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KR20200131287A - 마이크로-rna 22의 억제제 - Google Patents

마이크로-rna 22의 억제제 Download PDF

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KR20200131287A
KR20200131287A KR1020207029242A KR20207029242A KR20200131287A KR 20200131287 A KR20200131287 A KR 20200131287A KR 1020207029242 A KR1020207029242 A KR 1020207029242A KR 20207029242 A KR20207029242 A KR 20207029242A KR 20200131287 A KR20200131287 A KR 20200131287A
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KR
South Korea
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nucleic acid
mir
seq
lna
modifications
Prior art date
Application number
KR1020207029242A
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English (en)
Inventor
피에르 파올로 판돌피
리카르도 파넬라
사카리 카우피넨
안드레아스 페트리
Original Assignee
베스 이스라엘 데코니스 메디칼 센터
올보르 유니버시티
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 베스 이스라엘 데코니스 메디칼 센터, 올보르 유니버시티 filed Critical 베스 이스라엘 데코니스 메디칼 센터
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Abstract

본 개시내용은 마이크로RNA, 예를 들어 miR-22의 활성을 억제하는 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

마이크로-RNA 22의 억제제
우선권
본 출원은 2018년 3월 14일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/642,934에 대한 이익 및 우선권을 주장하며, 그 내용은 본 명세서에 그 전문이 참조에 의해 원용된다.
개시내용의 분야
본 개시내용은 마이크로RNA의 활성 또는 발현을 조절하는 제제에 관한 것이다.
전자 제출된 텍스트 파일에 대한 기술
본 명세서과 함께 전자제출된 텍스트 파일의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 포맷 카피(파일명: BID-005PC2_ST25.txt; 만든 날짜: 2019년 3월 14일; 파일 크기: 2,976 바이트).
마이크로RNA(miRNA 또는 miR)는 표적 유전자의 발현을 규제하는 핵산 분자이다. MiRNA는 전형적으로 짧고(일반적으로 18 내지 24개의 뉴클레오타이드), 이들의 서열이 완전하게 상보적인 경우에는 이들의 분해를 촉진하는 것에 의해, 및/또는 이들의 서열이 미스매치(mismatch)를 포함하는 경우에는 번역을 억제하는 것에 의해 표적 mRNA의 리프레서로 작용한다. miRNA의 기능 분석은, 이러한 작은 비암호화 RNA가 다양한 질병 또는 장애와 관련된 유전자를 규제하는 것을 비롯하여 상이한 생리적 및 대사적 프로세스에 기여함을 보여주었다. 이와 같은 이유로, miR을 규제하는 조성물 및 방법에 대한 필요가 있다.
본 개시내용은, 예를 들어 마이크로RNA 발현 및/또는 활성을 억제하는 것에 의해, miR-22를 억제하기 위한 신규한 조성물 및 방법을 제공한다. 이러한 억제는, 예를 들어 잠금 핵산(locked nucleic acid: LNA)을 포함하는 화학적으로 변형된 서열 특이 올리고뉴클레오타이드에 의해 매개될 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 miR-22 억제성 조성물을 제공한다. 이 조성물은 tggcagct(서열번호 2)를 포함하고 적어도 1개의 잠금 핵산(LNA) 변형을 포함하는 서열을 갖는 핵산을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2)의 7 및 8 위치에 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 약 8 내지 약 12개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 4개 이상의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 4개 이하의 연속적인 LNA 변형을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 하기로부터 선택된 서열을 갖는 핵산을 포함한다: tggcagct(서열번호 2), cttcaactggcagct(서열번호 3), tcttcaactggcagct(서열번호 4), ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 gttcttcaactggcagct(서열번호 6). 실시형태에서, 상기 핵산은 약 8개 내지 약 12개의 LNA 변형, 예를 들어 약 8개 내지 약 10개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 약 8개, 또는 약 9개, 또는 약 10개, 또는 약 11개, 또는 약 12개의 LNA 변형을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2), 및 적어도 6개의 LNA 변형을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2), 및 적어도 8개의 LNA 변형을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 적어도 6개의 LNA 변형, 적어도 8개의 LNA 변형, 또는 적어도 10개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 8개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 3, 6, 7, 10, 12, 14, 및 15 위치에 있다. 실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 10개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 3, 6, 7, 10, 11, 12, 14, 및 15 위치에 있다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 적어도 8개의 LNA 변형, 적어도 10개의 LNA 변형, 또는 적어도 11개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 10개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 4, 8, 10, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 4, 5, 6, 9, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다.
실시형태에서, 상기 핵산은 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 적어도 10개의 LNA 변형 또는 적어도 11개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 5, 6, 7, 10, 12, 13, 14, 16, 및 17 위치에 있다.
실시형태에서, 상기 핵산은 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 적어도 9개의 LNA 변형 또는 적어도 10개의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 9개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형은 1, 2, 6, 10, 13, 14, 16, 17, 및 18 위치에 있다/
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 측면의 핵산 또는 상기 실시형태 중 임의의 것 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 측면의 핵산 또는 상기 실시형태 중 임의의 것을 포함하는 벡터 또는 플라즈미드를 제공한다.
본 발명의 측면은 상기 측면의 핵산 또는 상기 실시형태 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 miR-22를 억제하기 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 miR-22를 상기 측면의 핵산 또는 상기 실시형태 중 임의의 것인 miR-22 억제제(inhibitor)를 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기술된 임의의 측면 또는 실시형태는 본 명세서에 개시된 바와 같은 임의의 다른 측면 또는 실시형태와 병행될 수 있다.
본 특허 또는 출원 파일은 적어도 1개의 컬러 도면을 포함한다. 컬러 도면을 포함하는 본 특허 또는 특허 출원 공개물의 사본은 요청 및 필요한 수수료 지불시 특허청에서 제공될 것이다.
도 1은 항-miR-22 LNA의 설계를 도시한다. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 7 내지 서열번호 15가 도시되어 있다.
도 2a 내지 도 2c는 항-miR-22 올리고뉴클레오타이드를 위한 설계 스페이스를 나타내는 일련의 막대 그래프 및 선 그래프이다.
도 3a 내지 도 3b는 가상 환경(in silico)(11228) 내의 가능한 항-miR 설계의 생성을 나타내고, 가장 최적의 항-miR-22 설계(8 내지 18개의 nt 길이)을 선택하기 위한 특징을 예측한다. 서열번호 11, 서열번호 2, 서열번호 7 내지 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 및 서열번호 1은 도 3b의 범례의 위에서 아래 방향으로 도시되어 있다.
도 4는 FAM-표지된 LNA의 MCF7 내 비조력 흡취량(unassisted uptake)을 나타낸다.
도 5는 MCF7 세포 내에 항-miR-22 LNA의 존재를 나타내는 웨스턴 블럿이다.
도 6a 내지 도 6c는 표적 단백질 수준에 영향을 미치는 MCF7 내 항-miR-22 LNA의 비조력 흡취량을 나타낸다. 도 6a 및 도 6b는 HSP-90 대조군 대비 TET2 발현을 나타내는 웨스턴 블럿 이미지이다. 도 6c는 TET2 단백질 발현을 나타내는 막대 그래프이다. 도 6c에서, 막대 그래프 내 데이터 순서는 왼쪽부터 오른쪽으로 읽어서, SCR(검은색), 25nM(연회색), 및 100nM(진회색)이다.
도 7은 항-miR-22 LNA가 MCF7 내 5-hmC 수준을 증가시킴을 나타내는 한 쌍의 닷-블럿 이미지이다.
도 8은 비히클(VCH), 스크램블 대조군 RNA(SCR) 및 잠금 핵산(LNA)을 세포감염시킨 후, HFD 상에 있는 miR-22-/- 및 WT 생쥐에 대한 생체 내 실험 계획 및 조건을 나타내는 픽토리얼이다.
도 9는 (△) 대조군, (◇) SCR, (□) 항-miR-22 처리된 생쥐와 미처리된 생쥐가 식량 소비에서 차이가 없음을 나타내는 막대 그래프이다.
도 10a 내지 도 10b는 miR-22의 생체 내 약학적 억제가 생쥐가 비만이 되는 것을 예방함을 나타내는 선 그래프이다. 도 10a는 최종 체질량 증가율을 나타낸다. 도 10b는 DIO 생쥐 내 miR-22의 생체 내 사일런싱을 나타낸다. 도면 둘 다에서, 최종 시점에, 데이터의 순서는 위에서 아래로 비히클(녹색), SCR(적색), 및 항-miR-22(청색)이다.
도 11은 항-miR-22-LNA, SCR 및 VHL로 처리된 HFD 상에 있는 그리고 두번째 HFD 식이요법에 있는 miR-22-/- 및 WT 생쥐를 나타낸 치료 접근법의 픽토리얼이다.
도 12는 이미 비만이고 HFD를 먹인 생쥐에서 유의한 체중 감소가 있다는 치료 접근법의 결과를 나타낸 선 그래프이다. 처리의 3 ½달 후, 비만이고 (평균 중량 > 40g) HFD를 먹인 생쥐에서 유의한 체중 감소가 관찰되었다. 생쥐를 희생시키고, 조직을 수거하고, 간으로부터 얻은 RNA를 RNA염기서열분석에 사용하였다.
도 13은 miR-22의 약학적 억제가 MEF 지방세포 분화를 감소시키는데 효과적임을 나타내는 오일-레드-O 염색이다.
도 14는 LNA 항-miR-22 존재 또는 비존재 하에 2주 동안 지방 분화 배지에서 배양된 인간 일차 간엽세포 내 항-miR-22 처리를 나타낸 오일-레드 O 염색 (도 14a) 및 막대 그래프(도 14b)이다. 비조력 흡취량 500nM(2일마다 LNA 첨가됨). 도 14b에서, 각 막대 그래프에 있는 오른쪽(적색) 막대 데이터는 LNA#10-처리된 세포에 대한 것이다.
도 15는 miR-22의 약학적 억제가 MEF 지방세포 분화를 감소시키는데 효과적임을 도시하는 막대 그래프이다. 막대 그래프에서 데이터 순서는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때, 위에서 아래쪽으로 읽은 범례(그래프의 오른편)와 상응한다.
본 개시내용은 예를 들어 마이크로RNA 발현 및/또는 활성을 억제함으로써 miR-22의 활성을 억제하기 위한 신규한 조성물 및 방법을 제공한다.
이론에 얽매이지 않으면서, 성숙한 miRNA는 polII 또는 polIII에 의해 생성되고 프리-miRNA라고 불리우는 초기 전사물로부터 발생하는 것으로 여겨진다. 이러한 프리-miRNA는 흔히 수천 개의 염기 길이이고, 따라서 보다 짧은 성숙 miRNA로 만들어지도록 가공된다. 이러한 프리-miRNA는 멀티시스트론성일 수 있고, 많은 miRNA로 발달할 수 있도록 정리하는(organize) 다수의 군집 서열의 전사로부터 생긴다. miRNA를 얻는 프로세스는 두 단계일 수 있다. 첫째, 프리-miRNA는 핵 내에서 RNase Drosha에 의해 약 70- 내지 약 100-개의 뉴클레오타이드 헤어핀-형태의 전구체(pre-miRNA)로 가공될 수 있다. 둘째, 세포질로 이동 후에, 헤어핀 예비-miRNA는 RNase Dicer에 의해 추가로 가공되어, 이중가닥 miRNA를 생성시킬 수 있다. 이후, 성숙한 miRNA 가닥은 RNA-유도 사일런싱 복합체(RISC)로 도입될 수 있고, 여기서 염기쌍 상호보완성에 의해 표적 mRNA와 연합하여, 단백질 발현의 억제를 유도할 것이다. RISC 사일런싱 복합체로의 진입을 위해 우선적으로 선택되지 않은 miRNA 듀플렉스의 다른 가닥은 운송 가닥 또는 마이너 miRNA 또는 스타(＊) 가닥으로 알려져 있다. 이 가닥은 분해될 수 있다. 구체적으로 명시하지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 miRNA는 프리- 및/또는 예비- 및/또는 성숙한 및/또는 마이너(스타) 가닥 및/또는 miRNA의 듀플렉스 버전으로 언급되는 것으로 이해된다.
일부 실시형태에서, miRNA는 단백질-암호화 유전자의 인트론 내에 위치하거나 또는 비암호화 전사 유닛의 인트론 또는 엑손 내에 위치할 수 있다. 인트론 miRNA의 발현은 호스팅 전사 유닛의 발현과 동시에 일어날 수 있는데, 이들이 일반적으로 같은 방향으로 배향되어 있고 이들이 속해 있는 pre-mRNA와 대등하게 발현되기 때문이다.
일부 실시형태에서, miRNA는 표적 유전자 전사물의 3' 비번역 영역(3'UTR) 내 서열에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, miRNA는 표적 유전자 전사물의 3'UTR 외부 서열에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, miRNA는 표적 유전자 전사물의 3'UTR 내부 및 외부 둘 다에 결합할 수 있다.
일부 실시형태에서, miRNA의 2번째 및 7번째 뉴클레오타이드 사이에 있는 뉴클레오타이드 쌍(miRNA 씨드 서열)과 표적 3'UTR을 따르는 상응하는 서열(씨드 매치)이 표적 인식을 위해 발생할 수 있다. 따라서, miRNA와 표적 간의 결합은 약 5개의 뉴클레오타이드 염기 쌍을 포함할 수 있다. 추가로, miRNA와 표적 간의 결합은 5개 초과의 염기 페어링을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, miRNA와 이를 조절하는 유전자 간의 결합은 표적 핵산의 최대 2개, 최대 4개, 최대 6개, 최대 8개, 또는 최대 10개 부위의 miRNA 결합에 의해 중재될 수 있다.
MiR-22
MiR-22는 침팬지, 생쥐, 쥐, 개, 및 말을 포함하는 많은 척추동물 종에 걸쳐 높게 보존되어 있다. 이러한 보존성 수준은 기능적 중요도를 암시한다. MiR-22는 이전에는 적혈구 성숙에서 일정 역할을 가짐이, 이후에는 종양 형성에서 일정 역할을 가짐이 확인되었다. MiR-22는 인산분해효소 및 텐신 동족체(PTEN) 및 tet 메틸시토신 다이옥시지네이즈(tet methylcytosine dioxygenase: TET)를 직접 표적으로 하여, 종양형성, 암전이 및 대사 장애를 촉진한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 PTEN 및/또는 TET2의 활성 및/또는 발현을 증가시킨다.
예상되는 miR-22 헤어핀 전구체는 비암호화 전사물, C17orf91의 엑손 2 내에 완전히 포함되어 있고, 접합 패턴은 단백질-암호화 가능성의 결핍에도 불구하고 인간과 생쥐에서 일반적으로 보존되어 있다. 문헌[Rodriguez el al., Identification of mammalian microRNA host genes and transcription units. Genome Res. 2004 Oct; 14(10A): 1902-10]을 참조한다. 생쥐 모델 내 mir-22를 포함하는 C17orf91의 엑손 2의 결실은 miR-22가 SIRT1(NAD-의존적 데아세틸라제 시르투인-1), HDAC4(히스톤 데아세틸라제 4), PURB(퓨린-풍부한 요소 결합 단백질 B) 및 PTEN을 표적으로 하는 것에 의해 심장 비대 및 리모델링에서 일정 역할을 함이 밝혀졌다. 문헌[Gurha et al., Targeted deletion of microRNA-22 promotes stress-induced cardiac dilation and contractile dysfunction. Circulation. 2012 Jun 5;125(22):2751-61; Huang et al., MicroRNA-22 regulates cardiac hypertrophy and remodeling in response to stress. Circ Res. 2013 Apr 26;112(9):1234-43] 참조.
miR-22의 억제제
실시형태에서, miRNA의 억제제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 작용하는 핵산이다. 본 발명의 핵산은 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 본 발명의 핵산은 적어도 1개의 화학적 변형을 가질 수 있다(비제한적 예들은 당 또는 뼈대 변형, 예를 들어 잠금 핵산(LNA)이다).
실시형태에서, miR-22를 억제하는 핵산의 서열은 종 간에 보존된다. 실시형태에서, 핵산의 서열은 인간 부분적으로는 miR-22의 서열과 상보적이다. 실시형태에서, 상기 억제제는 세포 또는 대상체 내에서 표적 miR-22의 발현 및/또는 활성을 감소시키도록 선택된다.
실시형태에서, 본 발명의 핵산은 인간 miR-22를 억제한다. 실시형태에서, 인간 miR-22는 AAGCUGCCAGUUGAAGAACUGU(서열번호 1)를 포함하거나 또는 이로 이루어져 있다. 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 길이 약 8 내지 약 20개 잔기(예를 들어, 길이 약 8-18개, 또는 약 8-16개, 또는 약 8-14개, 또는 약 8-12개, 또는 약 8-10개, 또는 약 10-18개, 또는 약 10-16개, 또는 약 10-14개, 또는 약 10-12개의 잔기)이다. 실시형태에서, 상기 핵산은 길이 약 8개, 또는 약 9개, 또는 약 10개, 또는 약 11개, 또는 약 12개의 잔기이다.
실시형태에서, 본 발명의 핵산은 완전한 상동성을 가지며 miR-22의 일부분에 결합한다. 예를 들어, 본 발명의 핵산은 길이 18개 잔기일 수 있고, 상기 18개 잔기의 각각은 miR-22의 뉴클레오타이드에 상보적이다. 대안적으로, 상기 본 발명의 핵산은 완전한 상동성을 가지며 miR-22의 일부분에 결합한다. 예를 들어, 본 발명의 핵산은 길이 16개의 잔기일 수 있고, 상기 잔기의 단지 15개 또는 더 적은 수가 miR-22의 뉴클레오타이드에 상보적이다.
실시형태에서, 본 발명의 핵산은 1개 위치, 2개 위치, 3개 위치, 4개 위치, 5개 위치, 또는 5개 이상의 위치에서 miR-22의 일부분과 상이하다.
실시형태에서, 본 발명의 핵산은 억제하는데 충분한 친화도로 miR-22에 결합한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 높은 친화도(예를 들어, nM 친화도)으로 miR-22에 결합한다. 이와 같이, 본 발명의 핵산은 비록 1개 이상의 위치에서 miR-22의 일부분과 상이하더라도 높은 친화도로 miR-22에 결합한다.
본 발명의 핵산은 tggcagct(서열번호 2)를 포함하고, 적어도 1개의 잠금 핵산(LNA) 변형을 포함하는 서열을 가질 수 있다.
잠금 핵산(LNA)에서, 상기 핵산의 리보오스 모이어티는 2' 산소 및 4' 탄소를 연결하는 여분의(extra) 브릿지로 변형되는데, 이는 3'-엔도 구조형태에서 리보오스를 잠근다. 본 발명의, 그리고 LNA를 포함하는 핵산은, 효율적으로 전달될 수 있고 다양한 장애의 치료 및 예방을 위해 충분한 생물학적 이용가능성을 갖는 비용효과적인 제제를 제공한다.
실시형태에서, 본 발명의 핵산은 그의 3' 말단을 향해 적어도 2개의 LNA 변형 (예를 들어, 3' 말단을 향해 약 2개, 또는 약 3개, 또는 약 4개, 또는 약 5개의 변형)을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2), 및 적어도 6개의 LNA 변형 또는 적어도 8개의 LNA 변형을 포함한다.
예를 들어, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2)의 7 및 8 위치에 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 4개 이하의 연속적인 LNA 변형(예를 들어, 단지 2개, 또는 3개, 또는 4개의 연속적인 LNA 변형)을 포함한다. 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 단지 3개 이하의 연속적인 비변형 잔기(예를 들어, 단지 3개, 또는 2개, 또는 1개의 비변형 잔기)를 포함한다. 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 4개 이상의 LNA 변형을 포함한다. 실시형태에서, 상기 핵산은 약 8개 내지 약 12개의 LNA 변형, 예를 들어 약 8개, 또는 약 9개, 또는 약 10개, 또는 약 11개, 또는 약 12개의 LNA 변형을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 하기로부터 선택된 서열을 갖는 핵산을 포함하거나 또는 이로 이루어진다: tggcagct(서열번호 2), cttcaactggcagct(서열번호 3), tcttcaactggcagct(서열번호 4), ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 gttcttcaactggcagct(서열번호 6). 실시형태에서, 상기 핵산은 tggcagct(서열번호 2), cttcaactggcagct(서열번호 3), tcttcaactggcagct(서열번호 4), ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 gttcttcaactggcagct(서열번호 6)로부터 선택된 서열을 갖고 약 8개 내지 약 12개의 LNA 변형, 예를 들어 약 8개, 또는 약 9개, 또는 약 10개, 또는 약 11개, 또는 약 12개의 LNA 변형을 포함하는 핵산을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 적어도 6개의 LNA 변형, 적어도 8개의 LNA 변형, 또는 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어진다. 실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 8개의 LNA 변형을 포함하거나 또는 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 3, 6, 7, 10, 12, 14, 및 15 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 CtTcaACtgGcAgCT(서열번호 7)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다. 실시형태에서, 상기 핵산은 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 10개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 3, 6, 7, 10, 11, 12, 14, 및 15 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 CTTcaACtgGCAgCT(서열번호 8)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 적어도 8개의 LNA 변형, 적어도 10개의 LNA 변형, 또는 적어도 11개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어진다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 10개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 4, 8, 10, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 TCtTcaaCtGGCAgCT(서열번호 10)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다. 실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 TCtTCAaCtgGCAgCT(서열번호 9)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다.
실시형태에서, 상기 핵산은 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 4, 5, 6, 9, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 TCtTCAacTgGCAgCT(서열번호 11)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다.
실시형태에서, 상기 핵산은 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 적어도 10개의 LNA 변형 또는 적어도 11개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어진다. 실시형태에서, 상기 핵산은 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 11개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 5, 6, 7, 10, 12, 13, 14, 16, 및 17 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 TTctTCAacTgGCAgCT(서열번호 12)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다.
실시형태에서, 상기 핵산은 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 적어도 9개의 LNA 변형 또는 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어진다. 실시형태에서, 상기 핵산은 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 9개의 LNA 변형을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 변형은 1, 2, 6, 10, 13, 14, 16, 17, 및 18 위치에 있다; 예를 들어, 상기 핵산은 서열 GTtctTcaaCtgGCaGCT(서열번호 13)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 여기서 대문자는 LNA 변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다.
실시형태에서, 위에 열거된 서열을 포함하는 핵산은 본 명세서에-열거된 서열에 추가 뉴클레오타이드 5'를 더 포함할 수 있고, 및/또는 본 명세서에-열거된 서열에 추가 뉴클레오타이드 3'를 더 포함할 수 있다. 추가 뉴클레오타이드는 비변형이거나 또는 예를 들어 LNA 또는 추가적인 화학적 변형과 같이 변형될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 추가적인 화학적 변형을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 화학적 변형은 티오인산에스터(phosphorothioate), 2'-0-메틸(2'-0-Methyl), 또는 2'-O-메톡시에틸(2'-O-Methoxyethyl), 2'-0-알킬-RNA(2'-0-alkyl-RNA) 유닛, 2'-OMe-RNA 유닛, 2'-아미노-DNA(2'-amino-DNA) 유닛, 2'-플루오로-DNA(2'-fluoro-DNA) 유닛(2' 위치에 불소로 치환된 DNA 유사체(2' F)를 포함하지만 이에 제한되지는 않음), LNA 유닛, PNA 유닛, HNA 유닛, INA 유닛, 및 2' MOE RNA 유닛이다.
적절한 핵산은, 당 뉴클레오사이드 변형(BSN)을 함유하는 올리고뉴클레오타이드 및 이들의 상보적인 miRNA 표적 가닥 사이에 형성된 복합체에 향상된 열적 안정성을 부여하는 하나 이상의 입체형태적으로 제약된 또는 이환식 당 뉴클레오사이드 변형(BSN)으로 구성될 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 상기 핵산은 적어도 1개의 잠금 핵산을 함유한다. 잠금 핵산(LNA)은 2'-0, 4'-C-메틸렌 리보뉴클레오사이드(구조 A)를 함유하고, 여기서 상기 리보오스 당 부분은 잠금 형태로 있다. 또 다른 실시형태에서, 상기 핵산은 적어도 1개의 2',4'-C-가교된 2' 데옥시리보뉴클레오사이드(CDNA, 구조 B)를 함유한다. 예를 들어, 미국 특허 제6,403,566호 및 문헌[Wang et al., (1999) Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 9: 1147-1150]을 참조하고, 이들 문헌 모두는 전문이 본 명세서에 참조로서 포함되어 있다. 추가의 또 다른 실시형태에서, 상기 핵산은 구조 C에 나타낸 구조를 갖는 적어도 1개의 변형된 뉴클레오사이드를 함유한다. 지방 관련 대사와 합성 경로 표적을 규제하는 miRNA 표적화 핵산은 BSN(LNA, CDNA 등) 또는 다른 변형된 뉴클레오타이드, 및 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드의 조합물을 함유할 수 있다.
Figure pct00001
대안적으로, 상기 핵산은 당-인산염 뼈대 보다는 펩티드-계 뼈대를 함유하는 펩티드 핵산(PNA)을 포함할 수 있다. 다른 변형된 당 또는 핵산에 대한 인산다이에스터 변형이 또한 고려된다. 제한하지 않는 예로서, 다른 화학적 변형은 2'-o-알킬(예를 들어, 2'-0-메틸, 2'-o-메톡시에틸), 2'-플루오로, 및 4'-티오 변형, 및 하나 이상의 티오인산에스터, 모르폴리노, 또는 포스포노카복실레이트 결합과 같은 뼈대 변형을 포함할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 6,693,187 및 7,067,641 참조하고, 이들의 전문은 본 명세서에 참조로서 포함되어 있다). 일 실시형태에서, 발암성 miRNA를 표적으로 하는 핵산은 각 염기에 2'-O-메틸 당 변형을 함유하고 티오인산에스터 결합에 의해 연결된다. 핵산, 특히 보다 짧은 길이(예를 들어, 16개 미만의 뉴클레오타이드, 7 내지 8개의 뉴클레오타이드)의 핵산은 비제한적으로 LNA, 이환식 뉴클레오사이드, 포스포노포르메이트, 2'o-알킬 변형 등과 같은 하나 이상의 친화도 향상 변형을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 적절한 핵산은, 중앙에 적어도 10개의 데옥시리보뉴클레오타이드를 가지면서 양쪽 5' 및 3' 말단 모두에 2'-O-메톡시에틸-변형된 리보뉴클레오타이드를 함유하는 2'-O-메톡시에틸 갭머(gapmers)이다. 이러한 갭머는 RNA 표적의 RNase H-의존적 분해 매커니즘을 유발할 수 있다. 안정성을 향상시키고 효능을 개선하는 핵산의 다른 변형은, 예를 들어 본 명세서에 전문이 참조로서 포함되어 있는, 미국 특허 번호 6,838,283에 기재되어 있고, 당업계에 공지되어 있으며, 본 발명의 방법에서 사용하기에 적절하다. 예를 들어, 이에 제한하려는 것은 아니지만, 생체 내 전달 및 안정성을 용이하게 하기 위해, 상기 핵산은 그의 3' 말단에 콜레스테롤 모이어티와 같은 스테로이드, 비타민, 지방산, 탄수화물 또는 글리코시드, 펩티드, 또는 다른 작은 분자 리간드에 연결될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은, 실질적으로 상보적이라 함은 표적 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상보적인 서열을 지칭한다(비제한적인 예는 성숙한, 마이너, 전구체 miRAN, 또는 예를 들어 miR-22의 프리-miRNA 서열이다).
일부 실시형태에서, 상기 본 발명의 핵산은 안타고미르(antagomir)이다. 안타고미르는 miRNA에 적어도 부분적으로 상보적인 단일-가닥의 화학적으로 변형된 리보뉴클레오타이드이고 따라서 이들을 사일런싱할 수 있다. 예를 들어, Kriitzfeldt, et al., Nature (2005) 438 (7068): 685-9를 참조한다. 안타고미르는 2'-0-메틸-당 변형과 같이 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 안타고미르는 단지 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다. 안타고미르는 또한 부분적 또는 완전한 포스포로티오에이트 뼈대를 초래하는 하나 이상의 포스포로티오에이트 결합을 포함할 수 있다. 생체 내 전달 및 안정성을 용이하게 하기 위해, 상기 안타고미르는 이의 3' 말단에서 콜레스테롤 또는 다른 모이어티에 연결될 수 있다. 억제를 위해 적절한 안타고미르는 길이 약 15 내지 약 50개의 뉴클레오타이드, 길이 약 18 내지 약 30개의 뉴클레오타이드, 및 길이 약 20 내지 약 25개의 뉴클레오타이드가 될 수 있다. 상기 안타고미르는 성숙 또는 마이너한 발암성 miRNA 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 상보적일 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 안타고미르는 성숙 또는 마이너한 발암성 miRNA 서열과 실질적으로 상보적일 수 있으며, 즉 표적 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 상보적이다. 다른 실시형태에서, 상기 안타고미르는 성숙 또는 마이너한 발암성 miRNA 서열과 100% 상보적이다.
본 발명의 핵산은 발암성 miRNA의 전구체 miRNA 서열(예비-miRNA) 또는 일차 miRNA 서열(프리-miRNA)과 실질적으로 상보적인 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 핵산은, 상기 miRNA의 표적의 3'-비번역 영역의 외부에 위치한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 핵산은 상기 miRNA의 표적의 3'-비번역 영역 내부에 위치한 서열을 포함한다.
실시형태에서, 상기 핵산은 제한된 자가-결합성 친화도를 갖거나 또는 자가-결합성 친화도를 갖지 않는다. 실시형태에서, 상기 핵산은 제한된 듀플렉스 구조를 갖거나 또는 듀플렉스 구조를 갖지 않는다. 실시형태에서, 상기 핵산은 제한된 폴드 구조를 갖거나 또는 폴드 구조를 갖지 않는다.
본 발명의 임의의 핵산은, miRNA 억제제 또는 작용제를 암호화하는 발현 벡터를 세포에 전달하는 것에 의해 표적 세포로 전달될 수 있다. 벡터는 관심있는 핵산을 세포 내부로 전달하는 데 사용될 수 있는 물질의 조성물이다. 당업계에는 많은 벡터가 알려져 있고, 이에 제한되지는 않지만, 선형 폴리뉴클레오타이드, 이온성 또는 양친성 화합물과 결합된 폴리뉴클레오타이드, 플라즈미드, 및 바이러스를 포함한다. 따라서 용어 벡터는 자체적으로 복제하는 플라즈미드 또는 바이러스를 포함한다. 바이러스 벡터의 예는, 이에 제한되지는 않지만, 아데노바이러스 벡터, 아데노-연합된 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함한다. 발현 작제물은 살아있는 세포 내에서 복제될 수 있거나 또는 합성에 의해 만들어질 수 있다. 본 출원의 목적을 위해, 용어 발현 작제물, 발현 벡터, 및 벡터는 본 발명의 적용분야를 실증하기 위해 일반적이고 예시적인 의미에서 교환하여 사용되고 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다.
일 실시형태에서, 본 발명의 핵산을 발현하기 위한 발현 벡터는 본 발명의 핵산을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은, 작동가능하게 연결된 또는 전사 조절하 와 같은 구절은, 상기 프로모터가 폴리뉴클레오타이드에 대해 정확한 위치와 방향으로 있어서 RNA 중합효소에 의한 전사의 개시 및 폴리뉴클레오타이드의 발현을 조절함을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 프로모터는 유전자의 특이적 전사를 개시하는데 필요한, 세포의 합성 도구 또는 도입된 합성 도구에 의해 인식되는 DNA 서열을 지칭한다. 적절한 프로모터는 RNA pol I, pol II, pol III, 및 바이러스 프로모터(예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스(CMV) 전초기 유전자 프로모터, SV40 초기 프로모터, 및 Rous 사르코마 바이러스 긴 말단 반복체)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 핵산을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결된 프로모터는 유도성 프로모터일 수 있다. 유도성 프로모터는 당업계에 공지되어 있고, 테트라시클린 프로모터, 메탈로티오네인 IIA 프로모터, 열충격 프로모터, 스테로이드/타이로이드 호르몬/레티노산 반응 요소, 아데노바이러스 후기 프로모터, 및 유도성 생쥐 유방종양 바이러스 LTR을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
발현 작제물 및 핵산을 세포로 전달하는 방법은 당업계에 공지되어 있고, 칼슘 포스페이트 공동침전, 전기천공법, 마이크로주입법, DEAE-덱스트란, 리포펙션, 폴리아민 세포감염 시약을 이용한 세포감염, 세포 초음파분해, 고속 마이크로프로젝타일을 이용한 유전자 충격법, 및 수용체-매개 세포감염을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면은, 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은, miR-22를 억제하기 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산인 miR-22 억제성 조성물과 miR-22를 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 생체 외 또는 생체 내에서 일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
임상 적용분야가 고려되는 경우, 약학적 조성물은 의도된 적용분야에 적절한 형태로 준비될 수 있다. 일반적으로, 이것은 발열물질뿐만 아니라 인간 또는 동물에 유해할 수 있는 다른 불순물이 본질적으로 없는 조성물의 준비를 필요로 할 것이다.
일 실시형태에서, 약학적 조성물은 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산 유효 투약량을 포함한다. 유효 투약량은 유익하거나 또는 원하는 임상 결과에 영향을 주기에 충분한 양이다. 유효 투약량은 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 2.5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 또는 약 5 mg/kg 내지 약 25 mg/kg일 수 있다. 유효 투약량에 고려될 정확한 결정은 각 환자에 대한 개별 인자, 예컨대 이들의 크기, 연령, 대사 장애의 유형, 및 억제제 또는 작용제의 특성에 근거할 수 있다 (비제한적인 예는 안타고미르, 발현 작제물, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드 듀플렉스 등을 포함한다). 따라서, 투여량은 본 개시내용 및 당업계의 기술 지식으로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 쉽게 확인될 수 있다. 예를 들어, 투여량은 참고문헌 Physicians' Desk Reference, 66th Edition, PDR Network; 2012 Edition (December 27, 2011)에 의해 결정될 수 있고, 그 내용은 전문이 본 명세서에 참조로서 포함되어 있다.
거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로스피어, 비드와 같은 콜로이드 분산 시스템, 및 수중 유적형 에멀젼, 미셀, 혼합 미셀, 및 리포좀을 포함하는 지질계 시스템이 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산을 위한 전달 비히클로서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 핵산을 지방 조직(예컨대, 지방세포)으로 전달하기에 적절한 상용화 지방 에멀젼은, INTRALIPIDO, LIPOSYN®, LIPOSYN® II, LIPOSYN® III, 뉴트리리피드, 및 다른 유사 리피드 에멀젼을 포함한다. 생체 내 전달 비히클로서 사용하기 위한 콜로이드 시스템은 리포좀(즉, 인공 멤브레인 소낭)이다. 이러한 시스템의 준비 및 용도가 당업계에 공지되어 있다. 예시적인 제형은 또한 US 5,981,505; US 6,217,900; US 6,383,512; US 5,783,565; US 7,202,227; US 6,379,965; US 6,127,170; US 5,837,533; US 6,747,014; 및 W003/093449에 개시되어 있고, 이들의 전문은 본 명세서에 참조로서 포함되어 있다.
일반적으로, 전달 비히클을 안정하게 만들고 표적 세포에 의한 흡수되도록 하기 위해 적절한 염 및 완충제를 이용하기를 원할 것이다. 본 발명의 수성 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 수성 매질 내에 용해된 또는 분산된 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산(예를 들어 리포좀 또는 다른 복합체 또는 발현 벡터)을 포함하는 전달 비히클의 유효량을 포함한다. 구문 약제학적으로 허용 가능한 또는 약물학적으로 허용 가능한 이란, 동물 또는 인간에게 투여될 때 역반응, 알레르기 반응, 또는 다른 부반응을 생성시키지 않는 분자 단위체 및 조성물을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 약제학적으로 허용 가능한 담체는, 인간에게 투여하기에 적절한 약제와 같이, 약제의 제형화에서의 사용을 위해 허용 가능한 용제, 완충액, 용액, 분산 매질, 코팅제, 항균성 및 항진균성 제제, 등장성 및 흡수성 지연제 등을 포함한다. 약제학적으로 활성인 물질을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 용매 또는 제제가 본 발명의 활성 성분과 함께 사용할 수 없는 경우를 제외하고는, 치료 조성물에 이의 사용이 고려된다. 보조 활성 성분이 또한 상기 조성물에 도입될 수 있으며, 단, 이들이 벡터 또는 상기 조성물의 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드를 비활성화하지 않아야 한다.
상기 약제의 형태는, 예를 들어 멸균 수용액 또는 분산액, 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조물용 멸균 분말이다. 일반적으로, 이들 제조물은 용이한 주사가능성이 존재하는 한도로 멸균 및 유동성이다. 제조물은 제조 및 보관 조건 하에서 안정되어야 하고, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용으로부터 보호되어야 한다. 적절한 용제 또는 분산매는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액상 폴리에틸렌 글리콜 등), 이의 적절한 혼합물, 및 식물성 기름을 함유할 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 레티신과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 일어날 수 있다. 많은 경우에, 등장액, 예를 들어 당 또는 염화 나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 장기적 흡수는 흡수를 지연하는 제제, 예를 들어 스테아린산 알루미늄 및 젤라틴의 조성물에서의 사용에 의해 일어날 수 있다.
멸균된 주사가능한 용액은 적절한 양의 본 발명의 임의의 본 명세서-기재된 핵산을, 원하는 임의의 다른 성분들(예를 들어 위에 열거한)과 함께 용매 내에 혼입시키고, 이후 여과 멸균하는 것에 의해 준비될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 원하는 다른 성분, 예를 들어 상기 열거한 것을 함유하는 멸균 비히클 내로 다양한 멸균된 활성 성분을 혼입시키는 것에 의해 준비된다. 멸균된 주사가능한 용액의 준비를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분(들)의 분말뿐만 아니라 임의의 추가적으로 원하는 성분을 이전에 멸균-여과된 이들의 용액으로부터 생산하는 진공-건조 및 냉동-건조 기술을 포함한다.
제형화 시에 용액은 투여 제형에 양립될 수 있는 방식으로, 그리고 치료적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다.
실시예
본 명세서에 개시된 발명이 보다 효율적으로 이해될 수 있도록 하기 위해, 하기에 실시예가 제공된다. 이러한 실시예는 예증을 위한 목적으로만 사용되는 것으로 이해돼야 하고, 임의의 방법으로 본 발명을 제한하는 것으로 이해되지 않는다.
실시예 1: 항-miR-22 잠금 핵산(LNA) 작제물의 설계
모든 LNA 항-miR-22는 인간 및 생쥐 양쪽에 유용하다. 숙주 유전자는 인간 및 생쥐 간에 49% 상보성을 나타내었고, LNA 항 HG-miR-22는 인간에게서 뚜렷하게 효과가 있다.
상기 작제물은, 씨드 서열을 커버하고 8개의 nt 내지 20개의 nt 길이를 함유하며 허용된 LNA의 길이-특이적 단편을 갖고 가급적 miR-22에 높은 결합 친화도를 갖도록 설계되었다(도 1 및 2a 내지 도 2c 참조).
설계 요소는 상기 작제물의 말단에 적어도 2개 변형을 포함하였다. 추가적인 설계 요소는 연이어 4개 이하의 LNA 변형을 포함하였다. 더 추가적인 설계 요소는 연이어 3개 이하의 비변형 잔기를 포함하였다.
상기 작제물은 이를 억제하는데 충분한 친화도로 miR-22에 결합하도록 설계되었다. 또한, 상기 작제물은 제한된 자가-결합 친화도를 갖거나 또는 자가-결합 친화도가 없도록 설계되었다(예를 들어, 듀플렉스 또는 폴드 구조가 제한적이거나 없음). 도 3a 내지 도 3b를 참조한다.
하기 서열에서, 대문자는 LNA-변형된 것이고 소문자는 비변형된 것이다; miR-22(서열번호 1)를 위한 그리고 항-miR-22 올리고뉴클레오타이드(서열번호 2 및 서열번호 7 내지 서열번호 13)를 위한 배향은 5'에서 3'로 정해진다. 도 1은 항-miR-22 올리고뉴클레오타이드가 miR-22에 하이브리드화될 때처럼 3'에서 5'로 배향됨을 나타낸다. 5'에서 3'로 배향된 서열번호 14 및 서열번호 15의 올리고뉴클레오타이드는 스크램블 서열이고 miR-22(서열번호 1)에 하이브리드화되지 않는다.
Figure pct00002
실시예 2: miR-22의 억제
MiR-22를 억제하는 실시예 1의 작제물의 능력이 평가되었다.
상기 서열은 부착 세포주에서, LNA 조력 흡취(Lipo200 세포감염)에 대한 프로토콜의 최적화에 의한 분석에서 입증되었고, FAM 표지된 LNA가 사용되었으며, 생물학적 효과는 부착 세포주 내에서 가장 가능성있는 항-miR-22 조력 및 비조력 흡취량을 확인하는 것에 의해 검증되었다(전 및 후 처리 miR-22 수준 및 TET2 활성 및 단백질 수준의 분석). 생체 내 처리용으로 사용하기 위한 가장 가능성있는 항-miR로 생쥐 모델 내에서 항-miR을 사용하는 것이 목적이었고, 확인 결과를 위해서는 도 3a-b, 도 4, 도 5, 도 6, 및 도 7을 참조한다.
MiR-22를 억제하는 실시예 1의 작제물 능력에 대한 추가적인 검증은 비만 모델에서 생체 내 평가되었다.
도 8을 보면, 예방을 위한 생체 내 실험 계획에서, HFD에 있는 2월령의 miR-22-/- 및 WT는 비히클(VCH), 스크램블 대조군 RNA(SCR) 및 실시예 1의 잠금 핵산(LNA)으로 세포감염되었고, 20 mg/kg의 부하량(최초) 및 10 mg/kg의 유지 투약량을 매주 IP 주사 비조력 흡취량으로 처리하였다. 도 9를 보면, 식량 소비에서 처리 및 비처리 생쥐 간에 차이가 없었다. miR-22의 생체 내 약물학적 억제는 생쥐가 비만이 되는 것을 예방하였다. 도 10 a-b 참조.
도 11은 항-miR-22-LNA, SCR 및 VHL로 처리된 HFD 상태에 있는 그리고 제 2 HFD 식이요법 상태에 있는 miR-22 -/- 및 WT 생쥐를 나타내는 치료 접근법의 픽토리얼이다. 도 12에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 작제물은, 체중 감소에 의해 입증된 바와 같이 miR-22를 억제하였다.
MiR-22 억제의 다른 증거는 MEF 지방세포 분화를 감소시킴을 나타내는 오일-레드-O 염색 실험에서 나타난다. 도 13은 실시예 1의 작제물에 의한 miR-22의 약물학적 억제가 MEF 지방세포 분화를 감소시키는 데 효과적임을 보여준다. 도 14는 LNA 항-miR-22를 사용하는 또는 이를 사용하지 않는 지방 분화 배지에서 2주 동안 배양된 인간 일차 간엽세포 내에 항-miR-22 처리를 나타내는 오일-레드 O 염색(도 14a) 및 막대 그래프(도 14b)이다. 비조력 흡취량 500nM(LNA는 2일마다 첨가되었다). 도 14b에서, 각 막대 그래프에 있는 오른쪽(적색) 막대에서의 데이터는 LNA#10-처리된 세포에 대한 것이다. 도 15는 miR-22의 약물학적 억제가 MEF 지방세포 분화를 감소시키는데 효과적임을 나타내주는 막대 그래프이다. 막대 그래프에서의 데이터의 순서는, 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때, 위에서 아래는 읽는 경우 범례(그래프의 오른쪽)와 상응한다. LNA의 수는 상기 실시예 1과 상응한다.
따라서, 실시예 1의 핵산 작제물은 miR-22를 억제하는데 효과적이다.
다른 실시형태
본 개시내용은 이의 상세한 기술과 함께 기재되므로, 전술한 기술은 본 개시내용의 범위를 제한하지 않고 설명하도록 하는 것으로 이해되며, 추가된 청구 범위에 의해 정의된다. 다른 측면, 이점, 및 변형은 하기 청구 범위 내에 있다.
참조의 포함
본 명세서에 참조된 모든 특허 및 공개물은 이들의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있다. 본 명세서에 언급된 공개물은 본 출원의 출원일 전에 이들의 공개를 위해서만 제공된다. 본 발명이 선행 발명에 의해 이러한 공개물을 개정할 자격을 주는 것이 아님을 본 명세서에 있는 어떤 것도 인정하는 것으로 해석되지 않는다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 모든 제목은 구성을 위해 간단하게 나타내며 어떤 형태든 개시내용을 제한하는 것은 아니다.
<110> BETH ISRAEL DEACONESS MEDICAL CENTER AALBORG UNIVERSITY <120> INHIBITORS OF MICRO-RNA 22 <130> WO2019/178411 <140> PCT/US2019/022351 <141> 2019-03-14 <150> US 62/642,934 <151> 2018-03-14 <160> 15 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1 aagcugccag uugaagaacu gu 22 <210> 2 <400> 2 000 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 3 cttcaactgg cagct 15 <210> 4 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 4 tcttcaactg gcagct 16 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 5 ttcttcaact ggcagct 17 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 6 gttcttcaac tggcagct 18 <210> 7 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 7 cttcaactgg cagct 15 <210> 8 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 8 cttcaactgg cagct 15 <210> 9 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 9 tcttcaactg gcagct 16 <210> 10 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 10 tcttcaactg gcagct 16 <210> 11 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 11 tcttcaactg gcagct 16 <210> 12 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 12 ttcttcaact ggcagct 17 <210> 13 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 13 gttcttcaac tggcagct 18 <210> 14 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 14 cgaatagtta gtagcg 16 <210> 15 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Nucleic Acid <400> 15 cgaatagtta gtagcg 16

Claims (30)

  1. tggcagct(서열번호 2)를 포함하는 서열을 갖는 핵산을 포함하는 miR-22 억제성 조성물(miR-22 inhibitory composition)로서,
    상기 핵산이 적어도 1개의 잠금 핵산(locked nucleic acid: LNA) 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 tggcagct(서열번호 2)의 7 및 8 위치에서 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 하기로부터 선택된 서열을 갖는 핵산을 포함하는, miR-22 억제성 조성물: tggcagct(서열번호 2), cttcaactggcagct(서열번호 3), tcttcaactggcagct(서열번호 4), ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 gttcttcaactggcagct(서열번호 6).
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 약 8개 내지 약 12개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 핵산이 약 8개 내지 약 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  6. 제1항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 약 8개, 또는 약 9개, 또는 약 10개 또는 약 11개, 또는 약 12개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 핵산이 약 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 tggcagct(서열번호 2), 및 적어도 6개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 tggcagct(서열번호 2), 및 적어도 8개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 적어도 6개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  11. 제8항에 있어서, 상기 핵산이 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 적어도 8개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  12. 제8항에 있어서, 상기 핵산이 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 핵산이 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 8개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 3, 6, 7, 10, 12, 14, 및 15 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 상기 핵산이 cttcaactggcagct(서열번호 3), 및 10개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 3, 6, 7, 10, 11, 12, 14 및 15 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 적어도 8개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 적어도 11개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  18. 제16항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 10개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 4, 8, 10, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  20. 제17항에 있어서, 상기 핵산이 tcttcaactggcagct(서열번호 4), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 4, 5, 6, 9, 11, 12, 13, 15, 및 16 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 핵산이 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 적어도 11개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 핵산이 ttcttcaactggcagct(서열번호 5), 및 11개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 5, 6, 7, 10, 12, 13, 14, 16, 및 17 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 상기 핵산이 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 적어도 9개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 핵산이 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 적어도 10개의 LNA 변형을 포함하는, miR-22 억제성 조성물.
  26. 제24항에 있어서, 상기 핵산이 gttcttcaactggcagct(서열번호 6), 및 9개의 LNA 변형을 포함하고, 상기 변형이 1, 2, 6, 10, 13, 14, 16, 17, 및 18 위치에 있는, miR-22 억제성 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 핵산 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는, 약학적 조성물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는, 벡터 또는 플라즈미드.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는, 숙주 세포.
  30. miR-22를 억제하는 방법으로서, miR-22를 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 miR-22 억제성 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, miR-22를 억제하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200131287A (ko) 2018-03-14 2020-11-23 베스 이스라엘 데코니스 메디칼 센터 마이크로-rna 22의 억제제
CN110609142A (zh) * 2019-10-09 2019-12-24 广州医科大学附属第二医院 一种检测外周血fto蛋白与自身调控元件结合能力的方法与应用
CN115029347B (zh) * 2022-05-11 2024-02-20 珠海中科先进技术研究院有限公司 识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒
CN116082447A (zh) * 2022-09-09 2023-05-09 湖南大学 一种多肽及其制备方法
CN117304258B (zh) * 2022-09-09 2024-09-24 湖南大学 一种多肽的用途
EP4353823A1 (en) * 2022-10-12 2024-04-17 Resalis Therapeutics S.r.l. Inhibitors of micro-rna 22

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5981505A (en) 1993-01-26 1999-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for delivery of genetic material
US5837533A (en) 1994-09-28 1998-11-17 American Home Products Corporation Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent
US5840710A (en) 1994-12-09 1998-11-24 Genzyme Corporation Cationic amphiphiles containing ester or ether-linked lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules
US6217900B1 (en) 1997-04-30 2001-04-17 American Home Products Corporation Vesicular complexes and methods of making and using the same
ATE321882T1 (de) 1997-07-01 2006-04-15 Isis Pharmaceuticals Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
CN1311630A (zh) 1998-05-26 2001-09-05 Icn药品公司 具有双环糖部分的新核苷类
US6838283B2 (en) 1998-09-29 2005-01-04 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of survivin expression
US6693187B1 (en) 2000-10-17 2004-02-17 Lievre Cornu Llc Phosphinoamidite carboxlates and analogs thereof in the synthesis of oligonucleotides having reduced internucleotide charge
AU2003266014B2 (en) 2002-05-06 2009-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for delivery of nucleic acids
CA2850323A1 (en) 2004-11-12 2006-12-28 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving mirna and mirna inhibitor molecules
US20070213292A1 (en) * 2005-08-10 2007-09-13 The Rockefeller University Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
ES2387250T3 (es) * 2005-12-12 2012-09-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Microarn que regulan la proliferación y diferenciación de células musculares
AU2013254923A1 (en) * 2006-04-03 2013-11-28 Santaris Pharma A/S Pharmaceutical compositions comprising anti-miRNA antisense oligonucleotide
EP2194129A3 (en) * 2006-04-03 2012-12-26 Santaris Pharma A/S Pharmaceutical composition comprising anti-miRNA antisense oligonucleotides
ES2406686T3 (es) * 2007-10-04 2013-06-07 Santaris Pharma A/S Micromirs
US8962253B2 (en) * 2009-04-13 2015-02-24 Somagenics Inc. Methods and compositions for detection of small RNAs
NZ597078A (en) * 2009-06-08 2013-11-29 Miragen Therapeutics CHEMICAL MODIFICATION MOTIFS FOR miRNA INHIBITORS AND MIMETICS
TW201238973A (en) 2010-12-17 2012-10-01 Sanofi Sa MiRNAs in joint disease
US10131905B2 (en) 2011-04-12 2018-11-20 Beth Israel Deaconess Medical Center Micro-RNA inhibitors and their uses in disease
JP6092655B2 (ja) * 2012-02-23 2017-03-08 善基 村上 テスト体液サンプルの分類方法
US9034839B2 (en) 2012-04-20 2015-05-19 Aptamir Therapeutics, Inc. miRNA modulators of thermogenesis
WO2013181613A1 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Research Development Foundation Mirna for the diagnosis and treatment of autoimmune and inflammatory disease
MX355408B (es) * 2012-06-21 2018-04-18 Miragen Therapeutics Inc Inhibidores a base de oligonucleotidos que comprenden un motivo de acido nucleico bloqueado.
US9822358B2 (en) 2013-10-18 2017-11-21 Beth Israel Deaconess Medical Center Treatment of cancers with micro-RNA inhibitors
WO2015113922A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Poly oligomer compound with biocleavable conjugates
WO2016127002A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
CA3017571A1 (en) * 2015-03-16 2016-09-22 Duncan Ross Method of treatment comprising membrane-enclosed vesicle
EP3449001B1 (en) 2016-04-29 2021-12-08 Aptamir Therapeutics, Inc. Inhibition of mir-22 mirna by apt-110
CN107432933A (zh) * 2017-07-13 2017-12-05 中南大学湘雅三医院 miR‑22作为靶位点在制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物中的应用
WO2019053235A1 (en) * 2017-09-15 2019-03-21 Genfit NON-INVASIVE DIAGNOSIS OF NON ALCOHOLIC LIVER DISEASES, NON ALCOHOLIC STHEATHEPATITIS AND / OR HEPATIC FIBROSIS
KR20200131287A (ko) 2018-03-14 2020-11-23 베스 이스라엘 데코니스 메디칼 센터 마이크로-rna 22의 억제제
WO2019217907A1 (en) * 2018-05-11 2019-11-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for the treatment of hepatic and metabolic diseases

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