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KR20210113261A - 뉴클레아제 융합 단백질을 사용한 쇼그렌병의 치료 - Google Patents

뉴클레아제 융합 단백질을 사용한 쇼그렌병의 치료 Download PDF

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KR20210113261A
KR20210113261A KR1020217024264A KR20217024264A KR20210113261A KR 20210113261 A KR20210113261 A KR 20210113261A KR 1020217024264 A KR1020217024264 A KR 1020217024264A KR 20217024264 A KR20217024264 A KR 20217024264A KR 20210113261 A KR20210113261 A KR 20210113261A
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KR
South Korea
Prior art keywords
rnase
fusion protein
patient
treatment
inflammation
Prior art date
Application number
KR1020217024264A
Other languages
English (en)
Inventor
제임스 아서 포사다
대니얼 엠.디. 버지
Original Assignee
리졸브 테라퓨틱스, 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리졸브 테라퓨틱스, 엘엘씨 filed Critical 리졸브 테라퓨틱스, 엘엘씨
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Abstract

본 개시내용은 뉴클레아제 융합 단백질을 투여함으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 방법은 피로를 포함하여, 쇼그렌병과 연관된 증상을 치료하는데 유용하다.

Description

뉴클레아제 융합 단백질을 사용한 쇼그렌병의 치료
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 1월 4일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/788,730을 우선권 주장하며, 이 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
원발성 쇼그렌 증후군 (pSS)은 일반 인구의 0.5% 내지 1%가 앓고 있는 것으로 추정되는 자가면역 장애이며, 환자 10명 중 9명은 여성이다 (Ramos-Casals, 2005, Ann Rheum Dis. 64, 347-354; Skopouli, 2000, Semin. Arthritis Rheum. 29:296-304). pSS를 동반한 대부분의 여성은 피로, 관절 통증, 및 안구 및/또는 구강 건조증으로서 나타나는 경증 내지 중등도의 질환을 특징으로 한다. 이러한 질환은 침샘과 눈물샘의 림프구성 침윤, 및 이에 따른 이들 샘의 염증, 손상 및 기능 상실로 인한 안구 건조와 구강 건조를 특징으로 한다. 폐, 신장 및 간을 포함한 주요 기관계의 침범은 pSS의 흔한 전신 증상이다 (Malladi, 2012, Arthritis Care Res. 64:911-918). 생화학적 수준에서, pSS는 이뮤노글로불린 수준의 증가와 리보핵단백질 복합체 예컨대 SSA/Ro 및 SSB/La에 대항한 항-핵 항체의 생산과 연관이 있다 (Bave, 2005, Arth. & Rheum. 52:1185-1195; Hall 2015, Arth. & Rheum. 67, 2437-2446).
일단 형성되면, RNA-함유 면역 복합체는 면역 체계 세포, 예컨대 수지상 세포로 쉽게 내재화되며, 여기서 면역 복합체와 결합된 RNA는 톨-유사 수용체 (TLR), 예컨대 RNA 센서인 TLR7와 상호 작용할 수 있다. TLR은 병원체-연관 분자 구성요소를 인식함으로써 선천 면역 체계의 핵심 요소로서 작동하는 것으로 생각되지만, 이제는 숙주 핵산이 TLR7, TLR8 및 TLR9를 포함한 특이적 패밀리 구성원을 활성화할 수도 있다는 것이 명백해졌다 (Theofilopoulos, 2010, Nat. Rev. Rheum., 6:146-156). 이들 수용체를 발현하는 세포는 세포 표면에 분포하지 않고서도 그렇게 하며; 오히려 TLR 7/8/9는 엔도솜 내에 격리되어 있다 (Theofilopoulos, 2010, Nat. Rev. Rheum., 6:146-156). 이러한 위치 설정은 숙주 핵산과의 상호 작용을 최소화하기 위해 가정된다. 그러나, 면역 복합체 내에 존재할 때, 핵산 항원은 수용체 매개된 세포내 이입을 통해 세포 내로 적극적으로 내재화된다. 이펙터 Fc, 보체, 및 B-세포 수용체 모두는 핵산 함유 IC의 엔도솜으로의 진입을 촉진시킬 수 있다 (Means, 2005, J. Clin. Invest. 115:407-417; Lau, 2005, J. Exp. Med. 202:1171-1177; Brkic 2013, Ann. Rheum. Dis. 72(5):728-735). 일단 내재화되면, 핵산은 상주 엔도솜 TLR과 결합하고 이를 활성화하도록 위치 설정된다. 활성화된 TLR은 결국, pDC로부터의 유형 1 IFN 생산을 촉진시키고, PMN을 활성화하며, B-세포 증식 및 자가항체 생산을 촉진시킨다. 따라서, 핵산-함유 항원은 pSS 질환 병태생리학의 여러 측면에 기여한다.
피로는 쇼그렌 증후군의 가장 흔한 선외 증상 중 하나이며 전신 피곤함이 오래 지속되는 것으로서 정의된다. pSS 환자의 대략 70%가 심각한 피로를 겪고 있으며, 이는 삶의 질에 부정적인 영향을 미치는 것으로 보고되고 있다. 혈청학적으로, 이러한 환자의 대략 80%는 작은 비-코딩 RNA 분자를 함유하는 자가항원과 결합하는 항-Ro/SSA 자가항체를 가지고 있다. 피로는 강도, 지속 시간, 및 일상 기능에 미치는 영향의 관점에서 특징규명될 수 있다. 특히, 일차 진료 환경에서 피로는 우울증과 밀접한 연관이 있다 (Segal et al. Arthritis Rhem. 2008 December 15; 59(12): 1780-1778). 따라서, 자가면역 질환 예컨대 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 피로를 개선시키기 위한 수단이 필요하다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 쇼그렌 증후군의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 쇼그렌 증후군을 치료하는데 유용한, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질에 관한 것이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 피로를 치료, 저하 또는 개선시키는데 유용한, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질에 관한 것이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 인지 능력을 개선, 증강 또는 증가시키거나, 또는 인지 결손을 저하, 감소 또는 개선시키는데 유용한, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질에 관한 것이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 피로와 연관된 우울증을 포함한, 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서의 우울증을 저하, 감소 또는 개선시키는데 유용한, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질에 관한 것이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌 증후군을 치료 또는 예방하는 방법, 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 피로를 치료, 예방 또는 저하시키는 방법, 및 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 인지 능력을 개선시키는 방법에 유용한, RNase-Fc 융합 단백질 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 약 5-10 mg/kg, 약 2-8 mg/kg, 약 3-6 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 주사 (예를 들어, 정맥내 주사)에 의해 인간 환자에게 투여된다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RSLV-132이다. RSLV-132는 각각 서열식별번호(SEQ ID NO): 50으로서 제시된 아미노산 서열을 갖는 2개의 폴리펩티드의 동종이량체를 포함하는 뉴클레아제 융합 단백질이다. 이러한 동종이량체의 각각의 폴리펩티드는 RNase-Fc의 N-말단에서 C-말단까지 도 1에 나타낸 구성을 가지며, 여기서 야생형 인간 RNase 1 도메인 (서열식별번호: 2)은 3개의 힌지 영역 시스테인 잔기 중 하나에서 세린으로의 돌연변이 (잔기 220 또는 C220S; 본원에서 "SCC 힌지"로서 지칭되기도 함) 및 CH2 도메인에서의 2개의 돌연변이, 즉 P238S 및 P331S를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인의 N-말단에 링커를 사용하지 않고 작동가능하게 커플링된다. 이들 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 Fc 도메인의 서열이 서열식별번호: 22에 제시되어 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132를 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132를 환자에게 정맥내 주사에 의해 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132를 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 환자에서의 인지 효과는 ProF의 정신적 구성요소에 있어서 치료 전 ProF의 정신적 구성요소에 대비하여 적어도 1점만큼 개선된다. 일부 측면에서, 환자에서의 인지 효과는 ProF의 정신적 구성요소에 있어서 치료 전 ProF의 정신적 구성요소에 대비하여 1점 초과, 2점 초과, 또는 3점 초과만큼 개선된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 약 5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량이다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 제약상 허용되는 담체와의 조성물의 형태로 투여된다. 일부 측면에서, 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물은 정맥내 주사용으로 제형화된다 (예를 들어, 용액 중).
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 제약 조성물을 환자에게 투여하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것이며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물은 정맥내 주사용으로 제형화된다 (예를 들어, 용액 중).
본 개시내용의 방법의 전술한 또는 관련된 실시양태 중 임의의 것에서, 본원에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질은 인간 췌장 RNase 1을 포함한다. 일부 측면에서, 인간 췌장 RNase 1은 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 야생형 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 인간 IgG1 Fc 도메인은 인간 세포 상에서 Fcγ 수용체에 대한 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 옵소닌화, 식균작용, 보체 의존성 세포독성, 및 항체-의존성 세포성 세포독성으로 이루어진 군으로부터 임의로 선택된 저하된 이펙터 기능을 갖는다.
일부 측면에서, 인간 IgG1 Fc 도메인은 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 인간 IgG1 Fc 도메인은 3개의 힌지 영역 시스테인 잔기 중 하나 이상을 세린으로 치환하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, Fc 도메인은 EU 인덱스에 따른 넘버링으로 SCC 돌연변이 (잔기 220, 226, 및 229)를 포함한다. 일부 측면에서, 인간 IgG1 Fc 도메인은 서열식별번호: 22에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 전술한 또는 관련된 실시양태 중 임의의 것에서, 본원에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질은 EU 넘버링에 따른 C220S 돌연변이, P238S 돌연변이 및 P331S 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 커플링된 인간 췌장 RNase 1을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 전술한 또는 관련된 실시양태 중 임의의 것에서, 본원에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 전술한 또는 관련된 실시양태 중 임의의 것에서, 본원에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 정맥내 주사에 의해 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, 환자는 2주마다 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효 용량을 투여받는다.
일부 측면에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 약 10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 약 5 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 3개월 동안 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 3개월에 걸쳐 6회 격주 주입으로 환자에게 투여된다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위해 환자에게 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 2주마다의 1회 투여로 투여된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 적어도 3회 용량의 투약 레지멘을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 각각의 용량은 약 5-10 mg/kg, 약 2-8 mg/kg, 약 3-6 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 (예를 들어, 주사, 예를 들어, 정맥내 주사에 의함) 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 환자는 RNase-Fc 융합 단백질의 적어도 4회 용량을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 RNase-Fc 융합 단백질의 적어도 5회 용량을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 RNase-Fc 융합 단백질의 적어도 6회 용량을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 RNase-Fc 융합 단백질의 적어도 7회 용량을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 RNase-Fc 융합 단백질의 적어도 8회 용량을 투여받는다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 적어도 2주 동안 매주 한 번 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 소정의 용량의 투약 레지멘을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 각각의 용량은 약 5-10 mg/kg, 약 2-8 mg/kg, 약 3-6 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 (예를 들어, 주사, 예를 들어, 정맥내 주사에 의함) 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 3주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 4주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 5주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 6주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 7주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 8주 동안 매주 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다.
일부 측면에서, 환자는 적어도 2주 동안 2주마다 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 4주 동안 2주마다 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 6주 동안 2주마다 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 적어도 8주 동안 2주마다 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여받는다.
일부 측면에서, 환자는 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 적어도 1개월 동안 2주마다의 1회 투여로 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 적어도 2개월 동안 2주마다의 1회 투여로 투여받는다. 일부 측면에서, 환자는 소정의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 적어도 3개월 동안 2주마다의 1회 투여로 투여받는다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 환자에서 피로를 EULAR SS 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI) 점수에 있어서 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 치료는 환자에 의한 ESSPRI 점수를 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시킨다. 일부 측면에서, 피로는 1 내지 10의 ESSPRI 척도에서 4.5 내지 5.5의 점수로 환자에 의해 저하된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 환자에서 피로를 만성 질병 요법의 기능적 평가 (FACIT) 피로 척도에 있어서 치료 전 FACIT 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 개선시키는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 치료는 환자에서 피로를 FACIT 피로 척도에 있어서 적어도 2점만큼 개선시킨다. 일부 측면에서, 치료는 환자에 의한 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 증가시킨다. 일부 측면에서, 치료는 환자에 의한 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 2점만큼 증가시킨다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF) 점수에 있어서 치료 전 ProF 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 치료는 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 정신적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 ProF의 정신적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시킨다. 일부 측면에서, 치료는 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 신체적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 ProF의 신체적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시킨다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 기능을 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 환자에서 인지 기능을 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에 의해 치료 전 DSST 테스트 점수에 대비하여 측정된 바와 같이 개선시키는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 치료는 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에서 환자에 의해 90초 내에 완료된 매칭물의 수를 증가시킨다. 일부 측면에서, 치료는 환자가 DSST 테스트를 완료하기까지의 시간을 감소시킨다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 주사가능한 용액을 포함하는 용기; 및 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는데 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트로서, 여기서 주사가능한 용액은 정맥내 투여용으로 제형화되는 것인 키트를 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 치료는 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 치료는 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 정맥내 주사에 의해 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 사용은 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 정맥내 주사에 의해 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 치료는 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 사용은 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 치료는 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 사용은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 치료는 유효량의 제약 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, RSLV-132, 또는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 사용은 유효량의 제약 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것인 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B를 포함한 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B를 포함한 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 용도를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 용도를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2를 포함한 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 용도를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서 본 개시내용은 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제를 제공한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10이다.
일부 측면에서 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 용도를 제공한다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제를 제공한다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, (a) 환자로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 결정된 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 상기 환자가 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 MAP3K8, ACKR3, STAT1, STAT2, TRIM37, 및 ZNF606을 포함한 군으로부터 선택된다.
본 특허 또는 출원 파일은 컬러로 실행된 적어도 하나의 도면을 함유한다. 컬러 도면(들)을 수반한 본 특허 또는 특허 출원 공개의 사본은 요청 및 필요한 비용을 지불하면 특허청에 의해 제공될 것이다.
본 발명의 이들 및 다른 특징, 측면 및 이점은 하기 설명 및 첨부 도면과 관련하여 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 2개의 폴리펩티드를 포함하는 동종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질인 RSLV-132의 구성을 도시한다. 이러한 동종이량체의 각각의 폴리펩티드는 RNase-Fc 구성을 가지며, 여기서 야생형 인간 RNase 1 도메인은 SCC 힌지 및 CH2 돌연변이 P238S 및 P331S를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인의 N-말단에 링커를 사용하지 않고 작동가능하게 커플링된다.
도 2는 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 pSS 환자에서 ESSPRI 점수에서의 개선을 그래프로 도시한다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 pSS 환자에서 평가되었다. ESSPRI 점수가 적어도 1점 감소하는 것이 임상적으로 의미가 있다.
도 3은 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ESSPRI 점수에서의 개선을 그래프로 도시한다. 기준선으로부터의 시간 경과에 따른 ESSPRI 점수에서의 변화가 y-축 위에 제공된다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. ESSPRI 점수가 적어도 1점 감소하는 것이 임상적으로 의미가 있다.
도 4는 RSLV-132 및 위약 군에 대한 ESSPRI의 피로 구성요소에서 기준선으로부터의 평균 변화를 그래프로 도시한다 (p=0.136). 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ESSPRI의 피로 구성요소 점수에서의 개선이 제시된다. 기준선으로부터 시간 경과에 따른 ESSPRI의 피로 구성요소 점수에서의 변화가 y-축 위에 제공된다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. 결과는 각각의 방문에 대해 별도의 일원 분산 분석 (ANOVA) 모델을 사용하여 분석되었으며, 각각은 치료 군 간의 실제 평균 차이가 0이라는 귀무 가설 (H0)을 테스트하였다. 조정되지 않은 알파 = 0.05. 모든 표준 오차 막대는 제99일 표준 오차를 사용한다.
도 5a는 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ESSPRI의 피로 구성요소 점수에서의 개선을 그래프로 도시한다. ESSPRI의 피로 구성요소 점수는 y-축 위에 제공된다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선) 및 제99일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다.
도 5b는 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ESSPRI의 통증 구성요소 점수를 그래프로 도시한다. ESSPRI의 통증 구성요소 점수는 y-축 위에 제공된다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선) 및 제99일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다.
도 5c는 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ESSPRI의 건조증 구성요소 점수를 그래프로 도시한다. ESSPRI의 건조증 구성요소 점수는 y-축 위에 제공된다. ESSPRI 점수는 연구 제1일 (기준선) 및 제99일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다.
도 6은 RSLV-132 및 위약 군에 대한 FACIT에서의 기준선으로부터의 평균 변화를 그래프로 도시한다 (p=0.92). 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 FACIT 피로 점수에서의 개선이 제시된다. FACIT 피로 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. FACIT 피로 점수에서의 증가는 피로에서의 개선을 나타낸다. 결과는 각각의 방문에 대해 별도의 일원 분산 분석 (ANOVA) 모델을 사용하여 분석되었으며, 각각은 치료 군 간의 실제 평균 차이가 0이라는 귀무 가설 (H0)을 테스트하였다. 조정되지 않은 알파 = 0.05. 모든 표준 오차 막대는 제99일 표준 오차를 사용한다.
도 7은 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ProF에서의 개선을 그래프로 도시한다. 기준선으로부터의 시간 경과에 따른 ProF 점수에서의 변화가 y-축 위에 제공된다. ProF 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. ProF 점수에서의 저하는 피로에서의 개선을 나타낸다.
도 8은 RSLV-132 및 위약 군에 대한 ProF의 정신적 피로 구성요소에서의 평균 변화를 그래프로 도시한다 (p=0.046). 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ProF의 정신적 구성요소에서의 개선이 제시된다. 기준선으로부터 시간 경과에 따른 ProF의 정신적 구성요소 점수에서의 변화가 y-축 위에 제공된다. ProF의 정신적 구성요소 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. ProF 점수에서의 저하는 피로에서의 개선을 나타낸다. 결과는 각각의 방문에 대해 별도의 일원 분산 분석 (ANOVA) 모델을 사용하여 분석되었으며, 각각은 치료 군 간의 실제 평균 차이가 0이라는 귀무 가설 (H0)을 테스트하였다. 조정되지 않은 알파 = 0.05. 모든 표준 오차 막대는 제99일 표준 오차를 사용한다.
도 9는 위약으로 치료받은 환자와 비교 시 RSLV-132로 치료받은 환자에서 ProF의 신체적 구성요소에서의 개선을 그래프로 도시한다. 기준선으로부터 시간 경과에 따른 ProF의 신체적 구성요소 점수에서의 변화가 y-축 위에 제공된다. ProF의 신체적 구성요소 점수는 연구 제1일 (기준선), 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일/치료 종료일에 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 평가되었다. ProF 점수에서의 저하는 피로에서의 개선을 나타낸다.
도 10a 및 10b는 RSLV-132 및 위약으로 치료받은 환자에서 숫자 부호 치환 테스트 (DSST)의 결과를 제공한다. DSST 테스트는 기준선 (제1일) 및 연구 제99일에 환자에게 투여되었다. 도 10a에 도시된 바와 같이, "총 90s"는 90초 동안 숫자와 매칭되는 총 부호의 수를 지칭한다. "완료"는 테스트를 완료하기까지의 시간 (초)을 지칭한다. 초기 기준선 테스트 (제1일)로부터 추적 (제99일)까지, RSLV-132로 치료받은 환자에서는 DSST 테스트를 완료하기까지의 시간에서의 통계적으로 유의미한 개선이 관찰되었다. 도 10b는 위약에 대한 완료 시간에서의 증가 및 RSLV-132로 치료받은 환자에 대한 완료 시간에서의 감소를 그래프로 도시한 것이다.
도 11은 임상 반응을 달성했거나 달성하지 못한 RSLV-132 대상체에 대해 제1일 (기준선)과 비교하여 제99일에 유전자 발현에서의 변화를 도시한다. 히트 맵에 표시된 유전자는 FACIT 기구 결과와 높은 정도의 상관관계가 있는 유전자이다 (R2 > 0.6).
도 12a-c는 후속적으로 제99일에 MCII를 경험한, RSLV-132로 치료받은 대상체의 기준선 (연구 약물 투여 전) 유전자 발현 패턴을 그렇지 않은 대상체와 비교하여 도시한다. 주어진 기구와 가장 높은 상관관계가 있는 유전자가 제시된다. 도 12a는 FACIT와 상관관계가 있는 유전자를 도시한다 (R2 > 0.6). 도 12b는 ProF와 상관관계가 있는 유전자를 도시한다 (R2 > 0.6). 도 12c는 ESSPRI와 상관관계가 있는 유전자를 도시한다 (R2 > 0.6).
본 개시내용은 순환 RNA, 및 자가항체 및 면역 복합체와 복합체를 형성한 RNA를 소화시킴으로써 원발성 쇼그렌 증후군 (pSS)을 가진 환자를 치료하는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질을 제공한다. 본 개시내용은 또한 상승된 수준의 순환 RNA 및/또는 RNA-함유 자가항체를 특징으로 하는 질환, 예컨대 쇼그렌 증후군을 치료하는 방법, 및 상승된 수준의 순환 RNA 및 RNA-함유 자가항체를 특징으로 하는 질환의 증상, 예컨대 쇼그렌 증후군 연관된 피로를 상기 질환의 증상의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질을 쇼그렌 증후군의 치료를 필요로 하는 pSS를 가진 환자를 포함한 쇼그렌 증후군을 가진 인간 환자에게 투여하기 위한 유효한 치료 및 투약 레지멘을 제공한다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RSLV-132의 투여에 의해 pSS를 가진 환자를 치료하는 것이 환자에서 pSS와 연관된 피로를 저하시킨다는 놀라운 발견에 근거한 것이다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 순환 RNA, 및 자가면역 질환을 가진 환자에서 자가항체 및 면역 복합체와 복합체를 형성한 RNA를 소화시킴으로써 자가면역 질환의 증상, 예컨대 쇼그렌 증후군 연관 피로를 저하시킬 수 있다고 여겨진다.
또한 이론에 얽매이는 것은 아니지만, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RSLV-132의 투여에 의해 쇼그렌 증후군을 가진 환자를 치료하는 것이, 자가항체와 연합되든 아니면 순환 시 자유로운지에 상관없이 순환 RNA를 저하킴으로써, TLR의 활성화 및 몇 가지 하류 염증 경로의 활성화를 저하시키는 것으로 여겨진다. 따라서, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RSLV-132의 투여에 의해 pSS 환자를 포함한 쇼그렌 증후군을 가진 환자를 치료하는 것이 염증-유발성 캐스케이드의 활성화를 저하, 감소 또는 억제하고, 그에 의해 환자에서 쇼그렌 증후군의 전반적인 염증 특징을 저하 또는 감소시킴으로써, 피로, 통증, 건조증, 우울증 및/또는 인지 장애를 포함한 쇼그렌 증후군과 연관된 증상을 저하 또는 감소시킬 수 있다.
예기치 못하게도, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RSLV-132의 투여에 의한, pSS 환자의 치료가, 치료 후 지속적으로 피로에서의 개선을 보여준 3가지 별도의 테스트에 의해 환자에서의 피로의 개선을 초래한 것으로 밝혀졌다. 특히, RSLV-132로 치료한 후 pSS 환자에게 EULAR 쇼그렌 증후군 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI)를 시행했을 때, 환자는 ESSPRI의 피로 구성요소 점수에 있어서 1점 이상의 ESSPRI 점수 상의 임상적으로 의미있는 감소를 경험하였다. ESSPRI 점수에서의 감소는 개선된 피로와 연관이 있다. RSLV-132로 치료한 후 이들 환자에게 만성 질병 테스트의 기능적 평가 (FACIT)를 시행하면 FACIT 피로 점수에서의 증가가 초래되었으며, 이는 저하된 피로와 연관이 있다. 마찬가지로, RSLV-132로 치료한 후 피로의 프로파일 (ProF) 테스트를 시행하면, ProF 점수에서의 감소가 초래되었으며, 이는 저하된 피로와 연관이 있다.
더욱이, 놀랍게도 RLSV-132로 pSS 환자를 치료한 후 환자가 숫자 부호 치환 테스트 (DSST)에 의해 측정된 바와 같이 개선된 인지 능력을 입증하였다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 본 개시내용은 쇼그렌 증후군을 치료하는 방법, 쇼그렌 증후군 연관 피로를 저하시키는 방법, 및 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 인지 능력을 개선시키는 방법에 유용한, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질을 제공한다. 본 개시내용은 또한 쇼그렌 증후군을 치료하는 방법, 쇼그렌 증후군 연관 피로를 저하시키는 방법, 및 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서 인지 능력을 개선시키는 방법에 유용한 RNase-Fc 융합 단백질 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RSLV-132이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 약 5-10 mg/kg, 약 2-8 mg/kg, 약 3-6 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 인간 환자에게 투여된다.
더욱이, RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 원발성 쇼그렌 증후군 (pSS)을 가진 환자를 치료한 후, 임상 반응을 달성한 환자는 염증-관련 유전자의 발현이 감소한 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 임상 반응을 경험한, RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 환자에서는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B의 발현이 저하되었다. RSLV-132로 치료한 후, 임상 반응을 달성한 환자는 염증-관련 유전자의 발현이 증가하는 것으로 또한 밝혀졌다. 예를 들어, 임상 반응을 경험한, RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 환자에서는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2의 발현이 증가하였다.
후속적으로 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)에 대한 긍정적인 임상 반응을 나타낸 자가면역 질환 (예를 들어, 원발성 쇼그렌 증후군 (pSS))을 가진 환자에서는, RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)의 투여 전에 뚜렷한 유전자 발현 프로파일이 있다는 것이 추가로 밝혀졌다. 예를 들어, 기준선 유전자 발현이 FACIT, ProF 또는 ESSPRI와 상관관계가 있을 때, RSLV-132 반응자 간의 특이적 프로파일이 밝혀졌다. STAT1 및 STAT2의 발현에서의 감소는 FACIT 테스트와 상관이 있었고, ZNF606의 발현에서의 증가 및 TRIM37의 발현에서의 감소는 ProF 테스트와 상관이 있었으며, ACKR3의 발현에서의 증가 및 MAPK3K8의 발현에서의 감소는 ESSPRI 테스트와 상관이 있었다.
이론에 얽매이는 것은 아니지만, 이들 환자에서 염증 경로의 만성 활성화를 촉진시키고 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)에 의한 특이적 순환, 비-코딩 RNA의 제거 뿐만 아니라 일반적으로 자가면역 질환 (예를 들어, pSS)을 가진 환자의 치료에 기여하는 염증-유발성 RNA의 제거를 촉진시키는 일부 환자의 순환에 특이적 RNA 분자가 있을 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, "유전자 발현 지문"을 사용하여, RNA 뉴클레아제 작용제, 예컨대 RSLV-132를 사용한 치료로부터 가장 많은 혜택을 받을 수 있는 환자를 확인하는 것이 가능할 수 있다.
정의
청구 범위 및 명세서에 사용된 용어는 달리 명시되지 않는 한 하기에 제시된 바와 같이 정의된다.
"아미노산"은 자연적으로 발생하는 및 합성 아미노산 뿐만 아니라 자연적으로 발생하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방 체를 지칭한다. 자연적으로 발생하는 아미노산은 유전 코드에 의해 코딩된 아미노산 뿐만 아니라 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연적으로 발생하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소와 결합되는 탄소, 카르복실기, 아미노기 및 R 기를 갖는 화합물, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기 (예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 백본을 갖지만, 자연적으로 발생하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와는 상이한 구조를 갖지만, 자연적으로 발생하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학 화합물을 지칭한다.
아미노산은 통상적으로 공지된 3 문자 부호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 권장하는 1-문자 부호로서 본원에 지칭될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오티드는 통상적으로 허용되는 단일 문자 코드로서 지칭될 수 있다.
"아미노산 치환"은 미리 결정된 아미노산 서열 (출발 폴리펩티드의 아미노산 서열)에서 적어도 하나의 기존 아미노산 잔기를 상이한 제2 "대체" 아미노산 잔기로 대체하는 것을 지칭한다. "아미노산 삽입"은 적어도 하나의 부가의 아미노산을 미리 결정된 아미노산 서열 내로 혼입시키는 것을 지칭한다. 삽입은 통상적으로 1개 또는 2개의 아미노산 잔기의 삽입으로 이루어질 것이지만, 더 큰 "펩티드 삽입", 예를 들어, 약 3개 내지 약 5개 또는 심지어 최대 약 10개, 15개 또는 20개의 아미노산 잔기의 삽입이 만들어질 수 있다. 삽입된 잔기(들)는 자연적으로 발생하거나 또는 상기 개시된 바와 같이 비-자연적으로 발생할 수 있다. "아미노산 결실"은 미리 결정된 아미노산 서열로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기의 제거를 지칭한다.
"폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 이러한 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연적으로 발생하는 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체 뿐만 아니라 자연적으로 발생하는 아미노산 중합체 및 비-자연적으로 발생하는 아미노산 중합체에도 적용된다.
"핵산"은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 그의 중합체를 지칭한다. 구체적으로 제한되지 않는 한, 상기 용어는 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는 자연 뉴클레오티드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포괄한다. 달리 표시되지 않는 한, 특정한 핵산 서열은 또한 그의 보존적으로 변형된 변이체 (예를 들어, 축퇴성 코돈 치환) 및 상보적 서열 뿐만 아니라 명시적으로 표시된 서열을 암시적으로 포괄한다. 구체적으로, 축퇴성 코돈 치환은 하나 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 세 번째 위치가 혼합 염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다 (Batzer et al., Nucleic Acid Res 1991;19:5081; Ohtsuka et al., JBC 1985;260:2605-8); Rossolini et al., Mol Cell Probes 1994;8:91-8). 아르기닌과 류신의 경우, 두 번째 염기에서의 변형이 또한 보존적일 수 있다. 용어 핵산은 유전자, cDNA, 및 유전자에 의해 코딩된 mRNA와 상호 교환적으로 사용된다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드로 구성될 수 있으며, 이는 변형되지 않은 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 단일 및 이중 가닥 DNA, 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일 및 이중 가닥 RNA, 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일 가닥 또는 보다 전형적으로 이중 가닥이거나 또는 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자로 구성될 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드는 RNA 또는 DNA를 포함하거나 또는 RNA와 DNA 둘 다를 포함하는 삼중 가닥 영역으로 구성될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 안정성 또는 다른 이유로 변형된 하나 이상의 변형된 염기 또는 DNA 또는 RNA 백본을 함유할 수 있다. "변형된" 염기는, 예를 들어, 트리틸화된 염기 및 특이한 염기 예컨대 이노신을 포함한다. DNA와 RNA에 대한 다양한 변형이 만들어질 수 있으며; 따라서 "폴리뉴클레오티드"는 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "작동가능하게 연결된" 또는 "작동가능하게 커플링된"은 기재된 구성요소가 그의 의도된 방식으로 기능하도록 허용하는 관계에 있는 병렬을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "글리코실화" 또는 "글리코실화된"은 분자에 당 모이어티를 부가하는 프로세스 또는 그의 결과를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "변경된 글리코실화"는 비글리코실화된, 탈글리코실화된 또는 저글리코실화된 분자를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "글리코실화 부위(들)"는 탄수화물 모이어티를 잠재적으로 수용할 수 있는 두 부위 뿐만 아니라 탄수화물 모이어티가 실제로 부착된 단백질 내의 부위를 지칭하며, 올리고사카라이드 및/또는 탄수화물에 대한 수용자로서 작용할 수 있는 임의의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "비글리코실화" 또는 "비글리코실화된"은 (예를 들어, 글리코실화의 수용자로서 제공되는 아미노산 잔기가 결여되도록 단백질 또는 폴리펩티드를 조작함으로써) 비글리코실화된 형태의 분자의 생산을 지칭한다. 대안적으로, 단백질 또는 폴리펩티드는, 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli)에서 발현되어 비글리코실화된 단백질 또는 폴리펩티드를 생산할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "탈글리코실화" 또는 "탈글리코실화된"은 분자 상의 당 모이어티를 효소적으로 제거하는 프로세스 또는 그의 결과를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "저글리코실화" 또는 "저글리코실화된"은 포유동물 세포에서 생산되는 경우 정상적으로 존재할 하나 이상의 탄수화물 구조가 생략, 제거, 변형 또는 차폐된 분자를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "Fc 영역" 및 "Fc 도메인"은 항원과 결합하는 가변 영역이 없는 그의 2개의 중쇄의 각각의 Fc 도메인 (또는 Fc 모이어티)에 의해 형성된 천연 이뮤노글로불린의 일부분이다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 파파인 절단 부위 바로 상류의 힌지 영역에서 시작하여 항체의 C-말단에서 끝난다. 따라서, 완전한 Fc 도메인은 적어도 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 힌지 (예를 들어, 상부, 중간 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, CH4 도메인, 또는 그의 변이체, 일부분, 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 완전한 Fc 도메인 (즉, 힌지 도메인, CH2 도메인, 및 CH3 도메인)을 포함한다. 한 실시양태에서, Fc 도메인은 CH3 도메인 (또는 그의 일부분)과 융합된 힌지 도메인 (또는 그의 일부분)을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 CH3 도메인 (또는 그의 일부분)과 융합된 CH2 도메인 (또는 그의 일부분)을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 CH3 도메인 또는 이의 일부분으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 힌지 도메인 (또는 그의 일부분) 및 CH3 도메인 (또는 그의 일부분)으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 CH2 도메인 (또는 그의 일부분) 및 CH3 도메인으로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 힌지 도메인 (또는 그의 일부분) 및 CH2 도메인 (또는 그의 일부분)으로 이루어진다. 한 실시양태에서, Fc 도메인에는 CH2 도메인의 적어도 일부분 (예를 들어, CH2 도메인의 전부 또는 일부)가 결여된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 Fc 도메인은 FcRn 결합에 필요한 것으로 관련 기술분야에 공지된 Fc 분자의 적어도 일부분을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 Fc 도메인은 단백질 A 결합에 필요한 것으로 관련 기술분야에 공지된 Fc 분자의 적어도 일부분을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 Fc 도메인은 단백질 G 결합에 필요한 것으로 관련 기술분야에 공지된 Fc 분자의 적어도 일부분을 포함한다. 본원에서의 Fc 도메인은 일반적으로 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이는 전체 CH1, 힌지, CH2, 및/또는 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 예를 들어 힌지, CH2 및 CH3 도메인만을 포함하는 이러한 펩티드의 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgE, 또는 IgM 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 종 및/또는 임의의 하위유형의 이뮤노글로불린으로부터 유래될 수 있다. Fc 도메인은 천연 Fc 및 Fc 변이체 분자를 포괄한다. Fc 변이체 및 천연 Fc와 마찬가지로, 용어 Fc 도메인은 전체 항체로부터 소화되거나 또는 다른 수단에 의해 생성되는지의 여부에 관계없이 단량체성 또는 다량체성 형태의 분자를 포함한다.
본원에 제시된 바와 같이, 임의의 Fc 도메인이 자연적으로 발생하는 이뮤노글로불린 분자의 천연 Fc 도메인으로부터의 아미노산 서열이 변하도록 변형될 수 있음을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이해할 것이다.
본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인은 상이한 이뮤노글로불린 분자로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, RNase-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인은 IgG1 분자로부터 유래된 CH2 및/또는 CH3 도메인 및 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, Fc 도메인은 부분적으로 IgG1 분자로부터 유래되고 부분적으로 IgG3 분자로부터 유래된 키메라 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, Fc 도메인은 부분적으로 IgG1 분자로부터 유래되고 부분적으로 IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다. 야생형 인간 IgG1 Fc 도메인은 서열식별번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "혈청 반감기"는 생체내 혈청 RNase-Fc 융합 단백질 농도가 50%만큼 감소하는데 필요한 시간을 지칭한다. RNase-Fc 융합 단백질의 혈청 반감기가 더 짧을수록, 치료 효과를 발휘해야 하는 시간이 더 짧아진다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "RNA 뉴클레아제 작용제"는 RNase 도메인을 포함하는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, RNA 뉴클레아제 작용제는 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, RNA 뉴클레아제 작용제는 RNase-Fc 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, RNA 뉴클레아제 작용제의 RNase 도메인은 인간 췌장 RNase 1이다. 일부 실시양태에서, RNA 뉴클레아제 작용제는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RNA 뉴클레아제 작용제는 RSLV-132이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질"은 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서, PK 모이어티 (약동학적 모이어티), 예컨대 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편에 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 뉴클레아제 도메인을 포함하는 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 지칭한다. 일부 실시양태에서, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서, Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편에 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 뉴클레아제 도메인을 포함하는 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 지칭하는 "RNase-Fc 융합 단백질"이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서, Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편에 작동가능하게 연결된 적어도 2개의 뉴클레아제 도메인을 포함하는 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산이다. 일부 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 인간 RNase 1이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 하나 이상의 RNase 도메인 및 하나 이상의 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 하나 이상의 RNase-도메인, 하나 이상의 Fc 도메인, 및 하나 이상의 DNase 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 작동가능하게 연결된 RNase 1 도메인 및 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 작동가능하게 연결된 DNase 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 탠덤 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, 하나 이상의 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단 중 하나에 탠덤으로 연결된 하나 이상의 RNase 1 도메인 및/또는 하나 이상의 DNase 도메인이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 동종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질 (2개의 동일한 폴리펩티드)이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질 (2개의 상이한 폴리펩티드)이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 도메인은 링커 도메인을 사용하여 작동가능하게 연결된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 도메인은 링커 도메인을 사용하지 않고 작동가능하게 연결된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "탠덤 RNase-Fc 융합 단백질"은 (N-말단에서 C-말단까지) 탠덤으로 연결된 적어도 2개의 뉴클레아제 도메인 및 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 탠덤 RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 Fc 도메인에 탠덤으로 작동가능하게 연결된 적어도 2개의 RNase 1 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 탠덤 RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 Fc 도메인에 탠덤으로 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 DNase1 도메인 및 적어도 하나의 RNase1 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 탠덤 RNase-Fc 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단까지 DNase1 도메인, 제1 링커, RNase1 도메인, 제2 링커, 및 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질"은 적어도 2개의 뉴클레아제 도메인 및 2개의 Fc 도메인, 그의 변이체 또는 단편을 함께 포함하는 제1 및 제2 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 이종이량체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 이종이량체는 제1 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제1 RNase 1 도메인, 및 제2 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제2 RNase 1 도메인을 포함하여, 이러한 제1 RNase 1 도메인과 제2 RNase 1 도메인이 이종이량체의 동일한 말단 (N- 또는 C-말단)에 위치하도록 한다. 일부 실시양태에서, 이종이량체는 제1 Fc 도메인의 N-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제1 RNase 1 도메인, 및 제2 Fc 도메인의 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제2 RNase 1 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 RNase1 도메인은 제1 Fc 도메인의 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결되고, 제2 RNase1 도메인은 제2 Fc 도메인의 N-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된다. 일부 실시양태에서, 이종이량체의 제1 및 제2 RNase 1 도메인은 상이하다. 일부 실시양태에서, 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 Fc 도메인에 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 DNase1 도메인 및 적어도 하나의 RNase1 도메인을 포함하는 이종이량체이며, 여기서 DNase 1 도메인은 제1 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결되고, RNase1 도메인은 동일한 (제1 Fc 도메인) 또는 상이한 Fc 도메인 (제2 Fc 도메인)의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결되어, DNase 1 도메인과 RNase 1 도메인이 동일한 (제1 Fc 도메인) 또는 상이한 Fc 도메인 (제2 Fc 도메인) 중 하나의 반대 말단 (N- 또는 C-말단) 상에 위치하도록 한다. 일부 실시양태에서, 이종이량체는 DNase를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "동종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질"은 동일한 뉴클레아제 도메인 중 적어도 2개 및 2개의 Fc 도메인, 그의 변이체 또는 단편을 함께 포함하는 제1 및 제2 폴리펩티드, 및 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 동종이량체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 동종이량체는 제1 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제1 RNase 1 도메인, 및 제2 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 제2 RNase 1 도메인을 포함하여, 이러한 제1 RNase 1 도메인과 제2 RNase 1 도메인이 동종이량체의 동일한 말단 (N- 또는 C-말단)에 위치하도록 한다. 일부 실시양태에서, 동종이량체의 제1 및 제2 RNase 1 도메인은 동일하다. 일부 실시양태에서, 동종이량체는 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 RNase 1 도메인, 및 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 연결된 DNase 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase 1 도메인과 DNase 도메인은 Fc 도메인의 동일한 말단 (N- 또는 C-말단)에 위치한다. 일부 실시양태에서, RNase 1 도메인과 DNase 도메인은 Fc 도메인의 반대 말단 상에 위치한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "이량체"는 2개의 거대 분자 (예를 들어, 폴리펩티드)에 의해 형성된 거대 분자 복합체를 지칭한다. "동종이량체"는 2개의 동일한 거대 분자 (예를 들어, 폴리펩티드)에 의해 형성되는 이량체를 지칭한다. "이종이량체"는 2개의 상이한 거대 분자 (예를 들어, 폴리펩티드)에 의해 형성되는 이량체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "변이체"는 야생형 뉴클레아제 (예를 들어, RNase) 또는 Fc 도메인으로부터 유래된 폴리펩티드를 지칭하고, 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 변경(들), 즉 치환, 삽입 및/또는 결실만큼 야생형과 상이하다. 치환은 특정 위치를 차지하고 있는 아미노산을 상이한 아미노산으로 대체하는 것을 의미한다. 결실은 특정 위치를 차지하고 있는 아미노산의 제거를 의미한다. 삽입은 특정 위치를 차지하고 있는 아미노산 바로 옆에 1개 이상, 예컨대 1개 내지 3개의 아미노산을 부가하는 것을 의미한다. 변이체 폴리펩티드는 반드시, 야생형 폴리펩티드와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는, 예를 들어, 변이체 폴리펩티드의 길이 전체에 걸쳐, 야생형 폴리펩티드의 아미노산 서열과 약 75% 내지 100% 미만, 또는 약 80% 내지 100% 미만, 또는 약 85% 내지 100% 미만, 또는 약 90% 내지 100% 미만 (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%o, 99%) 또는 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성의 아미노산 서열을 가질 것이다.
특정 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 하나 이상의 "링커 도메인", 예컨대 폴리펩티드 링커를 이용한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "링커 도메인"은 선형 폴리펩티드 서열에서 2개 이상의 펩티드 도메인을 연결하는 하나 이상의 아미노산을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리펩티드 링커"는 단백질의 선형 아미노산 서열에서 2개 이상의 폴리펩티드 도메인을 연결하는 펩티드 또는 폴리펩티드 서열 (예를 들어, 합성 펩티드 또는 폴리펩티드 서열)을 지칭한다. 예를 들어, 폴리펩티드 링커는 뉴클레아제 도메인 (예를 들어, RNase)을 Fc 도메인에 작동가능하게 연결하는데 사용될 수 있다. 이러한 폴리펩티드 링커는 일부 실시양태에서 폴리펩티드 분자에 유연성을 제공한다. 일부 실시양태에서 폴리펩티드 링커는 RNase 도메인을 Fc 도메인에 연결 (예를 들어, 유전적으로 융합)하기 위해 사용된다. RNase-Fc 융합 단백질은 1개 초과의 링커 도메인 또는 펩티드 링커를 포함할 수 있다. 다양한 펩티드 링커가 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "gly-ser 폴리펩티드 링커"는 글리신 및 세린 잔기로 이루어진 펩티드를 지칭한다. 예시적인 gly/ser 폴리펩티드 링커는 아미노산 서열 (Gly4Ser)n을 포함한다. 일부 실시양태에서, n은 1 이상, 예컨대 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상 또는 10 이상 (예를 들어, (Gly4Ser)10)이다. 또 다른 예시적인 gly/ser 폴리펩티드 링커는 아미노산 서열 Ser(Gly4Ser)n을 포함한다. 일부 실시양태에서, n은 1 이상, 예컨대 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상 또는 10 이상 (예를 들어, Ser(Gly4Ser)10)이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "커플링된", "접합된", "연결된", "융합된" 또는 "융합"은 상호 교환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 포함한 모든 수단에 의해, 2가지 이상의 요소 또는 구성요소 또는 도메인을 함께 연결하는 것을 지칭한다. 화학적 접합 방법 (예를 들어, 이종이작용성 가교 결합제를 사용함)이 관련 기술분야에 공지되어 있다.
지정된 폴리펩티드 또는 단백질로부터 "유래된" 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 폴리펩티드의 기원을 지칭한다. 바람직하게, 특정한 서열로부터 유래되는 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 그 서열 또는 그의 일부분과 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지며, 여기서 그 일부분은 적어도 10-20개의 아미노산, 바람직하게 적어도 20-30개의 아미노산, 보다 바람직하게 적어도 30-50개의 아미노산으로 이루어지거나, 또는 상기 아미노산 서열은 서열에 있어서 그의 기원을 갖는 것으로서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 달리 확인가능한 아미노산 서열을 갖는다. 또 다른 폴리펩티드로부터 유래된 폴리펩티드는 출발 폴리펩티드에 대비하여 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어, 또 다른 아미노산 잔기로 치환되었거나 또는 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입 또는 결실을 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다.
한 실시양태에서, 출발 폴리펩티드 서열과 그로부터 유래된 서열 간에는 하나의 아미노산 차이가 있다. 이러한 서열에 대한 동일성 또는 유사성은 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입한 후 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위한, 출발 아미노산 잔기와 동일한 (즉, 동일한 잔기) 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 및 그의 기능적으로 활성인 변이체로 이루어지거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 이를 포함한다. 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 예컨대 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 연속 아미노산 서열과 적어도 80%, 예컨대 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 연속 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 아미노산 서열의 적어도 10개, 예컨대 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 35개, 적어도 40개, 적어도 45개, 적어도 50개, 적어도 55개, 적어도 60개, 적어도 65개, 적어도 70개, 적어도 75개, 적어도 80개, 적어도 85개, 적어도 90개, 적어도 95개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 또는 적어도 500개 (또는 이들 숫자 내의 임의의 정수)의 연속 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다. 본 개시내용의 뉴클레오티드 서열은 클로닝, 유전자 요법, 단백질 발현 및 정제, 돌연변이 도입, 이를 필요로 하는 숙주의 DNA 백신 접종, 예를 들어 수동 면역화를 위한 항체 생성, PCR, 프라이머 및 프로브 생성, siRNA 설계 및 생성 (예를 들어, 다르마콘(Dharmacon) siDesign 웹사이트 참조) 등를 포함한 다수의 적용에 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 뉴클레오티드 서열은 서열 표 또는 서열 목록으로부터 선택된 RNase-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 서열은 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 예컨대 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 서열은 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 아미노산 서열을 코딩하는 연속 뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 예컨대 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 연속 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 서열은 본원에 개시된 서열 목록 또는 서열 표에 제시된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 적어도 10개, 예컨대 적어도 15개, 예컨대 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 35개, 적어도 40개, 적어도 45개, 적어도 50개, 적어도 55개, 적어도 60개, 적어도 65개, 적어도 70개, 적어도 75개, 적어도 80개, 적어도 85개, 적어도 90개, 적어도 95개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 또는 적어도 500개 (또는 이들 숫자 이내의 임의의 정수)의 연속 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또한, RNase-Fc 융합 단백질은 천연 서열의 바람직한 활성을 유지하면서도, 그의 구성요소 (예를 들어, 뉴클레아제 도메인, 링커 도메인, 및 Fc 도메인)가 유래되는 자연적으로 발생하는 서열 또는 천연 서열과 서열 면에서 서로 다르도록 변경될 수 있다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이해할 것이다. 예를 들어, "비-필수" 아미노산 잔기에서의 보존적 치환 또는 변화로 이어지는 뉴클레오티드 또는 아미노산 치환이 만들어질 수 있다. 비-자연 변이체를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실이 코딩된 단백질 내로 도입되도록, RNase-Fc 융합 단백질의 뉴클레오티드 서열 내로 하나 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가 또는 결실을 도입함으로써 생성될 수 있다. 돌연변이는 표준 기술, 예컨대 부위 지정 돌연변이 유발 및 PCR 매개된 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있다.
RNase-Fc 융합 단백질은 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어, 필수 또는 비-필수 아미노산 잔기에서의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 관련 기술분야에서 규정되었다. 따라서, RNase-Fc 융합 단백질에서의 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게 동일한 측쇄 패밀리로부터의 또 다른 아미노산 잔기로 대체된다. 또 다른 실시양태에서, 특정 스트링의 아미노산은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성에 있어서 상이한 구조적으로 유사한 스트링으로 대체될 수 있다. 대안적으로, 또 다른 실시양태에서, 돌연변이는 예컨대 포화 돌연변이 유발에 의해 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 그 결과로 생긴 돌연변이체는 RNase-Fc 융합 단백질 내로 혼입될 수 있고 원하는 표적과 결합할 수 있는 능력에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "선천 면역 체계의 조절인자"는 시토카인 및 케모카인 발현 및 분비; 수지상 세포 활성화; 및 보체 캐스케이드를 포함한 선천 면역 반응의 발현 또는 조절과 연관된 임의의 유전자, 단백질, 핵산 또는 마이크로RNA를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 선천 면역 체계의 조절인자는 염증-관련 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 선천 면역 체계의 조절인자는 염증-관련 유전자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 선천 면역 체계의 조절인자는 염증-관련 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, 선천 면역 체계의 조절인자는 신호 변환, 인터페론 패밀리 구성원, 보체, 항원 프로세싱, 신호 변환, 유비퀴틴화, 화학 주성, 세포 접착, 및 폴리머라제 활성과 연관되거나 또는 그의 조절과 연관된 유전자 또는 단백질을 포함한다.
용어 "선천 면역 체계"는 항원에 대한 비특이적 방어 메커니즘을 지칭한다. 선천 면역 반응은 특정한 항원에 대한 특이성에 의해 구동되지 않지만, 항원의 존재에 의해 구동된다. 선천 면역 체계의 기능은 감염체에 대한 물리적 및 화학적 장벽으로서 작용하는 것, 백혈구에 의한 외래 물질의 확인 및 제거, 수지상 세포 활성화, 시토카인 및 케모카인 분비, 및 보체 캐스케이드의 활성화, 및 적응 면역 체계의 활성화를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "염증-관련 분자"는 염증 또는 염증 반응에서 기능하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-유발성 분자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 항염증 분자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 유전자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 단백질이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 시토카인이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증 매개인자이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "염증-관련 유전자"는 염증 또는 염증 반응에서 기능하는 유전자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 염증-유발성 유전자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 항염증 유전자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 염증-관련 단백질을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 시토카인을 코딩한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "염증-관련 단백질"은 염증 또는 염증 반응에서 기능하는 단백질을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 단백질은 염증-유발성 단백질이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 단백질은 항염증 단백질이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 단백질은 시토카인이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "염증-유발성 분자"는 염증 반응을 증강 또는 자극하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 염증-유발성 분자는 "염증-유발성 유전자"이다. 일부 실시양태에서, 염증-유발성 분자는 "염증-유발성 단백질"이다. 일부 실시양태에서, 염증-유발성 유전자는 염증-유발성 단백질을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 염증-유발성 분자는 "염증 시토카인"이다.
일부 실시양태에서, 용어 "염증 반응을 자극하는 것"은 염증 시토카인의 생산을 자극하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "염증 시토카인"은 면역 세포 (예를 들어, 헬퍼 T 세포 및 대식세포)로부터 분비되고 염증 반응에서 일정 역할을 하는 신호전달 분자 (시토카인)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "유전자 발현 프로파일"은 샘플에서 발현되는 유전자를 확인하고/거나 명시된 시간에 그들의 발현 정도를 결정하는 기술을 지칭한다. 용어 "염증-관련 유전자 발현 프로파일"은 발현되는 염증-관련 유전자를 확인하고/거나 명시된 시간에 그들의 발현 정도를 결정하는 유전자 발현 프로파일을 지칭한다.
용어 "개선시키는 것"은 질환 상태, 예를 들어, 자가면역 질환 상태 (예를 들어, SLE, 쇼그렌 증후군)의 치료에서 임의의 치료상 유익한 결과를 지칭하며, 이는 상기 질환 상태의 예방, 중증도 또는 진행에 있어서의 감소, 차도 또는 치유를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "원발성 쇼그렌 증후군 (pSS)", "쇼그렌 증후군", "쇼그렌병", 및 "쇼그렌"은 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
용어 "계내"는 살아있는 유기체로부터 분리되어 성장하는, 예를 들어, 조직 배양에서 성장하는 살아있는 세포에서 일어나는 프로세스를 지칭한다.
용어 "생체내"는 살아있는 유기체에서 일어나는 프로세스를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "포유동물" 또는 "대상체" 또는 "환자"는 인간과 비-인간 둘 다를 포함하고 인간, 비-인간 영장류, 개, 고양이, 뮤린, 소, 말 및 돼지를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 용어 "동일성" 퍼센트는 하기 기재된 서열 비교 알고리즘 중 하나 (예를 들어, BLASTP 및 BLASTN 또는 통상의 기술자에게 이용가능한 다른 알고리즘)를 사용하거나 또는 육안 검사에 의해 측정된 바와 같이, 최대 상응도를 위해 비교되고 정렬될 때 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 적용에 따라, "동일성" 퍼센트는 비교되는 서열의 영역에 걸쳐, 예를 들어, 기능적 도메인에 걸쳐 존재할 수 있거나, 또는 대안적으로, 비교될 두 서열의 전체 길이에 걸쳐 존재할 수 있다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열이 시험 서열과 비교되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 및 참조 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요에 따라 하위서열 좌표를 지정하고, 서열 알고리즘 프로그램 파리미터를 지정한다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열에 대비하여 시험 서열(들)에 대한 서열 동일성 퍼센트를 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어, 문헌 [Smith & Waterman, Adv Appl Math 1981;2:482]의 국소 상동성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman & Wunsch, J Mol Biol 1970;48:443]의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson & Lipman, PNAS 1988;85:2444]의 유사성 방법 검색에 의해, 이들 알고리즘의 전산화된 구현 [위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지, 제네틱스 컴퓨터 그룹 (미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575)에서의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA]에 의해, 또는 육안 검사 (일반적으로, 하기 문헌 [Ausubel et al.] 참조)에 의해 시행될 수 있다.
서열 동일성 및 서열 유사성 퍼센트를 결정하는데 적합한 알고리즘의 한 예는 문헌 [Altschul et al., J Mol Biol 1990;215:403-10]에 기재되는 BLAST 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 생명 공학 정보 센터 웹사이트를 통해 공개적으로 이용가능하다.
용어 "충분한 양"은 원하는 효과를 초래하기에 충분한 양을 의미한다.
용어 "치료상 유효량"은 질환의 증상을 개선시키는데 유효한 양이다. 예방이 치료로 간주될 수 있기 때문에, 치료상 유효량은 "예방상 유효량"일 수 있다.
용어 "약"은 통상의 기술자에 의해 이해될 것이며 그것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 달라질 것이다. 상기 용어가 사용되는 맥락에서 통상의 기술자에게 명확하지 않은 용어의 사용이 있는 경우, "약"은 특정한 값의 최대 ± 10%를 의미할 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구 범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥 상 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 지시 대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다.
RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질
RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 PK 모이어티를 갖지 않는 뉴클레아제 도메인과 비교 시 스캐폴드를 제공하고/거나 RNase 도메인의 생체내 반감기를 연장시키는 PK 모이어티에 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 효소적으로 활성인 RNase 도메인, 또는 그의 단편 또는 변이체, 예컨대 인간 RNase 1, 또는 그의 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 측면에서, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편과 융합되지 않은 뉴클레아제 분자와 비교해서 그와 융합되는 뉴클레아제 분자의 혈청 반감기를 변경시키는, Fc 도메인, 예컨대 인간 IgG1 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편에 작동가능하게 연결된 적어도 하나의 효소적으로 활성인 RNase 도메인, 또는 그의 단편 또는 변이체, 예컨대 인간 RNase 1, 또는 그의 단편 또는 변이체를 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질이다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 링커 도메인을 통해, Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편에 작동가능하게 커플링된다. 일부 실시양태에서, 링커 도메인은 링커 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 링커 도메인은 링커 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 리더 서열, 예를 들어, 리더 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 리더 분자는 뉴클레아제 도메인의 N-말단에 위치한 리더 펩티드이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 상기 분자의 N-말단에서의 리더 펩티드를 포함하며, 여기서 리더 펩티드는 나중에 RNase-Fc 융합 단백질로부터 절단된다. 재조합 단백질과 융합된 리더 펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 생성하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 그의 N-말단과 융합된 리더를 수반하거나 수반하지 않으면서 발현된다. 융합된 리더 펩티드의 절단 후 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질의 단백질 서열은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 예측 및/또는 추론될 수 있다.
일부 실시양태에서 리더는 VK3 리더 펩티드 (VK3LP)이고, 여기서 리더 펩티드는 RNase-Fc 융합 단백질의 N-말단과 융합된다. 이러한 리더 서열은 포유동물 세포에서 RNase-Fc 융합 단백질의 합성 및 분비의 수준을 개선시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 리더는 절단되어 RNase-Fc 융합 단백질을 산출한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 그의 N- 말단과 융합된 리더 펩티드를 수반하지 않으면서 발현되고, 그 결과로 생성된 RNase-Fc 융합 단백질은 N-말단 메티오닌을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, 서열식별번호: 49 (RSLV-132)의 N-말단과 융합된 VK3 리더 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질, 예를 들어, 서열식별번호: 50 (RSLV-132)은 리더 서열을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 N- 또는 C-말단에 작동가능하게 커플링된 RNase 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RNase 도메인과 DNase 도메인 둘 다를 포함한다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 탠덤으로 서로 작동가능하게 커플링되고 동일하거나 상이한 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 N- 또는 C-말단에 추가로 작동가능하게 커플링된 2개의 뉴클레아제 도메인 (예를 들어, 2개의 RNase 도메인)을 포함한다.
서열 표는 다양한 구성의 예시적인 RNase-Fc 융합 단백질의 서열을 제공한다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 세포외 면역 복합체와 특이적으로 결합하는 동일하거나 상이한 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편과 융합된 다중-뉴클레아제 단백질 (예를 들어, 2개의 RNA 뉴클레아제, 또는 RNase 및 DNase)이다.
한 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 N-말단에 작동가능하게 커플링된다 [예를 들어, 화학적으로 접합되거나 또는 유전적으로 융합된다 (예를 들어, 직접적으로 또는 폴리펩티드 링커를 통함)]. 또 다른 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 C-말단에 작동가능하게 커플링된다 [예를 들어, 화학적으로 접합되거나 또는 유전적으로 융합된다 (예를 들어, 직접적으로 또는 폴리펩티드 링커를 통함)]. 다른 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 아미노산 측쇄를 통해 작동가능하게 커플링된다 [예를 들어, 화학적으로 접합되거나 또는 유전적으로 융합된다 (예를 들어, 직접적으로 또는 폴리펩티드 링커를 통함)].
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 2개 이상의 뉴클레아제 도메인 및 적어도 하나의 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함한다. 예를 들어, 뉴클레아제 도메인은 뉴클레아제 도메인과 Fc 도메인(들), 그의 변이체(들) 또는 단편(들) 사이에 임의적 링커를 사용하여, 동일하거나 상이한 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 N-말단과 C-말단 둘 다에 작동가능하게 커플링될 수 있다. 일부 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 동일하며, 예를 들어, RNase 및 RNase이다. 다른 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 상이하며, 예를 들어, 2개의 상이한 RNA 뉴클레아제 또는 RNase 및 DNase이다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 뉴클레아제 도메인은 일련으로 서로 (예를 들어, 폴리펩티드 링커를 통함) 작동가능하게 커플링되고, 뉴클레아제 도메인의 탠덤 어레이는 동일하거나 상이한 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 C-말단 또는 N-말단 중 하나에 작동가능하게 커플링된다 [예를 들어, 화학적으로 접합되거나 또는 유전적으로 융합된다 (예를 들어, 직접적으로 또는 폴리펩티드 링커를 통함)]. 다른 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인의 탠덤 어레이는 동일한 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 N-말단과 C-말단 둘 다에 작동가능하게 커플링된다. 일부 실시양태에서, 뉴클레아제 도메인은 동일하거나 상이한 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 링커를 사용하거나 사용하지 않으면서 탠덤으로 작동가능하게 연결된다 (예를 들어, N-RNase-RNase-C, N-RNase-DNase-C, 또는 N-DNase-RNase-C). 일부 실시양태에서, 탠덤 RNase-Fc 융합 단백질은 동종이량체 또는 이종이량체를 형성한다.
다른 실시양태에서, 하나 이상의 뉴클레아제 도메인은 2개의 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편 사이에 삽입된다. 예를 들어, 하나 이상의 뉴클레아제 도메인은 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 링커의 전부 또는 일부를 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 2개의 뉴클레아제 도메인 (예를 들어, RNase 및 RNase 또는 RNase 및 DNase), 적어도 하나의 링커 도메인, 및 적어도 하나의 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 본원에 기재된 바와 같은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함함으로써, RNase-Fc 융합 단백질의 혈청 반감기 및 생체 이용률을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 하나 이상의 폴리펩티드 예컨대 서열식별번호: 44-58 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
뉴클레아제 도메인 사이 및/또는 뉴클레아제 도메인과 Fc 도메인 사이에 임의적 링커를 포함시켜, 뉴클레아제 도메인 및 Fc 도메인의 다른 구성이 가능하다는 것을 통상의 기술자는 이해할 것이다. 뉴클레아제 도메인이 테스트된 특정한 구성에서 활성인 한은, 도메인 배향이 변경될 수 있음이 또한 이해될 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 생물학적 효과를 매개하는 표적 분자에 특이적인 적어도 하나의 뉴클레아제 도메인을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질의 표적 분자 (예를 들어, RNA 또는 DNA)에 대한 결합은, 예를 들어, 세포, 조직 또는 순환계로부터 표적 분자의 저하 또는 제거를 초래한다.
다른 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 2개 이상의 폴리펩티드 ("다량체")를 갖는 결합 단백질을 형성하기 위해 함께 어셈블리되거나 또는 다른 폴리펩티드와 어셈블리될 수 있으며, 여기서 다량체의 적어도 하나의 폴리펩티드는 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질이다. 예시적인 다량체 형태는 이량체, 삼량체, 사량체 및 육량체 변경된 결합 단백질 등을 포함한다. 한 실시양태에서, 다량체의 폴리펩티드는 동일하다 (즉, 동종체 변경된 결합 단백질, 예를 들어, 동종이량체, 동종사량체). 또 다른 실시양에서, 다량체의 폴리펩티드는 상이하다 (예를 들어, 이종체). 한 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 함께 어셈블리되어 이량체를 형성한다. 한 실시양태에서, 이량체는 동종이량체이다. 한 실시양태에서, 이량체는 이종이량체이다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편과 융합되지 않은 상응하는 뉴클레아제 분자에 대비하여 적어도 약 1.5배, 예컨대 적어도 3배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 50배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1000배, 또는 1000배 또는 그 초과로 증가되는 혈청 반감기를 갖는다. 다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편과 융합되지 않은 상응하는 뉴클레아제 분자에 대비하여 적어도 약 1.5배, 예컨대 적어도 3배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 50배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 또는 500배 또는 그 미만으로 감소되는 혈청 반감기를 갖는다. 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질의 혈청 반감기를 결정하기 위해 관련 기술분야에서 승인되고 있는 일상적인 방법을 사용할 수 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질에서의 RNase의 활성은 대조군 RNase 분자의 활성보다 적어도 약 10배 미만, 예컨대 9배 미만, 8배 미만, 7배 미만, 6배 미만, 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 또는 2배 미만이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질에서의 RNase의 활성은 대조군 RNase 분자의 활성과 대략 동등하다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은, 예를 들어, 가용성 형태로 또는 불용성 복합체로서 침착된, DNA 및/또는 RNA를 함유하는 세포외 면역 복합체에 대해 활성일 수 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 활성은 시험관내 및/또는 생체내에서 검출가능하다.
또 다른 측면에서, RNA 또는 DNA에 표적화된 scFv 또는 제1 도메인과 동일하거나 상이한 특이성을 갖는 제2 뉴클레아제 도메인과 같은, 결합 특이성을 갖는 또 다른 효소 또는 항체에 부착되는 다기능적 RNase 분자가 제공된다.
일부 실시양태에서, 링커 도메인은 5개 아미노산 수열에 의해 링커의 길이를 변경시키는 (gly4ser) 3, 4 또는 5 변이체를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 링커 도메인은 대략 18개 아미노산 길이이고, 생체내 프로테아제 절단에 감수성일 수 있는 N-연결된 글리코실화 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, N-연결된 글리코실화 부위는 링커 도메인에서의 절단으로부터 RNase-Fc 융합 단백질을 보호할 수 있다. 일부 실시양태에서, N-연결된 글리코실화 부위는 링커 도메인에 의해 분리된 독립적인 기능적 도메인의 폴딩을 분리하는데 도움이 될 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커 도메인은 NLG 링커 (VDGASSPVNVSSPSVQDI) (서열식별번호: 37)이다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 DNase의 실질적으로 모든 또는 적어도 효소적으로 활성인 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, DNase는 유형 I 분비DNase, 바람직하게 인간 DNase, 예컨대 성숙한 인간 췌장 DNase 1 (유니프롯KB 항목 P24855, 서열식별번호: 6)이다. 일부 실시양태에서, 액틴에 대한 저하된 감수성을 나타내는 자연적으로 발생하는 변이체 대립유전자 A114F (서열식별번호: 8)가 RNase-Fc 융합 단백질의 DNase1에 포함된다 (문헌 [Pan et al., JBC 1998;273:18374-81; Zhen et al., BBRC 1997;231:499-504; Rodriguez et al., Genomics 1997;42:507-13] 참조). 다른 실시양태에서, 야생형 DNase1에 대비하여 높은 DNase 활성을 나타내는 자연적으로 발생하는 변이체 대립유전자인 G105R (서열식별번호: 9)이 RNase-Fc 융합 단백질의 DNase1에 포함된다 (문헌 [Yasuda et al., Int J Biochem Cell Biol 2010;42:1216-25] 참조). 일부 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 RNase-FC 융합 단백질 내로 도입되어 인간 DNase1의 보다 안정적인 유도체를 생성한다. 일부 실시양태에서, DNase는 인간, 야생형 DNase1 또는 모든 잠재적 N-연결된 글리코실화 부위, 즉 천연 리더 (서열식별번호: 5)와 함께 완전한 길이의 췌장 DNase1의 위치 40 및 128 각각에서의 아스파라긴 잔기에 상응하는, 서열식별번호: 6에 제시된 DNase1 도메인의 위치 18 및 106에서의 아스파라긴 잔기를 제거하도록 돌연변이된 DNase1 A114F (즉, 인간 DNase1 N18S/N106S/A114F, 서열식별번호: 11)이다.
일부 실시양태에서, DNase는 DNase 기능성 및 염색질 절단을 증가시키기 위한 하나 이상의 염기성 (즉, 양으로 하전된) 아미노산 치환을 포함하는 인간 DNase1이다. 일부 실시양태에서, 염기성 아미노산은 DNA 결합 계면에서 인간 DNase1 내로 도입되어 DNA 기질 상에서 음으로 하전된 포스페이트와의 결합을 증강시킨다 (US 7407785; US 6391607 참조). 이러한 과다활성 DNase1은 "염색질 커터"로서 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 염기성 아미노산 치환이 DNase1 내로 도입된다. 예를 들어, DNA 결합을 증강시키기 위해 하기 잔기 중 하나 이상이 돌연변이된다: Gln9, Glu13, Thr14, His44, Asn74, Asn110, Thr205. 일부 실시양태에서 전술한 아미노산 중 하나 이상이 염기성 아미노산 예컨대 아르기닌, 리신 및/또는 히스티딘으로 치환된다. 예를 들어, 인간 DNase는 하기 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다: Q9R, E13R, T14K, H44K, N74K, N110R, T205K. 일부 실시양태에서, 인간 DNase1은 또한 액틴에 대한 감수성을 저하시키는 A114F 치환을 포함한다 (US 6348343 참조). 한 실시양태에서, 인간 DNase1은 하기 치환을 포함한다: E13R, N74K, A114F 및 T205K.
일부 실시양태에서, 인간 DNase1은 잠재적인 글리코실화 부위, 예를 들어, 천연 리더와 함께 완전한 길이의 췌장 DNase1의 위치 40 및 128 각각에서의 아스파라긴 잔기에 상응하는, 서열식별번호: 6에 제시된 DNase1 도메인의 위치 18 및 106에서의 아스파라긴 잔기를 제거하기 위한 돌연변이를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 인간 DNase1은 하기 치환을 포함한다: E13R/N74K/A114F/T205K/N18S/N106S.
일부 실시양태에서, DNase는 DNase 1-유사 (DNaseL) 효소, 1-3 (유니프롯KB 항목 Q13609; 서열식별번호: 15)이다. 일부 실시양태에서, DNase는 3개의 프라임 복구 엑소뉴클레아제 1 (TREX1; 유니프롯KB 항목 Q9NSU2; 서열식별번호: 16)이다. 일부 실시양태에서, DNase는 DNase2이다. 일부 실시양태에서, DNase2는 DNAse2 알파 (즉, DNase2; 유니프롯KB 항목 O00115 서열식별번호: 18) 또는 DNase2 베타 (즉, DNase2-유사 산 DNase; 유니프롯KB 항목 Q8WZ79; 서열식별번호: 19)이다. 일부 실시양태에서, DNase 1L3, TREX1, DNase2 알파, 또는 DNase2 베타의 N-연결된 글리코실화 부위는 예컨대 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위를 제거하도록 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 20 또는 25 aa 링커 도메인을 함유하는 DNase-링커-Fc 도메인이 만들어진다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질에서의 DNase의 활성은 대조군 DNase 분자의 활성보다 적어도 약 10배 미만, 예컨대 9배 미만, 8배 미만, 7배 미만, 6배 미만, 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 또는 2배 미만이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질에서의 DNase의 활성은 대조군 DNase 분자의 활성과 대략 동등하다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 인간 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 야생형 인간 RNase 1 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RNase A 패밀리의 인간 췌장 RNase1 (유니프롯KB 항목 P07998; 서열식별번호: 1)을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 성숙한 형태의 인간 췌장 RNase1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 도메인은 하나 이상의 돌연변이를 갖는 인간 RNase 1 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 RNase1은 모든 잠재적 N-연결된 글리코실화 부위, 즉 천연 리더와 함께 완전한 길이의 췌장 RNase1 (서열식별번호: 1)의 위치 62, 104, 및 116 각각에서의 아스파라긴 잔기에 상응하는, 서열식별번호: 2에 제시된 RNase1 도메인의 위치 34, 76, 및 88에서의 아스파라긴 잔기 (인간 RNase1 N34S/N76S/N88S, 서열식별번호: 4)를 제거하도록 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 20 또는 25 aa 링커 도메인을 함유하는 RNase1-링커-Fc가 만들어진다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 포유동물 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 영장류 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 설치류 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 마우스 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 래트 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 원숭이 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 염소 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 토끼 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 말 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 개 RNase 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase 1 도메인은 돌연변이체 RNase 1 도메인이다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 세포외 면역 복합체와 특이적으로 결합하는 Fc 도메인에 부착된 RNase 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 Fcγ 수용체와 효과적으로 결합하지 않는다. 한 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 C1q와 효과적으로 결합하지 않는다. 다른 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 IgG1로부터의 프레임 내 Fc 도메인을 포함한다. 다른 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 힌지, CH2, 및/또는 CH3 도메인에서의 돌연변이를 추가로 포함한다. 다른 측면에서, 돌연변이는 P238S, P331S 또는 N297S이고, 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함할 수 있다. 이러한 일부 측면에서, 돌연변이는 EU 인덱스에 따른 넘버링으로 잔기 220, 226 및 229에서의 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상에 존재하며, 예를 들어 하나 이상의 시스테인 잔기를 세린으로 치환한 것, 예를 들어 C220S, C226S 및/또는 C229S이다. 일부 실시양태에서, 3개의 힌지 영역 시스테인 중 하나가 세린으로 대체되며, 예를 들어, 본원에서 "SCC 힌지"로서 지칭되기도 하는 C220S이다. 일부 실시양태에서, 모든 3개의 힌지 영역 시스테인이 세린으로 대체되며, 본원에서 "SSS 힌지"로서 지칭되기도 하는 C220S, C226S 및 C229S이다. 다른 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 SCC 힌지를 함유하지만, 그렇지 않으면 인간 IgG1 Fc CH2 및 CH3 도메인에 대해 야생형이며 Fc 수용체와 효율적으로 결합하여, RNase-Fc 융합 단백질이 그들과 결합되는 세포의 세포내 이입 구획으로의 흡수를 용이하게 한다. 다른 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 단일 및/또는 이중 가닥 RNA 기질에 대항한 활성을 갖는다.
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이체 Fc 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이체 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 힌지, CH2, 및/또는 CH3 도메인에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 돌연변이 및 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S를 포함하고, 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S, 및/또는 3개의 힌지 시스테인에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S, 및/또는 SSS로의 3개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이 또는 SCC로의 1개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S, 및 3개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S, 및 SCC 또는 SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S 및 SCC를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P331S 및 SCC 또는 SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 3개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 SSS로의 3개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 SCC로의 3개의 힌지 시스테인 중 하나에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 SCC 또는 SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 서열식별번호: 21-28 중 임의의 것에 제시된 바와 같다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 44-58 중 임의의 것에 제시된 바와 같다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 SCC, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인, 또는 SSS, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 45-46에 제시되어 있다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 50에 제시되어 있다.
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 SCC, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 SSS, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 (Gly4Ser)4 링커 도메인을 통해 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 47-48에 제시되어 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 야생형, 인간 RNase1 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SCC, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 (Gly4Ser)4 링커 도메인을 통해 연결된 인간 DNase1 G105R A114F 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 야생형, 인간 RNase1 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SSS, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 (Gly4Ser)4 링커 도메인을 통해 연결된 인간 DNase1 G105R A114F 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 51-52에 제시되어 있다.
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 인간 DNase1 G105R A114F 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SCC, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 (Gly4Ser)4 링커 도메인을 통해 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 인간 DNase1 G105R A114F 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SSS, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 (Gly4Ser)4 링커 도메인을 통해 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 53-54에 제시되어 있다
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 인간 DNase1 G105R A114F 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SCC, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 인간 DNase1 G105R A114F 도메인에 NLG 링커 도메인을 통해 연결된 SSS, P238S, 및 P331S를 포함하는 돌연변이체, 인간 IgG1 Fc 도메인에 연결된 야생형, 인간 RNase1 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 55-58에 제시되어 있다.
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질의 활성은 시험관내 및/또는 생체내에서 검출가능하다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RNase 도메인 및 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 RNase1 도메인은 Fc의 COOH 측에 위치한다. 다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RNase 도메인 및 Fc 도메인을 포함하고, 여기서 RNase1 도메인은 Fc의 NH2 측에 위치한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 하기를 포함한다: RNase-Fc; Fc-RNase; Fc-링커-RNase; RNase-링커-Fc, RNase-Fc-DNase; DNase-Fc-RNase; RNase-링커-Fc-링커-DNase; DNase-링커-Fc-링커-RNase; RNase-Fc-링커-DNase; DNase-Fc-링커-RNase; RNase-링커-Fc-DNase; DNase-링커-Fc-RNase.
일부 실시양태에서, 효소 도메인과 RNase-Fc 융합 단백질의 다른 도메인 간의 융합 접합이 최적화된다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 RNase 효소 활성의 표적은 주로 세포외이고, 예를 들어, 항-RNP 자가항체와의 면역 복합체에 함유된 RNA 및 아폽토시스를 겪는 세포의 표면 상에 발현된 RNA로 이루어진다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 세포내 이입 소포의 산성 환경에서 활성이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은, 예를 들어, 분자가 FcR과 결합할 수 있게 하고 면역 복합체에 의해 사용되는 진입 경로를 통해 세포내 이입 구획으로 유입되도록 야생형 (wt) Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질은 세포외적으로 및 세포내 이입 환경 (TLR7이 발현될 수 있음) 둘 다에서 활성이 되도록 적응된다. 일부 측면에서, 이는 야생형 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질이 이전에 삼켜진 면역 복합체를 통하거나 또는 바이러스성 감염 후 TLR7을 활성화하는 RNA에 의한 TLR7 신호전달을 중단하도록 허용한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 야생형 RNase는 RNase 세포질 억제제에 의한 억제에 대한 저항성이 없다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 야생형 RNase는 세포의 세포질에서 활성이 없다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 RNase를 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 DNase와 RNase 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 RNase-Fc 융합 단백질은 쇼그렌병의 요법을 개선시키는데, 이는 이들이 RNA, DNA, 또는 RNA와 DNA 둘 다의 조합을 함유하는 면역 복합체를 소화 또는 분해하고, 세포외적으로 활성이기 때문이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 쇼그렌병을 가진 환자에서 피로를 저하시킨다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 장애, 질환 및 병태를 치료 또는 예방하기 위한 유전자 요법 방법에 사용하기 위한 하나 이상의 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 핵산을 제공한다. 유전자 요법 방법은 본 개시내용의 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 발현을 달성하기 위해, 하기를 필요로 하는 동물 내로 RNase-Fc 융합 단백질 핵산 (DNA, RNA 및 안티센스 DNA 또는 RNA) 서열을 도입하는 것에 관한 것이다. 이러한 방법은 표적 조직에 의한 RNase-Fc 융합 단백질의 발현에 필요한 임의의 다른 유전 요소 및 프로모터에 작동가능하게 커플링된 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드의 도입을 포함할 수 있다.
유전자 요법 적용에서, RNase-Fc 융합 단백질 유전자는 치료상 유효한 유전 산물의 생체내 합성을 달성하기 위해 세포 내로 도입된다. "유전자 요법"은 단일 치료에 의해 지속적인 효과가 달성되는 통상적인 유전자 요법과, 치료상 유효한 DNA 또는 mRNA의 1회 또는 반복 투여를 포함하는 유전자 치료제의 투여 둘 다를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, 음으로 하전된 포스포디에스테르 기를 비하전된 기로 치환함으로써 흡수를 증강시키기 위해 변형될 수 있다.
Fc 도메인
일부 실시양태에서, 하나 이상의 뉴클레아제 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 폴리펩티드는 폴리펩티드의 혈청 반감기를 증가시키는 수단 뿐만 아니라 스캐폴드로서 작용하는 Fc 도메인에 링커 도메인을 사용하거나 사용하지 않으면서 작동가능하게 커플링된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 뉴클레아제 도메인 및/또는 Fc 도메인은 비글리코실화, 탈글리코실화, 또는 저글리코실화된다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 돌연변이체 또는 변이체 Fc 도메인, 또는 Fc 도메인의 단편이다.
적합한 Fc 도메인은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, Fc 및 Fc 변이체, 예컨대 WO2011/053982, WO 02/060955, WO 02/096948, WO05/047327, WO05/018572, 및 US 2007/0111281 (전술한 것의 내용이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. Fc 도메인을 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질 (변경된 글리코실화를 수반하거나 수반하지 않음) 내로 도입하기 위한 일상적인 방법 (예를 들어, 클로닝, 접합)을 사용하는 것은 통상의 기술자의 능력 내에 있다.
일부 실시양태에서, Fc 도메인은 야생형 인간 IgG1 Fc, 예컨대 서열식별번호: 20에 제시된 것이다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 하나 이상의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, Fc 도메인은 야생형 인간 IgG4 Fc, 예컨대 서열식별번호: 30-31에 제시된 것이다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 하나 이상의 돌연변이를 갖는 인간 IgG4 Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, Fc 도메인은, 예를 들어, 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 초래하는 돌연변이에 의해 변경되거나 변형된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "Fc 도메인 변이체"는 Fc 도메인이 유래되는 야생형 Fc와 비교 시, 적어도 하나의 아미노산 변형, 예컨대 아미노산 치환을 갖는 Fc 도메인을 지칭한다. 예를 들어, Fc 도메인이 인간 IgG1 항체로부터 유래되는 경우, 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역의 상응하는 위치에서의 야생형 아미노산과 비교 시, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 (예를 들어, 치환)를 포함한다. Fc 변이체의 아미노산 치환(들)은 그 잔기가 항체에서의 Fc 영역에 제공될 위치 번호에 상응하는 것으로서 지칭되는 Fc 도메인 내의 위치에 위치할 수 있다 (EU 인덱스에 따른 넘버링).
한 실시양태에서, Fc 변이체는 힌지 영역 또는 그의 일부분에 위치한 아미노산 위치(들)에서의 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fc 변이체는 CH2 도메인 또는 그의 일부분에 위치한 아미노산 위치(들)에서의 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fc 변이체는 CH3 도메인 또는 그의 일부분에 위치한 아미노산 위치(들)에서의 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fc 변이체는 CH4 도메인 또는 그의 일부분에 위치한 아미노산 위치(들)에서의 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, Fc 도메인은 하기 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다: T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V. 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 하기 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다: T350V, T366L, K392L, 및 T394W.
일부 실시양태에서, 인간 IgG1 Fc 영역은 N83 (즉, 카바트 넘버링에 의한 N297)에서의 돌연변이를 가져, 비글리코실화된 Fc 영역 (예를 들어, Fc N83S; 서열식별번호: 21)을 산출한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG1 Fc 도메인은 3개의 힌지 영역 시스테인 (잔기 220, 226, 및 229, EU 인덱스에 따른 넘버링) 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 도메인 내의 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상은 SCC (서열식별번호: 24) 또는 SSS (서열식별번호: 25)로 돌연변이될 수 있으며, 여기서 "S"는 시스테인을 세린으로 아미노산 치환하는 것을 나타낸다 (여기서 CCC는 야생형 힌지 도메인에 존재하는 3개의 시스테인을 지칭한다). 따라서 "SCC"는 3개의 힌지 영역 시스테인 (잔기 220, 226, 및 229, EU 인덱스에 따른 넘버링) 중 첫 번째 시스테인만이 세린으로 아미노산 치환되는 것을 나타내는 반면, "SSS"는 힌지 영역 내의 3개의 시스테인 모두가 세린으로 치환되는 것을 나타낸다 (잔기 220, 226, 및 229, EU 인덱스에 따른 넘버링).
일부 측면에서, Fc 도메인은 하나 이상의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 Fc 도메인이다.
일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 힌지, CH2, 및/또는 CH3 도메인에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 측면에서, Fc 도메인은 하나 이상의 돌연변이를 갖는 인간 IgG4 Fc 도메인이다. 일부 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: F296Y, E356K, R409K, 및 H345R. 일부 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: F296Y, R409K, 및 K439E. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이체 IgG4 Fc 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드 - 여기서 Fc 도메인은 돌연변이 F296Y, E356K, R409K, 및 H345R을 포함함 - 및 돌연변이체 IgG4 Fc 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드 - 여기서 CH3 도메인은 돌연변이 F296Y, R409K, 및 K439E를 포함함 -를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이체 IgG4 Fc 도메인은 힌지, CH2, 및/또는 CH3 도메인에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
CH2 치환
일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 돌연변이 및 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S를 포함하고, 3개의 힌지 시스테인 (잔기 220, 226, 및 229, EU 인덱스에 따른 넘버링) 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S, 및/또는 3개의 힌지 시스테인 (잔기 220, 226, 및 229, EU 인덱스에 따른 넘버링) 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및/또는 P331S, 및/또는 SCC로의 힌지 시스테인에서의 돌연변이 또는 SSS로의 3개의 힌지 시스테인에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S 및 3개의 힌지 시스테인 중 적어도 하나에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S 및 SCC를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 P331S 및 SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P238S 및 SCC 또는 SSS를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 P331S 및 SCC 또는 SSS를 포함한다. (모두 EU 인덱스에 따른 넘버링).
일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 N-연결된 글리코실화의 부위, 예컨대 N297에서의 돌연변이, 예를 들어, 아스파라긴을 또 다른 아미노산 예컨대 세린으로 치환하는 것, 예를 들어, N297S를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 N-연결된 글리코실화의 부위, 예컨대 N297에서의 돌연변이, 예를 들어, 아스파라긴을 또 다른 아미노산 예컨대 세린으로 치환하는 것, 예를 들어, N297S 및 3개의 힌지 시스테인 중 하나 이상에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 N-연결된 글리코실화의 부위, 예컨대 N297에서의 돌연변이, 예를 들어, 아스파라긴을 또 다른 아미노산 예컨대 세린으로 치환하는 것, 예를 들어, N297S 및 SCC로의 3개의 힌지 시스테인 중 하나에서의 돌연변이 또는 SSS로의 3개의 시스테인 모두에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 N-연결된 글리코실화의 부위, 예컨대 N297에서의 돌연변이, 예를 들어, 아스파라긴을 또 다른 아미노산 예컨대 세린으로 치환하는 것, 예를 들어, N297S 및 FcγR 결합 및/또는 보체 활성화를 감소시키는 CH2 도메인에서의 하나 이상의 돌연변이, 예컨대 P238 또는 P331 또는 둘 다에서의 돌연변이, 예를 들어, P238S 또는 P331S 또는 P238S와 P331S 둘 다를 포함한다. 일부 측면에서, 이러한 돌연변이체 Fc 도메인은 힌지 영역에서의 돌연변이, 예를 들어, SCC 또는 SSS를 추가로 포함할 수 있다. (모두 EU 인덱스에 따른 넘버링.) 일부 측면에서, 돌연변이체 Fc 도메인은 본원의 서열 표 또는 서열 목록에 제시된 바와 같다.
CH3 치환
일부 실시양태에서, 이종이량체는 본원에 개시된 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질 상의 Fc 도메인의 CH3 도메인에서의 돌연변이에 의해 형성된다. 중쇄는 "놉-인투-홀" 전략을 사용하여 이종이량화를 위해 처음으로 조작되었다 (Rigway B, et al., Protein Eng., 9 (1996) pp. 617-621; 본원에 참조로 포함됨). 용어 "놉-인투-홀"은 하나의 폴리펩티드 내로 돌기 (놉)를 도입하고 이들과 상호작용하는 계면에서의 다른 폴리펩티드 내로 공동 (홀)을 도입함으로써 시험관내 또는 생체내에서 2개의 폴리펩티드를 함께 쌍 형성하는 것을 지시하는 기술을 지칭한다. 예를 들어, WO 96/027011, WO 98/050431, US 5,731,168, US2007/0178552, WO2009089004, US 20090182127 참조. 특히, CH3 도메인에서의 돌연변이의 조합은 이종이량체, 예를 들어, "놉" 중쇄에서의 S354C, T366W, 및 "홀" 중쇄에서의 Y349C, T366S, L368A, Y407V를 형성하는데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, "놉" 중쇄에서의 T366Y, 및 "홀" 중쇄에서의 Y407T를 형성하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질은 놉 돌연변이 T366W를 갖는 제1 CH3 도메인 및 홀 돌연변이 T366S, L368A 및 Y407V를 갖는 제2 CH3 도메인을 포함한다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.) 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질은 놉 돌연변이 T366Y를 갖는 제1 CH3 도메인 및 홀 돌연변이 Y407T를 갖는 제2 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CH3 돌연변이는 US 2012/0149876 A1, US 2017/0158779, US 9574010, 및 US 9562109 (그의 각각이 본원에 참조로 포함됨); 및 문헌 [Von Kreudenstein, T.S. et al. mABs, 5 (2013), pp. 646-654; 본원에 참조로 포함됨]에 기재된 것이고, 하기 돌연변이를 포함한다: T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V (제1 CH3 도메인); 및 T350V, T366L, K392L, T394W (제2 CH3 도메인). 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질은 T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V 돌연변이를 갖는 제1 CH3 도메인 및 T350V, T366L, K392L, T394W 돌연변이를 갖는 제2 CH3 도메인을 포함한다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.)
일부 실시양태에서, 이종이량체는 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질 상의 Fc 도메인의 CH3 도메인에서의 돌연변이에 의해 형성된다. 특히, CH3 도메인에서의 돌연변이의 조합을 사용하여, 높은 이종이량체성 안정성과 순도를 갖는 이종이 량체를 형성할 수 있다: 예를 들어, 문헌 [Von Kreudenstein et al., mAbs 5:5, 646-654; September-October 2013], 및 US 2012/0149876 A1, US 2017/0158779, US 9574010, 및 US 9562109 (이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨) 참조. 일부 실시양태에서, Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V. 일부 실시양태에서, Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: T350V, T366L, K392L, 및 T394W. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이 T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V를 갖는 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이 T350V, T366L, K392L, 및 T394W를 갖는 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질은 돌연변이체 Fc 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드 - 여기서 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V를 포함함 - 및 돌연변이체 Fc 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드 - 여기서 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, T366L, K392L, 및 T394W를 포함함 -를 포함한다.
이종이량체를 우선적으로 형성하는 Fc 도메인의 CH3 도메인에서의 다른 돌연변이가 고려된다. 예를 들어, 문헌 [Von Kreudenstein et al., mAbs 5:5, 646-654; September-October 2013; 본원에 참조로 포함됨] 참조. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드의 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군: T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩티드의 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군: T350V, T366L, K392M, 및 T394W로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드의 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군: L351Y, F405A, 및 Y407V로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩티드의 Fc 도메인에서의 돌연변이는 하기 돌연변이 군: T366L, K392M, 및 T394W로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시양태에서, CH3 돌연변이는 문헌 [Moore, G.L. et al. (mABs, 3 (2011), pp. 546-557)]에 기재된 것이고, 하기 돌연변이를 포함한다: S364H 및 F405A (제1 CH3 도메인); 및 Y349T 및 T394F (제2 CH3 도메인). 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질은 S364H 및 F405A 돌연변이를 갖는 제1 CH3 도메인 및 Y349T 및 T394F 돌연변이를 갖는 제2 CH3 도메인을 포함한다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.)
일부 실시양태에서, CH3 돌연변이는 문헌 [Gunasekaran, K. et al. (J. Biol. Chem., 285 (2010), pp. 19637-19646)]에 기재된 것이고, 하기 돌연변이를 포함한다: K409D 및 K392D (제1 CH3 도메인); 및 D399K 및 E365K (제2 CH3 도메인). 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 이종이량체성 RNase-Fc 융합 단백질은 K409D 및 K392D 돌연변이를 갖는 제1 CH3 도메인 및 D399K 및 E365K 돌연변이를 갖는 제2 CH3 도메인을 포함한다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.)
본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 이펙터 기능 및/또는 FcR 결합에서의 변경을 부여하는 것으로 공지되어 있는 관련 기술분야에서 승인되고 있는 Fc 변이체를 이용할 수 있다. 예를 들어, 국제 PCT 공보 WO88/07089A1, WO96/14339A1, WO98/05787A1, WO98/23289A1, WO99/51642A1, WO99/58572A1, WO00/09560A2, WO00/32767A1, WO00/42072A2, WO02/44215A2, WO02/060919A2, WO03/074569A2, WO04/016750A2, WO04/029207A2, WO04/035752A2, WO04/063351 A2, WO04/074455A2, WO04/099249A2, WO05/040217A2, WO04/044859, WO05/070963A1, WO05/077981A2, WO05/092925A2, WO05/123780A2, WO06/019447A1, WO06/047350A2, 및 WO06/085967A2; US 특허 공개 번호 US2007/0231329, US2007/0231329, US2007/0237765, US2007/0237766, US2007/0237767, US2007/0243188, US20070248603, US20070286859, US20080057056; 또는 미국 특허 번호 5,648,260; 5,739,277; 5,834,250; 5,869,046; 6,096,871; 6,121,022; 6,194,551; 6,242,195; 6,277,375; 6,528,624; 6,538,124; 6,737,056; 6,821,505; 6,998,253; 7,083,784; 및 7,317,091 (이들 각각은 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 아미노산 위치 중 하나 이상에서의 변화. 한 실시양태에서, 특이적 변화 (예를 들어, 관련 기술분야에 개시된 하나 이상의 아미노산의 특이적 치환)는 개시된 아미노산 위치 중 하나 이상에서 만들어질 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 아미노산 위치 중 하나 이상에서의 상이한 변화 (예를 들어, 관련 기술분야에 개시된 하나 이상의 아미노산 위치의 상이한 치환)가 만들어질 수 있다.
Fc 감마 수용체 및 Fc 감마 수용체 하위유형에 대한 결합을 저하시키는 Fc 도메인에서의 다른 아미노산 돌연변이가 고려된다. Fc 도메인에 대한 아미노산 잔기 번호의 할당은 카바트의 정의에 따른다. 예를 들어, 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest (Table of Contents, Introduction and Constant Region Sequences sections), 5th edition, Bethesda, MD:NIH vol. 1:647-723 (1991); Kabat et al., "Introduction" Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept of Health and Human Services, NIH, 5th edition, Bethesda, MD vol. 1:xiii-xcvi (1991); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)] (이들 각각은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함됨)을 참조한다.
예를 들어, Fc 영역의 위치 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 279, 280, 283, 285, 298, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 312, 315, 322, 324, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 356, 360, 373, 376, 378, 379, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 또는 439에서의 돌연변이는 2004년 5월 18일에 허여된 미국 특허 번호 6,737,056 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이 결합을 변경시킬 수 있다. 이러한 특허는 IgG3에서의 Pro331을 Ser으로 변경하면 돌연변이되지 않은 IgG3과 비교 시 6배 더 낮은 친화성이 초래되었으며, 이는 Fc 감마 RI 결합에 Pro331이 관여한다는 것을 나타낸다고 보고하였다. 또한, 위치 234, 235, 236 및 237, 297, 318, 320 및 322에서의 아미노산 변형은 1997년 4월 29일에 허여된 U.S. 5,624,821 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에서 수용체 결합 친화성을 잠재적으로 변경하는 것으로서 개시된다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.)
사용을 위해 고려되는 추가 돌연변이는, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0235208 (2006년 10월 19일에 공개되고 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 것을 포함한다. 이러한 공보는 232G, 234G, 234H, 235D, 235G, 235H, 236I, 236N, 236P, 236R, 237K, 237L, 237N, 237P, 238K, 239R, 265G, 267R, 269R, 270H, 297S, 299A, 299I, 299V, 325A, 325L, 327R, 328R, 329K, 330I, 330L, 330N, 330P, 330R, 및 331L (넘버링은 EU 인덱스에 따름) 뿐만 아니라 이중 돌연변이체 236R/237K, 236R/325L, 236R/328R, 237K/325L, 237K/328R, 325L/328R, 235G/236R, 267R/269R, 234G/235G, 236R/237K/325L, 236R/325L/328R, 235G/236R/237K, 및 237K/325L/328R을 포함한, Fc 영역에서의 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함하는, Fc 감마 수용체에 대한 저하된 결합, 저하된 항체 의존성 세포 매개된 세포독성, 또는 저하된 보체 의존성 세포독성을 나타내는 Fc 변이체를 기재한다. 상기 공보에 기재된 바와 같이 사용하기 위해 고려되는 다른 돌연변이는 227G, 234D, 234E, 234G, 234I, 234Y, 235D, 235I, 235S, 236S, 239D, 246H, 255Y, 258H, 260H, 2641, 267D, 267E, 268D, 268E, 272H, 272I, 272R, 281D, 282G, 283H, 284E, 293R, 295E, 304T, 324G, 324I, 327D, 327A, 328A, 328D, 328E, 328F, 328I, 328M, 328N, 328Q, 328T, 328V, 328Y, 330I, 330L, 330Y, 332D, 332E, 335D, 위치 235와 236 사이에 G의 삽입, 위치 235와 236 사이에 A의 삽입, 위치 235와 236 사이에 S의 삽입, 위치 235와 236 사이에 T의 삽입, 위치 235와 236 사이에 N의 삽입, 위치 235와 236 사이에 D의 삽입, 위치 235와 236 사이에 V의 삽입, 위치 235와 236 사이에 L의 삽입, 위치 235와 236 사이에 G의 삽입, 위치 235와 236 사이에 A의 삽입, 위치 235와 236 사이에 S의 삽입, 위치 235와 236 사이에 T의 삽입, 위치 235와 236 사이에 N의 삽입, 위치 235와 236 사이에 D의 삽입, 위치 235와 236 사이에 V의 삽입, 위치 235와 236 사이에 L의 삽입, 위치 297과 298 사이에 G의 삽입, 위치 297과 298 사이에 A의 삽입, 위치 297과 298 사이에 S의 삽입, 위치 297과 298 사이에 D의 삽입, 위치 326과 327 사이에 G의 삽입, 위치 326과 327 사이에 A의 삽입, 위치 326과 327 사이에 T의 삽입, 위치 326과 327 사이에 D의 삽입, 및 위치 326과 327 사이에 E의 삽입을 포함한다 (넘버링은 EU 인덱스에 따름). 부가적으로, 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0235208에 기재된 돌연변이는 227G/332E, 234D/332E, 234E/332E, 234Y/332E, 234I/332E, 234G/332E, 235I/332E, 235S/332E, 235D/332E, 235E/332E, 236S/332E, 236A/332E, 236S/332D, 236A/332D, 239D/268E, 246H/332E, 255Y/332E, 258H/332E, 260H/332E, 264I/332E, 267E/332E, 267D/332E, 268D/332D, 268E/332D, 268E/332E, 268D/332E, 268E/330Y, 268D/330Y, 272R/332E, 272H/332E, 283H/332E, 284E/332E, 293R/332E, 295E/332E, 304T/332E, 324I/332E, 324G/332E, 324I/332D, 324G/332D, 327D/332E, 328A/332E, 328T/332E, 328V/332E, 328I/332E, 328F/332E, 328Y/332E, 328M/332E, 328D/332E, 328E/332E, 328N/332E, 328Q/332E, 328A/332D, 328T/332D, 328V/332D, 328I/332D, 328F/332D, 328Y/332D, 328M/332D, 328D/332D, 328E/332D, 328N/332D, 328Q/332D, 330L/332E, 330Y/332E, 330I/332E, 332D/330Y, 335D/332E, 239D/332E, 239D/332E/330Y, 239D/332E/330L, 239D/332E/330I, 239D/332E/268E, 239D/332E/268D, 239D/332E/327D, 239D/332E/284E, 239D/268E/330Y, 239D/332E/268E/330Y, 239D/332E/327A, 239D/332E/268E/327A, 239D/332E/330Y/327A, 332E/330Y/268 E/327A, 239D/332E/268E/330Y/327A, 삽입 G>297-298/332E, 삽입 A>297-298/332E, 삽입 S>297-298/332E, 삽입 D>297-298/332E, 삽입 G>326-327/332E, 삽입 A>326-327/332E, 삽입 T>326-327/332E, 삽입 D>326-327/332E, 삽입 E>326-327/332E, 삽입 G>235-236/332E, 삽입 A>235-236/332E, 삽입 S>235-236/332E, 삽입 T>235-236/332E, 삽입 N>235-236/332E, 삽입 D>235-236/332E, 삽입 V>235-236/332E, 삽입 L>235-236/332E, 삽입 G>235-236/332D, 삽입 A>235-236/332D, 삽입 S>235-236/332D, 삽입 T>235-236/332D, 삽입 N>235-236/332D, 삽입 D>235-236/332D, 삽입 V>235-236/332D, 및 삽입 L>235-236/332D (EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함하고, 사용하기 위해 고려된다. 돌연변이체 L234A/L235A는, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2003/0108548 (2003년 6월 12일에 공개되고, 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 실시양태에서, 상기 기재된 변형은 개별적으로 또는 조합하여 포함된다. (EU 인덱스에 따른 넘버링.)
PK 모이어티
일부 실시양태에서, RNase는 RNase의 혈청 반감기를 증가시키는 수단 뿐만 아니라 스캐폴드로서 작용하는 PK 모이어티에 작동가능하게 커플링된다.
적합한 PK 모이어티는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 알부민, 트랜스페린, Fc 및 그의 변이체, 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 PK 모이어티는 HSA, 또는 그의 변이체 또는 단편, 예컨대 US 5,876,969, WO 2011/124718, 및 WO 2011/0514789에 기재된 것; Fc 및 Fc 변이체, 예컨대 WO2011/053982, WO 02/060955, WO 02/096948, WO05/047327, WO05/018572, 및 US 2007/0111281에 개시된 것; US 7,176,278 및 US 8,158,579에 개시된 바와 같은 트랜스페린, 또는 그의 변이체 또는 단편; 및 PEG 또는 유도체, 예컨대 문헌 [Zalipsky et al. ("Use of Functionalized Poly(Ethylene Glycols) for Modification of Polypeptides" in Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, J. M. Harris, Plenus Press, New York (1992)), 및 Zalipsky et al. Advanced Drug Reviews 1995:16: 157-182], 및 미국 특허 번호 4,640,835, 4,496,689, 4,301,144, 4,670,417, 4,791,192, 4,179,337, 및 5,932,462 (전술한 것의 내용은 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. PK 모이어티를 본 발명의 RNase에 작동가능하게 커플링하기 위한 일상적인 방법 (예를 들어, 클로닝, 접합)을 사용하는 것은 통상의 기술자의 능력 내에 있다.
일부 실시양태에서, PK 모이어티는 자연적으로 비글리코실화되는 HSA이다.
일부 실시양태에서, PK 모이어티는 야생형 Fc (서열식별번호: 20)이다.
특정 실시양태에서, Fc 도메인은, 예를 들어, 아미노산 돌연변이 (예를 들어, 부가, 결실, 또는 치환)에 의해 변경 또는 변형된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "Fc 도메인 변이체"는 Fc 도메인이 유래되는 야생형 Fc와 비교 시, 적어도 하나의 아미노산 변형, 예컨대 아미노산 치환을 갖는 Fc 도메인을 지칭한다. 예를 들어, Fc 도메인이 인간 IgG1 항체로부터 유래되는 경우, 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역의 상응하는 위치에서의 야생형 아미노산과 비교 시 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 (예를 들어, 치환)를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인이 인간 IgG4 항체로부터 유래되는 경우, 변이체는 인간 IgG4 Fc 영역의 상응하는 위치에서의 야생형 아미노산과 비교 시 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 (예를 들어, 치환)를 포함한다.
일부 실시양태에서, PK 모이어티는 본원에 기재된 Fc 변이체 중 임의의 것이다.
일부 실시양태에서, PK 모이어티는 야생형 HST이다. 다른 실시양태에서, PK 모이어티는 N413 및/또는 N611 및/또는 S12 (S12는 잠재적인 O-연결된 글리코실화 부위임)에서의 돌연변이를 갖는 HST이며, 변경된 글리코실화를 갖는 HST (즉, HST N413S, HST N611S, HST N413S/N611S 및 HST S12A/N413S/N611S)를 생성한다.
링커 도메인
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 링커 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 복수 개의 링커 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 도메인은 폴리펩티드 링커이다. 특정 측면에서, Fc, 또는 그의 변이체 또는 단편을 하나 이상의 뉴클레아제 도메인과 융합하여 RNase-Fc 융합 단백질을 형성하기 위해 폴리펩티드 링커를 이용하는 것이 바람직하다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 합성이다. 본원에 사용된 바와 같은, 폴리펩티드 링커와 관련한 용어 "합성"은 자연에서는 자연적으로 연결되지 않는 서열 (자연적으로 발생하거나 발생하지 않을 수 있음) (예를 들어, Fc 서열)에 아미노산의 선형 서열로 연결되는 아미노산 서열 (자연적으로 발생하거나 발생하지 않을 수 있음)을 포함하는 펩티드 (또는 폴리펩티드)를 포함한다. 예를 들어, 폴리펩티드 링커는 변형된 형태의 자연적으로 발생하는 폴리펩티드 (예를 들어, 돌연변이 예컨대 부가, 치환 또는 결실을 포함함)이거나 또는 제1 아미노산 서열 (자연적으로 발생하거나 발생하지 않을 수 있음)을 포함하는 비-자연적으로 발생하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드 링커는, 예를 들어, Fc, 또는 그의 변이체 또는 단편이 기능적 Fc 또는 그의 변이체 또는 단편의 적절한 폴딩 및 형성을 보장하기 위해 병렬되도록 하기 위해 이용될 수 있다. 바람직하게, 본 발명과 상용성인 폴리펩티드 링커는 비교적 비-면역원성일 것이고 결합 단백질의 단량체 서브유닛 간의 임의의 비-공유 연합을 억제하지 않을 것이다.
특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 서열식별번호: 37에 제시된 바와 같은 NLG 링커를 이용한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 단일 폴리펩티드 쇄에서 프레임 내 임의의 2개 이상의 도메인을 연결하기 위해 폴리펩티드 링커를 이용한다. 한 실시양태에서, 2개 이상의 도메인은 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편 중 임의의 것, 또는 본원에서 논의된 뉴클레아제 도메인으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 RNase 도메인은 링커 도메인을 통해 Fc 도메인에 작동가능하게 커플링된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 동일한 Fc 단편을 융합시킴으로써, 동종이량체성 Fc 영역을 형성하기 위해 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 상이한 Fc 단편을 융합시킴으로써, 이종이량체성 Fc 영역을 형성하기 위해 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드 링커는 제1 Fc 단편의 C-말단을 제2 Fc 단편의 N-말단과 유전적으로 융합시켜 완전한 Fc 도메인을 형성하기 위해 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 Fc 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편의 일부분을 포함한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 Fc 단편 (예를 들어, C 또는 N 도메인), 또는 Fc 도메인 또는 그의 변이체의 상이한 부분을 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 gly-ser 링커를 포함하거나 이로 이루어진다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "gly-ser 링커"는 글리신 및 세린 잔기로 이루어지는 펩티드를 지칭한다. 예시적인 gly/ser 링커는 식 (Gly4Ser)n의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 n은 양의 정수 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이다. 바람직한 gly/ser 링커는 (Gly4Ser)4이다. 또 다른 바람직한 gly/ser 링커는 (Gly4Ser)3이다. 또 다른 바람직한 gly/ser 링커는 (Gly4Ser)5이다. 특정 실시양태에서, gly-ser 링커는 폴리펩티드 링커의 2개의 다른 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 폴리펩티드 링커 서열 중 임의의 것) 사이에 삽입될 수 있다. 다른 실시 양태에서, gly-ser 링커는 폴리펩티드 링커의 또 다른 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 폴리펩티드 링커 서열 중 임의의 것)의 한쪽 또는 양쪽 말단에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 2개 이상의 gly-ser 링커가 폴리펩티드 링커에 일련으로 혼입된다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드 링커는 생물학적으로 관련된 펩티드 서열 또는 그의 서열 부분을 포함한다. 예를 들어, 생물학적으로 관련된 펩티드 서열은 항-거부 또는 항염증 펩티드로부터 유래된 서열을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 항-거부 또는 항염증 펩티드는 시토카인 억제 펩티드, 세포 접착 억제 펩티드, 트롬빈 억제 펩티드, 및 혈소판 억제 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 IL-1 억제 또는 길항제 펩티드 서열, 에리트로포이에틴 (EPO)-모방 펩티드 서열, 트롬보포이에틴 (TPO)-모방 펩티드 서열, G-CSF 모방 펩티드 서열, TNF-길항제 펩티드 서열, 인테그린-결합 펩티드 서열, 셀렉틴 길항제 펩티드 서열, 항-병원성 펩티드 서열, 혈관활성 장 펩티드 (VIP) 모방 펩티드 서열, 칼모둘린 길항제 펩티드 서열, 비만 세포 길항제, SH3 길항제 펩티드 서열, 유로키나제 수용체 (UKR) 길항제 펩티드 서열, 소마토스타틴 또는 코르티스타틴 모방 펩티드 서열, 및 대식세포 및/또는 T-세포 억제 펩티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 펩티드 서열을 포함한다. 그 중 어느 하나가 폴리펩티드 링커로서 이용될 수 있는 예시적인 펩티드 서열은 미국 특허 번호 6,660,843 (이는 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
RNase-Fc 융합 단백질에 사용하기 적합한 다른 링커는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어, US 5,525,491에 개시된 세린-풍부 링커, 문헌 [Arai et al., Protein Eng 2001;14:529-32]에 개시된 나선 형성 펩티드 링커 (예를 들어, A(EAAAK)nA (n=2-5)), 및 문헌 [Chen et al., Mol Pharm 2011;8:457-65]에 개시된 안정한 링커, 즉 디펩티드 링커 LE, 트롬빈 감수성 디술피드 시클로펩티드 링커, 및 알파-나선 형성 링커 LEA(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4ALE (서열식별번호: 39)이다.
다른 예시적인 링커는 GS 링커 (즉, (GS)n), GGSG (서열식별번호: 40) 링커 (즉, (GGSG)n), GSAT 링커 (서열식별번호: 41), SEG 링커, 및 GGS 링커 (즉, (GGSGGS)n)를 포함하며, 여기서 n은 양의 정수 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이다. RNase-Fc 융합 단백질에 사용하기 적합한 다른 링커는 공개적으로 이용가능한 데이터베이스, 예컨대 링커 데이터베이스 (ibi.vu.nl/programs/linkerdbwww)를 사용하여 찾을 수 있다. 링커 데이터베이스는 신규 융합 단백질에서 잠재적인 링커로서 제공되는 다기능 효소에서의 도메인 간 링커의 데이터베이스이다 (예를 들어, 문헌 [George et al., Protein Engineering 2002;15:871-9] 참조).
이러한 예시적인 폴리펩티드 링커의 변이체 형태는 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실이 폴리펩티드 링커 내로 도입되도록 하나 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가 또는 결실을, 폴리펩티드 링커를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 내로 도입함으로써 생성될 수 있음을 이해할 것이다. 돌연변이는 표준 기술, 예컨대 부위 지정 돌연변이 유발 및 PCR 매개된 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있다.
본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 적어도 하나의 아미노산 길이이고 다양한 길이일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드 링커는 약 1개 내지 약 50개의 아미노산 길이이다. 이러한 맥락에서 사용된 바와 같은, 용어 "약"은 +/- 2개의 아미노산 잔기를 나타낸다. 링커 길이는 양의 정수여야 하므로, 약 1개 내지 약 50개의 아미노산 길이는 1개 내지 48-52개의 아미노산 길이를 의미한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 약 10-20개의 아미노산 길이이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 약 15개 내지 약 50개의 아미노산 길이이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 약 20개 내지 약 45개의 아미노산 길이이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 약 15개 내지 약 25개의 아미노산 길이이다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 링커는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61개 또는 그 초과의 아미노산 길이이다.
폴리펩티드 링커는 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 폴리펩티드 서열 내로 도입될 수 있다. 변형은 DNA 서열 분석에 의해 확증될 수 있다. 플라스미드 DNA는 생산된 폴리펩티드의 안정적인 생산을 위해 숙주 세포를 형질전환시키는데 사용될 수 있다.
변경된 글리코실화를 수반한 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질
글리코실화 (예를 들어, O-연결된 또는 N-연결된 글리코실화)는, 예를 들어, 만노스 및 아시알로당단백질 수용체 및 다른 렉틴-유사 수용체에 의한 순환으로부터의 제거를 최소화함으로써 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 혈청 반감기에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, RNase-Fc 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 비글리코실화된, 탈글리코실화된, 또는 저글리코실화된 형태로 제조된다. 바람직하게, N-연결된 글리코실화가 변경되고 RNase-Fc 융합 단백질이 비글리코실화된다.
일부 실시양태에서, Asn-X-Ser/Thr (X는 Pro를 제외한 임의의 다른 자연적으로 발생하는 아미노산일 수 있음) 합의를 준수하는 RNase-Fc 융합 단백질에서의 모든 아스파라긴 잔기는 N-연결된 글리코실화의 수용자로서 제공되지 않는 잔기 (예를 들어, 세린, 글루타민)로 돌연변이되며, 그에 의해 단백질을 글리코실화하는 세포에서 합성될 때 RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화를 제거한다.
일부 실시양태에서, N-연결된 글리코실화 부위가 결여된 RNase-Fc 융합 단백질은 포유동물 세포에서 생산된다. 한 실시양태에서, 포유동물 세포는 CHO 세포이다. 따라서, 구체적 실시양태에서, 비글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질은 CHO 세포에서 생산된다.
다른 실시양태에서, N-글리코실화의 저하 또는 결여는, 예를 들어, 숙주 (예를 들어, 박테리아 예컨대 이. 콜라이), 글리코실화에 중요한 하나 이상의 효소가 결여되도록 조작된 포유동물 세포, 또는 글리코실화를 방지하는 작용제, 예컨대 투니카마이신 (Dol-PP-GlcNAc 형성의 억제제)으로 치료받은 포유동물 세포에서 RNase-Fc 융합 단백질을 생산함으로써 달성된다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 고 만노스 유형 당이 아니라, 복합 N-글리칸을 갖는 당단백질을 생산하도록 조작된 하등 진핵 생물에서 생산된다 (예를 들어, US2007/0105127 참조).
일부 실시양태에서, 글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질 (예를 들어, 포유동물 세포 예컨대 CHO 세포에서 생산된 단백질)은 화학적으로 또는 효소적으로 처리되어 하나 이상의 탄수화물 잔기 (예를 들어, 하나 이상의 만노스, 푸코스, 및/또는 N-아세틸글루코사민 잔기)를 제거하거나 또는 하나 이상의 탄수화물 잔기를 변형 또는 차폐한다. 이러한 변형 또는 차폐는 만노스 수용체, 및/또는 아시알로당단백질 수용체, 및/또는 다른 렉틴-유사 수용체에 대한 RNase-Fc 융합 단백질의 결합을 저하시킬 수 있다. 화학적 탈글리코실화는, 예를 들어, 문헌 [Sojar et al., JBC 1989;264:2552-9 및 Sojar et al., Methods Enzymol 1987;138:341-50]에 개시된 바와 같이, 트리플루오로메탄 술폰산 (TFMS)으로 RNase-Fc 융합 단백질을 처리하거나, 또는 문헌 [Sojar et al. (1987, 상기 참조)]에 개시된 바와 같이, 불화 수소로 처리함으로써 달성될 수 있다. RNase-Fc 융합 단백질로부터의 N-연결된 탄수화물의 효소적 제거는 문헌 [Thotakura et al. (Methods Enzymol 1987;138:350-9)]에 개시된 바와 같이, RNase-Fc 융합 단백질을 단백질 N-글리코시다제 (PNGase) A 또는 F로 처리함으로써 달성될 수 있다. 사용하기에 적합한 관련 기술분야에서 승인되고 있는 다른 상업적으로 입수가능한 탈글리코실화 효소는 엔도-알파-N-아세틸-갈락토사미니다제, 엔도글리코시다제 F1, 엔도글리코시다제 F2, 엔도글리코시다제 F3, 및 엔도글리코시다제 H를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 효소 중 하나 이상을 사용하여 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 탈글리코실화할 수 있다. 탈글리코실화를 위한 대안적 방법이, 예를 들어, US 8,198,063에 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 부분적으로 탈글리코실화된다. 부분적 탈글리코실화는 RNase-Fc 융합 단백질을 엔도글리코시다제 (예를 들어, 엔도글리코시다제 H)로 처리함으로써 달성될 수 있으며, 이는 N-연결된 고 만노스 탄수화물을 절단하지만 복합 유형 탄수화물은 절단하지 않고, 아스파라긴에 연결된 단일 GlcNAc 잔기를 남긴다. 엔도글리코시다제 H로 처리된 RNase-Fc 융합 단백질은 고 만노스 탄수화물이 결여되어, 간 만노스 수용체와의 상호 작용이 저하된다. 이러한 수용체는 말단 GlcNAc를 인식하지만, 단백질 표면 상의 단일 GlcNAc와의 생산적인 상호 작용의 가능성은 무손상 고 만노스 구조만큼 크지 않다.
다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화는, 예를 들어, 산화, 환원, 탈수, 치환, 에스테르화, 알킬화, 시알릴화, 탄소-탄소 결합 절단 등에 의해 변형되어, 혈액으로부터 RNase-Fc 융합 단백질의 제거를 저하시킨다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 탄수화물 구조를 변형시키기 위해 과아이오딘산염 및 소듐 보로하이드라이드로 처리된다. 과아이오딘산염 처리는 인접 디올을 산화시켜 탄소-탄소 결합을 절단하고 히드록실 기를 알데히드 기로 대체하며; 보로하이드라이드는 알데히드를 히드록실로 환원시킨다. 많은 당 잔기는 인접 디올을 포함하므로, 이러한 처리에 의해 절단된다. 과아이오딘산염 및 소듐 보로하이드라이드를 사용하여 연장된 혈청 반감기는 리소좀 효소 β-글루쿠로니다제를 이들 작용제로 순차적으로 처리함으로써 예시된다 (예를 들어, 문헌 [Houba et al. (1996) Bioconjug Chem 1996:7:606-11; Stahl et al. PNAS 1976;73:4045-9; Achord et al. Pediat. Res 1977;11:816-22; Achord et al. Cell 1978;15:269-78] 참조). 과아이오딘산염 및 소듐 보로하이드라이드로 처리하는 방법은 문헌 [Hickman et al., BBRC 1974;57:55-61]에 개시되어 있다. 리신의 혈청 반감기 및 조직 분포를 증가시키는 과아이오딘산염 및 시아노보로하이드라이드로 처리하는 방법은 문헌 [Thorpe et al. Eur J Biochem 1985;147:197-206]에 개시되어 있다.
한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 탄수화물 구조는 만노스 또는 아시알로당단백질 수용체 또는 다른 렉틴-유사 수용체에 의한 구조의 인식을 방해하는 하나 이상의 부가의 모이어티 (예를 들어, 탄수화물 기, 포스페이트 기, 알킬 기 등)의 부가에 의해 차폐될 수 있다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 잠재적인 글리코실화 부위는 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 핵산의 돌연변이에 의해 제거되며, 그에 의해 단백질을 글리코 실화하는 세포, 예를 들어, 포유동물 세포, 예컨대 CHO 세포에서 합성될 때 RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화를 저하시킨다 (저글리코실화). 일부 실시양태에서, 예를 들어, 저글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질이 증가된 활성을 나타내거나 또는 증가된 혈청 반감기에 기여하는 경우 그 안에 있는 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위를 돌연변이시킴으로써 RNase-Fc 융합 단백질을 선택적으로 저글리코실화하는 것이 바람직할 수 있다. 다른 실시양태에서, 예를 들어, 그러한 변형이 RNase-Fc 융합 단백질의 혈청 반감기를 개선시키는 경우, 특정 도메인에 N-글리코실화가 결여되도록 RNase-Fc 융합 단백질의 일부분을 저글리코실화하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 글리코실화 수용자 부근의 다른 아미노산을 변형시켜, 정상적으로 글리코실화될 것인 아미노산을 반드시 변화시키지 않고서도 글리코실화 효소에 대한 인식 모티프를 붕괴시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화는 글리코실화 부위를 도입함으로써 변경될 수 있다. 예를 들어, RNase-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열은 Asn-X-Ser/Thr (X는 프롤린 이외의 임의의 아미노산임)의 N-연결된 글리코실화를 위한 컨센서스 서열을 도입하도록 변형될 수 있다. 부가의 N-연결된 글리코실화 부위는 RNase-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열 전체에 걸쳐 어디에서나 부가될 수 있다. 바람직하게, 글리코실화 부위는 RNase-Fc 융합 단백질의 활성을 실질적으로 저하시키지 않는 아미노산 서열 내의 위치에 도입된다.
O-연결된 글리코실화 부위의 부가는 단백질, 예컨대 성장 호르몬, 난포 자극 호르몬, IGFBP-6, 인자 IX, 및 많은 다른 단백질의 혈청 반감기를 변경하는 것으로보고되었다 (예를 들어, 문헌 [Okada et al., Endocr Rev 2011;32:2-342; Weenen et al., J Clin Endocrinol Metab 2004;89:5204-12; Marinaro et al., European Journal of Endocrinology 2000;142:512-6; US 2011/0154516]에 개시된 바와 같음). 따라서, 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 O-연결된 글리코실화 (세린/트레오닌 잔기 상에서)가 변경된다. O-연결된 글리코실화를 변경하는 방법은 관련 기술분야에서 일상적이며, 예를 들어, 베타 제거 (예를 들어, 문헌 [Huang et al., Rapid Communications in Mass Spectrometry 2002;16:1199-204; Conrad, Curr Protoc Mol Biol 2001; Chapter 17:Unit17.15A; Fukuda, Curr Protoc Mol Biol 2001;Chapter 17;Unit 17.15B; Zachara et al., Curr Protoc Mol Biol 2011; Unit 17.6] 참조)에 의해; 상업적으로 입수가능한 키트 [예를 들어, 글리코프로파일(GlycoProfile™) 베타-제거 키트, 시그마(Sigma)]에 의해; 또는 Gal β1-3GalNAc 및/또는 GlcNAc β1-3GalNAc만이 남을 때까지, 예컨대 β1-4 갈락토시다제 및 β-N-아세틸글루코사미니다제이나 이에 제한되지는 않는 일련의 엑소글리코시다제로 RNase-Fc 융합 단백질을 처리한 다음, 예를 들어, 엔도-α-N-아세틸갈락토사미니다제 (즉, O-글리코시다제)로 처리함으로써 달성될 수 있다. 이러한 효소는, 예를 들어, 뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs)로부터 상업적으로 입수가능하다. 또 다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은, 예를 들어, 문헌 [Okada et al. (상기 참조), Weenen et al. (상기 참조)], US2008/0274958; 및 US2011/0171218에 개시된 바와 같이 RNase-Fc 융합 단백질에 O-연결된 글리코실화를 도입하도록 변경된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 O-연결된 글리코실화 컨센서스 부위, 예컨대 CXXGGT/S-C (서열식별번호: 59) (문헌 [van den Steen et al., In Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, Michael Cox, ed., 1998;33:151-208]), NST-E/D-A (서열식별번호: 60), NITQS (서열식별번호: 61), QSTQS (서열식별번호: 62), D/E-FT-R/K-V (서열식별번호: 63), C-E/D-SN (서열식별번호: 64), 및 GGSC-K/R (서열식별번호: 65)이 RNase-Fc 융합 단백질 내로 도입된다. 부가의 O-연결된 글리코실화 부위는 RNase-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열 전체에 걸쳐 어디에서나 부가될 수 있다. 바람직하게, 글리코실화 부위는 RNase-Fc 융합 단백질의 활성을 실질적으로 저하시키지 않는 아미노산 서열 내의 위치에 도입된다. 대안적으로, O-연결된 당 모이어티는, 예를 들어, WO 87/05330 및 문헌 [Aplin et al., CRC Crit Rev Biochem 1981;259-306]에 기재된 바와 같이 RNase-Fc 융합 단백질에서의 아미노산을 화학적으로 변형시킴으로써 도입된다.
일부 실시양태에서, N-연결된 글리코실화 부위와 O-연결된 글리코실화 부위 둘 다는 RNase-Fc 융합 단백질, 바람직하게 RNase-Fc 융합 단백질의 활성을 실질적으로 저하시키지 않는 아미노산 서열 내의 위치에 도입된다.
RNase-Fc 융합 단백질에서의 글리코실화 (예를 들어, N-연결된 또는 O-연결된 글리코실화)를 도입, 저하 또는 제거하고, 글리코실화 상태에서의 이러한 변형이 RNase-Fc 융합 단백질의 활성 또는 혈청 반감기를 증가 또는 감소시키는지의 여부를 관련 기술분야에서의 일상적인 방법을 사용하여 결정하는 것은 통상의 기술자의 능력 내에 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 변경된 글리코형을 포함할 수 있다 (예를 들어, 저푸코실화된 또는 푸코스가 없는 글리칸).
일부 실시양태에서, 변경된 글리코실화를 수반한 RNase-Fc 융합 단백질은 상응하는 글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질 (예를 들어, 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위가 돌연변이되지 않은 RNase-Fc 융합 단백질)에 대비하여 적어도 약 1.5배, 예컨대 적어도 3배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 50배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1000배, 또는 1000배 또는 그 초과로 증가되는 혈청 반감기를 갖는다. 관련 기술분야에서 승인되고 있는 일상적인 방법을 사용하여 변경된 글리코실화 상태를 수반한 RNase-Fc 융합 단백질의 혈청 반감기를 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 변경된 글리코실화를 수반한 RNase-Fc 융합 단백질 (예를 들어, 비글리코실화된, 탈글리코실화된, 또는 저글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질)은 상응하는 글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질 (예를 들어, 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위가 돌연변이되지 않은 RNase-Fc 융합 단백질)의 활성의 적어도 50%, 예컨대 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 또는 100%를 보유한다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화 상태를 변경하는 것은 활성을 직접적으로 증가시킴으로써, 또는 생체 이용률 (예를 들어, 혈청 반감기)을 증가시킴으로써 활성을 증가시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 변경된 글리코실화를 수반한 RNase-Fc 융합 단백질의 활성은 상응하는 글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질 (예를 들어, 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위가 돌연변이되지 않은 RNase-Fc 융합 단백질)에 대비하여 적어도 1.3배, 예컨대 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 2.5배, 적어도 3배, 적어도 3.5배, 적어도 4배, 적어도 4.5배, 적어도 5배, 적어도 5.5배, 적어도 6배, 적어도 6.5배, 적어도 7배, 적어도 7.5배, 적어도 8배, 적어도 8.5배, 적어도 9배, 적어도 9.5배, 또는 10배 또는 그 초과만큼 증가된다.
통상의 기술자는 관련 기술분야에서 승인되고 있는 방법을 사용하여 RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화 상태를 쉽게 결정할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 글리코실화 상태는 질량 분석법을 사용하여 결정된다. 다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질이 저글리코실화되는지의 여부를 결정하기 위해 콘카나발린 A (Con A)와의 상호 작용을 평가할 수 있다. 저글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질은 상응하는 글리코실화된 RNase-Fc 융합 단백질과 비교할 때 Con A-세파로스에 대한 저하된 결합을 나타낼 것으로 예상된다. SDS-PAGE 분석을 또한 사용하여 저글리코실화된 단백질과 상응하는 글리코실화된 단백질의 이동성을 비교할 수 있다. 저글리코실화된 단백질은 글리코실화된 단백질과 비교해서 SDS-PAGE에서의 더 큰 이동성을 가질 것으로 예상된다. 단백질 글리코실화 상태를 분석하기 위한 관련 기술분야에서 승인되고 있는 다른 적합한 방법은, 예를 들어, 문헌 [Roth et al., International Journal of Carbohydrate Chemistry 2012;1-10]에 개시되어 있다.
상이한 글리코실화 상태를 수반한 RNase-Fc 융합 단백질의 약동학, 예컨대 혈청 반감기는 일상적인 방법을 사용하여, 예를 들어, RNase-Fc 융합 단백질을 마우스에, 예를 들어, 정맥내로 도입하고, 미리 결정된 시점에서 혈액 샘플을 채취하며, 샘플에서의 RNase-Fc 융합 단백질의 수준 및/또는 활성을 검정 및 비교함으로써 검정될 수 있다.
RNase-Fc 융합 단백질을 제조하는 방법
RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 재조합 DNA 기술을 사용하여 형질전환되거나 또는 형질감염된 숙주 세포에서 만들어진다. 이를 위해, RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 재조합 DNA 분자를 제조한다. 이러한 DNA 분자를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 서열은 적합한 제한 효소를 사용하여 DNA로부터 절제될 수 있었다. 대안적으로, DNA 분자는 화학적 합성 기술, 예컨대 포스포르아미데이트 방법을 사용하여 합성될 수 있었다. 또한, 이들 기술의 조합을 사용할 수 있었다.
본 발명은 또한 적절한 숙주에서 RNase-Fc 융합 단백질을 발현할 수 있는 벡터를 포함한다. 이러한 벡터는 적절한 발현 제어 서열에 작동가능하게 커플링된 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자를 포함한다. DNA 분자가 벡터 내로 삽입되기 전 또는 후에, 이러한 작동 연결에 영향을 미치는 방법은 널리 공지되어 있다. 발현 제어 서열은 프로모터, 활성화제, 인핸서, 작동인자, 리보솜 뉴클레아제 도메인, 출발 신호, 정지 신호, 캡 신호, 폴리아데닐화 신호, 및 전사 또는 번역의 제어와 관련된 다른 신호를 포함한다.
그 결과로 생성된, 그 위에 DNA 분자를 갖는 벡터는 적절한 숙주를 형질전환 또는 형질감염시키는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질은 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 DNA를 포함하는 2개 이상의 발현 벡터를 적절한 숙주로 공동-형질감염 또는 공동-형질전환함으로써 만들어질 수 있다. 이러한 형질전환 또는 형질감염은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
다수의 이용가능하고 널리 공지된 숙주 세포 중 임의의 것이 본 발명의 실시에 사용될 수 있다. 특정한 숙주의 선택은 관련 기술분야에 의해 승인되는 다수의 요인에 의존적이다. 이는, 예를 들어, 선택된 발현 벡터와의 상용성, DNA 분자에 의해 코딩된 RNase-Fc 융합 단백질의 독성, 형질전환 또는 형질감염의 속도, RNase-Fc 융합 단백질의 회수 용이성, 발현 특징, 생물학적 안전성 및 비용을 포함한다. 이들 요인의 균형은 모든 숙주가 특정한 DNA 서열의 발현에 동등하게 효과적일 수 없다는 이해와 함께 이루어져야 한다. 이러한 일반적인 지침 내에서, 유용한 미생물 숙주는 박테리아 (예컨대 이. 콜라이), 효모 (예컨대 사카로마이세스) 및 다른 진균, 곤충, 식물, 배양중인 포유동물 (인간 포함) 세포, 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 숙주를 포함한다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 CHO 세포에서 생산된다.
다음으로, 형질전환 또는 형질감염된 숙주를 배양하고 정제한다. 숙주 세포는 원하는 화합물이 발현되도록 통상적인 발효 또는 배양 조건 하에서 배양될 수 있다. 이러한 발효 및 배양 조건은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 마지막으로, RNase-Fc 융합 단백질은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 배양물로부터 정제된다.
화합물은 또한 합성 방법에 의해 만들어질 수 있다. 예를 들어, 고체상 합성 기술이 사용될 수 있다. 적합한 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 문헌 [Merrifield (1973), Chem. Polypeptides, pp. 335-61 (Katsoyannis and Panayotis eds.); Merrifield (1963), J. Am. Chem. Soc. 85: 2149; Davis et al., Biochem Intl 1985;10: 394-414; Stewart and Young (1969), Solid Phase Peptide Synthesis; 미국 특허 번호 3,941,763; Finn et al. (1976), The Proteins (3rd ed.) 2: 105-253; 및 Erickson et al. (1976), The Proteins (3rd ed.) 2: 257-527]에 기재된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 펩티드를 함유하거나 또는 비-펩티드 기를 함유하는 화합물은 널리 공지된 유기 화학 기술에 의해 합성될 수 있다.
분자 발현/합성의 다른 방법은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
제약 조성물
특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 단독으로 투여된다. 특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 다른 치료제의 투여 전에 투여된다. 특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 다른 치료제의 투여와 공동으로 투여된다. 특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 다른 치료제의 투여에 후속하여 투여된다. 다른 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 적어도 하나의 다른 치료제의 투여 전에 투여된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 다른 작용제/화합물과 조합된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질과 다른 작용제는 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질과 다른 작용제는 동시에 투여되지 않으며, RNase-Fc 융합 단백질은 다른 작용제가 투여되기 전 또는 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 동일한 예방 기간, 장애 발생, 및/또는 치료 기간 동안 RNase-Fc 융합 단백질과 다른 작용제 둘 다를 받는다.
본 개시내용의 제약 조성물은 조합 요법으로, 즉 다른 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조합 요법은 RNase-Fc 융합 단백질을 적어도 하나의 다른 작용제와 조합하여 포함한다. 작용제는 시험관내 합성적으로 제조된 화학적 조성물, 항체, 항원 결합 영역, 및 그의 조합 및 접합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 작용제는 효능제, 길항제, 알로스테릭 조정제 또는 독소로서 작용할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 RNase-Fc 융합 단백질을 제약상 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아주반트와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 RNase-Fc 융합 단백질 및 치료상 유효량의 적어도 하나의 부가의 치료제를 제약상 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아주반트와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 허용되는 제형 물질은 바람직하게 이용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이다. 일부 실시양태에서, 제형 물질(들)은 s.c. 및/또는 I.V. 투여를 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은, 예를 들어, 이러한 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 냄새, 무균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 적합한 제형 물질은 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항미생물제; 항산화제 (예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제 (예컨대 붕산염, 중탄산염, 트리스-HCl, 구연산염, 인산염 또는 다른 유기산); 증량제 (예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 착화제 (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충전제; 모노사카라이드; 디사카라이드; 및 다른 탄수화물 (예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질 (예컨대 젤라틴); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저 분자량 폴리펩티드; 염 형성 반대이온 (예컨대 나트륨); 보존제 (예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 펜에틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알콜 (예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제 (예컨대 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 증강제 (예컨대 수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 증강제 (예컨대 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 제약 아주반트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1995)). 일부 실시양태에서, 제형은 하기를 포함한다: PBS; 20 mM NaOAC, pH 5.2, 50 mM NaCl; 및/또는 10 mM NAOAC, pH 5.2, 9% 수크로스.
특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질 및/또는 치료 분자는 관련 기술분야에 공지된 반감기 연장 비히클에 연결된다. 이러한 비히클은 폴리에틸렌 글리콜, 글리코겐 (예를 들어, RNase-Fc 융합 단백질의 글리코실화), 및 덱스트란을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 비히클은, 예를 들어, 미국 출원 번호 09/428,082에 기재되어 있고, 이는 현재 미국 특허 번호 6,660,843 및 공개된 PCT 출원 번호 WO 99/25044이다.
특정 실시양태에서, 최적의 제약 조성물은, 예를 들어, 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투여량에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 상기 참조]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 이러한 조성물은 본 개시내용의 융합 단백질의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 청소율에 영향을 미칠 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물 중의 1차 비히클 또는 담체는 본질적으로 수성 또는 비-수성일 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용 수, 생리 식염수 또는 인공 뇌척수액일 수 있으며, 가능하게는 비경구 투여용 조성물에서 흔한 다른 물질로 보충될 수 있다. 일부 실시양태에서, 식염수는 등장성 인산염 완충 식염수를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 pH 7.0-8.5의 트리스 완충제, 또는 약 pH 4.0-5.5의 아세테이트 완충제를 포함하며, 이는 소르비톨 또는 그에 대한 적합한 대체물을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물은 원하는 순도를 갖는 선택된 조성물을 임의적 제형화제 (상기 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences] 참조)와 혼합함으로써 저장을 위해 동결 건조된 케이크 또는 수용액의 형태로 제조될 수 있다. 추가로, 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물은 적절한 부형제 예컨대 수크로스를 사용하여 동결 건조물로서 제형화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 흡입 또는 소화관을 통한 전달, 예컨대 경구 투여를 위해 선택될 수 있다. 이러한 제약상 허용되는 조성물의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다.
특정 실시양태에서, 제형 구성요소는 투여 부위에 허용되는 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 완충제는 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 유지하는데 사용된다.
특정 실시양태에서, 비경구 투여가 고려되는 경우, 치료 조성물은 제약상 허용되는 비히클 중에, 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서 원하는 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는, 발열원이 없는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. 특정 실시양태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질이 적절하게 보존된 멸균 등장 용액으로서 제형화되는 멸균 증류수이다. 특정 실시양태에서, 그 제조는 주사가능한 마이크로스피어, 생침식성 입자, 중합체성 화합물 (예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜 산), 비드 또는 리포솜과 같은 작용제를 사용하여 원하는 분자를 제형화하는 것을 포함할 수 있으며, 이러한 작용제는 데포 주사를 통해 전달될 수 있는 산물의 제어식 또는 지속적 방출을 제공할 수 있다. 특정 실시양태에서, 히알루론산이 또한 사용될 수 있으며, 이는 순환 시 지속 기간을 촉진시키는 효과를 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 이식가능한 약물 전달 장치를 사용하여 원하는 분자를 도입할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 흡입용으로 제형화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질은 흡입용 건조 분말로서 제형화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 흡입 용액은 에어로졸 전달을 위한 추진제와 함께 제형화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 용액을 분무할 수 있다. 폐 투여는 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 설명하는 PCT 출원 번호 PCT/US94/001875에 추가로 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 제형은 경구로 투여될 수 있는 것으로 고려된다. 특정 실시양태에서, 이러한 방식으로 투여되는, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질은 고체 투여 형태, 예컨대 정제 및 캅셀제의 배합에 통상적으로 사용되는 담체를 수반하거나 수반하지 않으면서 제형화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 캡슐은 생체 이용률이 최대화되고 미리 전신 분해되는 것이 최소화될 때 위장관 내의 일정 지점에서 제형의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. 특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질 및/또는 임의의 부가의 치료제의 흡수를 촉진시키기 위한 적어도 하나의 부가의 작용제가 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 희석제, 향미제, 저 융점 왁스, 식물성 오일, 윤활제, 현탁제, 정제 붕해제 및 결합제를 이용할 수도 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 정제의 제조에 적합한 무독성 부형제와의 혼합물에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서, 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 정제를 멸균 수, 또는 또 다른 적절한 비히클에 용해시킴으로써, 용액을 단위 용량 형태로 제조할 수 있다. 특정 실시양태에서, 적합한 부형제는 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨 또는 중탄산나트륨, 락토스 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴, 또는 아카시아; 또는 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
지속-전달 또는 제어-전달 제형에서 적어도 하나의 부가의 치료제(들)를 포함하거나 포함하지 않으면서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제형을 포함한 부가의 제약 조성물이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 특정 실시양태에서, 다양한 다른 지속-전달 또는 제어-전달 수단, 예컨대 리포솜 담체, 생침식성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사제를 제형화하는 기술이 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 제약 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체성 마이크로입자의 제어 방출을 설명하는 PCT 출원 번호 PCT/US93/00829를 참조한다. 특정 실시양태에서, 지속 방출 제제는 성형품 형태, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919 및 EP 058,481), L-글루타민산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체 (문헌 [Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556 (1983)]), 폴리 (2-히드록시에틸-메타크릴레이트) (문헌 [Langer et al., J Biomed Mater Res, 15: 167-277 (1981) 및 Langer, Chem Tech, 12:98-105 (1982)]), 에틸렌 비닐 아세테이트 (상기 문헌 [Langer et al.] 참조) 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산 (EP 133,988)을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 지속 방출 조성물은 또한 관련 기술분야에 공지된 여러 방법 중 임의의 것에 의해 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Eppstein et al., PNAS, 82:3688-3692 (1985)]; EP 036,676; EP 088,046 및 EP 143,949를 참조한다.
생체내 투여에 사용되는 제약 조성물은 전형적으로 멸균성이다. 특정 실시양태에서, 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결 건조되는 특정 실시양태에서, 이러한 방법을 사용한 멸균은 동결 건조 및 재구성 전 또는 후에 시행될 수 있다. 특정 실시양태에서, 비경구 투여용 조성물은 동결 건조된 형태 또는 용액으로 저장될 수 있다. 특정 실시양태에서, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어, 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 봉지 또는 바이알 내에 배치된다.
특정 실시양태에서, 일단 제약 조성물이 제형화되면, 이는 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체로서, 또는 탈수되거나 또는 동결 건조된 분말로서 멸균 바이알에 저장될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 제형은 즉시 사용가능한 형태로 또는 투여 전에 재구성되는 형태 (예를 들어, 동결 건조됨)로 저장될 수 있다.
특정 실시양태에서, 단일 용량 투여 단위를 생산하기 위한 키트가 제공된다. 특정 실시양태에서, 키트는 건조된 단백질을 갖는 제1 용기와 수성 제형을 갖는 제2 용기 둘 다를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 단일 및 다중 챔버의 미리 충전된 시린지 (예를 들어, 액체 시린지 및 리오시린지)를 함유하는 키트가 포함된다.
특정 실시양태에서, 치료상 이용되는, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물의 유효량은, 예를 들어, 치료적 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 특정 실시양태에 따른 치료를 위한 적절한 투여량 수준이 부분적으로는, 전달된 분자, RNase-Fc 융합 단백질이 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서 사용되는 적응증, 투여 경로, 및 환자의 크기 (체중, 체 표면 또는 기관 크기) 및/또는 상태 (연령 및 일반적 건강)에 따라 달라질 것이라는 것을 인지할 것이다. 특정 실시양태에서, 임상의는 최적의 치료 효과를 수득하기 위해 투여량을 적정하고 투여 경로를 변형시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 전형적인 투여량은 상기 언급된 요인에 따라, 약 0.5 mg/kg 내지 최대 약 50 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여량은 약 5-10 mg/kg, 약 2-8 mg/kg, 약 3-6 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 범위일 수 있다.
특정 실시양태에서, 투약 빈도는 사용된 제형 중의 RNase-Fc 융합 단백질 및/또는 임의의 부가의 치료제의 약동학적 파라미터를 고려할 것이다. 특정 실시양태에서, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 조성물을 투여할 것이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 따라서, 단일 용량으로서, 또는 시간 경과에 따른 2회 이상의 용량으로서 (동일한 양의 원하는 분자를 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있음), 또는 체내이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가의 개선은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 일상적으로 이루어지며, 이들에 의해 일상적으로 수행되는 작업 범위 내에있다. 특정 실시양태에서, 적절한 용량-반응 데이터를 사용하여 적절한 투여량을 확인할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물의 투여 경로는 공지된 방법에 따르며, 예를 들어, 경구로, 정맥내, 복강내, 뇌내 (실질내), 뇌실내, 근육내, 피하로, 안구내, 동맥내, 문맥내, 또는 병변내 경로에 의한 주사를 통해; 지속 방출 시스템에 의해 또는 체내이식 장치에 의해서이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 볼루스 주사에 의해 또는 주입에 의해 연속적으로, 또는 체내이식 장치에 의해 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 조성물은 그 위로 원하는 분자가 흡수되거나 캡슐화된 막, 스폰지 또는 또 다른 적절한 물질의 체내이식을 통해 국부적으로 투여될 수 있다. 체내이식 장치가 사용되는 특정 실시양태에서, 이러한 장치는 임의의 적합한 조직 또는 기관 내로 체내이식될 수 있고, 원하는 분자의 전달은 확산, 점진적 방출 볼루스, 또는 연속 투여를 통해 이루어질 수 있다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 생체외 방식으로 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 예에서, 환자로부터 제거된 세포, 조직 및/또는 기관은 적어도 하나의 부가의 치료제를 포함하거나 포함하지 않으면서 RNase-Fc 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물에 노출되고, 그 후 상기 세포, 조직 및/또는 또는 기관은 후속적으로 환자에게 다시 체내이식된다.
특정 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질 및/또는 임의의 부가의 치료제는 폴리펩티드를 발현 및 분비하기 위해 본원에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여, 유전적으로 조작된 특정 세포를 체내이식함으로써 전달될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있고, 자가, 이질적 또는 이종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 세포는 불멸화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 면역 반응의 기회를 감소시키기 위해, 세포를 캡슐화하여 주변 조직의 침윤을 회피할 수 있다. 특정 실시양태에서, 캡슐화 물질은 전형적으로, 단백질 산물(들)의 방출을 허용하지만 환자의 면역 체계에 의한 또는 주변 조직으로부터의 다른 유해 요인에 의한 세포의 파괴를 방지하는 생체적합성 반투과성 중합체성 인클로저 또는 막이다.
시험관내 검정
RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 효능을 평가하기 위해 관련 기술분야에 공지된 다양한 시험관내 검정이 사용될 수 있다.
예를 들어, 정상 대상체로부터의 배양된 인간 PBMC, 루푸스 환자 PBMC, 또는 쇼그렌의 PBMC를 단리하고, 배양하며, RNase-Fc 융합 단백질의 존재 또는 부재 하에 다양한 자극 (예를 들어, TLR 리간드, 공동 자극 항체, 면역 복합체, 및 정상 또는 자가면역 혈청)으로 처리한다. 자극된 세포에 의한 시토카인 생산은 다양한 시토카인 (예를 들어, IL-6, IL-8, IL-10, IL-4, IFN-감마, 및 TNF-알파)에 대한 상업적으로 입수가능한 시약, 예컨대 바이오레전드(Biolegend; 미국 캘리포니아주 샌디에이고)로부터의 항체 쌍 키트를 사용하여 측정될 수 있다. 배양 상청액은 RNase-Fc 융합 단백질이 시토카인 생산에 미치는 영향을 결정하기 위해 상기 검정에 적절한 바와 같은 다양한 시점 (예를 들어, 24, 48시간, 또는 그 이후 시점)에서 수거된다. IFN-알파 생산은, 예를 들어, PBL 인터페론 공급원 (미국 뉴저지주 피스카타웨이)로부터 입수가능한 항-인간 IFN-알파 항체 및 표준 곡선 시약을 사용하여 측정된다. 인간 림프구 하위집단 (단리된 단핵구, B 세포, pDC, T 세포 등)을 사용하여 유사한 검정을 수행하며; 예를 들어, 밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotech; 미국 캘리포니아주 오번)으로부터 입수가능한 상업적으로 입수가능한 자기 비드 기반 단리 키트를 사용하여 정제된다.
다색 유동 세포계수법은 관련 기술분야에서 승인되고 있는 일상적인 방법을 사용하여 자극 후 다양한 시점에서 PBMC 또는 단리된 세포 하위집단에서의 림프구 활성화 수용체 예컨대 CD5, CD23, CD69, CD80, CD86, 및 CD25의 발현을 측정함으로써 면역 세포 활성화에 대한 RNase-Fc 융합 단백질의 효과를 평가하는데 사용될 수 있다.
RNase-Fc 융합 단백질의 효능은 또한, 예를 들어, 문헌 [Ahlin et al., Lupus 2012:21:586-95; Mathsson et al., Clin Expt Immunol 2007;147:513-20; 및 Chiang et al., J Immunol 2011;186:1279-1288]에 기재된 바와 같이, SLE 또는 쇼그렌의 환자 혈청을 정상 인간 pDC와 함께 인큐베이션하여 IFN 출력을 활성화함으로써 테스트될 수 있다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, SLE 또는 쇼그렌 환자 혈청에서 순환 핵산-함유 면역 복합체는 Fc 수용체 매개된 세포내 이입를 통한 pDC 엔도솜 내로의 핵산 항원 진입을 촉진시킨 다음, 엔도솜 TLR 7, 8 및 9에 대한 핵산의 결합 및 그의 활성화를 촉진시킨다. RNase-Fc 융합 단백질의 영향을 평가하기 위해, SLE 또는 쇼그렌 환자 혈청 또는 혈장을 RNase-Fc 융합 단백질로 미리 처리한 다음, 건강한 지원자로부터 단리된 pDC 세포의 배양물에 부가한다. 이어서, 생산된 IFN-α의 수준은 여러 시점에서 결정된다. 핵산 함유 면역 복합체를 분해함으로써, 유효한 RNase-Fc 융합 단백질은 생산되는 IFN-α의 양을 저하시킬 것으로 예상된다.
RNase-Fc 융합 단백질의 유효성은 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질로 처리된 세포로부터의 검정 결과를 대조군 제형으로 처리된 세포로부터의 검정 결과와 비교함으로써 입증된다. 처리 후, 상기 기재된 다양한 마커 (예를 들어, 시토카인, 세포-표면 수용체, 증식)의 수준은 일반적으로, 치료 이전에 존재하는 마커 수준에 대비하여, 또는 대조군에서 측정된 수준에 대비하여 유효한 RNase-Fc 융합 단백질 처리된 군에서 개선된다.
치료 방법
본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 자가면역 장애 또는 비정상 면역 반응의 치료에 특히 유효하다. 이와 관련하여, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 외부와 자가항원 둘 다에 대한 원치 않는 면역 반응을 제어, 억제, 조정, 치료 또는 제거하기 위해 사용되는 것으로 인지될 것이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 자가면역 장애를 가진 환자에서 피로를 치료하거나 또는 저하시키는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 피로는 쇼그렌 증후군 연관 피로이다.
일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질, 예컨대 RNase-Fc 융합 단백질을 자가면역 질환의 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 유효량 또는 충분한 양으로 투여함으로써 상기 질환을 치료하는, 인간 환자에서 자가면역 질환을 치료하는데 유용하다. 원하는 효과를 달성하기에 적합한 임의의 투여 경로가 본 개시내용에 의해 고려된다 (예를 들어, 정맥내, 근육내, 피하). 질환 병태의 치료는 장기적 또는 단기적이거나, 또는 심지어 일시적인 유익한 효과일 수 있는, 상기 병태와 연관된 증상에서의 감소를 초래할 수 있다. 일부 실시양태에서, 쇼그렌병의 치료는 상기 질환 또는 병태와 연관된 피로에서의 감소를 초래한다.
생화학적 검정
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질은 쇼그렌 증후군의 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 투여되어 쇼그렌 증후군을 치료한다. 일부 측면에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효성은 위약과 비교하여 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 인간 환자에서 IFN-알파 수준, IFN-알파 반응 유전자 수준, 자가항체 역가, 신장 기능 및 병리학, 및/또는 순환 면역 복합체 수준을 비교함으로써 입증된다.
예를 들어, 치료를 필요로 하는 인간 대상체 (예를 들어, 미국-유럽 합의 쇼그렌의 분류 기준을 충족하는 환자)가 선택되거나 확인된다. 대상체는, 예를 들어, 쇼그렌 증후군, 예를 들어, pSS의 원인 또는 증상을 저하시킬 필요가 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 쇼그렌 증후군을 앓고 있고 피로를 저하시킬 필요가 있다. 대상체의 확인은 임상 환경에서, 또는 다른 곳, 예를 들어, 대상체의 집에서 대상체가 셀프-테스팅 키트를 사용하여 발생할 수 있다.
기준선 (제1일)에, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 적합한 제1 용량이, 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다. RNase-Fc 융합 단백질은 본원에 기재된 바와 같이 제형화된다. 환자의 상태는 기준선 (제1일) 및 제1 용량 후 일정 기간 후, 예를 들어, 제8일, 제15일, 제29일, 제43일, 제57일, 제71일, 제85일, 제99일 또는 연구의 종료 시에, 예를 들어, IFN-알파 수준, IFN-알파 반응 유전자 수준, 자가항체 역가, 신장 기능 및 병리학, 및/또는 순환 면역 복합체 수준을 측정함으로써 평가된다. 다른 관련 기준도 측정할 수 있다. 용량의 횟수 및 강도는 대상체의 필요에 따라 조정된다. 치료 후, 대상체의 IFN-알파 수준, IFN-알파 반응 유전자 수준, 자가항체 역가, 신장 기능 및 병리학, 및/또는 순환 면역 복합체 수준은 치료 이전에 존재하는 수준에 대비하여, 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않은/대조군 대상체에서 측정된 수준에 대비하여 더 낮아지고/거나 개선된다.
피로 검정
다양한 환자 보고형 결과 (PRO) 기구가 만성 질환을 앓고 있는 대상체에서의 피로 측정에 사용 및 검증되었다. 이러한 PRO는 관련 기술분야에 공지되어 있으며 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 효능을 평가하는데 사용될 수 있다.
EULAR 쇼그렌 증후군 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI)
류마티즘에 대항한 유럽 연맹 (EULAR) 쇼그렌 증후군 (SS) 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI)는 원발성 쇼그렌 증후군을 가진 환자의 증상을 평가하기 위해 개발되었다 (Seror et al., Ann. Rheum. Dis. 2011;70:968-972). ESSPRI는 원발성 쇼그렌 증후군의 중요하고 장애를 일으키는 모든 증상: 건조증, 사지 통증 및 피로를 측정하기 위해 포괄적 점수로서 개발되었다. ESSPRI는 내용 타당도를 상실하지 않고서도 각각의 증상을 측정하기에 충분한 것으로 나타났으며, 점수 계산이 용이하다.
ESSPRI는 원발성 쇼그렌 증후군을 가진 환자의 증상을 평가하는 환자 관리 설문지이다. 이러한 설문지는 하기 증상: (1) 건조증, (2) 사지 통증 및 (3) 피로 각각에 대해 하나씩 3가지 척도를 포함한다. ESSPRI의 각각의 구성요소는 단일 0-10 숫자 척도로 측정되며 포괄적 ESSPRI 점수는 3가지 척도의 평균이다: (건조증 + 사지 통증 + 피로)/3. ESSPRI 점수에서 적어도 1점의 감소는 임상적으로 의미가 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물을 사용한 치료 후 환자에서의 피로 상의 개선을 평가함으로써 입증된다. 치료 후, 피로는 치료 전 환자에서의 피로 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 ESSPRI에 의해 측정된 바와 같이 환자에서 일반적으로 저하된다.
FACIT-피로
만성 질병 요법의 기능적 평가 피로 척도 (FACIT-피로)는 지난 주 동안 통상의 일상적인 활동을 하는 동안 개인의 피로 수준을 평가하는데 사용된다. FACIT- 피로 설문지와 채점 및 해석 자료는 FACIT.org (미국 일리노이주 엘머스트)로부터 입수가능하다. FACIT-피로 설문지는 일반적이고 표적화된 조치의 어레이를 제공한다. FACIT 피로 척도는 다양한 만성 건강 상태를 가진 환자에서의 변화에 대한 높은 내부 타당성, 높은 테스트-리테스트 신뢰성, 신뢰성 및 감수성, 사용 용이성, 및 다양한 환경에서의 사용을 포함하여 많은 혜택을 가지고 있다 (K.F. Tennant, Try This: best Practices in Nursing Care to Older Adults, Issue 30, 2012; Chandran et al., Ann. Rheum. Dis. 2007; 66: 936-939).
FACIT-피로는 원래 암을 가진 환자에서의 피로를 측정하기 위해 개발된 13개 항목 설문지이며, 현재에는 쇼그렌병을 가진 환자에서 피로를 측정하는데 사용된다. 환자는 0부터 4까지 점수가 매겨진 13개의 질문에 답해야 한다 (0=전혀 아님, 1=조금, 2=다소, 3=상당히, 4=매우 많이). 피로 척도는 13개 항목을 가지며, 가능한 가장 높은 점수는 52이다. 피로 척도의 점수가 더 높을수록 피로 수준이 더 낮아지고 삶의 질이 향상된다.
FACIT-피로 점수를 계산하기 위해, 부정적으로 표현된 질문에 대한 반응 점수가 반전되고, 이어서 13개 항목 반응이 부가된다. 반응이 있는 11개 항목의 점수가 반전되고 (반응이 누락되지 않은 경우, 항목 점수=4-반응), 2개의 항목 (항목 7-8)에 대한 반응은 변화되지 않는다. 모든 항목이 부가되어 점수가 더 높을수록 피로가 줄어 든다. 개별 질문을 건너 뛰는 경우, 점수는 척도에 있는 다른 답변의 평균을 사용하여 비례 배분된다.
FACIT-피로=13*[합계(반전된 항목)+합계(항목 7-8)]/답변 항목 수
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질로 치료받은 환자에서의 피로 상의 개선을 평가함으로써 입증된다. 치료 후, 피로는 치료 전 환자에서의 피로 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 FACIT 피로 척도에 의해 측정된 바와 같이 환자에서 일반적으로 저하된다.
피로의 프로파일
피로의 프로파일 (ProF)은 원발성 쇼그렌 증후군과 연관된 피로를 특징규명하는데 유효한 평가 도구를 확립하기 위해 개발되었다. 따라서, 원발성 쇼그렌 증후군을 가진 환자가 피로, 불편함, 및 통증에 대한 불만을 표현하기 위해 사용하는 단어가 ProF 설문지에 사용되었다. ProF는 원발성 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서의 피로와 전반적인 불편함의 중증도를 측정하기 위한 신뢰할 수 있고 유효한 기구인 것으로 나타났다.
ProF는 2개의 도메인, 즉 신체적 피로에 대한 1개와 정신적 피로에 대한 1개로 나누어진 16개 항목의 자기-기입식 설문지이다. 신체적 피로 도메인은 하기 4가지 국면으로 나누어진 12개 항목을 포함한다: (a) 휴식 필요 (4개 항목), (b) 시작 불량 (3개 항목), (c) 낮은 체력 (3개 항목), 및 (d) 약한 근육 (2개 항목). 정신적 피로 도메인은 하기 2가지 국면으로 나누어진 4개 항목을 포함한다: (a) 집중력 부족 (2개 항목) 및 (b) 기억력 부족 (2개 항목). 환자는 지난 2주 동안 최악의 상태를 어떻게 느꼈는지에 따라 0-7 (0 = '전혀 문제 없음' 및 7 = '상상할 수 있는만큼 나쁨')의 척도로 각각의 항목에 점수를 매긴다. 각각의 국면에 대한 점수는 각각의 국면 내의 항목 점수를 더하고, 그 합계를 각각의 국면에서의 항목 수로 나눔으로써 수득될 수 있다. 각각의 도메인 (예를 들어, 신체적, 정신적)에 대한 점수는 각각의 도메인 내의 국면 점수를 더하고, 그 합계를 각각의 도메인 내의 국면 수로 나눔으로써 수득될 수 있다. 점수가 더 높을수록 피로가 더 크다 (Bowman et al., Rheumatology, 2004; 43: 758-764; Strombeck et al., Scand. J. Rheumatol. 2005;34:455-459; Segal et al., Arthritis Rheum. 2008 Dec. 15; 59(12):1780-1787).
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물로 치료받은 환자에서의 피로 상의 개선을 평가함으로써 입증된다. 치료 후, 피로는 치료 전 환자에서의 피로 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 PROF에 의해 측정된 바와 같이 환자에서 일반적으로 저하된다.
쇼그렌 증후군 연관 피로에서의 저하를 평가하는 것
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질로 치료받은 환자에서의 피로의 저하를 평가함으로써 입증된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자는 치료 전 환자에서의 피로 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 피로에서의 저하를 입증할 것이다. 일부 실시양태에서, 피로는 쇼그렌 증후군 연관 피로이다.
일부 실시양태에서, 환자의 상태는 환자에서의 피로를 하나 이상의 환자 보고형 인덱스 (예를 들어, ESSPRI, PROF, FACIT)에 의해 치료 전 환자에서의 피로 수준과 비교 시 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않았거나 대조군인 환자에서의 피로 수준에 대비하여 측정함으로써 평가된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효성은 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자에서의 EULAR SS 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI), 피로의 프로파일 (PROF) 및/또는 만성 질병 요법의 기능적 평가 (FACIT) 피로 척도를 평가함으로써 입증된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자는 치료 전 환자의 ESSPRI 인덱스, PROF, 및/또는 FACIT 피로 척도와 비교할 때, 또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 ESSPRI 인덱스, PROF, 및/또는 FACIT 피로 척도에서의 개선을 입증할 것이다.
예를 들어, 치료를 필요로 하는 인간 대상체 (예를 들어, SLE에 대한 미국 류마티스 대학 기준을 충족하는 환자, 또는 미국-유럽 합의 쇼그렌의 분류 기준을 충족하는 환자)가 선택되거나 확인된다. 대상체는, 예를 들어, SLE 또는 쇼그렌 증후군, 예컨대 피로의 원인 또는 증상을 저하시킬 필요가 있을 수 있다. 대상체의 확인은 임상 환경에서, 또는 다른 곳, 예를 들어, 대상체의 집에서 대상체가 셀프-테스팅 키트를 사용하여 발생할 수 있다.
기준선 (제1일)에, RNase-Fc 융합물의 적합한 제1 용량이 대상체에게 투여된다. RNase-Fc 융합 단백질은 본원에 기재된 바와 같이 제형화된다. 환자의 상태는 기준선 (제1일) 및 제1 용량 후 일정 기간 후, 예를 들어, 제8일, 제15일, 제29일, 제43일, 제57일, 제71일, 제85일, 제99일 또는 연구의 종료 시에, 예를 들어, ESSPRI 인덱스, PROF, 및/또는 FACIT 피로 척도에 의해 평가된다. 다른 관련 기준도 측정할 수 있다. 용량의 횟수 및 강도는 대상체의 필요에 따라 조정된다. 치료 후, 하기 결과 중 하나 이상에서의 개선에 주목할 수 있다: (1) 치료 전 ESSPRI 인덱스에 대비하여, 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않은/대조군 대상체에 대비하여 ESSPRI 인덱스에서의 개선, (2) 치료 전 PROF에 대비하여, 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않은/대조군 대상체에 대비하여 PROF에서의 개선, (3) 치료 전 FACIT 피로 척도에 대비하여, 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않은/대조군 대상체에 대비하여 FACIT 피로 척도에서의 개선. 일부 실시양태에서, ESSPRI 인덱스에서의 개선은 임상적으로 의미있는 개선이다. ESSPRI 인덱스에서의 임상적으로 의미있는 개선은 ESSPRI 점수에서의 적어도 1점 감소이다.
피로 검정의 신경심리학적 분석
RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 효능을 평가하기 위해 관련 기술분야에 공지된 다양한 신경심리학적 검정이 사용될 수 있다.
숫자 부호 치환 테스트
숫자 부호 치환 테스트 (DSST)는 많은 도메인에서 영향을 받는 인지 기능 장애를 측정하기 위한 유효하고 감수성인 테스트를 제공한다. DSST는 쇼그렌 증후군을 가진 환자를 포함하여 일정 범위의 임상 집단 전반에 걸쳐 인지 기능에서의 변화 뿐만 아니라 인지 기능 장애의 존재 여부 둘 다에 감수성이다. 이러한 신경심리학적 테스트는 실행 기능 관련 입력에 대해 널리 사용되고, 고도로 검증되었으며, 매우 감수성인 테스트 판독이다.
DSST는 한 장의 종이에 제공되는 시간 제한된 종이와 연필 인지 테스트이다. 이러한 테스트에서는 환자가 종이 상단의 키에 따라 부호를 숫자와 매칭시켜야 한다. 환자는 부호를 숫자 행 아래의 공간에 복사하고 허용된 시간 (예를 들어, 90초 또는 120초) 내에 올바른 부호의 수를 계산한다. 상기 테스트는 작업 수행의 정확성과 속도에 대한 데이터를 제공한다. DSST 상에서의 환자의 성능은 실세계 기능적 결과, 예컨대 일상적인 작업을 수행할 수 있는 능력, 및 다양한 정신 질환에서 기능 장애로부터의 회복과 상관이 있다. DSST 테스트는 환자에서의 주의력 및/또는 집중력을 평가하는데 사용될 수 있다.
DSST는 인지 작동의 범위를 측정하고 시간이 지남에 따라 인지 기능을 모니터링하는 실용적이고 효과적인 방법을 제공하는 다요인 테스트이다. DSST 상에서 잘 수행하기 위해서는, 환자가 스캐닝 및 쓰기 또는 그리기 능력 (즉, 기본적인 정신적 손재주)을 포함하여 무손상 운동 속도, 주의력 및 시각지각 기능을 가져야만 한다. DSST는 인지 장애를 검출하는 높은 감도를 제공하며 간결성, 신뢰성, 변화에 대한 감수성, 및 테스트 성능에 대한 언어, 문화 및 교육에 미치는 최소한의 영향을 포함한 많은 혜택을 제공한다 (Jaeger, J., Journal of Clinical Psycopharmacology, 38(5), 513-518, October 2018).
더욱이, DSST는 약동학/약력학 (PK/PD) 관계를 정의하기 위한 임상 개발에 사용된다. 이러한 테스트는 또한 CNS 연구에서 PD 바이오마커로서 사용되며 2가지 용량의 선택적 세로토닌 재흡수 억제제 (SSRI) 간을 구별할 수 있다.
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 또는 그의 제약 조성물로 치료받은 환자에서의 인지 기능 상의 개선을 평가함으로써 입증된다. 치료 후, 인지 기능은 치료 전 환자에서의 인지 기능의 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 DSST 테스트에 의해 측정된 바와 같이 환자에서 일반적으로 개선된다.
쇼그렌 증후군 연관 인지 기능에서의 개선을 평가하는 것
일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 유효성은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질로 치료받은 환자에서의 인지 기능 상의 개선을 평가함으로써 입증된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자는 치료 전 환자에서의 인지 기능의 수준과 비교할 때, 및/또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 인지 기능에서의 개선을 입증한다. 일부 실시양태에서, 환자는 쇼그렌 증후군을 가진다.
일부 실시양태에서, 환자의 상태는 환자에서의 인지 기능을 하나 이상의 신경심리학적 검정 (예를 들어, DSST)에 의해 치료 전 환자에서의 인지 기능의 수준과 비교 시 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않았거나 대조군인 환자에서의 인지 기능의 수준에 대비하여 측정함으로써 평가된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효성은 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때, 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자에서의 DSST 테스트의 결과를 평가함으로써 입증된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질로 치료받은 환자는 치료 전 환자의 DSST 테스트 점수와 비교할 때, 또는 대조군 제형으로 치료받은 환자와 비교할 때 DSST 테스트에서의 개선을 입증할 것이다.
예를 들어, 치료를 필요로 하는 인간 대상체 (예를 들어, 미국-유럽 합의 쇼그렌의 분류 기준을 충족하는 환자)가 선택되거나 확인된다. 대상체는, 예를 들어, 쇼그렌 증후군, 예컨대 인지 기능 장애의 원인 또는 증상을 저하시킬 필요가 있을 수 있다. 대상체의 확인은 임상 환경에서, 또는 다른 곳, 예를 들어, 대상체의 집에서 대상체가 셀프-테스팅 키트를 사용하여 발생할 수 있다.
기준선 (제1일)에, RNase-Fc 융합물의 적합한 제1 용량이 대상체에게 투여된다. RNase-Fc 융합 단백질은 본원에 기재된 바와 같이 제형화된다. 환자의 상태는 기준선 (제1일) 및 제1 용량 후 일정 기간 후, 예를 들어, 제8일, 제15일, 제29일, 제43일, 제57일, 제71일, 제85일, 제99일 또는 연구의 종료 시에, 예를 들어, DSST에 의해 평가된다. 다른 관련 기준도 측정할 수 있다. 용량의 횟수 및 강도는 대상체의 필요에 따라 조정된다. 치료 후, 치료 전 DSST 테스트 점수에 대비하여, 또는 유사하게 병을 앓고 있지만 치료를 받지 않은/대조군 대상체에 대비하여 DSST 테스트 점수에서의 개선이 나타난다.
투약 레지멘
본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한, 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 및/또는 본 개시내용의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 인간 대상체에 대해 제약상 허용되는 투여 형태로 제형화된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물 중의 활성 성분 (즉, RNase-Fc 융합물)의 실제 투여량 수준은 환자에게 허용할 수 없는 독성이 없으면서, 특정한 인간 환자에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는데 유효한 활성 성분의 양, 조성, 및/또는 투여 방식을 수득하도록 달라진다.
선택된 투여량 수준은 특정한 RNase-Fc 융합 단백질의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 투여되는 특정한 RNase-Fc 융합 단백질의 배설 속도 또는 대사 속도, 흡수 속도 및 흡수 정도, 치료의 지속 기간, 투여된 특정한 RNase-Fc 융합 단백질과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에 널리 공지된 유사 요인을 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물의 적합한 용량은 인간 대상체에서 치료 효과를 초래하는데 유효한 최저 용량인 활성 성분의 양이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 기재된 요인에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 인간 환자에 대한 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물의 정맥내, 경구 및 피하 용량은 지시된 효과를 위해 사용될 때, 주당 체중 1 kg당 약 0.5 mg 내지 약 50 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 제약 조성물은, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 주당 체중 킬로그램당 약 0.5 mg 내지 약 50 mg의 용량으로 주사에 의해 (예를 들어, 정맥내 주사에 의해, 예를 들어, 주입에 의해) 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 일반적으로 주당 약 1-20 mg/kg, 주당 2-10 mg/kg, 주당 5-15 mg/kg, 주당 5-10 mg/kg, 또는 주당 2-5 mg/kg의 용량으로 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 주당 10 mg/kg 초과, 또는 15 mg/kg 초과 또는 20 mg/kg 초과의 용량이 필요할 수 있다. 일부 실시양태에서, 주당 20 mg/kg 미만, 또는 15 mg/kg 미만 또는 10 mg/kg 미만의 용량이 필요할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에 대한 비경구 용량 예컨대, 예를 들어, i.v. 투여는 주당 약 5-10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 약 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 20 mg/kg, 21 mg/kg, 22 mg/kg, 23 mg/kg, 24 mg/kg, 25 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 (예를 들어, 2개월마다, 3개월마다) 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 1 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 2 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 3 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 4 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 5 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 6 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 7 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 8 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 9 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 10 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 12 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 15 mg/kg의 용량으로 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
원하는 경우, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물의 유효한 매주, 격주, 매월 또는 수개월마다 용량은 임의로 단위 투여 형태로, 하루 종일 적절한 간격으로 별도로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 초과의 하위-용량으로서 인간 환자에게 투여된다 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입으로서). 일부 실시양태에서, 투약은 1일마다의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 수득하기 위해, 필요에 따라 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일마다, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주마다, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개월마다의 1회 이상의 투여이다 (예를 들어, 자가항체와 복합체를 형성한 순환 RNA 및/또는 RNA 함유 면역 복합체를 소화하기에 충분함). 일부 실시양태에서, 투약은 매주 한 번의 1회 투여 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입)이다. 일부 실시양태에서, 투약은 2주마다 한 번의 1회 이상의 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 2주마다 한 번의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 매월의 1회 이상의 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 매월의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 수개월마다 (예를 들어, 2개월마다, 3개월마다)의 1회 이상의 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 2개월마다 또는 3개월마다의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 2주 동안 매주 한 번의 1회 투여 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입), 및 이어서 그 후 2주마다의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 3주 동안 매주 한 번의 1회 투여, 및 이어서 그 후 2주마다의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 4주 동안 매주 한 번의 1회 투여, 및 이어서 그 후 2주마다의 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 2주 동안 매주 한 번의 1회 투여, 및 이어서 그 후 매월 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 3주 동안 매주 한 번의 1회 투여, 및 이어서 그 후 매월 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 투약은 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위한 4주 동안 매주 한 번의 1회 투여, 및 이어서 그 후 매월 1회 투여이다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다. 본원에 사용된 바와 같은, 초기 매주 투여에 이어 격주, 매월 또는 수개월마다 투약은 "부하 용량"으로서 지칭된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 1 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 3 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 4 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 6 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 7 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 8 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 9 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 12 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 15 mg/kg의 용량으로 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다. 본원에 사용된 바와 같은, 매주는 관련 기술분야에서 허용되고 있는 매주의 의미를 갖는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 1 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 2 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 3 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 4 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 5 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 6 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 7 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 8 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 9 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 10 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 12 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 15 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다. 본원에 사용된 바와 같은, 격주는 관련 기술분야에서 허용되고 있는 2주마다의 의미를 갖는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 1 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 2 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 3 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 4 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 5 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 6 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 7 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 8 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 9 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질은 약 10 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 12 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 15 mg/kg의 용량으로 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다. 본원에 사용된 바와 같은, 3주마다는 관련 기술분야에서 허용되고 있는 3주마다 한 번의 의미를 갖는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 1 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 2 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 3 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 4 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 5 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 6 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 7 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 8 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 9 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 10 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 12 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 약 15 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다. 본원에 사용된 바와 같은, 매월은 관련 기술분야에서 허용되고 있는 1개월마다의 의미를 갖는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함)되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 2 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 2 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함)되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 5 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 5 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여 (예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입에 의함)되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 격주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 2주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 3주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 RNase-Fc 융합 단백질 또는 조성물은 4주 동안 약 10 mg/kg의 용량으로 매주 투여되고, 이어서 약 10 mg/kg의 용량으로 매월 투여된다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이, 매주, 격주, 3주마다, 또는 매월 투여는 상기 논의된 바와 같이 1회 이상의 투여 또는 하위-용량일 수 있다.
한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 2 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 3 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 4 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 5 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 6 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 7 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 8 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 9 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 주당 약 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 2 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 3 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 4 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 5 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 6 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 7 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 8 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 9 mg/kg이다. 한 실시양태에서, RNase-Fc 융합 단백질의 유효량은 인간 대상체당 2주마다 약 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 전술한 용량은 정맥내 주사용으로 제형화된다.
염증-관련 분자의 방법 및 용도
본원에는 본원에 기재된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자, 염증-관련 단백질, 염증-유발성 분자)의 진단 및 치료 방법 및 용도가 제공된다. 추가로 본원에는 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자의 존재를 검출하거나 또는 그의 양 또는 발현 수준 (예를 들어, 양 또는 발현 수준)을 결정함으로써 본원에 기재된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 하나 이상의 염증-관련 분자의 존재 또는 그의 양 또는 발현 수준은 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다는 것을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
염증-관련 분자
일부 측면에서, 본 개시내용은 대상체로부터의 샘플 (예를 들어, 쇼그렌 증후군을 가진 대상체로부터의 샘플)에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 존재를 검출하거나 또는 그의 양 또는 발현 수준을 결정하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계, 및 상기 대상체로부터 수득된 샘플에서 결정된 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계에 의해, RNase 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "염증-관련 분자"는 염증 또는 염증 반응에 기능하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-유발성 분자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 항염증 분자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증 매개인자이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 단백질이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 시토카인이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자는 염증-관련 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, STAT5B, CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및/또는 STAT5B이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-5이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TNF 수용체이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-6 수용체이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-1 보조 단백질이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL1이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL-17 수용체 A이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 LTBR4이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT5B이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10)이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD163이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RIPK2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CCR2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL5이며, 이는 단백질 "인터류킨 5 (IL-5)"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TNFRSF1A이며, 이는 단백질 "TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 1A"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL6R이며, 이는 단백질 "인터류킨 6 수용체 (IL-6 수용체)"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL1RAP이며, 이는 단백질 "인터류킨 1 수용체 보조 단백질"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL1이며, 이는 단백질 "C-X-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CXCL1)"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL17RA이며, 이는 단백질 "인터류킨 17 수용체 A"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 LTB4R이며, 이는 단백질 "류코트리엔 B4 수용체"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT5B이며, 이는 단백질 "신호 변환기 및 전사 활성화제 5B (전사 인자 STAT 5B)"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10이며, 이는 단백질 "C-X-C 모티프 케모카인 리간드 10 (IP-10)"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD163이며, 이는 단백질 "CD163"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RIPK2이며, 이는 단백질 "수용체-상호작용 세린/트레오닌 키나제 2"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CCR2이며, 이는 단백질 "C-C 모티프 케모카인 수용체 2 (CCR2)"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, STAT5B, CXCL10, CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및/또는 STAT5B이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10, CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 APOL3, HGF, TBC1D23, SETD6, CCR2, CD47, CD163, CD36, CYBB, PLA2G7, IDO1, RIPK2, ACER3, CXCL10, AIMP1, BIRC3, SNX4, PTPN2, VAMP7, APPL1, CSF1, GBA, GPS2, AKT1, MAPKAPK2, PGLYRP1, NUPR1, TNFRSF1A, MAPK13, ORM2, CCN3, F11R, NFAM1, IL17RA, MMP25, ADAM8, NDST1, FOS, NLRP12, PIK3CD, IL1RAP, IL1R2, STAT5B, TREM1, SIRPA, IL6R, SLC11A1, LTB4R, BCL6, MMP9, FPR1, FPR2, TBXA2R, NOD2, IL1RN, IL5, CXCL1, TPST1, ZC3H12A, TYROBP, 및/또는 CDK19이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 APOL3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HGF이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TBC1D23이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SETD6이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CCR2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD47이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD163이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD36이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CYBB이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PLA2G7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IDO1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RIPK2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACER3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 AIMP1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 BIRC3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SNX4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PTPN2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 VAMP7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 APPL1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CSF1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GBA이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GPS2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 AKT1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAPKAPK2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PGLYRP1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NUPR1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TNFRSF1A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAPK13이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ORM2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CCN3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 F11R이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NFAM1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL17RA이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MMP25이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ADAM8이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NDST1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FOS이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NLRP12이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PIK3CD이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL1RAP이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL1R2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT5B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TREM1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SIRPA이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL6R이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SLC11A1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 LTB4R이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 BCL6이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MMP9이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FPR1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FPR2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TBXA2R이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NOD2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL1RN이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CXCL1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TPST1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZC3H12A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TYROBP이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CDK19이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT1 및 STAT2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT1이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT2이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF606 및 TRIM37이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF606이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRIM37이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACKR3 및 MAP3K8이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACKR3이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAP3K8이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 "STAT1"이며, 이는 시토카인 신호전달 경로의 주요 매개인자인 단백질 "신호 변환기 및 전사 활성화제 1"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 "STAT2"이며, 이는 시토카인 신호전달 경로의 주요 매개인자인 단백질 "신호 변환기 및 전사 활성화제 2"를 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 "ZNF606"이며, 이는 바이러스성 감염에 대한 숙주 반응에서 기능하는 단백질 "징크 핑거 단백질 606"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 "TRIM37"이며, 이는 클래스 I MHC-매개된 항원 제시 경로에서 기능하는 단백질 "삼자 모티프-함유 단백질 37"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 "MAP3K8"이며, 이는 NFκB, TNF, IL-2, 및 TLR4 신호전달의 유도인자인 단백질 "미토겐 활성화된 단백질 키나제 키나제 키나제 8"을 코딩하는 유전자이다.
일부 실시양태에서, "ACKR3"은 CXCL11 및 CXCL12에 대한 수용체로서 기능하는 단백질 "비정형 케모카인 수용체 3"을 코딩하는 유전자를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CRELD1, PARVG, ACAP1, RXRB, COX19, CERS4, B4GALT7, ZNF329, ZFAND2B, NELFB, EMD, UBTF, PYCR2, RNF216, SEC24C, NUMA1, CARD11, EMG1, ZNF576, TRAF2, MAP2K7, CDK4, KHDC4, GIPC1, ILF3, GBP4, FCER1G, STAT1, STAT2, DTX3L, EPSTI1, PARP9, TRIM22, SP140, TRIM5, PSMB9, MAP3K8, ACOT9, XRCC2, KLF5, NBPF10, PRUNE2, LACTB, FAM241A, CCDC169, KLHL33, KDM1B, FANCL, MR1, 및/또는 TRIM13이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PLCB1, EFHC2, RING1, REV1, HIBADH, C2ORF68, PPP2R2A, HADHA, ENY2, ZNF671, ERP29, TOB1, NUDT16L1, ZNF329, ZFAND2B, YIPF2, SNUPN, ZNF606, ELAC1, ECI1, HAX1, PFDN6, COQ8B, GOLGA8N, TOMM7, PIK3C2B, LOXHD1, FAM122C, IGHD, SYS1, OR2A42, OR2A1, IL4R, GRB10, RAB20, MOB3C, KLHL33, USF3, PFFIBP1, CD40, PLEKHA2, ABL2, PI3, TIMELESS, CLHC1, KMT5A, BCL7A, HACE1, TRIM37, 및/또는 C5ORF22이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KHDC4, PMS2, GIMAP1-GIMAP5, SLC25A25, EML2, ZNF790, VSIG1, AXIN2, DHRS3, TESPA1, RGPD5, SPOUT1, TRAF3IP3, RPL13A, NUDT16L1, ACKR3, TFPT, SPAG7, TOB1, ZFAND2B, ZNF329, UBTF, HIC2, TRMT61A, ZNF324B, PRKCE, PLEKHA2, BCL7A, ZNF608, TIMELESS, FCHSD2, SMG7, ATXN1, CNNM2, SIPA1L2, CDKL5, TSKU, GGA3, TESK2, BTN2A2, UBXN7, CHP2, MAP3K8, POU5F2, NF1, XRCC2, NME9, KLHL33, MR1, 및/또는 USF3이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CRELD1, PARVG, ACAP1, RXRB, COX19, CERS4, B4GALT7, ZNF329, ZFAND2B, NELFB, EMD, UBTF, PYCR2, RNF216, SEC24C, NUMA1, CARD11, EMG1, ZNF576, TRAF2, MAP2K7, CDK4, KHDC4, GIPC1, ILF3, GBP4, FCER1G, STAT1, STAT2, DTX3L, EPSTI1, PARP9, TRIM22, SP140, TRIM5, PSMB9, MAP3K8, ACOT9, XRCC2, KLF5, NBPF10, PRUNE2, LACTB, FAM241A, CCDC169, KLHL33, KDM1B, FANCL, MR1, TRIM13, PLCB1, EFHC2, RING1, REV1, HIBADH, C2ORF68, PPP2R2A, HADHA, ENY2, ZNF671, ERP29, TOB1, NUDT16L1, ZNF329, ZFAND2B, YIPF2, SNUPN, ZNF606, ELAC1, ECI1, HAX1, PFDN6, COQ8B, GOLGA8N, TOMM7, PIK3C2B, LOXHD1, FAM122C, IGHD, SYS1, OR2A42, OR2A1, IL4R, GRB10, RAB20, MOB3C, KLHL33, USF3, PFFIBP1, CD40, PLEKHA2, ABL2, PI3, TIMELESS, CLHC1, KMT5A, BCL7A, HACE1, TRIM37, C5ORF22, KHDC4, PMS2, GIMAP1-GIMAP5, SLC25A25, EML2, ZNF790, VSIG1, AXIN2, DHRS3, ESPA1, RGPD5, SPOUT1, TRAF3IP3, RPL13A, NUDT16L1, ACKR3, TFPT, SPAG7, TOB1, ZFAND2B, ZNF329, UBTF, HIC2, TRMT61A, ZNF324B, PRKCE, PLEKHA2, BCL7A, ZNF608, TIMELESS, FCHSD2, SMG7, ATXN1, CNNM2, SIPA1L2, CDKL5, TSKU, GGA3, TESK2, BTN2A2, UBXN7, CHP2, MAP3K8, POU5F2, NF1, XRCC2, NME9, KLHL33, MR1, 및/또는 USF3이다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CRELD1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PARVG이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACAP1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RXRB이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 COX19이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CERS4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 B4GALT7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF329이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZFAND2B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NELFB이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 EMD이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 UBTF이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PYCR2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RNF216이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SEC24C이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NUMA1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CARD11이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 EMG1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF576이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRAF2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAP2K7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CDK4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KHDC4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GIPC1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ILF3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GBP4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FCER1G이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 DTX3L이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 EPSTI1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PARP9이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRIM22이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SP140이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRIM5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PSMB9이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAP3K8이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACOT9이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 XRCC2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KLF5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NBPF10이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PRUNE2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 LACTB이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FAM241A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CCDC169이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KLHL33이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KDM1B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FANCL이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MR1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRIM13이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PLCB1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 EFHC2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RING1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 REV1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HIBADH이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 C2ORF68이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PPP2R2A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HADHA이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ENY2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF671이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ERP29이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TOB1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NUDT16L1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF329이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZFAND2B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 YIPF2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SNUPN이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF606이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ELAC1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ECI1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HAX1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PFDN6이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 COQ8B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GOLGA8N이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TOMM7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PIK3C2B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 LOXHD1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FAM122C이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IGHD이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SYS1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 OR2A42이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 OR2A1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 IL4R이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GRB10이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RAB20이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MOB3C이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KLHL33이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 USF3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PFFIBP1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CD40이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PLEKHA2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ABL2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PI3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TIMELESS이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CLHC1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KMT5A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 BCL7A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HACE1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRIM37이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 C5ORF22이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KHDC4이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PMS2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GIMAP1-GIMAP5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SLC25A25이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 EML2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF790이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 VSIG1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 AXIN2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 DHRS3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ESPA1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RGPD5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SPOUT1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRAF3IP3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 RPL13A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NUDT16L1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ACKR3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TFPT이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SPAG7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TOB1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZFAND2B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF329이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 UBTF이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 HIC2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TRMT61A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF324B이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PRKCE이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 PLEKHA2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 BCL7A이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF608이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TIMELESS이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 FCHSD2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SMG7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ATXN1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CNNM2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 SIPA1L2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CDKL5이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TSKU이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 GGA3이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 TESK2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 BTN2A2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 UBXN7이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 CHP2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MAP3K8이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 POU5F2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NF1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 XRCC2이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 NME9이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 KLHL33이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 MR1이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 USF3이다.
따라서, 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및/또는 STAT5B이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및/또는 STAT5B이다.
따라서, 일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및/또는 STAT5B이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및/또는 STAT5B이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가를 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10 (IP-10)이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10 (IP-10)이다.
일부 측면에서 본 개시내용은 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계에 의해, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 MAP3K8, ACKR3, STAT1, STAT2, TRIM37, 및/또는 ZNF606을 포함한다.
따라서, 일부 측면에서 본 개시내용은 쇼그렌 증후군을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 존재를 검출함으로써 본원에 기재된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 쇼그렌 증후군을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 존재는 그 대상체가 상기 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다는 것을 나타내는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 양 또는 발현 수준을 결정하고, 이를 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 참조 양 또는 참조 발현 수준과 비교한다. 일부 측면에서, 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 양 또는 발현 수준이 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 참조 양 또는 참조 발현 수준에 대비하여 증가될 때, 환자는 본원에 개시된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다. 일부 측면에서, 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 양 또는 발현 수준이 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 참조 양 또는 참조 발현 수준에 대비하여 감소될 때, 환자는 본원에 개시된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 환자로부터의 샘플을 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 DNA 또는 RNA에서의 상보적 표적 서열과 혼성화하는 핵산 프로브와 접촉시키고, 그에 의해 핵산 프로브와 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 DNA 또는 RNA 간에 혼성화 복합체를 형성시키는, 본원에 기재된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 환자를 확인하는 방법을 제공한다. 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 표적 DNA 또는 RNA 서열에 대한 프로브의 혼성화를 검출하기 위해, 프로브는 분자 마커; 예를 들어, 방사성 마커, 형광 마커, 효소 마커 또는 디곡시게닌으로 표지된다. 일부 측면에서, 프로브-표적 복합체의 존재는 환자가 치료에 반응할 가능성이 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 샘플에서의 프로브-표적 복합체의 양을 대조군과 비교한다. 일부 측면에서, 샘플에서의 프로브-표적 복합체의 양이 대조군에 대비하여 증가될 때, 환자는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다. 일부 측면에서, 샘플에서의 프로브-표적 복합체의 양이 대조군에 대비하여 감소될 때, 환자는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌 증후군을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 환자로부터의 샘플을 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질)과 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉시키고, 그에 의해 염증-관련 분자와의 복합체를 형성시키며, 항체-염증-관련 분자 복합체의 존재를 검출하며, 여기서 상기 복합체의 존재는 환자가 치료에 반응할 가능성이 있다는 것을 나타내는 것인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 샘플에서의 항체-염증-관련 분자 복합체의 양을 대조군과 비교한다. 일부 측면에서, 샘플에서의 항체-염증-관련 분자 복합체의 양이 대조군에 대비하여 증가될 때, 환자는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다. 일부 측면에서, 샘플에서의 항체-염증-관련 분자 복합체의 양이 대조군에 대비하여 감소될 때, 환자는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있다.
진단 방법
본 개시내용은 하나 이상의 샘플에서의 본원에 기재된 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자) (예를 들어, STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8)를 검출 및/또는 정량화하는 것과 관련된 방법으로서, 여기서 하나 이상의 염증-관련 분자를 개별적으로 또는 조합하여 검출 및/또는 정량화하는 것은 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)가 쇼그렌병을 가진 환자에게 치료 효과 또는 혜택을 제공할 가능성이 있다는 것을 나타낼 것인 방법을 제공한다.
본원에는 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계에 의해, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 유전자 발현 프로파일에서의 염증-관련 유전자는 MAP3K8, ACKR3, STAT1, STAT2, TRIM37, 및/또는 ZNF606을 포함한다.
추가로 본원에는 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계에 의해, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양이 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양과 동일하거나 그 보다 더 많을 때, 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 유전자 발현 프로파일에서의 염증-관련 유전자는 ZNF606 및/또는 ACKR3을 포함한다.
추가로 본원에는 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계에 의해, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양이 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양보다 더 적을 때, 대상체가 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 유전자 발현 프로파일에서의 염증-관련 유전자는 STAT1, STAT2, TRIM37, 및/또는 MAP3K8을 포함한다.
추가로 본원에는 쇼그렌병을 가진 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하며, 여기서 프로파일에서의 염증-관련 유전자는 MAP3K8, ACKR3, STAT1, STAT2, TRIM37, 및/또는 ZNF606을 포함하는 것인 단계; 쇼그렌병을 가진 대상체로부터의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계; 및 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 상기 대상체를 확인하는 단계에 의해, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 대상체를 확인하는 방법으로서, 여기서 a) 샘플에서의 ZNF606의 발현 수준은 대조군에 대비하여 증가되거나; b) 샘플에서의 ACKR3의 발현 수준은 대조군에 대비하여 증가되거나; c) 샘플에서의 STAT1의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; d) 샘플에서의 STAT2의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; e) 샘플에서의 TRIM37의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; f) 샘플에서의 MAP3K8의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; 또는 g) (a), (b), (c), (d), (e), 및 (f)의 임의의 조합인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 참조 양에 대비하여 환자로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자) (예를 들어, STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8)의 양을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 참조 양에 대비하여 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 양은 환자가 치료에 반응할 가능성을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 환자로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양을 결정하는 단계; 및 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양을 하나 이상의 염증-관련 유전자의 참조 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양이 하나 이상의 염증-관련 유전자의 참조 양과 동일하거나 그 보다 더 많을 때 환자가 치료에 반응할 가능성이 있는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 ZNF606 및/또는 ACKR3이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 환자로부터 수득된 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양을 결정하는 단계; 및 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양을 하나 이상의 염증-관련 유전자의 참조 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 유전자의 양이 하나 이상의 염증-관련 유전자의 참조 양보다 더 적을 때 환자가 치료에 반응할 가능성이 있는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 유전자는 STAT1, STAT2, TRIM37, 및/또는 MAP3K8이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 환자로부터의 샘플에서의 염증-관련 분자의 패널의 발현 수준을 결정하며, 여기서 패널은 STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8을 포함하는 것인 단계; 및 샘플에서의 패널의 발현 수준을 대조군에서의 패널의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대조군에서의 염증-관련 유전자의 양에 대비하여 샘플에서의 염증-관련 유전자의 양은 환자가 치료에 반응할 가능성을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 환자로부터의 샘플에서의 염증-관련 유전자의 패널의 발현 수준을 결정하며, 여기서 패널은 STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8을 포함하는 것인 단계; 샘플에서의 패널의 발현 수준을 대조군에서의 패널의 발현 수준과 비교하는 단계; 및 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 환자를 확인하는 단계를 포함하며, 여기서 a) 샘플에서의 ZNF606의 발현 수준은 대조군에 대비하여 증가되거나; b) 샘플에서의 ACKR3의 발현 수준은 대조군에 대비하여 증가되거나; c) 샘플에서의 STAT1의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; d) 샘플에서의 STAT2의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; e) 샘플에서의 TRIM37의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; f) 샘플에서의 MAP3K8의 발현 수준은 대조군에 대비하여 감소되거나; 또는 g) (a), (b), (c), (d), (e), 및 (f)의 임의의 조합인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병 환자를 확인하는 방법으로서, 샘플을 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 DNA 또는 RNA에서의 상보적 표적 서열과 혼성화하는 핵산 프로브와 접촉시키는 단계, 그에 의해 핵산 프로브와 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 DNA 또는 RNA 간에 혼성화 복합체를 형성시키는 단계; 및 참조 샘플에서의 복합체의 양에 대비하여 샘플에서의 복합체의 양을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 참조 샘플에서의 복합체의 양에 대비하여 샘플에서의 복합체의 양은 환자가 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 감수성일 가능성을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서, 샘플을 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)와 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 진단 항체, 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉시키고, 그에 의해 진단 항체-염증-관련 분자 복합체를 형성시키는 단계; 및 참조 샘플에서의 복합체의 양에 대비하여 샘플에서의 복합체의 양을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 참조 샘플에서의 복합체의 양에 대비하여 샘플에서의 복합체의 양은 환자가 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 사용한 치료에 감수성일 가능성을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성의 변화는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 분자는 염증-관련 유전자이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, STAT5B, CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, STAT5B, CXCL10, CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성에서의 감소는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 분자는 염증-관련 유전자이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및/또는 STAT5B이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및/또는 STAT5B이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준 및/또는 활성에서의 증가는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 염증-관련 분자는 염증-관련 유전자이다. 일부 측면에서, 염증-관련 유전자는 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에서의 증가는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10 (IP-10)이다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에서의 감소는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다.
추가로 본원에는 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)로 치료받은 쇼그렌병을 가진 환자의 반응을 모니터링하는 방법으로서, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 전에 수득된 환자로부터의 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료 후에 수득된 환자로부터의 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 결정하는 단계; 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성을 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 제1 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에 대비하여 제2 샘플에서의 하나 이상의 시토카인의 발현 수준 및/또는 활성에서의 변화는 RNA 뉴클레아제 작용제로 치료받은 환자의 반응을 나타내는 것인 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 시토카인은 CXCL10 (IP-10)이다.
염증-관련 분자의 결정
샘플에서의 본원에 기재된 하나 이상의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자, 염증-관련 단백질, 염증-유발성 분자, 예컨대 염증-유발성 유전자 또는 염증-유발성 단백질)의 존재 또는 그의 양 또는 발현 수준은 면역 조직 화학 (IHC), 면역 형광 (IF), 웨스턴 블롯 분석, 면역 침전, 분자 결합 검정, 효소 결합 면역 흡착 검정 (ELISA), 효소 결합 면역 여과 검정 (ELIFA), 유동 세포계수법, MassARRAY, 단백질체학, 정량적 혈액 기반 검정 (예를 들어, 혈청 ELISA), 생화학적 효소적 활성 검정, 계내 혼성화, 형광 계내 혼성화 (FISH), 서던 분석, 노던 분석, 전체 게놈 시퀀싱, 정량적 실시간 PCR을 포함한 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) (qRT-PCR) 및 다른 증폭 유형 검출 방법, 예컨대, 예를 들어, 분지형 DNA, SISBA, TMA 등, RNA-Seq, 마이크로어레이 분석, 유전자 발현 프로파일링, 및/또는 유전자 발현의 연속 분석 (SAGE) 뿐만 아니라 단백질, 유전자, 및/또는 조직 어레이 분석에 의해 수행될 수 있는 광범위한 검정 중 어느 하나를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 관련 기술분야에 공지되어 있고 통상의 기술자에 의해 이해되는 수많은 방법론 및 기술에 의해 검출 또는 결정될 수 있다. 유전자 및 유전자 산물의 상태를 평가하기 위한 전형적인 프로토콜은, 예를 들어, 문헌 [Ausubel et al., eds., 1 995, Current Protocols In Molecular Biology, Units 2 (Northern Blotting), 4 (Southern Blotting), 15 (Immunoblotting) 및 18 (PCR Analysis)]에서 찾을 수 있다. 다중화된 면역검정, 예컨대 룰스 베이스드 메디슨(Rules Based Medicine) 또는 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) ("MSD")로부터 이용가능한 것을 또한 사용할 수 있다. 본 개시내용의 염증-관련 분자와 결합하는 진단 항체는 다양한 상업적 공급원, 예컨대 BD 바이오사이언시즈(Biosciences), 이바이오사이언시즈(ebiosciences), 바이오레전드, 압캠(Abcam) 등으로부터 입수가능하다.
핵산 염증-관련 분자 기술
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준은 핵산 발현 수준일 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산 발현 수준은 qPCR, rtPCR, RNA-Seq, 다중 qPCR 또는 RT-qPCR, 마이크로어레이 분석, 유전자 발현 프로파일링, SAGE, MassARRAY 기술, 또는 계내 혼성화 (예를 들어, FISH)를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준은 쇼그렌병을 가진 환자로부터의 세포에서 결정된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)의 발현 수준은 쇼그렌병을 가진 환자로부터의 혈액 세포에서 결정된다.
세포에서 mRNA의 평가를 위한 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 상보적 DNA 프로브를 사용하는 혼성화 검정 (예컨대 하나 이상의 유전자에 특이적인 표지된 리보프로브를 사용한 계내 혼성화, 노던 블롯 및 관련 기술) 및 다양한 핵산 증폭 검정 (예컨대 하나 이상의 유전자에 특이적인 상보적 프라이머를 사용하는 RT-PCR, 및 다른 증폭 유형 검출 방법, 예컨대, 예를 들어, 분지형 DNA, SISBA, TMA 등)을 포함한다. 또한, 이러한 방법은 (예를 들어, "하우스키핑" 유전자, 예컨대 액틴 패밀리 구성원의 비교 대조군 mRNA 서열의 수준을 동시에 조사함으로써) 생물학적 샘플에서의 표적 mRNA의 수준을 결정할 수 있게 하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자, 염증-유발성 유전자)의 핵산 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)는 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, STAT5B, CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)는 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, STAT5B, CXCL10, CD163, RIPK2, 및/또는 CCR2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자)는 STAT1, STAT2, ZNF606, TRIM37, ACKR3, 및/또는 MAP3K8을 포함한다.
일부 실시양태에서, 증폭된 표적 cDNA의 서열을 결정할 수 있다. 방법은 마이크로어레이 기술에 의해 조직 또는 세포 샘플에서 mRNA, 예컨대 표적 mRNA를 검사 또는 검출하는 프로토콜을 포함한다. 핵산 마이크로어레이를 사용하여, 시험 및 대조군 조직 샘플로부터의 시험 및 대조군 mRNA 샘플을 역전사하고 표지시켜 cDNA 프로브를 생성한다. 이어서, 프로브는 고체 지지체 상에 고정화된 핵산의 어레이와 혼성화된다. 어레이는 이러한 어레이의 각각의 구성원의 순서와 위치가 공지되도록 구성된다. 예를 들어, 그의 발현이 RNA 뉴클레아제 작용제 (예를 들어, RSLV-132)를 포함하는 치료의 증가되거나 또는 저하된 임상적 혜택과 상관이 있는 유전자의 선택이 고체 지지체 상에 어레이될 수 있다. 표지된 프로브와 특정한 어레이 구성원의 혼성화는, 프로브가 유래되는 샘플이 그 유전자를 발현한다는 것을 나타낸다.
본원에 기재된 바와 같은 치료로부터 혜택을 얻을 가능성이 있는 환자를 확인하기 위한 방법 (예를 들어, 치료적 처치 또는 개입의 선택) 또는 치료의 개발 (예를 들어, 임상 시험에서의 등록 환자)에 관한 임의의 방법의 일부로서 본원에 기재된 진단 방법 중 임의의 것의 포함은, 그 구성원이 치료로부터의 혜택, 또는 치료에 대한 반응을 필요로 하고/거나 필요로 하지 않을 것으로 예측되는 환자 집단을 확인할 수 있다는 점에서, 상기 진단 방법을 포함하지 않는 방법에 비해 이점을 제공한다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 사용하기 적합한 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 진단 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 모니터링 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))이다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 예측 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))이다.
염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 그의 검출이 특정한 생리학적 상태 (예를 들어, 병에 걸린 상태)를 나타내는 물질 또는 생물학적 사례일 수 있다. 예를 들어, 환자의 혈청에서의 염증-관련 유전자의 존재는 질환 (예를 들어, 쇼그렌 증후군)을 나타낼 수 있다. 치료 전에 환자에서 측정된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 임상 시험에 포함시키기에 적합한 환자를 확인하는데 사용될 수 있다. 치료 후 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자)) 변화는 후보 약물과 관련된 안전성 문제를 예측 또는 확인하거나, 또는 치료의 최종 혜택을 예측할 것으로 예상되는 약리학적 활동을 밝힐 수 있다. 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 약물 성능에 관한 정량화가능한 예측을 제공함으로써 약물 개발 및 평가의 불확실성을 저하시킬 수 있으며, 용량 선택에 기여할 수 있다. 복합 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))는 단일 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))가 평가에 필요한 모든 관련 정보를 제공하지 못할 때 단일 해석 판독에 도달하는 명시된 알고리즘에 여러 개의 개별 염증-관련 분자 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))를 포함한다.
대리 평가 항목은 임상 평가 항목을 대체하도록 의도된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 유전자 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 유전자))이며, 이는 역학적, 치료적, 병리생리학적, 또는 다른 과학적 증거에 근거하여, 임상 혜택을 예측하도록 예상된다.
단백질 염증-관련 분자 기술
일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질)의 양은 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 단백질 발현 수준을 결정함으로써 측정된다. 본 개시내용에 의해 제공되는 방법에 사용될 수 있는, 관련 기술분야에 공지되고 본원에 기재된 단백질 발현 수준을 측정하거나 결정하는 다수의 기술이 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 단백질 발현 수준은 유동 세포계수법 (예를 들어, 형광 활성화 세포 분류 (FACS™)), 웨스턴 블롯, 효소 결합 면역 흡착 검정 (ELISA), 면역 침전, 면역 조직 화학 (IHC), 면역 형광, 방사성 면역 검정, 도트 블롯팅, 면역 검출 방법, HPLC, 표면 플라즈몬 공명, 광학 분광법, 질량 분석법, 및 HPLC로 이루어진 군으로부터 선택된 방법을 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에서, 샘플을 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 결합을 허용하는 조건 하에 본원에 기재된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))와 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키고, 이러한 항체와 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))에 의해 형성된 복합체의 존재를 검출한다. 일부 실시양태에서, 샘플을 본원에 기재된 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 조합과 특이적으로 결합하는 항체의 조합과 접촉시킨다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 단백질 발현 수준은 쇼그렌병을 가진 환자로부터의 세포에서 결정된다. 일부 실시양태에서, 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 단백질 발현 수준은 쇼그렌병을 가진 환자로부터의 혈액 세포에서 결정된다.
일부 실시양태에서, 샘플에서의 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))의 양은 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))와 결합하는 진단 항체를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-염증-관련 분자 진단 항체는 염증-관련 분자 (예를 들어, 염증-관련 단백질 또는 염증-유발성 분자 (예를 들어, 염증-유발성 단백질))와 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 진단 항체는 비-인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 진단 항체는 래트, 마우스, 또는 토끼 항체이다. 일부 실시양태에서, 진단 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 진단 항체는 직접적으로 표지된다. 다른 실시양태에서, 진단 항체는 간접적으로 표지된다.
키트
본 개시내용은 RNase-Fc 융합 단백질을 포함한 본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질 및 사용에 대한 지침서를 포함하는 키트를 제공한다. 키트는 적합한 용기에 본원에 개시된 RNase-Fc 융합 단백질, 하나 이상의 대조군, 및 다양한 완충제, 시약, 효소 및 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 표준 성분을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 RNase-Fc 융합 단백질과 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 주사가능한 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 주사가능한 용액은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 일부 실시양태에서, 키트는 사용에 대한 지침서를 포함한다.
용기는 적어도 하나의 바이알, 웰, 테스트 튜브, 플라스크, 병, 시린지 또는 다른 용기 수단을 포함할 수 있으며, 여기에 RNase-Fc 융합 단백질을 놓아둘 수 있고 일부 경우에는, 적절하게 등분될 수 있다. 부가의 구성요소가 제공되는 경우, 키트는 이러한 구성요소를 놓아둘 수 있는 부가의 용기를 함유할 수 있다. 키트는 또한 RNase-Fc 융합 단백질을 함유하기 위한 수단 및 상업적 판매를 위해 엄중히 밀폐된 임의의 다른 시약 용기를 포함할 수 있다. 이러한 용기는 원하는 바이알이 보관되는 주사 또는 취입 성형 플라스틱 용기를 포함할 수 있다. 용기 및/또는 키트는 사용에 대한 지침서 및/또는 경고가 있는 라벨링을 포함할 수 있다.
실시예
하기는 본 발명을 수행하기 위한 구체적 실시양태의 실시예이다. 본 실시예는 예시 목적으로만 제공되며 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 없다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만, 물론 일부 실험적 오류와 편차는 허용되어야 한다.
본 발명의 실행은 달리 지시되지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내에 있는 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 통상적인 방법을 이용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 자세히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., current addition); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990); Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3rd Ed. (Plenum Press) Vols A and B (1992)]을 참조한다.
실시예 1
RNase-Fc 융합 단백질 코딩 발현 벡터의 생성
본 개시내용의 RNase-함유 뉴클레아제 융합 단백질의 다양한 실시양태가 서열 표 (표 1)에 제시되어 있다. 예시적인 RNase-Fc 융합 단백질인 RSLV-132가 구축되었고, 도 1에 나타낸 구성을 갖는다. 구체적으로, RNase-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열로부터 시작하여, RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 젠스크립트(Genescript; 미국 뉴저지주 피스카타웨이)에 의한 코돈 최적화를 사용하여 직접적으로 합성되어 포유동물 세포에서 최적의 발현이 가능하다. 최적화 프로세스는, 예를 들어, 가능한 경우 GC 함량이 매우 높거나 (>80%) 매우 낮은 (<30%) 영역을 피하고, 시스 작용 서열 모티프, 예컨대 내부 TATA 상자, 카이-부위 및 리보솜 진입 부위, AT-풍부 또는 GC-풍부 서열 연장물, RNA 불안정성 모티프, 반복 서열 및 RNA 이차 구조, 및 고등 진핵 생물에서의 잠재적 스플라이스 공여자 및 수용자 부위를 피하는 것을 포함하였다. RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 pcDNA3.1+ 포유동물 발현 벡터 내로 클로닝된다. RSLV-132는 하기 구성으로 생성된 RNase-Fc 융합 단백질이다 (도 1).
RSLV-132는 각각 서열식별번호: 50으로서 제시된 아미노산 서열을 갖는 2개의 폴리펩티드를 포함하는 동종이량체이다. 동종이량체의 각각의 폴리펩티드는 구성 RNase-Fc를 가지며, 여기서 야생형 인간 RNase 1 도메인 (서열식별번호: 2)은 SCC 힌지 및 CH2 돌연변이 P238S 및 P331S (서열식별번호: 22)를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인의 N-말단에 링커를 수반하지 않으면서 작동가능하게 커플링된다.
실시예 2
RNase-Fc 융합 단백질의 일시적 발현 및 이러한 융합 단백질을 발현하는 안정한 포유동물 세포주
일시적 발현을 위해, RNase-Fc 융합 단백질 삽입물을 함유하는 실시예 1로부터의 발현 벡터를 제조업체 권장 형질감염 프로토콜을 사용하여, 프리스타일(FreeStyle™) MAX 시약을 사용하여 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 예를 들어, CHO-S 세포 [예를 들어, 프리스타일™ CHO-S 세포, 인비트로젠(Invitrogen)]로 일시적으로 형질감염시켰다. CHO-S 세포는 2 mM L-글루타민 및 페니실린-스트렙토마이신을 함유하는 프리스타일™ CHO 발현 배지에서 유지시켰다.
RNase-Fc 융합 단백질을 발현하는 안정한 CHO-S 세포주는 관련 기술분야에 공지된 일상적인 방법을 사용하여 생성되었다. 예를 들어, CHO-S 세포는 RNase-Fc 융합 단백질의 핵산 서열 뿐만 아니라, 예를 들어, 유동 세포계수법 또는 자기 비드 분리 (예를 들어, MACSelect™ 시스템)를 사용하기 위해 선택되는 마커 (예를 들어, GFP, 자기 비드에 의해 선택가능한 표면 마커)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 바이러스 (예를 들어, 레트로바이러스, 렌티바이러스)로 감염될 수 있다. 대안적으로, CHO-S 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 형질감염 방법, 예컨대 전기천공 [론자(Lonza)] 또는 상기 언급된 바와 같은 프리스타일™ MAX 시약을 사용하여, RNase-Fc 융합 단백질의 핵산 서열 및 선택가능한 마커를 포함하는 벡터로 형질감염시킨 다음, 예를 들어, 유동 세포계수법을 사용하여 선택될 수 있다. 선택가능한 마커는 RNase-Fc 융합 단백질을 코딩하는 것과 동일한 벡터 또는 별도의 벡터 내로 혼입될 수 있다.
RNase-Fc 융합 단백질은 단백질-A 세파로스 비드로 채워진 컬럼을 사용하여 분자를 포획한 다음, 컬럼 세척 완충액 (예를 들어, 90 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.05% 소듐 아지드)에서 세척하고, 적합한 용출 완충액 (예를 들어, 0.1 M 시트레이트 완충제, pH 3.0)을 사용하여 컬럼으로부터 분자를 방출함으로써 배양 상청액으로부터 정제되었다. 용출된 물질은 센트리콘(Centricon) 농축기를 사용하여 PBS에서 탠덤 스핀을 통해 완충제 교환을 통해 추가로 농축시킨 다음, 0.2 μm 필터 장치를 통해 여과시켰다. RNase-Fc 융합 단백질의 농도는 표준 분광광도측정 방법 [예를 들어, 브래드포드(Bradford), BCA, 로우리(Lowry), 뷰렛(Biuret) 검정]을 사용하여 결정되었다.
실시예 3
연구 설계 및 환자 특징
원발성 쇼그렌 증후군 (pSS)을 가진 환자 28명을 대상으로 RSLV-132의 8회 정맥내 주입의 영향을 평가하기 위한 다기관 공동의 이중 맹검 위약 대조 연구가 수행되었다. 2002년 미국-유럽 합의 그룹 (AEGC)에 따르면, 연구 참가자는 18세 내지 85세였으며 원발성 쇼그렌 증후군 진단을 받았다. 구체적으로, 본 연구는 항-Ro 52/60자가항체의 상승된 수준 및 혈액 세포에서의 상승된 인터페론 자극된 유전자 발현의 패턴 (예를 들어, 스크리닝 시 양성 인터페론 시그니처)을 가진 쇼그렌 환자의 서브세트를 대상으로 시행되었다. 연구 대상체는 기준선 방문 전 30일 동안 수반되는 의약을 안정적으로 유지해야 했다. 기준선 30일 이내의 히드록시클로로퀸의 사용; 기준선 90일 이내의 벨리무맙, 아바타셉트 또는 TNF 억제제의 사용; 또는 기준선 180일 이내의 시클로포스파미드 또는 리툭시맙의 사용이 금지되었다. 환자는 추가로, 과거 두경부 방사선, 림프종, 이식편 대 숙주 질환, 또는 IgG4 관련 질환이 없었어야 했다. 연구 진입 전 (즉, 기준선 방문 전) 60일 이내에 연구에 진입할 수 있는 적격성을 평가하기 위해 잠재적인 대상체를 스크리닝하였다. 30명의 대상체가 스크리닝되었고 본 연구에 무작위로 배정되었다. 2명의 대상체가 연구 치료를 받기 전에 동의를 철회하였다. 28명의 대상체가 이러한 무작위, 이중 맹검 위약 대조 2 상 연구에 등록되었다 (clinicaltrials.gov : NCT03247686). 본 연구 제1일에 기준선 평가를 수행하였다. 기준선 평가 후, 환자는 RSLV-132 또는 위약을 처음으로 주입받았다.
각각의 대상체는 3:1 (활성:위약)로 무작위 배정받았고, 2주 동안 매주 기준선에서 10 mg/kg의 RSLV-132 또는 위약을 8회 주입받고 (3회 용량), 이어서 본 연구의 그 다음 10주 동안 2주마다 한 번 주입받았다 (즉, 제1일 (기준선), 제8일, 제15일, 제29일, 제43일, 제57일, 제71일 및 제85일에 정맥내 주입이 투여되었다). EESPRI, FACIT, 및 피로의 프로파일 (PROF)에 의해 측정된 바와 같은 환자 보고형 결과는 기준선 및 연구 제99일을 비교하는 활성 대 대조군을 평가하는데 사용되었다. 환자 보고형 결과는 그날 용량을 받기 전 제1일, 제29일, 제57일, 제85일 및 제99일 (또는 치료 종료)에 측정되었다. 효능 평가 항목은 제99일에 측정되었고, 안전성 추적은 제141일, 제176일 및 제211일에 시행되었다.
RSLV-132는 정맥내 주입을 위한 희석용 완충액을 포함한 5.3 mL의 보존제 없는 멸균 용액을 함유하는 일회용 바이알에 9.5 mg/mL의 농도로 제시되었다. 0.9% 염화나트륨 용액이 주입을 위한 위약으로서 사용되었다.
본 연구는 헬싱키 선언과 좋은 임상 실습을 위한 조화 지침에 관한 국제 회의의 원칙에 따라 시행되었다. 윤리 위원회와 기관 검토 위원회의 승인을 받았으며 모든 환자는 서면 동의서를 제공하였다.
실시예 4
기준선에서의 환자 특징의 평가.
치료 군 간의 차이 (즉, RSLV-132로 치료받은 환자와 비교 시 위약으로 치료받은 환자)를 평가하고 분석을 위한 기준선 수준을 확립하기 위해, 치료 전에 인구 통계 및 질환 특징을 수득하였다. 기준선에서의 환자 특징의 분석은 보체 C3 및 보체 C4 수준, IgG 수준 (mg/dL), ESR 수준, ESSDAI 점수, ESSPRI 점수, FACIT 점수, 및 피로의 프로파일 (ProF)의 분석을 포함하였다.
보체 C3 및 보체 C4 (C3/C4) 측정은 면역 체계의 활성화를 평가하는데 사용된다. 혈액 내 C3/C4의 측정은 면역 활성에 대한 판독 값으로서 사용된다. 혈액 검사는 특이적 보체 단백질 (C3 또는 C4)을 측정하고 데시리터당 밀리그램으로서 보고된다. 혈액 내 C3/C4의 낮은 수준은 질환 또는 자가면역을 나타낼 수 있다.
이뮤노글로불린 G (IgG)는 혈청 이뮤노글로불린의 약 80 퍼센트를 구성한다. 혈액 샘플로부터의 IgG 수준의 측정은 질환 상태를 나타낼 수 있다. 혈액 내 IgG의 양은 전형적으로 데시리터당 밀리그램으로서 보고된다.
적혈구 침강 속도 (ESR)는 신체에서의 염증의 스크린으로서 사용된다. 전형적으로, 적혈구는 혈장 피브리노겐, 이뮤노글로불린, 및 다른 급성기 반응 단백질에서의 증가로 인해 일부 질환 상태에서 더 신속하게 침전된다. 적혈구 형상 또는 수에 있어서의 변화가 또한 ESR에 영향을 미칠 수 있다. 항응고된 전혈은 좁은 수직 튜브에 서서 중력의 영향을 받는 적혈구가 혈장으로부터 침전된다. 이들이 침전되는 속도는 한 시간 후 컬럼 상단에 존재하는 청정한 혈장의 수 (밀리미터)로서 측정된다 (mm/hr).
류마티스에 대항한 유럽 연맹 (EULAR) 쇼그렌 증후군 (SS) 질환 활성 지수 (ESSDAI)는 전신 활동의 동질적 평가로서 개발되었다 (Seror et al. , Ann Rheum Dis. 2010; 69(6):1103-1109). ESSDAI는 12개의 도메인 (즉, 기관 시스템: 피부, 호흡기, 신장, 관절, 근육질, 말초 신경계, 중추 신경계, 혈액학적, 선상, 체질적 림프선병, 생물학적)을 포함한다. 각각의 도메인은 3 내지 4 수준의 활성으로 나누어진다. 각각의 활성 수준의 정의는 그 도메인에서 고려해야 할 사항에 대한 상세한 설명으로서 제공된다. 가능한 점수는 0 내지 123의 범위이고 약 80 퍼센트의 환자가 점수 ≤13을 갖는다.
기준선 인구 통계, 질환 특징 및 생화학적 데이터는 치료 군 간에 유사하였다 (표 2). 구체적으로, 연구 집단은 ESSDAI 점수에 의해 결정된 바와 같이 경증 내지 중등도의 질환을 가졌고, ESSPRI 점수에 의해 결정된 바와 같은 높은 질환 활성을 가졌다. 연구 대상체는 또한 극심한 피로를 보고하였다. 위약 군에서의 ESSDAI 및 ESSPRI 점수는 RSLV-132 군에서의 것보다 보통 정도로 더 높았다. 보체 3, 보체 4, ESR 및 IgG 측정은 건강한 값과 거의 동등한 수준이고, 2개 군 간에 유사하였다 (표 2).
표 2. 기준선에서의 연구 대상체 인구 통계 및 평균 임상 특징
Figure pct00001
실시예 5
RSLV-132로 치료받은 환자는 ESSPRI 점수에서의 임상적으로 의미있는 개선과 ESSPRI 피로에서의 개선을 경험하였다.
pSS는 침샘과 눈물샘의 림프 침윤, 및 이에 따른 이들 샘의 염증, 손상 및 기능 상실로 인한 안구 건조와 구강 건조를 특징으로 하는 자가면역 장애이다. pSS의 임상적 특색은 하기 2개의 군으로 분리될 수 있다: (1) 대부분의 환자를 불능화하고 그에 영향을 줄 수 있는 양성 증상, 예컨대 건조증, 통증 및 피로; 및 (2) 중증일 수 있고 환자의 20-40%에 영향을 줄 수 있는 전신 증상 (Seror et al. Ann Rheum Dis 2011; 70:968-972).
EULAR SS 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI)는 원발성 쇼그렌 증후군에서의 환자의 증상을 평가하기 위해 개발되었으며 FDA에 의해 검증되고 승인되었다. ESSPRI는 환자에서의 건조증, 통증 및 피로를 평가하고, 각각의 증상은 0 내지 10 숫자 척도로 평가된다. ESSPRI 점수에서의 적어도 1점의 감소는 임상적으로 의미가 있다.
RSLV-132로 치료받은 환자는 연구 과정 전체에 걸쳐 ESSPRI 점수에서의 1점 초과의 감소를 경험하였다 (도 2). 구체적으로, RSLV-132를 투여받은 환자의 ESSPRI 점수는 기준선 시점에 대략 6점에서 제99일에 대략 4.5점으로 감소했으며 (도 2), 환자에 대한 기준선으로부터의 변화는 -1.20이었다 (도 3 및 표 3). ESSPRI 점수에서의 이러한 개선은 임상적으로 의미가 있다. 대조적으로, 도 3과 표 3에 제시된 바와 같이, 위약으로 치료받은 환자는 기준선으로부터 -0.54의 변화를 보였다. 더욱이, RSLV-132로 치료받은 환자는 위약 군에서의 0과 비교하여 기준선부터 연구 제99일까지 대략 -1.4의 ESSPRI 피로에서의 개선을 경험하였다 (도 4). ESSPRI 점수의 3가지 구성요소를 개별적으로 평가했을 때, RSLV-132로 치료받은 환자는 위약으로 치료받은 대조군 환자와 비교 시 쇼그렌 관련 피로에서의 감소를 경험하였다 (도 5a-5c). 대상체 수준 데이터는 위약 군의 대상체의 25%와 RSLV-132로 치료받은 대상체의 55%가 ESSPRI에서 최소한의 임상적으로 중요한 개선 (MCII)을 나타냈다는 것을 밝혀내었다 (≥ 1점 감소) (표 3). 이들 데이터는 RSLV-132 치료가 pSS를 가진 환자에서의 증상을 개선시키고 피로에 있어서 임상적으로 의미있는 저하가 있다는 증거를 제공한다.
표 3. 제99일에서의 임상 효능 조치
Figure pct00002
실시예 6
RSLV-132로 치료받은 환자는 FACIT 피로 점수에 있어서 임상적으로 의미있는 개선을 경험하였다
만성 질병 테스트의 기능적 평가 (FACIT) 피로 척도는 만성 질병에서의 피로를 측정하는데 사용되며 쇼그렌 증후군을 가진 환자에게 널리 사용되고 있다. FACIT 피로 설문지는 4점 리커트(Likert) 척도로 측정된 피로에 관한 13개의 질문을 포함한다. 총 점수 범위는 0 내지 52이며, 더 높은 점수는 줄어든 피로를 나타낸다 (Chandran et al., Ann Rheum Dis 2007; 66:936-939).
도 6에 도시된 바와 같이, RSLV-132로 치료받은 환자는 FACIT 피로 점수에 있어서 임상적으로 의미있는 개선을 경험하였다. 특히, RSLV-132로 치료받은 환자에 대한 FACIT 점수는 기준선과 연구 제57일 사이에 대략 6점만큼 증가하였다. 대조적으로, 연구 제57일에, 위약으로 치료받은 환자에 대한 FACIT 점수는 대락 1점만큼 증가하였다. 연구 제99일에, RSLV-132로 치료받은 환자에 대한 FACIT 점수는 기준선으로부터 대략 6점만큼 증가하였다 (평균 5.9 증가). 대조적으로, 연구 제99일에, 위약으로 치료받은 환자에 대한 FACIT 점수는 기준선으로부터 대략 1점만큼 증가하였다 (평균 1.13 증가). 대상체 수준 데이터는 위약 대상체의 25%와 RSLV-132로 치료받은 대상체의 45%가 FACIT 점수에서 최소한의 임상적으로 중요한 개선 (MCII)을 나타냈다는 것을 밝혀내었다 (≥6점 증가) (표 3). 이들 데이터는 RSLV-132 치료가 pSS를 가진 환자에서 피로를 개선시킨다는 증거를 제공한다.
실시예 7
RSLV-132로 치료받은 환자는 PROF에서의 개선을 경험하였다
피로의 프로파일 (ProF)은 만성 질병과 연관된 피로를 측정하는데 사용되며 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서의 피로를 평가하는데 사용되었다. ProF는 하기 2가지 도메인으로 나눠진 16개 항목으로 이루어진다: (1) 신체적 피로, 및 (2) 정신적 피로. ProF는 0부터 7까지 점수가 매겨지며 높은 점수는 더 많은 피로를 나타낸다. 점수는 프로파일로서 또는 계산된 총 점수로서 제시될 수 있다 (Strombeck et al., Scand J Rheumatol 2005; 34:455-459).
RSLV-132로 치료받은 환자는 연구 지속 기간 동안 ProF에서의 개선을 경험하였다. 구체적으로, RSLV-132로 치료받은 환자에 대한 ProF 점수는 기준선부터 연구 제99일까지 1점 초과하여 감소되었다 (평균 1.04점 감소) (도 7). 대조적으로, 위약으로 치료받은 환자는 ProF에서의 감소를 경험하지 못하였고, 평균 0.02점 감소를 나타냈다 (도 7).
특히, RSLV-132로 치료받은 환자는 연구 과정 전체에 걸쳐 ProF의 정신적 구성요소에서의 임상적으로 의미있는 개선을 경험하였으며, 이는 정신적 점수가 기준선부터 연구 제99일까지 대략 1.5점만큼 감소되었기 때문이다 (정신적 피로 구성요소에서의 평균 1.53점 감소) (도 8). 대조적으로, 위약으로 치료받은 환자는 ProF 점수에 있어서 평균 0.06점 감소를 경험하였다 (도 8). 표 3에 제시된 바와 같이, 제99일에 위약 환자의 25%와 RSLV-132로 치료받은 환자의 55%에서 정신적 피로 반응 (≥1점 감소)이 관찰되었다. 이들 데이터는 활성 군 (RSLV-132로 치료받은 환자)이 ProF의 정신적 구성요소에 있어서 임상적으로 의미있는 개선을 경험하였다는 증거를 제공한다 (≥1점 감소).
RSLV-132로 치료받은 환자는 또한 PROF의 신체적 구성요소에서의 개선을 경험하였으며, 이는 신체적 점수가 연구 과정 전체에 걸쳐 기준선으로부터 대략 0.8점만큼 감소되었기 때문이다 (도 9). 표 3에 제시된 바와 같이, 제99일에 위약 환자의 25%와 RSLV-132로 치료받은 환자의 50%에서 신체적 피로 반응 (≥1점 감소)이 관찰되었다. 위약으로 치료받은 환자는 PROF의 정신적 또는 신체적 구성요소에서의 감소를 경험하지 못하였다. 이들 데이터는 RSLV-132 치료가 pSS를 가진 환자에서 피로를 개선시킨다는 증거를 제공한다.
실시예 8
RSLV-132로 치료받은 환자는 DSST에서의 통계적으로 유의미한 개선을 경험하였다
숫자 부호 치환 테스트 (DSST)는 쇼그렌 증후군 환자에서의 인지 기능 (예를 들어, 주의력 및 집중력)을 측정하는데 사용되었다. DSST는 실행 기능에 대한 판독 값으로서 CNS 약물을 포함하는 임상 연구에 널리 사용되고 있는 고도로 검증된 감수성 기구이다. DSST는 시간 제한된 종이와 연필 인지 테스트이다. 이러한 테스트에서는 환자가 종이 상단의 키에 따라 부호를 숫자와 매칭시켜야 한다. 환자는 부호를 숫자 행 아래의 공간에 복사하고 허용된 시간 내에 올바른 부호의 수를 계산한다.
12명 환자의 서브세트에게 숫자 부호 치환 테스트 (DSST)가 시행되었다. DSST 신경심리학적 테스팅의 결과는 상기 기재된 피로 결과를 뒷받침해준다. 기준선 및 추적 (제99일)에서 환자에게 DSST가 시행되었다. 90초 내에 완료된 숫자와 매칭되는 총 기호 수 뿐만 아니라 테스트를 완료하기까지의 시간 (초)을 측정하였다. 할당된 시간 내에 완료되는 매칭물의 수에서의 증가는 개선을 입증한다. 테스트를 완료하기까지의 시간에서의 감소가 또한 개선을 입증한다. 특히, RSLV-132로 치료받은 환자는 기준선과 추적 사이에 테스트를 완료하기까지의 시간에 있어서 통계적으로 유의미한 개선을 입증하였으며, 위약으로 치료받은 환자에 대한 -2.80의 변화와 비교 시 16.40의 변화를 나타내었다 (도 10a). 도 10b에 도시된 바와 같이, RSLV-132 환자는 기준선보다 16.40초 더 빠르게 (16.4초 상실) 작업을 완료한 반면, 위약 환자는 기준선에서 원래 시간보다 2.80초 더 느렸습니다 (2.80초 부가). RSLV-132로 치료받은 환자는 또한 기준선과 추적 사이에 90초 내에 완료된 매칭물의 수에서의 개선을 입증하였다 (도 10a). DSST 테스트에서의 개선은 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서의 피로 저하 소견을 뒷받침해주며, 이는 피로에서의 저하가 인지 능력 개선에 상응하기 때문이다.
실시예 9
RSLV-132에 대한 반응자는 주요 염증 유전자를 발현한다
RSLV-132로 치료받은 쇼그렌 증후군을 가진 환자에서의 염증 저하의 생화학적 증거를 검정하기 위한 유전자 발현 분석을 수행하였으며, 하기와 같이 수행되었다.
전혈 샘플의 RNA 시퀀싱은 Q2 솔루션즈 | EA 게노믹스(Q2 Solutions | EA Genomics; 미국 노스 캐롤라이나주 모리스빌)에서 수행되었다. 연구 치료 전 제1일 및 제99일에 PAXGene® 수집 튜브에 전혈을 수집하였다. RNA는 써모-피셔(Thermo-Fisher)의 나노드롭(NanoDrop) 8000을 사용하여 분광광도측정법에 의해 추출 및 정량화되었으며, 바이오분석기 2100 상에서 RNA 6000 나노 검정을 사용하여 무결성을 평가하였다. rRNA의 리보제로 자기 골드 고갈을 수반하는 일루미나(Illumina) TruSeq 표준 전체 RNA 프로토콜을 사용하여 50개의 염기쌍, 가닥 및 페어드-엔드 시퀀싱 라이브러리를 생성하였다. 라이브러리는 일루미나 HiSeq 상에서 5,000만개의 판독 값의 표적 깊이로 시퀀싱되었다. 맵핑에 앞서, 어댑터 트리밍, 동종중합체 필터링 및 저 품질 읽기 필터링을 수행하였다. 이어서, 프로세싱된 판독 값은 STAR v2.4를 사용하여 hg19 게놈에 맵핑되었다. 유전자 및 전사체 정량화는 RSEM 1.2.14를 사용하여 수행되었다.
유전자 발현 분석의 결과는 RSLV-132에 대한 임상 반응을 경험하는 RSLV-132로 치료받은 환자에서, 염증 상의 저하의 생화학적 증거를 제공하였다 (도 11). 이들 환자는 임상 반응을 달성하지 못한 RSLV-132로 치료받은 환자에서 관찰되지 않은 주요 염증 경로에서의 광범위한 저하를 입증하였다. 임상 반응은 하기 3가지 기구 중 2가지에서 최소한의 임상적으로 중요한 개선 (MCII)을 경험한 환자로서 정의되었다: ESSPRI (≥1점 감소), FACIT (≥6점 증가) 또는 ProF (≥1점 감소). 이러한 기준을 사용하여, RSLV-132 군의 환자 20명 중 9명 (45%)과 위약 군의 환자 8명 중 2명 (25%)이 임상 반응을 경험하였다.
임상 반응을 달성했거나 달성하지 못한 RSLV-132 대상체에 대해 제99일에서의 유전자 발현 상의 변화를 제1일과 비교하였다. 무-반응자 군에서의 7명의 환자와 반응 군으로부터의 7명의 환자로부터 전혈을 채취하고, 이를 상기 기재된 프로토콜에 따라 RNAseq를 사용하여 유전자 발현 분석을 위해 프로세싱하였다. 도 11의 히트 맵에 표시된 유전자는 선천 면역 체계를 조절하는데 관여하는 주요 염증 유전자이며 FACIT 기구 결과와 높은 정도의 상관관계를 가졌다 (R2 > 0.6). 임상 반응을 달성한 RSLV-132로 치료받은 환자는 염증-관련 유전자 발현에서의 광범위한 감소를 나타냈으며, 임상 반응을 달성하지 못한 대상체에서는 관찰되지 않았다 (도 11). 주요 염증 유전자 예컨대 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B의 발현은 임상 반응을 경험한 RSLV-132로 치료받은 환자에서는 저하되는 것으로 관찰되었지만, 임상 반응을 경험하지 못한 환자에서는 그렇지 않았다. 임상 반응을 달성한 환자에서는 다른 유전자, 예컨대 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2에서의 증가도 관찰되었다. 위약 군의 2명의 대상체는 임상 반응을 경험하였지만, RSLV-132로 치료받은 반응자와 유사한 유전자 발현 프로파일을 나타내지 않았다 (데이터는 표시되지 않음).
이들 데이터는 임상 반응을 달성한 RSLV-132로 치료받은 대상체가 염증-관련 유전자 발현에서의 감소를 나타낸다는 증거를 제공한다.
실시예 10
RSLV-132에 대한 반응자는 뚜렷한 유전자 발현 프로파일을 나타낸다
유전자 발현 프로파일을 조사하여, RSLV-132를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 환자를 확인하는데 유용한 유전자 발현 "지문"을 확인하였다. 임상 반응을 나타내지 않은 RSLV-132로 치료받은 대상체의 기준선 유전자 발현 프로파일과 비교할 때, 나중에 제99일에 임상 반응 (MCII)을 나타낸 RSLV-132로 치료받은 대상체의 기준선 유전자 발현 프로파일 (연구 약물 투여 전) 간에 뚜렷한 유전자 발현 패턴이 관찰되었다.
RNAseq는 기준선 (RSLV-132 투여 전)에서 환자로부터 채취한 혈액 샘플에 대해 실시예 9에 기재된 바와 같이 수행되었다. 비-반응자 (임상 반응을 나타내지 않은 RSLV-132로 치료받은 환자) 및 반응자 (임상 반응을 나타낸 RSLV-132로 치료받은 환자)의 기준선 유전자 발현 프로파일을 분석하였다. 반응자 vs. 비-반응자 RSLV-132 하위군의 유전자 발현 프로파일을 조사한 결과, 반응자들 간에 흥미로운 프로파일이 밝혀졌다. 도 12a-12c 및 표 4에 제시된 바와 같이, 뚜렷한 유전자 발현 프로파일이 연구 약물 투여 전 제1일에 환자에서 관찰되었으며, 이는 나중에 연구 제99일에 긍정적인 임상 반응을 나타내었다.
기준선 유전자 발현이 FACIT (도 12a), ProF (도 12b) 또는 ESSPRI (도 12c)와 상관이 있을 때, RSLV-132 반응자 간의 특이적 프로파일이 밝혀졌다. STAT1 및 STAT2의 발현에서의 감소는 FACIT 테스트와 상관이 있었고 (도 12a), ZNF606의 발현에서의 증가 및 TRIM37의 발현에서의 감소는 ProF 테스트와 상관이 있었으며 (도 12b), ACKR3의 발현에서 증가 및 MAPK3K8의 발현에서의 감소는 ESSPRI 테스트와 상관이 있었다 (도 12c). 표 4에 제시된 바와 같이, MAP3K8 및 ACKR3은 ESSPRI와 고도로 상관이 있었고 (R2 > 0.9), STAT1 및 STAT2는 FACIT와 고도로 상관이 있었으며 (R2 > 0.76), TRIM37 및 ZNF606은 ProF와 고도로 상관이 있었다 (R2 > 0.71). 이들 데이터는 일부 환자에서 순환하는 특이적 RNA 분자가 이들 환자에서 염증 경로의 만성 활성화를 촉진시킨다는 증거를 제공한다.
표 4: 주어진 기구 (ESSPRI, FACIT, 또는 ProF)에서 MCII와 강력한 상관관계를 나타내는 유전자
Figure pct00003
실시예 11
RSLV-132 치료의 안전성 및 내약성
RSLV-132를 사용한 치료의 전반적인 안전성과 내약성을 평가하기 위해, 연구 내내 유해 사례를 측정하였다. 유해 사례는 최종 치료 후 211일까지 모니터링되었다. 응급 치료가 필요한 유해 사례, 심각한 유해 사례, 및 약물 관련 유해 사례의 발생률은 RSLV-132 치료군과 위약 치료군 간에 거의 동등한 수준이었다 (표 5). 연구 중 사망자는 발생하지 않았다. 피로는 연구에서 가장 흔한 유해 사례 (AE)였다. 대부분의 피로 AE는 연구 초기에 보고되었다. 연구 동안 어느 한 치료 군에서 심각한 감염이나 주입 반응이 관찰되지 않았다. 유해 사례 AE로 인해 연구 약물을 중단한 환자는 없었다. RSLV-132 군의 1명의 환자가 심각한 유해 사례를 경험하였으며 연구 약물의 최종 용량 후 88일에 이하선염으로 입원하였다. 이러한 유해 사례는 RSLV-132 치료와 상관이 있는 것으로 보이지 않았다.
표 5. 응급 치료가 필요한 유해 사례 (TEAE) (안전성 분석 세트)
Figure pct00004
*연구 약물의 최종 용량 후 88일에 이하선염으로 입원하였고; 이는 연구 약물과 무관하였다
서열 표 (표 1)
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
SEQUENCE LISTING <110> RESOLVE THERAPEUTICS, LLC <120> TREATMENT OF SJOGREN'S DISEASE WITH NUCLEASE FUSION PROTEINS <130> RSN-022PC <140> PCT/US2020/012258 <141> 2020-01-03 <150> US 62/788,730 <151> 2019-01-04 <160> 69 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 156 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(156) <223> Precursor human RNase1 <400> 1 Met Ala Leu Glu Lys Ser Leu Val Arg Leu Leu Leu Leu Val Leu Ile 1 5 10 15 Leu Leu Val Leu Gly Trp Val Gln Pro Ser Leu Gly Lys Glu Ser Arg 20 25 30 Ala Lys Lys Phe Gln Arg Gln His Met Asp Ser Asp Ser Ser Pro Ser 35 40 45 Ser Ser Ser Thr Tyr Cys Asn Gln Met Met Arg Arg Arg Asn Met Thr 50 55 60 Gln Gly Arg Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe Val His Glu Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Val Gln Asn Val Cys Phe Gln Glu Lys Val Thr Cys Lys Asn Gly 85 90 95 Gln Gly Asn Cys Tyr Lys Ser Asn Ser Ser Met His Ile Thr Asp Cys 100 105 110 Arg Leu Thr Asn Gly Ser Arg Tyr Pro Asn Cys Ala Tyr Arg Thr Ser 115 120 125 Pro Lys Glu Arg His Ile Ile Val 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570 575 Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala Tyr Asp Arg 580 585 590 Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val Val Pro Asp Ser 595 600 605 Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly Leu Ser Asp Gln Leu 610 615 620 Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val Glu Val Met Leu Lys 625 630 635 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: O-linked glycosylation consensus <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> X is E or D <400> 59 Cys Xaa Xaa Gly Gly Xaa Cys 1 5 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: O-linked glycosylation consensus <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> X is E or D <400> 60 Asn Ser Thr Xaa Ala 1 5 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: O-linked glycosylation consensus <400> 61 Asn Ile Thr Gln Ser 1 5 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial 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Claims (106)

  1. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 인간 췌장 RNase 1을 포함하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 인간 췌장 RNase 1이 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 야생형 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인이 인간 세포 상에서의 Fcγ 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는 것인 방법.
  6. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 옵소닌화, 식균작용, 보체 의존성 세포독성, 및 항체-의존성 세포성 세포독성으로 이루어진 군으로부터 임의로 선택된 저하된 이펙터 기능을 갖는 것인 방법.
  7. 제4항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 EU 넘버링에 따른 P238S 돌연변이 및 P331S 돌연변이를 포함하는 것인 방법.
  8. 제4항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 것인 방법.
  9. 제4항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 3개의 힌지 영역 시스테인 잔기 중 하나 이상의 세린으로의 치환을 포함하는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, Fc 도메인이 EU 인덱스에 따른 넘버링으로 SCC 돌연변이 (잔기 220, 226, 및 229)를 포함하는 것인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 서열식별번호: 22에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  13. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  14. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  15. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 5 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  16. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 정맥내 주사에 의해 환자에게 투여되는 것인 방법.
  17. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  18. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 3개월 동안 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  19. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 3개월에 걸쳐 6회 격주 주입으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  20. 제1항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 치료 효과를 달성하거나 또는 유지하기 위해 환자에게 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 2주마다의 1회 투여로 투여되는 것인 방법.
  21. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 EULAR SS 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI) 점수에 있어서 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  22. 제1항에 있어서, 치료가 ESSPRI 점수를 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  23. 제21항에 있어서, 피로가 1 내지 10의 ESSPRI 척도에서 4.5 내지 5.5의 점수로 저하되는 것인 방법.
  24. 제21항에 있어서, 환자가 2주마다 유효 용량의 RNase-Fc를 투여받는 것인 방법.
  25. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 만성 질병 요법의 기능적 평가 (FACIT) 피로 척도에 있어서 치료 전 FACIT 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 개선시키는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 FACIT 피로 척도에 있어서 적어도 2점만큼 개선시키는 것인 방법.
  27. 제1항에 있어서, 치료가 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 증가시키는 것인 방법.
  28. 제27항에 있어서, 치료가 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 2점만큼 증가시키는 것인 방법.
  29. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF) 점수에 있어서 치료 전 ProF 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  30. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 정신적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 PROF의 정신적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  31. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 신체적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 PROF의 신체적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  32. 제1항에 있어서, 치료가 환자에서 인지 기능을 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에 의해 치료 전 DSST 테스트 점수에 대비하여 측정된 바와 같이 개선시키는 것인 방법.
  33. 제1항에 있어서, 치료가 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에서 환자에 의해 90초 내에 완료된 매칭물의 수를 증가시키는 것인 방법.
  34. 제1항에 있어서, 치료가, 환자가 DSST 테스트를 완료하기까지의 시간을 감소시키는 것인 방법.
  35. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 환자에게 정맥내 주사에 의해 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  36. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 환자에서의 인지 효과가 ProF의 정신적 구성요소에 있어서 치료 전 ProF의 정신적 구성요소에 대비하여 적어도 1점만큼 개선되는 것인 방법.
  38. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 환자에게 투여하며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  39. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 제약 조성물을 환자에게 투여하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것이며, 그에 의해 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  40. 제35항 또는 제36항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 인간 췌장 RNase 1을 포함하는 것인 방법.
  41. 제40항에 있어서, 인간 췌장 RNase 1이 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  42. 제35항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 야생형 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인이 인간 세포 상에서의 Fcγ 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는 것인 방법.
  44. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 옵소닌화, 식균작용, 보체 의존성 세포독성, 및 항체-의존성 세포성 세포독성으로 이루어진 군으로부터 임의로 선택된 저하된 이펙터 기능을 갖는 것인 방법.
  45. 제42항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 EU 넘버링에 따른 P238S 돌연변이 및 P331S 돌연변이를 포함하는 것인 방법.
  46. 제42항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 것인 방법.
  47. 제42항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 3개의 힌지 영역 시스테인 잔기 중 하나 이상의 세린으로의 치환을 포함하는 것인 방법.
  48. 제47항에 있어서, Fc 도메인이 EU 인덱스에 따른 넘버링으로 SCC 돌연변이 (잔기 220, 226, 및 229)를 포함하는 것인 방법.
  49. 제35항 또는 제36항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 서열식별번호: 22에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  50. 제35항 또는 제36항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  51. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  52. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  53. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 약 5 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  54. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 정맥내 주사에 의해 환자에게 투여되는 것인 방법.
  55. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  56. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 3개월 동안 2주마다 약 5-10 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  57. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 3개월에 걸쳐 6회 격주 주입으로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  58. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, RNase-Fc 융합 단백질이 환자에게 3주 동안 매주, 및 그에 이어서 2주마다의 1회 투여로 투여되는 것인 방법.
  59. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 EULAR SS 환자 보고형 인덱스 (ESSPRI) 점수에 있어서 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  60. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 ESSPRI 점수를 치료 전 ESSPRI 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  61. 제59항에 있어서, 피로가 1 내지 10의 ESSPRI 척도에서 4.5 내지 5.5의 점수로 저하되는 것인 방법.
  62. 제59항에 있어서, 환자가 2주마다 유효 용량의 RNase-Fc를 투여받는 것인 방법.
  63. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 만성 질병 요법의 기능적 평가 (FACIT) 피로 척도에 있어서 치료 전 FACIT 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 개선시키는 것인 방법.
  64. 제63항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 FACIT 피로 척도에 있어서 적어도 2점만큼 개선시키는 것인 방법.
  65. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 증가시키는 것인 방법.
  66. 제65항에 있어서, 치료가 FACIT 피로 점수를 치료 전 FACIT 피로 점수에 대비하여 적어도 2점만큼 증가시키는 것인 방법.
  67. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF) 점수에 있어서 치료 전 ProF 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  68. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 정신적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 ProF의 정신적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  69. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 피로를 피로의 프로파일 (ProF)의 신체적 구성요소 점수에 있어서 치료 전 ProF의 신체적 구성요소 점수에 대비하여 적어도 1점만큼 저하시키는 것인 방법.
  70. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 인지 기능을 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에 의해 치료 전 DSST 테스트 점수에 대비하여 측정된 바와 같이 개선시키는 것인 방법.
  71. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 숫자 부호 치환 테스트 (DSST) 테스트에서 환자에 의해 90초 내에 완료된 매칭물의 수를 증가시키는 것인 방법.
  72. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가, 환자가 DSST 테스트를 완료하기까지의 시간을 감소시키는 것인 방법.
  73. 하기를 포함하는, 주사가능한 용액을 포함하는 용기, 및 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는데 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트로서:
    서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량; 및
    하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제;
    여기서 주사가능한 용액은 정맥내 투여용으로 제형화되는 것인 키트.
  74. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 치료는 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  75. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한, RNase-Fc 융합 단백질의 용도.
  76. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 치료는 상기 환자에게 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 정맥내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  77. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질의 용도로서, 용도는 상기 환자에게 약 5-10 mg/kg의 용량의 RNase-Fc 융합 단백질을 정맥내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
  78. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 치료는 상기 환자에게 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  79. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 인지 효과를 개선시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질의 용도로서, 용도는 상기 환자에게 유효량의 RNase-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
  80. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 치료는 상기 환자에게 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  81. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질의 용도로서, 용도는 상기 환자에게 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
  82. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 치료는 상기 환자에게 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  83. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 피로를 저하시킴으로써 쇼그렌병을 치료하는 의약의 제조에 사용하기 위한 RNase-Fc 융합 단백질로서, 사용은 상기 환자에게 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 서열식별번호: 50에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 RNase-Fc 융합 단백질; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것인 RNase-Fc 융합 단백질.
  84. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  86. 제84항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  87. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 방법.
  88. 제86항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  89. 쇼그렌병의 치료를 필요로 하는 환자에서 쇼그렌병을 치료하는 방법으로서, 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 방법.
  90. 제89항에 있어서, 시토카인이 CXCL10인 방법.
  91. 하기 단계를 포함하는, RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보로서 쇼그렌병을 가진 환자를 확인하는 방법으로서:
    (a) 환자로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 결정하는 단계; 및
    (b) 단계 (a)에서 결정된 염증-관련 유전자 발현 프로파일을 적합한 대조군 대상체로부터 수득된 샘플에서의 염증-관련 유전자 발현 프로파일과 비교하는 단계,
    여기서 염증-관련 유전자 발현 프로파일은 환자가 RNA 뉴클레아제 작용제를 사용한 치료에 대한 후보라는 것을 나타내는 것인 방법.
  92. 제91항에 있어서, 염증-관련 유전자가 MAP3K8, ACKR3, STAT1, STAT2, TRIM37, 및 ZNF606으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  93. 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 용도.
  94. 제93항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  95. 제93항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  96. 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 감소를 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  97. 제96항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL-5, TNF 수용체, IL-6 수용체, IL-1 보조 단백질, CXCL-1, IL-17 수용체 A, LTBR4, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  98. 제96항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 IL5, TNFRSF1A, IL6R, IL1RAP, CXCL1, IL17RA, LTB4R, 및 STAT5B로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  99. 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 용도.
  100. 제99항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  101. 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 염증-관련 유전자에서의 증가를 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  102. 제101항에 있어서, 하나 이상의 염증-관련 유전자가 CXCL10 (IP-10), CD163, RIPK2, 및 CCR2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  103. 쇼그렌병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 RNA 뉴클레아제 작용제의 용도로서, 용도는 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 용도.
  104. 제103항에 있어서, 시토카인이 CXCL10인 용도.
  105. 쇼그렌병을 치료하는 방법에 사용하기 위한 RNA 뉴클레아제 작용제로서, 사용은 환자에게 유효량의 RNA 뉴클레아제 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료는 하나 이상의 시토카인에서의 증가 및 피로에서의 개선을 초래하는 것인 RNA 뉴클레아제 작용제.
  106. 제105항에 있어서, 시토카인이 CXCL10인 RNA 뉴클레아제 작용제.
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