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KR20220130191A - 화합물 및 이의 접합체 - Google Patents

화합물 및 이의 접합체 Download PDF

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KR20220130191A
KR20220130191A KR1020227028554A KR20227028554A KR20220130191A KR 20220130191 A KR20220130191 A KR 20220130191A KR 1020227028554 A KR1020227028554 A KR 1020227028554A KR 20227028554 A KR20227028554 A KR 20227028554A KR 20220130191 A KR20220130191 A KR 20220130191A
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KR
South Korea
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compound
conjugate
antibody
formula
val
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KR1020227028554A
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English (en)
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페이 유
니얼 딕킨슨
필립 윌슨 하워드
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메디뮨 리미티드
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Publication date
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Abstract

리간드 단위에 연결하기 위한 링커를 갖는, 하기 토포이소머라제 저해제 유도체(A*)를 포함하는 접합체로서, 상기 링커는 절단 가능한 방식으로 아미노 잔기에 부착된다. 상기 리간드 단위는 바람직하게는 항체이다. 또한 연결 단위가 부착된 A*, 이의 합성을 위한 중간체 및 방출되는 워헤드(warhead)가 제공된다.

Description

화합물 및 이의 접합체
본 발명은 특정 토포이소머라제 저해제를 포함하는 표적화된 접합체 및 이의 합성에 유용한 화합물 및 방출되는 워헤드(warhead)에 관한 것이다.
토포이소머라제 저해제
토포이소머라제 저해제는 정상 세포 주기 동안 DNA 가닥의 포스포디에스테르 백본의 파단 및 재결합에 촉매작용을 함으로써 DNA 구조의 변화를 제어하는 효소의 유형인 토포이소머라제(토포이소머라제 I 및 II)의 작용을 차단하는 화학적 화합물이다.
라세미 형태의 하기 화합물이 유럽 특허 제0296597호(실시예 63)에 개시되어 있다:
Figure pct00001
이것은 또한 문헌[Sugimori, M., et al., J Med Chem, 1998, 41, 2308-2318 (DOI: 10.1021/jm970765q)]에 (라세미 형태의 화합물 34로서) 개시되어 있으며, 이의 생물학적 활성이 다수의 관련 화합물의 생물학적 활성과 함께 논의되어 있다.
이리노테칸 및 엑사테칸 유도체 및 독소루비신과 같은 다양한 토포이소머라제 저해제가 항체-약물 접합체에 포함되어 있다. 예를 들어, Daiichi Sankyo는 임상 시험에서 DS-8201a를 보유하고 있으며,
Figure pct00002
여기서, 항체는 Her2이다(문헌[Takegawa, N., et al., Int J Cancer, 2017, 141, 1682-1689 (DOI: 10.1002/ijc.30870)]). 이러한 ADC는 하기 엑사테칸 유도체를 방출한다:
Figure pct00003
.
문헌[Burke, P.J., et al., Bioconjugate Chem., 2009, 20, 1242-1250]에는 하기 화합물의 접합체가 개시되어 있고,
Figure pct00004
이것은 아미노기를 통해 하기 구조와 연결되고,
Figure pct00005
이것은 PABC(파라-아미노벤질옥시카르보닐)기를 포함한다.
Immunomedics는 임상 시험에서 Sacituzumab Govitecan(IMMU-132)을 보유하고 있다(문헌[Cardillo, T.M., et al., Bioconjugate Chem, 2015, 26(5), 919-931, DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.5b00223]):
Figure pct00006
.
일반적 양태에서, 본 발명은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커를 갖는, 하기 토포이소머라제 저해제 유도체(A*, 약물 단위)를 포함하는 접합체로서, 링커는 절단 가능한 방식으로 아미노 잔기에 부착되는, 접합체를 제공한다:
Figure pct00007
리간드 단위는 바람직하게는 항체이다. 본 발명은 또한 연결 단위가 부착된 A* 및 이들의 합성을 위한 중간체 및 방출되는 워헤드를 제공한다.
본 발명의 제1 양태는 하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 이의 염 및 용매화물을 포함한다:
[화학식 I]
Figure pct00008
상기 식에서, RL은 하기로부터 선택되는, 리간드 단위에 연결하기 위한 링커이다:
(ia):
Figure pct00009
(상기 식에서,
Q는
Figure pct00010
이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기, 트리펩티드 잔기 또는 테트라펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
X는
Figure pct00011
이고,
상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c1 = 0 또는 1이고, c2 = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0(즉, b1과 b2 중 하나만 0이 아닐 수 있음)이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0(즉, c1과 c2 중 하나만 0이 아닐 수 있음)이고;
GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
Figure pct00012
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
본 발명의 제2 양태는 하기에 기재된 방법 단계 중 적어도 하나를 포함하는, 본 발명의 제1 양태의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
제3 양태에서, 본 발명은 화학식 IV의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 제공한다:
[화학식 IV]
Figure pct00013
상기 식에서, L은 리간드 단위(즉, 표적화제)이고, DL은 하기 화학식 III의 약물 링커 단위이고,
[화학식 III]
Figure pct00014
RLL은 하기로부터 선택되는, 리간드 단위에 연결된 링커이고:
(ia'):
Figure pct00015
(상기 식에서, Q 및 X는 제1 양태에 정의된 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임);
(ib'):
Figure pct00016
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 제1 양태에 정의된 바와 같음);
p는 1 내지 20의 정수이다.
따라서, 접합체는 링커 단위(즉, 하나 이상의 약물-링커 단위가 부착된 리간드 단위)에 의해 적어도 하나의 약물 단위(A*)에 공유 연결된 리간드 단위를 포함한다. 하기에 보다 완전하게 설명되는 리간드 단위는 표적 모이어티에 결합하는 표적화제이다. 리간드 단위는 예를 들어 세포 성분(세포 결합제) 또는 다른 기타 관심 표적 분자에 특이적으로 결합할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 예를 들어 다양한 암 및 자가면역 질환의 치료 방법을 제공한다. 이러한 방법은 리간드 단위가 표적 분자에 특이적으로 결합하는 표적화제인 접합체의 사용을 포함한다. 리간드 단위는 예를 들어 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드, 예컨대, 항체, 항체의 항원-결합 단편, 또는 Fc 융합 단백질과 같은 기타 다른 결합제일 수 있다.
약물 로딩은 리간드 단위(예를 들어, 항체)당 약물 단위 수인 p로 표시된다. 약물 로딩의 범위는 리간드 단위(예를 들어, Ab 또는 mAb)당 1 내지 20의 약물 단위(D)일 수 있다. 조성물의 경우, p는 조성물에서 접합체의 평균 약물 로딩을 나타내고, p의 범위는 1 내지 20이다.
본 발명의 제4 양태는 증식성 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본 발명의 제3 양태의 접합체의 용도를 제공한다. 제4 양태는 또한 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 본 발명의 제3 양태의 접합체를 제공한다.
당업자는 후보 화합물이 임의의 특정 세포 유형에 대한 증식성 병태를 치료하는지 여부를 쉽게 판단할 수 있다. 예를 들어, 특정 화합물이 제공하는 활성을 평가하는 데 편리하게 사용할 수 있는 분석이 하기 실시예에 기술되어 있다.
문헌[Nakada, et al., Bioorg Med Chem Lett, 26 (2016), 1542-1545 (DOI: 10.1016/j.bmcl.2016.02.020)]에는 하기 일련의 ADC에 대해 논의되어 있으며,
Figure pct00017
ADC (1) 및 (2)의 감소된 세포독성이 종양 세포의 분해 효소에 의해 작용하는 부위에서 방출되는 약물 모이어티의 입체 장애 때문일 수 있다고 결론지었다. 이 문헌은 큰 부피로 방출되는 약물 모이어티로부터 펩티드기를 이격하는 것의 중요성을 교시한다. 대조적으로, 본 발명에서, 펩티드기는 큰 부피로 방출되는 약물 모이어티에 직접 연결된다.
본 발명의 제5 양태는 화합물 A이다:
Figure pct00018
일부 실시형태에서, 화합물 A는 단일 거울상이성질체 또는 거울상이성질체 풍부 형태로 제공된다.
화합물 A 및 A*를 포함하는 접합체는 다른 공지된 약물 단위 및 접합체와 비교하여 더 낮은 독성 및 더 높은 효력을 나타낼 수 있다. 이와 같이, 화합물 A 및 A*를 포함하는 접합체는 개선된 치료 윈도우를 나타낼 수 있다. 따라서 화합물 A는 특히 암의 치료에 사용하기 위한 약물 단위로서 특히 적합할 수 있다.
본 발명의 제6 양태는 하기 화학식 VI을 갖는 화합물이다:
[화학식 VI]
Figure pct00019
상기 식에서, Q는 제1 양태에 정의된 바와 같다.
추가의 일반적인 양태에서, 본 발명은 하기를 제공한다:
(i) 증식성 질환, 예컨대, 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의, 절단 가능한 방식으로 리간드 단위에 부착된 A*를 포함하는 접합체의 용도;
(ii) 증식성 질환, 예컨대, 암의 치료에 사용하기 위한, 절단 가능한 방식으로 리간드 단위에 부착된 A*를 포함하는 접합체;
(iii) 절단 가능한 방식으로 리간드 단위에 부착된 A*를 포함하는 접합체의 투여를 포함하는, 암을 치료하는 것과 같은 의학적 치료 방법;
(iv) 증식성 질환, 예컨대, 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의, A를 방출하는 리간드 단위 접합체의 용도;
(v) 증식성 질환, 예컨대, 암의 치료에 사용하기 위한, A를 방출하는 리간드 단위 접합체;
(vi) A를 방출하는 리간드 단위 접합체의 투여를 포함하는, 암을 치료하는 것과 같은 의학적 치료 방법; 및
(vii) A를 방출하는 리간드 단위 접합체.
정의
C5-6 아릴렌: 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C5-6 아릴렌"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거하여 수득되는 2가 모이어티에 관한 것이다.
이러한 맥락에서, 접두사(예를 들어, C5-6)는 탄소 원자이든 헤테로원자이든, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자 수의 범위를 나타낸다.
고리 원자는 "카르보아릴렌기"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있고, 이 경우 기는 페닐렌(C6)이다.
대안적으로, 고리 원자는 "헤테로아릴렌기"에서와 같이, 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 헤테로아릴렌기의 예는 하기로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
N1: 피롤(아졸)(C5), 피리딘(아진)(C6);
O1: 퓨란(옥솔) (C5);
S1: 티오펜(티올)(C5);
N1O1: 옥사졸(C5), 이속사졸(C5), 이속사진(C6);
N2O1: 옥사디아졸(퓨라잔)(C5);
N3O1: 옥사트리아졸(C5);
N1S1: 티아졸(C5), 이소티아졸(C5);
N2: 이미다졸(1,3-디아졸)(C5), 피라졸(1,2-디아졸)(C5), 피리다진(1,2-디아진)(C6), 피리미딘(1,3-디아진)(C6)(예를 들어, 시토신, 티민, 우라실), 피라진 (1,4-디아진)(C6); 및
N3: 트리아졸(C5), 트리아진(C6).
C1-4 알킬: 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C1-4 알킬"은, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화(예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C1-n 알킬"은, 1 내지 n개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화(예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)일 수 있다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에서 논의되는 하위 부류인 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 등을 포함한다.
포화 알킬기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), 프로필(C3) 및 부틸(C4)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
포화 선형 알킬기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), n-프로필(C3) 및 n-부틸(C4)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
포화 분지형 알킬기는 이소-프로필(C3), 이소-부틸(C4), sec-부틸(C4) 및 tert-부틸(C4)을 포함한다.
C2-4 알케닐: 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C2-4 알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알케닐기의 예는 에테닐(비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CH-CH3), 2-프로페닐(알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐(1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2) 및 부테닐(C4)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
C2-4 알키닐: 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C2-4 알키닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알키닐기의 예는 에티닐(-C≡CH) 및 2-프로피닐(프로파르길, -CH2-C≡CH)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
C3-4 시클로알킬: 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "C3-4 시클로알킬"은 시클릴기이기도 한 알킬기에 관한 것으로; 즉, 시클릭 탄화수소(카르보시클릭) 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티이고, 모이어티는 3 내지 7개의 고리 원자를 포함하는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다.
시클로알킬기의 예는 하기로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
포화 단환식 탄화수소 화합물:
시클로프로판(C3) 및 시클로부탄(C4); 및
불포화 단환식 탄화수소 화합물:
시클로프로펜(C3) 및 시클로부텐(C4).
연결 표시: 화학식
Figure pct00020
에서, 위첨자 표시 C(=O) 및 NH는 원자가 결합되는 기를 나타낸다. 예를 들어, NH기는 (예시된 모이어티의 일부가 아닌) 카르보닐에 결합되는 것으로 표시되고, 카르보닐은 (예시된 모이어티의 일부가 아닌) NH기에 결합되는 것으로 표시된다.
염
활성 화합물의 상응하는 염, 예를 들어 약제학적으로 허용 가능한 염을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염의 예는 문헌[Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)]에 논의되어 있다.
예를 들어, 화합물이 음이온성이거나, 음이온성일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예를 들어, -COOH는 -COO-일 수 있음), 적합한 양이온을 사용하여 염이 형성될 수 있다. 적합한 무기 양이온의 예는 알칼리 금속 이온, 예컨대, Na+ 및 K+, 알칼리토류 양이온, 예컨대, Ca2+ 및 Mg2+ 및 기타 양이온, 예컨대, Al+3을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 적합한 유기 양이온의 예는 암모늄 이온(즉, NH4+) 및 치환된 암모늄 이온(예를 들어, NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일부 적합한 치환된 암모늄 이온의 예는 에틸아민, 디에틸아민, 디시클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민 및 트로메타민 뿐만 아니라 아미노산, 예컨대, 리신 및 아르기닌으로부터 유래된 것이다. 일반적인 4차 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온성이거나, 양이온성일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예를 들어, -NH2는 -NH3 +일 수 있음), 적합한 음이온을 사용하여 염이 형성될 수 있다. 적합한 무기 음이온의 예는 하기 무기산으로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 염화수소산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아인산.
적합한 유기 음이온의 예는 하기 유기산으로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 2-아세틸옥시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캄포르설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루셉톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 히드록시말레산, 히드록시나프탈렌 카르복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 뮤신산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 석신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산 및 발레르산. 적합한 고분자 유기 음이온의 예는 탄닌산, 카르복시메틸 셀룰로스와 같은 고분자 산으로부터 유래된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
용매화물
활성 화합물의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 용질(예를 들어, 활성 화합물, 활성 화합물의 염)과 용매의 복합체를 지칭하는 통상적인 의미로 본 명세서에서 사용된다. 용매가 물인 경우, 용매화물은 편의상 수화물, 예를 들어 일수화물, 이수화물, 삼수화물 등으로 지칭될 수 있다.
이성질체
본 발명의 특정 화합물은 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t- 및 r-형태; 엔도- 및 엑소-형태; R-, S- 및 메소 형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 에놀- 및 에놀레이트-형태; syn- 및 anti-형태; 향사(synclinal)- 및 배사(anticlinal)-형태; α- 및 β-형태; 축상 및 수평방향 형태; 보트-, 의자-, 꼬임-, 봉투- 및 반의자-형태; 및 이들의 조합을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 특정한 기하, 광학, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 에피머, 아트로프, 입체이성질체, 호변이성질체, 배좌, 또는 아노머 형태로 존재할 수 있고, 이하에서는 통칭하여 "이성질체"(또는 "이성질체 형태")로 지칭한다.
용어 "키랄"은 거울상 파트너의 중첩할 수 없는 성질을 갖는 분자를 지칭하고, 반면, 용어 "아키랄"은 거울상 파트너에 중첩될 수 있는 분자를 지칭한다.
용어 "입체이성질체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 공간 내의 원자 또는 기의 배열에 있어서 상이한 화합물을 지칭한다.
"부분입체이성질체"는 2개 이상의 키랄 중심을 갖고 분자가 서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성질체는 융점, 비등점, 분광 특성 및 반응성과 같은 물리적 성질이 다르다. 부분입체이성질체의 혼합물은 고해상도 분석 절차, 예컨대, 전기영동 및 크로마토그래피로 분리될 수 있다.
"거울상이성질체"는 서로 중첩되지 않는 거울상인, 화합물의 2개의 입체이성질체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 입체화학적 정의 및 관례는 일반적으로 문헌[S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York]; 및 문헌[Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]에 따른 것이다. 본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 포함할 수 있으므로, 서로 다른 입체이성질체 형태로 존재한다. 본 발명의 화합물의 모든 입체이성질체 형태(부분입체이성질체, 거울상이성질체 및 회전장애이성질체를 포함하지만 이들로 제한되지 않음)뿐만 아니라, 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물도 본 발명의 일부를 형성하는 것으로 의도된다. 많은 유기 화합물은 광학적으로 활성인 형태로 존재하는데, 즉 이들은 평면-편광의 평면을 회전시킬 수 있는 능력을 갖는다. 광학적으로 활성인 화합물을 설명함에 있어서, 이의 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 배열을 나타내기 위해 접두사 D 및 L, 또는 R 및 S가 사용된다. 화합물에 의한 평면-편광 회전의 부호를 나타내기 위해 접두사 d 및 I 또는 (+) 및 (-)가 사용되며, (-) 또는 I는 화합물이 좌선성임을 의미한다. (+) 또는 d가 접두사로 붙은 화합물은 우선성이다. 제시된 화학 구조에 있어서, 이러한 입체이성질체는 서로 거울상이라는 점을 제외하면 동일하다. 특정 입체이성질체는 또한 거울상이성질체로서 지칭될 수 있고, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상이성질체 혼합물로 불린다. 거울상이성질체의 50:50 혼합물은 화학 반응 또는 과정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우에 발생할 수 있는 라세미 혼합물 또는 라세미체로 종종 지칭된다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학적 활성이 없는, 2개의 거울상이성질체 종의 등몰 혼합물을 지칭한다.
"거울상이성질체 풍부 형태"는 거울상이성질체 비율이 50:50 초과 100:0 미만인 키랄 물질의 샘플을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 호변이성질체 형태에 대해 이하에 논의되는 것을 제외하고는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "이성질체"로부터 구체적으로 구조(또는 구성) 이성질체(즉, 단지 공간내 원자의 위치가 아닌 원자들 간의 연결이 상이한 이성질체)는 제외된다. 예를 들어, 메톡시기 -OCH3에 대한 언급은 이의 구조 이성질체인 히드록시메틸기 -CH2OH에 대한 언급으로 해석되어서는 안 된다. 마찬가지로, 오르토-클로로페닐에 대한 언급은 이의 구조 이성질체인 메타-클로로페닐에 대한 언급으로 해석되어서는 안 된다. 그러나, 구조 부류를 언급할 경우, 해당 부류에 속하는 구조 이성질체 형태를 적절히 포함할 수 있다(예를 들어, C1-7 알킬은 n-프로필 및 이소-프로필을 포함하며; 부틸은 n-, 이소-, sec- 및 tert-부틸을 포함하고; 메톡시페닐은 오르토-, 메타- 및 파라-메톡시페닐을 포함한다).
상기 제외는 예를 들어, 다음 호변이성질체 쌍에서와 같은 호변이성질체 형태, 예를 들어 케토-, 에놀- 및 에놀레이트-형태에 적용되지 않는다: 케토/에놀(아래에 설명됨), 이민/엔아민, 아미드/이미노 알코올, 아미딘/엔디아민, 니트로소/옥심, 티오케톤/엔티올, N-니트로소/히드록시아조 및 니트로/아시-니트로.
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용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환될 수 있는 상이한 에너지를 갖는 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변이성질체(양성자 이전성 호변이성질체로도 알려져 있음)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대, 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 원자가 호변이성질체는 결합 전자 중 일부 전자의 재편성에 의한 상호전환을 포함한다.
용어 "이성질체"에 하나 이상의 동위원소 치환을 갖는 화합물이 구체적으로 포함된다는 점에 주의한다. 예를 들어, H는 1H, 2H (D) 및 3H (T)를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있고; C는 12C, 13C 및 14C를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있으며; O는 16O 및 18O를 포함하는 임의의 동위원소 형태로 존재할 수 있는 등이다.
본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린, 염소 및 아이오딘의 동위원소, 예컨대, 2H(중수소, D), 3H(삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl 및 125I를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 발명의 다양한 동위원소 표지 화합물은, 예를 들어, 3H, 13C 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 화합물이다. 이러한 동위원소 표지 화합물은 대사 연구, 반응 동역학 연구, 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 포함하여 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영(SPECT)과 같은 검출 또는 이미징 기법, 또는 환자의 방사선 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 중수소 표지되거나 치환된 치료 화합물은 분포, 대사 및 배설(ADME)과 관련하여, 개선된 DMPK(약물 대사 및 약동학) 특성을 가질 수 있다. 중수소와 같은 보다 무거운 동위원소에 의한 치환은 보다 큰 대사 안정성으로 얻어지는 특정 치료적 이점(예를 들어, 생체내 반감기 증가 또는 필요 투여량 감소)을 제공할 수 있다. 18F로 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 유용할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지 화합물 및 이의 전구약물은 일반적으로 동위원소 비표지 시약을 용이하게 입수할 수 있는 동위원소 표지 시약으로 대체함으로써 하기 기술된 반응식 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행하여 제조될 수 있다. 또한, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소(즉, 2H 또는 D)에 의한 치환은 보다 더 큰 대사 안정성으로 얻어지는 특정 치료적 이점, 예를 들어 생체내 반감기의 증가 또는 투약 요건의 감소 또는 치료 지수의 개선을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 치환기로 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물에서 특정 동위원소로 구체적으로 지정되지 않은 임의의 원자는 그 원자의 임의의 안정한 동위원소를 나타내는 것으로 의도된다.
달리 명시되지 않는 한, 특정 화합물에 대한 언급은 (전체적으로 또는 부분적으로) 라세미 및 이의 다른 혼합물을 포함하는 상기 모든 이성질체 형태를 포함한다. 상기 이성질체 형태의 제조방법(예를 들어, 비대칭 합성) 및 분리방법(예를 들어, 분별 결정화 및 크로마토그래피 방식)은 당해 분야에 공지되어 있거나, 본 명세서에 교시된 방법 또는 공지된 방법을 공지된 방식으로 적용함으로써 용이하게 수득된다.
리간드 단위
리간드 단위는 임의의 종류의 것일 수 있고, 표적 분자에 특이적으로 결합하는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드 및 비펩티드 작용제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 리간드 단위는 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드일 수 있다. 일부 실시형태에서, 리간드 단위는 환형 폴리펩티드일 수 있다. 이들 리간드 단위는 적어도 하나의 표적 분자-결합 부위를 포함하는 항체 또는 항체 단편, 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 또는 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 기타 세포 결합 분자 또는 물질을 포함할 수 있다.
용어 "특이적으로 결합하다" 및 "특이적 결합"은, 소정 분자(예를 들어, 항원)에 대한 항체 또는 다른 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드의 결합을 지칭한다. 전형적으로, 항체 또는 다른 분자는 적어도 약 1×107 M-1의 친화도로 결합되고, 소정 분자 또는 밀접하게 관련된 분자 이외의 비특이적 분자(예를 들어, BSA, 카세인)에 대한 결합 친화도보다 2배 이상 더 높은 친화도로 소정 분자에 결합한다.
리간드 단위의 예는 본 명세서에 포함된 WO 2007/085930호에서 용도에 대해 기재된 작용제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 리간드 단위는 세포 상의 세포외 표적에 결합하는 세포 결합제이다. 이러한 세포 결합제는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 또는 비펩티드 작용제일 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포 결합제는 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드일 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포 결합제는 환형 폴리펩티드일 수 있다. 또한 세포 결합제는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편일 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 발명은 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다.
세포 결합제
세포 결합제는 임의의 종류일 수 있고, 펩티드 및 비펩티드를 포함한다. 이들은 적어도 하나의 결합 부위를 포함하는 항체 또는 항체 단편, 림포카인, 호르몬, 호르몬 모방체, 비타민, 성장 인자, 영양소-운반 분자, 또는 임의의 기타 세포 결합 분자 또는 물질을 포함할 수 있다.
펩티드
일 실시형태에서, 상기 세포 결합제는 4 내지 30개, 바람직하게는 6 내지 20개의 연속 아미노산 잔기를 포함하는 선형 또는 환형 펩티드이다.
일 실시형태에서, 세포 결합제는 인테그린 ανβ6에 결합하는 펩티드를 포함한다. 펩티드는 XYS에 비해 ανβ6에 대해 선택적일 수 있다.
일 실시형태에서, 세포 결합제는 A20FMDV-Cys 폴리펩티드를 포함한다. A20FMDV-Cys는 서열 NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC를 갖는다. 대안적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산 잔기로 치환된 A20FMDV-Cys 서열의 변이체가 사용될 수 있다. 또한, 폴리펩티드는 서열
Figure pct00022
를 가질 수 있다.
항체
본 명세서에서 용어 "항체"는 최광의 개념으로 사용되고, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 다가 항체 및 항체 단편을 포함한다(문헌[Miller et al (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861]). 항체는 뮤린, 인간, 인간화, 키메라, 또는 기타 다른 종으로부터 유래된 것일 수 있다. 항체는 특이적 항원에 대한 인식 및 결합이 가능한 면역계에 의해 생성된 단백질이다(문헌[Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York]). 표적 항원은 일반적으로, 다중 항체 상의 CDR에 의해 인식되는 다수의 결합 부위(에피토프라고도 칭함)를 갖는다. 상이한 에피토프와 특이적으로 결합하는 각 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 하나보다 많은 대응 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장의 면역글로불린 분자 또는 전장의 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 관심 표적 항원 또는 이의 일부를 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 포함하고, 이러한 표적은 암세포 또는 자가면역 질환과 연관된 자가면역 항체를 생성하는 세포들을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 하위 부류일 수 있다. 면역글로불린은 인간, 뮤린, 또는 토끼 기원을 비롯한 임의의 종으로부터 유래될 수 있다.
"항체 단편"은 전장 항체의 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 scFv 단편; 디아바디; 선형 항체; Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR(상보성 결정 영역) 및 암 세포 항원, 바이러스성 항원 또는 미생물성 항원과 면역특이적으로 결합하는 상기의 임의의 것의 에피토프-결합성 단편, 단쇄 항체분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다(즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연발생적 돌연변이를 제외하고는 집단을 포함하는 개별 항체가 동일함). 단클론성 항체는 매우 특이적으로, 단일 항원 부위에 대해 유도된다. 또한, 상이한 결정기(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 유도된다. 이의 특이성 외에도, 단클론성 항체는 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생성을 필요로 하는 것으로 해석되지는 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론성 항체는 문헌[Kohler et al (1975) Nature 256:495]에서 최초로 기술된 하이브리도마 방법으로 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법(미국 특허 제4816567호 참조)으로 제조될 수 있다. 단클론성 항체는 또한 문헌[Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또는 완전 인간 면역글로불린 시스템을 보유하는 트랜스제닉 마우스(문헌[Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459])로부터 단리될 수 있다.
본 명세서에서 단클론성 항체는 구체적으로 키메라 항체, 인간화 항체 및 인간 항체를 포함한다.
세포 결합제의 예는 본 명세서에 포함된 WO 2007/085930호에서 용도에 대해 기재된 작용제를 포함한다.
본 발명의 실시형태에서 사용하기 위한 종양-연관 항원 및 동족 항체는 하기에 열거되어 있고, 본 명세서에 포함된 WO 2017/186894호의 14 내지 86페이지에 보다 상세하게 기재되어 있다.
(1) BMPR1B(골 형태형성 단백질 수용체-IB형)
(2) E16(LAT1, SLC7A5)
(3) STEAP1(전립선의 6개의 막관통 상피 항원)
(4) 0772P(CA125, MUC16)
(5) MPF(MPF, MSLN, SMR, 거핵모구 강화 인자, 메소텔린)
(6) Napi3b(NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리(solute carrier family) 34(인산나트륨), 구성원 2, 타입 II 소듐-의존성 포스페이트 트랜스포터 3b)
(7) Sema5b(FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린(Semaphorin 5b) Hlog, 세마(sema) 도메인, 7개의 트롬보스폰딘 반복부(seven thrombospondin repeat)(타입 1 및 타입 1-유사), 막관통 도메인(TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B)
(8) PSCA hlg(2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자)
(9) ETBR(엔도텔린 B형 수용체)
(10) MSG783(RNF124, 가상 단백질(hypothetical protein) FLJ20315)
(11) STEAP2(HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 연관 유전자 1, 전립선암 연관 단백질 1, 전립선 2의 6개 막관통 상피 항원, 6개 막관통 전립선 단백질
(12) TrpM4(BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 5 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4)
(13) CRIPTO(CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래 성장 인자)
(14) CD21(CR2(보체 수용체 2) 또는 C3DR(C3d/엡스타인 바(Epstein Barr) 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792)
(15) CD79b(CD79B, CD79β, IGb(면역글로불린 연관 베타), B29)
(16) FcRH2(IFGP4, IRTA4, SPAP1A(SH2 도메인 함유 포스파타제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C)
(17) HER2(ErbB2)
(18) NCA(CEACAM6)
(19) MDP (DPEP1)
(20) IL20R-알파(IL20Ra, ZCYTOR7)
(21) 브레비칸(BCAN, BEHAB)
(22) EphB2R(DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
(23) ASLG659(B7h)
(24) PSCA(전립선 줄기세포 항원 전구체)
(25) GEDA
(26) BAFF-R(B 세포-활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3)
(27) CD22(B-세포 수용체 CD22-B 아이소폼, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814)
(27a) CD22(CD22 분자)
(28) CD79a(CD79A, CD79알파), (면역글로불린-관련 알파, Ig 베타(CD79B)와 공유 상호작용하고, Ig M 분자와 표면에서 복합체를 형성하고, B-세포분화에 관여하는 신호를 전달하는 B 세포-특이적 단백질), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] 유전자 염색체: 19q13.2
(29) CXCR5(버킷 림프종 수용체(Burkitt's lymphoma receptor) 1, CXCL13 케모카인에 의해서 활성화되고, 림프구 이동 및 체액 방어에서 기능하고, HIV-2 감염 및 아마도 AIDS, 림프종, 골수종 및 백혈병의 발달에서 역할을 하는 G 단백질-커플링 수용체); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3,
(30) HLA-DOB(펩티드에 결합하여 CD4+ T 림프구에 제공하는 MHC 클래스 II 분자(Ia 항원)의 베타 소단위); 273 aa, pI: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3
(31) P2X5(세포외 ATP에 의해서 게이팅된 이온 채널인 푸린성 수용체(Purinergic receptor) P2 X 리간드-게이팅 이온 채널 5는 시냅스 전달 및 신경발생에 관련될 수 있고, 결핍은 특발성 배뇨근 불안정성의 병태생리학에 기여할 수 있음); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3).
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8.66, MW: 40225, TM: 15 [P] 유전자 염색체: 9p13.3).
(33) LY64(림프구 항원 64(RP105), B-세포 활성 및 세포사멸을 조절하고, 기능의 손실은 전신 홍반성 루푸스 환자에서 질환 활성의 증가와 관련된, 류신 풍부 반복체(LRR) 패밀리의 I형 막 단백질); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12
(34) FcRH1(Fc 수용체-유사 단백질 1, B-림프구 분화에 작용할 수 있는, C2형 Ig-유사 및 ITAM 도메인을 포함하는 면역글로불린 Fc 도메인의 추정 수용체); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22
(35) IRTA2(면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전위 관련 2, B 세포 발달 및 림프종 형성에 작용 가능성이 있는 추정 면역수용체; 전위에 의한 유전자의 탈조절이 일부 B 세포 악성종양에서 발생함); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21
(36) TENB2(TMEFF2, 토모레굴린(tomoregulin), TPEF, HPP1, TR, 추정 막관통 프로테오글리칸, EGF/성장 인자의 헤레굴린(heregulin) 패밀리 및 폴리스타틴(follistatin)과 관련됨); 374 aa)
(37) PSMA - FOLH1(엽산염 가수분해효소(전립선 특이적 막 항원) 1)
(38) SST(소마토스타틴 수용체; 5가지 하위유형이 있음에 유의)
(38.1) SSTR2(소마토스타틴 수용체 2)
(38.2) SSTR5(소마토스타틴 수용체 5)
(38.3) SSTR1
(38.4) SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - 두 소단위(39+40)
(39) ITGAV(인테그린, 알파 V)
(40) ITGB6(인테그린, 베타 6)
(41) CEACAM5(암배아성 항원 관련 세포 부착 분자 5)
(42) MET(met 원종양 유전자; 간세포 성장 인자 수용체)
(43) MUC1(뮤신 1, 세포 표면 관련)
(44) CA9(탄산 탈수효소 IX)
(45) EGFRvIII(표피 성장 인자 수용체(EGFR), 전사 변이체 3)
(46) CD33(CD33 분자)
(47) CD19(CD19 분자)
(48) IL2RA(인터류킨 2 수용체, 알파); NCBI 참조 서열: NM_000417.2);
(49) AXL(AXL 수용체 티로신 키나제)
(50) CD30 - TNFRSF8(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리, 구성원 8)
(51) BCMA(B-세포 성숙 항원) - TNFRSF17(종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리, 구성원 17)
(52) CT Ags - CTA(암 고환 항원)
(53) CD174(루이스 Y) - FUT3(푸코실트랜스퍼라제 3(갈락토시드 3(4)-L-푸코실트랜스퍼라제, 루이스 혈액형)
(54) CLEC14A(C형 렉틴 도메인 패밀리 14, 구성원 A; Genbank 수탁 번호: NM175060)
(55) GRP78 - HSPA5(열 충격 70 kDa 단백질 5(글루코스 조절 단백질, 78 kDa)
(56) CD70(CD70 분자) L08096
(57) 줄기세포 특이적 항원. 예를 들어:
Figure pct00023
5T4(하기 항목 (63) 참조)
Figure pct00024
CD25(상기 항목 (48) 참조)
Figure pct00025
CD32
Figure pct00026
LGR5/GPR49
Figure pct00027
프로미닌/CD133
(58) ASG-5
(59) ENPP3(엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 3)
(60) PRR4(프롤린 풍부 4(눈물샘))
(61) GCC - GUCY2C(구아닐레이트 시클라제 2C(열 안정성 장독소 수용체)
(62) Liv-1 - SLC39A6(용질 담체 패밀리 39(아연 수송체), 구성원 6)
(63) 5T4, 영양막 당단백질, TPBG - TPBG(영양막 당단백질)
(64) CD56 - NCMA1(신경 세포 부착 분자 1)
(65) CanAg(종양 관련 항원 CA242)
(66) FOLR1(엽산염 수용체 1)
(67) GPNMB(당단백질(막관통) nmb)
(68) TIM-1 - HAVCR1(A형 간염 바이러스 세포 수용체 1)
(69) RG-1/전립선 종양 표적 민딘(Mindin) - 민딘/RG-1
(70) B7-H4 - VTCN1(V-세트 도메인 함유 T 세포 활성화 저해제 1)
(71) PTK7(PTK7 단백질 티로신 키나제 7)
(72) CD37(CD37 분자)
(73) CD138 - SDC1(신데칸 1)
(74) CD74(CD74 분자, 주요 조직적합성 복합체, 클래스 II 불변 쇄)
(75) 클라우딘 - CL(클라우딘)
(76) EGFR(표피 성장 인자 수용체)
(77) Her3(ErbB3) - ERBB3(v-erb-b2 적혈구 백혈병 바이러스 종양 유전자 상동체 3(조류))
(78) RON - MST1R(대식세포 자극 1 수용체(c-met 관련 티로신 키나제))
(79) EPHA2(EPH 수용체 A2)
(80) CD20 - MS4A1(막관통 4-도메인, 서브패밀리 A, 구성원 1)
(81) 테나신 C - TNC(테나신 C)
(82) FAP(섬유아세포 활성화 단백질, 알파)
(83) DKK-1(딕코프 1 상동체(제노푸스 래비스))
(84) CD52(CD52 분자)
(85) CS1 - SLAMF7(SLAM 패밀리 구성원 7)
(86) 엔도글린 - ENG(엔도글린)
(87) 아넥신 A1 - ANXA1(아넥신 A1)
(88) V-CAM(CD106) - VCAM1(혈관 세포 부착 분자 1)
추가 종양 관련 항원 및 관심 동족 항체는 다음과 같다:
(89) ASCT2(ASC 수송체 2, SLC1A5로도 알려짐).
ASCT2 항체는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2018/089393에 기재되어 있다.
세포 결합제는 예를 들어 접합체로서 또는 접합체의 일부로서 혼입되기 전에 작용제의 검출 또는 정제를 돕기 위해 표지될 수 있다. 표지는 비오틴 표지일 수 있다. 다른 실시형태에서, 세포 결합제는 방사성 동위원소로 표지될 수 있다.
치료 방법
본 발명의 접합체는 요법의 방법에서 사용될 수 있다. 또한, 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 화학식 IV의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다. 용어 "치료적 유효량"은, 환자에게 유익을 나타내기에 충분한 양이다. 이러한 유익은 하나 이상의 증상에 대한 적어도 완화일 수 있다. 실제 투여량, 투여 속도 및 시간-과정은 치료 대상의 성질 및 중증도에 따라 다를 것이다. 치료의 처방, 예를 들어, 투여량에 대한 결정은 일반 의사 및 다른 의사의 책임 하에 있다.
접합체는 치료될 병태에 따라 단독으로 또는 다른 치료와 병행하여 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 치료 및 요법의 예는 화학요법(예를 들어, 약물을 포함한 활성제의 투여); 수술; 및 방사선 요법을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 발명에 따른, 그리고 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성 성분, 즉 화학식 IV의 접합체 이외에, 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 담체, 완충제, 안정화제, 또는 당업자에게 알려진 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 무독성이어야 하고, 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 경구 또는 주사, 예를 들어 피부, 피하 또는 정맥내 주사일 수 있는 투여의 경로에 따라 달라질 것이다.
경구 투여용 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액상 약제학적 조성물은 일반적으로 액상 담체, 예컨대, 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 광유, 또는 합성 오일을 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로스, 또는 다른 당류 용액, 또는 글리콜, 예컨대, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함될 수 있다. 캡슐은 젤라틴과 같은 고체 담체를 포함할 수 있다.
정맥내, 피부, 또는 피하 주사, 또는 환부 주사의 경우에, 활성 성분은 무발열원이고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용 가능한 수용액의 형태일 것이다. 당업자는 예를 들어, 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 락테이트 첨가 링거 주사액와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 적절하게 제조할 수 있다. 보존제, 안정화제, 완충제, 산화방지제 및/또는 다른 첨가제는 필요에 따라 포함될 수 있다.
본 접합체는 증식성 질환 및 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "증식성 질환"은 시험관내 또는 생체내 어느 곳에서든 신생물 또는 과형성 성장과 같은 바람직하지 않은 과도하거나 비정상적인 세포의 원치 않는 또는 제어되지 않는 세포 증식에 관한 것이다.
증식성 병태의 예는 신생물 및 종양(예를 들어, 조직구종, 신경아교종, 성상세포종, 골종), 암(예를 들어, 폐암, 소세포 폐암, 위장암, 장암, 결장암, 유방 암종, 난소 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종, 흑색종), 백혈병, 건선, 골 질환, (예를 들어, 결합 조직의) 섬유증식성 장애 및 아테롬성 동맥 경화증을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 양성, 전악성 및 악성 세포 증식을 포함한다. 관심 대상의 다른 암은 혈액암; 악성종양 예컨대, 백혈병 및 림프종, 예컨대, 비호지킨 림프종 및 하위유형 예컨대, DLBCL, 변연부, 외투세포 및 여포성, 호지킨 림프종, AML 및 B 또는 T 세포 기원의 다른 암을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 폐, 위장(예를 들어, 장, 결장을 포함), 유방(유방 관련), 난소, 전립선, 간(간 관련), 신장(신장 관련), 방광, 췌장, 뇌 및 피부를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 임의의 유형의 세포가 치료될 수 있다.
자가면역 질환의 예는 류마티스 관절염, 자가면역 탈수초성 질환(예를 들어, 다발성 경화증, 알레르기성 뇌척수염), 건선성 관절염, 내분비 안병증, 포도막망막염, 전신 홍반성 루프스, 중증 근무력증, 그레이브스병, 사구체신염, 자가면역 간장 장애, 염증성 장 질환(예를 들어, 크론병), 아나필락시스, 알레르기성 반응, 쇼그렌 증후군, 제 I형 당뇨병, 원발성 담즙성 간경변증, 베게너 육아종증, 섬유근육통, 다발성근염, 피부근염, 다발성 내분비 부전, 슈미트 증후군(Schmidt's syndrome), 자가면역 포도막염, 애디슨병, 부신염, 갑상선염, 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 자가 면역 갑상선 질환, 악성 빈혈, 위 위축증, 만성 간염, 루푸스 간염, 아테롬성 동맥 경화증, 아급성 피부 홍반성 루푸스, 부갑상선기능저하증, 드레슬러 증후군, 자가면역 혈소판감소증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 용혈성 빈혈, 심상성 천포창, 천포창, 포진성 피부염, 원형 탈모증, 유사천포창, 경피증, 진행성 전신 경화증, CREST 증후군(석회증, 레이노 증후군, 식도 운동 장애, 수지경화증 및 모세혈관확장증), 남성 및 여성 자가면역 불임, 강직성 척추염, 궤양성 대장염, 혼합 결합 조직 질환, 결절 다발 동맥염, 전신 괴사성 혈관염, 아토피성 피부염, 아토피성 비염, 굿파스튜어 증후군, 샤가스 질환, 유육종증, 류마티스성 열, 천식, 습관성 유산, 항-인지질 증후군, 농부폐병, 다형 홍반, 심장절개수술후 증후군, 쿠싱 증후군, 자가면역 만성 활동성 간염, 새-사육가 폐병, 독성 표피 괴사, 알포트 증후군, 폐포염, 알레르기성 폐포염, 섬유성 폐포염, 간질성 폐 질환, 결절 홍반, 괴저성 농피증, 수혈 부작용, 다카야수 동맥염, 다발성 근육통, 측두 동맥염, 주혈흡충증, 거대세포 동맥염, 회충증, 아스페르길루스증, 샘프터 증후군, 습진, 림프종양 육아종증, 베체트병, 카플란 증후군, 가와사키병, 뎅기열, 뇌척수염, 심내막염, 심내막심근 섬유증, 내안구염, 장기 융기성 홍반, 건선, 태아적모구증, 호산구성 근막염, 슐만 증후군, 펠티 증후군, 사상충증, 섬모체염, 만성 섬모체염, 홍채이색 섬모체염, 푹스 섬모체염, IgA 신장병, 헨노흐-숀라인 자반증, 이식편 대숙주병, 이식 거부, 심근증, 이튼-람베르트 증후군, 재발성 다발 연골염, 한랭글로불린혈증, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 이반 증후군 및 자가면역 생식샘 부전을 포함한다.
일부 실시형태에서, 자가면역 질환은 B 림프구 장애(예를 들어, 전신 홍반성 루푸스, 굿파스투어 증후군(Goodpasture's syndrome), 류마티스 관절염 및 제 I형 당뇨병), Th1-림프구(예를 들어, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 건선, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선염, 그레이브스병(Graves' disease), 원발성 담즙성 간경변증, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결핵, 또는 이식편 대 숙주병), 또는 Th2-림프구(예를 들어, 아토피성 피부염, 전신 홍반성 루푸스, 아토피성 천식, 비결막염, 알레르기성 비염, 오멘 증후군(Omenn's syndrome), 전신성 경화증, 또는 만성 이식편 대 숙주병)이다. 일반적으로, 수지상 세포 관련 장애는 Th1-림프구 또는 Th2-림프구의 장애와 관련된다. 일부 실시형태에서, 자가면역 장애는 T 세포-매개 면역학적 장애이다.
"화학치료제"는 작용 메커니즘과 관계없이, 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학치료제의 부류는 알킬화제, 대사길항물질, 방추체 독성 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 저해제, 항체, 광감작제 및 키나제 저해제를 포함한다. 화학치료제에는 "표적 치료" 및 통상적인 화학요법에 사용되는 화합물이 포함된다.
화학치료제의 예는 에를로티닙(TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), 도세탁셀(TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU(플루오로우라실, 5-플루오로우라실, 카스 번호 51-21-8), 겜시타빈(GEMZAR®, Lilly), PD-0325901(카스 번호 391210-10-9, Pfizer), 시스플라틴(시스-디아민, 디클로로플레티늄(II), 카스 번호 15663-27-1), 카르보플라틴(카스 번호 41575-94-4), 파클리탁셀(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, 미국 뉴저지주 프린스톤 소재), 트라스투주맙(HERCEPTIN®, Genentech), 테모졸로미드(4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타아자비시클로[4.3.0]노나-2,7,9-트리엔-9-카르복사미드, 카스 번호 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), 타목시펜((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸에탄아민, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) 및 독소루비신(ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD 및 라파마이신을 포함한다.
화학치료제의 더 많은 예는 하기를 포함한다: 옥살리플라틴(ELOXATIN®, Sanofi), 보테조밉(VELCADE®, Millennium Pharm.), 수텐트(SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), 레트로졸(FEMARA®, Novartis), 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®, Novartis), XL-518(Mek 저해제, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886(Mek 저해제, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126(PI3K 저해제, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235(PI3K 저해제, Novartis), XL-147(PI3K 저해제, Exelixis), PTK787/ZK 222584(Novartis), 풀베스트란트(FASLODEX®, AstraZeneca), 류코보린(폴린산), 라파마이신(시롤리무스, RAPAMUNE®, Wyeth), 라파티닙(TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파닙(SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), 소라페닙(NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), 게피티닙(IRESSA®, AstraZeneca), 이리노테칸(CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), 티피파닙(ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™(Cremophor-무함유), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(American Pharmaceutical Partners, 미국 일리노이주 샤움버그 소재), 반데타닙(rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), 클로람부실, AG1478, AG1571(SU 5271; Sugen), 템시롤리무스(TORISEL®, Wyeth), 파조파닙(GlaxoSmithKline), 칸포스파미드(TELCYTA®, Telik), 티오테파 및 시클로스포스파미드(CYTOXAN®, NEOSAR®); 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 니트로겐 머스터드, 예컨대, 클로람부실, 클로나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대, 엔디인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1(문헌[Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186]); 다이네미신, 다이네미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대, 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대, 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대, 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신, 예컨대, 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대, 메이탄신 및 아사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; PSK® 다당류 복합체(JHS Natural Products, 미국 오레곤주 유젠 소재); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠네; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘); 우레탄; 벤데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈(NAVELBINE®); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(XELODA®, Roche); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 및 이들 중 임의의 것의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체.
또한, "화학치료제"의 정의에는 (i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 항 호르몬제, 예컨대, 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERMs), 예를 들어, 타목시펜(NOLVADEX®; 타목시펜 시트레이트 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FARESTON®(토레미핀 시트레이트); (ii) 부신의 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 저해하는 아로마타제 저해제, 예컨대, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE®(메게스트롤 아세테이트), AROMASIN®(엑세메스탄, Pfizer), 포르메스타니, 파드로졸, RIVISOR®(보로졸), FEMARA®(레트로졸, Novartis) 및 ARIMIDEX®(아나스트로졸; AstraZeneca); (iii) 항-안드로겐, 예컨대, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); (iv) 단백질 키나제 저해제, 예컨대, MEK 저해제(WO 2007/044515); (v) 지질 키나제 저해제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상세포증식에 관여하는 신호전달 경로에서 유전자 발현을 저해하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, PKC-α, Raf 및 H-Ras, 예컨대, 오블리머센(GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) 리보자임, 예컨대, VEGF 발현 저해제(예를 들어, ANGIOZYME®) 및 HER2 발현 저해제; (viii) 백신, 예컨대, 유전자치료 백신, 예를 들어 ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® 및 VAXID®; PROLEUKIN® rlL-2; 토포이소머라제 1 저해제, 예컨대, LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) 항 혈관신생제, 예컨대, 베바시주맙(AVASTIN®, Genentech); 및 이들 중 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체가 포함된다.
또한 "화학치료제"의 정의에는 치료용 항체, 예컨대, 알렘투주맙(Campath), 베바시주맙(AVASTIN®, Genentech); 세툭시맙(ERBITUX®, Imclone); 파니투무맙(VECTIBIX®, Amgen), 리툭시맙(RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), 퍼투주맙(OMNITARG™, 2C4, Genentech), 트라스투주맙(HERCEPTIN®, Genentech), 토시투모맙(Bexxar, Corixia) 및 항체-약물 접합체, 겜투주맙 오조가미신(MYLOTARG®, Wyeth)이 포함된다.
본 발명의 접합체와 조합하여 화학치료제로서의 치료적 잠재력을 지닌 인간화 단클론성 항체로는 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피네우주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 겜투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 퍼투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 우르톡사주맙 및 비실리주맙이 포함된다.
제형
접합체를 단독으로 사용(예를 들어, 투여)하는 것이 가능하지만, 조성물 또는 제형으로 제시하는 것이 종종 바람직하다.
일 실시형태에서, 조성물은 본 명세서에 기술된 바와 같은 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물(예를 들어, 제형, 제제, 의약)이다.
일 실시형태에서, 조성물은 본 명세서에 기술된 바와 같은 하나 이상의 접합체를 다른 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제, 보조제, 충전제, 완충제, 보존제, 항산화제, 윤활제, 안정화제, 용해제, 계면활성제(예를 들어, 습윤제), 차폐제, 착색제, 풍미제 및 감미제를 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 당업자에게 잘 알려진 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 성분들과 함께 포함하는 약제학적 조성물이다.
일 실시형태에서, 조성물은 다른 활성제, 예를 들어 다른 치료제 또는 예방제를 추가로 포함한다.
적합한 담체, 희석제, 부형제 등은 표준 의약품 텍스트에서 찾아볼 수 있다. 예를 들어, 문헌[Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA)], 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000]; 및 문헌[Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994] 참조.
본 발명의 또 다른 양태는 본 명세서에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 [11C]-방사성 표지된 접합체 또는 접합체-유사 화합물을 당업자에게 널리 공지된 하나 이상의 다른 약제학적으로 허용 가능한 성분(예를 들어, 담체, 희석제, 부형제 등)과 혼합하는 단계를 포함하는 약제학적 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 개별 단위(예를 들어, 정제 등)로 제형화되는 경우, 각 단위는 활성 화합물의 소정량(투여량)을 함유한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이 논의되는 대상체의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하며, 합리적인 이득/위험비에 상응하는 화합물, 성분, 물질, 조성물, 투여량 형태 등에 관한 것이다. 각각의 담체, 희석제, 부형제 등은 또한 제형의 다른 성분과 양립 가능하다는 의미에서 "허용 가능"해야 한다.
제형은 약제학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법은 활성 화합물을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 화합물을 담체(예를 들어, 액체 담체, 미세하게 분해된 고체 담체 등)와 균일하고 긴밀하게 회합시킨 다음, 필요한 경우 생성물을 성형하여 제조된다.
제형은 급방출 또는 서방출; 즉시, 지연, 정기적(timed), 또는 지속 방출; 또는 이들의 조합으로 제공되도록 제조될 수 있다.
비경구 투여(예를 들어, 주사에 의함)용으로 적합한 제형은 활성 성분이 용해되거나, 현탁되거나, 또는 다른 방식으로 제공된(예를 들어, 리포솜 또는 다른 미립자 내에) 수성 또는 비수성이며, 등장성이고, 무-발열성 물질인 멸균 액체(예를 들어, 용액, 현탁액)를 포함한다. 이러한 액체는 다른 약제학적으로 허용 가능한 성분, 예컨대, 항산화제, 완충제, 보존제, 안정화제, 정균제, 현탁화제, 농조화제 및 제형이 계획된 수용자의 혈액(또는 다른 적절한 체액)과 등장성이 되도록 하는 용질을 추가로 함유할 수 있다. 부형제의 예는 예를 들어, 물, 알코올, 폴리올, 글리세롤, 식물성 오일 등을 포함한다. 이러한 제형에서 사용하기에 적합한 등장성 담체의 예는 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 또는 락테이트 첨가 링거 주사액을 포함한다. 전형적으로, 액체 내의 활성 성분의 농도는 약 1 ng/㎖ 내지 약 10 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 10 ng/㎖ 내지 약 1 ㎍/㎖이다. 제형은 단위-용량 또는 다회-용량형 밀봉 용기, 예를 들어, 앰플 및 바이알 내에 제공될 수 있으며, 사용하기 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주사용수를 첨가하는 것만을 필요로 하는 동결-건조된(동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
투여량
당업자라면 접합체 화합물 및 접합체 화합물을 포함하는 조성물의 적절한 투여량이 환자마다 다를 수 있음을 이해할 것이다. 최적 투여량을 결정하는 것은 일반적으로, 모든 위험 또는 유해한 부작용을 고려하여 치료학적 이득의 수준의 균형을 달성하는 것을 수반한다. 선택된 투여량 수준은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 투여 시기, 화합물의 배설률, 치료의 지속기간, 조합물 내의 그 밖의 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 병태의 중증도 및 환자의 종, 성별, 연령, 체중, 상태, 전반적인 건강 및 이전 병력을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 화합물의 양 및 투여 경로는 궁극적으로 의사, 수의사, 또는 임상의의 재량에 달려 있지만, 작용 부위에서 실질적으로 위험하거나 해로운 부작용을 야기함이 없이 바람직한 효과를 달성하는 국소 농도를 이루도록 선택될 것이다.
투여는 치료의 과정 전체에 걸쳐서 단일 용량으로 연속적으로 또는 간헐적으로(예를 들어, 적절한 간격으로 분할된 용량으로) 이루어질 수 있다. 가장 효과적인 투여의 수단 및 투여량을 결정하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 치료에 사용된 제형, 치료의 목적, 치료될 표적 세포(들) 및 치료될 대상체에 따라 달라질 것이다. 단일 또는 다회 투여는 치료하는 의사, 수의사, 또는 임상의에 의해서 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.
일반적으로, 활성 화합물의 적합한 용량은 1일당 대상체의 체중 ㎏당 약 100 ng 내지 약 25 ㎎(보다 전형적으로 약 1 ㎍ 내지 약 10 ㎎)의 범위이다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 등인 경우, 투여되는 양은 모화합물을 기준으로 계산되며, 따라서 사용되는 실중량은 비례해서 증가한다.
상술한 투여량은 접합체에 적용하거나 링커의 절단 후에 방출될 수 있는 화합물의 유효량에 적용할 수 있다.
질환의 예방 또는 치료를 위해서, 본 발명의 ADC의 적절한 투여량은 상기 정의된 바와 같은 치료될 질환의 유형, 질환의 중증도 및 과정, 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 치료법, 항체에 대한 환자의 임상력 및 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 분자는 적합하게는 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐서 환자에게 투여된다. 질환의 타입 및 중증도에 따라서 약 1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 또는 그 이상의 분자가 예를 들어, 하나 이상의 별도의 투여에 의해서든, 또는 연속 주입에 의해서든, 환자에게 투여하기 위한 일차 후보 투여량이다. 수일 이상에 걸쳐서 반복 투여하는 경우, 병태에 따라, 치료는 질환 증상에 대한 목적하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 다른 투약 요법이 유용할 수도 있다. 이러한 요법의 진행은 통상적인 기술 및 분석으로 용이하게 모니터링된다.
약물 로딩
약물 로딩(p)은 항체와 같은 세포 결합제일 수 있는 리간드 단위당 약물의 평균 개수이다.
접합 반응으로부터의 ADC 제제에서 항체당 약물의 평균 개수는 UV, 역상 HPLC, HIC, 질량 분광분석법, ELISA 분석 및 전기영동과 같은 통상의 수단에 의해 특성화될 수 있다. 또한 p의 측면에서 ADC의 정량적 분포가 결정될 수 있다. ELISA에 의해서, ADC의 특정 제제에서 p의 평균값을 결정할 수 있다(문헌[Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070]; 문헌[Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852]). 그러나, p(약물) 값의 분포는 항체-항원 결합 및 ELISA의 검출 한계에 의해 식별 가능하지 않다. 또한, 항체-약물 접합체의 검출을 위한 ELISA 분석은 약물 모이어티가 중쇄 또는 경쇄 단편, 또는 특정 아미노산 잔기와 같은 항체에 부착되는 부위를 판단하지 못한다. 일부 예에서, p가 다른 약물 로딩을 갖는 ADC로부터의 특정한 값인 경우, 균질한 ADC의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다. 이러한 기술은 또한 다른 유형의 접합체에도 적용될 수 있다.
일부 항체-약물 접합체의 경우에, p는 항체 상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 항체는 단 하나 또는 수 개의 시스테인 티올기를 가질 수 있거나, 이를 통해 링커가 부착될 수 있는 단 하나 또는 수 개의 충분히 반응성인 티올기를 가질 수 있다. 약물 로딩이 높을 수록, 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성, 또는 세포 투과성의 상실을 야기할 수 있다.
일반적으로, 이론적 최대치보다 적은 수의 약물 모이어티가 접합 반응 중에 항체에 접합된다. 항체는 예를 들어, 약물 링커와 반응하지 않는 다수의 리신 잔기를 함유할 수 있다. 가장 반응성이 큰 리신기만 아민-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 또한, 가장 반응성이 큰 시스테인 티올기만이 티올-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 모이어티에 연결될 수 있는 유리 및 반응성 시스테인 티올기를 함유하더라도 많이 함유하지는 않는다. 화합물의 항체 내 대부분의 시스테인 티올 잔기는 이황화 브릿지로서 존재하며, 부분적 또는 완전한 환원 조건 하에서 디티오트레이톨(DTT) 또는 TCEP와 같은 환원제에 의해 환원되어야 한다. ADC의 로딩(약물/항체 비율)은 (i) 항체에 대한 약물 링커의 몰 과량 제한, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도 제한 및 (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적 또는 제한적 환원 조건을 비롯한 몇몇 상이한 방식으로 제어될 수 있다.
특정 항체는 환원성 쇄간 이황화, 즉 시스테인 브릿지를 갖는다. 항체는 DTT(디티오트레이톨)와 같은 환원제를 이용한 처리에 의해 링커 시약과의 접합에 대해 반응성이 될 수 있다. 각 시스테인 브릿지는 따라서 이론적으로 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 리신을 2-이미노티올란(트라우트 시약(Traut's reagent))과 반응시킴으로써 추가의 친핵기를 항체에 도입하여, 아민을 티올로 전환할 수 있다. 반응성 티올기는, 1, 2, 3, 4, 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 조작(예를 들어, 하나 이상의 비천연 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 돌연변이 항체를 제조)함으로써, 항체(또는 이의 단편)에 도입될 수 있다. 미국 특허 제7521541호에는 반응성 시스테인 아미노산의 도입에 의한 항체 조작에 대해 교시되어 있다.
시스테인 아미노산은 항체 내의 반응성 부위에서 조작될 수 있고, 이것은 쇄간 또는 분자간 이항화 결합을 형성하지 않는다(문헌[Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932]; 문헌[Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729]; 미국 특허 제7521541호; 미국 특허 제7723485호; WO2009/052249호). 조작된 시스테인 티올은 말레이미드 또는 알파-할로 아미드와 같은 티올-반응성 친전자성기를 갖는 본 발명의 (즉, 화학식 I의) 약물-링커와 반응하여 시스테인 조작된 항체를 갖는 ADC를 형성할 수 있다. 따라서, 약물 단위의 위치가 설계, 제어 및 공지될 수 있다. 조작된 시스테인 티올기는 일반적으로 약물-링커 시약과 높은 수율로 반응하기 때문에 약물 로딩이 제어될 수 있다. IgG 항체의 조작으로 중쇄 또는 경쇄 상의 단일 부위에서의 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입하는 것은 대칭 항체 상에 2개의 새로운 시스테인을 제공한다. 2에 가까운 약물 로딩이 달성되고, 접합 산물 ADC의 균질성에 접근할 수 있다.
항체의 복수개의 친핵성 또는 친전자성기가 약물 링커와 반응하는 경우, 생성된 생성물은 예를 들어, 1, 2, 3개 등의 항체에 부착된 약물 단위의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물일 수 있다. 중합체 역상(PLRP) 및 소수성 상호작용(HIC)과 같은 액체 크로마토그래피 방법은 약물 로딩값에 의해 혼합물에서 화합물을 분리시킬 수 있다. 단일 약물 로딩값(p)을 갖는 ADC의 제제가 분리될 수 있지만, 약물 단위가 링커를 통해 항체 상의 상이한 부위에서 부착될 수 있기 때문에 이들 단일 로딩값의 ADC는 여전히 불균질한 혼합물일 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체-약물 접합체 조성물은 항체가 하나 이상의 약물 모이어티를 갖고 약물 모이어티가 다양한 아미노산 잔기에서 항체에 부착될 수 있는 경우에 항체-약물 접합체의 혼합물을 포함할 수 있다.
일 실시형태에서, 세포 결합제당 약물의 평균 수는 1 내지 20이다. 일부 실시형태에서, 상기 범위는 1 내지 10, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6 및 4 내지 10 중에서 선택된다.
일부 실시형태에서, 세포 결합제당 하나의 약물이 존재한다.
일반적인 합성 경로
RL이 화학식 Ia를 갖는 화학식 I의 화합물은 화학식 3의 화합물 또는 이의 활성화 버전을 연결시킴으로써 화학식 2의 화합물로부터 합성될 수 있다:
[화학식 2]
Figure pct00028
상기 식에서, RL*는 -QH이다.
[화학식 3]
Figure pct00029
.
이러한 반응은 아미드 커플링 조건 하에서 수행될 수 있다.
화학식 2의 화합물은 화학식 4의 화합물을 탈보호함으로써 합성될 수 있다.
[화학식 4]
Figure pct00030
상기 식에서, RL*prot는 -Q-ProtN이고, ProtN은 아민 보호기이다.
화학식 4의 화합물은 Friedlander 반응을 이용하여 화학식 5의 화합물과 화합물 A5를 커플링시킴으로써 합성될 수 있다:
[화학식 5]
Figure pct00031
.
화학식 5의 화합물은 예를 들어, NH4OH로의 처리에 의해서, 플루오로기를 아미노기로 전환시킴으로써 화학식 6의 화합물로부터 합성될 수 있다:
[화학식 6]
Figure pct00032
.
화학식 6의 화합물은 RL*prot-OH를 화합물 A3에 커플링시킴으로써 합성될 수 있다.
RL이 화학식 Ia 또는 Ib를 갖는 화학식 I의 화합물은 화합물 RL-OH 또는 이의 활성화 형태의 커플링에 의해서 화합물 1로부터 합성될 수 있다.
아민 보호기
아민 보호기는 당업자에게 잘 알려져 있다. 자세한 내용은 문헌[Greene's Protecting Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition, John Wiley & Sons, 2007 (ISBN 978-0-471-69754-1), 페이지 696-871]의 적합한 보호기의 개시를 참조한다.
추가 바람직한 예
하기 바람직한 예는 전술한 바와 같이 본 발명의 모든 양태에 적용될 수 있거나 단일 양태와 관련될 수 있다. 바람직한 예는 임의의 조합으로 함께 결합될 수 있다.
Q X
일 실시형태에서, Q는 아미노산 잔기이다. 아미노산은 천연 아미노산 또는 비천연 아미노산일 수 있다.
일 실시형태에서, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp로부터 선택되고, 상기 식에서 Cit는 시트룰린이다.
일 실시형태에서, Q는 디펩티드 잔기를 포함한다. 디펩티드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 디펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 디펩티드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 즉 디펩티드는 카텝신에 대한 인식 부위이다.
일 실시형태에서, Q는 하기로부터 선택된다:
NH -Phe-Lys-C=O,
NH -Val-Ala- C=O,
NH -Val-Lys- C=O,
NH -Ala-Lys- C=O,
NH-Val-Cit- C=O,
NH-Phe-Cit- C=O,
NH-Leu-Cit- C=O,
NH-Ile-Cit- C=O,
NH-Phe-Arg- C=O,
NH-Trp-Cit- C=O 및
NH -Gly-Val- C=O;
상기 식에서, Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, Q는 하기로부터 선택된다:
NH-Phe-Lys- C=O,
NH-Val-Ala- C=O,
NH-Val-Lys- C=O,
NH-Ala-Lys- C=O 및
NH-Val-Cit- C=O.
가장 바람직하게는, Q는 NH-Phe-Lys- C=O, NH-Val-Cit- C=O 또는 NH-Val-Ala- C=O로부터 선택된다.
다른 관심 디펩티드 조합은 하기를 포함한다:
NH -Gly-Gly- C=O,
NH -Gly-Val- C=O
NH -Pro-Pro- C=O 및
NH -Val-Glu- C=O.
본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869]에 기재된 것을 포함하여 다른 디펩티드 조합물이 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, Q는 트리펩티드 잔기이다. 트리펩티드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 트리펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 트리펩티드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 즉 트리펩티드는 카텝신에 대한 인식 부위이다. 특히 관심 대상인 트리펩티드 링커는 다음과 같다:
NH-Glu-Val-Ala-C=O
NH-Glu-Val-Cit-C=O
NH-αGlu-Val-Ala-C=O
NH-αGlu-Val-Cit-C=O
일부 실시형태에서, Q는 테트라펩티드 잔기이다. 테트라펩티드의 아미노산은 천연 아미노산과 비천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 테트라펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정성 링커인 경우, 테트라펩티드는 카텝신 매개 절단에 대한 작용 부위이다. 즉 테트라펩티드는 카텝신에 대한 인식 부위이다. 특히 관심 대상인 테트라펩티드 링커는 다음과 같다:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
일부 실시형태에서, 테트라펩티드는 다음과 같다:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O.
펩티드 잔기의 상기 표현에서, NH-는 N-말단을 나타내고, -C=O는 잔기의 C-말단을 나타낸다. C-말단은 A*의 NH에 결합한다.
Glu는 글루탐산의 잔기, 즉 하기를 나타낸다:
Figure pct00033
.
αGlu는 α-쇄를 통해 결합될 때의 글루탐산의 잔기, 즉 하기를 나타낸다:
Figure pct00034
.
일 실시형태에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호기는 상기 논의된 바와 같은 기일 수 있다. 보호된 아미노산 서열은 효소에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기를 포함하는 디펩티드 서열은 카텝신에 의해 절단될 수 있다.
아미노산의 측쇄에 대한 보호기는 당업계에 잘 알려져 있고 Novabiochem 카탈로그에 기술되어 있으며, 전술된 바와 같다.
G L
GL은 하기로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00035
Figure pct00036
일부 실시형태에서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택된다. 이들 실시형태 중 일부에서, GL은 GL1-1이다.
G LL
GLL은 하기로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00037
Figure pct00038
일부 실시형태에서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택된다. 이들 실시형태 중 일부에서, GLL은 GLL1-1이다.
X
X는 하기이다:
Figure pct00039
상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c1 = 0 또는 1이고, c2 = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0이다.
a는 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5일 수 있다. 일부 실시형태에서, a는 0 내지 3이다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, a는 0 또는 1이다. 추가 실시형태에서, a는 0이다.
b1은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16일 수 있다. 일부 실시형태에서, b1은 0 내지 12이다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b1은 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다.
b2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16일 수 있다. 일부 실시형태에서, b2는 0 내지 12이다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b2는 0 내지 8이고, 0, 2, 3, 4, 5 또는 8일 수 있다.
b1과 b2 중 하나만 0이 아닐 수 있다.
c1은 0 또는 1일 수 있다.
c2는 0 또는 1일 수 있다.
C1과 c2 중 하나만 0이 아닐 수 있다.
d는 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5일 수 있다. 일부 실시형태에서, d는 0 내지 3이다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, d는 1 또는 2이다. 추가 실시형태에서, d는 2이다. 추가 실시형태에서, d는 5이다.
X의 일부 실시형태에서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 1이고, c2는 0이고, d는 2이고, b2는 0 내지 8일수 있다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다.
X의 일부 실시형태에서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 0이고, b1은 0 내지 8일수 있다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다.
X의 일부 실시형태에서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 1이고, b2는 0 내지 8일수 있다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다.
X의 일부 실시형태에서, b1은 0이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, a와 d 중 하나는 0이다. a와 d 중 다른 하나는 1 내지 5이다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, a와 d 중 다른 하나는 1이다. 이러한 실시형태 중 다른 실시형태에서, a와 d 중 다른 하나는 5이다.
X의 일부 실시형태에서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 1이고, d는 2이고, b1은 0 내지 8일수 있다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이다.
일부 실시형태에서, RL은 화학식 Ib를 갖는다.
일부 실시형태에서, RLL은 화학식 Ib'를 갖는다.
RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성한다.
일부 실시형태에서, RL1 및 RL2 둘 다는 H이다.
일부 실시형태에서, RL1은 H이고, RL2는 메틸이다.
일부 실시형태에서, RL1 및 RL2 둘 다는 메틸이다.
일부 실시형태에서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌기를 형성한다.
일부 실시형태에서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로부틸렌기를 형성한다.
Ib 기의 일부 실시형태에서, e는 0이다. 다른 실시형태에서, e는 1이고, 니트로기는 고리의 임의의 이용가능한 위치에 있을 수 있다. 이러한 실시형태 중 일부 실시형태에서, 이는 오르토 위치에 있다. 이러한 실시형태 중 다른 실시형태에서, 이는 파라 위치에 있다.
본 발명의 제5 양태의 일부 실시형태에서, 거울상이성질체 풍부 형태의 거울상이성질체비는 60:40, 70:30, 80:20 또는 90:10보다 크다. 추가 실시형태에서, 거울상이성질체비는 95:5, 97:3 또는 99:1보다 크다.
일부 실시형태에서, RL은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
일부 실시형태에서, RLL은 상기 RL기로부터 유래된 기이다.
실시예
Qingdao Hailang 실리카겔을 사용하거나 Biotage® Isolera™을 사용하여 실리카 상 칼럼 크로마토그래피를 수행하고, 박막 크로마토그래피(thin-layer chromatography: TLC)를 사용하여 순도를 위해서 분획을 확인하였다. 유리 플레이트 상의 형광 인디케이터를 사용하여, Huanghai HSF254 실리카겔 또는 Merck Kieselgel 60 F254 실리카겔을 사용하여 TLC를 수행하였다. UV 광으로 TLC를 시각화하였다. 추출 및 크로마토그래피 용매 및 모든 정제 화학물질은 달리 제시되지 않는 한 SINOPHARM(중국), VWR(미국) 또는 Sigma-Aldrich(미국)로부터 구입하고, 추가로 정제하지 않고 사용하였다. 6,8-디플루오로-3,4-디히드로나트탈렌-1(2H)-온을 Bide Pharmatech Ltd.로부터 입수하였다.
MassLynx 프로그램과 함께 Waters 2767, Waters 2545, Waters 515 HPLC 펌프, WATERS SFO, WATERS 2424, Acquity QDa로 구성된 Waters Prep HPLC 시스템에서 역상 정제를 수행하였다.
분석용 LC/MS 조건은 다음과 같다: Waters Aquity H-class SQD2를 사용하여 포지티브 모드 전기분무 질량 분석을 수행하였다. 이동상으로 용매 A(0.1% 포름산이 포함된 물) 및 용매 B(0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴)를 사용하였다. 5-분 전개 동안의 구배: 초기 조성 5% B를 1분 동안 유지한 후, 3분에 걸쳐 5% B에서 95% B로 증가시켰다. 조성을 95% B에서 30초 동안 유지한 후, 30초 내에 5% B로 회복시키고, 84초 동안 유지시켰다. 총 구배 전개 시간은 5.0분이었다. 유량은 0.8 ㎖/분이었다. 칼럼: 45℃에서 Agilent ZORBAX Extend 80A 1.8 ㎛ 2.1×50 ㎜.
3분 전개 동안 조건: 유량은 0.3 ㎖/분이었다. 210 ㎚에서 검출하였다. 칼럼: Waters Acquity UPLC® BEH Shield C18 VanGuard Pre-칼럼(130 A, 1.7 ㎛, 2.1 ㎜×5 ㎜)이 장착된 Waters Acquity UPLC® BEH Shield C18(1.7 ㎛, 2.1×50 ㎜, 35℃).
실시예 1
Figure pct00043
a) 6,8-디플루오로-5-니트로-1-테트랄론 A2
0℃에서 6,8-디플루오로-1-테트랄론 A1(15 g, 82.3 m㏖)의 더스트(dust)에 진한 H2SO4(90 ㎖)를 적가하였다. 0℃에서 생성된 혼합물에 KNO3(8.2 g, 90.1 m㏖)를 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 빙수(200 ㎖)로 켄칭(quenching)하고, 그 다음 EtOAc(400 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 수성 NaHCO3(400 ㎖) 및 염수(400 ㎖)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/EtOAc = 100:1)로 정제시켜 화합물 A2(8.1 g, 43% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 6.98 (t, J = 10.0 Hz, 1 H), 3.01-2.98 (m, 2 H), 2.72-2.68 (m, 2 H), 2.21-2.05 (m, 2 H).
b) 5-아미노-6,8-디플루오로-1-테트랄론 A3
EtOH/H2O(8:1, 270 ㎖) 중의 화합물 A2(9.1 g, 39.6 m㏖)의 혼합물에 NH4Cl(6.4 g, 0.12 m㏖) 및 더스트 Fe(17.6 g, 0.32 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물(50 ㎖)로 희석한 다음 EtOAc(200 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(200 ㎖)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/EtOAc = 8:1)로 정제시켜 화합물 A3(7.3 g, 94% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.04 (t, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.05 (br s, 2 H), 2.71-2.2.68 (m, 2 H), 2.5 (m, 2 H), 2.03-1.98 (m, 2 H).
c) 5-아세틸아미노-6,8-디플루오로-1-테트랄론 A4
실온에서 DCM(100 ㎖) 중의 화합물 A3 (7.3 g, 37 m㏖) 및 Et3N(4.5 g, 44.4 m㏖)의 용액에 Ac2O(4.5 g, 44.4 m㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH = 300:1)로 정제시켜 화합물 A4(5.3 g, 60% 수율)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 6.84 (t, J = 10 Hz, 1 H), 6.75 (br s, 1 H), 2.89-2.86 (m, 2 H), 2.66-2.63 (m, 2 H), 2.25 (s, 3 H), 2.10-2.06 (m, 2 H).
d) 5-아세틸아미노-6-플루오로-8-아미노-1-테트랄론 A5
실온에서 DMSO(50 ㎖) 중의 화합물 A4(5.2 g, 21.7 m㏖)의 용액에 25% 수성 NH4OH(80 ㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 130℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 그 다음 EtOAc(200 ㎖×5)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(200 ㎖)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH = 100:1)로 정제시켜 화합물 A5(1.5 g, 30% 수율)를 갈색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 9.16 (s, 1 H), 6.42 (d, J = 12.4 Hz, 1 H), 2.66 (m, 2 H), 2.55-2.48 (m, 2 H), 2.00 (s, 3 H), 1.88-1.85 (m, 2 H).
e) (S)-N-(9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아세트아미드 A7
화합물 A5(150 ㎎, 0.635 m㏖), 168 ㎎(0.638 m㏖)의 (4S)-4-에틸-4-히드록시-7,8-디히드로-1H-피라노[3,4-f]인돌리진-3,6,10-트리온 A6 및 168 ㎎(0.668 m㏖)의 피리디늄 p-톨루엔설포네이트를 30 ㎖의 무수 톨루엔에서 혼합하였다. 딘-스탁 트랩을 장치하고, 반응을 130℃에서 4시간 동안 가열시켰다. 응축기에 수층이 존재하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 14 ㎖의 아세톤에서 침전시키고, 원심분리시켜 180 ㎎의 목적하는 생성물을 갈색 고체로서 얻었다. 플라스크벽 상의 잔류물을 아세톤으로 세척하고, 수집하여 60 ㎎의 목적하는 생성물을 갈색 고체로서 제공하였다. 조 생성물 A7의 합한 수율은 82%였다. LCMS (0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 464; 1H NMR (400 MHZ, DMSO-d 6): 목적하는 생성물에 대한 신호, δ ppm 9.77(s, 1 H), 7.72(d, J = 11.1 Hz, 1 H), 7.25(s, 1 H), 5.36 (s, 2 H), 5.17(s, 2 H), 3.09 (t, J = 5.5 Hz, 2 H), 2.91 (t, J = 5.5 Hz, 2 H), 2.22(s, 1 H), 2.08 (s, 3 H), 1.96 (m, 2 H), 1.80 (m, 2 H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).
f) (S)-4-아미노-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-1,2,3,9,12,15-헥사히드로-10H,13H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-10,13-디온 1
60 ㎎의 조 화합물 A7을 0.5 ㎖의 HCl(37%)에 용해시키고, 반응을 1시간 동안 100℃에서 마이크로파 반응기에서 밀봉 튜브에서 수행하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 1 ㎖의 NMP에 용해시키고, A 용매로서 물 중의 0.1% TFA 및 B 용매로서 아세토니트릴 중의 0.1% TFA를 사용하여 Prep-HPLC 상에서 정제시켰다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 동결시켰다. 동결건조 후, 반응은 28 ㎎(42%)의 목적하는 생성물 1을 오렌지색 고체로서 제공하였다. LCMS(0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 422; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.56 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.14 (s, 1 H), 5.34 (s, 2 H), 5.10 (s, 2 H), 2.99 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 2.78 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 1.95 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 1.79 (m, 2 H), 1.40-1.00 (m, 3H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
실시예 2
Figure pct00044
Figure pct00045
a) 5,8-디아미노-6-플루오로-1-테트랄론 A8
6N HCl(50 ㎖) 중의 5-아세틸아미노-6-플루오로-8-아미노-1-테트랄론 A5(1.0 g, 4.2 m㏖)의 용액을 4시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(60 ㎖)에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(100 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(100 ㎖)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 A8(0.7 g, 90% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
(마이크로파 방법) 240 ㎎의 5-아세틸아미노-6-플루오로-8-아미노-1-테트랄론 A5(1.06 m㏖)를 3 ㎖ HCl(37%)에 용해시키고, 마이크로파 반응기에서 100℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(10 ㎖)에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(15 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 ㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 A8(180 ㎎, 87% 수율)을 제공하였다.
b) 5-알로크글리신-8-아미노-6-플루오로-1-테트랄론 A9
THF(50 ㎖) 중의 화합물 A8(0.7 g, 3.8 m㏖) 및 Alloc-Gly-OH(0.7 g, 4.2 m㏖)의 용액에 Et3N(0.4 g, 4.2 m㏖), HOBt(0.6 g, 4.2 m㏖) 및 EDCI(0.9 g, 4.6 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(100 ㎖)로 희석하고, 그 다음 포화 수성 NaHCO3(50 ㎖) 및 염수(50 ㎖)로 세척하였다. 유기상을 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피(DCM/MeOH= 200:1)로 정제시켜 화합물 A9(0.52 g, 41% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 9.15 (s, 1 H), 7.53 (t, J= 6.0 Hz, 1 H), 6.41 (d, J= 12.4 Hz, 1 H), 5.92-5.88 (m, 1 H), 5.33-5.28 (m, 1 H), 5.20-5.17 (m, 1 H), 4.51-4.49 (m, 2 H), 3.78 (d, J= 6.0 Hz, 1 H), 2.65 (t, J= 6.0 Hz, 1 H), 2.55-2.49 (m, 2 H),1.87-1.84 (m, 2 H).
c) 알릴 (S)-(2-((9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트 A10
250 ㎎(0.746 m㏖)의 화합물 A9, 200 ㎎(0.760 m㏖)의 (4S)-4-에틸-4-히드록시-7,8-디히드로-1H-피라노[3,4-f]인돌리진-3,6,10-트리온 A6 및 200 ㎎(0.796 m㏖)의 피리디늄 p-톨루엔설포네이트를 30 ㎖의 무수 톨루엔에 용해시켰다. 딘-스탁 트랩을 장치하고, 반응을 130℃에서 4시간 동안 가열시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 아세톤에서 침전시켜 원심분리 및 진공 하에서의 건조 후 250 ㎎의 목적하는 생성물을 갈색 고체로서 제공하였다. 플라스크 상의 잔류물을 아세톤으로 세척하고, 농축시켜 110 ㎎의 화합물 A10을 갈색 고체로서 제공하였다. 조 생성물의 수율은 87%였다. LCMS (0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 563; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm: 목적하는 생성물에 대한 신호, 9.88 (s 1 H), 7.83 (d, J = 11 Hz, 1 H), 7.63 (t, J = 6.1 Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H), 5.99-5.88 (m, 1 H), 5.44 (s, 2 H), 5.32 (dd, J = 6.4 Hz, 1 H), 5.26 (s, 2 H), 5.20 (dd, J = Hz, 1 H), 4.53 (d, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.93 (d, J = 6 Hz, 2 H), 3.18 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.97 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 2.23 (s, 1 H), 2.03 (m, 2 H), 1.88 (m, 2 H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
d) (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-옥소 에틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트 A12
A11을 하기와 같이 합성하였다:
Fmoc-GGF(500 ㎎, 0.997 m㏖, 표준 용액 펩티드 합성 방법에 의해서 합성) 및 276 ㎎(1.50 m㏖)의 펜타플루오로페놀을 20 ㎖의 NMP에 용해시켰다. 이 현탁액에, 0.33 ㎖의 EDC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드)(1.8 m㏖)를 첨가하고, 반응을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다.
50 ㎎(0.089 m㏖)의 화합물 A10, 103 ㎎(0.0887 m㏖)의 Pd(PPh3)4 및 145 ㎕(0.899 m㏖)의 트리에틸실란을 2 ㎖의 NMP에 용해시켰다. 혼합물에, 4 ㎖(0.2 m㏖)의 활성화된 산 용액 A11을 첨가하였다. 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 에테르(15 ㎖의 2개의 바이알)에서 침전시키고, 원심분리시켜 화합물 A12를 제공하였다. 고체를 공기 건조시키고, 추가로 정제하지 않고 사용하였다.
e) (S)-2-(2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도)-N-(2-(((S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아미노)-2-옥소에틸)-3-페닐프로판아미드 A13
조 화합물 A12를 2 ㎖의 NMP에 용해시키고, 2 ㎖의 20% 4-메틸피페리딘(3.0 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완결 후, 반응 혼합물을 A 용매로서 물 중의 0.1% TFA 및 B 용매로서 아세토니트릴 중의 0.1% TFA를 사용하여 Prep-HPLC 상에서 정제시켰다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 동결/동결건조시켜 23 ㎎(35%)의 화합물 A13을 황색 고체로서 제공하였다.
LCMS(0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 741; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 9.74 (s, 1 H), 8.51 (t, J = 5.5 Hz, 1 H), 8.43 (t, J = 5.5 Hz, 1 H), 8.30 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.91 (br, s, 2 H + H+), 7.76 (d, J = 11 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.21-7.15 (m, 4 H), 7.14-7.07 (m, 1 H), 5.37 (s, 2 H), 5.21 (s, 2 H), 4.55 (m, 1 H), 3.98 (m, 2 H), 3.82 (dd, J = 16.8, 5.6 Hz, 1 H), 3.64 (dd, J = 16.8, 5.6 Hz, 1 H), 3.48 (m, 2 H), 3.11 (t, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.05 (dd, J = 13.9, 4.4 Hz, 1 H), 2.91 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 2.73 (dd, J = 13.8, 9.9 Hz, 1 H), 1.96 (m, 2 H), 1.80 (m, J = 7.4 Hz, 2 H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
f) 1-(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-N-(2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-1-옥소-3-패날프로판-2-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)-3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사헵타코산-27-아미드 2
15 ㎎(0.020 m㏖)의 화합물 A13 및 15 ㎎(0.022 m㏖)의 Mal-PEG8-NHS 에스테르 A14를 1 ㎖의 NMP에 용해시키고, 14 ㎕(0.10 m㏖)의 TEA를 용액에 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링하였다. 아민의 완전한 소모 후, 반응 혼합물을 여과하고, 반응 혼합물을 A 용매로서 물 중의 0.1% TFA 및 B 용매로서 아세토니트릴 중의 0.1% TFA를 사용하여 Prep-HPLC 상에서 정제시켰다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 수집/동결/동결건조시켜 14 ㎎(53%)의 목적하는 생성물을 황색 고체로서 제공하였다.
LCMS(0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 1315; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 9.64 (s, 1 H), 8.43 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.12-8.06 (m, 2 H), 7.94 (t, J = 4.6 Hz, 2 H), 7.76 (d, J = 11 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.21-7.15 (m, 4 H), 7.14-7.07 (m, 1 H), 6.93 (s, 2 H), 5.37 (s, 2 H), 5.20 (s, 2 H), 4.51-4.46 (m, 1 H), 3.95 (m, 2 H), 3.72 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 3.68 (d, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.60 (d, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.44-3.41 (m, PEG 및 H2O 신호 중첩), 3.29 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.14-3.00 (m, 5 H), 2.91 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 2.78 (m, 1 H), 2.31 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 2.26 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.96 (m, 2 H), 1.80 (m, 2 H), 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).
실시예 3에 대한 일반적인 정보
플래쉬 크로마토그래피는 Biotage® Isolera™을 사용하여 수행하였고, 박층 크로마토그래피(TLC)를 사용하여 분획의 순도를 확인하였다. TLC는 알루미늄 플레이트에서 형광 표식자가 있는 Merck Kieselgel 60 F254 실리카겔을 사용하여 수행하였다. UV 광으로 TLC를 시각화하였다. 추출 및 크로마토그래피 용매를 VWR(U.K.)로부터 구입하여, 추가 정제 없이 사용하였다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 정밀 화학물질은 Sigma-Aldrich로부터 구입하였다. 페길화 시약은 Stratech UK를 통해 Quanta biodesign US로부터 입수하였다.
분석용 LC/MS 조건은 다음과 같다: Waters Aquity H-class SQD2를 사용하여 포지티브 모드 전기분무 질량 분석을 수행하였다.
이동상으로 용매 A(0.1% 포름산이 포함된 물) 및 용매 B(0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴)를 사용하였다. 3분 전개 동안의 구배: 초기 조성 5% B에서 25초 간 유지한 후, 1분 35초에 걸쳐 5% B에서 100% B로 증가시켰다. 조성을 100% B에서 50초 간 유지한 후, 5초 내에 5% B로 회복시키고, 5초 동안 유지시켰다. 총 구배 실행 시간은 3.0분이었다. 유량은 0.8 ㎖/분이었다. 254 ㎚에서 검출하였다. 칼럼: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-칼럼(130 A, 1.7 ㎛, 2.1 ㎜×5 ㎜)이 장착된 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18(1.7 ㎛, 2.1×50 ㎜, 50℃).
실시예 3
Figure pct00046
a) (S)-N-(9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-4-일)아세트아미드 A7 의 대안적인 합성법
화합물 A5(136 ㎎, 0.57569 m㏖) 및 트리온 A6(167 ㎎, 0.63 m㏖)을 톨루엔(20 ㎖)에 용해시킨 후, 4-메틸벤젠설포네이트; 피리딘-1-윰(149 ㎎, 0.59 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 3.5시간 동안 환류 교반하였다. LCMS가 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시키고, MeCN으로 분쇄(trituration)하여 화합물 A7(220 ㎎, 0.4746 m㏖, 82.45% 수율)을 베이지색 고체로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. MeCN 세척물을 진공 하에서 농축시키고, isolera 크로마토그래피(CH2Cl2 중의 0~5% MeOH)로 정제시켜 isolera 정제(CH2Cl2 중의 0~5% MeOH) 후 추가의 20 ㎎의 화합물 A7을 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS: RT = 1.41분, 464.5 [M+H]+.
b) (S)-4-아미노-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-1,2,3,9,12,15-헥사히드로-10H,13H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-10,13-디온 1 의 대안적인 합성법
화합물 A7(220 ㎎, 0.474 m㏖)을 5 M HClaq(15 ㎖, 75 m㏖, 5 m㏖/L)에 용해시키고, 혼합물을 4시간 동안 80℃에서 교반하였고, 그 때 LCMS가 모든 출발 물질이 소모되었다는 것을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 화합물 1.2HCl(235 ㎎, 0.475 m㏖, 100.2% 수율)을 적색 고체로서 제공하였다. 생성물을 다음 단계에서 조물질로서 사용하였다. LCMS: RT = 1.49분, 질량 없음.
Figure pct00047
c) [(2R)-2-[(2-니트로페닐)디설파닐]프로필] 카르보노클로리데이트 A16 의 동일계 형성
(2R)-2-[(3-니트로-2-피리딜)디설파닐]프로판-1-올 A15(14 ㎎, 0.057 m㏖)를 CH2Cl2 (0.5 ㎖, 8 m㏖)에 용해시켰다. 피리딘(5.0 ㎕, 0.062 m㏖), 그 다음 트리포스겐(6 ㎎, 0.020 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 아르곤 하에서 30분 동안 교반하였고, 그 때 LCMS(Et2NH 켄칭)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. LCMS: RT= 1.94분, 346.4 [M+Et2NH]+
d) (R)-2-((3-니트로피리딘-2-일)디설파네일)프로필((S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1 H,12 H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b]퀴놀린-4-일)카르바메이트 3
별개의 플라스크에, 화합물 1.2HCl(22 ㎎, 0.044 m㏖)를 CH2Cl2(1 ㎖, 15.60 m㏖, 100 질량%), DIPEA(45 ㎕, 0.258 m㏖) 및 피리딘(22 ㎕, 0.272 m㏖)에 용해시켰다. 클로로포르메이트 반응 혼합물을 아닐린 용액에 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였고, 그 때 LCMS는 클로로포르메이트가 소모되었지만 화합물 3이 관찰되지 않았다는 것을 나타내었다. 추가의 트리포스겐을 반응에 첨가하고, 20분 동안 교반하였고, 그 때 LCMS는 소량의 생성물의 존재를 나타내었다. 추가의 트리포스겐을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였고, 그 때 LCMS는 주성분이 화합물 3이라는 것을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, isolera 크로마토그래피(CH2Cl2 중의 0~4% MeOH), 그 다음 역상 isolera 크로마토그래피(용리액 A 중의 0~60% 용리액 B)로 정제시켜 동결 건조 후 순수한 화합물 3(8 ㎎, 0.01153 m㏖, 25.91% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
용리액 A = H2O 중의 0.01% HCO2H
용리액 B = MeCN 중의 0.01% HCO2H
LCMS: RT = 1.95분, 694.6 [M+H]+.
실시예 4
Figure pct00048
Figure pct00049
a) 5-Fmoc-알라닌-6-플루오로-8-아미노-1-테트랄론 A17
164 ㎎(0.84 m㏖)의 5,8-디아미노-6-플루오로-1-테트랄론 A8을 6 ㎖의 THF에 용해시키고, 315 ㎎(1.01 m㏖, 1.2 eq.)의 Fmoc-Ala-OH 및 138 ㎎의 HOAt(1.01 m㏖, 1.2 eq.)를 용액에 첨가하였다. 그 다음 275 ㎕(1.24 m㏖)의 EDCI 및 142 ㎕(1.02 m㏖)의 Et3N을 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 냉동고에 저장하였다. 반응 혼합물을 50 ㎖ EtOAc/50 ㎖ H2O로 후처리하고, 그 다음 유기층을 H2O, 그 다음 염수로 세척하고, 그 후 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조 생성물을 디클로로메탄/메탄올을 사용하여 실리카 칼럼 상에서 정제시켜 260 ㎎의 목적하는 생성물을 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 488.93; 계산치 488.20
b) A18
210 ㎎의 5-Fmoc-알라닌-6-플루오로-8-아미노-1-테트랄론 A17 (0.43m㏖), 114 ㎎의 트리온 A6(0.43 m㏖) 및 109 ㎎의 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(0.43 m㏖)를 30 ㎖의 무수 톨루엔에 용해시켰다. 딘-스탁 트랩을 장치하고, 반응을 오일욕으로 130℃에서 4시간 동안 가열시켜, 응축기에 수층을 생성하였다. 용액을 경사분리시키고, 감압 하에서 건조시켜 270 ㎎의 목적하는 생성물을 제공하였다. 용액의 용매를 증발시키고, 0.5 ㎖의 NMP에 용해시키고, 14 ㎖의 디에틸 에테르에서 침전시켰다. 원심분리시켜 갈색 고체를 제공하였고, 이것을 다시 에테르로 세척하였다. 생성된 고체를 건조시켜 추가의 30 ㎎의 조 생성물을 제공하였다. 전체 목적하는 조 생성물(300 ㎎, 97% 수율)을 추가로 정제시키지 않고 사용하였다. LCMS ESI [M + H] = 716.01; 계산치 715.26
c) A19
220 ㎎(0.31 m㏖)의 A18을 2 ㎖의 NMP에 용해시키고, 150 ㎕(1.28 m㏖)의 4-메틸피페리딘을 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완결 후, 반응 혼합물을 0.1% TFA 물/0.1% TFA 아세토니트릴로 정제시켰다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 합하고, 그 다음 동결시키고, 동결건조 후 42 ㎎(28% 수율)의 목적하는 생성물을 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 493.23; 계산치 493.19
d) A20
23 ㎎(0.046 m㏖)의 A19를 0.5 ㎖의 NMP에 용해시켰다. 35 ㎎(0.11 m㏖)의 Boc-Val-NHS 및 20 ㎕(0.12 m㏖)의 DIPEA를 상기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 반응의 진행을 LC-MS로 확인하였다. 반응 완결 후, 생성물을 에테르에서 침전시키고, 에테르로 2회 세척하였다. 잔류물을 공기 건조시켜 32 ㎎(99% 수율)의 갈색 고체를 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 693.67; 계산치 692.31
e) A21
조 A20을 0.3 ㎖ DCM 중의 0.1 ㎖ TFA로 처리하고, 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완결 후, DCM 및 트리플루오로아세트산을 진공 하에서 제거하였다. 잔류물을 진공 하에서 밤새 건조시켜 27 ㎎(98% 수율)의 조 생성물을 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 592.04; 계산치 592.26. 1HNMR (DMSO-d6): δ ppm 10.07 (s, 1 H), 8.78 (cd, J = 6.9 Hz, 1 H), 8.10 (d, J = 4.1 Hz, 3 H), 7.82 (d, J = 11.0 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 6.53 (s, br, 1 H), 5.43 (s, 2 H), 5.27 (s, 2 H), 4.67 (q, J = 6.7 Hz, 1 H), 4.67 (q, J = 7.0 Hz, 1 H), 3.63 (q, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.17 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 2.96 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.14-2.07 (m, 1 H), 2.05-1.94 (m, 2 H), 1.87 (p, J = 7.3 Hz, 2 H), 1.46 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.96 (dd, J = 6.8, 4.2 Hz, 6 H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).
f) 4
12 ㎎(0.017 m㏖)의 Mal-PEG8-NHS A14를 1 ㎖의 NMP에 용해시켰다. 10.3 ㎎(0.017 m㏖)의 조 A21 및 12 ㎕(0.0094 m㏖)의 DIPEA를 상기 용액에 첨가하였다. 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 출발 물질 A21의 소모 후, 반응 혼합물을 8 ㎕의 TFA로 산성화시키고, 그 다음 0.1% TFA 물/0.1% TFA 아세토니트릴로 정제시켜 동결건조 후 목적하는 생성물 11 ㎎(54 % 수율)을 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 1166.09; 계산치 1165.52
1HNMR (DMSO-d6): δ ppm 9.86 (s, 1 H), 8.26 (d, J = 6.7 Hz, 1 H), 8.00 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.80 (d, J = 11 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 7.00 (s, 2 H), 5.43 (s, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 4.54 (q, J = 6.7 Hz, 1 H), 4.26 (dd, J = 8.2, 6.7 Hz, 1 H), 3.81-3.48 (m, H2O와 중첩), 3.35 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.20-3.10 (m, 4 H), 2.96 (t, 2 H), 2.40 (t, J = 6.3 Hz, 1 H), 2.32 (m, 2 H), 2.06-1.93 (m, 3 H), 1.93-1.80 (m, 2 H), 1.41 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.91-0.80 (m, 9 H).
실시예 5
Figure pct00050
22 ㎎(0.037 m㏖)의 A21 및 14 ㎎(0.045 m㏖)의 Mal-카프로일-NHS A22를 0.5 ㎖의 NMP에 용해시키고, 12 ㎕(0.068 m㏖)의 DIPEA를 이 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완결 후, 반응을 12 ㎕의 트리플루오로아세트산으로 켄칭하고, 0.1% TFA 물/0.1% TFA 아세토니트릴을 사용하여 분취용-HPLC 상에서 정제시켜 동결건조 후 10 ㎎(34% 수율)의 목적하는 생성물을 제공하였다. LCMS ESI [M + H] = 785.88; 계산치 785.33. 1HNMR (DMSO-d6): δ ppm 9.86 (s, 1 H), 8.23 (d, J = 6.7 Hz, 1 H), 7.84 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.80 (d, J = 11 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 6.98 (s, 2 H), 6.55-6.50 (m, 1 H), 5.43 (s, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 4.53 (q, J = 7.0 Hz, 1 H), 4.22 (dd, J = 8.7, 6.7 Hz, 1 H), 3.16 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 2.96 (t, 2 H), 2.22- 2.07(m, 3 H), 2.04-1.94 (m, 3 H), 1.93-1.81 (m, 2 H), 1.49-1.43 (m, 4 H), 1.40 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.15 (q, J = 7.5 Hz, 2 H), 0.92-0.82 (m, 9 H).
실시예 6
Figure pct00051
27 ㎎의 A13(0.0365 m㏖) 및 13 ㎎의 Mal-카프로일-NHS A22(0.04217 m㏖)를 0.5 ㎖의 NMP에 용해시키고, 10 ㎕의 DIPEA를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고, LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완결 후, 반응 혼합물을 0.1% TFA/ACN을 사용하여 분취용-HPLC 상에서 정제시켜 동결건조 후 9 ㎎(26%)의 목적하는 생성물을 제공하였다. LCMS (0.1% 포름산/아세토니트릴) ESI [M + H] = 933.29; 계산치 933.36. 1HNMR (DMSO-d6): δ ppm 9.70 (s, 1 H), 8.49 (d, J = 5.8 Hz, 1 H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 8.05 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.01 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 7.82 (d, J = 11.0 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 7.26 (s, 2 H), 7.24 (s, 2 H), 7.21-7.15 (m, 1 H), 6.98 (s, 2 H), 6.56 (br, 1 H), 5.43 (s, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 4.58-4.52 (m, 1 H), 4.02 (dt, J = 16.9, 6.0 Hz, 2 H), 3.76 (dd, J = 16.7, 5.9 Hz, 1 H), 3.65 (d, J = 5.7 Hz, 2 H), 3.60 (dd, J = 16.7, 5.4 Hz, 1 H), 3.34 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.17 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 3.10 (dd, J = 13.7, 4.3 Hz, 1 H), 2.97 (t, J = 5.4 Hz, 2 H), 2.84 (dd, J = 13.7, 9.7 Hz, 1 H), 2.08 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.02 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 1.87 (dq, J = 7.3 Hz, 2 H), 1.44 (dt, J = 7.3 Hz, 4 H), 1.20-1.12 (m, 2 H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).
실시예 7 - 접합
전통적인 접합
트라스투주맙으로부터 유래된 항-HER2 항체 및 음성 대조군 항체인 NIP228을 전장 항체로서 사용하여 ADC를 제조하였다. 항체를 37℃에서 1× PBS, 1 mM EDTA, pH 7.2 중의 50 mM 트리스-(2-카르복시에틸)-포스핀(TCEP)과 혼합하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 진탕함으로써 항체의 환원을 수행하였다. 그 다음 환원된 항체를 디메틸 설폭시드(Sigma-Aldrich) 중의 5 몰 과량의 화합물 2를 사용하여 접합을 위해 사용하였다. 접합 용액을 위한 10% 최종 DMSO 농도에 도달하기 위해서 완충액의 부피를 조정하였다. 1시간 동안 진탕하면서 실온에서 접합을 수행하였다. 이 방법을 사용하여 하기 접합체를 제조하였다:
Figure pct00052
접합체 Her2-2
Figure pct00053
접합체 Nip228-2
Figure pct00054
접합체 Her2-4
Figure pct00055
접합체 Nip228-4
Figure pct00056
접합체 Her2-5
Figure pct00057
접합체 Nip228-5
Figure pct00058
접합체 Her2-6
Figure pct00059
접합체 Nip228-6
조작된 접합
허셉틴 및 Nip228 항체를 239 및 240 위치 사이에 삽입된 시스테인을 갖도록 조작하였고, 문헌[Dimasi, N., et al., Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 510.1021/acs.molpharmaceut.6b00995)]에 기재된 방법에 따라 생성시켰다. 50 mM 트리스-(2-카르복시에틸)-포스핀(TCEP)를 사용하여 이러한 항체를 제조하였고, 3시간 동안 진탕하면서 37℃에서 PBS 1×, 1 mM EDTA, pH 7.2 중에서 50 mM로 환원시켰다. 캡핑되지 않은 항체를 4℃에서 밤새 접합 완충액(PBS 1×, 1 mM EDTA, pH 7.2)으로 투석시켰다. 그 다음 회수된 항체를 실온에서 4시간 동안 진탕하면서 20 몰 과량의 50 mM 데히드로아스코르브산(dhAA)을 사용하여 산화를 위해서 사용하였다. 그 다음 환원된 항체를 100% 디메틸 설폭시드에서 제조된 항체보다 8 몰 과량의 페이로드(10% 최종 DMSO 농도, Sigma-Aldrich)를 사용한 접합을 위해서 사용하였다. 접합은 실온에서 1시간 동안 진탕하면서 수행하였다. 이 방법을 사용하여 하기 접합체를 제조하였다:
Figure pct00060
접합체 Her2*-2
Figure pct00061
접합체 Nip228*-2
정제
접합 후, ADC를 세라믹 수산화인회석 HPLC(CHT) 상에서 정제시켜 유리 화합물 2 및 다른 오염물질을 제거하였다. 5 ㎖ Bio-Scale Mini CHT Type II, 40 ㎛ 카트리지 칼럼(Bio-Rad) 및 AKTA Pure 시스템(GE Healthcare)을 사용하여 정제를 수행하였다. 로딩 전에 ADC를 순수한 물에 1:3 비율로 희석시켰다. 로딩하고, 2배 칼럼 부피의 완충액 A로 세척한 후, ADC를 30분 동안 50% 완충액 B의 선형 구배를 사용하여 용리시켰다. (완충액 A: 10 mM 인산나트륨 완충액, pH7.0; 완충액 B: 10 mM 인산나트륨/2M 염화나트륨, pH7.0). SEC를 사용하여 ADC를 함유하는 분획을 특징규명하였다. 분획을 약 1 ㎎/㎖의 ADC까지 농축시켰다. SEC를 사용하여 ADC의 단량체 함량, 응집물 및 단편을 분석하였다. MassHunter 소프트웨어(Agilent)를 사용하여 데이터 수집 및 공정을 수행하였다. 0.22 mm 주사기 필터(Pall Corporation)를 사용하여 ADC를 여과하여 가능한 내독소 오염물을 제거하였다. ADC의 분취물을 추가 사용을 위해서 -80℃에서 저장하였다.
접합체 Her2-2는 8.0의 DAR을 갖는 반면, 접합체 Nip228-2는 7.79의 DAR을 가졌다.
접합체 Her2-4는 8.0의 DAR을 갖는 반면, 접합체 Nip228-4는 7.88의 DAR을 가졌다.
접합체 Her2-5는 8.0의 DAR을 갖는 반면, 접합체 Nip228-5는 8.0의 DAR을 가졌다.
접합체 Her2-6은 7.91의 DAR을 갖는 반면, 접합체 Nip228-6은 8.0의 DAR을 가졌다.
접합체 Her2*-2는 2.0의 DAR을 갖는 반면, 접합체 Nip228*-2는 2.0의 DAR을 가졌다.
실시예 8 - 추가 접합
pH 7.4 인산염 완충 식염수(PBS) 중의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP)의 10 mM 용액을, PBS 및 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충액 중의 항체(239번 위치와 240번 위치 사이에 삽입된 시스테인을 갖도록 조작된 허셉틴)(42 ㎎, 280 나노몰)의 20 ㎖ 용액에 2.1 ㎎/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(40 몰 당량/항체, 11.2 마이크로몰, 1.12 ㎖). 환원 혼합물을 실온에서 16시간 동안(또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 오비탈 쉐이커에서 가볍게(60 rpm) 진탕하면서 반응하도록 하였다. 환원된 항체를 스핀 필터 원심분리를 통해, PBS 및 1 mM EDTA를 함유하는 재산화 완충액으로 완충액 교환하여 과량의 환원제를 모두 제거하였다. DMSO 중의 디히드로아스코르브산(DHAA, 30 몰 당량/항체, 7.0 마이크로몰, 141 ㎕)의 50 mM 용액을 상기 환원 완충액 교환 항체(35.2 ㎎, 235 나노몰) 22 ㎖에 첨가하고, 재산화 혼합물을 1.6 ㎎/㎖의 항체 농도에서 가볍게(60 rpm) 진탕하면서 실온에서 2시간 30분 동안 반응하도록 하였다(또는 더 많은 DHAA를 첨가하고, 쇄간 시스테인 이황화물을 개질하기 위한 시스테인 티올의 완전한 재산화가 UHPLC에 의해 관찰될 때까지 더 오래 반응하도록 하였음). 이어서, 재산화 혼합물을 멸균-여과하였다. 10%(v/v) 최종 DMSO 농도 및 10%(v/v) 최종 중탄산나트륨에 대해 1 M 중탄산나트륨 1.16 ㎖를 사용하여 pH 조정된 상기 재산화된 항체 용액(16.8 ㎎, 112 나노몰) 10.5 ㎖에 화합물 3을 DMSO 용액(20 몰 당량/항체, 2.2 마이크로몰, 1.29 ㎖ DMSO 중)으로서 첨가하였다. 용액을 가볍게 진탕하면서 실온에서 2시간 동안 반응하도록 하였다. 이어서, N-아세틸 시스테인(11 마이크로몰, 100 mM의 112 ㎕)을 첨가하여 접합을 켄칭한 후, 정제하고, 50 ㎖ Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하여 25 mM 히스티딘 205 mM 수크로스 pH 6.0 완충액으로 완충액 교환하고, 멸균-여과하고 분석하였다. 25 mM 인산나트륨, 1.5 M 황산암모늄 pH 7.4 완충액 및 25 mM 인산나트륨 pH 7.4 완충액 중의 20% 아세토니트릴(v/v)의 구배로 용리하는 Sepax Proteomix HIC Butyl-NP5 4.6×35 ㎜ 5 ㎛ 칼럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템 상의 214 ㎚ 및 330 ㎚에서의 접합체 Her2*-3의 온전한 샘플에 대한 UHPLC 분석(화합물 3 특정)은 비접합 항체 및 화합물 3의 1개 또는 2개의 분자에 부착된 접합 항체를 나타내며, 이는 항체당 화합물 3 분자수 1.48의 약물/항체 비(DAR)와 일치한다.
200 mM 인산칼륨(pH 6.95), 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올(v/v)을 함유하는 멸균-여과된 SEC 완충액(0.3 ㎖/분)으로 용리하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 ㎛ 4.6×150 ㎜ 칼럼(4 ㎛ 3.0×20 ㎜ 가드 칼럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템 상의 280 ㎚에서의 접합체 Her2*-3의 샘플에 대한 UHPLC 분석은 98%의 단량체 순도를 나타낸다. UHPLC SEC 분석은 8.6 ㎖ 중의 1.38 ㎎/㎖에서 최종 접합체 Her2*-3의 농도를 제공하고, 접합체 Her2*-3의 얻어진 질량은 11.9 ㎎(71% 수율)이다.
실시예 9 - 시험관내 세포독성 시험 - 화합물
CELLTITER-GLO® 키트(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)에서 제안된 프로토콜을 사용하여 시험관내에서 인간 종양 세포주의 사멸을 평가하였다. 간단히 말하면, 80 ㎖ RPMI+10% FBS 중의 3×103개 세포를 백색 벽 96-웰 플레이트(Corning® Costar®, Fisher Scientific, 미국 매사추세츠주 월섬)의 내부 웰에 첨가하였다. 하기 세포주를 시험하였다: A549, HCT116 및 SKBR3. 시험 화합물을 RPMI+10% FBS 중에서 5Ax 스톡(125 μM)으로 희석시켰다. 이어서 처리물을 RPMI+10% FBS에서 1:10으로 연속 희석하였다. 이러한 시리즈 20 ㎖를 세포에 삼중으로 첨가하여, 최고 농도에서 25 mM부터 최저에서 2.5×10-7 mM까지의 범위의 시험 화합물의 9-지점 용량 곡선을 생성하였다. DMSO(비히클) 및 배지-단독 대조군을 또한 포함시켰다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 72시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 기간의 마지막에, 기질 용액(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 100 ㎖를 각각의 웰에 첨가하였다. 엔비젼 멀티라벨 플레이트 판독기(Perkin Elmer, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)를 사용하여 발광을 측정하였다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어(GraphPad Software, Inc., 미국 캘리포니아주 라호야 소재)를 사용하여 데이터를 분석하고 그래프화하였다.
엑사테칸을 화합물 1과의 비교를 위해서 검정에 포함시켰다:
Figure pct00062
.
Figure pct00063
실시예 10 - ADC의 시험관내 세포독성 시험
ADC 시험관내 세포독성 시험을 위해서, 소분자의 프로토콜과 동일한 프로토콜을 사용하였다. HER2-발현 인간 세포주 유방암 세포주 SKBR-3(ATCC) 및 NCI-N87(ATCC)을 시험관내 세포독성 검정에 사용하였다. HER2를 발현하지 않는 MDA-MB-468(ATCC) 유방암 세포주를 음성 대조군으로 사용하였다. 각각의 ADC(300 ㎍/㎖에서 시작)의 5배 연속 희석물을 삼중으로 각각의 웰에 첨가하였다. ADC로 처리된 세포를 6일 동안 배양하였다. 인큐베이션 기간의 마지막에, 기질 용액(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 100 ㎖를 각각의 웰에 첨가하였다. 엔비젼 멀티라벨 플레이트 판독기(Perkin Elmer, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)를 사용하여 발광을 측정하였다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어(GraphPad Software, Inc., 미국 캘리포니아주 라호야 소재)를 사용하여 데이터를 분석하고 그래프화하였다.
Figure pct00064
실시예 11 - ADC의 추가 시험관내 세포독성 시험
준컨플루언트(sub-confluent)(80~90% 컨플루언시) T75 플라스크로부터의 세포의 농도와 생존도를 트립판 블루 염색에 의해 측정하고, LUNA-II™ 자동화 세포 계수기를 사용하여 계수한다. 세포를 2×105/㎖로 희석하고, 96-웰의 편평 바닥 플레이트에 분배하였다(50 ㎕/웰).
필터-멸균된 ADC를 세포 배양 배지에 희석하여 항체-약물 접합체(ADC, 20 ㎍/㎖)의 모액(1 ㎖)을 제조하였다. 100 ㎕를 900 ㎕의 세포 배양 배지에 연속으로 옮겨 24-웰 플레이트에서 ADC 모액의 10배 희석액(8×) 세트를 제조하였다. 전날 시딩된 50 ㎕ 세포 현탁액을 함유하는 96-웰 플레이트의 4개의 복제 웰에 ADC 희석액을 분배하였다(50 ㎕/웰). 대조군 웰은 50 ㎕ 세포 배양 배지를 수용했다. 세포와 ADC를 함유하는 96-웰 플레이트를 CO2-가스가 있는 인큐베이터에서 노출 시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다.
인큐베이션 기간의 종료 시, MTS 분석으로 세포 생존도를 측정했다. MTS(Promega)를 각 웰에 분배하고(20 ㎕/웰), CO2-가스가 있는 인큐베이터에서 37℃로 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰 흡광도를 490 ㎚에서 측정하였다. 4개의 대조군 미처리 웰에서의 평균 흡광도(100%)와 비교하여 4개의 ADC-처리 웰의 평균 흡광도로부터 세포 생존 백분율을 계산하였다. 비선형 곡선 피트 알고리즘(가변 기울기를 갖는 S자형 용량-반응 곡선)을 사용하는 GraphPad Prism을 사용하여 용량-반응 데이터로부터 IC50을 결정하였다.
ADC 인큐베이션 시간은 MDA-MB-468 및 NCI-N87에 대해 각각 4일 및 7일이었다. MDA-MB-468 및 NCI-N87은 Glutamax + 10%(v/v) HyClone™ 우태아 혈청이 포함된 RPMI 1640에서 배양하였다.
Figure pct00065
실시예 12 - 마우스 이종이식편 모델(JIMT-1)에서의 생체내 연구
마우스
암컷 SCID 마우스(Fox Chase SCID®, CB17/Icr-Prkdcscid/IcoIcrCrl, Charles River)는 연구 1일차에 체중(BW) 범위가 17.3 내지 26.3 g인 10주령이었다. 동물들에게 18.0% 미정제 단백질, 5.0% 미정제 지방 및 5.0% 미정제 섬유로 구성된 NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet® 및 물(역삼투, 1 ppm Cl)을 자유식으로 공급했다. 20~22℃(68~72℉) 및 40~60% 습도에서 12-시간 광 주기로 조사된 고정 마이크로아이솔레이터의 Enrich-o'cobs™ Laboratory Animal Bedding 상에 마우스를 수용했다. Charles River Discovery Services는 구속, 사육, 수술 절차, 사료 및 체액 조절, 수의학 관리와 관련하여 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침의 권고 사항을 명확하게 준수한다. Charles River Discovery Services의 동물 관리 및 사용 프로그램은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 허용된 표준을 준수하는 것을 보장하는 AAALAC(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International)의 인증을 받았다.
종양 세포 배양
JIMT-1 인간 유방 암종 세포를 10% 우태아 혈청, 100 단위/㎖ 페니실린 G 나트륨, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 황산염, 25 ㎍/㎖ 젠타미신 및 2 mM 글루타민을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium: DMEM)에서 성장시켰다. 5% CO2 및 95% 공기의 분위기에서 37에서 가습 인큐베이터 내의 조직 배양 플라스크에서 세포 배양물을 유지시켰다.
생체내 이식 및 종양 성장
이식을 위해서 사용되는 JIMT-1 종양 세포를 지수 성장기(log phase growth)에 수거하고, 인산염 완충 식염수(PBS) 중의 50% Matrigel® Matrix(Corning®)에 1×108개 세포/㎖의 농도로 현탁시켰다. 각각의 시험 마우스의 우측 옆구리에 1×107개 JIMT-1 세포(0.1 ㎖ 세포 현탁액)를 피하 주사하고, 평균 크기가 150 내지 250 ㎣의 목표 범위에 근접함에 따라 종양 성장을 모니터링하였다. 캘리퍼를 사용하여 종양을 주 2회 2차원으로 측정하였고, 하기 식을 사용하여 부피를 계산하였다:
Figure pct00066
상기 식에서, w는 종양의 폭이고, l은 종양의 길이이다. 종양 중량은 1 ㎎이 1 ㎣의 종양 부피에 해당한다고 가정하여 추정될 수 있다.
연구 제1일로서 지정된, 종양 이식 21일 후, 172 내지 221 ㎣ 범위의 개별 종양 부피를 갖는 동물을 9개의 군(n = 8)으로 분류하였는데, 군 평균 종양 부피는 199 내지 202 ㎣이었다.
치료
확립된 피하 JIMT-1 이종이식편(172 내지 221 ㎣)을 갖는 암컷 SCID 마우스(n = 8)의 9마리 군에서 제1일에 치료를 시작하였다. 제1일에 단일 주사(qd×1)로 정맥내(i.v.) 투여된 3 ㎎/㎏에서 각각의 시험 작용제를 평가하였다. 비히클-처리군을 종양 이식 및 성장에 대한 대조군으로서 제공하였다.
연구가 제78일에 완결될 때까지 종양을 주 2회 측정하였다. 종양이 1000 ㎣의 종점 부피에 도달하거나 최종일 중 빠른 날짜에 각각의 마우스를 안락사시켰다. 종점까지의 시간(time to endpoint: TTE)을 하기 식에 의해서 각각의 마우스에 대해서 계산하였다:
Figure pct00067
상기 식에서, TTE는 일 단위로 표현되고, 종점 부피는 ㎣ 단위로 표현되고, b는 절편이고, m은 로그-변환된 종양 성장 데이터 세트의 선형 회귀에 의해서 얻어진 선의 기울기이다. 중간 TTE의 증가 백분율로서 정의된 종양 성장 지연 백분율(%TGD)로부터 치료 결과를 결정하였고, 군들 간의 차이는 로그순위 생존 분석법(logrank survival analysis)을 사용하여 P≤0.05에서 통계학적으로 유의하다고 간주되었다.
마지막 날에 연구에 남아있는 동물의 종양 부피로부터 치료 효능을 결정할 수 있다. 종양이 종점 부피에 도달하지 않았던 남아있는 동물의 수(n)에서 연구 마지막 날에 중간 종양 부피의 수로서 MTV(n)를 정의하였다.
연구 기간 동안 관찰된 퇴행 반응의 발생률 및 정도로부터 치료 효능을 또한 결정할 수 있다. 치료는 동물에서 종양의 부분 퇴행(PR) 또는 완전 퇴행(CR)을 야기시킬 수 있다. PR 반응에서, 종양 부피는 연구 과정 동안 3회 연속 측정에 대하여 1일차 부피의 50% 이하였고, 이러한 3회 측정 중 하나 이상에 대하여 13.5 ㎣ 이상이었다. CR 반응에서, 종양 부피는 연구 과정 동안 3회 연속 측정에 대하여 13.5 ㎣ 미만이었다. 연구 종료시 CR 반응이 있는 동물은 추가적으로 무종양 생존자(TFS)로서 분류하였다. 퇴행 반응에 대하여 동물을 모니터링하였다.
결과
모든 요법은 양호하게 내약성이었다. 대조군에 대한 중간 TTE는 39.4일이었고, 78일 연구 동안 38.6일(98%)의 최대 가능한 TGD를 달성하였다.
Figure pct00068
Figure pct00069
4개의 트라스투주맙-ADC는 98%의 최대 TGD를 생성하였고, 각각은 부분 종양 퇴행 및 완전 종양 퇴행 둘 다를 나타내었다.
실시예 12 - 마우스 이종이식편 모델(NCI-N87)에서의 생체내 연구
마우스
암컷 SCID 마우스(Fox Chase SCID®, CB17/Icr-Prkdcscid/IcoIcrCrl, Charles River)는 연구 제1일에 체중(BW) 범위가 15.9 내지 26.4 g인 12주령이었다. 동물에게 18.0% 미정제 단백질, 5.0% 미정제 지방 및 5.0% 미정제 섬유로 구성된 NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet® 및 물(역삼투, 1 ppm Cl)을 자유식으로 공급하였다. 20~22℃(68~72℉) 및 40~60% 습도에서 12-시간 광 주기로 조사된 고정 마이크로아이솔레이터의 Enrich-o'cobs™ Laboratory Animal Bedding 상에 마우스를 수용하였다. CR Discovery Services는 구속, 사육, 수술 절차, 사료 및 체액 조절, 수의학 관리와 관련하여 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침의 권고 사항을 명확하게 준수한다.
CR Discovery Services의 동물 관리 및 사용 프로그램은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 허용된 표준을 준수하는 것을 보장하는 AAALAC(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International)의 인증을 받았다.
종양 세포 배양
10% 우태아 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 황산염 및 25 ㎍/㎖ 겐타마이신이 보충된 RPMI-1640 배지에서 인간 NCI-N87 위 암종 세포를 배양하였다. 5% CO2 및 95% 공기의 분위기 중의 37℃의 가습 인큐베이터 내 조직 배양 플라스크에서 세포를 성장시켰다.
생체내 이식 및 종양 성장
이식을 위해서 사용되는 NCI-N87 종양 세포를 지수 성장기(log phase growth)에 수거하고, 인산염 완충 식염수(PBS) 중의 50% Matrigel® Matrix(Corning®)에 1×108개 세포/㎖의 농도로 현탁시켰다. 각각의 시험 마우스의 우측 옆구리에 1×107개 NCI-N87 세포(0.1 ㎖ 세포 현탁액)를 피하 주사하고, 평균 크기가 150 내지 250 ㎣의 목표 범위에 근접함에 따라 종양 성장을 모니터링하였다. 캘리퍼를 사용하여 종양을 주 2회 2차원으로 측정하였고, 하기 식을 사용하여 부피를 계산하였다:
Figure pct00070
상기 식에서, w는 ㎜ 단위의 종양의 폭이고, l은 ㎜ 단위의 종양의 길이이다. 종양 중량은 1 ㎎이 1 ㎣의 종양 부피에 해당한다고 가정하여 추정될 수 있다.
연구 제1일로서 지정된, 종양 이식 40일 후, 144 내지 256 ㎣ 범위의 개별 종양 부피를 갖는 동물을 9개의 군(n = 8)으로 분류하였는데, 군 평균 종양 부피는 190 내지 192 ㎣이었다.
치료
확립된 피하 NCI-N87 이종이식편(190 내지 192 ㎣)을 갖는 암컷 SCID 마우스(n = 8)의 9마리 군에서 제1일에 치료를 시작하였다. 제1일에 단일 주사(qd×1)로 정맥내(i.v.) 투여된 3 ㎎/㎏에서 각각의 시험 작용제를 평가하였다. 비히클-처리군을 종양 이식 및 성장에 대한 대조군으로서 제공하였다.
연구가 제59일에 완결될 때까지 종양을 주 2회 측정하였다. 종양이 800 ㎣의 종점 부피에 도달하거나 최종일 중 빠른 날짜에 각각의 마우스를 안락사시켰다. 종양 진행이 둔화되었고, 평가 가능한 모든 동물이 마지막 날에 연구에 남아있었다. 어떠한 동물도 종양 부피 종점에 도달하지 않았기 때문에, 효능 평가는 연구 마지막 날에 종양 성장 저해 백분율(TGI%)을 사용하였다. 최종일(제59일)에 동물의 수, n에 대한 중간 종양 부피인 MTV(n)을 총 종양 부피에 대해서 각각의 군에 대해서 결정하였다. %TGI는 대조군의 MTV의 백분율로서 표현된, 지정된 대조군(군 1)의 MTV와 약물-처리군의 MTV 간의 차이로서 정의하였다.
Figure pct00071
마지막 날에 연구에 남아있는 동물의 종양 부피로부터 그리고 퇴행 반응의 수 및 크기로부터 치료 효능을 또한 결정할 수 있다. MTV(n)는 남아있는 평가 가능한 동물의 수, n에서 최종일(제59일)에 중간 종양 부피로서 정의된다.
치료는 동물에서 종양의 부분 퇴행(PR) 또는 완전 퇴행(CR)을 야기시킬 수 있다. PR 반응에서, 종양 부피는 연구 과정 동안 3회 연속 측정에 대하여 1일차 부피의 50% 이하였고, 이러한 3회 측정 중 하나 이상에 대하여 13.5 ㎣ 이상이다. CR 반응에서, 종양 부피는 연구 동안 3회 연속 측정에 대하여 13.5 ㎣ 미만이다. PR 또는 CR 이벤트에 대하여 연구 기간 동안 한 번만 동물에게 점수를 매기고, PR 및 CR 두 기준 모두 충족된 경우에만 CR로 점수를 매겼다.
결과
모든 요법은 허용 가능하게 내약성이었다. 대조군 종양은 둔화된 진행성의 성장을 나타내었지만, 연구 완료까지 800 ㎣ 분석 종점에 도달하지 않았다. 연구 마지막 날(제59일)에 종양 성장 저해를 평가하였다.
Figure pct00072
Figure pct00073
모든 트라스투주맙-ADC 치료제는 비히클-대조군에 비해서 통계학적으로 유의한 제59일 TGI를 생성하였다(P < 0.001).
본 발명의 진술
1. 하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
[화학식 I]
Figure pct00074
상기 식에서, RL은 하기로부터 선택되는, 리간드 단위에 연결하기 위한 링커이다:
(ia):
Figure pct00075
(상기 식에서,
Q는
Figure pct00076
이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기, 트리펩티드 잔기 또는 테트라펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
X는 하기이고:
Figure pct00077
상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c1 = 0 또는 1이고, c2 = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0이고;
GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
Figure pct00078
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
2. 진술 1에 있어서, RL은 화학식 Ia를 갖는, 화합물.
3. 진술 2에 있어서, Q는 아미노산 잔기인, 화합물.
4. 진술 3에 있어서, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp으로부터 선택되는, 화합물.
5. 진술 2에 있어서, Q는 디펩티드 잔기인, 화합물.
6. 진술 5에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Phe-Lys-C=O,
NH -Val-Ala- C=O,
NH -Val-Lys- C=O,
NH Ala-Lys- C=O,
NH-Val-Cit- C=O,
NH-Phe-Cit- C=O,
NH-Leu-Cit- C=O,
NH-Ile-Cit- C=O,
NH-Phe-Arg- C=O,
NH-Trp-Cit- C=O 및
NH -Gly-Val- C=O.
7. 진술 6에 있어서, Q는 NH-Phe-Lys- C=O, NH-Val-Cit- C=O 및 NH-Val-Ala- C=O로부터 선택되는, 화합물.
8. 진술 2에 있어서, Q는 트리펩티드 잔기인, 화합물.
9. 진술 8에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH-Glu-Val-Ala-C=O-,
NH-Glu-Val-Cit-C=O,
NH-αGlu-Val-Ala-C=O 및
NH-αGlu-Val-Cit-C=O.
10. 진술 2에에 있어서, Q는 테트라펩티드 잔기인, 화합물.
11. 진술 10에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
12. 진술 11에 있어서, Q는 NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O인, 화합물.
13. 진술 2 내지 진술 12 중 어느 하나에 있어서, a는 0 내지 3인, 화합물.
14. 진술 13에 있어서, a는 0 또는 1인, 화합물.
15. 진술 13에 있어서, a는 0인, 화합물.
16. 진술 2 내지 15 중 어느 하나에 있어서, b1은 0 내지 8인, 화합물.
17. 진술 16에 있어서, b1은 0인, 화합물.
18. 진술 16에 있어서, b1은 2인, 화합물.
19. 진술 16에 있어서, b1은 3인, 화합물.
20. 진술 16에 있어서, b1은 4인, 화합물.
21. 진술 16에 있어서, b1은 5인, 화합물.
22. 진술 16에 있어서, b1은 8인, 화합물.
23. 진술 2 내지 진술 15 및 진술 17 중 어느 하나에 있어서, b2는 0 내지 8인, 화합물.
24. 진술 23에 있어서, b2는 0인, 화합물.
25. 진술 23에 있어서, b2는 2인, 화합물.
26. 진술 23에 있어서, b2는 3인, 화합물.
27. 진술 23에 있어서, b2는 4인, 화합물.
28. 진술 23에 있어서, b2는 5인, 화합물.
29. 진술 23에 있어서, b2는 8인, 화합물.
30. 진술 2 내지 29 중 어느 하나에 있어서, c1은 0인, 화합물.
31. 진술 2 내지 29 중 어느 하나에 있어서, c1은 1인, 화합물.
32. 진술 2 내지 31 중 어느 하나에 있어서, c2는 0인, 화합물.
33. 진술 2 내지 30 중 어느 하나에 있어서, c2는 1인, 화합물.
34. 진술 2 내지 제33 중 어느 하나에 있어서, d는 0 내지 3인, 화합물.
35. 진술 34에 있어서, d는 1 또는 2인, 화합물.
36. 진술 34에 있어서, d는 2인, 화합물.
37. 진술 2 내지 진술 33 중 어느 하나에 있어서, d는 5인, 화합물.
38. 진술 2 내지 진술 12 중 어느 하나에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 1이고, c2는 0이고, d는 2이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
39. 진술 38에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
40. 진술 2 내지 12 중 어느 하나에 있어서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 0이고, b1은 0 내지 8인, 화합물.
41.진술 40에 있어서, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
42. 진술 2 내지 진술 12 중 어느 하나에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 1이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
43. 진술 42에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
44. 진술 2 내지 12 중 어느 하나에 있어서, b1은 0이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, a와 d 중 하나는 0이고, a와 d 중 다른 하나는 1 내지 5인, 화합물.
45. 진술 41에 있어서, a와 d 중 다른 하나는 1 또는 5인, 화합물.
46. 진술 2 내지 진술 12 중 어느 하나에 있어서, a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 1이고, d는 2이고, b1은 0 내지 8인, 화합물.
47. 진술 46에 있어서, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
48. 진술 2 내지 진술 47 중 어느 하나에 있어서, GL은 하기로부터 선택되는, 화합물.
Figure pct00079
Figure pct00080
49. 진술 48에 있어서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택되는, 화합물.
50. 진술 48에 있어서, GL은 GL1-1인, 화합물.
51. 진술 1에 있어서, RL은 화학식 Ib를 갖는, 화합물.
52. 진술 51에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 H인, 화합물.
53. 진술 51에 있어서, RL1은 H이고, RL2는 메틸인, 화합물.
54. 진술 51에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 메틸인, 화합물.
55. 진술 51에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌기를 형성하는, 화합물.
56. 진술 51에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로부틸렌기를 형성하는, 화합물.
57. 진술 51 내지 56 중 어느 하나에 있어서, e는 0인, 화합물.
58. 진술 51 내지 56 중 어느 하나에 있어서, e는 1인, 화합물.
59. 하기 화학식 IV의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 IV`]
Figure pct00081
상기 식에서, L은 리간드 단위(즉, 표적화제)이고, DL은 하기 화학식 III의 약물 링커 단위이고:
[화학식 III]
Figure pct00082
RLL은 하기로부터 선택되는, 상기 리간드 단위에 연결된 링커이고:
(ia'):
Figure pct00083
(상기 식에서, Q 및 X는 진술 1 내지 47 중 어느 하나에 정의된 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임);
(ib'):
Figure pct00084
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 진술 1 및 52 내지 56 중 어느 하나에 정의된 바와 같음);
p는 1 내지 20의 정수이다.
60. 진술 59에 있어서, GLL은 하기로부터 선택되는, 접합체.
Figure pct00085
Figure pct00086
61. 진술 60에 있어서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택되는, 접합체.
62. 진술 61에 있어서, GLL은 GLL1-1인, 접합체.
63. 진술 59 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 리간드 단위는 세포 결합제인, 접합체.
64. 진술 59 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 리간드 단위는 항체 또는 이의 활성 단편인, 접합체.
65. 진술 64에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 종양 관련 항원에 대한 항체 또는 항체 단편인, 접합체.
66. 진술 65에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 (1) 내지 (89)에서 선택된 하나 이상의 종양 관련 항원 또는 세포 표면 수용체에 결합하는 항체인, 접합체:
(1) BMPR1B;
(2) E16;
(3) STEAP1;
(4) 0772P;
(5) MPF;
(6) Napi3b;
(7) Sema 5b;
(8) PSCA hlg;
(9) ETBR;
(10) MSG783;
(11) STEAP2;
(12) TrpM4;
(13) CRIPTO;
(14) CD21;
(15) CD79b;
(16) FcRH2;
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20R-알파;
(21) 브레비칸;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R;
(27) CD22;
(28) CD79a;
(29) CXCR5;
(30) HLA-DOB;
(31) P2X5;
(32) CD72;
(33) LY64;
(34) FcRH1;
(35) IRTA2;
(36) TENB2;
(37) PSMA - FOLH1;
(38) SST;
(38.1) SSTR2;
(38.2) SSTR5;
(38.3) SSTR1;
(38.4) SSTR3;
(38.5) SSTR4;
(39) ITGAV;
(40) ITGB6;
(41) CEACAM5;
(42) MET;
(43) MUC1;
(44) CA9;
(45) EGFRvIII;
(46) CD33;
(47) CD19;
(48) IL2RA;
(49) AXL;
(50) CD30 - TNFRSF8;
(51) BCMA - TNFRSF17;
(52) CT Ags - CTA;
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;
(54) CLEC14A;
(55) GRP78 - HSPA5;
(56) CD70;
(57) 줄기세포 특이적 항원;
(58) ASG-5;
(59) ENPP3;
(60) PRR4;
(61) GCC - GUCY2C;
(62) Liv-1 - SLC39A6;
(63) 5T4;
(64) CD56 - NCMA1;
(65) CanAg;
(66) FOLR1;
(67) GPNMB;
(68) TIM-1 - HAVCR1;
(69) RG-1/전립선 종양 표적 민딘 - 민딘/RG-1;
(70) B7-H4 - VTCN1;
(71) PTK7;
(72) CD37;
(73) CD138 - SDC1;
(74) CD74;
(75) 클라우딘 - CLs;
(76) EGFR;
(77) Her3;
(78) RON - MST1R;
(79) EPHA2;
(80) CD20 - MS4A1;
(81) 테나신 C - TNC;
(82) FAP;
(83) DKK-1;
(84) CD52;
(85) CS1 - SLAMF7;
(86) 엔도글린 - ENG;
(87) 아넥신 A1 - ANXA1;
(88) V-CAM(CD106) - VCAM1;
(89) ASCT2(SLC1A5).
67. 진술 64 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 시스테인 조작된 항체인, 접합체.
68. 진술 64 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 항체(Ab)에 대한 약물(D)의 약물 로딩(p)은 1 내지 약 10의 정수인, 접합체.
69. 진술 62에 있어서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10인, 접합체.
70. 진술 64 내지 63 중 어느 하나에 따른 접합체의 혼합물로서, 항체-약물 접합체의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩이 약 1 내지 약 10인, 접합체의 혼합물.
71. 요법에 사용하기 위한, 진술 59 내지 70 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물.
72. 진술 59 내지 70 중 어느 하나의 접합체 또는 혼합물 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
73. 진술 59 내지 70 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 66에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 대상체에서의 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
74. 진술 73에 있어서, 질환은 암인, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
75. 의학적 치료 방법에 있어서, 진술 59 내지 70 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 72에 따른 약제학적 조성물의 용도.
76. 진술 72의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 의학적 치료 방법.
77. 진술 76에 있어서, 의학적 치료 방법은 암을 치료하기 위한 것인, 방법.
78. 진술 77에 있어서, 환자에게 접합체와 조합된 화학치료제를 투여하는, 방법.
79. 증식성 질환의 치료를 위한 의약의 제조 방법에 있어서, 진술 59 내지 70 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물의 용도.
80. 진술 59 내지 70 중 어느 하나의 진술에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 72에 따른 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질환이 있는 포유동물을 치료하는 방법.
81. 하기 화합물 A:
Figure pct00087
.
82. 제81항에 있어서, 단일 거울상이성질체로서 또는 거울상이성질체 풍부 형태의 화합물.
83. 하기 화학식 VI을 갖는 화합물:
[화학식 VI]
Figure pct00088
상기 식에서, Q는 진술 1, 3, 12 중 어느 하나에서와 같다.
제1 우선 출원(P1)으로부터의 본 발명의 진술
P1-1. 하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
[화학식 I]
Figure pct00089
상기 식에서, RL은 하기로부터 선택되는, 세포 결합제에 연결하기 위한 링커이다:
(ia):
Figure pct00090
(상기 식에서,
Q는
Figure pct00091
이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기, 트리펩티드 잔기 또는 테트라펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
X는
Figure pct00092
이고,
상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고;
GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
Figure pct00093
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
P1-2. 진술 P1-1에 있어서, RL은 화학식 Ia를 갖는, 화합물.
P1-3. 진술 P1-2에 있어서, Q는 아미노산 잔기인, 화합물.
P1-4. 진술 P1-3에 있어서, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp으로부터 선택되는, 화합물.
P1-5. 진술 P1-2에 있어서, Q는 디펩티드 잔기인, 화합물.
P1-6. 진술 P1-5에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Phe-Lys-C=O,
NH -Val-Ala- C=O,
NH -Val-Lys- C=O,
NH Ala-Lys- C=O,
NH-Val-Cit- C=O,
NH-Phe-Cit- C=O,
NH-Leu-Cit- C=O,
NH-Ile-Cit- C=O,
NH-Phe-Arg- C=O,
NH-Trp-Cit- C=O 및
NH -Gly-Val- C=O.
P1-7. 진술 P1-6에 있어서, Q는 NH-Phe-Lys- C=O, NH-Val-Cit- C=O 및 NH-Val-Ala- C=O로부터 선택되는, 화합물.
P1-8. 진술 P1-2에 있어서, Q는 트리펩티드 잔기인, 화합물.
P1-9. 진술 P1-8에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH-Glu-Val-Ala-C=O-,
NH-Glu-Val-Cit-C=O,
NH-αGlu-Val-Ala-C=O 및
NH-αGlu-Val-Cit-C=O.
P1-10. 진술 P1-2에 있어서, Q는 테트라펩티드 잔기인, 화합물.
P1-11. 진술 P1-10에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
P1-12. 진술 P1-11에 있어서, Q는 NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O인, 화합물.
P1-13. 진술 P1-2 내지 진술 P1-12 중 어느 하나에 있어서, a는 0 내지 3인, 화합물.
P1-14. 진술 P1-13에 있어서, a는 0 또는 1인, 화합물.
P1-15. 진술 P1-13에 있어서, a는 0인, 화합물.
P1-16. 진술 P1-2 내지 진술 P1-15 중 어느 하나에 있어서, b1는 0 내지 8인, 화합물.
P1-17. 진술 P1-16에 있어서, b1은 0인, 화합물.
P1-18. 진술 P1-16에 있어서, b1은 2인, 화합물.
P1-19. 진술 P1-16에 있어서, b1은 3인, 화합물.
P1-20. 진술 P1-16에 있어서, b1은 4인, 화합물.
P1-21. 진술 P1-16에 있어서, b1은 5인, 화합물.
P1-22. 진술 P1-16에 있어서, b1은 8인, 화합물.
P1-23. 진술 P1-2 내지 P1-15 및 P1-17 중 어느 하나에 있어서, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P1-24. 진술 P1-23에 있어서, b2는 0인, 화합물.
P1-25. 진술 P1-23에 있어서, b2는 2인, 화합물.
P1-26. 진술 P1-23에 있어서, b2는 3인, 화합물.
P1-27. 진술 P1-23에 있어서, b2는 4인, 화합물.
P1-28. 진술 P1-23에 있어서, b2는 5인, 화합물.
P1-29. 진술 P1-23에 있어서, b2는 8인, 화합물.
P1-30. 진술 P1-2 내지 P1-29 중 어느 하나에 있어서, c는 0인, 화합물.
P1-31. 진술 P1-2 내지 P1-29 중 어느 하나에 있어서, c는 1인, 화합물.
P1-32. 진술 P1-2 내지 P1-31 중 어느 하나에 있어서, d는 0 내지 3인, 화합물.
P1-33. 진술 P1-32에 있어서, d는 1 또는 2인, 화합물.
P1-34. 진술 P1-32에 있어서, d는 2인, 화합물.
P1-35. 진술 P1-2 내지 P1-12 중 어느 하나에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P1-36. 진술 P1-35에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P1-37. 진술 P1-2 내지 P1-12 중 어느 하나에 있어서, a는 1이고, b2는 0이고, c는 0이고, d는 0이고, b1은 0 내지 8인, 화합물.
P1-38. 진술 P1-37에 있어서, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P1-39. 진술 P1-2 내지 P1-12 중 어느 하나에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c는 0이고, d는 1이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P1-40. 진술 P1-39에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P1-41. 진술 P1-2 내지 P1-12 중 어느 하나에 있어서, b1은 0이고, b2는 0이고, c는 0이고, a와 d 중 하나는 0이고, a와 d 중 다른 하나는 1 내지 5인, 화합물.
P1-42. 진술 P1-41에 있어서, a와 d 중 다른 하나는 1 또는 5인, 화합물.
P1-43. 진술 P1-2 내지 P1-42 중 어느 하나에 있어서, GL은 하기로부터 선택되는, 화합물.
Figure pct00094
Figure pct00095
P1-44. 진술 P1-43에 있어서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택되는, 화합물.
P1-45. 진술 P1-43에 있어서, GL은 GL1-1인, 화합물.
P1-46 진술 P1-1에 있어서, RL은 화학식 Ib를 갖는, 화합물.
P1-47. 진술 4 P1-6에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 H인, 화합물.
P1-48. 진술 P1-46에 있어서, RL1은 H이고, RL2는 메틸인, 화합물.
P1-49. 진술 P1-46에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 메틸인, 화합물.
P1-50. 진술 P1-46에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌기를 형성하는, 화합물.
P1-51. 진술 P1-46에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로부틸렌기를 형성하는, 화합물.
P1-52. 진술 v46 내지 P1-51 중 어느 하나에 있어서, e는 0인, 화합물.
P1-53. 진술 P1-46 내지 P1-51 중 어느 하나에 있어서, e는 1인, 화합물.
P1-54. 하기 화학식 IV의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 IV]
Figure pct00096
상기 식에서, L은 리간드 단위(즉, 표적화제)이고, DL은 하기 화학식 III의 약물 링커 단위이고,
[화학식 III]
Figure pct00097
RLL은 하기로부터 선택되는, 상기 리간드 단위에 연결된 링커이고:
(ia'):
Figure pct00098
(상기 식에서, Q 및 X는 진술 P1-1 내지 P1-42 중 어느 하나에 정의된 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임);
(ib'):
Figure pct00099
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 진술 P1-1 및 P1-47 내지 P1-51 중 어느 하나에 정의된 바와 같음);
p는 1 내지 20의 정수이다.
P1-55. 진술 P1-54에 있어서, GLL은 하기로부터 선택되는, 접합체.
Figure pct00100
Figure pct00101
P1-56. 진술 P1-55에 있어서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택되는, 접합체.
P1-57. 진술 P1-56에 있어서, GLL은 GLL1-1인, 접합체.
P1-58. 진술 P1-54 내지 P1-57 중 어느 하나에 있어서, 리간드 단위는 항체 또는 이의 활성 단편인, 접합체.
P1-59. 진술 P1-58에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 종양 관련 항원에 대한 항체 또는 항체 단편인, 접합체.
P1-60. 진술 P1-59에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 (1) 내지 (89)에서 선택된 하나 이상의 종양 관련 항원 또는 세포 표면 수용체에 결합하는 항체인, 접합체:
(1) BMPR1B;
(2) E16;
(3) STEAP1;
(4) 0772P;
(5) MPF;
(6) Napi3b;
(7) Sema 5b;
(8) PSCA hlg;
(9) ETBR;
(10) MSG783;
(11) STEAP2;
(12) TrpM4;
(13) CRIPTO;
(14) CD21;
(15) CD79b;
(16) FcRH2;
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20R-알파;
(21) 브레비칸;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R;
(27) CD22;
(28) CD79a;
(29) CXCR5;
(30) HLA-DOB;
(31) P2X5;
(32) CD72;
(33) LY64;
(34) FcRH1;
(35) IRTA2;
(36) TENB2;
(37) PSMA - FOLH1;
(38) SST;
(38.1) SSTR2;
(38.2) SSTR5;
(38.3) SSTR1;
(38.4) SSTR3;
(38.5) SSTR4;
(39) ITGAV;
(40) ITGB6;
(41) CEACAM5;
(42) MET;
(43) MUC1;
(44) CA9;
(45) EGFRvIII;
(46) CD33;
(47) CD19;
(48) IL2RA;
(49) AXL;
(50) CD30 - TNFRSF8;
(51) BCMA - TNFRSF17;
(52) CT Ags - CTA;
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;
(54) CLEC14A;
(55) GRP78 - HSPA5;
(56) CD70;
(57) 줄기세포 특이적 항원;
(58) ASG-5;
(59) ENPP3;
(60) PRR4;
(61) GCC - GUCY2C;
(62) Liv-1 - SLC39A6;
(63) 5T4;
(64) CD56 - NCMA1;
(65) CanAg;
(66) FOLR1;
(67) GPNMB;
(68) TIM-1 - HAVCR1;
(69) RG-1/전립선 종양 표적 민딘 - 민딘/RG-1;
(70) B7-H4 - VTCN1;
(71) PTK7;
(72) CD37;
(73) CD138 - SDC1;
(74) CD74;
(75) 클라우딘 - CLs;
(76) EGFR;
(77) Her3;
(78) RON - MST1R;
(79) EPHA2;
(80) CD20 - MS4A1;
(81) 테나신 C - TNC;
(82) FAP;
(83) DKK-1;
(84) CD52;
(85) CS1 - SLAMF7;
(86) 엔도글린 - ENG;
(87) 아넥신 A1 - ANXA1;
(88) V-CAM(CD106) - VCAM1;
(89) ASCT2(SLC1A5).
P1-61. 진술 P1-58 내지 P1-60 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 시스테인 조작된 항체인, 접합체.
P1-62. 진술 P1-58 내지 P1-61 중 어느 하나에 있어서, 항체(Ab)에 대한 약물(D)의 약물 로딩(p)은 1 내지 약 10의 정수인, 접합체.
P1-63. 진술 P1-62에 있어서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10인, 접합체.
P1-64. 진술 P1-58 내지 P1-63 중 어느 하나에 따른 접합체의 혼합물로서, 항체-약물 접합체의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩이 약 1 내지 약 10인, 접합체의 혼합물.
P1-65. 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한 접합체 또는 혼합물.
P1-66. 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나의 접합체 또는 혼합물 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
P1-67. 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 P1-66에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 대상체에서의 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
P1-68. 진술 P1-67에 있어서, 질환은 암인, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
P1-69. 의학적 치료 방법에 있어서, 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 P1-66에 따른 약제학적 조성물의 용도.
P1-70. 진술 P1-66의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 의학적 치료 방법.
P1-71. 진술 P1-70에 있어서, 의학적 치료 방법은 암을 치료하기 위한 것인, 방법.
P1-72. 진술 P1-71에 있어서, 환자에게 접합체와 조합된 화학치료제를 투여하는, 방법.
P1-73. 증식성 질환의 치료를 위한 의약의 제조 방법에 있어서, 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물의 용도.
P1-74. 진술 P1-54 내지 P1-64 중 어느 하나의 진술에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 P1-66에 따른 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질환이 있는 포유동물을 치료하는 방법.
P1-75. 하기 화합물 A:
Figure pct00102
.
P1-76. 제P1-75항에 있어서, 단일 거울상이성질체로서 또는 거울상이성질체 풍부 형태의 화합물.
제2 우선 출원(P2)으로부터의 본 발명의 진술
P2-1. 하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
[화합물 I]
Figure pct00103
상기 식에서, RL은 하기로부터 선택되는, 세포 결합제에 연결하기 위한 링커이다:
(ia):
Figure pct00104
(상기 식에서,
Q는
Figure pct00105
이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기, 트리펩티드 잔기 또는 테트라펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
X는
Figure pct00106
이고,
상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고;
GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커임);
(ib):
Figure pct00107
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성하고;
e는 0 또는 1임).
P2-2. 진술 P2-1에 있어서, RL은 화학식 Ia를 갖는, 화합물.
P2-3. 진술 P2-2에 있어서, Q는 아미노산 잔기인, 화합물.
P2-4. 진술 P2-3에 있어서, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp로부터 선택되는, 화합물.
P2-5. 진술 P2-2에 있어서, Q는 디펩티드 잔기인, 화합물.
P2-6. 진술 P2-5에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Phe-Lys-C=O,
NH -Val-Ala- C=O,
NH -Val-Lys- C=O,
NH Ala-Lys- C=O,
NH-Val-Cit- C=O,
NH-Phe-Cit- C=O,
NH-Leu-Cit- C=O,
NH-Ile-Cit- C=O,
NH-Phe-Arg- C=O,
NH-Trp-Cit- C=O 및
NH -Gly-Val- C=O.
P2-7. 진술 P2-6에 있어서, Q는 NH-Phe-Lys- C=O, NH-Val-Cit- C=O 및 NH-Val-Ala- C=O로부터 선택되는, 화합물.
P2-8. 진술 P2-2에 있어서, Q는 트리펩티드 잔기인, 화합물.
P2-9. 진술 P2-8에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH-Glu-Val-Ala-C=O-,
NH-Glu-Val-Cit-C=O,
NH-αGlu-Val-Ala-C=O 및
NH-αGlu-Val-Cit-C=O.
P2-10. 진술 P2-2에 있어서, Q는 테트라펩티드 잔기인, 화합물.
P2-11. 진술 P2-10에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 화합물:
NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
P2-12. 진술 P2-11에 있어서, Q는 NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O인, 화합물.
P2-13. 진술 P2-2 내지 P2-12 중 어느 하나에 있어서, a는 0 내지 3인, 화합물.
P2-14. 진술 P2-13에 있어서, a는 0 또는 1인, 화합물.
P2-15. 진술 P2-13에 있어서, a는 0인, 화합물.
P2-16. 진술 P2-2 내지 P2-15 중 어느 하나에 있어서, b1은 0 내지 8인, 화합물.
P2-17. 진술 P2-16에 있어서, b1은 0인, 화합물.
P2-18. 진술 P2-16에 있어서, b1은 2인, 화합물.
P2-19. 진술 P2-16에 있어서, b1은 3인, 화합물.
P2-20. 진술 P2-16에 있어서, b1은 4인, 화합물.
P2-21. 진술 P2-16에 있어서, b1은 5인, 화합물.
P2-22. 진술 P2-16에 있어서, b1은 8인, 화합물.
P2-23. 진술 P2-2 내지 P2-15 및 P2-17 중 어느 하나에 있어서, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P2-24. 진술 P2-23에 있어서, b2는 0인, 화합물.
P2-25. 진술 P2-23에 있어서, b2는 2인, 화합물.
P2-26. 진술 P2-23에 있어서, b2는 3인, 화합물.
P2-27. 진술 P2-23에 있어서, b2는 4인, 화합물.
P2-28. 진술 P2-23에 있어서, b2는 5인, 화합물.
P2-29. 진술 P2-23에 있어서, b2는 8인, 화합물.
P2-30. 진술 P2-2 내지 P2-29 중 어느 하나에 있어서, c는 0인, 화합물.
P2-31. 진술 P2-2 내지 P2-29 중 어느 하나에 있어서, c는 1인, 화합물.
P2-32. 진술 P2-2 내지 P2-31 중 어느 하나에 있어서, d는 0 내지 3인, 화합물.
P2-33. 진술 P2-32에 있어서, d는 1 또는 2인, 화합물.
P2-34. 진술 P2-32에 있어서, d는 2인, 화합물.
P2-35. 진술 P2-2 내지 P2-12 중 어느 하나에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P2-36. 진술 P2-35에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P2-37. 진술 P2-2 내지 P2-12 중 어느 하나에 있어서, a는 1이고, b2는 0이고, c는 0이고, d는 0이고, b1은 0 내지 8인, 화합물.
P2-38. 진술 P2-37에 있어서, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P2-39. 진술 P2-2 내지 P2-12에 있어서, a는 0이고, b1은 0이고, c는 0이고, d는 1이고, b2는 0 내지 8인, 화합물.
P2-40. 진술 P2-39에 있어서, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
P2-41. 진술 P2-2 내지 P2-12 중 어느 하나에 있어서, b1은 0이고, b2는 0이고, c는 0이고, a 및 d 중 하나는 0이고, a 및 d 중 나머지는 1 내지 5인, 화합물.
P2-42. 진술 P2-41에 있어서, a 및 d 중 나머지는 1 또는 5인, 화합물.
P2-43. 진술 P2-2 내지 P2-42 중 어느 하나에 있어서, GL은 하기로부터 선택되는, 화합물.
Figure pct00108
Figure pct00109
P2-44. 진술 P2-43에 있어서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택되는, 화합물.
P2-45. 진술 P2-43에 있어서, GL은 GL1-1인, 화합물.
P2-46. 진술 P2-1에 있어서, RL은 화학식 Ib를 갖는, 화합물.
P2-47. 진술 P2-46에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 H인, 화합물.
P2-48. 진술 P2-46에 있어서, RL1은 H이고, RL2는 메틸인, 화합물.
P2-49. 진술 P2-46에 있어서, RL1 및 RL2 둘 다는 메틸인, 화합물.
P2-50. 진술 P2-46에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌기를 형성하는, 화합물.
P2-51. 진술 P2-46에 있어서, RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로부틸렌기를 형성하는, 화합물.
P2-52. 진술 P2-46 내지 P2-51 중 어느 하나에 있어서, e는 0인, 화합물.
P2-53. 진술 P2-46 내지 P2-51 중 어느 하나에 있어서, e는 1인, 화합물.
P2-54. 하기 화학식 IV의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 IV]
Figure pct00110
상기 식에서, L은 리간드 단위(즉, 표적화제)이고, DL은 하기 화학식 III의 약물 링커 단위이고:
[화학식 III]
Figure pct00111
상기 식에서,
RLL은 하기로부터 선택되는, 상기 리간드 단위에 연결된 링커이고:
(ia'):
Figure pct00112
(상기 식에서, Q 및 X는 진술 P2-1 내지 P2-42 중 어느 하나에 정의된 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임);
(ib'):
Figure pct00113
(상기 식에서, RL1 및 RL2는 진술 P2-1 및 P2-47 내지 P2-51 중 어느 하나에 정의된 바와 같음);
p는 1 내지 20의 정수이다.
P2-55. 진술 P2-54에 있어서, GLL은 하기로부터 선택되는, 접합체.
Figure pct00114
Figure pct00115
P2-56. 진술 P2-55에 있어서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택되는, 접합체.
P2-57. 진술 P2-56에 있어서, GLL은 GLL1-1인, 접합체.
P2-58. 진술 P2-54 내지 P2-57 중 어느 하나에 있어서, 리간드 단위는 항체 또는 이의 활성 단편인, 접합체.
P2-59. 진술 P2-58에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 종양-연관 항원에 대한 항체 또는 항체 단편인, 접합체.
P2-60. 진술 P2-59에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 (1) 내지 (89)로부터 선택된 1종 이상의 종양-연관 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체인, 접합체:
(1) BMPR1B;
(2) E16;
(3) STEAP1;
(4) 0772P;
(5) MPF;
(6) Napi3b;
(7) Sema 5b;
(8) PSCA hlg;
(9) ETBR;
(10) MSG783;
(11) STEAP2;
(12) TrpM4;
(13) CRIPTO;
(14) CD21;
(15) CD79b;
(16) FcRH2;
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20R-알파;
(21) 브레비칸;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R;
(27) CD22;
(28) CD79a;
(29) CXCR5;
(30) HLA-DOB;
(31) P2X5;
(32) CD72;
(33) LY64;
(34) FcRH1;
(35) IRTA2;
(36) TENB2;
(37) PSMA - FOLH1;
(38) SST;
(38.1) SSTR2;
(38.2) SSTR5;
(38.3) SSTR1;
(38.4) SSTR3;
(38.5) SSTR4;
(39) ITGAV;
(40) ITGB6;
(41) CEACAM5;
(42) MET;
(43) MUC1;
(44) CA9;
(45) EGFRvIII;
(46) CD33;
(47) CD19;
(48) IL2RA;
(49) AXL;
(50) CD30 - TNFRSF8;
(51) BCMA - TNFRSF17;
(52) CT Ags - CTA;
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;
(54) CLEC14A;
(55) GRP78 - HSPA5;
(56) CD70;
(57) 줄기세포 특이적 항원;
(58) ASG-5;
(59) ENPP3;
(60) PRR4;
(61) GCC - GUCY2C;
(62) Liv-1 - SLC39A6;
(63) 5T4;
(64) CD56 - NCMA1;
(65) CanAg;
(66) FOLR1;
(67) GPNMB;
(68) TIM-1 - HAVCR1;
(69) RG-1/전립선 종양 표적 민딘 - 민딘/RG-1;
(70) B7-H4 - VTCN1;
(71) PTK7;
(72) CD37;
(73) CD138 - SDC1;
(74) CD74;
(75) 클라우딘 - CLs;
(76) EGFR;
(77) Her3;
(78) RON - MST1R;
(79) EPHA2;
(80) CD20 - MS4A1;
(81) 테나신 C - TNC;
(82) FAP;
(83) DKK-1;
(84) CD52;
(85) CS1 - SLAMF7;
(86) 엔도글린 - ENG;
(87) 아넥신 A1 - ANXA1;
(88) V-CAM(CD106) - VCAM1;
(89) ASCT2(SLC1A5).
P2-61. 진술 P2-58 내지 P2-60 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항체 단편은 시스테인-조작된 항체인, 접합체.
P2-62. 진술 P2-58 내지 P2-61에 있어서, 항체(Ab)에 대한 약물(D)의 약물 로딩(p)은 1 내지 약 10의 정수인, 접합체.
P2-63. 진술 P2-62에 있어서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인, 접합체.
P2-64. 진술 P2-58 내지 P2-63에 있어서, 항체-약물 접합체의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩은 약 1 내지 약 10인, 접합체의 혼합물.
P2-65. 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한 접합체 또는 혼합물.
P2-66. 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나의 접합체 또는 혼합물 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
P2-67. 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 P2-66에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 대상체에서의 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
P2-68. 진술 P2-67에 있어서, 질환은 암인, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
P2-69. 의학적 치료 방법에 있어서, 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 진술 P2-66에 따른 약제학적 조성물의 용도.
P2-70. 진술 P2-66의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 의학적 치료 방법.
P2-71. 진술 P2-70에 있어서, 의학적 치료 방법은 암을 치료하기 위한 것인, 방법.
P2-72. 진술 P2-71에 있어서, 환자에게 접합체와 조합된 화학치료제가 투여되는, 방법.
P2-73. 증식성 질환의 치료를 위한 의약의 제조 방법에서의 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물의 용도.
P2-74. 증식성 질환을 갖는 포유동물의 치료 방법으로서, 유효량의 진술 P2-54 내지 P2-64 중 어느 하나에 따른 접합체 또는 혼합물 또는 진술 66에 따른 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
P2-75. 하기 화합물 A:
Figure pct00116
.
P2-76. 단일 거울상이성질체 또는 거울상이성질체 풍부 형태의 P2-75항의 화합물.
SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE LIMITED <120> COMPOUNDS AND CONJUGATES THEREOF <130> TOP-101-WO-PCT <140> PCT/EP2021/051263 <141> 2021-01-21 <150> 63/085,414 <151> 2020-09-30 <150> 62/964,180 <151> 2020-01-22 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys 1 5 10 15 Val Ala Arg Thr Cys 20 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(18) <223> Any amino acid <400> 2 Asn Ala Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Arg Thr Cys 20 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Gly Gly Phe Gly 1 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Gly Phe Gly Gly 1

Claims (26)

  1. 하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
    [화학식 I]
    Figure pct00117

    [상기 식에서, RL은 하기로부터 선택되는, 리간드 단위에 연결하기 위한 링커이다:
    (ia):
    Figure pct00118

    (상기 식에서,
    Q는
    Figure pct00119
    이고, QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기, 트리펩티드 잔기 또는 테트라펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
    X는
    Figure pct00120

    이고,
    상기 식에서, a = 0 내지 5이고, b1 = 0 내지 16이고, b2 = 0 내지 16이고, c1 = 0 또는 1이고, c2 = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고, 적어도 b1 또는 b2 = 0이고, 적어도 c1 또는 c2 = 0이고;
    GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커임);
    (ib):
    Figure pct00121

    (상기 식에서, RL1 및 RL2는 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌 또는 시클로부틸렌기를 형성하고;
    e는 0 또는 1임)].
  2. 제1항에 있어서, RL은 화학식 Ia를 갖는, 화합물.
  3. 제2항에 있어서, Q는 하기인, 화합물:
    (a) Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg 및 Trp으로부터 선택된 아미노산 잔기; 또는
    (b) 하기로부터 선택된 디펩티드 잔기:
    NH -Phe-Lys-C=O,
    NH -Val-Ala- C=O,
    NH -Val-Lys- C=O,
    NH -Ala-Lys- C=O,
    NH-Val-Cit- C=O,
    NH-Phe-Cit- C=O,
    NH-Leu-Cit- C=O,
    NH-Ile-Cit- C=O,
    NH-Phe-Arg- C=O,
    NH-Trp-Cit- C=O 및
    NH -Gly-Val- C=O; 또는
    (c) 하기로부터 선택된 트리펩티드 잔기:
    NH-Glu-Val-Ala-C=O-,
    NH-Glu-Val-Cit-C=O,
    NH-αGlu-Val-Ala-C=O 및
    NH-αGlu-Val-Cit-C=O; 또는
    (d) 하기로부터 선택된 테트라펩티드 잔기:
    NH -Gly-Gly-Phe-Gly C=O; 및
    NH -Gly-Phe-Gly-Gly C=O.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, a는
    (a) 0 내지 3; 또는
    (b) 0 또는 1; 또는
    (c) 0인, 화합물.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, b1은
    (a) 0 내지 8; 또는
    (b) 0; 또는
    (c) 2; 또는
    (d) 3; 또는
    (e) 4; 또는
    (f) 5; 또는
    (g) 8인, 화합물.
  6. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, b2는
    (a) 0 내지 8; 또는
    (b) 0; 또는
    (c) 2; 또는
    (d) 3; 또는
    (e) 4; 또는
    (f) 5; 또는
    (g) 8인, 화합물.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) c1은
    (a) 0; 또는
    (b) 1이고;
    (ii) c2는
    (a) 0; 또는
    (b) 1이되;
    c1 및 c2 중 적어도 하나는 0인, 화합물.
  8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, d는
    (a) 0 내지 3; 또는
    (b) 1 또는 2; 또는
    (c) 2; 또는
    (d) 5인, 화합물.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) a는 0이고, b1은 0이고, c1은 1이고, c2는 0이고, d는 2이고, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이거나;
    (b) a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 0이고, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이거나;
    (c) a는 0이고, b1은 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, d는 1이고, b2는 0, 2, 3, 4, 5 또는 8이거나;
    (d) b1은 0이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 0이고, a와 d 중 하나는 0이고, a와 d 중 다른 하나는 1 또는 5이거나;
    (e) a는 1이고, b2는 0이고, c1은 0이고, c2는 1이고, d는 2이고, b1은 0, 2, 3, 4, 5 또는 8인, 화합물.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, GL은 하기로부터 선택되는, 화합물.
    Figure pct00122

    Figure pct00123
  11. 제10항에 있어서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택되는, 화합물.
  12. 제1항에 있어서, RL은 화학식 Ib를 갖고,
    (a) RL1 및 RL2는 모두 H이거나;
    (b) RL1은 H이고 RL2는 메틸이거나;
    (c) RL1 및 RL2는 모두 메틸이거나;
    (d) RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로프로필렌기를 형성하거나;
    (e) RL1과 RL2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 시클로부틸렌기를 형성하는, 화합물.
  13. 하기 화학식 IV의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
    [화학식 IV]
    Figure pct00124

    [상기 식에서, L은 리간드 단위이고, DL은 하기 화학식 III인 약물 링커 단위이고,
    [화학식 III]
    Figure pct00125

    RLL은 하기로부터 선택되는, 상기 리간드 단위에 연결된 링커이고:
    (ia'):
    Figure pct00126

    (상기 식에서, Q 및 X는 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임);
    (ib'):
    Figure pct00127

    (상기 식에서, RL1 및 RL2는 제1항 또는 제12항에 정의된 바와 같음);
    p는 1 내지 20의 정수이다].
  14. 제13항에 있어서, GLL은 하기로부터 선택되는, 접합체.
    Figure pct00128

    Figure pct00129
  15. 제14항에 있어서, GLL은 GLL1-1 및 GLL1-2로부터 선택되는, 접합체.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리간드 단위는 항체 또는 이의 활성 단편인, 접합체.
  17. 제16항에 있어서, 항체(Ab)에 대한 약물(D)의 약물 로딩(p)은 1 내지 약 10의 정수인, 접합체.
  18. 제16항 또는 제17항에 따른 접합체의 혼합물로서, 항체-약물 접합체의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩이 약 1 내지 약 10인, 접합체의 혼합물.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 접합체 또는 혼합물 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  20. 대상체에서의 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 제19항에 따른 약제학적 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 질환은 암인, 접합체, 혼합물, 또는 약제학적 조성물.
  22. 의학적 치료 방법에서의 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 접합체 또는 혼합물, 또는 제19항에 따른 약제학적 조성물의 용도.
  23. 제19항의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 의학적 치료 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 의학적 치료 방법은 암을 치료하기 위한 것인, 방법.
  25. 하기 화합물 A:
    Figure pct00130
  26. 하기 화학식 VI을 갖는 화합물:
    [화학식 VI]
    Figure pct00131

    [상기 식에서, Q는 제1항 또는 제3항에서와 같다].
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