2a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R3 또는 -R3a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R4는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R5 또는 -R5a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R6은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R7 또는 -R7a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R8 또는 -R8a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시형태에서, 화학식 (II)의 -R9 또는 -R9a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 WO2016/020373A1에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (III)를 갖는다:
Figure pct00067
상기 식 중,
점선은 각각 아미드 또는 에스테르 연결을 형성함으로써 -D의 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실에 대한 부착을 나타내고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R3 및 -R3a는 서로 독립적으로 -H, -C(R8R8aR8b), -C(=O)R8, -C≡N, -C(=NR8)R8a, -CR8(=CR8aR8b), -C≡CR8 및 -T로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4, -R5 및 -R5a는 서로 독립적으로 -H, -C(R9R9aR9b) 및 -T로 이루어진 군으로부터 선택되고;
a1 및 a2는 서로 독립적으로 0 또는 1이고;
각각의 -R6, -R6a, -R7, -R7a, -R8, -R8a, -R8b, -R9, -R9a, -R9b는 서로 독립적으로 -H, 할로겐, -CN, -COOR10, -OR10, -C(O)R10, -C(O)N(R10R10a), -S(O)2N(R10R10a), -S(O)N(R10R10a), -S(O)2R10, -S(O)R10, -N(R10)S(O)2N(R10aR10b), -SR10, -N(R10R10a), -NO2, -OC(O)R10, -N(R10)C(O)R10a, -N(R10)S(O)2R10a, -N(R10)S(O)R10a, -N(R10)C(O)OR10a, -N(R10)C(O)N(R10aR10b), -OC(O)N(R10R10a), -T, C1-20 alkyl, C2-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)- 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
각각의 -R10, -R10a, -R10b는 -H, -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-,
-S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)- 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
각각의 T는 서로 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R11은 서로 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR13, -OR13, -C(O)R13, -C(O)N(R13R13a), -S(O)2N(R13R13a), -S(O)N(R13R13a), -S(O)2R13, -S(O)R13, -N(R13)S(O)2N(R13aR13b), -SR13, -N(R13R13a), -NO2, -OC(O)R13, -N(R13)C(O)R13a, -N(R13)S(O)2R13a, -N(R13)S(O)R13a, -N(R13)C(O)OR13a, -N(R13)C(O)N(R13aR13b), -OC(O)N(R13R13a) 및 C1-6 알킬로부터 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R12, -R12a, -R13, -R13a, -R13b은 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R3/-R3a, -R6/-R6a, -R7/-R7a 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬; 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R2, -R1/-R3, -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7, -R2/-R3, -R2/-R4, -R2/-R5, -R2/-R6, -R2/-R7, -R3/-R4, -R3/-R5, -R3/-R6, -R3/-R7, -R4/-R5, -R4/-R6, -R4/-R7, -R5/-R6, -R5/-R7, -R6/-R7 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 고리 A를 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄린; C3-10 사이클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-L1-은 적어도 하나의 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
화학식 (III)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 상기 기재된 것과 같다.
바람직하게는 화학식 (III)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
일 실시형태에서, 화학식 (III)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
또 다른 실시형태에서, -L1-은 본원에 참고로 포함된 EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2, 및 US8618124B2에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 US8946405B2 및 US8754190B2에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IV)를 갖는다:
Figure pct00068
상기 식 중,
점선은 -OH, -SH 및 -NH2로 이루어진 군으로부터 선택된 -D의 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
-R1 및 -R2의 적어도 하나 또는 둘 다는 서로 독립적으로 -CN, -NO2, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, -C(O)R3, -S(O)R3, -S(O)2R3 및 -SR4로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-R1 및 -R2 중 하나 및 오직 하나는 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -N(R9)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐알킬, 선택적으로 치환된 알키닐알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R9는 -H 및 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y-는 부재하고, -X-는 -O- 또는 -S-이거나;
-Y-는 -N(Q)CH2-이고, -X-는 -O-이고;
Q는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
선택적으로, -R1 및 -R2는 3원 내지 8원 고리를 형성하도록 연결될 수 있고;
선택적으로, -R9 둘 다는 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
오직 화학식 (IV)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
본원에 사용된 것과 같이 용어 "알킬" 1개 내지 8개의 탄소 또는 일부 실시형태에서 1개 내지 6개 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시 및 유사를 포함하는 산소에 결합된 알킬 기를 포함한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리, 예컨대 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 및 유사한 것과 같은 기를 포함한다.
일부 경우에, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬렌 연결을 통해 분자의 나머지에 커플링될 수 있다. 이 상황 하에, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬이라 칭해질 것이고, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이 커플링된 분자 사이라는 것을 나타낸다.
용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
용어 "헤테로사이클릭 고리"는 3개 내지 7개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 4원 내지 8원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로푸라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기이다.
고리계가 선택적으로 치환될 때, 적합한 치환기는 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 추가 고리로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각은 선택적으로 추가로 치환된다. 상기를 포함하여 임의의 기에서의 선택적인 치환기는 할로, 니트로, 시아노, -OR, -SR, -NR2, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR2, -SOR, -SO2R, -SONR2, -SO2NR2이고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이거나, 2개의 R 기는 이것이 부착된 원자와 함께 취해져 고리를 형성한다.
바람직하게는 화학식 (IV)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 WO2013/036857A1에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (V)를 갖는다:
Figure pct00069
상기 식 중,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
-R1은 선택적으로 치환된 C1-C6 선형, 분지형 또는 환형 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 선택적으로 치환된 헤테로아릴; 알콕시; 및 -NR5 2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R2는 -H; 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H; 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 -H; 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 서로 독립적으로 -H; 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 2개의 -R5가 함께 취해질 때 사이클로알킬 또는 사이클로헤테로알킬일 수 있고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
오직 화학식 (V)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
"알킬", "알케닐", 및 "알키닐"은 1개 내지 8개의 탄소 또는 1개 내지 6개의 탄소 또는 1개 내지 4개의 탄소의 선형, 분지형 또는 환형 탄화수소 기를 포함하고, 알킬은 포화 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 기술되지 않는 한, 이들은 1개 내지 6개의 C를 함유한다.
"아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라센과 같은 기를 포함하는 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리, 예컨대 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 및 유사한 것과 같은 기를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환기 기를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 의미한다. 치환기는 일반적으로 F, Cl, Br 및 I를 포함하는 할로겐; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬 및 요오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; OH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알콕시; SH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬실릴, 알콕시실릴 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카보닐; 카복실산, 카복실산 에스테르, 카복실산 아미드; 아미노카보닐; 아미노아실; 카바메이트; 우레아; 티오카바메이트; 티오우레아; 케톤; 설폰; 설폰아미드; 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 헤테로아릴 피롤, 이미다졸, 푸란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘, 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴 및 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴을 포함하는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (V)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 US7585837B2에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (VI)를 갖는다:
Figure pct00070
상기 식 중,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
R1 및 R2는 수소, 알킬, 알콕시, 알콕시알킬, 아릴, 알칼릴, 아랄킬, 할로겐, 니트로, -SO3H, -SO2NHR5, 아미노, 암모늄, 카복사실, PO3H2 및 OPO3H2로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R3, R4 및 R5는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
화학식 (VI)에 대한 적합한 치환기는 알킬(예컨대, C1-6 알킬), 알케닐(예컨대, C2-6 알케닐), 알키닐(예컨대, C2-6 알키닐), 아릴(예컨대, 페닐), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로아릴(예컨대, 방향족 4원 내지 7원 헤테로사이클) 또는 할로겐 모이어티이다.
오직 화학식 (VI)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬", "알콕시", "알콕시알킬", "아릴", "알칼릴" 및 "아랄킬"은 1개 내지 8개, 바람직하게는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 알킬 라디칼, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 및 부틸, 및 6개 내지 10개의 탄소 원자의 아릴 라디칼, 예를 들면 페닐 및 나프틸을 의미한다. 용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (VI)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 WO2002/089789A1에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (VII)를 갖는다:
Figure pct00071
상기 식 중,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
Y1 및 Y2는 독립적으로 O, S 또는 NR7이고;
R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 수소, C1-6 알킬, C3-12 분지형 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-6 치환된 알킬, C3-8 치환된 사이클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아랄킬, C1-6 헤테로알킬, 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 페녹시 및 C1-6 헤테로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
Ar은 화학식 (VII)에 포함될 때 다치환된 방향족 탄화수소 또는 다치환된 헤테로사이클릭 기를 형성하는 모이어티이고;
X는 화학 결합 또는 표적 세포로 능동 수송된 모이어티, 소수성 모이어티 또는 이들의 조합이고,
y는 0 또는 1이고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
오직 화학식 (VII)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 알콕시, C3-8 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬 등을 포함하여 예를 들면 선형, 분지형, 치환된 C1-12 알킬을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 상이한 원자를 갖는 작용기 또는 화합물 내에 함유된 하나 이상의 원자를 첨가하거나 대체하는 것을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
치환된 알킬은 카복시알킬, 아미노알킬, 디알킬아미노, 하이드록시알킬 및 머캅토알킬을 포함하고; 치환된 사이클로알킬은 4-클로로사이클로헥실과 같은 모이어티를 포함하고; 아릴은 나프틸과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 아릴은 3-브로모-페닐과 같은 모이어티를 포함하고; 아랄킬은 톨루일과 같은 모이어티를 포함하고; 헤테로알킬은 에틸티오펜과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 헤테로알킬은 3-메톡시티오폰과 같은 모이어티를 포함하고; 알콕시는 메톡시과 같은 모이어티를 포함하고; 페녹시는 3-니트로페녹시과 같은 모이어티를 포함한다. 할로-는 플루오로, 클로로, 요오도 및 브로모를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (VII)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (VIII)의 하위구조를 포함한다:
Figure pct00072
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 아미드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (VIII)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (VIII)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX)의 하위구조를 포함한다:
Figure pct00073
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 카바메이트 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
-L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX)의 -L1-은 1개의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖는다:
Figure pct00074
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7),-COOH,
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
로 이루어진 군으로부터 선택된 친핵체이고;
-Ar-은
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
로 이루어진 군으로부터 선택되고,
상기 식 중,
점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a, -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖는다:
Figure pct00082
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R2, -R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-R4는 서로 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7),-COOH
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
로 이루어진 군으로부터 선택된 친핵체이고;
-Ar-은
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
로 이루어진 군으로부터 선택되고,
상기 식 중,
점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a, -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-b)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y1은 =O이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y2-는 -O-이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y3-은 -O-이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y4-는 -NR5-이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y5는 =O이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0 또는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 1이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 각각의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 둘 다 -H이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은 페닐이다. 소정의 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은 하기이다:
Figure pct00090
상기 식 중, 점선은 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 모이어티의 나머지에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 개재된 C1-10 알킬이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 개재된 C1-6 알킬이다. 소정의 실시형태에서 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 하기이다:
Figure pct00091
상기 식 중,
점선은 각각 화학식 (IX-a) 또는 (IX-b)의 모이어티의 나머지에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Nu는 -N(R7R7a)이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 메틸 또는 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 둘 다 메틸이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖는다:
Figure pct00092
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 5이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖는다:
Figure pct00093
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 WO2020/206358 A1에 개시된 것과 같은 구조를 갖는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (X)를 갖는다:
Figure pct00094
상기 식 중,
비표시된 점선은 -D에 대한 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에 대한 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
-R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끌기 기, 알킬 또는 H이고, -R1 또는 -R2 중 적어도 하나는 전자 끌기 기이고;
각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나, 2개의 -R4는 이것이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져 3원 내지 6원 고리를 형성하고;
-Y는 -D가 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 부재하거나, -Y는 -D가 페놀, 알코올, 티올, 티오페놀, 이미다졸 또는 비염기성 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 -N(R6)CH2-이고; R6은 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 0, 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 n은 3이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -CN, -NO2, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, -COR3, -SOR3 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 선택적으로 치환된 알킬이거나, -R8 기 둘 다는 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성함); 또는 -SR9(여기서, -R9는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬임)이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -CN이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -NO2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 6개 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 선택적으로 치환된 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 선택적으로 치환된 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 또는 인데닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 알케닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 알키닐이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -COR3, -SOR3 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 -H, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 알킬이거나, -R8 기 둘 다는 이것이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릭 고리를 형성함)이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끌기 기는 -SR9(여기서, -R9는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬임)이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 또는 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SOR3 또는 -SO2R3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 또는 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3(여기서, -R3은 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 또는 -NR8 2임)이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SO2N(CH3)2, -SO2CH3, -SO2로 치환된 페닐, -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐, -SO2N(CH2CH2)2O, -SO2CH(CH3)2, -SO2N(CH3)(CH2CH3) 또는 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 각각의 -R4는 C1-C3 알킬이다. 소정의 실시형태에서, -R4 둘 다는 메틸이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -Y-는 부재한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 -Y-는 -N(R6)CH2-이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 1이고, -R1은 -SO2 및 -CH3으로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 2이고, -R1은 -SO2 및 -CH3-으로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 소정의 실시형태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기서 n은 3이고, -R1은 -SO2 및 -CH3-으로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
오직 화학식 (X)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 1개 내지 20개, 1개 내지 12개, 1개 내지 8개, 1개 내지 6개 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 알킬은 선형 또는 분지형이다. 선형 또는 분지형 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐 및 n-데실을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 알킬은 환형이다. 환형 알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜타디에닐 및 사이클로헥실을 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시 및 사이클로부톡시를 포함하는 산소에 결합된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 용어 "헤테로아릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리, 예컨대 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 및 인데닐을 지칭한다.
소정의 실시형태에서, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬 연결을 통해 분자의 나머지에 커플링될 수 있다. 이 상황 하에, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬이라 칭해질 것이고, 이는 알킬렌 모이어티는 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이 커플링된 분자 사이라는 것을 나타낸다.
용어 "할로겐" 또는 "할로"는 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클릭 고리" 또는 "헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3원 내지 15원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로푸라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 헤테로사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릴은 비방향족이다. 소정의 실시형태에서, 헤테로사이클릭 고리 또는 헤테로사이클릴은 방향족이다.
용어 "선택적으로 치환된"은 비치환되거나 동일하거나 상이할 수 있는 치환기의 1개 이상(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개)에 의해 치환될 수 있는 기를 지칭한다. 치환기의 예는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, -CN, -ORaa, -SRaa, -NRaaRbb, -NO2, -C=NH(ORaa), -C(O)Raa, -OC(O)Raa, -C(O)ORaa, -C(O)NRaaRbb, -OC(O)NRaaRbb, -NRaaC(O)Rbb, -NRaaC(O)ORbb, -S(O)Raa, -S(O)2Raa, -NRaaS(O)Rbb, -C(O)NRaaS(O)Rbb, -NRaaS(O)2Rbb, -C(O)NRaaS(O)2Rbb, -S(O)NRaaRbb, -S(O)2NRaaRbb, -P(O)(ORaa)(ORbb), 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴을 포함하고, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 및 아릴은 각각 독립적으로 -Rcc에 의해 선택적으로 치환되고, -Raa 및 -Rbb는 각각 독립적으로 -H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴이거나, -Raa 및 -Rbb는, 이들이 부착된 질소 원자와 함께 취해져, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 -CN에 의해 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴을 형성하고, 각각의 -Rcc는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 아릴, -CN 또는 -NO2이다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 화학 결합이다. 소정의 실시형태에서, -L2-는 스페이서 모이어티이다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 개재되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 개재되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T-, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 개재되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
-Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -Ry2는 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬 사슬이고; C1-20 알킬 사슬은 -OH, -T 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 치환되고; -Ry1, -Ry6, -Ry6a는 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 14 g/mol 내지 750 g/mol 범위의 분자량을 갖는다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함한다:
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
상기 식 중,
점선은 각각 -L1-, -L2-의 나머지 또는 -Z에 대한 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, -L2-는 화학식 (IX-e)를 갖는다:
Figure pct00101
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -L1-에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 7이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 8이다.
소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-L2-는 화학식 (IX-f)를 갖는다:
Figure pct00102
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-는 화학식 (IX-f)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-는 화학식 (IX-f)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-는 화학식 (IX-f)를 갖고, 여기서 별표로 표시된 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (IX-f)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1-과 D 사이의 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 5이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 7이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 8이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이고, 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다.
일 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ia)를 갖는다. 소정의 실시형태에서, x는 1이다. 소정의 실시형태에서, x는 2이다. 소정의 실시형태에서, x는 3이다. 소정의 실시형태에서, x는 4이다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)를 갖는다. 소정의 실시형태에서, y는 2이다. 소정의 실시형태에서, y는 3이다. 소정의 실시형태에서, y는 4이다.
소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖는다:
Figure pct00103
상기 식 중, 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖고, 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖고, 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖고, 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (IX)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1-과 D 사이의 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (IX)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 5이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 4이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 5이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 6이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 7이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s2는 8이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 s1은 3이고, 화학식 (XI)의 s2는 3이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI)의 p1, p2, p3와 p4는 동일하다. 소정의 실시형태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다.
소정의 실시형태에서, 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖는다:
Figure pct00104
상기 식 중, 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖고, 점선은 -D의 리신 측쇄 또는 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖고, 점선은 -D의 리신 측쇄의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖고, 점선은 -D의 N 말단의 아민의 질소에 대한 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (XI-a)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1-과 D 사이의 연결은 카바메이트이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 115 내지 680 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 115 내지 560 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 185 내지 450 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 220 내지 240 범위의 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 115이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 160이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 225이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 270이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 340이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 450이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 560이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 p1, p2, p3와 p4는 동일하다. 소정의 실시형태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 14의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 23의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 24의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 26의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 27의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 28의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 29의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 30의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 32의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 33의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 35의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 36의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 37의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 38의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1a)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하고, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위이다. 소정의 실시형태에서, b3은 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 2이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
소정의 실시형태에서, IL-2 접합체는 혼합물로서 존재하고, 혼합물은 하기를 포함한다:
(i) 화학식 (A-1d)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체; 및
(ii) 화학식 (A-1e)의 모이어티 Mmod가 38번 위치에서의 시스테인의 황에 접합된 서열 번호 39의 IL-2 모이어티를 포함하는 적어도 하나의 접합체이되, 여기서 b1은 2이고, b2는 3이고, b3은 약 100 내지 125 범위의 정수이고, IL-2 모이어티에 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N 말단 또는 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240의 범위인 적어도 하나의 접합체.
소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체에서의 p1, p2, p3 및 p4는 약 112이다. 소정의 실시형태에서, 혼합물의 각각의 접합체의 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 리신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
본 발명의 또 다른 양태는 본원에 기재된 것과 같은 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체 및 적어도 하나의 부형제을 포함하는 약학 조성물이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 약학 조성물은 pH 3 내지 pH 8을 포함하여 이 범위의 pH를 갖는다.
소정의 실시형태에서, 이러한 약학 조성물은 액체 제형이다. 소정의 실시형태에서, 약학 조성물은 건조 제형이다.
이러한 액체 또는 건조 약학 조성물은 적어도 하나의 부형제를 포함한다. 비경구 제형에 사용된 부형제는 예를 들면 완충제, 등장성 개질제, 보존제, 안정화제, 흡수방지제, 산화 보호제, 점도제/점도 향상제 또는 다른 보조 제제로서 분류화될 수 있다. 그러나, 일부 경우에, 하나의 부형제는 이중 기능 또는 삼중 기능을 가질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 약학 조성물에 포함된 적어도 하나의 부형제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(i) 완충제: 원하는 범위에서 pH를 유지시키는 생리학적으로 관용된 완충액, 예컨대 인산나트륨, 중탄산염, 숙신산염, 히스티딘, 시트르산염 및 아세트산염, 황산염, 질산염, 클로라이드, 피루브산염; 제산제, 예컨대 Mg(OH)2 또는 ZnCO3이 또한 사용될 수 있음;
(ii) 등장성 개질제: 주사 데포에서 삼투압 차이로 인해 세포 손상으로부터 생길 수 있는 통증을 최소화하기 위해; 글리세린 및 염화나트륨은 예임; 유효 농도는 혈청에 대해 285 내지 315 mOsmol/kg의 추정된 오스몰농도를 사용하여 삼투압측정법에 의해 결정될 수 있음;
(iii) 보존제 및/또는 항균제: 다용량 비경구 제형은 주사 시 환자가 감염되는 위험을 최소화하기 위해 충분한 농도로 보존제의 첨가를 요하고 상응하는 조절 요건이 확립됨; 통상적인 보존제는 m-크레솔, 페놀, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 클로로부탄올, 벤질 알코올, 페닐질산수은, 티메로솔, 소르브산, 소르브산칼륨, 벤조산, 클로로크레솔 및 벤잘코늄 클로라이드를 포함함;
(iv) 안정화제: 안정화제는 단백질 안정화 힘의 강화에 의해, 변성된 상태의 탈안정화에 의해 또는 단백질에 대한 부형제의 직접 결합에 의해 달성됨; 안정화제는 아미노산, 예컨대 알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 글리신, 히스티딘, 리신, 프롤린, 당, 예컨대 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 폴리올, 예컨대 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 염, 예컨대 인산칼륨, 황산나트륨, 킬레이트화제, 예컨대 EDTA, 헥사포스페이트, 리간드, 예컨대 2가 금속 이온(아연, 칼슘 등), 다른 염 또는 유기 분자, 예컨대 페놀 유도체일 수 있음; 또한, 올리고머 또는 중합체, 예컨대 사이클로덱스트린, 덱스트란, 덴드리머, PEG 또는 PVP 또는 프로타민 또는 HSA가 사용될 수 있음;
(v) 흡수방지제: 주로 이온성 또는 비이온성 계면활성제 또는 다른 단백질 또는 가용성 중합체는 제형의 용기의 내부 표면에 경쟁적으로 코팅하거나 흡수하도록 사용됨; 예를 들면, 폴록사머(Pluronic F-68), PEG 도데실 에테르(Brij 35), 폴리소르베이트 20 및 80, 덱스트란, 폴리에틸렌 글리콜, PEG-폴리히스티딘, BSA 및 HSA 및 젤라틴; 부형제의 선택된 농도 및 유형은 회피되는 효과에 따라 달라지지만, 통상적으로 계면활성제의 단일층은 CMC 값보다 바로 높게 계면에서 형성됨;
(vi) 산화 보호제: 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 엑토인, 메티오닌, 글루타티온, 모노티오글리세롤, 모린, 폴리에틸렌이민(PEI), 프로필 갈레이트 및 비타민 E; 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, EDTA, 헥사포스페이트 및 티오글리콜산이 또한 사용될 수 있음;
(vii) 점도제 또는 점도 향상제: 바이알 및 주사기에서의 입자의 침강을 지연시키고, 입자의 혼합 및 재현탁을 수월하게 하고, 현탁액이 주사하기에 더 쉽게(즉, 주사기 플랜저에서 낮은 힘) 만들도록 사용됨; 적합한 점도제 또는 점도 향상제는 예를 들면 카보폴 940, 카보폴 Ultrez 10과 같은 카보머 점도제, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(하이프로멜로스, HPMC) 또는 디에틸아미노에틸 셀룰로스(DEAE 또는 DEAE-C)와 같은 셀룰로스 유도체, 콜로이드성 규산마그네슘(Veegum) 또는 규산나트륨, 하이드록시인회석 겔, 인산삼칼슘 겔, 잔탄, Satia 검 UTC 30과 같은 카라기난, 지방족 폴리(하이드록시 산), 예컨대 폴리(D,L- 또는 L-락트산)(PLA) 및 폴리(글리콜산)(PGA) 및 이들의 공중합체(PLGA), D,L-락타이드, 글리콜라이드 및 카프로락톤의 3원중합체, 폴록사머, 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌)-폴리(옥시에틸렌)의 삼중블록(예를 들면 Pluronic®)을 구성하기 위한 친수성 폴리(옥시에틸렌) 블록 및 소수성 폴리(옥시프로필렌) 블록, 폴리에테르에스테르 공중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 테레프탈레이트/폴리부틸렌 테레프탈레이트 공중합체, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트(SAIB), 덱스트란 또는 이의 유도체, 덱스트란 및 PEG의 조합, 폴리디메틸실록산, 콜라겐, 키토산, 폴리비닐 알코올(PVA) 및 유도체, 폴리알킬이미드, 폴리(아크릴아미드-코-디알릴디메틸 암모늄(DADMA)), 폴리비닐피롤린돈(PVP), 글리코사미노글리칸(GAG), 예컨대 황산더마탄, 황산콘드로이틴, 황산케라탄, 헤파린, 황산헤파란, 히알우로난, 소수성 A-블록, 예컨대 폴리락타이드(PLA) 또는 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)(PLGA) 및 소수성 B-블록, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리비닐 피롤린돈으로 이루어진 ABA 삼중블록 또는 AB 블록 공중합체임; 이러한 블록 공중합체뿐만 아니라 상기 언급된 플록사머는 반대 열 겔화 거동을 나타낼 수 있다(투여를 수월하게 하도록 실온에서 유체 상태 및 주사 후 신체 온도에서 졸-겔 전이 온도 초과에서 겔 상태);
(viii) 분산제 또는 확산제: 비제한적인 예로서 결합 조직의 세포간 공간에서 발견된 폴리사카라이드인 히알우론산과 같은 간질 공간에서 세포외 기질의 성분의 가수분해를 통해 결합 조직의 투과성을 개질함; 비제한적인 예로서 히알우로니다제와 같은 확산제는 세포외 기질의 점도를 일시적으로 감소시키고, 주사된 약물의 확산을 촉진함; 및
(ix) 다른 보조제: 예컨대 습윤제, 점도 개질제, 항생제, 히알우로니다제; 산 및 염기, 예컨대 염산 및 수산화나트륨은 제조 동안 pH 조정에 필요한 보조제임.
또 다른 양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유류 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 치료하거나 제어하거나 지연시키거나 예방하는 방법에 관한 것이고, 방법은 치료학적 유효량의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 이의 치료를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
소정의 실시형태에서, IL-2로 치료될 수 있는 질환은 암이다. 이러한 암은 액체 종양, 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
액체 림프종은 백혈병 또는 골수성 신생물, 예컨대 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수구성 백혈병(CML), 모발 세포 백혈병, 림프아구성 백혈병, 골수성 백혈병, 혈장 세포 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 골수증식성 신생물(MPN), 후-MPN AML, 후-MDS AML, del(5q) 연관된 고위험 MDS 또는 AML, 모세포 단계 만성 골수구성 백혈병, 다발성 골수종, 골수형성이상 증후군, 만성 골수증식성 장애, 혈장 세포 신생물 및 발덴스트롬 거대글로블린혈증일 수 있다.
고형 종양 또는 림프종은 입술암 및 구강암, 경구암, 간암/간세포암, 원발성 간암, 폐암, 림프종, 악성 중피종, 악성 흉선종, 피부암, 안와내 흑색종, 폐쇄성 원발 전이성 편평 목암, 아동 다발성 내분비 신생물 증후군, 균상 식육종, 비강암 및 부비강암, 코인두암, 신경모세포종, 구인두암, 난소암, 췌장암, 부갑상선암, 크롬친화성세포종, 뇌하수체 종양, 부신피질 암종, AIDS 관련된 악성종양, 항문암, 담관암, 방광암, 뇌 및 신경계 암, 유방암, 기관지 선종/카르시노이드, 위장 카르시노이드 종양, 암종, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 두개외 생식 세포 종양, 고환외 생식 세포 종양, 간외 담관암, 쓸개암, 위장(위)암, 임신 영양모 종양, 두경부암, 하인두암, 섬 세포 암종(내분비 췌장), 신장암/신장 세포 암, 후두암, 가슴막폐 모세포종, 전립선암, 신우 및 수뇨관의 전이성 세포 암, 망막모세포종, 침샘암, 육종, 세자리 증후군(Sezary syndrome), 소장암, 비뇨생식기암, 악성 흉선종, 갑상선암, 윌름스 종양, 담도암종, 및 또한 형성이상, 선종 및 상피내 암종과 같은 비정상 세포 성장의 이의 관련된 초기 병기로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 암은 간암/간세포암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 폐암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 림프종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 악성 흉선종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 피부암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 잠복 원발 전이성 편평 목암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신경모세포종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 난소암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 췌장암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 담관암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 방광암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 뇌 및 신경계 암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 위장 카르시노이드 종양이다. 소정의 실시형태에서, 암은 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 결장직장암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 간외 담관암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 쓸개암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 위장(위)암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 두경부암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신장암/신장 세포 암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 전립선암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 육종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 소장암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 비뇨생식기암이다.
폐암에 대한 예는 비소세포 폐암 및 소세포 폐암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 비소세포 폐암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 소세포 폐암이다.
림프종에 대한 예는 AIDS 관련된 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, T 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 임신 동안 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 임신 동안 비호지킨 림프종 및 혈관면역모구 림프종이다.
피부암에 대한 예는 흑색종 및 머켈 세포 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 피부암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 머켈 세포 암종이다.
난소암은 예를 들면 상피암, 생식 세포 종양 또는 저 악성상태 가능성 종양일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 상피암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 생식 세포 종양이다. 소정의 실시형태에서, 암은 낮은 악성 가능성 종양이다.
췌장암은 예를 들면 외분비 종양/선암, 췌장 내분비 종양(PET) 또는 신경내분비 종양(NET)일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 외분비 종양/선암이다. 소정의 실시형태에서, 종양은 췌장 내분비 종양이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신경내분비 종양이다.
뇌 및 신경계 암에 대한 예는 수모세포종, 예컨대 아동 수모세포종, 성상세포종, 상의세포종, 신경외배엽 종양, 신경초종, 뇌수막종, 뇌하수체 선종 및 신경교종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 수모세포종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 아동 수모세포종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 성상세포종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 상의세포종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신경외배엽 종양이다. 소정의 실시형태에서, 종양은 신경초종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 뇌수막종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 뇌하수체 선종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신경교종이다.
성상세포종은 거대 세포 교모세포종, 교모세포종, 속발성 교모세포종, 원발성 성인 교모세포종, 원발성 소아 교모세포종, 핍지교종성 종양, 핍지교종, 역형성 핍지교종, 희소성상세포성 종양, 희소성상세포종, 역형성 핍지교종, 희소성상세포성 종양, 희소성상세포종, 역형성 희소성상세포종, 역형성 성상세포종, 모양세포성 성상세포종, 상의하 거대 세포 성상세포종, 미만성 성상세포종, 다형성 황색성상세포종 및 소뇌 성상세포종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
신경외배엽 종양에 대한 예는 송과체 원시 신경외배엽 종양 및 천막상부 원시 신경외배엽 종양이다.
상의세포종은 뇌실막하세포종, 상의세포종, 점액유두 상의세포종 및 역형성 상의세포종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
뇌수막종은 비정형 뇌수막종 또는 역형성 뇌수막종일 수 있다.
신경교종은 다형 교모세포종, 부신경절종, 천막상부 원시 신경외배엽 종양(sPNET), 뇌간 신경교종, 아동 뇌간 신경교종, 시상하부 및 시각 경로 신경교종, 아동 시상하부 및 시각 경로 신경교종 및 악성 신경교종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
유방암에 대한 예는 임신 동안 유방암, 삼중 음성 유방암, 유관 상피내 암종(DCIS), 침윤성 유관 암종(IDC), 유방의 관 암종, 유방의 수질 암종, 유방의 점액 암종, 유방의 유두 암종, 유방의 체모양 암종, 침윤성 소엽 암종(ILC), 염증성 유방암, 소엽 상피내 암종(LCIS), 남성 유방암, 유두의 파제트병, 유방의 엽상 종양 및 전이성 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 임신 동안 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 삼중 음성 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유관 상피내 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 침윤성 유관 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 관 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 수질 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 점액 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 유두 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 체모양 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 침윤성 소엽 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 염증성 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 소엽 상피내 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 남성 유방암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유두의 페제트병이다. 소정의 실시형태에서, 암은 유방의 엽상 종양이다. 소정의 실시형태에서, 암은 전이성 유방암이다.
암종에 대한 예는 신경내분비 암종, 부신피질 암종 및 섬 세포 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 신경내분비 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 부신피질 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암은 섬 세포 암종이다.
결장직장암에 대한 예는 결장암 및 직장암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 결장암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 직장암이다.
육종은 카포시 육종, 골육종/골의 악성 섬유성 조직구증, 연조직 육종, 종양/육종의 유잉 패밀리, 횡문근육종, 건막의 투명 세포 육종, 중심성 연골육종, 중심성 및 골막 연골종, 섬유육종 및 자궁 육종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 카포시 육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 골육종/골의 악성 섬유성 조직구증이다. 소정의 실시형태에서, 암은 연조직 육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 종양/육종의 유잉 패밀리일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 횡문근육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 건막의 투명 세포 육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 중심성 연골육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 중심성 및 골막 연골육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 섬유육종일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 자궁 육종일 수 있다.
비뇨생식기 암에 대한 예는 고환암, 요도암, 질암, 자궁경부암, 음경암 및 외음부암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 고환암일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 요도암일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 질암일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 자궁경부암일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 음경암일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 암은 질암일 수 있다.
시아노몰거스 원숭이에서 본 발명의 IL-2가 잘 관용된 최소 호산구 확대로 용량에 기재된 기준선에 비해 γδ T 세포의 강력한 확대로 이어진다는 것이 놀랍게도 발견되었다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 100배의 γδ T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 150배의 γδ T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 200배의 γδ T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 300배의 γδ T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 350배의 γδ T 세포의 확대를 발생시킨다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 100배의 γ9δ2 T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 150배의 γ9δ2 T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 200배의 γ9δ2 T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 300배의 γ9δ2 T 세포의 확대를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 기준선에 비해 적어도 350배의 γ9δ2 T 세포의 확대를 발생시킨다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물에 의한 치료는 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에, 이와 동시에 또는 후에 개시될 수 있다. 게다가, 이러한 치료는 선택적으로 적어도 하나의 다른 암 치료제, 예컨대 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합될 수 있다. 적어도 하나의 암 치료제, 예컨대 전신 면역치료제는 소정의 실시형태에서 본 발명의 약학 조성물에 존재할 수 있는 하나 이상의 추가 약물에 대해 본원에서 어딘가에 제공된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 방사선 치료 또는 주사된 종양의 수술 제거 전에 적어도 하나의 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합 전에, 이와 동시에 또는 후에 전신으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 방사선 치료 또는 주사된 종양의 수술 제거 전에 적어도 하나의 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합 전에, 이와 동시에 또는 후에 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 접합체, 이의 약리학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물은 방사선 치료 또는 종양의 수술 제거 후에 적어도 하나의 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합 전에, 이와 동시에 또는 후에 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에, 이와 동시에 또는 후에 종양 배수 림프절로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 적어도 하나의 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합 전에, 이와 동시에 또는 후에, 및 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에, 이와 동시에 또는 후에 종양 배수 림프절로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 원발성 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에 또는 후에 발생할 수 있는 전이성 종양으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 적어도 하나의 전신 면역치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합 전에, 이와 동시에 또는 후에, 및 원발성 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에, 이와 동시에 또는 후에 발생할 수 있는 전이성 종양으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 적어도 하나의 전신 치료제는 종양의 수술 제거 또는 방사선 치료 전에 투여되고, 이후 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 전신 투여 또는 종양내 투여 또는 림프절내 투여가 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 종양내 투여가 처음에 투여되고, 이후 적어도 하나의 전신 치료제 또는 국소 종양내 면역치료제 또는 림프절내 면역치료제와 조합된 후속하는 치료가 있다. 소정의 실시형태에서, 적어도 하나의 전신 치료제는 종양의 수술 제거 전에 투여되고, 이후 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물이 수술 후에 전신으로 또는 배수 림프절로 또는 종양 층으로 또는 수술에 의해 제거되지 않은 종양에서 종양내 투여에 의해 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 에피토프 분산을 야기한다. 에프토프 분산은 유리한데, 왜냐하면 이것이 더 강하거나 더 포괄적인 면역 반응으로 이어질 수 있기 때문이다. 특히, 에피토프 분산의 생성 및 새로 활성화된 T 세포의 다양한 특이성을 갖는 새로운 에프토프로의 확대는 중요한 임상 이익에 기여할 수 있다. 예를 들면, 전이성 병변은 일부 에피토프와 지수 종양을 공유할 수 있지만, 여전히 지수 종양과 유전적으로 구별될 것이고, 이와 같이 에피토프 분산은 지수 종양과 전이성 종양 사이에 공유된 초기 면역 반응에 기초하여 먼 전이를 박멸하는 것을 도울 수 있고, 이는 이후 먼 전이에서 고유한 에피토프로 확산하고, 면역계가 이 전이를 제거하는 것을 돕는다. 에피토프 확산은 환자가 암을 가지면 증가 효율과 연관된다(Clin Cancer Res 2020;26:4442-7).
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물이 투여 전에, 동시에 또는 후에 환자에게 투여되고, 하나 이상의 추가 약물은 소정의 실시형태에서 패턴 인식 수용체 효능제(PRRA), 세포독성제/화학치료제, 면역 관문 억제제 또는 길항제, 면역 관문 효능제, 면역 활성화 수용체 효능제, 다중특이적 약물, 항체-약물 접합체(ADC), 항체-아쥬반트 접합체(AAC), 방사선핵종 또는 표적화된 방사선핵종 치료제, DNA 손상 보수 억제제, 종양 대사 억제제, 패턴 인식 수용체 효능제, 단백질 키나제 억제제, 케모카인 및 주화인자 수용체 효능제, 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제, 사이토카인 수용체 효능제, 사멸 수용체 효능제, CD47 또는 SIRPα 길항제, 종양세포붕괴성 약물, 신호 변환자 단백질, 후성적 변형제, 종양 펩타이드 또는 종양 백신, 열 쇼크 단백질(HSP) 억제제, 단백질분해 효소, 유비퀴틴 및 프로테아솜 억제제, 접착 분자 길항제, 호르몬 펩타이드 및 합성 호르몬을 포함하는 호르몬 및 입양 세포 치료제, 예컨대 종양 침윤 림프구(TIL) 치료제, 키메라 항원 수용체(CAR) 치료제, T 세포 치료제, 자연 살해(NK) 세포 치료제, CAR-T 치료제, CAR-NK 치료제, CAR-γδ 치료제, CAR-거대세포 치료제 또는 유전적으로 변형되거나 유전적으로 변형되지 않은 면역 세포 유형을 갖는 임의의 다른 세포 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
이러한 하나 이상의 추가 약물은 이의 유리 형태 또는 비변형된 형태일 수 있거나, 서방 화합물의 형태, 즉 약물이 소정의 반감기로, 예컨대 6시간 내지 6개월 범위의 반감기로 방출되는 형태일 수 있다.
PRRA는 톨 유사 수용체(TLR) 효능제, NOD 유사 수용체 효능제(NLR), RIG-I 유사 수용체 효능제, 세포액 DNA 센서 효능제, STING 효능제 및 아릴 탄화수소 수용체 효능제(AhR)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 톨 유사 수용체 효능제, 예컨대 TLR1/2의 효능제, 예컨대 펩티도글리칸, 지단백질, Pam3CSK4, Amplivant, SLP-AMPLIVANT, HESPECTA, ISA101 및 ISA201로 이루어진 군으로부터 선택된 톨 유사 수용체 효능제; TLR2의 효능제, 예컨대 LAM-MS, LPS-PG, LTA-BS, LTA-SA, PGN-BS, PGN-EB, PGN-EK, PGN-SA, CL429, FSL-1, Pam2CSK4, Pam3CSK4, 지모산, CBLB612, SV-283, ISA204, SMP105, 열 사멸된 리스테리아 모노사이토게네스; TLR3의 효능제, 예컨대 poly(A:U), poly(I:C)(poly-ICLC), 린타톨리모드, 아폭심, IPH3102, poly-ICR, PRV300, RGCL2, RGIC.1, 리복심(RGC100, RGIC100), 리복솔(RGIC50), 합성 천연 또는 변형된 이중 가닥 RNA, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머 및 리복손; TLR4의 효능제, 예컨대 리포폴리사카라이드(LPS), 네오셉틴-3, 글루코피라노실 지질 아쥬반트(GLA), GLA-SE, G100, GLA-AF, 임상 센터 기준 내독소(CCRE), 모노포스포릴 지질 A, 그래스 MATA MPL, PEPA10, ONT-10(PET-지질 A, 온코티레온), G-305, ALD046, CRX527, CRX675(RC527, RC590), GSK1795091, OM197MPAC, OM294DP, 종양 표적화된 TLR4 효능제, 및 SAR439794; TLR2/4의 효능제, 예컨대 지질 A, OM174 및 PGN007; TLR5의 효능제, 예컨대 플라겔린, 엔톨리모드, 모빌란, 프로텍탄 CBLB501; TLR6/2의 효능제, 예컨대 디아실화된 지단백질, 디아실화된 지질펩타이드, FSL-1, MALP-2 및 CBLB613; TLR7의 효능제, 예컨대 CL264, CL307, 이미퀴모드(R837), TMX-101, TMX-201, TMX-202, TMX302, 가르디퀴모드, S-27609, 851, UC-IV150, 852A(3M-001, PF-04878691), 록소리빈, 폴리우리딜산, GSK2245035, GS-9620, RO6864018(ANA773, RG7795), RO7020531, 이사토리빈, AN0331, ANA245, ANA971, ANA975, DSP0509, DSP3025(AZD8848), GS986, MBS2, MBS5, RG7863(RO6870868), 소티리모드, SZU101, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머, 종양 표적화된 TLR7 효능제 및 TQA3334; TLR8의 효능제, 예컨대 ssPolyUridine, ssRNA40, TL8-506, XG-1-236, VTX-2337(모톨리모드), VTX-1463, VTX378, VTX763, DN1508052, SBT6050, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머, 종양 표적화된 TLR8 효능제, 및 GS9688; TLR7/8의 효능제, 예컨대 TransCon™ TLR7/8 효능제, CL075, CL097, poly(dT), 레시퀴모드(R-848, VML600, S28463), MEDI9197(3M-052), NKTR262, DV1001, IMO4200, IPH3201, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 핵산 올리고머, BDC-1001, 다른 종양 표적화된 TLR7/8 효능제 및 VTX1463; TLR9의 효능제, 예컨대 CpG DNA, CpG ODN, 레피톨리모드(MGN1703), SD-101, QbG10, CYT003, CYT003-QbG10, DUK-CpG-001, CpG-7909(PF-3512676), GNKG168, EMD 1201081, IMO-2125, IMO-2055, CpG10104, AZD1419, AST008, IMO2134, MGN1706, IRS 954, 1018 ISS, 악틸론(CPG10101), ATP00001, AVE0675, AVE7279, CMP001, DIMS0001, DIMS9022, DIMS9054, DIMS9059, DV230, DV281, EnanDIM, 헵리사브(V270), 카파프록트(DIMS0150), NJP834, NPI503, SAR21609, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머 및 톨람바; 및 TLR7/9의 효능제, 예컨대 DV1179이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR1/2의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR2의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR3의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR4의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR2/4의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR5의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR6/2의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR7의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR8의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR7/8의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR9의 효능제이다.
CpG ODN에 대한 예는 ODN 1585, ODN 2216, ODN 2336, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006, ODN 2007, ODN BW006, ODN D-SL01, ODN 2395, ODN M362 및 ODN D-SL03이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 레시퀴모드이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 이미퀴모드이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 유리 형태의 레시퀴모드이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 화학식 (A-i)의 하나 이상의 모이어티가 접합된 중합체를 포함하는 접합체이다:
Figure pct00105
상기 식 중,
점선은 접합체에 대한 부착을 나타내고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (A-i)의 하나 이상의 모이어티가 접합된 중합체는 수용성 중합체이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 수용성 중합체는 PEG-기반 또는 히알우론산-기반 중합체이다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 PEG-기반 중합체이다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 하이드로겔, 예컨대 PEG-기반 또는 히알우론산-기반 하이드로겔이다. 소정의 실시형태에서, 하이드로겔은 PEG-기반 하이드로겔이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-i)의 n은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-i)의 n은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-i)의 n은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (A-i)의 n은 4이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 화학식 (A-i)의 다수의 모이어티가 접합된 PEG-기반 하이드로겔을 포함하는 접합체이고, 여기서 화학식 (A-i)에서 n은 2이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 본원에 참고로 포함된 WO2020/141221A1로부터 각각 217 및 219 페이지에 보이는 화합물 12 또는 14이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 WO2020/141221A1로부터 217 페이지에 보이는 화합물 12이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 WO2020/141221A1로부터 219 페이지에 보이는 화합물 14이다. 화합물 12 및 14를 WO2020/141221A1에 개시된 것처럼 합성할 수 있다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 NOD 유사 수용체 효능제이다. 하나 이상의 추가 약물이 NOD 유사 수용체 효능제이면, 이러한 NOD 유사 수용체 효능제는 NOD1의 효능제, 예컨대 C12-iE-DAP, C14-Tri-LAN-Gly, iE-DAP, iE-Lys 및 Tri-DAP; 및 NOD2의 효능제, 예컨대 L18-MDP, MDP, M-TriLYS, 무라부티드 및 N-글리콜릴-MDP로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 NOD1의 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 NOD2의 효능제이다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 RIG-I 유사 수용체 효능제이다. 하나 이상의 추가 약물이 RIG-I 유사 수용체 효능제이면, 이러한 RIG-I 유사 수용체 효능제는 3p-hpRNA, 5'ppp-dsRNA, 5'ppp RNA(M8), 킹크(kink)를 갖는 5'OH RNA(CBS-13-BPS), 5'PPP SLR, KIN100, KIN 101, KIN1000, KIN1400, KIN1408, KIN1409, KIN1148, KIN131A, poly(dA:dT), SB9200, RGT100 및 힐토놀로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 세포액 DNA 센서 효능제이다. 하나 이상의 추가 약물이 세포액 DNA 센서 효능제이면, 이러한 세포액 DNA 센서 효능제는 cGAS 효능제, dsDNA-EC, G3-YSD, HSV-60, ISD, ODN TTAGGG(A151), poly(dG:dC) 및 VACV-70으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 STING 효능제이다. 하나 이상의 추가 약물이 STING 효능제이면, 이러한 STING 효능제는 MK-1454, ADU-S100(MIW815), 2'3'-cGAMP, 3'3'-cGAMP, c-디-AMP, c-디-GMP, cAIMP(CL592), cAIMP 디플루오르(CL614), cAIM(PS)2 디플루오르(Rp/Sp)(CL656), 2'2'-cGAMP, 2'3'-cGAM(PS)2(Rp/Sp), 3'3'-cGAM 불화된, c-디-AMP 불화된, 2'3`-c-디-AMP, 2'3'-c-디-AM(PS)2(Rp,Rp), c-디-GMP 불화된, 2'3'-c-디-GMP, c-디-IMP, c-디-UMP 및 DMXAA(바디메잔, ASA404)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 MK-1454이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 ADU-S100(MIW815)이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 2'3'-cGAMP이다.
소정의 실시형태에서, PRRA는 아릴 탄화수소 수용체 효능제이다. 하나 이상의 추가 약물이 아릴 탄화수소 수용체(AhR) 효능제이면, 이러한 AhR 효능제는 FICZ, ITE 및 L-키누레닌으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 세포독성제/화학치료제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 면역 관문 억제제 또는 길항제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 면역 활성화 수용체 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 다중특이적 약물이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 항체-약물 접합체(ADC)이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 항체-아쥬반트 접합체(AAC)이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 방사선핵종 또는 표적화된 방사선핵종 치료제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 DNA 손상 보수 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양 대사 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 패턴 인식 수용체 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 단백질 키나제 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 케모카인 및 주화인자 수용체 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 사이토카인 수용체 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 사멸 수용체 효능제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 CD47 길항제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 SIRPα 길항제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양세포붕괴성 약물이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 신호 변환자 단백질이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 후성적 변형제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양 펩타이드 또는 종양 백신이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 열 쇼크 단백질(HSP) 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 단백질분해 효소이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 유비퀴틴 및 프로테이솜 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 부착 분자 길항제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 호르몬 펩타이드 및 합성 호르몬을 포함하는 호르몬이다.
세포독성 또는 화학치료제는 알킬화제, 안트라사이클린, 피롤로벤조디아제핀, 질소 머스타드, 백금 제제, 항대사물질, 항미세소관제, 토포아이소머라제 억제제, 세포독성 항생제, 아우리스타틴, 엔디인, 렉시트롭신, 두오카르마이신, 사이클로프로필피롤로인돌, 푸로마이신, 돌라스타틴, 메이탄신 유도체, 알킬설포네이트, 트리아젠 및 피페라진으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
알킬화제는 질소 머스타드, 예컨대 메클로르에타민, 사이클로포스파미드, 메팔란, 클로르암부실, 이포스파미드 및 부술판; 니트로소우레아, 예컨대 N-니트로소-N-메틸우레아, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 포테무스틴 및 스트렙토조신; 테트라진, 예컨대 다카르바진, 미토졸로미드 및 테모졸로미드; 에틸렌이민, 예컨대 알트레타민; 아지리딘, 예컨대 티오테파, 미토마이신 및 디아지퀀; 시스플라틴 및 유도체, 예컨대 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴; 및 비전통적 알킬화제, 예컨대 프로카르바진 및 헥사메틸멜라민으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항대사물질은 항-폴레이트, 예컨대 메토트렉세이트 및 페메트렉세드; 플루오로피리미딘, 예컨대 플루오로우라실 및 카페시타빈; 데옥시뉴클레오사이드 유사체, 예컨대 사이타라빈, 겜시타빈, 데시타빈, 아자시티딘, 플루다라빈, 넬라라빈, 클라드리빈, 클로파라빈 및 펜토스타틴; 및 티오푸린, 예컨대 티오구아닌 및 머캅토푸린으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항미세소관제는 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈덴신 및 빈플루닌; 탁산, 예컨대 파클리탁셀 및 도세탁셀; 포도필로톡신 및 유도체, 예컨대 포도필로톡신, 에토포시드 및 테니포시드; 스틸베노이드 페놀 및 유도체, 예컨대 지브레스타트(CA4P); 및 BNC105로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
토포아이소머라제 억제제는 토포아이소머라제 I 억제제, 예컨대 이리노테칸, 토포테칸 및 캄푸토테신; 및 토포아이소머라제 II 억제제, 예컨대 에토포사이드, 독소루비신, 미톡산트론, 테니포시드, 노보비오신, 메르바론 및 아클라루비신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 독소루비신이다.
세포독성 항생제는 안트라사이클린, 예컨대 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신 및 이다루비신; 피라루비신, 아클라루비신, 블레오마이신, 미토마이신 C, 미톡산트론, 악티노마이신, 닥티노마이신, 아드리아마이신, 미트라마이신 및 티라파자민으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE) 및 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
엔디인은 네오카르지노스타틴, 리다마이신(C-1027), 칼리케아미신, 에스페라미신, 디네미신 및 골포마이신 A로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
메이탄신 유도체는 안사미토신, 메르탄신(엠탄신, DM1) 및 라브탄신(소라보탄신, DM4)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
면역 관문 억제제 또는 길항제는 CTLA-4(세포독성 T-림프구 연관된 단백질 4)의 억제제, 예컨대 이필리무맙, 트레멜리무맙, MK-1308, FPT155, PRS010, BMS-986249, BPI-002, CBT509, JS007, ONC392, TE1254, IBI310, BR02001, CG0161, KN044, PBI5D3H5, BCD145, ADU1604, AGEN1884, AGEN1181, CS1002 및 CP675206; PD-1(예정사 1)의 억제제, 예컨대 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, AMP-224, BMS-936559, 세미플리맙 및 PDR001; PD-L1(예정 세포 사멸 단백질 1)의 억제제, 예컨대 MDX-1105, MEDI4736, 아테졸리주맙, 아벨루맙, BMS-936559 및 더발루맙; PD-L2(예정 사멸-리간드 2)의 억제제; KIR(살해-세포 면역글로불린 유사 수용체)의 억제제, 예컨대 릴루맙(IPH2102) 및 IPH2101; B7-H3의 억제제, 예컨대 MGA271; B7-H4의 억제제, 예컨대 FPA150; BTLA(B- 및 T-림프구 감쇠제)의 억제제; LAG3(림프구 활성화 유전자 3)의 억제제, 예컨대 IMP321(에프틸라기모드 알파), 렐라트리맙, MK-4280, AVA017, BI754111, ENUM006, GSK2831781, INCAGN2385, LAG3Ig, LAG525, REGN3767, Sym016, Sym022, TSR033, TSR075 및 XmAb22841; TIM-3(T 세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3)의 억제제, 예컨대 LY3321367, MBG453 및 TSR-022; VISTA(T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제자)의 억제제, 예컨대 JNJ-61610588; ILT2/LILRB1(Ig 유사 전사체 2/백혈구 Ig 유사 수용체 1)의 억제제; ILT3/LILRB4(Ig 유사 전사체 3/백혈구 Ig 유사 수용체 4)의 억제제; ILT4/LILRB2(Ig 유사 전사체 4/백혈구 Ig 유사 수용체 2)의 억제제, 예컨대 MK-4830; TIGIT(Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체)의 억제제, 예컨대 MK-7684, PTZ-201, RG6058 및 COM902; NKG2A의 억제제, 예컨대 IPH-2201; 및 PVRIG의 억제제, 예컨대 COM701로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CTLA-4의 억제제의 하나의 예는 항-CTLA4 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서 상기 접합체는 중합체성 모이어티 Z에 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 공유로 접합된 복수의 항-CTLA4 모이어티 -DCTLA4를 포함하고, -L1-은 -DCTLA4에 공유로 접합되고, -L2-는 Z에 공유로 접합되고, -L1-은 링커 모이어티이고, -L2-는 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이고, 모이어티 -L1-, -L2- 및 Z는 본 발명의 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, -DCTLA4는 야생형 Fc 항-CTLA4 항체, 효과기 기능에 대해 향상된 Fc/FcγR 결합 항-CTLA4 항체, 종양 미세환경에서 조건적으로 활성인 항-CTLA4 항체, 항-CTLA4 소분자, CTLA4 길항제 융합 단백질, 항-CTLA4 안티칼린, 항-CTLA4 나노바디 및 항체에 기반한 항-CTLA4 다중특이적 생물제, scFV 또는 다른 형식으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, -DCTLA4는 이필리무맙이다. 소정의 실시형태에서, -DCTLA4는 트레멜리무맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-CTLA4 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00106
상기 식 중,
별표로 표시된 점선은 -DCTLA4의 아민 작용기의 질소, 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소에 대한 부착을 나타내고;
비표시된 점선은 Z, 예컨대 하이드로겔, 특히 가교결합된 히알우론산 하이드로겔에 대한 부착을 나타낸다.
Z가 하이드로겔, 예컨대 가교결합된 히알우론산 하이드로겔이면, 다수의 모이어티 -DCTLA4-L1-L2-가 Z에 연결되는 것으로 이해된다.
소정의 실시형태에서, -DCTLA4 및 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소는 리신 잔기의 아민이다. 소정의 실시형태에서, -DCTLA4 및 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소는 N 말단 아민이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 상기 정의된 것과 같은 CTLA4의 억제제이다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 PD-1 또는 PD-L1의 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 PD-1의 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 PD-L1의 억제제이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 펨브롤리주맙이다.
면역 활성화 수용체 효능제는 CD27의 효능제, 예컨대 재조합 CD70, 예컨대 HERA-CD27L 및 발리루맙(CDX-1127); CD28의 효능제, 예컨대 재조합 CD80, 재조합 CD86, TGN1412 및 FPT155; CD40의 효능제, 예컨대 재조합 CD40L, CP-870,893, 다세투주맙(SGN-40), Chi Lob 7/4, ADC-1013 및 CDX1140; 4-1BB(CD137)의 효능제, 예컨대 재조합 4-1BBL, 우렐루맙, 우토밀루맙 및 ATOR-1017; OX40의 효능제, 예컨대 재조합 OX40L, MEDI0562, GSK3174998, MOXR0916 및 PF-04548600; GITR의 효능제, 예컨대 재조합 GITRL, TRX518, MEDI1873, INCAGN01876, MK-1248, MK-4166, GWN323 및 BMS-986156; 및 ICOS의 효능제, 예컨대 재조합 ICOSL, JTX-2011 및 GSK3359609로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
다중특이적 약물은 생물제 및 소분자 면역 관문 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 생물제에 대한 예는 다중특이적 면역 관문 억제제, 예컨대 CD137/HER2 다중특이적, PD-(L)1/LAG3 길항제(예를 들면 FS118, MGD013), CTLA4/LAG3 길항제(예를 들면 XmAb22841) 및 CTLA4/PD-(L)1 길항제(예를 들면 XmAb20717, MGD019); 다중특이적 면역 활성화 수용체 효능제, 면역사이토카인 및 다중특이적 면역 관문 효능제이다. 이러한 다중특이적 면역 관문 효능제는 Ig 슈퍼패밀리 효능제, 예컨대 ALPN-202, FPT155, TGN1412, GSK3359609, JTX-2011; TNF 슈퍼패밀리 효능제, 예컨대 FAP-4-1BBL(RG7826), OX40-41BB(FS120) ATOR-1015, ATOR-1144, ALG.APV-527, 리포칼린/PRS-343, PRS344/ONC0055, FAP-CD40 DARPin, MP0310 DARPin, FAP-0X40 DARPin, EGFR-CD40 DARPin, EGFR41BB/CD137 DARPin, EGFR-0X40/DARFPin, HER2-CD40 DARPin, HER2-41BB/CD137 DARPin, HER2-0X40 DARPin, FIBRONECTIN ED-B-CD40 DARPin, FIBRONECTIN ED-B-41BB/CD137 및 FIBRONECTIN ED-B-0X40 DARPin; CD3 다중특이적 효능제, 예컨대 블리나투모맙, 솔리토맙, MEDI-565, 에르투막소맙, 항-HER2/CD3, 1Fab-면역글로블린 G TDB, GBR 1302, MGD009, MGD007, EGFRBi, EGFR-CD Probody, RG7802, PF-06863135, PF-06671008, AMG212/BAY2010112, CD3-5T4, XmAb14045, XmAb13676, XmAb18087, S80880, REGN1979, REGN5458, REGN4018, RG6026, 모수네투주맙, EM801, ERY974, RG6194, AMG420, AMG330, AMG 212, AMG 596, AMG 160, AMG 427, AMG 562, AMG 673, AMG 701, AMG 757, AFM13, AMF24, AFM26, AFM11, TNB-486, TNB-383B, GEN3013, JNJ-63709178, JNJ-63898081, JNJ-64007957, JNJ-64407564, JNJ-67571244, AMV564, APVO414(MOR209, ES414), APVO436, HPN424, HPN536, HPN217, HPN 328, 및 종양 세포 항원 또는 바이러스 항원을 향한 T 세포 활성을 표적화하고 세포를 발현하는 γδ TCR 효능제를 포함하는 다른 다중특이적 CD3 효능제 또는 T 세포 수용체(TCR) 효능제; 활성화 NK 수용체 및 표적 종양 세포 항원을 표적화하는 자연 살해(NK) 세포 수용체 다중특이적 효능제, 예컨대 NKG2D 다중특이적 효능제, NKp30 다중특이적 효능제, NKp44 다중특이적 효능제, NKp46 다중특이적 효능제, NKp80 다중특이적 효능제, NKG2C 다중특이적 효능제, 2B4(CD244) 다중특이적 효능제, CD32a 다중특이적 효능제, CD64 다중특이적 효능제, 종양 항원에 결합하는 다중특이적 효능제뿐만 아니라, 활성화 수용체, 예컨대 NKG2D 또는 NKp30 또는 상기 열거된 다른 NK 수용체뿐만 아니라, Fc 수용체, 예컨대 TriNKeT에 대한 결합 및 CD16 다중특이적 효능제, 예컨대 1633 BiKE, 161533 TriKE, OXS-3550, OXS-C3550, AFM13 및 AFM24; 및 표적 항원에 결합할 수 있는 다른 치료학적 항체뿐만 아니라 Fc 수용체, 예컨대 CD16, CD32a, CD64로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
면역 활성화 수용체 효능제의 다른 예는 Dectin 효능제(Imprime PGG), 재조합 NKG2D 리간드, γδ TCR 신호전달의 리간드 또는 개질제, 예컨대 항-BTN3A1 mAb 또는 항-BTN2A1 mAb 또는 Vγ9/Vδ2 TCR 활성화 리간드, 예컨대 포스포 항원 및 피로포스페이트 항원 또는 파미드로네이트 및 졸레드로네이트와 같은 비스포스포네이트와 같은 내인성 Vγ9/Vδ2 리간드를 증가시키는 제제를 포함한다.
소분자 면역 관문 억제제에 대한 예는 CA-327(TIM3/PD-L1 길항제)이다.
항체-약물 접합체는 조혈 암을 표적화하는 ADC, 예컨대 겜투주맙, 오조가미신, 브렌툭시맙 베도틴, 이노투주맙 오조가미신, SAR3419, BT062, SGN-CD19A, IMGN529, MDX-1203, 폴라투주맙 베도틴(RG7596), 피나투주맙 베도틴(RG7593), RG7598, 밀라투주맙-독소루비신 및 OXS-1550; 및 고형 종양 항원을 표적화하는 ADC, 예컨대 트라스투주맙 엠탄신, 글렘바투모맙 베도틴, SAR56658, AMG-172, AMG-595, BAY-94-9343, BIIB015, 보르세투주맙 마포도틴(SGN-75), ABT-414, ASG-5ME, 엔포르투맙 베도틴(ASG-22ME), ASG-16M8F, IMGN853, 인두사투맙 베도틴(MLN-0264), 바도르투주맙 베도틴(RG7450), 소피투주맙 베도틴(RG7458), 리파스투주맙 베도틴(RG7599), RG7600, DEDN6526A(RG7636), PSMA TTC, Progenics Pharmaceuticals로부터의 1095, 로보투주맙 메르탄신, 로보투주맙 엠탄신, IMMU-130, 사시투주맙 고비테칸(IMMU-132), PF-06263507 및 MEDI0641로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항체-아쥬반트 접합체는 볼트바디, 예컨대 WO2018112108A1 및 WO2018009916A1에 기재된 볼트바디일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 볼트바디는 BDC-1001 및 BDC-2034로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 볼트바디는 BDC-1001이다. 소정의 실시형태에서, 볼트바디는 BDC-2034이다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-I)의 구조를 갖는다:
Figure pct00107
상기 식 중, Ab는 항체 모이어티이고;
A는 항체 모이어티에서의 비변형된 아미노산 측쇄 또는 항체 모이어티에서의 변형된 아미노산 측쇄이고;
Z는 연결 모이어티이고;
Adj는 아쥬반트 모이어티이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이다.
화학식 (BT-I)의 모이어티 Ab의 r 아미노산 측쇄가 모이어티 Adj-Z에 연결된다고 이해된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I)의 A는 아민 작용기를 포함하는 항체 모이어티에서 아미노산 측쇄를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-II)의 구조를 갖는다:
Figure pct00108
상기 식 중,
Ab는 항체 모이어티이고;
Figure pct00109
은 Ab의 리신 잔기의 측쇄를 나타내고, 비표시된 점선은 Z에 대한 부착을 나타내고, 별표로 표시된 점선은 리신 잔기의 알파 탄소에 대한 부착을 나타내고;
Adj는 아쥬반트 모이어티이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
Z는 에틸렌 글리콜 기 또는 글리신 잔기를 갖는 2가 연결 모이어티이다.
화학식(BT-II)의 모이어티
Figure pct00110
가 화학식 (BT-I)의 A에 상응한는 이해된다. 마찬가지로, 화학식 (BT-II)의 모이어티 Ab의 r 리신 측쇄 모이어티가 모이어티 Adj-Z에 연결된다고 이해된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 아미드 결합, C-N 단일 결합, C-O 단일 결합 또는 C-C 단일 결합을 통해 Adj에 결합되고, 아미드 결합 또는 C-N 단일 결합을 통해 Ab에 결합된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 Adj의 질소 기 및 Ab의 질소 기에 결합된다. 이러한 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 아미드 결합, C-N 단일 결합 또는 이들의 조합을 통해 인접한 질소 기에 결합된다.
일부 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 PEG 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 적어도 2개의 에틸렌 글리콜 기, 예컨대 적어도 3개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 4개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 5개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 6개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 7개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 8개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 9개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 10개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 11개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 12개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 13개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 14개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 15개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 16개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 17개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 18개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 19개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 20개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 21개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 22개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 23개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 24개의 에틸렌 글리콜 기 또는 적어도 25개의 에틸렌 글리콜 기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 2개의 에틸렌 글리콜 기, 3개의 에틸렌 글리콜 기, 4개의 에틸렌 글리콜 기, 5개의 에틸렌 글리콜 기, 6개의 에틸렌 글리콜 기, 8개의 에틸렌 글리콜 기, 12개의 에틸렌 글리콜 기, 24개의 에틸렌 글리콜 기 또는 25개의 에틸렌 글리콜 기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 글리신 잔기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 적어도 2개의 글리신 잔기, 예컨대 적어도 3개의 글리신 잔기, 적어도 4개의 글리신 잔기, 적어도 5개의 글리신 잔기, 적어도 6개의 글리신 잔기, 적어도 7개의 글리신 잔기, 적어도 8개의 글리신 잔기, 적어도 9개의 글리신 잔기, 적어도 10개의 글리신 잔기, 적어도 11개의 글리신 잔기, 적어도 12개의 글리신 잔기, 적어도 13개의 글리신 잔기, 적어도 14개의 글리신 잔기, 적어도 15개의 글리신 잔기, 적어도 16개의 글리신 잔기, 적어도 17개의 글리신 잔기, 적어도 18개의 글리신 잔기, 적어도 19개의 글리신 잔기, 적어도 20개의 글리신 잔기, 적어도 21개의 글리신 잔기, 적어도 22개의 글리신 잔기, 적어도 23개의 글리신 잔기, 적어도 24개의 글리신 잔기 또는 적어도 25개의 글리신 잔기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 2개의 글리신 잔기, 3개의 글리신 잔기, 4개의 글리신 잔기, 5개의 글리신 잔기, 6개의 글리신 잔기, 8개의 글리신 잔기, 12개의 글리신 잔기, 24개의 글리신 잔기 또는 25개의 글리신 잔기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Z는 2가 사이클로헥실렌 기를 추가로 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, CEA, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR, VEGF, HER2, SLAMF7, PDGFRa, gp75, CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, B7-H4, KIR, TNFRSF4, OX40L, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, BTLA, TIM3, A2Ar, VISTA, CLEC4C(BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D(MCL, CLECSF8), CLEC4E(Mincle), CLEC6A(Dectin-2), CLEC5A(MDL-1, CLECSF5), CLEC1B(CLEC-2), CLEC9A(DNGR-1) 및 CLEC7A(Dectin-1)로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 HER2에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 EGFR에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 CCR8에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 PD-L1에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 CEA에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 이필리무맙, 오비누투주맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 페르투주맙, 베바시주맙, 다라투무맙, 에타네르셉트, 올라라투맙, 엘로투주맙, 마르게툭시맙 및 이들의 바이오시밀러로 이루어진 군으로부터 선택된 항체를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 트라스투주맙을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 펨브롤리주맙을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Ab는 니볼루맙을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 PRRA를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 톨 유사 수용체(TLR) 효능제, c-타입 렉틴 수용체(CLR) 효능제, NOD 유사 수용체(NLR) 효능제, Rig-I 유사 수용체(RLR) 효능제, 인터페론 유전자의 자극자(STING) 효능제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 PRRA이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 TLR 효능제, 예컨대 TLR1 효능제, TLR2 효능제, TLR3 효능제, TLR4 효능제, TLR5 효능제, TLR6 효능제, TLR7 효능제, TLR7/8 효능제, TLR8 효능제, TLR9 효능제, TLR10 효능제, TLR11 효능제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 TLR 효능제이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 CL264, CL401, CL413, CL419, CL553, CL572, Pam3CSK4 및 Pam2CSK4로 이루어진 군으로부터 선택된 TLR 효능제이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00111
,
Figure pct00112
,
Figure pct00113
및
Figure pct00114
상기 식 중,
각각의 -J는 -H, -OR4 및 -R4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -R4는 -H, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 단위를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬 기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-Q-는 부재하거나, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 단위를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
점선은 Z에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00115
또는
Figure pct00116
상기 식 중,
각각의 -J는 -H, -OR4 또는 -R4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -R4는 -H, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 단위를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -U-는 독립적으로 -CH- 또는 -N-이고, 적어도 하나의 -U-는 -N-이고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이고;
-Q-는 부재하거나, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 단위를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고,
점선은 Z에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 하기 화학식으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00117
,
Figure pct00118
,
Figure pct00119
및
Figure pct00120
상기 식 중, 점선은 Z에 대한 부착을 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)의 Adj는 WO2018112108A1의 문단 [118] 내지 [136]에 개시된 아쥬반트 모이어티로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 하나 초과의 구별되는 아쥬반트 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VI)의 구조를 갖는다:
Figure pct00121
상기 식 중,
Ab는 항체 모이어티이고;
Figure pct00122
은 Ab의 리신 잔기의 측쇄를 나타내고, 비표시된 점선은 Z에 대한 부착을 나타내고, 별표로 표시된 점선은 리신 잔기의 알파 탄소에 대한 부착을 나타내고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
Z는 적어도 하나의 에틸렌 글리콜 기 또는 적어도 하나의 글리신 잔기를 포함하는 2가 연결 모이어티이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VI)의 Z는 화학식 (BT-I) 및 화학식 (BT-II)에 대해 정의된 것과 같이 사용된다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식(BT-VII)의 구조를 갖는다:
Figure pct00123
상기 식 중,
Ab는(i) 항원 결합 도메인 및(ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 모이어티이고;
Adj는 화학식 (BT-IVb)의 아쥬반트 모이어티이고;
Figure pct00124
상기 식 중,
-R4는 1개 내지 8개의 탄소를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -J는 -H이고;
각각의 -U-는 -N-이고;
각각의 t는 2이고;
-Q-는 부재하고;
점선은 G1에 대한 부착을 나타내고;
-G1-은 결합이고;
a는 1 내지 40으로부터 선택된 정수이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VII)의 구조를 갖는다:
Figure pct00125
상기 식 중,
Ab는 트라스투주맙이고;
Adj는 화학식 (BT-IVb)의 아쥬반트 모이어티이고;
Figure pct00126
상기 식 중,
-R4는 부틸이고;
각각의 -J는 -H이고;
각각의 -U-는 -N-이고;
각각의 t는 2이고;
-Q-는 부재하고;
점선은 -G1-에 대한 부착을 나타내고;
-G1-은 결합이고;
a는 1 내지 40으로부터 선택된 정수이고;
r은 1 내지 4로부터 선택된 정수이다.
소정의 실시형태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VIII)의 구조를 갖는다:
Figure pct00127
상기 식 중,
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
n은 약 2 내지 약 25로부터 선택된 정수이고;
Ab는 항체 모이어티이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 1이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 2이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 3이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 4이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 10이다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 HER2, EGFR, PD-L1 또는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 항체 모이어티는 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 EGFR에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
오직 화학식 (BT-IIIa), 화학식 (BT-IIIb), 화학식 (BT-IIIc), 화학식 (BT-IIId), 화학식 (BT-IVa) 및 화학식 (BT-IVb)의 맥락에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 표시된 탄소 원자의 수를 갖는 직선 또는 분지된, 포화, 지방족, 라디칼을 지칭한다. 알킬은 임의의 수의 탄소, 예컨대 C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C1-6, C1-7, C1-8, C1-9, C1-10, C2-3, C2-4, C2-5, C2-6, C3-4, C3-5, C3-6, C4-5, C4-6 및 C5-6을 포함할 수 있다. 예를 들면, C1-6 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 헥실을 포함한다. 알킬은 또한 30개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬 기, 예컨대 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실을 포함할 수 있다. 알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "아릴"은 고리 원자의 임의의 적합한 수 및 고리의 임의의 적합한 수를 갖는 방향족 고리계를 지칭한다. 아릴 기는 고리 원자의 임의의 적합한 수, 예컨대, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 16개의 고리 원자뿐만 아니라, 6개 내지 10개, 6개 내지 12개 또는 6개 내지 14개의 고리 구성원을 포함할 수 있다. 아릴 기는 단환식이거나, 이환식 또는 삼환식을 형성하도록 융합되거나, 바이아릴 기를 형성하도록 결합에 의해 연결될 수 있다. 대표적인 아릴 기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴 기는 메틸렌 연결 기를 갖는 벤질을 포함한다. 일부 아릴 기는 페닐, 나프틸 또는 바이페닐과 같은 6개 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다. 다른 아릴 기는 페닐 또는 나프틸과 같은 6개 내지 10개의 고리 구성원을 갖는다.
용어 "카보사이클"은 3개 내지 12개의 고리 원자 또는 표시된 원자의 수를 함유하는 포화 또는 부분 불포화된, 단환식, 융합된 이환식 또는 브릿징된 다환식 고리 어셈블리를 지칭한다. 카보사이클은 임의의 수의 탄소, 예컨대 C3-6, C4-6, C5-6, C3-8, C4-8, C5-8, C6-8, C3-9, C3-10, C3-11 및 C3-12를 포함할 수 있다. 포화 단환식 카보사이클릭 고리는 예를 들면 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 이환식 및 다환식 카보사이클릭 고리는 예를 들면 노르보르난, [2.2.2] 바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 카보사이클릭 기는 또한 고리에서 하나 이상의 이중 결합 또는 삼중 결합을 가지며 부분적으로 불포화될 수 있다. 부분 불포화된 대표적인 카보사이클릭 기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔(1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔(1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노르보르넨 및 노르보르나디엔을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
용어 "헤테로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 N, O 및 S로부터 선택된 이종원자로 선택적으로 및 독립적으로 대체된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클"은 헤테로사이클로알킬 기 및 헤테로아릴 기를 지칭한다. "헤테로아릴"은 홀로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 5개 내지 16개의 고리 원자를 함유하는 단환식 또는 융합된 이환식 또는 삼환식 방향족 고리를 지칭하고, 고리 원자의 1개 내지 5개는 이종원자, 예컨대 N, O 또는 S이다. 추가 이종원자, 예컨대 B, Al, Si 및 P가 또한 유용할 수 있다. 이종원자는 -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성하도록 산화될 수 있다. 헤테로아릴 기는 고리 원자의 임의의 수, 예컨대, 3개 내지 6개, 4개 내지 6개, 5개 내지 6개, 3개 내지 8개, 4개 내지 8개, 5개 내지 8개, 6개 내지 8개, 3개 내지 9개, 3개 내지 10개, 3개 내지 11개 또는 3개 내지 12개의 고리 구성원을 포함할 수 있다. 이종원자의 임의의 적합한 수, 예컨대 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 또는 1개 내지 2개, 1개 내지 3개, 1개 내지 4개, 1개 내지 5개, 2개 내지 3개, 2개 내지 4개, 2개 내지 5개, 3개 내지 4개 또는 3개 내지 5개가 헤테로아릴 기에 포함될 수 있다. 헤테로아릴 기는 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-이성질체, 1,2,4-이성질체 및 1,3,5-이성질체), 티오펜, 푸란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸 및 이속사졸과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로아릴 기는 또한 벤조피롤, 예컨대 인돌 및 이소인돌, 벤조피리딘, 예컨대 퀴놀린 및 이소퀴놀린, 벤조피라진(퀴녹살린), 벤조피리미딘(퀴나졸린), 벤조피리다진, 예컨대 프탈라진 및 시놀린, 벤조티오펜 및 벤조푸란과 같은 구성원을 형성하기 위해 페닐 고리와 같은 방향족 고리계에 융합될 수 있다. 다른 헤테로아릴 기는 결합, 예컨대 비피리딘에 의해 연결된 헤테로아릴 고리를 포함한다. 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 헤테로아릴" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 헤테로아릴 기는 고리에서 임의의 위치를 통해 연결될 수 있다. 예를 들면, 피롤은 1-피롤, 2-피롤 및 3-피롤을 포함하고, 피리딘은 2-피리딘, 3-피리딘 및 4-피리딘을 포함하고, 이미다졸은 1-이미다졸, 2-이미다졸, 4-이미다졸 및 5-이미다졸을 포함하고, 피라졸은 1-피라졸, 3-피라졸, 4-피라졸 및 5-피라졸을 포함하고, 트리아졸은 1-트리아졸, 4-트리아졸 및 5-트리아졸을 포함하고, 테트라졸은 1-테트라졸 및 5-테트라졸을 포함하고, 피리미딘은 2-피리미딘, 4-피리미딘, 5-피리미딘 및 6-피리미딘을 포함하고, 피리다진은 3-피리다진 및 4-피리다진을 포함하고, 1,2,3-트리아진은 4-트리아진 및 5-트리아진을 포함하고, 1,2,4-트리아진은 3-트리아진, 5-트리아진 및 6-트리아진을 포함하고, 1,3,5-트리아진은 2-트리아진을 포함하고, 티오펜은 2-티오펜 및 3-티오펜을 포함하고, 푸란은 2-푸란 및 3-푸란을 포함하고, 티아졸은 2-티아졸, 4-티아졸 및 5-티아졸을 포함하고, 이소티아졸은 3-이소티아졸, 4-이소티아졸 및 5-이소티아졸을 포함하고, 옥사졸은 2-옥사졸, 4-옥사졸 및 5-옥사졸을 포함하고, 이속사졸은 3-이속사졸, 4-이속사졸 및 5-이속사졸을 포함하고, 인돌, 예컨대 1-인돌, 2-인돌 및 3-인돌, 이소인돌, 예컨대 1-이소인돌 및 2-이소인돌, 퀴놀린, 예컨대 2-퀴놀린, 3-퀴놀린 및 4-퀴놀린, 이소퀴놀린, 예컨대 1-이소퀴놀린, 3-이소퀴놀린 및 4-이소퀴놀린, 퀴나졸린, 예컨대 2-퀴나졸린 및 4-퀴나졸린, 시놀린, 예컨대 3-시놀린 및 4-시놀린, 벤조티오펜, 예컨대 2-벤조티오펜 및 3-벤조티오펜, 및 벤조푸란, 예컨대 2-벤조푸란 및 3-벤조푸란이다.
용어 "헤테로사이클로알킬"은 홀로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 3개 내지 12개의 고리 구성원 및 N, O 및 S의 1개 내지 4개의 이종원자를 갖는 포화 고리계를 지칭한다. 추가 이종원자, 예컨대 B, Al, Si 및 P가 또한 유용할 수 있다. 이종원자는 -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성하도록 산화될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 고리 원자의 임의의 수, 예컨대, 3개 내지 6개, 4개 내지 6개, 5개 내지 6개, 3개 내지 8개, 4개 내지 8개, 5개 내지 8개, 6개 내지 8개, 3개 내지 9개, 3개 내지 10개, 3개 내지 11개 또는 3개 내지 12개의 고리 구성원을 포함할 수 있다. 이종원자의 임의의 적합한 수, 예컨대 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 또는 1개 내지 2개, 1개 내지 3개, 1개 내지 4개, 1개 내지 5개, 2개 내지 3개, 2개 내지 4개, 2개 내지 5개, 3개 내지 4개 또는 3개 내지 5개가 헤테로사이클로알킬 기에 포함될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 아지리딘, 아제티딘, 피롤리딘, 피페리딘, 아제판, 아조칸, 퀴누클리딘, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 피페라진(1,2-이성질체, 1,3-이성질체 및 1,4-이성질체), 옥시란, 옥세탄, 테트라하이드로푸란, 옥산(테트라하이드로피란), 옥세판, 티이란, 티에탄, 티올란(테트라하이드로티오펜), 티안(테트라하이드로티오피란), 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 디옥솔란, 디티올란, 모르폴린, 티오모르폴린, 디옥산 또는 디티안과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 인돌린과 같은 구성원을 형성하도록 방향족 또는 비방향족 고리계에 또한 융합될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 헤테로사이클로알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 고리에서 임의의 위치를 통해 연결될 수 있다. 예를 들면, 아지리딘은 1-아지리딘 또는 2-아지리딘일 수 있고, 아제티딘은 1-아제티딘 또는 2-아제티딘일 수 있고, 피롤리딘은 1-피롤리딘, 2-피롤리딘 또는 3-피롤리딘일 수 있고, 피페리딘은 1-피페리딘, 2-피페리딘, 3-피페리딘 또는 4-피페리딘일 수 있고, 피라졸리딘은 1-피라졸리딘, 2-피라졸리딘, 3-피라졸리딘 또는 4-피라졸리딘일 수 있고, 이미다졸리딘은 1-이미다졸리딘, 2-이미다졸리딘, 3-이미다졸리딘 또는 4-이미다졸리딘일 수 있고, 피페라진은 1-피페라진, 2-피페라진, 3-피페라진 또는 4-피페라진일 수 있고, 테트라하이드로푸란은 1-테트라하이드로푸란 또는 2-테트라하이드로푸란일 수 있고, 옥사졸리딘은 2-옥사졸리딘, 3-옥사졸리딘, 4-옥사졸리딘 또는 5-옥사졸리딘일 수 있고, 이속사졸리딘은 2-이속사졸리딘, 3-이속사졸리딘, 4-이속사졸리딘 또는 5-이속사졸리딘일 수 있고, 티아졸리딘은 2-티아졸리딘, 3-티아졸리딘, 4-티아졸리딘 또는 5-티아졸리딘일 수 있고, 이소티아졸리딘은 2-이소티아졸리딘, 3-이소티아졸리딘, 4-이소티아졸리딘 또는 5-이소티아졸리딘일 수 있고, 모르폴린은 2-모르폴린, 3-모르폴린 또는 4-모르폴린일 수 있다.
용어 "아릴알킬"은 알킬 기의 임의의 아릴 유도체이다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 아릴 모이어티는 알킬 연결을 통해 분자의 나머지에 커플링될 수 있다. 이 상황 하에, 치환기는 아릴알킬이라 칭해질 것이고, 이는 알킬렌 모이어티가 아릴 모이어티와 아릴이 커플링된 분자 사이에 있다는 것을 나타낸다. 대표적인 아릴알킬 기는 페닐메틸, 페닐에틸, 페닐프로필, 페닐이소프로필, 페닐부틸, 페닐-이소부틸, 페닐-sec-부틸, 페닐-tert-부틸, 페닐펜틸, 페닐-이소펜틸, 페닐헥실, 나프틸메틸, 나프틸에틸, 나프틸프로필, 나프틸이소프로필, 나프틸부틸, 나프틸-이소부틸, 나프틸-sec-부틸, 나프틸-tert-부틸, 나프틸펜틸, 나프틸-이소펜틸, 나프틸헥실, 바이페닐메틸, 바이페닐에틸, 바이페닐프로필, 바이페닐이소프로필, 바이페닐부틸, 바이페닐-이소부틸, 바이페닐-sec-부틸, 바이페닐-tert-부틸, 바이페닐펜틸, 바이페닐-이소펜틸 및 바이페닐헥실을 포함한다.
용어 "헤테로아릴알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 N, O 및 S로부터 선택된 이종원자로 선택적으로 및 독립적으로 대체된 아릴알킬 기를 지칭한다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가 약물은 β-에미터, 예컨대 177루테튬, 166홀뮴, 186레늄, 188레늄, 67구리, 149프로메튬, 199금, 77브롬, 153사마룸, 105로듐, 89스트론튬, 90이트륨, 131요오드; α-에미터, 예컨대 213비스무트, 223라듐, 225악티늄, 211아스타틴; 및 오거 전자-에미터, 예컨대 77브롬, 111인듐, 123요오드 및 125요오드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 방사선핵종이다.
표적화된 방사선핵종 치료제는 제발린(90Y-이브리투모맙 튜세탄), 벡사(131I-토시투모맙), 온콜림(131I-Lym 1), 림포사이드(90Y-에프라투주맙), 코타라(131I-chTNT-1/B), 라베투주맙(90Y 또는 131I-CEA), 테라긴(90Y-펨투모맙), 리카르틴(131I-메툭시맙), 라드레투맙(131I-L19) PAM4(90Y-클리바투주맙 테트라세탄), 조피고(223Ra 디클로라이드), 루타테라(177Lu-DOTA-Tyr3-Octreotate) 및 131I-MIBG로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
DNA 손상 보수 억제제는 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 억제제, 예컨대 올라파립, 루카파립, 니라파립, 벨리파립, CEP 9722 및 E7016; CHK1/CHK2 이중 억제제, 예컨대 AZD7762, V158411, CBP501 및 XL844; CHK1 선택적 억제제, 예컨대 PF477736, MK8776/SCH900776, CCT244747, CCT245737, LY2603618, LY2606368/프렉사세립, AB-IsoG, ARRY575, AZD7762, CBP93872, ESP01, GDC0425, SAR020106, SRA737, V158411 및 VER250840; CHK2 억제제, 예컨대 CCT241533 및 PV1019; ATM 억제제, 예컨대 AZD0156, AZD1390, KU55933, M3541 및 SX-RDS1; ATR 억제제, 예컨대 AZD6738, BAY1895344, M4344 및 M6620(VX-970); 및 DNA-PK 억제제, 예컨대 M3814로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
종양 대사 억제제는 아데노신 경로의 억제제, 트립토판 대사의 억제제 및 아르기닌 경로의 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
아데노신 경로의 억제제에 대한 예는 A2AR(아데노신 A2A 수용체)의 억제제, 예컨대 ATL-444, 이스트라데필린(KW-6002), MSX-3, 프레라데난트(SCH-420,814), SCH-58261, SCH412,348, SCH-442,416, ST-1535, 카페인, VER-6623, VER-6947, VER-7835, 비파데난트(BIIB-014), ZM-241,385, PBF-509 및 V81444; CD73의 억제제, 예컨대 IPH53 및 SRF373; 및 CD39의 억제제, 예컨대 IPH52이다.
트립토판 대사의 억제제에 대한 예는 IDO의 억제제 예컨대 인독시모드(NLG8189), 에파카도스타트, 나복시모드, BMS-986205 및 MK-7162; TDO의 억제제, 예컨대 680C91; 및 IDO/TDO 이중 억제제이다.
아르기닌 경로의 억제제에 대한 예는 아르기나제의 억제제, 예컨대 INCB001158이다.
단백질 키나제 억제제는 수용체 티로신 키나제 억제제, 세포내 키나제 억제제, 사이클린 의존적 키나제 억제제, 포스포이노시티드-3-키나제 억제제, 미토겐 활성화된 단백질 키나제 억제제, 핵 인자 카파-β 키나제의 억제제(IKK) 및 Wee-1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
수용체 티로신 키나제 억제제에 대한 예는 EGF 수용체 억제제, 예컨대 아파티닙, 세툭시맙, 에를로티닙, 게피티닙, 페르투주맙 및 마르게툭시맙; VEGF 수용체 억제제, 예컨대 악시티닙, 레반티닙, 페갑타닙 및 리니파닙(ABT-869); C-KIT 수용체 억제제, 예컨대 CDX0158(KTN0158); ERBB2(HER2) 억제제, 예컨대 허셉틴(트라스투주맙); ERBB3 수용체 억제제, 예컨대 CDX3379(MEDI3379, KTN3379) 및 AZD8931(사피티닙); FGF 수용체 억제제, 예컨대 에르다피티닙; AXL 수용체 억제제, 예컨대 BGB324(BGB 324, R 428, R428, 벰센티닙) 및 SLC391; 및 MET 수용체 억제제, 예컨대 CGEN241이다.
세포내 키나제 억제제에 대한 예는 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제, 예컨대 이브루티닙, 아칼라브루티닙, GS-4059, 스페브루티닙, BGB-3111, HM71224, 자누부르티닙, ARQ531, BI-BTK1 및 베카부르티닙; 비장 티로신 키나제 억제제, 예컨대 포스타마티닙; Bcr-Abl 티로신 키나제 억제제, 예컨대 이마티닙 및 닐로티닙; 야누스 키나제 억제제, 예컨대 룩소리티닙, 토파시티닙 및 페드라티닙; 및 다중특이적 티로신 키나제 억제제, 예컨대 보수티닙, 크리조티닙, 카보잔티닙, 다사티닙, 엔트렉티닙, 라파티닙, 무브리티닙, 파조파닙, 소라페닙, 수니티닙, SU6656 및 반데타닙이다.
티로신 키나제 억제제의 하나의 예는 티로신 키나제 억제제("TKI") 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서 상기 접합체는 중합체성 모이어티 Z에 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 공유로 접합된 복수의 TKI 모이어티 -DTKI를 포함하고, -L1-은 -DTKI에 공유로 및 가역적으로 접합되고, -L2-는 Z에 공유로 접합되고, -L1-은 링커 모이어티이고, -L2-는 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이고, 모이어티 -L1-, -L2- 및 Z는 본 발명의 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, -DTKI는 수용체 티로신 키나제 억제제, 세포내 키나제 억제제, 사이클린 의존적 키나제 억제제, 포스포이노시티드-3-키나제(PI3K) 억제제, 미토겐 활성화된 단백질 키나제 억제제, 핵 인자 카파-β 키나제의 억제제(IKK) 및 Wee-1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, -DTKI는 악시티닙이다. 소정의 실시형태에서, -DTKI는 레반티닙이다. 소정의 실시형태에서, -DTKI는 페갑타닙이다. 소정의 실시형태에서, -DTKI는 이니파닙이다.
사이클린 의존적 키나제 억제제에 대한 예는 리보시클립, 팔보시클립, 아베마시클립, 트리라시클립, 푸르발라놀 A, 올로무신 II 및 MK-7965이다.
포스포이노시티드-3-키나제 억제제에 대한 예는 IPI549, GDc-0326, 피크틸리십, 세라벨리십, IC-87114, AMG319, 셀렉탈리십, 이데알리십 및 CUDC907이다.
미토겐 활성화된 단백질 키나제 억제제에 대한 예는 Ras/파르네실 전환효소 억제제, 예컨대 티피라피닙 및 LB42708; Raf 억제제, 예컨대 레고라페닙, 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, PLX-4720, GDC-0879, AZ628, 리피라페닙, PLX7904 및 RO5126766; MEK 억제제, 예컨대 코비메티닙, 트라메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, 피마세르팁, 레파메티닙 및 PD0325901; ERK 억제제, 예컨대 MK-8353, GDC-0994, 울리세르티닙 및 SCH772984이다.
핵 인자 카파-β 키나제의 억제제(IKK)에 대한 예는 BPI-003 및 AS602868이다.
Wee-1 억제제의 예는 아다보세르팁이다.
케모카인 수용체 및 주화인자 수용체 효능제는 CXC 케모카인 수용체, CC 케모카인 수용체, C 케모카인 수용체, CX3C 케모카인 수용체 및 주화인자 수용체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CXC 케모카인 수용체는 CXCR1 효능제, 예컨대 재조합 CXCL8 및 재조합 CXCL6; CXCR2 효능제, 예컨대 재조합 CXCL8, 재조합 CXCL1, 재조합 CXCL2, 재조합 CXCL3, 재조합 CXCL5, 재조합 CXCL6, MGTA 145 및 SB251353; CXCR3 효능제, 예컨대 재조합 CXCL9, 재조합 CXCL10, 재조합 CXCL11 및 재조합 CXCL4; CXCR4 효능제, 예컨대 재조합 CXCL12, ATI2341, CTCE0214, CTCE0324 및 NNZ4921; CXCR5 효능제, 예컨대 재조합 CXCL13; CXCR6 효능제, 예컨대 재조합 CXCL16; 및 CXCL7 효능제, 예컨대 재조합 CXCL11로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CC 케모카인 수용체는 CCR1 효능제, 예컨대 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL4, 재조합 CCL5, 재조합 CCL6, 재조합 CCL8, 재조합 CCL9/10, 재조합 CCL14, 재조합 CCL15, 재조합 CCL16, 재조합 CCL23, PB103, PB105 및 MPIF1; CCR2 효능제, 예컨대 재조합 CCL2, 재조합 CCL8, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR3 효능제, 예컨대 재조합 CCL11, 재조합 CCL26, 재조합 CCL7, 재조합 CCL13, 재조합 CCL15, 재조합 CCL24, 재조합 CCL5, 재조합 CCL28 및 재조합 CCL18; CCR4 효능제, 예컨대 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL5, 재조합 CCL17 및 재조합 CCL22; CCR5 효능제, 예컨대 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL5, 재조합 CCL8, 재조합 CCL11, 재조합 CCL13, 재조합 CCL14, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR6 효능제, 예컨대 재조합 CCL20; CCR7 효능제, 예컨대 재조합 CCL19 및 재조합 CCL21; CCR8 효능제, 예컨대 재조합 CCL1, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR9 효능제, 예컨대 재조합 CCL25; CCR10 효능제, 예컨대 재조합 CCL27 및 재조합 CCL28; 및 CCR11 효능제, 예컨대 재조합 CCL19, 재조합 CCL21 및 재조합 CCL25로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
C 케모카인 수용체는 XCR1 효능제, 예컨대 재조합 XCL1 또는 재조합 XCL2일 수 있다.
CX3C 케모카인 수용체는 CX3CR1 효능제, 예컨대 재조합 CX3CL1일 수 있다.
주화인자 수용체는 포밀 펩타이드 수용체 효능제, 예컨대 N-포밀 펩타이드, N-포밀메티오닌-류실-페닐알라닌, 엔푸비르티드, T21/DP107, 아넥신 A1, Ac2-26 및 Ac9-25; C5a 수용체 효능제; 및 케모카인 유사 수용체 1 효능제, 예컨대 케메린으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
케모카인 길항제는 CXCL 케모카인의 억제제, 예컨대 UNBS5162; CXCL8의 억제제, 예컨대 BMS986253 및 PA620; CXCL10의 억제제, 예컨대 TM110, 엘데루맙 및 NI0801; CXCL12의 억제제, 예컨대 NOX-A12 및 JVS100; CXCL13의 억제제, 예컨대 VX5; CCL2의 억제제, 예컨대 PA508, ABN912, AF2838, BN83250, BN83470, C243, CGEN54, CNTO888, NOXE36, VT224 및 SSR150106; CCL5의 억제제, 예컨대 HGS1025 및 NI0701; CCL2/CCL5의 억제제, 예컨대 BKTP46; CCL5/FMLP 수용체의 억제제, 예컨대 RAP160; CCL11의 억제제, 예컨대 베르틸리무맙 및 RAP701; CCL5/CXCL4의 억제제, 예컨대 CT2008 및 CT2009; CCL20의 억제제, 예컨대 GSK3050002; 및 CX3CL1의 억제제, 예컨대 쿼트몰리맙으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
케모카인 수용체 길항제는 CXCR1의 억제제, 예컨대 레퍼탁신, CCX832, FX68 및 KB03; CXCR2의 억제제, 예컨대 AZD5069, AZD5122, AZD8309, GSK1325756, GSK1325756H, PS291822, SB332235 및 SB656933; CXCR1/CXCR2의 억제제, 예컨대 DF1970, DF2156A, DF2162, DF2755A, 레파릭신, SX576, SX682, PACG31P, AZD4721 및 PA401; CXCR3의 억제제; CXCR4의 억제제, 예컨대 BL8040; CXCR4/E-셀렉틴의 억제제, 예컨대 GMI1359; CXCR6의 억제제, 예컨대 CCX5224; CCR1의 억제제, 예컨대 AZD4818, BAY865047, BMS817399, CCX354, CCX634, CCX9588, CP481715, MLN3701, MLN3897, PS031291, PS375179 및 PS386113; CCR2의 억제제, 예컨대 AZD2423, BL2030, BMS741672, CCX140, CCX598, CCX872, CCX915, CNTX6970, INCB3284, INCB3344, INCB8696, JNJ17166864, JNJ27141491, MK0812, OPLCCL2LPM, PF4136309, 세로시온, STIB0201, STIB0211, STIB0221, STIB0232, STIB0234, TAK202, TPI526; CCR2/CCR5의 억제제, 예컨대 PF04634817, RAP103 및 TBR652; CCR2/CCR5/CCR8의 억제제, 예컨대 RAP310; CCR3의 억제제, 예컨대 ASM8, AXP1275, BMS639623, CM101, DPC168, GW766994, GW824575, MT0814, OPLCCL11LPM 및 QAP642; CCR4의 억제제, 예컨대 AT008, AZD2098, CCX6239, FLX193, FLX475, GBV3019, GSK2239633, IC487892 및 포텔리게오; CCR5의 억제제, 예컨대 5P12-RANTES, AZD5672, AZD8566, CMPD167, ESN196, GSK706769, GW873140, HGS004, INCB15050, INCB9471, L872, 살균제, PF232798, PRO140, RAP101, SAR113244, SCH350634, SCH351125, SCH417690, 셀젠트리, TAK779, TBR220, TD0232 및 VX286; CCR5/CXCR4의 억제제, 예컨대 AMD887, ND401 및 SP01A; CCR6의 억제제, 예컨대 CCX507, CCX9664 및 STIB100X; CCR6의 억제제, 예컨대 CCX025, CCX507, CCX807, eut22, MLN3126, POL7085, 트라피세트-EN; CXCR3의 억제제, 예컨대 AMG487, AT010, STIA120X; CXCR4의 억제제, 예컨대 AD114, AD214, ALX0651, ALX40-4C, AMD070, AT007, AT009, BKT170, BMS936564, 셀릭사포르, CTCE9908, GBV4086, GSK812397, KRH2731, KRH3140, LY2510924, LY2624587, 모조빌, OPLCXCL12LPM, PF06747143, POL6326, Q122, revixil, TG0054, USL311, X4P001 및 X4P002; 및 CXCR7의 억제제, 예컨대 CCX650 및 CCX662로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
사이토카인 수용체 효능제는 IL-2, IL-15, IL-7, IL-10, IL-12, IL-21, IFNα IL-17, IFNβ, IFNγ, IL-18, IL-27, TNFα, GM-CSF, FLT3L, LTα, LTβ 및 TRAIL 및 재조합 단백질에 대한 유전자를 암호화하는 mRNA, DNA 또는 플라스미드, 예컨대 IL-2/IL-15 β/γ 수용체의 효능제, IL-10 수용체의 효능제, IL-12 수용체의 효능제, IL-18 수용체의 효능제, IL-21 수용체의 효능제, IL-7 수용체의 효능제, IFNα/β 수용체의 효능제, IFN γ 수용체의 효능제, FLT3 수용체의 효능제, GM-CSF 수용체의 효능제, LTα 수용체의 효능제, LTβ 수용체의 효능제 및 TNFα 수용체의 효능제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
IL-10 수용체의 효능제에 대한 예는 AG011, 데카빌, EG10, IL10Nanocap, 일로데칼린, AM0010, 테노빌 및 VT310 VIRON이다.
IL-12 수용체의 효능제에 대한 예는 재조합 IL-12 p70, 재조합 IL-12 p35, AM0012, AS1409, 도데킨, HemaMax, LipoVIL12, MSB0010360N, Ad-RTS-hIL-12, 타보키노겐 텔세플리스미드, exoIL-12 및 NHS-IL12이다.
IL-18 수용체의 효능제에 대한 예는 SB485232이다.
IL-21 수용체의 효능제에 대한 예는 BMS982470(데네니콜킨)이다.
IL-7 수용체의 효능제에 대한 예는 CYT107, CYT99007 및 GX-I7이다.
FLT3R 수용체의 효능제에 대한 예는 CDX-301이다.
TNFα 수용체의 효능제에 대한 예는 L19-TNFα, 아우리뮨, 베로뮨, BreMel/TNFα, 피로뮨, 레프노트 및 TNFPEG20이다.
사멸 수용체 효능제는 TRAILR1/DR4 효능제, 예컨대 AMG951(둘라네르민), APG350, APG880, HGSETR1(마파투무맙) 및 SL231; 및 TRAILR2/DR5 효능제, 예컨대 AMG655, DS8273, HGSETR2(렉사투무맙), HGSTR2J, IDD004/GEN1029, INBRX109, LBY135, MEDI3039, PRO95780, RG7386 및 TAS266으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CD47 길항제는 ALX148, CC-90002, Hu5F9G4, SRF231, TI061, TTI-621, TTI-622, AO176, IBI188, IMC002, 재조합 SIRPα 및 LYN00301로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
SIRPα 길항제에 대한 예는 FSI89 또는 재조합 CD47이다.
종양세포붕괴성 약물은 CAVATAK, BCG, 모빌란, TG4010, Pexa-Vec(JX-594), JX-900, JX-929 및 JX-970이다.
신호 변환자 단백질에 대한 예는 Fn14-TRAIL(KAHR101), CD80-Fc(FTP155), CTLA4-FasL(KAHR102), PD1-41BBL(DSP 105), PD-L1-41BB(PRS-344, NM21-1480, FS222), PD1-CD70(DSP 106) 및 SIRPα-41BBL(DSP 107)이다.
후성적 변형제는 DNA 메틸변환효소 억제제, 리신 특이적 데메틸라제 1 억제제, Zeste 동족체 2 억제제, 브로모도메인 및 말단외 모티프(BET) 단백질 억제제, 예컨대 GSK525762 및 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, 예컨대 벨레오닥, SNDX275 및 CKD-M808로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
종양 펩타이드/백신에 대한 예는 NY-ESO, WT1, MART-1, IO102 및 PF-06753512 및 환자 유래된 종양 서열 또는 신생항원을 사용한 개인화된 암 백신이다.
열 쇼크 단백질(HSP) 억제제에 대한 예는 HSP90의 억제제, 예컨대 PF-04929113(SNX-5422)이다.
단백질분해 효소의 예는 재조합 히알우로니다제, 예컨대 rHuPH20 및 PEGPH20이다.
유비퀴틴 및 프로테아솜 억제제는 유비퀴틴 특이적 프로테아제(USP) 억제제, 예컨대 P005091; 20S 프로테아솜 억제제, 예컨대 보르테지밉, 카르필조밉, 익사조밉, 오프로조밉, 델란조밉 및 셀라스트롤; 및 이뮤노프로테아솜 억제제, 예컨대 ONX-0914로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
부착 분자 길항제는 β2-인테그린 길항제 및 셀렉틴 길항제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
호르몬은 호르몬 수용체 효능제 및 호르몬 수용체 길항제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
호르몬 수용체 효능제에 대한 예는 소마토스타틴 수용체 효능제, 예컨대 소마토스타틴, 란레오타이드, 옥트레오타이드, FX125L, FX141L 및 FX87L이다.
호르몬 수용체 길항제에 대한 예는 항-안드로겐, 항-에스트로겐 및 항-프로게스토겐이다. 항-안드로겐에 대한 예는 스테로이드성 항안드로겐, 예컨대 시프로테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 클로르마디논 아세테이트, 스피로노락톤, 옥센돌론 및 오사테론 아세테이트; 비스테로이드성 항-안드로겐, 예컨대 플루타미드, 비칼루타미드, 닐루타미드, 토필루타미드, 엔잘루타미드 및 아팔루타미드; 안드로겐 합성 억제제, 예컨대 케토코나졸, 아비라테론 아세테이트, 세비테로넬, 아미노글루테티미드, 피나스테라이드, 두타스테라이드, 에프리스테라이드 및 알파트라디올이다. 항-에스트로겐에 대한 예는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 예컨대 타목시펜, 클로미펜, 파레스톤 및 랄록시펜; ER 침묵 길항제 및 선택적 에스트로겐 수용체 분해제(SERD), 예컨대 플베스트란트; 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸, 레트로졸, 엑스메스탄, 보로졸, 포르메스탄 및 파드로졸; 및 항-고나트로핀, 예컨대 테스토스테론, 프로게스토겐 및 GnRH 유사체이다. 항-프로게스토겐에 대한 예는 미페프리스톤, 릴로프리스톤 및 오나프리스톤이다.
세포 치료제의 예는 CAR 치료제, 예컨대 CAR-T 치료제, 예컨대 티사젠렉류셀, 애시카브타겐 실루셀, bb21217, LCAR-B38M, JCARH125, MCARH171, JNJ-4528, 이데카브타겐 비클루셀(bb2121), SCRI-CAR19x22; 종양 항원을 표적화하는 CAR 치료제, 예컨대 CD19 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, CD22 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, BCMA 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, HER2 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, CD138 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, CD133 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, BCMA 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, CEA 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, Claudin 18.2 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, EGFR 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, EGFRvIII 발현 세포, Eph2A 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, EpCAM 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, GD2 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, GPC3 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, MSLN 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, 5T4 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, LMP1 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, PD-L1 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, PSMA 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제, FRα 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제 및 MUC1 발현 세포를 표적화하는 CAR 치료제를 포함한다. 세포 치료제의 예는 TIL 치료제, NK 치료제, 사이토카인 유도된 기억 NK 세포 치료제, 생체외 확대된 세포에 의한 NK 세포 치료제를 포함한다. 세포 치료제의 예는 종양 항원 또는 종양 신생항원 특이적 T 세포 수용체를 발현하도록 조작될 수 있거나, 종양 항원 또는 종양 신생항원의 맥락에서 확대될 수 있는 αβ 또는 γδ T 세포에 의한 치료제를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물과 함께 에피토프 분산을 야기한다. 에피토프 분산은 본원에 어딘가에 기재된 이점을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 하나의 이러한 추가 약물은 본원에 어딘가에 기재된 것과 같은 화학식 (A-i)의 하나 이상의 모이어티가 접합된 중합체를 포함하는 접합체이다:
소정의 실시형태에서, 환자는 포유류 환자, 예컨대 인간 환자이다.
본원에 기재된 것과 같은 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 투여는 외부 적용, 관절내, 관절주위, 피내, 피하, 근육내, 정맥내, 골내, 복강내, 척추강내, 낭내, 안와내, 유리체내, 고실내, 방광내, 심장내, 기관경유, 표피하, 피막하, 지주막하, 척수내, 심실내, 흉골내 주사 및 점적을 포함하는 주사 또는 점적, 뇌 조직 또는 뇌 유체로의 본 발명의 전달을 허용하는 이식된 장치 또는 유사한 것(예를 들면, Ommaya Reservoir)을 통한 뇌로의 직접적인 전달, 직접적인 뇌실내 주사 또는 점적, 뇌 또는 뇌 연관 구역으로의 주사 또는 점적, 맥락막하 공간으로의 주사, 안와뒤 주사 및 안와 점적주입에 의해 바람직하게는 피하 주사를 통해 수행될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 투여는 피하 주사를 통해서이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 포유류 시스템에서 발현된 화학식 (I)의 IL-2 단백질이다.
소정의 실시형태에서, 포유류 발현 시스템에서 발현된 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 본 발명의 IL-2 접합체는 시아노몰거스 마카크에 대한 투여 후 N 말단 알라닌이 없는 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 서열을 갖는 IL-2 단백질을 포함하는 상응하는 IL-2 접합체보다 방출된 IL-2 단백질의 생체내 약동학적 반감기의 적어도 1.1배 초과, 예컨대 적어도 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배 또는 2배를 나타낼 수 있고, N 말단 알라닌이 없는 IL-2 단백질은 이. 콜라이 발현 시스템에서 발현되었다.
소정의 실시형태에서, 포유류 발현 시스템에서 발현된 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 본 발명의 IL-2 접합체는 시아노몰거스 마카크에 대한 투여 후 N 말단 알라닌이 없는 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 서열을 갖는 IL-2 단백질을 포함하는 상응하는 IL-2 접합체보다 IL-2 접합체의 생체내 순환 반감기의 적어도 1.1배 초과, 예컨대 적어도 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배 또는 2배를 나타낼 수 있고, N 말단 알라닌이 없는 IL-2 단백질은 이. 콜라이 발현 시스템에서 발현되었다.
소정의 실시형태에서, 포유류 발현 시스템에서 발현된 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 본 발명의 IL-2 접합체는 시아노몰거스 마카크에 대한 투여 후 N 말단 알라닌이 없는 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 서열을 갖는 IL-2 단백질을 포함하는 상응하는 IL-2 접합체와 비교하여 CD8+ T 세포, 기억(CD28+ CD95+) CD8+ T 세포, NK 세포, γδ T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 세포 유형에 대한 피크 또는 곡선 하 면적(AUC) 값, CD8+ T 세포 내의 Ki67+ 세포의 백분율, 기억 (CD28+ CD95+) CD8+ T 세포 내의 Ki67+ 세포의 백분율, NK 세포 내의 Ki67+ 세포의 백분율 및 γδ T 세포 내의 Ki67+ 세포의 백분율의 적어도 1.1배 초과, 예컨대 적어도 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배 또는 2배를 나타내고, N 말단 알라닌이 없는 IL-2 단백질은 이. 콜라이 발현 시스템에서 발현되었다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질 서열에 관한 것이다:
SEQ A - Cys* - SEQ B (I-i)
상기 식 중,
SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
Cys*은 시스테인 잔기이다.
SEQ A 및 SEQ B에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 대해 개시된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질은 서열 번호 21의 서열을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 이 접합체에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 약학 조성물 또는 하나 이상의 이러한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체에 관한 것이다. 이러한 약학 조성물에 대한 특정한 실시형태는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 약학 조성물 또는 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유류 환자, 바람직하게는 인간 환자를 치료하거나 제어하거나 지연시키거나 예방하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 이와 동시에 또는 후에 환자에게 투여된다. 이러한 하나 이상의 추가 약물에 대한 특정한 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다. 소정의 실시형태에서, IL-2는 서열 번호 21의 서열을 갖고, 환자에게 투여되는 하나의 추가 약물은 화학식 (A-i)의 하나 이상의 모이어티가 본원에 어딘가에 기재된 것과 같이 접합된 중합체를 포함하는 접합체이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 서열에 관한 것이다:
X - SEQ A - Cys* - SEQ B (I-ii)
상기 식 중,
SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
X는 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이고;
Cys*은 시스테인 잔기이다.
SEQ A 및 SEQ B에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 대해 개시된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 아르기닌 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 아스파라긴 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 아스파르트산 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 시스테인 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 글루타민 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 글루탐산 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 글리신 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 히스티딘 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 이소류신 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 류신 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 리신 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 메티오닌 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 페닐알라닌 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 세린 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 트레오닌 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 트리토판 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 티로신 잔기이다. 소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 X는 발린 잔기이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체됨을 예외로 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 이 접합체에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체됨을 예외로 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 약학 조성물 또는 하나 이상의 이러한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체에 관한 것이다. 이러한 약학 조성물에 대한 특정한 실시형태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체됨을 예외로 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 약학 조성물 또는 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체에 대해 본원에서 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 약제로서 사용하기 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
또 다른 양태는 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유류 환자, 바람직하게는 인간 환자를 치료하거나 제어하거나 지연시키거나 예방하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. IL-2에 의해 치료될 수 있는 질환에 대한 구체적인 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 이와 동시에 또는 후에 환자에게 투여된다. 이러한 하나 이상의 추가 약물에 대한 특정한 실시형태는 본원에 어딘가에 기재된 것과 같다.
재료 및 방법
재료
모든 재료는 달리 기술되지 않는 한 상업적으로 이용하였다.
단백질 용액의 농도 결정을 UV-큐벳 마이크로(neoLAB) 및 하기 조건을 사용하여 Tecan Infinite M200에서 수행하였다: 경로 길이 1 cm; 흡광도 파장 280 nm; 흡광도 파장 밴드폭 5 nm; 기준 파장 338 nm; 기준 파장 밴드폭 25 nm; 플래쉬의 수 25. 농도의 계산은 글리코실화 또는 PEG화 및 순서에 기초하여 계산된 흡광 계수를 고려하지 않고, 단백질의 계산된 분자량에 기초한다.
5 kDa PEG 말레이미드를 NOF Europe(Sunbright ME-050MA, CAS 883993-35-9, NOF Europe N.V., 벨기에 그로벤통크)으로부터 구입하고, 이것은
Figure pct00128
(여기서, n은 100 내지 125의 정수임)의 구조 및 5 kDa의 평균 분자량을 갖는다.
5 kDa PEG 말레이미드를 Jenkem Technology(M-Mal-5000, Jenkem Technology Co., 중국 베이징)로부터 구입하고, 이것은
Figure pct00129
(여기서, n은 100 내지 125의 정수임)의 구조 및 5 kDa의 평균 분자량을 갖는다.
10 kDa PEG 말레이미드를 NOF Europe(Sunbright ME-100MA, CAS 883993-35-9, NOF Europe N.V., 벨기에 그로벤통크)으로부터 구입하고, 이것은
Figure pct00130
(여기서, n은 200 내지 250의 정수임)의 구조 및 10 kDa의 평균 분자량을 갖는다.
30 kDa PEG 말레이미드를 NOF Europe(Sunbright ME-300MA, CAS 883993-35-9, NOF Europe N.V., 벨기에 그로벤통크)로부터 구입하고, 이것은
Figure pct00131
(여기서, n은 650 내지 700의 정수임)의 구조 및 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다.
실시예
실시예 1: 피치아 파스토리스에서의 IL-2 뮤테인 M1 및 Ala-M1의 발현
IL-2 뮤테인 M1(서열 번호 16) 및 IL-2 뮤테인 Ala-M1(서열 번호 17)을 암호화하는 DNA 서열을 아미노산 서열의 역번역에 의해 얻었다(M1 = N 말단 알라닌이 없는 기준 재료, 서열 번호 18; 및 Ala-M1, 서열 번호 14). DNA 서열을 역번역된 아미노산 서열에 기초하여 생성하고, 후속하여 피치아 파스토리스(코마가탤라 파피(Komagataella phaffii))에서 발현에 대해 코돈 최적화하였다. M1 및 Ala-M1을 암호화하는 DNA를 커스텀 합성하고 클로닝하였다. 이 클로닝 백터에서, M1 및 Ala-M1을 암호화하는 DNA 서열은 BspQ1 제한 부위에 의해 플랭킹된다.
발현 벡터는 G1-3 프로모터(글루코스 유도성), AOX1 TT 통합 부위(단일 카피), 알파 일치 인자 신호 서열(αMF), 오직 클로닝 목적을 위한 lacZ 단편 및 Zeocin™ 내성을 함유하였다. 피치아 파스토릭스에서의 M1의 발현을 위해, 플라스미드 pCSP1007(서열 번호 19)을, 클로닝 벡터로부터의 선형 399 bp BspQI 분해된 단편으로, 리더 서열 αMF를 함유하는 발현 벡터의 선형 대략 4440 bp BspQI 단편의 결찰에 의해 작제하였다. 피치아 파스토리스에서의 Ala-M1의 발현을 위해, 플라스미드 pCKP1036(서열 번호 20)을, 클로닝 벡터로부터의 선형 402 bp BspQI 분해된 단편으로, 발현 벡터의 대략 4440 bp BspQI 단편의 결찰에 의해 유사하게 작제하였다. 후속하여, 화학적으로 유능한 DH10B 세포를 결찰 혼합에 의해 형질전환하였다. 플라스미드 정제 및 제한 분해 분석 후, 새로 생성된 플라스미드에서 관심 있는 유전자는 시퀀싱에 의해 확인되었고, 균주 LP2(CBS7435)를 후속하는 멀티 카피 스크리닝을 위해 선형화된 플라스미드 pCSP1007 또는 pCKP1036에 의해 형질전환하였다.
플라스미드 pCSP1007 및 pCKP1036의 AscI에 의한 선형화 후, LP2 균주를 선형화된 플라스미드로 형질전환하고, Zeocin™(Invitrogen)의 상이한 농도(500 및 1000 ㎍/mL)를 함유하는 한천 플레이트에 플레이팅하였다. 30℃에서 48시간 동안 항온처리 후, 숙주/플라스미드 통합당 11개 내지 12개의 클론을 선별하고, 24웰 플레이트에서 후속 발현 스크리닝을 위해 마스터 플레이트(100 ㎍/mL Zeocin™을 함유)로 스트리킹하였다. 발현 실험을 복합 배지를 함유하는 24웰 플레이트(GE Healthcare Life sciences)에서 수행하였다. 주요 배양물(2 mL)을 30℃에서 YPG(효모 펩톤 글리세롤)에서 성장된 밤샘 배양물로 4의 출발 OD600으로 접종하였다. 후속하여, 배양물을 25℃ 및 260 rpm 진탕에서 항온처리하고, 48시간 동안 글루코스 제한에 의해 유도하였다.
배양 상청액에서의 생성물의 검출을 쿠마시 염색에 의해 SDS PAGE에 의해 수행하였다. SDS-PAGE를 환원 조건 하에 실행하였다. 예비캐스팅된 Criterion 12% Bis-Tris SDS 겔(Bio-Rad)을 MES 완충액(Bio-Rad)과 사용하였다. 샘플을 NuPAGE 4x LDS 로딩 완충액(Invitrogen)과 혼합하고, 95℃에서 5분 동안 항온처리하였다. 레인마다, 20 ㎕의 샘플(30 ㎕의 배양 상청액과 10 ㎕의 4x LDS 로딩 완충액)을 로딩하였다. 분자량 표준품으로서, Mark12(Invitrogen)를 로딩하였다. 기준품으로서, Abcam으로부터 구입한 2 ㎍의 재조합 IL-2를 로딩하였다. 전기천공을 대략 80분 동안 200 V에서 수행하였다. 분리된 단백질을 GelCode Blue Stain Reagent(Thermo Scientific)으로 1시간 내지 2시간 동안 염색함으로써 가시화하고, 물로 밤새 탈염색하였다.
생성물의 검출을 또한 웨스턴 블롯에 의해 수행하였다. 이 목적을 위해, SDS-PAGE를 환원 조건 하에 실행하였다. 예비캐스팅된 Criterion 12% Bis-Tris SDS 겔(Bio-Rad)을 MES 완충액(Bio-Rad)과 사용하였다. 샘플을 NuPAGE 4x LDS 로딩 완충액, 환원 조건(Invitrogen)과 혼합하고, 95℃에서 5분 동안 항온처리하였다. 레인마다, 20 ㎕의 샘플(30 ㎕의 배양 상청액과 10 ㎕의 4x LDS 로딩 완충액)을 로딩하였다. 분자량 표준품으로서, SuperSignal Enhanced Molecular Weight Protein Ladder(Thermo Scientific)를 로딩하였다. 기준품으로서, Abcam으로부터 구입한 0.5 ㎍의 재조합 IL-2를 로딩하였다. 전기천공을 대략 60분 동안 200 V에서 수행하였다. 분리된 단백질을 Turboblot(Bio-Rad)을 사용하여 7분 동안 25 V에서 니트로셀룰로스 막(Bio-Rad)으로 옮겼다. 후속하여, 블롯을 개재 완충액(TBS + 5% 밀크 파우더(Merck))에서 1시간 동안 항온처리하였다. 후속하여, 막을 1차 항체 용액(TBST + 1.5% 밀크 파우더 + 0.1 내지 0.2 ㎍/mL의 토끼 항-IL-2 항체(AbCam))에서 1시간 동안 항온처리하였다. MQ 물 중의 3x 5분 동안 세척 후, 막을 60분 동안 2차 항체 용액(TBST + 1.5% 밀크 파우더 + 1:1000 항-토끼-IgG-HRP(AbCam))에서 항온처리하였다. 세척(TBST 중의 4x 5분) 후, 블롯을 이후 Lumi-Light 기질 용액(Roche LumiLight Kit)으로 처리하고, GeneGnome imaging 시스템에 의해 분석하였다.
결과: 시험된 M1 클론 중에서, 배양 상청액에서의 분비된 M1 생성물의 매우 낮은 양이 SDS-PAGE/쿠마시 염색에 의해 확인될 수 있거나 확인될 수 없었다. 선택된 샘플을 IL-2에 대해 항체를 사용하여 웨스턴 블롯을 통해 분석하여, 배양 상청액 중의 M1 생성물의 존재를 확인한다. 그러나, 오직 매우 약한 밴드가 예상된 분자량에서 검출된 반면, 약한 분해 밴드 이외에 상당한 생성물 응집이 보였다.
M1과 달리, Ala-M1 함유 샘플에 대한 웨스턴 블롯은 예상된 크기에서 밴드를 보여주어서, Ala-M1의 발현 및 분비를 확인한다. 이합체 형성을 나타내는 약한 결합이 또한 검출되었다.
실시예 2: CHO에서의 IL-2 뮤테인 M1 및 IL-2 뮤테인 Ala-M1의 발현
CHO K1 숙주 세포를 생성물에 의한 일시적 형질감염 전에 PDL 30-100에 4 mM 글루타민(J.T Baker) 및 1% HT Supplement(Invitrogen)를 함유하는 CD CHO 배지(Invitrogen)에서 배양하였다. CHO K1 숙주 세포를 WAVE 백(36.5℃, pH 6.9 내지 7.2, DO 40% 내지 100%)에서 배양하였다.
M1(서열 번호 18) 및 Ala-M1(서열 번호 14)의 아미노산 서열은, S1(서열 번호 47) 및 S2(서열 번호 48)인 각각 2개의 상이한 N 말단 분비 신호 서열과 조합되어, 역번역되고 CHO 세포에서 발현에 대해 코돈 최적화되었다. S1-M1, S2-M1, S1-Ala-M1 및 S2-Ala-M1을 암호화하는 생성된 DNA 서열을 커스텀 합성하고, 인간 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터의 하류에서 발현 벡터로 클로닝하였다. CMV 프로모터 이외에, 발현 벡터는 티미딘 키나제 폴리아데닐화 신호(TK pA), pUC 복제 기원 및 암피실린(bla) 내성 유전자를 함유하였다. 생성된 플라스미드(S1-M1에 대해 P1, S2-M1에 대해 P2, S1-Ala-M1에 대해 P3 및 S2-Ala-M1에 대해 P4)를 CHO K1 세포에서의 일시적 발현을 위해 NucleoBond Xtra Maxi Kit(Macherey Nagel)를 사용하여 Top10 이. 콜라이 세포로부터 맥시-제조하였다.
일시적 형질감염을 CHO K1 숙주 세포와 폴리에틸렌이민 및 플라스미드 DNA를 혼합함으로써 진탕 플라스크에서 수행하였다. 6 mg의 DNA를 약 16 x106 개의 세포/ml로 각각 1 ℓ의 세포로 형질감염시키고, DNA와 PEI 사이의 질량비는 1:3였다. CHO K1 숙주 세포를 형질감염 전 96시간에 WAVE 백에서 CD CHO 배지에 의한 관류에 의해 배양하였다. 세포 밀도를 Vi-CELL(Beckman Coulter)을 사용하여 계수하였다. 숙주 세포 배양물의 고정된 용적은 1:1 비로 BM003H 배지(WuXi Biologics)에 의해 희석되었다. 세포 밀도를 형질감염 전에 예비 가온된 새로운 BM017H 배지에 의해 대략 18 x 106개의 세포/ml로 조정하였다. 희석된 숙주 세포를 사용 전에 진탕기(36.5℃, 85% 습도, 6% CO2, 120 rpm)에서 항온처리하였다.
형질감염된 세포 배양액을 4시간 동안 Kuhner 진탕기에서 36.5℃, 85% 습도, 6% CO2, 120 rpm에서 항온처리하였다. 상청액을 첨가하고, 형질감염된 배양액을 이후 14일 동안 Kuhner 진탕기에서 31℃, 85% 습도, 6% CO2, 120 rpm에서 항온처리하였다. 상청액을 세포 생존능력 및 VCD에 따라 형질감염 후 4일, 7일 및 11일에 공급하였다. 글루코스를 2 g/ℓ 초과의 글루코스 농도를 유지하도록 배양액에 첨가하였다. 배양액을 14일에 또는 세포 생존능력이 60% 미만일 때 수확하였다.
생성물의 검출을 웨스턴 블롯에 의해 수행하였다. 배양물을 형질감염 후 14일에 수확하였다. 0.5 ml의 세포 배양물을 12000g에서 30분 동안 원심분리하고, 상청액을 웨스턴 블롯 분석을 위해 유지시켰다. 세포 펠릿을 수집하고, 0.5 mL PBS로 재현탁하고, 이후 4℃에서 음파처리에 의해 파괴하였다. 음파처리 용액을 12,000g에서 30분 동안 항온처리하였다. 원심분리에 의해 분리된 전체 음파처리 용액 및 상청액을 웨스턴 블롯 분석을 위해 수집하였다.
세포 배양 배지 상청액(CMS: cell culture medium supernatant), 세포 초음파 용해 상청액(CLS: cell ultrasonic lysis supernatant) 및 세포 초음파 용해 전체(CLT: cell ultrasonic lysis total)로부터의 1 ㎕의 샘플을 10 ㎕의 2X 환원된 LDS Sample 완충액(Invitrogen)에 첨가하였다. 환원된 혼합물을 95℃에서 5분 동안 가열하였다. 모든 환원된 샘플을 예비캐스팅된 NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gels(Invitrogen)에 로딩하였다. SDS-PAGE를 180 V의 일정한 전압에서 40분 동안 실행하였다. 샘플을 SDS-PAGE로부터 PVDF 막으로 옮겼다. 이동 공정을 25 V 및 1.3 A에서 7분 동안 실행하였다. PVDF 막을 Blocker 완충액(Bio-Rad)과 30분 동안 항온처리하였다. 개재 처리 후, PVDF 막을 1차 항체(닭에서 제조된 항-IL-2 항체, Sigma)와 2시간 동안 실온에서 항온처리하였다. PVDF 막을 TBST로 3x 5분 동안 세척하였다. 이후, PVDF 막을 2차 항체(염소 항-닭 IgY(H+L) 2차 항체, HRP, Invitrogen)와 2시간 동안 실온에서 항온처리하였다. PVDF 막을 TBST로 3x 5분 동안 세척하였다. ECL 기질 용액 A 및 B(Bio-Rad)를 혼합하고, PVDF 막에 2분 항온처리 동안 첨가하였다. PVDF 막을 Chemi DOC MP Imaging System(Bio-Rad)으로 분석하였다.
S1-M1 P1 및 S2-M1 P2로 형질감염된 세포로부터의 배양 상청액의 환원된 샘플의 웨스턴 분석은 거의 검출 불가능한 수준의 예상된 크기의 IL-2 생성물을 보여주는 반면, 예상된 크기의 명확한 생성물 밴드는 S1-Ala-M1 P3 및 S2-Ala-M1 P4로 형질감염된 세포로부터의 상청액에서 검출되었다. 모든 샘플에 대해 이중 IL-2 생성물 밴드는 비글리코실화된 생성물 및 O-글리코실화된 생성물에 예상된 것처럼 관찰되었다. 상청액 중의 분비된 생성물의 농도를 S1-M1 P1 및 S2-M1 P2에 대해 대략 6 mg/ℓ, S1-Ala-M1 P3에 대해 76 mg/ℓ 및 S2-Ala-M1 P4에 대해 148 mg/ℓ로 정량화하였다.
용해된 세포로부터의 환원된 샘플의 웨스턴 블롯 분석은 모든 샘플에 대해 예상된 크기의 명확한 밴드를 보여주었다. 세포 용해 샘플에서의 생성물 농도를 S1-M1 P1에 대해 153 mg/ℓ, S1-Ala-M1 P3에 대해 161 mg/ℓ 및 S2-Ala-M1 P4에 대해 209 mg/ℓ로 정량화하였다. 총 생성물의 분비된 생성물의 분획(분비된 생성물/[분비된 생성물 + 세포내 생성물])은 따라서 S1-M1 P1에 대해 대략 4%, S1-Ala-M1 P3에 대해 32% 및 S2-Ala-M1 P4에 대해 41%였다.
실시예 3: 배양 상청액의 정제
배양물을 14일에 8000g에서 40분 동안 원심분리에 의해 수확하였다. 여과된 상청액을 IL-2 뮤테인 Ala-M1의 추가의 규명을 위해 정제하였다. 상청액을 농축시키고, 25 mM Tris, 200 mM NaCl pH 8.0에서 평형화된 Superdex 75 prep 등급 칼럼(GE Healthcare Life Sciences, 현재 Cytiva)에 로딩하였다. 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 혼주하였다. 추가의 정제를 25 mM Na-아세테이트 pH 5.5에서 평형화된 SP Sepharose HP 칼럼(GE Healthcare Life Sciences, 현재 Cytiva)에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 로딩 전에, 단백질 풀을 5.5로 pH 조정하고, 물로 희석하였다. 용리를 선형 염 구배 용리에 의해 수행하였다. 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 것을 혼주하여 정제된 IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(디설파이드 브릿지를 통해 38번 위치에서 시스테인의 티올 기에 연결된 추가 시스테인 또는 글루타티온을 갖는 서열 번호 14)을 생성시켰다.
실시예 4: IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 제조
25 mM 아세트산나트륨, 200 mM NaCl, pH 5.5 중에 0.2 mg/mL에서 제형화된 45 mL의 정제된 IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(서열 번호 14)을 13.5 mL의 0.5 M 인산나트륨, pH 7.4와 혼합하고, 2.5 mg/mL에서의 1에 의해 3.1 mL로 Amicon Ultra-15, Ultracel 3 K 원심분리 필터(Merck Millipore)에서 농축시켰다. 9.1 mg의 TCEP를 635 ㎕의 PBS pH 7.4에 용해시켜 50 mM 용액을 생성시켰다. pH의 조정을 수행하지 않았다. 37 ㎕의 TCEP 용액을 농축된 단백질 용액에 첨가하였다. 샘플을 주위 온도에서 30분 동안 항온처리하였다. 후속하여, PBS, pH 7.4(5 mol. eq.) 중의 507 ㎕의 5 mM 5 kDa PEG 말레이미드(Sunbright ME-050MA, CAS 883993-35-9, NOF Europe N.V., 벨기에 그로벤통크)를 반응 용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 30분 동안 항온처리 후, 접합체의 형성은 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 접합 혼합물의 완충액을 HiPrep Desalting 26/10 칼럼이 장착된 Aekta 시스템을 사용하여 100 mM 보레이트, pH 9.0으로 교환하였다. 샘플을 25℃에서 밤새 항온처리하여 비정제된 IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-5kDa PEG 3을 생성시켰다. 반응 혼합물을 이후 Amicon Ultra-15, Ultracel 3 K 원심분리 필터(Merck Millipore)를 사용하여 5.2 mg/mL로 농축시켰다. 0.109 g의 40 kDa mPEG-링커 시약(합성은 특허 WO2009/133137 실시예 7에서 화합물 17ca에 대해 기재된 것처럼 동일한 특허로부터 화합물 16c 및 화합물 1A를 사용하여 수행될 수 있음)을 1.26 mL의 차가운 물에 용해시켜 2.1*10-3 mol/ℓ의 스톡 용액을 생성시켰다. 용액을 얼음에서 저장하였다. 1.34 mL의 단백질 용액을 100 mM 보레이트, pH 9.0의 첨가에 의해 4 mg/mL로 희석하고, 이후 873 ㎕의 차가운 40 kDa mPEG-링커 시약 스톡 용액을 첨가하였다(단백질과 관련하여 4 mol. eq.에 상응).
접합 혼합물을 물 욕에서 14℃에서 2시간 동안 배치하였다. pH를 872 ㎕의 물 및 3.488 mL의 200 mM 아세트산나트륨, pH 3.6의 첨가에 의해 pH 4로 이동시켰다. 밤새 25℃에서 항온처리 후, 하나의 단일 40 kDa mPEG 링커가 부착된 접합체(단일접합체)를 Aekta 시스템에 연결된 HiScreen Capto MMC ImpRes 칼럼(칼럼 치수: 0.77 x 10 cm)을 사용하여 반응 혼합물로부터 단리하였다. 1.2 mL/분의 유속 및 12 칼럼에서의 10 mM 숙신산, pH 5.5 내지 80%의 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.5의 선형 구배를 적용하였다. 구배 동안 용리하는 주로 단일접합체를 함유하는 피크는 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 이 분획의 염 함량을 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.5의 첨가에 의해 150 mM NaCl로 조정하고, 이후 그 분획을 Amicon Ultra-15, Ultracel 10 K 필터(Merck Millipore)에서 2.48 mL로 농축시켰다. 농축된 용액(2.48 mL)을 130 ㎕의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 1% Tween20, pH 5.5 및 165 ㎕의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 0.05% Tween20, pH 5.5에 의해 (글리코실화를 고려하지 않고 단백질의 분자량에 기초하여) 1 mg/mL 1 당량의 최종 농도로 희석하여 화합물 5를 생성시키고, 이것은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00132
상기 식 중, 점선은 3의 N 말단 또는 리신 측쇄의 1차 아민의 질소에 대한 부착을 나타내고, 각각의 n은 200 내지 250의 정수이다.
실시예 5: IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 6의 제조
20 mM 인산나트륨, 140 mM NaCl, pH 7.4 중에 2.5 mg/mL에서 제형화된 12 mL의 정제된 IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(서열 번호 14)을 출발 단백질 용액으로서 사용하였다. 15.3 mg의 TCEP·HCl을 1068 ㎕의 PBS pH 7.4에 용해시켜 50 mM 용액을 생성시켰다. pH의 조정을 수행하지 않았다. 93.3 ㎕의 TCEP 용액을 농축된 단백질 용액에 첨가하였다. 샘플을 주위 온도에서 30분 동안 항온처리하였다. 후속하여, PBS, pH 7.4(3 mol. eq.) 중의 1123 ㎕의 5 mM 5 kDa PEG 말레이미드(M-Mal-5000, Jenkem Technology Co., 중국 베이징)를 반응 용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 30분 동안 항온처리 후, 접합체의 형성은 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 접합 혼합물의 완충액을 HiPrep Desalting 26/10 칼럼이 장착된 Aekta 시스템을 사용하여 100 mM 보레이트, pH 9.0으로 교환하였다. 샘플을 25℃에서 밤새 항온처리하여 비정제된 IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-5kDa PEG 4를 생성시켰다. 반응 혼합물을 이후 Amicon Ultra-15, Ultracel 3 K 원심분리 필터(Merck Millipore)를 사용하여 4.4 mg/mL로 농축시켰다. 0.307 g의 40 kDa mPEG-링커 시약(합성은 특허 WO2009/133137 실시예 7에서 화합물 17ca에 대해 기재된 것처럼 동일한 특허로부터 화합물 16c 및 화합물 1A를 사용하여 수행될 수 있음)을 3.55 mL의 차가운 물에 용해시켜 2.1*10-3 mol/ℓ의 스톡 용액을 생성시켰다. 용액을 얼음에서 저장하였다. 5.8 mL의 단백질 용액을 100 mM 보레이트, pH 9.0의 첨가에 의해 4 mg/mL로 희석하고, 이후 3.21 ㎕의 차가운 40 kDa mPEG-링커 시약 스톡 용액을 첨가하였다(단백질과 관련하여 4 mol. eq.에 상응).
접합 혼합물을 물 욕에서 14℃에서 2시간 동안 배치하였다. pH를 3.21 ㎕의 물 및 12.83 mL의 200 mM 아세트산나트륨, pH 3.6의 첨가에 의해 pH 4로 이동시켰다. 밤새 25℃에서 항온처리 후, 하나의 단일 40 kDa mPEG 링커가 부착된 접합체(단일접합체)를 Aekta 시스템에 연결된 HiScreen Capto MMC ImpRes 칼럼(칼럼 치수: 0.77 x 10 cm)을 사용하여 반응 혼합물로부터 단리하였다. 1.2 mL/분의 유속 및 12 칼럼에서의 10 mM 숙신산, pH 5.0 내지 80%의 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.0의 선형 구배를 적용하였다. 구배 동안 용리하는 주로 단일접합체를 함유하는 피크는 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 이 분획의 염 함량을 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.0의 첨가에 의해 150 mM NaCl로 조정하고, 이후 그 분획을 Amicon Ultra-15, Ultracel 10 K 필터(Merck Millipore)에서 3.64 mL로 농축시켰다. 농축된 용액(3.64 mL)을 192 ㎕의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 1% Tween20, pH 5.0 및 3.59 mL의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 0.05% Tween20, pH 5.0으로 (글리코실화를 고려하지 않고 단백질의 분자량에 기초하여) 1 mg/mL 1 당량의 최종 농도로 희석하여 화합물 6을 생성시키고, 이것은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00133
상기 식 중, 점선은 4의 N 말단 또는 리신 측쇄의 1차 아민의 질소에 대한 부착을 나타내고, 각각의 n은 200 내지 250의 정수이다.
실시예 6: IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-5kDa PEG 3의 제조
IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 정제 공정으로부터 화합물 3을 생성하였다. Capto MMC ImpRes 수지에서 화합물 5의 분리 동안 3을 함유하는 나중에 용리하는 피크를 수집하였다. 수집된 분획을 10 mM 숙신산, pH 5.0으로 희석하여 전도도를 대략 14 mS/cm로 낮추고, 완충액 A(20 mM 인산나트륨, pH 7.5), 완충액 B(20 mM 인산나트륨, 1 M NaCl, pH 7.5) 및 6 칼럼 부피에서 0% 내지 50% 완충액 B의 구배를 사용하여 HiScreen Capto Blue 칼럼이 장착된 Akta 시스템에서 추가로 정제하였다. 주요 피크를 수집하고, Amicon Ultra 원심분리 장치(3 kDa MWCO)를 사용하여 농축시켰다. 농축된 용액을 Akta 시스템 및 HiPrep 26/10 칼럼을 사용하여 10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트 20, pH 7.4로 완충액 교환하고, 농도를 0.25 mg/mL로 조정하여 화합물 3을 생성시켰다.
실시예 7: IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-5kDa PEG 3의 제조
화합물 3을 실시예 4에서 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 정제 공정에 기재된 것과 같이 5 kDa PEG 말레이미드와의 접합 및 pH 9.0에서의 밤샘 항온처리 후에 정제하였다. 25℃ 및 pH 9.0에서의 밤샘 항온처리 후 반응 용액을 완충액 A(20 mM Tris, pH 8.5) 및 완충액 B(20 mM Tris, 1 M NaCl, pH 8.5)를 사용하고, 11 칼럼 부피에서 0% 내지 30% 완충액 B의 선형 구배를 적용함으로써 AIEX Poros GoPure XQ 5 mL 칼럼으로 로딩하였다. 3을 함유하는 분획을 수집하고, Akta 시스템에서 HiPrep 26/10 칼럼을 사용함으로써 10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트 20, pH 7.4로 완충제 교환하였다. 완충액 교환된 단백질을 0.25 mg/mL로 농도 조정하고 멸균 여과하여 화합물 3을 생성시켰다.
실시예 8: IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 방출 혼합물 7의 제조
250 ㎕의 5를 205 ㎕의 50 mM 보레이트 pH 10.0에 의한 희석에 의해 pH 9.0으로 pH 이동시켰다. 샘플을 항온처리기에서 37℃에서 24시간 동안 항온처리하였다. 항온처리 후, 방출된 Ala-M1-5kDa PEG 3의 백분율은 1260 Infinity II 시스템(Agilent Technologies)에서 Acquity UPLC 펩타이드 BEH C18 칼럼(물, 300 Å, 2.1 x 50 mm, 1.7 ㎛)을 사용하여 RP-HPLC에 의해 결정되었다. 칼럼 온도를 30℃에서 유지시키고, 흐름을 0.25 mL/분으로 설정하였다. UV 검출을 215 nm에서 수행하였다. 방출된 3의 함량을 동일한 RP-HPLC 조건을 사용하여 칼럼에서 0.25 내지 2 ㎍의 IL2의 범위에서 5의 상이한 주입 부피에서 정제된 3의 보정 곡선에 대해 결정하였다. IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 방출 혼합물 7을 정제 없이 사용하고, 따라서 이는 Ala-M1-5kDa PEG 3 및 절단된 40 kDa mPEG-링커뿐만 아니라 소량의 잔류 5를 함유한다.
실시예 9: IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-10kDa PEG 14의 제조
20 mM 인산나트륨, 140 mM NaCl, pH 7.4에서 제형화된 2.3 mg/mL에서의 2.0 mL의 1을 처음에 실온에서 30분 동안 0.4 mM TCEP의 최종 농도에서 TCEP 염산염(Sigma-Aldrich, CAS 51805-45-9, 카탈로그 번호: 75259-10G, 스톡: PBS, pH 7.4 중의 50 mM)로 탈보호하였다. 후속하는 접합을 단백질과 관련하여 3배 몰 과량으로 10 kDa mPEG-Mal(NOF, Sunbright ME-100MA, 스톡: PBS, pH 7.4 중의 5 mM)의 첨가 및 실온에서 10분 동안 항온처리에 의해 수행하였다. 연속 연결된 3개의 HiTrap 탈염 칼럼(GE Healthcare, 각각 5 mL)이 장착된 Akta 시스템을 사용한 0.1 M 보레이트, pH 9로의 완충제 교환 후, 수집된 단백질 분획을 25℃에서 대략 18시간 동안 항온처리하여 티오숙신이미드 고리의 가수분해를 달성하여 14를 생성시켰다. 탈이온수에 의한 6배 희석 시, 14를 Poros XQ 칼럼(Thermo Scientific, 5 mL)이 장착된 Akta 시스템 및 11 CV에서 20 mM TRIS, pH 8.5 내지 20 mM TRIS, 300 mM NaCl, pH 8.5 범위의 염 구배를 사용하여 1.67 mL/분의 유속에서 및 mL 수지당 0.5 mg의 근사 단백질 로드로 AIEX에 의해 정제하였다. 14의 수집된 분획을 이후 HiPrep 26/10 탈염 칼럼(GE Healthcare, 53 mL)이 구비된 Akta 시스템을 사용하여 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.0% Tween 20, pH 7.4로 완충제 교환하고, 이후 원심 분리 필터(Amicon Ultra-15, Merck, Ultracel-3k)를 사용하여 0.26 mg/mL 1 당량(글리코실화를 고려하지 않고 단백질의 분자량에 기초)으로 농축시키고, 멸균 여과(0.22 ㎛, PVDF) 시 -80℃에서 저장하였다.
실시예 10: IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-30kDa PEG 15의 정제
20 mM 인산나트륨, 140 mM NaCl, pH 7.4에서 제형화된 2.3 mg/mL에서의 2.2 mL의 1을 처음에 실온에서 30분 동안 0.4 mM TCEP의 최종 농도에서 TCEP 염산염(Sigma-Aldrich, 품목: 75259-10G, 스톡: PBS, pH 7.4 중의 50 mM)로 탈보호하였다. 후속하는 접합을 단백질과 관련하여 3배 몰 과량으로 30 kDa mPEG-Mal(NOF, Sunbright ME-300MA, 스톡: PBS, pH 7.4 중의 5 mM)의 첨가 및 실온에서 10분 동안 항온처리에 의해 수행하였다. 연속 연결된 3개의 HiTrap 탈염 칼럼(GE Healthcare, 각각의 5 mL)이 장착된 Akta 시스템을 사용한 0.1 M 보레이트, pH 9로의 완충제 교환 후, 수집된 단백질 분획을 25℃에서 20시간 동안 항온처리하여 티오숙신이미드 고리의 가수분해를 달성하여 15를 생성시켰다. 탈이온수에 의한 6배 희석 시, 15를 Poros XQ 칼럼(Thermo Scientific, 5 mL)이 장착된 Akta 시스템 및 11 CV에서 20 mM TRIS, pH 8.5 내지 20 mM TRIS, 300 mM NaCl, pH 8.5 범위의 염 구배를 사용하여 1.67 mL/분의 유속에서 및 mL 수지당 0.5 mg의 근사 단백질 로드로 AIEX에 의해 정제하였다. 15의 수집된 분획을 이후 HiPrep 26/10 탈염 칼럼(GE Healthcare, 53 mL)이 구비된 Akta 시스템을 사용하여 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.0% Tween 20, pH 7.4로 완충제 교환하고, 이후 원심 분리 필터(Amicon Ultra-15, Merck, Ultracel-10k)를 사용하여 0.26 mg/mL 1 당량(글리코실화를 고려하지 않고 단백질의 분자량에 기초)으로 농축시키고, 멸균 여과(0.22 ㎛, PVDF) 시 -80℃에서 저장하였다.
실시예 11: 수용체 결합 연구에 대한 알데스류킨11의 제조
2 mg/mL에서의 1 mL의 재조합 인간 인터루킨-2 11(알데스류킨, Akron Biotechnology, AK9993-CSTM, 로트 번호 15104181285)(서열 번호 15)을 백색의 침전물의 완전한 소실까지 주위 온도에서 정치되게 하였다. 4 mL의 메탄올을 첨가한 후 약간 수동으로 흔들었다. 이후, 1 mL의 클로로포름을 용액에 첨가하고, 이것을 이후 오직 하나의 상이 보일 때까지 와류시켰다. 마지막으로, 3 mL의 물을 첨가하고, 샘플을 완전히 와류시켰다. 원심분리(6분, 9384 rcf) 시, 상부 유기 상을 상간을 방해하지 않으면서 제거하였다. 3 mL의 메탄올을 첨가하고, 샘플을 와류시키고 원심분리하였다(3분, 9384 rcf). 상청액을 이후 조심스럽게 제거하고, 단백질 펠릿을 질소로 약간 건조시켰다. 500 ㎕의 50 mM 아세트산, pH 3.0을 첨가하여 0.614 mL·mg-1·cm-1의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 포토메트릭 측정을 통해 결정된 것처럼 3 mg/mL 단백질 용액을 생성시켰다. 453 ㎕의 상기 언급된 용액을 이후 50 mM 아세트산, pH 3으로 2 mg/mL로 희석하였다. 140 mM HEPES, 1:1 중량측정 비로 300 mM 염화나트륨, 6 mM EDTA-Na2, 0.1% Tween-20, pH 8.2와 혼합 및 후속하는 멸균 여과(0.22 ㎛, PVDF) 후, 11을 얻었고, 수용체 결합 연구에서 추가로 사용하였다.
실시예 12: 레시퀴모드 로딩된 하이드로겔 8의 제조
화합물 8을 WO2020/141221(실시예 5, 비교 화합물 12c)에 기재된 것처럼 제조하고, 2673 ㎍ eq./mL의 레시퀴모드로 PTP 완충액 중의 현탁액으로서 얻었다.
실시예 13: IL-2 뮤테인 M1 중합체 프로드럭 10의 제조
10 mM 인산나트륨, 145 mM NaCl, 10% 글리세롤, pH 7.4 중에 1.84 mg/mL에서 제형화된 45.2 mL의 IL-2 뮤테인 M1(서열 번호 18) 2를 13.6 mL의 0.5 M 인산나트륨, pH 7.4와 혼합하였다. 23.2 mg의 TCEP를 1619 ㎕의 PBS pH 7.4에 용해시켜 50 mM 용액을 생성하였다. pH의 조정을 수행하지 않았다. 710 ㎕의 TCEP 용액을 농축된 단백질 용액에 첨가하였다. 샘플을 주위 온도에서 30분 동안 항온처리하였다. 후속하여, PBS, pH 7.4(5 mol. eq.) 중의 5527 ㎕의 5 mM 5 kDa PEG 말레이미드(Sunbright ME-050MA, CAS 883993-35-9, NOF Europe N.V., 벨기에 그로벤통크)를 반응 용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 대략 20분 동안 항온처리 후, 접합체의 형성은 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 접합 혼합물의 완충액을 HiPrep Desalting 26/10 칼럼이 장착된 Aekta 시스템을 사용하여 100 mM 보레이트, pH 9.0으로 교환하였다. 샘플을 25℃에서 밤새 항온처리하여 비정제된 IL-2 뮤테인 접합체 M1-5kDa PEG 9를 생성시켰다. 반응 혼합물을 이후 Amicon Ultra-15, Ultracel 3 K 원심분리 필터(Merck Millipore)를 사용하여 5.3 mg/mL로 농축시켰다. 0.847 g의 40 kDa mPEG-링커 시약(합성은 특허 WO2009/133137 실시예 7에서 화합물 17ca에 대해 기재된 것처럼 동일한 특허로부터 화합물 16c 및 화합물 1A를 사용하여 수행될 수 있음)을 9.746 mL의 차가운 물에 용해시켜 2.1*10-3 mol/ℓ의 스톡 용액을 생성시켰다. 용액을 얼음에서 저장하였다. 12.87 mL의 단백질 용액을 100 mM 보레이트, pH 9.0의 첨가에 의해 4 mg/mL로 희석하고, 이후 8477 ㎕의 차가운 40 kDa mPEG-링커 시약 스톡 용액을 첨가하였다(단백질과 관련하여 4 mol. eq.에 상응). 접합 혼합물을 물 욕에서 14℃에서 2시간 동안 배치하였다. pH를 8.4 mL의 물 및 33.5 mL의 200 mM 아세트산나트륨, pH 3.6의 첨가에 의해 pH 4로 이동시켰다. 밤새 25℃에서 항온처리 후, 하나의 단일 40 kDa mPEG 링커가 부착된 접합체(단일접합체)를 Aekta 시스템에 연결된 HiScreen Capto MMC ImpRes(칼럼 치수: 0.77 x 10 cm)을 사용하여 반응 혼합물로부터 단리하였다. 1.2 mL/분의 유속 및 12 칼럼에서의 10 mM 숙신산, pH 5.5 내지 80%의 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.5의 선형 구배를 적용하였다. 3회의 정제 실행을 수행하였다. 구배 동안 용리하는 주로 단일접합체를 함유하는 피크는 분석 크기 배제 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 이 분획의 염 함량을 10 mM 숙신산, 1 M NaCl, pH 5.5의 첨가에 의해 150 mM NaCl로 조정하고, 이후 그 분획을 Amicon Ultra-15, Ultracel 10 K 필터(Merck Millipore)에서 8.1 mL로 농축시켰다. 농축된 용액을 425 ㎕의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 1% Tween20, pH 5.5 및 14.36 mL의 10 mM 숙신산, 150 mM NaCl, 0.05% Tween20, pH 5.5로(단백질의 분자량에 기초하여) 1 mg/mL의 IL-2 뮤테인 M1 2 당량의 최종 농도로 희석하여 화합물 10을 생성시키고, 이것은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00134
상기 식 중, 점선은 9의 리신 측쇄의 질소에 대한 부착을 나타내고, 각각의 n은 200 내지 250의 정수이다.
실시예 14: 시아노몰거스(Cyno) 마카크(원숭이)에서의 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5 또는 6의 약동학적 효과
2개의 연구는 Cyno에서 알데스류킨(Prometheus, National Drug Code 65483011607)(서열 번호 15) 11 또는 5 중 어느 하나의 약동학적 효과를 측정하도록 수행되었다. 제1 연구에서, 체중이 7.77 내지 10.6 kg(평균 9.2 kg)의 범위인 4마리의 Cyno를 1일 내지 5일에 11의 5의 순차적인 매일의 0.4 mg 용량(평균 mg/kg: 0.044)으로 정맥내로 처리하였다. 제2 연구에서, 체중이 2.46 내지 3.69 kg(평균 3.13 kg)의 범위인 4마리의 Cyno를 0.1 mg/kg(n=2) 또는 0.3 mg/kg(n=2)의 5 중 어느 하나의 단일 정맥내 용량으로 처리하였다. 모든 동물을 연구 전에 체어 훈련하였다. 연구 둘 다에 대해, 말초 혈액 샘플을 표시된 것과 같은 다양한 시점에 처리 전에 및 후에 취하고, 림프구 수, 호산구 수 및 사이토카인에 대해 분석하였다. 5로 처리된 동물에 대해, 추가 유세포분석법 실험을 수행하였다. (절대) 림프구 수 및 호산구 수의 측정을 위해, 전혈을 혈핵학 분석기에서 가공하였다. IL-5 및 IL-6 사이토카인 측정에 대해, 혈청을 전혈로부터 가공하고, ELISA 또는 MSD에 의해 분석하였다. 유세포분석법 측정(면역표현형분석, IPT, FACS)을 위해, 시아노몰거스 원숭이 전혈을 EDTA 항응고제에서 수집하고, 유세포분석법을 위해 가공할 때까지 실온에서 유지시켰다. 혈액을 용해하고, 샘플을 표준 방법에 의해 세포외 표면 마커 및 세포내 표현형 및 계통 마커에 대해 염색하였다. 세포 집단을 하기 표현형을 사용하여 분석하고, 증식 마커 Ki67에 양성인 세포의 백분율에 대해 게이팅하였다.
Figure pct00135
하기 시약은 유세포분석법 파일링을 위해 사용되었다(표 2 참조):
Figure pct00136
표 1에 열거된 집단을 각각의 집단 내의 Ki67+ 세포의 백분율에 대해 분석하였다. 표 1에 열거된 집단을 유세포분석법 분석된 림프구 게이트 내의 그 세포 유형의 유세포분석법 분석된 빈도에 의해 각각의 시점에서의 림프구 수를 곱하여 세포수에 대해 분석하였다. 배수 변화 측정은 -4일에 투약전 기준선 시점에 대한 주어진 시점에 세포수의 비를 측정함으로써 이루어졌다. CD8 / Treg 비, NK / Treg 비 및 γδ T 세포 / Treg 비는 주어진 시점에 유세포분석법 분석된 림프구 게이트 내의 각각의 세포 유형의 빈도를 사용하여 계산되었다.
림프구 및 호산구 수: 화합물 11로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 평균 2.77배 및 2.79배의 림프구 수의 증가를 입증하는 반면, 각각 8일 및 10일에 평균 6.92배 및 5.94배의 호산구의 증가를 입증하였다(표 3).
0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 평균 3.62배 및 2.53배의 림프구 수의 증가를 입증하는 반면, 각각 8일 및 10일에 평균 1.13배 및 1.39배의 호산구 증가를 입증하였다(표 4).
0.3 mg/kg 55로 처리된 원숭이는 실질적으로 각각 8일 및 10일에 평균 평균 27.4배 및 10.82배의 림프구 수의 증가를 입증하는 반면, 호산구의 실질적인 증가 없음을 입증하였다. 평균 1.32배의 호산구 수의 증가가 10일에 보였고, 8일에 0.3 mg/kg 처리된 동물로부터의 말초 혈액 샘플의 혈액학 분석에서 호산구가 검출되지 않았다(표 4).
Figure pct00137
Figure pct00138
사이토카인 결과: 11로 처리된 원숭이는 117.78 pg/ml의 평균 혈청 피크 IL-5 수준으로 모든 동물에서 IL-5의 명확하고 실질적인 증가를 입증하였다(표 5). 이와 반대로, 0.1 또는 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 IL-5의 최소 증가를 입증하였다. 시험된 4마리 중 3마리의 동물에서, 혈청 IL-5는 분석된 시점에서 검출 가능하지 않았지만, 4번째 동물에서, 6.41 pg/ml의 값은 연구 5일에 보였다(표 6). 11로 처리된 원숭이는 58.66 pg/ml의 평균 혈청 피크 IL-6 수준으로 모든 동물에서 IL-6의 명확하고 실질적인 증가를 입증하였다(표 5). 이와 반대로, 0.1 또는 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 IL-6의 최소 증가를 입증하였다. 시험된 4마리 중 2마리의 동물에서, 혈청 IL-6은 분석된 시점에서 검출 가능하지 않았지만, 5.26 및 3.44 pg/ml의 값은 투약 후 6시간에 단일 시점에서 보였다(표 6).
Figure pct00139
Figure pct00140
유세포분석법 결과:
본원에 기재된 데이터는 외부 CRO에 의해 수집된 유세포분석법 원시 데이터의 내부 게이팅 분석으로부터이고, CRO로부터 최종 데이터를 받기 전에 예비 분석을 나타낸다. 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 96.8% 및 91.4%의 평균으로 NK 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 매우 강력한 증가를 입증하였다(표 7). 유사하게, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 68.3% 및 49.2%의 평균으로 CD8 T 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 강력한 증가를 입증하였다(표 7). 추가적으로, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 95.5% 및 89.5%의 평균으로 γδ T 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 강력한 증가를 입증하였다(표 7).
0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 98.7% 및 90.7%의 평균으로 NK 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 매우 강력한 증가를 입증하였다(표 7). 유사하게, 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 91.1% 및 71.3%의 평균으로 CD8 T 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 매우 강력한 증가를 입증하였다(표 7). 추가적으로, 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 6일 및 10일에 관찰된 99.5% 및 95.3%의 평균으로 γδ T 세포 내의 증식하는 Ki67+ 세포의 백분율의 매우 강력한 증가를 입증하였다(표 7).
Figure pct00141
0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 7.28 및 4.42의 평균 배수 변화 값으로 NK 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 강력한 증가를 입증하였다(표 8). 유사하게, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 3.78 및 2.26의 평균 배수 변화 값으로 CD8 T 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 강력한 증가를 입증하였다(표 8). 추가적으로, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 26.47 및 24.94의 평균 배수 변화 값으로 γδ T 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 훨씬 더 강력한 증가를 입증하였다(표 8).
0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 24.69 및 12.56의 평균 배수 변화 값으로 NK 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 강력한 증가를 입증하였다(표 8). 유사하게, 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 17.34 및 7.57의 평균 배수 변화 값으로 CD8 T 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 강력한 증가를 입증하였다(표 8). 추가적으로, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 각각 8일 및 10일에 관찰된 607.34 및 213.27의 평균 배수 변화 값으로 γδ T 세포의 기준선으로부터의 배수 변화의 훨씬 더 실질적인 증가를 입증하였다(표 8).
Figure pct00142
0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선(-4일)에서의 7.10 및 8일에서의 31.97의 평균 NK/Treg 비로 NK 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9). 유사하게, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선에서의 12.61 및 8일에서의 29.23의 평균 CD8/Treg 비로 CD8 T 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9). 추가적으로, 0.1 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선에서의 2.24 및 8일에서의 35.23의 평균 γδ/Treg 비로 γδ T 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9).
0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선에서의 4.19 및 8일에서의 28.06의 평균 NK/Treg 비로 NK 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9). 유사하게, 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선에서의 7.63 및 8일에서의 36.35의 평균 CD8/Treg 비로 CD8 T 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9). 추가적으로, 0.3 mg/kg 5로 처리된 원숭이는 투약 전 기준선에서의 1.90 및 8일에서의 287.33의 평균 γδ/Treg 비로 γδ T 세포 대 Treg의 비의 명확한 증가를 입증하였다(표 9).
Figure pct00143
전체적으로, 화합물 5는 최소 호산구 확대 또는 IL-5 유도로 CD8+ T 세포 및 NK 세포 확대를 포함하는 공공 데이터에 기초하여 시아노몰거스 원숭이에서 감소된 IL-2Rα 결합을 갖는 IL-2 치료에 대한 몇몇 예상된 약동학적 효과를 유도하였다(Joseph et al. 2019, Rafei 2020). IL-5가 호산구 확대를 유도하고, IL-2가 VLS와 같은 효과를 유도하는 주요 기전인 것으로 활성화가 가정되므로 이는 주목할만하다(Rand 1991, Van Haelst et al. 1991, Van Gool et al. 2014, Abo et al. 2019). 화합물 5에 의한 처리는 병력학적 비교자와 비교하여 림프구와 호산구 반응 사이의 주요 윈도우를 유도하였다(즉, 0.3mg/kg에서의 림프구에서의 27.4배 증가 및 호산구에서의 1.32배 증가). 화합물 5에 의한 처리는 또한 강력한(200배 초과 확대) γδ T 세포 증식 반응을 유도하였다.
추가 연구에서, 6마리의 cyno를 6의 0.7 mg/kg(n=3 수컷) 또는 0.6 mg/kg(n=3 암컷)의 단일 정맥내 용량으로 처리하고, 말초 혈액 샘플을 다양한 시점에서 처리 전에 및 후에 취하고, 상기 기재된 것과 유사한 방법을 사용하여 유세포분석법에 의해 분석하였다. 이 실험에서, γδ T 세포 하위집단, 예컨대 강력하게 항종양인 γ9δ2 T 세포 하위집단에 대한 6의 효과를 γ9 특이적 항체(Biolegend, Clone B3)를 사용하여 측정하였다. 화합물 6은 총 γδ T 세포와 비교하여 γ9δ2 T 세포에 대한 유사한 효과를 입증하였고(즉, 각각 399.87 대 438.56의 8일에 모든 동물에서의 평균 배수 확대), 이는 화합물 6이γ9δ2 T 세포를 튼튼하게 확대시킨다는 것을 입증한다(표 10).
Figure pct00144
실시예 15: 레시퀴모드 로딩된 하이드로겔 8과 조합된 IL-2 뮤테인 M1 중합체 프로드럭 10의 항종양 활성.
연구는 종양 접종의 일자에 9 내지 11주령의 암컷 BALB/C 마우스에서 수행되었다. 마우스에 오른쪽 뒤 옆구리에 5 x 105개의 CT26 종양 세포를 이식하였다. 종양이 대략 85 mm3의 평균 종양 용적으로 성장할 때, 마우스를 처리 코호트(0일)로 무작위화하고, 200 ㎕의 완충액 대조군의 0일에 하나의 정맥내 용량 및 6일에 하나의 정맥내 용량 및 16일에 하나의 정맥내 용량, 200 ㎕의 60 ㎍의 10의 0일에 8의 단일 50 ㎕의 종양내 주사 또는 0일에 하나의 정맥내 용량과 6일에 하나의 정맥내 용량의 조합 및 16일에 하나의 정맥내 용량 및 0일에 134 ㎍의 8의 단일 50 ㎕의 종양내 주사로 처리되었다.
시험감염된 종양에 대한 면역 기억을 시험하기 위해, 대장 유래된 CT26 종양이 완전히 제거된 마우스 또는 초기 종양 용적보다 작은 종양 크기를 갖는 마우스(완전한 반응자, CR)를 초기 투약 시작 후 73일에 원래의 CT26 종양으로부터의 반대의 옆구리에서 5 x 105개의 CT26 종양 세포에 의한 접종에 의해 재시험감염하였다. 대조군으로서, 미경험 BALB/c 마우스를 또한 5 x 105개의 CT26 종양 세포로 접종하였다. 구별되는 종양에 대해 보호하는 처리의 능력을 시험하기 위해, 재시험감염된 콜론 유래된 CT26 종양을 거부할 수 있었던 마우스를 제3의 구별되는 부위에서 5 x 105개의 유방 유래된 EMT6 종양 세포에 의한 접종에 의해 시험감염하였다. 대조군으로서, 미경험 BALB/c 마우스를 또한 5 x 105 EMT6 종양 세포로 접종하였다. 처리 초기 후, 항종양 효능을 캘리퍼스에 의해 종양 크기 측정으로부터 다양한 시점에 종양 용적의 결정에 의해 평가하였다. 종양 용적을 하기 식에 따라 계산하였다: 종양 용적 = (L × W²) × 0.5, 여기서 L은 종양의 길이이고, W는 폭이다(둘 다 mm 단위). 종양이 3000 mm3 초과이면 마우스를 연구로부터 제거하였다.
원래의 CT26 종양의 처리의 개시 후 14일에, 대조군 처리된 마우스에서의 평균 종양 용적이 1643.66 mm3이지만, 8로 처리된 마우스는 대조군 마우스와 비교하여 통계학적으로 더 낮은 평균 용적(455.58 mm3, T 시험 p-값 < 0.001)을 가졌다(표 11). 유사하게, 10과 8의 조합으로 처리된 마우스는 대조군 마우스와 비교하여 통계학적으로 더 낮은 평균 용적(373.46 mm3, T 시험 p-값 < 0.001)을 가졌다(표 11).
23일에, 10과 8의 조합에 의해 처리된 마우스는 또한 8 단독으로 처리된 마우스(2156.90 mm3, 표 12)와 비교하여 통계적으로 더 낮은 평균 용적(653.10 mm3, T-시험 p-값 0.01)을 가졌고, 이는 10에 의한 처리가 8에 의한 처리와 같은 다른 면역치료의 치료 효과를 향상시킬 수 있다는 것을 입증한다. 유사하게, 100일에, 10과 8의 조합으로 처리된 6/8 마우스는 8 단독으로 처리된 8마리의 마우스 중 불과 2마리와 비교하여 검출 가능한 종양 없이 완전한 반응을 입증하였다(표 12).
Figure pct00145
Figure pct00146
WT 미경험 비처리된 마우스 또는 완전한 반응을 나타내거나 80 mm3 미만의 초기 무작위화 종양 크기를 갖는 마우스를 초기 처리 개시 후 73일에 반대의 옆구리에서 접종에 의해 CT26으로 재시험감하였다. 재시험감염 후 21일에, 미경험 마우스는 1320.28 mm3의 평균 종양 크기로 명확한 종양 성장을 나타냈지만, 8 또는 8과 10의 조합에 의해 이전에 처리된 마우스는 모두 재시험감염된 CT26 결장 유래된 종양 세포를 거부하여서 면역 기억을 나타냈다(표 13).
Figure pct00147
WT 미경험 비처리된 마우스 또는 CT26으로 재시험감염하기 위해 완전한 반응을 나타낸 마우스를 제3의 구별되는 부위에서 CT26 재시험감염 후 28일에 접종에 의해 유방 유래된 EMT6 종양 세포로 시험감염하였다. EMT6 시험감염 후 18일에, 미경험 비처리된 마우스는 2224.38 mm3의 평균 종양 크기로 명확한 종양 성장을 나타냈지만, 8로 이전에 처리된 마우스는 529.24 mm3의 평균 종양 크기를 나타내고, EMT6 종양 시험감염에 대한 완전한 반응을 나타내지 않았다(표 14). 이와 반대로, 8 및 10에서 조합으로 이전에 처리된 마우스는 12.21 mm3의 유의미하게 더 낮은 평균 종양 크기(T-시험 p-값 < 0.001)를 나타내고, 6마리 중 4마리의 마우스는 EMT6 시험감염에 대한 완전한 반응을 보여준다(표 14).
Figure pct00148
실시예 16: CD1 비근교계된 마우스에서의 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 약동학적 효과
연구는 건강한 마우스에서 5의 약동학적 효과를 측정하도록 수행되었다. 5를 주마다(총 3회 용량) 투약으로 22일 반복 투약 연구의 일부로서 CD-1 마우스에 정맥내로 투여하였다. 연구는 1주 1회 저속 볼루스에 의해 5 IV를 받는 4개의 용량 그룹(0, 1.8, 3.6 및 6.0 mg/kg/주)을 포함하고, 유세포분석법 면역표현형분석을 통한 림프구 세포 하위유형의 평가를 포함하였다(표 15 참조). 5는 비처리된 마우스와 비교하여 CD8+ T 세포 대 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 대 Treg의 증가된 비를 포함하여 건강한 CD-1 마우스에서 CD8+ T 세포 및 NK 세포의 강력한 확대 및 활성화를 유도하였다.
Figure pct00149
면역표현형 분석을 위한 혈액 샘플을 1일에 제1 용량 및 15일에 투약 후 48시간, 96시간 및 168시간에 제3 용량 및 8일에 투약 후 96시간 및 168시간에 제2 용량 후 수집하였다. CD8+ T 세포의 강력한 증식 및 활성화는 5에 의한 마우스의 처리 후 관찰되었다. T 세포 내의 CD8+ T 세포 빈도는 CD8+ T 세포 대 CD4+ T 세포의 비가 그런 것처럼(표 16) 5 처리에 의해 용량 의존적 방식으로 증가하였고(데이터 비기재), 이 비는 제2 투약 사이클및 제3 투약 사이클에서 더 증가하여서 누적 효과를 생성시켰다.
Figure pct00150
더욱이, CD8+ T 세포 대 Treg의 비는 또한 추가 투약 사이클로 누적 방식으로 5 처리로 증가하였다(표 17).
Figure pct00151
마지막으로, CD8+ T 세포는 CD8+ T 세포 집단 내의 CD44+ 세포의 백분율에서 관찰된 용량 의존적 및 시간 의존적 증가로 5 처리 후 증가된 효과기 / 기억 표현형을 나타냈다(표 18). 중요하게는, 대조군 마우스는 이들 특징에서 변화를 나타내지 않았다. CD8+ T 세포 활성화의 모든 이들 측정에 대해, 더 강한 효과는 특히 3.6 mg/kg/주에서 암컷에 대해 수컷에서 대개 보였다.
Figure pct00152
T 세포에 대한 효과 이외에, NK 세포 수/㎕(혈액)의 강력한 증가는 5 처리 후 용량 의존적 방식으로 주목되었다(표 19).
Figure pct00153
더욱이, 5 처리는 그램자임 B+ NK 세포의 퍼센트에 의해 측정된 것처럼 활성화된 NK 세포 표현형을 유도하였다(표 20). 중요하게는, 대조군 마우스는 이들 특징에서 변화를 나타내지 않았다.
Figure pct00154
전체적으로, 용량 및 시간 의존적 약동학적 변화는 5 처리된 마우스에서 관찰되었는데, 이는 CD8+ T 세포 내의 기억/효과기 세포 표현형(CD44+)의 유도와 함께 CD4+ T 세포에 대한 NK 세포의 수의 강력한 증가 및 CD8+ T 세포의 선택적 증가를 나타낸다.
실시예 17: 시아노몰거스 원숭이에서의 5 및 3의 독성동태학
표 21에 기재된 투약 계획에 따라 정맥내(IV) 저속 볼로스 투여를 통해 원숭이에게 1일 및 15일에 5를 투여한 후 5 및 5로부터 방출된 3의 독성동태학을 결정하였다.
Figure pct00155
혈액 샘플을 투약 전 1일에 및 투약 후 대략 2시간, 6시간, 24시간, 48시간, 96시간, 144시간, 216시간 및 336시간(제2 용량 전)에 모든 동물로부터 수집하였다. 추가적으로, 혈액 샘플을 15일에 대략 투약 후 2시간, 6시간, 24시간, 48시간, 96시간, 144시간, 216시간 및 336시간에 모든 동물로부터 수집하였다. 혈액 샘플을 혈장으로 가공하고, 5 및 3에 대해 분석하였다. 5를 샌드위치 ELISA 방법을 사용하여 시아노몰거스 원숭이 리튬-헤파린(Li-Hep) 혈장에서 정량화하였다. 96웰 플레이트를 래트 단일클론 면역글로블린 G(IgG) 항-IL-2 항체로 코팅하였다. 플레이트의 개재 후, 5를 함유하는 샘플을 웰에 피펫팅한 후, 바이오티닐화된 토끼 단일클론 IgG 항-PEG 항체를 첨가하여 부동화된 5에 결합한다. 복합체를 스트렙타비딘 표지된 과산화수소효소에 의해 검출하였다. 비결합된 시약을 제거하도록 세척 후, 효소는 기질 TMB에 대한 이의 작용에 의해 나타났다. 강산에 의해 반응을 중단한 후, 색상의 강도(450 nm에서 판독; 620 nm의 보정 파장)는 샘플에 존재하는 5의 양에 직접 비례하였다.
방출된 3은 마우스 단일클론 면역글로불린 M(IgM) 항-PEG 항체로 코팅된 아가로스 비드를 사용하여 원숭이 Li-Hep 혈장 샘플에서 5로부터 분리되었다. 분리 단계에 이어서 3의 정량화를 위한 샌드위치 ELISA가 있었다. 96웰 플레이트를 래트 단일클론 IgG 항-IL-2 포획 항체로 코팅하였다. 플레이트의 개재 후, 3을 함유하는 샘플을 웰에 피펫팅한 후, 바이오티닐화된 토끼 다중클론 IgG 항-IL-2 검출 항체를 첨가하여 부동화된 3에 결합한다. 비오티닐화된 검출 항체는 스트렙타비딘-겨자무 과산화수소효소 접합체에 의해 인식된다. 항체-3 복합체에 대한 이 접합체의 결합은 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)의 전환에 의해 분석되었다. 반응을 산성화를 통해 중단시키고, 450 nm에서의 UV 흡광도를 기록하였다.
원숭이 혈장에서의 5 및 방출된 3에 대한 개별 및 평균 독성동태학적 매개변수의 요약은 각각 하기 표 22 및 표 23에 기재되어 있다.
5 및 3 평균 Cmax 및 AUC0-336 값의 성별 차이는 2배 미만이였다. 5 및 3 평균 Cmax 및 AUC0-336 값에 의해 평가된 것과 같은 노출은 1일에 0.1 내지 0.9 mg/kg/경우 및 15일에 0.1 내지 0.75 mg/kg/경우의 5의 용량 수준의 증가에 따라 증가하였다. 평균 Cmax 및 AUC0-336 값의 증가는 일반적으로 용량 비례하였다. 5 또는 3의 축적이 0.1 및 0.3 mg/kg/경우 용량 수준에서 원숭이에서 5의 다중 용량 후 관찰되지 않았다(1일 및 15일에 상이한 용량으로 인한 높은 용량 수준에 대한 결론 없음)
Figure pct00156
Figure pct00157
실시예 18: IL-2Rα 및 IL-2Rβ 결합 실험 및 바이어스의 계산에서 IL-2 뮤테인 접합체 Ala-M1-5kDa PEG 3 및 4뿐만 아니라 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 방출 혼합물 7의 수용체 결합
프로드럭 5 및 6의 작용 방식은 이의 IL-2R 아단위 특이적 결합에 대해 각각 이의 활성 성분 3 및 4를 시험함으로써 입증되었다. 활성 성분은 정제된 변이체 3 또는 4 또는 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 방출 혼합물 7에서의 주요 성분 중 어느 하나였다. Biacore를 사용한 결합 연구는 인간 IL-2Rα-Fc 또는 인간 IL-2Rβ-Fc 코팅된 센서 칩에 3, 4, 7 및 비바이어싱된 대조군 재조합 인간 IL-2, 화합물 12(서열 번호 45)를 주입함으로써 수행하였다. 결과는 표 24에 요약되어 있다. 3, 4 및 7은 이들 모두가 12와 반대로 2 μM의 농도까지 IL-2Rα에 대한 결합을 나타내지 않고 모두 IL-2Rβ에 대한 결합을 보여주므로 바이어싱된 IL-2 분자이다. 3, 4 및 7은 IL-2Rβ에 대한 고도로 필적하는 해리 상수(대략 2 μM의 KD)를 보여주었고, 이는 12(대략 0.5 μM)와 비교하여 약간 감소된다(3배 내지 5배).
Figure pct00158
비의존적 측정에서 알데스류킨 11의 수용체 결합은 비바이어싱된 대조군 재조합 인간 IL-2, 화합물 12(서열 번호 45)에 대해 측정되었다. 알데스류킨 11을 실시예 11에 따라 제조하였다. 화합물 12 및 11 둘 다는 IL-2Rα 및 IL-2Rβ 둘 다에 대해 고도로 필적하는 KD 값을 갖고, 따라서 수용체 둘 다에 필적하는 결합 친화도를 갖는 것으로 발견되었다.
IL-2의 바이어스는 각각 하기 식에 의해 기재된 것과 같이 이들의 IL-2Rα 및 IL-2Rβ 결합과 관련하여 알데스류킨에 대한 변형된 IL-2의 KD 비에 기초하여 정의된다.
Figure pct00159
상기 식 중,
Figure pct00160
여기서
"KD 바이어싱된 IL-2 대 IL-2Rα"는 IL-2Rα에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD이고,
"KD 바이어싱된 IL-2 대 IL-2Rβ"는 IL-2Rβ에 대한 바이어싱된 IL-2의 KD이고,
"KD 알데스류킨 대 IL-2Rα"는 IL-2Rα에 대한 알데스류킨의 KD이고,
"KD 알데스류킨 대 IL-2Rβ"는 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD이다.
IL-2Rα 및 IL-2Rβ 결합 둘 다에 대한 KD 11 = KD 12로 및 상기 언급된 식에 의해, 하기 비가 계산되고 표 25에 요약되어 있다.
Figure pct00161
실시예 19: IL-2Rβγ 발현 세포주인 HH에서의 3 및 7의 생물활성
3 및 7의 생물활성을 확인하기 위해, 실험은 IL-2Rβ/γ를 오직 발현하는 것으로 입증된 공격적 피부 T 세포 백혈병/림프종(ATCC® CRL-2105??)을 갖는 환자의 말초 혈액으로부터 유래된 성숙 T 세포주인 HH 세포주로 수행되었다. CD8+ T 세포 및 NK 세포와 같은 림프구의 사이토카인 매개된 활성에서의 가장 이른 사건 중 하나는 신호 변환자 및 전사 활성자(pSTAT5)의 야누스 연관된 키나제 매개된 인산화 및 활성이다. 이와 같이, pSTAT5는 12와 함께 3 및 7의 생물학적 활성을 측정하도록 사용되었다. 3은 12보다 대략 3.5배 낮은(EC50: 233 ng/ml) IL-2Rβ/γ 발현 HH 세포에서의 명확한 생물활성(EC50: 773 ng/ml)을 입증하였다. 추가적으로, 7은 3과 매우 유사한 생물활성(EC50: 756 ng/ml)을 유도하였고, 이는 7이 가속 (스트레스) 조건 후에도 프로드럭 5로부터 방출된 후 생물활성을 보유한다는 것을 입증한다.
실시예 20: 1차 인간, cyno 및 마우스 혈액 림프구에서의 3 및 7의 생물활성
인간과 마우스 또는 인간과 시아노몰거스 원숭이 사이의 IL-2 및 이의 수용체 아단위의 아미노산 서열 동일성은 표 26에 기재되어 있다.
Figure pct00162
인간과 마우스 사이의 IL-2 및 IL-2 수용체 서열 동일성이 불과 58% 내지 71%이지만, 마우스 모델은 IL-2 및 IL-2 변이체의 약리학적 효과 및 항종양 효과를 시험하기 위해 광범위하게 사용되었다. 이와 반대로, 시아노몰거스 원숭이는 인간과 훨씬 더 높은 IL-2 및 IL-2R 서열 동일성을 가졌다(92% 내지 97%, 표 26). 시아노몰거스 원숭이 및 마우스가 5를 연구하기 위한 관련 종이라는 것을 실험적으로 정량화하기 위해, 3뿐만 아니라 his 태그화된 포유류 발현된 대조군 인간 IL-2, 화합물 13(서열 번호 46)을 사용한 PD 실험은 인간, 시아노몰거스 원숭이 또는 마우스 혈액 샘플을 사용하여 생물활성에 대해 시험하여 수행되었다.
1차 인간 또는 원숭이 세포에서의 3의 세포 유형 특이적 면역조절 효과를 평가하기 위해, 2명의 공여자로부터의 전체 인간 또는 시아노몰거스 원숭이 혈액을 각각 30분 동안 3 또는 13의 다양한 농도와 항온처리하고, 고유한 세포 하위집단, 예컨대 주로 IL-2Rα/β/γ를 발현하는 Treg뿐만 아니라 주로 IL-2Rβ/γ를 발현하는 CD8+ T 세포(CD8) 및 NK 세포에서 인산화된 STAT5(pSTAT5)의 세포내 수준에 대해 유세포분석법에 의해 분석하였다. 추가적으로, CD8+ T 세포를 CD8+ CD45RA+ 미경험(CD8 N)뿐만 아니라 CD8+ CD45RA- 기억(CD8 M) 하위집단에 대해 추가로 분석하였다. 마우스 특이적 항체의 상이한 패널을 사용하여 마우스 혈액에 의해 유사한 실험을 수행하였다. 모든 하위 집단을 pSTAT5의 중앙치 형광 강도에 대해 분석하고, EC50 값을 모든 세포 유형에 걸쳐 각각의 화합물에 대해 계산하였다.
인간 및 시아노몰거스 원숭이 둘 다에서, 13과 비교하여, 3은 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대한 유사하고 약간 감소된 효력을 유지시키면서 Treg에서의 실질적으로 감소된 효력을 입증하였다. 예를 들면, 인간 혈액에서 13은 0.09 ng/ml의 Treg에서의 pSTAT5에 대한 EC50 값을 입증하였지만, 3은 이 집단에서 34.5 ng/ml의 상당히 더 높은 EC50 값을 보여주었다. 이와 반대로, 13은 6.01 ng/ml의 인간 NK 세포에서의 pSTAT5에 대한 EC50 값을 입증하였지만, 3은 이 집단에서 11.84 ng/ml의 필적하고 약간 덜 강력한 EC50 값을 보여주었다(표 27).
Figure pct00163
마우스에서, 13과 비교하여, 3은 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대한 유사하고 약간 증가된 효력을 유지시키면서 마우스 Treg에서의 실질적으로 감소된 효력을 입증하였다(표 27). 예를 들면, 마우스 혈액에서 13은 0.37 ng/ml의 Treg에서의 pSTAT5에 대한 EC50 값을 입증하였지만, 3은 이 집단에서 92.24 ng/ml의 상당히 더 높은 EC50 값을 보여주었다. 이와 반대로, 13은 9,694.74 ng/ml의 마우스 NK 세포에서의 pSTAT5에 대한 EC50 값을 입증하였지만, 3은 이 집단에서 3,614.68의 필적하는 EC50 값을 보여주었다(표 27).
시아노몰거스 원숭이 림프구 하위집단이 이의 인간 대응물에 대해 3과 유사한 효력을 입증하였지만(1.37배 내지 1.51배 더 낮은 효력, 표 28), 마우스에서 그것이 사실이 아니었다. 주목하게는, 마우스 Treg가 인간 Treg와 비교하여 유사한 전체 3 효력을 나타냈지만(즉, 2.67배 더 낮은 효력, 표 28), 마우스 IL-2Rβ/γ+ CD8+ T 세포 및 NK 세포는 인간과 비교하여 3에 대한 현저히 감소된 감수성을 나타냈다(CD8+ T 세포에서 165.69배 더 낮은 효력 및 NK 세포에서 305.29배 더 낮은 효력, 표 28). 바꾸어 말하면, 마우스 CD8+ T 세포 및 NK 세포는 이의 인간 대응물에 대해(표 28) 또는 마우스 Treg와 비교하여(표 27) 활성에 대해 3의 훨씬 더 높은 용량을 요하는 것으로 보인다. 중요하게는, 13에 대해 동일한 일반적 경향이 명확하였다.
Figure pct00164
인간 혈액에 의한 추가 실험에서, IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 방출 혼합물 7은 3과 거의 동일한 생물활성을 보여주어서(표 29), 7이 5로부터 방출 후 완전한 생물활성을 유지한다는 것을 입증한다.
Figure pct00165
전체적으로, 이 실험은 인간, 시아노몰거스 원숭이 및 마우스 1차 세포가 3에 의해 활성화될 수 있고, 모든 3개의 종에 대해 3이 시험관내 보인 IL-2Rα 결합 및 원하는 작용 기전의 소실과 일치하여 13과 비교하여 실질적으로 감소된 Treg 효력을 나타낸다는 것을 입증하였다. 시아노몰거스 원숭이 또는 인간과 달리, 마우스가 IL-2Rα 발현 세포의 활성화에 비해 CD8+ T 세포 및 NK 세포 활성화에 대해 3의 더 높은 농도(및 마찬가지로 5의 더 높은 농도)를 요한다는 것이 주목할 만하였다.
실시예 21: 인간 말초 혈액 단핵 세포 림프구 하위집단에서의 3, 14, 15의 생물활성.
화합물 1에서 시스테인38 부착점에서 PEG 크기의 영향을 추가로 이해하기 위해, 시스테인38에서 5kDa(3), 10kDa(14) 또는 30kDa(15) PEG 부착 중 어느 하나로 Ala-M1의 저온보존된 인간 PBMC에서의 생물검정 효력을 비교하기 위해 추가 실험이 수행되었다. 예를 들면 실시예 20에 기재된 것과 같은 유사한 방법은 표시된 화합물에 의한 자극의 30분 후 유세포분석법을 사용하여 구별되는 림프구 하위집단에서 pSTAT5 유도를 조사하도록 사용되었다. 데이터는 표 30 및 표 31에 요약되어 있고, 특히 10 kDa를 넘어 IL-2Rα 결합 계면에서의 PEG 크기를 증가시키는 것이 IL2Rβγ 발현 세포, 예컨대 CD8+ T 세포 및 NK 세포에서가 아니라 단지 Treg에서 효력을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 예를 들면, 15는 3보다 5.4배 더 낮은 CD8+ T 세포에서의 EC50 효력 값(각각 802.17 대 148.31, 표 30) 및 대조군 IL-2, 화합물 13보다 16.46배 더 낮은 효력을 보여주었다(표 31). 유사하게, 15는 3보다 6.77배 더 낮은 NK 세포에서의 EC50 효력 값(각각 192.25 대 28.41, 표 30) 및 대조군 IL-2, 화합물 13보다 14.73배 더 낮은 효력을 보여주었다(표 31). 전체적으로 이 데이터는 10 kDa를 넘어 IL-2Rα 개재 PEG 크기를 증가시키는 것이 IL2Rβγ 발현 세포 유형에 대한 효력을 억제하지만, 더 작은 5kDa PEG 크기가 IL2Rβγ 발현 세포에서 더 양호한 효력을 유지시키면서 IL-2Rα 개재를 달성한다는 것을 보여준다.
Figure pct00166
Figure pct00167
실시예 22: 인간 말초 혈액 단핵 세포 림프구 하위집단에서의 3 및 4의 생물활성.
실험은 1과 화합물 3 또는 4에 의해 표시된 5kDa PEG 변이체의 생물검정 효력을 비교하도록 수행되었다. 예를 들면 실시예 20에 기재된 것과 같은 유사한 방법은 표시된 화합물에 의한 자극의 30분 후 유세포분석법을 사용하여 구별되는 림프구 하위집단에서 pSTAT5 유도를 조사하도록 사용되었다. 데이터는 표 32에 요약되어 있고, 화합물 3 및 4는 매우 유사한 효력을 나타낸다.
Figure pct00168
예를 들면, 이 실험에서의 화합물 3 및 4는 각각 126.59 및 133.77의 CD8+ T 세포에서의 매우 유사한 EC50 효력 값을 보여주었다. 유사하게, 이 실험에서의 화합물 3 및 4는 각각 22.05 및 24.02의 NK 세포에서의 매우 유사한 EC50 효력 값을 보여주었다. 전체적으로, 이 데이터는 IL-2Rα/β/γ+ 세포 유형, 예컨대 Treg뿐만 아니라 IL-2Rβ/γ+ 세포 유형, 예컨대 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 걸친 화합물 3 및 4의 효력의 실질적인 차이 없음을 보여준다.
실시예 23: 항-PD1 또는 항-CTLA4 면역치료와 조합된 IL-2 뮤테인 M1 중합체 프로드럭 10의 항종양 활성.
연구는 종양 접종의 일자에 9 내지 11주령의 암컷 BALB/C 마우스에서 수행되었다. 마우스에 오른쪽 뒤 옆구리에 5 x 105개의 CT26 종양 세포를 이식하였다. 종양이 대략 85 mm3의 평균 종양 용적으로 성장할 때, 마우스를 0일, 6일 및 16일에 200 ㎕의 완충액 대조군의 정맥내 용량, 0일, 3일, 7일 및 10일에 2주 동안 1주 2회 복강내로 투여된 10 mg/kg의 항-mCTLA4(9D9), 0일, 3일, 7일 및 10일에 2주 동안 1주 2회 복강내 투여된 10 mg/kg의 항-mPD1(RMP1-14), 200 ㎕의 60 ㎍의 10의 0일에 하나의 정맥내 용량 및 6일에 하나의 정맥내 용량 및 16일에 하나의 정맥내 용량, 또는 200 ㎕의 60 ㎍의 10의 0일에 하나의 정맥내 용량 및 6일에 하나의 정맥내 용량 및 16일에 하나의 정맥내 용량의 조합 중 어느 하나 및 상기 기재된 것과 같은 항-CTLA4 또는 항-PD1 처리 중 어느 하나를 받도록 처리 코호트(0일)로 무작위화하였다.
종양 용적을 하기 식에 따라 계산하였다: 종양 용적 = (L × W²) × 0.5, 여기서 L은 종양의 길이 및 W 폭(둘 다 mm 단위)이다. 종양이 3000 mm3 초과이면 마우스를 연구로부터 제거하고, 연구를 지역 동물 복지 가이드라인에 따라 실행하였다. 미리 규정된 일자에 상이한 그룹에서 상대 종양 용적을 비교하기 위해, Bartlett 시험은 모든 그룹에 걸쳐 변동량의 동질성의 추정을 확인하도록 사용되었다. Bartlett 시험의 p-값이 0.05 초과일 때, 1 방향 ANOVA는 모든 그룹에 걸쳐 평균의 전체 균등을 시험하도록 수행되었다. 1 방향 ANOVA의 p-값이 0.05 미만이면, 사후 검증은 모든 쌍별 비교를 위한 Tukey HSD(어니스트 유의차: honest significant difference) 시험 및 각각의 처리 그룹을 비히클 그룹과 비교하기 위한 Dunnett 시험을 실행함으로써 추가로 시험하여 수행되었다. Bartlett 시험의 p-값이 0.05 미만일 때, Kruskal-Wallis 시험은 모든 그룹에 걸쳐 중앙치의 전체 균등을 시험하도록 수행되었다. Kruskal-Wallis 시험의 p-값이 0.05 미만이면, 사후 검증은 모든 쌍별 비교를 위해 또는 각각의 처리 그룹을 비히클 그룹(둘 다 단일-단계 p-값 조정)과 비교하기 위해 Conover 비모수 시험을 실행함으로써 수행되었다. 종양 성장 억제(TGI)는 항종양 활성의 표시자로서 사용되고, 0일에 그룹 사이에 종양 용적의 변동량으로 인한 대조군 및 처리 그룹의 상대 종양 용적으로부터 계산되었다. TGI(%) = (1-T/C) x 100%; T/C = MTVT/MTVC, MTVT: t일에 처리 그룹에서의 평균 종양 용적, MTVC: t일에 대조군 그룹에서의 평균 종양 용적. 게다가, 통계 분석은 대조군 그룹에서 모든 또는 대부분의 마우스가 살아 있을 때의 일자에 수집된 데이터에서 수행되었다.
각각의 그룹에서의 14일에 대한 TGI 값은 표 33에 요약되어 있다: 완충액 처리된 동물에서, 32.53%, 51.79%, 및 60.65%의 종양 성장 억제(TGI) 값은 각각 10, 항-CTLA4 단일치료 또는 10과 항-CTLA4의 조합에 의해 관찰되었다. 추가적으로, 조합 10 및 항-CTLA4는 10 또는 항-CTLA4 단독에 의한 처리보다 완충액 처리된 동물에 대해 더 낮은 평균 종양 용적 및 더 낮은 p-값을 입증하였다(표 33). 유사하게, 완충액 처리된 동물과 비교될 때, 47.21% 및 57.82%의 TGI 값은 항-PD1 또는 항-PD1 + 10의 조합에 의해 처리된 그룹에 대해 관찰되었다. 요약하면, 14일에서 데이터는 CTLA4 또는 PD1 단독을 받는 그룹과 비교하여 10과 조합된 CTLA4 또는 PD1을 받는 그룹에서 완충액 처리된 동물과 비교하여 증가된 종양 성장 억제, 더 낮은 평균 종양 용적 및 더 낮은(더 상당한) p-값을 보여준다(표 33).
Figure pct00169
실시예 24: IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 시험관내 방출 역학
IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5의 시험관내 방출 역학은 생리학적 pH 및 온도 조건을 모방하도록 pH 7.4 및 37℃에서 결정되었다. 이 목적을 위해, IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5를 2 mL/분의 유속 및 280 nm에서의 UV 검출을 사용하여 Akta 시스템 및 2개의 연결된 HiTrap 탈염 칼럼(Cytiva)을 사용하여 25 mM HEPES, 135 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM L-메티오닌, 2 mg/mL Pluronic F-68, pH 7.4로 완충제 교환하였다. 완충액 교환된 샘플을 2주(333.5 시간) 이하 동안 물 욕에서 온도 제어된 조건 하에 37℃에서 항온처리하였다. 3의 링커 절단 및 방출의 결정은 Acquity UPLC 펩타이드 BEH C18 칼럼(300 Å, 1.7 ㎛, 2.1 mm x 50 mm)이 장착된 Acquity UPLC I-Class Plus System(Waters)에서 역상 고압 액체 크로마티그래피에 의해 샘플의 산성화 후 수행되었다. 방출을 215 nm에서의 각각의 RP-HPLC 크로마토그램에서의 IL-2 뮤테인 Ala-M1 중합체 프로드럭 5 및 방출 관련된 종(3 및 절단된 40 kDa mPEG-링커 종)의 피크의 적분에 의해 8개의 상이한 시점에서 정량화하였다. 방출된 종의 백분율을 항온처리 시간에 대해 작도하고, 곡선 적합화 소프트웨어를 링커 절단 역학의 반감기를 결정하도록 비선형 1단계 결합 적합화를 적용하도록 사용하였다. 시험관내 링커 반감기는 pH 7.4 및 37℃에서 54시간(95% 신뢰 간격 = 50시간 내지 58시간)으로 결정되었다.
실시예 25: IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(서열 번호 14)에 대한 O-글리코실화 패턴
IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(서열 번호 14)에서의 O-글리코실화 부위를 조사하기 위해, 펩타이드 맵을 수행하였다. 이 목적을 위해, IL-2 뮤테인 Ala-M1 1(서열 번호 14)의 2개의 배치를 pH 8 및 37℃에서 18시간 동안 트립신과 엔도프로테이나제 Lys-C의 혼합물(효소 대 기질 비 = 1:10)로 분해하였다. 분해 후, 샘플을 동일한 용적의 물로 희석하고, Halo C18 칼럼(Advanced Materials Technology, 90 Å, 2.1 x 100 mm, 2.7 ㎛)을 사용하여 역상 고압 액체 크로마토그래피에 의해 분석하였다. 이동상은 물 중의 0.07% TFA(A) 및 아세토니트릴 중의 0.060 % TFA(B)로 이루어졌다. 구배 프로그램은 1시간 동안 유지된 0.5% B의 출발 조성을 따랐고, 8.2분에 25.7% B로 증가하였고, 1.3분에 33 % B로 증가하였고, 15.5분에 61% B로 증가하였고, 이어서 0.2분에 99.9% B로 증가하였다(유속 = 0.5 mL/분, 칼럼 온도 = 20.9℃). 펩타이드 단편의 확인은 쿼드러플 비행 시간 질량 분광기를 사용하여 고해상 질량 분광법에 의해 수행되었다. 가장 강한 글리코실화된 종은 215 nm에서의 피크 강도의 비교에 의해 결정되었다.
분해된 펩타이드 단편 1-8(APTSSSTK)은 O-글리코실화되는 것으로 발견되었다(비글리코실화된APTSSSTK 단편이 발견되지 않았다). 가능한 O-글리코실화는 펩타이드 단편에 대해 발견된 질량 및 데이터베이스로부터의 이론적 질량(GlycoMod Tool, ExPASy, Swiss Institute of Bioinformatics)의 비교에 의해 확인되었다. 정성적 결과는 표 34에 요약되어 있다(오직 생물학적 관련된 글리코폼은 일치에 대해 고려됨).
Figure pct00170
뱃치 둘 다에서의 가장 강한 글리코폼은 (Hex)1(HexNAc)1(NeuAc)2 및 (Hex)1(HexNAc)1(NeuAc)1였다.
실시예 26: 이. 콜라이에서의 IL-2 뮤테인의 발현
K35에서 돌연변이를 갖는 IL-2 변이체의 발현을 위해, Ala-M1[서열 번호 40], Ala-M1 K35E[서열 번호 41], Ala-M1 K35D[서열 번호 42], Ala-M1 K35Q[서열 번호 43] 및 Ala-M1 K35S[서열 번호 44]를 암호화하는 DNA 서열을 에스체리치아 콜라이(이. 콜라이)에서의 발현을 위한 역전사 및 코돈 최적화에 의해 아미노산 서열(Ala-M1[서열 번호 14], Ala-M1 K35E[서열 번호 35], Ala-M1 K35D[서열 번호 39], Ala-M1 K35Q[서열 번호 33] 및 Ala-M1 K35S[서열 번호 29])로부터 얻었다. ATG 코돈을 이. 콜라이에서의 세포액 발현이 가능하게 하도록 각각의 DNA 서열의 5' 말단에 첨가하였다. DNA 서열을 합성하고(GeneArt), IPTG 유도성 Tac 프로모터의 제어 하에 발현 벡터로 클로닝하였다. 선택을 위해 카나마이신 내성 유전자를 추가로 함유하는 발현 벡터를 이. 콜라이 숙주 균주 BL21로 형질전환하고, 생성된 균주를 Ala-M1 K35 돌연변이체의 발현을 위해 사용하였다. 균주를 LB-Kan 배지(37℃, 250 rpm)에서 밤새 성장시키고, 밤샘 배양물을 사용하여 250 mL의 진탕 플라스크(37℃, 250 rpm)에서 50 mL의 TB-Mg-Kan 배지를 접종하였다. 배양물의 OD600이 1에 도달할 때, 발현은 0.1 mM IPTG를 첨가함으로써 유도되었고, 배양물을 수확 전 5시간 동안 진탕시키면서 정치시켰다.
가용성 세포 분획 및 불용성 세포 분획에서 생성물 수율의 분석을 위해, 가용성 단백질을 300 ㎕의 BugBuster 시약을 사용하여 각각의 진탕 플라스크로부터 2 x 1 mL의 배양물로부터 추출하였다. 남은 세포 펠릿을 불용성 분획을 나타내는 DTT를 함유하는 300 ㎕의 샘플 완충액에 용해시키고, 둘 다의 분획을 로딩 후 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. 결과는 생성물이 모든 시험된 IL-2 변이체에 대해 불용성 분획에서 오직 존재한다는 것을 보여주었다.
재폴딩 실험을 위해, IL-2 봉입체를 가용화 완충액(6 M 구아니딘 HCl, 8 mM DTT, 50 mM Tris, pH 8.5)에 가용화시키고, 이후 재폴딩 완충액(1.2 M 우레아, 500 mM 아르기닌 HCl, 20% 글리세롤, 0.001% Tween 80, 12 mM L-시스테인, 0.15 mM 시스타민 2HCl, 35 mM Tris, pH 8.5)에서 50배 희석에 의해 재폴딩하였다. 혼합물을 실온에서 교반하면서 55시간 동안 항온처리하였다. 재폴딩 후에 재폴딩의 시간 과정에 걸친 RP-HPLC 분석을 위해 샘플을 꺼냈다. RP-HPLC 방법(Waters X-bridge BEH C18 칼럼, 300 Å, 3.5 ㎛, 2.1 x 100 mm. 온도: 40℃. 용리제 A: UPW 중의 0.05% TFA 및 용리제 B: ACN 중의 0.05% TFA. 36분에 걸친 25% 내지 75% B의 선형 구배. 유속 0.4 mL/분, 50 ㎕의 주입 용적 및 220 nm에서의 UV 검출)은 완전히 환원된 IL-2 출발 재료 및 R38C에서 시스테인 캡핑을 갖는 재폴딩된 단량체성 IL-2 변이체의 분리를 허용하였다.
결과는 모든 시험된 변이체에 대해 시간에 걸친 정확하게 폴딩된 단량체성 생성물의 증가하는 농도를 보여준다. 재폴딩된 단량체 생성물의 더 높은 초기 형성 속도 및 더 높은 최종 농도는 Ala-M1과 비교하여 Ala-M1 K35D 및 Ala-M1 K35E에 대해 관찰되었다. Ala-M1 K35Q 및 Ala-M1 K35S 돌연변이체는 재폴딩 개선을 나타내지 않았고, 오히려 Ala-M1과 비교하여 재폴딩된 단량체 생성물의 매우 유사한 형성 속도 및 최종 농도를 가졌다. 정확하게 재폴딩된 단량체의 가장 높은 최종 농도는 Ala-M1 K35D 변이체(Ala-M1보다 대략 1.8배 높음)로 얻어졌지만, Ala-M1 K35E 변이체는 Ala-M1보다 대략 1.5배 더 높은 재폴딩된 단량체의 최종 농도를 가졌다. 최종 농도의 배수 개선은 여기서 재폴딩의 47시간 후 K35 변이체의 재폴딩된 생성물 피크 면적을 Ala-M1 재폴딩된 생성물 피크 면적과 비교함으로써 추정되었다.
이. 콜라이에서의 Ala-M1[서열 번호 14] 및 M1[서열 번호 18]의 가용성 주변세포질 발현을 달성하려는 시도에서, Ala-M1 및 M1을 일련의 박테리아 신호 펩타이드(dsbA, glll, mal, OmpA, OpmC, OmpT, pelB, phoA, torA, torT, EOX, STLL, SfmC, lamb, MglB, MmAp 및 tolB)에 N 말단 융합시켰다. 단독으로 및 신호 펩타이드와 융합된 IL-2 뮤테인의 아미노산 서열은 역번역되고, 생성된 DNA 서열은 이. 콜라이에서의 발현을 위해 코돈 최적화되었다. 생성된 DNA 서열을 합성하고, 람노스 유도성 rham 프로모터(Atum)의 제어 하에 선택을 위해 카나마이신 내성 유전자를 함유하는 발현 벡터로 클로닝하였다. 이러한 방식으로 작제된 플라스미드를 이. 콜라이 숙주 균주 BL21로 형질전환하고, 생성된 균주를 소규모 시험을 위해 사용하였다. 균주를 37℃에서 TB-Kan 배지에서 밤새 성장시키고, 밤샘 배양물을 사용하여 0.5 mL TB-Mg-Kan을 0.2의 출발 OD600로 접종하였다. 배양물의 OD600이 0.8에 도달할 때, 발현은 4 mM 람노스를 첨가함으로써 유도되었고, 배양물을 원심분리에 의해 수확 전 4시간 동안 진탕시키면서 항온처리하였다. 주변세포질 공간의 외부 막을 파괴시키고 주변세포질 단백질을 세포로부터 추출한 후, 남은 세포 재료로부터 전체 세포 용해물을 제조하였다. 전체 세포 용해물을 가용성 분획 및 불용성 분획에서 분리하였다. 전체, 가용성 및 주변세포질 단백질 분획으로부터의 샘플을 이후 변성시키고, 환원 조건에서 SDS-PAGE에서 실행하였다. 발현 수준은 쿠마시 염색된 겔에서 IL-2 표준품에 비해 전장 단백질 밴드의 농도계에 의해 예측되었다. 샘플을 또한 IL-2 항체를 사용하여 웨스턴 블롯 분석에 의해 분석하였다. 양성 대조군(모든 분석된 분획에 존재하는 단백질을 발현하는 세포) 및 음성 대조군(빈 발현 플라스미드를 갖는 세포)은 기준품에 대해 분석에 포함되었다. SDS-PAGE 분석은 임의의 시험된 신호 펩타이드를 갖는 M1 또는 Ala-M1 중 어느 하나로부터의 가용성 샘플 또는 주변세포질 샘플 중 어느 하나에서 IL-2 생성물을 검출하지 않았다. 신호 서열 없이 발현된 M1 및 Ala-M1에 대해, 예상된 크기의 단백질 밴드는 SDS-PAGE 겔에서 전체 세포 용해물 분획에서 관찰되었고, 생성물의 정체는 웨스턴 블롯에 의해 검증되었다. 신호 서열 없이 발현된 M1 및 Ala-M1에 대해, 약간 증가된 크기의 단백질 밴드는 SDS-PAGE에서 전체 세포 용해물 분획에서 관찰되었고, 밴드의 정체는 웨스턴 블롯에 의해 검증되었다. 생성물 크기의 약간의 증가는 절단되지 않은 신호 펩타이드와 일치하였다. 일부 신호 서열에 대해, 생성물은 전체 세포 용해물을 포함하여 임의의 분획에서 검출될 수 없었다. M1에 대해, 이는 시험된 17개 중 7개의 신호 펩타이드(dsbA, torT, tolB, EOX, STLL, SfmC 및 MmAp)에 대한 경우이지만, Ala-M1에 대해, 이것은 오직 신호 펩타이드 중 3개(dsbA, torT 및 tolB)에 대한 경우이다.
Figure pct00171
Figure pct00172
SEQUENCE LISTING <110> Ascendis Pharma Oncology Division A/S <120> Novel IL-2 sequences and uses thereof <130> CPX72963PC <160> 48 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ A <400> 1 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr 35 <210> 2 <211> 95 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ B <400> 2 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 1 5 10 15 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 20 25 30 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 35 40 45 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 50 55 60 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 65 70 75 80 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 85 90 95 <210> 3 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ A with K34A 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Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 36 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 of formula (I) with SEQ A = SEQ ID NO:10 and SEQ B = SEQ ID NO:2 <400> 36 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Asn Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 37 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 of formula (I) with SEQ A = SEQ ID NO:10 and SEQ B = SEQ ID NO:12 <400> 37 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Asn Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 38 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 of formula (I) with SEQ A = SEQ ID NO:11 and SEQ B = SEQ ID NO:2 <400> 38 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Asp Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 39 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 of formula (I) with SEQ A = SEQ ID NO:11 and SEQ B = SEQ ID NO:12 <400> 39 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Asp Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 40 <211> 402 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding SEQ ID NO:14 in E.Coli <400> 40 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt acttctggat 60 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccaaactcac ctgtatgctc 120 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360 tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt aa 402 <210> 41 <211> 402 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding SEQ ID NO:35 in E.Coli <400> 41 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt acttctggat 60 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccgaactcac ctgtatgctc 120 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360 tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt aa 402 <210> 42 <211> 402 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding SEQ ID NO:39 in E.Coli <400> 42 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt acttctggat 60 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccgacctcac ctgtatgctc 120 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360 tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt aa 402 <210> 43 <211> 402 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding SEQ ID NO:33 in E.Coli <400> 43 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt acttctggat 60 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc cccaactcac ctgtatgctc 120 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360 tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt aa 402 <210> 44 <211> 401 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding SEQ ID NO:29 in E.Coli <400> 44 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt acttctggat 60 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccagcctcac ctgtatgctc 120 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360 tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt a 401 <210> 45 <211> 134 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 variant <400> 45 Met Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu 1 5 10 15 His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr 20 25 30 Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro 35 40 45 Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu 50 55 60 Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His 65 70 75 80 Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu 85 90 95 Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr 100 105 110 Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ala Gln Ser 115 120 125 Ile Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 46 <211> 139 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-2 variant with His-tag <400> 46 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr His His His His His His 130 135 <210> 47 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Signal peptide S1 <400> 47 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys <210> 48 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Signal peptide S2 <400> 48 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala 1 5 10 15

Claims (43)

  1. 하나 이상의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Ala - SEQ A - Cys* - SEQ B (I)
    상기 식 중,
    SEQ A는 서열 번호 1과 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
    SEQ B는 서열 번호 2와 적어도 94%의 서열 동일성을 갖고;
    Ala는 알라닌 잔기이고;
    Cys*는 시스테인 잔기이다.
  2. 제1항에 있어서, SEQ A는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10 및 서열 번호 11로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, SEQ A는 서열 번호 1의 서열을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B는 서열 번호 2의 서열을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B는 서열 번호 12의 서열을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 단백질은 바이어싱된 IL-2인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 제1항 내지 제3항, 제5항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 단백질은 서열 번호 14의 서열을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 단백질은 화학식 (I)의 IL-2 단백질에서 별표로 표시된 시스테인에 접합된 모이어티 Mmod를 포함하는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체는 바이어싱된 IL-2인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체는 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00173

    Figure pct00174

    상기 식 중,
    -D는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하고;
    -L1-은 -D에 공유로 및 가역적으로 부착된 링커 모이어티이고;
    -L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
    -Z는 중합체성 모이어티 또는 치환된 지방 산 모이어티이고;
    x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    y는 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 중합체성 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 화학식 (A-1)을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00175

    상기 식 중,
    -FG-는 연결이고;
    -SP-는 스페이서 모이어티이고;
    -POL은 중합체이다.
  13. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 0.5 kDa 내지 1000 kDa 범위의 분자량을 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  14. 제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 PEG-기반 중합체인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  15. 제8항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod가 안정한 연결을 통해 IL-2 단백질에 부착되어 있는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  16. 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 화학식 (A-1a)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00176

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
    b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
  17. 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 화학식 (A-1d)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00177

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
    b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
  18. 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod는 화학식 (A-1e)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00178

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 화학식 (I)에서 별표로 표시된 시스테인의 황에 대한 부착을 나타내고;
    b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
    b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
  19. 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 접합체에서 Mmod는 화학식 (A-1d)와 화학식 (A-1e)의 혼합물을 포함하는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  20. 제10항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, -Z는 중합체성 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  21. 제10항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, -Z는 1 kDa 내지 1000 kDa 범위의 분자량을 갖는 중합체성 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  22. 제10항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, -Z는 PEG-기반 중합체성 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  23. 제10항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, -Z는 화학식 (A)의 모이어티를 포함하는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00179

    상기 식 중,
    -BP1<, -BP2<, -BP3<은 서로 독립적으로 -N< 및 -C(R8)<로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R8은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 40%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG-기반 사슬이고;
    -C1-, -C2-는 서로 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
    각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
    각각의 -R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11aR11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R10, R10a, R11, R11a 및 R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
  24. 제23항에 있어서, C1 및 C2는 화학식 (A-a)를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00180

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 BP1에 대한 부착을 나타내고;
    비표시된 점선은 각각 BP2 또는 BP3에 대한 부착을 나타내고;
    q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    q4는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, P1, P2, P3 및 P4는 서로 독립적으로 화학식 (A-b)를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00181

    상기 식 중,
    점선은 -Z의 나머지에 대한 부착을 나타내고;
    m은 0 또는 1이고;
    p는 70 내지 900 범위의 정수이고;
    q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, BP1은 -N<인 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, BP2 및 BP2는 둘 다 -CH<인 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  28. 제10항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, -Z는 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함하는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00182

    상기 식 중,
    p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
  29. 제10항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00183

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    =Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    =Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
    -R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    -Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7),-COOH,
    Figure pct00184

    Figure pct00185

    Figure pct00186

    로 이루어진 군으로부터 선택된 친핵체이고;
    -Ar-은
    Figure pct00187

    Figure pct00188

    Figure pct00189

    Figure pct00190

    로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    상기 식 중,
    점선은 -L1-의 나머지에 대한 부착을 나타내고,
    -Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    -Z2-는 -N(R7)-이고;
    -R7, -R7a, -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
    -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
  30. 제10항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00191

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
    비표시된 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
    s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
  31. 제30항에 있어서, s1은 3인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  32. 제10항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-는 스페이서인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  33. 제10항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재되고;
    -Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 개재되고;
    각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 T는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 독립적으로 선택적으로 치환되고;
    각각의 -Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
    각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  34. 제10항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-는 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 개재된 C1-20 알킬 사슬이고; C1-20 알킬 사슬은 -OH, -T 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 치환되고; -Ry1, -Ry6, -Ry6a는 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄린, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로바이사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  35. 제10항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-은 화학식 (IX-e)를 갖는 것인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00192

    상기 식 중,
    별표로 표시된 점선은 -L1-에 대한 부착을 나타내고;
    비표시된 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
    s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
  36. 제35항에 있어서, s2는 3인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
  39. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료 방법에 사용하기 위한 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 암은 육종, 척삭종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암, 기저 세포 암, 선암, 땀샘암, 피지샘암, 유두모양 암, 유두상 선암종, 낭샘암종, 수질암, 기관지암, 신장 세포 암, 간세포종, 담관암, 융모암, 정상피종, 배아 암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 속귀신경집종, 핍지교종, 뇌수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 비호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 이와 동시에 또는 그 후에 환자에게 투여되는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
  42. 제41항에 있어서, 하나 이상의 추가 약물은 패턴 인식 수용체 효능제(PRRA), 세포독성제/화학치료제, 면역 관문 억제제 또는 길항제, 면역 관문 효능제, 면역 활성화 수용체 효능제, 다중특이적 약물, 항체-약물 접합체(ADC), 항체-아쥬반트 접합체(AAC), 방사선핵종 또는 표적화된 방사선핵종 치료제, DNA 손상 보수 억제제, 종양 대사 억제제, 패턴 인식 수용체 효능제, 단백질 키나제 억제제, 케모카인 및 주화인자 수용체 효능제, 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제, 사이토카인 수용체 효능제, 사멸 수용체 효능제, CD47 또는 SIRPα 길항제, 종양세포붕괴성 약물, 신호 변환자 단백질, 후성적 변형제, 종양 펩타이드 또는 종양 백신, 열 쇼크 단백질(HSP) 억제제, 단백질분해 효소, 유비퀴틴 및 프로테아솜 억제제, 접착 분자 길항제, 호르몬 펩타이드 및 합성 호르몬을 포함하는 호르몬 및 입양 세포 치료제, 예컨대 종양 침윤 림프구(TIL) 치료제, 키메라 항원 수용체(CAR) 치료제, T 세포 치료제, 자연 살해(NK) 세포 치료제, CAR-T 치료제, CAR-NK 치료제, CAR-γδ 치료제, CAR-거대세포 치료제 또는 유전적으로 변형되거나 유전적으로 변형되지 않은 면역 세포 유형을 갖는 임의의 다른 세포 치료제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
  43. 제38항 또는 제39항에 있어서, 기준선에 비해 적어도 100배의 γδ T 세포의 확대를 발생시키는 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학 조성물.
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