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KR20190029324A - Compositions for anti-itching of skin comprising plant extracts - Google Patents

Compositions for anti-itching of skin comprising plant extracts Download PDF

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KR20190029324A
KR20190029324A KR1020170116722A KR20170116722A KR20190029324A KR 20190029324 A KR20190029324 A KR 20190029324A KR 1020170116722 A KR1020170116722 A KR 1020170116722A KR 20170116722 A KR20170116722 A KR 20170116722A KR 20190029324 A KR20190029324 A KR 20190029324A
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KR
South Korea
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extract
itching
skin
topical
corn
Prior art date
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KR1020170116722A
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Korean (ko)
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KR102050470B1 (en
Inventor
노경백
정은선
박덕훈
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바이오스펙트럼 주식회사
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Publication date
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Abstract

The present invention relates to a composition for alleviating skin itching containing cornhusk and above-ground Centella asiatica extracts as active ingredients. The composition containing cornhusk and above-ground Centella asiatica extracts as active ingredients of the present invention inhibits the activation and expression transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), and interleukin-31 (IL-31) as well as freeing of histamine derived from itching mediators, thereby protecting skin from itching inducing factors to alleviate and inhibit skin itching. In addition, a composite extract is effective in measuring the degree of alleviation of itching and atopic dermatitis in a human body application test and has no side effect on a human body, thereby being safely used in cosmetic materials and pharmaceutical compositions.

Description

식물 추출물을 포함하는 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물{Compositions for anti-itching of skin comprising plant extracts}[0001] The present invention relates to a cosmetic composition for skin itching,

본 발명은 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 가려움증 완화용 조성물에 관한 것으로, 옥수수껍질 및 병풀 지상부 추출물의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하여 가려움증 유발 매개인자인 히스타민, 바닐로이드 수용체1 (transient receptor potential vaniloid type 1, TRPV1) 및 인터루킨-31(interleukin-31, IL-31)의 활성화를 억제하여 가려움증 유발인자로 인해 유발되는 피부 가려움증의 억제 및 완화를 위한 화장료 및 약학적 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for relieving skin itching comprising an extract of a plant as an active ingredient, which comprises a complex extract of a corn husk and an extract of a ground part of a pathogen, The present invention relates to a cosmetic composition and a pharmaceutical composition for suppressing and relieving skin itching caused by an itch inducing factor by inhibiting activation of vanilloid type 1, TRPV1 and interleukin-31 (IL-31).

가려움증은 피부 질환에서 가장 주요하게 나타나는 증상이며, 생리적인 자기 보호 기능으로 외부로 부터의 유해하거나 자극이 되는 물질로부터 피부를 보호하기 위해 나타나는 하나의 현상이다. 가려움증은 통증을 동반할 수 있고, 동일한 자극이라도 때에 따라 사람에 따라 매우 다른 정도의 가려움증을 일으킬 수 있다. 가려움증은 외부자극과 무난하게 일어날 수도 있으며, 여러 가지 피부질환이나 내과적, 신경과적 질환과 연관되어 발생하기도 한다.Itching is the most common symptom of skin disease, and physiological self-protection is a phenomenon that appears to protect the skin from harmful or irritating substances from the outside. Itching can be accompanied by pain, and even the same stimulus can sometimes cause a very different degree of itching depending on the person. Itching may occur with external stimulation and may occur in association with various skin diseases or medical and neurological diseases.

다양한 원인에 의해 유발된 가려움증은 상처, 발진 등의 이차적인 피부병변을 야기하며, 가려워서 긁게 되면 가려움증 유발 물질이 분비되어 가려움증이 더욱 심해지는 악순환이 발생하게 된다. Itching caused by various causes causes secondary skin lesions such as wounds and rashes, and when it is scratched, itching secretion is secreted, causing a vicious cycle in which the itching becomes worse.

피부와 말초신경에는 강력한 가려움증이 매개체와 수용체가 존재하는데, 여기에는 H4 히스타민 수용체, PAR-2, 카텝신(cathepsin) S, 인터루킨-31(interleukin-31, IL-31), 바닐로이드 수용체1 (transient receptor potential vaniloid type 1, TRPV1), 신경성장인자(NGF)와 수용체, 아세틸콜린, substance P 등이 포함된다.The skin and peripheral nerves have strong itching mediators and receptors, including the H4 histamine receptor, PAR-2, cathepsin S, interleukin-31, IL-31, transient receptor potential vaniloid type 1, TRPV1), nerve growth factor (NGF) and receptors, acetylcholine, and substance P.

한편, 비만세포는 세포질내에 과립을 풍부하게 가지고 있는 세포로서 외부 자극에 의한 유발되는 피부의 가려움증, 발진 등에 관여하는 매개체를 생산 분비하게 된다. 대표적인 매개체로 비만세포의 과립 내에 이미 저장되어 있다가 자극이 주어졌을 때 세포가 파괴되어 방출되는 히스타민 (histamine), 세린프로테아제(serine protease) 등이 있고, 자극을 받은 후 새롭게 생성되어져서 유리되는 사이토카인(cytokine), 류코트리엔(leukotriene), 프로스타글란딘(prostaglandin) 등이 있다. 특히 히스타민의 경우 혈관 내피세포와 결합하면 혈관세포의 수축이 일어나서 혈액 속의 플라즈마(plasma)를 조직으로 삼출시키며, 내피세포는 혈관 근육세포를 이완시키는 프로스타사이클린(prostacyclin)과 산화질소(Nitric oxide)와 같은 물질의 합성을 유도하여 혈관 팽창을 유발하여 부종, 발적, 가려움의 피부반응을 일으킬 수 있다 (Yano et al., J Clin Invest., 1989;84:1276-86). On the other hand, mast cells are rich in granules in the cytoplasm and secrete mediators that are involved in the itching and rash of skin caused by external stimuli. Histamine, serine protease, which is already stored in the granules of mast cells and released when the stimulus is given, is a representative mediator. There are cytokines such as histamine, serine protease, Cytokine, leukotriene, prostaglandin, and the like. In particular, when histamine binds to vascular endothelial cells, vascular cell contraction occurs to excrete the plasma into the tissue, and endothelial cells release prostacyclin and nitric oxide, which relax vascular muscle cells. ( Yano et al ., J Clin Invest ., 1989; 84: 1276-86). In addition, it is possible to induce swelling, vomiting and irritation of the skin by inducing vasodilatation.

또한, IL-31은 가려움증에 중요한 역할을 하는 대표적인 사이토카인의 하나로 알려져 왔다. 림프구에서의 IL-31의 과발현은 긁는 행동과 더불어 피부염을 유발하며, 아토피 피부염 환자나 가려움 발진 환자의 피부 병변에서 증가한다고 알려져 있다. 최근 IL-31 수용체의 유전자 변이가 국소적인 가려움증을 동반하는 가족성 원발 피부 아밀로이드증의 발생기전에 관여됨이 밝혀졌으며, 피부 신경섬유에 있는 수용체에 직접적으로 작용하여 가려움증을 유발한다고 밝혀졌다. 또한 항 IL-31 항체는 생쥐 아토피 피부염 모델에서 피부 병변 발생시 긁는 행동을 감소시키는 효과를 보여 IL-31이 가려움증에 중요한 매개체임을 확인하였다. 따라서 IL-31을 타겟으로 한 치료제의 개발은 아토피 피부염과 다른 가려움증을 나타내는 염증성 피부질환의 치료에 주요한 타겟으로 사료되고 있다.In addition, IL-31 has been known as one of the representative cytokines that play an important role in itching. Overexpression of IL-31 in lymphocytes is known to cause dermatitis as well as scratching, and it is known to increase in atopic dermatitis and skin lesions in patients with itchy rash. Recent gene mutations of the IL-31 receptor have been shown to be involved prior to the development of familial primary amyloidosis with localized itching, and it has been shown to act directly on receptors in the skin nerve fibers, leading to itching. In addition, the anti-IL-31 antibody reduced the scratching behavior of skin lesions in a mouse model of atopic dermatitis, confirming that IL-31 is an important mediator of itching. Therefore, the development of therapeutic agents targeting IL-31 is considered to be a major target in the treatment of inflammatory skin diseases, which manifest as atopic dermatitis and other itching.

바닐로이드 수용체1 (transient receptor potential vaniloid type 1, TRPV1)은 칼슘 투과성을 지닌 비 선택적 양이온 채널로 각종 유해 화학 및 열 자극을 감지한다. 캡사이신은 감각신경에 존재하는 TRPV1에 작용하여 substance P 같은 신경펩타이드를 유리시키는데, 최근 가려움증의 병인에서 TRPV1이 중요하다는 점이 밝혀졌고 이를 근거하여 캡사이신이 가려움증의 치료에 사용되고 있다. 그러므로 TRPV1을 타겟으로 한 소재의 개발은 아토피 피부염 환자 및 민감성 피부환자의 피부 트러블과 작열감, 소양감을 줄여줄 수 있는 소재로 적용 가능함을 알 수 있다.Transient receptor potential vaniloid type 1 (TRPV1) is a non-selective cation channel with calcium permeability that detects various toxic chemical and thermal stimuli. Capsaicin acts on TRPV1 present in the sensory nerve to release neuropeptides such as substance P. Recently, it has been shown that TRPV1 is important in the pathogenesis of itch. Based on this, capsaicin is being used to treat itch. Therefore, development of a material targeting TRPV1 can be applied as a material that can reduce skin troubles, burning sensation, and feelings of atopic dermatitis patients and sensitive skin patients.

현재 일반적으로 가려움증과 염증을 완화시키는데 사용되는 약물은 항히스타민과 스테로이드 제제를 들 수 있는데, 장기적으로 복용 또는 피부에 도포할 경우 부작용이 일어날 수 있다. 그러므로 가려움증과 함께 수반되는 염증반응을 효과적으로 제어할 수 있는 부작용이 최소화된 소재의 개발이 필요하다. Currently, drugs commonly used to relieve itching and inflammation include antihistamines and steroid preparations. Side effects may occur if taken over a long period of time or when applied to the skin. Therefore, it is necessary to develop a material with minimal side effects that can effectively control the inflammatory reaction accompanied by itching.

한편, 옥수수(Zea. mays L.)는 벼과(Gramineae)에 속하는 열대성 작물로, 동양권에서는 식용 이외에 한약재로 이용되고 있다. 약용으로는 옥수수 뿌리와 잎은 소변이 찔끔거리는 것과 요석(尿石)이 있어 아픈 증상을 치료하는데 사용하였다. 또한, 옥수수 겨 또는 수염은 페놀산(ferulic acid), 쿠마르산(coumaric acid), 디페룰로일푸트레신(N,N-diferuloylputrescine), 디쿠마일푸트레신(N,N-dicoumaroylputrescine), 카로티노이드계(carotenoids), 피토스테롤(phytosterols), 섬유질(corn fiber), 메이신(maysin) 등의 생리활성 성분을 포함하여 항암, 항고혈압, 항당뇨, 항산화, 항비만 및 항노화 등에 활성을 나타낸다.On the other hand, corn ( Zea mays L.) is a tropical crop belonging to the Gramineae family. For medicinal purposes, corn roots and leaves were used to treat sick symptoms because of urination and urinary stones. In addition, corn bran or beard may be selected from the group consisting of ferulic acid, coumaric acid, N, N- dimeruloylputrescine, N, N- dicoumaroylputrescine, antioxidant, anti-obesity, and anti-aging, including physiologically active ingredients such as carotenoids, phytosterols, corn fiber, and maysin.

또한, 병풀(Centella asiatica)은 미나리과에 속하는 다년생 식물로서, 해열, 치독 또는 근골연축, 백대하 등에 효과가 있다고 알려져 있다. 이러한 병풀로부터 분리된 배당체인 아시아티코사이드(Asiaticoside)는 피부궤양, 광범한 외상치료, 피부정맥, 노장성궤양, 미란성피부궤양, 한성원형탈모증 등에 효과가 알려져 있지만, 피부 가려움증 완화 및 치유에 관하여 보고된 바가 없다. Centella asiatica ( Centella asiatica ) is a perennial plant belonging to the family Persia, and is known to be effective for fever, chewing or muscle spasms, Asiaticoside, a glycoside isolated from such a housepine, is known to be effective for skin ulcers, extensive trauma, skin veins, obliteration ulcers, erosive skin ulcers, and alopecia areata. However, in the case of skin itching relief and healing There is no report.

이에 본 발명자들은 피부 가려움증에 관한 연구를 꾸준히 수행하던 중, 옥수수껍질 추출물과 아시아티코사이드 B를 다량 함유하는 병풀 추출물 분획의 혼합물이 피부 가려움증에 효능을 가지고 있음을 발견하였고, 이에 따라 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have found that a mixture of corn husk extract and Centella asiatica B containing a large amount of Centella asiatica extract has an effect on skin pruritus while steadily conducting research on skin itching. Thus, .

따라서, 본 발명에서 해결하고자 하는 기술적 과제는 피부 가려움증 억제를 위해 사용되는 스테로이드 및 항히스타민제의 문제점을 해결하면서 인체 안정성이 높아 피부 부작용이 없는 성분을 함유하는 조성물을 제공하기 위한 것이다.SUMMARY OF THE INVENTION Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition containing a steroid and an antihistamine, which are used for inhibiting skin itching, and which has high human stability and is free from side effects of skin.

상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 옥수수껍질 및 병풀 지상부 추출물을 2:1 내지 1:2의 중량비로 혼합한 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 가려움증 억제 및 완화용 조성물을 제공한다.In order to solve the above technical problems, the present invention provides a composition for suppressing and alleviating itching of skin comprising an extract of corn husks and topical extracts of corn husks and corn cobs, at a weight ratio of 2: 1 to 1: 2, as an active ingredient.

바람직하게, 본 발명에서 조성물은 화장료 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.Preferably, the composition in the present invention may be a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.

본 발명에서 피부 가려움증 방지는 모든 형태의 원인으로부터의 피부 가려움증 방지를 의미하며, 외부자극으로 부터의 피부자극 또는 여러 가지 피부질환이나 내과적 신경과적 질환을 원인으로 발생하는 피부 가려움증을 호전 및 양호화시키는 것을 의미한다.In the present invention, prevention of skin itching means prevention of skin itching from all kinds of causes, and it is effective to prevent skin irritation from external stimuli or to improve and improve skin itching caused by various skin diseases or medical neurological diseases .

본 발명에 있어서, 복합 추출물이란 옥수수 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 혼합물을 의미한다. 식물은 추출 부위에 따라서 각 추출물 분획물의 활성 여부, 활성의 정도 및 이에 포함되는 구체적인 성분이 상이할 수 있는데, 본 발명에서는 옥수수의 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 복합 추출물이 피부 가려움증을 완화 및 억제하는 것을 규명하였다. In the present invention, the complex extract means a mixture comprising a corn husk extract and a topical extract of a coriander. In the present invention, the extract of corn husk extract and the combination of the extracts of topical ginseng root extract to alleviate and inhibit skin itch, Respectively.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 조성물은 옥수수껍질 및 병풀 지상부 추출물을 2:1 내지 1:2의 중량비, 바람직하게는 1:1의 중량비로 혼합한 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다. According to one embodiment of the present invention, the composition according to the present invention comprises a complex extract obtained by mixing corn husks and topical extracts of corn cobs and corn cob in a weight ratio of 2: 1 to 1: 2, preferably 1: 1, .

본 발명의 바람직한 실시양태에 따르면, 상기 병풀 지상부 추출물은 병풀내 함유되어 있는 아시아티코사이드(Asiaticoside) B가 다량 포함되어 있는 병풀 지상부 추출물의 분획인 것을 특징으로 한다. According to a preferred embodiment of the present invention, the bloody ground-portion extract is a fraction of a bloom-ground-portion extract containing a large amount of asiaticoside B contained in a bottle pool.

본 발명의 용어 "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. The term " extract " of the present invention refers to a preparation which is obtained by squeezing a herbal medicine with an appropriate leaching solution and concentrating the liquid by evaporating the leaching solution. The extract solution obtained by the extraction treatment, diluted solution of the extract solution, Dried products obtained by these methods, their controlled products or purified products.

본 발명에서 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.Extracts in the present invention can be prepared using general extraction, isolation and purification methods known in the art. Examples of the extraction method include, but are not limited to, hot water extraction, hot water extraction, cold extraction, reflux cooling extraction, or ultrasonic extraction.

본 발명의 구체적인 실시양태에 따르면, 옥수수 껍질 추출물 및 병풀 지상부 추출물은 각각 옥수수 껍질 및 병풀 지상부를 건조한 다음 분말화하여 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 이용하여 추출한 다음 감압 여과하여 제조할 수 있다. 이 때 유기용매로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올을 예로 들 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용하며, 더욱 바람직하게는 70% 에탄올을 사용할 수 있다. According to a specific embodiment of the present invention, the extract of corn husks and the topical extract of corn husks may be prepared by drying the ground corn husks and corn husks and then pulverizing them and extracting them using water, an organic solvent or a mixture thereof, followed by filtration under reduced pressure. In this case, examples of the organic solvent include methanol, ethanol, propanol or butanol, preferably ethanol, more preferably 70% ethanol.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 아시아티코사이드(Asiaticoside) B가 다량 함유된 병풀 지상부 추출물의 분획은 상기 병풀 지상부 추출물을 유기용매에 용해시키고 여과한 다음 유기용매와 물을 이동상으로 사용하여 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 수행하는 추가의 추출공정을 통하여 수득될 수 있다. 이 때 유기용매로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올을 예로 들 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the fraction of the topical extract of Aspergillus oryzae containing a large amount of Asiaticoside B is obtained by dissolving the topical extract of the topical extract of the perilla organs in an organic solvent, filtering and then using the organic solvent and water as a mobile phase, Can be obtained through a further extraction process which performs liquid chromatography (HPLC). Examples of the organic solvent include methanol, ethanol, propanol, and butanol.

본 발명에 있어서, 상기 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In the present invention, the above-mentioned " active ingredient " means a component that exhibits the desired activity alone or can exhibit activity together with a carrier which is itself inactive.

본 발명의 조성물에는 복합 추출물이 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.00001 내지 15.0 중량%, 보다 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 내지 5 중량%로 포함할 수 있다. 이 때 복합 추출물의 함량이 0.00001중량% 미만일 경우 본 발명의 목적효과인 피부 가려움증 완화효과를 수득할 수 없으며, 15중량%를 초과할 경우 함량의 증가에 따라 효과가 비례적이지 않아 비효율적일 수 있으며 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다.The composition of the present invention may contain the complex extract in an amount of 0.00001 to 15.0% by weight, more preferably 0.0001 to 10% by weight, and most preferably 0.0001 to 5% by weight, based on the total weight of the composition. If the content of the complex extract is less than 0.00001% by weight, the skin itching relief effect, which is the object of the present invention, can not be obtained. If the content is more than 15% by weight, the effect is not proportional to the content, There is a problem that the stability of the shape is not ensured.

본 발명의 복합 추출물을 함유하는 조성물은 피부 가려움증 완화 및 억제효과를 나타내며, 천연 물질로서 세포독성이 거의 없다. The composition containing the complex extract of the present invention exhibits a skin itching relieving and inhibiting effect and is almost free from cytotoxicity as a natural substance.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 피부 가려움증의 완화 또는 억제효과를 향상시키기 위하여, 상기 복합 추출물을 포함하는 조성물에 캐모마일, 황금, 감초, 녹차, 호장 및 로즈마리 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 추가로 포함할 수 있다. According to one embodiment of the present invention, in order to improve the relieving or inhibiting effect of skin itching, one or more extracts selected from the group consisting of chamomile, golden, licorice, green tea, May be further included.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.According to one embodiment of the present invention, there is provided a cosmetic composition comprising a complex extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 화장료 조성물에는 유효성분으로서의 복합 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 추가로 첨가할 수 있다. The cosmetic composition according to the present invention may further contain, in addition to the complex extract as an active ingredient, conventional additives such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors, and carriers which are conventionally added to cosmetic compositions .

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art and can be used as a solution, a suspension, an emulsion, a paste, a gel, a cream, a lotion, a powder, a soap, , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be prepared as a nutritional cream, a convergent lotion, a soft lotion, a lotion, an essence, a nutritional gel or a massage cream.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, use is made of an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth gum, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, tosse, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, chlorofluorohydrocarbons, propane / Propane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 검등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Castellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracert, etc. may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.According to one embodiment of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising a complex extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 복합 추출물 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the complex extract. The pharmaceutically acceptable carrier to be contained in the pharmaceutical composition of the present invention is one usually used at the time of formulation, and includes lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, But are not limited to, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrups, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. It is not. The pharmaceutical composition of the present invention may further contain a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, etc., in addition to the above components. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington ' s Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and is preferably applied by parenteral administration, more preferably topical application by application.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.A suitable dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on such factors as the formulation method, administration method, age, body weight, sex, pathological condition, food, administration time, route of administration, excretion rate, . The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is in the range of 0.001-100 mg / kg on an adult basis. When the composition is an external preparation, it is preferably applied in an amount of 1.0 to 3.0 ml on an adult basis once to five times a day, and continued for 1 month or more. However, the dose is not intended to limit the scope of the present invention.

본 발명의 약학적 조성물은 당분야의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑시르제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in unit dosage form by formulating it using a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to a method which can be easily carried out by a person having ordinary skill in the art, Into the container. The formulations may be in the form of solutions, suspensions, syrups or emulsions in an oil or aqueous medium, or in the form of excipients, powders, powders, granules, tablets or capsules, and may additionally contain dispersing or stabilizing agents.

한편, 본 발명의 구체적 실시양태에 따르면, 복합 추출물에 대한 피부누적 자극실시 결과 독성 및 부작용이 거의 없는 인체에 무해한 물질임이 확인되었고, 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료 및 약학적 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.According to a specific embodiment of the present invention, it has been confirmed that the cumulative stimulation of the complex extract results in harmless substances to the human body with little toxicity and side effects, and can be safely used even in long-term use. In particular, And can safely be used in pharmaceutical compositions.

이와 같이, 본 발명의 옥수수 껍질 및 병풀 지상부의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 가려움증 매개인자로부터 유도되는 히스타민의 유리와 TRPV1, IL-31의 활성화 및 발현을 억제하여 가려움증 유발 인자로부터 피부를 보호하여 피부 가려움증 완화 및 억제 효과를 나타낸다. 또한, 복합 추출물은 인체적용 시험시 아토피 피부염 지수 및 가려움증 완화 정도 측정에서도 유효한 효과를 나타내었으며 인체에 대한 부작용이 없으므로 화장료 및 약학적 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.As described above, the composition comprising the complex extract of the corn husks and the ground portion of the present invention as an active ingredient inhibits the release of histamine and the activation and expression of TRPV1 and IL-31 induced from the itching mediator, Thereby exhibiting an effect of alleviating and suppressing skin itching. In addition, the compound extract has been effective in measuring the atopic dermatitis index and the itching relieving degree in the human body application test, and can be safely used in cosmetic and pharmaceutical compositions since it has no adverse effects on human body.

도 1은 옥수수 껍질과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 복합 추출물의 히스타민 유리 억제효과를 보여주는 그래프이다.
도 2는 옥수수 껍질과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 복합 추출물의 IL-31 발현 억제효과를 보여주는 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing the inhibitory effect of histamine-free inhibiting effect of a combination extract containing corn husks and topical extracts of corn cobs.
FIG. 2 is a graph showing the effect of inhibiting the expression of IL-31 in a complex extract containing a corn husk and an extract of a groundwort plant.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다. Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following embodiments. Embodiments of the invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.

실시예 1: 피부 가려움증 완화 및 항염 효능을 가지는 천연물의 선정Example 1: Alleviation of skin itching and selection of natural products having anti-inflammatory activity

피부 가려운증에 관한 선행연구결과를 바탕으로 옥수수 껍질 및 병풀을 선별하였고, 이들로부터 수득한 추출물의 피부가려움 완화 및 항염 효능에 대해서 검증하였다.Based on the previous studies on skin itch, we selected corn husks and chillies, and examined the skin itching relief and anti - inflammatory efficacy of the extracts obtained from them.

1-1. 옥수수껍질 추출물의 제조 1-1. Manufacture of corn husk extract

옥수수 껍질 부위를 채취하여 세척 후 음건한 다음, 입자의 크기가 1mm 이하가 되도록 분쇄하였다. 그 후 분쇄된 옥수수 껍질 분말 1kg을 70% 에탄올 10 리터에 침지하여 24시간동안 초음파 추출하였다. 그 후 수득한 추출액을 여과지(No.2, Advantec, 미국)여과하고, 동결건조하여 추출물 분말을 제조하였다.The corn husk was sampled, washed, shredded and ground to a particle size of less than 1 mm. Then, 1 kg of pulverized corn husk powder was immersed in 10 liters of 70% ethanol and sonicated for 24 hours. Then, the obtained extract was filtered through a filter paper (No. 2, Advantec, USA) and lyophilized to prepare an extract powder.

1-2. 병풀 지상부 추출물의 제조 1-2. Preparation of topical extract of Bacillus sp.

병풀 지상부를 채취하여 세척 후 음건한 다음, 입자의 크기가 1mm 이하가 되도록 분쇄하였다. 그 후 분쇄된 병풀 지상부 분말을 1kg을 70% 에탄올 10 리터에 침지하여 24시간동안 초음파 추출하였다. 그 후 수득한 추출액을 여과지(No.2, Advantec, 미국)여과하고, 동결건조하여 추출물 분말을 제조하였다.The shrubs were collected, shaved and shredded to a particle size of 1 mm or less. Then, 1 kg of the ground powder of crushed corn borer was dipped in 10 liters of 70% ethanol and sonicated for 24 hours. Then, the obtained extract was filtered through a filter paper (No. 2, Advantec, USA) and lyophilized to prepare an extract powder.

1-2-1. 아시아티코사이드 B 함량이 증가된 병풀 지상부 추출물의 분획 제조 1-2-1. Fractionation of Bacillus thuringiensis Extract with Increased Asian Ticoside B Content

HPLC를 통해 아시아티코사이드 B가 포함된 병풀 지상부 추출물 분획을 제조하였다. 병풀 70% 에탄올 추출물 400 mg을 메탄올 100 ml에 녹인 후 0.45 μm 막여과하여 샘플을 제조하였고, 이동상은 4 mmol/l β-사이클로덱스트린이 포함된 메탄올:물 (50:50,v/v)로 구성하였으며 HPLC(Waters 600 controller, 616 pump, 717 autosampler, 996 photodiode array detector)를 사용하고, 컬럼은 Phenomenex Luna C18(2), 5μm 을 사용하였고, 유속 1 ml/min으로 215nm에서 검출하였다. 컬럼을 통해 분리된 아시아티코사이드 B가 함유된 병풀 지상부 추출물 분획은 용매를 완전히 제거한 후 동결건조하여 분말화하였다. The topical extract of Bacillus thuringiensis including A. ticoside B was prepared by HPLC. The mobile phase was prepared by dissolving 400 mg of 70% ethanol extract of Centella asiatica in methanol (100 ml) and 0.45 μm membrane filtration , and the mobile phase was eluted with methanol / water (50:50, v / v) containing 4 mmol / l β-cyclodextrin The HPLC was performed using a Phenomenex Luna C18 (2), 5 μm column and a flow rate of 1 ml / min at 215 nm using a HPLC (Waters 600 controller, 616 pump, 717 autosampler, and 996 photodiode array detector) The fraction of the topical extract of Bacillus subtilis containing the Asian thioside B separated through the column was completely dried and then lyophilized and powdered.

1-3. 옥수수 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 복합 추출물 제조 1-3. Production of complex extract containing corn husk extract and topical extract

상기 1-1의 옥수수 껍질 추출물과 1-2의 병풀 지상부 추출물을 1:1의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.The corn husk extracts 1-1 and 1-2 of the above-mentioned topical extracts were mixed at a weight ratio of 1: 1 to prepare a combined extract.

1-4. 옥수수 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획을 포함하는 복합 추출물 제조 1-4. Production of complex extract containing corn husk extract and fraction of topical extract

상기 1-1의 옥수수 껍질 추출물과 1-2-1의 병풀 지상부 추출물의 분획을 1:1의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.The extract of corn husk of 1-1 and the fraction of 1-2-1 of the topical extract of Bombyx mori were mixed at a weight ratio of 1: 1 to prepare a complex extract.

실시예 2: Example 2: in vitro in vitro 에서 복합 추출물의 히스타민 유리 억제력 효과 측정Of histamine-inhibiting effect of complex extracts

피부 알레르기 유도하는 주요인자인 히스타민에 대해 각각의 추출물 및 복합 추출물이 어떠한 영항을 미치는지 알아보기 위해 히스타민 유리 저해능을 측정하였다. 구체적으로, 마우스의 비만세포인 MC/9 세포(mouse mast cell line, ATCC)를 10% Rat T-STIM, 10% FBS, 0.05mM 2-머캅토에탄올이 포함된 DMEM 배지에 배양한 후 24-웰 플레이트에 접종시키고(2 x 105 세포/웰), 5% 농도의 CO2 배양기에서 37℃, 24시간 동안 배양하였다. 배양한 각 웰에 각각의 추출물 및 복합 추출물을 1시간 동안 전처리한 다음 500nM 농도의 A23187(Sigma, 미국)을 처리하여 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 배양후 세포 배양 상등액을 덜어낸 다음 원심 분리하여 상등액만을 수집하여 샘플을 제조하였다. Histamine glass inhibition was measured in order to investigate the effect of each extract and compound extract on histamine, a major factor inducing skin allergy. Specifically, mouse mast cell line (ATCC), a mouse mast cell, was cultured in a DMEM medium containing 10% Rat T-STIM, 10% FBS and 0.05 mM 2-mercaptoethanol, (2 x 10 5 cells / well) and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 24 hours. Each of the cultured wells was pretreated with each extract and complex extract for 1 hour, then treated with 500 nM of A23187 (Sigma, USA) and re-cultured for 24 hours. After culturing for 24 hours, the cell culture supernatant was removed and centrifuged to collect only the supernatant.

히스타민 측정 키트 (Histamine ELISA kit, Enzo, 미국)를 이용하여 유리되는 히스타민의 양을 측정하였다. 자세한 실시방법은 Enzo사의 키트 설명서에 따라 수행하였다. 유리되는 히스타민의 수치는 히스타민 표준곡선에 대비하여 그 양을 환산하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.The amount of histamine liberated was measured using a histamine ELISA kit (Enzo, USA). Detailed procedures were performed according to the Enzo kit manual. The amount of histamine liberated was compared with the histamine standard curve, and the result was shown in Fig.

도 1은 옥수수 껍질과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 복합 추출물의 히스타민 유리 억제효과를 보여주는 그래프이다. 여기에서 보듯이, 양성대조군인 A23187 처리군과 히스타민 유리 정도를 비교하였을 때, 옥수수 추출물(1-1), 병풀 지상부 추출물, 병풀 지상부 추출물의 분획 및 옥수수껍질 추출물 + 병풀 복합 추출물의 복합 추출물은 낮은 저해능을 보인 반면 옥수수껍질 추출물 + 병풀 지상부 추출물의 분획의 복합 추출물은 현격하게 향상된 히스타민 유리 저해능을 나타내었다.FIG. 1 is a graph showing the inhibitory effect of histamine-free inhibiting effect of a combination extract containing corn husks and topical extracts of corn cobs. As shown here, the combined extract of corn extract (1-1), corncobs, corncobs extract, corncobs extract, and corncobs extract combined with the A23187-treated group, a positive control group, While the combined extracts of the extracts of corn husk extract + corn bark and ground corn extract showed markedly improved histamine release.

실시예 3: Example 3: in-vitroin vitro 에서 복합 추출물의 TRPV1 활성 저해 효과 측정Inhibition of TRPV1 Activity by Combined Extracts

HEK293-TRPV1 세포주를 96-웰 블랙 플레이트에 3 x 104 세포수/웰이 되도록 접종시킨 뒤 24시간동안 배양하였다. 24시간 후 HBSS(Hanks' Blanced Salt Solution) 완충액으로 2회 세척한 뒤 Fluo-4를 세포에 넣어주었다. 37℃에서 30분, 상온에서 30분 반응시킨 후, HBSS 완충액으로 2회 세척하고 각각의 추출물 및 복합 추출물을 농도별로 세포에 처리하였다. 10분간 반응시킨 후 캡사이신을 처리하고 60초간 세포내 Ca2+ 농도변화를 측정하였다. 494 nm의 파장으로 여기(excitation)시켰을 때, 516 nm의 파장으로 방출(emission)되는 형광으로 세포내 Ca2+ 농도를 측정하였다. 캡사이신 처리 후 60초간의 플렉스(flex)를 측정하여 얻어낸 값의 최소값과 최대값의 차를 구한 후, 그 값을 각각의 추출물 및 복합 추출물 처리시의 최소값과 최대값의 차와 비교하여 칼슘이온들의 세포내 유입에 대한 억제율(%)을 하기 표 1에 나타내었다.The HEK293-TRPV1 cell line was inoculated on a 96-well black plate at 3 x 10 4 cells / well and cultured for 24 hours. Twenty-four hours later, the cells were washed twice with HBSS (Hanks' Blanced Salt Solution) buffer, and then Fluo-4 was added to the cells. After incubation at 37 ° C for 30 minutes and at room temperature for 30 minutes, the cells were washed twice with HBSS buffer, and the extracts and complex extracts were treated with cells at different concentrations. After 10 minutes of reaction, capsaicin was treated and the change of intracellular Ca 2+ concentration was measured for 60 seconds. Intracellular Ca 2+ concentration was measured by fluorescence emission at a wavelength of 516 nm when excited with a wavelength of 494 nm. The difference between the minimum value and the maximum value obtained by measuring the flex of 60 seconds after the capsaicin treatment was obtained and then the difference was compared with the difference between the minimum value and the maximum value in the treatment of each extract and compound extract, The percent inhibition against intracellular entry is shown in Table 1 below.

처리물질Treating material TRPV1 활성 저해율(%)TRPV1 activity inhibition (%) 캡사이신(대조군)Capsaicin (control) -- 옥수수껍질 추출물 (1-1)Corn bark extract (1-1) 10 ppm10 ppm 22 100 ppm100 ppm 1One 200 ppm200 ppm 55 병풀 지상부 추출물 (1-2)Bacillus subtilis extract (1-2) 10 ppm10 ppm 33 100 ppm100 ppm 55 200 ppm200 ppm 77 병풀 지상부 추출물의 분획 (1-2-1)Fraction of above-ground portion extract (1-2-1) 10 ppm10 ppm 66 100 ppm100 ppm 1111 200 ppm200 ppm 1818 복합
추출물
complex
extract
옥수수 껍질
+
병풀 지상부 추출물
(1-3)
Corn husk
+
Bacillus subtilis extract
(1-3)
10 ppm10 ppm 88
100 ppm100 ppm 1212 200 ppm200 ppm 1717 옥수수 껍질
+
병풀 지상부 추출물의 분획 (1-4)
Corn husk
+
Fraction of groundwort extract (1-4)
10 ppm10 ppm 1010
100 ppm100 ppm 2525 200 ppm200 ppm 4343

상기 표 1에서 보듯이, 각각의 옥수수 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물이 단독으로 처리된 군에서 캡사이신에 의한 세포 내 칼슘 이온들의 유입이 거의 차이를 나타내지 않았으며, 병풀 지상부 추출물의 분획 및 복합 추출물 중 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 복합 추출물의 처리 조건에서는 약한 칼슘저해 활성을 나타내었고, 특히 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획의 복합 추출물을 처리한 조건에서 농도에 따라 유의적으로 칼슘 이온의 유입이 감소됨을 확인할 수 있었다.As shown in Table 1, there was almost no difference in the intracellular calcium ion inflow by capsaicin in the groups treated with the extracts of corn husks and topical extracts of corn cobs. In the fraction and complex extracts of corn borer, In the treatment conditions of complex extract of bark extract and topical extract of Bacillus subtilis, it showed weak calcium inhibitory activity. In particular, when the extract of corn husk extract and fraction of Bacillus subtilis extract was treated, Respectively.

상기한 결과로부터, 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획의 복합 추출물이 TRPV1을 매개로 하는 피부 가려움증의 증상을 완화하는데 효과적임을 알 수 있었다.From the above results, it was found that the combined extract of the corn husk extract and the fraction of the groundwort extract from the corn cob is effective in relieving symptoms of skin itching through TRPV1.

실시예 4: Example 4: in-vitroin vitro 에서 복합 추출물의 IL-31 발현 저해 효과 측정Inhibition of IL-31 Expression by Combined Extracts

말초혈액 단핵세포(Peripheral blood mononuclear cell, PBMCs, ATCCㄾ PCS-800-011™)를 5% 인간 AB 혈청, 5 mmol/L 글루타민, 1% 페니실린/스트렙토마이신이 포함된 RPMI에 배양후 24-웰 플레이트에 2 x 106 세포수/웰이 되도록 접종시킨 뒤 24시간동안 배양하였다. 배양한 각 웰에 시험물질을 2시간동안 전처리한 다음 황색포도상구균(Staphylococcal enterotoxin B, SEB, Sigma, USA)를 1ug/ml 농도로 처리하여 24시간 동안 다시 배양한다. 24시간 후 세포를 회수하여 RNA 추출 키트(RNeasy Mini kit, Qiagen, 독일)를 이용하여 RNA를 추출한 뒤 cDNA 합성키트(amfiRivert cDNA Synthsis Platinum Master Mix, Gendepot, 미국)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 각 조건별 cDNA를 이용하여 IL-31의 mRNA 발현 정도를 실시간 중합효소 연쇄반응(real-time PCR)을 이용하여 확인하였다. 사용한 PCR 프라이머는 하기 표 2에 나타내었다.Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs, ATCC® PCS-800-011 ™) were cultured in RPMI containing 5% human AB serum, 5 mmol / L glutamine, 1% penicillin / streptomycin, Plates were inoculated at 2 x 10 6 cells / well and cultured for 24 hours. The test material is pretreated for 2 hours in each well and incubated for 24 hours with 1 ug / ml of Staphylococcal enterotoxin B (SEB, Sigma, USA). After 24 hours, the cells were recovered and RNA was extracted using an RNA extraction kit (RNeasy Mini kit, Qiagen, Germany), and cDNA was synthesized using a cDNA synthesis kit (amfiRivert Synthsis Platinum Master Mix, Gendepot, USA). The mRNA expression level of IL-31 was confirmed by real-time PCR using the synthesized cDNA of each condition. The PCR primers used are shown in Table 2 below.

유전자gene 프리이머Preemer 서열 (5 → 3)Sequence (5 → 3) IL-31IL-31 forwardforward GCC CAG CCG CCA AACGCC CAG CCG CCA AAC reversereverse GCT GTC TGA TTG TCT TGA GAT ATGCGCT GTC TGA TTG TCT TGA GAT ATGC

상기 조건으로 수행한 IL-31의 실시간 PCR 결과는 도 2에 나타내었다.Real-time PCR results of IL-31 performed under the above conditions are shown in FIG.

도 2는 옥수수 껍질과 병풀 지상부 추출물을 포함하는 복합 추출물의 IL-31 발현 억제효과를 보여주는 그래프이다. 여기에서 보듯이, 각각의 옥수수 껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물 및 병풀 지상부 추출물의 분획이 단독으로 처리된 군 및 옥수수껍질과 병풀 지상부 추출물이 포함된 복합 추출물은 대조군인 SEB 처리군과 비교하여 IL-31 발현 저해능이 없거나 약한 반면, 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획이 포함된 복합 추출물은 우수한 IL-31 발현 저해능을 나타내었다.FIG. 2 is a graph showing the effect of inhibiting the expression of IL-31 in a complex extract containing a corn husk and an extract of a groundwort plant. As can be seen, the extracts of each of corn husk extract, corn husk extract, corn husk and corn husk and corn husk and corn rind extracts compared to the control SEB treatment group showed IL-31 In contrast, the combined extracts of corn husk extract and fraction of topical extract from the topical extracts showed excellent inhibition of IL-31 expression.

실시예 5: 복합 추출물의 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험Example 5: Test for confirming safety of the complex extract on human skin

세포실험 결과 효능을 보인 병풀 지상부 추출물의 분획이 인체피부에 안전한지 확인하기 위하여, 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획이 포함된 복합 추출물에 대한 피부 안전성 검증 실험을 수행하였다. 피부 안전성 검증을 위해 통상의 피부누적자극실험을 실시하였다.In order to confirm that the fraction of the topical extract of Bacillus subtilis showed efficacy on the human skin, a skin safety test was conducted on a complex extract containing a fraction of corn husk extract and bacillus subtilis extract. In order to verify skin safety, normal skin stimulation experiments were performed.

5-1. 복합 추출물을 함유한 피부 외용제 제조5-1. Manufacture of external skin preparation containing complex extract

옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획이 포함된 복합 추출물이 인체 피부에 안전한지 확인하기 위하여, 하기 표 3의 성분 및 함량으로 복합 추출물을 함유한 피부 외용제를 제조하였다. In order to confirm that the complex extract containing the corn husk extract and the fraction of the topical extract of the bacillus subtilis was safe for the human skin, a skin external preparation containing the complex extract was prepared by the ingredients and contents shown in Table 3 below.

구체적으로, 정제수, 글리세린, 부틸렌글리콜을 혼합하고 70℃에서 용해하였으며(물파트), 상기 세 성분과 트리메탄올아민을 제외한 나머지 성분을 70℃에서 용해하였다(오일파트). 상기 오일파트를 물파트에 첨가하고 호모믹서(일본 Tokushu Kika사)로 교반하여 1차 유화하였고, 여기에 트리메탄올아민을 최종 첨가하였다. 다음으로, 상기 혼합액에 생성된 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 피부 외용제를 제조하였다. 외용제 조성물 함량은 하기 표 3에 나타내었다.Specifically, purified water, glycerin, and butylene glycol were mixed and dissolved at 70 캜 (water part), and the other components except for the above three components and trimethanolamine were dissolved at 70 캜 (oil part). The oil part was added to a water part and stirred with a homomixer (Tokushu Kika, Japan) for primary emulsification, and trimethanolamine was finally added thereto. Next, the bubbles generated in the mixed solution were removed, and the mixture was cooled to room temperature to prepare an external preparation for skin. The composition of the composition for external application is shown in Table 3 below.

성분ingredient 함량 (%)content (%) 대조군Control group 시험군Test group 정제수Purified water 7272 71.971.9 글리세린glycerin 8.08.0 8.08.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 4.04.0 4.04.0 복합 추출물Complex extract 00 0.10.1 카프릴릭 카프리 트리글리세라이드Caprylic Capri Triglyceride 8.08.0 8.08.0 스쿠알란Squalane 5.05.0 5.05.0 세테아릴 글루쿠사이드Cetearyl glucide 1.51.5 1.51.5 소르비탄 스테아레이트Sorbitan stearate 0.40.4 0.40.4 세테아릴 알코올Cetearyl alcohol 1.01.0 1.01.0 트리메탄올아민Trimethanolamine 0.10.1 0.10.1 총중량Gross weight 100100 100100

5-2. 피부누적 자극 실험5-2. Experiment of cumulative stimulation of skin

상기 5-1에서 제조한 피부 외용제를 건강한 30명의 성인을 대상으로 윗팔뚝 부위에 격일로 총 9회, 24시간 누적 첩포를 시행하여 복합 추출물이 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다.The skin external preparation prepared in the above 5-1 was applied to 30 healthy adults for 9 times and 24 hours cumulative pelletization on the upper forearm every other day to determine whether or not the complex extract stimulates the skin.

첩포 방법은 핀 챔버(Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였으며, 챔버에 상기 각 피부 외용제를 15 ㎕씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응의 정도를 하기 수학식 1을 이용하여 점수화 하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.A pin chamber (Finn chamber, Epitest Ltd, Finland) was used as a method of applying the coating, and 15 μl of each of the external preparations was dropped into the chamber. The degree of reaction on the skin each time was scored using the following equation (1), and the results are shown in Table 4.

Figure pat00001
Figure pat00001

반응도에서 ±는 1점, +는 2점 및 ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.A score of ±, a +, and a ++ is given as 1, 2, and 4, respectively, and a safe composition is determined when the average degree of reaction is less than 3.

시험물질Test substance 반응이 나타난 피검자수(명)Number of subjects who responded (persons) 평균
반응도
Average
Reactivity
1주1 week 2주2 weeks 3주3 weeks 1차Primary 2차Secondary 3차Third 4차Fourth 5차5th 6차6th 7차Seventh 8차8th car 9차9th ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++ ±/+/++± / + / ++
대조군

Control group
-/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - 0.000.00
복합 추출물
(200 ppm)
Complex extract
(200 ppm)
-/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - -/-/-- / - / - 0.000.00
피검인원Subject 3030 3030 3030 3030 3030 3030 3030 3030 3030 0.000.00

상기 표 4에서 보듯이, 시험군은 ±, + 및 ++에 해당하는 사람의 수가 각각 0명, 0명 및 0명이고, 평균 반응도는 각각 0.00, 0.00, 0.00이었다. 그러므로 평균반응도가 3이하의 반응도를 나타내므로, 복합 추출물이 누적자극 양상을 나타내지 않는 인체 피부에 안전한 물질로 판정되었다.As shown in Table 4, in the test group, the numbers of persons corresponding to ±, + and ++ were 0, 0, and 0, respectively, and the average reactivity was 0.00, 0.00, and 0.00, respectively. Therefore, the combined extracts were judged to be safe for human skin, which did not exhibit the cumulative stimulus pattern, because the average degree of reactivity was 3 or less.

하기에 본 발명의 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획이 포함된 복합 추출물을 포함하는 조성물을 위한 제제예를 예시한다.An example of a preparation for a composition comprising a corn husk extract of the present invention and a complex extract comprising a fraction of a topical extract of a pathogenic fungus is provided below.

제제예 1 : 화장료 제제Formulation Example 1: Cosmetic preparation

1-1. 유연화장수1-1. Softening longevity

성분ingredient 중량%weight% 복합 추출물Complex extract 0.010.01 글리세린 glycerin 3.03.0 부틸렌 글리콜 Butylene glycol 2.02.0 프로필렌 글리콜 Propylene glycol 2.02.0 카복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.10.1 에탄올ethanol 10.010.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수Preservatives, micronutrients, trace fragrances and trace water 82.7982.79 총계 sum 100.0100.0

1-2. 영양화장수1-2. Nutritional lotion

성분ingredient 중량%weight% 복합 추출물Complex extract 0.010.01 밀납Wax 4.04.0 폴리소르베이트 60 Polysorbate 60 1.51.5 소르비탄세스퀴올레이트 Sorbitan sesquioleate 0.50.5 유동파라핀 Liquid paraffin 5.05.0 스쿠알란 Squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 Caprylic / capric triglyceride 5.05.0 글리세린 glycerin 3.03.0 부틸렌 글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌 글리콜 Propylene glycol 3.03.0 카복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.10.1 트리에탄올아민 Triethanolamine 0.20.2 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 Preservatives, micronutrients, trace fragrances and trace water 69.6969.69 총계 sum 100.0100.0

1-3. 영양크림1-3. Nourishing cream

성분ingredient 중량%weight% 복합 추출물Complex extract 0.010.01 밀납Wax 10.010.0 폴리소르베이트 60 Polysorbate 60 1.51.5 소르비탄세스퀴올레이트 Sorbitan sesquioleate 0.50.5 유동파라핀Liquid paraffin 10.010.0 스쿠알란 Squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 Caprylic / capric triglyceride 5.05.0 글리세린 glycerin 5.05.0 부틸렌 글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌 글리콜 Propylene glycol 3.03.0 트리에탄올아민 Triethanolamine 0.20.2 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 Preservatives, micronutrients, trace fragrances and trace water 56.7956.79 총계 sum 100.0100.0

1-4. 마사지 크림1-4. Massage cream

성분ingredient 중량%weight% 복합 추출물Complex extract 0.010.01 밀납Wax 10.010.0 폴리소르베이트 60 Polysorbate 60 1.51.5 소르비탄세스퀴올레이트 Sorbitan sesquioleate 0.80.8 유동파라핀Liquid paraffin 40.040.0 스쿠알란 Squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 Caprylic / capric triglyceride 4.04.0 글리세린 glycerin 5.05.0 부틸렌 글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌 글리콜 Propylene glycol 3.03.0 트리에탄올아민 Triethanolamine 0.20.2 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 Preservatives, micronutrients, trace fragrances and trace water 27.4927.49 총계 sum 100.0100.0

1-5. 팩1-5. pack

성분ingredient 중량%weight% 복합 추출물Complex extract 0.010.01 폴리비닐알콜Polyvinyl alcohol 13.013.0 소듐카복시메틸셀룰로스 Sodium carboxymethylcellulose 0.20.2 알란토인Allantoin 0.10.1 에탄올 ethanol 5.05.0 노닐페닐에테르Nonyl phenyl ether 0.30.3 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 Preservatives, micronutrients, trace fragrances and trace water 81.3981.39 총계 sum 100.0100.0

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

실시예 6: Example 6: in-vivoin-vivo 에서 복합 추출물을 함유하는 화장료의 가려움증 완화 효능 측정Measures for relieving itchiness of cosmetics containing complex extracts

임상유효성 평가로 피부 건조증에 의해 가려움증이 있는 시험자 33명을 기준으로 시험을 실시하였고, 8주간 옥수수껍질 추출물과 병풀 지상부 추출물의 분획이 포함된 복합 추출물이 포함된 크림 바른 후 복합 추출물이 포함되지 않은 조건과 비교하여 가려움 개선도 측정 및 설문평가를 통해서 피부 가려움증에 대한 완화 효과를 확인하였다. 피부 가려움증이 발생하는 대표적인 질병인 아토피 피부염에 적용하여 아토피 피부염 평가법인 SCORAD(Scoring atopic dermatitis) 변화율과 통증 가려움 정도 측정법인 VAS(Visual analogue scale)과 변화율을 측정하였다.Clinical efficacy was assessed on the basis of 33 subjects who had itching due to dry skin. After 8 weeks of corn bark extract and complex extract containing the fraction of topical extract of Bacillus subtilis, The results of this study were as follows. The rate of SCORAD (Scoring atopic dermatitis) and the visual analogue scale (VAS), which is a measure of pain itching, and the rate of change were measured by applying it to atopic dermatitis, a representative disease that causes skin itching.

상기 제조예 1-3의 방법으로 복합 추출물이 함유된 크림을 제조한 다음, 33명의 시험자를 대상으로 1일 2회, 8주 동안 상기 크림을 사용하게 하였다. 대조구로는 복합 추출물 대신 정제수가 함유된 상기 제조예 1-3의 방법으로 제조한 크림을 사용하였다. 그 값을 하기 표 10에 나타내었다.The cream containing the complex extract was prepared by the method of Preparation Example 1-3, and then 33 creams were used for 2 weeks for 8 weeks. As a control, the cream prepared by the method of Preparation Example 1-3 containing purified water was used instead of the complex extract. The values are shown in Table 10 below.

구분division 가려움증 평가 (VAS) (Mean±SD)Itching Assessment (VAS) (Mean ± SD) 사용전Before use 36.82 ± 11.4536.82 + - 11.45 대조군 변화율Control group change rate 사용 4주 후After 4 weeks of use 30.52 ± 10.7530.52 + - 10.75 사용 8주 후After 8 weeks of use 28.69 ± 15.46 28.69 ± 15.46 사용전 - 사용 4주후Before use - 4 weeks after use 17.11 %17.11% 사용전 - 사용 8주후Before use - After 8 weeks of use 22.08 %22.08% 시험군 변화율Test group change rate 사용 4주 후After 4 weeks of use 26.08 ± 13.5226.08 ± 13.52 사용 8주 후After 8 weeks of use 18.39 ± 12.1618.39 ± 12.16 사용전 - 사용 4주후Before use - 4 weeks after use 29.11 %29.11% 사용전 - 사용 8주후Before use - After 8 weeks of use 50.05 %50.05% 변화율(%)Rate of change (%) 대조군 시험군 (4주)Control group (4 weeks) 12 %12% 대조군 시험군 (8주)Control group (8 weeks) 28 %28%

실험결과, 대조군인 복합 추출물이 포함되지 않은 크림을 바른 조건과 시험군인 복합 추출물이 포함된 크림을 8주간 바른 조건을 비교했을 때 아토피 지수가 12% 개선된 것을 확인할 수 있었고, 통증 가려움 정도는 28% 개선된 것을 확인할 수 있었다.As a result of the experiment, it was confirmed that the atopy index was improved by 12% when the condition of the cream without the compound extract as the control group and the condition of the cream containing the compound extract of the test group were compared with each other for 8 weeks, and the degree of pain itching was 28 % Improvement.

Claims (7)

옥수수 껍질 및 병풀 지상부 추출물을 2:1 내지 1:2의 중량비로 혼합한 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.A corn husk and a topical extract of Bacillus subtilis are mixed at a weight ratio of 2: 1 to 1: 2 as an active ingredient. 제 1 항에 있어서,
상기 병풀 지상부 추출물이 아시아티코사이드 B를 함유하는 병풀 지상부 추출물의 분획인 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the topical extract of Bacillus subtilis is a fraction of topical extract of Bacillus subtilis containing Asian thioside B.
제 2 항에 있어서,
상기 병풀 지상부 추출물의 분획이 병풀 지상부 추출물을 유기용매에 용해시키고 여과한 다음 유기용매와 물을 이동상으로 사용하는 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 수행하여 제조된 것임을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.
3. The method of claim 2,
Characterized in that the fraction of the topical extract of Bacillus cereus is obtained by dissolving the Bacillus subtilis extract in an organic solvent and filtering and then performing a high performance liquid chromatography (HPLC) using an organic solvent and water as a mobile phase. Cosmetic composition.
제 1 항에 있어서,
상기 피부 가려움증은 염증성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선, 피부 건조증, 지루성 피부염 및 자외선 중 하나 이상으로부터 유발되는 가려움증인 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the skin itching is an itch caused by at least one of inflammatory dermatitis, atopic dermatitis, contact dermatitis, psoriasis, dry skin, seborrheic dermatitis, and ultraviolet rays.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물이 캐모마일, 황금, 감초, 녹차, 호장 및 로즈마리 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition further comprises at least one extract selected from the group consisting of chamomile, golden, licorice, green tea, shellac, and rosemary extract.
제 1 항에 있어서,
상기 복합 추출물은 조성물 전체중량에 대하여 0.00001 내지 15 중량%인 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The cosmetic composition for suppressing or alleviating skin itching according to claim 1, wherein the complex extract is 0.00001 to 15% by weight based on the total weight of the composition.
옥수수 껍질 및 병풀 지상부 추출물을 2:1 내지 1:2의 중량비로 혼합한 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 억제 또는 완화용 약학적 조성물.
Corn husks and topical extracts of Bacillus subtilis in a weight ratio of 2: 1 to 1: 2 as an active ingredient.
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