KR20200060567A - 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하여, 적외선 영역의 태양광에 의한 열로부터 발생된 피부 주름을 보다 효율적으로 개선할 수 있도록 피부 내부의 콜라겐을 생합성할 수 있도록 콜라겐 전구체인 Type Ⅰ pro-collagen을 보다 다량으로 합성할 수 있도록 할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 원료 수급이 보다 수월한 경단구슬모자반을 유효성분으로 포함하여, 화장품 등의 제품으로 적용 시 보다 생산 원가를 포함한 비용을 절감할 수 있다.

Description

경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION INCLUDING AS EFFECTIVE INGREDIENT AN EXTRACT OF SARGASSUM MUTICUM}

본 발명은 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

모자반(Sargassum)은, 모자반속 조류의 총칭으로서, 특정 종 Sargassum fulvellum 또는 대형 갈조류를 통칭하는 말이기도 하다.

모자반은 우리나라를 비롯하여 일본이나 동남아시아 일대에 50여 종이 생육하고 있다. 모자반속이 무성한 곳은 각종 연안동물들이 먹이를 얻거나 산란하기에 적합하여, 환경보존과 어업자원 확보를 위해서도 매우 중요한 구실을 한다. 한국에서도 모자반속의 많은 종류가 식용되기도 하며, 알긴산 등 해조 공업의 원료로 이용되거나 비료로도 쓰인다.

모자반은 항암, 당뇨 및 혈관계 등에 대한 유익한 효능이 알려지면서, 이에 대한 추가적인 연구가 활발하게 진행되고 있다.

한편, 현대인들의 삶의 질이 향상되고 이에 따른 사람들의 외모에 대한 관심이 증가하면서 화장품의 수요가 급증하였고, 그 중에서 피부 노화 및 주름 개선의 효능이 뛰어난 화장품들에 대한 관심이 집중되고 있다.

인간의 노화 현상 중 하나인 피부의 노화는 그 원인으로 크게 내적, 외적 요인으로 나누어지는데, 그 중 외적요인으로 태양광에 의한 UV 조사는 피부노화의 생리학적, 형태학적 변화의 주된 원인으로 알려져 있다.

따라서, 태양광에 의한 UV 조사에 따른 피부 노화를 예방하고자 하는 기술들은 이미 많이 알려져 있다. 그러나, 태양광은 UV 뿐만 아니라 적외선 또는 가시광선 형태로도 피부 노화를 발생시킬 수 있으며, 이러한 피부 노화에 대한 연구는 미진한 상황이다.

최근에는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 주름완화, 미백 등의 기능을 가진 기능성 화장품(functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있으며, 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 천연 재료를 이용한 피부 외용제에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 광노화 방지 화장료 조성물의 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다.

특허문헌 1은, 이러한 천연물 중에서도 모자반에 대한 추출물을 포함하여 피부와 관련된 효능을 확인한 기술을 제안하고 있다.

보다 구체적으로, 특허문헌 1에 개시된 기술은, 1.톱니모자반 주정 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 톱니모자반 주정 추출물은 a) 톱니모자반을 양지에서 자연건조 후 마쇄하여 분말화하는 단계; b) 상기 분말에 주정을 첨가하여 70℃에서 환류냉각 추출한 후 50kDa의 여과막을 사용한 한외여과기를 통해 이물질을 제거하는 단계; 및 c) 상기 b) 단계를 통해 수득한 여과 추출물에서 주정을 제거하는 단계를 포함하는 과정을 통해 제조되는 것을 특징으로 하는, 주름개선용 화장료 조성물을 개시하고 있다.

그러나, 특허문헌 1에서는 태양광 중 UV 조사에 대한 피부 노화에 초점이 맞추어져 있으며, 대표적인 피부 노화 요인 중 하나인 열에 의한 피부 노화에 대한 주름 개선에 대한 효능이 충분히 발휘되지 못한 문제점이 있다.

특허문헌 1: 한국 등록특허공보 제10-1589002호

본 발명은, 상기 종래 기술의 문제점 해결을 위한 것으로, 모자반 중에서도 원료 수급이 수월한 경단구슬모자반의 추출물을 유효성분으로 포함하여 보다 적외선 영역대의 태양광에 의해 발생되는 열에 의한 피부 노화에 따른 주름을 개선할 수 있는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은, 상기 언급한 과제 해결을 위하여, 경단구슬모자반(Sargassum muticum) 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서, 상기 경단구슬모자반 추출물의 농도는 50μg/mL 이하이고, 상기 화장료 조성물은 피부 열 노화에 의한 주름 개선 용도로 사용되며, 상기 피부 열 노화는 적외선에 의해 발생되는 열에 의한 피부 노화인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 주름 개선은 사람 각질 형성 세포(HaCaT)에서 콜라겐 생성을 촉진함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 콜라겐 생성은 Type Ⅰ pro-collagen을 생합성하는 단계를 포함하는 과정을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 화장료 조성물은 로션, 스킨로션, 모이스처로션, 영양로션, 스킨토너, 에센스, 파운데이션, 영양크림, 핸드크림, 모이스처크림, 마사지크림, 마스크팩, 올인원크림, 비비크림, 씨씨크림, 비누, 바디로션, 바디크림, 바디클렌저, 클렌징로션, 클렌징 폼, 샴푸, 린스 또는 컨디셔너로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 1종 이상의 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 포함하여, 적외선 영역의 태양광에 의한 열로부터 발생된 피부 주름을 보다 효율적으로 개선할 수 있도록 피부 내부의 콜라겐을 생합성할 수 있도록 콜라겐 전구체인 Type Ⅰ pro-collagen을 보다 다량으로 합성할 수 있도록 할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 원료 수급이 보다 수월한 경단구슬모자반을 유효성분으로 포함하여, 화장품 등의 제품으로 적용 시 보다 생산 원가를 포함한 비용을 절감할 수 있다.

첨부된 도면은 해당 기술 분야의 통상의 기술자에게 본 발명의 내용을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 기술적 사상이 이에 한정되는 것은 아니다.
도 1은, 본 발명에 따른 실험예 3에서의 세포 독성 결과를 나타낸 도이다.
도 2는, 본 발명에 따른 실험예 4에서의 MMP-1 생성 저해 활성 측정 결과를 나타낸 도이다.
도 3은, 본 발명에 따른 실험예 5에서의 Type I pro-collagen 생합성량 측정 결과를 나타낸 도이다.
도 4는, 본 발명에 따른 실험예 6에서의 RT-PCR에 따른 mRNA 발현 결과를 나타낸 도이다.
도 5 내지 도 9는, 본 발명에 따른 경단구슬모자반 추출물을 함유하는 화장품에 대한 자외선에 의해 발생된 열에 대한 효과를 실제 피평가자들을 대상으로 실험한 후, 적외선 체열영상진단기로 관찰한 도이다.
도 10 내지 도 14는, 본 발명에 따른 경단구슬모자반 추출물을 함유하는 화장품에 대한 적외선에 의해 발생된 열에 대한 효과를 실제 피평가자들을 대상으로 실험한 후, 적외선 체열영상진단기로 관찰한 도이다.

이하, 본 발명에 따른 화장료 조성물에 관하여 상세히 설명하나, 상기 화장료 조성물의 범위가 하기 설명에 의해 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명은 경단구슬모자반(Sargassum muticum) 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 명세서상의 용어 "추출물"은, 원료 물질에 대한 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 의미이다.

상기 경단구슬모자반(Sargassum muticum) 추출물은 특별히 제한된 것은 아니나, 예를 들어 통상적인 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나에 의한 과정을 통하여 수득될 수 있으며, 구체적으로는 본 명세서상의 실시예 부분에 기재된 추출 과정을 통하여 수득될 수 있다.

상기 경단구슬모자반의 추출물의 농도는 50μg/mL 이하, 40μg/mL 이하 또는 30μg/mL 이하이고, 하한은 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 0.1μg/mL 이상, 1μg/mL 이상 또는 5μg/mL 이상일 수 있다.

상기 경단구슬모자반의 추출물의 농도가 전술한 범위 이외의 농도일 경우에는 세포 독성이 나타나거나, 본 발명에 대한 효과 구현이 미미하므로, 전술한 범위의 농도를 가진 경단구슬모자반 추출물을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 경단구슬모자반으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 에탄올(주정)을 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 70％ 에탄올을 사용하는 것이 좋다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 경단구슬모자반 추출물의 제조 방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 열 노화에 의한 주름 개선 용도를 위해 사용될 수 있다.

상기 주름 개선은, 사람 각질 형성 세포(HaCaT)에서 콜라겐 생성을 촉진함으로써 수행될 수 있으며, 상기 콜라겐 생성은 Type Ⅰ pro-collagen을 생합성하는 단계를 포함하는 과정을 통해 수행될 수 있다.

상기 콜라겐 생성을 위한 Type Ⅰ pro-collagen과 관련하여, 일반적으로 진피조직에서 콜라겐은 피부 보습과 탄력에 영향을 미치며 나이가 증가할수록 진피 층 섬유아세포 및 콜라겐, 엘라스틴 등 구조 단백질의 량이 줄어들어 조직이 느슨해지는데 이는 피부노화의 요인으로 간주할 수 있으며, 체내에 존재하는 콜라겐 중 전체 콜라겐의 약 80％ 내지 85％를 차지하는 것이 콜라겐 type Ⅰ이다.

본 발명에 있어서, 상기 콜라겐 생성은 체내에 존재하는 콜라겐 중 상기 Type Ⅰ 콜라겐에 대한 전구체 또는 상기 콜라겐을 합성할 수 있는 중간체일 수 있다.

상기 피부 열 노화는 적외선에 의해 발생되는 열에 의한 피부 노화일 수 있으며, 상기 적외선은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 750㎚ 내지 2,000㎚, 750㎚ 내지 1,500㎚ 또는 750㎚ 내지 1,000㎚ 파장 영역대의 태양광일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴 화장수, 유연 화장수, 영양화장수, 각종크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 로션, 스킨로션, 모이스처로션, 영양로션, 스킨토너, 에센스, 파운데이션, 영양크림, 핸드크림, 모이스처크림, 마사지크림, 마스크팩, 올인원크림, 비비크림, 씨씨크림, 비누, 바디로션, 바디크림, 바디클렌저, 클렌징로션, 클렌징 폼, 샴푸, 린스 또는 컨디셔너로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 필요한 경우 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 1종 이상의 보조제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 유효성분(경단구슬모자반 추출물 또는 이의 분획물)의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 1 중량％ 내지 20 중량％이며, 바람직하게는 1 중량％ 내지 5 중량％이며, 보다 바람직하게는 2 중량％ 내지 3 중량％이다. 상기 유효성분(경단구슬모자반 추출물 또는 이의 분획물)의 함량이 1 중량％ 미만이면 피부 주름 개선 효과가 크게 감소될 수 있고, 20 중량％를 초과하는 경우에는 세포 독성이나 피부 자극을 초래할 수 있으며, 제형상의 문제점이 발생할 수 있다.

한편, 필요한 경우, 본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은 유효성분(경단구슬모자반 추출물 또는 이의 분획물)을 나노 리포좀 내부에 함유시켜 안정화하여 제형화할 수도 있다. 상기 유효성분(경단구슬모자반 추출물 또는 이의 분획물)을 나노리포좀 내부에 함유시키면, 유효성분이 안정화되어 제형화시 침전형성, 변색, 변취 등의 문제점을 해결할 수 있으며, 성분의 용해도 및 경피 흡수율을 높일 수 있어 상기 추출물로부터 기대되는 효능인 콜라겐 합성을 최대로 발현시킬 수 있다.

본 발명에서 나노 리포좀은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 10~500nm인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현 예에 따르면, 나노 리포좀의 평균 입자 지름은 50~300nm이며, 더욱 바람직하게는 100~200nm이다. 나노 리포좀의 평균 입자 지름이 500nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명에 따라 상기 추출물을 안정화하는데 사용되는 나노 리포좀은 폴리올, 유성성분, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 나노 리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자일리톨, 솔비톨 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다. 그 사용량은 나노 리포좀 총 중량에 대하여 10~80중량％, 바람직하게는 30~70중량％이다.

본 발명의 나노 리포좀의 제조에 이용되는 유성(oil) 성분은 당업계에 공지된 다양한 오일이 이용될 수 있으며, 바람직하게는 헥사데칸 및 파라핀 오일과 같은 하이드로카본계 오일, 에스테르계의 합성오일, 디메치콘 및 사이크로메치콘계와 같은 실리콘 오일, 해바라기유, 옥수수유, 대두유, 아보카도유, 참깨유 및 어유와 같은 동식물성 오일, 에톡시레이티드 알킬에테르계오일, 프로폭시레이티드 알킬에테르계오일, 피토스핑고신, 스핑고신 및 스핑가닌과 같은 스핑고노이드 지질, 세레브로사이드 콜레스테롤, 시토스테롤 콜레스테릴설페이트, 시토스테릴설페이트, C10-40 지방알콜 및 이의 혼합물이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여1.0~30.0중량％일 수 있으며, 바람직하게는 3.0~20.0중량％이다.

본 발명의 나노 리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있다. 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있다. 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제이다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드 알킬에테르, 알콕시레이티드 알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 특히 바람직한 계면활성제는 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1~10중량％일 수 있으며, 바람직하게는 0.5~5.0중량％이다.

본 발명의 나노 리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질이 이용되며, 천연 인지질(예를 들어, 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질(예를 들어, 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 특히, 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이 바람직하다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜콜린의 양이 23~95％, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20％ 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 인지질의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5~20.0중량％이며, 바람직하게는 2.0~8.0중량％이다.

본 발명의 나노 리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05~3.0중량％일 수 있으며, 바람직하게는 0.1~1.0중량％이다.

본 발명의 나노 리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노 리포좀 총 중량에 대하여 5.0~40중량％일 수 있다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600~1200bar의 압력 하에서 1~5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 주름개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

또한, 필요한 경우, 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

또한, 피부에 도포할 수 있는 제형으로서 흡수성 젤, 패드, 패치, 스폰지 및 마스크팩 형태의 조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 적용되는 형태는 특별한 제한이 없으며, 예를 들어, 피부에 바르는 형태로 적용될 수도 있고, 마이크로 니들 등을 이용하여 피부 내부로 흡수되는 형태로 적용될 수도 있다.

이하, 본 발명을 구체적인 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실험예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실험예에 한정되는 것은 아니다.

[실험예 1] 세포 배양

실험에 사용된 세포는 human keratinocyte cell (HaCaT)를 CLS Cell Lines Service GmbH (Eppelheim, Baden-W

rttemberg, Germany)으로부터 분양받았으며, 항생제 1％ penicillin/streptomycin과 10％ fetal bovine serum (FBS)와 25％ F-12 nutrient mixure가 함유된 dulbecco’s modified Eagle’s minimal essential medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5％ CO₂ 항온기에서 배양하되, 2일에 한 번씩 계대 배양하였다.

[실험예 2] 경단구슬모자반 추출물의 제조

본 발명에 사용한 경단구슬모자반은 추가도에서 채취하였고, 경단구슬모자반 추출물은 자연 건조된 2000g을 열풍건조로 500g의 시료를 얻어 70％ 에탄올 수용액에 넣고, 72시간 동안 침지 추출하였고 이 여액을 여과지로 여과한 후 감압 농축한 농축액을 얻는 과정을 통하여 최종적으로 경단구슬모자반 추출물 샘플을 제작하였다.

[실험예 3] 경단구슬모자반 추출물의 세포 독성 평가

HaCaT 세포는 1.5 × 10⁵ cells/mL로 24well plate에 넣고 24시간 전 배양 후, 혈청이 포함되지 않은 배지를 가하였다. 그 후, 24시간 starvation 과정을 진행하였다. 24시간 후 혈청이 포함되지 않은 배지를 가한 후 44℃로 맞춰진 워터배스(water bath)에 파라필름으로 밀봉한 플레이트를 넣고 30분 동안 열 자극을 준 후, 혈청이 포함되지 않은 배지에 25μg/mL, 50μg/mL 및 100μg/mL 농도로 시료를 희석하여 각 플레이트에 400μl씩 처리하였다. 20시간 배양한 후 각각 MTT 용액(4mg/mL)을 400μl 처리하여 2시간 동안 반응시키고 세포 독성을 측정하였다.

이 경우, MTT solution이 처리된 세포배양 상등액을 제거하고 형성된 비수용성 formazan 침전물을 DMSO를 가하여 완전히 용해시킨 후, microplate reader를 사용하여 570㎚ 흡광도를 측정하였다. 시료 무처리군을 기준으로 흡광도 값을 비교하여 세포 독성을 측정하였다.

본 실험예 3에서의 세포 독성 결과는 도 1에 나타내었다.

[실험예 4] MMP-1 ELISA assay

24 well plate에 HaCaT cells를 1.5 × 10⁵ cells/mL로 24시간 전 배양 후, 혈청이 포함되지 않은 배지를 가하였다. 그 후, 24시간 starvation 과정을 진행하였다. 24시간 후 혈청이 포함되지 않은 배지를 가한 후 44℃로 맞춰진 워터배스(water bath)에 파라필름으로 밀봉한 플레이트를 넣고 30분 동안 열 자극을 준 후, 혈청이 포함되지 않은 배지에 25μg/mL 및 50μg/mL 농도로 시료를 희석하여 각 플레이트에 400μl씩 처리하였다. 24시간 후 세포배양 상등액을 회수하여 MMP-1 함량을 측정하였다. MMP-1 저해 활성 정도는 Human Pro-MMP-1 Quantikine ELISA Kit를 이용하여 측정하였다.

본 실험예 4에서의 MMP-1 생성 저해 활성 측정 결과는 도 2에 나타내었다.

[실험예 5] Type I pro-collagen ELISA assay

24 well plate에 HaCaT cells를 1.5 × 10⁵ cells/mL로 24시간 전 배양 후, 혈청이 포함되지 않은 배지를 가하였다. 그 후, 24시간 starvation 과정을 진행하였다. 24시간 후 혈청이 포함되지 않은 배지를 가한 후 44℃로 맞춰진 워터배스(water bath)에 파라필름으로 밀봉한 플레이트를 넣고 30분 동안 열 자극을 준 후, 혈청이 포함되지 않은 배지에 25μg/mL 및 50μg/mL 농도로 시료를 희석하여 각 플레이트에 400μl씩 처리하였다. 24시간 후 세포배양 상등액을 회수하여 procollagen의 양은 Procollagen Type I C-peptide (PIP) EIA Kit를 이용하여 측정하였다.

본 실험예 5에서의 Type I pro-collagen 생합성량 측정 결과는 도 3에 나타내었다.

[실험예 6] RT-PCR

HaCaT 세포를 60㎜ 플레이트에 3 × 10⁵ cell/well 이 되도록 접종한 후, 24시간 배양 후, 배양액을 버리고 혈청이 포함되지 않은 배지를 가하였다. 그 후, 24시간 starvation 과정을 진행하였다. 24시간 후 혈청이 포함되지 않은 배지를 가한 후 44℃로 맞춰진 워터배스(water bath)에 파라필름으로 밀봉한 플레이트를 넣고, 15분 동안 열 자극을 준 후, 혈청이 포함되지 않은 배지에 25μg/mL 및 50μg/mL 농도로 시료를 희석하여 각 플레이트에 4mL씩 처리하였다. 24시간 추가 배양한 세포를 차가운 PBS 완충 용액으로 세척한 다음 각 플레이트에 500μL의 Trizol을 넣고 15분 동안 상온에서 반응시킨 후, 세포를 회수하였다. 그 후, 200μL 클로로포름(chloroform)을 넣고 vortexing을 수행하였다. 4℃, 15,000×rpm에서 15분간 원심분리를 수행하여 150μL의 상층액을 회수한 후, 각 튜브에 150μL의 isopropanol을 가하였고, 그 후 voltexing을 수행하고, 실온에서 15분간 반응시켰다. 그 후, 4℃, 15,000×rpm에서 15분간 원심분리를 수행하여 RNA를 침전시킨 후, 상등액을 버렸다. 75％ 에탄올을 사용하여 RNA pellet을 세척 (4℃, 15,000×rpm에서 20 분간 원심분리)한 후, air dry 시켜 DEPC H2O를 넣어 RNA를 추출하였다. 총 RNA를 전기 영동으로 확인 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 RNA를 정량한 다음, cDNA를 합성하였다.

cDNA 합성은 ‘MG cDNA Synthesis kit Ⅱ, MG Med, )를 사용하여 다음과 같이 수행하였다. 총 RNA (0.2μg)에 10mM each dNTPs 1μL와 Oligo dT (15mer) 2μL를 가한 후 총 부피가 10μL가 되도록 한 뒤 65℃에서 5분 동안 반응하였고, Template RNA Primer Mixture 10μL에 10×MG RT Buffer 2uL, MG MMLV RT(200units/μL) 1μL, RNase inhibitor(40units/μL) 0.5μL를 가한 후, 총 부피가 20μL가 되도록 nuclease free water를 가해 준 후, 50℃에서 40분 동안 반응 조건을 설정하여 수행하였다.

그 후, cDNA 증폭은 ‘MG 2× HOT MasterMix without Dye, MG Med, MP02505’를 사용하여 다름과 같이 수행하였다.

3배로 희석한 cDNA 1μL, MG HOT MasterMix(2×) without Dye 10μL, 정방향 프라이머(forward primer, 10 pmol) 0.5μL, 역방향 프라이머(reverse primer, 10 pmol), nuclease free water 7μL를 혼합하여 cDNA를 증폭하였다. 타겟 유전자의 증폭을 위해 사용된 프라이머 배열은 아래 [표 1]과 같다.

MMP-1	forward	5'-ATT CTA CTG ATA TCG TGA-3'
	reverse	5'-ATG TCC TTG TAT CCG TGTAG-3'
HSP47	forward	5'-CGT CTC GAC TCC TGG GAA TG-3'
	reverse	5'-ACA TGG CGT TGA CTA GCA GG-3'
β-actin	forward	5'-TCA TGT AGA CCT A-3'
	reverse	5'-GTC TTT GCG CAC G-3'

본 실험예 6에서의 RT PCR에 따른 mRNA 발현 결과는 도 4에 나타내었다.

도 1 내지 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 첨가한 실험군에서는 특정 농도(50μg/mL 이하)에서 세포 독성이 없다는 점, MMP-1에 대한 활성 저해는 나타나지 않는 점 및 대조군에 대비하여 pro-collagen의 생합성량을 증가시키는 점 및 HSP47의 mRNA 수준의 발현이 증가하는 점 등으로부터 피부에 대한 주름 개선을 위한 용도로 적용될 수 있음을 확인할 수 있었다.

추가적으로, 실제 주름 개선을 위한 화장료 조성물을 제조하여, 인체 피부에 대한 실험을 통하여 보다 구체적인 피부 주름 원인군에 대한 특정을 하고자 하였다.

[제조예 1] 화장료 조성물 제조

<1-1> 유연 화장수(skin)

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 함유한 유연 화장수(skin)를 아래 [표 2]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량％)
경단구슬모자반 추출물	1~3
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
REG 1500	1.0
알렌토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
벤조페논-9	0.04
소듐 히아루로네이트	5.0
에탄올	10.0
옥틸도데세스-16	0.2
폴리솔베이트 20	0.2
유니사이드-유 13	0.01
향	미량
증류수	잔량
합계	100

<1-2> 영양화장수(lotion)

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 함유한 영양 화장수(lotion)를 아래 [표 3]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량％)
경단구슬모자반 추출물	1~3
글리세릴 스테아레이트 SE	1.5
세테아릴알콜	1.5
라놀린	1.5
폴리솔베이트 60	1.3
솔비타스테아레이트	0.5
경화식물유	4.0
광물유	5.0
트리옥타노인	2.0
디메치콘	0.8
초산 토코페롤	0.5
카르복시비닐 폴리머	0.12
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
소듐히아루로네이트	5.0
트리에탄올아민	0.12
유니사이드-유 13	0.02
향	미량
증류수	잔량
합계	100

<1-3> 영양크림

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 함유한 영양크림을 아래 [표 4]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량％)
경단구슬모자반 추출물	1~10
친유형 모모스테아린산 글리세린	1.5
세테아릴알콜	1.5
폴리솔베이트 60	1.0
솔비타스테아레이트	1.5
이소스테아릴 이소스테레이트	0.6
스쿠알란	5.0
광물유	35.0
디메치콘	0.5
히드록시에틸셀룰로오스	0.12
글리세린	6.0
트리에탄올아민	0.7
유니사이드-유 13	0.02
향	미량
증류수	잔량
합계	100

<1-4> 마사지크림

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 함유한 마사지크림을 아래 [표 5]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량％)
경단구슬모자반 추출물	1~3
프로필렌글리콜	6.0
세테아릴알콜	2.0
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
트리에탄올아민	0.5
토코페닐아세테이트	0.1
밀납	2.0
글리세린	4.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향	미량
증류수	잔량
합계	100

<1-5> 팩

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 함유한 팩을 아래 [표 6]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량％)
경단구슬모자반 추출물	1~3
베타인	5.0
REG 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
벤조페논-9	0.04
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐 히아루로네이트	80.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데칸올	0.3
옥틸도데세스-16	0.4
글리세린	10.0
에탄올	6.0
유니사이드-유 13	0.01
향	미량
증류수	잔량
합계	100

본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 포함하는 화장품 형태 중 유연 화장수를 사용하여, 직접 얼굴에 열이 발생한 사람 20명을 피평가자들로 하여, 피평가자들을 대상으로 피부 온도 변화에 대한 평가를 실시하였다.

구체적으로, 피평가자들은 만 30세에서 만 55세 이하의 성인 여성 20명을 대상으로 수행하였다.

이 경우, 열 발생 요인을 자외선 파장 영역대인 100㎚ 내지 400㎚에서의 빛을 피평가자들 안면에 조사하여 열 발생을 시켰다.

그 후, 본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 포함하는 화장품 형태 중 유연 화장수를 사용하여 피평가자들 안면에 도포한 후, 적외선 체열영상진단기 (THERMOGRAPHY, MEDICORE, Korea)로 온도 감소 측정 실험을 하였으며, 온도 측정은 사용 전, 가온 후 및 제품 사용 후 각각 총 3번 측정하였다.

온도 측정 결과는 아래 표 7에 나타내었으며, 실제 적외선 체열 영상 진단기로 측정한 사진의 예는 도 5 내지 도 9에 나타내었다.

구분(단위:℃)	사용 전	가온 후	제품 사용 후
1	28.62	30.46	29.39
2	26.58	29.21	28.54
3	28.21	30.16	29.36
4	28.34	30.84	29.29
5	26.98	29.39	28.12
6	27.47	29.76	29.28
7	27.60	29.63	29.50
8	28.98	30.32	29.72
9	28.18	30.03	29.15
10	27.16	30.57	29.80
11	27.87	31.01	29.84
12	26.99	30.08	29.31
13	27.87	30.59	29.19
14	30.05	32.14	31.94
15	27.47	29.19	28.42
16	27.53	30.33	29.75
17	27.71	30.79	29.23
18	29.02	31.77	31.16
19	30.10	32.30	31.15
20	26.94	28.94	27.73

또한, 동일한 피평가자들은 대상으로, 열 발생 요인을 자외선이 아닌 적외선 파장 영역대인 750㎚ 이상의 파장대(특히 적외선은 적외선 조사기(IR-2009, Yeollin Sesang, Korea)를 사용함)에서의 빛을 피평가자들 안면에 조사하여 열 발생을 시켰다.

그 후, 본 발명의 경단구슬모자반 추출물을 포함하는 화장품 형태 중 유연 화장수를 사용하여 피평가자들 안면에 도포한 후, 적외선 체열영상진단기 (THERMOGRAPHY, MEDICORE, Korea)로 온도 감소 측정 실험을 하였으며, 온도 측정은 사용 전, 가온 후 및 제품 사용 후 각각 총 3번 측정하였다.

온도 측정 결과는 아래 표 8에 나타내었으며, 실제 적외선 체열 영상 진단기로 측정한 사진의 예는 도 10 내지 도 14에 나타내었다.

구분(단위:℃)	사용 전	가온 후	제품 사용 후
1	28.62	30.46	28.39
2	26.58	29.21	26.68
3	28.21	30.16	28.06
4	28.34	30.84	28.29
5	26.98	29.39	26.82
6	27.47	29.76	27.98
7	27.60	29.63	27.50
8	28.98	30.32	28.72
9	28.18	30.03	28.19
10	27.16	30.57	28.80
11	27.87	31.01	28.84
12	26.99	30.08	28.30
13	27.87	30.59	27.99
14	30.05	32.14	29.94
15	27.47	29.19	27.42
16	27.53	30.33	27.75
17	27.71	30.79	28.23
18	29.02	31.77	29.66
19	30.10	32.30	30.15
20	26.94	28.94	25.73

표 7 내지 표 8 및 도 5 내지 도 14에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 경단구슬모자반 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로부터 제조된 화장품의 경우, 열 노화에 의한 피부 주름 개선에 효과가 있으며, 그 중에서도 상기 열 노화는 자외선이 아닌 적외선에 의한 열 노화에 의한 것에 보다 효율적으로 적용될 수 있음을 확인하였다.

전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (5)

1. 경단구슬모자반(Sargassum muticum) 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서,
   상기 경단구슬모자반 추출물의 농도는 50μg/mL 이하이고,
   상기 화장료 조성물은 피부 열 노화에 의한 주름 개선 용도로 사용되며,
   상기 피부 열 노화는 적외선에 의해 발생되는 열에 의한 피부 노화인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서, 상기 주름 개선은 사람 각질 형성 세포(HaCaT)에서 콜라겐 생성을 촉진함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
3. 제 2 항에 있어서, 상기 콜라겐 생성은 Type Ⅰ pro-collagen을 생합성하는 단계를 포함하는 과정을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
4. 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 로션, 스킨로션, 모이스처로션, 영양로션, 스킨토너, 에센스, 파운데이션, 영양크림, 핸드크림, 모이스처크림, 마사지크림, 마스크팩, 올인원크림, 비비크림, 씨씨크림, 비누, 바디로션, 바디크림, 바디클렌저, 클렌징로션, 클렌징 폼, 샴푸, 린스 또는 컨디셔너로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
5. 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 1종 이상의 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

Images