KR20200030084A - 씨디39 기질 줄기세포 단리 방법 및 용도 - Google Patents
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Abstract
본 명세서는 표면 마커 CD39의 발현에 의한 SDC2+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 기질 줄기세포로부터의 엑소좀을 단리하는 방법을 개시한다. 또한 본 명세서는 상기 방법에 의해 단리된 기질 줄기세포 및 엑소좀을 개시한다.
Description
상호 참조
본 출원은 2017년 7월 14일자로 출원된 미국 가 출원 제 62/532,800 호 및 2017년 7월 19일자로 출원된 제 62/534,631 호의 이득을 주장하며, 이들 출원은 각각 내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다.
관련 출원
본 출원은 2017년 1월 13일자로 출원된 PCT 출원 제 PCT/IB2017/000091 호의 내용 전체를 참고로 인용한다.
중간엽 줄기세포(예를 들어, 중간엽 기질 줄기세포 및 기질 세포)는 각종 질병의 치료에 치료학적 가치를 갖는 것으로 입증되었다. 이들 세포는 생체내에서 소동맥, 동굴모양 내피 및 고 내피 소낭과 관련있는 것으로 밝혀졌으며, 여기에서 이들 세포는 내피세포 활성화 및 혈관구조에서 표적 조직으로의 면역세포의 수송을 조절할 수 있다. 또한 중간엽 줄기세포는 면역억제 및 소염 성질, 예를 들어 동종이계 거부의 회피 및 면역세포, 예를 들어 자연 살해세포, 호중구, 수지상 세포, 단핵구/대식세포 및 림프구 억제를 갖는 것으로 입증되었다. 더욱 또한, 중간엽 줄기세포는 면역억제성 사이토킨, 예를 들어 간세포 성장인자(HGF), IL-10, TGFβ1, 사이클로옥시게나제 1 및 2, 신데칸(Syndecan)-2 및 PGE-2를 생산하는 것으로 밝혀졌다. 중간엽 줄기세포의 면역억제 활성은 염증 자극, 특히 인터페론-감마의 존재하에서 증가하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 성질은 중간엽 줄기세포 및 그의 유도체(예를 들어, 중간엽 기질 줄기세포, 기질세포, 및 중간엽 줄기세포에 의해 생산된 엑소좀)를 이들의 질병 치료 잠재성에 있어서 특히 흥미롭게 한다.
본 명세서는 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리하는 방법을 제공한다. 방법은 (a) 포유동물 세포의 혼합 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포 중의 SDC2+ 세포 풍부성을 측정하여, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리하는 단계 중 하나 이상을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 인간, 마우스, 래트 또는 말 세포를 포함한다. 일부의 예에서, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 다수의 CD39 결합제가 본 명세서의 개시내용과 일치한다. 종종, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 종종, 항체는 인간, 마우스, 래트, 및 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단 (fluorophore)에 접합 (conjugate)시킨다. 때때로, 항체를 비드에 접합시킨다. 종종, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 20%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 40%는 SDC2+이다. 종종, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 70%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 예에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 종종, 방법은 단리된 세포를 배양함을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD73을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다.
본 명세서는 또한 면역조절 조성물의 제조 방법을 제공한다. SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 포함하는 방법을 제공하며, 방법은 (a) 포유동물 세포의 혼합 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포 중의 SDC2+ 세포 풍부성을 측정함을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 인간, 마우스, 래트 또는 말 세포의 집단이다. 종종, 포유동물 세포의 혼합 집단을 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된 공급원으로부터 수득한다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 종종, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 인간, 마우스, 래트, 및 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 종종, 항체를 형광단에 접합시킨다. 일부의 예에서, 항체를 비드에 접합시킨다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 20%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 40%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 70%는 SDC2+이다. 종종, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 예에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 예에서, 단리된 세포를 배양한다. 종종, SDC2+ 기질 줄기세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 일부의 경우에, 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 세포외 기질을 추가로 포함한다. 종종, 세포외 기질은 콜라겐을 포함한다. 일부의 경우에, 세포외 기질은 히아루론산을 포함한다. 종종, 조성물은 DMSO를 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 글리세롤을 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD73을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다.
본 명세서는 또한 면역조절 조성물의 단리 방법을 제공한다. 일부의 상기와 같은 방법은 (a) 포유동물 세포의 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포로부터 엑소좀을 포함하는 상등액을 회수하는 것 중에서 적어도 하나를 포함한다. 일부의 경우에, 상등액으로부터 엑소좀 분획을 획득한다. 종종, 엑소좀 분획의 획득은 상등액의 원심분리를 포함한다. 일부의 예에서, 원심분리는 세포를 약 100,000 g에서 원심분리시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 원심분리는 세포를 적어도 1시간 동안 원심분리시킴을 포함한다. 일부의 예에서, 원심분리는 한외여과를 포함한다. 일부의 경우에, 원심분리는 크기-배제 액체 크로마토그래피를 포함한다. 종종, 엑소좀 분획의 획득은 한외여과를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 분획의 획득은 크기-배제 액체 크로마토그래피를 포함한다. 일부의 예에서, 엑소좀 분획의 획득은 상등액을 항체와 접촉시킴을 포함한다. 종종, 항체는 항-CD39 항체 및 항-SDC2 항체 중 적어도 하나 중에서 선택된다. 일부의 경우에, 엑소좀은 주변분비 신호전달 엑소좀이다. 종종, 단리된 세포는 SDC2+이다. 일부의 경우에, 단리된 세포는 중간엽 줄기세포를 포함한다. 일부의 경우에, 단리된 세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 일부의 예에서, 방법은 실온에서 엑소좀 분획을 보관함을 포함한다. 종종, 방법은 엑소좀 분획을 극저온 보존 없이 보관함을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 면역-조절 조성물에 면역억제 약물을 첨가함을 포함한다. 종종, 단리된 세포를 동요시켜 엑소좀 생성을 이끌어낸다. 일부의 경우에, 단리된 세포를 중공-섬유 생물반응기에서 배양한다. 일부의 경우에, 단리된 세포는 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD73을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다.
본 명세서는 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법을 또한 제공한다. 일부의 상기와 같은 방법은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 염증 반응 부위로 전달함을 포함하며, 여기에서 SDC2+ 세포를 CD39 발현을 근거로 세포를 단리함으로써 세포의 혼합 집단으로부터 정제시킨다. 일부의 예에서, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 수집함을 포함한다. 종종, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 배양함을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 주사함을 포함한다. 종종, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 국소적으로 적용함을 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 하이드로겔을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 콜라겐 겔을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 안내 투여를 포함한다. 종종, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 안과 적용을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 정맥내 전달을 포함한다. 일부의 예에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 림프절-내 주사를 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 피하 전달을 포함한다. 종종, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 복강내 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 척수강내 전달을 포함한다. 일부의 예에서, SDC2+ 세포에서, SDC2+ 세포는 인간, 마우스, 래트 및 말 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된다. 일부의 경우에, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 종종, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 종종, 항체를 비드에 접합시킨다. 종종, SDC2+ 세포의 적어도 20%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, SDC2+ 세포의 적어도 40%는 SDC2+이다. 일부의 예에서, SDC2+ 세포의 적어도 70%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 경우에, 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 종종, SDC2+ 세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^3 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^4 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^5 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^6 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD73을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 종종, 염증 반응은 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 패혈증, 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, ALS, 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, ARDS, 패혈증, 염증성 간 질환, 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염, 루푸스 신염, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 항합성효소항체 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 폐 부종, 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 자가면역 다선 증후군 3형, 자가면역 췌장염, 자가면역 갑상선염, 오즈(Ord's) 갑상선염, 그레이브스병, 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 쇼그렌 증후군, 자가면역 장병증, 셀리악병, 미세장염, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 혈소판 감소증, 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 미분화된 결합조직병, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중증 근무력증, 신경근육긴장증, 방종양성 소뇌 변성, 다발성근염, 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 횡단성 척수염, 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 톨로사-헌트 증후군, 자가면역 내이병, 메니에르병, 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염 중 적어도 하나를 포함한다.
본 명세서는 또한 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법을 제공한다. 일부 상기와 같은 방법은 엑소좀을 포함하는 조성물을 염증 반응 부위로 전달함을 포함하며, 여기에서 엑소좀은 SDC2+이고 엑소좀은 CD39 발현에 근거하여 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 단리된 SDC2+ 세포로부터 유래한다. 일부의 경우에, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 수집함을 포함한다. 일부의 경우에, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 배양함을 포함한다. 종종, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물을 주사함을 포함한다. 때때로, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물을 국소적으로 적용함을 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 하이드로겔을 포함한다. 종종, 조성물은 콜라겐 겔을 포함한다. 일부의 예에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 안내 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 안과 적용을 포함한다. 때때로, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 정맥내 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 림프절-내 주사를 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 피하 전달을 포함한다. 일부의 예에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 복강내 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 척수강내 전달을 포함한다. 종종, 엑소좀은 인간, 마우스, 래트 및 말 세포 중 적어도 하나인 SDC2+ 세포로부터 단리된다. 때때로, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 종종, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 때때로, 항체를 비드에 접합시킨다. 일부의 경우에, 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀의 적어도 40%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀의 적어도 70%는 SDC2+이다. 종종, 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 경우에, 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39 결합제에 결합된 세포의 배양을 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 세포는 CD45-이다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^6 엑소좀의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^7 엑소좀의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^8 엑소좀의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 적어도 10^9 엑소좀의 전달을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 방법은 CD73을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 종종, 염증 반응은 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 패혈증, 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, ALS, 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, ARDS, 패혈증, 염증성 간 질환, 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염, 루푸스 신염, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 항합성효소항체 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 폐 부종, 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 자가면역 다선 증후군 3형, 자가면역 췌장염, 자가면역 갑상선염, 오즈(Ord's) 갑상선염, 그레이브스병, 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 쇼그렌 증후군, 자가면역 장병증, 셀리악병, 미세장염, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 혈소판 감소증, 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 미분화된 결합조직병, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중증 근무력증, 신경근육긴장증, 방종양성 소뇌 변성, 다발성근염, 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 횡단성 척수염, 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 톨로사-헌트 증후군, 자가면역 내이병, 메니에르병, 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염 중 적어도 하나를 포함한다.
본 명세서는 또한 적어도 20%의 SDC2+인 세포 집단을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기에서 세포 집단은 CD39 결합제에 결합된다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 30% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 40% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 50% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 60% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 70% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 80% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 90% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 95% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 99% SDC2+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 20% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 30% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 40% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 50% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 60% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 70% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 80% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 90% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 95% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단은 적어도 99% CD39+이다. 일부의 경우에, 세포 집단의 적어도 90%는 CD45-이다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^6 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^7 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^8 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 1 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 20 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 50 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 100 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 150 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 200 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 250 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 500 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 750 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 1000 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 종종, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 때때로, 항체를 비드에 접합시킨다. 일부의 예에서, 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 DMSO를 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 글리세롤을 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 적어도 10^3 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 적어도 10^4 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 적어도 10^5 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 적어도 10^6 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 조성물은 적어도 10^7 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 세포 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 포함한다. 일부의 경우에, 세포 집단은 아피라제를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포 집단은 CD39를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포 집단은 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포 집단은 CD73을 과발현하도록 유전자 변형된다.
본 명세서는 또한 엑소좀을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기에서 엑소좀은 적어도 20% SDC2+이고 엑소좀은 CD39 결합제에 결합된다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 30% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 40% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 50% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 60% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 70% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 80% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 90% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 95% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 99% SDC2+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 20% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 30% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 40% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 50% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 60% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 70% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 80% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 90% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 95% CD39+이다. 일부의 경우에, 엑소좀은 적어도 99% CD39+이다. 일부의 경우에, 집단은 CD45-이다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 10^6 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 10^7 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 10^8 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 1 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 10 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 20 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 50 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 100 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 150 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 200 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 250 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 500 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 750 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 적어도 1000 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 일부의 예에서, 조성물은 완충제를 포함한다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 경우에, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 종종, 항체는 인간, 마우스, 래트 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 때때로, 항체를 비드에 접합시킨다.
본 발명의 신규의 특징을 명세서 및 첨부된 청구항에 구체적으로 제시한다. 본 발명의 특징 및 장점의 추가적인 이해가 예시적인 실시태양을 제시하는 하기의 상세한 설명을 참조하여 획득될 것이고, 여기에서 본 발명의 원리가 사용되며, 첨부 도면에서:
도 1A는 탯줄로부터 기질 줄기세포를 단리하기 위한 예시적인 게이팅 전략을 도시한다.
도 1B는 연구된 탯줄 세포 집단에서 CD39 및 CD362(SDC2) 발현의 예시적인 분석을 도시한다. 이중 양성 세포를 굵은 상자와 화살표로 강조한다.
도 1C는 CD362+ 대 CD39+/CD362+ 세포의 상대적인 집단 백분율을 도시한다.
도 1D는 CD362+/CD39+ 세포상의 예시적인 콜로니 형성 분석을 도시한다.
도 1E는 분류되지 않은(야생형) 세포상의 예시적인 콜로니 형성 분석을 도시한다.
도 2A는 골수로부터의 CD39+/CD362+ 세포(굵은 사각형에 의해 강조됨)의 전형적인 게이팅 조절 및 식별을 도시한다.
도 2B는 CD39+/CD362+ 세포 대 CD39hi/CD362+ 세포의 상대적인 집단 백분율을 도시한다.
도 2C는 분류되지 않은 세포, CD39-/CD362+ 세포, CD39+/CD362+ 세포, CD39+/CD362- 세포, 및 이중 음성 세포에 대한 콜로니 형성 분석의 표로 작성된 결과를 도시한다.
도 3A는 인간 골수로부터의 CD39+/CD362+ 세포(굵은 사각형에 의해 강조됨)의 식별을 위한 전형적인 밀테니(Miltenyi) MACSQuant 타이토(Tyto) 분류 게이트 및 분석을 도시한다.
도 3B는 인간 골수로부터 밀테니 MACSQuant 타이토 분류 및 BD FACSAria 세포 분류기 모두를 사용하는, 분류되지 않은 세포, CD39-/CD362+ 세포, CD39+/CD362+ 세포, CD39hi/CD362+, CD39+/CD362- 세포, 및 이중 음성 세포에 대한 콜로니 형성 분석의 표로 작성된 결과를 도시한다.
도 4는 인접 세포에 의한 엑소좀 합성, 방출 및 흡수를 예시한다.
도 5는 투과형 전자 현미경검사에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀에 의한 SDC2 발현을 도시한다.
도 6은 웨스턴 블럿에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀에 의한 SDC2 발현을 도시한다.
도 7은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 8은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 9는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 10은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 11은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다.
도 12는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다.
도 13은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다.
도 14는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다.
도 15는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 폐 습윤 건조비를 도시한다.
도 16은 48시간 동안 무혈청 배지 또는 엑소좀으로 처리된 A549 세포에 대한 스크래치 분석으로부터의 결과를 도시한다.
도 17은 A549 세포, 플레이트 1에 대한 스크래치 분석 결과를 도시한다.
도 18은 한외여과에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다.
도 19는 한외여과에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다.
도 20은 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다.
도 21은 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다.
도 22는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 23은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 24는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다.
도 25는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다.
도 26은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다.
도 27은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다.
도 1A는 탯줄로부터 기질 줄기세포를 단리하기 위한 예시적인 게이팅 전략을 도시한다.
도 1B는 연구된 탯줄 세포 집단에서 CD39 및 CD362(SDC2) 발현의 예시적인 분석을 도시한다. 이중 양성 세포를 굵은 상자와 화살표로 강조한다.
도 1C는 CD362+ 대 CD39+/CD362+ 세포의 상대적인 집단 백분율을 도시한다.
도 1D는 CD362+/CD39+ 세포상의 예시적인 콜로니 형성 분석을 도시한다.
도 1E는 분류되지 않은(야생형) 세포상의 예시적인 콜로니 형성 분석을 도시한다.
도 2A는 골수로부터의 CD39+/CD362+ 세포(굵은 사각형에 의해 강조됨)의 전형적인 게이팅 조절 및 식별을 도시한다.
도 2B는 CD39+/CD362+ 세포 대 CD39hi/CD362+ 세포의 상대적인 집단 백분율을 도시한다.
도 2C는 분류되지 않은 세포, CD39-/CD362+ 세포, CD39+/CD362+ 세포, CD39+/CD362- 세포, 및 이중 음성 세포에 대한 콜로니 형성 분석의 표로 작성된 결과를 도시한다.
도 3A는 인간 골수로부터의 CD39+/CD362+ 세포(굵은 사각형에 의해 강조됨)의 식별을 위한 전형적인 밀테니(Miltenyi) MACSQuant 타이토(Tyto) 분류 게이트 및 분석을 도시한다.
도 3B는 인간 골수로부터 밀테니 MACSQuant 타이토 분류 및 BD FACSAria 세포 분류기 모두를 사용하는, 분류되지 않은 세포, CD39-/CD362+ 세포, CD39+/CD362+ 세포, CD39hi/CD362+, CD39+/CD362- 세포, 및 이중 음성 세포에 대한 콜로니 형성 분석의 표로 작성된 결과를 도시한다.
도 4는 인접 세포에 의한 엑소좀 합성, 방출 및 흡수를 예시한다.
도 5는 투과형 전자 현미경검사에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀에 의한 SDC2 발현을 도시한다.
도 6은 웨스턴 블럿에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀에 의한 SDC2 발현을 도시한다.
도 7은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 8은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 9는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 10은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 11은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다.
도 12는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다.
도 13은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다.
도 14는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다.
도 15는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 폐 습윤 건조비를 도시한다.
도 16은 48시간 동안 무혈청 배지 또는 엑소좀으로 처리된 A549 세포에 대한 스크래치 분석으로부터의 결과를 도시한다.
도 17은 A549 세포, 플레이트 1에 대한 스크래치 분석 결과를 도시한다.
도 18은 한외여과에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다.
도 19는 한외여과에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다.
도 20은 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다.
도 21은 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀 또는 무혈청 배지로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다.
도 22는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다.
도 23은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다.
도 24는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다.
도 25는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다.
도 26은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다.
도 27은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포(10 밀/㎏) 또는 엑소좀(200 ㎍, IV)으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다.
기질 줄기세포 또는 중간엽 기질세포는, 예를 들어 조직 손상 부위로 이동하는 능력 및 상대적으로 용이한 시험관내 확대에 있어서 치료학적 가치가 입증되었다. 특히 SDC2+ 기질 줄기세포는 광범위한 질병의 치료에 효능이 입증되었다. SDC2+ 기질 줄기세포의 대안의 제조 방법을 본 명세서에 개시하며, 여기에서 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리는 CD39의 발현에 근거한다.
CD39 및 CD39L3는 아피라제 효소이다. 아피라제 효소는 ATP 및 ADP로부터 포스페이트기를 절단하여 AMP 및 포스페이트를 생성시킨다. 보다 일반적으로 말하자면, 아피라제 효소는 세포외 뉴클레오시다제이며, 세포외 뉴클레오티드, 예를 들어 ATP 및 ADP의 이화작용을 매개한다. CD39 및 CD39L3 세포 표면 발현은 종종 SDC2+ 세포 표면 발현과 상관있으며, 따라서 CD39 또는 CD39L3는 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리를 위한 마커 세포 표면 단백질로서 유효하다. 일부의 경우에, 세포외 뉴클레오시데아제는 세포외 ATP 및 ADP의 AMP로의 이화작용을 매개하고, AMP는 아데노신으로 추가로 분해된다. CD73은 종종 AMP를 아데노신으로 분해한다. 세포외 뉴클레오시다제의 추가적인 예는 CD39L1, CD39L2, 및 CD39L4를 포함한다. ATP 및 ADP는 세포의 밖에서 유리 아데노신에 길항적으로 작용하여 세포 분화 및 염증을 포함한 다수의 반응을 매개하므로, CD39, CD39 동족체, 및 심지어 구조적으로 다양한, 기능적으로 유사한 효소는 세포외 ATP 신호전달에 공통적인 영향을 미칠 수 있다.
일부의 경우에, 아피라제, 예를 들어 세포외 뉴클레오시다제는 막관통 도메인을 통해 세포에 부착된다. 일부의 경우에, 세포외 뉴클레오시다제는 세포 밖의 용해성 단백질이다. 아피라제 활성은 ATP 또는 ADP 농도를 아데노신 또는 세포외 퓨린 농도에 상대적으로 통상적으로 조절하기 위해, 완전길이 단백질을 통해, 또는 교대로, 아피라제 세포외 도메인 또는 아피라제에 대해 서열, 구조 유사성 또는 기능 유사성을 공유하는 세포외 도메인을 갖는 단백질을 통해 발휘된다.
SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물 및 CD39 발현에 근거한 단리 방법 및 염증 반응의 조절에서 상기와 같은 세포의 용도를 본 명세서에 개시한다. 일부의 경우에 이들 조성물은 주변분비 신호전달을 매개하거나 주변분비 신호전달 성분을 전달한다.
SDC2+ 및 SDC2+CD39 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물에 대한 추가적인 용도는 엑소좀으로 제형화된 소염 치료제를 포함하는 조성물을 포함한다. 이러한 특징은 치료가 필요한 개인에게 치료제가 전달되게 할 것이다. 예를 들어, 항-TNF 항체, 예를 들어 인플릭시맵을 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물로 제형화할 수 있다. 교대로 또는 함께, 고유의 신호전달 성분, 예를 들어 주변분비 신호전달 성분이 일부 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물 중에 함유된다.
또한, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 본 명세서에 기재된 것들을 또한 조절 T 세포, 예를 들어 CD4+CD25+FOXP3+ 조절 T 세포와 병용하여, 염증성 또는 면역 질병을 치료하는 치료제를 생성시킬 수 있다. 이 경우에 엑소좀 조성물은 조절 T 세포 치료제의 활성, 효능 및 지속성을 증대시킬 것이다.
CD39 결합제를 사용하는 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 방법
본 명세서에 개시된 SDC2+ 기질 줄기세포를 CD39의 발현을 근거로 단리하거나 정제한다. 일부의 경우에, 상기와 같은 방법은 CD39 결합제를 사용하여 SDC2+ 기질 줄기세포를 단리한다. 단리 또는 정제 방법은 포유동물 세포의 집단으로부터 기질 줄기세포를 단리함을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물의 단리 또는 정제 방법은 SDC2+ 기질 줄기세포를 단리하기 위한 포유동물 세포의 집단을 수득하고, 상기 포유동물 세포의 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고, 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 회수하고, 이에 의해 SDC2+ 기질 줄기세포를 수득함을 포함한다. 단리 또는 정제 방법은 SDC2+ 세포가 풍부한 기질 줄기세포 조성물을 생성시킨다. 일부 상기와 같은 세포 집단은 SDC2+ 기질 줄기세포를 포함하며, 여기에서 기질 줄기세포의 적어도 20%는 SDC2+ 발현을 포함한다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 예에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 종종, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 때때로, 항체를 비드에 접합시킨다.
SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제를 CD39 결합제의 사용으로 수행한다. 일부의 경우에, CD39 결합제는 CD39에 대한 하나 이상의 항체 또는 그의 단편을 포함한다. 일부의 단리 또는 정제 방법은 포유동물 세포의 집단을 CD39 결합제와 함게 배양하고 오직 상기 CD39 결합제에 결합된 세포만을 유지시킴을 포함한다. 본 명세서에 개시된 방법에 적합한 CD39 결합제, 예를 들어 CD39 항체는 CD39에 특이적으로 결합하는 성질을 갖는다. 포유동물 세포의 집단과 CD39 결합제와의 배양을, CD39에의 CD39 결합제의 특이적인 결합을 촉진하는 완충제 중에서, 및 항체 결합 및 세포 생육력 및 안정성을 촉진하는 온도에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 실온에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 4℃에서 수행한다. 배양 완충제는 종종 적어도 하나의 완충제, 세제 및 염을 포함한다. 교대로 또는 함께, CD39 결합제는 항체가 아닌 결합제, 예를 들어 CD39 수용체 또는 CD39에 결합하는 올리고머를 포함한다. 단리된 또는 정제된 SDC2+ 기질 줄기세포를 보관에 또는 종종 상기가 필요한 개인에게 투여하기에 적합한 완충제 또는 부형제 중에서 제조한다.
일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포를, CD39, CD39L3 또는 다른 아피라제 단백질 발현을 증가시키도록 변형시킨다. 상기와 같은 과발현은 단리 또는 정제 방법으로부터 생성되는 기질 줄기세포의 치료 효능을 개선시키는 것으로 관찰된다. 일부의 경우에, 세포를 CD39를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 교대로, 아피라제, 아피라제 기능성 단편, 아피라제 세포외 도메인, 또는 세포외 도메인 기능성 단편, 또는 아피라제 세포외 도메인 활성을 갖는 단백질의 과발현은 개선된 치료 효능을 수행하기에 충분하다.
기질 세포의 유전자 변형은 비제한적으로, CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어 CMV, SV40, EF1a, 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함한 방법에 의해 수행된다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형은, CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행된다.
CD39 결합제를 사용하는 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제 방법은 특정 비율의 SDC2+ 기질 줄기세포를 포함하는 조성물을 생성시킨다. 일부의 경우에, SDC2를 포함하는 CD39 결합제를 사용하여 정제된 조성물 중의 기질 줄기세포의 비율은 20% 내지 99%의 범위 이내이다. 일부의 단리 또는 정제 방법은 기질 줄기세포 조성물을 생성시키며 이때 SDC2를 포함하는 조성물 중의 기질 줄기세포의 비율은 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 99% 초과이다. 일부의 경우에, 단리 또는 정제 방법은 기질 줄기세포 조성물을 생성시키며 이때 CD39를 포함하는 조성물 중의 기질 줄기세포의 비율은 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 99% 초과이다.
일부의 경우에, CD39 결합제, 예를 들어 항체 또는 CD39 접합체를 사용하는, CD39 결합제에 결합하는 세포의 단리 또는 정제, 예를 들어 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제 방법은 SDC2+ 세포를 포함하는, 및 조절 T 세포를 추가로 포함하는 조성물을 생성시킨다. 일부의 경우에, 조절 T 세포는 CD25+이다. 일부의 경우에, 조절 T 세포는 FoxP3+이다. 일부의 경우에, 조절 T 세포는 CD25+ 및 FoxP3+이다.
본 명세서는 CD39 결합제에 결합하는 SDC2+ 기질 줄기세포를 치료 유효량으로 단리 또는 정제하는 방법을 개시한다. 일부의 경우에, CD39 결합제를 사용하여 정제된 SDC2+ 기질 줄기세포의 최소의 치료 유효량 범위는 10^3 내지 10^8 세포, 예를 들어 10^3, 10^4, 10^5, 10^6, 10^7, 10^8, 또는 10^8 초과의 세포이다. 때때로 실질적으로 보다 적거나 또는 실질적으로 보다 많은 세포가 치료량을 구성한다. 일부의 경우에, CD39 결합제를 통한 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제는 투여에 앞서 개인에 의해 완충제 또는 부형제 중에 희석되는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물의 농축을 포함한다. 일부의 경우에, CD39 결합제에 결합하는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물의 단리 또는 정제는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물을 완충제 또는 희석제 중에, 상기 조성물이 개인에게 바로 투여될 수 있도록 희석함을 포함한다. 일부의 경우에, CD39 결합제에 결합하는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물의 단리 또는 정제 방법은 일회용 바이알 또는 IV 주머니를 생성시킨다. 일부의 경우에, CD39 결합제를 사용하는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물의 단리 또는 정제 방법은 단일 용기 중에 존재하는 수회 용량을 생성시킨다.
항-CD39 항체와 같은 결합제를 사용하는 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리 또는 정제 방법은 포유동물 세포의 집단으로부터 CD39 항체-SDC2+ 기질 줄기세포 복합체를 단리함을 포함한다. CD39 항체-SDC2+ 기질 줄기세포 복합체를, 비제한적으로 형광 활성화된 세포 분류(FACS), 면역침전, 단백질 A 비드를 사용하는 컬럼 정제, 단백질 G 비드를 사용하는 컬럼 정제, 비오틴화된 비드 및 비오틴화된 2차 항체를 사용하는 컬럼 정제, 및 자기 비드 기반 분리 방법을 포함하는 임의의 수의 적합한 방법으로 정제한다. 이어서 SDC2+ 기질 줄기세포를, 항체로부터 SDC2+ 기질 줄기세포를 용출시키기에 충분한 엄격성을 갖는 완충된 염 용액을 사용하여 항체로부터 용출시킨다. 완충된 염 용액을 원심분리 또는 희석 과정을 사용하여 엑소좀 조성물로부터 제거한다. 이어서 생성되는 단리된, 정제된 SDC2+ 기질 줄기세포를 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제 중에서 희석하고 동결시키거나, 또는 달리, SDC2+ 기질 줄기세포가 효능 및 안정성을 유지하는 온도에서 보관한다. 임의로, SDC2+ 기질 줄기세포를, 투여용 세포의 제조 전에 세포수를 확대시키기 위해 포유동물 세포 배양 완충제에서 배양한다.
SDC2+ 엑소좀의 단리 방법
본 명세서는 CD39 결합제를 사용하는 SDC2+ 엑소좀의 단리, 정제 또는 농축 방법을 개시한다. 본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물을 단리하거나 정제한다. 단리 또는 정제 방법은 본 명세서에 제공된 방법에 의해 CD39 결합제를 사용하여 단리된, SDC2+ 기질 세포와 같은 기질 세포의 집단으로부터 엑소좀을 단리함을 포함한다. 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 종종 엑소좀의 단리를 위해 CD39 결합제를 사용하여 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 SDC2+ 세포가 농축된 세포 집단을 수득하고, 상기 세포 집단으로부터 상등액을 회수하고, 상기 상등액으로부터 엑소좀 분획을 획득함을 포함한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물은 SDC2를 발현한다. 종종, 본 명세서에서 엑소좀 조성물은 CD39를 발현한다. 일부의 경우에, SDC2는 엑소좀의 내부에서 발견된다. 일부의 경우에, SDC2는 엑소좀의 외부상에서 발견된다. CD39는 한편으로 엑소좀의 내부에서 또는 엑소좀의 외부상에서 발견된다. 단리 또는 정제 방법은 엑소좀을 포함하는 엑소좀 조성물을 생성시키며, 여기에서 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2를 포함한다.
일부의 경우에, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포를, 단리 또는 정제 방법으로부터 생성되는 엑소좀 조성물의 수율이 증가하도록 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 SDC2를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 CD39를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 기질 세포의 유전자 변형을 비제한적으로, SDC2 또는 CD39 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어, CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함한 방법에 의해 수행한다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형은, SDC2 또는 CD39 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행된다.
주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, 본 명세서에 제공된 CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포를, 세포골격 조절과 관련된 단백질을 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 코르탁틴을 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 기질 세포의 유전자 변형을 비제한적으로, 코르탁틴 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어, CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함한 방법에 의해 수행한다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형은, 코르탁틴 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행된다.
종종, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포를, 단리 또는 정제 방법으로부터 생성되는 엑소좀 조성물의 수율을 증가시키기 위해 방사선 조사한다. 세포의 방사선 조사는 비제한적으로 기질 세포를 방사선원, 예를 들어 알파선원, 베타선원, 또는 감마선원에 노출시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 기질 세포를 감마-방사선 조사를 사용하여 조사한다.
한편으로 또는 함께, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포에 염증 자극을 가한다. 염증 자극은 비제한적으로 TNF-알파, 인터페론-감마, 인터페론-베타, 인터류킨-1b, TLR 작용물질, Poly I:C, 및 LPS를 포함한다.
추가로, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 위한 기질 세포에 성장 정지를 가한다. 성장 정지는 세포의 분열을 늦추거나 정지시키는 것으로서 당해 분야의 숙련가에 의해 이해된다. 성장 정지 방법은 비제한적으로 방사선 조사, 미토마이신-c, TGFb 자극, 및 세포 밀집(confluence)으로의 성장을 포함한다.
주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 SDC2를 포함하는 엑소좀을 특정 비율로 포함하는 조성물을 생성시킨다. 일부의 경우에, SDC2를 포함하는 조성물 중의 엑소좀의 비율은 20% 내지 99%의 범위 이내이다. 일부의 경우에, 단리 또는 정제 방법은 SDC2를 포함하는 조성물 중의 엑소좀의 비율이 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상인 엑소좀 조성물을 생성시킨다. 일부의 경우에, CD39를 포함하는 조성물 중의 엑소좀의 비율은 20% 내지 99%의 범위 이내이다. 일부의 경우에, 단리 또는 정제 방법은 CD39를 포함하는 조성물 중의 엑소좀의 비율이 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상인 엑소좀 조성물을 생성시킨다.
주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 일부 단리 또는 정제 방법은 연속 생산 기술, 예를 들어 중공-섬유 생물반응기 기술을 사용한다. 중공-섬유 생물반응기(HFBR)는 다수의 세포를 고밀도로 지지하는 높은 면적-대-부피비를 갖는다. 예시적인 HFBR은 비제한적으로 화이버셀 시스템스(FiberCell Systems) 및 테루모 콴텀 셀 익스팬션 시스템(Terumo Quantum Cell Expansion System)을 포함한다. 상기와 같은 시스템은 약 10^7 세포 내지 약 10^8 세포를 지지할 수 있지만, 일부의 경우에 상기 범위 밖의 세포량도 또한 사용될 수 있다. HFBR의 장점은 비제한적으로, 양양소 및 노폐물은 통과되게 하지만 엑소좀은 반응기 중에 유지시키고 100배까지 농축시키는, 5 내지 20 kDa의 분자량 컷오프를 갖는 섬유를 포함한다. 지지체에 결합된 세포는, 세포주가 현저한 세포사멸 없이 밀집-후까지 성장할 수 있기 때문에 분할을 필요로 하지 않는다. 일부의 경우에, 엑소좀의 콜렉션이 수 개월의 연속 생산에 걸쳐 유지된다. 이들 인자를 모두 병용하여 엑소좀을 다수로 분비시키고 카트리지의 모세관외 공간의 작은 부피 중에 현저하게 농축되게 한다. 엑소좀은 어느 방향으로도 섬유를 통과할 수 없으며 따라서 세포 배양 장액을, 카트리지의 모세관외 공간내에 분비된 엑소좀의 오염 없이 순환 배지에 사용할 수 있다.
주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 살아있는 세포가 없는 엑소좀 조성물을 생성시킨다, 즉 생성되는 엑소좀 조성물이 살아있는 세포를 포함하지 않는다. 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제는 비-종양형성성인 조성물을 생성시킨다. 즉, 본 명세서에 개시된 단리 또는 정제 방법에 의해 수득된 엑소좀 조성물은, 하나 이상의 용량의 엑소좀 조성물로 치료되거나 또는 상기 조성물이 제공된 포유동물에서 종양이나 암을 발생시키지 않는다.
본 명세서에 개시된 CD39 결합제 결과를 사용하는 단리 또는 정제 방법은 안정한 조성물을 생성시킨다. 예를 들어, 단리 또는 정제 방법에 의해 수득된 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물은 실온(20 내지 25℃)에서, 저온(3 내지 5℃)에서, 또는 동결 온도(-150 내지 0℃)에서 안정하다. 일부의 경우에, 안정성은 적합한 완충제 또는 부형제의 첨가에 의해 개선된다. 부형제의 비제한적인 예는 슈크로스, 트레할로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리사카라이드, 담체 단백질, 불활성 단백질, 덱스트란, 하이드록실 에틸 전분(HETA), PEG-4000, 젤라틴, PLGA, 유드라지트(Eudragit) RS 100 나노입자, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서에 개시된 CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 동결방지제의 사용 없이 동결 또는 저온보존 후에 효능 또는 활성을 유지할 수 있는 엑소좀 조성물을 생성시킨다. 동결방지제는 DMSO, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 덱스트란, 및 트레할로스를 포함한다. 엑소좀 조성물은 또한 특별한 동결 프로토콜의 사용 없이 동결후에 효능을 유지한다. 특별한 동결 프로토콜은 순간 동결, 프로그램화 가능한 속도 프리저, 및 단열 용기에서의 동결을 포함한다. 엑소좀 조성물을 완충제 또는 배양 배지 중에서 동결시킨다. 완충제는 생리학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 아세테이트 완충제, 및 다른 적합한 완충제를 포함한다. 일부의 경우에 본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물을 동결건조시킨다.
본 명세서에 개시된 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 엑소좀, 예를 들어 시험관내 엑소좀을 포함하는 조성물, 및 SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포)를 병용함을 포함한다. 일부의 예에서, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 시험관내 엑소좀을 포함하는 조성물 및 조절 T 세포의 병용을 포함한다. 조절 T 세포는 CD25+ 조절 T 세포, CD4+ 조절 T 세포, FoxP3+ 조절 T 세포, CD25+CD4+FoxP3+ 조절 T 세포, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 예에서, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 시험관내 엑소좀을 포함하는 조성물, SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포), 및 조절 T 세포의 병용을 포함한다.
본 명세서는 치료 유효량의 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은, CD39 결합제를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법을 개시한다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량의 범위는 조성물 중 106 내지 108 엑소좀, 예를 들어 106, 107, 108, 또는 그 이상의 엑소좀이다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량의 범위는 조성물 중 1 ㎍ 내지 700 ㎎의 엑소좀, 예를 들어 1 ㎍, 10 ㎍, 20 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 500 ㎍, 750 ㎍, 1 ㎎, 2 ㎎, 3 ㎎, 4 ㎎, 5 ㎎, 6 ㎎, 7 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 50 ㎎, 100 ㎎, 200 ㎎, 300 ㎎, 400 ㎎, 500 ㎎, 600 ㎎, 700 ㎎, 또는 그 이상의 엑소좀이다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제는 투여에 앞서 개인에 의해 희석되는 엑소좀 조성물의 농축을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제는 엑소좀 조성물을 개인에 의해 바로 투여될 수 있도록 희석시킴을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 일회용 바이알 또는 주사기를 생성시킨다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 단일 용기 중에 존재하는 수회 용량을 생성시킨다.
일부의 경우에, CD39 결합제를 사용하는 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제를 SDC2에 항체를 첨가하여 수행하며, 이는 엑소좀 수율의 증가 및 SDC2를 포함하는 단리된 엑소좀 비율의 증가 효과를 갖는다. 단리 또는 정제 방법은 항-CD39 항체 및 항-SDC2 항체와 함께 엑소좀을 포함하는 조성물을 배양하고 상기 항-CD39 및 항-SDC2 항체에 결합된 엑소좀만을 유지시킴을 포함한다. 본 명세서의 방법에 적합한 항-SDC2 항체는 SDC2에 특이적으로 결합하는 성질을 갖는다. 항-SDC2 항체와 함께 엑소좀을 포함하는 조성물의 배양을, SDC2에의 항-SDC2 항체의 특이적인 결합에 적합한 완충제 중에서, 및 항체 결합 및 엑소좀 안정성에 적합한 온도에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 실온에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 4℃에서 수행한다. 배양 완충제는 적어도 하나의 완충제, 세제 및 염을 포함한다.
일부의 경우에 CD39 결합제를 사용하여 엑소좀 조성물이 단리되거나 정제되는, 주변분비 신호전달 엑소좀과 같은 엑소좀을 포함하는 일부 조성물은 세포 배양물을 포함한다. 세포 배양물은 비제한적으로 SDC2+ 세포, 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포, CD39+ 세포, CD39+ 중간엽 줄기세포, CD39+ 중간엽 기질 줄기세포, CD39+/SDC2+ 세포, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 경우에, 세포 배양물을 적합한 방법에 의해 SDC2를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 항-SDC2 항체를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 출발 물질로부터 SDC2 항체-엑소좀 복합체를 단리하는 방법을 포함한다. SDC2 항체-엑소좀 복합체를 비제한적으로, 형광 활성화된 세포 분류(FACS), 면역침전, 단백질 A 비드를 사용하는 컬럼 정제, 단백질 G 비드를 사용하는 컬럼 정제, 비오틴화된 비드 및 비오틴화된 2차 항체를 사용하는 컬럼 정제, 및 자기 비드 기반 분리 방법을 포함하는 방법에 의해 정제한다. 이어서 엑소좀 조성물을, 항체로부터 엑소좀 조성물을 용출시키기에 충분한 엄격성을 갖는 완충된 염 용액을 사용하여 항체로부터 용출시킨다. 완충된 염 용액을 탈염 컬럼 또는 희석 과정을 사용하여 엑소좀 조성물로부터 제거한다. 이어서 생성되는 단리된, 정제된 엑소좀 조성물을 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제 중에서 희석하고 동결시키거나, 또는 달리, 엑소좀 조성물이 효능 및 안정성을 유지하는 온도에서 보관한다.
일부의 경우에, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제를 CD39에 대한 항체의 사용으로 수행하며, 이는 엑소좀 수율의 증가 및 SDC2를 포함하는 단리된 엑소좀 비율의 증가 효과를 갖는다. 단리 또는 정제 방법은 항-CD39 항체와 함께 엑소좀을 포함하는 조성물을 배양하고 상기 항-CD39 항체에 결합된 엑소좀만을 유지시킴을 포함한다. 항-CD39 항체는 CD39에 특이적으로 결합하는 성질을 갖는다. 항-CD39 항체와 함께 엑소좀을 포함하는 조성물의 배양을, CD39에의 항-CD39 항체의 특이적인 결합을 촉진하는 완충제 중에서, 및 항체 결합 및 엑소좀 안정성에 최적인 온도에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 실온에서 수행한다. 일부의 경우에, 배양을 4℃에서 수행한다. 배양 완충제는 적어도 하나의 완충제, 세제 및 염을 포함한다.
일부의 경우에 CD39에 대한 항체를 사용하여 엑소좀 조성물이 단리되거나 정제되는, 주변분비 신호전달 엑소좀과 같은 엑소좀을 포함하는 조성물은 세포 배양물을 포함한다. 세포 배양물은 비제한적으로 SDC2+ 세포, 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포, CD39+ 세포, CD39+/SDC2+ 세포, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 경우에, 세포 배양물을 적합한 방법에 의해 CD39를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 항-CD39 항체를 사용하는 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 출발 물질로부터 CD39 항체-엑소좀 복합체를 단리하는 방법을 포함한다. CD39 항체-엑소좀 복합체를 비제한적으로, 형광 활성화된 세포 분류(FACS), 면역침전, 단백질 A 비드를 사용하는 컬럼 정제, 단백질 G 비드를 사용하는 컬럼 정제, 비오틴화된 비드 및 비오틴화된 2차 항체를 사용하는 컬럼 정제, 및 자기 비드 기반 분리 방법을 포함하는 방법에 의해 정제한다. 이어서 엑소좀 조성물을, 항체로부터 엑소좀 조성물을 용출시키기에 충분한 엄격성을 갖는 완충된 염 용액을 사용하여 항체로부터 용출시킨다. 완충된 염 용액을 탈염 컬럼 또는 희석 과정을 사용하여 엑소좀 조성물로부터 제거한다. 이어서 생성되는 단리된, 정제된 엑소좀 조성물을 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제 중에서 희석하고 동결시키거나, 또는 달리, 엑소좀 조성물이 효능 및 안정성을 유지하는 온도에서 보관한다.
일부의 경우에 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제를 예비 한외원심분리와 같은 한외원심분리 방법을 사용하여 수행한다. 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제 방법은 세포 집단, 예를 들어 기질 세포, SDC2+ 세포, 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포, CD39+ 세포, CD39+/SDC2+ 세포, 및 이들의 조합을 수득함을 포함한다. 일부의 경우에, 세포는 SDC2 및/또는 CD39를 과발현하도록 유전자 변경되었다. 세포 배양물의 배지 또는 상등액을 세포 배양물로부터 단리하거나 정제한다. 이어서, 배지 또는 상등액을 적합한 염 또는 완충제와 혼합하여 한외원심분리에서 분리 효능을 증대시킨다. 생성 혼합물을, 상기 혼합물이 1 내지 24시간 동안 약 100,000 x g(또는 중력의 100,000배)의 높은 원심력을 안전하게 견딜 수 있게 하는 한외원심분리 튜브에 가한다. 엑소좀 조성물은 함께 농축되고 튜브로부터 제거되는 것으로 밝혀졌다. 일부의 경우에, 엑소좀을 튜브로부터 재현탁된 펠릿으로서 제거한다. 일부의 경우에, 엑소좀은 생성되는 밀도 구배에서 가시화되며, 이를 바늘 흡출, 또는 다른 방법에 의해 제거한다. 생성되는 엑소좀 조성물을 한외원심분리 완충제로부터 정제하고 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제 중에서 희석하고 동결시키거나, 또는 달리, 엑소좀 조성물이 효능 및 안정성을 유지하는 온도에서 보관한다.
일부의 경우에 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제를 한외여과를 사용하여 수행한다. 일부의 한외여과 방법, 예를 들어 수성 완충제는 통과시키지만 엑소좀과 같은 고분자량 물질은 통과시키지 않는 농축 컬럼을 수반하는 방법이 적합하다. 단리 또는 정제 방법의 한외여과 방법의 일부 예는 세포 집단, 예를 들어 기질 세포, SDC2+ 세포, 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 줄기세포, SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포, CD39+ 세포, CD39+/SDC2+ 세포, 또는 이들의 조합을 수득함을 포함한다. 일부의 경우에, 세포는 SDC2 및/또는 CD39를 과발현하도록 유전자 변경되었거나, 또는 외인성 SDC2 및/또는 CD39 또는 SDC2 및/또는 CD39를 암호화하는 벡터가 제공되었다. 세포 배양물의 배지 또는 상등액을 세포 배양물로부터 단리하거나 정제한다. 이어서 배지 또는 상등액을, 100,000 kDa 바이오맥스(Biomax) 폴리에테르설폰을 갖는 교반식 셀 모델(Stirred Cell Model) 8200 또는 10 psi의 질소 기체를 사용하는 울트라셀(Ultracel) 재생 셀룰로스 멤브레인을 사용하여, 예를 들어 30의 인자까지, 예를 들어 150 ㎖의 출발 배지 또는 상등액에서 10 ㎖의 농축된 엑소좀을 생성시키도록 농축시킨다. 이어서 농축된 엑소좀을 아미콘 울트라(Amicon Ultra)-15 100,000 kDa 장치와 같은 수집 장치로 옮기고 예를 들어 알레그라(Allegra) X-15R 원심분리기에서 4,000 x g에서 4℃에서 원심분리시켜 엑소좀을 20의 또 다른 인자까지, 예를 들어 10 ㎖의 농축된 엑소좀이 0.5 ㎖로 추가로 농축되도록 농축시킨다. 적합한 경우에 대안의 컬럼 및 원심분리기를 대체한다.
일부의 경우에, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 단리 또는 정제를 자동화된 제작 시스템을 사용하여 수행한다. 일부의 경우에, 자동화된 제작은 테루모 콴텀 셀 익스팬션 시스템의 사용을 포함한다.
기질 줄기세포 조성물
본 명세서는 CD39 결합제에 결합된, SDC2+ 기질 줄기세포를 포함하는 조성물과 같은 조성물을 제공한다. 일부의 상기와 같은 조성물은 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 CD39+ 기질 줄기세포를 포함한다. 일부의 경우에, 조성물 중의 기질 줄기세포의 적어도 20%는 SDC2+이다. 일부의 경우에, 기질 줄기세포의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상이 SDC2+이다. 일부의 경우에, 조성물 중의 기질 줄기세포의 적어도 20%는 CD39+이다. 일부의 경우에, 기질 줄기세포의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상이 CD39+이다. 일부의 경우에, 조성물 중의 기질 줄기세포의 적어도 20%는 SDC2+CD39+이다. 일부의 경우에, 기질 줄기세포의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상이 SDC2+CD39+이다. SDC2를 포함하는 조성물 중의 기질 줄기세포의 비율을 면역형광, 예를 들어 유식 세포측정, 자기 활성화된 세포 분류, 형광 현미경검사, 또는 다른 적합한 방법에 의해 측정한다.
일부의 경우에, 본 명세서에서 CD39 결합제는 항체, 예를 들어 항-CD39 항체 또는 그의 단편을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 경우에, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 일부의 경우에, 항체를 비드에 접합시킨다.
SDC2는 신데칸-2 단백질을 암호화하는 유전자를 지칭한다(또한 흔히 본 명세서 및 당해 분야의 다른 곳에서 SDC2라 지칭된다). 신데칸-2, 또는 'SDC2 단백질' 또는 간단히 SDC2는 막관통 I형 헤파린 설페이트 프로테오글리칸이다. 'SDC2 단백질' 또는 SDC2를 차치하고, 신데칸-2에 대한 추가적인 유의어는 HSPG, CD362, HSPG1, 및 SYND2를 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이 SDC2는 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 'SDC2 유전자', "SDC2 전사물', 'SDC2 항체'를 인용함으로써 단백질 또는 그의 인식 가능한 단편을 지칭한다. 추가로, SDC2는 본 명세서에 동반되는 서열 목록에서 그의 폴리펩티드 서열에 의해 식별된다.
일부의 경우에, 본 명세서의 기질 세포 조성물은 기질 줄기세포 조성물의 치료 효능을 증가시키기 위해 변형된다. 일부의 경우에, 세포는 CD39와 같은 아피라제 또는 본 명세서에 논의된 바와 같은 대안의 아피라제를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포는 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형된다. 기질 세포의 유전자 변형은 비제한적으로, CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어 CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함하는 방법에 의해 수행된다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형은 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행된다.
SDC2는 3개의 도메인: 아미노산 19-144의 세포외 도메인, 아미노산 145-169의 막관통 도메인, 및 아미노산 170-201의 세포질 도메인을 갖는다. SDC2는 세포 결합, 세포 신호전달, 및 세포골격 구성의 매개에 연루되었다. SDC2는 HIV-1 TAT 단백질의 내면화에 필수적인 것으로 입증되었다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 기질 줄기세포 조성물은 동결방지제 또는 동결보존제를 포함한다. 동결방지제는 DMSO, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 덱스트란, 트레할로스, 및 상업적인 제형, 예를 들어 바이오라이프 솔루션즈(Biolife solutions)로부터의 CryoStor를 포함한다. 본 명세서의 기질 줄기세포 조성물은 특별한 동결 프로토콜을 사용하여 동결후에 효능을 유지한다. 특별한 동결 프로토콜은 순간 동결, 프로그램화 가능한 속도 프리저, 및 단열된 용기에서의 동결을 포함한다. 기질 줄기세포 조성물은 일부의 경우에 완충제 또는 동결방지제가 첨가된 배양 배지 중에서 동결된다. 완충제는 생리학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 아세테이트 완충제, 바이오라이프 솔루션즈로부터의 하이포써마졸(Hypothermasol) 및 다른 적합한 완충제를 포함한다.
본 명세서에 개시된 기질 줄기세포 조성물을 생리학적으로 허용 가능한 완충제 중에서 제형화하며 이는 일부의 경우에 적어도 하나의 부형제에 의해 보충된다. 부형제의 비제한적인 예는 슈크로스, 트레할로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리사카라이드, 담체 단백질, 불활성 단백질, 덱스트란, 하이드록실 에틸 전분(HETA), PEG-4000, 젤라틴, PLGA, 유드라지트 RS 100 나노입자, 및 이들의 조합을 포함한다. 상기와 같은 기질 줄기세포 조성물을 가장 안정한 것으로 판정된 온도에서 보관한다(즉, 여기에서 기질 줄기세포 조성물은 최고의 효능을 유지하거나, 가장 긴 시간 동안 효능을 유지하거나, 또는 달리 목적하는 성질을 최적화한다). 일부의 경우에, 적어도 하나의 부형제의 첨가는, 조성물이 달리 가능한 경우보다 더 높은 온도에서 보관될 때 주변분비 신호전달 효능과 같은 효능을 유지할 수 있게 한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 CD39 결합제와 같은 아피라제 세포외 결합 도메인 작용제를 사용하여 단리된 일부 기질 줄기세포 조성물, 예를 들어 CD39+, SDC2+, 또는 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물은 SDC2+ 기질 줄기세포 및 또 다른 포유동물 세포를 포함한다. 다른 포유동물 세포 병용된 SDC2+ 기질 줄기세포는 일부의 경우에 조절 T 세포, 예를 들어 CD25+ 조절 T 세포, CD4+ 조절 T 세포, FoxP3+ 조절 T 세포, CD25+CD4+FoxP3+ 조절 T 세포, 또는 이들의 조합이다.
광범위한 CD39+, SDC2+, 또는 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포를 포함하는 조성물을 본 명세서에 개시한다. 일부 조성물은 SDC2+ 기질 줄기세포를 치료 유효량으로 포함한다. 일부의 조성물에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 양은 조성물 중 10^3 내지 10^8 SDC2+ 기질 줄기세포, 예를 들어 10^3, 10^4, 10^5, 10^6, 10^7, 또는 10^8 SDC2+ 기질 줄기세포 세포, 또는 그 이상의 SDC2+ 기질 줄기세포의 범위이다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물을 투여에 앞서 개인 또는 의료인에 의해 희석되도록 농축시킨다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 개인 또는 의료인에 의해 희석되고 바로 투여된다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 일회용 바이알, 주사기, 또는 IV 주머니 중에 함유된다. 일부의 경우에, 수회 용량이 단일 용기 중에 존재한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 치료학적으로 활성인 CD39+, SDC2+, 또는 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물은 면역억제 약물을 포함한다. 본 명세서에서 고려되는 면역억제 약물은 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포발육저지제, 항체, 임뮤노필린 억제제, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스 및 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 사이클로옥시게나제 억제제, 항히스타민제, 대사길항물질, 폴산, 메토트렉세이트, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 단백질 합성 억제제, 마이코페놀레이트, 세포독성 항생제, 스테로이드, 항-TNF 항체, TNF 억제제, 및 NSAID를 포함한다. 일부 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 항-TNF 항체, 예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 아달리뮤맵, 세르톨리주맵, 및 골리뮤맵을 포함한다. SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 TNF 억제제, 예를 들어 비제한적으로 에타너셉트, 잔틴 유도체, 및 부프로피온을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 적어도 하나의 NSAID를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 적어도 하나의 스테로이드를 포함한다.
엑소좀 조성물
본 명세서는 CD39 결합제에 결합된 조성물, 예를 들어 엑소좀, 예를 들어 시험관내 엑소좀, 예를 들어 SDC2+ 엑소좀을 포함하는 치료학적으로 활성인 조성물을 제공한다. 일부의 경우에 엑소좀은 주변분비 신호전달을 매개하거나, 수행하거나 또는 억제하는 성분을 포함한다. 일부의 경우에, 조성물 중의 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2+이거나 또는 SDC2를 포함한다. 일부의 경우에 엑소좀의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상은 SDC2를 포함한다. 일부의 경우에 엑소좀의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상은 CD39를 포함한다. SDC2는 일부의 예에서 엑소좀의 표면상에서 발견된다. 일부의 예에서, SDC2는 엑소좀의 내부에서 발견된다. SDC2를 포함하는 조성물 중의 엑소좀의 비율을 면역형광, 예를 들어 유식 세포측정, 전자 현미경검사, 또는 다른 적합한 방법에 의해 측정한다.
일부의 경우에, 본 명세서의 CD39 결합제는 항체, 예를 들어 항-CD39 항체를 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 일부의 경우에, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 일부의 경우에, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부의 경우에, 항체를 형광단에 접합시킨다. 일부의 경우에, 항체를 비드에 접합시킨다.
SDC2는 신데칸-2 단백질을 암호화하는 유전자를 지칭한다(또한 흔히 본 명세서 및 당해 분야의 다른 곳에서 SDC2라 지칭된다). 신데칸-2, 또는 'SDC2 단백질' 또는 간단히 SDC2는 막관통 I형 헤파린 설페이트 프로테오글리칸이다. 'SDC2 단백질' 또는 SDC2를 차치하고, 신데칸-2에 대한 추가적인 유의어는 HSPG, CD362, HSPG1, 및 SYND2를 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이 SDC2는 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 'SDC2 유전자', "SDC2 전사물', 'SDC2 항체'를 인용함으로써 단백질 또는 그의 인식 가능한 단편을 지칭한다. 추가로, SDC2는 본 명세서에 동반되는 서열 목록에서 그의 폴리펩티드 서열에 의해 식별된다.
SDC2는 3개의 도메인: 아미노산 19-144의 세포외 도메인, 아미노산 145-169의 막관통 도메인, 및 아미노산 170-201의 세포질 도메인을 갖는다. SDC2는 세포 결합, 세포 신호전달, 및 세포골격 구성의 매개에 연루되었다. SDC2는 HIV-1 TAT 단백질의 내면화에 필수적인 것으로 입증되었다.
일부의 경우에, 본 명세서에 기재된 엑소좀 조성물은 세포로부터 유래되지만, 상기 엑소좀 조성물은 살아있는 세포를 반드시 포함하지는 않는다. 따라서, 무세포 엑소좀 조성물은 비-종양형성성이다, 즉 상기 조성물은 종양 세포로 분화할 수 있는 세포를 포함하지 않기 때문에 피실험자의 종양 또는 암 발생 민감성을 증가시키지 않는다. 대안의 조성물에서, 엑소좀에 조성물의 소염 활성 또는 주변분비 신호전달 활성에 기여하는 세포, 예를 들어 중간엽 기질 세포를 보충한다.
본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물은 종종 동결방지제의 사용 없이, 동결 또는 동결보존 후에 효능 또는 활성, 예를 들어 주변분비 신호전달 활성을 유지한다. 동결방지제는 DMSO, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 덱스트란, 트레할로스, 및 상업적인 제형, 예를 들어 바이오라이프 솔루션즈로부터의 CryoStor를 포함한다. 엑소좀 조성물은 또한 특별한 동결 프로토콜의 사용 없이 동결후에 효능을 유지한다. 특별한 동결 프로토콜은 순간 동결, 프로그램화 가능한 속도 프리저, 및 단열된 용기에서의 동결을 포함한다. 엑소좀 조성물의 내구성의 이점은, 상기 조성물이 보다 쉽게 동결되고 동결방지제 없이 동결되어, 보다 내구성이고, 보다 용이하고 저렴하게 제조되며, 동결 프로토콜 또는 조성물의 결함으로 인한 활성의 손실로부터 발생하는 배치 변동이 덜 문제가 되는 듯한 조성물을 생성시킨다는 것이다. 엑소좀 조성물은 일부의 경우에 완충제 또는 배양 배지 중에서 동결된다. 완충제는 생리학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 아세테이트 완충제, 바이오라이프 솔루션즈로부터의 하이포써마졸 및 다른 적합한 완충제를 포함한다. 일부의 경우에 본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물을 동결건조시킨다.
본 명세서에 개시된 엑소좀 조성물을 생리학적으로 허용 가능한 완충제 중에서 제형화하며 이는 일부의 경우에 적어도 하나의 부형제에 의해 보충된다. 부형제의 비제한적인 예는 슈크로스, 트레할로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리사카라이드, 담체 단백질, 불활성 단백질, 덱스트란, 하이드록실 에틸 전분(HETA), PEG-4000, 젤라틴, PLGA, 유드라지트 RS 100 나노입자, 및 이들의 조합을 포함한다. 상기와 같은 엑소좀 조성물을 가장 안정한 것으로 판정된 온도에서 보관한다(즉, 여기에서 엑소좀 조성물은 최고의 효능을 유지하거나, 가장 긴 시간 동안 효능을 유지하거나, 또는 달리 목적하는 성질을 최적화한다). 일부의 경우에, 적어도 하나의 부형제의 첨가는, 조성물이 달리 가능한 경우보다 더 높은 온도에서 보관될 때 주변분비 신호전달 효능과 같은 효능을 유지할 수 있게 한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 일부 엑소좀 조성물은 시험관내 엑소좀 및 SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어, CD39의 발현에 근거하여 단리된 중간엽 기질 줄기세포)를 포함한다. 시험관내 엑소좀에 병용된 세포는 일부의 경우에 조절 T 세포, 예를 들어 CD25+ 조절 T 세포, CD4+ 조절 T 세포, FoxP3+ 조절 T 세포, CD25+CD4+FoxP3+ 조절 T 세포, 또는 이들의 조합이다. 일부의 예에서, 엑소좀 조성물은 시험관내 엑소좀, SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어, CD39의 발현에 근거하여 단리된 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포), 및 조절 T 세포(예를 들어 CD39의 발현에 근거하여 단리된 조절 T 세포)를 포함한다.
광범위한 엑소좀을 포함하는 조성물을 본 명세서에 개시한다. 일부 조성물은 엑소좀을 치료 유효량으로 포함한다. 일부 조성물에서, 엑소좀의 양은 조성물 중 106 내지 108 엑소좀, 예를 들어 106, 107, 108, 또는 그 이상의 엑소좀의 범위이다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량의 범위는 조성물 중 1 ㎍ 내지 700 ㎎의 엑소좀, 예를 들어 1 ㎍, 10 ㎍, 20 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 500 ㎍, 750 ㎍, 1 ㎎, 2 ㎎, 3 ㎎, 4 ㎎, 5 ㎎, 6 ㎎, 7 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 50 ㎎, 100 ㎎, 200 ㎎, 300 ㎎, 400 ㎎, 500 ㎎, 600 ㎎, 700 ㎎, 또는 그 이상의 엑소좀이다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 투여에 앞서 개인에 의해 희석되도록 농축된다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 개인에 의해 희석되고 바로 투여된다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 일회용 바이알 또는 주사기 중에 함유된다. 일부의 경우에, 수회 용량이 단일 용기 중에 존재한다.
본 명세서에 개시된 일부 엑소좀 조성물은 추가적인 단백질, 예를 들어 치료 효능에 기여하거나, 또는 치료 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 단백질을 포함한다. 단백질은 일부의 경우에 비제한적으로 IL-12, 사이토킨 신호전달의 억제제(SOCS), p53, PTEN, CD52, TSC1, FOXP3, 용해성 면역 반응 억제제(SIRS), TGFB, CD39L3, CD73, 및 매스핀(Maspin)을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀은
및 이들의 조합으로 이루어지는 목록 중에서 선택된 단백질 중 적어도 하나를 포함한다.
일부의 경우에, CD39 결합제를 사용하여 단리된 엑소좀의 치료 효능에 기여하거나 또는 상기 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 단백질은 CD39, CD39L3, 및/또는 CD73, 또는 서열, 길이 또는 서열 및 길이는 상이하지만 ATP 또는 ADP를 유리 퓨린 아데노신으로 환원시키는 공통의 능력을 유지하는 그의 구조 또는 기능 유사체를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 효능에 기여하거나 또는 상기 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 단백질은 CD39를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 효능에 기여하거나 또는 상기 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 단백질은 CD39L3를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 효능에 기여하거나 또는 상기 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 단백질은 CD73을 포함한다. 일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 엑소좀은 상기 단백질 중 하나 이상을 전달하여 염증을 감소시킨다. 일부 엑소좀은, 예를 들어 ATP 농도, ADP 농도 및 AMP 농도 중 적어도 하나를 감소시키기 위해서, ATP의 ADP, AMP 또는 유리 퓨린으로의 형질전환을 촉매화함으로써 국소적인 ATP, ADP 및/또는 AMP 농도에 영향을 미치는 단백질을 전달한다. 교대로 또는 함께, 일부 엑소좀은, 예를 들어 ATP, ADP 및 AMP 중 적어도 하나를 유리 퓨린으로 전환시킴으로써 유리 퓨린 농도를 증가시키는 단백질을 전달한다. ATP, ADP 및 AMP의 유리 퓨린으로의 전환은 일부의 경우에 CD39 및 CD73을 포함하는 단백질의 조합을 통해 수행된다. 교대로, 일부의 경우에 단일 효소 활성은 ATP, ADP 및 AMP 중 적어도 하나로부터 유리 퓨린을 방출시킨다. 일부 엑소좀은 ATPase, ADPase, AMPase, 및 아데노신 데퓨리나제 활성 중 적어도 하나를 갖는 효소를 전달한다. 다양한 실시태양에서, 엑소좀은 상기 목록 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개 이하 또는 100개 초과의 단백질을 포함한다. 다양한 실시태양에서, 엑소좀은 상기 목록 중 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개 또는 100개 초과의 단백질을 포함한다. 다양한 실시태양에서, 엑소좀은 상기 목록으로부터 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이하의 단백질, 또는 100%의 단백질을 포함한다. 다양한 실시태양에서, 엑소좀은 상기 목록으로부터 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상, 또는 100%의 단백질을 포함한다. 다양한 실시태양에서, 상기 목록으로부터 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이하, 또는 100%의 단백질을 질병의 치료를 위해, 예를 들어 엑소좀 조성물로부터 정제한다. 다양한 실시태양에서, 상기 목록으로부터 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상, 또는 100%의 단백질을 질병의 치료를 위해, 예를 들어 엑소좀 조성물로부터 정제한다. 일부의 경우에, 상기 목록으로부터의 정제된 단백질을 질병의 치료를 위해, 예를 들어 전달 기전으로서 엑소좀을 사용하여, 엑소좀 조성물과 병용한다.
본 명세서에 개시된 CD39 결합제를 사용하여 단리된 일부 엑소좀 조성물은, 치료 효능에 기여하거나, 또는 치료 효능을 수행하기 위해 주변분비 신호전달을 매개하는 핵산, 예를 들어 miRNA를 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 미세RNA(miRNA)를 포함한다. miRNA는 비제한적으로 let7b miRNA를 포함한다. 일부의 태양에서, 엑소좀-유래된 miRNA를 림프구에 전달하여 조절 표현형을 유도한다. 일부의 태양에서, miRNA를 림프구에 전달하여 조절 Foxp3+ 표현형을 유도한다. 일부의 태양에서, miRNA를 대식세포에 전달하여 조절 M2 대식세포 표현형을 유도한다. 일부의 태양에서, miRNA let-7b를 대식세포에 전달하여 조절 M2 대식세포 표현형을 유도한다. 일부의 태양에서, 조성물은 분자의 적어도 하나의 범주, 예를 들어 숙주 면역계로부터 면역-자극, 염증-전 반응을 생성시키는 외인성 RNA, 단백질, 항원 및 미세RNA를 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 액체 또는 고형 종양 중의 내인성 종양 침윤성 림프구(TIL)로부터 면역-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 자극 항원을 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 림프구 관문 경로의 억제제와 협력하여 액체 또는 고형 종양 중의 내인성 종양 침윤성 림프구(TIL)로부터 면역-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 자극 항원을 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 CTLA4, PD1, PDL1, LAG3, PDL2 또는 CD39 경로와 같은 림프구 관문 경로의 항체, 이중특이성 항체 또는 화학적 억제제와 협력하여, 액체 또는 고형 종양 중의 내인성 종양 침윤성 림프구(TIL)로부터 증대된 공-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 자극 항원을 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 액체 또는 고형 종양에 표적화된 외인성 조작된 T 림프구로부터 면역-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 자극 항원을 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 특정한 고형 종양 항원에 표적화된 외인성 수지상 세포(DC)로부터 면역-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 자극 항원을 포함한다. 일부의 태양에서, 조성물은 고형 또는 액체 종양에 표적화된 외인성 조작된 자연 살해(NK) 세포로부터 면역-자극, 염증전 반응을 생성시키는 외인성 공-자극 항원을 포함한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 치료학적으로 활성인 엑소좀 조성물은 면역억제 약물을 포함한다. 본 명세서에서 고려되는 면역억제 약물은 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포발육저지제, 항체, 임뮤노필린 억제제, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스 및 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 사이클로옥시게나제 억제제, 항히스타민제, 대사길항물질, 폴산, 메토트렉세이트, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 단백질 합성 억제제, 마이코페놀레이트, 세포독성 항생제, 스테로이드, 항-TNF 항체, TNF 억제제, 및 NSAID를 포함한다. 일부 엑소좀 조성물은 항-TNF 항체, 예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 아달리뮤맵, 세르톨리주맵, 및 골리뮤맵을 포함한다. 엑소좀 조성물은 TNF 억제제, 예를 들어 비제한적으로 에타너셉트, 잔틴 유도체, 및 부프로피온을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 적어도 하나의 NSAID를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 적어도 하나의 스테로이드를 포함한다.
치료 방법
본 명세서에 개시된 CD39의 발현에 근거하여 단리된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은, 일부의 경우에 주변분비 신호전달 활성을 통해, 질병의 치료 방법 및 용도를 위한 치료 조성물을 포함한다. 일부의 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 포유동물에서 염증 반응을 조절한다. 따라서, 본 명세서는 염증 반응 부위에 적어도 하나의 정제된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 투여함으로써 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법을 개시한다. 또한 본 명세서는 염증 반응 부위에 적어도 하나의 정제된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 투여함으로써 포유동물에서 염증 반응을 조절하는데 사용하기 위한 정제된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다. 또한 본 명세서는 염증 반응 부위에 적어도 하나의 정제된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 투여함으로써 포유동물에서 염증 반응의 조절을 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 정제된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다.
방법 및 용도는 치료가 필요한 염증 반응에 따라 변하는, 염증 부위에 도달하기에 적합한 다양한 투여 경로를 포함한다. 투여 경로는 비제한적으로 비경구(피하, 정맥내, 동맥내, 골내, 뇌내, 뇌실내, 척수강내, 수질내, 관절내, 근육내, 또는 복강내 주사 포함), 직장, 호흡 또는 흡입, 국소, 경피, 및 경구(예를 들어 캡슐, 현탁액 또는 정제 중에서)를 포함한다. 일부 적응증의 경우, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 정맥내 투여를 통해 투여하는 것이 바람직하다. 특히, 정맥내 투여가 종종, 포유동물 폐, 예를 들어 인간 폐에 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물로부터 유래된 조성물을 전달하는데 바람직하다.
일부 적응증의 경우, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 흡입 장치를 사용하여 호흡 또는 흡입 경로를 통해 투여하는 것이 바람직하다. 흡입 장치는 치료 조성물을 환자의 기도에 투여할 수 있다. 흡입 장치에는 통상적인 흡입 장치, 예를 들어 계량된 용량 흡입기, 건조 분말 흡입기, 제트 분무기, 초음파 분무기, 열 기화기, 연무 흡입기, 및 고효율 분무기가 포함된다. 분무기, 계량된 용량 흡입기, 및 연무 흡입기는 쉽게 흡입될 수 있는 소적 크기를 포함하는 에어로졸을 형성시킴으로써 치료제를 전달한다. 흡입 요법을 해야하는 환자는 에어로졸을 사용할 수 있다. 분무기는 치료제 또는 약물을, 개인의 폐로 전달되는 미세 에어로졸 미스트로 전환할 수 있다.
분무기는 고효율 분무기를 포함한다. 고효율 분무기는 액체 용액을 전기 또는 기계 수단을 통해 흡입에 적합한 에어로졸 소적으로 전환시키는 미세-천공된 멤브레인을 포함하는 흡입 장치이다. 고효율 분무기는 큰 분획의 부하 용량을 환자에게 전달할 수 있다. 일부의 실시태양에서, 고효율 분무기는 또한 하나 이상의 능동적으로 또는 수동적으로 진동하는 미세천공된 멤브레인을 사용한다. 일부의 실시태양에서, 고효율 분무기는 하나 이상의 진동 멤브레인을 함유한다. 일부의 실시태양에서, 고효율 분무기는 다수의 구멍을 갖는 진동 메쉬 또는 플레이트 및 임의로 에어로졸 혼합 챔버를 갖는 진동 발생기를 함유한다. 일부의 상기와 같은 실시태양에서, 혼합 챔버는 에어로졸 발생기로부터 에어로졸을 수집하는(또는 쌓는) 기능을 한다. 일부의 실시태양에서, 흡입 밸브가 또한 흡입 단계 동안 주변 공기의 혼합 챔버내로의 유입을 허용하기 위해 사용되며, 이는 발산 단계 동안 혼합 챔버로부터 에어로졸의 탈출을 방지하기 위해 닫힌다. 일부의 상기와 같은 실시태양에서, 발산 밸브는 혼합 챔버에 제거 가능하게 놓이는 마우스피스에 배열되고 이를 통해 환자는 혼합 챔버로부터 에어로졸을 흡입한다. 더욱 또한, 일부의 실시태양에서, 고효율 분무기는 맥동하는 멤브레인을 함유한다. 일부의 실시태양에서, 고효율 분무기는 연속적으로 작동한다.
일부 적응증, 질병 또는 질환의 경우, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 국소적으로(예를 들어 치료되는 개인의 피부에 직접 적용) 투여하는 것이 바람직하다. 일부의 경우에, 국소 투여를 사용하여 피부의 질병을 치료한다. 국소 투여는 표피 투여를 포함한다. 국소 투여용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 특별히 피부에 투여되도록 제형화한다. 상기와 같은 국소적인 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 비제한적으로 용액, 로션, 크림, 연고, 겔(하이드로겔 또는 콜라겐 겔 포함), 폼, 경피 패치, 분말, 페이스트, 및 팅크제를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하이드로겔 또는 콜라겐 겔을 포함한다.
몇몇 적응증, 질병 또는 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 눈에의 투여(예를 들어 안내 또는 안과학적)로부터 이득을 얻는다. 눈 투여용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 눈 투여에 적합한 제형(예를 들어 완충제 또는 부형제)을 포함한다.
SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 피실험자에의 주사가 몇몇 적응증, 질병 또는 질환의 치료에 유효하다. 주사를 통한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 전달은 비제한적으로 림프절에의 주사, 피하 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사, 복강내 주사, 척수강내 주사, 피내 주사, 관절내 주사, 및 본 명세서의 방법에 적합한 다른 주사 방법을 포함한다. 주사용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 주사용 제형 또는 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제를 포함한다.
몇몇 적응증, 질병 또는 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 심장에의 직접적인 투여로부터 이득을 얻는다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 직접적인 심장 적용은 비제한적으로 심장내, 심장주변내, 또는 관상동맥내 주사를 포함한다.
일부의 경우에 포유동물의 치료 방법 및 용도에 사용되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하나 이상의 항원을 포함한다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물이 하나 이상의 항원을 포함하는 치료 방법 및 용도에서, 항원은 개인의 체액 면역계에 노출되지 않는다. 이러한 경우에, 개인은 항원에 대해 체액 면역 반응이 발생하지 않는다.
포유동물의 치료 방법 및 용도에 사용되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 SDC2 및/또는 CD39를 포함하거나 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+이다. 기질 줄기세포 또는 엑소좀 조성물을 분석하는 경우, 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2를 포함하고 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 20%는 CD39를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도에 사용되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은, 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상이 SDC2를 포함하고 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상이 CD39를 포함하는 조성물을 포함한다. SDC2 및 CD39를 포함하는 조성물 중의 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 비율을 면역형광, 예를 들어 유식 세포측정, 형광 현미경검사, 전자 현미경검사, 또는 다른 적합한 방법에 의해 측정한다.
일부의 경우에, 본 명세서에서 치료 방법에 사용되는 기질 세포 조성물을 기질 줄기세포 조성물의 치료 효능을 증가시키도록 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 본 명세서에 개시된 바와 같은 아피라제, 예를 들어 CD39, CD39의 구조 또는 기능 활성 변체 또는 아피라제 활성을 갖는 다른 단백질을 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 기질 세포의 유전자 변형을, 비제한적으로 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어 CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함한 방법에 의해 수행한다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형을 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 기재된 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물과 같은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 CD39의 발현을 근거로 단리된 세포로부터 유래하는 반면, 상기 엑소좀 조성물은 살아있는 세포를 포함하지 않는다. 따라서, 엑소좀 조성물은 종양형성성이 아니다, 즉 상기 조성물은 피실험자의 종양 또는 암 발생 민감성을 증가시키지 않는다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 포유동물에게 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 또는 시험관내 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀, 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 중간엽 줄기세포(예를 들어 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 중간엽 기질 줄기세포)의 혼합물을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 투여함을 포함한다. 일부의 예에서, 치료 방법 빛 용도는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 또는 시험관내 엑소좀을 포함하는 조성물 및 조절 T 세포를 포함하는 엑소좀 조성물을 사용한다. 조절 T 세포는 CD25+ 조절 T 세포, CD4+ 조절 T 세포, FoxP3+ 조절 T 세포, CD25+CD4+FoxP3+ 조절 T 세포, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 예에서, 엑소좀 조성물을 사용하는 치료 방법 및 용도는 시험관내 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 중간엽 줄기세포, 및 조절 T 세포를 포함하는 조성물을 포함한다.
본 명세서의 치료 방법 및 용도는 동결되거나 또는 동결방지제의 사용 없이 동결보존된 후에 효능 또는 활성을 유지하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용한다. 동결방지제는 DMSO, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 덱스트란, 및 트레할로스를 포함한다. 치료 방법 및 용도에 사용되는 엑소좀 조성물은 또한 특별한 동결 프로토콜의 사용 없이 동결후에 효능을 유지한다. 특별한 동결 프로토콜은 순간 동결, 프로그램화 가능한 속도 프리저, 및 단열 용기에서의 동결을 포함한다. 치료 방법 및 용도에 사용되는 엑소좀 조성물을 완충제 또는 배양 배지 중에서 동결시킨다. 완충제는 생리학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 아세테이트 완충제, 및 다른 적합한 완충제를 포함한다. 일부의 경우에 본 명세서의 치료 방법 및 용도는 동결건조되거나 동결건조된 엑소좀 조성물을 사용한다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 동결되거나 또는 동결보존된 후에 효능 또는 활성을 유지하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물을 사용한다. 동결방지제는 DMSO, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 덱스트란, 및 트레할로스를 포함한다. 치료 방법 및 용도에 사용되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물은 또한 특별한 동결 프로토콜의 사용 없이 동결후에 효능을 유지한다. 특별한 동결 프로토콜은 순간 동결, 프로그램화 가능한 속도 프리저, 및 단열 용기에서의 동결을 포함한다. 치료 방법 및 용도에 사용되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물을 완충제 또는 동결방지제와 혼합된 배양 배지 중에서 동결시킨다. 완충제는 생리학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 아세테이트 완충제, 및 다른 적합한 완충제를 포함한다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 치료 유효량의, CD39의 발현에 근거하여 단리된 SDC2+ 기질 줄기세포를 포함하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포의 치료 유효량의 투여는 조성물 중 10^3 내지 10^8 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포, 예를 들어 10^3, 10^4, 10^5, 10^6, 10^7, 10^8, 또는 그 이상의 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포의 투여를 포함한다. 치료 방법 및 용도는 일부의 경우에, 투여에 앞서 개인 또는 의료인에 의해 희석되도록 농축되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 개인 또는 의료인에 의해 희석되고 바로 투여되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 일회용 바이알, 주사기, 또는 IV 주머니 중에 함유되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 수회 용량을 포함하는 용기로부터의 용량의 투여를 포함한다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 치료 유효량의, 주변분비 신호전달 엑소좀과 같은 엑소좀을 포함하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량의 투여는 조성물 중 106 내지 108 엑소좀, 예를 들어 106, 107, 108, 또는 그 이상의 엑소좀의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량의 투여는 조성물 중 1 ㎍ 내지 700 ㎎의 엑소좀, 예를 들어 1 ㎍, 10 ㎍, 20 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 500 ㎍, 750 ㎍, 1 ㎎, 2 ㎎, 3 ㎎, 4 ㎎, 5 ㎎, 6 ㎎, 7 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 50 ㎎, 100 ㎎, 200 ㎎, 300 ㎎, 400 ㎎, 500 ㎎, 600 ㎎, 700 ㎎, 또는 그 이상의 엑소좀의 투여를 포함한다. 치료 방법 및 용도는 일부의 경우에, 투여에 앞서 개인에 의해 희석되도록 농축되는 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 개인에 의해 희석되고 바로 투여되는 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 일회용 바이알 또는 주사기 중에 함유되는 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도는 수회 용량을 포함하는 용기로부터의 용량의 투여를 포함한다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 치료 효능이 있거나 없는 단백질을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 단백질은 비제한적으로 IL-12, 사이토킨 신호전달의 억제제(SOCS), p53, PTEN, CD52, TSC1, FOXP3, 용해성 면역반응 억제제(SIRS), TGFB, CD39, CD39L3, CD73, 및 매스핀을 포함한다. 일부의 방법 및 용도는 ATPase, ADPase, AMPase, 또는 이데노신 데퓨리나제 활성을 갖는 효소의 투여를 포함한다.
일부의 경우에, 본 명세서의 치료 방법 및 용도는 면역억제 약물을 포함하는 치료학적으로 활성인 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 치료를 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물에 사용되는 면역억제 약물의 비제한적인 예는 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포발육저지제, 항체, 임뮤노필린 억제제, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스 및 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 사이클로옥시게나제 억제제, 항히스타민제, 대사길항물질, 폴산, 메토트렉세이트, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 단백질 합성 억제제, 마이코페놀레이트, 세포독성 항생제, 스테로이드, 항-TNF 항체, TNF 억제제, 및 NSAID를 포함한다. 치료 방법 및 용도를 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 항-TNF 항체, 예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 아달리뮤맵, 세르톨리주맵, 및 골리뮤맵을 포함한다. 치료 방법 및 용도는 TNF 억제제, 예를 들어 비제한적으로 에타너셉트, 잔틴 유도체, 및 부프로피온을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 본 명세서의 치료 방법 및 용도를 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 NSAID를 포함한다. 일부의 경우에, 치료 방법 및 용도를 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하나 이상의 스테로이드를 포함한다.
면역계의 염증성 질병 및 질환은 면역계의 과활성화 또는 부적합한 활성화로 인해 생성된다. 면역계 중의 하나 이상의 세포 유형, 예를 들어 CD4+ 헬퍼 T 세포, CD8+ 세포독성 T 세포, Th17 세포, 수지상 세포, 대식세포, 비만 세포, 백혈구, 호중구, 호산구, 호염기구, 단핵구, 및 이들의 조합이 염증 및 면역 질병에 기여할 수 있다. 종종 이들 세포는 효소, 사이토킨, 케모킨 및 다른 면역 매개체와 같은 세포 유래된 매개체를 통해 염증 반응을 상승시키고 증폭시킨다. 면역 매개체는 비제한적으로 리소좀 과립, 히스타민, IFNγ, IL-8, 류코트리엔 B4, 산화 질소, 프로스타글란딘, TNFα, IL-1, IL-1β, IL-17, IL-2, 및 이들의 조합을 포함한다. 급성 염증은 질병에 대한 면역 반응의 필수 성분이나; 만성 염증은 일반적으로 염증 질병에 이르게 되고 염증 세포에 의한 조직 파괴를 생성시킨다. 일부의 경우에, 염증은 적어도 부분적으로, 염증 부위에서의 증가된 세포외 ATP에 의해 야기된다. 일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 세포외 ATP를 감소시키며 이에 의해 염증을 감소시킨다. 일부의 경우에, 염증은 적어도 부분적으로, 염증 부위의 증가된 세포외 ADP에 의해 야기된다. 일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 세포외 ADP를 감소시키며 이에 의해 염증을 감소시킨다. 일부의 경우에, 염증은 적어도 부분적으로, 염증 부위의 증가된 세포외 AMP에 의해 야기된다. 일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 세포외 AMP를 감소시키며 이에 의해 염증을 감소시킨다. 일부의 경우에, 염증은 적어도 부분적으로, 염증 부위의 증가된 세포외 아데노신에 의해 야기된다. 일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 세포외 아데노신을 감소시키며 이에 의해 염증을 감소시킨다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 조성물은 ATPase, ADPase, AMPase, 또는 아데노신 데퓨리나제 활성을 갖는 적어도 하나의 효소의 전달에 의해 염증을 감소시킨다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 조성물은 CD39 및 CD73 효소 중 적어도 하나 또는 둘 다, 또는 서열, 길이 또는 서열 및 길이가 상이하지만 ATP 또는 ADP를 세포외 공간에서 유리 퓨린 아데노신으로 환원시키는 공통의 능력을 유지하는 그의 구조 또는 기능 유사체의 전달에 의해 염증을 감소시킨다. 염증성 질병은 염증이 침범한 조직 또는 기관에 따라 변하는 다양한 증상이 존재하지만, 일부 공통성은 통증, 발열, 적열, 팽창 및 조직 또는 기관 기능의 상실을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 상기 염증 반응 중 전부 또는 일부를 예방하거나 역전시킨다.
본 명세서는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 포유동물의 염증 반응의 조절 방법을 개시한다. 또한, 포유동물의 염증 반응의 조절에 사용하기 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다. 또한, 포유동물의 염증 반응의 조절을 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다. 일부의 경우에, 염증 반응은 면역 반응이다. 일부의 경우에, 염증 반응은 자가면역 반응이다. 면역 반응, 염증 반응, 및 자가면역 반응은 종종 포유동물에서 치료가 필요한 질병 또는 질환의 발생을 도출한다. 면역 반응, 염증 반응, 또는 자가면역 반응에 의해 야기된 질병 및 질환은 신체의 거의 모든 조직을 침범하며 일반적으로 포유동물 면역계에 의한 과활성 또는 달리 부적합한 반응을 특징으로 한다. 일부의 경우에, 면역 반응, 염증 반응, 및 자가면역 반응은 적응 면역계로부터 유래한다. 일부의 경우에, 면역 반응, 염증 반응, 또는 자가면역 반응은 선천적인 면역 반응으로부터 유래한다. 일부의 경우에, 면역 반응, 염증 반응, 또는 자가면역 반응은 사이토킨의 과잉 분비, 세포독성 T 세포 활성, 항체 생성, T 세포 증식, 팽창, 적열, 발열, 부종, 또는 면역계의 세포 또는 조직에 의한 다른 반응을 생성시킨다. 일부의 경우에 면역 반응은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
본 명세서는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여를 포함하는 염증 반응 또는 면역 반응의 치료 방법을 개시한다. 또한 본 명세서는 염증 반응 또는 면역 반응의 치료에 사용하기 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다. 또한 본 명세서는 염증 반응 또는 면역 반응의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시한다. 반응은 비제한적으로 패혈증, 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 골관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 운동신경 장애, 쇼그렌 증후군, 비-치유성 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중중 근무력증, 신경근육긴장, 방종양성 소뇌 변성, 다발성 근염, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 경우에, 염증 반응은 염증성 간 질환을 포함한다. 일부의 경우에 염증 반응은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 당뇨 합병증을 포함한다. 당뇨 합병증은 종종 당뇨병이 있는 개인에서 관찰된다. 일부의 경우에, 당뇨 합병증은 1형 당뇨병이 있는 개인에서 발생한다. 일부의 경우에, 당뇨 합병증은 2형 당뇨병이 있는 개인에서 발생한다. 당뇨 합병증은 비제한적으로 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, 및 당뇨병 환자에서 발생하는 다른 병을 포함한다. 일부의 경우에 당뇨 합병증은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 투여시, 당뇨병의 증상이 개선되며, 따라서 일부의 경우에 일부 기능이 다시 획득된다. 종종, 이러한 이득은 혈당 수준에 영향 없이 당뇨병 개인에서 관찰된다.
일부의 경우에 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은, 또한 비인슐린-의존성 당뇨병 또는 성인 발병 당뇨병으로서 공지된 2형 당뇨병의 치료 또는 완화에 유용하다. 2형 당뇨병은 2형 당뇨병이 있는 환자에서 인슐린 민감성을 감소시키는 증가된 전신 염증과 관련된다. 일부의 경우에, 전신 염증은 비만, 심장병, 죽상동맥경화증 및 대사 증후군과 관련된다. 2형 당뇨병의 증상은 비제한적으로 피로, 배고픔, 비-치유성 상처, 심장병, 뇌졸중, 당뇨성 망막병증, 실명, 신부전, 감소된 혈류, 고삽투압성 고혈당, 및 이들의 조합을 포함한다. 소염 약물 또는 조성물, 예를 들어 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물에 의한 염증의 감소는 하나 이상의 증상을 감소시키고, 일부의 경우에 2형 당뇨병을 치유한다. 특히, 일부의 경우에 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 투여는, 일부의 경우에 엑소좀 수용자에서 혈당에 영향 없이 당뇨병-관련된 신장 손상을 개선시킨다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 심장 질환을 포함한다. 심장 질환은 비제한적으로 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 및 아급성 세균성 심내막염을 포함한다. 일부의 경우에 심장 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 신장 질환을 포함한다. 신장 질환은 비제한적으로 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염 및 루푸스 신염을 포함한다. 일부 신장 질환은 1형 당뇨병 또는 2형 당뇨병과 같은 당뇨병으로부터 생성되거나 또는 상기 당뇨병과 관련된다. 일부의 경우에 신장 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 치료되거나, 중재되거나 완화된다. 신장 질환을 중재하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 일례는 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물이다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 투여시, 신장병의 증상이 개선되며, 따라서 일부의 경우에 일부 신장 기능이 다시 획득된다. 종종, 이러한 이득은 혈당 수준의 영향 없이 당뇨병 개인에서 관찰된다.
본 명세서에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 치료가 필요한 일부 염증 반응은 간 질환을 포함한다. 간 질환은 비제한적으로 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 및 원발성 경화성 담관염을 포함한다. 일부의 경우에 간 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 폐 질환을 포함한다. 폐 질환은 비제한적으로 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 항합성효소 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질병, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 및 폐 부종을 포함한다. 일부의 경우에 폐 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 피부 질환을 포함한다. 피부 질환은 비제한적으로 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 및 자가면역 다선 증후군 3형을 포함한다. 일부의 경우에 피부 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
본 명세서에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 일부 염증 반응은 췌장 질환을 포함한다. 췌장 질환은 비제한적으로 자가면역 췌장염 및 1형 당뇨병을 포함한다. 일부의 경우에 췌장 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은, 또한 1형 당뇨병으로서 공지된 1형 당뇨병의 치료 또는 완화에 유용하다. 1형 당뇨병은 적어도 부분적으로 자가반응성 T 세포에 의한 췌장 중 베타 세포의 인슐린 분비의 파괴에 의해 야기된다. 1형 당뇨병의 증상은 비제한적으로 증가된 혈당 및 요당 수준, 다뇨증(빈번한 배뇨), 조갈증(증가된 갈증), 다식증(증가된 배고픔), 체중 감소, 당뇨성 케토산증, 비케톤성 고삼투압성 혼수, 심장병, 뇌졸중, 신부전, 발 궤양, 눈 손상 및 이들의 조합을 포함한다. 당뇨병의 잠복성 자가면역 또는 초기 단계에서, 소염성 약물 또는 조성물, 예를 들어 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물에 의한 면역 억제 또는 면역 반응의 감소는 베타 세포의 증가된 파괴를 역전시키고, 늦추고 방지하여, 1형 당뇨병의 하나 이상의 증상의 감소, 및 일부의 경우에 치유에 이르게 된다. 특히, 일부의 경우에 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여는 1형 당뇨병-관련된 신장 질환의 증상을 치료하거나, 중재하거나 개선시킨다. 일부의 경우에 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 투여의 이러한 이로운 효과는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 투여의 글루코스 수준에 대한 어떠한 영향과도 무관한다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 갑상선 질환을 포함한다. 갑상선 질환은 비제한적으로 자가면역 갑상선염, 오즈 갑상선염 및 그레이브스병을 포함한다. 일부의 경우에 갑상선 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 외분비 질환을 포함한다. 외분비 질환은 비제한적으로 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 및 자가면역 고환염을 포함한다. 일부의 경우에 외분비 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 소화계 질환을 포함한다. 소화성 질환은 비제한적으로 자가면역 장병증, 셀리악병, 크론병, 미세장염, 염증성 장 질환 및 궤양성 대장염을 포함한다. 일부의 경우에, 소화계 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
본 명세서에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 일부 염증 반응은 혈액 질환을 포함한다. 혈액 질환은 비제한적으로 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 및 혈소판 감소증을 포함한다. 종종, 혈액 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
종종, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 결합 조직, 다-기관 또는 전신 질환을 포함한다. 결합 조직, 다-기관, 또는 전신 질환은 비제한적으로 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 및 미분화된 결합조직병을 포함한다. 일부의 경우에 결합 조직, 다-기관 또는 전신 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 신경계 질환을 포함한다. 신경계 질환은 비제한적으로 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 알쯔하이머병, 파킨슨병, ALS, 및 횡단성 척수염을 포함한다. 일부의 경우에, 신경계 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다. 일부의 경우에, 신경계 질환은 중추 신경계 질환이다. 일부의 경우에 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여는 혈액 뇌 장벽을 통과하는 엑소좀 또는 다른 인자를 생성시키고, 이에 의해 뇌의 염증을 감소시킨다.
본 명세서에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 일부 염증 반응은 눈 질환을 포함한다. 눈 질환은 비제한적으로 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 및 톨로사-헌트 증후군을 포함한다. 종종 눈 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
본 명세서에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 추가적인 염증 반응은 귀 질환을 포함한다. 귀 질환은 비제한적으로 자가면역 내이병, 및 메니에르병을 포함한다. 일부의 경우에 귀 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
일부의 경우에, 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용하는 치료가 필요한 염증 반응은 혈관계 질환을 포함한다. 혈관계 질환은 비제한적으로 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염을 포함한다. 일부의 경우에, 혈관계 질환은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의해 중재되거나 완화된다.
본 명세서에 개시된 치료 방법 및 용도는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 투여에 의한 치료를 위한 환자 또는 환자 그룹의 식별을 포함한다. 일부의 경우에, 환자 그룹의 식별은 의사 또는 다른 전문 의료인에 의해 수행된다. 의사 또는 다른 전문 의료인은 개인, 환자 또는 환자 집단이 염증, 면역 또는 자가면역 반응의 치료를 위한 후보인지를 결정하기 위해 의학 분야의 숙련가들에게 공지된 기준을 사용한다.
전달 방법
본 명세서에 기재된 바와 같이, CD39의 발현에 근거하여 정제된, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포유동물의 세포내 공간으로의 면역-조절 신호의 전달 방법에 사용한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 또한 포유동물의 세포내 공간으로의 면역-조절 신호의 전달에 사용하기 위한 것이다. 면역-조절 신호는 포유동물에서 염증 또는 면역반응을 조절하는 조성물을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물을 기질 세포, SDC2+ 세포, 중간엽 줄기세포, 또는 SDC2+ 중간엽 줄기세포로부터 단리하거나 정제하며, 여기에서 세포를 CD39의 발현을 근거로 정제한다. 엑소좀 조성물은 면역-조절 신호를 함유하며, 이에 의해 포유동물에게 투여시 포유동물의 체액 면역계에 엑소좀 조성물의 내용물의 노출 없이 포유동물의 세포내 공간으로 면역-조절 신호를 전달한다.
일단 투여되면, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 포유동물의 세포내 공간으로의 전달은, 비제한적으로 식세포작용, 세포이물흡수, 또는 융합을 포함한 과정을 통해 발생한다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포유동물의 필요에 적합한, 적합한 투여 경로에 의해 면역-조절 신호전달이 필요한 포유동물에게 투여한다. 투여 경로는 비제한적으로 비경구(피하, 정맥내, 동맥내, 골내, 뇌내, 뇌실내, 척수강내, 수질내, 관절내, 근육내, 또는 복강내 주사 포함), 직장, 호흡 또는 흡입, 국소, 경피, 및 경구(예를 들어 캡슐, 현탁액 또는 정제 중에서)를 포함한다.
전달 방법 및 용도는 생리학적으로 허용 가능한 완충제 및 적어도 하나의 부형제로 제형화되는 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 및 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용한다. 부형제의 비제한적인 예는 슈크로스, 트레할로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리사카라이드, 담체 단백질, 불활성 단백질, 덱스트란, 하이드록실 에틸 전분(HETA), PEG-4000, 젤라틴, PLGA, 유드라지트 RS 100 나노입자, 및 이들의 조합을 포함한다. 상기와 같은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 가장 안정한 것으로 측정된 온도에서 보관한다(즉, 여기에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 최고의 효능을 유지한다). 일부의 경우에, 하나 이상의 부형제의 첨가는 달리 가능한 경우보다 더 높은 온도에서 보관시 조성물이 효능을 유지하게 한다.
본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 전달 방법 및 용도는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 및 SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포)의 혼합물을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부의 예에서, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 시험관내 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 및 조절 T 세포를 포함하는 조성물을 포함한다. 조절 T 세포는 CD25+ 조절 T 세포, CD4+ 조절 T 세포, FoxP3+ 조절 T 세포, CD25+CD4+FoxP3+ 조절 T 세포, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부의 예에서, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 시험관내 엑소좀, SDC2+ 중간엽 줄기세포(예를 들어 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포), 및 조절 T 세포를 포함하는 조성물을 포함한다.
일부의 경우에, 전달 방법을 위한 기질 세포 조성물은 기질 줄기세포 조성물의 치료 효능을 증가시키기 위해 변형된다. 일부의 경우에, 세포는 CD39를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포는 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형된다. 일부의 경우에, 세포는 본 명세서에 개시된 바와 같은 아피라제, 예를 들어 CD39, CD39의 구조 또는 기능 활성 변체, 또는 아피라제 활성을 갖는 다른 단백질을 과발현하도록 유전자 변형된다. 기질 세포의 유전자 변형은 비제한적으로, CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어 CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함하는 방법에 의해 수행된다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형은 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행된다.
전달 방법 및 용도는 치료 유효량의, CD39의 발현에 근거하여 단리된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포를 포함하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포의 치료 유효량의 투여는 조성물 중 10^3 내지 10^8 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포, 예를 들어 10^3, 10^4, 10^5, 10^6, 10^7, 10^8, 또는 그 이상의 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포의 투여를 포함한다. 전달 방법 및 용도는 일부의 경우에, 투여에 앞서 개인 또는 의료인에 의해 희석되도록 농축되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 전달 방법 및 용도는 개인 또는 의료인에 의해 희석되고 바로 투여되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 전달 방법 및 용도는 일회용 바이알, 주사기, 또는 IV 주머니 중에 함유되는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 전달 방법 및 용도는 수회 용량을 포함하는 용기로부터의 용량의 투여를 포함한다.
전달 방법 및 용도는 치료 유효량의, 주변분비 신호전달 엑소좀 조성물과 같은 엑소좀 조성물의 투여를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량 범위는 조성물 중 106 내지 108 엑소좀, 예를 들어 106, 107, 108, 또는 그 이상의 엑소좀이다. 일부의 경우에, 엑소좀의 치료 유효량 범위는 조성물 중 1 ㎍ 내지 700 ㎎의 엑소좀, 예를 들어 1 ㎍, 10 ㎍, 20 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 500 ㎍, 750 ㎍, 1 ㎎, 2 ㎎, 3 ㎎, 4 ㎎, 5 ㎎, 6 ㎎, 7 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 50 ㎎, 100 ㎎, 200 ㎎, 300 ㎎, 400 ㎎, 500 ㎎, 600 ㎎, 700 ㎎, 또는 그 이상의 엑소좀이다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 투여에 앞서 개인에 의해 희석되도록 농축된다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 개인에 의해 희석되고 바로 투여된다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 일회용 바이알 또는 주사기 중에 함유된다. 일부의 경우에, 수회 용량이 단일 용기 중에 존재한다.
전달 방법 및 용도는 치료 효능이 있거나 없는 단백질을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 사용한다. 단백질은 비제한적으로 IL-12, 사이토킨 신호전달의 억제제(SOCS), p53, PTEN, CD52, TSC1, FOXP3, 용해성 면역반응 억제제(SIRS), TGFB, CD39, CD39L3, CD73, 및 매스핀을 포함한다.
세포내 공간으로의 전달 방법 및 용도는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 국소적으로(예를 들어 치료되는 개인의 피부에 직접 적용) 포함한다. 일부의 경우에, 국소 투여를 사용하여 피부의 질병을 치료한다. 국소 투여는 표피 투여를 포함한다. 국소 투여용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 특별히 피부에 투여되도록 제형화한다. 상기와 같은 국소적인 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 비제한적으로 용액, 로션, 크림, 연고, 겔(하이드로겔 또는 콜라겐 겔 포함), 폼, 경피 패치, 분말, 페이스트, 및 팅크제를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하이드로겔 또는 콜라겐 겔을 포함한다.
세포내 공간으로의 전달 방법 및 용도는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 눈에의 투여(예를 들어 안내 또는 안과학적)를 포함한다. 눈 투여용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 눈 투여에 적합한 제형(예를 들어 완충제 또는 부형제)을 포함한다.
세포내 공간으로의 전달 방법 및 용도는 주사에 의한 투여를 포함한다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 피실험자에의 주사가 몇몇 적응증, 질병 또는 질환의 치료에 유효하다. 주사를 통한 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 전달은 비제한적으로 림프절에의 주사, 피하 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사, 복강내 주사, 척수강내 주사, 피내 주사, 관절내 주사, 및 다른 적합한 주사 방법을 포함한다. 주사용 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 주사용 제형 또는 생리학적으로 허용 가능한 완충제 또는 부형제를 포함한다.
세포내 공간으로의 전달 방법 및 용도는 본 명세서에 개시된 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 흡입 장치를 사용하는 호흡 또는 흡입 경로를 통한 투여를 포함한다. 흡입 장치는 환자의 기도에 치료 조성물을 투여할 수 있다. 흡입 장치에는 통상적인 흡입 장치, 예를 들어 계량된 용량 흡입기, 건조 분말 흡입기, 제트 분무기, 초음파 분무기, 열 기화기, 연무 흡입기, 및 고효율 분무기가 포함된다. 분무기, 계량된 용량 흡입기, 및 연무 흡입기는 쉽게 흡입될 수 있는 소적 크기를 포함하는 에어로졸을 형성시킴으로써 치료제를 전달한다. 흡입 요법을 해야하는 환자는 에어로졸을 사용할 수 있다. 분무기는 치료제 또는 약물을, 개인의 폐로 전달되는 미세 에어로졸 미스트로 전환할 수 있다.
세포내 공간으로의 전달 방법 및 용도는 면역억제 약물을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물의 사용을 포함한다. 면역억제 약물의 비제한적인 예는 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포발육저지제, 항체, 임뮤노필린 억제제, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스 및 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 사이클로옥시게나제 억제제, 항히스타민제, 대사길항물질, 폴산, 메토트렉세이트, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 단백질 합성 억제제, 마이코페놀레이트, 세포독성 항생제, 스테로이드, 항-TNF 항체, TNF 억제제, 및 NSAID를 포함한다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 항-TNF 항체, 예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 아달리뮤맵, 세르톨리주맵, 및 골리뮤맵을 포함한다. SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 TNF 억제제, 예를 들어 비제한적으로 에타너셉트, 잔틴 유도체, 및 부프로피온을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하나 이상의 NSAID를 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 하나 이상의 스테로이드를 포함한다.
보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물
본 명세서는 보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 개시하며, 여기에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포는 CD39의 발견에 근거하여 단리된다. 보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물은 배양된 줄기세포 또는 기질 줄기세포 및 본 명세서에 개시된 적어도 하나의 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 CD39의 발현을 근거로 배양된 줄기세포 또는 기질 줄기세포로부터 단리되고 이어서 상기 배양된 줄기세포와 병용되어 상기 배양된 줄기세포의 치료 효능을 증대시킨다.
보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물은 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포함하며, 여기에서 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물은 CD39의 발현을 근거로 단리된다. 일부의 조성물에서, 조성물 중의 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2+이거나 또는 SDC2를 포함한다. 일부의 경우에, 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 그 이상은 SDC2를 포함한다. 일부의 예에서, SDC2는 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 표면상에서 발견되거나 또는 적어도 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 표면상에서 발견되는 폴리펩티드 부분을 포함한다. 일부의 경우에, SDC2는 기질 줄기세포 또는 엑소좀의 내부에서 발견된다. SDC2를 포함하는 조성물 중의 SDC2+ 기질 줄기세포 또는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀의 비율을 면역형광, 예를 들어 FACS, 현미경검사, 또는 다른 적합한 방법에 의해 측정한다.
일부의 경우에, 본 명세서의 보충된 줄기세포 조성물을 기질 줄기세포 조성물의 치료 효능을 증가시키도록 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 CD39를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 일부의 경우에, 세포를 본 명세서에 개시된 바와 같은 아피라제, 예를 들어 CD39, CD39의 구조 또는 기능 활성 변체 또는 아피라제 활성을 갖는 다른 단백질을 과발현하도록 유전자 변형시킨다. 기질 세포의 유전자 변형을, 비제한적으로 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터, 예를 들어 CMV, SV40, EF1a 또는 CAG 프로모터를 포함하는 하나 이상의 플라스미드에 의한 기질 세포의 형질감염을 포함한 방법에 의해 수행한다. 일부의 경우에, 기질 세포의 유전자 변형을 CD39 또는 CD39L3 암호화 서열 및 프로모터를 포함하는 바이러스에 의한 기질 세포의 감염에 의해 수행한다.
보충된 줄기세포 조성물은 일부의 경우에 SDC2+인 배양된 줄기세포 또는 기질 줄기세포를 포함한다. 배양된 줄기세포 또는 기질 줄기세포의 적어도 20%는 일부의 경우에 SDC2+이다. 배양된 줄기세포 또는 기질 줄기세포는 일부의 경우에, 20% 내지 90% SDC2+ 세포, 예를 들어 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% SDC+ 세포 또는 90% 초과의 SDC2 세포 내지 100%의 SDC2 양성 세포의 균일한 집단을 포함한다.
보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물은 일부의 경우에 치료 효능이 있거나 없는 단백질을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포함한다. 단백질은 비제한적으로 IL-12, 사이토킨 신호전달의 억제제(SOCS), p53, PTEN, CD52, TSC1, FOXP3, 용해성 면역반응 억제제(SIRS), TGFB, CD39, CD39L3, CD73, 및 매스핀을 포함한다.
보충된 줄기세포 및 기질 줄기세포 조성물은 일부의 경우에 면역억제 약물을 포함하는 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물, 예를 들어 주변분비 신호전달 SDC2+ 및 SDC2+CD39+ 엑소좀 조성물을 포함한다. 면역억제 약물의 비제한적인 예는 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포발육저지제, 항체, 임뮤노필린 억제제, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스 및 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 사이클로옥시게나제 억제제, 항히스타민제, 대사길항물질, 폴산, 메토트렉세이트, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 단백질 합성 억제제, 마이코페놀레이트, 세포독성 항생제, 스테로이드, 항-TNF 항체, TNF 억제제, 및 NSAID를 포함한다. 엑소좀 조성물은 항-TNF 항체, 예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 아달리뮤맵, 세르톨리주맵, 및 골리뮤맵을 포함한다. 엑소좀 조성물은 TNF 억제제, 예를 들어 비제한적으로 에타너셉트, 잔틴 유도체, 및 부프로피온을 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 하나 이상의 NSAID를 포함한다. 일부의 경우에, 엑소좀 조성물은 하나 이상의 스테로이드를 포함한다.
엑소좀 조성물, 단리 방법, 및 질병의 치료 방법 및 용도를 본 명세서에 제공된 도면에 의해 예시한다. 도 1A 내지 1E는 인간 탯줄로부터 신규의 CD39+CD362+ 기질 세포 집단의 식별 및 단리를 도시한다. 도 1A는 전형적인 게이팅 전략을 도시한다. 도 1B는 CD39+CD362+(굵은 사각형 게이트와 화살표로 강조된다) 기질 세포 집단의 식별을 도시한다. 도 1C는 CD362+ 0.121±0.054, CD39+CD362+ 0.105±0.045(n=5% 평균±SEM)를 도시한다. 도 1D 및 도 1E는 밀테니 MACSQuant 타이토 미세칩 세포 분류기, n=2에 의한 분류된 CD39+CD362+(도 1D) 및 야생형(도 1E, 분류되지 않은 WT) 집단으로부터 형성된 콜로니의 CFU-f 분석 및 예를 도시한다.
도 2A 내지 C는 인간 골수로부터 신규의 CD39+CD362+ 기질 세포 집단의 식별 및 단리를 도시한다. 도 2A는 CD39+CD362+(굵은 사각형 게이트로 강조된다) 기질 세포 집단의 전형적인 게이팅 조절 및 식별을 도시한다. 도 2B는 CD362+ 0.4093±0.103, CD39+CD362+ 0.0147±0.002(n=3% 평균±SEM)를 도시한다. 도 2C는 BD FACSAria 세포 분류기, n=3에 의한 야생형(분류되지 않은 WT), CD362+, CD39+CD362+, CD39+ 및 이중 음성(-/-) 집단으로부터 형성된 콜로니의 CFU-f 분석을 도시한다.
도 3A 내지 B는 신규의 폐쇄된 미세칩 세포 분류기 밀테니 타이토를 사용하는 인간 골수로부터의 신규의 CD271+CD362+ 기질 세포 집단의 식별 및 단리를 도시한다. 도 3A는 CD39+CD362+(굵은 사각형에 의해 강조됨) 기질 세포 집단의 식별을 위한 전형적인 밀테니 MACSQuant Tyto 분류 게이트 및 분류 후 분석을 도시한다, n=1. 도 3B는 BD FACSAria 세포 분류기(n=3) 및 밀테니 MACSQuant 타이토 미세칩 세포 분류기(n=1)에 의해 단리된 CD39+CD362+ 집단으로부터 형성된 콜로니의 CFU-f 분석 및 예를 도시한다.
도 4는 본 명세서에서 고려되는 바와 같은 엑소좀의 만화 묘사를 제공한다. 본 도면에서, 일부 엑소좀에 중요한 다수의 성분, 예를 들어 부착 분자, 예를 들어 ICAM 및 인테그린; 테트라스파닌, 예를 들어 CD63, CD9 및 CD81; 세포골격 단백질, 예를 들어 액틴, 튜불린 ERM, 및 미오신; 막 수송 단백질, 예를 들어 RAB 및 아넥신; 엔도솜 분자, 예를 들어 TSG101, 유비퀴틴, 클래테린, 및 ALIX; 및 세라미드, 콜레스테롤 및 포스파티딜세린을 포함한 지질 유동섬; 핵산, 예를 들어 mRNA 분자, 예를 들어 관심 단백질 또는 단백질들을 암호화하는 mRNA 분자, 다수의 암호화 유전자좌를 갖는 DNA 분자를 포함하여 다양한 길이의 DNA 단편 또는 전체 DNA 암호화 분자, miRNA 또는 pre-miRNA, 예를 들어 면역 반응에 관련된 단백질을 암호화하는 유전자 또는 전사물의 발현에 영향을 미치는 miRNA 또는 pre-miRNA를 도시한다. 다양한 순열 또는 조합의 이들의 임의의 성분 내지 이들 성분 전체 또는 이들 성분 중 하나 이상의 변체 중 어느 것도 본 명세서에 고려되는 바와 같은 일부 다양한 SDC2+ 엑소좀 중에 존재하지 않는다.
도 5는 금-태그된 항-SDC2 항체 결합을 검출하기 위한 투과형 전자 현미경검사에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀 중의 SDC2 존재를 도시한다. CD63, TSG101 및 Alix의 발현을, 각각의 단백질에 대한 금속-표지된 항체의 투과형 전자 현미경검사에 의해 유사하게 도시한다. 각각의 현미경 사진 중의 스케일 바는 100 ㎚이다. 도면은 SDC2, CD63, TSG101 및 Alix가 SDC2+ 중간엽 줄기세포로부터 단리된 엑소좀 중에 존재함을 입증한다. 아이소타입 대조용은 항체가 특이적으로 결합함을 입증한다. 래트 IgG2B APC-접합된 아이소타입 대조용 항체(Cat #IC013A, R&D 시스템스(Systems)로부터)에 의한 엑소좀 표지화의 결여는 균등한 래트 IgG2B APC-접합된 항-SDC2 항체에 의한 항-SDC2 표지화의 특이성을 가리킨다.
도 6은 단백질 젤 전기영동에 의한 SDC2+ 중간엽 기질 세포(MSC)로부터 유래된 엑소좀 중의 SDC2 발현을 도시한다. 본 실험에서, H36(골수 유래된 SDC2+ MSC), H37(골수 유래된 SDC2+ MSC) 및 HUC12(인간 탯줄 유래된 SDC2+ MSC) 세포 및 이들 세포로부터 정제된 엑소좀을 용해 완충제 중에 균질화하고, 정제되지 않은 전체 샘플 단백질 추출물과 함께, SDS-PAGE 겔상에서 실행시켰다. 상기 겔로부터의 단백질을 멤브레인으로 옮기고 래트 IgG2B 항-인간 SDC2 항체로 염색하였다. 각각의 '엑소' 엑소좀 단백질 추출물 레인에서, 50 kDa 아래에서 강한 농축이 관찰되며, 이는 SDC2/CD362가 전체 세포 추출물 분획에 비해 엑소좀 분획 중에 불균형적으로 존재함을 가리킨다.
SDC2+ 엑소좀을 염증 손상의 포유동물 모델에서 염증-관련된 손상을 감소시키는 그의 효능 및 안전성에 대해 시험하였다.
도 7은 급성 호흡곤란 증후군('ARDS')의 래트 모델에서 포스페이트 완충된 염수('PBS') 비히클, 인간 탯줄 유래된 SDC2+ 기질 세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하였다. 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 0.3에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우에 비해 개선된 폐 기능을 가졌음을 나타낸다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가, 예를 들어 hMSC 처리의 경우에 필적하는 수준에서, 폐 기능의 증가된 개선을 보일 것이 예상된다.
도 8은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 탯줄 유래된 SDC2+ 기질 세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하였다. 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 탯줄 유래된 SDC2+ 기질 세포로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 1.0에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 기능이 감소되지 않았음을 나타낸다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 동물 폐 회복에 유해하지 않음을 가리킨다.
도 9는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀, 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의, 골수 중간엽 줄기세포 또는 인간 탯줄 중간엽 줄기세포로부터 정제된 엑소좀으로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 0.3에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 기능이 감소되지 않았음을 나타낸다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가 폐 기능의 증가된 개선을 보일 것이 예상된다.
도 10은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 골수(BM) 엑소좀, 또는 인간 탯줄(HUC) 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의, 골수 중간엽 줄기세포 또는 인간 탯줄 중간엽 줄기세포로부터 정제된 엑소좀으로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 1.0에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 기능이 감소되지 않았음을 나타낸다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가 폐 기능의 증가된 개선을 보일 것이 예상된다.
도 11은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 세균 부하의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 감소된 BAL 세균 부하를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀의 투여 효능을 입증한다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가 폐 기능의 증가된 개선을 보일 것이 예상된다.
도 12는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 총 세포수의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우에 비해 감소된 BAL 총 세포수를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀의 투여 효능을 입증한다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가 폐 기능의 훨씬 더 양호한 개선을 보일 것이 예상된다.
도 13은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 호중구수의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 적은 폐 중 침윤성 호중구를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀의 투여 효능을 입증한다. 보다 많은 용량으로 처리된 래트가 폐 기능의 훨씬 더 양호한 개선을 보일 것이 예상된다.
도 14는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 정적 폐 탄성의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 기능의 감소를 갖지 않음을 나타낸다. 이는 엑소좀 투여가 동물 폐 회복에 유해하지 않음을 가리킨다.
도 15는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포, 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 폐 습윤 건조비를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 폐 습윤 건조비의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 단지 90 내지 100 ㎍의 엑소좀만으로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 기능의 감소를 갖지 않음을 나타낸다. 이는 엑소좀 투여가 동물 폐 회복에 유해하지 않음을 가리킨다.
도 16은 48시간 동안 무혈청 배지 또는 엑소좀으로 처리된 A549 세포에 대한 스크래치 분석으로부터의 결과를 도시한다. 스크래치 분석은 배양 접시에서 증식하는 부착 세포에서 생성된 스크래치내로의 세포 이동을 측정한다. 본 분석에서, 300,000개의 A549 세포를 24 웰 플레이트 중의 단층에서 증식시켰다. 세포를 p200 피펫 팁으로 직선으로 긁어 스크래치를 생성시켰다. 긁은 시간(0h) 및 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀과 48시간 배양 후에 상을 촬영하였다. 여기에서 엑소좀은 스크래치의 크기를 감소시키고, 따라서 A549 세포의 세포 이동이 무혈청 배지 대조용에 비해 증가하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 엑소좀이 상피 세포 이동을 증가시킴을 가리킨다.
도 17은 A549 세포, 플레이트 1에 대한 스크래치 분석 결과를 도시한다. 긁은 시간(0h) 및 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀과 48시간 배양 후에 상을 촬영하였다. 여기에서 엑소좀은 스크래치의 크기를 감소시키고, 따라서 A549 세포의 세포 이동이 무혈청 배지 대조용에 비해 증가하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 엑소좀이 상피 세포 이동을 증가시킴을 가리킨다.
도 18은 무혈청 배지 또는 한외여과에 의해 정제된 엑소좀으로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시켰다. 세포를 수시간 동안 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀으로 처리하고, 이어서 수시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정하였다. 엑소좀으로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰되었다. 따라서, SDC2+ 엑소좀은 NFκB 활성화를 감소시킨다.
도 19는 무혈청 배지 또는 한외여과에 의해 정제된 엑소좀으로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시켰다. 세포를 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀으로 처리하고, 이어서 수시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정하였다. 엑소좀으로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰되었다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 NFκB 활성화를 감소시킴을 가리킨다.
도 20은 무혈청 배지 또는 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀으로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 막대 그래프를 도시한다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시켰다. 세포를 수시간 동안 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀으로 처리하고, 이어서 수시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정하였다. 엑소좀으로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰되었다. 따라서, 엑소좀은 NFκB 활성화를 감소시킨다.
도 21은 무혈청 배지 또는 한외원심분리에 의해 정제된 엑소좀으로 처리된 세포에서 IL1β 자극에 의한 NFκB 리포터 유전자 활성화의 분산 그래프를 도시한다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시켰다. 세포를 수시간 동안 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍ 엑소좀으로 처리하고, 이어서 수시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정하였다. 엑소좀으로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰되었다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 NFκB 활성화를 감소시킴을 가리킨다.
도 22는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, hMSC 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 0.3을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 정맥내 투여에 의해 200 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 MSC로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 0.3에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 200 ㎍의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 MSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 현저하게 개선된(일원 anova p<0.0001) 폐 기능을 가졌음을 나타낸다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 동물 폐 손상의 치료에 유효함을 가리키며 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다.
도 23은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, hMSC 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 동맥 FI 1.0을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 정맥내 투여에 의해 200 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 MSC로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 FI 0.3에서 동맥 산소의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 200 ㎍의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 MSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 현저하게 개선된(일원 anova p<0.0001) 폐 기능을 가졌음을 나타낸다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 동물 폐 손상의 치료에 유효함을 가리키며 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다.
도 24는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 정적 폐 탄성을 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 200 ㎍의 정맥내 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 정적 폐 탄성의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 200 ㎍의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 MSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 현저하게 개선된(일원 anova p<0.01) 폐 기능을 가졌음을 나타낸다. 이러한 결과는 엑소좀 투여가 동물 폐 손상의 치료에 유효함을 가리키며 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다.
도 25는 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 세균 부하를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 200 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 정맥내로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 세균 부하의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 엑소좀 또는 hMSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 현저하게 감소된(일원 anova p<0.01) BAL 세균 부하를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀 투여의 효능을 입증하고 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다.
도 26은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 총 세포수를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 200 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 정맥내로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 총 세포수의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 엑소좀 또는 hMSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 현저하게 감소된(일원 anova p<0.01) BAL 총 세포수를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀 투여의 효능을 입증하고 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다.
도 27은 ARDS의 래트 모델에서 PBS 비히클, 인간 중간엽 줄기세포 또는 엑소좀으로 처리된 래트에서의 기관지폐포 세척(BAL) 호중구수를 도시한다. 본 실험에서 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 200 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 10 백만/㎏의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 정맥내로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 BAL 호중구수의 측정에 의해 측정하였다. 본 실험은 엑소좀 또는 hMSC로 처리된 래트가 PBS 비히클로 처리된 경우보다 폐 중에 현저하게 감소된 침윤성 호중구를 가졌음을 나타내며, 이는 치료제로서 엑소좀 투여의 효능을 입증하고 엑소좀 치료가 hMSC 치료에 필적함을 암시한다. 도면 전체를 통해, 유의수준 차이를 별표(*)로 나타낸다.
본 명세서의 개시내용을 하기와 같이 넘버링된 실시태양의 부분 목록을 참조하여 더욱 명확히 한다. 1. 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리하는 방법으로, 상기 방법은 (a) 상기 포유동물 세포의 혼합 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포 중의 SDC2+ 세포 풍부성을 측정하여, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리함을 포함한다. 2. 실시태양 1의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 인간, 마우스, 래트 또는 말 세포로 이루어지는 목록 중에서 선택된 세포를 포함한다. 3. 실시태양 1 또는 실시태양 2의 방법에서, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 4. 실시태양 1 내지 3 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 5. 실시태양 4의 방법에서, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 6. 실시태양 4의 방법에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 7. 실시태양 4의 방법에서, 항체는 인간, 마우스, 래트, 및 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 8. 실시태양 4의 방법에서, 항체를 형광단에 접합시킨다. 9. 실시태양 4의 방법에서, 항체를 비드에 접합시킨다. 10. 실시태양 1 내지 9 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 20%는 SDC2+이다. 11. 실시태양 1 내지 10 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 40%는 SDC2+이다. 12. 실시태양 1 내지 11 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 70%는 SDC2+이다. 13. 실시태양 1 내지 12 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 14. 실시태양 1 내지 12 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 15. 실시태양 1 내지 14 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포를 배양함을 포함한다. 16. 실시태양 1 내지 15 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 17. 실시태양 1 내지 16 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제에 결합된 세포는 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 18. 실시태양 1 내지 17 중 어느 하나의 방법에서, 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 19. 실시태양 1 내지 18 중 어느 하나의 방법에서, CD39 세포외 도메인을 갖는 단백질을 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 20. 실시태양 1 내지 19 중 어느 하나의 방법에서, CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 21. 실시태양 1 내지 20 중 어느 하나의 방법에서, CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 22. SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 포함하는 면역조절 조성물의 제조 방법으로, 상기 방법은 (a) 포유동물 세포의 혼합 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포 중의 SDC2+ 세포 풍부성을 측정함을 포함한다. 23. 실시태양 22의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 인간, 마우스, 래트 또는 말 세포의 집단이다. 24. 실시태양 22 또는 실시태양 23의 방법에서, 포유동물 세포의 혼합 집단을 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된 공급원으로부터 수득한다. 25. 실시태양 22 내지 24 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 26. 실시태양 25의 방법에서, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 27. 실시태양 25의 방법에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 28. 실시태양 25의 방법에서, 항체는 인간, 마우스, 래트, 및 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 29. 실시태양 25의 방법에서, 항체를 형광단에 접합시킨다. 30. 실시태양 25의 방법에서, 항체를 비드에 접합시킨다. 31. 실시태양 22 내지 30 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 20%는 SDC2+이다. 32. 실시태양 22 내지 31 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 40%는 SDC2+이다. 33. 실시태양 22 내지 32 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 70%는 SDC2+이다. 34. 실시태양 22 내지 33 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 35. 실시태양 22 내지 33 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제에 결합된 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 36. 실시태양 22 내지 35 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포를 배양함을 포함한다. 37. 실시태양 22 내지 36 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 38. 실시태양 22 내지 37 중 어느 하나의 방법에서, 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 39. 실시태양 22 내지 38 중 어느 하나의 방법에서, 조성물은 세포외 기질을 추가로 포함한다. 40. 실시태양 39의 방법에서, 세포외 기질은 콜라겐을 포함한다. 41. 실시태양 39의 방법에서, 세포외 기질은 히아루론산을 포함한다. 42. 실시태양 22 내지 41 중 어느 하나의 방법에서, 조성물은 DMSO를 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 43. 실시태양 22 내지 41 중 어느 하나의 방법에서, 조성물은 글리세롤을 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 44. 실시태양 22 내지 43 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 45. 실시태양 22 내지 44 중 어느 하나의 방법에서, 아피라제를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 46. 실시태양 22 내지 45 중 어느 하나의 방법에서, CD39를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 47. 실시태양 22 내지 46 중 어느 하나의 방법에서, CD39L3를 과발현하도록 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 48. 엑소좀을 포함하는 면역조절 조성물의 단리 방법으로, 상기 방법은 (a) 포유동물 세포의 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포로부터 엑소좀을 포함하는 상등액을 회수함을 포함한다. 49. 실시태양 48의 방법에서, 상등액으로부터 엑소좀 분획을 획득함을 포함한다. 50. 실시태양 49의 방법에서, 엑소좀 분획의 획득은 상등액의 원심분리를 포함한다. 51. 실시태양 50의 방법에서, 원심분리는 세포를 약 100,000 g에서 원심분리시킴을 포함한다. 52. 실시태양 50 또는 실시태양 51의 방법에서, 원심분리는 세포를 적어도 1시간 동안 원심분리시킴을 포함한다. 53. 실시태양 50 내지 52 중 어느 하나의 방법에서, 원심분리는 한외여과를 포함한다. 54. 실시태양 50 내지 53 중 어느 하나의 방법에서, 원심분리는 크기-배제 액체 크로마토그래피를 포함한다. 55. 실시태양 49 내지 54 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀 분획의 획득은 한외여과를 포함한다. 56. 실시태양 49 내지 55 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀 분획의 획득은 크기-배제 액체 크로마토그래피를 포함한다. 57. 실시태양 49 내지 56 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀 분획의 획득은 상등액을 항체와 접촉시킴을 포함한다. 58. 실시태양 57의 방법에서, 항체는 항-CD39 항체 및 항-SDC2 항체 중 적어도 하나 중에서 선택된다. 59. 실시태양 48 내지 58 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀은 주변분비 신호전달 엑소좀이다. 60. 실시태양 48 내지 59 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포는 SDC2+이다. 61. 실시태양 48 내지 60 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포는 중간엽 줄기세포를 포함한다. 62. 실시태양 48 내지 61 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 63. 실시태양 48 내지 62 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 실온에서 엑소좀 분획을 보관함을 포함한다. 64. 실시태양 48 내지 63 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 엑소좀 분획을 극저온 보존 없이 보관함을 포함한다. 65. 실시태양 48 내지 64 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 면역-조절 조성물에 면역억제 약물을 첨가함을 포함한다. 66. 실시태양 48 내지 65 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포를 동요시켜 엑소좀 생성을 이끌어낸다. 67. 실시태양 48 내지 66 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포를 중공-섬유 생물반응기에서 배양한다. 68. 실시태양 48 내지 67 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포는 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 69. 실시태양 48 내지 68 중 어느 하나의 방법에서, 아피라제를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 70. 실시태양 48 내지 69 중 어느 하나의 방법에서, CD39를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 71. 실시태양 48 내지 70 중 어느 하나의 방법에서, CD39L3를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 72. SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 염증 반응 부위로 전달함을 포함하는, 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법으로, 여기에서 상기 SDC2+ 세포를 CD39 발현을 근거로 세포를 단리함으로써 세포의 혼합 집단으로부터 단리한다. 73. 실시태양 72의 방법에서, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 수집함을 포함한다. 74. 실시태양 73의 방법에서, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 배양함을 포함한다. 75. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 주사함을 포함한다. 76. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 국소적으로 적용함을 포함한다. 77. 실시태양 76의 방법에서, 조성물은 하이드로겔을 포함한다. 78. 실시태양 76의 방법에서, 조성물은 콜라겐 겔을 포함한다. 79. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 안내 투여를 포함한다. 80. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 안과 적용을 포함한다. 81. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 정맥내 전달을 포함한다. 82. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 림프절-내 주사를 포함한다. 83. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 피하 전달을 포함한다. 84. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 복강내 전달을 포함한다. 85. 실시태양 72 내지 74 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 척수강내 전달을 포함한다. 86. 실시태양 72 내지 85 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 세포에서, 상기 SDC2+ 세포는 인간, 마우스, 래트 및 말 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된다. 87. 실시태양 72 내지 86 중 어느 하나의 방법에서, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 88. 실시태양 72 내지 87 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 89. 실시태양 88의 방법에서, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 90. 실시태양 88의 방법에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 91. 실시태양 88의 방법에서, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 92. 실시태양 88의 방법에서, 항체를 형광단에 접합시킨다. 93. 실시태양 88의 방법에서, 항체를 비드에 접합시킨다. 94. 실시태양 72 내지 93 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 세포의 적어도 20%는 SDC2+이다. 95. 실시태양 72 내지 94 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 세포의 적어도 40%는 SDC2+이다. 96. 실시태양 72 내지 95 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 세포의 적어도 70%는 SDC2+이다. 97. 실시태양 72 내지 96 중 어느 하나의 방법에서, 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 98. 실시태양 72 내지 96 중 어느 하나의 방법에서, 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 99. 실시태양 72 내지 98 중 어느 하나의 방법에서, SDC2+ 세포의 적어도 90%는 CD45-이다. 100. 실시태양 72 내지 99 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^3 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 101. 실시태양 72 내지 100 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^4 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 102. 실시태양 72 내지 101 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^5 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 103. 실시태양 72 내지 102 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^6 SDC2+ 세포의 전달을 포함한다. 104. 실시태양 72 내지 103 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포는 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 포함한다. 105. 실시태양 72 내지 104 중 어느 하나의 방법에서, 아피라제를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 106. 실시태양 72 내지 105 중 어느 하나의 방법에서, CD39를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 107. 실시태양 72 내지 106 중 어느 하나의 방법에서, CD39L3를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 108. 실시태양 72 내지 107 중 어느 하나의 방법에서, 염증 반응은 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 패혈증, 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, ALS, 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, ARDS, 패혈증, 염증성 간 질환, 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염, 루푸스 신염, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 항합성효소항체 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 폐 부종, 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 자가면역 다선 증후군 3형, 자가면역 췌장염, 자가면역 갑상선염, 오즈(Ord's) 갑상선염, 그레이브스병, 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 쇼그렌 증후군, 자가면역 장병증, 셀리악병, 미세장염, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 혈소판 감소증, 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 미분화된 결합조직병, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중증 근무력증, 신경근육긴장증, 방종양성 소뇌 변성, 다발성근염, 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 횡단성 척수염, 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 톨로사-헌트 증후군, 자가면역 내이병, 메니에르병, 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염 중 적어도 하나를 포함한다. 109. 엑소좀을 포함하는 조성물을 염증 반응 부위로 전달함을 포함하는, 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법으로, 여기에서 상기 엑소좀은 SDC2+이고 상기 엑소좀은 CD39 발현에 근거하여 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 단리된 SDC2+ 세포로부터 유래한다. 110. 실시태양 109의 방법에서, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 수집함을 포함한다. 111. 실시태양 109 또는 실시태양 110의 방법에서, 세포의 단리는 CD39 결합제에 결합된 세포를 배양함을 포함한다. 112. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물을 주사함을 포함한다. 113. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물을 국소적으로 적용함을 포함한다. 114. 실시태양 113의 방법에서, 조성물은 하이드로겔을 포함한다. 115. 실시태양 113의 방법에서, 조성물은 콜라겐 겔을 포함한다. 116. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 안내 투여를 포함한다. 117. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 안과 적용을 포함한다. 118. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 정맥내 전달을 포함한다. 119. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 림프절-내 주사를 포함한다. 120. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 피하 전달을 포함한다. 121. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 복강내 전달을 포함한다. 122. 실시태양 109 내지 111 중 어느 하나의 방법에서, 전달은 엑소좀을 포함하는 조성물의 척수강내 전달을 포함한다. 123. 실시태양 109 내지 122 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀은 인간, 마우스, 래트 및 말 세포 중 적어도 하나인 SDC2+ 세포로부터 단리된다. 124. 실시태양 109 내지 123 중 어느 하나의 방법에서, 포유동물 세포의 혼합 집단은 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중에서 선택된 공급원으로부터 수득된다. 125. 실시태양 109 내지 124 중 어느 하나의 방법에서, CD39 결합제는 항체를 포함한다. 126. 실시태양 125의 방법에서, 항체는 CD39 항원에 대해 발생한다. 127. 실시태양 125의 방법에서, 항체는 적어도 하나의 포유동물 CD39 단백질에 특이적으로 결합하는 가변 도메인을 포함한다. 128. 실시태양 125의 방법에서, 항체는 인간, 마우스, 래트, 또는 말 CD39 단백질 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 129. 실시태양 125의 방법에서, 항체를 형광단에 접합시킨다. 130. 실시태양 125의 방법에서, 항체를 비드에 접합시킨다. 131. 실시태양 109 내지 130 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀의 적어도 20%는 SDC2+이다. 132. 실시태양 109 내지 131 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀의 적어도 40%는 SDC2+이다. 133. 실시태양 109 내지 132 중 어느 하나의 방법에서, 엑소좀의 적어도 70%는 SDC2+이다. 134. 실시태양 109 내지 133 중 어느 하나의 방법에서, 세포의 단리는 형광 활성화된 세포 분류를 포함한다. 135. 실시태양 109 내지 133 중 어느 하나의 방법에서, 세포의 단리는 자기-활성화된 세포 분류를 포함한다. 136. 실시태양 109 내지 135 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 CD39 결합제에 결합된 세포의 배양을 추가로 포함한다. 137. 실시태양 109 내지 136 중 어느 하나의 방법에서, 세포는 CD45-이다. 138. 실시태양 109 내지 137 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^6 엑소좀의 전달을 포함한다. 139. 실시태양 109 내지 138 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^7 엑소좀의 전달을 포함한다. 140. 실시태양 109 내지 139 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 적어도 10^8 엑소좀의 전달을 포함한다. 141. 실시태양 109 내지 140 중 어느 하나의 방법에서, 적어도 10^9 엑소좀의 전달을 포함한다. 142. 실시태양 109 내지 141 중 어느 하나의 방법에서, 단리된 세포는 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 포함한다. 143. 실시태양 109 내지 142 중 어느 하나의 방법에서, 아피라제를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 144. 실시태양 109 내지 143 중 어느 하나의 방법에서, CD39를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 145. 실시태양 109 내지 144 중 어느 하나의 방법에서, CD39L3를 과발현하도록 단리된 세포를 유전자 변형시킴을 포함한다. 146. 실시태양 109 내지 145 중 어느 하나의 방법에서, 염증 반응은 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 패혈증, 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, ALS, 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, ARDS, 패혈증, 염증성 간 질환, 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염, 루푸스 신염, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 항합성효소항체 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 폐 부종, 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 자가면역 다선 증후군 3형, 자가면역 췌장염, 자가면역 갑상선염, 오즈(Ord's) 갑상선염, 그레이브스병, 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 쇼그렌 증후군, 자가면역 장병증, 셀리악병, 미세장염, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 혈소판 감소증, 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 미분화된 결합조직병, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중증 근무력증, 신경근육긴장증, 방종양성 소뇌 변성, 다발성근염, 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 횡단성 척수염, 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 톨로사-헌트 증후군, 자가면역 내이병, 메니에르병, 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염 중 적어도 하나를 포함한다. 147. 적어도 20%의 SDC2+인 세포 집단을 포함하는 조성물로, 여기에서 상기 세포 집단은 CD39 결합제에 결합된다. 148. 실시태양 147의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 30% SDC2+이다. 149. 실시태양 147 또는 실시태양 148의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 40% SDC2+이다. 150. 실시태양 147 내지 149 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 50% SDC2+이다. 151. 실시태양 147 내지 150 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 60% SDC2+이다. 152. 실시태양 147 내지 151 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 70% SDC2+이다. 153. 실시태양 147 내지 152 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 80% SDC2+이다. 154. 실시태양 147 내지 153 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 90% SDC2+이다. 155. 실시태양 147 내지 154 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 95% SDC2+이다. 156. 실시태양 147 내지 155 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 99% SDC2+이다. 157. 실시태양 147 내지 156 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 20% CD39+이다. 158. 실시태양 147 내지 157 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 30% CD39+이다. 159. 실시태양 147 내지 158 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 40% CD39+이다. 160. 실시태양 147 내지 159 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 50% CD39+이다. 161. 실시태양 147 내지 160 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 60% CD39+이다. 162. 실시태양 147 내지 161 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 70% CD39+이다. 163. 실시태양 147 내지 162 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 80% CD39+이다. 164. 실시태양 147 내지 163 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 90% CD39+이다. 165. 실시태양 147 내지 164 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 95% CD39+이다. 166. 실시태양 147 내지 165 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 적어도 99% CD39+이다. 167. 실시태양 147 내지 166 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단의 적어도 90%는 CD45-이다. 168. 실시태양 147 내지 167 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^6 엑소좀을 추가로 포함한다. 169. 실시태양 147 내지 168 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^7 엑소좀을 추가로 포함한다. 170. 실시태양 147 내지 169 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^8 엑소좀을 추가로 포함한다. 171. 실시태양 147 내지 170 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 1 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 172. 실시태양 147 내지 171 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 173. 실시태양 147 내지 172 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 20 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 174. 실시태양 147 내지 173 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 50 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 175. 실시태양 147 내지 174 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 100 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 176. 실시태양 147 내지 175 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 150 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 177. 실시태양 147 내지 176 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 200 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 178. 실시태양 147 내지 177 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 250 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 179. 실시태양 147 내지 178 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 500 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 180. 실시태양 147 내지 179 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 750 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 181. 실시태양 147 내지 180 중 어느 하나의 조성물에서, CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 1000 ㎍의 엑소좀을 추가로 포함한다. 182. 실시태양 147 내지 181 중 어느 하나의 조성물에서, 완충제를 추가로 포함한다. 183. 실시태양 147 내지 182 중 어느 하나의 조성물에서, DMSO를 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 184. 실시태양 147 내지 182 중 어느 하나의 조성물에서, 글리세롤을 포함하는 동결보존제를 추가로 포함한다. 185. 실시태양 147 내지 184 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^3 세포를 포함한다. 186. 실시태양 147 내지 185 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^4 세포를 포함한다. 187. 실시태양 147 내지 186 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^5 세포를 포함한다. 188. 실시태양 147 내지 187 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^6 세포를 포함한다. 189. 실시태양 147 내지 188 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^7 세포를 포함한다. 190. 실시태양 147 내지 189 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 포함한다. 191. 실시태양 147 내지 190 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 아피라제를 과발현하도록 유전자 변형된다. 192. 실시태양 147 내지 191 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 CD39를 과발현하도록 유전자 변형된다. 193. 실시태양 147 내지 192 중 어느 하나의 조성물에서, 세포 집단은 CD39L3를 과발현하도록 유전자 변형된다. 194. 엑소좀을 포함하는 조성물로, 여기에서 상기 엑소좀은 적어도 20% SDC2+이고 상기 엑소좀은 CD39 결합제에 결합된다. 195. 실시태양 194의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 30% SDC2+이다. 196. 실시태양 194 또는 실시태양 195의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 40% SDC2+이다. 197. 실시태양 194 내지 196 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 50% SDC2+이다. 198. 실시태양 194 내지 197 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 60% SDC2+이다. 199. 실시태양 194 내지 198 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 70% SDC2+이다. 200. 실시태양 194 내지 199 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 80% SDC2+이다. 201. 실시태양 194 내지 200 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 90% SDC2+이다. 202. 실시태양 194 내지 201 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 95% SDC2+이다. 203. 실시태양 194 내지 202 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 99% SDC2+이다. 204. 실시태양 194 내지 203 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 20% CD39+이다. 205. 실시태양 194 내지 204 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 30% CD39+이다. 206. 실시태양 194 내지 205 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 40% CD39+이다. 207. 실시태양 194 내지 206 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 50% CD39+이다. 208. 실시태양 194 내지 207 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 60% CD39+이다. 209. 실시태양 194 내지 208 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 70% CD39+이다. 210. 실시태양 194 내지 209 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 80% CD39+이다. 211. 실시태양 194 내지 210 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 90% CD39+이다. 212. 실시태양 194 내지 211 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 95% CD39+이다. 213. 실시태양 194 내지 212 중 어느 하나의 조성물에서, 엑소좀은 적어도 99% CD39+이다. 214. 실시태양 194 내지 213 중 어느 하나의 조성물에서, 집단은 CD45-이다. 215. 실시태양 194 내지 214 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^6 엑소좀을 포함한다. 216. 실시태양 194 내지 215 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^7 엑소좀을 포함한다. 217. 실시태양 194 내지 216 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10^8 엑소좀을 포함한다. 218. 실시태양 194 내지 217 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 1 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 219. 실시태양 194 내지 218 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 10 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 220. 실시태양 194 내지 219 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 20 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 221. 실시태양 194 내지 220 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 50 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 222. 실시태양 194 내지 221 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 100 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 223. 실시태양 194 내지 222 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 150 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 224. 실시태양 194 내지 223 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 200 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 225. 실시태양 194 내지 224 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 250 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 226. 실시태양 194 내지 225 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 500 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 227. 실시태양 194 내지 226 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 750 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 228. 실시태양 194 내지 227 중 어느 하나의 조성물에서, 적어도 1000 ㎍의 엑소좀을 포함한다. 229. 실시태양 194 내지 228 중 어느 하나의 조성물에서, 완충제를 포함한다.
정의
일부의 경우에 본 명세서에서 호환 가능하게 사용되는 "엑소좀" 또는 "미세소낭"은 세포-유래된 소낭을 포함하며, 상기 소낭은 세포, 예를 들어 배양된 세포 또는 배양된 기질 세포에 의해 세포외 환경으로 방출된다.
"SDC2"(또한 신데칸-2, CD362, S2 또는 피브로글리칸으로서 공지됨)는 일반적으로 본 명세서에서 서열 목록에 의해 명시된 SDC2 폴리펩티드, 또는 SDC2 유전자좌에 의해 암호화된 폴리펩티드를 지칭한다. 신데칸-2, 또는 'SDC2 단백질' 또는 간단히 SDC2는 막관통 I형 헤파린 설페이트 프로테오글리칸이다. 'SDC2 단백질' 또는 SDC2를 차치하고, 신데칸-2에 대한 추가적인 유의어는 HSPG, CD362, HSPG1, 및 SYND2를 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이 SDC2는 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 'SDC2 유전자', "SDC2 전사물', 'SDC2 항체'를 인용함으로써 단백질 또는 그의 인식 가능한 단편을 지칭한다. 추가로, SDC2는 본 명세서에 동반되는 서열 목록에서 그의 폴리펩티드 서열에 의해 식별된다. SDC2 단편은 SDC2 폴리펩티드 서열을 독특하게 또는 인식 가능하게 지도화하는 임의의 세트의 SDC2의 연속적인 잔기를 지칭한다. 일부의 경우에 SDC2 단편은 SDC2 단백질의 일부 또는 모든 활성을 유지하거나, 또는 완전길이 또는 고유 SDC2의 억제제로서 작용한다. SDC2는 또한 때때로 본 명세서에서 약식으로 SDC2 단백질을 암호화하는 유전자좌 또는 유전자를 지칭하기도 한다. 당해 분야의 숙련가가 SDC2 참조를 구별할 수 없는 경우에, 상기 용어는 본 명세서에서 SDC2에 대해 발생하거나 상기에 결합하는 유전자, 전사물 또는 항체라기보다는 단백질 또는 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 것으로 추정된다. 포유동물 중에 신데칸 단백질의 한 패밀리가 존재한다. SDC2는 구체적으로 포유동물 신데칸-2 또는 인간 SDC2와 관련하여 교대로 사용된다. 당해 분야의 숙련가가 SDC2 참조를 구별할 수 없는 경우에, 상기 용어는 본 명세서에서 인간 단백질 또는 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 것으로 추정된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "세포외 뉴클레오티다제"(또한 "아피라제", "E-형 뉴클레오티다제" 및 "NTPase"로서 공지됨)는 세포외 뉴클레오티드 이화작용의 매개체이다. 세포외 뉴클레오티데아제의 예는 비제한적으로 CD39, CD39L1, CD39L2, CD39L3, CD39L4 및 CD73을 포함한다. 일부의 경우에, 본 명세서에서 세포외 뉴클레오티데아제는 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리를 위한 세포 표면 단백질이다. 일부의 경우에, 본 명세서에서 세포외 뉴클레오티데아제는 세포외 ATP의 아데노신으로의 이화작용을 매개한다.
"CD39"(또한 ENTPD1, ATPDase, NTPDase-1, SPG64, 및 엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라제 1으로서 공지됨)는 CD39 유전자좌에 의해 암호화된 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, CD39는 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 'CD39 유전자', 'CD39 전사물', 'CD39 항체'를 인용함으로써 단백질 또는 그의 인식 가능한 단편을 지칭한다. CD39는 트리포스포- 및 디포스포뉴클레오시드의 γ 및 β 포스페이트 잔기의, 모노포스포뉴클레오시드 유도체로의 가수분해를 촉매화하는 효소를 갖는 세포 표면 단백질이다. 일부의 경우에, CD39는 세포외 ATP를 세포외 아데노신으로 가수분해시킨다.
"CD39L3"(또한 ENTPD3, HB6, NTPDase-3, 또는 엑토뉴클레오시드 트리포스파제 디포스포하이드롤라제 3로서 공지됨)은 CD39L3 유전자좌에 의해 암호화된 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, CD39L3는 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 'CD39L3 유전자', 'CD39L3 전사물', 'CD39L3 항체'를 인용함으로써 단백질 또는 그의 인식 가능한 단편을 지칭한다. CD39L3는 트리포스포- 및 디포스포뉴클레오시드의 γ 및 β 포스페이트 잔기의, 모노포스포뉴클레오시드 유도체로의 가수분해를 촉매화하는 효소를 갖는 세포 표면 단백질이다. 일부의 경우에, CD39L3는 세포외 ATP를 세포외 아데노신으로 가수분해시킨다.
"수용자", "개인", "피실험자", "숙주" 및 "환자"란 용어는 본 명세서에서 호환 가능하게 사용되며, 일부의 경우에 진단, 치료 또는 치료법을 요하는 임의의 포유동물 피실험자, 특히 인간을 지칭한다. 치료를 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 실험, 동물원, 스포츠 또는 애완용 동물, 예를 들어 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 마우스, 래트, 토끼, 기니피그, 원숭이 등을 포함한 포유동물로서 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 일부의 실시태양에서, 포유동물은 인간이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치료", "치료하는" 등의 용어는 일부의 경우에, 효과를 획득하기 위한 목적으로 작용제를 투여하거나 시술을 수행함을 지칭한다. 상기 효과는 질병 또는 그의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방하는 면에서 예방학적이고/이거나 질병 및/또는 상기 질병의 증상의 부분적인 또는 완전한 치료를 수행하는 면에서 치료학적일 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 종양의 치료를 포함할 수 있으며, (a) 질병의 소인이 있을 수 있지만 아직 질병을 갖는 것으로(예를 들어, 원발성 질병과 관련되거나 상기 질병에 의해 야기될 수 있는 질병을 포함하는 것으로) 진단되지는 않은 피실험자에서 발생하는 질병 또는 질병의 증상을 예방하고; (b) 상기 질병을 억제하고, 즉 그의 발달을 막고; (c) 상기 질병을 경감시킴, 즉 상기 질병의 퇴행을 야기시킴을 포함한다. 치료는 완화; 차도; 증상의 감소 또는 질병 상태를 환자에게 보다 허용 가능하게 하거나; 퇴행 또는 감퇴 속도를 늦추거나; 또는 최종 퇴행점을 덜 약화시키는 것과 같은 임의의 객관적인 또는 주관적인 매개변수를 포함하여, 암의 치료 또는 개선 또는 예방에 있어서 성공의 표시를 지칭할 수 있다. 증상의 치료 또는 개선은 의사에 의한 검사 결과를 포함하여; 객관적인 또는 주관적인 매개변수에 근거할 수 있다. 상응하게, "치료하는"이란 용어는 암 또는 다른 질병과 관련된 증상 또는 상태의 발달을 예방하거나 지연시키거나, 완화시키거나, 또는 저지하거나 또는 억제하기 위한 본 발명의 화합물 또는 작용제의 투여를 포함한다. "치료 효과"란 용어는 피실험자에서 질병, 질병의 증상, 또는 질병의 부작용의 감소, 제거 또는 예방을 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한", "생리학적으로 허용 가능한"이란 용어 및 그의 문법적 변형은 조성물, 담체, 희석제 및 시약을 지칭하는 경우, 호환 가능하게 사용되며, 일부의 경우에 물질이, 바람직하지 못한 생리학적 효과를 조성물의 투여를 금지할 정도로 생성시키지 않으면서 인간에게 또는 인간상에 투여될 수 있음을 나타낸다.
"치료 유효량"은 일부의 경우에, 질병의 치료를 위해 피실험자에게 투여될 때 상기 질병의 치료를 수행하기에 충분한 양을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 숫자에서 "약"이란 용어는 상기 숫자의 10% 미만 내지 상기 숫자의 10% 초과에 걸쳐 있고 상기와 같은 숫자 범위내의 값 자체를 포함하는 범위를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 청구항의 요소 또는 요소들을 "포함하는"이란 용어는 상기 요소들을 지칭하지만 추가적인 요소 또는 요소들의 포함을 제외하지 않는다.
실시예
하기의 실시예들을 본 발명의 다양한 실시태양을 예시하기 위해 제공하며 이들은 본 발명을 어떠한 방식으로도 제한함을 의미하지 않는다. 본 실시예는 현재 본 명세서에 기재된 방법과 함께 바람직한 실시태양을 나타내며, 예시적이고, 본 발명의 범위를 제한하고자 하지 않는다. 실시예 중의 변화 및 청구항의 범위에 의해 정의되는 바와 같은 본 발명의 진의 내에 포함되는 다른 용도는 당해 분야의 숙련가들에게 떠 오를 것이다.
실시예 1: 탯줄로부터 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리
세포를 인간 탯줄로부터 단리하고 기질 줄기세포를 FACS를 사용하여 정제하여, 밀테니 MACSQuant 타이토 미세팁 세포 분류기를 사용하여 살아있는 단세포, CD39 및 CD362(SDC2)를 게이팅하였다(도 1A, 도 1B). 집단을 분석하였으며 CD362+인 집단의 백분율이 CD39+/CD362+인 집단의 백분율, 0.10%와 같음을 발견하였다(도 1C). 콜로니 형성 활성을 CD39+/CD362+ 세포상에서 측정하였으며 상기 세포가 웰당 40k 세포로 도말시 1/2352의 비율로 콜로니를 형성하고 웰당 10k 세포로 도말시 1/1666의 비율로 콜로니를 형성함을 발견하였다(도 1D). 이를 웰당 200k 세포로 도말시 1/9090의 비율로 콜로니를 형성하고 웰당 100k 세포로 도말시 1/9375의 비율로 콜로니를 형성한 분류되지 않은 세포와 비교한다(도 1E). 따라서, 마커로서 CD39를 사용하여 단리된 기질 줄기세포는 마커로서 CD362를 사용하여 단리된 기질 줄기세포만큼 또는 그 보다 양호하게 성능을 수행한다.
실시예 2: 골수로부터 SDC2+ 기질 줄기세포의 단리
세포를 인간 골수로부터 단리하고 기질 줄기세포를, CD39-/CD362+, CD39+/CD362+, 및 CD39+/CD362- 분획을 단리하는 BD FACSAria 세포 분류기와 함께 FACS를 사용하여 정제하였다(도 2A). 집단을 분석하였으며 CD39+/CD362+ 세포는 집단의 약 0.4%를 차지한 반면 CD39hi/CD362+ 세포는 집단의 0.02%를 차지하였다(도 2B). 따라서, 대부분의 CD362+ 세포는 또한 CD39+인 것으로 밝혀졌다. 분류된 세포를 콜로니 형성에 대해 추가로 분석하였으며(도 2C), 이는 분류되지 않은 골수 세포(야생형)가 1/18750 내지 1/50000의 비율로 콜로니를 형성하고; CD39-/CD362+ 세포는 0 내지 1/11의 비율로 콜로니를 형성하며; CD39+/CD362+ 세포는 1/46 내지 1/4의 비율로 콜로니를 형성하고; CD39+/CD362- 및 이중 음성 세포는 0의 비율로 콜로니를 형성함을 보인다.
대안의 방법에서, 세포를 인간 골수로부터 단리하고 기질 줄기세포를, CD39-/CD362+, CD39+/CD362+, 및 CD39+/CD362- 분획을 단리하는 밀테니 MACSQuant 타이토 미세칩 세포 분류기와 함께 FACS를 사용하여 정제하였다(도 3A). 분류된 세포를 BD FACSAria와 밀테니 MACSQuant 타이토의 결과를 비교하는 콜로니 형성에 대해 추가로 분석하였으며(도 3B), 이는 분류되지 않은 골수 세포(야생형)가 1/50000 내지 1/18750(BD) 대 1/14285(타이토)의 비율로 콜로니를 형성하고; CD39-/CD362+ 세포는 0 내지 1/11(BD)의 비율로 콜로니를 형성하며; CD39+/CD362+ 세포는 1/46 내지 1/4(BD) 대 1/16.6(타이토)의 비율로 콜로니를 형성하고; CD39+/CD362- 세포는 0(BD)의 비율로 콜로니를 형성하고; 이중 음성 세포는 0(BD) 대 1/100000 내지 1/16.6(타이토)의 비율로 콜로니를 형성함을 보인다.
실시예 3: 당뇨성 궤양의 치료
치료학적으로 활성인 CD39+/SDC2+ 세포 조성물을 사용하여 당뇨성 궤양의 치료가 필요한 개인을 치료한다. 의사는 당뇨성 궤양에 국소적인 사용을 위해 콜라겐 연고로 제형화된 치료학적으로 활성인 CD39+/SDC2+ 세포 조성물을 적용한다. 당뇨성 궤양에 상기 조성물 투여 1주일 후에, 궤양의 중증도가 감소하였다. 임의로, 환자는 조성물의 또 다른 투여를 위해 복귀한다. 당뇨성 궤양에 조성물 투여 1개월 후에, 궤양이 크게 치유되었다.
실시예 4: 염증성 간 질환의 치료
치료학적으로 활성인 CD39+/SDC2+ 세포 조성물을 사용하여 자가면역 간염의 치료가 필요한 개인을 치료한다. 의사는 정맥내 용도로 제형화된 치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 세포 조성물을 투여한다. 피실험자에게 조성물 투여 후에, 개인의 간 기능이 개선되고 상기 개인은 간 이식을 필요로 하지 않는다.
실시예 5: 스크래치 상처 분석
스크래치 상처 분석을 A549 세포상에서 수행하여 세포 이동에 대한 CD39+/SDC2+ 세포의 영향을 관찰한다. 본 분석에서, 300,000개의 A549 세포를 24 웰 플레이트 중의 단층에서 증식시킨다. 세포를 p200 피펫 팁으로 직선으로 긁어 스크래치를 생성시켰다. 긁은 시간(0h) 및 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 10^6 CD39+/SDC2+ 세포와 48시간 배양 후에 상을 촬영한다. 세포와의 배양은 무혈청 배지에 비해 감소된 스크래치 크기를 생성시킨다.
본 실시예는 무혈청 배지 단독으로 처리된 세포에 비해 CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 세포에서 증가된 세포 이동을 보인다.
실시예 6: NFκB 리포터 분석
NFκB 분석을 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중 CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 A549 세포상에서 수행한다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시킨다. 세포를 24시간 동안 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 10^5 CD39+/SDC2+ 세포로 처리하고 이어서 24시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정한다. CD39+/SDC2+로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰된다.
본 실시예는 무혈청 배지 단독으로 처리된 세포에 비해 CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 세포에서 염증 반응의 감소를 보인다.
실시예 7: ARDS 폐 손상을 치료하기 위한 엑소좀 전달
CD39+/SDC2+ 세포를 ARDS의 래트 모델에서 시험한다. 간단히, 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 정맥내 용량의 200 ㎍ 또는 10 밀/㎏의 CD39+/SDC2+ 세포로 처리한다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 동맥 산소, BAL 세균 부하, BAL 세포 침윤, 정적 탄성, 및 폐 습윤 건조비의 측정에 의해 측정한다. 동맥 FI 0.3의 개선이 비히클에 비해 CD39+/SDC2+ 세포에 의한 처리에 의해 관찰된다(일원 anova p<0.0001). 개선이 또한 비히클에 비해 CD39+/SDC2+ 세포에 의한 처리에 의해 관찰된 동맥 FI 1.0에서 관찰된다(일원 anova p<0.0001). 이는 CD39+/SDC2+ 세포가 ARDS 폐 손상 모델에서 폐 손상을 치료할 수 있음을 입증한다.
정적 폐 탄성을 또한 PBS 비히클 대조용에 비해 CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 래트에서 측정한다. 상기 측정은 CD39+/SDC2+ 세포가 대조용에 비해 ARDS 폐 손상의 치료에 유효함을 보인다(일원 anova p<0.01).
세균 부하를 기관지폐포 세척(BAL)에서 측정한다. 이 측정에서, CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 래트에서 BAL 세균 부하의 현저한 감소가 관찰된다(일원 anova p<0.01). 이 분석에서, 비히클 대조용에 비해 CD39+/SDC2+ 세포로 처리된 래트에서 BAL 총 세포수 및 BAL 호중구수의 현저한 차이가 관찰된다(일원 anova p<0.01).
본 실시예는 증가된 용량 및 정맥내 방식으로 투여된 CD39+/SDC2+ 세포 투여가 ARDS 폐 손상을 치료함을 보인다.
실시예 8: 당뇨병-관련된 신부전의 치료
치료학적으로 활성인 CD39+/SDC2+ 세포 조성물을 사용하여 당뇨병과 관련된 신부전을 앓고 있는 개인을 치료한다. 피실험자에게 조성물 투여 후, 환자가 경험한 증상이 감소한다. 10명의 환자에게 조성물의 정맥내 주사를 제공할 때, 9명이 신장 기능의 현저한 증가를 경험한다. 10명의 환자에게 대체 치료를 제공할 때, 신장 기능은 개선되지 않는다. 일부 개인에서 혈당 수준에 대한 영향은 관찰되지 않는다.
실시예 9: 시험관내 엑소좀
시험관내 SDC2+ 엑소좀을 포함하는 치료학적으로 활성인 조성물을 제조한다. SDC2+ 엑소좀 조성물을 상기 엑소좀 조성물내에 인플릭시맵을 포함하도록 제조한다. 조성물을 환자에게 투여할 때, 인플릭시맵은 체액 면역계에 노출되지 않으며 환자는 인플릭시맵에 대한 체액 면역 반응이 발생하지 않는다. 조성물의 샘플을 시험할 때, 엑소좀의 적어도 30%가 SDC2를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀 조성물을 DMSO와 같은 동결방지제의 사용 없이 포스페이트 완충제에서만 보관하기 위해 동결시킨다. 조성물 해동시, 염증 반응의 억제에 의해 측정된 바와 같이 치료 효능의 상실이 없다.
실시예 10: 시험관내 엑소좀 및 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포
시험관내 SDC2+ 엑소좀을 포함하는 치료학적으로 활성인 조성물을 제조한다. SDC2+ 엑소좀 조성물을 상기 엑소좀 조성물내에 인플릭시맵을 포함하도록 제조한다. 조성물을 환자에게 투여할 때, 인플릭시맵은 체액 면역계에 노출되지 않으며 환자는 인플릭시맵에 대한 체액 면역 반응이 발생하지 않는다. 조성물의 샘플을 시험할 때, 엑소좀의 적어도 30%가 SDC2를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀 조성물을 CD39의 발현에 근거하여 정제된, SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포와 병용한다. 엑소좀 조성물의 첨가는 염증 반응의 감소에서 SDC2+ 중간엽 기질 줄기세포의 치료 활성을 증대시킨다.
실시예 11: 시험관내 엑소좀 및 조절 T 세포
CD39의 발현에 근거하여 단리된 세포로부터의 시험관내 SDC2+ 엑소좀을 포함하는 치료학적으로 활성인 조성물을 제조한다. SDC2+ 엑소좀 조성물을 상기 엑소좀 조성물내에 인플릭시맵을 포함하도록 제조한다. 조성물을 환자에게 투여할 때, 인플릭시맵은 체액 면역계에 노출되지 않으며 환자는 인플릭시맵에 대한 체액 면역 반응이 발생하지 않는다. 조성물의 샘플을 시험할 때, 엑소좀의 적어도 30%가 SDC2를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀 조성물을 CD25+CD4+Foxp3+ 조절 T 세포와 병용한다. 엑소좀 조성물의 첨가는 염증 반응의 감소에서 CD25+CD4+Foxp3+ 조절 T 세포의 치료 활성을 증대시킨다.
실시예 12: 당뇨성 궤양의 치료
치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 사용하여 당뇨성 궤양의 치료가 필요한 개인을 치료한다. 의사는 국소용 콜라겐 연고로 제형화된 치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 처방하고 환자에게 조성물을 주당 1 내지 5회 당뇨성 궤양에 투여할 것을 지시한다. 1주일 동안 당뇨성 궤양에 조성물 투여 후, 궤양의 중증도가 감소하였다. 1개월 동안 당뇨성 궤양에 조성물 투여 후, 궤양이 크게 치유되었다.
실시예 13: 류머티스성 관절염의 치료
인플릭시맵을 추가로 포함하는 치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 사용하여 류머티스성 관절염의 치료가 필요한 개인을 치료한다. 의사는 피하 투여용으로 제형화된 치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 처방하고 환자에게 조성물을 피하 주사에 의해 매주 투여할 것을 지시한다. 피실험자에게 조성물 투여 후, 환자가 경험한 관절 통증이 적어도 50%까지 감소하고 환자의 관절 운동성이 적어도 60%까지 증가한다. 더욱이, 환자는 인플릭시맵에 대한 체액 면역 반응을 경험하지 않는다.
실시예 14: 근위축성 측삭 경화증의 치료
치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 사용하여 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료가 필요한 개인을 치료한다. 의사는 의원에서 척수강내 투여용으로 제형화된 치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 처방하고 환자에게 매주 척수강내 주사를 위해 내원하도록 지시한다. 피실험자에게 조성물의 투여 후, 환자가 경험한 증상이 감소한다. 10명의 환자에게 조성물의 척수강내 주사를 제공하는 경우, 이들 중 8명이 운동 뉴런 기능의 최소의 감소 및 그의 증상의 안정화를 경험한다. 10명의 환자에게 대체 치료 제공시, 이들 중 3명이 운동 뉴런 기능의 최소의 감소 및 그의 증상의 안정화를 경험한다.
실시예 15: 단리
면역-조절 조성물을, SDC2를 발현하는 엑소좀의 단리에 의해 수득한다. 조성물을, SDC2+ 기질 세포가 SDC2를 과발현하도록 SDC2 유전자를 갖는 렌티바이러스로 형질전환된 SDC2+ 기질 세포로부터 단리한다. SDC2의 과-발현은 SDC2+ 엑소좀의 수를 증가시키는 효과를 가지며, 그 결과 엑소좀의 단리 효율 및 세포에 의해 생성된 엑소좀의 효능이 증가한다.
단리된 엑소좀을 분석하며, 상기 엑소좀의 적어도 20%가 SDC2+이고 700 ㎎의 엑소좀이 수득되는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀을 포스페이트 완충제를 사용하여 희석하고 사용 필요시까지 일회용 바이알 중에서 DMSO 없이 동결시킨다.
실시예 16: 항체 정제를 사용하는 단리
면역-조절 조성물을, SDC2를 발현하는 엑소좀의 단리에 의해 수득한다. 조성물을, SDC2+ 기질 세포가 SDC2를 과발현하도록 SDC2 유전자를 갖는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스로 형질전환된 SDC2+ 기질 세포로부터 단리한다. SDC2의 과-발현은 SDC2+ 엑소좀의 수를 증가시키는 효과를 가지며, 그 결과 엑소좀의 단리 효율이 증가한다. 엑소좀을 포함하는 조성물을 4℃에서 10 내지 30분 동안 또는 밤새 항-SDC2 항체와 함께 배양한다. SDC2+ 엑소좀을 유식 세포측정 기반 분류 또는 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 용액으로부터 단리하고 SDC2+ 엑소좀을 컬럼으로부터 용출시킨다.
단리된 엑소좀을 분석하며, 상기 엑소좀의 적어도 80%가 SDC2+이고 700 ㎎의 엑소좀이 수득되는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀을 포스페이트 완충제를 사용하여 희석하고 사용 필요시까지 일회용 바이알 중에서 DMSO 없이 동결시킨다.
실시예 17: 한외원심분리를 사용하는 단리
면역-조절 조성물을, SDC2를 발현하는 엑소좀의 단리에 의해 수득한다. 조성물을, SDC2+ 기질 세포가 SDC2를 과발현하도록 SDC2 유전자를 갖는 렌티바이러스 또는 아데노바이러스로 형질전환된 SDC2+ 기질 세포로부터 단리한다. SDC2의 과-발현은 SDC2+ 엑소좀의 수를 증가시키는 효과를 가지며, 그 결과 엑소좀의 단리 효율이 증가한다. 엑소좀을 함유하는 SDC2+ 세포로부터의 상등액에 4℃에서 16시간 동안 100,000 x g력의 한외원심분리를 가한다. 엑소좀 분획을 배지 용액으로부터 단리한다. 일부 용도의 경우, 후속적인 액체 크로마토그래피와 함께 한외여과(UF-LC) 단계를 생성되는 생성물상에서 수행하여 보다 순수한 SDC2+ 엑소좀 제제를 생성시킨다.
단리된 엑소좀을 분석하며, 상기 엑소좀의 적어도 80%가 SDC2+이고 700 ㎎의 엑소좀이 수득되는 것으로 밝혀졌다. 엑소좀을 포스페이트 완충제를 사용하여 희석하고 사용 필요시까지 일회용 바이알 중에서 DMSO 없이 동결시킨다.
실시예 18: 중공-섬유 생물반응기(HFBR)를 사용하는 단리
인간 중간엽 줄기세포(MSC), 예를 들어 SDC2+ MSC를 1 x 107 내지 1 x 108 MSC가 시딩된, C2011 카트리지(화이버셀 시스템스)에서, 또는 한편으로 테루모 콴텀 셀 익스팬션 시스템에서 증식시킨다. 상기는 10주 동안 엑소좀을 계속해서 생성시킨다. 카트리지의 모세관외 공간으로부터의 전형적인 수확은 400 ㎖ 부피 중에 1.1 x 1012 엑소좀/㎖이다. 총 생물반응기 수율 또는 엑소좀 수는 10-배 이상의 농도에서 대략 10-배 이상이다. 수확을 2주마다 수행하고, 각 수확에 앞서 작은 세포 샘플을 표현형 분석을 위해 수집한다. 상기 10주 동안, 배양물은 글루코스 흡수율을 근거로 확대되지 않으며, 이는 매우 일정하게 남아있는다. 직교 측정에 의하면, 세포의 표현형이 또한 일정하게 남아있는다. 엑소좀이 세포의 분할 및/또는 계대배양 없이 계속해서 수확된다.
실시예 19: 엑소좀 조성물의 전달
면역-조절 신호를 SDC2+ 줄기세포로부터 단리된 엑소좀을 사용하여 개인의 세포내 공간으로 전달한다. 엑소좀을 인플릭시맵을 함유하도록 제형화한다. 엑소좀을 개인에게 피하 투여하고 엑소좀의 내용물을 개인의 세포내 공간으로 전달하고, 이에 의해 면역-조절 신호를 전달한다. 엑소좀의 투여 및 면역-조절 신호의 전달은 인플릭시맵에 대한 개인에 의한 체액 면역 반응을 생성시키지 않으며, 이에 의해 인플릭시맵의 효능을 증가시킨다.
실시예 20: 보충된 줄기세포 조성물
중간엽 기질 줄기세포로부터 유래된 시험관내 SDC2+ 엑소좀을 포함하는 치료학적으로 활성인 조성물을 제조한다. 제조된 조성물의 샘플의 시험시, 엑소좀의 적어도 30%가 SDC2를 포함하는 것으로 밝혀졌다. SDC2+ 엑소좀을 중간엽 기질 줄기세포와 병용하고 생성되는 혼합물을 상처 치유가 필요한 개인에게 투여한다. 상기 치료의 결과, 중간엽 기질 줄기세포 단독 투여에 비해 상처 치유가 증대된다.
실시예 21: ARDS 폐 손상을 치료하기 위한 엑소좀 전달
엑소좀을 ARDS의 래트 모델에서 시험하였다. 간단히, 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 90 내지 100 ㎍ 용량의 엑소좀 또는 4 백만개의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 동맥 산소, BAL 세균 부하, BAL 세포 침윤, 정적 탄성, 및 폐 습윤 건조비의 측정에 의해 측정하였다. 동맥 FI 0.3의 개선이 비히클에 비해 엑소좀에 의한 처리에 의해 관찰되었다(도 7). 이는 엑소좀이 ARDS 폐 손상 모델에서 폐 손상을 치료할 수 있음을 입증한다. 엑소좀 치료는 동맥 FI 1.0 측정에서 PBS 비히클 치료만큼 안전함을 보였으며, 이는 엑소좀 치료와 PBS 비히클 대조용간에 유사한 크기를 나타내었다(도 8).
동맥 산소를 또한, PBS 비히클 대조용과 비교하여 동맥 FI 0.3(도 9) 및 동맥 FI 1.0(도 10)에 의한 골수(BM) 엑소좀 및 인간 탯줄(HUC) 엑소좀 처리에 대해 측정하였다. 도 9 및 도 10에서, BM 엑소좀 및 HUC 엑소좀은 동맥 FI 0.3 또는 FI 1.0상에서 꼭 PBS 비히클 대조용만큼 안전한 것으로 나타났다.
도 11에서, 세균 부하를 기관지폐포 세척(BAL)에서 측정하였다. 이 측정에서, 엑소좀 및 hMSC로 처리된 래트에서 BAL 세균 부하의 현저한 감소가 관찰되었다. BAL 총 세포수 및 호중구수를 도 12 및 도 13에 도시한다. 이 분석에서, 비히클 대조용에 비해 엑소좀 및 hMSC로 처리된 래트에서 BAL 총 세포수 및 BAL 호중구수의 측정 가능한 차이가 관찰되었다.
정적 폐 탄성 및 폐 습윤 건조비를 또한 PBS 비히클 대조용에 비해 엑소좀 및 hMSC로 처리된 래트에서 측정하였다(도 14). 이 측정은 엑소좀이 꼭 PBS 비히클 대조용만큼 안전함을 보였다. 도 15는 엑소좀 또는 hMSC로 처리된 래트에서 습윤 건조비의 결과를 도시한다. 이는 또한 엑소좀이 꼭 PBS 비히클 대조용만큼 안전함을 보였다.
본 실시예는 PBS 비히클 대조용과 비교된 엑소좀의 안전성 및 효능을 나타낸다.
실시예 22: 스크래치 상처 분석
스크래치 상처 분석을 A549 세포상에서 수행하여 세포 이동에 대한 엑소좀의 영향을 관찰하였다. 본 분석에서, 300,000개의 A549 세포를 24 웰 플레이트 중의 단층에서 증식시켰다. 세포를 p200 피펫 팁으로 직선으로 긁어 스크래치를 생성시켰다. 긁은 시간(0h) 및 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍의 SDC2+ 엑소좀과 48시간 배양 후에 상을 촬영하였다. 도 16 및 도 17에 도시된 바와 같이, 엑소좀과의 배양은 무혈청 배지에 비해 감소된 스크래치 크기를 생성시켰다.
본 실시예는 무혈청 배지 단독으로 처리된 세포에 비해 엑소좀으로 처리된 세포에서 증가된 세포 이동을 보인다.
실시예 23: NFκB 리포터 분석
NFκB 분석을 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중 엑소좀으로 처리된 A549 세포상에서 수행하였다. 상기 분석의 결과를 도 18 내지 21에 나타낸다. 본 분석에서, NFκB-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 30,000개의 A549 세포를 96 웰 접시에서 증식시켰다. 세포를 24시간 동안 무혈청 배지 또는 무혈청 배지 중의 2 ㎍의 엑소좀으로 처리하고 이어서 24시간 동안 인간 IL-1β로 자극하고 루시페라제 활성을 측정하였다. 한외여과에 이어서 한외원심분리에 의해 획득된 엑소좀(도 18 및 도 10)뿐만 아니라 한외여과 없이 한외원심분리에 의해 획득된 엑소좀(도 20 및 도 21)으로 처리된 A549 세포에서 루시페라제 활성의 감소가 관찰되었다.
본 실시예는 무혈청 배지 단독으로 처리된 세포에 비해 엑소좀으로 처리된 세포에서 염증 반응의 감소를 보인다.
실시예 24: ARDS 폐 손상을 치료하기 위한 엑소좀 전달
엑소좀을 ARDS의 래트 모델에서 시험하였다. 간단히, 300 g의 스프래그 다우리 래트에게 폐내 용량의 이 콜라이를 제공하여 ARDS 폐 손상을 유발하고, 1시간 후에, 래트를 정맥내 용량의 200 ㎍ 또는 10 밀/㎏의 인간 중간엽 줄기세포(hMSC)로 처리하였다. 이어서 폐 손상 정도를 24시간 후에 동맥 산소, BAL 세균 부하, BAL 세포 침윤, 정적 탄성, 및 폐 습윤 건조비의 측정에 의해 측정하였다. 동맥 FI 0.3의 개선이 비히클에 비해 엑소좀에 의한 처리에 의해 관찰되었다(일원 anova p<0.0001)(도 22). 개선이 또한 비히클에 비해 엑소좀에 의한 처리에 의해 관찰된 동맥 FI 1.0에서 관찰되었다(일원 anova p<0.0001)(도 23). 이는 엑소좀이 ARDS 폐 손상 모델에서 폐 손상을 치료할 수 있음을 입증한다.
정적 폐 탄성을 또한 PBS 비히클 대조용에 비해 엑소좀 또는 hMSC로 처리된 래트에서 측정하였다(도 24). 상기 측정은 엑소좀이 대조용에 비해 ARDS 폐 손상 치료에 유효함을 보였다(일원 anova p<0.01).
도 25에서 세균 부하를 기관지폐포 세척(BAL)에서 측정하였다. 이 측정에서, 엑소좀 및 hMSC로 처리된 래트에서 BAL 세균 부하의 현저한 감소가 관찰되었다(일원 anova p<0.01). BAL 총 세포수 및 호중구수를 도 26 및 도 27에 도시한다. 이 분석에서, 비히클 대조용에 비해 엑소좀 및 hMSC로 처리된 래트에서 BAL 총 세포수 및 BAL 호중구수의 현저한 차이가 관찰되었다(일원 anova p<0.01).
본 실시예는 증가된 용량 및 정맥내 방식으로 투여된 엑소좀 투여가 ARDS 폐 손상을 치료함을 보인다.
실시예 25: 당뇨병-관련된 신부전의 치료
치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 사용하여 당뇨병과 관련된 신부전을 앓고 있는 개인을 치료한다. 피실험자에게 조성물 투여 후, 환자가 경험한 증상이 감소한다. 10명의 환자에게 조성물의 척수강내 주사를 제공할 때, 9명이 신장 기능의 현저한 증가를 경험한다. 10명의 환자에게 대체 치료를 제공할 때, 신장 기능은 개선되지 않는다. 일부 개인에서 혈당 수준에 대한 영향은 관찰되지 않는다.
실시예 26: 알쯔하이머병의 치료
치료학적으로 활성인 시험관내 SDC2+ 엑소좀 조성물을 사용하여 알쯔하이머병을 앓고 있는 개인을 치료한다. 정맥내 투여에 의한 피실험자에의 조성물의 투여 후, 조성물은 혈액 뇌 장벽을 교차하고 뇌를 치료할 수 있으며 알쯔하이머병 증상을 감소시킨다. 10명의 환자에게 조성물의 정맥내 주사를 제공할 때, 9명이 기억력의 개선을 경험한다.
실시예 27: 개선된 SDC2+ 기질 줄기세포
SDC2+ 기질 줄기세포 조성물을 CD39 항체를 사용하여 인간 탯줄로부터 단리한다. 조성물은 CD25+ FoxP3+ 조절 T 세포를 추가로 포함한다. 세포의 1/3을 CD39를 과발현하도록 렌티바이러스로 형질도입시키고, 세포의 1/3을 CD39L3를 과발현하도록 렌티바이러스로 형질도입시키고, 세포의 1/3을 트랜스유전자 없이 렌티바이러스로 형질도입시킨다. CD39 또는 CD39L3로 형질도입된 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물은 트랜스유전자 없이 렌티바이러스로 형질도입된 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물보다 NFκB 리포터 분석에서 측정된 바와 같이 염증 반응의 억제에 더 유효하다. 본 실시예는 SDC2+ 기질 줄기세포 조성물이 CD39 또는 CD39L3로 형질도입될 때 더 큰 소염 활성을 가짐을 보인다.
본 발명의 바람직한 실시태양을 본 명세서에 도시하고 기재하였지만, 상기와 같은 실시태양이 단지 예로서 제공됨은 당해 분야의 숙련가들에게 명백할 것이다. 이제 다수의 변이, 변화, 및 치환이 본 발명으로부터 이탈됨 없이 당해 분야의 숙련가들에게 떠 오를 것이다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 실시태양에 대한 다양한 대안을 본 발명의 실시에 사용할 수 있음은 물론이다. 하기의 청구항들은 본 발명의 범위를 한정하며 이들 청구항의 범위내의 방법 및 구조 및 이들의 균등물을 상기 범위에 의해 포함하고자 한다.
Claims (30)
- 포유동물 세포의 혼합 집단으로부터 SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리하는 방법으로, (a) 상기 포유동물 세포의 혼합 집단을 CD39 결합제와 접촉시키고; (b) 상기 CD39 결합제에 결합된 세포를 단리하고; (c) 상기 단리된 세포 중의 SDC2+ 세포 풍부성을 측정하여, SDC2+ 기질 줄기세포의 집단을 단리함을 포함하는 방법.
- 제1항에 있어서,
SDC2+ 기질 줄기세포의 집단이 인간, 마우스, 래트 또는 말 세포로 이루어지는 목록 중에서 선택된 세포를 포함하는 방법. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
포유동물 세포의 혼합 집단이 골수, 지방 조직, 골격근, 자궁내막, 태반, 탯줄, 와튼 젤리, 및 다능성 세포로부터 유래된 세포 중 적어도 하나 중에서 선택된 공급원으로부터 수득되는 방법. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
CD39 결합제가 항체를 포함하는 방법. - 제4항에 있어서,
항체를 형광단에 접합시키는 방법. - 제4항에 있어서,
항체를 비드에 접합시키는 방법. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 20%가 SDC2+인 방법. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 40%가 SDC2+인 방법. - 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 기질 줄기세포 집단의 적어도 70%가 SDC2+인 방법. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
단리된 세포를 배양함을 포함하는 방법. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 기질 줄기세포의 적어도 90%가 CD45-인 방법. - SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 염증 반응 부위로 전달함을 포함하는, 포유동물에서 염증 반응을 조절하는 방법으로, 상기 SDC2+ 세포를 CD39 발현을 근거로 세포를 단리함으로써 세포의 혼합 집단으로부터 단리하는 방법.
- 제12항에 있어서,
세포의 단리가 CD39 결합제에 결합된 세포를 수집함을 포함하는 방법. - 제13항에 있어서,
세포의 단리가 CD39 결합제에 결합된 세포를 배양함을 포함하는 방법. - 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
전달이 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 주사함을 포함하는 방법. - 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
전달이 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물을 국소적으로 적용함을 포함하는 방법. - 제16항에 있어서,
조성물이 하이드로겔을 포함하는 방법. - 제16항에 있어서,
조성물이 콜라겐 겔을 포함하는 방법. - 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
전달이 SDC2+ 세포를 포함하는 조성물의 정맥내 전달을 포함하는 방법. - 제12항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
CD39 결합제가 항체를 포함하는 방법. - 제20항에 있어서,
항체를 형광단에 접합시키는 방법. - 제20항에 있어서,
항체를 비드에 접합시키는 방법. - 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 세포의 적어도 20%가 SDC2+인 방법. - 제12항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 세포의 적어도 40%가 SDC2+인 방법. - 제12항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
SDC2+ 세포의 적어도 70%가 SDC2+인 방법. - 제12항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
적어도 10^3 SDC2+ 세포를 전달함을 포함하는 방법. - 제12항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
염증 반응이 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 패혈증, 크론병, 염증성 장 증후군, 류머티스성 관절염, 이식편 대 숙주병, 다발성 경화증, ALS, 피부 상처, 골절, 뇌진탕 상처, 화상, 죽상동맥경화증, 신장병증, 심근병증, 신경병증, 신장 질환, 신부전, 당뇨성 궤양, 다리 궤양, ARDS, 패혈증, 염증성 간 질환, 심근염, 심근경색후 증후군, 심막절개술후 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 항-사구체 기저막 신염, 간질성 방광염, 루푸스 신염, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 항합성효소항체 증후군, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 무기폐, 기관지염, 폐기종, 폐렴, 폐 부종, 원형탈모증, 자가면역 혈관부종, 자가면역 프로제스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유사천포창, 흉터 유사천포창, 포진성 피부염, 원반모양 홍반 루푸스, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평태선, 경화태선, 선형 IgA병, 국소 피부경화증, 심상성 천포창, 급성 태선상 두진상 비강진, 무하-하베르만병, 건선, 전신 피부경화증, 백반증, 애디슨병, 자가면역 다선 증후군, 자가면역 다선 증후군 2형, 자가면역 다선 증후군 3형, 자가면역 췌장염, 자가면역 갑상선염, 오즈(Ord's) 갑상선염, 그레이브스병, 생식기관 장애, 자가면역 난소염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 쇼그렌 증후군, 자가면역 장병증, 셀리악병, 미세장염, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군, 재생불량성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 백혈구감소증, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 한랭응집소병, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 에반스 증후군, IgG4-관련 전신 질병, 발작성 야간혈색뇨증, 악성 빈혈, 진성 적혈구계 무형성증, 혈소판 감소증, 동통성 지방증, 성인-발병 스틸병, 강직성 척추염, CREST 증후군, 약물-유발된 루푸스, 부착부염-관련 관절염, 호산성 근막염, 펠티 증후군, 소아 관절염, 라임병(만성), 혼합 결합조직병, 회귀성 류머티즘, 안면편측 위축증, 파르소니지-터너 증후군, 건선성 관절염, 반응성 관절염, 재발성 다발 연골염, 복막후 섬유증, 류머티스열, 류머티스성 관절염, 사르코이드증, 슈니츨러 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 미분화된 결합조직병, 악액질, 근육감소증, 피부근염, 섬유근육통, 봉입체 근염, 근염, 중증 근무력증, 신경근육긴장증, 방종양성 소뇌 변성, 다발성근염, 급성 파종성 뇌척수염, 급성 운동축삭 신경병증, 항-N-메틸-D-아스파테이트 수용체 뇌염, 발로씨 동심성 경화증, 비커스태프 뇌염, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 길랑 바레 증후군, 하시모토 뇌증, 특발성 염증성 탈수초병, 람베르트-이튼 근무력 증후군, 다발성 경화증, 스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신질환, 진행성 염증 신경병증, 하지 불안 증후군, 강직인간 증후군, 시데남 무도병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 횡단성 척수염, 자가면역 망막병증, 자가면역 포도막염, 코간 증후군, 그레이브스 눈병, 중간 포도막염, 목질 결막염, 무어렌 궤양, 시속 척수염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 시신경염, 공막염, 스삭 증후군, 교감성 안염, 톨로사-헌트 증후군, 자가면역 내이병, 메니에르병, 항-호중구 세포질 항체-관련 혈관염, 베체트병, 척-스트라우스 증후군, 거대세포 동맥염, 헤노흐-쉔라인 자반병, 카와사키병, 백혈구파괴 혈관염, 루푸스 혈관염, 류머티스성 혈관염, 미세 다발혈관염, 결절성 다발동맥염, 류머티스성 다발근통, 두드러기성 혈관염 및 혈관염 중 적어도 하나를 포함하는 방법. - 적어도 20% SDC2+인 세포 집단을 포함하는 조성물로, 상기 세포 집단이 CD39 결합제에 결합되는 조성물.
- 제28항에 있어서,
세포 집단이 적어도 20% CD39+인 조성물. - 제28항 또는 제29항에 있어서,
CD39 결합제에 결합된 세포 집단으로부터 단리된 적어도 10^6 엑소좀을 또한 포함하는 조성물.
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