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KR20210121105A - 항바이러스 뉴클레오시드 및 이의 유도체 - Google Patents

항바이러스 뉴클레오시드 및 이의 유도체 Download PDF

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Publication number
KR20210121105A
KR20210121105A KR1020217026477A KR20217026477A KR20210121105A KR 20210121105 A KR20210121105 A KR 20210121105A KR 1020217026477 A KR1020217026477 A KR 1020217026477A KR 20217026477 A KR20217026477 A KR 20217026477A KR 20210121105 A KR20210121105 A KR 20210121105A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
formula
compound
pharmaceutically acceptable
benzyloxy
effective amount
Prior art date
Application number
KR1020217026477A
Other languages
English (en)
Inventor
레오니드 비글맨
광이 왕
나탈리아 디야티나
Original Assignee
얀센 바이오파마, 인코퍼레이트.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 얀센 바이오파마, 인코퍼레이트. filed Critical 얀센 바이오파마, 인코퍼레이트.
Publication of KR20210121105A publication Critical patent/KR20210121105A/ko

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Abstract

뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체, 이를 함유하는 약제학적 조성물, 및 이들의 합성 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 본 화합물은 인플루엔자 감염과 같은 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 데 유용하다.

Description

항바이러스 뉴클레오시드 및 이의 유도체
본 발명은 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체, 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 이의 제조 방법 및 동물, 특히 인간에서 오르토믹소바이러스 또는 인플루엔자 감염을 치료하는 데 있어서의 이들의 용도에 관한 것이다.
오르토믹소바이러스과(Orthomyxoviridae family)의 바이러스는 음성 센스, 단일 가닥, RNA 바이러스이다. 오르토믹소바이러스과는 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B, 인플루엔자 바이러스 C, 이사바이러스(Isavirus) 및 토고토바이러스(Thogotovirus)를 포함하는 여러 속을 포함한다. 인플루엔자 바이러스는 상기도 및 하기도 바이러스 감염을 포함하는 호흡기 바이러스 감염을 유발할 수 있다. 호흡기 바이러스 감염은 매년 수백만 명의 사람들의 사망의 주요 원인이다. 상기도 바이러스 감염은 코, 부비동, 인두 및/또는 후두를 침범한다. 하기도 바이러스 감염는 기관, 1차 기관지 및 폐를 포함하는 성대 아래에 있는 호흡기계를 침범한다.
인플루엔자는 음성 센스, 단일 가닥 RNA 바이러스 및 오르토믹소바이러스과의 구성원이다. 현재 인플루엔자 A, 인플루엔자 B 및 인플루엔자 C의 3종의 인플루엔자가 존재한다. 인플루엔자 A는 바이러스 표면에서 돌출된 헤마글루티닌, 뉴라미니다제 및 M2 단백질을 함유하는 숙주 세포에서 유래된 지질막을 갖는다. 인플루엔자 A는 2개의 바이러스 표면 단백질, 즉 헤마글루티닌(H 또는 HA) 및 뉴라미니다제(N)에 기초하여 추가로 분류되었다. 대략 16개의 H 항원(H1 내지 H16) 및 9개의 N 항원(N1 내지 N9)이 있다. 인플루엔자 A는 H1N1, H1N1, H1N2, H2N2, H3Nl, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H7N9, H9N2 및 H1ON7을 포함하는 여러 아형을 포함한다. 인플루엔자 바이러스 중합효소는 산성 중합효소(PA), 염기성 중합효소 1(PB1) 및 염기성 중합효소 2(PB2)의 3가지 하위단위로 구성된 이종삼량체이다. 이러한 중합효소는 감염된 세포의 핵에서 바이러스 RNA의 복제 및 전사를 담당한다. PA 하위단위는 엔도뉴클레아제 활성 부위를 함유한다. PA의 엔도뉴클레아제 활성은 세포 mRNA를 절단하며, 이는 이어서 바이러스 mRNA 합성을 위한 프라이머로서 PB1 하위단위에 의해 사용된다.
인플루엔자 바이러스는 감염된 분비물 및/또는 오염된 표면 또는 물체와 직접적인 접촉을 통해 사람에서 사람으로 전염될 수 있다. 인플루엔자 바이러스 감염의 합병증에는 폐렴, 기관지염, 탈수 및 부비동과 귀 감염이 포함된다. 인플루엔자 감염의 사망자 수를 막기 위한 노력의 일환으로, 많은 국가에서 예방적 조치로 예방 접종을 채택하였지만, 다가오는 독감 시즌에 어떤 인플루엔자 균주(들)가 우세할 것인지를 예측하기 어렵기 때문에 성공은 제한적이다. 2017-2018년 독감 시즌에 입원과 사망의 급증에서 알 수 있듯이 백신 접종은 정확한 균주(들)가 확인된 경우에도 독감에 대한 불완전한 면역을 제공한다. 이 분야의 활발한 연구에도 불구하고 모든 독감 균주에 대해 보호할 수 있는 범용 백신은 아직 개발되지 않았다. 현재 인플루엔자 감염에 대해 FDA가 승인한 약물에는 제한된 수의 뉴라미니다제 억제제 및 M2 단백질 억제제가 포함된다. 승인된 뉴라미니다제 억제제 및 M2 단백질 억제제의 예에는 아만타딘, 리만타딘, 리렌자(Relenza)(등록상표)(자나미비르(zanamivir), GlaxoSmithKline) 및 타미플루(Tamiflu)(등록상표)(오셀타미비르(oseltamivir), Genentech)가 포함된다. 현재까지 미국 시장에서 이용 가능한 인플루엔자 중합효소 복합체를 표적으로 하는 치료 화합물은 없다. 따라서, 현재 방식의 단점 또는 한계를 해결할 수 있는 화합물이 필요하다.
본 발명은 본 명세서에 첨부된 독립항 및 종속항에 의해 각각 정의된 일반적인 실시 형태 및 바람직한 실시 형태에 관한 것이며, 이들은 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 발명의 한 측면은 화학식 (I)의 화합물, 및 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드에 관한 것이며:
[화학식 (I)]
Figure pct00001
상기 식에서,
HET는
Figure pct00002
및
Figure pct00003
로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
추가의 실시 형태는 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물, 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 활성인 대사산물에 의해 제공된다.
특정 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 상세한 설명에 기재되거나 예시된 화학종으로부터 선택되는 화합물이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이의 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체에 관한 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 약제학적으로 활성인 대사산물로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물의 유효량을 포함하는, 오르토믹소바이러스과 바이러스의 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 오르토믹소바이러스과 바이러스의 감염의 치료가 필요한 대상체에게 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 활성인 대사산물로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 오르토믹소바이러스과 바이러스의 감염을 앓거나 이로 진단 받은 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 치료 방법의 추가의 실시 형태가 상세한 설명에 기재되어 있다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 약제학적으로 활성인 대사산물을 제조하는 방법을 포함한다.
본 발명의 목적은 종래의 방법 및/또는 종래 기술의 단점 중 적어도 하나를 해소하거나 개선하거나, 이에 대한 유용한 대안을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 실시 형태, 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 본 발명의 실시를 통해 명백해질 것이다. 본 발명은 하기 용어 해설 및 최종 실시예를 비롯하여, 하기 설명을 참조함으로써 더욱 완전하게 이해될 수 있다. 간략함을 위해, 본 명세서에 인용된 특허를 비롯한 간행물의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 언급된 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 기타 간행물은 달리 언급되지 않는 한 전체적으로 참고로 포함된다. 본 명세서에서의 용어에 대해 복수의 정의가 존재하는 경우에, 달리 언급되지 않는 한 이 섹션에 있는 것들이 우선한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "포함하여", "함유하는" 및 "포함하는"은 이들의 개방적이고 비제한적인 의미로 본 명세서에서 사용된다.
본 명세서에 사용되는 "알킬"은 완전 포화(이중 또는 삼중 결합이 없는) 탄화수소 기를 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 사슬을 말한다. 알킬 기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 가질 수 있다(본 명세서에 나타날 때, "1 내지 20"과 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하며; 예를 들어, "1 내지 20개의 탄소 원자"는 알킬 기가 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 등의 최대 20개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미하지만, 본 정의는 수치 범위가 지정되지 않은 용어 "알킬"의 경우도 포함한다). 알킬 기는 또한 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 중간 크기 알킬일 수 있다. 알킬 기는 또한 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 저급 알킬일 수 있다. 화합물의 알킬 기는 "C1-C6 알킬" 또는 유사한 명칭으로 지정될 수 있다. 단지 예로서, "C1-C6 알킬"은 알킬 사슬 내에 1 내지 6개의 탄소 원자가 있음을 나타내는데, 즉 알킬 사슬은 메틸, 에틸, 프로필, 아이소-프로필, n-부틸, 아이소-부틸, sec-부틸 및 t-부틸로부터 선택된다. 전형적인 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 아이소프로필, 부틸, 아이소부틸, 3차 부틸, 펜틸(직쇄 및 분지형) 및 헥실(직쇄 및 분지형)을 포함하지만 결코 이에 한정되지 않는다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다.
용어 "헤테로아릴" 또는 "HET"는 헤테로사이클 당 3 내지 9개의 고리 원자를 가진, 모노사이클릭 또는 융합 바이사이클릭 헤테로사이클(탄소 원자, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 4개 이하의 헤테로원자로부터 선택된 고리 원자를 갖는 고리 구조)을 말한다. 헤테로아릴기의 예시적인 예는 적절하게 결합된 모이어티 형태의 하기 실체를 포함한다:
Figure pct00004
당업자는 상기에 열거되거나 예시된 헤테로아릴기의 화학종이 완전히 망라되지 않았으며, 이들 정의된 용어의 범위 내에서 추가의 화학종이 또한 선택될 수 있음을 인식할 것이다.
용어 "치환된"은 특정 기 또는 모이어티가 하나 이상의 치환기를 갖는 것을 의미한다. 용어 "비치환된"은 특정 기가 치환기를 갖지 않는 것을 의미한다. 용어 "임의로 치환된"은 특정 기가 비치환되거나 하나 이상의 치환기로 치환되는 것을 의미한다. 용어 "치환된"이 구조 시스템을 설명하는데 사용되는 경우, 시스템 상의 임의의 원자가 허용 위치에서 치환이 일어나는 것을 의미한다. 특정 부분 또는 기가 임의의 특정 치환기로 임의로 치환되거나 치환되는 것으로 명시되지 않은 경우에, 그러한 부분 또는 기는 치환되지 않은 것으로 의도되는 것으로 이해된다.
보다 간결한 설명을 제공하기 위해, 본 명세서에 주어진 정량적인 표현 중 일부는 용어 "약"으로 수식되지 않는다. 용어 "약"이 명시적으로 사용되든 아니든, 본 명세서에서 주어진 모든 양은 실제 주어진 값을 지칭하고자 하는 것이며, 또한 그러한 주어진 값에 대한 실험 및/또는 측정 조건으로 인한 등가값 및 근사값을 포함하는, 본 기술 분야의 통상의 기술에 기초하여 합리적으로 추정되는 그러한 주어진 값에 대한 근사값을 지칭하고자 하는 것임이 이해된다. 수율이 백분율로 주어질 때마다, 그러한 수율은 특정 화학량론적 조건 하에서 얻을 수 있는 실체의 최대량에 대하여 수율이 주어지는 동일 실체의 질량을 말한다. 백분율로 주어진 농도는 별도의 지시가 없는 한, 질량비를 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 임의의 보호기, 아미노산 및 다른 화합물에 대한 약어는, 달리 나타내지 않는 한, 이들의 일반적인 사용법, 인식되는 약어, 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명법 위원회(문헌[Biochem. 11:942-944 (1972)] 참조)에 따른다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "보호기" 및 "보호기들"은 분자에 존재하는 기가 원치 않는 화학 반응을 거치는 것을 방지하기 위해 분자에 부가되는 임의의 원자 또는 원자들의 군을 말한다. 보호기 모이어티의 예가 문헌[T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. Ed. John Wiley & Sons, 1999] 및 문헌[J.F.W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry Plenum Press, 1973]에 기재되어 있으며, 이들 모두는 적합한 보호기를 개시하기 위한 제한된 목적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 보호기 모이어티는 특정 반응 조건에 안정하고 당업계에 공지된 방법을 사용하여 편리한 단계에서 용이하게 제거되는 방식으로 선택될 수 있다. 보호기의 비제한적인 목록에는 벤질; 치환된 벤질; 알킬카르보닐 및 알콕시카르보닐(예를 들어, t-부톡시카르보닐(BOC), 아세틸 및 아이소부티릴); 아릴알킬카르보닐 및 아릴알콕시카르보닐(예를 들어, 벤질옥시카르보닐); 치환된 메틸 에테르(예를 들어, 메톡시메틸 에테르 및 테트라하이드로피라닐 에테르); 치환된 에틸 에테르; 치환된 벤질 에테르; 실릴(예를 들어, 트라이메틸실릴, 트라이에틸실릴, 트라이아이소프로필실릴, t-부틸다이메틸실릴, 트라이-아이소-프로필실릴옥시메틸, [2-(트라이메틸실릴)에톡시]메틸 및 t-부틸다이페닐실릴); 에스테르(예를 들어, 벤조에이트 에스테르); 카르보네이트(예를 들어, 메톡시메틸카르보네이트); 설포네이트(예를 들어, 토실레이트 및 메실레이트); 비환형 케탈(예를 들어, 다이메틸 아세탈 및 다이아이소프로필 아세탈); 환형 케탈(예를 들어, 1,3-다이옥산 및 1,3-다이옥솔란); 비환형 아세탈; 환형 아세탈; 비환형 헤미아세탈; 환형 헤미아세탈; 다이티오아세탈(환형 및 비환형 모두); 다이티오케탈(환형 및 비환형 모두)(예를 들어, S,S'-다이메틸, S,S'-다이에틸, S,S'-다이아이소프로필, 1,3-다이티안 및 1,3-다이티올란); 오르토에스테르(환형 오르토에스테르, 예를 들어 환형 오르토포르메이트 포함); 카르바메이트(예를 들어, N-페닐카르바메이트) 및 트라이아릴메틸 기(예를 들어, 트라이틸, 모노메톡시트라이틸(MMTr), 4,4'-다이메톡시트라이틸(DMTr) 및 4,4',4"-트라이메톡시트라이틸(TMTr); 및 본 명세서에 기재된 것들)이 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이탈기"는 화학 반응에서 다른 원자 또는 모이어티에 의해 치환될 수 있는 임의의 원자 또는 모이어티를 말한다. 보다 구체적으로, 일부 실시 형태에서, "이탈기"는 친핵성 치환 반응에서 치환되는 원자 또는 모이어티를 말한다. 일부 실시 형태에서, "이탈기"는 강산의 컨쥬게이트 염기인 임의의 원자 또는 모이어티이다. 적합한 이탈기의 예에는 토실레이트, 메실레이트, 트라이플루오로아세테이트 및 할로겐(예를 들어, I, Br 및 Cl)이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 이탈기의 비제한적인 특성 및 예는, 예를 들어, 문헌[Organic Chemistry, 2d ed., Francis Carey (1992), pages 328-331]; 문헌[Introduction to Organic Chemistry, 2d ed., Andrew Streitwieser and Clayton Heathcock (1981), pages 169-171]; 및 문헌[Organic Chemistry, 5th ed., John McMurry (2000), pages 398 and 408]에서 찾을 수 있으며, 이들 모두는 이탈기의 특성 및 예를 개시하기 위한 제한된 목적을 위해 본 명세서에 참고로 포함된다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 투여되는 유기체에 상당한 자극을 일으키지 않고 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 소실시키지 않는 화합물의 염을 말한다. 일부 실시 형태에서, 염은 화합물의 산 부가 염이다. 약제학적 염은 화합물을 무기 산, 예컨대 할로겐화수소산(예를 들어, 염산 또는 브롬화수소산), 황산, 질산 및 인산과 반응시켜 얻을 수 있다. 약제학적 염은 또한, 화합물을 유기 산, 예컨대 지방족 또는 방향족 카르복실산 또는 설폰산, 예를 들어, 포름산, 아세트산, 석신산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 니코틴산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 또는 나프탈렌설폰산과 반응시켜 얻을 수 있다. 약제학적 염은 또한 화합물을 염기와 반응시켜 염, 예컨대 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 또는 마그네슘 염, 다이사이클로헥실아민, N-메틸-D-글루카민, 트리스(하이드록시메틸)메틸아민, C1-C7 알킬아민, 사이클로헥실아민, 트라이에탄올아민, 에틸렌다이아민과 같은 유기 염기의 염, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌 및 라이신과의 염을 형성하여 얻을 수 있다.
본 출원에 사용되는 용어와 어구, 및 이들의 변형은, 특히 첨부된 청구범위에서, 달리 명백히 언급되지 않는 한, 제한적인 것과 대조적으로 개방형(open ended)인 것으로 해석되어야 한다. 전술한 것의 예로서, 용어 '포함하는'은 '제한 없이 포함하는', '포함하지만 이에 한정되지 않음' 등을 의미하는 것으로 해석되어야 하고; 본 명세서에 사용된 용어 '포함하는'은 '포함하여', '함유하는' 또는 '특징으로 하는'과 동의어이고, 포괄적이거나 개방형이고, 추가의 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않고; 용어 '갖는'은 '적어도 갖는'으로 해석되어야 하고; 용어 '포함한다'는 '포함하지만 이에 한정되지 않는'으로 해석되어야 하고; 용어 '예시적인'은 논의 중인 항목의 예시적인 경우를 제공하기 위해 사용되며, 망라된 것이 아니거나 이의 제한적인 목록이고; '바람직하게', '바람직한', '원하는' 또는 '바라던' 및 유사한 의미의 단어의 사용은 소정 특징부가 구조 또는 기능에 중요하거나, 필수적이거나, 심지어 중요하다는 것을 암시하는 것으로 이해되어서는 안되며, 대신 특정 실시 형태에서 이용되거나 이용되지 않을 수 있는 대안적 또는 추가의 특징부를 강조하기 위한 것일 뿐이다. 또한, 용어 "포함하는"은 어구 "적어도 갖는" 또는 "적어도 포함하는"과 동의어로 해석되어야 한다. 공정과 관련하여 사용되는 경우, 용어 "포함하는"은 공정이 적어도 언급된 단계를 포함하지만, 추가의 단계를 포함할 수도 있음을 의미한다. 화합물, 조성물 또는 장치와 관련하여 사용되는 경우, 용어 "포함하는"은 화합물, 조성물 또는 장치가 적어도 언급된 특징부 또는 구성요소를 포함하지만, 또한 추가의 특징부 또는 구성요소를 포함할 수 있음을 의미한다. 마찬가지로, 접속사 '및'으로 연결된 항목들의 그룹은 그러한 항목 모두가 각각 그룹화되어 존재해야 한다는 것을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 하며, 오히려 명백히 달리 언급되지 않는 한 '및/또는'으로 해석되어야 한다. 유사하게, 접속사 '또는'으로 연결된 항목들의 그룹은 그러한 그룹 간에 상호 배타성을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 하며, 오히려 명백히 달리 언급되지 않는 한 '및/또는'으로 해석되어야 한다.
본 명세서에서 실질적으로 임의의 복수 및/또는 단수 용어의 사용과 관련하여, 당업자는 문맥 및/또는 적용에 적절하게 복수를 단수로 번역하고/하거나 단수를 복수로 번역할 수 있다. 다양한 단수/복수 순열(permutation)이 명료함을 위해 본 명세서에 명시적으로 설명될 수 있다. 부정 관사("a" 또는 "an")는 복수형을 배제하지 않는다. 단일 프로세서 또는 다른 유닛이 청구범위에 언급된 몇몇 항목의 기능을 충족시킬 수 있다. 특정 측정치가 서로 상이한 종속항에서 인용되어 있다는 단순한 사실이 이들 측정치의 조합이 유리하게 사용될 수 없다는 것을 나타내지는 않는다. 청구범위의 임의의 참조 부호는 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
하나 이상의 키랄 중심을 갖는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물에서, 절대 입체화학이 명시적으로 표시되지 않으면, 각각의 중심은 독립적으로 R-배열 또는 S-배열 또는 이들의 혼합물일 수 있음이 이해된다. 따라서, 본 명세서에 제공된 화합물은 거울상 이성질체적으로 순수하거나, 거울상 이성질체적으로 풍부하거나, 라세미 혼합물이거나, 부분입체 이성질체적으로 순수하거나, 부분입체 이성질체적으로 풍부하거나, 또는 입체이성질체 혼합물일 수 있다. 또한, E 또는 Z로 정의될 수 있는 기하 이성질체를 생성하는 하나 이상의 이중 결합(들)을 갖는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물에서, 각각의 이중 결합은 독립적으로 E 또는 Z, 또는 이들의 혼합물일 수 있음이 이해된다.
본 명세서에 개시된 화합물이 채워지지 않은 원자가를 갖는 경우, 원자가는 수소 또는 이의 동위원소, 예를 들어 수소-1(경수소) 및 수소-2(중수소)로 채워져야 함이 이해되어야 한다.
본 명세서에 기재된 화합물이 동위원소로 표지될 수 있음이 이해된다. 중수소와 같은 동위원소로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 기인하는 소정의 치료적 이점, 예를 들어, 생체내 반감기 증가 또는 투여량 요건 감소를 제공할 수 있다. 화합물 구조에 나타낸 바와 같은 각각의 화학 원소는 상기 원소의 임의의 동위원소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 화합물 구조에서, 수소 원자는 명시적으로 개시되거나 화합물에 존재하는 것으로 이해될 수 있다. 수소 원자가 존재할 수 있는 화합물의 임의의 위치에서, 수소 원자는 수소-1(경수소) 및 수소-2(중수소)를 포함하지만 이에 한정되지 않는 수소의 임의의 동위원소일 수 있다. 따라서, 본 명세서에서의 화합물에 대한 언급은 그 문맥이 명백히 달리 나타내지 않는 한 모든 잠재적인 동위원소 형태를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법 및 조합은 결정질 형태(화합물의 동일한 원소 조성의 상이한 결정 패킹 배열을 포함하는 다형체로도 알려짐), 비정질 상(phase), 염, 용매화물, 및 수화물을 포함하는 것으로 이해된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 약제학적으로 허용되는 용매, 예컨대 물, 에탄올 등과 함께 용매화된 형태로 존재한다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 비용매화 형태로 존재한다. 용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 양의 용매를 함유하고, 물, 에탄올 등의 약제학적으로 허용되는 용매를 사용한 결정화 공정 동안 형성될 수 있다. 용매가 물인 경우 수화물이 형성되거나, 용매가 알코올인 경우 알코올레이트가 형성된다. 또한, 본 명세서에 제공된 화합물은 비용매화 형태뿐만 아니라 용매화 형태로도 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화 형태는 본 명세서에 제공된 화합물 및 방법의 목적을 위해 비용매화 형태와 등가인 것으로 간주된다.
일정 범위의 값이 제공되는 경우, 상한 및 하한, 그리고 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 중간값이 실시 형태 내에 포함되는 것으로 이해된다.
화합물
한 측면에서, 화학식 (I)의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 입체 이성질체, 동위원소 변이체, N-옥사이드 또는 용매화물이 본 명세서에 제공되며:
[화학식 (I)]
Figure pct00005
상기 식에서,
HET는
Figure pct00006
로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 HET가
Figure pct00007
인 화학식 (I)의 화합물이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 HET가
Figure pct00008
인 화학식 (I)의 화합물이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 HET가
Figure pct00009
인 화학식 (I)의 화합물이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는
Figure pct00010
로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 하기 구조를 갖는 화합물:
Figure pct00011
;
및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 화학식 (II)의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 입체 이성질체, 동위원소 변이체, N-옥사이드 또는 용매화물이며:
[화학식 (II)]
Figure pct00012
상기 식에서,
R6은 -(C=O)C1-6알킬 또는 -(C=O)C1-6알킬이고, C1-6알킬은 NH2로 치환된다.
본 발명의 추가의 실시 형태는
Figure pct00013
로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 화학식 (III)의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 입체 이성질체, 동위원소 변이체, N-옥사이드 또는 용매화물이며:
[화학식 (III)]
Figure pct00014
상기 식에서,
R7은 H이거나, 2개의 R7 구성원은 함께 OCH3으로 치환된 5원 고리를 형성하고;
R8은 -CH2O-(C=O)-O-C1-6알킬이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는
Figure pct00015
로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 화학식 (IV)의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 입체 이성질체, 동위원소 변이체, N-옥사이드 또는 용매화물이며:
[화학식 (IV)]
Figure pct00016
상기 식에서,
HET는
Figure pct00017
로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는
Figure pct00018
Figure pct00019
로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 하기 표 1에 나타낸 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물이다.
Figure pct00020
본 발명의 추가의 실시 형태는 하기 표 2에 나타낸 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물이다.
Figure pct00021
약제학적 조성물
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)의 유효량과, 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 이들의 조합을 포함할 수 있는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
용어 "약제학적 조성물"은 본 명세서에 개시된 하나 이상의 화합물과 기타 화학 성분, 예컨대 희석제 또는 담체의 혼합물을 말한다. 약제학적 조성물은 유기체에 대한 화합물의 투여를 촉진시킨다. 약제학적 조성물은 또한 화합물을 무기산 또는 유기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산 및 살리실산과 반응시킴으로써 얻을 수 있다. 약제학적 조성물은 일반적으로 특정 의도된 투여 경로에 맞추어서 조정될 것이다.
용어 "생리학적으로 허용되는"은 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 소실시키지 않는 담체, 희석제 또는 부형제를 정의한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "담체"는 세포 또는 조직 내로 화합물의 도입을 촉진하는 화합물을 말한다. 예를 들어, 제한 없이, 다이메틸 설폭사이드(DMSO)는 대상체의 세포 또는 조직 내로 많은 유기 화합물의 흡수를 촉진하는 일반적으로 사용되는 담체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "희석제"는 약리학적 활성이 결여되어 있지만 약제학적으로 필요하거나 바람직할 수 있는 약제학적 조성물의 성분을 말한다. 예를 들어, 희석제는 제조 및/또는 투여하기에 질량이 너무 작은 강력한 약물의 벌크를 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이는 또한 주사, 섭취 또는 흡입에 의해 투여하고자 하는 약물의 용해를 위한 액체일 수 있다. 본 기술 분야에서 일반적인 형태의 희석제는 비제한적으로 인간 혈액의 조성을 모방하는 인산염 완충 식염수와 같은 완충 수용액이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "부형제"는 약제학적 조성물에 첨가되어 조성물에 비제한적으로 벌크, 일관성, 안정성, 결합 능력, 윤활성, 붕해 능력 등을 제공하는 불활성 물질을 말한다. 적합한 부형제는 본 명세서에 참고로 포함된, 미국 약사회(American Pharmaceutical Association)에서 발행한 문헌[Handbook of Pharmaceutical Excipients]에서 찾을 수 있다. "희석제"는 일종의 부형제이다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 그 자체로 또는 병용 요법에서와 같이, 다른 활성 성분, 담체, 희석제, 부형제 또는 이들의 조합과 혼합되는 약제학적 조성물로 인간 환자에게 투여될 수 있다. 적절한 제형은 선택된 투여 경로에 따라 다르다. 본 명세서에 기재된 화합물의 제형화 및 투여 기술은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 그 자체로 알려진 방식으로, 예를 들어, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조(dragee-making), 분말화(levigating), 유화(emulsifying), 캡슐화, 봉입(entrapping) 또는 정제화(tableting) 공정에 의해 제조될 수 있다. 추가적으로, 활성 성분은 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유된다. 본 명세서에 개시된 약제학적 조합물에 사용되는 많은 화합물은 약제학적으로 적합한 반대이온과의 염으로서 제공될 수 있다.
경구, 직장, 국소, 에어로졸 주사, 및 근육내, 피하, 정맥내, 골수내 주사, 척수강내, 직접 뇌실내(direct intraventricular), 복강내, 비강내 및 안내(intraocular) 주사를 포함하는 비경구 전달이 포함되지만 이에 한정되지 않는 화합물을 투여하는 다수의 기술이 본 기술 분야에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 근육내 투여될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 비강내 투여될 수 있다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 피내 투여될 수 있다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 경구 투여될 수 있다.
경구 투여되는 경우, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)은 치료될 대상체가 경구 섭취하기 위해 정제, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로서 제형화될 수 있다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 비강내 전달을 위한 약제학적 조성물은 또한 비강 분비물의 시뮬레이션을 돕기 위해 종종 제조되는 점적제 및 스프레이를 포함할 수 있다.
예를 들어, 종종 데포(depot) 또는 지속 방출 제형으로 감염된 영역에 화합물을 직접 주사하여, 전신 방식보다는 국부 방식으로 화합물을 또한 투여할 수 있다. 또한, 표적화된 약물 전달 시스템, 예를 들어, 조직-특이적 항체로 코팅된 리포솜으로 화합물을 투여할 수 있다. 리포솜은 기관을 표적으로 하며 선택적으로 기관에 의해 흡수될 것이다.
원하는 경우, 조성물은 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태(unit dosage form)를 함유할 있는 팩 또는 디스펜서 장치(dispenser device)로 제공될 수 있다. 예를 들어, 팩에는 금속 또는 플라스틱 포일, 예컨대 블리스터 팩(blister pack)이 포함될 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치에는 투여에 대한 지침서가 포함될 수 있다. 팩 또는 디스펜서에는 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에서 규정한 형태의 용기와 관련된 통지가 또한 함께 포함될 수 있으며, 이러한 통지는 인간 또는 수의학적 투여를 위한 약물의 형태에 대한 기관의 승인을 반영한다. 이러한 통지는, 예를 들어, 미국 식품의약국(U.S. Food and Drug Administration)이 처방약에 대해 승인한 표지, 또는 승인된 제품 삽입물(insert)일 수 있다. 적합한 약제학적 담체에 제형화된 본 명세서에 기재된 화합물을 포함할 수 있는 조성물은 또한 제조되어, 적절한 용기에 배치되고, 지시된 질환의 치료를 위해 표지될 수 있다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 적어도 하나의 표 1의 화합물, 및 표 1의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물, 표 1의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 표 1의 약제학적으로 활성인 대사산물; 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 발명의 추가의 실시 형태는 적어도 하나의 표 2의 화합물, 및 표 2의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물, 표 2의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 표 2의 약제학적으로 활성인 대사산물의 유효량; 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이다.
화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체도 본 발명의 범위 내에 있다. 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물도 본 발명의 범위 내에 있다. 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 약제학적으로 활성인 대사산물도 본 발명의 범위 내에 있다.
화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 동위원소 변이체, 예를 들어 화학식 (I)의 중수소화 화합물도 본 발명의 범위 내에 있다. 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 동위원소 변이체의 약제학적으로 허용되는 염, N-옥사이드 또는 용매화물도 본 발명의 범위 내에 있다. 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 동위원소 변이체의 약제학적으로 허용되는 전구약물 및 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물의 동위원소 변이체의 약제학적으로 활성인 대사산물도 본 발명의 범위 내에 있다. 본 발명의 화합물은 전구약물, 즉 생체 내에서 활성 대사물질로 대사되는 화합물의 형태로 제공될 수 있다. 적합한 전구약물 유도체의 선택과 제조를 위한 통상적인 절차는 예를 들어 문헌["Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]에 기재되어 있다.
사용 방법
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물 또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함할 수 있는, 오르토믹소바이러스 감염, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염을 완화 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 다른 실시 형태는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량과 오르토믹소바이러스과 바이러스, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스 복제에 감염된 세포를 접촉시키는 단계를 포함할 수 있는, 오르토믹소바이러스과 바이러스의 복제, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스의 복제를 억제하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 복제를 억제할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 중합효소 복합체의 활성을 억제할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 엔도뉴클레아제의 활성 부위를 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있는 인플루엔자 엔도뉴클레아제의 엔도뉴클레아제 활성을 억제 및/또는 감소시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물은 mRNA를 절단하는 엔도뉴클레아제의 능력을 억제 및/또는 감소시킨다.
이전 단락의 실시 형태를 포함하는 일부 실시 형태에서, 인플루엔자 바이러스의 감염은 인플루엔자 A 바이러스의 감염일 수 있다. 이전 단락의 실시 형태를 포함하는 다른 실시 형태에서, 인플루엔자 바이러스의 감염은 인플루엔자 B 바이러스의 감염일 수 있다. 이전 단락의 실시 형태를 포함하는 또 다른 실시 형태에서, 인플루엔자 바이러스의 감염은 인플루엔자 C 바이러스의 감염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 사용하여 인플루엔자의 하나 이상의 아형을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 사용하여 H1N1 및/또는 H3N2를 치료할 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 사용하여 H2N2, H5N1 및/또는 H7N9를 치료할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물(화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)은 1종 초과의 인플루엔자 아형에 대해 효과적일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 화합물(화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)은 2, 3, 4 및/또는 5종 초과의 인플루엔자 아형에 대해 효과적일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염에 (직접 및/또는 간접적으로) 기인한 상기도 바이러스의 감염을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염에 (직접 및/또는 간접적으로) 기인한 하기도 바이러스의 감염을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염(예컨대, 본 명세서에 기재된 것들)의 하나 이상의 증상을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염으로 인한 기관지염 및/또는 기관기관지염을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염으로 인한 폐렴을 치료 및/또는 완화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 바이러스의 감염으로 인한 기침을 치료 및/또는 완화할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및/또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 화합물(예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 사용하여 인플루엔자 감염의 하나 이상의 증상의 중증도를 줄일 수 있으며; 증상의 예에는 발열, 오한, 기침, 인후염, 콧물, 코막힘, 근육통, 몸살, 두통, 피로, 구토 및/또는 설사가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료", "치료적" 및 "요법"은 반드시 질환 또는 병태의 완전한 치유 또는 근절을 의미하는 것은 아니다. 질환 또는 병태의 임의의 원치 않는 징후 또는 증상의 어느 정도의 경감이 치료 및/또는 요법으로 간주될 수 있다.
용어 "치료적 유효량" 및 "유효량"은 지시된 생물학적 또는 의약적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 약제학적 작용제(pharmaceutical agent)의 양을 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, 화합물의 치료적 유효량은 질환의 증상을 경감 또는 완화하거나 또는 치료되는 대상체의 생존을 연장시키는 데 필요한 양일 수 있다. 이러한 반응은 조직, 계, 동물 또는 인간에서 발생할 수 있으며, 치료되는 질환의 징후 또는 증상의 경감을 포함한다. 유효량의 결정은 본 명세서에 제공된 개시내용을 고려하여 당업자의 능력 내에 충분히 있다. 용량으로서 필요한 본 명세서에 개시된 화합물의 치료적 유효량은 투여 경로, 치료되는 인간을 포함하는 동물의 유형, 및 고려 중인 특정 동물의 상태 또는 신체적 특성에 좌우될 것이다. 용량은 원하는 효과를 달성하도록 조정될 수 있지만, 연령, 체중, 식이, 병행 약물(concurrent medication)과 같은 인자 및 의학 기술에서 숙련된 자들이 인식할 기타 인자에 좌우될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 치료 또는 관찰의 대상이었던 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 말한다. "포유동물"은 마우스, 래트, 래빗, 기니피그, 개, 고양이, 양, 염소, 소, 말, 영장류, 예컨대 원숭이, 침팬지 및 유인원 및 인간을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
오르토믹소바이러스과 바이러스의 감염을 치료하기 위한 방법의 유효성을 결정하기 위한 다양한 지표가 당업자에게 알려져 있다. 적합한 지표의 예에는 바이러스 부하의 감소, 바이러스 복제의 감소, 혈청전환(환자 혈청에서 검출불가능한 바이러스)에 이르기까지의 시간의 감소, 임상 결과에 있어서의 이환율 또는 사망률의 감소, 질환의 증상의 완화 및/또는 질환 반응의 기타 지표가 포함되지만 이에 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 치료되지 않은 대상체에 비해 질환 지속기간 감소, 질병 중증도 감소, 정상적인 건강 및 정상적인 활동으로 복귀하는 시간의 감소 및 오르토믹소바이러스 감염의 하나 이상의 증상의 완화까지의 시간의 감소와 같은 삶의 질에 있어서의 하나 이상의 개선을 초래할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 인플루엔자 치료의 통상적인 표준 치료를 받는 대상체에 비해 질환 지속기간 감소, 질병 중증도 감소, 정상적인 건강 및 정상적인 활동으로 복귀하는 시간의 감소 및 오르토믹소바이러스 감염의 하나 이상의 증상의 완화까지의 시간의 감소와 같은 삶의 질에 있어서의 하나 이상의 개선을 초래할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 치료되지 않은 대상체에 비해 오르토믹소바이러스 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 길이 및/또는 중증도를 감소시킬 수 있다. 오르토믹소바이러스 감염의 증상은 본 명세서에 기재되어 있으며, 오한, 기침, 근통(근육통), 비폐색, 인후통, 피로, 두통 및 발열을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 치료되지 않은 대상체에 비해 중이염(귀 염증), 부비동염, 기관지염 및 폐렴을 포함하나 이에 한정되지 않는 오르토믹소바이러스 감염과 관련된 하나 이상의 이차 합병증을 감소시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 치료 계획 개시 후(예를 들어, 치료 개시 10일 후) 결정시, 대상체에서의 치료 전 수준에 비해 오르토믹소바이러스의 복제를 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100배 또는 그 이상 감소시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 치료 전 수준에 비해 약 2 내지 약 5배, 약 10 내지 약 20배, 약 15 내지 약 40배 또는 약 50 내지 약 100배의 범위로 오르토믹소바이러스의 복제를 감소시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 오셀타미비르(Tamiflu(등록상표))에 의해 달성된 오르토믹소바이러스 복제의 감소에 비해 1 내지 1.5 log, 1.5 log 내지 2 log, 2 log 내지 2.5 log, 2.5 내지 3 log 또는 3 log 내지 3.5 log의 범위로 오르토믹소바이러스 복제를 감소시킬 수 있거나, 또는 5일의 오셀타미비르(Tamiflu(등록상표)) 요법 후에 달성된 감소에 비해 더 짧은 기간, 예를 들어 1일, 2일, 3일 또는 4일 내에 오셀타미비르(Tamiflu(등록상표)) 요법과 동일한 감소를 달성할 수 있다.
일정 기간 후에, 감염원은 하나 이상의 선택 치료제에 대한 내성이 생길 수 있다. CDC에 따르면, 많은 인플루엔자 A 균주는 아만타딘 및 리만타딘을 포함하는, 아다만탄으로 알려진 종류의 인플루엔자 약물에 대한 내성을 갖는다. 마찬가지로, H1N1 인플루엔자 바이러스의 균주는 오셀타미비르에 대한 내성을 갖는 것으로 알려져 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "내성"은 바이러스 균주가 치료제(들)에 대해 지연 반응, 감소 반응 및/또는 무반응을 나타냄을 말한다. 예를 들어, 항바이러스제에 의한 치료 후에, 내성 바이러스로 감염된 대상체의 바이러스 부하는 비내성 균주로 감염된 대상체에 의해 나타나는 바이러스 부하 감소의 양에 비해 더 적은 정도로 감소될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)(및 화학식 (II), 화학식 (III) 및 화학식 (IV))의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하나 이상의 상이한 항인플루엔자 제제(예를 들어, 아만타딘, 리만타딘 및/또는 오셀타미비르)에 내성인 인플루엔자 바이러스 균주에 감염된 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 M2 단백질 억제제에 내성인 인플루엔자 바이러스에 감염된 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 오셀타미비르로 치료되고 합병증을 경험한 대상체의 백분율에 비해 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 합병증을 경험한 대상체의 백분율을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 오셀타미비르로 치료되는 대상체에 비해 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로 치료되고 합병증을 경험한 대상체의 백분율은 10%, 25%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 및 90% 더 적을 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 본 명세서에 기재된 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가의 작용제(들)와 병용하여 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 인플루엔자를 치료하기 위한 통상적인 표준 치료에서 현재 사용되는 하나 이상의 작용제와 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 추가의 작용제는 아만타딘(아다만탄-1-아민, Symmetrel(등록상표)), 리만타딘(Flumadine(등록상표)), 자나미비르(리렌자(등록상표)) 및 오셀타미비르(타미플루(등록상표))일 수 있다. 인플루엔자의 치료를 위한 추가의 작용제에는 뉴라미니다제 억제제, M2 단백질 억제제, 중합효소 억제제, PB2 억제제, 페라미비르(peramivir) ((1S,2S,3S,4R)-3-[(1S)-1-아세트아미도-2-에틸부틸]-4-(다이아미노메틸리덴아미노)-2-하이드록시사이클로펜탄-1-카르복실산, BioCryst Pharmaceuticals), 라니나미비어(laninamivir) ((4S,5R,6R)-5-아세트아미도-4-카르바미미드아미도-6-[(1R,2R)-3-하이드록시-2-메톡시프로필]-5,6-다이하이드로-4H-피란-2-카르복실산), 파비피라비어(favipiravir) (T-705, 6-플루오로-3-하이드록시-2-피라진카르복스아미드), 라니나미비어 옥타노에이트 ((3R,4S)-3-아세트아미도-4-구아니디노-2-((1S,2S)-2-하이드록시-1-메톡시-3-(옥타노일옥시)프로필)-3,4-다이하이드로-2H-피란-6-카르복실산) 플루다제(DAS181, NexBio), ADS-8902(아만타딘 HCl/오셀타미비어/리바비린, Adamas Pharmaceuticals), 면역 조절제(예를 들어, 1형 인터페론), 베라프로스트(4-[2-하이드록시-1-[(E)-3-하이드록시-4-메틸옥트-1-엔-6-인일]-2,3,3a,8b-테트라하이드로-1H-사이클로펜타[b][1]벤조푸란-5-일]부탄산), Neugene(등록상표), 리바비린, (R)-3-((5-플루오로-2-(5-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)피리미딘-4-일)아미노)-4,4-다이메틸펜탄산(CAS 등록 번호 1422050-75-6), (2S,3S)-3-((5-플루오로-2-(5-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.2]옥탄-2-카르복실산 산(CAS 등록 번호 1259366-34-1, VX-787), (S)-8-벤즈히드릴-4-하이드록시-6-아이소프로필-7,8-다이하이드로-3H-피라지노[1,2-b]피리다진-3,5(6H)-디온, (S)-8-벤즈히드릴-6-아이소프로필-3,5-다이옥소-5,6,7,8-테트라하이드로 -3H-피라지노[1,2-b]피리다진-4-일 아이소부티레이트 FluMist Quadrivalent(등록상표)(MedImmune), Fluarix(등록상표) Quadrivalent(GlaxoSmithKline), Fluzone(등록상표) Quadrivalent(Sanofi Pasteur), Flucelvax(등록상표)(Novartis) 및 FluBlok(등록상표)(Protein Sciences)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 본 명세서에 기재된 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 오셀타미비르와 병용하여 사용될 수 있다.
1형 인터페론이 당업자에게 알려져 있다. 예의 비제한적 목록에는 알파-인터페론, 베타-인터페론, 델타-인터페론, 오메가-인터페론, 타우-인터페론, x-인터페론, 컨센서스(consensus) 인터페론 및 아시알로(asialo)-인터페론이 포함된다. 1형 인터페론은 페길화될 수 있다. 1형 인터페론의 특정예에는 인터페론 알파 1A, 인터페론 알파 1B, 인터페론 알파 2A, 인터페론 알파 2B, 페길화-인터페론 알파 2a(PEGASYS, Roche), 재조합 인터페론 알파 2a(ROFERON, Roche), 흡입형(inhaled) 인터페론 알파 2b(AERX, Aradigm), 페길화-인터페론 알파 2b(ALBUFERON, Human Genome Sciences/Novartis, PEGINTRON, Schering), 재조합 인터페론 알파 2b(INTRON A, Schering), 페길화 인터페론 알파 2b(PEG-INTRON, Schering, VIRAFERONPEG, Schering), 인터페론 베타-1a(REBIF, Serono, Inc. 및 Pfizer), 컨센서스 인터페론 알파(INFERGEN, Valeant Pharmaceutical)가 포함된다.
일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 단일 약제학적 조성물로 하나 이상의 추가의 작용제(들)와 함께 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 둘 이상의 별개의 약제학적 조성물로서 하나 이상의 추가의 작용제(들)와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하나의 약제학적 조성물로 투여될 수 있고, 추가의 작용제들 중 적어도 하나가 제2 약제학적 조성물로 투여될 수 있다. 적어도 2가지의 추가의 작용제가 존재하는 경우, 하나 이상의 추가의 작용제는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 제1 약제학적 조성물에 존재할 수 있고, 적어도 하나의 다른 추가의 작용제(들)는 제2 약제학적 조성물에 존재할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 하나 이상의 추가의 작용제(들)의 투여 순서는 다양할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 모든 추가의 작용제보다 앞서 투여될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 적어도 하나의 추가의 작용제보다 앞서 투여될 수 있다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하나 이상의 추가의 작용제(들)와 동시에 투여될 수 있다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 적어도 하나의 추가의 작용제의 투여에 후속하여 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 모든 추가의 작용제의 투여에 후속하여 투여될 수 있다.
투여 경로, 정확한 투여량(dosage) 및 투여 빈도는 당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 사용되는 특정 화학식 (I)(또는 화학식 (II), 화학식 (III) 또는 화학식 (IV))의 화합물, 치료되는 포유동물 종, 치료되는 특정 병태, 치료되는 병태의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 전반적인 신체 상태뿐만 아니라 개인이 복용하고 있을 수 있는 다른 약물에 따라 좌우될 수 있다. 또한, 치료되는 대상체의 반응에 따라 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 판단에 따라 상기 유효량을 감소 또는 증가시킬 수 있음이 명백하다. 따라서, 위에서 언급된 1일 유효량은 단지 지침일 뿐이며 본 발명의 범주 또는 용도를 어느 정도로든 제한하고자 하는 것은 아니다. 성인 인간 환자에 대한 1일 투여량 계획(regimen)은 예를 들어, 0.01 mg 내지 3000 mg, 바람직하게는 1 mg 내지 700 mg, 예를 들어 5 내지 200 mg의 각 활성 성분의 경구 용량일 수 있다. 투여량은 대상체가 필요로 함에 따라, 단회 투여 또는 1일 이상 동안에 주어진 2회 이상의 연속 투여로 될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물들은 연속된 요법 기간 동안, 예를 들어 1주 이상 동안, 또는 수개월 또는 수년 동안 투여될 것이다.
화합물에 대한 인간 투여량이 적어도 일부 질환에 대해 확립된 경우에, 그러한 동일한 투여량이 사용될 수 있거나, 또는 확립된 인간 투여량의 약 0.1% 내지 500%, 더 바람직하게는 약 25% 내지 250% 사이의 투여량이 사용될 수 있다. 신규 발굴된 약제학적 조성물에 대한 경우와 같이, 인간 투여량이 확립되어 있지 않은 경우, 적합한 인간 투여량은 ED50 또는 ID50 값, 또는 동물에서의 독성 연구 및 효능 연구에 의해 공인된 바와 같은, 시험관내 또는 생체내 연구로부터 도출된 다른 적절한 값으로부터 추론될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 염의 투여의 경우에, 투여량은 유리 염기로서 계산될 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 소정의 상황에서는, 본 명세서에 개시된 화합물을, 특히 공격적인 질환 또는 감염을 효과적으로 치료하기 위하여 상기 기재된 바람직한 투여량 범위를 초과하거나, 또는 심지어는 훨씬 초과하는 양으로 투여하는 것이 필요할 수 있다.
투여량 및 투여 간격은 조절 효과, 또는 최소 유효 농도(MEC)를 유지하기에 충분한 활성 모이어티의 혈장 수준을 제공하도록 개별적으로 조정될 수 있다. MEC는 각각의 화합물에 따라 다양하겠지만, 시험관내 데이터로부터 평가될 수 있다. MEC를 달성하는 데 필요한 투여량은 개개의 특성 및 투여 경로에 좌우될 것이다. 그러나, 혈장 농도를 결정하기 위해 HPLC 검정 또는 생물학적 검정이 사용될 수 있다. 투여 간격이 MEC 값을 사용하여 또한 결정될 수 있다. 혈장 수준을 그 시간의 10 내지 90%, 바람직하게는 30 내지 90% 그리고 가장 바람직하게는 50 내지 90% 동안 MEC를 초과하여 유지하는 계획을 사용하여 조성물이 투여되어야 한다. 국부 투여 또는 선택적 흡수의 경우에, 약물의 유효 국부 농도는 혈장 농도와 관련되지 않을 수 있다.
합성
이제부터, 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물은 이의 일반적인 제조를 위한 하기 예시적인 합성 반응 도식 및 후술하는 구체적인 실시예를 참조하여 설명될 것이다. 당업자는 본 명세서의 각종 화합물을 얻기 위해, 최종적으로 원하는 치환체가 필요에 따라 보호되거나 보호되지 않고서 반응 도식을 통해 가지게 되어, 원하는 생성물을 얻도록 출발 물질이 적절히 선택될 수 있음을 인지할 것이다. 대안적으로, 최종적으로 원하는 치환체 대신에, 반응 도식을 통해 가질 수 있으며, 필요에 따라 원하는 치환체로 치환될 수 있는 적절한 기를 사용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 달리 명시되지 않으면, 변수는 화학식 (I)에 대하여 상기에 정의된 바와 같다. 반응은 용매의 융점과 환류 온도 사이에서, 바람직하게는 0℃ 내지 용매의 환류 온도에서 행해질 수 있다. 반응은 통상적인 가열 또는 마이크로파 가열을 사용하여 가열될 수 있다. 반응은 또한 용매의 통상적인 환류 온도를 초과하여 밀폐된 압력 용기에서 행해질 수 있다.
본 명세서에서 사용된 약어 및 두문자어는 다음을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
제조예
이제부터, 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물은 이의 일반적인 제조를 위한 하기 예시적인 합성 반응 도식 및 후술하는 구체적인 실시예를 참조하여 설명될 것이다.
[반응 도식 1]
Figure pct00026
반응 도식 1에 따라, D-리보푸라노스로부터 2 단계로 PG가 벤질인 화학식 (V)의 화합물을 제조한다. 제1 단계에서, MeOH 중에서 산, 예컨대 H2SO4를 사용하여 D-리보푸라노스를 메틸화한다. 제2 단계에서, 당업자에게 알려진 조건을 사용하여, 적합한 보호기, 예컨대 벤질로 보호함으로써 화학식 (V)의 화합물을 얻는다. 10 내지 15시간의 기간 동안 물 중에서 산, 예컨대 TFA 등을 사용하여 화학식 (V)의 화합물의 메틸 기의 제거를 달성하여 화학식 (VI)의 화합물을 얻는다.
[반응 도식 2]
Figure pct00027
반응 도식 2에 따라, PG가 벤질인 화학식 (VI)의 화합물을 아세틸화하고, 이어서 TMSCN/BF3OEt2로 처리하여, 화학식 (VII)의 리보푸라노실 시아나이드 화합물 및 이의 에피머를 얻는다. 화학식 (VI)의 화합물을 또한 적합한 용매, 예컨대 DCM 중에서 산화 조건, 예컨대 PCC 등을 사용하여 산화되어, 화학식 (VIII)의 화합물을 얻는다.
[반응 도식 3]
Figure pct00028
반응 도식 3에 따라, -78℃에서 화학식 (VIII)의 리보락톤 화합물을 Et2O 등과 같은 적합한 용매 중에서 LDA와 같은 염기의 존재 하에 3-((4-메톡시벤질)옥시)아이소티아졸과 반응시켜, HET가 아이소티아졸이고 Ra가 -OPMB인 화학식 (X)의 화합물을 얻는다. -78℃ 내지 25℃ 범위의 온도에서 DCM 등과 같은 적합한 용매 중에서 Et3SiH 및 BF3·Et2O를 사용하여 화학식 (X)의 화합물을 탈수소화하여, Ra가 -OH 또는 -SMe인 화학식 (XI)의 화합물을 얻는다. 4-메톡시벤질 보호기(PMB)는 전술한 바와 같은 탈수소화 조건 하에서 제거된다는 것을 이해할 것이다.
[반응 도식 4]
Figure pct00029
반응 도식 4에 따라, PG가 벤질인 화학식 (VII)의 화합물은 EtOH 등과 같은 적합한 용매 중에서, Et3N, 피리딘 등과 같은 적합한 염기, H2S에 의한 압력 하에서 화학식 (XII)의 리보푸라노실 티오아미드 화합물로 전환된다.
화학식 (XII)의 리보푸라노실 티오아미드 화합물을 통상적인 가열 또는 마이크로파 가열을 사용하여, EtOH, t-BuOH 등과 같은 적합한 용매 중에서 에틸 에틸 3-브로모-2-옥소-프로파노에이트와 한취(Hantzsch) 반응으로 고리축합시켜, Rb가 CO2Et이고 PG가 벤질인 화학식 (XIII)의 티아졸 화합물을 얻는다.
Rb가 CO2Et이고 PG가 벤질인 화학식 (XIII)의 티아다이아졸 화합물은 PG가 벤질인 화학식 (XII)의 리보푸라노실 티오아미드 화합물로부터 2단계로 합성된다. 제1 단계에서, 화학식 (XII)의 리보푸라노실 티오아미드 화합물을 마이크로파 또는 통상적인 가열을 사용하여 ACN 등과 같은 용매 중에서 시판되는 또는 합성적으로 입수가능한 에틸 2-(다이메틸아미노)-2,2-다이에톡시아세테이트(중간체 1)와 반응시킨다. 제2 후속 단계에서, 약 55℃의 온도에서 EtOH 등과 같은 용매 중에서 피리딘과 같은 염기, 아미노옥시설폰산(HAOS)의 존재 하에 치환된 카르보티오아미드를 고리화하여, Rb가 CO2Et이고 PG가 벤질인 화학식 (XIII)의 티아다이아졸 화합물을 얻는다.
[반응 도식 5]
Figure pct00030
반응 도식 5에 따라, PG가 벤질인 화학식 (VII)의 화합물을 나트륨 메톡사이드와 반응시킨 다음, 생성된 이미데이트를 제자리에서 HCl로 가수분해하여, 화학식 (XIV)의 메틸 에스테르 화합물을 얻는다. 화학식 (XIV)의 화합물로부터 2 단계로 화학식 (XV)의 화합물을 제조한다. 제1 단계에서, 하이드라진과의 반응에 의해 하이드라지드 중간체를 얻고, 이어서, 메틸 2-클로로-2-옥소아세테이트로 아세틸화하여, 화학식 (XV)의 치환된 하이드라지드를 얻는다. HET1이 티아다이아졸이고 Rb가 -CO2CH3인 화학식 (XIII)의 화합물은 승온에서 라웨슨 시약을 사용하여 화학식 (XV)의 화합물을 1-포트 티올화 및 축합하여 형성된다.
[반응 도식 6]
Figure pct00031
반응 도식 6에 따라, 시판되는 또는 합성에 의해 입수가능한, PG가 벤질인 화학식 (XVI)의 화합물을 약 70℃의 온도에서 은 트라이플레이트의 존재 하에 아크릴아미드와 반응시켜, HET가 옥사졸이고 Rb가 -CH= CH2인 화학식 (XVIII)의 화합물을 얻는다. Rb가 -C(=O)NH2가 되게 하는 Rb 비닐의 정교화(elaboration)는 4단계로 달성된다. 제1 단계에서, THF, 아세톤, 물 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 OsO4와 같은 촉매, NMO와 같은 산화제를 사용하여 비닐 Rb 모이어티를 산화시켜, Rb가 CH(OH)CH2OH인 다이올 화합물을 얻는다. 다이올 화합물을 과요오드산나트륨으로 산화적으로 쪼개어, Rb가 -C(=O)H인 화합물을 얻는다. 당업자에게 알려진 조건을 사용하여 알데히드 화합물을 산화시켜 Rb가 -CO2H인 화합물을 얻는다. Rb가 -C(=O)NH2인 화학식 (XIII)의 화합물을 아미드 결합 형성 조건 하에 아민과 반응시켜, Rb가 -CO2H인 화합물로부터 얻는다. 바람직한 실시 형태에서, 아민은 암모니아이며, 톨루엔, 아세토니트릴, 아세트산에틸, DMF, THF, 메틸렌 클로라이드 등과 같은 유기 용매 또는 이의 혼합물 중에서; HOBt/EDAC, CDI, HATU, HOAT, BOP와 같은 탈수제의 존재 하에 Rb가 -CO2H인 화합물과 반응시켜, Rb가 -C(=O)NH2인 화학식 (XIII)의 화합물을 얻는다. 특히 바람직한 실시 형태에서, 탈수제는 HATU이다.
[반응 도식 7]
Figure pct00032
반응 도식 7에 따라, 당업자에게 알려진 조건을 사용하여 Ra가 -Sme인 화학식 (XI)의 화합물을 산화시킨다. 예를 들어, Ra가 -SMe인 화학식 (XI)의 화합물을 0℃ 내지 25℃ 범위의 온도에서 DMC와 같은 적합한 용매 중에서 메타-클로로퍼옥시벤조산(mCPBA)과 같은 산화제와 반응시켜, Rb가 -SO2Me이고 Rc가 H인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다. DMSO와 같은 적합한 용매 중에서 KCN, NaCN 등을 사용하여 -SO2Me을 CN으로 전환하여, Rb가 -CN이고 Rc가 H인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다.
Rb가 CN이고 Rc가 H인 화학식 (XVII)의 화합물을 염기성 조건 하에서 Rb가 -CO2H인 화학식 (XVII)의 화합물로 가수분해한다. 예를 들어, 약 90℃의 온도에서 18 내지 24시간 동안 MEOH, H2O 및 THF와 같은 적합한 용매 혼합물 중에서 KOH와 같은 염기와의 반응은 Rb가 CN이고 Rc가 H인 화학식 (XVII)의 화합물을 Rb가 -CO2H인 화학식 (XVII)의 화합물로 가수분해시켜, Rb가 -CO2H인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다. Rb가 -CO2H인 화학식 (XVII)의 화합물을 용매, 예컨대 DCM 중에서 알코올, 예컨대 2-메틸프로판-2-올 등, DMAP, DCC를 사용하여 에스테르화하여, Rb가 -CO2C1-4 알킬인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다. Rb가 -CO2C1-4 알킬인 화학식 (XIII) 또는 화학식 (XVII)의 화합물을 약 -78℃의 온도에서 염기, 예컨대 LDA 및 트라이알킬 주석 시약, 예컨대 트라이메틸주석 클로라이드, 트라이부틸클로로스탄난 등과 반응시켜, Rb가 -CO2C1-4 알킬이고, Rc가 Sn(C1-4 알킬)3인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다. Rb가 -CO2C1-4 알킬이고 Rc가 Sn(C1-4 알킬)3인 화학식 (XVII)의 화합물은 은-매개 플루오르화 반응으로 플루오르화된다. 예를 들어, Rb가 -CO2C1-4알킬이고 Rc가 Sn(C1-4알킬)3인 화학식 (XVII)의 화합물을 아세톤, EtOAc 등과 같은 적합한 용매 중에서 약 65℃의 온도에서 Ag2O, AgOTf 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 은 시약, 셀렉트-플루오로(등록상표)와 같은 플루오르화제, NaOH, K2CO3, NaHCO3 등과 같은 염기와 반응시켜, Rb가 -CO2C1-4알킬이고, Rc는 F인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다. Rb가 -CO2C1-4알킬이고 Rc가 H 또는 F인 화학식 (XIII) 또는 화학식 (XVII)의 화합물의 에스테르 작용기를 약 50℃의 온도에서 18 내지 24시간 동안 NH3·MeOH를 사용하여 Rb가 -C(=O)NH2이고 Rc는 H 또는 F인 화학식 (XVII)의 화합물의 아미드 화합물로 직접 변환시킨다.
.
Rb가 CN이고 Rc가 H 또는 Cl인 화학식 (XVII)의 화합물은 과산화수소의 존재 하에 알칼리 조건 하에서 Rb가 -C(=O)NH2인 화학식 (XVII)의 화합물로 전환된다. 예를 들어, Rb가 CN인 화학식 (XVII)의 화합물을 NH3 .H2O 등과 같은 염기 및 H2O2와 실온에서 반응시켜 Rb가 -C(=O)NH2이고 Rc가 H 또는 Cl인 화학식 (XVII)의 화합물을 얻는다.
PG가 벤질인 화학식 (XI), 화학식 (XIII) 또는 화학식 (XVII)의 화합물은 -78℃ 내지 0℃ 범위의 온도에서 DCM과 같은 적합한 용매 중에서 BCl3을 사용하여 탈보호되어, HET가
Figure pct00033
이고, R3 및 R4가 H인 화학식 (I)의 화합물을 얻는다.
[반응 도식 8]
Figure pct00034
반응 도식 8에 따라, 화학식 (I)의 화합물을 아실화하여 화학식 (II)의 화합물을 얻는다. 제1 단계에서, 화학식 (I)의 화합물의 2차 하이드록실 기는 트라이메틸 오르토포르메이트 및 촉매량의 p-톨루엔설폰산 일수화물로 처리되어 옥소메틸렌-테더링된 것으로 보호된다. 제2 단계에서, 적합한 용매, 예컨대 DCM 중에서 산 클로라이드, 예컨대 프로피오닐 클로라이드, 아이소부티릴 클로라이드, BzCl 등, 염기, 예컨대 피리딘 등 및 촉매, 예컨대 DMAP로 아실화하였다. 옥소메틸렌-테더링된 것으로 보호된 화합물을 적합한 용매, 예컨대 DMF 중에서 Boc-발린 등 및 DCC와 교대로 반응시킨다.
다이옥산, 물, 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 HCl과 같은 산을 사용하여 테더링된 옥소메틸렌을 탈보호하여, R6이 -C(=O)C1-6 알킬 또는 -C(= O)CH(NH2)C1-6 알킬인 화학식 (II)의 화합물을 얻는다.
[반응 도식 9]
Figure pct00035
반응 도식 9에 따라, HET가 티아다이아졸인 화학식 (I)의 화합물은 트라이메틸 오르토포르메이트 및 촉매량의 p-톨루엔설폰산 일수화물로 처리되어 옥소메틸렌-테더링된 것으로 보호된다. 제2 단계에서, 적합한 용매, 예컨대 THF 등 중에서, 트라이에틸암모늄 비스(POC)포스페이트, 염기, 예컨대 DIPEA 등, BopCl, 및 니트로트라이아졸과 옥소메틸렌-테더링된 화합물을 반응시켜, 2개의 R7 구성원이 함께 OCH3으로 치환된 5원 고리를 형성하고, R8이 -CH2O-(C=O)-O-C1-6 알킬인 화학식 (III)의 화합물을 얻는다.
다이옥산, 물, 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 HCl과 같은 산을 사용하여 테더링된 옥소메틸렌을 탈보호하여, R7이 H이고 R8은 -CH2O-(C=O)-O-C1-6 알킬인 화학식 (II)의 화합물을 얻는다.
[반응 도식 10]
Figure pct00036
반응도식 10에 따라, 당업자에게 알려진 조건을 사용하여 화학식 (I)의 화합물로부터 HET가
Figure pct00037
인 화학식 (IV)의 뉴클레오시드 화합물을 제조한다. 예를 들어, 화학식 (I)의 뉴클레오시드를 트라이메틸 포스페이트, 포스포릴 클로라이드 및 N-메틸이미다졸과 반응시켜 모노포스페이트를 얻는다. 이어서, 적합한 용매, 예컨대 DMF 등 중에서 피로포스페이트의 테트라부틸암모늄 염과 반응시켜 화학식 (IV)의 트라이포스페이트를 얻는다.
화학식 (I)의 화합물은 당업자에게 알려진 방법을 사용하여 이의 상응하는 염으로 전환될 수 있다. 예를 들어, 화학식 (I)의 아민을 용매, 예컨대 Et2O, CH2Cl2, THF, MeOH, 클로로포름 또는 아이소프로판올 중에서 트라이플루오로아세트산, HCl 또는 시트르산으로 처리하여, 상응하는 염 형태를 얻는다. 대안적으로, 트라이플루오로아세트산 또는 포름산 염은 역상 HPLC 정제 조건의 결과로서 얻어진다. 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염의 결정질 형태는 극성 용매(극성 용매의 혼합물 및 극성 용매의 수성 혼합물을 포함함) 또는 비극성 용매(비극성 용매의 혼합물을 포함함)로 재결정하여, 결정질 형태로 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 화합물이 적어도 하나의 키랄 중심을 갖는 경우, 이는 그에 따라 거울상 이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우에, 이는 추가로 부분입체 이성질체로서 존재할 수 있다. 모든 그러한 이성질체 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
전술된 반응 도식에 따라 제조된 화합물은 형태 특이적 합성 또는 분해에 의해 단일 거울상 이성질체와 같은 단일 형태로서 얻을 수 있다. 상기 반응 도식에 따라 제조된 화합물은 대안적으로 다양한 형태의 혼합물, 예컨대 라세미(1:1) 또는 비라세미(1:1이 아님) 혼합물로서 얻을 수 있다. 거울상 이성질체의 라세미 및 비라세미 혼합물이 얻어지는 경우, 단일 거울상 이성질체는 당업자에게 공지된 통상적인 분리 방법, 예를 들어 키랄 크로마토그래피, 재결정, 부분입체 이성질체 염 형성, 부분입체 이성질체 부가물로의 유도체화, 생체내 변환(biotransformation) 또는 효소 변환을 이용하여 분리될 수 있다. 위치 이성질체 또는 부분입체 이성질체 혼합물이 얻어지는 경우, 적용 가능한 경우, 단일 이성질체는 통상적인 방법, 예를 들어 크로마토그래피 또는 결정화를 이용하여 분리될 수 있다.
하기 구체적인 실시예는 본 발명 및 다양한 바람직한 실시 형태를 더욱 더 설명하기 위해 제공된다.
실시예
하기 실시예에 기재된 화합물 및 상응하는 분석 데이터를 얻는 데 있어서, 달리 지시되지 않는 한, 하기 실험 및 분석 프로토콜을 따랐다.
달리 언급되지 않는 한, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온(rt)에서 자석 교반하였다. 용액을 "건조시키는" 경우에는, 이를 일반적으로 건조제, 예컨대 Na2SO4 또는 MgSO4로 건조시켰다. 혼합물, 용액 및 추출물을 "농축시키는" 경우에는, 이를 감압 하에서 회전 증발기 상에서 농축시켰다. 마이크로파 조사 조건 하에서의 반응은 Biotage Initiator에서 실행하였다.
순상 실리카 겔 크로마토그래피(FCC)를 미리 충전된 카트리지를 사용하여 실리카 겔(SiO2) 상에서 행하였다.
분취용 역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP HPLC)를 Agilent HPLC 상에서 수행하였는데, 이것은 Xterra Prep RP18 컬럼(5 μM, 30 x 100 또는 50 x 150 mm) 또는 XBridge C18 OBD 컬럼(5 μM, 30 x 100 또는 50 x 150 mm)을 구비하였으며, 20 mM NH4HCO3 중 5% ACN의 이동상을 2분 동안 유지하고, 이어서 15분에 걸쳐 5 내지 99% ACN의 구배를 수행하고, 이어서 99% ACN에서 5분 동안 유지하였으며, 이때 유량은 40 또는 80 mL/min이었다.
질량 스펙트럼(MS)은 포지티브 모드에서 전기분무 이온화(ESI)를 사용하여 애질런트 시리즈 1100 MSD 상에서 얻었다. NTP의 질량 스펙트럼을 음성 모드에서 얻었다. 계산된(calcd.) 질량은 정확한 질량에 해당한다.
핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 Bruker 모델 DRX 분광계 또는 Varian 400 상에서 얻었다. 다중도에 대한 정의는 다음과 같다: s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, m = 다중선, br = 넓은. 교환가능한 양성자를 포함하는 화합물의 경우, 상기 양성자는 NMR 스펙트럼을 실행하는 데 사용되는 용매의 선택 및 용액 중의 화합물의 농도에 따라 NMR 스펙트럼 상에서 가시적일 수도 비가시적일 수도 있음을 이해할 것이다.
화학명은 ChemDraw Ultra 12.0, ChemDraw Ultra 14.0(미국 매사추세츠주 케임브리지 소재의 CambridgeSoft Corp.) 또는 ACD/Name 버전 10.01(Advanced Chemistry)을 사용하여 생성하였다.
중간체 1: 에틸 2-(다이메틸아미노)-2,2-다이에톡시아세테이트.
Figure pct00038
단계 A: 에틸 2-(다이메틸아미노)-2-옥소아세테이트. DCM(2.0 L) 중의 에틸 2-클로로-2-옥소아세테이트(100.00 g, 732.45 mmol, 81.95 mL)의 용액에, Et3N(133.4 g, 1.32 mol, 182.75 mL)을 첨가한 다음, 0℃에서 N-메틸메탄아민 염산염(107.5 g, 1.32 mol, 1.80 eq.)을 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물에 EtOH(100 mL)를 첨가하여 켄칭하고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, PE/EA=5/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(93.00 g, 634.27 mmol, 86.60% 수율, 99% 순도)을 얻었다.
1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 4.32 (q, J = 7.3 ㎐, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 1.35 (t, J=7.2 ㎐, 3H). LCMS: MS: m/z 145.9 [M+H]+.
단계 B. 에틸 2-(다이메틸아미노)-2,2-다이에톡시아세테이트 에틸 2-(다이메틸아미노)-2-옥소아세테이트(90 g, 620 mmol, 1.00 eq.)를 트라이에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트(117.8 g, 620 mmol)로 처리하고, 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, NaOEt(EtOH(600.00 mL) 중의 Na(14.26 g, 620 mmol)로 제조됨)의 용액으로 처리하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼(PE/EA/TEA=100/1/1)으로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(66.00 g, 300.99 mmol, 43.69% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 4.27 (q, J = 7.13 ㎐, 2 H), 3.56-3.67 (m, 2 H), 3.48 (dq, J = 9.65, 7.07 ㎐, 2 H), 2.35 (s, 6 H), 1.33 (t, J = 7.17 ㎐, 3 H), 1.23 (t, J = 7.17 ㎐, 6 H).
중간체 2. 3-((4-메톡시벤질)옥시)아이소티아졸.
Figure pct00039
0℃에서 N2 하에 DMF(20.00 mL) 중의 아이소티아졸-3-올의 용액에 K2CO3 (6.83 g, 49.44 mmol) 및 4-메톡시벤질 클로라이드(PMB-Cl)(4.26 g, 27.19 mmol, 3.70 mL, 1.10 eq.)를 첨가하고, 25℃에서 18시간 동안 교반하였다.반응 혼합물을 H2O(50 mL)로 켄칭하고, EtOAc(50 x 3 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, PE/EA=100/1 내지 40/1)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(6.30 g, 25.91 mmol, 52.41% 수율, 91% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 8.45 (d, J=4.9 ㎐, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 2H), 6.98 - 6.89 (m, 2H), 6.62 (d, J=4.6 ㎐, 1H), 5.35 (s, 2H), 3.83 (s, 3H).
중간체 3: (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-올.
Figure pct00040
단계 A: (2R,3S,4R)-2-(하이드록시메틸)-5-메톡시테트라하이드로푸란-3,4-다이올. MeOH(150.00 mL) 중의 (3R,4S,5R)-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2,3,4-트라이올(20.00 g, 133.22 mmol)의 용액에 H2SO4(2.40 g, 23.98 mmol, 1.30 mL, 98% 순도)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 2개의 배치로 설정하였다. 반응 혼합물을 MeOH(200 mL)로 희석하고, Na2CO3 고체로 켄칭하고 여과하였다. 여과액을 진공 중에서 농축시켰다. 정제((FCC, SiO2, DCM/MeOH 25/1 내지 5/1)를 수행하여, 무색 오일로서 표제 화합물(40 g, 243.67 mmol, 91.45% 수율)을 얻었다.
단계 B: (2R,3R,4R)-3,4-비스(벤질옥시)-2-((벤질옥시)메틸)-5-메톡시테트라하이드로푸란. DMF(200.00 mL) 중의 2R,3S,4R)-2-(하이드록시메틸)-5-메톡시테트라하이드로푸란-3,4-다이올(20.00 g, 121.83 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(17.06 g, 426.41 mmol, 60% 순도)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, TBAI(4.50 g, 12.18 mmol)를 첨가하고, BnBr(72.93 g, 426.41 mmol, 50.65 mL, 3.50 eq.)을 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 11시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(200 mL)로 희석하고, 포화 NH4Cl 용액(200 mL)으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL x 2)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=25/1 내지 5/1)로 정제하여, 담황색 오일로서 표제 화합물(38.60 g, 88.83 mmol, 72.92% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.38 - 7.23 (m, 14H), 4.91 (s, 1H), 4.68 - 4.63 (m, 1H), 4.62 - 4.58 (m, 1H), 4.55 (d, J=4.6 ㎐, 1H), 4.53 - 4.51 (m, 1H), 4.46 - 4.41 (m, 1H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.00 (dd, J=4.6, 7.1 ㎐, 1H), 3.83 (dd, J=0.7, 4.6 ㎐, 1H), 3.63 - 3.56 (m, 1H), 3.52 - 3.46 (m, 1H), 3.30 (s, 3H).
단계 C: (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-올. (2R,3R,4R)-3,4-비스(벤질옥시)-2-((벤질옥시)메틸)-5-메톡시테트라하이드로푸란(25.00 g, 57.53 mmol)을 TFA(70.00 mL)와 H2O(30.00 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 3개의 배치로 설정하였다. 반응 혼합물을 물(300 mL)로 희석시키고, 고체 NaHCO3 (120 g)로 중성화하였다. 생성된 용액을 EA(500 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수(400 mL x 2)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=30:1 내지 10:1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(56.50 g, 134.36 mmol, 77.85% 수율)을 얻었다.
중간체 4: (2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴.
Figure pct00041
단계 A: (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일 아세테이트. DCM(500 mL) 중의 (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-올(중간체 3, 35.00 g, 83.23 mmol)의 용액에 DMAP(1.02 g, 8.33 mmol) 및 Ac2O(25.48 g, 249.69 mmol, 23.38 mL) 및 Et3N(25.27 g, 107.01 mmol, 34.65 mL)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3(50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, EA(50 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EA(200 mL X 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(300 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, PE/EA 100/1 내지 5/1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(32.00 g, 65.73 mmol, 78.97% 수율, 95% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 485.2 [M+ Na] +
단계 B: (2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴. CH3CN(300.00 mL) 중의 (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일 아세테이트의 용액에 트라이메틸실릴 시안화물(TMSCN)(9.65 g, 97.25 mmol) 및 BF3·Et2O(11.05 g, 77.80 mmol)를 -35℃에서 첨가하였다. 혼합물을 -35℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액(200 mL)으로 켄칭하고, 반응 혼합물을 EA(200 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(150 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼(PE/EA 20/1 내지 4/1)으로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(12.10 g, 27.89 mmol, 43.01% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 7.39-7.26 (m, 15H), 4.64-4.48 (m, 7H), 4.31 (t, J=5.0 ㎐, 1H), 4.24 (q, J=3.7 ㎐, 1H), 4.08-4.03 (m, 1H), 3.61-3.48 (m, 2H).
중간체 5: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-(트라이메틸스탄닐)티아졸-4-카르복실레이트
Figure pct00042
단계 A: (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보티오아미드. (2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5 ((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴(중간체 4, 23.00 g, 53.55 mmol), Et3N(55.00 mL) 및 EtOH(1.00 L)의 혼합물을 18℃에서 2시간 동안 H2S(15 PSI)로 버블링하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=10/1)로 정제하여, 황색 고체로서 표제 화합물(24.00 g, 51.77 mmol, 96.68% 수율, 100% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 9.10 (br, s, 1H), 7.54 - 7.46 (m, 2H), 7.40 - 7.27 (m, 9H), 7.25 - 7.20 (m, 2H), 7.15 (dd, J=2.4, 7.1 ㎐, 2H), 7.09 (br s, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.91 (d, J=12.1 ㎐, 1H), 4.71 (d, J=12.1 ㎐, 1H), 4.51 - 4.45 (m, 2H), 4.41 - 4.36 (m, 1H), 4.34 (dd, J=1.6, 9.8 ㎐, 1H), 4.30 (d, J=4.5 ㎐, 1H), 4.17 (d, J=11.9 ㎐, 1H), 3.99 - 3.92 (m, 2H), 3.63 (d, J=10.0 ㎐, 1H). LCMS: ESI-MS: m/z = 464.0 [M + H]+.
단계 B: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)티아졸-4-카르복실레이트. EtOH(300.00 mL) 중의 (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보티오아미드(24.00 g, 51.77 mmol) 및 에틸 3-브로모-2-옥소-프로파노에이트(20.19 g, 103.54 mmol, 12.94 mL)의 혼합물을 5시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(ISCO(등록상표); 80 g 세파플래시(SepaFlash)(등록상표) 실리카 플래시 컬럼, 60 mL/분으로 10% 아세트산에틸/석유 에테르의 용리제 구배)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(25.00 g, 34.84 mmol, 67.30% 수율, 78% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 7.42 - 7.26 (m, 15H), 5.46 (d, J=3.2 ㎐, 1H), 4.85 - 4.70 (m, 2H), 4.65 - 4.50 (m, 3H), 4.49 - 4.35 (m, 4H), 4.30 - 4.25 (m, 1H), 3.95 -3.90 (m, 1H), 3.77 - 3.65 (m, 2H), 1.43 (t, J= 6.8 ㎐, 3H).
단계 C: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-(트라이메틸스탄닐)티아졸-4-카르복실레이트.
무수 THF(5 mL) 중의 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)티아졸-4-카르복실레이트(520.00 mg, 929.12 μmol)의 용액에 LDA(2 M, 464.56 μL)를 -78℃에서 첨가하였다. 3분 후에, 클로로트라이메틸스탄난(1 M, 2.32 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 추가로 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃에서 10% 구연산염 완충액(pH=4.0, 5 mL)으로 켄칭하였다. 이어서, 반응 혼합물을 18℃로 만들고, 10% 구연산염 완충액(pH=4.0, 5 mL)과 EtOAc(15 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=10/1)로 정제하여, 오일로서 표제 화합물(3.40 g, 4.38 mmol, 42.82% 수율, 93% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z = 723.8 [M + H]+. 주: 반응물(동시에 11개의 배치) 및 조합된 잔기들을 1회 정제하였다.
중간체 6: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-(트라이부틸스탄닐)티아졸-4-카르복실레이트.
Figure pct00043
THF(10 mL) 중의 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)티아졸-4-카르복실레이트(중간체 5, 단계 B의 생성물, 1.00 g, 1.79 mmol)의 용액에 LDA(2 M, 984.50 μL)를 -78℃에서 첨가하였다. 5분 후에, 트라이부틸클로로스탄난(1.76 g, 5.41 mmol, 1.45 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 추가로 교반하였다. 혼합물을 -78℃에서 10% 구연산염 완충액(pH=4.0, 10 mL)으로 켄칭하였다. 이어서, 반응 혼합물을 18℃로 만들고, 10% 구연산염 완충액(pH=4.0, 10 mL)과 EtOAc(50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=12/1)로 정제하여, 오일로서 표제 화합물(6.40 g, 7.54 mmol, 42.13% 수율)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z = 850.4 [M + H]+, 872.3 [M + Na]+.
반응물(동시에 10개의 배치)을 조합하고 정제하였다.
중간체 7: (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)다이하이드로푸란-2(3H)-온.
Figure pct00044
DCM(100.00 mL) 중의 (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-올(중간체 3, 15.00 g, 35.67 mmol)의 용액에 피리디늄 클로로크로메이트(PCC)(15.38 g, 71.34 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 3개의 배치로 설정하였다. 반응 혼합물을 Celite(등록상표) 상에서 여과하였다. 여과액을 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/아세트산에틸=30:1 내지 5:1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(34.50 g, 82.44 mmol, 77.04% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.41 - 7.26 (m, 13H), 7.20 - 7.16 (m, 2H), 4.96 (d, J=11.9 ㎐, 1H), 4.78 - 4.68 (m, 2H), 4.58 - 4.53 (m, 2H), 4.52 - 4.48 (m, 1H), 4.44 - 4.39 (m, 2H), 4.19 - 4.08 (m, 1H), 3.73 - 3.63 (m, 1H), 3.59 - 3.52 (m, 1H).
중간체 8: 1-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-2-브로모에탄-1-온.
Figure pct00045
단계 A: (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르복실산. H2O(10 mL) 및 다이옥산(60 mL) 중의 (2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5 ((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴(중간체 4, 10 g, 23.28 mmol)의 용액에 다이옥산(80 mL) 중의 4 M HCl을 한번에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 EA(100 mL)에 용해시키고, 유기 층을 염수(50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 1/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(6.8 g, 15.16 mmol, 65.12% 수율)을 얻었다.
단계 B: (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)-N-메톡시-N-메틸테트라하이드로푸란-2-카르복스아미드. THF(50 mL) 중의 (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르복실산(6.5 g, 14.49 mmol)의 용액에, DIPEA(11.24 g, 86.96 mmol, 15.19 mL), HATU(6.61 g, 17.39 mmol) 및 N, O-다이메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(4.24 g, 43.48 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(20 mL)로 켄칭하였다. 생성된 용액을 EA(20 mL x 2)로 추출하고, 유기 층을 염수(20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 3:1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(6.2 g, 87.03% 수율)을 얻었다. LCMS: ESI -MS: m/z = 492.2 [M + H]+, 514.1 [M + Na]+
단계 C: 1-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)에탄-1-온. THF(100 mL) 중의 (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)-N-메톡시-N-메틸테트라하이드로푸란-2-카르복스아미드(6 g, 12.21 mmol)의 용액에 -78℃에서 MeMgBr(3 M, 6.10 mL, 1.50 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액(30 mL)으로 켄칭하고, 반응 혼합물을 EA(50 mL*2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(35 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=50/1 내지 3:1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(5.1 g, 93.57% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.38 - 7.14 (m, 15H), 4.66 - 4.38 (m, 7H), 4.28 (td, J=3.5, 6.6 ㎐, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 1H), 3.81 (dd, J=5.1, 6.4 ㎐, 1H), 3.67 (dd, J=3.1, 10.6 ㎐, 1H), 3.53 (dd, J=4.0, 10.6 ㎐, 1H), 2.25 - 2.10 (m, 3H)
단계 D: 1-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-2-브로모에탄-1-온. 0℃에서 DCM(20 mL) 중의 1-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)에탄-1-온(2 g, 4.48 mmol)의 용액에, DIPEA(2.32 g, 17.92 mmol, 3.13 mL), 이어서 TMSOTf(2.99 g, 13.44 mmol, 2.43 mL)를 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물(20 mL)로 켄칭하고, DCM(20 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물 THF(10 mL) 및 H2O(5 mL)에 용해시킨 다음, NBS(797.16 mg, 4.48 mmol, 1.00 eq)를 0℃에서 나누어 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(30 mL) 및 염수(20 mL)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 3:1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(3.3 g, 70.11% 수율) d를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.35 - 6.99 (m, 15H), 4.70 - 4.19 (m, 7H), 4.19 - 4.10 (m, 3H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.74 (dd, J=5.0, 6.7 ㎐, 1H), 3.59 (dd, J=2.6, 10.8 ㎐, 1H), 3.47 - 3.27 (m, 1H); LCMS: ESI -MS: m/z = 547.0, 549.0 [M + Na]+.
실시예 1: 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드.
Figure pct00046
단계 A: (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보티오아미드. EtOH (300 mL) 및 Et3N (50.00 mL) 중의 (2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴(중간체 4, 10.00 g, 23.28 mmol)을 H2S(15 PSI)로 버블링하고, 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(PE/EA= 4:1)로 정제하여, 황색 고체로서 표제 화합물(9.60 g, 20.29 mmol, 87.17% 수율, 98% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 9.12 (br, s, 1H), 7.51 (br, d, J=6.8 ㎐, 2H), 7.40-7.08 (m, 14H), 4.97 (s, 1H), 4.91 (d, J=12.1 ㎐, 1H), 4.72 (d, J=12.1 ㎐, 1H), 4.51-4.45 (m, 2H), 4.41-4.28 (m, 3H), 4.16 (d, J=11.9 ㎐, 1H), 4.00-3.93 (m, 2H), 3.64 (d, J=10.6 ㎐, 1H). LCMS: ESI-MS: m/z 464.0 [M+H] +, 486.1 [M+ Na] +.
단계 B: 에틸 (Z)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보노티오일)이미노)-2-(다이메틸아미노)아세테이트. CH3CN(1.50 mL x 3) 중의 (2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보티오아미드(2.00 g x 5, 4.32 mmol x 3)의 용액에 에틸 2-(다이메틸아미노)-2,2-다이에톡시아세테이트(중간체 1, 3.79 g x 3, 17.28 mmol x 3)를 첨가하였다. 밀봉된 튜브의 반응 혼합물을 마이크로파 조사 하에 78℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(PE/EA=1/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(1.3 g, 16% 수율)을 얻었다. 회수된 출발 물질 2.6 g을 재활용하였다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3), δ = 7.37-7.12 (m, 15H), 4.98 (d, J=1.5 ㎐, 1H), 4.77 (d, J=12.0 ㎐, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 4.52-4.47 (m, 1H), 4.46 (d, J=7.8 ㎐, 1H), 4.33 (td, J=4.2, 8.3 ㎐, 1H), 4.23 (d, J=12.0 ㎐, 1H), 4.18-4.10 (m, 2H), 4.07 (dd, J=1.6, 4.9 ㎐, 1H), 3.87 (dd, J=4.9, 8.4 ㎐, 1H), 3.67 (d, J=4.3 ㎐, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 1.18 (t, J=7.2 ㎐, 3H). LCMS: ESI-MS: m/z 591.1 [M+Na] +.
단계 C: 에틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복실레이트. EtOH(10.00 mL) 및 피리딘(367.0 mg, 4.64 mmol) 중의 에틸 (Z)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-카보노티오일)이미노)-2-(다이메틸아미노)아세테이트(1.3 g, 2.32 mmol)의 용액에 MeOH(3.00 mL) 중의 아미노 옥시설폰산(262.4, 2.32 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 55℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(PE/EA=5/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(670 mg, 50.1% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.42-7.24 (m, 15H), 5.52 (d, J=3.1 ㎐, 1H), 4.85-4.72 (m, 2H), 4.61-4.49 (m, 5H), 4.44-4.38 (m, 2H), 4.23 (dd, J=3.2, 4.7 ㎐, 1H), 3.98 (dd, J=4.9, 7.3 ㎐, 1H), 3.78 (dd, J=2.3, 10.9 ㎐, 1H), 3.60 (dd, J=3.5, 10.8 ㎐, 1H), 1.53-1.44 (m, 3H).
LCMS: ESI-MS: m/z 583.1 [M+ Na] +.
단계 D: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드. EtOH(5.00 mL) 중의 에틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복실레이트(670.00 mg, 1.19 mmol)의 용액에 NH3·EtOH(10.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼(PE/EA=2/1)으로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(405 mg, 67.08% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.38-7.24 (m, 15H), 7.15 (br, s, 1H), 5.80 (br, s, 1H), 5.48 (d, J=3.5 ㎐, 1H), 4.80-4.69 (m, 2H), 4.62-4.43 (m, 4H), 4.43-4.39 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 1H), 4.00 (dd, J=4.7, 6.7 ㎐, 1H), 3.77 (dd, J=2.6, 10.8 ㎐, 1H), 3.60 (dd, J=3.4, 10.9 ㎐, 1H). LCMS: ESI-MS: m/z 532.1 [M+ H]+ 554.1 [M+ Na]+.
단계 E: 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드. DCM(2.00 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(405.00 mg, 763 μmol)의 용액에 -78℃에서 BCl3(1 M, 5.87 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH(5 mL)로 켄칭하고, 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH(1 mL) 및 MeOH(7.0 M, 5 mL) 중의 3 방울의 NH3에 용해시키고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼(DCM/MeOH 15/1 내지 5/1)으로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(122.1 mg)을 얻었다(동결건조를 위한 다른 배치와 조합됨). 1H NMR (D2O, 400 ㎒) δ = 5.38 (d, J=4.8 ㎐, 1H), 4.36-4.39 (t, J=4.8 ㎐, 1H), 4.73-4.84 (m, 1H), 4.17-4.24 (m, 1H), 3.89-3.90 (dd, J=3.2, 12.8 ㎐, 1H), 3.75-3.80 (dd, J1=5.2, 12.8 ㎐, 1H). LCMS: ESI-MS: m/z 261.8 [M+1]+.
실시예 2: 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복스아미드.
Figure pct00047
단계 A: (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)-2-(3-((4-메톡시벤질)옥시)아이소티아졸-5-일)테트라하이드로푸란-2-올. Et2O(5.00 mL) 중의 LDA(2 M, 2.87 mL)의 용액에 THF(2.00 mL) 중의 3-((4-메톡시벤질)옥시)아이소티아졸(중간체 2, 1.27g, 5.74mmol)을 -78℃에서 N2 하에 적가하였다. 30분 후에, THF(1.00 mL) 중의 (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)다이하이드로푸란-2(3H)-온(중간체 7, 2.00 g, 4.78 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액(5 mL)으로 켄칭하고, EtOAc(10 x 2 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 4/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(1.04 g, 1.56 mmol, 32.65% 수율, 96% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 662.0 [M + Na]+.
단계 B: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-올. DCM(20 mL) 중의 (3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)-2-(3-((4-메톡시벤질)옥시)아이소티아졸-5-일)테트라하이드로푸란-2-올(800.0 mg, 1.25 mmol)의 용액에 Et3SiH(5.09 g, 43.75 mmol, 6.97 mL) 및 BF3·Et2O(887 mg, 6.25 mmol, 0.77 mL)를 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(3 mL)로 켄칭하고, NaHCO3(10 mL)의 용액으로 pH=7로 조정하였다. 생성된 용액을 DCM(20 mL x 3)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 8/1)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(372.0 mg, 664.8 μmol, 53.18% 수율, 90% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 526.0 [M + Na]+.
단계 C: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-일 트라이플루오로메탄설포네이트. DCM(5 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-올(372.0 mg, 738.7 μmol)의 용액에 피리딘(py)(350.6 mg, 4.4 mmol, 357.7 μL, 6.00 eq.) 및 Tf2O(312.6 mg, 1.1 mmol, 182.8 μL, 1.50 eq.)를 -30℃에서 N2 하에 적가하였다. 혼합물을 -30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 용액(2 mL)으로 세정한 다음, DCM(2 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 12/1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(300.0 mg, 471.9 μmol, 63.89% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.25 (br, s, 15H), 6.83 (s, 1H), 5.25 (d, J=7.5 ㎐, 1H), 4.65 - 4.34 (m, 7H), 4.04 - 3.98 (m, 1H), 3.86 (dd, J=5.0, 7.4 ㎐, 1H), 3.61 - 3.50 (m, 2H). LCMS: ESI-MS: m/z 635.9 [M + 1]+.
단계 D: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르보니트릴. DMF(1.50 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-일 트라이플루오로메탄설포네이트(230.0 mg, 361.8 μmol)의 용액에 Zn(CN)2(85 mg, 723.6 μmol, 45.9 μL), Pd2(dba)3(132.5 mg, 144.7 μmol), DPPF(120.3 mg, 217.1 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 H2O 및 포화 염수(10 mL, 1:1)로 세정한 다음, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 12/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(160.00 mg, 277.79 μmol, 76.78% 수율, 89% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 513.2 [M + 1]+, m/z 535.2 [M + Na]+.
단계 E: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복스아미드. 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르보니트릴(160.0 mg, 312.1 μmol)을 MeOH(400.00 μL), NH3 .H2O(7.10 g, 56.7 mmol, 7.8 mL, 28% 순도) 및 H2O2(933.0 mg, 8.2 mmol, 790.7 δμL, 30% 순도)의 혼합물에 한번에 25℃에서 N2 하에 용해시켰다. 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO3 용액(6 mL)으로 켄칭하였다. 생성된 용액을 EtOAc(10 x 3 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, PE/EA=20:1 내지 3:1)로 정제하여, 황색 고체로서 표제 화합물(130.0 mg, 73.39% 수율, 93.5% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.71 (s, 1H), 7.41 - 7.23 (m, 15H), 7.09 (br, s, 1H), 5.53 (br, s, 1H), 5.33 (d, J = 6.6 ㎐, 1H), 4.62 - 4.47 (m, 6H), 4.37 (br, d, J = 3.3 ㎐, 1H), 3.99 (t, J = 4.0 ㎐, 1H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.64 - 3.51 (m, 2H). LCMS: ESI-MS: m/z 553.0 [M + Na]+.
단계 F: 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복스아미드. DCM(2.00 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복스아미드(110.0 mg, 207.3 μmol)의 용액에 -78℃에서 N2 하에 BCl3(1 M, 2.07 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH(2 mL) 및 NH3.H2O(0.5 mL)로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/ MeOH=30/1 내지 10/1)로 정제하여, 담황색 고체로서 표제 화합물(47.0 mg, 178.8 μmol, 86.24% 수율, 99% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ = 7.74 (d, J=0.9 ㎐, 1H), 5.10 (d, J=7.1 ㎐, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 2H), 3.93 (dd, J=5.3, 6.8 ㎐, 1H), 3.77 - 3.65 (m, 2H). MS: ESI-MS: m/z 261.05 [M + H]+.
실시예 3: 2-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복스아미드.
Figure pct00048
단계 A:
방법 A: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복실레이트. 밀봉된 용기 내의 아세톤(60.00 mL) 중의 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-(트라이메틸스탄닐)티아졸-4-카르복실레이트(중간체 5, 800.00 mg, 1.11 mmol), NaHCO3(186.05 mg, 2.21 mmol, 86.13 μL), Ag2O(25.66 mg, 110.73 μmol), AgOTf(341.41 mg, 1.33 mmol) 및 셀렉트-플루오르(786.46 mg, 2.22 mmol, 2.00 eq.)의 교반한 혼합물을 65℃에서 4시간 동안 가열하고 빛을 차단하였다. 반응 혼합물을 셀라이트(등록상표)의 짧은 패드를 통해 여과하고, 아세톤(50 mL)으로 세정하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 EA(50 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(45 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=10/1)로 정제하여, 오일로서 조 생성물 표제 화합물(300.00 mg)을 얻었다. 동시에 3개의 배치 설정하고, 조합하고, 정제하였다.
방법 B: 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복실레이트. 밀봉된 용기 내의 아세톤(60.00 mL) 중의 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-(트라이부틸스탄닐)티아졸-4-카르복실레이트(중간체 6, 1.00 g, 1.18 mmol), NaHCO3(198.26 mg, 2.36 mmol, 91.79 μL), Ag2O(27.35 mg, 118.00 μmol), AgOTf(303.19 mg, 1.18 mmol) 및 셀렉트-플루오르(등록상표)(836.05 mg, 2.36 mmol)의 교반한 혼합물을 65℃에서 4시간 동안 가열하고 빛을 차단하였다. 반응 혼합물을 셀라이트(등록상표)의 짧은 패드를 통해 여과하고, 아세톤(50 mL)으로 세정하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 EA(50 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3(45 mL)로 세정하였다. 생성된 용액을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=10/1)로 정제하여, 오일로서 조 생성물 표제 화합물(400 mg)을 얻었다.
방법 A 및 방법 B로부터의 생성물(700 mg)을 조합하고, 분취 HPLC(FA system)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(450.00 mg, 777.45 μmol, 21.96% 수율, 99.8% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 7.43 - 7.26 (m, 15H), 5.26 (t, J = 2.5 ㎐, 1H), 4.83 - 4.69 (m, 2H), 4.66 - 4.49 (m, 3H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 4.36 (td, J = 3.5, 6.7 ㎐, 1H), 4.25 (dd, J = 3.5, 4.8 ㎐, 1H), 3.98 (dd, J = 4.9, 6.9 ㎐, 1H), 3.75 (dd, J = 2.5, 10.8 ㎐, 1H), 3.59 (dd, J = 4.0, 10.8 ㎐, 1H), 1.42 (t, J = 7.2 ㎐, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, CD3OD), δ = -128.64. LCMS: ESI-MS: m/z = 578.0 [M + H]+, 600.0 [M + Na]+
단계 B: 에틸 2-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복실레이트. DCM(7.00 mL) 중의 에틸 2-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복실레이트(400.00 mg, 692.45 μmol)의 용액에 -78℃에서 BCl3(1 M, 6.92 L)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 EtOH(1.5 mL)를 첨가하여 켄칭한 다음, NH3·H2O(1 mL)로 중화시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(ISCO(등록상표); 4 g 세파 플래시(등록상표) 실리카 플래시 컬럼, 18 mL/분으로 0 내지 5% MeOH/DCM 에테르의 용리제 구배)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(140.00 mg, 65.14% 수율, 99% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ = 4.90 (dd, J = 2.2, 4.9 ㎐, 1H), 4.37 (q, J = 7.1 ㎐, 2H), 4.19 (t, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.81 - 3.75 (m, 1H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 1.36 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). LCMS: ESI-MS: m/z = 307.8 [M + H]+.
단계 C: 2-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복스아미드. 에틸 2-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-5-플루오로티아졸-4-카르복실레이트(115.00 mg, 374.24 μmol)를 NH3·H2O(2.50 mL, 25 내지 28%)로 처리하였다. 반응 혼합물을 18℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취-HPLC(FA system)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(51.60 mg, 49.55% 수율, 100% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 M ㎐, D2O) δ 5.01 (dd, J = 1.8, 5.3 ㎐, 1H), 4.35(t, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.20 - 4.16 (m, 1H), 4.16 - 4.12 (m, 1H), 3.88 - 3.82 (m, 1H), 3.77- 3.70 (m, 1H). 19F-NMR (376 ㎒, D2O), δ = -132.44. LCMS: ESI-MS: m/z = 278.9 [M + H]+.
실시예 4: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 아이소부티레이트.
Figure pct00049
단계 A: 5-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(하이드록시메틸)-2-메톡시테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드. 다이옥산(2.00 mL) 및 DMF(400 μL) 중의 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(실시예 2, 120 mg, 459.33 μmol)의 용액에 트라이메톡시메탄(389 mg, 3.67 mmol) 및 p-톨루엔설폰산(TsOH)(31.6 mg, 183.73 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Et3N(1 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/MeOH=20/1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(105 mg, 75.37% 수율)을 얻었다.
단계 B:((3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-2-메톡시테트라하이드로푸로 [3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메틸 아이소부티레이트. 0℃에서 피리딘(1.00 mL) 중의 5-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(하이드록시메틸)-2-메톡시테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(105.00 mg, 346.20 μmol)의 용액에 DCM(1.00 mL) 중의 아이소부티릴 클로라이드(40.58 mg, 380.82 μmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물에 MeOH(1 mL)를 첨가하여 켄칭하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, EA/PE=1/0)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(85.6 mg, 62.9% 수율, 95% 순도)을 얻었다. ESI-MS: m/z 395.9 [M + Na]+.
단계 C: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 아이소부티레이트. ((3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-2-메톡시테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메틸 아이소부티레이트(86.00 mg, 230.33 μmol)를 다이옥산(1.00 mL)에 용해시키고, HCl/다이옥산(1 M, 1.15 mL) 및 H2O(8.30 mg, 460.66 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(4 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/MeOH=30/1)로 정제하여, 미정제물을 얻고, 이를 분취-HPLC(Phenomenex Gemini C18 250*50 10μm; 이동상:[물(0.225% FA)-ACN]; B%: 13% 내지 43%, 11.2 분)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(28.20 mg, 36.95% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3), δ = 7.52 (br, s, 1H), 6.81 (br, s, 1H), 5.32 (br, d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 2H), 4.35 (br, s, 1H),4.30 - 4.24 (m, 1H), 4.19 (br, s, 1H), 2.54 (td, J = 7.0, 13.9 ㎐, 1H), 1.13 (d, J = 7.1 ㎐, 6H).LCMS: ESI-MS: m/z 331.9 [M + H] +.
실시예 5:
Figure pct00050
단계 A. 다이옥산(1 mL) 중의 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(실시예 1, 30 mg, 0.11 mmol)의 용액에 트라이메틸 오르토포르메이트(0.36 mL, 3.3 mmol) 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(21 mg, 0.11 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 메탄올성 암모니아로 중화하고, 농축시키고, MeOH/CH2Cl2 용매 시스템을 사용하여 실리카 상의 플래시 크로마토그래피(2 내지 10% 구배)로 정제하여, 20 mg의 2',3'-메톡시메틸렌 유도체를 얻었다.
단계 B. 단계 A로부터의 중간체를 THF(1 mL) 중의 트라이에틸암모늄 비스(POC)포스페이트(0.14 mmol), DIPEA(61 μL), BopCl(54 mg) 및 니트로트라이아졸(24 mg)과 반응시켜, 실시예 4에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 실시예 5(2 단계에 대해 27 mg, 40%)를 얻었다. 31P-NMR (CDCl3): δ -4.41, -4.33. MS: m/z = 616 (M+1)+.
실시예 6:
Figure pct00051
실시예 5(27 mg, 0.044 mmol) 및 80% 수성 AcOH(2 mL)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음에 혼합물을 농축시켰다. 이렇게 얻은 잔류물을 톨루엔, 이어서 몇 방울의 Et3N을 함유하는 메탄올로 여러번 공증발시켰다. 증발된 잔류물을 MeOH/CH2Cl2 용매 시스템(3% 내지 12% 구배)을 사용하여 실리카 겔 컬럼 상에서 정제하여, 실시예 6(20 mg, 80%)을 얻었다. 1H-NMR (CD3CN): δ 7.39 (br s, 1H), 6.43 (br s, 1H), 5.62 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 5.59 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 5.23 (d, J = 4.4 ㎐, 1H) 4.88 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 4.17-4.26 (m, 3H), 4.08 (m, 2H), 4.08 (m, 2H), 3.74 (br s, 1H), 1.27 (m, 12H). 31P-NMR (CD3CN): δ -4.38. MS: m/z = 574 (M+1)+.
실시예 7: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 발리네이트.
Figure pct00052
단계 A: 5-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(하이드록시메틸)-2-메톡시테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드. 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일]-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(실시예 1, 52 mg, 0.2 mmol)를 다이옥산(2 mL)에 용해시켰다. 메틸 오르토포르메이트(210 μL, 2 mmol), 이어서 TsOH(76 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 하룻밤 동안 정치시켰다. 메탄올(5 mL) 및 Et3N(0.5 mL)을 첨가하고, 주위 온도에서 30분 동안 정치시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 정제(FCC, SiO2, DCM 중의 메탄올 2 내지 10%)에 의해, 40 mg의 표제 화합물을 얻었다.
단계 B. ((3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-2-메톡시테트라하이드로푸로 [3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메틸 발리네이트. DMF(5 mL) 중의 5-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(하이드록시메틸)-2-메톡시테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)-1,2,4-티아다이아졸-3-카르복스아미드(40 mg, 0.13 mmol))의 용액에 DCC(0.5 mmol) 및 Boc-발린(0.5 mmol)을 첨가하고, 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 5 mL의 물을 첨가하였다. 우레아를 여과하고, 여과액을 EA(10 x 3)로 추출하였다. 유기 분획을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH/CH2Cl2 용매 시스템(2 내지 10% 구배)을 사용하여 실리카 겔 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 2',3'-메톡시메틸렌 유도체를 얻었다.
단계 C. ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 발리네이트. ((3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-2-메톡시테트라하이드로푸로 [3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메틸 발리네이트의 용액을 1 N HCl/다이옥산-DCM 1:1(v/v) 용액으로 40분 동안 처리하고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 0.05 M 포름산에서 RP HPLC로 정제하여, 표제 화합물(20 mg, 42%)을 얻었다. 1H-NMR (CD3OD), δ = 8.48 (br s, 1H), 6.43 (br s, 1H), 5.27 (d, 1H), 4.86-4.41 (m, 2H), 4.31-4.27 (m, 2H), 4.05-4.03 (dd, 1H), 3.93-3.91 (m, 1H), 2.20-2.30 (m, 1H), 1.05 (d, 6H). MS: m/z = 362 (M+1)+.
실시예 8: 뉴클레오시드 5'-트라이포스페이트의 합성.
건조 뉴클레오시드(0.05 mmol)를 건조 PO(OMe)3(0.7 mL) N-메틸이미다졸(0.009 mL, 0.11 mmol)에 용해시키고, 이어서 POCl3(0.009 mL, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20 내지 40분 동안 교반하였다. 반응을 LCMS에 의해 제어하고, 상응하는 뉴클레오시드 5'-모노포스페이트의 출현에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후에, 피로포스페이트의 테트라부틸암모늄 염(150 mg)을 첨가한 후, DMF(0.5 mL)를 첨가하여 균질한 용액을 얻었다. 주위 온도에서 1.5시간 후에, 반응물을 물(10 mL)로 희석시키고, Q Sepharose High Performance를 갖는 컬럼 HiLoad 16/10 상에 로딩하였다. 50 mM TRIS-완충액(pH 7.5) 중 0부터 1 N까지의 NaCl의 선형 구배로 분리를 행하였다. 트라이포스페이트를 75%부터 80%까지의 B로 용리하였다. 상응하는 분획을 농축시켰다. Synergy 4 micron Hydro-RP 컬럼(Phenominex) 상에서 RP HPLC에 의해 탈염을 달성하였다. 50 mM 트라이에틸암모늄 아세테이트 완충액(pH 7.5) 중 0 내지 30% 메탄올의 선형 구배를 용리에 사용하였다. 상응하는 분획을 합하고, 농축시키고, 3회 동결건조시켜 과량의 완충액을 제거하였다.
실시예 9: ((2R,3S,4R,5R)-5-(4-카르바모일-5-플루오로티아졸-2-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트.
Figure pct00053
표제 화합물을 실시예 3에 기재된 뉴클레오시드를 사용하여, 실시예 8과 유사한 방법으로 제조하였다. MS: m/z = 516.7 (M-1)-. 31P-NMR (D2O), δ = -11.05 (d), -11.65 (d), -23.47 (t).
실시예 10: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-1,2,4-티아다이아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트.
Figure pct00054
표제 화합물을 실시예 1에 기재된 뉴클레오시드를 사용하여, 실시예 8과 유사한 방법으로 제조하였다. MS: m/z = 500.0 (M-1)-. 31P-NMR (D2O), δ = -10.95 (d), -11.67 (d), -23.46 (t).
실시예 11: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일아이소티아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트.
Figure pct00055
표제 화합물을 실시예 2에 기재된 뉴클레오시드를 사용하여, 실시예 8과 유사한 방법으로 제조하였다. MS: m/z = 499.2 (M-1)-. 31P-NMR (D2O), δ = -10.93 (d), -11.58 (d), -27.63 (t).
실시예 12: ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-4-플루오로아이소티아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트.
Figure pct00056
단계 A: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르보니트릴. 표제 화합물은 단계 D로부터의 생성물인 실시예 3이다.
단계 B: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복실산. 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르보니트릴(2.4 g, 4.68 mmol, 1.00 eq.)을 MeOH(20 mL), H2O(2 mL) 및 THF(2 mL)의 혼합물에 용해시키고, 이어서 KOH(1.05 g, 18.73 mmol, 4.00 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, DCM/MeOH=50/1 내지 30/1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(3 g, 4.06 mmol, 86.78% 수율, 90% 순도)을 얻었다.LCMS: ESI-MS: m/z 532.3 [M + 1]+, m/z 554.2 [M + Na]+.
단계 C: tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복실레이트. DCM(10 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복실산(1.29 g, 2.43 mmol, 1.00 eq)의 용액에 2-메틸프로판-2-올(215.83 mg, 2.91 mmol, 278.49 μL, 1.2 eq) 및 DMAP(59.29 mg, 485.31 μmol, 0.20 eq) 및 DCC (751.01 mg, 3.64 mmol, 736.28 μL, 1.50 eq)를 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 2개의 배치로 설정하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, PE: EA=20:1 내지 11:1)로 정제하여, 담황색 오일로서 표제 화합물(1.4 g, 2.24 mmol, 46.14% 수율, 94% 순도)을 얻었다. 1H- NMR (400 ㎒, CDCl3), δ = 7.61 (d, J=1.8 ㎐, 1H), 7.39 - 7.23 (m, 15H), 5.34 - 5.29 (m, 1H), 4.61 - 4.55 (m, 4H), 4.54 - 4.45 (m, 2H), 4.37 (br s, 1H), 4.03 - 3.97 (m, 1H), 3.89 - 3.82 (m, 1H), 3.60 - 3.54 (m, 2H), 1.64 (d, J=1.8 ㎐, 9H). LCMS:ESI-MS: m/z 610.0 [M + Na]+.
단계 D: tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-(트라이메틸스탄닐)아이소티아졸-3-카르복실레이트. THF(3.5 mL) 중의 tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)아이소티아졸-3-카르복실레이트 (490 mg, 833.72 μmol)의 용액에 -78℃에서 N2 하에 LDA(2 M, 500.23 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 클로로트라이메틸스탄난(415.33 mg, 2.08 mmol, 420.38 μL)을 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(PE/EA=3/1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 포화 KF 용액(2 mL)으로 처리하고, 0.5시간 동안 교반한 다음, 시트르산으로 pH=4로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, PE/EA 30/1 내지 11/1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(320 mg, 46.54% 수율, 91% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 774.0 [M + Na] +.
단계 E: tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-플루오로아이소티아졸-3-카르복실레이트.밀봉된 용기 내의 아세톤(23 mL) 중의 tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-(트라이메틸스탄닐)아이소티아졸-3-카르복실레이트(320 mg, 426.37 μmol), 셀렉트플루오르(등록상표)(302.09 mg, 852.73 μmol), NaHCO3 (71.64 mg, 852.73 μmol, 33.16 μL), Ag2O (10.56 mg, 85.27 μmol, 1.41 μL), AgOTf (131.46 mg, 511.64 μmol)의 교반한 혼합물을 65℃에서 3시간 동안 가열하고 빛을 차단하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, PE/EA=30/1 내지 17/1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(60 mg, 23.23% 수율, 100% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI-MS: m/z 628.1 [M + Na] +.
단계 F: 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-플루오로아이소티아졸-3-카르복스아미드. A: tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-플루오로아이소티아졸-3-카복실레이트(42 mg, 69.34 μmol)를 NH3·MeOH(10 mL)로 처리하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 2개의 배치로 설정하였다. B: tert-부틸 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-플루오로아이소티아졸-3-카복실레이트(60 mg, 99.06 μmol)를 NH3·MeOH(10 mL)로 처리하였다. 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 상기 3개의 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, PE/ EA=20/1 내지 3/1)로 정제하여, 담황색 고체로서 표제 화합물(130 mg, 95.69% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.36 - 7.28 (m, 15H), 6.92 (br, s, 1H), 5.57 (br, s, 1H), 5.41 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.63 - 4.61 (m, 2H), 4.60 - 4.58 (m, 1H), 4.56 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.51 - 4.49 (m, 1H), 4.37 - 4.32 (m, 1H), 4.09 - 4.06 (m, 1H), 4.03 - 3.98 (m, 1H), 3.69 (dd, J = 3.0, 10.8 ㎐, 1H), 3.57 (dd, J = 3.5, 10.8 ㎐, 1H).
단계 G: 5-((2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일]-4-플루오로아이소티아졸-3-카르복스아미드. DCM(1 mL) 중의 5-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-4-플루오로아이소티아졸-3-카르복스아미드(130 mg, 236.96 μmol)의 용액에 -78℃에서 N2 하에 BCl3(1 M, 2.37 mL, 10 eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH(10 mL) 및 NH3.H2O(0.5 mL)로 켄칭하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/MeOH=25/1 내지 10/1)로 정제하여, 백색 고체로서 표제 화합물(44 mg, 65.00% 수율, 97.4% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ = 5.14 (dd, J = 0.9, 5.7 ㎐, 1H), 4.13 - 4.09 (m, 1H), 4.07 (t, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.01 (q, J = 4.4 ㎐, 1H), 3.79 - 3.72 (m, 1H), 3.70 -3.64 (m, 1H). 19F NMR (376 ㎒, CD3OD) δ 140.5. MS:ESI-MS: m/z 279.04 [M + H]+.
단계 H. ((2R,3S,4R,5R)-5-(3-카르바모일-4-플루오로아이소티아졸-5-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트. 표제 화합물을 실시예 8과 유사한 방법으로 제조하였다. MS: m/z = 517.1 (M-1)-. 31P-NMR (D2O), δ = -11.03 (d), -11.67 (d), -23.52 (t).
실시예 13: ((2R,3S,4R,5S)-5-(2-카르바모일옥사졸-4-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트.
Figure pct00057
단계 A: 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-2-비닐옥사졸. EA(30 mL) 중의 1-((2R,3R,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-2-브로모에탄-1-온(중간체 8, 3 g, 5.71 mmol)의 용액에, s 트라이플레이트(1.91 g, 7.42 mmol) 및 아크릴아미드(527.58 mg, 7.42 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 여과하여, 여과액을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=50/1 내지 1:1)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물(1.2 g, 42.24% 수율, 100% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.50 (s, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 15H), 6.56 (dd, J=11.2, 17.6 ㎐, 1H), 6.14 (dd, J=0.9, 17.6 ㎐, 1H), 5.61 (dd, J=0.9, 11.2 ㎐, 1H), 5.04 (d, J=4.6 ㎐, 1H), 4.67 - 4.59 (m, 3H), 4.59 - 4.45 (m, 3H), 4.31 (td, J=4.2, 6.0 ㎐, 1H), 4.16 (t, J=4.9 ㎐, 1H), 4.08 - 4.01 (m, 1H), 3.77 - 3.65 (m, 1H), 3.62- 3.52 (m, 1H). LCMS: ESI -MS: m/z = 520.1 [M + Na]+.
단계 B: 1-(4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-일)에탄-1,2-다이올. THF(20 mL) 및 H2O(2 mL) 중의 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)-2-비닐옥사졸(1.2 g, 2.41 mmol)의 용액에 OsO4(H2O 중의 0.1 M, 7.24 mL) 및 NMO(423.79 mg, 3.62 mmol, 381.79 μL)에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO3 수용액(20 mL)으로 켄칭하고, EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 생성된 용액을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 1:2)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(0.860 g, 67.08% 수율, 100% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI -MS: m/z = 554.1 [M + Na]+
단계 C: 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르브알데히드. CH3CN(5 mL) 및 H2O(3 mL) 중의 1-(4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-일)에탄-1,2-다이올(600 mg, 1.13 mmol)의 용액에 NaIO4(724.24 mg, 3.39 mmol)를 첨가하였다.혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL) 및 염수(10 mL)로 희석하였다. 유기 층을 염수(10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=20/1 내지 1:2)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(0.470 g, 83.36% 수율)을 얻었다. LCMS: ESI -MS: m/z = 522.0 [M + Na]+.
단계 D: 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르복실산. t-BuOH(3 mL) 및 H2O(2 mL) 중의 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르브알데히드(450 mg, 900.80 μmol)의 용액에 NaH2PO4(108.08 mg, 900.80 μmol), 2-메틸-2-부텐(277.97 mg, 3.96 mmol, 419.90 μL) 및 아염소산나트륨(358.47 mg, 3.96 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL x 2)로 추출하고, 유기 층을 염수(10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/MeOH=100/1 내지 8:1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(0.32 g, 68.90% 수율, 100% 순도)을 얻었다. LCMS: ESI -MS: m/z = 538.1 [M + Na]+.
단계 E: 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르복스아미드. DMF(3 mL) 중의 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르복실산(200 mg, 360.78 μmol), HATU(274.36 mg, 721.56 μmol)의 혼합물을 15분 동안 교반하고, NH3(1 M, THF 중 1 mL)를 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(5 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 EA(5 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 (염수:H2O=1:1, 5 mL x 2)로 세정하고, 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, 석유 에테르/아세트산에틸=5/1 내지 1:1)로 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(0.151 g, 81.34% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ = 7.65 (s, 1H), 7.41 - 7.20 (m, 15H), 6.63 (br s, 1H), 5.44 (br s, 1H), 5.03 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 3H), 4.58 - 4.48 (m, 3H), 4.37 -4.29 (m, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 1H), 4.10 - 4.05 (m, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 1H), 3.65 - 3.53 (m, 1H). LCMS: ESI -MS: m/z = 515.0 [M + H]+.
단계 F: 4-((2S,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르복스아미드. -78℃에서 DCM(1 mL) 중의 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-비스(벤질옥시)-5-((벤질옥시)메틸)테트라하이드로푸란-2-일)옥사졸-2-카르복스아미드(150 mg, 271.10 μmol)의 용액에 BCl3(DCM 중 10 eq, 1 M, 2.71 mL)을 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH(5 mL)로 켄칭하고, 30분 동안 교반하여, 반응 혼합물을 저압에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(FCC, SiO2, DCM/MeOH=30/1 내지 10:1)로 2회 정제하여, 황색 오일로서 표제 화합물(48 mg, 72.07% 수율, 99.4% 순도)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ = 8.07 (s, 1H), 4.78 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.24 -4.15 (m, 1H), 4.11 (t, J = 5.1 ㎐, 1H), 3.98 - 3.92 (m, 1H), 3.80 - 3.74 (m, 1H), 3.68 -3.61 (m, 1H)
MS: ESI -MS: m/z = 245.08[M + H]+.
단계 G. ((2R,3S,4R,5S)-5-(2-카르바모일옥사졸-4-일)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 테트라하이드로겐 트라이포스페이트. 표제 화합물을 실시예 8과 유사한 방법으로 제조하였다. MS: m/z = 483.2 (M-1)-. 31P-NMR (D2O), δ = -8.14(d), -11.18 (d), -22.37 (t).
생물학적 분석
2개의 세포주 WSN/33(H1N1)A549 및 MDCK를 사용하여 측정된 EC 50 [uM]
1. 인간 폐 암종 A549 세포(미국 버지니아주 머내서스 소재의 ATCC)를 96웰 플레이트에서 유지 배지(10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 1% HEPES, 1% 글루타민 및 1% 비필수 아미노산(모두 미국 버지니아주 머내서스 소재의 Mediatech)이 보충된 햄(Ham)의 F12 배지) 중에 5 x 104개의 세포/mL(5 x 103개의 세포/웰)의 밀도로 플레이팅하였다. 24 시간 후에, 분석 배지(0.3FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 1% HEPES, 1% 글루타민 및 1% 비필수 아미노산이 보충된 햄의 F12) 중의 연속적으로 희석된 화합물을 세포에 첨가하고 추가로 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 250 IU/웰의 인플루엔자 균주 A/WSN/33(H1N1)(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재의 Virapur)으로 감염시키고, 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 세포 배양 상층액을 흡인하고, 33 mM MES(pH 6.5)(미국 워싱턴주 베인브리지 아일랜드 소재의 Emerald Biosystems)에 용해된 25 μM 2'-(4-메틸움벨리페릴)-a-D-N-아세틸뉴라민산(MUNANA, Sigma-Aldrich) 50 μl를 세포에 첨가하였다. 30℃에서 45분 동안 인큐베이션한 후, 150 μL의 정지 용액(100 mM 글리신(pH 10.5), 25% 에탄올, 모두 Sigma-Aldrich)을 첨가하여 반응을 정지시켰다. Victor X3 다중-표지 플레이트 판독기(미국 매사추세츠주 월섬 소재의 Perkin Elmer) 상에서 각각 355 nm 및 460 nm의 여기 필터 및 방출 필터에 의해 형광을 측정하였다. 100 μL의 CellTiter-Glo(등록상표) 시약(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 Promega)을 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 감염되지 않은 평행 배양물의 세포독성을 결정하였다. Victor X3 다중-표지 플레이트 판독기 상에서 발광을 측정하였다.
2. 대안적으로, Madin-Darby 개 신장 상피 세포(MDCK, ATCC)를 96웰 플레이트에서 유지 배지(상기와 동일한 보충제를 갖는 DMEM) 중에 7.5 x 104개의 세포/mL(7.5 x 103개의 세포/웰)의 밀도로 플레이팅하였다. 24 시간 후에, 분석 배지(0.3FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 1% HEPES, 1% 글루타민 및 1% 비필수 아미노산이 보충된 MEM) 중의 연속적으로 희석된 화합물을 세포에 첨가하고 추가로 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 250 IU/웰의 인플루엔자 균주 A/WSN/33(H1N1)으로 감염시키고, 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 세포 배양 상층액을 흡인하고, 33 mM MES(pH 6.5)(미국 워싱턴주 베인브리지 아일랜드 소재의 Emerald Biosystems)에 용해된 25 μM 2'-(4-메틸움벨리페릴)-a-D-N-아세틸뉴라민산(MUNANA, Sigma-Aldrich) 50 μl를 세포에 첨가하였다. 30℃에서 45분 동안 인큐베이션한 후, 150 μl의 정지 용액(100 mM 글리신(pH 10.5), 25% 에탄올, 모두 Sigma-Aldrich)을 첨가하여 반응을 정지시켰다. Victor X3 다중-표지 플레이트 판독기(미국 매사추세츠주 월섬 소재의 Perkin Elmer) 상에서 각각 355 nm 및 460 nm의 여기 필터 및 방출 필터에 의해 형광을 측정하였다. 100 μL의 CellTiter-Glo(등록상표) 시약(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 Promega)을 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 감염되지 않은 평행 배양물의 세포독성을 결정하였다. Victor X3 다중-표지 플레이트 판독기 상에서 발광을 측정하였다.
Figure pct00058
IC 50 [uM] IAVpol (Nanchang/H3N2)
인플루엔자 중합효소 분석 및 화합물 IC 50 측정
IAV PA/PB1/PB2 복합체(H3N2 IAV 균주(A/닭/Nanchang/3-120/01)로부터)의 뉴클레오티드 혼입 활성은 삼중수소화 UMP가 산불용성 RNA 생성물에 혼입하는 것으로 측정된다. 반응물은 30 nM의 재조합 효소, 100 nM IAV 최소 게놈 RNA, 0.5 μM 5'vRNA, 100 μM ATP, 100 μM GTP, 100 μM CTP, 0.5 μM 삼중수소화 UTP, 40 mm Tris-HCl (pH 7.4), 0.4U/μL RNaseIn, 0.2 mg/mL BSA, 50 mM NaCl, 2 mm 다이티오트레이톨, 5 mm MgCl2를 함유한다. 증가하는 농도의 억제제의 존재 하에서, 표준 반응물을 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 반응의 종료 시점에서, RNA를 10% TCA를 사용하여 침전시키고, 산불용성 RNA 산물을 크기 배제 96웰 플레이트로 여과한다. 플레이트를 세척한 후에, 섬광 액체를 첨가하고, 방사성 표지된 RNA 산물을 Trilux Topcount 섬광 카운터를 사용하여 표준 절차에 따라 검출한다. 효소-촉매 생성물 형성 속도가 50% 감소되는 화합물 농도(IC50)는 S자형 용량-반응 방정식에 피팅한 비선형 회귀 데이터에 의해 계산된다.
Figure pct00059
RSV 서브게놈 레플리콘
RSV 서브게놈 레플리콘 395 Hela는 Apath(미국 뉴욕주 브루클린 소재)로부터 인가받았고, 원래는 미국 오하이오주 콜럼버스 소재의 미국 국립아동병원(Nationwide Children's Hospital)에 있는 연구소(Research Institute)인 백신 및 면역 센터(Center for Vaccines & Immunity)의 마크 미플즈(Dr. Mark Meeples) 박사에 의해 개발되었다[2]. 요약하면, 서브게놈 RSV 레플리콘을 생성하기 위해, 전장 재조합 GFP-발현(rg) RSV 항게놈 cDNA로부터 SH, G, 및 F에 대한 3개의 당단백질 유전자가 결실되었다. 이들 부위에, 블라스티시딘 S 데아미나제(bsd) 유전자를 삽입하였다. 다수의 단계를 통해, RSV 레플리콘을 Hela 세포에서 확립하였다. 395 Hela 세포를 4500 mg/L의 D-글루코스, L-글루타민, 및 110 mg/L의 소듐 피루베이트(Invitrogen, 카탈로그 번호 11995-040)를 함유하는 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium)(DMEM) 중에서 배양하였다. 배지에 10%(v/v) 소 태아 혈청(FBS)(Mediatech, 카탈로그 번호 35-010-CV), 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신(Mediatech, 카탈로그 번호 30-002-CI) 및 10 ㎍/mL의 블라스티시딘(BSD)(Invivogen, 카탈로그 번호 ant-bl-1)을 추가로 보충하였다. 세포를 가습된 5% CO2 분위기에서 37℃로 유지하였다.
약물 치료
RSV 레플리콘 세포에서의 50% 억제 농도(IC50), 90% 억제 농도(IC90) 및 50% 세포독성 농도(CC50)의 결정을 하기 절차에 따라 수행하였다. 첫째 날에, 웰당 5000개의 RSV 레플리콘 세포를 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 다음날에, 증식 배지를 제거하고, 적절한 농도의 페니실린/스트렙토마이신, BSD와 함께 5%, 10%, 20% 및 40%(v/v) 백분율의 인간 혈청을 함유하는 세포 배지로 교체하였다. 시험하고자 하는 화합물을 100% DMSO 중에 100 x 원하는 최종 시험 농도로 가용화시켰다. 각각의 화합물을 최대 9개의 구별되는 농도로 연속으로 희석하였다(1:3). 100% DMSO 중 화합물을 세포 배양 배지 중에 1:10으로 희석시킴으로써 10% (v/v) DMSO로 감소시켰다. 세포 배양 배지에 의해 10% (v/v) DMSO로 희석된 화합물의 10 μl 샘플을 96웰 포맷으로 RSV 레플리콘 세포를 처리하는 데 사용하였다. 최종 DMSO 농도는 1% (v/v)였다. 세포를 5% CO2 분위기에서 37℃에서 7일 동안 화합물과 인큐베이션하였다. 각각의 검정에서는, RSV 레플리콘 검정에서 미리 특성화된 양성 대조군을 포함시켰다.
항-활성의 결정
레닐라 루시퍼라아제 분석
레닐라 루시퍼라아제 분석 시스템(Renilla Luciferase Assay System)(Promega, 카탈로그 번호 E2820)을 사용하여 항-RSV 레플리콘 활성을 측정하였다. 검정 플레이트를 상기에 언급된 바와 같이 설정하였다(섹션 4.3 참조). Perkin Elmer 멀티라벨 카운터 Victor3V를 사용하여 발광을 기록하였다. 비처리된 세포 대조군 값에 비해 RSV 레플리콘 RNA를 50% 감소시키는 데 필요한 약물의 농도인 IC50은 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel) forecast 함수를 사용하여 약물 농도에 대한 광학 밀도(OD) 값의 감소 백분율의 도표로부터 계산하였다.
세포 생존율 분석
395 Hela 세포 증식 분석(Promega; CellTiter-Glo 발광 세포 생존율 분석, 카탈로그 번호 G7572)을 사용하여 세포 생존율을 측정하였다. CellTiter-Glo(등록 상표) 발광 세포 생존율 분석은 대사 활성 세포의 존재를 나타내는 ATP의 정량화에 기초하여 배양액에서의 생존 세포의 수를 결정하는 균질한 방법이다. 검정 플레이트를 레플리콘 분석과 동일한 형식으로 설정하였다(섹션 4.4). CellTiter-Glo 시약(100 μL)을 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 8분 동안 인큐베이션하였다. Perkin Elmer 멀티라벨 카운터 Victor3V를 사용하여 발광을 기록하였다. 비처리된 세포 대조군 값에 비해 생존 세포를 50% 감소시키는 데 필요한 약물의 농도인 CC50은 마이크로소프트 엑셀 forecast 함수를 사용하여 약물 농도에 대한 발광 값의 감소 백분율의 도표로부터 계산하였다.

Claims (32)

  1. 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00060

    상기 식에서,
    HET는
    Figure pct00061
    및
    Figure pct00062

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
  2. 제1항에 있어서, HET는
    Figure pct00063
    인, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, HET는
    Figure pct00064
    인, 화합물.
  4. 제1항에 있어서, HET는
    Figure pct00065
    인, 화합물.
  5. Figure pct00066
    및
    Figure pct00067

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드.
  6. 제5항에 있어서,
    Figure pct00068
    ;
    인, 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드.
  7. 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드:
    [화학식 (II)]
    Figure pct00069

    상기 식에서,
    R6은 -(C=O)C1-6알킬 또는 -(C=O)C1-6알킬이고, C1-6알킬은 NH2로 치환된다.
  8. 제7항에 있어서,
    Figure pct00070
    및
    Figure pct00071

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드.
  9. 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드:
    [화학식 (III)]
    Figure pct00072

    상기 식에서,
    R7은 H이거나, 2개의 R7 구성원은 함께 OCH3으로 치환된 5원 고리를 형성하고;
    R8은 -CH2O-(C=O)-O-C1-6알킬이다.
  10. Figure pct00073

    로부터 선택되는 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드.
  11. 화학식 (IV)의 구조를 갖는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드:
    [화학식 (IV)]
    Figure pct00074

    상기 식에서,
    HET는
    Figure pct00075
    및
    Figure pct00076

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
  12. 제11항에 있어서,
    Figure pct00077
    ; 및
    Figure pct00078

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 N-옥사이드.
  13. (A) 화학식 (I)의 화합물로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물, 및 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드의 유효량; 및 (B) 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00079

    상기 식에서,
    HET는
    Figure pct00080
    및
    Figure pct00081

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
  14. 적어도 하나의 제5항의 화합물의 유효량 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  15. 제6항의 화합물의 유효량 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  16. 적어도 하나의 제8항의 화합물의 유효량 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  17. 적어도 하나의 제10항의 화합물의 유효량 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  18. 적어도 하나의 제12항의 화합물의 유효량 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  19. 대상체에서 오르토믹소바이러스(orthomyxovirus) 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 화학식 (I)의 화합물로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물, 및 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00082

    상기 식에서,
    HET는
    Figure pct00083
    및
    Figure pct00084

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
  20. 제19항에 있어서, 오르토믹소바이러스는 인플루엔자인, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 인플루엔자는 인플루엔자 A인, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 인플루엔자는 인플루엔자 A 아형 H3N2인, 방법.
  23. 제21항에 있어서, 인플루엔자 A는 아만타딘(amantadine), 리만타딘(rimantadine) 또는 오셀타미비르(oseltamivir)에 내성인 균주를 갖는, 방법.
  24. 제20항에 있어서, 인플루엔자는 인플루엔자 B인, 방법.
  25. 제19항에 있어서, 상기 화합물은 경구 투여되는, 방법.
  26. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게
    Figure pct00085
    ; 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  27. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게
    (A) 화학식 (I)의 화합물로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물, 및 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체, 동위원소 변이체 또는 N-옥사이드의 유효량; 및 (B) 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00086

    상기 식에서,
    HET는
    Figure pct00087
    및
    Figure pct00088

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴이다.
  28. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제5항의 화합물의 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  29. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제6항의 화합물의 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  30. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제8항의 화합물의 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  31. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제10항의 화합물의 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 대상체에서 오르토믹소바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 적어도 하나의 제12항의 화합물의 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
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