KR20190067219A

KR20190067219A - 통증 예방, 경감 또는 치료에서의 신경 흥분성 상해 관련 폴리펩타이드의 용도

Info

Publication number: KR20190067219A
Application number: KR1020197013609A
Authority: KR
Inventors: 후아민 한; 위지아 티엔; 웨이 통
Original assignee: 바이오셀즈(베이징) 바이오테크 코., 엘티디.
Priority date: 2016-10-10
Filing date: 2017-09-30
Publication date: 2019-06-14
Also published as: JP2020503248A; CN107913395A; US20200385423A1; WO2018068670A1; CN107913395B; EP3524257A4; EP3524257A1

Abstract

본원에는 아미노산 서열 YEKLLDTEI(서열 번호 1) 또는 이의 기능성 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 약학적 조성물의, 개체의 통증, 특히 침해 수용성 통증의 예방, 경감 또는 치료를 위한 약물 제조에서의 용도 및 통증의 예방, 경감 또는 치료 방법이 제공된다.

Description

통증 예방, 경감 또는 치료에서의 신경 흥분성 상해 관련 폴리펩타이드의 용도

본 출원은 2016년 10월 10일자로 출원된 중국 특허 출원 제201610885295.4호의 우선권을 주장하며, 그 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다.

본 출원은 대체적으로 의학 분야에 관한 것이며, 특히, 본 출원은 통증 예방, 경감 또는 치료에서의 신경 흥분 손상 관련 폴리 펩타이드의 용도를 제공한다.

통증은 사람들이 평생 동안 종종 겪게 되는 불쾌한 느낌이다. 이러한 통증은 신체가 위협받고 있음을 알리는 경고 신호를 제공하고, 생명에 필수적인 특별한 보호 기능 역할을 수행한다. 다른 한편, 이는 다양한 질병의 가장 흔한 증상이며 오늘날 인간의 건강을 괴롭히는 가장 심각한 문제 중 하나이다. 통증은 매우 복잡한 신경 활동이다. 또한, 통증 연구는 현재의 신경 과학 연구에서 중요한 주제 중 하나가 되어 가고 있다.

기존 연구에 따르면, N-메틸-D-아스파르테이트(N-methy-D-spartate, NMDA) 수용체의 NR2B 아단위는 신경 흥분성 시냅스 전달, 중추 감작(sensitization), 만성 통증과 같은 생리 병리학 과정에 관여된다. 후근 신경절 (DRG)의 신경 세포는 주변 자극과 중추 시냅스를 가지고 있으며, 말초 중심 시냅스의 말단에서 손상 자극을 직접 받게 되고, Aδ 섬유와 C 섬유를 통해 척수 후각의 얇은 층에서 중추 시냅스의 말단으로 전달되어, 글루타메이트, 아스파르트산, SP 및 CGRP와 같은 신경 전달 물질을 방출한다. 글루타메이트는 NMDA와 AMPA 수용체에 결합된다. Mg² ⁺가 NMDA 수용체 이온 채널을 차단하기 때문에 AMPA 수용체만 활성화되어 세포로의 Na⁺ 유입을 계속 활성화시켜 세포막의 탈분극을 유도하고 Mg² ⁺에 의한 채널 차단을 제거하며 Ca² ⁺ 투과성을 증가시킨다. 세포 내의 대량의 Ca² ⁺가 PKC를 활성화시켜 NMDA 수용체를 인산화시키고, 따라서, 상이한 NMDA 수용체 아형의 발현 비율을 변화시키고, 아울러 NMDA 수용체의 사일런트 시냅스를 기능성 시냅스로 전환시킨다. NMDA 관련 NOS는 Ca² ⁺ 농도의 영향을 받는다. NOS는 PSD-95 및 PSD-93의 PDZ 위치에서 효소 반응을 촉매하여 NO 생성을 유발하고, 오르니틴 시클라제를 활성화시켜 엽산을 합성하며, PSD 칼모듈린 의존성 인산화를 촉진시켜 시냅스 전달 물질의 방출을 조절하며, 뉴런의 흥분성을 변화시킨다. 이러한 피드백 증폭 효과는 상해 정보를 중추로 전달하여 통증 감작과 통증 신호 증폭을 유발한다.

상기 과정에서 Ca² ⁺ 농도와 NR2B와 PSD-95 사이의 상호 작용이 통증 신호 증폭의 관건적인 조건임을 확인할 수 있다. 이에 따라 이러한 조건 중 하나를 제한할 경우 통증 신호가 약화될 수 있다. 따라서 PSD95 억제제 개발은 통증 치료에 큰 의미가 있다.

제1 양태에서, 본원은 아미노산 서열 YEKLLDTEI(서열 번호 1) 또는 이의 기능성 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 약학적 조성물의, 개체의 통증 예방, 경감 또는 치료를 위한 약물 제조에서의 용도를 제공한다.

제2 양태에서, 본원은 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 통증의 예방, 경감 또는 치료 방법을 제공한다.

제1 양태에서 제공하는 용도 또는 제2 양태에서 제공하는 방법의 일부 실시예에 있어서, 상기 기능성 변이체는 서열 번호 1의 LDTEI 부분에서 하나 이상의 보존성 치환(conservative substitutions)에 의해 생성된 변이체이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 보존성 치환은 D와 E 사이의 치환, L, V 및 I 사이의 치환 및 T와 S사이의 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시예에 있어서, 상기 기능성 변이체는 YEKLLDTEI의 LDTEI 부분을 LDTEL, LDTEV, LDTDI, LDTDL, LDTDV, LDSEI, LDSEL, LDSEV, LDSDI, LDSDL, LDSDV, LETEI, LETEL, LETEV, LETDI, LETDL, LETDV, VDTEI, VDTEL, VDTEV, VDTDI, VDTDL, VDTDV, IDTEI, IDTEL, IDTEV, IDTDI, IDTDL, IDTDV, IETEI, IETEL, IETEV, IETDI, IETDL, 및 IETDV으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 서열로 대체하여 생성된 변이체이다.

제1 양태에서 제공하는 용도 또는 제2 양태에서 제공하는 방법의 일부 실시예에 있어서, 상기 펩타이드는 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체 및 내연(internalization) 펩타이드를 포함하는 키메라 펩타이드이다.

일부 실시예에 있어서, 내연 펩타이드는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRR (서열 번호 2)를 포함한다.

일부 실시예에 있어서, 키메라 펩타이드는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (서열 번호 3)를 포함한다.

제1 양태에서 제공하는 용도 또는 제2 양태에서 제공하는 방법의 일부 실시예에 있어서, 통증은 침해 수용성 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 통증은 외부 응력 (stress) 또는 자극에 의해 유발된 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 외부 응력 또는 자극은 열 자극 또는 터치이다.

일부 실시예에 있어서, 침해 수용성 통증은 체성통(somatic pain) 및/또는 내장통(visceral pain)이다.

일부 실시예에 있어서, 체성통에는 화상, 상처, 타박상, 어깨 통증, 사지 통증, 요통, 관절염, 건초염 또는 근막염이 포함된다.

일부 실시예에 있어서, 내장통에는 복통, 맹장염, 췌장염 또는 소화성 궤양이 포함된다.

일부 실시예에 있어서, 전술한 용도 및 방법의 개체는 신경 손상이 없는 개체이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 개체는 건강한 개체이다.

본 출원의 발명자들은 통증의 기전에 대한 연구를 통해 통증 치료를 위한 다수의 표적을 개발하였고, 실험을 통해 통증을 예방, 경감 또는 치료할 수 있는 펩타이드를 설계 및 스크리닝하고, 최종적으로 바람직한 특성을 갖는 펩타이드를 획득하였다. 본원에서 획득된 펩타이드는 고효율 및 저독성 등 장점을 갖고 있다.

도 1은 P5와 PDZ1/2 도메인의 상호 작용을 검출하기 위한 풀다운 실험을 보여준다. M은 단백질 분자량 마커를 나타내고, 레인 1은 His + PDZ1/2 + P5이고, 레인 2는 단독 P5, 레인 3은 His + P5, 레인 4는 His + PDZ1/2이다. 레인 1에 나타낸 용출된 밴드는 P5와 PDZ1/2를 모두 함유하고 있고, P5가 PDZ1/2 도메인에 결합될 수 있음을 확인할 수 있다.
도 2는 핫 플레이트 실험에서 폴리 펩타이드 P5, 음성 대조군 (일반 생리 식염수) 및 양성 대조군 (이부프로펜)으로 래트를 처치하여 얻은 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 니들 실험에서 폴리펩타이드 P5, 음성 대조군 (일반 생리 식염수) 및 양성 대조군 (이부프로펜)으로 래트를 처치하여 얻은 결과를 나타내는 그래프이다.

특별히 다르게 지시하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다.

"키메라 펩타이드"라는 용어는 서로 자연적으로 결합하지 않은 2개의 펩타이드 성분을 갖는 펩타이드를 의미한다. 2개의 펩타이드 성분은 융합 단백질을 형성하거나 화학적 결합으로 연결될 수 있다.

"기능적 변이체"란 용어는 모체와 동일하거나 유사한 생물학적 기능 및 특성을 갖는 변이체를 가리킨다. 비제한적인 예시로서, "기능적 변이체"는 모체에서 하나 이상의 보존성 치환을 진행함으로써 획득할 수 있다.

"PDZ 도메인"이라는 용어는 약 90개 아미노산의 모듈식 단백질 도메인을 가리키고, 시냅스 단백질 PSD-95, 초파리 분리식 코넥신 Discs-Large(Drosophila separating connexin Discs-Large; DLG), 및 상피 밀착 연접 단백질(epithelial tight junction protein) Z01의 높은 서열 동일성(예를 들어, 적어도 60%)을 갖고 있다. PDZ 도메인은 Discs-Large 상동 반복(Discs-Large homolog repeats; "DHR") 및 GLGF 반복으로도 알려져 있다. PDZ 도메인은 전형적으로 핵심 공통 서열을 유지하고 있다(Doyle, D.A., 1996, Cell 85 : 1067-76). 예시적인 PDZ 도메인을 함유한 단백질 및 PDZ 도메인 서열은 미국 특허 출원 제10/714,537호에 개시되어 있다.

"특이적 결합"이란 용어는 두 분자(예를 들어, 리간드와 수용체) 사이의 결합을 의미하는 바, 여기서, 하나의 분자(예로, 리간드)는 기타 다양한 분자들이 존재하는 경우에도 다른 특정 분자(예로, 수용체)와 결합할 수 있는 능력, 즉 이질적인 분자 혼합물에서 하나의 분자가 다른 한 분자에 우선적으로 결합하는 능력을 가리킨다. 수용체에 대한 리간드의 특이적 결합은 또한 과량의 표지되지 않은 리간드가 존재할 경우 수용체에 대한 검출 가능하게 표지된 리간드의 결합이 감소되는 것(즉, 결합 경쟁 분석)을 통해 확인할 수 있다.

제1 양태에서, 본 출원은 아미노산 서열 YEKLLDTEI(서열 번호 1) 또는 이의 기능성 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 약학적 조성물이 통증의 예방, 경감 또는 치료를 위한 약물 제조에서의 용도를 제공한다.

일부 실시예에서, 상기 기능성 변이체는 YEKLLDTEI의 LDTEI 부분에서 하나 이상의 보존성 치환에 의해 생성된 변이체이다.

일부 실시예에서, 보존성 치환은 D와 E 사이의 치환, L, V 및 I 사이의 치환 및 T와 S 사이의 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 보다 구체적인 실시예에서, 기능적 변이체는 서열 번호 1의 LDTEI 부분을 LDTEL, LDTEV, LDTDI, LDTDL, LDTDV, LDSEI, LDSEL, LDSEV, LDSDI, LDSDL, LDSDV, LETEI, LETEL, LETEV, LETDI, LETDL, LETDV, VDTEI, VDTEL, VDTEV, VDTDI, VDTDL, VDTDV, IDTEI, IDTEL, IDTEV, IDTDI, IDTDL, IDTDV, IETEI, IETEL, IETEV, IETDI, IETDL, 및 IETDV로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 서열로 대체하여 생성된 변이체이다.

일부 실시예에서, 본원에 개시된 기능적 변이체는 또한 상술한 펩타이드에 대해 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 더 높은 동일성을 갖는 아미노산 서열을 더 포함한다. 해당 분야에서 이미 알려진 바와 같이, 2가지의 단백질 사이의 "동일성"은 제1 단백질의 아미노산 서열과 이에 대한 보수적 아미노산 치환을 포함한 제2 단백질의 서열을 비교하여 결정될 수 있다. 2가지 단백질 간의 동일성은 컴퓨터 알고리즘 및 당업자에게 이미 알려진 방법을 통해 결정될 수 있다. 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성은 바람직하게 BLASTP 알고리즘을 통해 결정된다.

일부 실시예에서, 본원에 개시된 기능적 변이체는 상술한 펩타이드와 비교하여 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상의 위치에서 아미노산 잔기의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입을 포함함으로써, 상술한 펩타이드와 구별된다.

상술한 바와 같이, 기능적 변이체는 하나 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입에 의해 상기 개시된 구체적인 펩타이드와 구분될 수 있다. 이러한 변이체는 자연 발생적이거나 합성적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 하나 이상의 상기 펩타이드 서열들은 변형될 수 있고, 이들의 생물학적 활성은 본원에 기재된 바와 같이 이미 알려진 다양한 기술 중 임의의 기술에 의해 평가될 수 있다.

일부 실시예에서, 상기 아미노산 서열 YEKLLDTEI(서열 번호 1) 또는 이의 기능성 변이체를 포함하는 펩타이드는 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체 및 내연(internalization) 펩타이드를 포함하는 키메라 펩타이드이다.

세포 침투성 펩타이드라고도 알려진 "내연 펩타이드"는 단백질 약물 분야에서 널리 사용되고, 이와 결합된 활성 펩타이드가 세포에 의해 섭취 및 흡수되도록 촉진시키는 작용을 한다. 비제한적인 예시로서, 내연 펩타이드는 Tat 펩타이드일 수 있고, Tat 펩타이드의 비제한적인 예시로, YGRKKRRQRRR(서열 번호 2)이 있다.

일부 실시예에서, 상기 내연 펩타이드는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO: 2)을 포함한다.

일부 실시예에서, 상기 키메라 펩타이드는 아미노산 서열YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (SEQ ID NO: 3)을 포함한다.

상기 기술된 펩타이드는 표적에 대한 친화력을 증진시키고, 세포막을 가로질러 수송될 수 있는 능력을 촉진시키거나, 세포막을 통해 전달되도록 하기 위해 선택적으로 유도체화(예로, 아세틸화, 인산화 및/또는 글리코실화) 될 수 있음을 해당 분야의 당업자라면 이해할 것이다.

통증은 실제 또는 잠재적인 조직성 손상과 관련된 불쾌감 또는 정서적 체험이다. 통증의 병리 생리학에 따르면, 통증은 침해 수용성 통증, 비 침해 수용성 통증 및 전면적 통증으로 나뉠 수 있는바, 여기서 침해 수용성 통증에는 체성통 및 내장통이 포함되며, 비 침해 수용성 통증에는 신경성 통증, 중추성 통증, 말초 통증 및 심리적 통풍이 포함된다.

일부 실시예에 있어서, 본원에서 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 통증은 침해 수용성 통증이다. 침해 수용성 통증은 손상 자극에 의한 A8 및 C 형 신경 섬유와 같은 통각 수용기의 활성화 및 민감화에 의해 유발된 생리적 반응이다. 이러한 반응은 조직 손상의 병리 생리학적 과정이며, H⁺, 프로스타글란딘, 브라디키닌, 5-세로토닌 및 아데노신과 같은 조직 손상 과정에 생성되는 다양한 요인들이 감각 신경 말단을 자극함으로써 다양한 신경 말단 수용체를 감작시킴으로써, 신경 섬유를 따라 다양한 통증 신호를 전달하여 통증을 유발한다.

일부 실시예에 있어서, 본원에서 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 통증은 외부 응력 또는 자극에 의해 유발된 통증이다. 일부 실시예에서, 외부 응력 또는 자극은 열 자극 또는 터치일 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 본원에서 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 침해 수용성 통증은 체성통이다. 체성통은 신체 표면 (피부 조직) 또는 심층 조직 (골격 근육 조직)의 통증 수용기가 다양한 침해성 자극을 받음으로써 유발된다. 여기서 전자는 표재성 체성통증으로 알려져 있고, 후자는 심층 체성통증으로 알려져 있다.

일부 실시예에 있어서, 체성통은 화상, 베인 상처, 타박상, 어깨 통증, 사지 통증, 요통, 관절염, 건염 또는 근막염을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

일부 실시예에 있어서, 본원에서 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 침해 수용성 통증은 내장통이다. 내장통은 흔히 위치를 확인하기 힘든 가슴, 복부, 골반 장기 등에서 침투, 압박, 당김 또는 꼬임으로 인해, 이러한 부위의 통증 수용기가 활성화되어 유발되는 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 내장통은 복통, 맹장염, 췌장염 또는 소화성 궤양을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

일부 실시예에 있어서, 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 정제, 분쇄, 유화, 캡슐화, 포획 또는 동결 건조 방법에 의해 제조될 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 약학적 조성물은 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조 물질을 사용하여 통상적인 방식으로 제제화될 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 펩타이드 또는 약학적 조성물은 수용액, 바람직하게는 (주사 부위에서의 불편함을 감소시키기 위해) 행크(Hank's) 용액, 링거(Ringer's) 용액 또는 생리 식염수 또는 아세테이트 완충액과 같은 생리학적으로 호환 가능한 완충액에서 제제화될 수 있다. 용액은 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물은 사용하기 전에 멸균을 거친 비발열성 물와 같은 적합한 담체로 재구성한 분말 형태일수 있다.

일부 실시예에 있어서, 관통하고자 하는 장벽에 적합한 침투제가 제형에 사용된다.

일부 실시예에 있어서, 본 출원의 펩타이드는 정제, 환제, 트로키제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리, 현탁액 등으로 제제화될 수 있다. 분말, 캡슐 및 정제와 같은 고형 제제의 경우, 적합한 부형제는 당 (예를 들어, 필러락토오스, 수크로오스, 만니톨 및 솔비톨)과 같은 필러; 콘스타치, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸 셀룰로오스, 카르복시 프로필 메틸 셀룰로즈, 소듐 카르복시 메틸 셀룰로오스 및/또는 포비돈 (PVP)과 같은 셀룰로즈 제제; 과립 화제 및 결합제를 포함한다. 수요에 따라 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 이의 염 (예컨대, 나트륨 알기 네이트)과 같은 붕해제를 첨가할 수 있다. 수요에 따라, 고체 제제는 표준 기술을 사용하여 설탕 또는 장용성 코팅으로 코팅될 수 있다. 현탁액, 엘릭서 및 용액과 같은 경구용 액체 제제의 경우, 적합한 담체, 부형제 또는 희석제는 물, 글리세롤, 오일 및 알코올을 포함한다. 또한, 향료, 방부제, 착색제 등을 첨가할 수도 있다.

상기 제형 이외에, 본 발명의 펩타이드는 또한 저장 제제로 제조될 수도 있다. 따라서, 예를 들어, 화합물은 적절한 중합체성 물질 또는 소수성 물질 (예를 들어, 허용 가능한 오일 내의 에멀젼으로 제형됨) 또는 이온 교환 수지와 함께 제제화될 수 있거나, 또는 난용성 유도체, 예를 들어 난용성 염으로 제제화될 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 앞서 설명된 개체는 신경 손상이 없는 개체이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 건강한 개체이다.

제2 양태에서, 본 출원에는 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 이러한 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물을 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 통증의 예방, 경감 또는 치료 방법이 제공된다.

일부 실시예에서, 상기 기능성 변이체는 서열 번호 1의 LDTEI 부분에서 하나 이상의 보존성 치환(conservative substitutions)에 의해 생성된 변이체이다.

상기 기술된 펩타이드는 표적에 대한 친화력을 증진시키고, 세포막을 가로질러 수송될 수 있는 능력을 촉진시키거나, 세포막을 통해 전달되도록 하기 위해 선택적으로 유도체화(예로, 아세틸화, 인산화 및/또는 글리코실화)될 수 있음을 해당 분야의 당업자라면 이해할 것이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 통증은 침해 수용성 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 통증은 열 자극 또는 터치에 의해 유발되는 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 통증은 열이나 찌름에 의한 통증이다.

일부 실시예에 있어서, 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 침해 수용성 통증은 체성통이다. 일부 실시예에 있어서, 체성통은 화상, 베인 상처, 타박상, 어깨 통증, 사지 통증, 요통, 관절염, 건염 또는 근막염을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

일부 실시예에 있어서, 예방, 경감 또는 치료하고자 하는 침해 수용성 통증은 내장통이다. 일부 실시예에 있어서, 내장통은 복통, 맹장염, 췌장염 또는 소화성 궤양을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

일부 실시예에 있어서, 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 이러한 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물의 투여 방식에는 장관외, 정맥내, 경구, 피하, 동맥내, 두개내, 척수강내, 복강내, 국소, 비강내 또는 근육내 투여가 포함될 수 있고, 여기서, 정맥내 투여가 바람직하다.

일부 실시예에 있어서, 바람직하게, 장관외 투여용 약학적 조성물은 무균이고 실질적으로 등장성을 갖고 있다. 주사의 경우, 활성 펩타이드 또는 키메라 펩타이드는(주사 부위의 불편함을 줄이기 위하여) 수용액, 바람직하게는 행크 용액, 링거 용액 또는 생리 식염수 또는 아세테이트 완충액과 같은 생리적으로 호환 가능한 완충액에 제제화될 수 있다. 상기 용액은 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다.

선택적으로, 활성 펩타이드 또는 키메라 펩타이드는 사용 전에 멸균을 거친 비발열성 물과 같은 적합한 담체로 재구성한 분말 형태일 수 있다.

점막 투여의 경우, 관통하고자 하는 장벽에 적합한 침투제가 제제에 사용된다. 해당 투여 경로는 화합물을 비강 내로 전달하거나 설하 투여의 경우에 사용될 수 있다.

일부 실시예에서, 경구 투여의 경우, 활성 펩타이드 또는 키메라 펩타이드는 치료 대상인 환자의 경구 섭취를 위해 정제, 환제, 트로키제, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화될 수 있다. 분말, 캡슐 및 정제와 같은 경구용 고체 제제의 경우, 적합한 부형제로는 락토오스, 수크로오스, 만니톨 및 솔비톨 등 당과 같은 충전제; 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸 셀룰로오스, 카르복시 프로필 메틸 셀룰로즈(carboxypropylmethylcellulose), 나트륨 카르복시 메틸 셀룰로오스(sodium carboxymethylcellulose) 및/또는 포비돈(PVP)과 같은 셀룰로즈 제제; 과립화제 및 결합제를 포함한다. 필요할 경우, 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone), 한천 또는 알긴산 또는 이의 염(예컨대, 알긴산 나트륨)과 같은 붕해제를 첨가할 수 있다. 필요할 경우, 표준 기술을 사용하여 고형제제에 대해 설탕 또는 장용피로 코팅할 수 있다. 현탁액, 엘릭서 및 용액과 같은 경구용 액체 제제의 경우, 적합한 담체, 부형제 또는 희석제에는 물, 글리세롤, 오일 및 알코올이 포함된다. 또한, 향료, 방부제, 착색제 등이 첨가될 수도 있다.

상술한 제제 외에, 활성 펩타이드 또는 키메라 펩타이드는 저장 제제로 제형화될 수 있다. 이러한 장시간 작용 제형은 이식(예를 들어, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어 화합물은 적합한 고분자 물질 또는 소수성 물질(예를 들어, 허용 가능한 오일 내의 에멀젼으로 제형됨) 또는 이온 교환 수지와 함께 제제화될 수 있거나, 또는 난용성 유도체, 예를 들어, 난용성 염으로 제제화될 수 있다.

선택 가능한 대안으로, 기타 약물 전달 시스템이 사용될 수 있다. 키메라 펩타이드는 리포좀 및 에멀젼을 사용하여 전달될 수 있다. 디메틸 술폭시드와 같은 특정 유기 용매를 사용할 수도 있다. 또한, 화합물은 예를 들어, 치료제를 함유한 고체 고분자의 반투성 기질과 같은 지속 방출 시스템을 사용하여 전달될 수 있다.

본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물은 원하는 목적(예를 들어, 침해성 통증에 대한 예방, 경감 또는 치료)을 달성하는데 효과적인 치료적 유효량으로 투여된다. 치료적 유효량은 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물을 투여하지 않은 개체 (또는 동물 모델)의 대조군 집단에서의 통증과 비교하여, 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물의 치료를 거친 개체 (또는 동물 모델)의 뚜렷한 통증 예방, 경감 또는 치료 효과를 획득하기에 충분한 펩타이드 또는 약학적 조성물의 양을 의미한다.

일부 실시예에 있어서, 0.1 ㎍/㎏, 0.2 ㎍/㎏, 0.3 ㎍/㎏, 0.4 ㎍/㎏, 0.5 ㎍/㎏, 0.6 ㎍/㎏, 0.7 ㎍/㎏, 0.8 ㎍/㎏, 0.9 ㎍/㎏, 1 ㎍/㎏, 2 ㎍/㎏, 3 ㎍/㎏, 4 ㎍/㎏, 5 ㎍/㎏, 6 ㎍ / 8 ㎍/㎏, 9 ㎍/㎏ 또는 10 ㎍/㎏과 같은, 0.1 ㎍ 내지 10 ㎍/㎏ 범위의 투여량으로 펩타이드를 투여하였다. 일부 실시예에서, 바람직한 투여 량은 0.2 ㎍/㎏이다.

일부 실시예에 있어서, 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물의 투여량은 치료되는 대상, 대상의 무게, 통증의 중증도, 투여 경로 및 처방 의사에 의한 조정에 의해 결정된다.

일부 실시예에 있어서, 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물의 치료 유효량은 심각한 독성을 일으키지 않으면서 치료 효과를 실현할 수 있다. LD50 (모집단의 50%에 대한 치사량) 또는 LD100 (모집단의 100%에 대한 치사량)을 결정하는 등의 표준 약제 절차를 통해 세포 배양물 또는 실험동물에서 독성을 측정할 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 복용량 비율은 치료 지수이다. 실험을 통해, 본 출원의 펩타이드는 200 mg/kg의 투여량에서 특별히 뚜렷한 독성을 나타내지 않음을 확인하였다.

일부 실시예에 있어서, 본 출원의 펩타이드 또는 약학적 조성물의 효능은 적어도 2 시간 동안 지속될 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 상기 개체는 신경 손상이 없는 개체이다.

일부 실시예에 있어서, 상기 개체는 건강한 개체이다.

전술한 상세한 설명은 당업자가 본원을 보다 명확하게 이해하도록 돕기 위한 것일 뿐, 본원을 그 어떠한 방식으로 제한하려는 것이 아님을 이해할 것이다. 당업자는 설명된 실시예들에 대한 다양한 수정 및 변경을 진행할 수 있다.

[ 실시예 ]

이하의 실시예는 본원의 일부 실시예를 설명하기 위해 제공된 것으로 그 어떠한 방식으로 제한하려는 것이 아니다.

실시예 1: 활성 펩타이드 분자의 스크리닝

보고된 연구 결과에 따라, Tat 막관통 펩타이드 YGRKKRRQRRR(서열 번호 2)을 선택하고 이를 다양한 수량의 아미노산에 연결시켜 펩타이드 라이브러리를 형성하였다. 펩타이드 라이브러리 중의 키메라 펩타이드 분자와 체외 발현 및 정제된 PDZ1/2 도메인의 상호 작용에 대해 시험하고, 상호 작용력의 강도에 따라 폴리 펩타이드에 대해 초기 스크리닝을 진행하였다.

고정상 분자(리간드)는 2mg/ml의 농도에서 약 20kD의 분자량을 갖는 PDZ1/2 단백질이고, 이동상 분자(분석물)는 10mg/ml의 농도에서 약 2kD의 분자량으로 스크리닝될 폴리 펩타이드이며, CM5 칩은 Biacore 3000 장비를 통해 고정되었다. 전기 영동용 완충액은 PBS+0.005% 트윈 20을 사용하였다. 고정화는 아미노 커플링법을 통해 진행되었다. 리간드의 농도는 10 ㎍/ml이고, 고정 완충액은 10 mM 아세트산 나트륨으로서, pH 4.0이며, 고정량은 1400RU로서 유동 세포 2에 고정되었다. 사용되는 유속은 10 ㎕/ml이고 리간드는 1분 동안 로딩되었다. pH 2.0+2.5에서 10 mM Gly를 재생제로 사용하고, 재생은 30 ㎕/분의 유속으로 수행되었으며, 로딩 시간은 30초이었다.

동작 분석(Kinetic Analysis)은 아래와 같은 조건 하에 수행되었다.

대조 채널 : 유동 세포 1;

전기 영동 완충액 : PBS;

모드 : Kinetic Analysis Wizard;

농도 기울기 : 6.25n, 12.5n, 25n, 50n, 100n, 200n, 400nM;

로딩 시간 : 1분;

해리 시간 : 2분; 및

유속 : 30 ㎕/분.

데이터는 피팅 소프트웨어 Biaevaluation 4.1을 사용하여 적합(fitting)되며, 적합 모델은 1:1 바인딩 모델이다. 해리 상수 KD 값은 상호 작용력에 반비례한다.

스크리닝에 의해, PDZ1/2 도메인과 상호 작용하는 강한 능력을 갖는 키메라 펩타이드를 획득하고, 이를 P5로 명명하였고, 그 서열은 아래와 같다.

P5: YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI

아래의 실험에서 키메라 펩타이드 P5에 대해 추가적으로 실험을 진행하였다.

실시예 2: P5와 PDZ1 /2 도메인의 상호 작용을 확인하기 위한 풀다운 실험

P5가 PDZ1/2 도메인과 상호 작용할 수 있는지를 확인하기 위해 풀다운 실험을 진행하였다.

컬럼을 100㎕의 His beads와 1ml의 MCAC-0 완충액으로 5분간 평형시키고 4℃에서 진탕시켰다. 혼합물을 4℃에서 1분간 5000g으로 원심 분리하고, 상등액을 버렸다. 1 mg의 PDZ1/2 단백질을 혼합물에 첨가하고, 완충제를 첨가하여 1ml의 부피에 도달시키고, 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 결합되도록 회전시켰다. 혼합물을 4℃에서 1분간 5000g으로 원심 분리하고, 상청액을 버렸다. 1ml의 MCAC-0 완충액으로 매회 5분 동안씩 3 회 세정하였다(4 ℃에서 진탕 세정함). 1mg의 P5 단백질을 혼합물에 첨가하고, 완충액을 첨가하여 1 ml의 부피에 도달시키고, 상기 혼합물을 4℃에서 2시간 동안 결합되도록 회전시켰다. 상기 혼합물을 4℃에서 1분간 5000g으로 원심 분리하고, 상청액을 버렸다. 혼합물을 매회 5분 동안씩 1ml의 용해 완충액으로 3 회 세정하였다(4℃에서, 진탕 세정). 세정 후 20㎕의 MCAC-300을 첨가하였다. 원심 분리 후, 용출물에 대해 SDS-PAGE 분석을 진행하였다. 실험 결과는 도 1에 표시된 바와 같다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 키메라 펩타이드 P5의 용출된 밴드는 P5 및 PDZ1/2 도메인 양자를 포함하므로, 따라서 키메라 펩타이드 P5가 PDZ1/2 도메인에 결합될 수 있음을 확인하였다.

실시예 3: P5 폴리펩타이드의 핫 플레이트 진통 효과 검사

실험 절차

동물 스크리닝

240-260 g의 수컷 SD 래트 (Huafukangcheng Co., Ltd.에서 구입)를 실험용 래트로 선택하고 각 그룹당 6 마리의 래트를 3개의 그룹으로 나누어 핫 플레이트 실험을 실시하였다. 3개의 그룹에는 0.2 ㎍/㎏의 폴리 펩타이드 P5 투여 그룹; 일반 식염수 투여 그룹 및 양성 대조 약물 (이부프로펜, 50 mg/kg) 투여 그룹이 포함되었다. 실험 전에 아래와 같이 선별 검사를 실시하였다: 핫 플레이트 실험 전에, 후보 래트들을 55 ℃에서 핫 플레이트에 올려놓고, 30초 이내에 뒷발을 핥거나 발을 들지 않은 래트는 실험에서 제외시켰다.

동물 모델 생성

(Shandong Boda 의료 용품 유한 회사에서 구입한) 4.0 크롬 케트츠 (chromic catguts) (Shijiazhuang Four Medicine Co., Ltd., 에서 구입함; National Pharmaceutical Standard H13023200)를 30분 동안 연화시키기 위해 생리 식염수에 담갔다. 래트를 허벅지 중간 부분의 털을 제거하고 요오드로 닦았다. 가위로 표피 이하 1cm의 상처를 내어 J31060 지혈기로 대퇴 이두근을 찢었다. 좌골 신경이 허벅지 중간 부분으로 노출됨을 확인할 수 있었다. 다리 근위는 좌골 신경의 삼차 신경이므로, 좌골 신경의 허벅지의 중간 부분을 선택하여 4.0 chromic catguts로 부드럽게 4번 결찰(ligate)하였다. 힘 강도는 결찰 부위 근처의 근육이 약간 떨리는 정도로 적절하게 조절하였다. 인접한 결찰 부위는 1mm 간격으로 떨어져 있도록 한 후, 근육과 표피 조직을 각각 봉합하였다.

약물 투여

실험 전에 성공적으로 수술을 거친 실험군 래트한테 일회적으로 꼬리 정맥을 통해 펩타이드 P5 생리 식염수 용액 (0.2 ㎍/㎏ 용량)을 주사하고, 생리 식염수 그룹 래트한테 0.3 mL의 생리 식염수를 복강 내 주사하며, 양성 약물군 래트한테는 50 mg/kg의 투여량으로 이부프로펜 현탁액 (Shanghai Qiangsheng Pharmaceutical Co., Ltd.,에서 구입함; National Pharmaceutical Standard H19991011)을 위내 주입을 통해 투여하였다.

핫 플레이트 실험

핫 플레이트 실험은 래트가 수술을 마치고 7 일후부터 수행되었다. 래트에게는 정상적으로 먹이를 먹였고 실내 환경은 약 25℃으로 유지하였다. YLS-6B 지능형 핫 플레이트 기기 (Beijing Zhongshi Di Chuang Technology Development Co., Ltd.에서 구입함)의 온도는 약 55℃로 설정하였다. 래트를 밀봉 및 착탈 가능한 투명 플렉시 유리 용기 내의 열판기구에 놓고 뒷발 ?기 또는 점프 반응의 발생 시간을 기록하였다. 투여 후 용기에 넣은 뒤 20초간 래트에게서 반응이 관찰되지 않을 경우, 과도한 가열로 인해 발에 상해를 주는 것을 피면하기 위해 SD 래트를 꺼냈다. 이러한 경우, 래트의 통증 역치는 20초로 설정되었다. 각 래트는 최소한 30초 간격으로 2번 연속 검사를 진행하고, 검사 결과의 평균치를 계산하였다.

실험 종료 시, 생리 식염수 대조군 및 각 투여군에 대해 투여 전 투여 후 10분, 70분 및 130분에서의 래트의 가열 통증 반응 시간 (즉, 통증 역치; 단위는 초)을 기록하였다.

실험 결과

엑셀의 T-테스트 기능 (two-tailed variance)을 사용하여 모델링 전과 후 실험 래트의 가열 통증으로 인한 발 리프팅 시간 역치 사이의 통계학적 차이를 분석함으로써, 모델링이 성공했는지 여부를 평가하였다. 다음, 투여 전 및 투여 후 각 시점에서의 가열 통증 시간 역치의 차이를 분석하여 약효를 평가하였다. P<0.05는 통계학적으로 차이가 있는 것으로 간주되고, P<0.01는 통계학적으로 선명한 차이가 있는 것으로 간주된다.

실험 결과는 이하 표1 및 도 2에 나타낸 바와 같다.

약물 투여량/mg.kg^-1	모델링 전 (대조군)/s	수술 부위 약물 투여전/s	약물 투여후 상이한 시간에서의 래트 수술 부위 열 통증에 의한 발 리프팅 역치/s
약물 투여량/mg.kg^-1	모델링 전 (대조군)/s	수술 부위 약물 투여전/s	10 min	70 min	130 min
P5(0.0002)	14.10	3.55	5.09	4.59	4.79
생리 식염수	12.57	3.66	3.45	3.75	3.84
이부프로펜(50)	12.50	3.95	5.74	4.64	4.19

실험 결과, 0.2 ㎍/㎏의 투여량을 적용한 처치군 래트의 경우, 모델링 전과 후 래트 수술 부위 열 통증에 의한 발 리프팅 시간 역치(p = 0.0002)에 통계학적으로 뚜렷한 차이가 있음을 확인하였고, 이는 모델링이 성공했음을 나타낸다. 0.2 ㎍/㎏의 투여량으로 투여전과 투여 후 10분 사이에 통계학적으로 차이(p = 0.013)가 있었다. P5 투여 후 10분과 일반 생리 식염수 투여 후 10분에서도 통계학적으로 차이(P = 0.028)가 있음을 확인하였고, 이는 P5 투여후 단시간 내에 진통 효과가 나타날 수 있음을 설명한다. 또한, 0.2 ㎍/㎏의 투여량으로 P5 투여전과 투여 후 130분 사이에 통계학적으로 차이(p = 0.047)가 존재하고, 투여 후 10분과 투여 후 130분 사이에는 통계학적으로 차이가 없음(p = 0.697)을 확인하였다. 이는 투여 후 10분 내지 투여 후 130분 사이에서 진통 효과에 통계학적으로 변화가 없음을 보여준다. 즉, 폴리펩타이드 P5의 치료 효과는 적어도 130분 동안 지속될 수 있다.

양성 약물 대조군의 결과에 따르면, 이부프로펜을 50 mg/kg의 용량으로 처치한 래트의 경우, 건강측 부위과 수술 부위 발 리트팅 역치는 통계학적으로 차이가 있음(p<0.01)을 확인하였고, 이는 모델링이 성공적임을 나타낸다. 투여전과 투여 후 10분에서 통계학적으로 뚜렷한 차이가 나타났으며 (p = 0.03), 이부프로펜 투여 후 짧은 시간 내에 진통 효과가 나타남을 알 수 있었다. 그러나 이부프로펜 투여 130분 후와 투여 전 래트의 수술 부위 발 리프팅 시간 역치는 통계학적으로 차이가 없음(p> 0.05)을 확인하였고, 이는 치료 효과가 130분 동안 지속될 수 없음을 나타낸다.

실시예 4: 니들링 실험에서 폴리펩타이드 P5의 진통 효과 평가

실험 절차

동물 스크리닝

240-260 g의 수컷 SD 래트 (Huafukangcheng Co., Ltd.에서 구입)를 실험용 래트로 선택하고 각 그룹당 6 마리의 래트를 3개의 그룹으로 나누어 니들링 실험을 실시하였다. 3개의 그룹에는 0.2 ㎍/㎏의 폴리 펩타이드 P5 투여 그룹; 일반 식염수 투여 그룹 및 양성 대조 약물 (이부프로펜, 50 mg/kg) 투여 그룹이 포함되었다.

모델링

(Shandong Boda 의료 용품 유한 회사에서 구입한) 4.0 크롬 케트츠 (chromic catguts) (Shijiazhuang Four Medicine Co., Ltd., 에서 구입함; National Pharmaceutical Standard H13023200)를 30분 동안 연화시키기 위해 생리 식염수에 담갔다. 래트를 허벅지 중간 부분의 털을 제거하고 요오드로 닦았다. 가위로 표피 이하 1cm의 상처를 내어 J31060 지혈기로 대퇴 이두근을 찢었다. 좌골 신경이 허벅지 중간 부분으로 노출됨을 확인할 수 있었다. 다리 근위는 좌골 신경의 삼차 신경이므로, 좌골 신경의 허벅지의 중간 부분을 선택하여 4.0 chromic catguts로 부드럽게 4번 결찰(ligate)하였다. 힘 강도는 결찰 부위 근처의 근육이 약간 떨리는 정도로 적절하게 조절하였다. 인접한 결찰 부위는 1mm 간격으로 떨어져 있도록 하고, 그 다음 근육과 표피 조직을 각각 봉합하였다.

약물 투여

실험 전에 성공적으로 수술을 거친 실험군 래트한테 일회로 꼬리 정맥을 통해 펩타이드 P5 생리 식염수 용액 (0.2 ㎍/㎏ 용량)을 주사하고, 생리 식염수 그룹 래트한테 0.3 mL의 생리 식염수를 복강 내 주사하며, 양성 약물군 래트한테는 50 mg/kg의 투여량으로 이부프로펜 현탁액 (Shanghai Qiangsheng Pharmaceutical Co., Ltd.,에서 구입함; National Pharmaceutical Standard H19991011)을 위내 주입을 통해 투여하였다.

니들링 실험

수술 후 14일 째에 투여군의 래트를 투여 전과 투여 후 10분/70분/130분에서 시험을 시작하였다. 실험 래트를 플렉시 글라스 관찰 챔버에 넣고 래트가 더이상 주변을 두리번거리지 않을 때까지 5분 동안 환경에 적응시켰다. ZS-CTY 족부 니들링 시스템 (Beijing Zhongshi Di Chuang Technology Development Co., Ltd.에서 구입)은 win7 32 비트 컴퓨터에 연결하고, 테스트 소프트웨어를 작동하여 장비의 제로 포인트를 보정한 후, 10g 무게를 더하여 다시 보정하였다. 그 다음, vonFrey 프로브를 사용하여 래트의 테스트하고자 하는 뒷다리 중간 부분을 천천히 부드럽게 자극하여 래트의 발 움츠림 반응을 관찰하였다. 래트가 자극으로 인해 신속한 발 움츠림 반응을 보인다면, 이들을 양성 반응으로 표기하였다. 신체 활동으로 인한 래트의 발 움츠림 반응은 여기서 제외되었다. 각 시점에서 2회씩 기록하고, 평균값을 산출하여 니들 통증에 인한 발 리프팅 역치(g)를 얻었다. 족부 니들링 시스템 (Beijing Zhongshi Di Chuang Technology Development Co., Ltd.에서 구입, lot 번호: 20160101060001)을 10g 무게로 제로 포인트 조정을 진행한 후, 래트의 발바닥을 바늘로 자극할 경우, 기본 판독값에는 여전히 변동이 존재하며, 변동은 일반적으로 +3 ~ + 5g의 범위를 갖고, 상기 값은 최종값에서 차감되어야 한다. 그래도 기준선이 있다면 이는 제외되어야 한다.

실험 결과

EXCEL의 T-테스트 기능 (양측 분산)을 사용하여 실험 래트의 치료를 거치지 않은 부위와 수술 부위에서의 니들링에 의한 발 리프팅 역치의 통계학적 차이를 분석함으로써 모델링의 성공 여부를 평가하였고, 이어서, 투여 전과 투여 후 각 시점에서의 니들링 통증 역치의 차이를 분석함으로써 약효 및 약 효과 지속 시간을 평가하였다. P <0.05는 통계학적으로 차이가 있음을 의미하고, P <0.01는 통계학적으로 뚜렷한 차이가 있음을 의미한다.

실험 결과는 이하 표 2 및 도 3에 나타난 바와 같다.

표 2: 폴리 펩타이드 P5로 처치한 래트의 통증 역치를 측정한 결과

약물 투여량/mg.kg^-1	간강 부위 (대조군)/g	수술 부위 투여 전/g	투여 후 상이한 시간에서의 래트 수술 부위의 니들링에 의한 발 리프팅 역치/g
약물 투여량/mg.kg^-1	간강 부위 (대조군)/g	수술 부위 투여 전/g	10 min	70 min	130 min
P5(0.0002)	68.27	33.38	49.81	47.34	48.32
생리 식염수	80.10	30.86	29.52	31.44	31.19
이부프로펜(50)	73.65	28.72	46.24	36.21	38.88

실험 결과, 0.2 ㎍/㎏의 투여량의 처치군 래츠의 건강 부위와 수술 부위에서 니들링에 의한 발 리프팅 역치는 통계학적으로 차이가 있었고 (p = 0.0004), 이는 모델링이 성공적임을 의미한다. 0.2 ㎍/㎏ 투여량의 투여군 래트에 있어서, 투여 전과 투여 후 10분 사이 래트 수술 부위에서 니들링에 의한 발 리프팅 역치는 통계학적 차이가 있었으며 (p = 0.03); P5 투여 후 10분과 생리 식염수 투여 후 10분 사이에서 래트 수술 부위에서 니들링에 의한 발 리프팅 역치는 통계학적으로 차이가 있었고 (P = 0.03), 이는 P5 투여 후 단시간 내에 진통 효과가 발생할 수 있음을 보여준다. 또한, 0.2 ㎍/㎏의 투여량의 투여군 래트에 있어서, P5 투여전과 투여 후 130분에서 래트 수술 부위에서 니들링에 의한 발 리프팅 역치는 통계학적으로 차이가 있었고 (p = 0.03)가 있으며; 투여 후 10분과 투여 후 130분에서 래트 수술 부위에서 니들링에 의한 발 리프팅 역치는 p=0.687으로 통계학적으로 차이가 있었으며, 이는 투여후 130분 내에 니들링에 의한 발 리프팅 시간에는 통계학적 변화가 없음을 의미한다. 즉, 폴리펩타이드 P5의 치료 효과는 적어도 130분 동안 지속될 수 있다.

다른 한편, 양성 약물 대조군의 결과에 따르면, 이부프로펜을 50 mg/kg의 용량으로 처치한 래트의 경우, 건강 부위와 수술 부위 발 리트팅 힘 강도의 역치에는 통계학적으로 차이가 있음(p<0.01)을 확인하였고, 이는 모델링이 성공적임을 나타낸다. 투여전과 투여후 10분에서 통계학적으로 뚜렷한 차이가 없었으며 (p=0.069), P5 투여 후 10분과 생리 식염수 투여후 10분에서도 마찬가지로 통계학적으로 뚜렸한 차이가 없었다. 그리고, 이부프로펜 투여 130 분 후와 투여 전의 경우, p>0.05임을 확인하였고, 이는 양성 약물의 치료 효과가 130분 동안 지속될 수 없음을 나타내며, 따라서 폴리펩타이드 P5의 진통 효과는 양성 약물보다 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 5: 급성 독성 평가

급성 독성 실험은 래트에 대해 진행되었다. 결과는 P5가 200 mg/kg 체중의 투여량으로 래트에게 치명적인 치사 효과 및 기타 명확한 독성 부작용이 없음을 확인할 수 있었다.

본 명세서에 인용된 모든 간행물 또는 특허 문헌에서 각각 구체적으로 본원을 참조로서 인용함을 명확히 지시한 것과 같이, 이러한 간행물 및 특허 문헌은 본원에 참고로 인용된다. 본 명세서에 개시된 사상 및 범위를 벗어나지 않는 한 본 명세서에 개시된 다양한 실시예에 대해 다양한 변경 및 등가적인 대체를 가할 수 있다. 본 명세서의 실시예의 임의의 특징, 단계 또는 실시예는 문맥상 달리 언급되지 않는 한 임의의 기타 특징, 단계 또는 실시예와 조합하여 사용될 수 있다.

<110> Biocells (Beijing) Biotech Co., Ltd <120> USE OF NEUROEXCITATORY INJURY-RELATED POLYPEPTIDES FOR PREVENTING, ALLEVIATING OR TREATING PAIN <130> PI19-014 <150> PCT/CN2017/104750 <151> 2017-09-30 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P5 active peptide <400> 1 Tyr Glu Lys Leu Leu Asp Thr Glu Ile 1 5 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Tat internalization peptide <400> 2 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P5 chimeric peptide <400> 3 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Tyr Glu Lys Leu Leu 1 5 10 15 Asp Thr Glu Ile 20

Claims

개체의 통증 예방, 경감 또는 치료를 위한 약물의 제조에서의, 아미노산 서열 YEKLLDTEI (서열 번호 1) 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물의 용도.
아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물을 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 통증의 예방, 경감 또는 치료 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 기능성 변이체는 YEKLLDTEI의 LDTEI 부분에서 하나 이상의 보존성 치환에 의해 생성된 변이체이고, 바람직하게, 상기 보존성 치환은 D와 E 사이의 치환, L, V 및 I 사이의 치환 및 T와 S 사이의 치환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
제3항에 있어서,
상기 기능성 변이체는 YEKLLDTEI의 LDTEI 부분을 LDTEL, LDTEV, LDTDI, LDTDL, LDTDV, LDSEI, LDSEL, LDSEV, LDSDI, LDSDL, LDSDV, LETEI, LETEL, LETEV, LETDI, LETDL, LETDV, VDTEI, VDTEL, VDTEV, VDTDI, VDTDL, VDTDV, IDTEI, IDTEL, IDTEV, IDTDI, IDTDL, IDTDV, IETEI, IETEL, IETEV, IETDI, IETDL, 및 IETDV으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 서열로 대체하여 생성된 변이체인 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
상기 청구항 중 임의의 한 항에 있어서,
상기 펩타이드는 아미노산 서열 YEKLLDTEI 또는 이의 기능적 변이체 및 내연 펩타이드를 포함하는 키메라 펩타이드이고, 바람직하게, 상기 내연 펩타이드는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRR (서열 번호 2)를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
제5항에 있어서,
상기 키메라 펩타이드는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (서열 번호 3)를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
상기 청구항 중 임의의 한 항에 있어서,
상기 통증은 침해 수용성 통증이고, 바람직하게, 상기 통증은 외부 응력 또는 자극에 의해 유발된 통증이며, 더욱 바람직하게, 상기 외부 응력 또는 자극은 열 자극 또는 터치인 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
제7항에 있어서,
상기 침해 수용성 통증은 체성통 및/또는 내장통인 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
제8항에 있어서,
상기 체성통은 화상, 상처, 타박상, 어깨 통증, 사지 통증, 요통, 관절염, 건초염 또는 근막염을 포함하고, 및/또는 상기 내장통은 복통, 맹장염, 췌장염 또는 소화성 궤양을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.
상기 청구항 중 임의의 한 항에 있어서,
상기 개체는 신경 손상이 없는 개체이고, 바람직하게, 상기 개체는 건강한 개체인 것을 특징으로 하는 용도 또는 방법.