KR20230010994A

KR20230010994A - 피부의 주름 개선, 미백, 세포 재생, 상처 치유에 유효한 피트 추출물과 소금을 활성성분으로 함유하는 다 기능성 화장품 조성물

Info

Publication number: KR20230010994A
Application number: KR1020210091474A
Authority: KR
Inventors: 손진성; 박상욱
Original assignee: 농업회사법인 제일인터내셔널주식회사
Priority date: 2021-07-13
Filing date: 2021-07-13
Publication date: 2023-01-20

Abstract

본 발명은 추출 용매를 65 내지 85℃의 물로 하여 추출한 피트 추출물; 및 상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5 내지 15중량부의 소금을 활성성분으로 포함하며, 선택적으로 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말, 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일, 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물, 왜우산풀 에탄올 및 창포 에탄올 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 활성성분으로 더 포함하여 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과가 우수한 다 기능성 화장품 조성물을 제공한다.

Description

피부의 주름 개선, 미백, 세포 재생, 상처 치유에 유효한 피트 추출물과 소금을 활성성분으로 함유하는 다 기능성 화장품 조성물{Multifunctional cosmetic composition containing peat extracts and salts effective for skin wrinkle improvement, whitening, cell regeneration, and wound healing as an active ingredient}

본 발명은 피트 추출물을 활성 성분으로 포함하여 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과가 우수한 다 기능성 화장품 조성물에 관한 것이다.

피트는 죽은 나무·관목·이끼 등이 얕은 산성 수에서 썩은 다음 그 위에 쌓인 다른 나무 때문에 압축되어서 만들어지는 것으로서 이와 같은 피트의 효과는 여드름, 아토피, 건선 피부 등 피부 발진과 두피 처방에 좋은 효과가 있으며, 혈액 순환과 신진대사를 활발하게 하여 손, 발의 차가운 증상을 개선하는 효과가 확인되었으며, 특히 피부를 탄력적이게 하며, 보습 등 피부 개선에 효과가 우수한 것으로 알려져 있다.

또한, 미국 등록특허 6267962호(1997년 6월 30일 출원)에서는 곰팡이, 박테리아, 리케치아, 바이러스 감염, 건선(psoriasis), 알레르기 및 다른 피부염, 습진(eczema)에 의해 일어나는 상처 치료, 고통, 가려움증, 염증, 비정상적인 세포 증식 또는 감염의 치료에 사용할 수 있는 피트 또는 이의 유사물로부터 제조된 조성물을 개시하고 있다.

그러나 상술한 바와 같은 피트의 다양한 효과에도 피트를 주성분으로 하여 화장품 조성물을 상품화하기에는 그 활성을 약하여 한계를 가지고 있다.

1. 미국 등록특허 6267962호

따라서 본 발명이 이루고자 하는 과제는 피트 추출물에 그 활성 강화할 수 있는 천연물을 더 부가하여 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과가 우수한 다 기능성 화장품 조성물을 제공하는 것을 과제로 한다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은

추출 용매를 65 내지 85℃의 물로 하여 추출한 피트 추출물; 및

상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5 내지 15중량부의 소금을 활성성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물을 제공한다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 다 기능성 화장품 조성물은 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말, 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일, 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물, 왜우산풀 에탄올 및 창포 에탄올 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 활성성분으로 더 포함하며, 그 함량은 상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부인 것을 특징으로 한다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 다 기능성 화장품 조성물에 있어서,

상기 다 기능성은 피부 탄력 증진, 피부 미백, 피부 주름 방지, 항산화, 항염증, 항아토피, 피부 재생 및 피부 상처 치유에 대하여 현저한 효과를 보이는 것이다.

본 발명에 의하면 소금, 흰점박이꽃무지 유충, 왜우산풀, 창포를 이용한 피트의 피부 활성 효과 강화를 통하여 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과를 동시에 발휘할 수 있는 다 기능성 화장품의 제조가 가능하다.

이하 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 상세하게 설명하기로 한다.

본 발명은 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과가 우수한 다 기능성 화장품 조성물을 제공하기 위하여 추출 용매를 65 내지 85℃의 물로 하여 추출한 피트 추출물; 및 상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5 내지 15중량부의 소금을 활성성분으로 포함하는 것을 조성물을 제공한다.

상술한 바와 같은 본 발명은 100℃의 열수가 아닌 65 내지 85℃의 물로 하여 추출하였을 때 피트 추출물의 피부에 대한 활성이 증가하고 또 피트 추출물 100중량부에 대하여 5 내지 15중량부의 소금을 용해하면 상승 작용에 의하여 현저한 효과 향상이 있음을 확인하여 완성한 것이다.

상기 피트 추출물 대비 소금의 함량이 5중량부 미만이면 상승효과가 나타나지 않으며, 15중량부를 초과하는 경우는 피부 자극 등에 문제가 있으며 상승효과가 발생하지 않아 첨가하는 의미가 없어진다.

또한, 상기 소금은 특별한 제한은 없으나 자연에서 제조한 천일염 내지 자염인 것이 바람직하며, 상기 천일염은 염전에서 바닷물을 증발시켜 만든 소금이며, 자염은 바닷물을 끓여서 만든 소금을 의미한다.

또한. 본 발명은 여기에 선택적으로 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말, 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일, 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물, 왜우산풀 에탄올 및 창포 에탄올 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 활성성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물을 제공하며, 이들은 피트 추출물 100중량부 대비 5중량부 포함되는 것이 바람직하며, 왜우산풀과 창포는 뿌리는 제거한 지상부를 건조하여 사용하며 에탄올을 이용한 추출법은 본 발명이 속하는 기술분야에 널리 알려진 것이라면 특별한 제한이 없으며, 흰점박이꽃무지 유충을 절식하여 내부의 이물질을 제거한 후에 건조하여 에탄올로 추출한 것을 의미한다.

또한, 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말 및 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일은 흰점박이꽃무지 유충을 유산균으로 발효를 한 후에 얻어지는 펩타이드 분말 내지 오일로서 충남 태안에 소재하는 에이치엠오건강드림영농조합법인에 의해 화장품 원료 등재한 물질로서, 본 발명에서도 이를 이용하며, 구체적인 제조방법은 대한민국 등록특허 제10-1938348오 개시되어 있는데, 그 방법은 (a) 굼벵이 또는 분쇄한 굼벵이를 물에 넣고 Bacillus subtilis var. natto 균주, Bacillus subtilis 균주 및Aspergillus kawachii 균주로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 균주를 접종하여 발효시키는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계 완료 후 지방산 오일을 함유하는 상층부의 유상과 수용성 펩타이드를 함유하는 하층부의 수상을 분리하여 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 굼벵이로부터 지방산 오일 및 수용성 펩타이드를 분리하는 방법으로 구성되어 있다.

본 발명에서의 화장품 조성물은 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일 예로 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

이와 같은 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 일 구체 예로 고점도 유화제형, 저점도 유화제형 및 가용화 제형으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 제조하고자 하는 제형에 따라 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 화장품 조성물 배합 성분을 포함할 수 있다. 일 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 베이스, 비비크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

제조하고자 하는 제형에 따라 추가로 수상성분, 유상성분, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 점증제, 킬레이트제, 방부제, 향료 등을 선택하여 배합 첨가할 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

피트 6kg을 75℃로 가온한 정제수 60ℓ와 혼합하여 3시간 동안 75℃를 유지하면서 추출을 하여 피트 추출물을 제조한 다음에 여기에 태안 천일염으로 만든 태현보호작업장의 RED SALT를 용해해 본 발명에 따른 조성물을 제조하였다.

여기서 RED SALT의 사용량은 피트 추출물 100중량부에 대하여 10중량부이었다.

< 실시예 2>

실시예 1과 동일하며 다만 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

< 실시예 3>

실시예 1과 동일하며 다만 왜우산풀 에탄올 추출물을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

< 실시예 4>

실시예 1과 동일하며 다만 창포 에탄올 추출물을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

< 실시예 5>

실시예 1과 동일하며 다만 흰점박이꽃무지 유충, 왜우산풀, 창포를 동일 중량비율로 혼합한 후에 제조한 에탄올 추출물을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

< 실시예 6>

실시예 1과 동일하며 다만 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

상기 발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말은 충남 태안에 소재하는 에이치엠오건강드림영농조합법인으로부터 공급받아 사용하였다.

< 실시예 7>

실시예 1과 동일하며 다만 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일을 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 더 포함하여 제조한 것에 차이가 있다.

상기 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일은 충남 태안에 소재하는 에이치엠오건강드림영농조합법인으로부터 공급받아 사용하였다.

< 비교예 1>

피트 6kg을 75℃로 가온한 정제수 60ℓ와 혼합하여 3시간 동안 75℃를 유지하면서 추출을 하여 피트 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물을 제조하였다.

< 비교예 2>

피트 6kg을 100℃로 가온한 정제수 60ℓ와 혼합하여 3시간 동안 100℃를 유지하면서 추출을 하여 피트 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물을 제조하였다.

< 시험예 1: Elastase 저해 활성을 통한 피부 탄력 증진 및 주름 방지 효능 평가>

실시예 및 비교예 조성물을 메탄올에 희석한 시험용액 40㎕에 50mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 proporcine pancreas elastase (2.5 U/㎖) 용액 40㎕을 가한 후 기질로 50mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide (0.5mg/㎖)을 80㎕ 첨가하여 혼합하였으며. 37℃에서 30분간 반응시킨 후 410nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 oleanolic acid를 사용하여다.

Elastase 저해활성은 하기 계산식과 같이 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하여 그 결과를 표 1에 나타냈다.

계산식: 저해율(%)= 1-(시료첨가군의 흡광도/시료무첨가군의 흡광도) x 100

Sample	Concentration (100 ㎍/㎖)
실시예 1	82.3±0.6
실시예 2	85.9±0.7
실시예 3	86.3±0.6
실시예 4	86.2±0.5
실시예 5	90.3±0.6
실시예 6	91.5±0.4
실시예 7	92.6±0.6
비교예 1	55.4±0.6
비교예 2	32.7±0.6
oleanolic acid	70.6±0.5

인체의 중성구 과립구내에 존재하는 elastase는 동물 결합 조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 elastin을 분해시켜 피부의 진피조직의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로써 피부 탄력 증진 감소 및 주름 생성의 주원인 효소로 알려져 있으며, 이의 활성을 억제하는 경우 피부 탄력 증진 유지 내지 회복, 피부 주름 생성을 방지할 수 있는데, 상기 표 1의 결과를 보면, 본 발명의 실시예 추출물 모두 양성 대조군보다 우수한 효과를 보여 소금의 상승 효과 등 그 효과의 현저성을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 5, 6, 7에서 매우 우수한 효과를 보였다.

또한, 비교예를 보면 열수로 추출한 비교예 2에서 비교예 1보다 효과가 떨어지는 것으로 보아 피트는 100℃보다 낮은 온도에서 추출하는 것은 효율적임을 알 수 있었다.

< 시험예 2: 미백 효능 평가>

1) tyrosinase 저해 활성 측정

0.175M sodium phosphate buffer(pH 6.8) 0.5㎖에 기질액인 10mM L-DOPA 0.2㎖ 과 시료용액 0.1㎖을 96 well plate에 넣고 혼합한 혼합액에 mushroom tyrosinase (110 U/㎖) 0.2㎖을 첨가하여 25℃에서 2분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 475nm에서 측정하였으며, 양성 대조군으로 Arbutin을 사용하였다.

Tyrosinase 저해활성은 하기 계산식과 같이 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하여 그 결과를 표 2에 나타냈다.

Sample	Concentration (100 ㎍/㎖)
실시예 1	67.8±0.3
실시예 2	76.5±0.5
실시예 3	75.9±0.6
실시예 4	74.2±0.5
실시예 5	81.9±0.6
실시예 6	82.7±0.5
실시예 7	82.4±0.6
비교예 1	42.5±0.8
비교예 2	29.5±0.8
Arbutin	55.8±0.8

tyrosinase는 피부 멜라닌 생성에 있어서 매우 중요한 역할을 하고 있으며, melanosome 내에서 tyrosine을 산화시켜 DOPA를 만드는 tyrosine hydroxylase로 DOPA를 산화시켜 DOPA quinone을 만드는 DOPA oxidase로서 작용하여 멜라닌 중합체를 합성하는데 중요한 효소로 작용하며, 이를 억제하면 멜라닌의 생성의 억제되어 피부 미백 효과를 나타내게 되는데, 상기 표 2의 결과를 보면, 본 발명의 실시예 추출물 모두 양성 대조군보다 우수한 효과를 보여 소금을 통한 상승효과 등 그 효과의 현저성을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 5, 6, 7에서 매우 우수한 효과를 보였다.

2) melanin 생합성 저해 활성 측정

melanoma cell line인 B16F10 cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Grand Island, USA)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 2일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

DMEM 배지로 배양된 B16F10 세포를 24 well plate에 2.0 X 10⁴ cells/well로 접종한 후 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양 후 시료와 혼합하였다.

시료와 cell에 자극하기 위하여 자극제인 α-MSH를 200nM로 혼합하여 첨가한 후 37℃, 5% CO₂incubator에서 48시간 동안 배양한 후에 배양액을 제거한 후 인산완충액(pH 7.4)으로 각 well을 세척하였다.

이어서 1N NaOH를 100㎕씩 가하여 cell을 떼어낸 후 1.5㎖ tube에 옮겨준다. 80℃에서 1시간 반응시킨 후 분광광도계 405nm에서 흡광도를 측정하였으며, melanin 생합성 저해는 시료 용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하였으며, 그 결과는 표 3에 나타냈다.

sample	Melanin contents (%)
α-MSH(-)	-
α-MSH(+, 200nm)	100
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 1	42.8 ± 1.2
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 2	35.9 ± 1.5
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 3	35.1 ± 1.1
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 4	34.5 ± 1.3
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 5	26.1 ± 1.2
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 6	24.8 ± 1.1
α-MSH(+, 200nM) + 실시예 7	25.1 ± 1.2
α-MSH(+, 200nM) + 비교예 1	66.2 ± 1.3
α-MSH(+, 200nM) + 비교예 2	77.8 ± 1.3

상기 표 3을 보면 α-MSH 단독 처리군을 통해 α-MSH에 의해 멜라닌 합성이 유도됨을 확인할 수 있었으며, α-MSH 단독 처리군에 비교하여 본 발명의 실시예 추출물 모두 우수한 효과를 보여 소금을 통한 상승효과 등 그 효과의 현저성을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 5, 6, 7에서 매우 우수한 효과를 보였다.

< 시험예 3: Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성을 통한 항염증 효능 평가>

Murine macrophage cell line인 RAW 264.7 cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Grand Island, USA)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 2일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

RAW 264.7 cell를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 2.0 × 10⁵cells/㎖로 24 well plate에 넣고 18시간 배양하였으며, 준비된 시료에 LPS를 1ug/㎖의 농도로 혼합하여 cell에 동시에 처리하여 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양하였다.

이어서 세포배양 상등액 100㎕와 Griess 시약 100㎕를 혼합하여 96 well plate에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

생성된 NO의 양은 Griess 시약 [1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphylethylenediamine in 2.5% (v/v) phosphoric acid]을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO₂ ^-의 형태로 측정하고 sodium nitrite (NaNO₂)를 standard로 사용하여 확인할 수 있었으며, 그 결과는 표 4에 나타냈으며, 양성 대조군으로 대조군인 2-amino- 4-methylpyridine을 사용하였다.

Sample	NO production (%)
LPS (-)	-
LPS (+, 1㎍/㎖ )	100
2-amino-4-methylpyridine	36.8 ± 1.9
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 1(1000㎍/㎖)	29.9 ± 1.3
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 2(1000㎍/㎖)	20.7 ± 1.9
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 3(1000㎍/㎖)	20.9 ± 1.4
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 4(1000㎍/㎖)	20.9 ± 1.2
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 5(1000㎍/㎖)	17.1 ± 1.3
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 6(1000㎍/㎖)	15.7 ± 1.2
LPS (1㎍/㎖) + 실시예 7(1000㎍/㎖)	16.2 ± 1.3
LPS (1㎍/㎖) + 비교예 1(1000㎍/㎖)	55.7 ± 1.9
LPS (1㎍/㎖) + 비교예 2(1000㎍/㎖)	71.2 ± 1.9

상기 표 4의 결과를 보면, 본 발명의 실시예 추출물 모두 양성 대조군보다 우수한 효과를 보여 소금을 통한 상승효과 등 그 효과의 현저성을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 5, 6, 7에서 매우 우수한 효과를 보였다.

< 시힘예 4: 염증성 chemokines ( TARC , MDC ) 생성 억제 활성을 통한 항아토피 효능 평가>

Human keratinocyte cell line인 HaCaT cell을 한국 세포주 은행으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic 과 10% fetal bovine serum 이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 3일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

HaCaT cell을 3.0 * 10⁵ cells/㎖로 24 well plate에 18시간 전 배양하였으며, 준비된 시료에 IFN-γ 와 TNF-α를 각각 10ng/㎖ 농도로 혼합하여 cell에 동시에 처리하여 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양하였다.

이후 배양액을 1.5㎖ tube에 옮겨 원심 분리하여 얻어진 상층액의 chemonkines 합성량을 측정하였 그 결과를 표 5에 나타냈으며, 모든 시료는 정량 전까지 냉동보관 하엿으며, 염증성 chemokines는 Human enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems)를 이용하여 정량하였으며 standard에 대한 표준곡선의 r ² 값은 0.99 이상이었다.

Sample	TARC production (%)
-	0
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖)	100
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 1(1000㎍/㎖)	35.1 ± 1.3
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 2(1000㎍/㎖)	27.9 ± 2.1
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 3(1000㎍/㎖)	28.3 ± 1.6
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 4(1000㎍/㎖)	27.6 ± 1.5
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 5(1000㎍/㎖)	20.4 ± 1.6
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 6(1000㎍/㎖)	19.5 ± 1.7
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 실시예 7(1000㎍/㎖)	19.6 ± 1.3
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 비교예 1(1000㎍/㎖)	67.1 ± 1.2
TNF-α (10ng/㎖) + IFN-γ (10ng/㎖) + 비교예 2(1000㎍/㎖)	79.2 ± 1.2

아토피 피부염 환자에서 TARC의 발현이 증가하는 것으로 알려져 있는데, 상기 표 5의 결과를 보면, TNF-α, IFN-γ 단독 처리군을 통해 TARC의 발현이 유도됨을 확인하였고, 실시예의 시료로 처리하였을 때 TNF-α, IFN-γ 단독 처리군과 비교하여 TARC의 발현에 대하여 높은 억제율을 보이는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 5, 6, 7에서 매우 우수한 효과를 보였다.

< 시힘예 5: fibroblast 이동성 평가를 통한 피부 세포 재생 및 상처 치유 효과 평가>

Human dermal fibroblast cell을 한국 세포주 은행으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic 과 10% fetal bovine serum 이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 3, 4일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

fibroblast의 이동성 평가를 위해 CytoSelect^TM 24-Well Wound Healing Assay kit (CELL BIOLABS INC. USA)를 사용하였다. 멸균된 포셉을 이용하여 wound field inserts를 24 well plate의 각 well에 잘 고정시킨 후 fibroblast를 24well plate에 각각 8.0x10⁴cells/well, 3.0x10⁵cells/well로 접종하였다.

이어서 37℃, 5% CO₂incubator에서 18시간 전배양 한 후 시료를 농도별로 준비한다. 멸균된 포셉을 이용하여 wound field insert를 제거한 후 배양액을 제거하고 PBS로 2번 세척한 다음 준비된 시료인 실시예 1의 조성물을 각 well에 처리한 후 37℃, 5% CO₂incubator에서 2시간 동안 배양한 후 배양액을 제거한 다음 PBS로 세척 후 시료가 들어있지 않은 배양액으로 교체하였다.

그리고 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간, 48시간, 72시간 동안 시간별로 cell 상태를 확인하고, 배양을 멈춰야 하는 시간 때에 배양액을 제거한 후 cell의 잔여물이 남지 않도록 PBS로 2번 세척한 다음 각 well에 cell stain solution을 250㎕ 씩 넣은 후 실온에서 15분 동안 반응시키고 다시 PBS로 3번 세척한 다음 실온에서 건조한 plate를 가지고 현미경으로 cell의 이동성 상태를 확인하였다.

피부는 외부환경에 대한 일차 장벽으로 개체를 보호하는 주된 역할을 담당한다. fibroblast는 피부 내 진피 층 건조중량의 70%를 차지하는 collagen을 생성하며, 진피층을 이루는 주요 세포이다. 결손 된 피부의 진피층이 재생되기 위하여 fibroblast의 재생이 가장 중요한데, 실시예 추출물이fibroblast에 대한 상처치유에 영향을 미치는지 확인해 보기 위해 wound healing assay를 수행하였으며, 아무 처리 하지 않은 control군과 실시예 1 추출물을 각각 6.25㎍/㎖씩 처리한 세포군의 증식 정도를 관찰하여 그 결과를 표 6에 나타냈다.

	fibroblast
시료	N.C
시간	48시간	72시간

시료	실시예 1 조성물
시긴	48시간	72시간

상기 표 6을 보면 48시간과 72시간을 배양하여 확인한 결과 실시예 1 추출물로 처리한 세포에서 시간이 지날수록 negative control보다 세포의 이동과 증식의 속도가 빠른 것으로 관찰되어 피부 세포 재생 및 상처 치유에 현저한 효과를 확인한 수 있었다.

이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명에 의하면 소금, 흰점박이꽃무지 유충, 왜우산풀, 창포를 이용한 피트의 피부 활성 효과 강화를 통하여 피부 탄력 증진, 주름 개선, 피부 미백, 항염, 아토피, 피부 재생, 피부 상처 회복 효과를 동시에 발휘할 수 있는 다 기능성 화장품의 제조가 가능하다.

Claims

추출 용매를 65 내지 85℃의 물로 하여 추출한 피트 추출물; 및
상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5 내지 15중량부의 소금을 활성성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물.
제 1항에 있어서,
발효 흰점박이꽃무지 유충 펩타이드 분말, 발효 흰점박이꽃무지 유충 오일, 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물, 왜우산풀 에탄올 및 창포 에탄올 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 활성성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물.
제 2항에서 있어서,
상기 흰점박이꽃무지 유충 에탄올 추출물, 왜우산풀 에탄올 및 창포 에탄올 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 성분이 상기 피트 추출물 100중량부에 대하여 5중량부 포함되는 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 다 기능성이 피부 탄력 증진, 피부 미백, 피부 주름 방지, 항산화, 항염증, 항아토피, 피부 재생 및 피부 상처 치유인 것을 특징으로 하는 다 기능성 화장품 조성물.