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KR20190065183A - Pd-1 항체 - Google Patents

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KR20190065183A
KR20190065183A KR1020187018317A KR20187018317A KR20190065183A KR 20190065183 A KR20190065183 A KR 20190065183A KR 1020187018317 A KR1020187018317 A KR 1020187018317A KR 20187018317 A KR20187018317 A KR 20187018317A KR 20190065183 A KR20190065183 A KR 20190065183A
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KR
South Korea
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seq
amino acid
acid sequence
ser
antibody
Prior art date
Application number
KR1020187018317A
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English (en)
Inventor
앤디 춘
쳉 첸
샤오린 리우
대-차오 마이클 유
Original Assignee
이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드
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Publication date
Application filed by 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 filed Critical 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드
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Abstract

본 발명은 인간 프로그램화된 세포 사멸 1 (PD-1)에 결합하는 항체에 관한 것이고, 단독으로 및 화학요법 및 다른 암 치료제와 함께 조합하여 암을 치료하는 데 유용할 수 있다.

Description

PD-1 항체
본 발명은 의약의 분야에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 인간 프로그램화된 세포 사멸 1 (PD-1)에 결합하는 항체에 관한 것이고, 단독으로 및 화학요법 및 다른 암 치료제와 함께 조합하여 암을 치료하는 데 유용할 수 있다.
종양 세포는 다중 기전을 통해 면역계에 의한 검출 및 제거를 회피한다. 면역 체크포인트 경로는 자기-관용 유지 및 활성화된 T 세포 제어에서 사용되지만, 암 세포는 파괴를 막기 위해 상기 경로를 사용할 수 있다. PD-1/인간 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1 (PD-L1) 경로는 상기와 같은 하나의 면역 체크포인트이다. 인간 PD-1은 T 세포에서 발견되고, PD-L1 및 인간 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 2 (PD-L2)의 PD-1에의 결합이 T 세포 증식 및 시토카인 생산을 억제시킨다. 그러므로, PD-L1 및 PD-L2의 종양 세포 생산을 통해 T 세포 감시로부터의 회피할 수 있다.
인간 PD-1에 대한 완전 인간 IgG4 (S228P) 항체인 니볼루맙은 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2에의 결합을 억제시키는 것으로 밝혀졌고, 다양한 임상 시험에서 시험되어 왔다 (문헌 [Wang et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(9):846]). PD-1에 대한 인간화 IgG4 (S228P) 항체인 펨브롤리주맙 (종전의 람브롤리주맙)은 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2에의 결합을 억제시키는 것으로 밝혀졌고, 다양한 임상 시험에서 시험되어 왔다 (WO2008156712 및 문헌 [Hamid et al., N Engl J Med (2013) 369:2]).
인간 PD-1에 결합하여 그의 PD-L1 및 PD-L2와의 상호작용을 중화시키는 대안적 항체를 제공하는 것이 여전히 요구되고 있다. 특히, 높은 친화도로 인간 PD-1에 결합하는 항체를 제공하는 것이 여전히 요구되고 있다. 또한, PD-L1 및 PD-L2와의 인간 PD-1 상호작용을 효과적으로 차단하는 항체를 제공하는 것이 여전히 요구되고 있다.
본 발명의 제1 측면은 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 PD-1 (서열 번호(SEQ ID NO): 1)에 결합하는 항체로서, 여기서,
경쇄는 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어진 경쇄 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고,
중쇄는 중쇄 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, 여기서,
HCDR1은 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2 (xd-16 A, xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D, 및/또는 xd-16 E의 HCDR1의 경우))에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어지고;
HCDR2는
GIWPSFGTANYAQKFQG (서열 번호: 3 (xd-16 A의 HCDR2의 경우)),
GIWPSFGTASYAQKFQG (서열 번호: 4 (xd-16 B의 HCDR2의 경우)),
GIWPSFGTASYAQKFRG (서열 번호: 5 (xd-16 C의 HCDR2의 경우)),
GIWPSFDTANYAQKFRG (서열 번호: 6 (xd-16 D의 HCDR2의 경우)), 또는
GIWPSFGTANYARKFQG (서열 번호: 7 (xd-16 E의 HCDR2의 경우))에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어지고;
HCDR3은 ARAEYSSTGTFDY (서열 번호: 8 (xd-16 A, xd-16 C, 및/또는 xd-16 D의 HCDR3의 경우)), 또는 ARAEYSSTGIFDY (서열 번호: 9 (xd-16 B, 및/또는 xd-16 E의 HCDR3의 경우))에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어지는 것인 항체를 제공한다.
본 발명의 특정 항체는 특정 조건하에서 니볼루맙 및 펨브롤리주맙보다 큰 높은 친화도로 인간 PD-1에 결합한다. 추가로, 본 발명의 특정 항체는 생체내 모델에서 니볼루맙 및 펨브롤리주맙에 비해 우선적인 증진된 동종반응성을 매개한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어지고, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 아미노산 서열 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2), GIWPSFGTANYAQKFQG (서열 번호: 3), 및 ARAEYSSTGTFDY (서열 번호: 8)로 이루어진 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어지고, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 아미노산 서열 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2), GIWPSFGTASYAQKFQG (서열 번호: 4), 및 ARAEYSSTGIFDY (서열 번호: 9)로 이루어진 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어지고, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 아미노산 서열 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2), GIWPSFGTASYAQKFRG (서열 번호: 5), 및 ARAEYSSTGTFDY (서열 번호: 8)로 이루어진 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어지고, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 아미노산 서열 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2), GIWPSFDTANYAQKFRG (서열 번호: 6), 및 ARAEYSSTGTFDY (서열 번호: 8)로 이루어진 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이 각각 아미노산 서열 RASQGISSWLA (서열 번호: 10), SAASSLQS (서열 번호: 11), 및 QQANHLPFT (서열 번호: 12)로 이루어지고, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 아미노산 서열 KASGGTFSSTAIS (서열 번호: 2), GIWPSFGTANYARKFQG (서열 번호: 7), 및 ARAEYSSTGIFDY (서열 번호: 9)로 이루어진 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 1 또는 2개의 경쇄(들) (LC) 및 1 또는 2개의 중쇄(들) (HC)를 포함하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하고, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하고, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 또는 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 13에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 14에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 15에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 16에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 중 하나가 경쇄 중 하나와 쇄간 디술피드 결합을 형성하고, 나머지 다른 한 중쇄는 나머지 다른 한 경쇄와 쇄간 디술피드 결합을 형성하고, 중쇄 중 하나가 나머지 다른 한 중쇄와 2개의 쇄간 디술피드 결합을 형성하는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 글리코실화된 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 경쇄는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하고, 중쇄는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하고, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 또는 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 13에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 14에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 15에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 16에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, LC는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는, 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 중쇄 중 하나는 경쇄 중 하나와 쇄간 디술피드 결합을 형성하고, 나머지 다른 한 중쇄는 나머지 다른 한 경쇄와 쇄간 디술피드 결합을 형성하고, 중쇄 중 하나는 나머지 다른 한 중쇄와 2개의 쇄간 디술피드 결합을 형성하는 것인 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서, 항체가 글리코실화된 것인 항체를 제공한다.
본 발명의 제2 측면은 본 발명의 상기 항체, 그의 단편 또는 유도체 중 어느 하나를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 A S228P IgG4의 HC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 25에 의해 제시되는 바와 같다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 B S228P IgG4의 HC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 26에 의해 제시되는 바와 같다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 C S228P IgG4의 HC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 27에 의해 제시되는 바와 같다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 D S228P IgG4의 HC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 28에 의해 제시되는 바와 같다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 E S228P IgG4의 HC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 29에 의해 제시되는 바와 같다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, xd-16 A, xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D, 및 xd-16 E의 LC를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 30에 의해 제시되는 바와 같다.
본 발명의 제3 측면은 제3 측면의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명의 제4 측면은 제3 측면의 백터를 포함하는 숙주 세포이거나, 또는 상기 세포의 게놈이 제2 측면에 따른 외인성 폴리뉴클레오티드와 함께 통합되어 있는 것인 숙주 세포를 제공한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 포유동물 세포, 바람직하게, CHO 세포이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있는 것인 포유동물 세포를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있는 것인 포유동물 세포를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있는 것인 포유동물 세포를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있는 것인 포유동물 세포를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있는 것인 포유동물 세포를 제공한다.
본 발명의 제5 측면으로, 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 제조하는 방법으로서, 상기 항체가 발현되도록 하는 조건하에서 제4 측면의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는 것인 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 항체를 제공한다.
본 발명의 제6 측면은 본 발명의 항체, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 제7 측면은 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태에서, 암을 치료하는 방법은 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서, 암은 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간암이다.
추가 실시양태에서, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 항체를 1종 이상의 항종양제(들), 면역-항암제(들), 또는 그의 조합과 함께 동시, 별개, 또는 순차적 조합으로 투여하는 것을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 항종양제로는 라무시루맙, 네시투무맙, 올라라투맙, 갈루니세르팁, 아베마시클립, 시스플라틴, 카르보플라틴, 다카르바진, 리포솜 독소루비신, 도세탁셀, 시클로포스파미드 및 독소루비신, 나벨빈, 에리불린, 파클리탁셀, 주사가능 현탁액용 파클리탁셀 단백질-결합 입자, 익사베필론, 카페시타빈, FOLFOX (류코보린, 플루오로우라실, 및 옥살리플라틴), FOLFIRI (류코보린, 플루오로우라실, 및 이리노테칸), 세툭시맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
추가 실시양태에서, 상기 면역-항암제로는 니볼루맙, 이필리무맙, 피딜리주맙, 펨브롤리주맙, 트레멜리무맙, 우렐루맙, 리릴루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제8 측면은 요법에서 사용하기 위한 용도의 본 발명의 항체를 제공한다.
본 발명의 제9 측면은 암 치료에서 사용하기 위한 용도의 본 발명의 항체를 제공한다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간암인 것인, 암 치료에서 사용하기 위한 용도의 본 발명의 항체를 제공한다.
본 발명의 제10 측면은 암 치료에서 병용하여 사용하기 위한 용도의, 1종 이상의 항종양제, 면역-항암제, 또는 그의 조합과 함께 동시, 별개, 또는 순차적으로 조합되는 본 발명의 측면들 중 어느 하나의 항체를 제공한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 항종양제로는 라무시루맙, 네시투무맙, 올라라투맙, 갈루니세르팁, 아베마시클립, 시스플라틴, 카르보플라틴, 다카르바진, 리포솜 독소루비신, 도세탁셀, 시클로포스파미드 및 독소루비신, 나벨빈, 에리불린, 파클리탁셀, 주사가능 현탁액용 파클리탁셀 단백질-결합 입자, 익사베필론, 카페시타빈, FOLFOX (류코보린, 플루오로우라실, 및 옥살리플라틴), FOLFIRI (류코보린, 플루오로우라실, 및 이리노테칸), 세툭시맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
추가 실시양태에서, 상기 면역-항암제로는 니볼루맙, 이필리무맙, 피딜리주맙, 펨브롤리주맙, 트레멜리무맙, 우렐루맙, 리릴루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제11 측면은 암 치료용 제약 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 항체의 용도를 제공한다.
추가 실시양태에서, 암은 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간세포 암종이다.
추가 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 항종양제 및/또는 면역-항암제 중 1종 이상의 것을 추가로 포함한다.
추가 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 그를 필요로 하는 대상체에게 항종양제 및/또는 면역-항암제 중 1종 이상의 것과 함께 동시, 별개, 또는 순차적 조합으로 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 상기 항종양제로는 라무시루맙, 네시투무맙, 올라라투맙, 갈루니세르팁, 아베마시클립, 시스플라틴, 카르보플라틴, 다카르바진, 리포솜 독소루비신, 도세탁셀, 시클로포스파미드 및 독소루비신, 나벨빈, 에리불린, 파클리탁셀, 주사가능 현탁액용 파클리탁셀 단백질-결합 입자, 익사베필론, 카페시타빈, FOLFOX (류코보린, 플루오로우라실, 및 옥살리플라틴), FOLFIRI (류코보린, 플루오로우라실, 및 이리노테칸), 세툭시맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
추가 실시양태에서, 상기 면역-항암제로는 니볼루맙, 이필리무맙, 피딜리주맙, 펨브롤리주맙, 트레멜리무맙, 우렐루맙, 리릴루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서, 상기 및 하기 (예컨대, 실시예에서) 구체적으로 기술되는 기술상의 특징은 서로 조합될 수 있으며, 이로써, 하나하나씩 설명될 필요가 없는, 새로운 또는 바람직한 기술상의 해결안을 구성할 수 있다는 것을 이해하여야 한다.
상세한 설명
본 발명의 항체는 조작된, 비-자연적으로 발생된 폴리펩티드 복합체이다. 본 발명의 DNA 분자는 본 발명의 항체에서의 폴리펩티드 중 하나의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 비-자연적으로 발생된 DNA 분자이다.
본 발명의 항체는 조작된 CDR을 가지고, 항체의 일부 부분 (프레임워크, 힌지 영역, 및 불변 영역 모두 또는 그의 일부)이 인간 게놈 서열로부터 유래된 프레임워크 및 불변 영역과 동일하거나, 실질적으로 동일한 인간 기원 (실질적으로 인간)의 것이 되도록 설계된다. 완전 인간 프레임워크, 힌지 영역, 및 불변 영역은 상기 인간 생식계열 서열 뿐만 아니라, 자연적으로 발생된 체세포 돌연변이를 가지는 서열 및 조작된 돌연변이를 가지는 서열이다. 본 발명의 항체는 그 안에 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 함유하는 완전 인간 프레임워크, 힌지, 또는 불변 영역으로부터 유래된 프레임워크, 힌지, 또는 불변 영역을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명의 항체는 바람직하게는 인간에서 실질적으로 비-면역원성이다.
본 발명의 항체는 IgG 유형 항체이고, 쇄내 및 쇄간 디술피드 결합을 통해 가교되는 4개의 아미노산 쇄 (2개의 "중"쇄 및 2개의 "경"쇄)를 가진다. 각 중쇄는 N-말단 HCVR 및 중쇄 불변 영역 ("HCCR")으로 구성된다. 각 경쇄는 LCVR 및 경쇄 불변 영역 ("LCCR")으로 구성된다. 특정 생물학적 시스템에서 발현될 때, 천연 인간 Fc 서열을 가지는 항체는 Fc 영역에서 글리코실화된다. 전형적으로, 글리코실화는 항체의 Fc 영역 중 고도로 보존되는 N-글리코실화 부위에서 발생한다. N-글리칸은 전형적으로 아스파라긴에 부착된다. 항체는 또한 다른 위치에서도 글리코실화될 수 있다.
임의적으로, 본 발명의 항체는 Fc 수용체-매개 염증 기전에 관여하거나, 또는 보체를 활성화시키는 능력의 감소와 이에 따른 이펙터 기능의 감소 때문에 인간 IgG4 Fc 영역으로부터 유래된 Fc 부분을 함유한다.
S228P 돌연변이는 절반-항체 형성 (IgG4 항체에서의 절반-분자의 동적 교환 현상)을 방지하는 힌지 돌연변이이다. F234A 및 L235A 돌연변이는 이미 낮은 인간 IgG4 이소형의 이펙터 기능을 추가로 감소시킨다.
HCVR 및 LCVR 영역은 프레임워크 영역 ("FR")으로 지칭되는, 더욱 잘 보존되어 있는 영역 사이에 배치된, 상보성 결정 영역 ("CDR")으로 지칭되는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 HCVR 및 LCVR은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 아미노-말단에서 카르복시-말단까지 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 배열된다. 본원에서, 중쇄의 3개의 CDR은 "HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3"으로 지칭되고, 경쇄의 3개의 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 지칭된다. CDR은 항원과 특이적인 상호작용을 형성하는 잔기 대부분을 함유한다. 현재 서열 기술에 사용되는, 항체에 대한 CDR 배정 시스템은 3가지가 존재한다. 카바트 (Kabat) CDR 정의 (문헌 [Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)])는 항체 서열 가변성에 기초한다. 코티아(Chothia) CDR 정의 (문헌 [Chothia et al., "Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987)]; [Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)])는 항체의 3차원 구조 및 CDR 루프의 위상학에 기초한다. 코티아 CDR 정의는 HCDR1 및 HCDR2를 제외하면, 카바트 CDR 정의와 동일하다. 노스(North) CDR 정의 (문헌 [North et al., "A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations", Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011)])는 다수의 결정 구조를 사용하는 친화도 전파 클러스터링에 기초한다. 본 발명의 목적을 위해, 노스 CDR 정의가 사용된다.
HCVR 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 HCVR-코딩 DNA를 중쇄 불변 영역을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장의 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 뿐만 아니라, 다른 포유동물의 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있다. 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 예컨대, 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다.
LCVR 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 LCVR-코딩 DNA를 경쇄 불변 영역을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장의 경쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 뿐만 아니라, 다른 포유동물의 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있다. 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열이 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된 후에 숙주 세포에서 발현될 것이다. 발현 벡터는 전형적으로 숙주 유기체에서 에피솜으로서, 또는 숙주 염색체 DNA의 필수 부분으로서 복제가능하다. 통상적으로, 발현 벡터는 원하는 DNA 서열로 형질전환된 상기 세포의 검출을 허용하기 위한 선별 마커, 예컨대, 테트라시클린, 네오마이신, 및 디히드로폴레이트 리덕타제를 함유할 것이다.
본 발명의 항체는 포유동물 세포, 예컨대, CHO, NS0, HEK293 또는 COS 세포에서 용이하게 생산될 수 있다. 숙주 세포는 당업계에 널리 공지된 기술을 사용하여 배양된다.
관심 폴리뉴클레오티드 서열 (예컨대, 항체의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 발현 제어 서열)을 함유하는 벡터는 세포 숙주의 유형에 따라 다른, 널리 공지된 방법에 의해 숙주 세포 내로 전달될 수 있다.
다양한 단백질 정제 방법이 사용될 수 있고, 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990)] 및 [Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994)]에 기술되어 있다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 항체, 또는 상기 항체를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 제공된다. 본원에서 사용되는 바, "단리된"이라는 용어는 세포 환경에서 발견되는 임의의 다른 거대분자 종이 없는 또는 실질적으로 없는 단백질, 펩티드, 또는 핵산을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, "실질적으로 없는"이란, 관심 단백질, 펩티드, 또는 핵산이 제시된 거대분자 종을 80% 초과 (몰 기준), 바람직하게는 90% 초과, 보다 바람직하게는 95% 초과로 포함한다는 것을 의미한다.
본 발명의 항체, 또는 상기 항체를 포함하는 제약 조성물은 비경구 경로 (예컨대, 피하 및 정맥내)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 항체는 단독으로 환자에게 단일 또는 다중 용량으로 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 투여될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 당업계에 널리 공지된 방법 (예컨대, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed. (1995), A. Gennaro et al., Mack Publishing Co.])에 의해 제조될 수 있고, 본원에 개시된 바와 같이, 항체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함한다.
"치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")라는 용어는 현존 증상, 장애, 병태, 또는 질환의 진행 또는 중증도를 저속화, 차단, 저지, 완화, 정지, 감소, 또는 역전시키는 것을 지칭한다.
인간 PD-1에 대한 항체의 친화도와 관련하여 본원에서 사용되는 "결합하다"라는 것은 달리 명시되지 않는 한, 본질적으로 본원에 기술된 바와 같이, 37℃에서 표면 플라스몬 공명 (SPR) 바이오센서를 사용하는 것을 비롯한, 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정되는 바, KD가 약 1 x10-9 M 미만, 바람직하게는, 약 2 x 10-10 M 미만인 것을 의미하는 것으로 의도된다.
본 개시내용의 목적을 위해, "고친화도"라는 용어는 인간 PD-1에 대한 KD가 약 1150 pM 미만인 것을 지칭한다. KD 값은 검정 섹션에서 "결합 동역학적 성질 및 친화도"에 기술된 바와 같이 결합 동역학적 성질에 의해 확립된다.
본 발명은 제약상 허용되는 담체(들) 또는 부형제, 및 안전하고, 효과적인 양으로 본 발명의 폴리펩티드, 또는 그의 효능제를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 상기 담체로는 염수, 완충제 용액, 글루코스, 물, 글리세롤, 에탄올, 또는 그의 조합을 포함한다 (그러나, 이에 제한되지 않는다). 제약 제제는 투여 모드에 부합하여야 한다. 본 발명의 제약 조성물은 주사 형태로 제조될 수 있고, 예컨대, 종래 방법에 의해 글루코스 또는 다른 보조제를 함유하는 염수 또는 수용액을 이용하여 제조될 수 있다. 제약 조성물, 예컨대, 정제, 및 캡슐제는 종래 방법으로 제조될 수 있다. 제약 조성물, 예컨대, 주사제, 액제, 정제 및 캡슐제는 바람직하게, 멸균 조건에서 제조될 수 있다. 활성 성분의 투여량은 치료학상 유효량, 예를 들어, 1일당 약 1 ㎍/kg (체중)- 5 mg/kg (체중)이다. 더욱이, 본 발명의 폴리펩티드는 다른 치료학적 작용제와 함께 추가로 사용될 수 있다.
"유효량"은 연구원, 의사, 또는 다른 임상의가 추구하는 조직, 시스템, 동물, 포유동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응 또는 그에 대한 원하는 치료학적 효과를 도출하는, 본 발명의 항체 또는 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물의 양을 의미한다. 항체의 유효량은 인자, 예컨대, 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 도출해낼 수 있는 항체의 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 항체의 임의의 독성 또는 유해 효과를 치료학상 유익한 효과가 능가하는 양이다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다. 본 실시예는 단지 본 발명을 예시하고자 하는 것이며, 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 구체적인 조건이 구체적으로 명시되지 않는 하기 실시예 중의 실험 방법을 위해, 이는 통상의 조건, 예컨대, 문헌 [Sambrook. et al., in Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012]에 기술되어 있는 조건하에서, 또는 제조사의 지시에 따라 수행된다. 달리 언급되지 않는 한, 백분율(%) 및 부는 중량% 및 중량부를 지칭한다.
본 발명의 주요 이점:
xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는 1가 및 고결합력(avid)의 결합 모드, 둘 모두로 펨브롤리주맙 및 니볼루맙보다 더 높은 친화도로 인간 PD-1에 결합한다. 각 농도에서 항체 xd-16 B는 면역 세포 활성화 검정법에서 니볼루맙 및 펨브롤리주맙과 대등하게, 또는 그보다 더 우수한 정도로 IL-2 또는 IFN-γ을 증가시켰다.
실시예
실시예 1: 항체 발현 및 정제
항체 A - 항체 I의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 폴리펩티드, 완전한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열, 및 그를 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 하기 "아미노산 및 뉴클레오티드 서열"이라는 표제의 섹션에 열거되어 있다. 추가로, 항체 A - 항체 I의 경쇄, 중쇄, 경쇄 가변 영역, 및 중쇄 가변 영역에 대한 서열 번호가 표 1에 제시되어 있다.
항체 A - 항체 I를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 본 발명의 항체는 본질적으로 하기와 같이 제조되고, 정제될 수 있다. 적절한 숙주 세포, 예컨대, HEK 293 또는 CHO는 미리 결정된 최적의 HC:LC 벡터 비 (예컨대, 1:3 또는 1:2) , 또는 HC 및 LC 둘 모두를 코딩하는 단일 벡터 시스템을 사용하여 항체를 분비하기 위한 발현 시스템에 의해 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염될 수 있다. 항체 분비가 이루어진 정화된 배지는 통용되는 다수의 기술 중 임의의 것을 사용하여 정제될 수 있다. 예를 들어, 배지는 상용 완충제, 예컨대, 포스페이트 완충처리된 염수 (pH 7.4)로 평형화된 맙셀렉트(MabSelect) 칼럼 (GE 헬스케어(GE Healthcare)), 또는 Fab 단편을 위한 카파셀렉트(KappaSelect) 칼럼 (GE 헬스케어)에 편리하게 적용될 수 있다. 칼럼은 비특이적 결합 성분을 제거하기 위해 세척될 수 있다. 결합된 항체는 예를 들어, pH 구배 (예컨대, 20 mM 트리스(Tris) 완충제 pH 7에서 10 mM 시트르산나트륨 완충제 pH 3.0, 또는 포스페이트 완충처리된 염수 pH 7.4에서 100 mM 글리신 완충제 pH 3.0)에 의해 용리될 수 있다. 항체 분획은 예컨대, SDS-PAGE에 의해 검출될 수 있고, 이어서, 풀링될 수 있다. 추가 정제는 의도되는 용도에 따라 임의적이다. 항체는 통상적인 기술을 사용하여 농축 및/또는 멸균 여과될 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체는 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환, 다중모드, 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 비롯한, 통상적인 기술에 의해 효과적으로 제거될 수 있다. 상기 크로마토그래피 단계 후의 항체의 순도는 95% 초과이다. 생성물은 -70℃에서 즉시 동결될 수 있거나, 또는 동결건조될 수 있다.
Figure pct00001
검정
결합 동역학적 성질 및 친화도
인간 PD-1에 대한 동역학적 성질 및 평형 해리 상수 (KD)를 MSD, 표면 플라즈몬 공명 (비아코어(Biacore)), 및 생물-광 간섭측정법 (포르테바이오(ForteBio)) 검정 방법을 사용하여 본 발명의 항체에 대해 측정한다.
본원에서 사용된 바, 니볼루맙은 프로프즈드 INN: 리스트(Proposed INN: List) 107 (CAS #946414-94-4)로부터의 중쇄 및 경쇄 서열을 이용하는, 293 HEK 세포에서 일시적으로 발현된 인간 IgG4 PD-1 항체이다. 본원에서 사용된 바, 펨브롤리주맙은 프로프즈드 INN: 리스트 72로부터의 중쇄 및 경쇄 서열을 이용하는, 293 HEK 세포에서 일시적으로 발현된 인간 IgG4 PD-1 항체이다.
MSD 검정
평형 친화도 측정은 앞서 기술된 바와 같이 수행된다 (문헌 [Estep, P., et al., MAbs, 2013. 5(2): p. 270-8]). 용액 평형 적정 (SET)은 PBS + 0.1% IgG-무함유 BSA (PBSF)에서 수행하며, 여기서, 항원 (b-PD-1 단량체)은 10-100 pM으로 일정하게 유지되고, 5-100 nM에서 시작하는 Fab 또는 mAb의 3- 내지 5-배 연속 희석액과 함께 인큐베이션된다 (실험 조건은 샘플 의존적이다). PBS에 20 nM로 희석된 항체를 4℃에서 밤새도록 또는 실온에서 30 min 동안 표준 결합 MSD-ECL 플레이트 상에서 코팅한다. 플레이트를 700 rpm로 진탕시키면서 30 min 동안 BSA로 차단한다. 이어서, 플레이트를 세척 완충제 (PBSF + 0.05% 트윈(Tween) 20)로 3x 세척한다. SET 샘플을 적용하고, 700 rpm으로 진탕시키면서, 150s 동안 플레이트 상에서 인큐베이션시킨 후, 이어서 1회 세척한다. 플레이트 상에 포획된 항원을 3 min 동안 플레이트 상에서 인큐베이션시킴으로써 PBSF 중 250 ng/mL 술포태그-표지된 스트렙트아비딘으로 검출한다. 플레이트를 세척 완충제로 3회 세척한 후, 이어서, 계면활성제를 포함하는 1x 리드 버퍼 T(Read Buffer T)를 사용하여 MSD 섹터 이미저 2400(Sector Imager 2400) 기기 상에서 판독한다. 유리 항원의 비율(%)을 프리즘(Prism)에서 적정된 항체의 함수로서 플롯팅하고, 2차 방정식에 피팅하여 KD를 추출한다. 처리량을 개선시키기 위해, 액체 취급 로봇을 SET 샘플 제조를 비롯한 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 사용한다.
본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, IgG1 포맷이고, 효모에서 발현된 xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는 각각 45 pM, 50 pM, 93 pM 및 150 pM인 KD로 인간 PD-1에 결합한다. 펨브롤리주맙 및 니볼루맙은 각각 130 pM 및 640 pM인 KD로 PD-1에 결합한다. xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E에 대한 결합력은 각각 대략 0.9 pM, 2.5 pM, 1.3 pM 및 0.9 pM인 KD로 측정된다. 펨브롤리주맙 및 니볼루맙은 각각 대략 3 pM 및 5 pM인 KD로 인간 PD-1에 결합한다.
Figure pct00002
생물-광 간섭측정법
포르테바이오 친화도 측정은 일반적으로 앞서 기술된 바와 같이 수행하였다 (문헌 [Estep, P., et al., High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013. 5(2): p. 270-8.]). 간략하면, AHQ 센서 상에 IgG를 온라인으로 로딩함으로써 포르테바이오 친화도 측정을 수행하였다. 센서를 30 min 동안 검정 완충제에서 오프-라인으로 평형화시킨 후, 이어서, 기준선 확립을 위해 60초 동안 온-라인으로 모니터링하였다. IgG가 로딩된 센서를 5 min 동안 100 nM 항원에 노출시키고, 그 후 이들을 오프-속도 측정을 위해 5 min 동안 검정 완충제로 옮겼다. 1:1 결합 모델을 사용하여 동역학적 성질을 분석하였다.
본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, 효모에서 발현된 IgG1로부터 제조된 IgG1 포맷의 xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는, PD-1_Fc가 센서 팁 상에 있을 때, 니볼루맙 및 펨브롤리주맙보다 대략 2배 내지 3배 더 낮은 KD로 인간 PD-1_Fc에 결합한다. 항체가 센서 팁 상에 있을 때, IgG1 포맷이고, 효모에서 발현된 xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙보다 대략 3배 내지 4배 더 낮은 KD로 인간 PD-1_His에 결합한다. 효모에서 발현된 IgG1로부터 제조된 Fab 포맷의 xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙과 유사한 KD로 시노PD-1_Fc에 결합한다.
Figure pct00003
CHO 세포 상에서의 인간 PD-1에의 결합
본 발명의 항체의 인간 PD-1에의 결합을 유세포측정법 검정에서 측정할 수 있다.
CHO 세포 (0.2 x 106개)를 얼음 상에서 PBS 1% BSA 중에서 30 min 동안 200 nM로부터 최저 농도 0.3185 pM까지 2배율로 19x 적정된 실험 항체와 함께 인큐베이션시킨다. 이어서, 세포를 3x 세척하고, (차광하에) 얼음 상에서 30 min 동안 PBS 1% BSA 중에서 2차 항체 (PE-표지됨, 최종 농도 5 ㎍/ml)와 함께 인큐베이션시킨다. 세포를 3x 세척하고, 유세포측정법을 통해 분석한다. 유세포측정법은 어큐리(Accuri) C6 시스템 (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences)) 상에서 수행하고, MFI를 C6 소프트웨어 상에서 계산한다. EC50을 그래프패드(Graphpad) 소프트웨어 상에서 계산한다.
본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, xd-16 B (IgG4 S228P)는 용량에 의존하는 방식으로 1.461 nM인 EC50 값 (n=1)으로 PD-1에 결합하고, xd-16 D (IgG4 S228P)는 용량에 의존하는 방식으로 1.471 nM인 EC50 값 (n=1)으로 PD-1에 결합하고, 니볼루맙 (IgG4 S228P)은 용량에 의존하는 방식으로 1.311 nM인 EC50 값 (n=1)으로 PD-1에 결합한다. 본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, xd-16 B 및 xd-16 D는 상기 조건하에서 니볼루맙과 유사한 EC50으로 인간 PD-1에 결합한다.
Figure pct00004
CHO 세포에서의 인간 PD-1의 PD-L1 및 PD- L2에 대한 차단 .
인간 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2에의 결합을 차단할 수 있는 본 발명의 항체의 능력을 유세포측정법에 의해 측정할 수 있다.
CHO 세포 0.2 x 106개를 얼음 상에서 PBS 1% BSA 중에서 30 min 동안 실험 항체 (100 nM)와 함께 인큐베이션시킨다. 이어서, 세포를 3X 세척하고, (차광하에) 얼음 상에서 30 min 동안 PBS 1% BSA 중에서 NHS-플루오레세인 (프로메가(Promega))과 연결된 PD-L2와 함께 인큐베이션시킨다. 세포를 3x 세척하고, 유세포측정법을 통해 분석한다. 유세포측정법을 어큐리 C6 시스템 (BD 바이오사이언시스) 상에서 수행하고, MFI를 C6 소프트웨어 상에서 계산한다. EC50을 그래프패드 소프트웨어 상에서 계산한다.
본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, (효모에서 발현된 IgG1 포맷의) xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D 및 xd-16 E는 182,959.1인 MFI를 나타낸 대조군 IgG와 비교하였을 때, 각각 26,445.9, 26,524.8, 39,983.1 및 40,867.9인 MFI를 나타내며 인간 PD-L2-FITC 결합을 차단하였다. 펨브롤리주맙 및 니볼루맙은 각각 46,245.9 및 54,509.8인 MFI를 나타내었다.
Figure pct00005
혼합 림프구 반응
본 발명의 항체에 의한 PD-1 신호의 차단은 T 세포 활성화 동안 억제 신호의 방출을 측정함으로써 평가할 수 있다.
웰당 2 x 106개의 PBMC를 완전 T 세포 배지 중 6 웰 조직 배양 플레이트 또는 T25 조직 배양 플라스크에 플레이팅한다. 세포를 2-3시간 동안 인큐베이션시켜 단핵구를 부착시킨다. 부착이 불충분할 경우, 무혈청 배지를 사용한다. 신선한 배지 3X가 담긴 플라스크를 온화하게 와동시켜 미부착된 세포를 제거한다.
1% AB 혈청, 10 mM HEPES, 50 μM β-Me, IL-4 (1000 U/ml) 및 GM-CSF (1000 U/ml), 또는 각각의 25-50 ng/ml를 함유하는 X-VIVO 15 배지에서 PBMC로부터 단핵구 (1 x 106개의 세포/ml)를 배양함으로써 미성숙 골수성 DC를 생성한다. 2일 후, IL-4 및 GM-CSF로 보충된 신선한 배지를 첨가한다. 5일째, 세포를 동결시키거나, 또는 3 x 105개의 세포/ml의 세포 밀도로 2일 동안 rTNFa (1000 U/ml), IL-1b (5 ng/ml), IL-6 (10 ng/ml) 및 1 μM PGE2를 함유하는 자극 칵테일을 첨가함으로써 성숙을 유도한다.
언터치트(Untouched) CD4+ T 세포 단리 키트 (인비트로겐(Invitrogen))에서 제조사의 설명서에 따라 T 세포 단리를 수행한다. 1.5 ml 튜브 랙이 장착된 자석을 사용하여 원치 않는 자기 비드 (퀴아젠(QIAGEN))를 제거한다.
100,000-200,000개의 단리된 T 세포를 37℃에서 4-5일 동안 96-둥근 바닥 조직 배양 플레이트에서 200 ㎕의 총 부피로 10,000-20,000개의 동종이계 moDC와 혼합한다. 3:1 (세포:비드) 비의 항-CD3/CD28 디나비즈(DynaBeads)를 양성 대조군으로 사용하여 T 세포를 자극하고; 비드는 제조사의 설명서에 따라 제조한다. 시험 항체를 MLR 시작 시점에 첨가하고, 배양 기간 내내 인큐베이션시킨다.
제조사의 설명서에 따라 (e바이오사이언스(eBioscience)) IL-2 및 IFN-γ의 검출을 수행한다. OD 측정값은 멀티스칸 FC(Multiskan FC) 시스템 (써모(Thermo)) 상에서 측정한다.
본질적으로 본 검정에 기술된 바와 같이 수행된 실험에서, 각 농도에서의 항체 xd-16 B는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙과 대등하게 IL-2 또는 IFN-γ를 증가시켰다.
Figure pct00006
Figure pct00007
본 발명에서 언급된 모든 참고문헌은 마치 그들이 각각 개별적으로 본원에서 참조로 인용된 것과 같이, 본원에서 참조로 포함된다. 추가로, 당업자는 상기 내용을 읽은 후, 본 발명을 다양하게 수정 또는 변형시킬 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 이들 등가물 모두 첨부된 본 출원의 특허청구범위에 의해 정의되는 범주 내에 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> INNOVENT BIOLOGICS (SUZHOU) CO., LTD) <120> PD-1 Antibodies <130> IPA180677-CN <160> 30 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 288 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> PD-1 <400> 1 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr 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atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300 tacagtagca caggaacctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420 agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600 tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660 aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720 tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780 tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900 cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020 ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080 aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200 gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260 aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320 ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347 <210> 26 <211> 1347 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HC of xd-16 B S228P IgG4 <400> 26 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttggtac agcaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300 tacagtagca caggaatctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420 agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600 tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660 aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720 tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780 tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900 cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020 ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080 aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200 gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260 aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320 ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347 <210> 27 <211> 1347 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HC of xd-16 C S228P IgG4 <400> 27 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttggtac agcaagctac 180 gcacagaagt tccggggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300 tacagtagca caggaacctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420 agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600 tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660 aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720 tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780 tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900 cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020 ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080 aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200 gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260 aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320 ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347 <210> 28 <211> 1347 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HC of xd-16 D S228P IgG4 <400> 28 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttgatac agcaaactac 180 gcacagaagt tccggggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300 tacagtagca caggaacctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420 agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600 tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660 aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720 tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780 tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900 cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020 ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080 aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200 gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260 aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320 ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347 <210> 29 <211> 1347 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HC of xd-16 E S228P IgG4 <400> 29 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttggtac agcaaactac 180 gcacggaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300 tacagtagca caggaatctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420 agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600 tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660 aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720 tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780 tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900 cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020 ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080 aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200 gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260 aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320 ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347 <210> 30 <211> 648 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LC of xd-16 A, xd-16 B, xd-16 C, xd-16 D, and xd-16 E <400> 30 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctccgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcaaatcacc tccctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa aaggaccgtg gccgccccct ccgtgttcat ctttcccccc 360 agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc tccgtggtgt gcctgctgaa caacttctat 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtc gacaatgccc tgcagagcgg caactcccag 480 gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctact ccctgagctc caccctgaca 540 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac acaccagggc 600 ctgagctccc ccgtgaccaa gtccttcaac aggggcgagt gctgatga 648

Claims (38)

  1. 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 PD-1 (서열 번호: 1)에 결합하는 항체로서, 여기서,
    경쇄는 각각 서열 번호: 10, 11 및 12에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고,
    중쇄는 중쇄 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, 여기서,
    HCDR1은 서열 번호: 2에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어지고;
    HCDR2는 서열 번호: 3, 4, 5, 6, 또는 7에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어지고;
    HCDR3은 서열 번호: 8 또는 9에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  2. 제1항에 있어서, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 서열 번호: 2, 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  3. 제1항에 있어서, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 서열 번호: 2, 서열 번호: 4, 및 서열 번호: 9에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  4. 제1항에 있어서, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 서열 번호: 2, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 8에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  5. 제1항에 있어서, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 서열 번호: 2, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 8에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  6. 제1항에 있어서, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이 각각 서열 번호: 2, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9에 의해 제시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인 항체.
  7. 1 또는 2개의 경쇄(들) (LC) 및 1 또는 2개의 중쇄(들) (HC)를 포함하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하고, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하고, 여기서, LCVR은 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR은 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16 또는 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  8. 제7항에 있어서, LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 13에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  9. 제7항에 있어서, LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 14에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  10. 제7항에 있어서, LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 15에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  11. 제7항에 있어서, LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 16에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  12. 제7항에 있어서, LCVR이 서열 번호: 18에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HCVR이 서열 번호: 17에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  13. 제7항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  14. 제13항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  15. 제13항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  16. 제13항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  17. 제13항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  18. 제13항에 있어서, LC가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, HC가 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  19. 제13항에 있어서, 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 항체로서, 여기서, 각각의 경쇄는 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄는 서열 번호: 19, 서열 번호: 20, 서열 번호: 21, 서열 번호: 22, 또는 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  20. 제19항에 있어서, 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 19에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  21. 제19항에 있어서, 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 20에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  22. 제19항에 있어서, 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 21에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  23. 제19항에 있어서, 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 22에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  24. 제19항에 있어서, 각각의 경쇄가 서열 번호: 24에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지고, 각각의 중쇄가 서열 번호: 23에 의해 제시되는 아미노산 서열을 가지는 것인 항체.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 중 하나가 경쇄 중 하나와 쇄간 디술피드 결합(inter-chain disulfide bond)을 형성하고, 나머지 다른 한 중쇄는 나머지 다른 한 경쇄와 쇄간 디술피드 결합을 형성하고, 중쇄 중 하나가 나머지 다른 한 중쇄와 2개의 쇄간 디술피드 결합을 형성하는 것인 항체.
  26. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 글리코실화된 것인 항체.
  27. 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포로서, 여기서, 세포는 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고; 바람직하게는, 상기 포유동물 세포는 CHO 세포인 것인 포유동물 세포.
  28. 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함하는 항체를 제조하는 방법으로서, 상기 항체가 발현되도록 하는 조건하에서 제27항의 포유동물 세포를 배양하는 단계, 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  29. 제28항의 방법에 의해 제조된 항체.
  30. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  31. 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 암이 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간암인 것인 방법.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 1종 이상의 항종양제를 동시에, 별개로, 또는 순차적으로 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  34. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에서 사용하기 위한 용도의 항체.
  35. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료에서 사용하기 위한 용도의 항체.
  36. 제35항에 있어서, 암이 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간세포 암종인 것인 사용하기 위한 용도의 항체.
  37. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료에서 병용하여 사용하기 위한 용도의, 1종 이상의 항종양제와 함께 동시에, 별개로, 또는 순차적으로 조합되는 항체.
  38. 제37항에 있어서, 암이 흑색종, 폐암, 두부경부암, 결장직장암, 췌장암, 위암, 신장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 또는 간세포 암종인 것인, 병용하여 사용하기 위한 용도의 항체.
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