KR20210121069A - 검체의 전개를 제어할 수 있는, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험 키트 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 면역크로마토그래피 시험편 상에서의 검체의 전개(展開)를 제어하고, 산성시약과 아질산염과 중화시약에 의한 처리를 적절하게 제어하기 위한 면역크로마토그래피 시험 키트 및 상기 키트를 사용한 면역크로마토그래피 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
(i) 아질산염 용액 또는 산성 용액, 및
(ii) 아질산염 또는 산성 용액과 혼합한 검체를 첨가하는 샘플 패드, 당쇄항원에 대한 항체를 표지한 표지항체를 포함하는 표지체 영역 및 상기 당쇄항원에 대한 항체를 고상화(固相化)한 검출영역을 포함하고, 검출영역에 있어서 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체를 형성시켜, 당쇄항원을 측정하는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 상기 표지체 영역의 상류에 중화시약을 함침시킨 영역을 가지고, 또한 상기 중화시약을 함침시킨 영역의 상류에, 아질산염과 혼합한 검체를 사용할 때는 고형상 산성시약을 함침시킨 영역을 가지고, 산성 용액과 혼합한 검체를 사용할 때는 아질산염을 함침시킨 영역을 가지는, 검체 중의 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편을 포함하는 면역크로마토그래피 시험 키트로서, 아질산염 또는 산성 용액이 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르, 제4급 암모늄 화합물, 인산, 수산화 나트륨, N-아세틸-L-시스테인, NaCl, PVA, BSA,및 NaBr로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상을 포함하는, 면역크로마토그래피 시험 키트.
(i) 아질산염 용액 또는 산성 용액, 및
(ii) 아질산염 또는 산성 용액과 혼합한 검체를 첨가하는 샘플 패드, 당쇄항원에 대한 항체를 표지한 표지항체를 포함하는 표지체 영역 및 상기 당쇄항원에 대한 항체를 고상화(固相化)한 검출영역을 포함하고, 검출영역에 있어서 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체를 형성시켜, 당쇄항원을 측정하는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 상기 표지체 영역의 상류에 중화시약을 함침시킨 영역을 가지고, 또한 상기 중화시약을 함침시킨 영역의 상류에, 아질산염과 혼합한 검체를 사용할 때는 고형상 산성시약을 함침시킨 영역을 가지고, 산성 용액과 혼합한 검체를 사용할 때는 아질산염을 함침시킨 영역을 가지는, 검체 중의 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편을 포함하는 면역크로마토그래피 시험 키트로서, 아질산염 또는 산성 용액이 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르, 제4급 암모늄 화합물, 인산, 수산화 나트륨, N-아세틸-L-시스테인, NaCl, PVA, BSA,및 NaBr로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상을 포함하는, 면역크로마토그래피 시험 키트.
Description
본 발명은, 면역크로마토그래피 시험편 상에서 당쇄항원의 아질산 추출처리를 하는 것이 가능한, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험 키트에 관한 것이다.
면역크로마토그래피법을 원리로 하는 신속진단약의 대부분은, 바이러스 또는 세균감염증을 신속·간편하게 측정하고, 치료 방침을 결정하는 하나의 수단으로서 널리 사용되고 있다.
일반적인 면역크로마토그래피법을 원리로 하는 신속진단약은, 검체를 검체부유액에 부유시킨 후, 그 부유액을 면역크로마토그래피 시험편에 공급함으로써 신속·간편하게 측정할 수 있다.
A군β용혈성 연쇄구균(A군β용련균), 구강내 연쇄구균 등 스트렙토코커스속에게 속하는 미생물을 검출하기 위해서는 당쇄항원을 추출하고, 당쇄항원을 측정할 필요가 있다.
예를 들면, 면역크로마토그래피 시험편에 미리 아질산 나트륨과 중화시약을 포함시킴으로써, 검체를 아세트산 등의 산성 용액에 부유하고 면역크로마토그래피 시험편에 공급하는 조작만으로 아질산 추출처리를 면역크로마토그래피 시험편 상에서하는 방법이 보고되어 있다(특허문헌1).
또한, 면역크로마토그래피 시험편에 미리 산성시약과 중화시약을 포함시켜 두고, 검체를 아질산염에 부유하여 면역크로마토그래피 시험편에 공급하는 방법도 있다.
또한, 면역크로마토그래피 시험편 상에서 효율적으로 당쇄항원의 아질산 추출 처리를 행하는 방법이 보고되어 있다(특허문헌 2∼4).
현재 시판되고 있는 면역크로마토그래피법을 원리로 하는 A군β용련균(Strep A) 항원검출시약의 대부분이 아질산염 용액(R1)과 산용액(R2)을 혼합하여 발생시킨 산성의 아질산을, 면역크로마토그래피용 검출시약(시험편) 상에 있는 건조상태의 중화제(R3)로 중화하여 반응시키는 기술을 채용하고 있지만, R1 또는 R2를 패드에 도포함으로써, R1과 R2의 사용시 조제 및 추출공정을 생략하는, 1스텝화의 기술도 알려져 있다. 1스텝의 Strep A 항원검출시약에 있어서는, 테스트디바이스 상에서 추출공정을 행하므로, 샘플 적하 후, 일정한 추출시간을 담보하는 것이 필수적이다. 그러나, 점성이 높은 검체를 사용하면, 샘플액이 디바이스 상에 머무는 시간이 지나치게 긴 현상이 관찰되었다. 이로써, (1) 샘플이 전개(展開)하지 않고, (2) 전개는 하지만, 전개지연에 의해 측정 개시 후 5분 시의 감도가 저하되고, (3) 전개는 하지만, 비특이적 반응이 발생하는, 등의 문제가 있었다.
본 발명은, 면역크로마토그래피 시험편 상에서의 검체의 전개를 제어하고, 산성시약과 아질산염과 중화시약에 의한 처리를 적절하게 제어하기 위한 면역크로마토그래피 시험 키트 및 상기 키트를 사용한 면역크로마토그래피 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은, 면역크로마토그래피 시험편 상에서의 검체의 전개를 제어하고, 산성시약과 아질산염과 중화시약에 의한 처리를 적절하게 제어하는 방법에 대하여 예의(銳意) 검토를 행하였다.
그 결과, 검체부유액에 미리 계면활성제, 염, 화학합성물질(PVA), 단백질성 물질(BSA) 등의 화합물을 가함으로써, 전개개시시간이 단축하고, 라인 판정이 빠른 시간대부터 가능하게 되고, 또한, 비특이반응도 경감되는 것을 발견하고, 본 발명을 완성시키기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 하기와 같다.
[1] (i) 아질산염 용액 또는 산성 용액, 및
(ii) 아질산염 또는 산성 용액과 혼합한 검체를 첨가하는 샘플 패드, 당쇄항원에 대한 항체를 표지한 표지항체를 포함하는 표지체 영역 및 상기 당쇄항원에 대한 항체를 고상화한 검출영역을 포함하고, 검출영역에 있어서 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체를 형성시켜, 당쇄항원을 측정하는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 상기 표지체 영역의 상류에 중화시약을 함침시킨 영역을 가지고, 또한 상기 중화시약을 함침시킨 영역의 상류에, 아질산염과 혼합한 검체를 사용할 때는 고형상(固形狀) 산성시약을 함침시킨 영역을 가지고, 산성 용액과 혼합한 검체를 사용할 때는 아질산염을 함침시킨 영역을 가지는, 검체 중의 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편
을 포함하는 면역크로마토그래피 시험 키트로서,
아질산염 또는 산성 용액이 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르, 제4급 암모늄 화합물, 인산, 수산화 나트륨, N-아세틸-L-시스테인, NaCl, PVA, BSA,및 NaBr로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상을 포함하는, 면역크로마토그래피 시험 키트.
[2] 샘플 패드 상에 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역이 존재하는, [1]에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트.
[3] 고형상 산성시약이, 말론산, 말산, 말레산, 시트르산 및 주석산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, [1] 또는 [2]에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트.
[4] 중화시약이, 트리스하이드록시메틸아미노메탄 또는 수산화 나트륨인, [1]∼[3] 중 어느 하나에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트.
[5] 당쇄항원이, 원생동물, 진균, 세균, 마이코플라즈마(mycoplasma), 리케차(rickettsia), 클라미디아(chlamydia) 또는 바이러스의 당쇄항원인, [1]∼[4] 중 어느 하나에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트.
[6] 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르가 Triton X이며, 제4급 암모늄 화합물이 염화벤잘코늄 또는 염화벤제토늄인, [1]∼[5] 중 어느 하나에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트.
[7] [1]∼[6] 중 어느 하나에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트를 사용하여 면역크로마토그래피법에 의해 검체 중의 당쇄항원을 측정하는 방법으로서,
면역크로마토그래피 시험편이 고형상 산성시약을 함침시킨 영역을 가질 때에는 검체를 아질산 용액과 혼합하고, 면역크로마토그래피 시험편이 아질산염을 함침시킨 영역을 가질 때에는 검체를 산성 용액과 혼합하여, 상기 면역크로마토그래피 시험편의 샘플 패드에 첨가하는 공정을 포함하고,
고형상 산성시약을 함침시킨 영역 또는 아질산염을 함침시킨 영역에 있어서, 아질산염과 고형상 산성시약의 반응에 의해 발생한 아질산의 작용에 의해 검체로부터 당쇄항원이 추출되고, 중화시약을 함침시킨 영역에 있어서, 상기 당쇄항원을 포함하는 산성 용액이 중화되고,
검출영역에 있어서, 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체가 형성되는, 면역크로마토그래피법에 의해, 면역크로마토그래피 시험편 상에서의 검체의 전개의 스피드나 방향을 제어하고, 산성시약과 아질산염과 중화시약에 의한 처리를 제어하여, 검체 중의 당쇄항원을 측정하는 방법.
본 명세서는 본원의 우선권의 기초가 되는 일본특허출원번호 2019-012912호의 개시내용을 포함한다.
아질산염 용액(R1) 또는 산성 용액에 계면활성제, 염, N-아세틸-L-시스테인, BSA 등의 단백질성 물질, 그 외의 화학합성제 중 어느 하나를 가함으로써, 점성이 높은 인두(咽頭)를 닦은 검체를 사용한 경우라도, 전개불량이나 전개지연에 의한 감도부족이나 비특이반응을 방지하는 디바이스를 제공할 수 있다.
도 1은 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 고형상 산성시약영역이 샘플 패드를 겸하고 있는 면역크로마토그래피 시험편(2장 패드 시험편)의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 2는 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역이 샘플 패드를 겸하고 있는 면역크로마토그래피 시험편(1장 패드 시험편)의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 3은 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 고형상 산성시약영역이 중화시약영역을 겸하고 있고, 샘플 패드가 별도로 존재하는 면역크로마토그래피 시험편(2장 패드 시험편)의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 4는 PET 시트가 고형상 산성시약영역과 중화시약영역 사이에 첩부된, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 5는 PET 시트가 고형상 산성시약영역과 중화시약영역의 사이에 첩부된, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이며, 각 파트(part) 사이의 거리를 나타낸 도면이다.
도 2는 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역이 샘플 패드를 겸하고 있는 면역크로마토그래피 시험편(1장 패드 시험편)의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 3은 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 고형상 산성시약영역이 중화시약영역을 겸하고 있고, 샘플 패드가 별도로 존재하는 면역크로마토그래피 시험편(2장 패드 시험편)의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 4는 PET 시트가 고형상 산성시약영역과 중화시약영역 사이에 첩부된, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이다.
도 5는 PET 시트가 고형상 산성시약영역과 중화시약영역의 사이에 첩부된, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편의 구조를 모식적으로 나타낸 도면이며, 각 파트(part) 사이의 거리를 나타낸 도면이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은, 당쇄항원의 아질산 추출처리를 면역크로마토그래피 시험편 상에서 행할 수 있도록 간편화하고, 피검출물질인 당쇄항원을 신속하면서 정확하게 측정하는 것을 가능하게 하는 면역크로마토그래피 시험 키트에 관한 것이다.
상기 면역크로마토그래피 시험 키트는, 아질산염 또는 산성시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편과 아질산 용액 또는 산성 용액을 포함한다.
면역크로마토그래피 시험편은, 피검출물질(항원 등)을 포착하는 항체(항체 1)가 고정화된 검출영역을 가지는 지지체, 이동가능한 표지항체(항체 2)를 가지는 표지체 영역, 검체를 첨가하는 샘플 패드, 전개된 검체액을 흡수하는 흡수대, 이들 부재를 1개로 접합시키기 위한 배킹(backing) 시트 등을 구비한다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험편은, 저장용기 내에 수용되어 있어도 되고, 상기 저장용기에 의해, 예를 들면 자외선이나 공기 중의 습기에 의한 열화를 방지할 수 있다. 또한, 오염성, 감염성이 있는 검체시료를 사용하는 경우, 저장용기에 의해 어세이를 행하는 시험자가 오염 또는 감염되는 것을 방지할 수 있다. 예를 들면, 적당한 크기의 수지제 케이스를 저장용기로서 사용하고, 상기 케이스 중에 본 발명의 장치를 수납하면 된다. 또한, 항원 또는 항체를 고정화한 시험편의 표면을 수지제 필름 등(PET 시트)으로 덮어도 된다. 저장용기와 그 안에 저장된 시험편을, 일체로 하여 면역크로마토그래피 디바이스라고 하는 경우가 있다.
그리고, 검출영역의 수 및 표지체 영역에 포함되는 표지항체의 종류는 1개로 한정되지 않고, 복수의 피검출물질에 대응하는 항체를 사용함으로써, 2개 이상의 항원을 동일한 시험편에서 측정할 수 있다.
지지체는, 피검출물질(항원)을 포착하기 위한 항체를 고정화하는 성능을 가지는 재료이며, 또한 액체가 수평방향으로 통행하는 것을 방해하지 않는 성능을 가진다. 바람직하게는, 모세관작용을 가지는 다공성 박막(멤브레인)이며, 액체 및 그것에 분산된 성분을 흡수에 의해 수송가능한 재료이다. 지지체를 이루는 재질은 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 셀룰로오스, 니트로셀룰로오스, 셀룰로오스아세테이트, 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 유리섬유, 나일론, 폴리케톤 등이 있다. 이 중에서 니트로셀룰로오스를 사용하여 박막 또는 멤브레인으로 한 것이 보다 바람직하다. 항체를 고정화한 멤브레인을 항체고정화 멤브레인이라고 한다.
표지체 영역은, 표지항체를 포함하는 다공성 기재(基材)로 이루어지고, 기재의 재질은 일반적으로 사용되고 있는 유리섬유(glass fiber)나 부직포 등을 사용할 수 있다. 상기 기재는, 다량의 표지항체를 함침시키기 위하여, 두께 0.3mm∼0.6mm 정도의 패드형인 것이 바람직하다. 표지항체를 함침시키고 건조시킨 다공성 기재를 건조 패드로도 칭한다.
표지항체의 표지에는, 알칼리 포스파타아제나 서양 고추냉이 퍼옥시다아제와 같은 효소, 금 콜로이드와 같은 금속 콜로이드, 실리카 입자, 셀룰로오스 입자, 자성입자, 형광입자, 착색 폴리스티렌 입자 및 착색 라텍스 입자 등이 사용되는 경우가 많다. 금속 콜로이드 입자, 착색 폴리스티렌 입자나 착색 라텍스 입자 등의 착색 입자를 사용하는 경우에는, 이 표지시약이 응집함으로써 착색이 생기므로, 이 착색을 측정한다. 항체를 고정화한 입자를 항체고정화 입자라고 한다.
검출영역은, 피검출물질(항원)을 포착하는 항체가 고정화된 지지체의 일부의 영역을 나타낸다. 검출영역은, 항원을 포착하기 위한 항체를 고정화한 영역을 적어도 1개 설치한다. 검출영역은 지지체에 포함되어 있으면 되고, 지지체 상에 항체를 고정화하면 된다.
샘플 패드는, 검체를 첨가하기 위한 부위이며, 다공성 재료이다. 샘플 패드는 면역크로마토그래피 시험편의 가장 상류에 있는 부위이다. 상기 재료에는 일반적으로 사용되는 여과지, 유리섬유, 부직포 등을 사용할 수 있다. 다량의 검체를 면역측정에 사용하기 위하여, 두께 0.3mm∼1mm 정도의 패드형인 것이 바람직하다. 검체에는, 검체를 다른 용액에 부유하여 얻어지는 시료 등, 검체를 사용하여 조제된 시료도 포함한다.
흡수대는, 지지체에 공급되고 검출영역에서 반응에 관여하지 않은 성분을 흡수하기 위한 부재이다. 재료에는, 일반적인 천연고분자화합물, 합성고분자화합물 등으로 이루어지는 보수성(保水性)이 높은 여과지, 스폰지 등을 사용할 수 있지만, 검체의 전개촉진을 위해서는 흡수성이 높은 것이 바람직하다.
배킹 시트는, 전술한 모든 재료, 즉 지지체, 샘플 패드, 표지체 영역, 흡수대 등이, 부분적인 중첩을 가지고 첩부·고정되기 위한 부재이다. 배킹 시트는, 이들 재료가 최적인 간격으로 배치·고정된다면, 반드시 필요한 것은 아니지만, 제조 상 혹은 사용 상의 편리성을 고려하여, 일반적으로는 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험편에는, 대조표시영역(부재)이 더욱 존재하고 있어도 된다. 대조표시영역은 시험이 정확하게 실시된 것을 나타내는 부위이다. 예를 들면, 대조표시영역은, 검출영역의 하류에 존재하고, 검체시료가 검출영역을 통과하고, 대조표시영역에 도달했을 때 착색 등에 의해 시그널을 발한다. 대조표시영역에는, 표지담체를 결합시킨 항체에 결합하는 물질을 고상화해 두어도 되고, 검체가 도달했을 때 색이 변화되는 pH인디케이터 등의 시약을 고상화해 두어도 된다. 표지담체를 결합시킨 항체가 마우스 모노클로널 항체인 경우, 항마우스IgG항체를사용하면 된다.
면역크로마토그래피 시험편의 크기는 한정되지 않지만, 예를 들면, 세로 길이 수 cm∼수십 cm, 가로 길이 수 mm∼수 cm 정도이다.
상기한 형태의 시험편에 있어서, 검체는, 샘플 패드, 표지체 영역, 지지체, 검출영역, 흡수대 등의 일련의 접속에 의해 형성된 다공성 유로(流路)를 통과한다. 따라서 본 형태에 있어서는, 이들 모두가 검체이동영역으로 된다. 각 구성 재료의 재질이나 형태에 의해, 검체가 재료내부를 침투하지 않고 계면을 통행하는 형태도 있을 수 있지만, 본 명세서에서 정의한 검체이동영역은 재료의 내부인가 계면인가를 묻지 않으므로, 상기 형태의 시험편도 본 명세서의 범위에 포함된다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험편을 사용하여 검체 중의 당쇄항원을 측정하는 경우, 최초에 검체 중의 당쇄항원을 추출할 필요가 있다. 당쇄항원의 추출은, 당쇄항원을 포함하는 검체를 아질산으로 처리하는 것에 의해 행한다. 아질산은 아질산 나트륨 등의 아질산염을 산과 혼합함으로써 발생시킬 수 있고, 이와 같이 하여 발생시킨 아질산으로 당쇄항원을 포함하는 검체를 처리하면 된다. 추출한 항원은 면역크로마토그래피 시험편 상에 고상화한 항체에 항원항체반응에 의해 결합되지만, 이때, 반응계에 산이 남아있으면 반응계는 산성이 되고, 항원항체반응이 저해된다. 이에, 반응계의 산을 중화할 필요가 있다.
본 발명에 있어서, 아질산염과 산을 혼합하여 아질산을 발생시켜, 상기 아질산에 의해 검체 중의 당쇄항원을 추출하고, 산을 중화한 후에, 면역크로마토그래피 시험편 상에 고상화한 항체에 당쇄항원을 결합시켜, 당쇄항원을 측정하는 방법에 있어서, 당쇄항원을 추출하여 측정하는 방법으로서 하기 방법을 예로 들 수 있다. 어느 방법에 있어서도, 아질산에 의한 당쇄항원의 추출과 중화는 면역크로마토그래피 시험편 상에서 행한다. 아질산에 의한 당쇄항원의 추출을 면역크로마토그래피 시험편 상에서 행하기 위해서는, 면역크로마토그래피 시험편 상에 산성시약 또는 아질산염을 포함시켜 두면 된다. 중화를 면역크로마토그래피 시험편 상에서 행하기 위해서는, 면역크로마토그래피 시험편 상에 중화시약을 함침(含浸)시켜 두면 된다.
(A) 미리 검체와 산성 용액을 혼합하고, 아질산염과 중화시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편의 샘플 패드에 첨가한다. 혼합액이 아질산염을 함침시킨 영역에 도달하면 아질산염과 산이 반응하여, 아질산이 발생하고, 검체 중의 당쇄항원이 추출된다. 당쇄항원의 추출액은 면역크로마토그래피 시험편 상의 중화시약을 함침시킨 영역에서 중화되고, 당쇄항원은 면역크로마토그래피 시험편 상에 고상화한 항체에 결합하여, 검출할 수 있다. 상기 방법에 있어서, 사용하는 산성 용액으로서는, 아세트산, 염산, 말론산, 말산, 말레산, 시트르산, 주석산 등을 예로 들 수 있다.
(B) 미리 검체와 아질산염 용액을 혼합하고, 산성시약과 중화시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편의 샘플 패드에 첨가한다. 혼합액이 산성시약을 함침시킨 영역에 도달하면 아질산염과 산이 반응하여, 아질산이 발생하고, 검체 중의 당쇄항원이 추출된다. 당쇄항원의 추출액은 면역크로마토그래피 시험편 상의 중화시약을 함침시킨 영역에서 중화되고, 당쇄항원은 면역크로마토그래피 시험편 상에 고상화한 항체에 결합하여, 검출할 수 있다.
상기한 (A) 또는 (B)의 방법을 행하기 위한 본 발명의 면역크로마토그래피 시험편에서는, 표지체 영역보다 상류(검체의 흐름의 상류이며 샘플 패드가 존재하는 측)에, 즉 샘플 패드 내 또는 샘플 패드와 표지체 영역 사이에 아질산염이 함침되어 있는 면역크로마토그래피 시험편은 상기 (A)의 방법에 사용할 수 있다. 또한, 샘플 패드 내 또는 샘플 패드와 표지체 영역 사이에 산성시약이 함침되어 있는 면역크로마토그래피 시험편은 상기 (B)의 방법에 사용할 수 있다. 그리고, 산성시약으로서는, 고형상 산성시약이 사용된다. 이 방법에 의해, 피험시료 중의 피검출물질을 피험시료의 시험에 제공되는 양에 의하지 않고, 정확하게, 특이적으로 측정하는 것이 가능하게 된다.
고형상 산성시약이 함침된 영역을 고형상 산성시약영역으로 칭하고, 산성시약이 함침된 영역을 산성시약영역으로 칭하고, 중화시약이 함침된 영역을 중화시약영역으로 칭한다.
상기 고형상 산성시약 또는 아질산염은, 샘플 패드에 함침시켜도 되고, 샘플 패드와는 다른 부직포 등의 다공성 재료로 이루어지는 패드에 함침시켜, 얻어진 고형상 산성시약 함침 다공성 재료 또는 아질산염 함침 다공성 재료를, 샘플 패드와 표지체 영역 사이, 즉 표지체 영역의 상류 측에 배치해도 된다. 여기서, 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역과 샘플 패드 또는 표지체 영역은 접촉하고 있어도 되고, 접촉하고 있지 않아도 된다. 본 발명에 있어서, 시약을 함침시킨 영역을 시약을 함침시킨 패드라고도 한다.
상기 중화시약은, 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시키는 영역보다 하류에 배치한다. 중화시약은, 지지체에 함침시켜도 되고, 지지체와는 다른 부직포 등의 다공성 재료로 이루어지는 패드에 함침시켜, 얻어진 중화시약 함침 다공성 재료를, 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역과 표지체 영역 사이에 배치해도 된다. 즉, 표지체 영역의 상류에 중화시약을 함침시킨 영역을 가지고, 또한 상기 중화시약을 함침시킨 영역의 상류에 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역을 가진다.
여기서, 중화시약을 함침시킨 영역과 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역 또는 표지체 영역은 접촉하고 있어도 되고, 접촉하고 있지 않아도 된다.
아질산시약, 산성시약 또는 중화시약을 함침시키는 영역에 사용하는 다공성 재료의 소재로서는, 구체적으로는, 셀룰로오스의 면섬유로 된 여과지나 유리섬유로 된 유리 여과지 등을 예로 들 수 있다.
고형상 산성시약영역 또는 아질산염영역과 중화시약영역을 가지는 면역크로마토그래피 시험편은, 지지체 상에 상류로부터 샘플 패드, 고형상 산성시약영역 또는 아질산염영역, 중화시약영역, 표지체 영역, 검출영역 및 흡수대를 가지고, 고형상 산성시약영역 또는 아질산염영역은 샘플 패드 상에 있어도 된다. 또한, 샘플 패드, 고형상 산성시약영역 또는 아질산염영역, 중화시약영역, 표지체 영역, 검출영역 및 흡수대는, 이웃이 되는 영역끼리 접촉하고 있어도 되고, 접촉하고 있지 않아도 된다.
본 발명에서 사용되는 고형상 산성시약은 상온(常溫)에 있어서 고형상이며, 고온에 있어서 휘발하지 않는 것이다.
본 발명에 사용되는 바람직한 고형상 산성시약으로서는, 말론산, 말산, 말레산, 시트르산, 주석산을 예로 들 수 있다.
또한, 본 발명에서 사용되는 바람직한 고형상 산성시약으로서는, 예를 들면, 시트르산과 같은 가수(價數)가 많은 산을 사용하면 보다 적은 양으로 추출할 수 있다. 또한 동일한 가수라면 보다 산해리상수가 작은, 예를 들면, 말레산, 주석산은 효율이 양호하다.
또한, 본 발명에서 사용되는 바람직한 고형상 산성시약으로서는, 면역크로마토그래피 시험편 상에서 착색되지 않는 시약, 구체적으로는 건조상태로 백색 또는 건조열이나 산화로 착색되기 어려운 시약이 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 아질산염으로서는, 아질산 나트륨, 아질산 칼륨 등을 예로 들 수 있다.
본 발명에 사용되는 고형상 산성시약 또는 아질산염의 사용량, 즉 면역크로마토그래피 시험편에 함침시키는 양은, 특별히 한정되지 않지만, 통상, 면역크로마토그래피 시험편의 1시험편당 0.01μg∼1mg 정도이며, 바람직하게는 0.1μg∼0.1mg 정도이다. 무엇보다, 사용하는 고형상 산성시약 또는 아질산염의 종류, 검체부유액의 조성이나 첨가량 등에 의해 효과가 얻어지는 최적인 양을 선택하는 것이 바람직하다.
고형상 산성시약 또는 아질산염을 샘플 패드 또는 다공성 재료에 함침시키기 위해서는, 고형상 산성시약 또는 아질산염을 한번 용해시켜 도포하고 건조시킨다. 예를 들면, 0.1∼수 M의 고형상 산성시약 또는 아질산염 용액을 도포하고 건조시키면 된다.
본 발명에 사용되는 중화시약은 상온에 있어서 고형상이며, 고온에 있어서 휘발하지 않는 것이다. 중화시약을 염기성 시약이라고도 한다.
본 발명에 사용되는 바람직한 중화시약으로서는, 트리스 염기(트리스하이드록시메틸아미노메탄), 수산화 나트륨, 인산수소 2칼륨, 시트르산 3나트륨, 알칼리 영역에 완충능을 가지는 굿 버퍼를 예로 들 수 있다.
본 발명에 사용되는 중화시약의 사용량, 즉 면역크로마토그래피 시험편에 함침시키는 양은, 특별히 한정되지 않지만, 통상, 면역크로마토그래피 시험편의 1시험편당 0.01μg∼1mg 정도이며, 바람직하게는 0.1μg∼0.1mg 정도이다. 무엇보다, 사용하는 중화시약의 종류, 검체부유액의 조성이나 첨가량 등에 의해 효과가 얻어지는 최적인 양을 선택하는 것이 바람직하다.
중화시약을 다공성 재료에 함침시키기 위해서는, 중화시약을 한번 용해시키고, 용액을 다공성 재료에 도포하고, 그 후 건조시키면 된다. 예를 들면, 0.1∼수 M, 바람직하게는 0.5∼수 M의 중화시약용액을 도포하고 건조시키면 된다.
도 1∼3은, 전형적인 면역크로마토그래피 시험편의 바람직한 1형태를 나타낸 도면이다. 도 1에 나타낸면역크로마토그래피 시험편은, 고형상 산성시약 및 중화시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편이지만, 고형상 산성시약 대신 아질산염을 함침시켜도 되고, 이 경우에는, 아질산염 및 중화시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편이 된다. 즉, 이하의 시험편의 설명에 있어서, 고형상 산성시약영역 대신 아질산염시약영역을 형성하는 경우가 있다. 당업자라면, 아질산염 및 중화시약을 함침시킨 면역크로마토그래피 시험편을 적절하게 설계하여 제조할 수 있다. 그리고, 면역크로마토그래피 시험편은, 도 1∼3에 나타낸 것으로 한정되는 것은 아니다. 도 1 중, 1이 지지체, 2가 표지체 영역, 3이 검출영역, 7이 흡수대, 8이 배킹 시트를 나타내고 있다.
도 1 및 2는, 고형상 산성시약영역(5)이 샘플 패드(10)를 겸하고 있는 시험편을 나타낸다. 도 1의 A가 상면도, 도 1의 B가 절단 단면도이다. 도 1의 예에서는, 표지체 영역(2)의 상류에 고형상 산성시약영역(5) 및/또는 중화시약영역(6)이 존재하고, 이들이 중첩되어 있고, 이로써, 연속된 래터럴 플로우의 유로가 형성되어 있다. 도 1에 나타낸 시험편에 있어서는, 고형상 산성시약영역(5)이 샘플 패드(10)를 겸하고 있다. 즉, 고형상 산성시약영역(5)이 샘플 패드(10) 상에 존재한다. 이 시험편에 있어서는, 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)이 별도의 2장의 다공성 재료(패드) 상에 설치되어 있으므로, 2장 패드 시험편으로 칭하는 경우가 있다. 고형상 산성시약영역의 상류에 또한 샘플 패드가 존재해도 된다. 고형상 산성시약영역과 샘플 패드가 따로따로 존재하고 있어도 된다.
도 2의 시험편은, 샘플 패드(10)가 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)을 겸하고 있고, 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)이 샘플 패드(10) 상에 존재한다. 도 2의 A가 상면도, 도 2의 B가 절단 단면도이며, 도 2의 C가 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5) 또는 아질산시약영역의 위치 관계를 나타낸다. 이 시험편에 있어서는, 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)이 1장의 다공성 재료(패드) 상에 설치되어 있으므로, 1장 패드 시험편으로 칭하는 경우가 있다.
도 3의 시험편은, 샘플 패드(10)가 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)과 따로따로 존재하고, 고형상 산성시약영역(5)이 중화시약영역(6)을 겸하고 있고, 샘플 패드가 따로 존재한다. 샘플 패드(10)에는 시약은 함침되어 있지 않고, 샘플 패드만으로서 기능한다. 도 3의 A가 상면도, 도 3의 B가 절단 단면도이며, 도 3의 C가 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5) 또는 아질산시약영역의 위치 관계를 나타낸다. 도 3의 시험편은, 고형상 산성시약영역 및 중화시약영역을 겸하는 다공성 재료(패드)와 샘플 패드가 별도의 2장의 다공성 재료(패드)로서 형성되어 있으므로, 2장 패드 시험편으로 칭할 수 있다. 도면에는 나타내지 않고 있지만, 샘플 패드(10), 고형상 산성시약영역(5) 및 중화시약영역(6)의 3개가 따로따로 존재하고 있어도 된다.
측정은, 검체 또는 검체를 사용하여 조제된 시료를 아질산염 용액과 접촉 혼합시키고, 검체를 아질산염 용액에 부유시키고, 샘플 패드(10), 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10), 또는 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10)에 첨가하여 제공함으로써 개시된다. 이 때, 검체 5∼100 μL와 0.1M∼8M의 아질산염 0.01∼2 mL를 혼합하고, 5∼200 μL를 샘플 패드(10), 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10), 또는 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10)에 제공하면 된다. 아질산염으로서, 아질산 나트륨, 아질산 칼륨 등을 예로 들 수 있다.
샘플 패드(10), 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10), 또는 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10)에 제공된 피검출물질인 당쇄항원을 포함하는 검체는 모관(毛管)작용에 의해, 샘플 패드(10), 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10), 혹은 중화시약영역(6)과 고형상 산성시약영역(5)을 겸하는 샘플 패드(10) 및 중화시약영역(6)에 전개된다. 이 때, 고형상 산성시약영역(5)과 중화시약영역(6) 사이에는, PET 시트인 탑 라미네이트 시트가 존재한다. 이 때문에, 고형상 산성시약영역(5)으로부터 중화시약영역(6)으로의 검체의 흐름은 억제되고, 또한, 일단 중화시약영역(6)에 들어간 검체가 고형상 산성시약영역(5)으로 역류하는 것을 방해할 수 있다. 다음으로, 검체는 표지체 영역(2), 지지체(1), 흡수대(7)에 순차적으로, 수평방향으로 전개된다. 고형상 산성시약영역(5)에 있어서, 검체에 혼합한 아질산염과 고형상 산성시약영역(5) 상의 고형상 산성시약이 반응하여, 유리(遊離) 아질산이 발생하고, 그 아질산의 작용에 의해 검체로부터 당쇄항원이 추출된다. 추출된 당쇄항원은 산성의 전개용액과 함께 중화시약영역(6)에 전개이동하고, 중화시약영역(6)에서 당쇄항원을 포함하는 산성의 전개용액의 pH가 중화되어 중성영역으로 조정된다. 그 결과, 당쇄항원은 중성 조건 하에 있어서 더욱 하류로 전개이동한다. 표지체 영역(2)에서는 검체시료의 전개와 함께 표지항체가 액중에 방출되어 지지체(1)에 전개된다. 검체시료 중에 당쇄항원이 존재하는 경우에 있어서, 지지체(1)의 검출영역(3)에서는 포착 항체에 의해 당쇄항원이 특이적으로 포착되고, 또한 당쇄항원은 표지항체와도 특이적 반응에 의해 복합체를 형성한다. 이로써, 검출영역(3)에서는 당쇄항원을 통한 항체의 샌드위치가 성립하고, 표지항체-당쇄항원 복합물을 검출영역(3)에서 측정할 수 있다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험 키트는 검체를 부유하는 아질산염 용액(R1) 또는 산성 용액(R2)을 포함하고, 상기 검체를 부유하는 아질산염 용액(R1) 또는 산성 용액(R2)에, 인두를 닦은 검체 등의 점성이 높은 검체를 사용한 경우라도, 전개불량이나 전개지연에 의한 감도부족이나 비특이반응을 방지하는 물질을 가하는 것을 특징으로 한다. 이와 같은 물질로서, 계면활성제, 염, N-아세틸-L-시스테인(NALC), BSA(소 혈청 알부민) 등의 단백질성 물질, 인산, 수산화 나트륨, 폴리비닐알코올(PVA), 그 외의 화학합성제를 예로 들 수 있다. 계면활성제는 한정되지 않지만, 비이온계 계면활성제, 양이온 계면활성제, 음이온 계면활성제를 모두 사용할 수 있다. 구체적으로는, Triton X-100, Triton X-114 등의 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르; 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등의 제4급 암모늄 화합물; Tween 20, Tween 80 등의 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산 에스테르; Brij-35, Brij-58 등의 폴리옥시에틸렌알킬에테르; 콜산 나트륨, 디옥시콜산 등의 스테로이드 골격을 가지는 콜산계; 라우릴황산 나트륨, 도데실벤젠술폰산 나트륨 등의 음이온계 계면활성제 등의 계면활성제를 예로 들 수 있다. 이 중에서도, Triton X-100, Triton X-114 등의 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르; 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등의 제4급 암모늄 화합물이 바람직하다. 염으로서는, NaCl, NaBr 등을 예로 들 수 있다. 예시한 상기 화합물의 첨가 농도의 일례를 이하에 나타낸다.
Triton X-100(Tx-100): 0.5∼5 %, 바람직하게는 1∼3 %, 더욱 바람직하게는 2%
염화벤잘코늄: 5∼20 %, 바람직하게는 5∼15 %, 더욱 바람직하게는 10%
염화벤제토늄: 10mM∼200mM, 바람직하게는 50∼150mM, 더욱 바람직하게는 100mM
인산완충액: 100∼500 mM, 바람직하게는 150∼350 mM, 더욱 바람직하게는 250mM
NAOH: 0.05N∼3N, 바람직하게는 0.05N∼2N, 더욱 바람직하게는 0.1N∼1N
NALC: 10mM∼200mM, 바람직하게는 50∼150mM, 더욱 바람직하게는 100mM
NaCl: 1∼5N, 바람직하게는 2∼4N, 더욱 바람직하게는 3N
BSA: 0.5∼3 %, 바람직하게는 0.5∼2 %, 더욱 바람직하게는 1%
NaBr: 10mM∼200mM, 바람직하게는 50∼150 mM, 더욱 바람직하게는 100mM
상기한 것 중에서도 특히 PVA의 효과가 높고, PVA의 비누화(saponification도)는 70∼90 mol·%인 것이 바람직하다. 또한, PVA의 농도는 0.01% ∼5%에서 효과가 관찰되었지만, 0.01%∼0.05%가 보다 바람직하다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험 키트를 사용한 방법에 의하면, 검체 중의 당쇄항원의 추출은 면역크로마토그래피 시험편 상에서 행해지므로, 면역크로마토그래피 시험편을 사용한 측정 전에 미리 검체 중의 당쇄항원을 추출할 필요는 없으며, 1스텝으로 검체 중의 당쇄항원을 측정할 수 있다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험 키트를 사용한 방법에 있어서, 검체가 되는 생체시료는, 특별히 한정되지 않지만, 혈청, 혈장, 혈액, 오줌, 변, 타액, 조직액, 수액, 닦은 액 등의 체액 등 또는 그 희석물을 예로 들 수 있다.
본 발명의 면역크로마토그래피 시험 키트를 사용한 방법에 있어서, 측정 대상이 되는 피검출물질은 이뮤노어세이, 즉 항원항체반응을 이용한 어세이로 측정할 수 있는 당쇄항원이다. 항원으로서는 아질산 추출처리에 의해 추출되는 세균의 세포벽에 존재하는 당쇄항원인 다당체 등을 예로 들 수 있다. 이들 물질을 포함하는 원생동물, 진균, 세균, 마이코플라즈마, 리케차, 클라미디아, 바이러스 등도 측정할 수 있다. 본 발명의 면역크로마토그래피 시험편을 사용한 방법에 의해, 피험체의 생체시료 중에 원생동물, 진균, 세균, 마이코플라즈마, 리케차, 클라미디아, 바이러스 등에 유래하는 당쇄항원이 포함되어 있는 지의 여부를 확인할 수 있고, 당쇄항원이 포함되어 있는 경우, 피험체는 원생동물, 진균, 세균, 마이코플라즈마, 리케차, 클라미디아, 바이러스 등에 의한 감염증에 감염하고 있는 것으로 판단할 수 있다. 예를 들면, A군β용혈성 연쇄구균(Streptococcus pyogenes), 대장균, 레지오넬라, 캄필로박터 등의 감염의 유무를 검출할 수 있다.
본 발명의 키트는, 면역크로마토그래피 시험편에, 아질산염 또는 산성시약과 중화시약을 함침시키는 경우로 한정되지 않고, 면역크로마토그래피 시험편 상에 복수 개, 즉 2개로부터 n개의 효과가 상이한 시약으로서, 보존 중의 반응을 피해야 할 시약을 함침시킬 때도 이용할 수 있다.
[실시예]
본 발명을 이하의 실시예에 의해 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
이하의 실시예에 있어서, %는, 특별히 언급하지 않는 경우에는 w/v%를 나타낸다.
실시예 1
A군용련균 연쇄구균 측정면역크로마토그래피 시험편의 예
아질산염, 고형상 산성시약 및 중화시약으로서 하기의 것을 사용했다.
아질산염(액상(液狀)시약) 3.0M 아질산 나트륨
고형상 산성시약(면역크로마토그래피 시험편에 함침) 1.0M 시트르산
중화시약(면역크로마토그래피 시험편에 함침) 3.0M 트리스 염기(Trizma BASE)
1. 항Streptococcus pyogenes(A군β용혈성 연쇄구균)항체의 니트로셀룰로오스 멤브레인(지지체)으로의 고정화
항Streptococcus pyogenes 항체를 희석한 액 및 항토끼IgG항체를 준비하고, PET 필름으로 배킹된 니트로셀룰로오스 멤브레인의 샘플 패드 측에 항Streptococcus pyogenes항체, 흡수대 측에 항토끼IgG항체를 각각 선형으로 도포했다. 그 후, 니트로셀룰로오스 멤브레인를 건조시켜, 항Streptococcus pyogenes항체 고정화 멤브레인를 얻었다. 이 멤브레인를 본 실시예에 있어서, 「항체고정화 멤브레인」으로 칭한다.
2. 항Streptococcus pyogenes항체의 착색 폴리스티렌 입자로의 고정화
항Streptococcus pyogenes항체 희석액에 착색 폴리스티렌 입자를 가하고, 교반 후, 카르보디이미드를 가하여, 더욱 교반한다. 원심분리조작에 의해 상청액을 제거하고, 완충액에 재부유하여, 항Streptococcus pyogenes항체 결합 착색 폴리스티렌 입자 부유액을 얻었다. 이 입자를, 본실시예에 있어서, 「항체고정화 입자(착색 폴리스티렌)」로 칭한다.
3. 항Streptococcus pyogenes항체 고정화 착색 폴리스티렌 입자의 도포·건조
2에서 제작한 항체 고정화 착색 폴리스티렌 입자부유액을 부직포에 소정량을 도포하고, 건조시켰다. 얻어진 부직포를, 본실시예에 있어서, 「C.Pad」로 칭한다.
4. 중화시약(염기성 시약)의 도포
상기한 중화시약(염기성 시약)을 여과지에 도포했다.
5. 고형상 산성시약 함침 부직포의 제작
상기한 고형상 산성시약을 부직포에 도포했다. 도포 후에 즉시 건조하여, 고형상 산성시약 함침 영역으로서 고형상 산성시약 함침 부직포를 얻었다.
6. Streptococcus pyogenes검출용 면역크로마토그래피 시험편의 제작
스트립의 배킹 시트에, 먼저 항체고정화 멤브레인(지지체)을 하류로부터 20mm의 부분에 첩부했다.
멤브레인의 하류에, 액을 흡수시키기 위한 흡수대를 첩부했다.
멤브레인의 상류에 멤브레인과의 사이에 2mm의 중첩을 가지게 하고, 항체결합 착색 폴리스티렌 입자가 도포된 10mm 폭의 유리섬유(C.Pad)를 첩부했다.
C.Pad와 중화시약을 함침시킨 패드의 중첩이 4mm로 되도록, 중화시약 함침 패드(중화시약 함침영역)를 첩부했다.
면역크로마토그래피 시험편의 상부에 맞추어서, PET 시트인 탑 라미네이트 시트(60mm)를 첩부했다.
마지막으로, 고형상 산성시약을 함침시킨 패드(고형상 산성시약 함침영역)를, 중화시약을 함침시킨 패드 위의 사이에 탑 라미네이트 시트가 개재하고, 또한 고형상 산성시약을 함침시킨 패드와 중화시약을 함침시킨 패드가 접촉하도록, 면역크로마토그래피 시험편의 상류(하단)에 맞추어서 첩부했다.
이와 같이 하여 제작한 면역크로마토그래피 시험편의 구조를 도 4에 나타낸다. 또한, 도 5에 모식도을 각 파트 사이의 거리(mm)와 함께 나타낸다. 그리고, 도 4 및 도 5에 있어서, 고형상 산성시약을 함침시킨 패드와 중화시약을 함침시킨 패드는, 양 패드 사이에 탑 라미네이트가 존재하지 않는 부위에서도 접촉하지 않고 이격되어 있도록 표시되지만, 실제로는, 탑 라미네이트가 없는 부분에서 양 패드는 접촉하고 있다.
실시예 2
실시예 1의 면역크로마토그래피 시험편을 테스트디바이스 케이스(면역크로마토그래피 시험편을 저장한 수지제의 케이스)에 넣었다. 3.0M 아질산 Na 용액만을 포함하는 용액을 대조로 하고, Triton X-100, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 인산, 수산화 나트륨, NALC, NaCl, PVA, BSA, NaBr을, 표 1에 기재된 농도로 3M 아질산 Na 용액에 첨가한 각 조건의 용액을 준비했다. 비특이반응이 생기는 것을 알고 있는 음성의 인간 콧물 검체를 사용하고, 아질산 Na 용액 및 상기한 각 물질을 첨가한 아질산 Na 용액으로 검체를 조제하여(용액 4: 검체 1), 시료로 하였다. 조제한 시료를 75μL 적하하고, 5분 후에 판정했다.
그 결과, 첨가없음의 대조 조건과 비교하여, 어느 조건에 있어서도, 전개개시시간이 단축하고, 라인 판정이 빠른 시간대로부터 가능하게 되었다. 또한, 비특이반응의 정도(비특이 라인의 발색의 짙은 정도)도 대조와 비교하여 경감되었다. 특히, PVA를 가한 조건에 있어서는, 전개도 개선하고, 또한 비특이도 억제 효과가 가장 높았다(표 1).
[표 1]
실시예 3
실시예 1의 면역크로마토그래피 시험편을 테스트디바이스 케이스에 넣었다. 아질산 Na 용액으로서, (1) 2M 아질산 Na 용액(PVA없음), (2) 2M 아질산 Na+0.5% PVA를 준비했다. 인간 인두를 닦은 검체에 Streptococcus pyogenes생균(세균)을 첨가한 각 아질산 Na 용액으로 검체를 조제하여, 시료로 하였다. 조제한 시료를 75μL 적하하고, 5분 후에 판정했다.
그 결과, PVA 유의 조건 하에서는, 전개개시시간이 단축하고, 양성검체의 경우에는, 양성판정이 빠른 시간대로부터 가능하게 되고, 또한 판정시간 5분에서의 라인 발색도 짙은 결과가 되었다. 또한, 음성검체를 시험한 경우에는, 비특이적 반응이 발생하는 빈도가 약 4% 저하되었다(표 2).
[표 2]
[산업상 이용가능성]
본 발명의 면역크로마토그래피 디바이스를 사용하여 A군β용혈성 연쇄구균의 감염을 정확하게 검출할 수 있다.
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 그대로 인용에 의해 본 명세서에 포함하는 것으로 한다.
1: 지지체(검출영역을 포함함)
2: 표지체 영역
3: 검출영역
5: 고형상 산성시약영역
6: 중화시약영역
7: 흡수대
8: 배킹 시트
9: 탑 라미네이트 시트
10: 샘플 패드
2: 표지체 영역
3: 검출영역
5: 고형상 산성시약영역
6: 중화시약영역
7: 흡수대
8: 배킹 시트
9: 탑 라미네이트 시트
10: 샘플 패드
Claims (7)
- (i) 아질산염 용액 또는 산성 용액, 및
(ii) 아질산염 또는 산성 용액과 혼합한 검체를 첨가하는 샘플 패드, 당쇄항원에 대한 항체를 표지한 표지항체를 포함하는 표지체 영역 및 상기 당쇄항원에 대한 항체를 고상화(固相化)한 검출영역을 포함하고, 검출영역에 있어서 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체를 형성시키고, 당쇄항원을 측정하는 면역크로마토그래피 시험편으로서, 상기 표지체 영역의 상류에 중화시약을 함침시킨 영역을 가지고, 또한 상기 중화시약을 함침시킨 영역의 상류에, 아질산염과 혼합한 검체를 사용할 때는 고형상(固形狀) 산성시약을 함침시킨 영역을 가지고, 산성 용액과 혼합한 검체를 사용할 때는 아질산염을 함침시킨 영역을 가지는, 검체 중의 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편
을 포함하는 면역크로마토그래피 시험 키트로서,
아질산염 또는 산성 용액이 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르, 제4급 암모늄 화합물, 인산, 수산화 나트륨, N-아세틸-L-시스테인, NaCl, PVA, BSA,및 NaBr로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상을 포함하는, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항에 있어서,
샘플 패드 상에 고형상 산성시약 또는 아질산염을 함침시킨 영역이 존재하는, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
고형상 산성시약이, 말론산, 말산, 말레산, 시트르산 및 주석산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
중화시약이, 트리스하이드록시메틸아미노메탄 또는 수산화 나트륨인, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
당쇄항원이, 원생동물, 진균, 세균, 마이코플라즈마(mycoplasma), 리케차(rickettsia), 클라미디아(chlamydia) 또는 바이러스의 당쇄항원인, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르가 Triton X이며, 제4급 암모늄 화합물이 염화벤잘코늄 또는 염화벤제토늄인, 면역크로마토그래피 시험 키트. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 기재된 면역크로마토그래피 시험 키트를 사용하여 면역크로마토그래피법에 의해 검체 중의 당쇄항원을 측정하는 방법으로서,
면역크로마토그래피 시험편이 고형상 산성시약을 함침시킨 영역을 가질 때는 검체를 아질산 용액과 혼합하고, 면역크로마토그래피 시험편이 아질산염을 함침시킨 영역을 가질 때는 검체를 산성 용액과 혼합하여, 상기 면역크로마토그래피 시험편의 샘플 패드에 첨가하는 공정을 포함하고,
고형상 산성시약을 함침시킨 영역 또는 아질산염을 함침시킨 영역에 있어서, 아질산염과 고형상 산성시약의 반응에 의해 발생한 아질산의 작용에 의해 검체로부터 당쇄항원이 추출되고,
중화시약을 함침시킨 영역에 있어서, 상기 당쇄항원을 포함하는 산성 용액이 중화되고,
검출영역에 있어서, 항체-당쇄항원-표지항체의 복합체가 형성되는, 면역크로마토그래피법에 의해, 면역크로마토그래피 시험편 상에서의 검체의 전개(展開)의 스피드나 방향을 제어하고, 산성시약과 아질산염과 중화시약에 의한 처리를 제어하여, 검체 중의 당쇄항원을 측정하는 방법.
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Family Cites Families (6)
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