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KR20210118101A - 항암 면역 반응을 유도하는 방법 - Google Patents

항암 면역 반응을 유도하는 방법 Download PDF

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KR20210118101A
KR20210118101A KR1020217025449A KR20217025449A KR20210118101A KR 20210118101 A KR20210118101 A KR 20210118101A KR 1020217025449 A KR1020217025449 A KR 1020217025449A KR 20217025449 A KR20217025449 A KR 20217025449A KR 20210118101 A KR20210118101 A KR 20210118101A
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KR
South Korea
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inhibitor
antibody
cancer
cells
cell
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KR1020217025449A
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English (en)
Inventor
찰스 디 스미스
린 더블유 메인스
Original Assignee
아포지 바이오테크놀로지 코포레이션
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Publication date
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Abstract

생체외에서 환자로부터 수집된 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하는 단계를 포함하는 수집된 암 세포를 사용하여 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 제조하는 방법이 개시되어 있으며, 여기서 독성 농도는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분하다. 일 실시 형태에서, 화합물은 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이의 표면 상에서 칼레티쿨린을 과발현한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 고형 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 순환 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 채취하는 단계 및 세포를 인산염 완충 식염수에 현탁하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자의 치료 장소로 운송하는 단계를 추가로 포함한다.

Description

항암 면역 반응을 유도하는 방법
암은 비정상 세포의 비제어된 성장 및 확산을 특징으로 하는 질환의 군이다. 전통적인 요법(예를 들어, 수술, 화학요법 및 방사선 요법), 보다 새로운 형태의 치료(표적 요법) 및 상보적이고 대안적인 요법을 포함하여 많은 상이한 유형의 암 치료가 존재한다. 암이 다수의 변경된 분자 경로에 의존하고 단일 제제를 사용한 치료에 대한 다양한 내성 기작을 생성할 수 있음이 점점 더 명백해지고 있다. 따라서, 병용 요법은 효과가 오래 지속되는 효과적인 요법에 대한 최상의 희망을 제공할 수 있다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제의 독성 농도를 포함하는 면역원성 세포 사멸(ICD) 유도제가 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 독성 농도는 약 35 μM 내지 약 45 μM이다. 일 실시 형태에서, 환자의 암 세포는 암 세포에서 충분한 면역원성 세포 사멸(ICD)을 야기하도록 약 35 μM 내지 약 45 μM의 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로 시험관 내 처리된다. 이러한 프라이밍된 암 세포는 암 면역요법으로 사용되어, 환자에게 다시 투여될 수 있다. 일 실시 형태에서, 이러한 새로 이식된 프라이밍된 암 세포는 환자 내의 치료되지 않은 암 세포에서 대규모 ICD를 유발할 수 있다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 환자로부터 수집된 암 세포를 생체외에서 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하는 것을 포함하는 암 세포를 사용하여 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 제조하는 방법이 개시되어 있으며, 여기서 독성 농도는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분하다. 일 실시 형태에서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제인 화합물은 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 수집된 암 세포는 적어도 24시간 동안 치료된다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제의 독성 농도는 약 20 μM 내지 약 60 μM이다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이의 표면 상에서 칼레티쿨린을 과발현한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 면역 세포이다. 일 실시 형태에서, 면역 세포는 T-세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 수지상 세포를 포함한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 혈액암 세포이다. 일 실시 형태에서, 혈액암 세포는 백혈병 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 고형 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 순환 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 채취하는 단계 및 세포를 인산염 완충 식염수에 현탁하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자의 치료 장소로 운송하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 환자의 치료 장소는 병원이다. 일 실시 형태에서, 환자의 치료 장소는 암센터이다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 운송된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자에게 투여하여 면역 반응을 유도하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암의 성장을 늦추거나 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암이 전이되는 것을 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자의 면역계를 암 세포를 사멸시키는 데 더 효율적으로 만든다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 환자로부터 암 세포를 제거하고, 세포를 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도, 향상 또는 촉진하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용가능한 제형에 포함된 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로 생체외에서 치료한 후, 치료된 세포를 원래 환자에게 다시 투여하여 환자의 암에 대한 면역 반응을 유도하는 단계를 포함하는, 환자에서 항암성 면역 반응을 유도하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 환자의 세포는 백혈병 세포와 같은 혈액암 세포이다. 일 실시 형태에서, 환자의 세포는 환자의 혈액에서 단리된 순환 종양 세포 또는 생검으로 얻은 고형 종양 세포이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 대상에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 스핑고신 키나제의 억제제의 유효량 및 CTLA-4 수용체 억제제, PD-1 수용체 억제제, PD-L1 리간드 억제제, PD-L2 리간드 억제제, LAG-3 수용체 억제제, TIM-3 수용체 억제제, BTLA 수용체 억제제, KIR 수용체 억제제, 또는 임의의 전술한 면역관문 억제제의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제는 PD-L1/PD-1 경로의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제는 CTLA-4의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 암은 화학요법 또는 방사선 저항성 암이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제가 투여된 후, 적절한 기간 내에 다른 억제제가 투여된다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다. 일 실시 형태에서, PD-L1/PD-1 경로의 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체 또는 이들의 조합이다. 일 실시 형태에서, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제(SK)의 억제제의 유효량 및 면역관문 억제제의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제는 CTLA4(예를 들어, 이필리무맙)에 대해 유도되거나 PD-1(예를 들어, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙)에 대해 유도되거나 또는 PD-L1(예를 들어, 아테졸리주맙 또는 더발루맙)에 대해 유도되는 항체일 수 있다. 이들 경로를 표적화하는 다른 항체 또는 화학적 억제제가 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어, PD-L1 경로의 추가의 억제제는 BMS-936559, MPDL3280A, BMS-936558, MK-3475, CT-011 또는 MEDI4736을 포함한다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제 억제제; 및 PD-L1/PD-1 경로의 억제제 또는 CTLA-4의 억제제 중 적어도 하나의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제 2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다. 일 실시 형태에서, PD-L1/PD-1 경로의 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체 또는 이들의 조합이다. 일 실시 형태에서, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제의 억제제 및 CTLA-4의 억제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 흑생종 치료를 필요로 하는 환자에서 흑색종을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다. 일 실시 형태에서, CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, 흑색종을 치료하는 것은 종양의 크기를 감소시키거나 종양의 성장을 억제하는 것으로 추가로 정의된다. 일 실시 형태에서, 억제제는 이를 필요로 하는 환자에게 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여된다. 일 실시 형태에서, 환자에게 제2 암 요법이 추가로 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다. 일 실시 형태에서, 흑색종은 화학요법 또는 방사선 저항성 흑색종이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제의 억제제 및 PD-L1/PD-1 경로의 억제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 흑생종 치료를 필요로 하는 환자에서 흑색종을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다. 일 실시 형태에서, PD-L1/PD-1 경로의 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체 또는 이들의 조합이다. 일 실시 형태에서, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, 흑색종을 치료하는 것은 종양의 크기를 감소시키거나 종양의 성장을 억제하는 것으로 추가로 정의된다. 일 실시 형태에서, 억제제는 환자에게 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여된다. 일 실시 형태에서, 환자에게 제2 암 요법이 추가로 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다. 일 실시 형태에서, 흑색종은 화학요법 또는 방사선 저항성 흑색종이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640) 및 PD-1 경로의 억제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 흑생종 치료를 필요로 하는 환자에서 흑색종을 치료하는 방법이 개시되어 있다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, PD-1 수용체에 특이적으로 결합하여 PD-1 활성을 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분("항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 부분")이고, 경구 투여되는 스핑고신 키나제의 억제제와 병용하여 60분 미만 동안 주입에 의해 투여되는, 항암제의 치료적 유효량을 폐암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암에 걸린 환자를 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 경구 투여되는 스핑고신 키나제의 억제제의 치료적 유효량과 병용하여, PD-1 수용체에 특이적으로 결합하여 PD-1 활성을 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 항암제의 치료적 유효량의 고정 용량을 폐암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암에 걸린 환자를 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 스핑고신 키나제의 억제제 및 항-CTLA-4의 억제제의 유효량을 폐암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 폐암을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신-키나제-2의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신-키나제-2의 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640)이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 단일클론 항체는 이필리무맙이다. 일 실시 형태에서, 폐암을 치료하는 것은 종양의 크기를 감소시키거나 종양의 성장을 억제하는 것으로 추가로 정의된다. 일 실시 형태에서, 억제제는 환자에게 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여된다. 일 실시 형태에서, 환자에게 제2 암 요법이 추가로 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드(ABC294640) 및 항-CTLA-4의 억제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암 치료를 필요로 하는 환자에서 폐암을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-CTLA-4 단일클론 항체는 이필리무맙이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 면역원성 세포 사멸을 위한 세포를 제조하기 위한 키트가 개시되어 있다. 키트는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분한 독성 농도의 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물; 및 사용 설명서 세트를 포함한다. 일 실시 형태에서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제인 화합물은 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제의 독성 농도는 약 20 μM 내지 약 60 μM이다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, 종양을 치료하기 위한 키트가 개시되어 있다. 키트는 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물; 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 사용 설명서 세트를 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 사용 설명서는 투여 경로, 투여 용량 및 투여를 위한 기간을 포함하여, 억제제를 투여하는 방법을 나타내는 라벨을 포함한다. 키트의 일부 실시 형태에서, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물과 별개의 용기에 저장된다. 키트의 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물은 CTLA-4 수용체 억제제, PD-1 수용체 억제제, PD-L1 억제제 또는 PD-L2 억제제, LAG-3 수용체 억제제, TIM-3 수용체 억제제, BTLA 수용체 억제제, KIR 수용체 억제제, 또는 임의의 전술한 면역관문 억제제 화합물의 조합이다. 키트의 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 항체 또는 항체 단편이다. 키트의 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물은 항-CTLA-4 수용체 항체, 항-PD-1 수용체 항체, 항-LAG-3 수용체 항체, 항-TIM-3 수용체 항체, 항-BTLA 수용체 항체, 항-KIR 수용체 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체, 또는 임의의 전술한 항체의 조합이다. 키트의 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물은 동결건조된 고체 형태이다. 일부 실시 형태에서, 키트는 수성 재구성 용매를 추가로 포함한다. 키트의 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제 화합물은 제1 약학적으로 허용가능한 제형 중에 혼입되고, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드는 제2 약제학적으로 허용가능한 제형에 혼입된다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, PD-1 수용체에 특이적으로 결합하여 PD-1 활성을 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 적어도 약 240 mg의 고정 용량; 스핑고신 키나제의 억제제의 투여량; 및 본 발명의 방법에서 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 스핑고신 키나제의 억제제를 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 폐암에 걸린 대상을 치료하기 위한 키트가 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 사용 설명서는 투여 경로, 투여 용량 및 투여 기간을 포함하여, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 스핑고신 키나제의 억제제를 투여하는 방법을 나타내는 라벨을 포함한다. 일 실시 형태에서, 키트는 CTLA-4에 특이적으로 결합하여 이를 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 0.1 내지 10 mg/체중 1 ㎏ 범위의 투여량인 다른 항암제의 투여량 및 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하는 방법을 추가로 설명하는 설명서를 추가로 포함한다.
본 명세서에 예시된 양태에 따르면, PD-1 수용체에 특이적으로 결합하여 PD-1 활성을 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 항암제를 0.1 내지 10 mg/체중 1 ㎏ 범위의 투여량; 스핑고신 키나제의 억제제의 투여량; 및 본 발명의 방법에서 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 스핑고신 키나제의 억제제를 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 폐암에 걸린 대상을 치료하기 위한 키트가 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 키트는 CTLA-4에 특이적으로 결합하여 이를 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 0.1 내지 10 mg/체중 1 ㎏ 범위의 투여량인 다른 항암제의 투여량 및 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하는 방법을 추가로 설명하는 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명의 양태에 따르면, 치료될 암은 흑색종, 피부 T-세포 림프종, 비호지킨(non-Hodgkin) 림프종, 균상식육종, 파제트병모양망상증, 세자리(Sezary) 증후군, 육아종성 이완 피부(granulomatous slack skin), 림프종양구진증, 만성 태선모양잔비늘증, 급성 태선모양잔비늘증, CD30+ 피부 T-세포 림프종, 이차성 피부 CD30+ 거대세포 림프종, 비균상식육종 CD30 피부 거대 T-세포 림프종(non-mycosis fungoides CD30 cutaneous large T-cell lymphoma), 다형성 T-세포 림프종, 레너트(Lennert) 림프종, 피하 T-세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 아구성 NK-세포 림프종, B-세포 림프종, 호지킨 림프종(HL), 두경부종양; 편평세포 암종, 횡문근육종, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 식도 편평세포 암종, 식도 선암종, 신장세포 암종(RCC), 대장암(CRC), 급성 골수성 백혈병(AML), 유방암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 요로상피세포암종, 방광암, 위암, 전립선 소세포 신경내분비 종양(SCNC), 간암, 육종, 교모세포종, 간암, 구강 편평세포 암종, 췌장암, 신장암, 유두갑상선암, 간내 담관세포암, 간세포 암종, 골암, 전이 및 비인두 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 암을 치료하는 것은 종양의 크기를 감소시키거나 종양의 성장을 억제하는 것으로 추가로 정의된다.
본 발명의 양태에 따르면, 억제제는 이를 필요로 하는 대상에게 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여될 수 있다. 본 발명의 일 실시 형태에서, 이를 필요로 하는 대상에는 추가로 제2 암 요법이 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다. 일 실시 형태에서, 암은 화학요법 또는 방사선 저항성 암이다.
도 1은 ABC294640 처리된 B16 흑색종 세포의 투여가 이어서 주사되는 비처리된 B16 종양 세포에 대한 면역을 유도함을 보여준다. 이는 ABC294640이 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 것을 입증한다. 도 1, 도 2 및 도 3a 내지 도 3c에 나타낸 "상자 수염(box & whiskers)" 그림의 경우, 종양 부피 중앙값은 각 막대의 수평선에 의해 표시되고; 막대 범위는 사분위수 범위를 나타내며; 수염은 각 처리군의 최소 및 최대 종양 사이의 범위를 나타낸다.
도 2는 ABC294640 처리된 신경-2a 신경아세포종 세포의 투여가 이어서 주사되는 비처리된 신경-2a 종양 세포에 대한 면역을 유도함을 보여준다. 이는 ABC294640이 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 것을 추가로 입증한다.
도 3a 내지 도 3c는 ABC294640 처리된 루이스폐암종(Lewis Lung Carcinoma) 세포의 투여가 이어서 주사되는 비처리된 LLC 종양 세포에 대한 면역을 유도함을 보여준다. 종양 크기는 15일(도 3a), 17일(도 3b) 및 20일(도 3c)에 나타내며, ABC294640 처리된 세포의 투여가 비처리 종양 세포에 의한 종양 성장의 지속적인 억제를 야기한다는 것을 입증한다. 이는 ABC294640이 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 것을 추가로 입증한다.
도 4는 ABC294640 처리된 B16 흑색종 또는 루이스폐암종(LLC) 세포의 투여가 이어서 주사되는 비처리된 B16 종양 세포에 대한 면역을 유도함을 보여준다. 이는 ABC294640이 교차 면역을 유도한다는 것을 입증한다.
도 5는 ABC294640 처리된 B16 흑색종 또는 루이스폐암종(LLC) 세포의 투여가 이어서 주사되는 비처리된 LLC 종양 세포에 대한 면역을 유도함을 보여준다. 이는 ABC294640이 교차 면역을 유도한다는 것을 추가로 입증한다.
도 6은 B16 흑색종 종양의 성장이 ABC294640(ABC) 단독 또는 항-PD-1 항체 단독으로 마우스를 처리하여 부분적으로 억제됨을 보여준다. ABC294640과 항-PD-1 항체의 조합으로 마우스를 처리한 결과 종양 성장의 억제가 현저하게 증가하였다. 기호는 평균 종양 부피를 나타내고, 오차 막대는 표시된 시간에서의 각 처리군에 대한 평균의 표준 오차를 나타낸다.
도 7은 B16 흑색종 종양을 보유하는 마우스의 생존이 ABC294640(ABC) 단독 또는 항-PD-1 항체 단독으로 마우스를 처리하여 약간 연장됨을 보여준다. ABC294640과 항-PD-1 항체의 조합으로 마우스를 처리한 결과 종양-보유 마우스의 생존이 현저하게 증가하였다.
도 8은 LLC 폐 종양의 성장이 ABC294640(ABC) 단독 또는 항-CTLA4 항체 단독으로 마우스를 처리하여 부분적으로 억제됨을 보여준다. ABC294640과 항-CTLA4 항체의 조합으로 마우스를 처리한 결과 종양 성장의 억제가 현저하게 증가하였다.
도 9는 LLC 종양을 보유하는 마우스의 생존이 ABC294640(ABC) 단독 또는 항-CTLA4 항체 단독으로 마우스를 처리하여 약간 연장됨을 보여준다. ABC294640과 항-CTLA4 항체의 조합으로 마우스를 처리한 결과 종양-보유 마우스의 생존이 현저하게 증가하였다.
본 발명의 스핑고신 키나제(SK) 억제제는 하나 이상의 다른 항암 요법과 병용하여 사용해야 한다. 이러한 다른 약물은 일반적으로 사용되는 경로 및 양으로, 본 발명의 SK 억제제와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 SK 억제제가 하나 이상의 다른 약물과 동시에 사용되는 경우, 본 발명의 SK 억제제 이외에 이러한 다른 약물을 함유하는 약제학적 조성물이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 SK 억제제 이외에 하나 이상의 다른 활성 성분 또는 치료제를 또한 함유하는 것들을 포함한다. 별도로 또는 동일한 약제학적 조성물로 투여될 수 있는 본 발명의 SK 억제제와 병용될 수 있는 다른 치료제의 예에는 CTLA-4, PD1 또는 PD-L1에 대한 항체가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 제2 활성 성분에 대한 본 발명의 SK 억제제의 중량비는 다양할 수 있으며, 각 성분의 유효량에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 각각의 유효량이 사용될 것이다. 본 발명의 SK 억제제 및 다른 활성 성분의 조합은 일반적으로는 전술한 범위 내에 있을 것이나, 각각의 경우에, 각 활성 성분의 유효량이 사용되어야 한다. 일 실시 형태에서, SK 억제제는 면역관문 억제제와 병용하여 사용된다. 일 실시 형태에서, SK 억제제는 CTLA-4(CD 152), PD-1(CD279), PDL-1(CD274), TIM-3, LAG-3(CD223), VISTA, KIR, NKG2A, BTLA, PD-1H, TIGIT, CD96, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GARP, CSF-1R, A2AR, CD73, CD47, 트립토판 2,3-다이옥시게나제(TDO) 또는 인돌아민 2,3-다이옥시게나제(IDO)의 활성을 차단하는 하나 이상의 화합물과 병용하여 사용된다.
용어
본 개시 내용이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 특정 용어를 먼저 정의한다. 본 출원에 사용되는 바와 같이, 본 명세서에 달리 명백하게 제공되는 경우를 제외하고는 다음 용어 각각은 아래에 기재된 의미를 가질 것이다. 추가 정의가 본 출원 전체에 기재된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an", "the"), "적어도 하나" 및 "하나 이상"은 상호교환적으로 사용된다.
"투여하는"은 당업자에게 공지된 임의의 다양한 방법 및 전달 시스템을 사용하여, 본 발명의 억제제를 포함하는 조성물을 대상에게 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 항-PD-1 항체에 대한 바람직한 투여 경로는, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 어구 "비경구 투여"는, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 일반적으로 주사에 의한 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피부내, 복강내, 기관지, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 본 발명의 SK 억제제는 전형적으로 비경구가 아닌 경로(non-parenteral)를 통해, 바람직하게는 경구로 투여된다. 다른 비경구가 아닌 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어, 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소 경로를 포함한다. 투여는 또한, 예를 들어, 1회, 복수회 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "제제"는 약리학적 활성(개체에 대한 제제의 효과)을 갖는 화합물을 지칭한다. 용어 "제제", "화합물" 및 "약물"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다.
"개선하다"는 특정 병태의 증상 또는 임상 징후의 정도, 중증도, 빈도 및/또는 가능성의 임의의 감소를 지칭한다.
본 발명의 "SK 억제제-처리된 암 세포" 또는 "ABC296460-처리된 암 세포"는 처리된 세포의 표면 상에서 칼레티쿨린의 발현이 증가될 것이다. 이론에 구애되지 않고, 칼레티쿨린의 과발현은 면역 반응을 촉진하는 신생항원 중 적어도 하나로서 작용하는 것으로 여겨진다. 칼레티쿨린의 표면 발현은 주사 전에 세포의 유세포 분석에 의해 측정될 수 있고, 세포는 면역 반응을 최적화하기 위해 칼레티쿨린의 높은 발현을 갖는 하위세트로 분류될 수도 있다. 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조된 SK 억제제-처리된 암 세포 또는 ABC294640 처리된 암 세포는 항암성 면역 반응을 유도하는 데 특히 효과적이다.
칼레귤린(calregulin), CRP55, CaBP3, 칼세퀘스트린-유사 단백질 및 소포체 상주 단백질 60(ERp60)으로도 알려져 있는 칼레티쿨린은 Ca2+ 이온(신호 전달의 제2 메신저)에 결합하여 비활성화하는 다작용성 수용성 단백질이다.
"항체"(Ab)는 항원에 특이적으로 결합하고 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질 면역글로불린, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함할 것이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 YH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인 Cm, Cm 및 m-를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 YL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 불변 도메인 CL을 포함한다. V# 및 YL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 명명되는, 보다 보존된 영역이 산재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명되는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 YH 및 YL은 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함하며, 이는 아미노-말단부터 카르복시-말단까지 하기의 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 성분(Clq)을 포함하는, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
"항체 단편"은 리간드에 대한 모 항체의 결합 기능의 적어도 일부를 유지하는 항체의 하위-부분을 지칭한다.
"항체 유도체"는 항체 또는 항체 단편의 화학적으로 변형된 버전을 지칭한다. 유도체의 일부 예에는 다른 작용성 분자, 예를 들어 PEG 기, 펩티드, 단백질 또는 다른 항체에 대한 부착이 포함된다.
용어 "면역원성 세포 사멸"("ICD")은 면역 반응을 유발하는 임의의 유형의 세포 사멸이다. ICD는 세포 표면의 조성 변화를 수반한다.
SK 억제제, 예를 들어 "시험관내에서 면역원성 세포 사멸을 일으키는 것으로 알려진" 화합물ABC294640의 농도는 종양 세포의 적어도 75% 사멸시키도록 선택되는 화합물의 독성량을 의미한다. 일 실시 형태에서, SK 억제제, 예를 들어 시험관내에서 세포 사멸을 일으키는 것으로 알려진 ABC294640의 농도는 약 10 μM 내지 약 100 μM; 약 20 μM 내지 약 60 μM; 약 25 μM 내지 약 55 μM; 약 30 μM 내지 약 50 μM; 약 35 μM 내지 약 45 μM이다. 일 실시 형태에서, SK 억제제, 예를 들어 시험관내에서 면역원성 세포 사멸을 일으키는 것으로 알려진 ABC294640의 농도는 40 μM이다.
본 명세서에 개시된 "생체외" 방법은 환자로부터 채취한 세포를 시험관 내에서 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물로 처리한 다음 환자의 신체로 다시 넣을 수 있도록 프라이밍하는 것을 의미한다.
용어 "단일클론 항체"("mAh")는 단일 분자 조성의 항체 분자, 즉, 1차 서열이 본질적으로 동일하고 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 분자의 비자연적으로 발생하는 제제를 지칭한다. 단일클론 항체는 단리된 항체의 예이다. MAb는 하이브리도마, 재조합, 트랜스제닉 또는 당업자에게 공지된 다른 기술에 의해 생성될 수 있다.
면역관문 경로를 차단하기 위한 단일클론 항체, 항체 단편 및 항체 유도체는, 체세포 혼성화 기술 및 하이브리도마 방법을 포함하지만 이에 한정되지 않는 당업자에게 공지된 임의의 여러 방법에 의해 제조될 수 있다. 하이브리도마 생성은 문헌[Antibodies, A Laboratory Manual, Harlow and Lane, 1988, Cold Spring Harbor Publications, New York]에 기재되어 있다. 인간 단일클론 항체는, 예를 들어 미국 특허 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,571,698호, 제6,582,915호 및 제6,593,081호에 기재된 방법에 의해 인간 면역글로불린 유전자의 파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝함으로써 확인 및 단리될 수 있다.
단일클론 항체는 미국 특허 제6,331,415호(캐빌리(Cabilly))에 기재된 일반적인 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
"신생항원"은 면역 세포가 암 세포를 확인하고 이와 싸우는 것을 돕는 독특한 분자 또는 단백질이다. 일 실시 형태에서, SK 억제제, 예를 들어 ABC294640의 독성 농도로 환자-유래 암 세포를 시험관내에서 처리한 결과 처리된 암 세포의 표면 상에서 칼레티쿨린이 과발현된다. 이어서, 이들 처리된("프라이밍된") 암 세포는 암과의 싸움/치료를 돕기 위해 환자에게 투여될 수 있다.
"인간" 항체(HuMAb)는 프레임워크 및 CDR 영역 모두가 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 더욱이, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 생성에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 생식세포계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 이식된 항체를 포함하고자 하는 것은 아니다. 용어 "인간" 항체 및 "완전 인간" 항체는 동의어로 사용된다. 예를 들어, 인간 단일클론 항체는 제노마우스(XenoMouse)TM(미국 캘리포니아주 프리몬트 소재의 압제닉스(Abgenix)) 또는 제노마우스로부터의 B 세포의 하이브리도마를 사용하여 제조될 수 있다. 제노마우스는 미국 특허 제6,162,963호(쿠체라파티(Kucherlapati))에 기재된 바와 같은 기능적 인간 면역글로불린 유전자를 갖는 쥐과 숙주이다.
"인간화 항체"는 비인간 항체의 CDR 도메인 외의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 대체된 항체를 지칭한다. 항체의 인간화 형태의 일 실시 형태에서, CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 대체된 반면, 하나 이상의 CDR 영역 내의 일부, 대부분 또는 모든 아미노산은 변하지 않는다. 특정 항원에 결합하는 항체의 능력을 없애지 않는 한 아미노산의 작은 첨가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형이 허용된다. "인간화" 항체는 원래 항체와 유사한 항원 특이성을 유지한다.
"키메라 항체"는 가변 영역이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역이 인간 항체로부터 유래되는 항체와 같은 가변 영역이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역이 다른 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
"항-항원(anti-antigen)" 항체는 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 항-PD-1 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 항-CTLA-4 항체는 CTLA-4에 특이적으로 결합한다.
"차단하다", "차단하는", "차단" 및 이들의 변형은 "억제하다", "억제하는", "억제" 및 이들의 변형과 동일한 의미를 갖는다. 용어 "차단"은 부분적 차단 및 완전한 차단 모두를 포함하는 의미이다.
"세포-매개 면역 활성"은, 예를 들어, 적어도 하나의 THI사이토카인의 생성 증가와 같은 세포-매개 면역 반응의 일부로 간주되는 생물학적 활성을 지칭한다.
"면역관문 억제제(checkpoint inhibitor 또는 immune checkpoint inhibitor)"는 면역계 또는 면역 반응을 향상시키는 임의의 제제를 포함한다. 이러한 억제제는 면역관문 수용체 리간드에 결합하고 이를 차단하거나 억제하는 항체 또는 면역관문 수용체에 결합하고 이를 차단하거나 억제하는 소분자, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 항체 단편, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 차단 또는 억제를 위해 표적화될 수 있는 예시적인 면역관문 분자에는 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, LAG3, TIM3, VISTA, KIR, 2B4(CD2 분자 계열에 속하며, 모든 NK, γδ 및 기억 CD8+(αβ) T 세포 상에서 발현됨), CD160(BY55로도 지칭됨), CGEN-15049, CHK 1 및 CHK2 키나제, A2aR 및 다양한 B-7 계열 리간드가 포함되나 이에 한정되지 않는다. B7 계열 리간드에는 B7-1, B7-2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7- H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6 및 B7-H7이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 면역관문 억제제에는 하나 이상의 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160 및 CGEN-15049에 결합하고 이의 활성을 차단하거나 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 다른 결합 단백질, 생물학적 치료제 또는 소분자가 포함된다. 예시적인 면역관문 억제제에는 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체), 항-OX40, PD-L1 단일클론 항체(항-B7-Hl; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항-PD1 항체), CT-011(항-PD1 항체), BY55 단일클론 항체, AMP224(항-PDL1 항체), BMS-936559(항-PDL1 항체), MPLDL3280A(항-PDL1 항체), MSB0010718C(항-PDL1 항체) 및 여보이/이필리무맙(항-CTLA-4 면역관문 억제제)이 포함된다. 면역관문 단백질 리간드에는 PD-L1, PD-L2, B7-H3, B7- H4, CD28, CD86 및 TIM-3이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
"면역 세포"는 면역계의 세포, 즉 선천적이든, 후천적이든, 체액성이든, 세포 매개이든 면역 반응의 생성 또는 유지에 직접 또는 간접적으로 관여하는 세포를 지칭한다.
"유도하다" 및 이의 변형은 세포 활성의 임의의 측정가능한 증가를 지칭한다. 예를 들어, 면역 반응의 유도는, 예를 들어, 사이토카인 생성, 면역 세포 집단의 활성화, 증식 또는 성숙의 증가 및/또는 증가된 면역 기능의 다른 지표를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "대상" 또는 "환자"는 동의어이며, 성인, 어린이, 또는 유아를 지칭한다.
예정된 사멸-1(PD-1)은 활성화된 T 및 B 세포에 의해 발현되는 주요 면역관문 수용체이며, 면역억제를 매개한다. PD-1은 CD28 수용체 계열의 구성원이며, CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 및 BTLA를 포함한다. PD-1에 대한 2개의 세포 표면 당단백질 리간드인 예정된 사멸 리간드-1(PD-L1, CD274, B7-H1) 및 예정된 사멸 리간드-2(PD-L2, CD273, B7-DC)가 확인되었다. PD-L1 및 PD-L2는 PD-1에 결합시 T 세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향조절하며, 이는 항원 제시 세포뿐만 아니라 많은 인간 암에서 발현되고 PD-1에 결합시 T 세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향조절시키는 것으로 나타났다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "PD-1"은 인간 PD-1(hPD-1), hPD-1의 변이체, 상동체 및 종 유사체, 및 hPD-1와 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hPD-1 서열은 GenBank 수탁 번호 U64863에서 찾을 수 있다. PD-1/PD-L1 상호작용의 억제는 전임상 모델에서 강력한 항종양 활성을 매개하고(미국 특허 제8,008,449호 및 제7,943,743호), 암을 치료하기 위한 PD-1/PD-L1 상호작용의 항체 억제제의 사용은 임상 시험에 진입하였다(문헌[Brahmer et al, 2010]; 문헌[Topalian et al, 2012a]; 문헌[Topalian et al, 2014]; 문헌[Hamid et al., 2013]; 문헌[Brahmer et al, 2012]; 문헌[Flies et al, 2011]; 문헌[Pardoll, 2012]; 문헌[Hamid and Carvajal, 2013]).
PD-L1에 대한 항체를 사용한 PD-1/PD-L1 라이게이션의 차단은 많은 시스템에서 T 세포 활성화를 복원 및 증강하는 것으로 나타났다. 진행성 암 환자는 PD-L1에 대한 단일클론 항체 요법의 득을 본다. 종양 및 만성 감염의 전임상 동물 모델은 단일클론 항체에 의한 PD-1/PD-L1 경로의 차단이 면역 반응을 향상시키고 종양 거부 또는 감염 제어를 초래할 수 있음을 보여주었다. PD-1/PD-L1 차단을 통한 항종양 면역요법은 다수의 조직학적으로 구별되는 종양에 대한 치료적 면역 반응을 증강시킬 수 있다.
현재 미국에서 시판 중인 PD-1/PD-L1 억제제의 예에는 펨브롤리주맙(키트루다(등록상표), Merck), 니볼루맙(옵디보(등록상표), Bristol-Myers Squibb), 아테졸리주맙(티센트릭(등록상표), Roche), 아베루맙(바벤시오(등록상표), EMD 및 Pfizer) 및 더발루맙(임핀지(등록상표), AstraZeneca)이 포함된다. 임의의 이들 PD-1/PD-L1 억제제는 본 발명의 SK 억제제와 함께 사용될 수 있다.
니볼루맙(이전 명칭: 5C4, BMS-936558, MDX-1 106 또는 ONO-4538)은 PD-1 리간드(PD-L1 및 PD-L2)와의 상호작용을 선택적으로 방지하여, 항종양 T-세포 기능의 하향 조절을 차단하는 완전 인간 IgG4(S228P) PD-1 면역관문 억제제 항체이다(미국 특허 제8,008,449호; 문헌[Wang et al., 2014]). 니볼루맙은 신장 세포 암종(신장 선암종 또는 부신종), 흑색종 및 비소세포 폐암(NSCLC)을 포함하는 다양한 진행성 고형 종양에서 활성을 나타내었다(문헌[Topalian et al, 2012a]; 문헌[Topalian et al., 2014]; 문헌[Drake et al, 2013]; WO 2013/173223호).
이필리무맙(여보이(등록상표))은 2011년 FDA에 의해 승인된 제1 면역관문 항체였으며, 미국 특허 제6,984,720호에 개시된 바와 같이, 진행성 흑색종 환자에서 CTLA-4가 이의 B7 리간드에 결합하는 것을 차단하여, T 세포 활성화를 자극하고 전체 생존(OS)을 개선하는 완전 인간 IgG1 단일클론 항체이다(문헌[Hodi et al, 2010]). 이필리무맙은 4회 용량으로 3주마다 1회 3 mg/㎏으로 정맥내 투여되는 흑색종 치료에 대해 승인되었다. 따라서, 바람직한 실시 형태에서, 3 mg/㎏은 항-PD-1 항체와 병용하여 사용되는 이필리무맙의 최고 투여량이지만, 소정 실시 형태에서, 항-CTLA-4 항체, 예컨대 이필리무맙은 니볼루맙과 병용될 경우 2주 또는 3주마다 약 0.3 내지 10 mg/㎏ 체중의 범위 내에서 투여될 수 있다. 3주마다 승인된 3 mg/㎏ 보다 유의하게 낮은, 예를 들어, 3주 또는 4주마다 0.3 mg/㎏ 이하의 이필리무맙 투여량은 치료적 투여량 이하(subtherapeutic dosage)로 간주된다. 3 mg/㎏의 니볼루맙 및 3 mg/㎏의 이필리무맙의 병용 투여는 흑색종 집단에서 MTD를 초과한 반면, 1 mg/㎏의 니볼루맙과 3 mg/㎏의 이필리무맙 또는 3 mg/㎏의 니볼루맙과 1 mg/㎏의 이필리무맙의 병용은 흑색종 환자에서 허용될 수 있는 것으로 밝혀졌다(문헌[Wolchok et al., 2013]). 따라서, 니볼루맙은 2주마다 정맥내 투여되는 10 mg/㎏까지 허용되지만, 바람직한 실시 형태에서, 항-PD-1 항체의 용량은 이필리무맙과 병용되는 경우 3 mg/㎏을 초과하지 않는다. 소정 실시 형태에서, 위험 대비 효용(risk-benefit) 및 PK-PD 평가에 기초하여, 사용된 투여량은 1 mg/㎏의 니볼루맙과 3 mg/㎏의 이필리무맙, 3 mg/㎏의 니볼루맙과 1 mg/㎏의 이필리무맙 또는 3 mg/㎏의 니볼루맙과 3 mg/㎏의 이필리무맙의 조합을 포함하며, 각각은 2 내지 4주마다 1회, 바람직하게는 3주마다 1회의 투여 빈도로 투여된다. 소정의 다른 실시 형태에서, 니볼루맙은 0.1, 0.3, 1, 2, 3 또는 5 mg/㎏의 투여량으로 투여되는 이필리무맙과 병용하여 0.1, 0.3, 1, 2, 3 또는 5 mg/㎏의 투여량으로 2주마다 1회, 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 투여된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "PD-1 항체"는 PD-1을 작용시킴으로써 림프구의 활성 및/또는 증식을 길항작용하는 항체를 지칭한다. 용어 "활성을 길항작용하다"는 림프구 증식 또는 활성이 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 감소(또는 저하)하는 것에 관한 것이다. 용어 "길항작용하다"는 용어 "억제" 및 "억제하다"와 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 T 세포 증식 검정을 사용하여 PD-1 매개 활성을 정량적으로 결정할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 제형"은 선택된 투여 경로에 의해 대상에게 본 발명의 화합물의 치료적 유효량을 전달할 수 있고, 일반적으로 대상에 의해 허용되며, 허용가능한 독성 프로파일(바람직하게는 투여된 용량에서 독성이 최소이거나 전혀 없음)을 갖는다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (1990), Mack Publishing Co.]에 기재되어 있으며, 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 화합물 중에서 적어도 하나의 산 또는 염기 기를 무독성 염 형태로 전환함으로써 화합물이 변형된 화합물의 유도체를 지칭한다. "약제학적으로 허용가능한 염"의 예는 문헌[Journal of Pharmaceutical Science (1977), 66, pages 1-19]에서 버지(Berge)에 의해 기재되어 있으며, 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 산 부가염은 화합물 내의 염기성 모이어티(예를 들어, 아민기)의 무기 또는 유기산 염을 포함한다. 적합한 산 부가염에는, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산 등과 같은 무기산으로부터 유도된 것들이 포함된다. 적합한 산 부가염에는 유기산, 예를 들어 모노- 및 다이-카르복실산(예를 들어, 아세트산, 프로피온산), 하이드록시알콘산(예를 들어, 시트르산, 타르타르산), 방향족산(예를 들어, 벤조산, 키노포산(xinofoic acid), 팜산), 지방족 및 방향족 설폰산(예를 들어, 파라-톨루엔 설폰산) 등으로부터 유도된 것들이 포함된다. 염기 부가염에는 화합물 내의 산성 모이어티(예를 들어, 카르복실산기)의 알칼리토류 무기염 및 유기 아민 염이 포함된다. 적합한 염기 부가염에는 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 염 등이 포함된다. 추가의 적합한 염기 부가염에는 콜린, 에틸렌다이아민 등과 같은 무독성 유기 아민이 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "적합한 기간"은 대상이 본 발명의 방법을 사용하여 암의 진단에 대한 치료를 시작할 때 시작하여, 치료 전반에 걸쳐, 대상이 치료를 중단할 때까지의 기간을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 1주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 1주 내지 2주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 2주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 2주 내지 3주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 3주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 3주 내지 4주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 4주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 4주 내지 5주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 5주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 5주 내지 6주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 6주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 6주 내지 7주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 7주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 7주 내지 8주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 8주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 적어도 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 적어도 1년이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "상승 작용적"은 조합된 작용이 개별적으로 작용하는 각각의 합보다 크도록 본 발명의 둘 이상의 제제의 조정되거나 상관된 작용을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 제제는, 치료 요법의 일부로서 함께 투여될 때, 상승 작용적 부작용을 동반하지 않고서 치료적 상승 작용을 제공한다(이에 한정되지 않으나, 예를 들어, 교차반응 제제).
"치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 투여량"은 종양의 적어도 하나의 증상 또는 임상 징후를 개선하는 양이다. 종양의 적어도 하나의 증상 또는 임상 징후를 개선하는 것은 종양의 크기의 감소, 종양의 크기 또는 성장의 안정화, 종양의 성장 속도의 감소, 종양 괴사의 증가, 종양 구조의 변화, 예컨대 붕해, 종양 확립 감소와 관련된 생화학적 마커의 변화, 종양 진행의 감소 또는 종양 생존의 감소를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "암을 치료하는", "치료하는" 및 "치료"는 암 발생의 예방 또는 감소, 암의 증상의 감소, 확립된 암의 성장의 저해 또는 억제, 기존 암의 전이 및/또는 침습 방지, 암 퇴행 촉진 또는 유도, 암 세포의 증식 억제 또는 저해, 혈관신생 감소, 악성 또는 암성 종양 세포의 사멸, 또는 아포토시스 암 세포의 양 증가를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치료를 필요로 하는 환자"는 치료가 필요한 것으로 확인된 환자를 의미한다. 예를 들어, 암 치료를 필요로 하는 환자는 암이 있거나 암 발병 위험이 있는 것으로 확인된 환자이다. 환자는 의료 전문가에 의해 및/또는 하나 이상의 진단 검정을 수행하여 치료를 필요로 하는 것으로 진단될 수 있다. 예를 들어, 암 치료를 필요로 하는 환자는 의료 전문가에 의해 암으로 진단되거나 암 위험이 있는 환자일 수 있다. 환자가 암에 걸렸는지 또는 암 발병 위험이 있는지를 평가하는 진단 검정이 당업계에 공지되어 있다.
본 발명의 방법 및 투여량과 관련하여 용어 "고정 용량"의 사용은 환자의 체중 또는 신체 표면적(BSA)과 무관하게 환자에게 투여되는 용량을 의미한다. 따라서, 고정 용량은 mg/㎏ 용량으로서 제공되지 않고, 오히려 제제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 절대량으로서 제공된다. 예를 들어, 60 ㎏인 사람과 100 ㎏인 사람은 동일한 용량의 항체(예를 들어, 240 mg의 항-PD1 항체)를 제공받을 것이다.
본 명세서에서 "체중 기반 용량"으로 지칭되는 용어는 환자에게 투여되는 용량이 환자의 체중을 기준으로 계산됨을 의미한다. 예를 들어, 체중이 60 ㎏인 환자가 3 mg/㎏의 항-PD-1 항체를 필요로 할 때, 투여를 위해 적절한 양의 항-PD-1 항체(즉, 180 mg)를 계산하여 사용할 수 있다.
종양의 세포를 포함하는 세포 집단의 적어도 하나의 세포-매개 면역 반응의 증가는 종양 미세환경의 면역학적 프로파일의 개선과 관련된 적어도 하나의 생화학적, 조직학적 또는 면역학적 마커의 증가를 지칭한다. 마커 양의 증가가 종양 미세환경의 면역학적 프로파일의 개선과 관련되는 마커는 인터페론-알파; 인터페론-감마; 인터페론 유도성 단백질; TNF-알파; 케모카인, 예를 들어 CCL2, CCL3, CCL4, CXCL2; 활성화된 T-세포; 활성화된 B-세포; 활성화된 NK-세포; 종양 특이적 T-세포, 활성화된 종양 관련 대식세포; 케모카인 수용체, 예를 들어 CCR6; 또는 종양 관련 림프구 응집체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
종양 미세환경과 관련된 마커는, 예를 들어 종양, 국소화 종양 영역 또는 종양 배출 림프절로부터의 생검(예를 들어, 바늘생검)을 분석하여 결정될 수 있다. 마커에 대한 분석은 표준 기술, 예를 들어 조직학(H&E 염색), 유세포 분석, 유전자 발현 분석(정량적 PCR), 면역화학 기술뿐만 아니라 당업자에게 일반적으로 공지된 다른 기술을 사용하여 수행할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "시험관내"는, 예를 들어, 제한 없이, 시험관 또는 세포 배양 시스템과 같은 인공 환경에서 수행되는 절차를 지칭한다. 당업자는, 예를 들어, 단리된 SK 효소가 시험관내 환경에서 개질제와 접촉될 수 있음을 이해할 것이다. 대안적으로, 단리된 세포는 시험관내 환경에서 개질제와 접촉될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "생체내"는 제한 없이, 인간, 원숭이, 마우스, 쥐, 토끼, 소, 말, 돼지, 개, 고양이 또는 영장류와 같은 살아있는 유기체 내에서 수행되는 절차를 지칭한다.
본 발명에 유용한 활성 성분 또는 제제는 이의 이성질체, 염, 용매화물 및 다형체뿐만 아니라 라세미 혼합물 및 전구약물을 포함하는 이들의 약제학적으로 허용가능한 형태 중 임의의 형태로 본 명세서에 기재된 것들을 포함한다.
본 발명의 스핑고신 키나제의 억제제
스핑고신 키나제(SK)는 프로아포토시스 세라아미드를 희생하여 유사분열유발성 제2 메신저 스핑고신-1-포스페이트(S1P)의 형성을 촉매하는 발암성 스핑고지질-대사 효소이다. 따라서, SK는 S1P 차단이 암 세포에서 아포토시스의 유도뿐만 아니라 증식의 억제로 이어지기 때문에 암 요법의 매력적인 표적이다. 본 발명은 SK를 억제하는 아릴아다만탄 화합물을 제공한다. 일 실시 형태에서, SK 억제제는 스핑고신 키나제-1(SK1)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK 억제제는 스핑고신 키나제 2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK 억제제는 (스핑고신 키나제-1 및 스핑고신 키나제-2 모두를 억제하는) 스핑고신 키나제의 이중 억제제이다.
SK의 억제제인 본 발명의 아릴아다만탄 화합물의 예는 일반적으로 하기에 나타낸 화학식 1 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로 표시되며:
[화학식 I]
Figure pct00001
상기 식에서,
L은 결합(bond)이거나 또는 -C(R3,R4)-이고;
X는 - C(R3,R4)N(R5)-, -C(O)N(R4)-, -N(R4)C(O) -, - C(R4,R5)-, -N(R4)-, -O-, - S-,-C(O) -,-S(O)2-,-S(O)2N(R4) - 또는 -N(R4)S(O)2-이며;
R1은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이고;
R2는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일, 모노 또는 다이알킬티오카르바모일, 알킬-S-알킬, -헤테로아릴-아릴, -알킬-헤테로아릴-아릴, -C(O)-NH-아릴, -알케닐-헤테로아릴, -C(O)-헤테로아릴 또는-알케닐-헤테로아릴-아릴이며;
R3은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, 옥소(=O), -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)알킬, 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이고; 여기서, 상기 R1, R2 및 R3 기 각각의 알킬 및 고리 부분은 독립적으로 (C1-C6)알킬, 할로겐, 할로알킬, -OC(O)(C1-C6 알킬), -C(O)O(C1-C6 알킬), -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR'C(O)R", -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 알콕시, 하이드록시알킬, -CN, -CO2H, -SH, -S-알킬, -SOR'R", -SO2R', -NO2 또는 NR'R"인 5개 이하의 기로 선택적으로 치환되며(R' 및 R"은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고, 치환기의 각각의 알킬 부분은 할로겐, CN, OH 및 NH2로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 선택적으로 추가로 치환됨);
R4 및 R5는 독립적으로 H 또는 알킬이되, 단 R3 및 R4가 동일한 탄소 상에 있고 R3이 옥소인 경우, R4는 부재한다.
화학식 1의 아릴아다만탄 화합물은 하기 화학식 I-1의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하며:
[화학식 I-1]
Figure pct00002
상기 식에서,
R1은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이고;
R2는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일, 모노 또는 다이알킬티오카르바모일, 알킬-S-알킬, -헤테로아릴-아릴, -알킬-헤테로아릴-아릴, -NH-아릴, -알케닐-헤테로아릴, -헤테로아릴, -NH-알킬, -NH-사이클로알킬 또는 -알케닐-헤테로아릴-아릴이며;
여기서, 상기 R1 및 R2 기 각각의 알킬 및 고리 부분은 독립적으로 (C1-C6)알킬, 할로겐, 할로알킬, -OC(O)(C1-C6 알킬), -C(O)O(C1-C6 알킬), -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR'C(O)R", -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 알콕시, 하이드록시알킬, -CN, -CO2H, -SH, -S-알킬, -SOR'R", -SO2R', -NO2 또는 NR'R"인 5개 이하의 기로 선택적으로 치환된다(R' 및 R"은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고, 치환기의 각각의 알킬 부분은 할로겐, CN, OH 및 NH2로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 선택적으로 추가로 치환됨).
화학식 I의 아릴아다만탄 화합물은 하기 화학식 II의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하며:
[화학식 II]
Figure pct00003
상기 식에서,
Y는 -C(R4, R5)-, -N(R4)-, -O- 또는 -C(O)-이고;
R1은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이며;
R2는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)(알킬), 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일, 모노 또는 다이알킬티오카르바모일, 알킬-S-알킬, -헤테로아릴-아릴, -알킬-헤테로아릴-아릴, -C(O)-NH-아릴, -알케닐-헤테로아릴, -C(O)-헤테로아릴 또는-알케닐-헤테로아릴-아릴이고;
R3은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, 옥소(=O), -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)알킬, 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이고;
여기서, 상기 R1, R2 및 R3 기 각각의 알킬 및 고리 부분은 독립적으로 (C1-C6)알킬, 할로겐, 할로알킬, -OC(O)(C1-C6 알킬), -C(O)O(C1-C6 알킬), -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR'C(O)R", -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 알콕시, 하이드록시알킬, -CN, -CO2H, -SH, -S-알킬, -SOR'R", -SO2R', -NO2 또는 NR'R"인 5개 이하의 기로 선택적으로 치환되며(R' 및 R"은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고, 치환기의 각각의 알킬 부분은 할로겐, CN, OH 및 NH2로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 선택적으로 추가로 치환됨);
R4 및 R5는 독립적으로 H 또는 알킬이다.
화학식 II의 화합물은 하기를 포함하며:
Y는 - C(R4,R5)- 또는 -N(R4)-이고;
R1은 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)알킬, 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일 또는 모노 또는 다이알킬티오카르바모일이며;
R2는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 알킬아릴, 알케닐아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, 알킬-헤테로사이클로알킬, 아실, 아로일, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시, 하이드록시알킬, 알카노일, -COOH, -OH, -SH, -S-알킬, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(알킬), -OC(O)알킬, 카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노카르바모일, 모노 또는 다이알킬카르바모일, 모노 또는 다이알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이알킬아미노알킬, 티오카르바모일, 모노 또는 다이알킬티오카르바모일, 알킬-S-알킬, -헤테로아릴-아릴, -알킬-헤테로아릴-아릴, -C(O)-NH-아릴, -알케닐-헤테로아릴, -C(O)-헤테로아릴 또는 -알케닐-헤테로아릴-아릴이고;
여기서, 상기 R1 및 R2 기 각각의 알킬 및 고리 부분은 독립적으로 (C1-C6)알킬, 할로겐, 할로알킬, -OC(O)(C1-C6 알킬), C(O)O(C1-C6 알킬), CONR4R5, -OC(O)NR4R5 -NR4C(O)R5, -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 알콕시, 하이드록시알킬, -CN, - CO2H, -SH, -S-알킬, -SOR4R5, - SO2R4R5, - NO2, 또는 NR4R5인 5개 이하의 기로 선택적으로 치환되며(치환기의 각각의 알킬 부분은 할로겐, CN, OH 및 NH2로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 선택적으로 추가로 치환됨);
R3은 H, 알킬, 또는 옥소(= O)이고;
R4 및 R5는 독립적으로 H 또는(C1-C6)알킬이다.
본 발명의 특히 바람직한 아릴아다만탄 SK 억제제 화합물은 하기에 예시되며, ABC294640 [3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)아미드]로 지칭된다:
Figure pct00004
본 발명의 특정 방법 또는 치료적 조합에 포함된 SK 억제제의 정확한 양은, 예를 들어, 대상의 신체적 및 임상적 상태, 투여 방법, 제형의 함량, 의도된 투여 계획 또는 순서와 같은 본 기술 분야에 공지된 인자에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 모든 가능한 응용에 대해 치료적으로 유효한 SK 억제제의 양을 구성하는 양을 구체적으로 제시하는 것은 실용적이지 않다. 그러나, 당업자는 이러한 인자들을 고려하여 적절한 양을 용이하게 결정할 수 있다.
항-PD-1 항체
높은 친화도로 PD-1에 특이적으로 결합하는 인간 단일클론 항체는 미국 특허 제8,008,449호에 개시되어 있다. 다른 항-PD-1 단일클론 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제6,808,710호, 제7,488,802호, 제8,168,757호 및 제8,354,509호 및 국제 특허 공개 WO 2012/145493호에 기재되어 있다. 미국 특허 제8,008,449호에 개시된 항-PD-1 인간 단일클론 항체 각각은 하기 특성 중 하나 이상을 나타내는 것으로 입증되었다:(a) Biacore 바이오센서 시스템을 사용하는 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정될 때 1 x 10"7 M 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합함; (b) 인간 CD28, CTLA-4 또는 ICOS에 실질적으로 결합하지 않음; (c) 혼합 림프구 반응(MLR) 분석에서 T-세포 증식을 증가시킴; (d) MLR 분석에서 인터페론-γ 생성을 증가시킴; (e) MLR 분석에서 IL-2 분비를 증가시킴; (f) 인간 PD-1 및 사이노몰거스 원숭이 PD-1에 결합함; (g) PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 결합을 억제함; (h) 항원-특이적 기억 반응을 자극함; (i) 항체 반응을 자극함; (j) 생체내에서 종양 세포 성장을 억제함. 본 발명에서 사용가능한 항-PD-1 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하며, 전술한 특성 중 적어도 하나, 바람직하게는 적어도 5개를 나타내는 단일클론 항체를 포함한다. 바람직한 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 다른 바람직한 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다.
개시된 방법에서 사용가능한 항-PD-1 항체는 또한 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 인간 PD-1에 대한 결합에 대해 니볼루맙과 교차-경쟁하는 단리된 항체를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 제8,008,449호; WO 2013/173223호 참조). 항원에 대한 결합에 대해 교차-경쟁하는 항체의 능력은 이러한 항체가 항원의 동일한 에피토프 영역에 결합하고, 그 특정 에피토프 영역에 대한 다른 교차-경쟁 항체의 결합을 입체적으로 저해한다는 것을 나타낸다. 이러한 교차-경쟁 항체는 PD-1의 동일한 에피토프 영역에 대한 결합에 의해 니볼루맙과 매우 유사한 기능적 특성을 가질 것으로 예상된다. 교차 경쟁 항체는 Biacore 분석, ELISA 분석 또는 유세포 분석과 같은 표준 PD-1 결합 분석에서 니볼루맙과 교차-경쟁하는 이들의 능력을 기반으로 용이하게 확인될 수 있다(예를 들어, WO 2013/173223호 참조).
소정 실시 형태에서, 니볼루맙과 인간 PD-1에 대한 결합에 대해 교차 경쟁하거나, 이와 인간 PD-1의 동일한 에피토프 영역에 결합하는 항체는 단일클론 항체이다. 인간 대상에 투여하기 위해, 이러한 교차-경쟁 항체는 바람직하게는 키메라 항체, 또는 더욱 바람직하게는 인간화 또는 인간 항체이다. 이러한 키메라, 인간화 또는 인간 단일클론 항체는 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 제조되고 단리될 수 있다.
개시된 발명의 방법에서 사용가능한 항-PD-1 항체는 또한 상기 항체의 항원결합 부분을 포함한다. 항체의 항원 결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 충분히 입증되었다. 항체의 "항원 결합 부분"이라는 용어에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) L, H, CL및 Cm 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) V# 및 C 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 및 (iv) 항체의 단일 아암의 Vi 및 V# 도메인으로 이루어진 Fv 단편을 포함한다.
본 발명의 항-CTLA-4 항체는 인간 CTLA-4에 결합하여 CTLA-4와 인간 B7 수용체의 상호작용을 방해한다. CTLA-4와 B7의 상호작용은 CTLA-4 수용체를 보유하는 T-세포의 불활성화로 이어지는 신호를 전달하기 때문에, 상호작용의 방해는 이러한 T 세포의 활성화를 효과적으로 유도하거나, 향상시키거나 연장시킴으로써 면역 반응을 유도하거나, 향상시키거나 연장시킨다.
높은 친화도로 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 인간 단일클론 항체는 미국 특허 제6,984,720호 및 제 7,605,238호에 개시되어 있다. 다른 항-PD-1 단일클론 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제5,977,318호, 제6,051,227호, 제6,682,736호 및 제7,034, 121호에 기재되어 있다. 미국 특허 제6,984,720호 및 제7,605,238호에 개시된 항-PD-1 인간 단일클론 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 나타내는 것으로 입증되었다: (a) Biacore 분석에 의해 측정된 바와 같이 적어도 약 107 M'1 또는 약 109 M'1 또는 약 1010 M"1 내지 1011 M'1 또는 그 이상의 평형 결합 상수(Ka)에 의해 반영된 결합 친화도로 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합함; (b) 적어도 약 103, 약 104 또는 약 105 m'1 s'1의 결합 속도 상수(kinetic association constant, ka); (c) 약 103, 약 104 또는 약 105 m"1 s"1의 해리 속도 상수(kinetic disassociation constant, k^); 및 (d) CTLA-4가 B7-1(CD80) 및 B7-2(CD86)에 결합하는 것을 억제함. 본 발명에서 사용가능한 항-CTLA-4 항체는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하며, 전술한 특성 중 적어도 하나, 바람직하게는 적어도 3개를 나타내는 단일클론 항체를 포함한다.
개시된 방법에서 사용가능한 항-CTLA-4 항체는 또한 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 인간 CTLA-4에 대한 결합에 대해 이필리무맙 또는 트레멜리무맙과 교차-경쟁하거나, 이필리무맙 또는 트레멜리무맙과 인간 CTLA-4의 동일한 에피토프 영역에 결합하는 단리된 항체를 포함한다. 소정의 바람직한 실시 형태에서, 이필리무맙 또는 트레멜리무맙과 인간 CTLA-4에 대한 결합에 대해 교차-경쟁하거나, 이와 인간 PD-1의 동일한 에피토프 영역에 결합하는 항체는 인간 IgG1 동종형의 중쇄를 포함하는 항체이다. 인간 대상에 투여하기 위해, 이러한 교차-경쟁 항체는 바람직하게는 키메라 항체, 또는 더욱 바람직하게는 인간화 또는 인간 항체이다. 사용가능한 항-CTLA-4 항체는 또한 상기 항체의 항원-결합 부분, 예를 들어 Fab, F(ab')2, Fd 또는 Fv 단편을 포함한다.
일 특정 실시 형태에서, 본 발명은 세포독성 T-림프구 항원-4(CTLA-4)의 활성을 억제하는 특정 부류의 면역관문 억제제 약물의 사용을 포함한다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 항-CTLA4 길항제에는, 제한 없이, 항-CTLA4 항체, 인간 항-CTLA4 항체, 마우스 항-CTLA4 항체, 포유류 항-CTLA4 항체, 인간화 항-CTLA4 항체, 단일클론 항-CTLA4 항체, 다클론 항-CTLA4 항체, 키메라 항-CTLA4 항체, MDX-010(이필리무맙), 트레멜리무맙, 항-CD28 항체, 항-CTLA4 애드넥틴(adnectin), 항-CTLA4 도메인 항체, 단쇄 항-CTLA4 단편, 중쇄 항-CTLA4 단편, 경쇄 항-CTLA4 단편, 공동-자극 경로를 작용시키는 CTLA4의 억제제, 국제 특허 공개 WO2001/014424호에 개시된 항체, 국제 특허 공개 WO2004/035607호에 개시된 항체, 미국 특허 공개 제2005/0201994호에 개시된 항체 및 승인된 유럽 특허 EP1212422 B1호에 개시된 항체가 포함된다. 추가의 CTLA-4 항체는 미국 특허 제5,811,097호, 제5,855,887호, 제6,051,227호 및 제6,984,720호; 국제 특허 공개 WO01/14424호 및 WO00/37504호; 및 미국 특허 공개 제2002/0039581호 및 제2002/086014호에 개시되어 있다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 항-CTLA-4 항체에는, 예를 들어, WO98/42752; 미국 특허 제6,682,736호 및 제 6,207,156호; 문헌[Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17): 10067-10071 (1998)]; 문헌[Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145): Abstract No. 2505 (2004)](항체 CP-675206); 문헌[Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)] 및 미국 특허 제5,977,318호, 제6,682,736호 및 제7,109,003호 및 제7,132,281호에 개시되는 것들이 포함된다,
추가의 항-CTLA4 길항제에는 CD28 항원이 이의 동족 리간드에 결합하는 능력을 방해할 수 있고, CTLA4가 이의 동족 리간드에 결합하는 능력을 억제하고, 동시 자극 경로를 통해 T 세포 반응을 증강하고, B7이 CD28 및/또는 CTLA4에 결합하는 능력을 방해하고, B7이 동시 자극 경로를 활성화시키는 능력을 방해하고, CD80이 CD28 및/또는 CTLA4에 결합하는 능력을 방해하고, CD80이 동시 자극 경로를 활성화시키는 능력을 방해하고, CD86이 CD28 및/또는 CTLA4에 결합하는 능력을 방해하고, CD86이 동시 자극 경로를 활성화시키는 능력을 방해하고, 일반적으로 동시 자극 경로가 활성화되는 것을 방해하는 임의의 억제제가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 여기에는 동시 자극 경로의 다른 구성원 중에서도 CD28, CD80, CD86, CTLA4의 소분자 억제제; 동시 자극 경로의 다른 구성원 중에서도 CD28, CD80, CD86, CTLA4에 대한 항체; 동시 자극 경로의 다른 구성원 중에서도 CD28, CD80, CD86, CTLA4에 대한 안티센스 분자; 동시 자극 경로의 다른 구성원 중에서도 CD28, CD80, CD86, CTLA4에 대한 애드넥틴, 동시 자극 경로의 다른 구성원 중에서도 CD28, CD80, CD86, CTLA4의 RNAi 억제제(단일 가닥과 이중 가닥 모두), 그 중에서도 항-CTLA4 길항제가 반드시 포함된다.
본 발명의 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 면역관문 수용체 및 면역관문 수용체의 상응하는 리간드 사이의 신호전달 상호작용을 억제한다. 면역관문 억제제 화합물은 면역관문 수용체(수용체의 일부 예에는 CTLA-4, PD-1, LAG-3, TIM-3, BTLA 및 KIR이 포함됨)의 억제(길항작용) 또는 면역관문 수용체의 리간드(리간드의 일부 예에는 PD-L1 및 PD-L2이 포함됨)의 억제에 의해 면역관문 경로의 활성화를 차단함으로써 작용할 수 있다. 이러한 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물의 효과는 종양 미세환경에서 면역계 항종양 반응의 소정 측면의 하향 조절을 감소시키거나 제거하는 것이다.
면역관문 수용체 세포독성 T-림프구 관련 항원 4(CTLA-4)는 T-세포 상에서 발현되며, T-세포 활성화의 수준을 감소시키는 신호전달 경로에 관여한다. CTLA-4는 CD80 및 CD86의 경쟁적 결합 및 격리를 통해 T-세포 활성화를 하향 조절할 수 있는 것으로 여겨진다. 또한, CTLA-4는 T조절 세포의 면역억제 활성을 향상시키는 데 관여하는 것으로 나타났다.
본 발명의 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 작은 유기 분자(분자량이 1000 달톤 미만), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 항체 단편 또는 항체 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 항체이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 단일클론 항체, 특히 인간 또는 인간화 단일클론 항체이다.
면역관문 항체의 제조 및 사용 방법이 하기 예시적인 공보에 기재되어 있다. 항-CTLA-4 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 제7,229,628호(알리슨(Allison)), 미국 특허 제7,311,910호(린슬리(Linsley)) 및 미국 특허 제8,017,144호(코만(Korman))에 기재되어 있다. 항-PD-1 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 제8,008,449호(코만) 및 미국 특허 제8,552,154호(프리만(Freeman))에 기재되어 있다. 항-PD-L1 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 제7,943,743호(코만)에 기재되어 있다. 항-TIM-3 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 제8,101,176호(쿠크루(Kuchroo)) 및 미국 특허 제8,552,156호(타가야나기(Tagayanagi))에 기재되어 있다. 항-LAG-3 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 출원 공개 제2011/0150892호(추듐(Thudium)) 및 국제 특허 공개 WO2014/008218호(론버그(Lonberg))에 기재되어 있다. 항-KIR 항체의 제조 및 치료적 용도는 미국 특허 제8,119,775호(모레타(Moretta))에 기재되어 있다. BTLA 조절 억제 경로를 차단하는 항체(항-BTLA 항체)의 제조는 미국 특허 제8,563,694호(마타라자(Mataraza))에 기재되어 있다.
본 발명의 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 CTLA-4 수용체 억제제, PD-1 수용체 억제제, LAG-3 수용체 억제제, TIM-3 수용체 억제제, BTLA 수용체 억제제 또는 KIR 수용체 억제제이다. 일부 실시 형태에서, 면역관문 억제제 화합물은 PD-L1의 억제제 또는 PD-L2의 억제제이다.
면역관문 억제제의 임의의 적합한 일일 용량이 본 명세서에 개시된 조성물, 투여 형태 및 방법과 함께 사용하기 위해 고려된다. 면역관문 억제제의 일일 용량은 다수의 인자에 의존하며, 그 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 예를 들어, 면역관문 억제제의 일일 용량은 면역관문 억제제의 강도에 좌우된다. 약한 면역관문 억제제는 중등도 면역관문 억제제보다 더 많은 일일 용량을 필요로 할 것이며, 중등도 면역관문 억제제는 강한 면역관문 억제제보다 더 많은 일일 용량을 필요로 할 것이다. 예를 들어, Merck의 펨브롤리주맙(키트루다)은 3주마다 30분에 걸쳐 2 mg/㎏ iv로 승인되었다(50 mg의 동결건조된 분말). 니볼루맙(OPDVO)은 2주마다 60분에 걸쳐 3 mg/㎏ iv로 투여된다(주사 투여 형태: 단회 사용 바이알에서 100 mg/10 /ml 및 40 mg/4 ml). 이필리무맙(YERVOY)은 총 4회 용량으로 3주마다 90분에 걸쳐 3 mg/㎏의 iv로 투여된다(투여 형태: 50 mg/10 ml, 200 mg/40 ml).
경구 투여를 위한 고체 형태는 약제학적으로 허용가능한 결합제, 감미제, 붕해제, 희석제, 향미제, 코팅제, 보존제, 윤활제 및/또는 시간 지연제를 함유할 수 있다. 적합한 결합제에는 아카시아 검, 젤라틴, 옥수수 전분, 트래거캔스 검, 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 포함된다. 적합한 감미제에는 수크로스, 락토스, 글루코스, 아스파탐 또는 사카린이 포함된다. 적합한 붕해제에는 옥수수 전분, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 잔탄 검, 벤토나이트, 알긴산 또는 한천이 포함된다. 적합한 희석제에는 락토스, 소르비톨, 만니톨, 덱스트로스, 카올린, 셀룰로오스, 탄산칼슘, 규산칼슘 또는 인산이칼슘이 포함된다. 적합한 향미제에는 페퍼민트 오일, 윈터그린(wintergreen) 오일, 체리, 오렌지 또는 라즈베리 향이 포함된다. 적합한 코팅제에는 아크릴산 및/또는 메타크릴산 및/또는 이의 에스테르, 왁스, 지방 알코올, 제인, 셸락 또는 글루텐의 중합체 또는 공중합체가 포함된다. 적합한 보존제에는 벤조산나트륨, 비타민 E, 알파-토코페롤, 아스코르브산, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤 또는 중아황산나트륨이 포함된다. 적합한 윤활제에는 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 올레산나트륨, 염화나트륨 또는 활석이 포함된다. 적합한 시간 지연제에는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트가 포함된다.
본 발명의 조성물 및 방법은 대상에 투여시 필로바이러스 매개 질환을 치료하는 화합물(들)의 농도를 생성하는 화합물(들)의 제형(들)을 포함할 수 있다. 화합물(들)은 임의의 적합한 담체 물질에 임의의 적절한 양으로 함유될 수 있으며, 일반적으로 조성물의 총 중량의 1 내지 95 중량%의 양으로 존재한다. 조성물은 경구, 비경구(예를 들어, 정맥내 또는 근육내), 직장, 피부과적, 피부, 비강, 질, 흡입제, 피부(패치), 안구, 척수강내 또는 두개내 투여 경로에 적합한 투여 형태로 제공될 수 있다. 따라서, 조성물은, 예를 들어, 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 현탁액, 에멀젼, 용액, 하이드로겔을 포함하는 겔, 페이스트, 연고, 크림, 반창고(plaster), 물약(drench), 삼투성 전달 장치, 좌약, 관장제, 주입제, 임플란트, 스프레이 또는 에어로졸의 형태일 수 있다. 약제학적 조성물은 통상적인 약제학적 실시에 따라 제형화될 수 있다.
본 발명에 따른 또는 본 발명의 방법에 사용되는 약제학적 조성물은 투여 즉시 또는 투여 후 임의의 사전결정된 시간 또는 기간에 활성 화합물을 방출하도록 제형화될 수 있다. 후자의 유형의 조성물은 일반적으로 제어된 방출 제형으로서 알려져 있으며, 이는 (i) 연장된 기간에 걸쳐 체내에서 본 발명의 제제(들)의 실질적으로 일정한 농도를 생성하는 제형; (ii) 사전결정된 지연 시간 후에 연장된 기간에 걸쳐 체내에서 본 발명의 제제(들)의 실질적으로 일정한 농도를 생성하는 제형; (iii) 제제(들)의 혈장 수준의 변동과 관련된 바람직하지 않은 부작용의 최소화와 함께 체내의 제제(들)의 비교적 일정하고 유효한 수준을 유지함으로써 사전결정된 기간 동안 제제(들) 작용을 지속시키는 제형(톱니 운동학적 패턴(sawtooth kinetic pattern)); (iv) 제제(들)의 작용을 국소화하는, 예를 들어, 병든 조직 또는 기관에 인접하거나 이내의 제어된 방출 조성물을 공간적으로 배치하는 제형; (v) 예를 들어, 조성물을 매주 1회 또는 2주마다 1회 투여하는 것을 포함하는 투여의 편의를 달성하는 제형; 및 (vi) 조합물을 특정 표적 세포 유형으로 전달하기 위해 담체 또는 화학적 유도체를 사용함으로써 제제(들)의 작용을 표적으로 하는 제형을 포함한다.
방출 속도가 당해 화합물의 대사 속도를 능가하는 제어된 방출을 얻기 위해 임의의 다수의 전략이 추구될 수 있다. 일 예에서, 제어된 방출은, 예를 들어, 다양한 유형의 제어된 방출 조성물 및 코팅을 포함하여 다양한 제형 파라미터 및 성분의 적절한 선택에 의해 얻어진다. 따라서, 화합물(들)은 투여시 화합물(들)을 제어된 방식으로 방출하는 약제학적 조성물로 적절한 부형제와 함께 제형화된다. 예에는 단일 또는 다중 단위 정제 또는 캡슐 조성물, 오일 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로캡슐, 분자 복합체, 미소구체, 나노입자, 패치 및 리포솜이 포함된다.
화합물의 투여는 조합물의 모든 화합물에 대한 단일 제형 및 전달 방법으로 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 조합물은, 예를 들어, 전술한 제형 및 방법 중 임의의 것을 사용하여, 조합물의 각각의 화합물에 대한 별개의 제형 및/또는 전달 방법을 사용하여 투여될 수 있다. 일 예에서, 제1 제제는 경구 전달되고, 제2 제제는 정맥내 전달된다.
화합물 또는 화합물의 조합물의 투여량은 투여 방법, 치료될 질환의 유형, 감염의 중증도, 투여가 감염의 초기 또는 말기에 처음 발생하는지 여부, 및 치료될 환자의 연령, 체중 및 건강을 포함하는 여러 인자에 좌우된다. 본 명세서에서 확인된 제제의 상승 작용적 쌍을 포함하는 조합물의 경우, 항바이러스제에 대한 권장 투여량은 문헌[Physician's Desk Reference, 69th Edition (2015)]에 제공된 권장 투여량 이하일 수 있다.
상기에 기재된 바와 같이, 당해 화합물(들)은 정제, 캡슐, 엘릭시르 또는 시럽 형태로 경구 투여되거나, 좌약의 형태로 직장으로 투여될 수 있다. 화합물의 비경구 투여는, 예를 들어, 식염수 용액의 형태로 또는 리포솜에 혼입된 화합물(들)로 적절히 수행된다. 화합물 그 자체가 용해되기에 충분히 용해성이 아닌 경우에, 에탄올과 같은 가용화제가 적용될 수 있다. 화합물의 정확한 투여량은 바이러스 복제 분석에서 화합물의 효능 및 인간에서의 이의 독성을 조사함으로써 결정될 수 있다.
본 발명의 제제는 또한 바이러스 질환에 관련된 생물학적 경로에 대한 기계론적 정보를 설명하는 데 유용한 도구이다. 이러한 정보는 바이러스 질환을 치료, 예방 또는 감소시키기 위한 새로운 조합물 또는 단일 제제의 개발로 이어질 수 있다. 생물학적 경로를 결정하기 위해 당업계에 공지된 방법을 사용하여 바이러스에 감염된 세포(예를 들어, 1차 대식세포 세포)와 본 발명의 화합물을 접촉시킴으로써 영향을 받은 경로 또는 경로의 네트워크를 결정할 수 있다. 이러한 방법은, 비처리, 양성 또는 음성 대조군 화합물 및/또는 새로운 단일 제제 및 조합물과 비교하여 본 발명의 화합물과 접촉한 후에 발현되거나 억제되는 세포 성분을 분석하거나, 효소 활성, 영양소 흡수 및 증식과 같은 세포 또는 바이러스의 일부 다른 활성을 분석하는 단계를 포함할 수 있다. 분석되는 세포 성분에는 유전자 전사체 및 단백질 발현이 포함될 수 있다. 적합한 방법은 본 발명의 화합물을 방사성표지화(예를 들어, 14C 또는 3H 표지화)하고, 예를 들어, 2D 겔, 유전자 발현 프로파일링을 사용하여 단백질에 결합하는 화합물을 관찰하는 표준 생화학 기술을 포함할 수 있다. 일단 확인되면, 이러한 화합물은 생체내 모델(예를 들어, 녹아웃(knockout) 또는 형질전환(transgenic) 마우스)에서 사용되어, 바이러스 질환을 치료하기 위한 새로운 제제 또는 전략을 개발하거나 도구를 추가로 검증할 수 있다.
키트 및 패키지
용어 "키트" 및 "약제학적 키트"는 하나 이상의 적합한 용기, 하나 이상의 약제학적 조성물 및 이들의 사용 설명서를 포함하는 상업적 키트 또는 패키지를 지칭한다. 일 실시 형태에서, ABC294640 및 이의 투여에 대한 설명서를 포함하는 키트가 제공된다. 일 실시 형태에서, 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 1개 또는 2개, 또는 1개 내지 3개)의 추가의 치료제와 조합된 ABC294640 및 이들의 투여에 대한 설명서를 포함하는 키트가 제공된다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 면역관문 억제제는 단일 패키징 내에 포장되는 투여 단위로 제형화된다. 단일 패키징은 병, 어린이용 병(child-resistant bottle), 앰플 및 튜브를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 면역관문 억제제 및 선택적으로 추가의 치료제는 투여 단위로 제형화되고, 모든 단일 투여 단위는 개별적으로 단일 패키징에 포장된다. 이러한 개별 포장된 단위는 액체 형태, 고체 형태, 분말 형태, 과립 형태, 발포성 분말 또는 정제, 경질 또는 연질 캡슐, 에멀젼, 현탁액, 시럽, 좌약, 정제, 트로키, 로젠지, 용액, 구강 패치, 박막, 경구용 겔, 저작성 정제, 씹어먹는 검 및 일회용 주사기를 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 형태로 약제학적 조성물을 함유할 수 있다. 이러한 개별 포장된 단위는 종이, 카드보드, 판지, 금속 포일 및 플라스틱 포일, 예를 들어 블리스터 팩(blister pack) 중 하나 이상으로 제조된 패키지에서 조합될 수 있다. 하나 이상의 투여 단위가 하루에 1회 또는 복수회 투여될 수 있다. 하나 이상의 투여 단위가 하루에 3회 투여될 수 있다. 하나 이상의 투여 단위가 하루에 2회 투여될 수 있다. 하나 이상의 투여 단위가 첫째 날에 투여될 수 있고, 하나 이상의 투여 단위가 다음 날에 투여될 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더 잘 이해될 수 있다. 이러한 실시예는 본 발명의 특정 실시 형태를 나타내는 것으로 의도되며, 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1
3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 ABC294640의 합성 방법
예를 들어, ABC294640의 합성 절차는 반응 도식 1에 기재되어 있다. 염화알루미늄(AlCl3)의 존재 하에 아다만탄-1-카르복실산(1)을 직접 브롬화하여, 1의 3-브로마이드 유도체(2)를 얻고, 이는 프리델-크래프츠반응의 반응에 의해 (3)으로 전환되었다. 3을 티오닐 클로라이드(SOCl2)와 반응시켜 3-R-치환된-1-아다만탄카르보닐 클로라이드 4를 얻었다. THF 중 4를 치환된 아민, 예를 들어 4-아미노메틸피리딘(5)과 반응시켜, 6(ABC294640으로도 나타냄) 및 관련 아미드 화합물을 얻었다.
반응 도식 1
Figure pct00005
보다 구체적으로, 아다만탄-1-카르복실산(1)(45 g, 0.25 mol)을 0℃ 에서 AlCh(45 g, 0.34 mol)와 Bn(450 g)의 혼합물에 첨가하고, 0 내지 10℃ 에서 48시간 동안 교반하여, 약 20℃에서 5시간 동안 유지하고, 500 g의 분쇄된 얼음에 부어, 300 ml의 CHCl3로 희석하고, 고체 Na2S2O5로 탈색시켰다. 수상을 Et2O(50 ml x 2)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 H2O로 세정하고, 10% NaOH로 추출하였다. 알칼리성 추출물을 2N H2SO4로 산성화하여, 49 g(수율= 75.7%)의 3-브로모-아다만탄-1-카르복실산(2)을 얻었다.
30분의 기간에 걸쳐, -10℃에서 50 ml의 건조 클로로벤젠 중 3-브로모-아다만탄-1-카르복실산(2)(16.0 g, 61.7 mmol)을 100 ml의 건조 클로로벤젠 및 9.3 g, 70 mmol의 AlCl3에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 1시간 동안 실온으로 가온시킨 다음에, 10시간 동안 90℃로 가열하였다. 이어서, 혼합물을 200 g의 분쇄된 얼음 상에 붓고, 여과하여 14.2 g(수율=79.3%)의 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(3)을 얻었다.
3을 등몰량의 1,1'-카르보닐 다이이미다졸(CDI)과 반응시켜 중간체 3-R-치환된-1-아다만탄카르보닐 이미다졸(4)을 얻었다. 4와 치환된 아민의 반응에 의해, 상응하는 아다만틸아미드를 얻었다.
예를 들어, 톨루엔 중 3과 4-아미노메틸피리딘(5)의 반응에 의해, 92.6%의 수율 및 128 내지 130℃의 융점으로 {3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드}(6, 또한 ABC294640으로 나타냄)을 얻었다. 1HNMR(300 ㎒, CDCl3) δ 1.72-2.25(m, 12H, Admant-CH), 4.44-4.46 (d, J=6 ㎐, 2H, CH2-Py), 6.18 (m, 1H, HN), 7.13- 7.15 (d, J=6 ㎐, 2H, H-Py), 7.15-7.30 (m, 4H, H-Ph), 8.52-8.54 (d, J=6 ㎐, 2H, H-Py); 13C NMR(300 ㎒, CDCl3) δ 28.98, 35.73, 36.71, 38.77, 42.18, 42.37, 44.88, 122.38, 125.30, 126.57, 128.56, 129.26, 148.39, 150.20 177.76; MS m/z (상대 강도) 381.50 (MH+, 100), 383.41 (90), 384.35(80).
실시예 2
ABC294640의 제2 합성 방법 ABC294640 및 관련 아다만틸아미드의 제2 합성 방법은 반응 도식 2에 기재되어 있다. 3-페닐 치환된 중간체(3)를 상기에 기재된 바와 같이 제조하였다. 3을 1,1'-카르보닐다이이미다졸(CDI)과 반응시켜 3-R-치환된-1-아다만탄카르보닐이미다졸 중간체(4)를 얻었다. 톨루엔 중 4와 치환된 아민, 예를 들어, 4-아미노메틸피리딘 5의 반응에 의해, 6 {3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드}를 얻었다.
반응 도식 2
Figure pct00006
다양한 세트의 치환된 아릴아다만탄은 다양한 방향족 화합물과 2의 축합에 의해 효율적으로 합성될 수 있으며, 다양한 이러한 화합물은 시판된다. 추가적으로, 3의 아미드화는 다양한 커플링 시약 및 1차 아민-함유 화합물을 사용하여 효율적으로 완료될 수 있다. 하기 실시예는 이러한 절차의 여러 대표적인 생성물을 제공하지만, 이러한 방법은 본 발명의 대상으로 간주되는 다수의 구조적으로 관련된 아다만틸아미드를 생성하도록 조정될 수 있다. 이러한 방법의 완전한 개시 내용을 위해, 미국 특허 제7,338,961호는 그 안의 교시를 위해 본 명세서에 참고로 포함된다.
실시예 3
ABC294640은 종양 세포의 표면 상의 칼레티쿨린의 발현을 증가시킨다. 종양 세포가 면역원성 세포 사멸(ICD)을 진행하고 있다는 한 가지 지표는 세포의 표면 상의 칼레티쿨린의 발현 증가이다. 칼레티쿨린은 정상적으로 세포의 소포체(ER)에서 발현되지만; 세포가 ER 스트레스를 촉진하는 제제로 처리될 때, 칼레티쿨린 발현은 세포의 외부 표면에서 관찰될 수 있다. ER 스트레스의 촉진은 ICD를 유도하기 위한 전형적인 기작이므로, 칼레티쿨린의 표면 발현을 측정하는 것은 화합물이 ICD를 유발하는지를 결정하는 확립된 방법이다. 여러 다른 유형의 종양 세포에서 칼레티쿨린의 표면 발현에 대한 스핑고신 키나제-2의 억제제인 ABC294640의 효과를 조사하였다. 이러한 실험에서, 시험 종양 세포를 다양한 농도의 ABC294640과 인큐베이션하고, ABC294640의 첨가 4 내지 24시간 후에 세포를 채취하였다. 이어서, 세포를, 칼레티쿨린에 선택적으로 결합하는 형광 표지된 항체와 함께 인큐베이션하고, 세정한 다음, 유세포 분석으로 분석하여, 많은 개별 세포 상에서 표면 칼레티쿨린의 양을 정량화하였다. 유세포 분석에서 잘 알려진 알고리즘을 사용하여 세포 집단에 대한 형광 강도의 기하 평균을 결정함으로써 생성된 데이터를 분석한다. 표 1에 제공된 데이터는 종양 세포의 패널에서 칼레티쿨린의 표면 발현에 대한 ABC294640 처리의 효과를 요약한다. 각 세포 유형에 대해, 샘플을 24시간 동안 다이메틸설폭사이드(DMSO, ABC294640을 용해하는 데 사용된 용매) 또는 40 μM의 ABC294640으로 처리하였다. DMSO로 처리된 세포 샘플에 대한 형광 강도의 기하 평균을 1.0으로 표현하고, ABC294640으로 처리된 세포 샘플에 대한 데이터를 DMSO 대조군에 대해 표현하였다. 모든 경우에, ABC294640 처리는 1.46 내지 3.64 범위의 반응으로 칼레티쿨린의 표면 발현을 증가시켰다. 이 데이터는 대수 규모로 계산되므로 기하 평균 형광 2.0은 표면 칼레티쿨린 양이 10배 증가함을 나타냄에 유의하여야 한다. 요약하면, ABC294640 처리는 췌장, 전립선, 신경아세포종, 유방, 폐 및 흑색종 종양 세포에서 대략 3배 내지 >400배로 표면 칼레티쿨린 발현을 증가시켰다. 따라서, ABC294640은 광범위한 종양에서 ICD를 증가시켰다.
[표 1]
Figure pct00007
실시예 4
ABC294640이 B16 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 생체내 실증 ICD를 유도하는 ABC294640의 능력을 쥐과 흑색종 B16 세포(ATCC CRL-6322)가 시험관내에서 ABC294640으로 처리된 다음 면역 적격(C57BL/6) 마우스에 피하 이식된 상승 작용 마우스 모델을 사용하여 평가하였다. C57B1/6 마우스(6 내지 8주령, 수컷)를 Jackson Labs로부터 얻었고, 표준 조건 하에서 음식과 물을 자율 제공하였다. 임상 등급 ABC294640(배치CHP 110607)을 ChemPacific Corporation(메릴랜드주 볼티모어 소재)에 의해 GMP 계약 하에 제조하였고, 모든 연구에 사용하였다. B16 세포를 ATCC로부터 얻었고, 10% 소 태아 혈청을 포함하는 둘베코 수정 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에서 표준 조건 하에서 배양하였다. B16 세포를 24시간 동안 세포 사멸을 유발하는 것으로 알려진 ABC294640의 농도를 포함하는 배양물에서 처리하여 세포 사멸을 유도하였다 - 세포를 40 μM의 ABC294640으로 처리하였다. 이어서, 배양물을 트립신 처리하고 플레이트에서 세포를 긁어내어 ABC296460 처리된 세포를 채취하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에 현탁시켜, 0.1 ml의 총 부피로 왼쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다(500,000개의 죽어가는 세포). 대조군을 PBS 단독으로 왼쪽 뒷 옆구리에 주사하였다. 7일 후, 두 군(n=10/군)의 마우스의 오른쪽 뒷 옆구리에 100,000개의 비처리 B16 세포를 이식하였다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼로 주당 3회 측정하고, 종양 부피를 식 (L x W2)/2를 사용하여 계산하였다. 종양 부피가 ≥ 3,000 ㎣에 도달하면 마우스를 안락사하였다. 도 1은 PBS-전처리된 마우스(대조군) 또는 ABC294640 처리된 B16 세포로 전처리된 마우스(면역화됨)에 이식한 후 14일차에 B16 종양 크기에 대한 데이터를 나타낸다. 대조군 마우스의 종양은 14일차에 2344 ± 361 ㎣의 평균 크기에 도달하였다. 대조적으로, 면역화된 마우스로 주사된 세포는 14일차에 단지 641 ± 210 ㎣의 평균 크기에 도달하였다(p=0.0007). 이러한 데이터는 ABC294640을 사용한 B16 종양 세포의 처리가 후속적으로 시도된 마우스에서 종양 성장을 현저하게 감소시키는 ICD를 유발함을 입증한다.
실시예 5
ABC294640이 신경-2a 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 생체내 실증
실험의 두 번째 버전에서, ICD를 유도하는 ABC294640의 능력을 쥐과 신경-2a 신경아세포종 세포가 시험관내에서 ABC294640으로 처리된 다음 면역 적격(A/J) 마우스에 피하 이식된 상승 작용 마우스 모델을 사용하여 평가하였다. 마우스, ABC294640 및 종양 세포의 공급원은 실시예 4에 상술된 것과 동일하였다. 신경-2a 세포를 24시간 동안 세포 사멸을 유발하는 것으로 알려진 ABC294640의 농도를 포함하는 배양물에서 처리하여 세포 사멸을 유도하였다 - 세포를 40 μM의 ABC294640으로 처리하였다. 이어서, 배양물을 트립신 처리하고 플레이트에서 세포를 긁어내어 ABC296460 처리된 세포를 채취하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에 현탁시켜, 0.1 ml의 총 부피로 왼쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다(5,000,000개의 죽어가는 세포). 대조군을 PBS 단독으로 왼쪽 뒷 옆구리에 주사하였다. 7일 후, 두 군(n=4 내지 5/군)의 마우스의 오른쪽 뒷 옆구리에 1,000,000개의 비처리 신경-2a 세포를 이식하였다. 종양 성장을 측정하였고, 종양 부피를 실시예 1에 기재된 바와 같이 계산하였다. 도 2는 PBS-전처리된 마우스(대조군) 또는 ABC294640 처리된 신경-2a 세포로 전처리된 마우스(면역화됨)에 이식한 후 22일차에 신경-2a 종양 크기에 대한 데이터를 나타낸다. 대조군 마우스의 종양은 22일차에 1039 ± 450 ㎣의 평균 크기에 도달하였다. 현저하게 대조적으로, 면역화된 마우스로 주사된 세포는 22일차에 단지 15 ± 15 ㎣의 평균 크기에 도달하였다(p=0.085). 대조군의 모든 마우스는 종양을 가졌던 반면, 면역화된 군의 75%는 22일차에 측정가능한 종양을 갖지 않았다. 이러한 데이터는 ABC294640을 사용한 신경-2a 종양 세포의 처리가 후속적으로 시도된 마우스에서 종양 성장을 현저하게 감소시키는 ICD를 유발함을 입증한다.
실시예 6
ABC294640이 루이스 폐암종(LLC) 종양 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도한다는 생체내 실증
실험의 세 번째 버전에서, ICD를 유도하는 ABC294640의 능력을 쥐과 LLC 세포(ATCC CRL-1642)가 시험관내에서 ABC294640으로 처리된 다음 면역 적격(C57BL/6) 마우스에 피하 이식된 상승 작용 마우스 모델을 사용하여 평가하였다. 마우스, ABC294640 및 종양 세포의 공급원은 실시예 4에 상술된 것과 동일하였다. LLC 세포를 24시간 동안 40 μM의 ABC294640을 포함하는 배양물에서 처리하여 세포 사멸을 유도하였다. 이어서, 배양물을 트립신 처리하고 플레이트에서 세포를 긁어내어 ABC294640 처리된 세포를 채취하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에 현탁시켜, 0.1 ml의 총 부피로 왼쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다(5,000,000개의 죽어가는 세포). 대조군을 PBS 단독으로 왼쪽 뒷 옆구리에 주사하였다. 7일 후, 두 군(n=10/군)의 마우스의 오른쪽 뒷 옆구리에 1,000,000개의 비처리 LLC 세포를 이식하였다. 종양 성장을 측정하였고, 종양 부피를 실시예 1에 기재된 바와 같이 계산하였다. 도 3a 내지 도 3c는 PBS-전처리된 마우스(대조군) 또는 ABC294640 처리된 LLC 세포로 전처리된 마우스(면역화됨)에 이식한 후 15일, 17일 및 20일차에 LLC 종양 크기에 대한 데이터를 나타낸다. 대조군 마우스의 종양은 실험 과정에 걸쳐 점진적으로 증가하여, 15일, 17일 및 20일차에 각각 651 ± 114, 1190 ± 143 및 2263 ± 227 s㎣의 평균 크기에 도달하였다. 대조적으로, 면역화된 마우스로 주사된 세포는 15일, 17일 및 20일차에 각각 209 ± 18 (p=0.0012), 510 ± 94 (p=0.0009) 및 1220 ± 320 (p=0.016) ㎣의 평균 크기에 도달하였다. 이러한 데이터는 ABC294640을 사용한 LLC 종양 세포의 처리가 후속적으로 챌린지된(challenged) 마우스에서 종양 성장을 현저하게 감소시키는 ICD를 유발함을 입증한다.
실시예 7
ABC294640이 교차 면역을 유도한다는 생체내 실증
상기 실시예는, 시험관내에서 ABC294640을 사용하여 다수의 종양 세포주를 처리 다음, 처리된 세포를 정상 마우스에 투여하면 동일한 종양 세포의 후속적으로 투여된 비처리된 샘플의 성장을 억제한다는 것을 증명한다. 다음의 연구에서, ABC294640 처리된 종양 세포의 한 유형을 투여하면 동일한 유형의 종양 세포의 성장을 억제할 뿐만 아니라, 다른 유형의 종양 세포에 대한 "교차" 면역을 제공한다는 가설을 시험하였다. 마우스, ABC294640 및 종양 세포의 공급원은 이전 실시예에 상술된 것과 동일하였다. 별도로, B16 또는 LLC 세포를 24시간 동안 40 μM의 ABC294640을 포함하는 배양물에서 처리하여 세포 사멸을 유도하였다. 이어서, 배양물을 트립신 처리하고 플레이트에서 세포를 긁어내어 ABC294640 처리된 B16 또는 LLC 세포를 채취하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에 현탁시켜, 0.1 ml의 총 부피로 왼쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다(500,000개의 죽어가는 B16 및 5,000,000개의 죽어가는 LLC 세포). 대조군 마우스를 PBS 단독으로 왼쪽 뒷 옆구리에 주사하였다. 7일 후, 마우스를 하기에 요약된 바와 같이 4개의 군으로 무작위배정하였으며, 이는 종양 성장을 평가하기 위해 오른쪽 뒷 옆구리에 100,000개의 살아있는 B16 세포 또는 1,000,000개의 살아 있는 LLC 세포로 챌린지하였다. 따라서, "교차" 시험군은 ABC294640 처리된 폐 암종 세포로 면역화되고 비처리된 흑색종 세포로 챌린지된 마우스로 이루어진 그룹 3; 및 ABC294640 처리된 흑색종 세포로 면역화되고 비처리된 폐 암종 세포로 챌린지된 마우스로 이루어진 그룹 6이다.
Figure pct00008
종양 성장을 측정하였고, 종양 부피를 실시예 1에 기재된 바와 같이 계산하였다. 종양 부피가 ≥ 3,000 ㎣에 도달하면 마우스를 안락사하였다. 도 4는 PBS-전처리된 마우스(대조군), ABC294640 처리된 B16 세포로 전처리된 마우스 또는 ABC294640 처리된 LLC 세포로 전처리된 마우스에 이식한 후 19일차에 B16 종양 크기에 대한 데이터를 나타낸다. 대조군 마우스의 종양은 702 ± 144 ㎣의 평균 크기에 도달하였다. 대조적으로, B16 면역화된 마우스로 주사된 세포는 203 ± 15 ㎣(p=0.018)의 평균 크기에 도달한 반면, LLC 면역화된 마우스에 주사된 세포는 102 ± 51 ㎣(p=0.0009)의 평균 크기에 도달하였다. 따라서, ABC294640 처리된 흑색종 또는 폐 암종 세포에 의한 백신 접종은 비처리된 흑색종 세포의 후속적인 성장을 억제하였다. 도 5는 PBS-전처리된 마우스(대조군), ABC294640 처리된 B16 세포로 전처리된 마우스 또는 ABC294640 처리된 LLC 세포로 전처리된 마우스에 이식한 후 28일차에 LLC 종양 크기에 대한 데이터를 나타낸다. 대조군 마우스의 종양은 479 ± 113 ㎣의 평균 크기에 도달하였다. 대조적으로, B16 면역화된 마우스로 주사된 세포는 208 ± 74 ㎣(p=0.0003)의 평균 크기에 도달한 반면, LLC 면역화된 마우스에 주사된 세포는 177 ± 68 ㎣(p<0.001)의 평균 크기에 도달하였다. 따라서, ABC294640 처리된 흑색종 또는 폐 암종 세포에 의한 백신 접종은 비처리된 폐 암종 세포의 후속적인 성장을 억제하였다. 이러한 데이터는 ABC294640을 사용한 종양 세포의 시험관내 처리가 후속적으로 챌린지된 마우스에서 다수의 종양 유형에 대한 면역을 촉진한다는 것을 입증한다.
실시예 8
항-PD-1 항체와 병용한 ABC294640의 생체내 항종양 활성 ICD를 유도하는 제제는 면역관문 항체의 항종양 활성을 향상시킬 수 있다. 상기에 기재된 데이터가 ABC294640이 여러 유형의 암에서 ICD를 유도함을 명백하게 입증하기 때문에, ABC294640와 항-PD-1 항체로 종양-보유 마우스를 처리하는 병용 효과를 B16 종양 모델에서 조사하였다. 항-마우스 PD-1(카탈로그 번호 BE0146) 항체를 BioXCell(미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재)로부터 구매하였다. C57BL/6 마우스에 PBS에 현탁된 100,000개의 B16 세포를 실험 0일차에 오른쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다. 실험 3일차에 다음의 4개의 처리군(n=10/군)으로 마우스를 무작위배정하였다: 대조군(비히클 단독); ABC294640 단독; 항-PD-1 항체 단독; 및 항-PD-1 항체와 병용한 ABC294640. ABC294640을 비히클(46.7% PEG, 46.7% 식염수 및 6.6% 에탄올)에 현탁하고, 희생될 때까지 경구 위관 영양법으로 50 mg/㎏으로 주 5일(즉, 3-7, 10-14, 17-21일 등) 투여하였다. 항-PD-1 항체를 멸균 PBS에 현탁하고, 3일, 6일 및 10일차에 200 ㎍/마우스의 용량으로 복강내(i.p.) 주사에 의해 투여하였다. 병용 처리군 마우스는 항체가 예정된 날에 항체 및 ABC294640 처리를 동시에 받았다. 대조군 마우스는 처리된 마우스가 ABC294640 또는 항체를 받은 모든 날에 경구 비히클 및/또는 멸균 PBS i.p.를 받았다. 종양을 디지털 캘리퍼로 주당 3회 측정하고, 부피를 식 (L x W2)/2를 사용하여 계산하였다. 종양 부피가 ≥ 3,000 ㎣에 도달하면 마우스를 안락사하였다. 도 6은 이러한 실험에서 B16 종양의 성장을 보여준다. 대조군 마우스의 종양은 대략 10일의 지연 후에 매우 강하게 성장하였다. 19일차에, 대조군, ABC294640 단독, 항-PD-1 항체 단독 및 병용 처리군의 평균 종양 부피는 각각 1702 ± 373, 892 ± 364, 783 ± 265 및 190 ± 114 ㎣였다. ABC294640 단독 및 항-PD-1 항체 단독의 경우 종양 부피는 대조군과 유의하게 다르지 않았으나, ABC294640와 항-PD-1 처리군의 종양 부피는 대조군과 비교하여 매우 유의하게 감소되었다(p=0.0011). IACUC 프로토콜에 의해 지시된 바와 같이, 각 마우스는 이의 종양 부피가 3,000 ㎣에 도달하였을 때 희생되었다. 도 7은 이러한 실험에서 마우스의 생존 곡선을 나타낸다. 대조군의 마우스는 21일의 생존 중앙값을 가졌으며, 모든 동물은 29일차에 희생되었다. ABC294640 단독 처리는 24일의 생존 중앙값을 제공하였으며, 마우스의 30%가 실험이 종료된 56일차에 살아있었다(p=0.009). 유사하게, 항-PD-1 단독 처리는 생존 중앙값이 23일까지 향상되었고(p=0.033), 마우스의 20%가 56일차까지 생존하였다. ABC294640과 항-PD-1 항체의 병용은 생존 중앙값을 35일차로 현저하게 증가시켰고, 이들 마우스의 30%는 56일차까지 생존하였다(p<0.0001). 따라서, ABC294640과 PD-1 면역관문 항체를 병용하면 항종양 활성이 크게 개선되며, 두 제제 중 어느 하나만 사용하는 것보다 생존 기간을 증가시킨다.
실시예 9
항-CTLA4 항체와 병용한 ABC294640의 생체내 항종양 활성 ABC294640 및 항-CTLA41 항체로 종양 보유 마우스를 치료하는 병용 효과를 LLC 종양 모델에서 조사하였다. 항-마우스 CTLA-4(카탈로그 번호 BE0131) 항체를 BioXCell(미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재)로부터 구매하였다. 마우스에 PBS에 현탁된 1,000,000개의 LLC 세포를 실험 0일차에 오른쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다. 실험 3일차에 다음의 4개의 처리군(n=5/군)으로 마우스를 무작위배정하였다: 대조군(비히클 단독); ABC294640 단독; 항-CTLA4 항체 단독; 및 항-CTLA4 항체와 병용한 ABC294640. ABC294640을 비히클(46.7% PEG, 46.7% 식염수 및 6.6% 에탄올)에 현탁하고, 희생될 때까지 경구 위관 영양법으로 50 mg/㎏으로 주 5일(즉, 3-7, 10-14, 17-21일 등) 투여하였다. 항-CTLA4 항체를 희석 완충액(BioXCell, 카탈로그 번호 IP0070)에 현탁하고, 3일, 6일, 10일, 13일, 17일 및 20일차에 200 ㎍/마우스의 용량으로 복강내(i.p.) 주사에 의해 투여하였다. 병용 처리군 마우스는 항체가 예정된 날에 항체 및 ABC294640 처리를 동시에 받았다. 대조군 마우스는 처리된 마우스가 ABC294640 또는 항체를 받은 모든 날에 경구 비히클 및/또는 멸균 PBS i.p.를 받았다. 종양을 디지털 캘리퍼로 주당 3회 측정하고, 부피를 식 (L x W2)/2를 사용하여 계산하였다. 종양 부피가 ≥ 3,000 ㎣에 도달하면 마우스를 안락사하였다. 도 8은 이러한 실험에서 LLC 종양의 성장을 보여준다. 대조군 마우스의 종양은 대략 7일의 지연 후에 점진적으로 성장하였다. 21일차에, 대조군, ABC294640 단독, 항-CTLA4 항체 단독 및 병용 처리군의 평균 종양 부피는 각각 4622 ± 548, 3197 ± 914, 3029 ± 675 및 1274 ± 336 ㎣였다. ABC294640 단독 및 항-CTLA4 항체 단독의 경우 종양 부피는 대조군과 유의하게 다르지 않았으나, ABC294640와 항-CTLA4 처리군의 종양 부피는 대조군과 비교하여 매우 유의하게 감소되었다(p=0.0008). IACUC 프로토콜에 의해 지시된 바와 같이, 각 마우스는 이의 종양 부피가 3,000 ㎣에 도달하였을 때 희생되었다. 도 9는 이러한 실험에서 마우스의 생존 곡선을 나타낸다. 대조군의 마우스는 19일의 생존 중앙값을 가졌으며, 모든 동물은 21일차에 희생되었다. ABC294640 단독 처리는 22일의 생존 중앙값을 제공한 반면, 항-CTLA4 처리는 생존 중앙값에 영향을 주지 않았다. ABC294640과 항-CTLA4 항체의 병용은 생존 중앙값을 26일 초과로 증가시켰고, 이들 마우스의 60%는 26일차까지 생존하였다. 따라서, ABC294640과 CTLA4 면역관문 항체를 병용하면 항종양 활성이 유의하게 개선되며, 두 제제 중 어느 하나만 사용하는 것보다 생존 기간을 증가시킨다.
실시예 10
항-PD-L1 항체와 병용한 ABC294640의 생체내 항종양 활성
ABC294640 및 항-PD-L1 항체로 종양 보유 마우스를 치료하는 병용 효과를 B16 종양 모델에서 조사하였다. 항-마우스 PD-L1(카탈로그 번호 BE0101) 항체를 BioXCell(미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재)로부터 구매하였다. 마우스에 PBS에 현탁된 100,000개의 B16 세포를 실험 0일차에 오른쪽 뒷 옆구리에 피하 주사하였다. 종양 부피가 ≥ 300 ㎣에 도달하면, 다음의 4개의 처리군(n=5 내지 6/군)으로 마우스를 무작위배정하였다: 대조군(비히클 단독); ABC294640 단독; 항-PD-L1 항체 단독; 및 항-PD-L1 항체와 병용한 ABC294640. 무작위배정일을 각 마우스에 대한 실험의 1일로 기록한다. ABC294640을 비히클(46.7% PEG, 46.7% 식염수 및 6.6% 에탄올)에 현탁하고, 희생될 때까지 경구 위관 영양법으로 50 mg/㎏으로 주 5일 투여하였다. 항-PD-L1 항체를 희석 완충액(BioXCell, 카탈로그 번호 IP0070)에 현탁하고, 1일, 3일, 5일 및 7일차에 200 ㎍/마우스의 용량으로 복강내(i.p.) 주사에 의해 투여하였다. 병용 처리군 마우스는 항체가 예정된 날에 항체 및 ABC294640 처리를 동시에 받았다. 대조군 마우스는 처리된 마우스가 ABC294640 또는 항체를 받은 모든 날에 경구 비히클 및/또는 멸균 PBS i.p.를 받았다. 종양을 디지털 캘리퍼로 주당 3회 측정하고, 부피를 식 (L x W2)/2를 사용하여 계산하였다. 종양 부피가 ≥ 3,000 ㎣에 도달하면 마우스를 안락사하였다. 하기 표는 각 처리군의 생존 중앙값을 나타낸다.
Figure pct00009
대조군의 마우스는 8.5일의 생존 중앙값을 가졌으며, 모든 동물은 12일차에 희생되었다. ABC294640 단독 또는 항-PD-L1 단독 처리는 각각 10일 및 10.5일의 생존 중앙값을 제공하였다. ABC294640과 항-PD-L1 항체의 병용은 생존 중앙값을 16일까지 증가시켰다(대조군과 비교하여 p=0.0029). 따라서, ABC294640과 PD-L1 면역관문 항체를 병용하면 항종양 활성이 유의하게 개선되며, 두 제제 중 어느 하나만 사용하는 것보다 생존 기간을 증가시킨다.
스핑고신 키나제(SK)의 억제제의 유효량 및 면역관문 억제제의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제는 CTLA4(예를 들어, 이필리무맙)에 대해 유도되거나 PD-1(예를 들어, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙)에 대해 유도되거나 또는 PD-L1(예를 들어, 아테졸리주맙 또는 더발루맙)에 대해 유도되는 항체일 수 있다. 이들 경로를 표적화하는 다른 항체 또는 화학적 억제제가 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어, PD-L1 경로의 추가의 억제제는 BMS-936559, MPDL3280A, BMS-936558, MK-3475, CT-011 또는 MEDI4736을 포함한다.
일 실시 형태에서, 종양 세포는 암 환자의 혈액 또는 영향을 받은 조직으로부터 단리되어, 대략 24시간 동안 ABC294640으로 생체외에서 처리될 수 있다. 이어서, 처리된 세포는 환자의 혈류로 전달되어 암에 대한 면역 반응을 촉진할 수 있다.
일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 화학식 I로 표현되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이며:
[화학식 I]
Figure pct00010
상기 식에서, R1은 페닐, 4-클로로페닐 또는 4-플루오로페닐이고, R2는 4-피리딜, 독립적으로 (C1-C6)알킬, 할로겐, 할로알킬, -OC(O)(C1-C6 알킬), -C(O)O(C1-C6 알킬), -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR'C(O)R", -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 알콕시, 하이드록시알킬, -CN, -CO2H, -SH, -S-알킬, -SOR'R", -SO2R', -NO2 또는 NR'R"인 4개 이하의 기로 선택적으로 치환되며(R' 및 R"은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고, 치환기의 각각의 알킬 부분은 할로겐, CN, OH 및 NH2로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 선택적으로 추가로 치환됨); R4는 H 또는 알킬이고, n은 1 또는 2이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 다음과 같다:
Figure pct00011
일 실시 형태에서, 암을 치료하는 것은 종양의 크기를 감소시키거나 종양의 성장을 억제하는 것으로 추가로 정의된다. 일 실시 형태에서, 억제제는 대상에게 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 투여된다. 일 실시 형태에서, 대상에게 제2 암 요법이 추가로 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다. 일 실시 형태에서, 흑색종은 화학요법 또는 방사선 저항성 흑색종이다. 일 실시 형태에서, 유효량은 대상의 체중에 따라 적어도 약 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 또는 300 ㎍/㎏ 또는 mg/㎏을 포함한다.
생체외에서 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하는 단계를 포함하는 환자로부터 수집된 암 세포를 사용하여 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 제조하는 방법이 개시되어 있으며, 여기서 독성 농도는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분하다. 일 실시 형태에서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제인 화합물은 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 수집된 암 세포는 적어도 24시간 동안 치료된다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제의 독성 농도는 약 20 μM 내지 약 60 μM이다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이의 표면 상에서 칼레티쿨린을 과발현한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 면역 세포이다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배 이상(예를 들어, 약 3배 내지 약 400배 이상)으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 6배, 약 7배, 약 8배, 약 9배, 약 10배, 약 15배, 약 20배, 약 30배, 약 40배, 약 50배, 약 60배, 약 70배, 약 80배, 약 90배, 약 100배, 약 150배, 약 200배, 약 250배, 약 300배, 약 350배, 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배 내지 약 10배, 약 3배 내지 약 50배, 약 3배 내지 약 100배, 약 3배 내지 약 150배, 약 3배 내지 약 200배, 약 3배 내지 약 250배, 약 3배 내지 약 300배, 약 3배 내지 약 350배, 약 3배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 10배 내지 약 50배, 약 10배 내지 약 100배, 약 10배 내지 약 150배, 약 10배 내지 약 200배, 약 10배 내지 약 250배, 약 10배 내지 약 300배, 약 10배 내지 약 350배, 약 10배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 50배 내지 약 100배, 약 50배 내지 약 150배, 약 50배 내지 약 200배, 약 50배 내지 약 250배, 약 50배 내지 약 300배, 약 50배 내지 약 350배, 약 50배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 100배 내지 약 150배, 약 100배 내지 약 200배, 약 100배 내지 약 250배, 약 100배 내지 약 300배, 약 100배 내지 약 350배, 약 100배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 150배 내지 약 200배, 약 150배 내지 약 250배, 약 150배 내지 약 300배, 약 150배 내지 약 350배, 약 150배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 200배 내지 약 250배, 약 200배 내지 약 300배, 약 200배 내지 약 350배, 약 200배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 250배 내지 약 300배, 약 250배 내지 약 350배, 약 250배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 300배 내지 약 350배, 약 300배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 350배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일 실시 형태에서, 면역 세포는 T-세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 수지상 세포를 포함한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 혈액암 세포이다. 일 실시 형태에서, 혈액암 세포는 백혈병 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 고형 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 순환 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 채취하는 단계 및 세포를 인산염 완충 식염수에 현탁하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자의 치료 장소로 운송하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 환자의 치료 장소는 병원이다. 일 실시 형태에서, 환자의 치료 장소는 암센터이다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 운송된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자에게 투여하여 면역 반응을 유도하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암의 성장을 늦추거나 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암이 전이되는 것을 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자의 면역계를 암 세포를 사멸시키는 데 더 효율적으로 만든다. 일 실시 형태에서, 본 방법은 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 방법에 의해 얻어진 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 포함하는 암 치료제.
환자로부터 수집된 암 세포를 제공받는 단계; 및 생체외에서 수집된 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하여 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 제조하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포로서, 독성 농도는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분한, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포. 일 실시 형태에서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 수집된 암 세포는 적어도 24시간 동안 치료된다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제의 독성 농도는 약 20 μM 내지 약 60 μM이다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이의 표면 상에서 칼레티쿨린을 과발현한다. 일 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배 이상(예를 들어, 약 3배 내지 약 400배 이상)으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 6배, 약 7배, 약 8배, 약 9배, 약 10배, 약 15배, 약 20배, 약 30배, 약 40배, 약 50배, 약 60배, 약 70배, 약 80배, 약 90배, 약 100배, 약 150배, 약 200배, 약 250배, 약 300배, 약 350배, 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 3배 내지 약 10배, 약 3배 내지 약 50배, 약 3배 내지 약 100배, 약 3배 내지 약 150배, 약 3배 내지 약 200배, 약 3배 내지 약 250배, 약 3배 내지 약 300배, 약 3배 내지 약 350배, 약 3배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 10배 내지 약 50배, 약 10배 내지 약 100배, 약 10배 내지 약 150배, 약 10배 내지 약 200배, 약 10배 내지 약 250배, 약 10배 내지 약 300배, 약 10배 내지 약 350배, 약 10배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 50배 내지 약 100배, 약 50배 내지 약 150배, 약 50배 내지 약 200배, 약 50배 내지 약 250배, 약 50배 내지 약 300배, 약 50배 내지 약 350배, 약 50배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 100배 내지 약 150배, 약 100배 내지 약 200배, 약 100배 내지 약 250배, 약 100배 내지 약 300배, 약 100배 내지 약 350배, 약 100배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 150배 내지 약 200배, 약 150배 내지 약 250배, 약 150배 내지 약 300배, 약 150배 내지 약 350배, 약 150배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 200배 내지 약 250배, 약 200배 내지 약 300배, 약 200배 내지 약 350배, 약 200배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 250배 내지 약 300배, 약 250배 내지 약 350배, 약 250배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 300배 내지 약 350배, 약 300배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일부 실시 형태에서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이들의 표면에서 프라이밍되지 않은 암 세포보다 약 350배 내지 약 400배 또는 그 이상으로 칼레티쿨린을 발현한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 면역 세포이다. 일 실시 형태에서, 면역 세포는 T-세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 수지상 세포를 포함한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 혈액암 세포이다. 일 실시 형태에서, 혈액암 세포는 백혈병 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 고형 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 순환 종양 세포이다. 일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 상기에 기재된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 포함한다. 일 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량을 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 환자에서 면역 반응을 촉진하기 위한 약제학적 조성물의 제조에 있어서 상기에 기재된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 용도가 개시되어 있다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암의 성장을 늦추거나 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자에서 암이 전이되는 것을 막는다. 일 실시 형태에서, 면역 반응은 환자의 면역계를 암 세포를 사멸시키는 데 더 효율적으로 만든다.
서술 1: 환자로부터 수집된 암 세포를 면역학적으로 프라이밍하는 생체외 방법으로서, 상기 방법은 환자로부터 수집된 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하여 수집된 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하는 단계를 포함하는, 방법.
서술 2: 환자로부터 수집된, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 생성하는 생체외 방법으로서, 상기 방법은 환자로부터 수집된 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하여 수집된 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도함으로써 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
서술 3: 환자로부터 수집한 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기 위해 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 생체외 용도.
서술 4a: 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물이 스핑고신 키나제의 억제제인, 서술 1 또는 서술 2의 방법 또는 서술 3의 용도.
서술 4b: 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도가 약 20 μM 내지 약 60 μM인, 서술 1 또는 서술 2의 방법 또는 서술 3의 용도.
서술 5: 스핑고신 키나제의 억제제가 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제인, 서술 4a 또는 서술 4b의 방법 또는 용도.
서술 6: SK2의 선택적 억제제가 3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 서술 5의 방법 또는 용도.
서술 7: 수집된 암 세포가 적어도 24시간 동안 처리되는, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 6 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 6 중 어느 하나의 용도.
서술 8: 상기 암 세포는 면역 세포인, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 7 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 7 중 어느 하나의 용도.
서술 9: 면역 세포가 T-세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 수지상 세포인, 서술 8의 방법 또는 용도.
서술 10: 상기 암 세포는 혈액암 세포인, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 7 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 7 중 어느 하나의 용도.
서술 11: 상기 혈액암 세포가 백혈병 세포인, 서술 10의 방법 또는 용도.
서술 12: 상기 암 세포는 고형 종양 세포인, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 7 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 7 중 어느 하나의 용도.
서술 13: 상기 암 세포는 순환 종양 세포인, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 7 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 7 중 어느 하나의 용도.
서술 14: 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자의 치료 장소로 운송하는 단계를 추가로 포함하는, 서술 1, 서술 2 또는 서술 4a 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법 또는 서술 3 내지 서술 13 중 어느 하나의 용도.
서술 15: 운송된 프라이밍된 암 세포의 일부는 죽어가는 암 세포를 포함하는, 서술 14의 방법 또는 용도.
서술 16: 환자의 치료 장소가 병원인, 서술 14 또는 서술 15의 방법 또는 용도.
서술 17: 환자의 치료 장소가 암센터인, 서술 14 또는 서술 15의 방법 또는 용도.
서술 18: 의료에 사용하기 위해 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 19: 환자에서 암 세포에 대한 면역 반응을 촉진시키기 위한, 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 20: 환자에서 암의 성장을 늦추거나 막는 데 사용하기 위한, 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 21: 환자에서 암이 전이되는 것을 막는 데 사용하기 위한, 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 22: 환자의 면역계를 암 세포를 사멸시키는 데 더 효율적으로 만드는 데 사용하기 위한, 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 23: 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 서술 2 또는 서술 4 내지 서술 13 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
서술 24: 상기 방법은 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 서술 20에 따라 사용하기 위한 면역학적으로 프라이밍된 암 세포.
암 치료를 필요로 하는 대상에서 세포에 대한 면역원성 세포 사멸을 향상시키거나 유도함으로써 암을 치료하는 방법은 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 유효량을 대상에게 투여하는 단계 및 면역관문 경로의 억제제의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제이다. 일 실시 형태에서, 스핑고신 키나제의 억제제인 화합물은 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제이다. 일 실시 형태에서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 일 실시 형태에서, 면역원성 세포 사멸은 암 세포 표면의 칼레티쿨린의 증가된 발현을 포함한다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 흑색종 세포이다. 일 실시 형태에서, 암 세포는 폐암 세포이다. 일 실시 형태에서, 면역관문 경로의 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체 또는 이들의 조합이다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제 경로는 항-CTLA4 항체이다. 일 실시 형태에서, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체는 단일클론 항체이다.
일 실시 형태에서, 항-CTLA4 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일 실시 형태에서, 투여는 복수회 수행된다. 일 실시 형태에서, 대상에게 제2 암 요법이 추가로 투여된다. 일 실시 형태에서, 제2 암 요법에는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 독소 요법, 면역요법, 냉동요법 또는 유전자 요법이 포함된다.
키트는 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 적어도 하나의 면역관문 억제제; 및 사용 설명서를 포함한다. 일 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 CTLA-4 수용체 억제제, PD-1 수용체 억제제, PD-L1 리간드 억제제, PD-L2 리간드 억제제, LAG-3 수용체 억제제, TIM-3 수용체 억제제, BTLA 수용체 억제제, KIR 수용체 억제제, 또는 임의의 전술한 면역관문 억제제의 조합이다. 일 실시 형태에서, 면역관문 억제제는 항체 또는 항체 단편이다. 일 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 항-CTLA-4 수용체 항체, 항-PD-1 수용체 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, 또는 임의의 전술한 항체의 조합이다. 일 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 동결건조된 고체 형태이다. 일 실시 형태에서, 키트는 수성 재구성 용매를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 제1 약제학적으로 허용가능한 제형에 혼입되고, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 제2 약제학적으로 허용가능한 제형에 혼입된다.
본 명세서에 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

Claims (41)

  1. 생체외에서 암의 치료를 필요로 하는 환자로부터 수집된 암 세포를 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 독성 농도로 처리하여 면역학적으로 프라이밍된 암 세포를 제조하는 단계를 포함하는 방법으로서, 독성 농도는 암 세포에서 면역원성 세포 사멸을 유도하기에 충분한, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제인, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 암 세포는 적어도 24시간 동안 화합물로 처리되는, 방법.
  6. 제3항 또는 제4항에 있어서, SK2의 선택적 억제제의 독성 농도는 약 20 μM 내지 약 60 μM인, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 면역학적으로 프라이밍된 암 세포는 이의 표면 상에서 칼레티쿨린을 과발현하는, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 암 세포는 면역 세포인, 방법.
  9. 제1항에 있어서, 상기 암 세포는 혈액암 세포인, 방법.
  10. 제1항에 있어서, 상기 암 세포는 고형 종양 세포인, 방법.
  11. 제1항에 있어서, 상기 암 세포는 순환 종양 세포인, 방법.
  12. 제1항에 있어서,
    면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 채취하는 단계 및 세포를 인산염 완충 식염수에 현탁하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자의 치료 장소로 운송하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 환자의 치료 장소는 병원인, 방법.
  15. 제13항에 있어서, 환자의 치료 장소는 암센터인, 방법.
  16. 제13항에 있어서,
    운송된 면역학적으로 프라이밍된 암 세포의 적어도 일부를 환자에게 투여하여 면역 반응을 유도하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 면역 반응은 환자에서 암의 성장을 늦추거나 막는, 방법.
  18. 제16항에 있어서, 면역 반응은 환자에서 암이 전이되는 것을 막는, 방법.
  19. 제16항에 있어서, 면역 반응은 환자의 면역계를 암 세포를 사멸시키는 데 더 효율적으로 만드는, 방법.
  20. 제16항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  21. 암 치료를 필요로 하는 환자에서 암 세포에 대한 면역원성 세포 사멸을 향상시키거나 유도함으로써 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 방법은 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계; 및
    면역관문 경로의 억제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 스핑고지질 대사를 변형시키는 화합물은 스핑고신 키나제의 억제제인, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 스핑고신 키나제의 억제제는 스핑고신 키나제-2(SK2)의 선택적 억제제인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, SK2의 선택적 억제제는 3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 방법.
  25. 제21항에 있어서, 면역원성 세포 사멸은 암 세포 표면 상의 칼레티쿨린의 증가된 발현을 포함하는, 방법.
  26. 제21항에 있어서, 상기 암 세포는 면역관문 억제제로 통상적으로 처리되는 암으로부터의 세포인, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 암은 흑색종, 메르켈 세포 암종(Merkel cell carcinoma), 편평세포 암종, 식도, 폐, 소세포 폐, 비소세포 폐 신장의 편평세포 암종, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma), 두경부, 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종, 신장, 방광, 요로, 간, 결장직장, 자궁경부, 자궁 및 위암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  28. 제21항에 있어서, 면역관문 경로의 억제제는 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체 또는 이들의 조합인, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 항-PD-L1 항체 및 항-PD-1 항체는 단일클론 항체인, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체인, 방법.
  31. 제21항에 있어서, 면역관문 경로의 억제제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 단일클론 항체인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 단일클론 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체인, 방법.
  34. 제21항에 있어서, 투여는 충분한 시간에 걸쳐 복수회 수행되는, 방법.
  35. 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 적어도 하나의 면역관문 억제제; 및 사용 설명서를 포함하는 키트.
  36. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 CTLA-4 수용체 억제제, PD-1 수용체 억제제, PD-L1 리간드 억제제, PD-L2 리간드 억제제, LAG-3 수용체 억제제, TIM-3 수용체 억제제, BTLA 수용체 억제제, KIR 수용체 억제제, 또는 임의의 전술한 면역관문 억제제의 조합인, 키트.
  37. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 항체 또는 항체 단편인, 키트.
  38. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 항-CTLA-4 수용체 항체, 항-PD-1 수용체 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, 또는 임의의 전술한 항체의 조합인, 키트.
  39. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 동결건조된 고체 형태인, 키트.
  40. 제35항에 있어서, 수성 재구성 용매를 추가로 포함하는 키트.
  41. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 면역관문 억제제는 제1 약학적으로 허용가능한 제형 중에 혼입되고, 3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드는 제2 약제학적으로 허용가능한 제형에 혼입되는, 키트.
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