KR20190119020A

KR20190119020A - 지칭개 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물

Info

Publication number: KR20190119020A
Application number: KR1020190126846A
Authority: KR
Inventors: 강창희; 김철환; 황혜진; 정용태; 김민진; 황병수; 한웅; 이승영; 유상미; 엄정혜; 황용; 정상철; 권예슬; 오영택
Original assignee: 국립낙동강생물자원관
Priority date: 2019-10-14
Filing date: 2019-10-14
Publication date: 2019-10-21

Abstract

본 발명은 지칭개(Hemistepta lyrata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 지칭개 추출물은 천연물질로써, LPS에 의해 과활성화된 대식세포에서 NO, PGE₂ 및 IL-6의 염증질환의 주요 매개물의 생성을 억제함으로써, 항염증 효능을 나타낼 뿐만 아니라 마우스의 면역세포인 대식세포에서 독성이 없어 항염증용 약학적 조성물 및 화장료 조성물, 및 염증 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물로써 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

지칭개 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물{A COMPOSITION FOR ANTI-INFLAMMATION COMPRISING HEMISTEPTA LYRATA EXTRACT}

본 발명은 지칭개(Hemistepta lyrata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 지칭개 추출물은 독성이 없는 천연물질로서, 마우스의 면역세포인 대식세포에서 독성을 나타내지 않으며, LPS(Lipopolysaccharide)에 의해 과활성화된 대식세포에서 NO(Nitric oxide), PGE2(Prostaglandin E2) 및 IL-6(Interleukin-6)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물에 관한 것이다.

염증은 발적(發赤), 종창(腫脹), 작열(灼熱), 동통(疼痛)의 증후가 동반되며, 염증의 병인으로는 물리학적 병인, 화학적 병인, 세균이나 바이러스와 같은 미생물, 기생충이 있다.

일반적으로 생체의 세포나 조직에 어떠한 기질적 변화를 가져오는 자극이 가해질 때 유도되는 염증반응은 생체를 보호하기 위한 방어 시스템이다. 그러나 정상적인 염증반응은 생체 방어기작으로 작용하지만, 염증과정이 종결되지 않고 지속으로 진행되면 질병상태가 된다. 염증반응에 의한 조직 손상은 주로 염증 주변 조직에 임파구나 백혈구 등의 면역세포들이 과다하게 침입됐거나, 염증 조직 부위에 콜라겐이 과다하게 축적된 경우, 활성 산소 생성에 의한 DNA 손상 등에 의하여 유발된다고 알려져 있다.

또한, 이러한 염증이 만성적으로 진행되면 당뇨, 동맥경화를 포함한 심혈관계 질환, 대사질환, 치매 등 뇌 퇴행성 질환을 유발하며, 동맥경화, 염증성 장질환, 관절염, 위염, 간염, 알레르기성 천식 및 비염, 당뇨병, 그리고 악성 종양과 같은 질병을 유발할 수 있다.

이러한 염증에 의한 치료는 소염제를 통하여 촉진될 수 있으며, 소염작용이란 침입균의 증식을 억제하거나 이물질들을 탐식하는 대식세포 (macrophage)를 활성화하여 상기 이물질들을 소화 및 배설하는 대식세포의 기능을 항진시키는 염증치료 촉진작용이다. 현재 가장 강력한 항염작용을 지니고 있는 약제는 스테로이드 제제이다.

그러나 스테로이드 제제 대부분이 합성 제제들로써 장기적 사용 시 부신억제, 체액의 저류와 같은 부작용을 수반하게되는 경우가 많다. 따라서 천연식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 의약품이나, 별도의 정제 과정 없이 안전하게 섭취할 수 있으며, 염증을 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 필요한 실정이다.

이에 본 발명자는 항염증 효능을 보유한 천연물 스크리닝을 통해 지칭개 추출물을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.

지칭개(Hemistepita lyrata Bunge)는 국화과(Compositae)에 속하는 2년생 초본으로 5월경에 홍자색 꽃이 핀다. 지칭개의 생약명은 이호채(泥胡菜), 야고마(野苦麻), 고마채(苦馬菜), 나미채 라고도 불리우며 높이는 30~80 ㎝이고 다육질인 원뿔꼴의 뿌리가 있으며, 잎은 가늘고 긴 피침형으로 우리나라 전국의 산이나 들에서 자생한다. Hemistepita lyrata Bunge의 전초는 열을 내리고 해독하며 부기를 가라앉히고 어혈을 없애는 효능이 있으며, 조그마한 종기, 외상의 출혈, 골절을 치료하는 것으로 알려져 있다.

선행기술에 따르면, 대한민국 등록특허 제 10-1405429호 : 청구항 1항 야생초를 포함하여 조성되는 화장품에 있어서, 상기 야생초는 꽃다지, 냉이, 쇠뜨기, 큰개불알풀, 광대나물, 별꽃, 가죽나물, 뽀리뱅이, 지칭개, 애기똥풀, 뱀딸기, 돌나물, 방가지똥, 소리쟁이, 명아주, 닭의장풀, 비름나물, 며느리밑씻개, 새삼, 토끼풀, 환삼덩굴, 박주가리, 털별꽃아재비, 어성초, 야생돌콩, 피, 칡넝쿨, 까마중, 강아지풀, 미국자리공, 개여뀌, 개쑥갓, 돼지감자, 미역취, 쑥부쟁이, 개미취, 머위, 곰취, 쑥, 엉겅퀴, 민들레, 수리취, 씀바귀, 비비추, 원추리, 얼레지, 밀나물, 풀솜대, 단풍취, 개망초, 갯기름나물, 고들빼기, 고마리, 털여뀌, 장구채, 메꽃, 톱풀, 까실쑥부쟁이, 제비꽃, 쇠무릎, 쇠비름, 꿀풀, 활나물, 무늬둥글레, 참나물, 애기수영, 지치, 달개비, 쥐오줌풀, 바디나물, 양지꽃, 질경이, 짚신나물, 등골나물, 박하, 차즈기, 구릿대, 금낭화, 기린초, 무릇, 배초향, 방아풀, 독활, 참나리, 천궁, 치커리 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상인 것임을 특징으로 하는 야생초 화장품으로 기재되어 있으나, 상기 발명은 피부 미백효능을 나타내는 야생초 화장품으로써 본 발명과 상이하다고 하겠다.

대한민국 등록특허 제 10-1405429호(2014.06.02)

본 발명은 지칭개(Hemistepta lyrata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명의 지칭개 추출물은 독성이 없는 천연물질로서, 마우스의 면역세포인 대식세포에서 독성을 나타내지 않으며, LPS에 의해 과활성화된 대식세포에서 NO, PGE₂ 및 IL-6의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 지칭개 추출물을 함유하는 항염증 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 상기 지칭개 추출물은 물 또는 탄소수 1개 내지 6개의 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나의 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 상기 지칭개 추출물은 RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 100 μg/ml 함유하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 상기 지칭개 추출물은 NO(Nitric oxide), PGE2(Prostaglandin E2) 및 IL-6(Interleukin-6)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은, 지칭개 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은 지칭개(Hemistepta lyrata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 지칭개 추출물은 독성이 없는 천연물질로써, LPS에 의해 과활성화된 대식세포에서 NO, PGE₂ 및 IL-6의 염증질환의 주요 매개물의 생성을 억제함으로써, 항염증 효능을 나타내는 화장료 제제로 활용할 수 있다.

도 1은 지칭개 추출물의 세포생존률을 확인한 도면이다.
도 2는 지칭개 추출물의 NO(Nitric oxide) 생성 억제를 나타낸 도면이다.
도 3은 지칭개 추출물의 PGE2(Prostaglandin E2) 생성 억제를 나타낸 도면이다.
도 4는 지칭개 추출물의 IL-6(Interleukin-6) 생성 억제를 나타낸 도면이다.

본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

실험예 1 : 지칭개를 이용한 물질 추출

지칭개 건조 분말에 10배 중량의 50 ~ 100 %(w/v) ethanol을 실온에서 24시간 동안 2회 추출 후 여과(Whatman No.2)한 여액을 rotary vacuum evaporator(EYELA. Japan)로 농축 후 동결건조 하여 실험 때가지 20℃에 보관하여 사용하였다.

설계조건에 따라, 다른 용매가 사용될 수도 있으며, 추출 용매의 종류에 따라 추출 온도, 추출 시간, 용매의 양 및 잔류 성분 처리 방식이 다르게 설계될 수 있다. 추출 용매 또한 다양한 용매가 사용될 수 있는데, 추출 가능한 용매에는 물, 에탄올, 물 또는 탄소수 1개 내지 6개의 알코올 및 이들의 혼합용매, 메탄올, 지방유, 글리세린, 마유, 에틸아세테이트, 아세톤, 부탄올 및 이소프로판올이 있다. 바람직하게는 본 발명에서 에탄올로 지칭개를 추출하였다. 바람직하게는 지칭개 건조 분말에 10배 중량의 70 %(w/v) ethanol을 실온에서 24시간 동안 2회 추출 후 여과한 여액을 농축 후 동결건조 하였다.

실험예 2 : 지칭개 추출물의 세포 생존률 평가

시료가 세포의 생존률에 미치는 영향을 측정하기 위하여 MTT 분석을 수행 하였다. RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0 × 10⁵ cell/ml로 조절한 후 24well plate에 분주 배양하고, LPS(500ng/ml)를 처리하고 1시간 후 추출물 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양 하였다. 이후 MTT(5mg/ml)를 50ul를 가하여 침전물을 완전히 용해시킨 후, microplate reader를 사용하여 540nm 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포 생존률을 평가하였다.

도 1은 지칭개 추출물의 세포생존률을 확인한 도면이다. 도 1을 참조하면 지칭개 추출물은 마우스의 대식세포 생존률에 영향이 미치지 않음으로 독성이 없음을 알 수 있다.

실험예 3 : 지칭개 추출물의 NO(Nitric oxide) 생성 억제 평가

시료가 LPS가 유도한 NO 생성 억제 영향을 측정하기 위하여 ELISA 분석을 수행 하였다. RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0 × 10⁵ cell/ml로 조절한 후 24well plate에 분주 배양하고, LPS(500ng/ml)를 처리하고 1시간 후 추출물 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양 하였다. 생성된 NO는 Griess 시약[1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphylethyleneduamine in 2.5% (v/v) phosphoric acid]를 사용하여 세포배양액에 녹아있는 NO₂ ^-의 형태로 측정하였다. 세포배양액 100ul와 Griess시약 100ul를 혼합하여 96 well plate에서 20분간 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 2는 지칭개 추출물의 NO(Nitric oxide) 생성 억제를 나타낸 도면이다. 도 2를 참조하면, LPS에 의해 과생성된 NO를 지칭개 추출물 25~100 μg/ml 의 농도에서 억제하는 것을 알 수 있다.

실험예 4 : 지칭개 추출물의 PGE ₂ (Prostaglandin E ₂ ) 생성 억제 평가

시료가 LPS가 유도한 PGE₂ 생성 억제 영향을 측정하기 위하여 ELISA 분석을 수행 하였다. RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0 × 10⁵ cell/ml로 조절한 후 24well plate에 분주 배양하고, LPS(500ng/ml)를 처리하고 1시간 루 추출물 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양 하였다. PGE₂의 측정은 PGE₂ ELISA kit(R&D Systems)를 이용하여 정량하였으며, standard에 대한 표준곡선의 R2 값은 0.99이상이었다.

도 3은 지칭개 추출물의 PGE2(Prostaglandin E2) 생성 억제를 나타낸 도면이다. 도 3을 참조하면 LPS가 과도하게 생산한 PGE₂의 생산을 지칭개 추출물 25~100 μg/ml 의 농도에서 억제하는 것을 알 수 있다.

실험예 5 : 지칭개 추출물의 IL-6(Interleukin-6) 생성 억제 평가

시료가 LPS가 유도한 IL-6 생성 억제 영향을 측정하기 위하여 ELISA 분석을 수행 하였다. RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0 × 10⁵ cell/ml로 조절한 후 24well plate에 분주 배양하고, LPS(500ng/ml)를 처리하고 1시간 후 추출물 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양 하였다. IL-6의 측정은 IL-6 ELISA kit(BD bioscience)를 이용하여 정량하였으며, standard에 대한 표준곡선의 R2 값은 0.99이상이었다.

도 4는 지칭개 추출물의 IL-6(Interleukin-6) 생성 억제를 나타낸 도면이다. 도 4를 참조하면 LPS가 과도하게 생산한 IL-6의 생산을 지칭개 추출물 25~100 μg/ml의 농도에서 억제하는 것을 알 수 있다.

실시예 1. 지칭개 추출물을 함유하는 조성물의 제조

지칭개 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물로 이용될 수 있다.

1) 약학적 조성물

약학적 조성물로 이용되기 위하여는 약제학적 분야에서의 공지의 방법에 의해 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한 이들은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다.

약학적 조성물의 유효 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 물활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질환의 중증 정도 등에 따라 적절히 선택될 수 있다.

바람직하게는 상기 실시예 결과에 따라 지칭개 추출물은 RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 25 ~100 μg/ml 함유하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물을 제조할 수 있다.

약학적 조성물을 이용하여 환, 과립, 음료, 타블렛, 캅셀 등의 제형을 제조할 수 있으며, 이 경우에 각 제형을 제조하기 위하여 첨가제가 추가될 수 있음은 물론이다.

2) 식품 조성물

식품 조성물로 이용되는 경우에는, 식품학적으로 허용되는 첨가제를 이용하여 건강기능식품으로 제조하여 제공한다.

상기 실시예 결과에 따라 식품 조성물은 지칭개 추출물을 RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 25 ~100 μg/ml 함유하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물을 제조할 수 있다.

건강기능식품의 경우, 기능성 음료, 건강보조식품, 차, 과자류 등과 같이 다양한 형태로 제공될 수 있다.

3) 의약외품

의약외품 조성물로 이용하는 경우에는, 각 의약외품의 용도에 맞게 본 발명에 따른 조성물을 적용하여 제공할 수 있다.

상기 실시예 결과에 따라 의약외품 조성물은 지칭개 추출물을 RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 25 ~100 μg/ml 함유하는 것을 특징으로 하는 의약외품 조성물을 제조할 수 있다.

4) 화장품

화장품 조성물로 이용되기 위하여는, 용도에 맞게 본 발명에 따른 지칭개 조성물을 적용하여 제공할 수 있다. 그 자체 또는 화장품으로 제조되는 크림, 에센스, 로션, 스킨 제형으로 제조될 수 있으며, 화장품에서 사용되는 유화제, 담체, 부형제, 희석제와 혼합하여 제조되어 사용될 수 있다. 이 경우에 각 제형을 제조하기 위하여 첨가제가 추가될 수 있음은 물론이다.

상기 실시예 결과에 따라 화장품 조성물은 지칭개 추출물을 RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 25 ~100 μg/ml 함유하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물을 제조할 수 있다.

Claims

지칭개(Hemistepita lyrata Bunge) 전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 개선을 위한 화장품 조성물로서,
상기 지칭개 전초 추출물은,
지칭개 건조분말을 10배 중량의 50 ~ 100 %(w/v) 에탄올로 실온에서 24시간 동안 2회 추출 후 여과하여 제조되고,
RAW 264.7 대식세포 2.0 × 10⁵cells/㎖ 기준으로 100 μg/ml 함유되어, NO(Nitric oxide), PGE2(Prostaglandin E2) 및 IL-6(Interleukin-6)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는,
지칭개 전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 예방 또는 개선을 위한 화장품 조성물.