KR20180052718A - 시스틴 노트 스캐폴드 플랫폼 - Google Patents
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Abstract
VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)이 제공된다. 추가로, 진단 및 치료 조성물 및 방법을 포함하여 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP을 사용하는 방법이 제공된다. 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)에 결합하는 비-자연 CKP가 또한 제공된다.
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대안적 단백질 스캐폴드로부터 신규한 단백질의 설계 및 공학기술은 구조 생물학 및 이미지형성 도구부터 병상에서 현재 시험되고 있는 치료 시약까지 적용 범위의 광범위 스펙트럼으로 지난 10년간 신흥 분야가 되어 왔다 (HK Binz 등, Nat Biotechnol 23, 1257-1268, 2005; HK Binz and A Pluckthun, Curr Opin Biotechnol 16, 459-469, 2005; SS Sidhu and S Koide, Curr Opin Struct Biol 17, 481-487, 2007; A Skerra, Curr Opin Biotechnol 18, 295-304, 2007; C Gronwall and S Stahl, J Biotechnol 140, 254-269, 2009; T Wurch 등, Trends Biotechnol 30, 575-582, 2012; S Banta 등, Annu Rev Biomed Eng 15, 93-113, 2013).
잠재적인 대안적 스캐폴드 분자의 바람직한 물리적 특성은 높은 열적 안정성 그리고 열적 폴딩 및 언폴딩의 가역성을 포함한다. 고도로 유사한 열안정성 서열과 비교에 기반된 합리적인 설계, 디설파이드 브릿지 안정화의 설계, -나선 경향을 증가시키기 위한 돌연변이, 염 다리의 공학기술, 단백질의 표면 전하의 변경, 지향된 진화, 및 공통 서열의 조성물을 포함하는, 단백질 및 효소의 분명한 열적 안정성을 증가시키기 위해 몇 개의 방법이 적용되어 왔다 (Lehmann and Wyss, Cur Open Biotechnology 12, 371-375, 2001).
시스틴-노트 펩타이드는 광범위한 공급원에서 나오고 다양한 약리적 활성을 나타낸다. 이들은 거의 30-50개 아미노산 길이이고 3개 디설파이드 결합을 형성하는 6개 보존된 시스테인 잔기를 함유한다. 디설파이드 중 하나는 2개의 다른 디설파이드 및 그것의 상호연결 골격에 의해 형성되는 매크로사이클을 투과하여, 이로써 표면에서 노출된 다중 루프로 특징적인 노트된 위상기하학을 산출한다. 루프는 6개 보존된 시스테인 잔기를 측접하고 사실상 고도로 가변성인 아미노산 영역으로서 정의된다. 더욱이, 디설파이드 결합의 특유의 배열은 시스틴-노트 펩타이드를 열적, 단백분해적 및 화학적 열화에 고도로 안정적으로 만든다.
따라서, 다양한 치료 및 진단 응용분야, 예컨대 안구 질환 및 장애에 대하여 작은, 안정적인, 인공 항체-유사 분자를 개발하는 것이 필요하다. 본 발명은 이러한 및 다른 필요를 충족시킨다.
본 발명의 간략한 요약
특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)를 본 명세서에서 제공하되, 상기 CKP는 시스틴 스캐폴드 구조를 포함한다:
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6 (서열식별번호:2), X1X2X3X4X5X6X7 (서열식별번호:3), X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4), X1X2X3X4X5X6X7X8X9 (서열식별번호:5), 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 (서열식별번호:6), 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5 (서열식별번호:7), 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L5은 루프 5이고, 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5 (서열식별번호:7), 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
상기 비천연 아미노산은 L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고
상기 CKP는 500 pM 이상의 친화도로 VEGF-A에 결합한다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)는 서열식별번호: 1에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질과 관련된 변경된 디설파이드 결합 연결성을 가지며; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 2종의 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 3종의 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 G이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서, X3은 I가 아니고; X5은 M이 아니고/거나; X6은 R이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X1은 P, Q, R, T, V, D, N, K, L, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T, D, L, V, I, R, P, N 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 T, P, M, L, S, F, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X4은 R, T, Q, D, W, L, E, S, K, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, P, V, E, K, L, I, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X6은 K, N, F, P, L, Y, T, D, M, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X7은 Q, W, H 및/X; 및/또는 X8은 Y, A, G, D, E, W, S, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X9은 L, I, V, D, E 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X10은 Y, T, M, N, F, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 G, Q, H, R, L, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; X2은 P, M, W, Y, F, L, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X3은 N, F, H, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X4은 G, Q, D, N, K, H, E, 및 S로부터 선택된 아미노산이고/거나; X5은 F, S, 및 T로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4), 여기서:X1은 P, Q, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T, L, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 T, M 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 R, Q, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, P, 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X6은 K 및 F로부터 선택된 아미노산이고; X7은 Q 및 W로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X8은 Y, G, 및 D로부터 선택된 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 X9 X10 (서열식별번호:6), 여기서:X1은 Q, R, T 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 P이고; X4은 T 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, E, P, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X6은 N 및 P로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X8은 A, D, E, 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X9은 L 및 I로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X10은 Y, T, M 및 N으로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 G, H, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; X2은 P, M, W, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X3은 N 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X4은 G, Q, 및 S로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 F 및 S로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4), 여기서:X1은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X2은 V, I, R, L, 및 P로부터 선택된 아미노산이고; X3은 L, S, M, T, 및 F로부터 선택된 아미노산이고; X4은 Q, L, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P이고; X6은 F, L, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; 그리고 X8은 G이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X3은 Y이고; X5은 S이고; 그리고 X1, X2 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고, X4은 G가 아니고/거나, X5은 F가 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 H, L, R, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; X2은 W, F, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y이고; X4은 Q, N, K, H, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 X9 X10 (서열식별번호:6), 여기서:X1은 K, Q, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 P 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 L, T, S 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, V, I, 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X6은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; X8은 A 및 S로부터 선택된 아미노산이고; X9은 L, V, E 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X10은 Y 및 F로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 Q이고; X2은 L, F, M, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X3은 F, Y, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X4은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S 및 T로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L2에서, X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4), 여기서:X5은 P이고; X7은 W이고; X8은 G이고; 그리고 여기서 X1, X2, X3, X4 및 X6 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 P가 아니고, X2은 R이 아니고, X3은 I가 아니고/거나 X6은 R이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4), 여기서:X1은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X2은 I 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X3은 M 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 L, Q, D 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P이고; X6은 F, Y, T, L, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; 그리고 X8은 G이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 Q, H, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Y 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y이고; X4은 Q 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X3은 Y이고; X5은 S이고; 그리고 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고/거나, X4은 G가 아니다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L2에서: X1은 G 또는 E로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Q, L, P, R, E, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고; X3은 S, D, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; X4은 F, Y, L, M, 및 I로부터 선택된 아미노산이고/거나; X5은 E, D, Q, L, 및 S로부터 선택된 아미노산이고,
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L3에서, X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L4에서, X1은 V 또는 F이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 G를 제외한 임의의 아미노산이고; X2은 P를 제외한 임의의 아미노산이고; X3은 N을 제외한 임의의 아미노산이고; X4은 G를 제외한 임의의 아미노산이고; 그리고/또는 X5은 F를 제외한 임의의 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1은 하기 구조를 갖는다: X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호:4) (여기서 X1은 N, D, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 I, V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 M 또는 X이고; X4은 L, Q, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P 또는 X이고; X6은 F, Y, 또는 X이고; X7은 W 또는 X이고; 그리고 X8은 G 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L3에서, 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 단, X1은 류신 (L)이 아니고, X2은 알라닌 (A)이 아니고, 그리고 X3은 글리신 (G)이 아니고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 상기 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L3에서: X1은 M, F, L V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 S, N, Q, I, Y, E, V, T, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 D, Q, T, N, E, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L4에서, X1은 V를 제외한 임의의 아미노산 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L4에서, X1은 I, L, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X3은 Y 또는 X이고; X5은 S 또는 X이고; 그리고 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산 또는 X이고, 단, X1은 G가 아니고, X2 는 P가 아니고/거나 X4은 G가 아니고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 Q, H, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Y, W, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y 또는 X이고; X4은 Q, N, 또는 X이고; X5은 S 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, X는 및 비천연 아미노 산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L2에서: X1은 G 또는 X이고; X2은 R, P, 또는 X이고; X3은 D 또는 X이고; X4 는 F, I, 또는 X이고; 그리고 X5은 E, D, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, 및 L-4-플루오로페닐알라닌.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLQQCICQYYQSCG (서열식별번호:103). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVERCICQYYQSCG (서열식별번호:104). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:105). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMNQCICQYYQSCG (서열식별번호:106). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMQTCICQYYQSCG (서열식별번호:107). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVYQCICQYYQSCG (서열식별번호:108). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECFINCICQYYQSCG (서열식별번호:109). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:110). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVTECICQYYQSCG (서열식별번호:111). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECFYECICQYYQSCG (서열식별번호:112). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:113). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호:114). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호:139). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:140). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:142). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:145) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임).
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:224) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)가 제공된다: GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:113), GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호:114), GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호:139), GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:140), GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:142), GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:145) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), 및 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:224) (여기서 X는 노르류신임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:113). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호:114). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호:139). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:140). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:142). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:145) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:224) (여기서 X는 노르류신임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 VEGF-A에 결합한다.
특정 구현예에서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)가 제공된다: GCDVX1QPYWGCGPDI-D/E-CLS-N/K/X2-CICHWYNSCG (서열식별번호:534), GCDVX1QPYWGCGPDI-N/K/X2-CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호:535), GCNIX1LPYWGCGRDF-D/E-CME-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:538), GCNIX1LPYWGCGRDF-N/K/X2-CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:539), GCNIX1LPFWGCGRDF-D/E-CVS-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:540), 및 GCNIX1LPFWGCGRDF-N/K/X2-CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:541) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVX1QPYWGCGPDI-D/E-CLS-N/K/X2-CICHWYNSCG (서열식별번호:534) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVXQPYWGCGPDIDCLSKCICHWYNSCG (서열식별번호:536) (여기서 X는 노르류신임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVX1QPYWGCGPDIDCLSX2CICHWYNSCG (서열식별번호:537) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVX1QPYWGCGPDI-N/K/X2-CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호:535) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPYWGCGRDF-D/E-CME-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:538) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIXLPYWGCGRDFECMEKCICQYYQSCG (서열식별번호:543) (여기서 X는 노르류신임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPYWGCGRDFECMEX2CICQYYQSCG (서열식별번호:544) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPYWGCGRDF-N/K/X2-CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:539) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPFWGCGRDF-D/E-CVS-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:540) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIXLPFWGCGRDFECVSKCICQYYQSCG (서열식별번호:545) (여기서 X는 노르류신임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPFWGCGRDFECVSX2CICQYYQSCG (서열식별번호:546) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIX1LPFWGCGRDF-N/K/X2-CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:541) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 VEGF-A에 결합한다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)가 제공되고, 상기 CKP는 시스틴 스캐폴드 구조를 포함한다:
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고;
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
상기 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질과 관련된 변경된 디설파이드 결합 연결성을 갖는다: 서열식별번호:1; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6이고; 그리고 상기 CKP는 적어도 20%의 퍼센트 알파 나사선구조 함량을 갖는다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및 Z2은 임의의 아미노산, 1 초과 종의 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1 중 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L2 중 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L3 중 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L4 중 X1 은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5 중 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)는 500 pM 이하의 친환도로 VEGF-A에 결합한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정된다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 2종의 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 3종의 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다.
상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 C-말단 카복실기는 변형된다 (예컨대, 캐핑된다). 상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 N-말단 아민기는 변형된다 (예컨대, 캐핑된다). 상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 C-말단 카복실기는 캡핑되고, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 N-말단 아민기는 변형된다 (예컨대, 캐핑된다).
상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 N-말단 아민기는 아세틸화된다 상기의 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)의 N-말단 아민기는 아세틸화된다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)은 VEGF-A 활성을 억제한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, CKP는 약 0.5 nM 내지 약 1.0 nM의 IC50로 VEGF-A 활성을 억제한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 비-자연 발생 EETI-II 스캐폴드 단백질은 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합한다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 비-자연 발생 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 항체 G6.31과 경쟁한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하기 위해 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)와 경쟁하는 비-자연 발생 CKP가 제공된다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 적어도 하나를 포함하는 VEGF-A 상의 에피토프에 결합하는 비-자연 발생 CKP:V14, V15, F17, D19, Y21, Q22, Y25, I46, K48, N62, D63, L66, M81, I83, K84, P85, H86, G88, Q89, I91, C104, R105, 및 P106.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: K48, N62, 및 D63. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: Y21, Y25, 및 P106. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: H86 및 Q89. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: M81, D19, 및 Q22. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: F17, M81, 및 I91. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: V14, F17, D19, Q22, M81, 및 I91. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 잔기는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: Y25.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP은 치료제에 접합된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP은 표지에 접합된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 표지는 방사선동위원소, 형광 염료, 및 효소로 구성된 군으로부터 선택된다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 하나의 핵산 분자를 인코딩하는 발현 벡터가 또한 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 하나의 발현 벡터를 포함하는 세포가 또한 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 생성하는 방법이 또한 제공되고, 상기 방법은 상기 구현예 중 임의의 하나의 세포를 배양하는 단계, 및 상기 세포 배양으로부터 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 회수하는 단계를 포함한다.
상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 생성하는 방법이 또한 제공되고, 상기 방법은 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)를 화학적으로 합성하는 단계를 포함하다.
상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP) 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 본 조성물은 1종 이상의 추가의 화합물을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 제2 생물학적 분자에 결합한다: 인터류킨-6 (IL-6); 인터류킨-6 수용체 (IL-6R); PDGF; 안지오포이에틴; 안지오포이에틴 2; Tie2; S1P; 인테그린 αvβ3, αvβ5, 및 α5β1; 베타셀룰린; 아페린/APJ; 에리트로포이에틴; 보체 인자 D; TNFα; HtrA1; VEGF 수용체; ST-2 수용체; 및 하기에 유전적으로 연결된 단백질: 연령 관련 황반 변성 (AMD) 위험 예컨대 보체 경로 성분 C2, 인자 B, 인자 H, CFHR3, C3b, C5, C5a, C3a, HtrA1, ARMS2, TIMP3, HLA, 인터류킨-8 (IL-8), CX3CR1, TLR3, TLR4, CETP, LIPC, COL10A1, 및 TNFRSF10A. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 비-자연 발생 CKP이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 항체 또는 이것의 항원-결합 단편이다.
대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 유효량의 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 본 방법은 추가로, 1종 이상의 추가의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP은 추가의 화합물(들)과 동시에 투여된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP은 추가의 화합물(들) 전 또는 후에 투여된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 제2 생물학적 분자에 결합한다: 인터류킨-6 (IL-6); 인터류킨-6 수용체 (IL-6R); PDGF; 안지오포이에틴; 안지오포이에틴 2; Tie2; S1P; 인테그린 αvβ3, αvβ5, 및 α5β1; 베타셀룰린; 아페린/APJ; 에리트로포이에틴; 보체 인자 D; TNFα; HtrA1; VEGF 수용체; ST-2 수용체; 및 하기에 유전적으로 연결된 단백질: 연령 관련 황반 변성 (AMD) 위험 예컨대 보체 경로 성분 C2, 인자 B, 인자 H, CFHR3, C3b, C5, C5a, C3a, HtrA1, ARMS2, TIMP3, HLA, 인터류킨-8 (IL-8), CX3CR1, TLR3, TLR4, CETP, LIPC, COL10A1, 및 TNFRSF10A. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 비-자연 발생 CKP이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 추가의 화합물은 항체 또는 이것의 항원-결합 단편이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환이다: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP).
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP) 또는 본 조성물은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 이식가능 디바이스는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하는데 사용하기 위해 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환이다: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 본 조성물은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 이식가능 디바이스는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하는데 사용하기 위해 상기 구현예 중 임의의 하나의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)을 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환이다: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP). 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 약제은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, 이식가능 디바이스는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP)은 지효성 전달용으로 제형화된다.
상기 구현예 중 임의의 것의 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 (CKP) 및 PLGA을 포함하는 제형이 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, PLGA는 PLGA 로드이다.
인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)가 또한 제공되고, 상기 CKP는 시스틴 스캐폴드 구조를 포함한다:
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2;
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6, X1X2X3X4X5X6X7, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고; 그리고
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 2종의 아미노산이다. 특정 구현예에서, Z2 는 3종의 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2은 G이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X1은 R, V, M, A, G, N, S, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T, N, S, G, R, 및 A로부터 선택된 아미노산이고; X3은 N, R, H, V, K, S, G, I, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X4은 R, V, N, I, K, S, 및 T으로부터 선택된 아미노산이고; X5은 V, R, K, I, T, S, L, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X6은 K, G, A, I, R, N, S, 및 V로부터 선택된 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X7은 G, R, K, E, P, 및 T로부터 선택된 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X8은 G, R, K, Q, A, 및 S로부터 선택된 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X9은 R 또는 G로부터 선택된 아미노산이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L1에서: X10은 E, W, 및 G로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L5에서: X1은 G, S, N, Y, A, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 P, G, S, V, E, R, F, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 N, G, S, E, P, K, H, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X4은 G, R, H, S, Q, V, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 F, D, N, R, G, Y, S, 및 T로부터 선택된 아미노산이다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L2에서, X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L3에서, X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 상기 구현예 중 임의의 것에 따른 (또는 그것에 적용된 바와 같은) 특정 구현예에서, L4에서, X1은 V이다.
도1은 EETI-II 시스틴 노트 단백질의 구조를 도시한다.
도2A는 EGF_CKP9.54.90이 VEGF-A(8-109)와 KDR; VEGF-A(8-109)와 Flt-1; VEGF-A 165와 KDR; VEGF-B와 Flt-1; VEGF-C와 Flt-4; VEGF-D와 Flt-4; 및 PIGF-2와 FLT-1 사이 상호작용을 방해하는지를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 보여준다.
도2B는 EGF_CKP9.54.90이 VEGF-A(8-109)와 KDR; VEGF-A(8-109)와 Flt-1; VEGF-A 165와 KDR; EGF와 EGFR; PDGF와 PDGFR; NGF와 NGFR; 및 IGF와 IGFR 사이 상호작용을 방해하는지를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 보여준다.
도3은 VEGF_CKP9.54.90, VEGF_CKP9.54, 및 VEGF_CKP9.63.12가 트립신 프로테아제 활성을 억제시키는지를 결정하기 위해 수행된 실험의 결과를 보여준다.
도4 는 VEGF_CKP9.54.90 및 VEGF_CKP9.63.12가 트립신 소화에 저항성인지를 결정하기 위해 수행된 실험의 결과를 보여준다.
도5 는 VEGF_CKP9.54.90의 구조, 야생형 EETI-II의 구조를 도시하고, 야생형 EETI-II의 것과 VEGF-결합 CKP 변이체의 디설파이드 결합 연결성 패턴을 비교하는 도식을 제공한다.
도6은 VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54.90의 공-결정 구조를 도시한다.
도7은 VEGF_CKP9.54.90, 항체 G6.31의 결합 계면, 및 VEGF-A에서 Flt-2의 도메인 2를 보여주는 공간 충전 모델을 도시한다.
도 8은 VEGF_CKP9.54.90, 항체 G6.31의 결합 계면, 및 VEGF-A에서 Flt-2의 도메인 2를 보여주는 리본 다이어그램 모델을 도시한다.
도9는 VEGF-A와 VEGF_CKP9.54.90 사이 상호작용 표면에 VEGF-A에서 접촉 잔기를 보여준다.
도10은 VEGF-A에서 베바시주맙 Fab, Z-도메인, 및 수용체-블록킹 펩타이드 v108의 결합 계면을 보여준다.
도11은 VEGF-A에 VEGF_CKP9.54.90의 결합 및 VEGFA에 VEGF__CKP9.63.12의 결합에 관한 VEGF-A내 아미노산 치환 돌연변이의 효과를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다. 실험의 결과는 2개의 상이한 y 축에 대해 나타난다.
도12는 랫트 눈에서 CNV에 관한 VEGF_CKP9.54.90의 효과를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다.
도13은 VEGF-결합 CKP 변이체의 IC50 값을 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다.
도14는 VEGF_CKP9.54 및 VEGF_CKP9.63의 구조를 도시한다. 또한 하기에서 나타난다: 도14, VEGF-A의 Gln22의 측쇄와 수소 결합을 형성할 수 있는 VEGF_CKP9.63의 루프 1내에 위치 8에서 그 잔기를 보여주는 VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.63의 공-결정 구조의 부분이.
도15는 hVEGF(8-109)에 대하여 클론 9.54-28, 9.54, 9.54.1-2, 9.54.1-36, 9.54.1-42, 9.54.1-63, 9.54.1-90, 및 9.54.1의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
도16A는 클론 9.63.44-1 내지 9.63.44-7의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
도16B는 클론 9.63.44-8 내지 9.63.44-14의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
도2A는 EGF_CKP9.54.90이 VEGF-A(8-109)와 KDR; VEGF-A(8-109)와 Flt-1; VEGF-A 165와 KDR; VEGF-B와 Flt-1; VEGF-C와 Flt-4; VEGF-D와 Flt-4; 및 PIGF-2와 FLT-1 사이 상호작용을 방해하는지를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 보여준다.
도2B는 EGF_CKP9.54.90이 VEGF-A(8-109)와 KDR; VEGF-A(8-109)와 Flt-1; VEGF-A 165와 KDR; EGF와 EGFR; PDGF와 PDGFR; NGF와 NGFR; 및 IGF와 IGFR 사이 상호작용을 방해하는지를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 보여준다.
도3은 VEGF_CKP9.54.90, VEGF_CKP9.54, 및 VEGF_CKP9.63.12가 트립신 프로테아제 활성을 억제시키는지를 결정하기 위해 수행된 실험의 결과를 보여준다.
도4 는 VEGF_CKP9.54.90 및 VEGF_CKP9.63.12가 트립신 소화에 저항성인지를 결정하기 위해 수행된 실험의 결과를 보여준다.
도5 는 VEGF_CKP9.54.90의 구조, 야생형 EETI-II의 구조를 도시하고, 야생형 EETI-II의 것과 VEGF-결합 CKP 변이체의 디설파이드 결합 연결성 패턴을 비교하는 도식을 제공한다.
도6은 VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54.90의 공-결정 구조를 도시한다.
도7은 VEGF_CKP9.54.90, 항체 G6.31의 결합 계면, 및 VEGF-A에서 Flt-2의 도메인 2를 보여주는 공간 충전 모델을 도시한다.
도 8은 VEGF_CKP9.54.90, 항체 G6.31의 결합 계면, 및 VEGF-A에서 Flt-2의 도메인 2를 보여주는 리본 다이어그램 모델을 도시한다.
도9는 VEGF-A와 VEGF_CKP9.54.90 사이 상호작용 표면에 VEGF-A에서 접촉 잔기를 보여준다.
도10은 VEGF-A에서 베바시주맙 Fab, Z-도메인, 및 수용체-블록킹 펩타이드 v108의 결합 계면을 보여준다.
도11은 VEGF-A에 VEGF_CKP9.54.90의 결합 및 VEGFA에 VEGF__CKP9.63.12의 결합에 관한 VEGF-A내 아미노산 치환 돌연변이의 효과를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다. 실험의 결과는 2개의 상이한 y 축에 대해 나타난다.
도12는 랫트 눈에서 CNV에 관한 VEGF_CKP9.54.90의 효과를 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다.
도13은 VEGF-결합 CKP 변이체의 IC50 값을 결정하기 위해 수행되었던 실험의 결과를 제공한다.
도14는 VEGF_CKP9.54 및 VEGF_CKP9.63의 구조를 도시한다. 또한 하기에서 나타난다: 도14, VEGF-A의 Gln22의 측쇄와 수소 결합을 형성할 수 있는 VEGF_CKP9.63의 루프 1내에 위치 8에서 그 잔기를 보여주는 VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.63의 공-결정 구조의 부분이.
도15는 hVEGF(8-109)에 대하여 클론 9.54-28, 9.54, 9.54.1-2, 9.54.1-36, 9.54.1-42, 9.54.1-63, 9.54.1-90, 및 9.54.1의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
도16A는 클론 9.63.44-1 내지 9.63.44-7의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
도16B는 클론 9.63.44-8 내지 9.63.44-14의 결합 친화성을 평가하기 위해 수행되었던 파아지 경쟁 ELISA 실험의 결과를 보여준다.
인간 VEGF-A를 특이적으로 결합시키는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKPs)가 제공된다. 상기 비-자연 발생 CKPs는 하기 특징 중 하나 이상을 입증한다: 약 0.5 nM 미만과 약 1.0 nM 미만 사이의 IC50으로 VEGF-A 활성의 억제; 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합; 트립신 소화에 저항; C1-C4, C2-C3, 및 C5-C6의 디설파이드 결합 연결성; 적어도 약 적어도 약 15% 내지 최소 약 50%의 알파 나사선구조 함량; 항체 G6.31에 의해 결합된 에피토프와 상이한 VEGF-A에 관한 에피토프에 결합, 베바시주맙에 의해 결합된 에피토프와 상이한 VEGF-A에 관한 에피토프에 결합, 및/또는 Flt-1에 의해 결합된 에피토프와 상이한 VEGF-A에 관한 에피토프에 결합.
VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드, VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 CKPs를 인코딩하는 핵산, 및 조성물 (예컨대 약제학적 조성물)을 포함하는 키메라성 분자 및 콘주게이트가 또한 제공된다. 비정상 (예컨대 과도한) 혈관신생 및/또는 비정상 혈관 투과도에서 비롯하는 안구 질환 및/또는 장애 (예컨대 안구 혈관 증식성 질환 및/또는 장애) 치료를 위하여 VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 CKPs의 이용 방법이 또한 제공된다. 안구 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서 VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 CKPs의 용도가 또한 제공된다.
관련된 측면에서, 인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)을 결합시키는 비-자연 발생 CKPs가 또한 제공된다.
본 개시내용의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 세포 생물학, 독성학, 분자 생물학, 생화학, 세포 배양, 면역학, 종양학, 재조합 DNA의 분야 및 종래 분야의 기술 내에 관련된 분야에서 표준 방법 및 종래의 기술을 사용한다. 상기 기술은 문헌에서 기재되고 이로써 당해 분야의 숙련가에 이용가능하다. 참조, 예를 들면, Alberts, B. 등, "Molecular Biology of the Cell," 5th edition, Garland Science, New York, NY, 2008; Voet, D. 등"Fundamentals of Biochemistry:Life at the Molecular Level," 3rd edition, John Wiley & Sons, Hoboken, NJ, 2008; Sambrook, J. 등, "Molecular Cloning:A Laboratory Manual," 3rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001; Ausubel, F. 등, "Current Protocols in Molecular Biology," John Wiley & Sons, New York, 1987 and periodic updates; Freshney, R.I., "Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique," 4th edition, John Wiley & Sons, Somerset, NJ, 2000; 및 the series "Methods in Enzymology," Academic Press, San Diego, CA.
정의
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "비-자연 발생"은, 예를 들면, 자연에서 발견되지 않는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 또는, 예를 들면, 자연에서 발견되지 않는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 의미한다. 본 명세서에서 제공된 "비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드" 또는 "비-자연 발생 CKP" (또는 동종을 인코딩하는 핵산)은 하기의 아미노산 서열을 갖지 않는다: 야생형 EETI-II 단백질, 즉,GCPRILMRCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:1), 여기서 루프 1 (L1)은 하기이고: 아미노산 서열 PRILMR (서열식별번호:92), 루프 2 (L2)는 하기이고: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93), 루프 3 (L3)은 아미노산 서열 LAG이고, 루프 4 (L4)는 아미노산 V이고, 루프 5 (L5)는 하기이다: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:15). 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKP는 유전공학 방법에 의해 또는 화학적 합성 방법에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP는 재조합성일 수 있다, 즉, 그 세포에 원상태가 아닌 형태로 원상태 핵산의 변경 또는 이종성 핵산의 도입에 의해 변형되어 온, 또는 세포가 그렇게 변형된 세포로부터 유래되는, 세포, 또는 핵산, 또는 벡터에 의해 생산될 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP는 화학적 펩타이드 합성을 통해 생산될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "시스틴-노트 펩타이드" 또는 "CKP"는, 3개 디설파이드 결합을 형성하는 6개 보존된 시스테인 잔기를 함유하는, 26-50개 아미노산 길이의 펩타이드를 지칭한다. 디설파이드 중 하나는 2개의 다른 디설파이드 및 그것의 상호연결 골격에 의해 형성되는 매크로사이클을 투과하여, 이로써 표면에서 노출된 다중 루프로 특징적인 노트된 위상기하학을 산출한다. 루프는 6개 보존된 시스테인 잔기를 측접하고 사실상 고도로 가변성인 아미노산 영역으로서 정의된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "아미노산 변경"은, 예를 들면, 펩타이드 서열 (예컨대 비-자연 발생 CKP를 생성하기 위한 WT EETI-II 펩타이드 서열에서, 또는 또 다른 비-자연 발생 CKP를 생성하기 위한 비-자연 발생 CKP에서) 적어도 1종의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 지칭한다.
"단리된" 비-자연 발생 CKP 또는 조성물은 그것의 천연 환경의 한 성분으로부터 확인된 및 분리된 및/또는 회수된 것이다. 그것의 천연 환경의 오염물질 성분은 비-자연 발생 CKP용 진단 또는 치료 용도를 방해할 것이고, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있는 물질이다. 바람직한 구현예에서, 비-자연 발생 CKP 또는 조성물은 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정된 바와 같이 비-자연 발생 CKP의 95 중량% 초과, 및 가장 바람직하게는 99 중량% 초과로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마씨 블루 또는, 바람직하게는, 은 얼룩을 이용하여 환원 또는 비환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질성으로 정제될 것이다. 단리된 비-자연 발생 CKP는 CKP의 천연 환경의 적어도 1종의 성분이 존재할 수 없기 때문에 재조합 세포 내에 원 위치에서 CKP를 포함한다. 단리된 비-자연 발생 CKP는 적어도 1종의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
본 명세서에서 확인된 폴리펩타이드 서열에 대하여 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 또는 "상동성"은, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하여 서열 정렬 이후, 비교되는 폴리펩타이드에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성 결정의 목적을 위한 정렬은, 예를 들면, 공공연하게 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 당해 분야의 기술 내인 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는, 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬 측정용 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 본 명세서에서 목적으로, 그러나, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 이용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 허가되었고 소스 코드는 하기에서 사용자 문서화로 제출되었다: 미국연방저작권청, 워싱턴 D.C., 20559 (하기에서 등록되었다: 미국저작권 등록 번호TXU510087). ALIGN-2 프로그램은 하기로부터 공공연하게 이용가능하다: Genentech, Inc., South San Francisco, California.ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운영 체제, 바람직하게는 디지털 UNIX V4.0D에서 사용을 위하여 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 셋팅되고 달라지지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "에피토프"는 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKP에 의해 구체적으로 결합될 수 있는 단백질 결정인자를 지칭한다. 에피토프는, 에피토프에 독특한, 공간적 형태에서 약 3-10개 아미노산을 포함할 수 있다. 이들 아미노산은 단백질 내에 선형 (즉, 아미노산 서열에서 연속적)일 수 있거나 이들은 단백질의 상이한 부분에 배치될 (즉, 아미노산 서열에서 비-연속적일) 수 있다. 단백질 내에, 또는 2개 단백질의 계면에서 아미노산의 공간적 형태의 결정 방법은 당해 기술에 공지되어 있고, 예를 들면, x-선 결정학 및 2-차원 핵자기 공명을 포함한다.
용어들 "디설파이드 결합 패턴 (DBP)" "디설파이드 결합 연결성" 및 "디설파이드 연결 패턴"은 WT EETI-II 단백질에 대해 시스테인의 연결 패턴을 지칭한다. WT EETI-II 단백질은 연결성 C1-C4, C2-C5, 및 C3-C6과 3개 디설파이드 결합을 형성하는 6개 보존된 시스테인 잔기 (넘버링된 1-6)를 포함한다. 디설파이드 결합 패턴은 위상적으로 일정하여, 디설파이드 결합이 하나 이상의 디설파이드 미연결 예컨대 산화환원 조건의 이용에 의해 단지 변화될 수 있다는 것을 의미한다.
치료의 목적으로 "대상체" "환자" 또는 "개체"는, 인간, 가정용 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소, 등을 포함하는, 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이 비-자연 발생 CKP (또는 그와 같은 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 "효과적인 양"은 구체적으로 언급된 목적을 실시하기에 충분한 양이다. "효과적인 양"은 실험적으로 그리고 언급된 목적에 관련하는 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
용어 "치료적으로 효과적인 양"은, 포유동물 (예컨대 인간 환자)에서 질환 또는 장애를 "치료하기"에 효과적인, 본 명세서에서 개시된 바와 같은 비-자연 발생 CKP 또는 조성물의 양을 지칭한다. 안구 질환 또는 안구 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애)의 경우에서, 본 명세서에서 기재된 VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 CKP (또는 그와 같은 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물)의 치료적 유효량은 본 명세서에서 다른 곳에 더욱 상세하게 기재된 안구 질환의 적어도 1종의 증상, 예컨대 안구 질환의 증상 또는 장애를 감소, 중단 또는 예방시키는 양을 지칭한다. 예를 들면, 효과적인 양은 안구 질환 또는 안구 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애), 예를 들면 빛 간섭 단층촬영 (OCT)에 의해 측정된 바와 같이 안구 질환의 완전한 또는 부분적인 해상도 및/또는 유지 또는 최상의 정정된 시력 (예컨대 EDTRS 시력 검사표에 의해 평가된 바와 같이 5 문자 초과)으로 증가 및/또는 유지, 또는 기저부 형광 혈관조영술에 의해 평가된 바와 같이 신생혈관형성 또는 신생혈관 투과도의 크기 감소의 증상을 감소 또는 예방하기에 충분한 양으로서 고려될 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 효과적인 양은 또한, 예를 들면, 황반 부종, 향상된 투과도 (예컨대 망막 혈관 투과도), CNV 병변의 크기, 및 시력 손실의 발생을 예방 또는 지연시키기에 충분한 양을 포함할 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 효과적인 양은 또한 안구 질환의 증상의 발생을 예방 또는 지연, 증상 질환의 과정을 변경 (예를 들면 비제한적으로, 안구 질환의 증상의 진행을 둔화), 또는 질환의 증상을 반전시키기에 충분한 양을 포함할 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함하는 유익한 또는 요망된 결과 수득을 위한 접근법이다. 본 발명을 위해, 유익한 또는 요망된 임상 결과는, 비제한적으로, 하기 중 하나 이상을 포함한다: 안구 질환에서 비롯한 하나 이상의 증상 경감, 안구 질환의 정도 약화, 안구 질환 안정화 (예를 들면, 질환의 악화 예방 또는 지연), (예컨대 주위 안구 조직에) 질환의 확산 예방 또는 지연, 안구 질환의 재발 예방 또는 지연, 안구 질환의 진행 지연 또는 둔화, 질환 상태 완화, 안구 질환의 차도 또는 해상도 (부분 또는 전체) 제공, 안구 질환을 치료하기 위해 요구된 하나 이상의 다른 약물의 용량 감소, 안구 질환의 진행 지연, 삶의 질 증가 또는 개선, 및/또는 시력 손실의 예방 또는 지연. 안구 질환의 병리적 결과 (예컨대, 예를 들면, 시력 손실)의 감소가 또한 "치료"에 포함된다. 본 명세서에서 제공된 방법은 치료의 이들 측면 중 임의의 1종 이상을 고려한다.
"장애"는 본 명세서에서 기재된 VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 CKP로 치료로부터 유익할 임의의 병태이다. 본 명세서에서 치료되는 VEGF-A-관련된 장애의 비-제한적인 예는, 본 명세서에서 다른 곳에 기재된 바와 같이, 안구 질환 및 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애)를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한" 또는 "약리적으로 양립가능한"은 생물학적으로 또는 달리 바람직한 물질, 예를 들면, 임의의 상당한 바람직하지 않은 생물학적 효과 유발 또는 함유되는 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용 없이 환자에 투여된 약제학적 조성물에 편입될 수 있는 물질을 의미한다. 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 부형제는 바람직하게는 독물학적 및 제조 시험의 요구된 표준을 충족시키고/거나 하기에 의해 작성된 불활성 성분 안내에 포함된다: 미국식품의약품안전청.
용어 "검출"은 서브스턴스의 존재 또는 부재 결정 또는 서브스턴스 (예컨대 표적 리간드)의 양 정량화를 포함하도록 의도된다. 상기 용어는 따라서 정성적 및 정량적 결정을 위하여 본 명세서에서 제공된 물질, 조성물, 및 방법의 이용을 지칭한다. 일반적으로, 검출에 사용된 특정한 기술은 본 발명의 실시용 핵심이 아니다.
예를 들면, 본 발명에 따르면 "검출"은 하기를 포함할 수 있다: (비제한적으로, 인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6) 폴리펩타이드 또는 인간 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A) 폴리펩타이드를 포함하는) 표적 리간드의 존재 또는 부재; 표적 리간드의 수준에서 변화; 및/또는 표적 리간드의 생물학적 기능/활성에서의 변화 관찰. 특정 구현예에서, "검출"은 표적 리간드의 수준 (예를 들면, 인간 LRP6 또는 인간 VEGF-A의 폴리펩타이드 수준) 검출을 포함할 수 있다. 검출은, 대조군과 비교된 경우, 10% 내지 90% 임의의 값, 또는 30% 내지 60% 임의의 값, 또는 100% 초과의 변화 (증가 또는 감소) 정량화를 포함할 수 있다. 검출은 하기 임의의 값의 변화 정량화를 포함할 수 있다: 2-배 내지 10-배, (포함), 또는 초과 예를 들면, 100-배.
본 명세서에서 사용될 때 단어 "표지"는 비-자연 발생 CKP에 직접적으로 또는 간접적으로 접합되는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 상기 표지는 그것만으로 자체 검출가능할 수 있거나 (예를 들면, 방사선동위원소 표지 또는 형광 표지), 효소 표지의 경우에서, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매화할 수 있다.
표적 리간드에 비-자연 발생 CKP의 결합에 관하여, 용어 "특이적 결합" 또는 특정한 표적 리간드"에 특이적으로 결합하는" 또는 "상기에 특이적인"은 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 그 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들면, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인, 대조군 분자의 결합과 비교된 분자의 결합 결정에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적, 예를 들면, 과잉의 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 탐침에 표지된 표적의 결합이 과잉의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면 특이적 결합은 지시된다. 특정 구현예에서, "비-표적" 리간드에 비-자연 발생 CKP의 결합의 정도는, 예를 들면, 형광 활성화된 세포 분류 (FACS) 분석 또는 방사선면역침강 (RIA)에 의해 결정된 바와 같이 그것의 표적 리간드 (예컨대 LRP6 또는 VEGF-A)에 비-자연 발생 CKP의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 비-자연 발생 CKP는 약 4 ºC, 25 ºC, 37 ºC, 또는 45 ºC의 온도에서 측정된; 100 nM 동등 또는 미만, 선택적으로 10 nM 미만, 선택적으로 1 nM 미만, 선택적으로 0.5 nM 미만, 선택적으로 0.1 nM 미만, 선택적으로 0.01 nM 미만, 또는 선택적으로 0.005 nM 미만 해리 상수 (Kd) 로 표적 리간드 (예컨대 인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6) 또는 인간 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A))에 특이적으로 결합한다.
본 명세서에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 참조는 상기 기술 분야에서 숙련가에 쉽게 공지된 각각의 값에 대하여 일반 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 참조는 그 값 또는 파라미터 자체에 관련되는 측면을 포함한다 (그리고 기재한다). 예를 들면, "약 X"를 지칭하는 설명은 "X"의 설명을 포함한다.
본 명세서에서 기재된 본 발명의 측면 및 구현예가 측면 및 구현예를 "포함하는" "구성되는" 및 "상기로 본질적으로 구성되는" 것을 포함한다는 것으로 이해된다.
특허 출원 및 공개를 포함하는, 본 명세서에서 인용된 모든 참조문헌은 이로써 그 전문이 참고로 편입된다.
인간 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)를 결합시키는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKPs)
특정 구현예에서, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)를 본 명세서에서 제공하되, 상기 CKP는 하기 시스틴 스캐폴드 구조 (즉, 스캐폴드 구조 I)를 포함한다:
Z1C 1 L1C2 L2C3 L3C4 L4C5 L5C6Z2 (I)
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신,, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신,, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신,, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드;
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드; 및
상기 CKP는 500 pM 이하의 친화도로 VEGF-A에 결합한다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질 와 관련된 변경된 디설파이드 결합 연결성을 갖는다: 서열식별번호:1; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6인, CKP.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 Z1 및/또는 Z2 은 G이다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 4종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 5종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비천연 아미노산은 N-아세틸글리신 또는 글리신 아미드이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L1을 포함하되, 여기서 X3은 I가 아니고; 여기서 X5은 M이 아니고/거나; 여기서 X6은 R이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L1을 포함하되, 여기서 X1은 P, Q, R, T, V, D, N, K, L, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X2은 T, D, L, V, I, R, P, N 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X3은 T, P, M, L, S, F, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X4은 R, T, Q, D, W, L, E, S, K, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X5은 F, P, V, E, K, L, I, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X6은 K, N, F, P, L, Y, T, D, M, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X7은 Q, W, H 및 X로부터 선택된 아미노산이고/거나; 여기서 X8은 Y, A, G, D, E, W, S, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L1을 포함하되, 여기서 X9은 L, I, V, D, E 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L1을 포함하되, 여기서 X10은 Y, T, M, N, F, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하고, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드; 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하고, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 G, Q, H, R, L, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X2은 P, M, W, Y, F, L, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X3은 N, F, H, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X4은 G, Q, D, N, K, H, E, 및 S로부터 선택된 아미노산이고/거나; 여기서 X5은 F, S, 및 T로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V 또는 F이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8, 여기서:X1은 P, Q, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T, L, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 T, M 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 R, Q, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, P, 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X6은 K 및 F로부터 선택된 아미노산이고; X7은 Q 및 W로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X8은 Y, G, 및 D로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 X9 X10, 여기서 X1은 Q, R, T 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X2은 T 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 P이고; X4은 T 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, E, P, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X6은 N 및 P로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X8은 A, D, E, 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X9은 L 및 I로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X10은 Y, T, M 및 N으로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 G, H, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; X2은 P, M, W, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X3은 N 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X4은 G, Q, 및 S로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 F 및 S로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V 또는 F이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 갖는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8, 여기서:X1은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X2은 V, I, R, L, 및 P로부터 선택된 아미노산이고; X3은 L, S, M, T, 및 F로부터 선택된 아미노산이고; X4은 Q, L, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P이고; X6은 F, L, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; 그리고 X8은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X3은 Y이고; X5은 S이고; 그리고 여기서 X1, X2 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고, X4은 G가 아니고/거나, X5은 F가 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 H, L, R, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고; X2은 W, F, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y이고; X4은 Q, N, K, H, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V 또는 F이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 X9 X10, 여기서 X1은 K, Q, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X3은 P 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 L, T, S 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X5은 F, V, I, 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X6은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; X8은 A 및 S로부터 선택된 아미노산이고; X9은 L, V, E 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X10은 Y 및 F로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 Q이고; X2은 L, F, M, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X3은 F, Y, 및 H로부터 선택된 아미노산이고; X4은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S 및 T로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V 또는 F이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8, 여기서:X5은 P이고; X7은 W이고; X8은 G이고; 그리고 여기서 X1, X2, X3, X4 및 X6 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 P가 아니고, X2은 R이 아니고, X3은 I가 아니고/거나 X6은 R이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8, 여기서 X1은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고; X2은 I 및 V로부터 선택된 아미노산이고; X3은 M 및 L로부터 선택된 아미노산이고; X4은 L, Q, D 및 K로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P이고; X6은 F, Y, T, L, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고; X7은 W이고; 그리고 X8은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 Q, H, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Y 및 W로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y이고; X4은 Q 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X5은 S이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X3은 Y이고; X5은 S이고; 그리고 여기서 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고/거나, X4은 G가 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 G 또는 E로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Q, L, P, R, E, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고; X3은 S, D, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; X4은 F, Y, L, M, 및 I로부터 선택된 아미노산이고/거나; X5은 E, D, Q, L, 및 S로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V 또는 F이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L5를 포함하되, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L5를 포함하되, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L5를 포함하되, 여기서 X1은 G를 제외한 임의의 아미노산이고; X2은 P를 제외한 임의의 아미노산이고; X3은 N을 제외한 임의의 아미노산이고; X4은 G를 제외한 임의의 아미노산이고; 그리고/또는 X5은 F를 제외한 임의의 아미노산이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8, 여기서 X1은 N, D, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 I, V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 M 또는 X이고; X4은 L, Q, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X5은 P 또는 X이고; X6은 F, Y, 또는 X이고; X7은 W 또는 X이고; 그리고 X8은 G 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드, 단, X1은 류신 (L)이 아니고, X2은 알라닌 (A)이 아니고, 그리고 X3은 글리신 (G)이 아니고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 상기 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 M, F, L V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 S, N, Q, I, Y, E, V, T, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 X3은 D, Q, T, N, E, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V를 제외한 임의의 아미노산, 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 I, L, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X3은 Y 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드; X5은 S 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드; 및 여기서 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 이는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드, 단, X1은 G가 아니고, X2 는 P가 아니고/거나 X4은 G가 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L5를 포함하되, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하고, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP) L5를 포함하되, 여기서 X1은 Q, H, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X2은 Y, W, 및 X로부터 선택된 아미노산이고; X3은 Y 또는 X이고; X4은 Q, N, 또는 X이고; X5은 S 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 G 또는 X이고; X2은 R, P, 또는 X이고; X3은 D 또는 X이고; X4 는 F, I, 또는 X이고; 그리고 X5은 E, D, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)가 본 명세서에서 또한 제공되고, 상기 CKP는 아래에 제공된 시스틴 스캐폴드 구조 (즉, 스캐폴드 구조 I)을 포함한다:
Z1C 1 L1C2 L2C3 L3C4 L4C5 L5C6Z2 (I)
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고;
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고; 여기서,
CKP는 하기 서열식별번호에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질과 관련하여 변경된 디설파이드 결합 연결성을 갖는다: 1; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6이고; 그리고 상기 CKP는 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50% (이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 의 퍼센트 알파 나사선구조 함량을 갖는다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 CKP는 약 500 pM 이하 의 친화도로 VEGF-A에 결합한다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 대한 비-자연 발생 CKP의 결합 친화도는 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 또는 아래의 실시예에서 상술된 다른 검정을 통해 결정된다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 Z1 및/또는 Z2 은 G이다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 4종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 5종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비천연 아미노산은 N-아세틸글리신 또는 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 L5를 포함하고, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2 는 프롤린 (P)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 L5를 포함하고, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4 는 글리신 (G)이 아니다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 약 0.5 nM 내지 약 1.0 nM의 IC50로 VEGF-A 활성을 억제한다. 특정 구현예에서, 억제도는 아래에서 실시예에서 더욱 상술된 바와 같이 세포 IC50 검정을 통해 결정된다.
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 HMMYDY (서열식별번호:231) 또는 K/P/Q/R-K/T/L/D-W/T/M/L-Q/R/D-W/F/P/V-W/K/F-Y/Q/W-M/Y/G/D (서열식별번호:115) 또는 E/G/P/Q/R/T/V-T/E/A/D-D/T/I/P-W/V/Q/T/W-Y/F/N/E/P/K-P/E/W/N/P-H/Q/K/W/H-Q/F/E/A/D/W-I/L/H-D/W/P/Y/T/M/N (서열식별번호:232) (상기의 스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 하기를 포함하는 L2를 추가로 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 V 또는 F를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 G/E/Y/Q/H-P/M/W/Y-N/Y/W-G/D/T/Q/R/S-F/A/E/S (서열식별번호:20) 또는 SWWPSL (서열식별번호:237).
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 하기의 서열식별번호로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L1을 포함한다: 8-14 및 225-230 (상기의 스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 하기를 포함하는 L2를 추가로 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 V 또는 F를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP는 서열식별번호 15-18 및 233-238)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L5을 추가로 포함한다. 서열식별번호 8-18, 225-230, 및 233-238의 아미노산 서열은 아래의 표 1에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 아미노산 서열을 포함한다: 21-17 및 239-244. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:21-17 및 239-244은 아래의 표 2에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 Q/H/E/N/D-L/V/R/P/I-M/F/L-Q/E/R/L-P-F/A/L/S-W-G (서열식별번호:358) (상기의 스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYQS (서열식별번호: 17).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 서열식별번호 33, 36, 및 245-253 (스캐폴드 구조 I에 대한 것임)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L1을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYQS (서열식별번호:17). 서열식별번호 33, 36, 및 245-253의 아미노산 서열은 아래의 표 3에서 제공된다:
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기의 서열식별번호 중 임의의 하나에 대한 아미노산 서열을 포함한다: 265-275. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:265-275은 아래의 표 4에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 QLMQPFWG (서열식별번호:10) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 R/H-W-Y-N/Q/H-S (서열식별번호:359).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 QLMQPFWG (서열식별번호:10) (상기의 스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L5를 포함한다: HWYQS (서열식별번호:17), RWYHS (서열식별번호:43), 및 RWYNS (서열식별번호:133).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:23, 276, 및 278.서열식별번호 23, 276, 및 278은 아래의 표 5에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 Q/D/K/N/A/R/H-L/V/I/R/P/V/-M/L/S/T/F-Q/E/L/H-P-F/L/M/Y/S-W-G (서열식별번호:40) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 H/L/R/Q/-W/F/Y-Y-Q/N/K/H/D/E-S (서열식별번호:360).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열를 포함하는 L1을 포함한다: 서열식별번호28-39 및 254-261 (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 하기의 서열식별번호로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열:17, 41-46, 133, 262-264, 및 567. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:17, 28-39, 41-46, 133, 254-264, 및 567은 표 6에서 제공된다:
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:47-59 및 279-286. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:47-59 및 279-286은 아래의 표 7에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 Q/D/K/W/E/L/R-D/N-P/R/L/T-T/S/L/K-F/V/L/I-N/D-W-A/S/G-L/V/E/T/Q/D-F/Y(서열식별번호:70) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 Q/R-M/L/F/H-Y/F/H-D/Q/N/K-S/T (서열식별번호:80).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열를 포함하는 L1을 포함한다: 서열식별번호60-69 및 287-291. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 하기의 서열식별번호로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열:16, 71-79, 274, 및 292. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:16, 60-69, 71-79, 274, 및 287-292은 아래의 표 8에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:81-91 및 293-297. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:81-91 및 293-297은 아래의 표 9 에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 K/G/Q/S/N-Q/L/P/A/V/T/R/W/K/G/Y-D/S/E/N-S/F/Y/L/F/Q/M-D/E/N/A/L/F/H/Q (서열식별번호:98). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L2를 포함한다: 서열식별번호:94-97 및 298-309. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45). 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:94-97 및 298-309은 아래의 표 10에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:99-102 및 310-321. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:99-102 및 310-321은 아래의 표 11 에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 N-I-M/L-L/S/T/Q/N/E/D-P-F/Y/S-WG (서열식별번호:454) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 GRDFE (서열식별번호:97). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 L/V/M/F-A/Q/E/S/N/Y/I/T-G/Q/R/D/T/N/E를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V 또는 I를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터선택된 아미노산 서열을 포함하는 L1을 포함한다: NIMLPFWG (서열식별번호:33), NILLPFWG (서열식별번호:396), NILLPYWG (서열식별번호:397), NIMSPFWG (서열식별번호:398), NIMTPFWG (서열식별번호:399), NIMQPFWG (서열식별번호:400), NIMNPFWG (서열식별번호:401), NIMEPFWG (서열식별번호:402), NIMDPFWG (서열식별번호:403), NIMLPSWG (서열식별번호:414), 및 NIMLPYWG (서열식별번호:141) (스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33) (스캐폴드 구조 V 또는 I와 관련됨). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 GRDFE (서열식별번호:97). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L3을 포함한다: LQQ, VER, MSD, MNQ, MQT, VYQ, FIN, VSQ, VTE, FYE, MEQ, 및 VYR. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 I를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다: 서열식별번호:103-114. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:103-114은 아래의 표 12에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 K/G/D/A/E-Q/E/R/V/P/D/M/G/N/L/A/F-D/N/Y/S-S/F/L/I/M/Y/V/N/E-D/L/Q/S/E/T/L/A/N (서열식별번호:121). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L2를 포함한다: 서열식별번호:117-120, 211, 및 322-339. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46). 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:117-120, 211, 및 322-339은 아래의 표 13에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:122-126 및 340-357. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:서열식별번호:122-126 및 340-357은 아래의 표 14에서 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 D-V-M/L-Q/K/D-P-Y/M/T/L-W-G (서열식별번호:130) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열
KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 H/L/Q/R-W-Y-N-S (서열식별번호:134).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L1을 포함한다: 서열식별번호:127-129 (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 하기의 서열식별번호로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열:131-133. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:127-129 및 131-133은 아래의 표 15에서 제공된다:
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열: 서열식별번호:135-137. 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열:135-127은 아래의 표 16 에서 제공된다:
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 GPDID (서열식별번호:118). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 L/F-A/V/S-G/R/N 를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, V, I, 및 L로부터 선택된 아미노산을 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 GPDID (서열식별번호:118). 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 서열 FVR 및 LSN 를 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, V, I, 및 L로부터 선택된 아미노산을 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호:139). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:140).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 본 명세서에서 개시된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP 중 임의의 하나의 L1, L2, L3, L4 및/또는 L5를 포함한다. 따라서, 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열를 포함하는 L1을 포함한다: 서열식별번호8-14, 28-39, 60-69, 127-129, 141, 225-230, 245-261, 287-291, 396-403, 및 414 (스캐폴드 구조 I와 관련됨). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L2를 포함한다: 서열식별번호:93-97, 117-120, 211, 298-309, 및 322-339. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, LAG, LQQ, VER, MSD, MNQ, MQT, VYQ, FIN, VSQ, VTE, FYE, MEQ, 및 VYR, FVR 및 LSN로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L3을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 아미노산 V, F, I, 또는 L 를 포함하는 L4을 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 L5를 포함한다: 서열식별번호:15-18, 41-46, 71-79, 131-133, 233-238, 262-264, 및 292. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 본 명세서에서 제공된 VEGF-A 결합 CKP로부터 결실된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 N-말단으로부터 결실된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 C-말단으로부터 결실된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 N-말단 및 C-말단으로부터 결실된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 내부 아미노산이 결실된다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 CNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSC (서열식별번호:217). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 적어도 1종의 아미노산 첨가를 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 N-말단에 첨가된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 C-말단에 첨가된다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 아미노산은 N-말단 및 C-말단에 첨가된다.
특정 구현예에서, 2종의 아미노산은 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 N-말단에 첨가된다. 특정 구현예에서, 2종의 아미노산은 하기에서 제시된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 N-말단에 첨가된다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:102). 특정 구현예에서, 하기의 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 2종의 아미노산:102은 F/I/G/T/V/L-H/A/S/R. 특정 구현예에서, 하기의 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 2종의 아미노산:102은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: FH, IA, GS, TR, VH, 및 LS. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGFH (서열식별번호:379). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGIA (서열식별번호:380). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGGS (서열식별번호:381). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGTR (서열식별번호:382). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGVH (서열식별번호:383). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGLS (서열식별번호:384).
특정 구현예에서, 2종의 아미노산은 하기에서 제시된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 N-말단에 첨가된다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:386). 특정 구현예에서, 하기의 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 2종의 아미노산:102은 R/W/P/D/Q/E/S-T/K/E/F/Q/L/S. 특정 구현예에서, 하기의 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 2종의 아미노산:102은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: RT, WK, PL, DE, QF, EQ, PT, RL, 및 SL. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGRT (서열식별번호:387). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGWK (서열식별번호:388). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGPL (서열식별번호:389). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGDE (서열식별번호:390). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGQF (서열식별번호:391). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGEQ (서열식별번호:392). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGPT (서열식별번호:393). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGRL (서열식별번호:394). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCGSL (서열식별번호:395).
특정 구현예에서, 3종의 아미노산은 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 N-말단에 첨가된다. 특정 구현예에서, 2종의 아미노산은 하기에서 제시된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 N-말단에 첨가된다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:102). 특정 구현예에서, 하기 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 3종의 아미노산:102은 P/N/T/D/E/Y/W-L/Y/F/H/D/P-I/Q/V/K/S/Y/H. 특정 구현예에서, 하기 서열식별번호의 N-말단에 첨가된 3종의 아미노산:102은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: PLI, NYQ, PLQ, TFQ, DLV, EHK, YLS, WDY, WPH, 및 PHQ. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGPLI (서열식별번호:369). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGNYQ (서열식별번호:370). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGPLQ (서열식별번호:371). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGTFQ (서열식별번호:372). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGDLV (서열식별번호:373). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGEHK (서열식별번호:374). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGYLS (서열식별번호:375). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGWDY (서열식별번호:376). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGWPH (서열식별번호:377). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCGPHQ (서열식별번호:378).
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핑된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 변이체이다. 특정 구현예에서, 그와 같은 변이체는 하기에서 제시된 서열 중 하나 이상에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 적어도 10개의 아미노산 치환을 포함한다: 서열식별번호:8-14, 28-39, 60-69, 127-129, 141, 225-230, 245-261, 287-291, 396-403, 및 414; 서열식별번호:93-97, 117-120, 211, 298-309, 및 322-339; 아미노산 서열 LAG, LQQ, VER, MSD, MNQ, MQT, VYQ, FIN, VSQ, VTE, FYE, MEQ, 및 VYR, FVR 및 LSN; 및/또는 15-18, 41-46, 71-79, 131-133, 233-238, 262-264, 및 292. 특정 구현예에서, 아미노산 치환(들)은 보존적 아미노산 치환(들)이다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 인간 VEGF-A를 결합시키기 위해 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는다. 예를 들면, VEGF-A 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들면, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 실시될 수 있다. 비-자연 발생 VEGF-A -결합 CKP의 변이체의 결합 친화성은 아래 실시예에서 기재된 방법을 이용하여 평가될 수 있다.
보존적 치환은 "보존적 치환"의 제목하에 아래 표 17에서 보여진다. 더욱 실질적인 변화는 아미노산 측쇄 부류에 관련하여 아래에서 추가로 기재된 바와 같이 그리고 "예시적인 치환"의 제목하에 표 17에서 제공된다. 아미노산 치환은 요망된 활성, 예를 들면, 유지된/개선된 VEGF-A 결합으로 선별된 생성물 및 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 변이체로 도입될 수 있다.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 또 다른 부류로 교환을 수반할 것이다.
예시적인 치환형 변이체는, 예를 들면, 파아지 디스플레이 기반 친화성 성숙 기술 예컨대 본 명세서에서 기재된 것을 이용하여, 편리하게 생성될 수 있는, 친화성 성숙된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP이다. 간단히, L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5에서 하나 이상의 잔기는 변경 (즉, 부가, 결실, 또는 치환)되고 변이체 VEGF-A-결합 CKP는 파아지에서 표시되고 VEGF-A 결합 친화성으로 선별된다. 친화성 성숙의 특정 구현예에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들면, 오류유발 PCR, 루프 셔플링, 또는 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발)에 의해 성숙을 위하여 선택된 가변성 유전자에 도입된다. 2차 라이브러리는 그 다음 창출된다. 라이브러리는 그 다음 VEGF-A에 대하여 요망된 친화성을 가진 임의의 비-자연 발생 CKP 변이체를 확인하기 위해 선별된다. 특정 구현예에서, 다양성 도입은 루프-관련된 접근법을 관여하고, 여기에서 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 내 몇 개의 잔기 (예를 들면, 한번에 약 5, 약 4-6, 또는 약 6-10 잔기)는 무작위화된다. 표적 리간드 결합에 관여된 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 잔기는, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여, 확인될 수 있다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGQSFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:215).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:216).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAKCVCQYYQSCG (서열식별번호:542).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:363).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:364).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMNQCICQYYQSCG (서열식별번호:222).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECFYECICQYYQSCG (서열식별번호:223).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:142).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:405).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:406).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMSPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:407).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMTPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:408).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMQPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:409).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMNPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:410).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMEPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:411).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMDPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:412).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPSWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:415).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLSGCVCQYYQSCG (서열식별번호:421).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLTGCVCQYYQSCG (서열식별번호:422).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLEGCVCQYYQSCG (서열식별번호:423).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCLCQYYQSCG (서열식별번호:424).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCICQYYQSCG (서열식별번호:425).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCS (서열식별번호:431).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:435).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:386).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:547).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILQPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:548).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 서열 중1종 이상의 아미노산은 비천연 아미노산으로 치환된다. 특정 구현예에서, 1종 이상의 아미노산은 동일한 비천연 아미노산으로 치환된다. 특정 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 각각은 상이한 비천연 아미노산으로 치환된다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 임의의 아미노산 위치 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 (스캐폴드 구조 I에 대한 것임)에서 비천연 아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:216), 상기 N-말단 글리신은 C(=O)-옥세탄-3일로 캡핑된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAXCVCQYYQSCG (서열식별번호:568, 여기서 X는 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 XCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:361) (여기서 X는 N-아세틸글리신이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 설포티로신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 3,4-디클로로-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A -결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 4-클로로-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 2-피리돈 (NH 파라)-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPXWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:362) (여기서 X는 피리돈 (NH 메타)-L-알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:218) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:219) (여기서 X는 1-나프틸알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:219) (여기서 X는 2-나프틸알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 XCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:221) (여기서 X는 PEG6-프로파르길글리신이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:365) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호:144) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호:145) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDF-D/E-CVS-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:540) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2 는 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECVSKCICQYYQSCG (서열식별번호:545) 여기서 X는 노르류신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDFECVSX2CICQYYQSCG (서열식별번호:546) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDF-N/K/X2-CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:541) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2 는 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFKCVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:561 (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 CNIXLPFWGCGRDFKCVSDCICQYYQSCG (서열식별번호:562 (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 CNIXLPFWGCGRDFKCVSECICQYYQSCG (서열식별번호:563 (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDFX2CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:564, 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDFX2CVSDCICQYYQSCG (서열식별번호:565, 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPFWGCGRDFX2CVSECICQYYQSCG (서열식별번호:566, 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:146) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDF-D/E-CME-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호:538) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECMEKCICQYYQSCG (서열식별번호:543) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFECMEX2CICQYYQSCG (서열식별번호:544) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDF-N/K/X2-CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:539) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFKCME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:555) 여기서 X는 노르류신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFKCMEDCICQYYQSCG (서열식별번호:556) 여기서 X는 노르류신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFKCMEECICQYYQSCG (서열식별번호:557) 여기서 X는 노르류신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFX2CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호:558) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFX2CMEDCICQYYQSCG (서열식별번호:559) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFX2CMEECICQYYQSCG (서열식별번호:560) 여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDI-D/E-CLS-N/K/X2-CICHWYNSCG (서열식별번호:534) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSKCICHWYNSCG (서열식별번호:536) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDIDCLSX2CICHWYNSCG (서열식별번호:537) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDI-N/K/X2-CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호:535) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호:224) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIKCLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호:549) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIKCLSDCICHWYNSCG (서열식별번호:550) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIKCLSECICHWYNSCG (서열식별번호:551) (여기서 X는 노르류신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDIX2CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호:552) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDIX2CLSDCICHWYNSCG (서열식별번호:553) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDIX2CLSECICHWYNSCG (서열식별번호:554) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLXFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:413) (여기서 X는 감마-벤질-L-프롤린이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLXFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:413) (여기서 X는 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLXFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:413) (여기서 X는 4-OH-L-프롤린이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLXFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:413) (여기서 X는 4-플루오로-L-프롤린이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLXFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:413) (여기서 X는 4-[4-(트리플루오로메틸)벤질]-L-프롤린이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:417) (여기서 X는 N-메틸 인돌이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:417) (여기서 X는 N-에틸 인돌이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:417) (여기서 X는 N-이소프로필 인돌이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYXGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:417) (여기서 X는 5-아자-인돌이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 4-메틸-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 2-나프틸-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 2-퀴놀릴-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 4,4'-바이페닐-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 4-메틸-2-피리딜-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 벤조티아졸-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 벤조티오펜-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDXECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:419) (여기서 X는 3-(3-이소퀴놀리닐)-L-알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECXAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:420) (여기서 X는 t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸글리신으로도 공지됨)이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECXAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:420) (여기서 X는 3-사이클로부틸-L-알라닌이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECXAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:420) (여기서 X는 3-사이클로펜틸-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECXAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:420) (여기서 X는 5,5,5-트리플루오로-L-류신이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 L-tert-류신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸글리신으로도 공지됨)이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 L-사이클로펜틸글리신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 3-사이클로펜틸-L-알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 L-사이클로부틸-L-글리신이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 3-사이클로부틸-L-알라닌이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCXCQYYQSCG (서열식별번호:426) (여기서 X는 5,5,5-트리플루오로-L-류신이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQXYQSCG (서열식별번호:428) (여기서 X는 2-피리돈이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQXYQSCG (서열식별번호:428) (여기서 X는 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQXYQSCG (서열식별번호:428) (여기서 X는 3,4-플루오로 페닐알라닌임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQXYQSCG (서열식별번호:428) (여기서 X는 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYXQSCG (서열식별번호:430) (여기서 X는 2-클로로-L-티로신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYXQSCG (서열식별번호:430) (여기서 X는 2-메틸-L- 티로신임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYXQSCG (서열식별번호:430) (여기서 X는 2-에틸-L-티로신, 또는 4-(나프탈렌-1-올-)-L-알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCX (서열식별번호:432) (여기서 X는 D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸글리신, 글리세롤의 에스테르로 전환된 카복시 말단을 갖는 글리신, 글리콜의 에스테르로 전환된 카복시 말단을 갖는 글리신, 옥세타닐 알코올의 에스테르로 전환된 카복시 말단을 갖는 글리신, 또는 글리신 모폴린 아미드임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXQPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호:436) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFECX2EQCICQYYQSCG (서열식별번호:437). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 노르류신이다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECLEQCICQYYQSCG (서열식별번호:438) (여기서 X는 노르류신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIX1LPYWGCGRDFECX2EQCX3CQYYQSCG (서열식별번호:439). 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신, X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3은 사이클로부틸-L-글리신이다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신, X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3은 3-사이클로부틸-L-알라닌이다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신, X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3은 노르류신이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 CNIX1QPYWGCGRDFECX2EQCX3CQYYQSCG (서열식별번호:440). 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신, X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3은 사이클로부틸-L-글리신이다. 특정 구현예에서, X1은 노르류신, X2은 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3은 3-사이클로부틸-L-알라닌이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPYWGCGRDFECXEQCICQYYQSCG (서열식별번호:441) (여기서 X는 3-사이클로부틸-L-알라닌 또는 t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸글리신으로도 공지됨)이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNILLPYWGCGRDFECMEQCXCQYYQSCG (서열식별번호:442) (여기서 X는 사이클로부틸-L-글리신 또는 3-사이클로부틸-L-알라닌임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CNIX2LPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCX3 (서열식별번호:443). 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1은 N-아세틸글리신, X2 는 노르류신이고, 그리고 X3은 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CNILLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCX2 (서열식별번호:444). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1은 N-아세틸글리신 및 X2은 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CNILQPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCX2 (서열식별번호:445). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1은 N-아세틸글리신 및 X2은 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CNILQPYWGCGRDFECLEQCICQYYQSCX2 (서열식별번호:446). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1은 N-아세틸글리신 및 X2은 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVLQPYWGCGPDIDCXSNCICHWYNSCG (서열식별번호:447) (여기서 X는 3-사이클로부틸-L-알라닌 또는 t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸글리신)임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVLQPYWGCGPDIDCLSNCXCHWYNSCG (서열식별번호:448) (여기서 X는 사이클로부틸-L-글리신임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVX1QPYWGCGPDIDCX2SNC2X3CHWYNSCG (서열식별번호:449). 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1 는 노르류신, X2 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3 는 사이클로부틸-L-글리신이다. 특정 구현예에서, X1 는 노르류신, X2 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X3 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVLQPYWGCGPDIDCX1SNC2X2CHWYNSCG (서열식별번호:450). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X2 는 사이클로부틸-L-글리신이다. 특정 구현예에서, X1 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X2 는 3-사이클로부틸-L-알라닌이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CDVLQPYWGCGPDIDCX2SNC2X3CHWYNSCX4 (서열식별번호:451). 특정 구현예에서, X1, X2, X3, 및/또는 X4 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, X3, 및/또는 X4은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1 는 N-아세틸글리신, X2 는 3-사이클로부틸-L-알라닌, X3 는 사이클로부틸-L-글리신, 및 X4 는 글리신 아미드 특정 구현예에서, X1 는 아세틸글리신, X2 는 사이클로부틸-L-알라닌, X3 는 사이클로부틸-L-알라닌이고, 그리고 X4 는 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CDVX2QPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCX3 (서열식별번호:452). 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3 은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1, X2, 및/또는 X3은 동일한 비천연 아미노산이 아니다. 특정 구현예에서, X1 는 N-아세틸글리신, X2 는 노르류신이고, 그리고 X3 는 글리신 아미드이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 X1CDVLQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCX2 (서열식별번호:453). 특정 구현예에서, X1 및 X2은 동일한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 및 X2은 상이한 비천연 아미노산이다. 특정 구현예에서, X1 는 N-아세틸글리신 및 X2 는 글리신 아미드
특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단은 변형된다 (예컨대 캡핍된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단은 변형된다 (예컨대 캡핍된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C- 및 N- 말단 둘 모두는 변형된다 (예컨대 캡핍된다). 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다. 특정 구현예에서, VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화된다.
구조적 특징
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A결합 CKP의 구조는 WT EETI-II 단백질과 상이한, 즉, WT EETI-II의 C1-C4, C2-C5, 및 C3-C6 디설파이드 결합 패턴 특징과 상이한 디설파이드 결합 연결성을 갖는다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 C1-C4, C2-C3, 및 C5-C6의 디설파이드 결합 연결성을 갖는다. 예를 들면, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 디설파이드 결합 연결성의 결정 방법은, 예를 들면, 부분 환원 알킬화 이후 질량 분광분석법을 통해, 또는 단백분해 소화 이후 질량 분광분석법을 통해, VEGF-A와 복합체로 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 공-결정 구조 용해 및 분석에 의해, 하기에서 기재된 바와 같이 구조 계산 수행을 포함한다: Sampoli 등 (2000) Proteins Struct Funct Gen.40, 168-174, 등.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 그리고, 이들 값 사이의 임의의 범위를 포함하는, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50%의 알파 나사선구조 함량을 갖는다. 특정 구현예에서, 알파 나사선구조로부터 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 또는 적어도 18 아미노산. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 C1-C4, C2-C3, 및 C5-C6의 디설파이드 결합 연결성 그리고, 이들 값 사이의 임의의 범위를 포함하는, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50%의 알파 나사선구조 함량을 갖는다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 알파 나사선구조 함량은, 예를 들면, 부분 환원 알킬화 이후 질량 분광분석법을 통해, 또는 단백분해 소화 이후 질량 분광분석법을 통해, VEGF-A와 복합체로 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP의 공-결정 구조 용해 및 분석에 의해, 원형 2색성 (CD), 광학 회전식 분산물 (ORD), 핵자기 공명 (NMR)로 결정된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCKQDSDCLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:52).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCKQDSDCLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:52).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 VEGF-A 결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GRDFE (서열식별번호:97); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:102).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A 결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GRDFE (서열식별번호:97); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:102).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCKQDSDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:55).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCKQDSDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:55).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 단백질은 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GPDID (서열식별번호:118); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 VEGF-A에 결합하기 위해 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP와 경쟁하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:123).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GPDID (서열식별번호:118); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP에 의해 결합된 VEGF-A 상의 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 제2 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:123).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 V14, V15, F17, D19, Y21, Q22, Y25, I46, K48, N62, D63, L66, M81, I83, K84, P85, H86, Q87, G88, Q89, I91, C104, R105, 및 P106로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 또는 10개 초과 개를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 K48, N62, 및 D63 를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 H86 를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 Y21, Y25, 및 P106를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 M81, D19, 및 Q22를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 F17, M81, 및 I91를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 V14, F17, D19, Q22, M81, 및 I91을 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 Q22 및 Y25를 포함하는 VEGF-A의 에피토프에 결합한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 항-VEGF-A 항체 G6.31 에 의해 결합된 VEGF-A 의 에피토프와 중합되는 VEGF-A 상의 에피토프에 결합한다 (Fuh 등 (2006) J. Biol. Chem. 281, 6625-6631). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 Flt-1에 의해 결합된 VEGF-A 의 에피토프와 중합되는 VEGF-A 상의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 베바시주맙에 의해 결합된 VEGF-A 의 에피토프와 중첩된 VEGF-A 상의 에피토프에 결합한다.
기능성 특징
특정 구현예에서, VEGF-A (예컨대 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및/또는 랫트 VEGF-A)에 "특이적으로 결합하는" 비-자연 발생 CKP는 약 1 x 10-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 x 10-8 이하 및 가장 바람직하게는 약 1 x 10-9 M) 이하 의 결합 친화도 (Kd) 값을 갖지만, VEGF-A에 대한 결합 친화도보다 적어도 약 50-배, 또는 적어도 약 500-배, 또는 적어도 약 1000-배 약한 VEGF-A의 동족체 또는 다른 성장 인자에 대한 결합 친화도를 갖는다.
특정 구현예에서, 예를 들면, 비-표적 단백질 (예를 들면, VEGFA의 동족체 예컨대 VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D) 또는 다른 성장 인자 (예컨대 P1GF, EGF, NGF, IGF 및 PDGF)에 대한 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 결합의 정도는 당해 분야에서 공지된 방법, 예컨대 ELISA, 형광 활성화된 세포 분류 (FACS) 분석, 또는 방사선면역침강 (RIA)에 의한 측정시, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 VEGF-A에의 결합의 약 10% 미만이다. 특이적 결합은, 예를 들면, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인, 대조군 분자의 결합과 비교된 분자의 결합 결정에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적, 예를 들면, 과잉의 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 탐침에 표지된 표적의 결합이 과잉의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면 특이적 결합은 지시된다. VEGF-A에"특이적으로 결합하는" 비-자연 발생 CKP의 결합을 평가하는 다른 방법은 실시예에 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 특정한 폴리펩타이드 표적 상의 특정한 폴리펩타이드 또는 에피토프에 대한 용어 "특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합한다"은 또는 "에 특이적인"은, 예를 들면, 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M, 이상의 상기 표적에 대한 Kd 를 갖는 분자로 나타낼 수 있다. 일 구현예에서, 용어 "특이적 결합"은 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합 없이 특정한 폴리펩타이드의 에피토프 또는 특정한 폴리펩타이드에 분자가 결합하는 결합을 지칭한다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 약 1 pM 내지 약 500 nM의 Kd로 VEGF-A 에 결합한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 50 pM 내지 약 250 pM, 약 250 pM 내지 약 500 pM, 약 500 pM 내지 750 pM, 약 750 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 25 nM, 약 25 nM 내지 약 50 nM, 50 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 250 nM, 또는 약 250 nM 내지 약 500 nM의 Kd 로 VEGF-A에 결합한다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및/또는 랫트 VEGF-A에 결합한다. 특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCKQDSDCLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:52).
특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NIMLPFWG (서열식별번호:33); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GRDFE (서열식별번호:97); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 QYYQS (서열식별번호:45) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLAGCVCQYYQSCG (서열식별번호:102).
특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCKQDSDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:55).
특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 DVMQPYWG (서열식별번호:35); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 GPDID (서열식별번호:118); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4, 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 HWYNS (서열식별번호:46) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 하기를 포함한다: 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLAGCVCHWYNSCG (서열식별번호:123).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 약 0.5 nM 미만, 약 0.6 nM 미만, 약 0.7 nM 미만, 약 0.8 nM 미만, 약 0.9 nM 미만, 또는 약 1.0nM 미만 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)의 IC50 값을 갖는다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 펩타이드 기질 절단 검정 (예를 들면, 실시예에서 기재된 펩타이드 기질 절단 검정)에서 측정된 바와 같이 트립신 프로테아제 활성을 억제시키지 않는다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는 트립신 소화에 저항성이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 약 30% 이하, 약 25% 이하, 또는 약 20% 이하는 37 ℃에서 트립신으로 24 h 인큐베이션 이후 루프 2내에 Arg13에서 절단된다.
본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKPs를 인코딩하는 핵산 분자, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터, 및 핵산 분자를 포함하는 세포가 또한 고려된다. 상기 세포의 배양, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 발현, 및 세포 배양으로부터 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 회수에 의해 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 생산 방법이 또한 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는, 본 명세서에서 다른 곳에 기재된 바와 같이, 시험관내 번역을 통해 생산된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP는, 예를 들면, 스캐폴드 프레임워크 (예컨대 스캐폴드 구조 I)상에 화학적으로 합성된 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 펩타이드의 그라프팅에 의해, 또는 전체 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 화학적으로 합성에 의해 화학적 펩타이드 합성을 통해 생성된다.
인간 저밀도 지질단백질 수용체 (LDL)-관련된 단백질 6 (LRP6)을 결합시키는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKPs)
LDL 수용체는 단백질 리간드 및 지질단백질의 수용체-매개된 세포내이입에 관여된 막관통 세포 표면 단백질이다. 인간 LDL 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6) (접근 번호:NM_002336 (mRNA) 및 NP_002327 (단백질); UniProtKB:O75581)은 수용체로서 또는, 프리즐레드와, Wnt용 공-수용체로서 기능하고 이로써 하기를 전송한다: 표준적 Wnt/베타-카테닌 신호전달 캐스케이드 (Katoh 등 (2007) Clin Cancer Res 13:4042-4045). Wnt/베타-카테닌 신호전달 캐스케이드와 그것의 상호작용을 통해, LRP6은 세포 분화, 증식, 및 이동의 조절에서, 그리고 하기에서 역할을 한다: 많은 암 유형의 발생 (Li 등 (2004) Oncogene 23:9129-9135; Tung 등 (2012) PLoS ONE 7(5): e36565. doi:10.1371/journal.pone.0036565; Liu 등 (2010) Proc Natl Acad Sci USA 107:5136-5141).
Wnt 신호전달은 많은 생물학적 경로에서 관여된다. 질환에 대하여 암 및 전이성 질환, 골다공증 및 다른 골 대사 및 질환, 뉴런의 및 신경퇴행성 질환, 류마티스성 관절염 및 다른 염증성 질환과 관여된다. LRP6의 봉쇄에 의한 Wnt 신호전달의 상기 억제는 광범위한 치료 유용성을 가질 수 있다. 골손실은, 폐경후 골다공증 동안, 뿐만 아니라 류마티스성 관절염에서, 심각한 의료 문제이다. 골은 다발성 골수종에서 그리고 골 전이에서 분해된다. 골 강화, 골절 예방, 또는 손상된 골의 회복을 목표한 치료 전략은 따라서 매우 높은 관심사이다 (Kawai 등 (2011) Nat.Rev.Drug Discov.10, 141-156; Mason and Williams (2010) J.Osteoporosis, vol.2010, Article ID 460120, 9 pages; doi:10.4061/2010/460120). Wnt 경로 억제제 DKK1 및 SOST는, 신규한 골 형성 억제에서 그것의 역할 때문에, 고도로 유망한 치료 표적으로 간주되고; SOST의 기능을 중화하는 항체는 상당한 전임상 활성을 보여주고 (Ominsky 등 (2010) J.Bone Miner.Res.25, 948-959) 그리고 지금은 인간 임상시험 중이다 (Padhi 등 (2011) J.Bone Miner.Res.26, 19-26.
오조절된 Wnt 신호전달은 골다공증 내지 암 범위의 질환에서 연루된다 (Clevers (2006) Cell 127:469-80; MacDonald 등2009. Dev Cell 17:9-26; Nusse (2008) Cell Res 18:523-7; Polakis (2007) Curr Opin Genet Dev 17:45-51). 상기 목록은 대사 장애를 포함하도록 확장하였다 (Mani 등 (2007) Science 315:1278-82 and neurodegeneration (Caricasole 등 (2004) J Neurosci 24:6021-7; De Ferrari 등 (2007) Proc Natl Acad Sci USA 104:9434-9). 특히 명확한 링크는, β-카테닌 수준, 및 결장직장암의 효과적인 조절을 예방하는, 단백질 선종성 결장 폴립증 (APC)의 돌연변이 사이 존재한다 (Polakis (2007) Curr Opin Genet Dev 17:45-51). LRP5와 골 항상성 사이 강한 유전적 관계가 또한 특히 주목된다. LRP5에서 기능상실 돌연변이는, 저 골량, 안구 결함 및 골절에 대한 소인을 특징으로 하는, 상염색체 열성 장애 골다공증거짓신경아교종 증후군 (OPPG)를 유발시킨다 (Gong 등 (2001) Cell 107:513-23.
인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)에 결합하는 비-자연 발생 CKP가 본 명세서에서 제공되고, 상기 비-자연 CKP는 하기 시스틴 스캐폴드 구조 (즉, 스캐폴드 구조 I)를 포함한다:
Z1C 1 L1C2 L2C3 L3C4 L4C5 L5C6Z2(I)
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6, X1X2X3X4X5X6X7, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고; 그리고
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이다.
특정 구현예에서, LRP6에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)의 Z1 및/또는 Z2 은 G이다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 1 초과 종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 4종의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, Z1 및/또는 Z2 는 5종의 아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L1을 포함하되, 여기서 X1은 R, V, M, A, G, N, S, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X2은 T, N, S, G, R, 및 A로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X3은 N, R, H, V, K, S, G, I, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X4은 R, V, N, I, K, S, 및 T으로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X5은 V, R, K, I, T, S, L, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 여기서 X6은 K, G, A, I, R, N, S, 및 V로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L1을 포함하되, 여기서 X7은 G, R, K, E, P, 및 T로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L1을 포함하되, 여기서 X8은 G, R, K, Q, A, 및 S로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L1을 포함하되, 여기서 X9은 R 또는 G로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L1을 포함하되, 여기서 X10은 E, W, 및 G로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L5를 포함하되, 여기서 X1은 G, S, N, Y, A, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X2은 P, G, S, V, E, R, F, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X3은 N, G, S, E, P, K, H, 및 R로부터 선택된 아미노산이고; 여기서 X4은 G, R, H, S, Q, V, 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 그리고 여기서 X5은 F, D, N, R, G, Y, S, 및 T로부터 선택된 아미노산이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L2를 포함하되, 여기서 X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L3을 포함하되, 여기서 X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 L4를 포함하되, 여기서 X1은 V이다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 경쟁 분자의 인간 LRP6에의 결합을 경쟁적으로 억제한다. 특정 구현예에서, 경쟁 분자는 항-LRP6 항체이다. 특정 구현예에서, 경쟁 분자는 제2 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP이다.
표적 상의 중첩 또는 유사한 영역에 결합하는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 경쟁적 억제/결합 검정에 의해 확인될 수 있다. 그와 같은 검정은 당해 분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들면 하기에서 기재된다: S.J.Mather (ed.)1996.Current Directions in Radiopharmaceutical Research and Development, 169- 179, Kluwer Academic Publishers; Zettner (1973) Clin.Chem.19, 699-705; Gao (2012) Analytical Methods 4, 3718-3723.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 제2 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP에 의해 결합된 인간 LRP6의 동일한 에피토프에 결합한다: 하기를 포함하는 L1: 아미노산 서열 V/R/N/S/E/G-N/S/G/R-R/V/K/S/N/I/Y-V/N/I/R/S/T-R/K/I/N-G/I/R/K/S/A (서열식별번호:185) 또는 A/R/M/V/G/S-N/T/S/A-R/N/H-V/R/K-K/V/I-R/K/A/N/S/V-T/G/R/K/P-S/G/R/A (서열식별번호:186) 또는 R/A/Q-S/A-G/S/N/I-N/K-T/S/L/R-I/R/V-R/E/K-K/Q/A/R-R/G/Q-E/W/G/R (서열식별번호:187); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 G/S/N/Y/A/R-P/G/S/V/E/R/F/D-N/G/S/E/P/K/H/R-G/R/H/S/Q/V/D-F/D/N/R/G/Y/S/T (서열식별번호:188) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 V/R/N/S/E/G-N/S/G/R-R/V/K/S/N/I/Y-V/N/I/R/S/T-R/K/I/N-G/I/R/K/S/A (서열식별번호:185) 또는 A/R/M/V/G/S-N/T/S/A-R/N/H-V/R/K-K/V/I-R/K/A/N/S/V-T/G/R/K/P-S/G/R/A (서열식별번호:186) 또는 R/A-S-G/S/N-N/K-T/S/L-I/R-R/E-K/Q/A-R/G-E/W/G (서열식별번호:187)) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L2를 포함한다: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 아미노산 V를 포함하는 L4를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 추가로, 하기를 포함하는 L5를 포함한다: 아미노산 서열 G/S/N/Y/A/R-P/G/S/V/E/R/F/D-N/G/S/E/P/K/H/R-G/R/H/S/Q/V/D-F/D/N/R/G/Y/S/T (서열식별번호:188
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 본 명세서에서 개시된 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP 중 임의의 하나의 L1 및/또는 L5를 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기 서열식별번호 중 임의의 하나에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 L1을 포함한다: 147-168 및 367 (스캐폴드 구조 I에 대한 것임). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기 서열식별번호에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 L2를 추가로 포함한다: 93. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 아미노산 V를 포함하는 L4를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기 서열식별번호 중 임의의 하나에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 L5를 추가로 포함한다: 19 및 169-184.
상기에 기재된 L1 및 L5 아미노산 서열은 아래의 표 18 에서 제공된다:
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RTNRVKGG (서열식별번호:147); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 VNRVRG (서열식별번호:148); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 SGGRD (서열식별번호:169) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 MNHVKARR (서열식별번호:149); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RSVNKI (서열식별번호:150); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GSSRN (서열식별번호:170) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 VNKIKG (서열식별번호:151); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GVEGR (서열식별번호:29) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RNSIKR (서열식별번호:152); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 SVGHG (서열식별번호:172) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 VSNRVNKG (서열식별번호:153); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RGNIIK (서열식별번호:154); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 NESRG (서열식별번호:173) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RSGNTIRKRE (서열식별번호:155); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GGPGG (서열식별번호:174) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 ASSNSIRQGW (서열식별번호:156); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPKSN (서열식별번호:175) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RSNRIR (서열식별번호:157); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 YGHGD (서열식별번호:176) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP 하기를 포함하는 L1: 아미노산 서열 RSNKLREARG (서열식별번호:158); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GSRQD (서열식별번호:177) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 VNSVKR (서열식별번호:159); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 SRGVN (서열식별번호:178) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 GSNKIRPR (서열식별번호:160); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNDF (서열식별번호:179) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 NRIRNS (서열식별번호:161); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GRGDY (서열식별번호:180) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 SRNSIK (서열식별번호:162); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 ASGSS (서열식별번호:181) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 SNYVKR (서열식별번호:163); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 SPGGR (서열식별번호:182) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 RANRVSGR (서열식별번호:164); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 SNRVKVRA (서열식별번호:165); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 ENRTKG (서열식별번호:166); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GFRGT (서열식별번호:183) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 GNKIRA (서열식별번호:167); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 RDRVG (서열식별번호:184) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 ANRVKRTS (서열식별번호:168); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기를 포함하는 L1을 포함한다: 아미노산 서열 QAINRVKRQR (서열식별번호:367); 하기를 포함하는 L2: 아미노산 서열 KQDSD (서열식별번호:93); 아미노산 서열 LAG를 포함하는 L3; 아미노산 V를 포함하는 L4; 및 하기를 포함하는 L5: 아미노산 서열 GPNGF (서열식별번호:19) (스캐폴드 구조 I에 대한 것임).
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 하기 서열식별번호 중 임의의 하나에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: 189-210 및 366.서열식별번호:189-210 및 366은 아래에서 제공된다.
GCRTNRVKGGCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:189)
GCVNRVRGCKQDSDCLAGCVCSGGRDCG (서열식별번호:190)
GCMNHVKARRCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:191)
GCRSVNKICKQDSDCLAGCVCGSSRNCG (서열식별번호:192)
GCVNKIKGCKQDSDCLAGCVCGVEGRCG (서열식별번호:193)
GCRNSIKRCKQNSDCLAGCVCSVGHGCG (서열식별번호:194)
GCVSNRVNKGCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:195)
GCRGNIIKCKQDSDCLAGCVCNESRGCG (서열식별번호:196)
GCRSGNTIRKRECKQDSDCLAGCVCGGPGGCG (서열식별번호:197)
GCASSNSIRQGWCKQDSDCLAGCVCGPKSNCG (서열식별번호:198)
GCRSNRIRCKQDSDCLAGCVCYGHGDCG (서열식별번호:199)
GCRSNKLREARGCKQDSDCLAGCVCGSRQDCG (서열식별번호:200)
GCVNSVKRCKQDSDCLAGCVCSRGVNCG (서열식별번호:201)
GCGSNKIRPRCKQDSDCLAGCVCGPNDFCG (서열식별번호:202)
GCNRIRNSCKQDSDCLAGCVCGRGDYCG (서열식별번호:203)
GCSRNSIKCKQDSDCLAGCVCASGSSCG (서열식별번호:204)
GCSNYVKRCKQDSDCLAGCVCSPGGRCG (서열식별번호:205)
GCRANRVSGRCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:206)
GCSNRVKVRACKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:207)
GCENRTKGCKQDSDCLAGCVCGFRGTCG (서열식별번호:208)
GCGNKIRACKQDSDCLAGCVCRDRVGCG (서열식별번호:209)
GCANRVKRTSCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:210)
GCQAINRVKRQRCKQDSDCLAGCVCGPNGFCG (서열식별번호:366)
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 변이체이다. 특정 구현예에서, 그와 같은 변이체는 하기에서 제시된 서열 중 하나 이상에서 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 적어도 10개의 아미노산 치환을 포함한다: 서열식별번호:19, 93, 147-168, 169-184, 및 189-210 및/또는 아미노산 서열 LAG. 특정 구현예에서, 아미노산 치환(들)은 보존적 아미노산 치환(들)이다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 인간 LRP6을 결합시키는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는다. 예를 들면, LRP6 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들면, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 실시될 수 있다. 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 변이체의 결합 친화성은 아래 실시예에서 기재된 방법을 이용하여 평가될 수 있다.
보존적 치환은 "보존적 치환"의 제목하에 상기 표 17 에서 보여진다. 더욱 실질적인 변화는 아미노산 측쇄 부류에 관련하여 아래에서 추가로 기재된 바와 같이 그리고 "예시적인 치환"의 제목하에 표 17에서 제공된다. 아미노산 치환은 요망된 활성, 예를 들면, 유지된/개선된 LRP6 결합으로 선별된 생성물 및 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 변이체에 도입될 수 있다.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 또 다른 부류로 교환을 수반할 것이다. 예시적인 치환형 변이체는, 예를 들면, 파아지 디스플레이 기반 친화성 성숙 기술 예컨대 본 명세서에서 기재된 것을 이용하여, 편리하게 생성될 수 있는, 친화성 성숙된 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP이다. 간단히, L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5에서 하나 이상의 잔기는 변경 (즉, 부가, 결실, 또는 치환)되고 변이체 LRP6-결합 CKP는 파아지에서 표시되고 LRP6 결합 친화성으로 선별된다. 친화성 성숙의 특정 구현예에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들면, 오류유발 PCR, 루프 셔플링, 또는 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발)에 의해 성숙을 위하여 선택된 가변성 유전자에 도입된다. 2차 라이브러리는 그 다음 창출된다. 라이브러리는 그 다음 LRP6에 대하여 요망된 친화성을 가진 임의의 비-자연 발생 CKP 변이체를 확인하기 위해 선별된다. 특정 구현예에서, 다양성 도입은 루프-관련된 접근법을 관여하고, 여기에서 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 내 몇 개의 잔기 (예를 들면, 한번에 약 5, 약 4-6, 또는 약 6-10 잔기)는 무작위화된다. 표적 리간드 결합에 관여된 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 잔기는, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여, 확인될 수 있다.
특정 구현예에서, 인간 LRP6을 "특이적으로 결합하는" (즉, 약 1 x 10-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 x 10-8 이하 및 가장 바람직하게는 약 1 x 10-9 M 이하의 결합 친화성 (Kd) 값을 갖는) 비-자연 발생 CKP는 그러나, LRP6에 대하여 그것의 결합 친화성보다 약한, 적어도 약 50-배, 또는 적어도 약 500-배, 또는 적어도 약 1000-배인 또 다른 LRP 단백질에 대하여 결합 친화성을 갖는다.
특정 구현예에서, 비-표적 단백질 (예를 들면, LRP6 동족체 예컨대 LRP1, LRP1B, LRP2, LRP3, LRP4, LRP5, LRP8, LRP10, LRP11, 및 LRP12)에 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 결합의 정도는 당해 분야에서 공지된 방법, 예컨대 ELISA, 형광 활성화된 세포 분류 (FACS) 분석, 또는 방사선면역침강 (RIA)에 의해 결정된 바와 같이 인간 LRP6에 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 결합의 약 10% 미만이다. 특이적 결합은, 예를 들면, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인, 대조군 분자의 결합과 비교된 분자의 결합 결정에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적, 예를 들면, 과잉의 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 탐침에 표지된 표적의 결합이 과잉의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면 특이적 결합은 지시된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 특정한 폴리펩타이드 표적상의 에피토프 또는 특정한 폴리펩타이드에 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적인"은, 예를 들면, 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M, 또는 초과의 상기 표적용 Kd를 갖는 분자로 나타나질 수 있다. 일 구현예에서, 용어 "특이적 결합"은 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합 없이 특정한 폴리펩타이드의 에피토프 또는 특정한 폴리펩타이드에 분자가 결합하는 결합을 지칭한다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 약 1 pM 내지 약 500 nM의 Kd로 인간 LRP6을 결합시킨다. 특정 구현예에서, LRP6을 특이적으로 결합시키는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP 단백질은, 이들 값 사이의 임의의 범위를 포함하는, 약 1 pM 내지 약 50 pM, 약 50 pM 내지 약 250 pM, 약 250 pM 내지 약 500 pM, 약 500 pM 내지 750 pM, 약 750 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 25 nM, 약 25 nM 내지 약 50 nM, 50 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 250 nM, 또는 약 250 nM 내지 약 500 nM의 Kd로 인간 LRP6을 결합시킨다. .
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는, 예를 들면, 아래 실시예에서 기재된 방법을 이용하여 결정된 바와 같이, Wnt1 신호전달을 억제시킨다.
기재된 비-자연 발생 LRP6-결합 CKPs를 인코딩하는 핵산 분자, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKPs를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터, 및 핵산 분자를 포함하는 세포가 또한 고려된다. 상기 세포 배양, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP 발현, 및 세포 배양으로부터 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP 회수에 의한 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 생산 방법이 또한 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는, 본 명세서에서 다른 곳에 기재된 바와 같이, 시험관내 번역을 통해 생산된다.
본 명세서에서 다른 곳에 기재된 바와 같이, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 화학적 펩타이드 합성을 통해, 예를 들면, EETI-II 프레임워크상에 화학적으로 합성된 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 펩타이드의 그라프팅에 의해, 또는 전체 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP의 화학적으로 합성에 의해 생성된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 과도한 LRP6 활성이 관여되는 질환 또는 병태의 치료에서 치료제로서이다.
생산 방법
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 유전공학을 통해 생성된다. 다양한 돌연변이유발 방법은 (적절한 선별 또는 선택 방법을 따라) 이전에 기재되었다. 상기 돌연변이유발 방법은, 비제한적으로, 예를 들면, 재조합에 앞서 오류유발 PCR, 루프 셔플링, 또는 올리고뉴클레오타이드-지향된 돌연변이유발, 랜덤 뉴클레오타이드 삽입 또는 다른 방법을 포함한다. 이들 방법에 관한 추가 세부사항은, 예를 들면, 하기에 기재된다: Abou-Nadler 등 (2010) Bioengineered Bugs 1, 337-340; Firth 등 (2005) Bioinformatics 21, 3314-3315; Cirino 등 (2003) Methods Mol Biol 231, 3-9; Pirakitikulr (2010) Protein Sci 19, 2336-2346; Steffens 등 (2007) J.Biomol Tech 18, 147-149; 및 다른 것.따라서, 특정 구현예에서, 유전 공학 기술을 통해 생성된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP가 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 시험관내 번역을 통해 생성된다. 간단히, 시험관내 번역은 프로모터를 함유하는 벡터에 단백질-코딩 서열(들)의 클로닝, RNA 폴리머라제로 클로닝된 서열(들)의 전사에 의한 mRNA의 생산, 및 시험관내 상기 mRNA의 번역에 의해, 예를 들면, 무세포 추출물을 이용하는 단백질의 합성을 수반한다. 요망된 변이체 단백질은 클로닝된 단백질-코딩 서열의 변경에 의해 간단히 생성될 수 있다. 많은 mRNAs는 밀 배아 추출물에서 또는 토끼 망상적혈구 용해물에서 효율적으로 번역될 수 있다. 시험관내 번역에 관한 추가 세부사항은, 예를 들면, 하기에 기재된다: Hope 등 (1985) Cell 43, 177-188; Hope 등 (1986) Cell 46, 885-894; Hope 등 (1987) EMBO J.6, 2781-2784; Hope 등 (1988) Nature 333, 635-640; 및 Melton 등 (1984) Nucl.Acids Res.12, 7057-7070.
따라서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP를 인코딩하는 핵산 분자가 제공된다. 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP를 인코딩하는 핵산 분자에 작동가능하게 연결된 발현 벡터가 또한 제공된다. 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP를 인코딩하는 핵산을 포함하는 (예를 들면, 원핵 숙주세포 예컨대 E. 콜리, 진핵생물 숙주 세포 예컨대 효모 세포, 포유동물 세포, CHO 세포, 등을 포함하는) 숙주세포가 또한 제공된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 시험관내 번역을 통해 생성된다. 간단히, 시험관내 번역은 프로모터를 함유하는 벡터에 단백질-코딩 서열(들)의 클로닝, RNA 폴리머라제로 클로닝된 서열(들)의 전사에 의한 mRNA의 생산, 및 시험관내 상기 mRNA의 번역에 의해, 예를 들면, 무세포 추출물을 이용하는 단백질의 합성을 수반한다. 요망된 돌연변이체 단백질은 클로닝된 단백질-코딩 서열의 변경에 의해 간단히 생성될 수 있다. 많은 mRNAs는 밀 배아 추출물에서 또는 토끼 망상적혈구 용해물에서 효율적으로 번역될 수 있다. 시험관내 번역에 관한 추가 세부사항은, 예를 들면, 하기에 기재된다: Hope 등 (1985) Cell 43, 177-188; Hope 등 (1986) Cell 46, 885-894; Hope 등 (1987) EMBO J.6, 2781-2784; Hope 등 (1988) Nature 333, 635-640; 및 Melton 등 (1984) Nucl.Acids Res.12, 7057-7070.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 화학적 합성을 통해 생성된다. 특정 구현예에서, 화학적으로 합성된 L1, L2, L3, L4, 및/또는 L5 펩타이드는 EETI-II-기반 프레임워크 (예컨대 스캐폴드 구조 I)에서 그라프팅되어 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP를 생성한다. 특정 구현예에서 전체 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 전체 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 화학적으로 합성된다. 고상 및 액상 펩타이드 합성 방법은 당해 분야에서 잘 알려지고, 예를 들면, 하기에서 상세히 기재된다: Methods of Molecular Biology, 35, Peptide Synthesis Protocols, (M.W.Pennington and B.M.Dunn Eds), Springer, 1994; Welsch 등 (2010) Curr Opin Chem Biol 14, 1-15; Methods of Enzymology, 289, Solid Phase Peptide Synthesis, (G.B.Fields Ed.), Academic Press, 1997; Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, (P.Lloyd-Williams, F.Albericio, and E.Giralt Eds), CRC Press, 1997; Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach, (W.C.Chan, P.D.White Eds), Oxford University Press, 2000; Solid Phase Synthesis, A Practical Guide, (S.F.Kates, F Albericio Eds), Marcel Dekker, 2000; P.Seneci, Solid-Phase Synthesis and Combinatorial Technologies, John Wiley & Sons, 2000; Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (M.Goodman, Editor-in-chief, A.Felix, L. Moroder, C.Tmiolo Eds), Thieme, 2002; N.L.Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis, CRC Press, 2005; Methods in Molecular Biology, 298, Peptide Synthesis and Applications, (J.Howl Ed) Humana Press, 2005; 및 Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry, Volume 3, Building Blocks, Catalysts and Coupling Chemistry, (A.B.Hughs, Ed.)Wiley-VCH, 2011.
비-자연 발생 EETI-II 단백질을 포함하는 키메라성 분자
본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 또한 또 다른, 이종성 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열에 융합된 (예를 들면, 재조합으로 융합된) 비-자연 발생 CKP를 포함하는 키메라성 분자를 형성하기 위한 방식으로 유리하면 변형될 수 있다. 특정 구현예에서, 그와 같은 키메라성 분자는, 예를 들면, 2가 분자 또는 이중특이적 분자를 형성하기 위해 항체와 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 융합을 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라성 분자는, 예를 들면, 인간 면역결핍 바이러스 TAT 단백질의 단백질 형질도입 도메인을 이용하여, 다양한 조직에, 또는, 예를 들면, 뇌 혈액 장벽을 거쳐, 전달용 키메라성 분자를 표적하는 제2 모이어티 (예컨대 단백질 형질도입 도메인)과 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 융합을 포함한다 (Schwarze 등, 1999, Science 285:1569-72).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKP는 다량체 형태로 (동일한 표적 리간드상의 상이한 에피토프 또는 상이한 표적 리간드에 대하여) 이중- 또는 다중-특이적으로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 이량체성 이중특이적 비-자연 발생 CKP는 제1 표적 단백질 또는 에피토프에 대하여 특이성을 가진 1종의 하위단위 및 제2 표적 단백질 또는 에피토프에 대하여 특이성을 가진 제2 하위단위를 갖는다. 비-자연 발생 CKP 단백질 하위단위는 원자가 및 따라서 표적 리간드에 결합의 친화력을 증가시킬 수 있는 다양한 형태로 연결될 수 있다.
특정 구현예에서 본 명세서에서 제공된 키메라성 분자는 2종 이상의 (예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 10 초과) 비-자연 발생 CKP 단백질을 포함한다. 특정 구현예에서, 핵산은 단일 비-자연 발생 CKP의 2종 이상의 카피를 인코딩하기 위해 조작될 수 있고, 여기에서 카피는 나란히 전사 및 번역되어 동일한 하위단위의 공유결합된 다량체를 생산한다. 특정 구현예에서, 상기 핵산은 2종 이상의 상이한 비-자연 발생 CKPs를 인코딩하기 위해 조작될 수 있고, 여기에서 카피는 나란히 전사 및 번역되어, 예를 들면, 단일 표적 리간드의 상이한 에피토프, 또는, 예를 들면, 상이한 표적 리간드를 결합시키는 상이한 하위단위의 공유결합된 다량체를 생산한다.
또 다른 구현예에서, 그와 같은 키메라성 분자는 항-태그 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 에피토프를 제공하는 태그 폴리펩타이드와 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 융합을 포함한다. 상기 에피토프 태그는 비-자연 발생 CKP의 아미노- 또는 카복실- 말단에 일반적으로 배치된다. 비-자연 발생 CKP 단백질의 상기 에피토프-태깅된 형태의 존재는 태그 폴리펩타이드에 대한 항체를 이용하여 검출될 수 있다. 또한, 에피토프 태그의 제공은 에피토프 태그에 결합하는 친화성 매트릭스의 또 다른 유형 또는 항-태그 항체를 이용하여 친화성 정제에 의해 비-자연 발생 CKP가 쉽게 정제되도록 할 수 있다. 다양한 태그 폴리펩타이드 및 그것의 각각의 항체는 당해 기술에 공지되어 있다. 그 예는 하기를 포함한다: 폴리-히스티딘 (폴리-His) 또는 폴리-히스티딘-글리신 (폴리-His-Gly) 태그; 플루 HA 태그 폴리펩타이드 및 그것의 항체 12CA5 (Field 등 (1988) Mol.Cell.Biol.8, 2159-2165); c-myc 태그 및 거기에 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 및 9E10 항체 (Evan 등 (1985) Mol.Cell.Biol.5, 3610-3616]; 및 단순 포진 바이러스 당단백질 D (gD) 태그 및 그것의 항체 (Paborsky 등 (1990) Protein Eng., 3, 547-553). 다른 태그 폴리펩타이드는 하기를 포함한다: Flag-펩타이드 (Hopp 등 (1988) BioTechnology, 6,1204-1210); KT3 에피토프 펩타이드 (Martin 등 (1992) Science, 255, 192-194]; α-튜불린 에피토프 펩타이드 (Skinner 등 (1991) J. Biol. Chem. 266, 15163-15166); 및 T7 유전자 10 단백질 펩타이드 태그 (Lutz-Freyermuth 등 (1990) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87, 6393-6397].
특정 구현예에서, 키메라성 분자는 면역글로불린 또는 면역글로불린의 특정한 영역과 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP 단백질 (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 융합을 포함할 수 있다. 키메라성 분자 (예를 들면, "면역부착소")의 2가 형태에 대하여, 그와 같은 융합은 IgG 분자의 Fc 영역에 될 수 있다. 본 명세서에서 제공된 Ig 융합은 Ig 분자내에 적어도 1종의 가변 영역 대신에 인간의 대략 또는 단지 잔기 94-243, 잔기 33-53 또는 잔기 33-52를 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 면역글로불린 융합은 힌지, CH2 및 CH3, 또는 IgG1 분자의 힌지, CH1, CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 면역글로불린 융합의 생산에 대하여 참고 또한, 미국 특허 번호5,428,130 (1995년 6월 27일 발행). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는, 예를 들면, IgG (Fc)의 불변 영역에 대한, N 또는 C 말단에서 융합된다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 CKP/Fc 융합 분자는 면역 반응의 보체 성분을 활성화시킨다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 CKP/Fc 융합 단백질은 비-자연 발생 CKP의 치료 가치를 증가시킨다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP 단백질 (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는, 예를 들면, 보체 단백질, 예컨대 C1q에 대한, N 또는 C 말단에서 융합된다 (예컨대 재조합으로 융합된다). 다양한 공보는 반감기가 분자에 FcRn-결합 폴리펩타이드 도입 (WO 1997/43316, US 5869046, US 5747035, WO 1996/32478, WO 1991/14438)에 의해 또는 FcRn-결합 친화성이 보존되지만 다른 Fc 수용체에 대한 친화성이 크게 감소된 항체와 단백질의 융합 (WO 1999/43713) 또는 항체의 FcRn 결합 도메인과 융합 (WO 2000/09560, US 4703039)에 의해 변형되는 비-자연 발생 단백질 수득 방법에 대하여 기재한다. of increasing of 생리적으로 활성 분자 (예를 들면, 비-자연 발생 CKP)의 반감기 증가의 특이적인 기술 및 방법이 또한 US 7083784에서 발견될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP 단백질 (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 (카밧에서 EU 지수에 의해 넘버링된 바와 같이) 하기 아미노산 잔기 돌연변이를 포함하는 IgG로부터 Fc 영역에 융합된다: M252Y/S254T/T256E 또는 H433K/N434F/Y436H.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP 단백질 (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 생체내 또는 혈청 반감기를 증가 또는 확장하는 분자와 융합된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민 (HSA), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 다당류, 면역글로불린 분자 (IgG), 보체, 헤모글로빈, 결합 펩타이드, 지질단백질 또는 혈류 및/또는 그것의 조직 침투에서 그것의 반감기를 증가시키기 위한 다른 인자와 융합된다.
비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKPs 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKPs를 포함하는 추가의 키메라성 분자는 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링, 및/또는 코돈-셔플링 (집합적으로 "DNA 셔플링"로 칭함)의 기술을 통해 생성될 수 있다. DNA 셔플링은 비-자연 발생 CKPs (예를 들면, 더 높은 친화성 및 더 낮은 해리 속도를 가진 비-자연 발생 CKPs)의 활성을 변경시키는데 이용될 수 있다. 참고, 일반적으로, US 5605793, US5811238, US 5830721, US 5834252, US 5837458, Patten 등 (1997) Curr.Opinion Biotechnol.8, 724-33; Harayama (1998) Trends Biotechnol.16, 76-82; Hansson, 등, (1999) J.Mol.Biol.287, 265-76; 및 Lorenzo and Blasco, (1998) Biotechniques 24, 308-313
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는 재조합에 앞서 오류유발 PCR, 랜덤 뉴클레오타이드 삽입 또는 다른 방법에 의해 랜덤 돌연변이유발에 적용됨으로써 변경된다. 특이적 표적에 결합하는 스캐폴드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 하나 이상의 부분은 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 성분, 모티프, 섹션, 부, 도메인, 단편, 등과 재조합될 수 있다.
임의의 이들 융합은, 예를 들면, 표준 기술에 의해, 공공연하게 이용가능한 유전자 서열을 이용하여 작제된 재조합 융합 유전자로부터 융합 단백질의 발현에 의해, 또는 화학적 펩타이드 합성에 의해 생성될 수 있다.
비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)를 포함하는 콘주게이트
세포독성 약물 예컨대 화학치료제, 독소 (예를 들면, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그것의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사선접합체)에 접합된 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-에 자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)를 포함하는 면역접합체가 본 명세서에서 제공된다.
사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 그것의 단편은 하기를 포함한다: 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬 (슈도모나스 에어루기노사로부터), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 알류라이테스 포르디 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센.다른 독소는 메이탄신 및 메이탄시노이드, 칼리키아마이신 및 다른 세포독성 약물을 포함한다. 다양한 방사선핵종은 방사선접합된 비-자연 발생 CKPs의 생산에 이용가능하다. 그 예는 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re를 포함한다.
본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 콘주게이트 및, 예를 들면, 세포독성 약물은 하기를 이용하여 제조된다: 다양한 이중기능성 단백질-커플링제 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 하기의 이중작용성 유도체: 이미도에스테르 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디석신이미딜 우베레이트), 알데하이드 (예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨이엔(tolyene) 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠). 예를 들면, 리신 면역독소는 하기에서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다: Vitetta 등, Science, 238:1098 (1987). 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKP에 방사선핵종의 콘주게이션용 예시적인 킬레이트제이다. 참고, WO94/11026.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 상기 비-자연 발생 EETI-II 스캐폴드 단백질-수용체 콘주게이트가 눈 환자에 투여되는 안구 "사전-표적화"에서 이용하기 위한 "수용체" (예컨대 스트렙타비딘)에 접합될 수 있고, 이어서 투명제를 이용하여 순환으로부터 미결합된 콘주게이트를 제거하고 그 다음 세포독성 약물 (예를 들면, 방사선핵종) 또는 치료제에 접합되는 "리간드" (예를 들면, 아비딘)이 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 다량체 형태로 (동일한 표적 리간드에서 상이한 에피토프 또는 상이한 표적 리간드에 대하여) 이중- 또는 다중-특이적으로서 사용될 수 있다. 부착은 공유 또는 비-공유일 수 있다. 예를 들면, 이량체성 이중특이적 비-자연 발생 CKP는 제1 표적 단백질 또는 에피토프에 대하여 특이성을 가진 1종의 하위단위 및 제2 표적 단백질 또는 에피토프에 대하여 특이성을 가진 제2 하위단위를 갖는다. 비-자연 발생 CKP 하위단위는, 예를 들면, 콘주게이션을 통해, 원자가 및 따라서 표적 리간드에 결합의 또는 다중 표적 리간드를 결합시키는 친화력을 증가시킬 수 있는 다양한 형태로 연결될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKPs는 콘주게이션용 반응성 기를 제공하도록 조작된다. 특정 구현예에서, N- 말단 및/또는 C- 말단은 또한 콘주게이션용 반응성 기를 제공하는 역할을 할 수 있다. 특정 구현예에서, N- 말단은 1종의 모이어티 (예컨대, 비제한적으로 PEG)에 접합되는 한편 C-말단은 또 다른 모이어티 (예컨대, 비제한적으로 바이오틴)에 접합되거나, 또는 그 반대이다.
비제한적으로, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자, 소분자, 모방 제제, 합성 약물, 무기 분자, 및 유기 분자를 포함하는, 하나 이상의 모이어티에 접합된 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)가 제공된다. 이종성 단백질 또는 폴리펩타이드 (또는 그것의 단편, 적어도 10, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90 또는 적어도 100 아미노산의 폴리펩타이드로)에 (공유 및 비-공유 콘주게이션 둘 모두를 포함하는) 화학적으로 접합된 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 용도가 또한 제공된다. 융합은 필연적으로 직접적일 필요가 없지만, 본 명세서에서 기재된 링커 서열을 통해 발생할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP), 또는 유사체 또는 그것의 유도체는 진단 또는 검출가능한 제제에 접합될 수 있다. 상기 비-자연 발생 CKP 콘주게이트는 임상 시험 절차의 일부로서 질환의 발생 또는 진행의 모니터링 또는 예측, 예컨대 특정한 요법의 효능 결정에 유용할 수 있다. 상기 진단 및 검출은 비-자연 발생 CKP를 하기에 커플링시킴으로써 달성될 수 있다: 하기를 포함하는 검출가능한 서브스턴스: 비제한적으로 다양한 효소, 예컨대 비제한적으로 홀스래디쉬 페록시다아제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린에스테라제; 보철 그룹, 예컨대 비제한적으로 스트렙타비딘l바이오틴 및 아비딘/바이오틴; 형광 물질, 예컨대 비제한적으로, 엄벨리페론, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레신, 단실 클로라이드 또는 파이코에리트린; 발광성 물질, 예컨대, 비제한적으로, 루미놀; 생물발광 물질, 예컨대 비제한적으로, 루시퍼라아제, 루시페린, 및 에쿼린; 방사선활성 물질, 예컨대 비제한적으로 요오드 (131I, 125I, 123I, 121I), 탄소 (14C), 황 (35S), 삼중수소(3H), 인듐 (115In, 113In, 112In, 111In,), 및 테크네튬 (99Tc), 탈륨 (201Ti), 갈륨 (68Ga, 67Ga), 팔라듐 (103Pd), 몰리브데늄 (99Mo), 크세논 (133Xe), 불소 (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 및 117Tn; 다양한 양전자 방출 단층촬영을 이용하는 양전자 방출 금속, 비방사성 상자성 금속 이온, 및 특이적인 방사선동위원소에 방사선표지된 또는 접합된 분자.
치료 모이어티에 접합된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)가 또한 제공된다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 CKP는 치료 모이어티 예컨대 세포독소, 예를 들면, 세포증식억제성 또는 세포파괴 제제, 치료제 또는 방사성 금속 이온, 예를 들면, 알파-에미터에 접합될 수 있다. 세포독소 또는 세포독성 약물은 세포에 해로운 임의의 제제를 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP는, 폴리펩타이드에, 비제한적으로, 131In, 131Lu, 131Y, 131Ho, 131Sm을 포함하는, 방사성금속 이온 접합에 유용한 치료 모이어티 예컨대 방사성 금속 이온, 예컨대 알파-에미터 예컨대 213Bi 또는 거대환형 킬레이터에 접합된다. 특정 구현예에서, 거대환형 킬레이터는 링커 분자를 통해 비-자연 발생 CKP에 부착될 수 있는 1, 4, 7, 10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N",N"'-테트라-아세트산 (DOTA)이다. 상기 링커 분자는 당해 분야에서 통상적으로 공지되고, 예를 들면, 하기에서 기재된다: Denardo 등 (1998) Clin Cancer Res.4, 2483-90; Peterson 등 (1999) Bioconjug.Chem.10, 553-557; 및 Zimmerman 등 (1999) Nucl.Med.Biol.26, 943-50.
항체에 치료 모이어티 접합 기술은 잘 알려지고 본 명세서에서 개시된 비-자연 CKPs에 적용될 수 있다, 참고, 예를 들면, Amon 등, "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy" in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld 등 (eds.), pp. 243-56.(Alan R.Liss, Inc.1985); Hellstrom 등, " Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson 등 (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, " Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review", in Monoclonal Antibodies 84:Biological And Clinical Applications, Pinchera 등 (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radio labeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin 등 (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), and Thorpe 등, 1982, Immunol.Rev.62:119-58.유사한 접근법은 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKPs로 이용에 적합할 수 있다.
본 명세서에서 기재된 비-자연 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)에 접합된 치료 모이어티 또는 약물은 대상체에서 특정한 장애에 대하여 요망된 예방적 또는 치료 효과(들)을 달성하기 위해 선택될 수 있다. 임상의 또는 다른 의료인은 스캐폴드에 접합하기 위한 치료 모이어티 또는 약물에 관한 결정 경우 하기를 고려할 수 있다: 질환의 성질, 질환의 중증도, 및 대상체의 병태.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 또한 고형 지지체에 부착될 수 있고, 이는 표적 항원의 면역검정 또는 정제에 특히 유용하다. 상기 고형 지지체는, 비제한적으로, 유리, 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌을 포함한다.
공유 변형
본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)의 공유 변형은 또한 고려된다. 공유 변형의 1종의 유형은 비-자연 발생 CKP의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C- 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도화제와 비-자연 발생 CKP의 표적화된 아미노산 잔기 반응을 포함한다. 이중기능제로 유도체화는, 예를 들면, 표적 리간드 정제 방법에서 사용하기 위한 수-불용성 지지 매트릭스 또는 표면에 비-자연 발생 CKP의 가교결합, 및 반대로에 유용하다. 통상적으로 사용된 가교결합제는, 예를 들면, 하기를 포함한다: 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데하이드, N-하이드록시석신이미드 에스테르, 예를 들면, 4-아지도살리실 산을 가진 에스테르, 디석신이미딜 에스테르 예컨대 3,3'-디티오비스(석신이미딜-프로피오네이트), 이중작용성 말레이미드 예컨대 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄 및 제제 예컨대 메틸-3-[(p-아지도페닐)-디티오]프로피오이미데이트를 포함하는, 동종이중작용성 이미도에스테르.
다른 변형은 하기를 포함한다: 대응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기, 각각에 글루타미닐 및 아스파르기닐 잔기의 탈아미드화, 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 기의 인산화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화 (T.E.Creighton, Proteins:Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카복실 기의 아미드화.
비-자연 발생 CKP의 공유 변형의 또 다른 유형은, US 4640835, US 4496689, US 4301144, US 4670417, US 4791192 또는 US 4179337에서 제시된 방식으로, 다양한 비단백질성 폴리머, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에 비-자연 발생 CKP의 연결을 포함한다.
용어 "폴리에틸렌 글리콜" 또는 "PEG"는, 커플링제, (예를 들면, 티올, 트리플레이트, 트레실레이트, 아지르딘(azirdine), 옥시란, N-하이드록시석신이미드 또는 말레이미드 모이어티를 가진) 커플링 또는 활성화 모이어티와 상관 없이, 폴리에틸렌 글리콜 화합물 또는 그것의 유도체를 의미한다. 용어 "PEG"는, 그것의 유사체를 포함하는, 500 내지 150,000 Da의 분자량의 폴리에틸렌 글리콜을 지시하도록 의도되고, 여기서 예를 들면 말단 OR-기는 메톡시 기 (mPEG로 칭함)로 대체되었다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로 유도된다. PEG는 2 말단 하이드록실 기를 가진 에틸렌 옥사이드 반복 단위의 선형, 수용성 폴리머이다. PEGs는 전형적으로 약 500 달톤 내지 약 40,000 달톤 범위인 그것의 분자량으로 분류된다. 현재 바람직한 구현예에서, 이용된 PEGs는 5,000 달톤 내지 약 20,000 달톤 범위의 분자량을 갖는다. 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 CKPs에 커플링된 PEGs는 분지형 또는 비분지형일 수 있다 (예를 들면, Monfardini, C. 등 1995 Bioconjugate Chem 6:62-69). PEGs는 하기로부터 상업적으로 입수가능하다: Nektar Inc., Sigma Chemical Co. 및 다른 회사. 상기 PEGs는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜 (MePEG-OH), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-석시네이트 (MePEG-S), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-석신이미딜 석시네이트 (MePEG-S-NHS), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-아민 (MePEG-NH2), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-트레실레이트 (MePEG-TRES), 및 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-이미다졸릴-카보닐 (MePEG-IM).
특정 구현예에서, 이용되는 친수성 폴리머, 예를 들면, PEG는 무반응성 기 예컨대 메톡시 또는 에톡시 기에 의해 1종의 단부에서 캡핑된다. 그 후에, 폴리머는 하기와 반응에 의해 다른 단부에서 활성화된다: 적합한 활성화제, 예컨대 시아누르산 할라이드 (예를 들면, 시아누르 클로라이드, 브로마이드 또는 플루오라이드), 디이마도즐(diimadozle), 무수물 시약 (예를 들면, 디할로석신산 무수물, 예컨대 디브로모석신산 무수물), 아실 아자이드, p-디아조이움벤질 에테르, 3-(p-디아조늄페녹시)-2-하이드록시프로필에테르) 및 기타 동종의 것. 활성화된 폴리머는 그 다음 본 명세서에서 비-자연 발생 CKP (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)와 반응되어 폴리머로 유도된 비-자연 발생 CKP를 생산한다. 대안적으로, 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKP에서 작용기는 폴리머와 반응에 활성화될 수 있거나, 2개의 기는 공지된 커플링 방법을 이용하는 일치된 커플링 반응으로 연결될 수 있다. 본 명세서에서 제공된 비-자연 발생 CKPs가 당해 분야의 숙련가에 공지된 및 숙련가에 의해 사용된 무수한 다른 반응식을 이용하여 PEG로 유도될 수 있다는 것이 쉽게 인정될 것이다.
리포좀
본 명세서에서 개시된 비-자연 발생 CKPs (예컨대 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 비-자연 발생 LRP6-결합 CKP)는 또한 리포좀으로서 제형화될 수 있다. 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 EETI-II 스캐폴드 단백질을 함유하는 리포좀은 당해 분야에서 공지된 방법, 예컨대 하기에서 기재된 것에 의해 제조될 수 있다: 엡슈타인 등, Proc Natl Acad Sci USA, 82:3688 (1985); Hwang 등, Proc Natl Acad Sci USA, 77:4030 (1980); 및 미국 특허 번호 4,485,045 및 4,544,545. 향상된 순환 시간을 가진 리포좀은 하기에서 개시된다: 미국 특허 번호 5,013,556.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤, 및 PEG-유도된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)를 포함하는 지질 조성물로 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포좀은 요망된 직경을 가진 리포좀을 산출하기 위해 한정된 기공 크기의 필터를 통해 압출된다. 제2 치료제는 선택적으로 또한 리포좀 내에 함유된다. 참고, Gabizon 등, J. National Cancer Inst., 81(19): 1484 (1989). 인간 혈관 내피 성장 인자 A(VEGF-A)를 결합시키는 비-자연 시스틴 노트 펩타이드 (CKPs)를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서 조성물은 또한, 안구 투여에 적합한 조성물이 환자에 요망된 효과 또는 결과를 달성하도록 하기 위해, 완충액, 캐리어, 안정화제, 보존제 및/또는 팽화제를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 각막을 투과하도록 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 허용하는 하나 이상의 투과도 인핸서를 포함한다. 상기 투과도 인핸서의 예는, 예를 들면, 계면활성제, 담즙산, 킬레이트제, 보존제, 사이클로덱스트린 (즉, 친유성 약물과 복합체를 형성하는 친수성 외면 및 친유성 내면을 가진 원통형 올리고뉴클레오타이드), 등을 포함한다. 상기 투과도 인핸서는 화학적 안정성 및 생체이용률을 증가시키고 국부 자극을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 추가로 다양한 안구 구획에서 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP의 흡수 및 분포를 증가시키는 제제를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은, 그것의 점막부착형 특성 덕분에 안구 생체이용률을 향상시킬 수 있는, 가교결합된 폴리아크릴산을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 셍체접착성 폴리머를 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 인-시튜 겔화 시스템으로서, 예를 들면, 조성물이 눈물과 접촉하는 경우 특이적인 물리화학 파라미터 (이온 강도, 온도, pH, 또는 용매 교환) 때문에 안구 표면에서 졸 대 겔 상전이를 나타내는 점성 폴리머계 액체로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 눈 스프레이로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 제공된 약제학적 조성물은 리포좀으로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 니오좀 (즉, 부형제로서, 예를 들면, 콜레스테롤을 함유하는 비-이온성 계면활성제계 소포)로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 파마코좀 (즉, 양친매성 약물에 의해 형성된 소포)로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 마이크로에멀젼으로서 제형화된다. 다양한 안과 약제학적 제형에 관한 추가 세부사항은, 예를 들면, 하기에서 제공된다: Gaikwad 등 (2013) Indo Amer J Pharm Res. 3, 3216-3232; Achouri 등 (2012) Drug Dev Indust Pharm. 39, 1599-1617; Lu (2010) Recent Pat Drug Deliv Formul.4, 49-57; Baranowski 등 (2014) Sci World J. doi.org/10.1155/2014/861904; Lang (1995) Adv Drug Deliv Rev. 16, 39-43; Short (2008) Toxicologic Path. 36, 49-62; 및 다른 것.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 약제학적 조성물은, 이들 값 사이의 임의의 범위를 포함하는, 약 0.5 주, 약 1.0 주, 약 1.5 주, 약 2.0 주, 약 2.5 주, 3.5 주, 약 4.0 주, 약 1 개월, 약 2 개월 약 3 개월, 약 4 개월 약 5 개월, 약 6 개월, 또는 6 개월 초과 동안 실온에서 (예컨대 약 20-25ºC에서) 안정적이다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 약제학적 조성물은, 이들 값 사이의 임의의 범위를 포함하는, 약 0.5 주, 약 1.0 주, 약 1.5 주, 약 2.0 주, 약 2.5 주, 3.5 주, 약 4.0 주, 약 1 개월, 약 2 개월 약 3 개월, 약 4 개월 약 5 개월, 약 6 개월, 또는 6 개월 초과 동안 가속화된 조건 (예컨대 저장 약 37 ℃에서 저장) 하에 안정적이다.
혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)를 결합시키는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKPs)를 이용하는 치료 방법
대략 40 kDa의 이량체성 당단백질인, 혈관 내피 성장 인자 (VEGF-A)는 신규한 혈관의 혈관신생 성장 및 증가된 혈관 투과도로 이어지는 증식, 이동 및 튜브 형성을 자극시키는 강력한, 내피 세포 미토겐이다. 망막 또는 각막에서 저 산소 병태는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF-A)의 발현을 유도하고, 누출성 혈관의 비정상 (예컨대 과도한 또는 달리 부적절한) 성장은, 예를 들면, 당뇨병성 시각상실, 망막증, 주로 당뇨 망막병증, 연령 관련 황반 변성 (AMD), 증식성 당뇨 망막병증 (PDR), 미숙아 망막증 (ROP), 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 본 리펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 망막 정맥 폐색 (분지형 망막 정맥 폐색 (BRVO) 및 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO) 둘 모두, 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성 및 조홍을 포함하는, 몇 개의 쇠약 안구 질환의 병리학의 원인이 된다. 신규한 혈관의 VEGF-A-유도된 형성은 해롭고, 망막, 섬유주간 또는 각막 신생혈관형성은 궁극적으로 시력 손실로 이어질 수 있다.
특정 구현예에서, 대상체에게 본 명세서에서 기재된 유효량의 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP 또는 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물 (예컨대 약제학적 조성물)의 투여를 포함하는 대상체내 안구 질환 또는 장애의 치료 방법이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 대상체내 안구 질환 또는 장애 치료에서 사용을 위하여 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물 (예컨대 약제학적 조성물)이 제공된다. 특정 구현예에서, 대상체내 안구 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 용도가 제공된다.
특정 구현예에서, 치료받는 대상체는 포유동물 (예를 들면, 인간, 비-인간 영장류, 랫트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 등)이다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다. 특정 구현예에서, 대상체는 임상 환자, 임상시험 지원자, 실험적 동물, 등이다. 특정 구현예에서, 대상체는 비정상 혈관신생 및/또는 비정상 혈관 투과도 (예컨대 본 명세서에서 기재된 것)을 특징으로 하는 안구 질환 또는 장애를 갖는 것으로 또는 가질 위험에 처한 것으로 의심된다. 특정 구현예에서, 대상체는 비정상 혈관신생 및/또는 비정상 혈관 투과도 (예컨대 본 명세서에서 기재된 것)을 특징으로 하는 안구 질환 또는 장애를 가진 것으로 진단되었다.
특정 구현예에서, 안구 질환 또는 장애는 안구 혈관 증식성 질환, 예컨대 하기로 구성되는 군으로부터 선택된 안구 혈관 증식성 질환이다: 당뇨병성 시각상실, 망막증, 주로 당뇨 망막병증, 연령 관련 황반 변성 (AMD), 증식성 당뇨 망막병증 (PDR), 미숙아 망막증 (ROP), 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 본 리펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 망막 정맥 폐색 (분지형 망막 정맥 폐색 (BRVO) 및 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO) 둘 모두, 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 조홍. 특정 구현예에서, 각막 신생혈관형성은 눈의 감염, 눈에서 염증, (화학적 화상을 포함하는) 눈에 대한 트라우마, 또는 각막 윤부 줄기(stern) 세포 장벽의 손실을 초래한다. 특정 구현예에서, 각막 신생혈관형성은 포진성 각막염, 트라코마, 또는 사상충증에서 비롯한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 유효량의 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 본 명세서에서 기재된 상기 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물)은, 본 명세서에서 다른 곳에 더욱 상세하게 기재된 바와 같이, 대상체의 눈에 직접적으로 (예컨대 초자체내로 또는 국소적으로) 투여된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 제2 제제와 조합으로 투여된다. 안구 질환 또는 장애가 염증 반응에 의해 유발되는 환자에 대하여, 항-염증제와 병용 요법이 고려될 수 있다. 예를 들면, 염증을 감소시키기 위해 그리고 신규한 혈관의 형성을 예방하기 위해 스테로이드 및 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 CKP를 포함하는 조성물)의 조합된 용도는, 각각, 예를 들면, 각막 신생혈관형성을 가진 환자에서 특히 유리할 수 있다. 박테리아, 바이러스성, 진균 또는 가시아메바 감염후 안구 질환 또는 장애로 고통받는 환자는 항미생물제 및 선택적으로 항-염증제와 조합으로 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 투여로부터 유익할 수 있다. 안구 질환 또는 장애의 결과로서 각막 기질 혈관을 가진 환자는 각막 이식후 면역 거부에 대하여 상당한 위험에 처한다. 각막 이식에 앞서 (및 선택적으로 또한 차후에) 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 투여는 따라서 각막 혈관형성의 성공적인 감소가 이식 거부의 위험을 감소시킴에 따라 각막 기질 혈관을 가진 환자에 특히 유익할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 제2 항-혈관형성제와 조합으로 투여된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP) 억제제와 조합으로 투여된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 제2 요법과 조합으로 투여된다. 특정 구현예에서, 제2 요법은 레이저 광응고 요법 (LPT)이다. LPT는 레이저광을 이용하여 망막의 제어된 손상을 유발시켜 유익한 치료 효과를 생산한다. 레이저광의 작은 버스트는 누출성 혈관을 밀봉, 비정상 혈관을 파괴, 망막 열공을 밀봉, 또는 안구 뒤쪽에서 비정상 조직을 파괴시킬 수 있다. 신속하고, 비-침습성이며, 일반적으로 마취제 점안액 이외의 마취가 필요 없다. LPT 기술 및 장치는 안과의가 쉽게 이용가능하다 (참조 Lock 등 (2010) Med J Malaysia 65:88-94). LPT에 관한 추가의 세부사항은 아래에서 발견될 수 있다: 예를 들면, WO 2014/033184.
특정 구현예에서, 제2 요법은 광역학적 요법 (PDT)이다. PDT 광-활성화된 분자를 이용하여 신생혈관 내피에 국재화된 손상을 유발시켜, 혈관 폐색을 초래한다. 광은, 적합한 안과 배율 렌즈를 이용하여, 섬유 광케이블 및 슬릿 램프를 통해 단일 원형 스팟으로서 망막에 전달된다 (레이저 치료). 광-활성화된 화합물은 레이저 치료에 앞서 순환에 주사되고, 손상은 신생혈관형성으로 괴로운 영역에서 화합물의 광활성화로 가해된다. 하나의 통상적으로 사용된 광-활성화된 화합물은 베르테포르핀 (Visudyne®)이다. 베르테포르핀은 주로 지질단백질에 의해 혈장에서 수송된다. 일단 베르테포르핀이 산소의 존재 하에 광에 의해 활성화되면, 내피 주위 혈관을 손상시키는 고도로 반응성, 단수명 단일항 산소 및 반응성 산소 라디칼은 생성된다. 손상된 내피는 리포-옥시게나제 (류코트리엔) 및 사이클로옥시게나제 (에이코사노이드 예컨대 트롬복산) 경로를 통해 응혈원 및 혈관활성 인자를 방출시키도록 공지되어, 혈소판 응집, 피브린 응괴 형성 및 혈관수축을 초래한다. 베르테포르핀은 어느 정도 우선적으로 신맥관구조에서 축적하는 것처럼 보인다. 광-활성화된 화합물의 광활성화에 사용된 레이저의 파장은 사용된 특이적 광-활성화된 화합물에 의존하여 다양할 수 있다. PDT에 관한 추가의 세부사항은 아래에서 발견될 수 있다: 예를 들면, WO 2014/033184.
특정 구현예에서, 제2 요법은 투열요법 및 지짐술이고, 여기서 혈관은 단극성 투열요법 유닛을 통한 응고 전류의 적용에 의해 또는 경계에서 공급기 혈관에 삽입된 전기분해 바늘을 이용하는 열적 지짐술에 의해 폐색된다.
투여
특정 구현예에서 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은, 예를 들면, 주사, 예를 들면, 결막하 주사, 각막내 주사, 또는 초자체내 주사를 통해, 투여된다. 수성 형태로 투여는 하기의 전형적인 용적으로 일반적이다: 20-150μl 예를 들면40-60μl, 또는 50μl.주사는 30-게이지 x 1/2-인치 (12.7 mm) 바늘을 통해서일 수 있다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 투여를 위하여 준비한 미리 충전된 멸균된 주사기에서 제공된다. 특정 구현예에서, 주사기는 저 실리콘 함량을 갖거나 실리콘이 없다. 주사기는 유리로 제조될 수 있다. 전달을 위하여 미리 충전된 주사기의 이용은 투여에 앞서 멸균된 길항제 용액의 임의의 오염이 회피될 수 있는 이점을 갖는다. 미리 충전된 주사기는 또한 투여 안과의에 더 쉬운 취급을 제공한다. 참조, 예를 들면, WO 2014/033184, Fagan 등 (2013) Clin Exp Ophthalmol .41, 500-507; Avery 등 (2014) Retina.34 Suppl 12, S1-S18; 및 Doshi 등 (2015) Seminar Ophthalmol.26, 104-113 초자체내 투여에 관한 추가 세부사항에 대하여.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은, 예를 들면 안약의 형태로 국소적으로 투여된다. 눈에 국소 약물 전달에 관한 추가의 세부사항은, 예를 들면, 하기에서 발견된다: Loftsson 등 (2012) Acta Ophthalmologica.90, 603-608; Patel 등 (2013) World J.Pharmacol.2, 47-64; Freeman 등 (2009) Exp Rev Ophthalmol.4, 59-64; 및 Boddu 등 (2014) Recent Patents on Drug Delivery and Formulation.8, 27-36.
특정 구현예에서, 초자체내 디바이스는 눈에 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)을 계속해서 전달하는데 사용된다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 하기를 통해 투여된다: 안구 삽입물 (비제한적으로, 예를 들면, 하기 포함:오쿠르세르트, 락티서스, 가용성 안구 약물 삽입물 (SODIs), 미니디스크, 콘택트 렌즈, 필름, 여과지 스트립, 인공 눈물 삽입물, 및 콜라겐 보호물). 참조, 예를 들면, Gaikwad 등 (2013) Indo Amer J Pharm Res. 3, 3216-3232). 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 안구 충전물 (예컨대 공막 또는 유리체 임플란트)로서 투여된다. 다양한 공막 및 초자체내 전달 시스템은 당해 기술에 공지되어 있다. 이들 전달 시스템은 전형적으로 비-생분해성이고, 능동성 또는 수동성일 수 있다. 예를 들면, WO 2010/088548은 치료제를 전달하기 위해 수동 확산을 이용하는 강성 바디를 갖는 전달 시스템을 기재한다. WO 2002/l00318은 차압을 통해 활성 투여를 허용하는 가요성 바디를 갖는 전달 시스템을 개시한다. 대안적으로, 활성 전달은 이식가능 미니어쳐 펌프에 의해 달성될 수 있다. 치료제를 전달하기 위해 미니어쳐 펌프를 이용하는 초자체내 전달 시스템용 예는 사전-결정된 횟수로 치료제의 세트 양을 전달하기 위해 프로그래밍될 수 있는 Replenish, Inc.에 의해 시판되는 Ophthalmic MicroPump SystemTM이다. 특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 작은 캡슐-유사 컨테이너 (예를 들면, 실리콘 엘라스토머 컵)에서 케이스에 넣어진다. 컨테이너는 눈에서 홍채 위에 일반적으로 이식된다. 컨테이너는 방출 개구부를 포함한다. 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 방출은 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)과 개구부 사이 배치된 막에 의해, 또는 컨테이너에 연결된 미니어쳐 펌프에 의해 제어될 수 있다. 대안적으로, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 컨테이너 밖으로 길항제의 급속 확산을 예방하는 서방출 매트릭스에서 침착될 수 있다. 바람직하게는, 초자체내 디바이스는 제1 개월에서 더 높은 초기 속도로 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)을 방출하도록 설계된다. 방출 속도는, 예를 들면, 이식후 제1 개월의 과정 동안, 초기 속도 약 50% 미만인 속도로 느리게 감소시킨다. 컨테이너는 약 4 내지 6 개월 동안 지속하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 공급을 유지하는데 충분한 크기를 가질 수 있다. 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 감소된 용량이 투여가 연속인 경우 효과적인 치료에 충분할 수 있기 때문에, 컨테이너에서 공급은 1 년 이상, 바람직하게는 약 2 년, 더 바람직하게는 약 3 년 동안 지속할 수 있다. 단지 작은 수술이 전달 시스템을 이식하는데 요구되고 초자체내 주사가 회피되기 때문에, 반복된 초자체내 주사로 환자 순응 사안은 회피될 수 있다. 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 초자체내 농도는 감소되고, 따라서 순환에 진입하는 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)로부터 부작용의 잠재적인 위험은 감소된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 이온침투요법을 통해 투여된다. 이온침투요법은 작은 전류가 조직에 이온화 의약품 침투를 향상시키기 위해 적용되는 비침습성 기술이다 (참고, 예를 들면, Myles 등 (2005) Adv Drug Deliv Rev 57, 2063-79 and Eljarrat-Binstock 등 (2006) J Controlled Release 110, 479-89). 약물은 약물과 동일한 전하를 운반하는 전극과 함께 적용되고, 반대 전하의 것인, 접지 전극은 회로를 완성하기 위해 바디에서 다른 곳에 배치된다. 약물은 조직을 통해 전류의 컨덕터로서 작용한다.
눈에 약물의 투여에 관한 추가의 세부사항은, 예를 들면, 하기에서 제공된다: Kuno 등 (2011) Polymers 3, 193-221; Short (2008) Toxicologic Path.36, 49-62; Ghate등 (2006) Expert Opin Drug Deliv 3, 275-87; Davis 등 (2004) Curr Opin Mol Therap 6, 195-205; Gaudana 등 (2010) AAPS J.12, 348-360; 및 다른 것.
서방출 / 지효성 전달 제형
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 서방출 제형으로서 제공된다. 서방출 제형은 생분해성 폴리머와 치료제의 혼합 또는 극미립자로의 캡슐화에 의해 전형적으로 수득된다.
본 발명에 따른 서방출 제형은 전형적으로 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물), 폴리머 캐리어, 및 폴리머 캐리어로부터 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 방출 속도 변형을 위한 방출 변형제를 포함한다. 폴리머계 전달 조성물의 제조 조건 다양화로, 수득한 조성물의 방출 동력학 특성은 조절될 수 있다. 폴리머 캐리어는 일반적으로 하나 이상의 생분해성 폴리머 또는 코-폴리머 또는 이들의 조합을 포함한다. 예를 들면, 폴리머 캐리어는 폴리-락트산 (PLA), 폴리-글라이콜산 (PGA), 폴리락타이드-코-글라이콜라이드 (PLGA), 폴리에스테르, 폴리 (오르토에스테르), 폴리(포스파진), 폴리 (포스페이트 에스테르), 폴리카프로락톤, 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다.
특정 구현예에서 폴리머 캐리어는 PLGA이다. 방출 변형제는, 바람직하게는 10 내지 40 탄소 원자를 포함하는, 전형적으로 장쇄 지방 알코올이다. 통상적으로 사용된 방출 변형제는 하기를 포함한다: 카프릴 알코올, 펠라르곤산 알코올, 카프르산 알코올, 라우릴 알코올, 미리스틸 알코올, 세틸 알코올, 팔미톨레일 알코올, 스테아릴 알코올, 이소스테아릴 알코올, 엘라이딜 알코올, 올레일 알코올, 리놀레일 알코올, 다중불포화된 엘라이도리놀레일 알코올, 다중불포화된 리놀레닐 알코올, 엘라이도리놀레닐 알코올, 다중불포화된 리시놀레일 알코올, 아라키딜 알코올, 베헤닐 알코올, 에루실 알코올, 리그노세릴 알코올, 세릴 알코올, 몬타닐 알코올, 클루이틸 알코올, 미리실 알코올, 멜리스실 알코올, 및 게딜 알코올.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 마이크로구형체계 지속 방출 조성물에 편입된다. 특정 구현예에서, 마이크로구형체는 PLGA로부터 제조된다. 마이크로구형체에서 편입된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 양 그리고 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)의 방출 속도는 마이크로구형체 제조에 사용된 조건 다양화에 의해 제어될 수 있다. 상기 서방출 제형의 생산 벙법은 US 2005/0281861 및 US 2008/0107694에서 기재된다.
특정 구현예에서, 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물)은 생분해성 이식물 (예컨대 마이크로니들)에 편입된다. 매트릭스 이식물 (예컨대 마이크로니들)은 1-일 내지 6-개월 기간 동안 약물의 용량 테이퍼링 이후 부하 용량을 요구하는 안구 질환을 치료하는데 전형적으로 사용된다 (Davis 등 (2004) Curr Opin Mol Therap 6, 195-205). 이들은, 물 및 이산화탄소로 분해하는, 코폴리머 폴리-락트산-산 (PLA) 및/또는 폴리-락트산-글라이콜산 (PLGA)로부터 가장 통상적으로 제조된다. 이식물로부터 약물 방출의 속도 및 정도는 락타이드 (느림) 및 글라이콜라이드 (빠름)의 상대 농도 변경, 폴리머 중량 비의 변경, 폴리머의 추가의 코팅물 첨가, 또는 소수성, 불용성 약물 이용에 의해 감소될 수 있다. 약물의 방출은 일반적으로 약물 방출의 초기 과잉방출 그 다음 약물 수준으로 급속 감소하는 1차 동력학을 따른다. 생분해성 이식물은, 이들이 경시적으로 용해함에 따라, 제거가 필요 없다 (Hsu (2007) Curr Opin Ophthalmol 18, 235-9). 생분해성 이식물은 또한, 폴리머 PLA/PLGA 비에 의존하여, 짧은 지속기간 (수주) 내지 더 긴 지속기간 (수개월 내지 1 년) 용량 및 치료의 가요성을 허용하고, 용량 및 치료 요건이 경시적으로 변할 수 있기 때문에, 이는 질환 진행에 약물 전달 맞춤화에서 또 다른 이점이다. 안구 투여를 위하여 생분해성 이식물 (예컨대 PLGA 또는 PLA 이식물)의 제조 및 이식에 관한 추가의 세부사항은, 예를 들면, 하기에서 제공된다: WO 2006/093758, US 2006/0182783, WO 2009/026461, US 2008/0181929, US 2009/0263460, US 2010/0015158, US 2011/0207653, 및 US 2014/0154321. 안구 약물 전달을 위하여 마이크로니들에 관한 추가의 세부사항은, 예를 들면, 하기에서 제공된다: Donnelly 등 (2010) Drug Deliv 14, 187-207; USP7918814, Yavux 등 (2013) Sci World J. doi.org/10.1155/2013/732340, 및 다른 곳에.
제조 물품 및 키트
특정 구현예에서, 안구 질환 또는 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애)의 치료에 유용한 물질 및 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 컨테이너 및 컨테이너에서 또는 이와 관련된 표지 또는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 컨테이너는, 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, 등을 포함한다. 컨테이너는 다양한 물질 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 특정 구현예에서, 컨테이너는 안구 질환 또는 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애) 치료에 효과적인 그리고, 비제한적으로, 주사 디바이스, 국소 및 주사가능 약물, 외과용 기기, 봉합 및 봉합 니들, 및 눈 가리개 를 포함하는, 서방출 안구 또는 안구내 약물 전달 시스템을 이식하는데 필요한 항목의 완전한 세트를 가질 수 있는 조성물을 보유한다. 특정 구현예에서, 컨테이너는 멸균된 단위-용량 패키지를 폴딩한다. 본 조성물내 적어도 1종의 활성제는 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP이다. 표지 또는 포장 삽입물은 본 조성물이 안구 질환 또는 장애 (예컨대 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애) 치료에 사용되는 것을 지시한다. 표지 또는 포장 삽입물은 환자에게 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP (또는 상기 비-자연 발생 CKP를 포함하는 조성물) 투여용 지침을 추가로 포함할 것이다. 본 명세서에서 기재된 조합 요법을 포함하는 제조 물품 및 키트는 또한 고려된다.
포장 삽입물은 상기 치료 제품에 관하여 징후, 용법, 복용량, 투여, 사용금지사유 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 치료 제품의 상업적 패키지에서 관례상 포함된 지침을 지칭한다. 특정 구현예에서, 포장 삽입물은 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물이 안구 질환 또는 장애 (예컨대 본 명세서에서 기재된 과도한 혈관신생을 특징으로 하는 안구 혈관 증식성 질환 또는 안구 장애) 치료에 사용되는 것을 지시한다.
선택적으로 제조 물품과 조합으로, 다양한 목적, 예를 들면, 단리 또는 검출 VEGF-A에 유용한 키트가 또한 제공된다. VEGF-A의 단리 및 정제를 위하여, 상기 키트는 비드 (예를 들면, 세파로오스 비드)에 커플링된 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 함유할 수 있다. 예를 들면 ELISA 또는 블랏에서, 시험관내 VEGF-A의 검출 및 정량화를 위하여 본 명세서에서 기재된 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 함유하는 키트가 제공될 수 있다. 제조 물품과 함께, 본 키트는 컨테이너에서 또는 이와 관련된 표지 또는 포장 삽입물 그리고 컨테이너를 포함한다. 예를 들면, 컨테이너는 본 명세서에서 기재된 적어도 1종의 비-자연 발생 VEGF-A-결합 CKP를 포함하는 조성물을 보유한다. 예를 들면, 희석제 및 완충액, 대조군 항체, 등을 함유하는 추가의 컨테이너가 포함될 수 있다. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물의 설명 뿐만 아니라 의도된 시험관내 또는 진단 용도용 지침을 제공할 수 있다.
실시예
실시예 1:실시예 2-3용 물질 및 방법M13 파아지에서 EETI-II의 디스플레이.
EETI-II는 이전에 기재된 파아지미드 pS2202b 변형에 의해 M13 박테리오파아지의 표면에서 표시되었다 (Skelton, N.J., Koehler, M.F., Zobel, K., Wong, W.L., Yeh, S., Pisabarro, M.T., Yin, J.P., Lasky, L.A., and Sidhu, S.S.(2003) Origins of PDZ domain ligand specificity.Structure determination and mutagenesis of the Erbin PDZ domain.J Biol Chem 278, 7645-7654). 표준 분자 생물학 기술은 EETI-II에 대하여 인코딩하는 DNA 단편으로 pS2202d 인코딩 Erbin PDZ 도메인의 단편을 대체하는데 사용되었다. 수득한 파아지미드 (p8EETI-II)는 말토오스 결합 단백질 분비 신호에 대하여 인코딩하였고, 그 다음 gD 태그 및 EETI-II 그리고 하기로 끝나는 열린 해독틀을 함유하였다: M13 메이저 코트 단백질 p8.E.콜리 포함 p8EETI-II는 M13-KO7 헬퍼 파아지로 공-감염되었고 배양물은 밤새 30 °C에서 50 μg/ml 카르벤실린 및 25 μg/ml 카나마이신으로 보충된 30 ml 2YT 배지에서 성장되었다. 번식된 파아지는 하기에 따라 정제되었고: 표준 프로토콜 (Tonikian, R., Zhang, Y., Boone, C., and Sidhu, S.S.(2007) Identifying specificity profiles for peptide recognition modules from phage-displayed peptide libraries.Nat Protoc 2, 1368-1386) 그리고 1 ml PBT 완충액 (PBS, 0.5% BSA 및 0.1% TWEEN®20)에 재현탁되어, p8EETI-II DNA를 캡슐화하였고 EETI-II를 표시하였던 파아지 입자의 생산을 초래하였다. 표시 수준은 파아지 ELISA를 이용하여 분석되었다.
라이브러리 작제 및 정렬.
EETI-II 라이브러리는 하기를 따라 작제되었다: Kunkel 돌연변이유발 방법 (Kunkel, T.A., Roberts, J.D., and Zakour, R.A.(1987) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection.Methods Enzymol 154, 367-382). 3 라이브러리는 작제되었다: 루프 1 (3-8)이 6, 8 또는 10 아미노산 길이에서 Cys를 제외하고 모든 천연 아미노산을 인코딩하는 저하된 코돈으로 무작위화된, 라이브러리 1; 또는 루프 5 (22-26)이 5 아미노산의 고정된 길이를 가진 저하된 코돈의 동일한 세트로 무작위화된, 라이브러리 2; 또는 양쪽 루프 1이 6, 8, 및 10 아미노산으로 무작위화된 그리고 루프 5가 19 아미노산에 대하여 인코딩하는 저하된 코돈과 동시에 5 아미노산으로 무작위화된, 라이브러리 3.돌연변이유발용 올리고뉴클레오타이드는 등몰 농도에서 19 아미노산에 대하여 인코딩하는 삼량체 포스포르아미다이트의 통상 혼합을 이용하여 합성되었다. (Glen Research, Sterling, VA). 정지 템플레이트는 3-26의 영역내 3 정지 코돈을 함유하는 p8EETI-II의 단일 가닥 DNA이고 모든 3 라이브러리를 작제하는데 사용되었다. 3 라이브러리의 풀은 ~3 x 1010 특유의 구성원을 함유하였고 하기를 따라 4 라운드용 플레이트에서 포착된 hVEGF (8-109)에 대해 결합 선택의 라운드를 통해 사이클링되었다: 표준 프로토콜 (Tonikian, R., Zhang, Y., Boone, C., and Sidhu, S.S.(2007) Identifying specificity profiles for peptide recognition modules from phage-displayed peptide libraries.Nat Protoc 2, 1368-1386) 25ug/ml의 hVEGF(8-109)가 플레이트를 코팅하는데 사용되었고 용출된 파아지가 30°C에서 밤새 배양액 성장에 의해 번식되었던 것을 변동하면서.
스팟 파아지 ELISA.
결합 선택의 4 라운드 이후, 개별 파아지 클론은 채집되었고 96-웰 블록에서 50 μg/ml 카르벤실린 및 M13-KO7 헬퍼 파아지를 함유하는 450 μl 2YT 배지에 접종되었고, 이들은 밤새 37 ℃에서 성장되었다. 상청액은 스팟 파아지 ELISA로 아래와 같이 분석되었다: hVEGF(8-109) 또는 BSA는 384-웰 MAXISORPTM 면역플레이트에서 코팅되었고 PBT 완충액으로 희석된 (1:3) 파아지 상청액은 웰들에 첨가되었다. 플레이트는 세정되었고 결합된 파아지는 항-M13-HRP 그 다음 TMB 기질로 검출되었다. 이들 검정에서, BSA 단독에 파아지 결합은 배경 결합을 평가하기 위해 병렬적으로 시험되었다. hVEGF-A (8-109)에 대한 결합 신호가 BSA (배경)에 보다 3 배 초과 더 높았던 클론은 양성으로 간주되었다. 양성 클론은 DNA 서열 분석에 적용되었다.
결정학.
안정적인 복합체를 형성하기 위해, VEGF-A는 7 mg/ml로 농축되었고 6-배 몰 과잉의 VEGF_CKP9.54.90 변이체로 인큐베이션되었다. 원시 단사정계 공간 그룹 P1211의 VEGFA/ VEGF_CKP9.54.90 결정은 하기의 드롭 비를 이용하는 현적 증기 확산 방법에 의해 19°C에서 성장되었다: 2:1 단백질:저장소 용액.저장소 용액은 100 mM HEPES pH 7.4 및 26% PEG 3350을 함유하였다. 결정은 25% PEG 200으로 보충된 저장소 용액에서 동결보호되었고 데이터 수집에 앞서 액체 질소에서 급속-냉동되었다.
데이터 수집 및 구조 결정.
X-선 회절 데이터는 진전된 광자 공급원에서 빔라인 21IDF에 1.64 Å로 수집되었다. 데이터는 iMosflm을 이용하여 가공되었다. 구조는 하기를 동반한 Phenix내 Phaser를 이용하는 분자 대체에 의해 해결되었다: 이전에 공개된 아포 VEGF-A 구조 (PDB:1VPF) 조사 모델로서 그리고 비대칭 유닛에서 1종의 VEGF-A 이량체.뚜렷한 Fo - Fc 밀도는 VEGF_CKP9.54.90 변이체에 대하여 존재하였고, 그래서 상기 변이체의 구조는 Coot를 이용하여 수작업으로 밀도에 빌딩되었고 그 다음 Phenix 및 Coot를 이용하여 개량 및 리빌딩의 반복적인 라운드에 적용되었다.
세포성 IC
50
를 결정하기 위한 KDR-CHO VEGF 검정
KDR-CHO 세포 (gD 태깅된-KDR로 안정적으로 형질감염된 CHO 세포)는 하기에서 성장되었다: 세포 성장 배지 (DMEM/Ham's F-12, 10% 정용여과된 FBS (GIBCO 카탈로그 번호26400), 25 mM HEPES, 2 mM L-GLUTAMAXTM). VEGF 자극 검정을 위하여, 5x104 세포/웰은 96-웰 조직 배양판내 100 μl의 세포 플레이팅 배지 (DMEM/Ham's F-12, 0.2% BSA, 0.25% 정용여과된 FBS, 25 mM HEPES, 2 mM L-GLUTAMAXTM)에서 플레이팅되었고 밤새 37 ℃에서 인큐베이션되었다. 배지는 100 μl의 무혈청 세포 자극 배지 (DMEM/Ham's F-12, 0.5% BSA, 25 mM HEPES)로 대체되었고 세포는 2시간 동안 37 ℃에서 인큐베이션되었다. 자극 1 시간 전에, 배지는 50 μl의 무혈청 세포 자극 배지로 대체되었다. 동반하여, VEGF (hVEGF용 50 ng/ml, mVEGF 및 rVEGF용 100 ng/ml)는 1시간 동안 37 ℃에서 50 μl의 무혈청 세포 자극 배지내 CKP 또는 항-VEGF의 적정된 양으로 사전-인큐베이션되었고 세포에 첨가되었다. 세포는 15분 동안 37C에서 자극되었고 배지는 제거된다. 세포는 하기로 용해되었다: 130 μl의 빙랭 세포 용해 완충액 (150 mM NaCl, 50 mM HEPES, 0.5% 트리톤-X 100, HALT 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일 (ThermoFisher Scientific, Inc.카탈로그 번호78444), 5 mM EDTA). KDR의 VEGF 매개된 Tyr 인산화는 ELISA-기반 검정에 의해 결정되었다. 간단히, MAXISORPTM 96 웰 플레이트 (ThermoFisher Scientific, Inc. 카탈로그 번호 439454)는 밤새 4 ℃에서 PBS (1 μg/ml)에서 희석된 100 μl의 항-gD 항체로 코팅되었고 세정 완충액 (PBS, 0.05% TWEEN®20, pH 7.4)로 3회 세정되었다. 플레이트는 1시간 동안 실온에서 300 μl의 차단 완충액 (PBS, 0.5% BSA)으로 차단되었고 그 다음 세정 완충액으로 3회 세정되었다. 상기 KDR-CHO 세포 용해물 (100 μl)는 각 웰에 첨가되었고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션되었다. 플레이트는 세정 완충액으로 4회 세정되었고 그 다음 하기로 인큐베이션되었다: 100 μl의 0.5 μg/ml 바이오틴-접합된 항-포스포티로신 (클론 4G10, 밀리포어 카탈로그 번호16-103) 차단 완충액내 실온에서 2시간 동안.4회 세정 이후, 플레이트는 실온에서 30 분 동안 차단 완충액내 100 μl의 HRP-접합된 스트렙타비딘으로 인큐베이션되었다. 4회 세정 이후, 플레이트는 실온에서 20~30 분 동안 100 μl의 TMB 기질 (BD Biosciences)로 현상되었고 50 μl의 H2SO4 용액 첨가에 의해 중단되었다. 각각의 웰의 광학 밀도는 450 nm까지 설정된 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 결정되었다.
경쟁 ELISAs
각각의 펩타이드의 결합 특이성은 경쟁 ELISA에 의해 확립되었다. 먼저, 플레이트-ELISA 포멧으로 그것의 대응하는 수용체에 각각의 성장 인자의 결합은 PBS내 4o C에서 밤새 MAXISORPTM 플레이트내 2 또는 5 μg/mL로 VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, PlGf-2, NGF, EGF, PDGF-ββ, 또는 IGF-1 코팅에 의해 확인되었다. 2시간 동안 실온에서 블록 완충액 (0.5% BSA 및 0.05% TWEEN®20을 가진 PBS)로 차단 이후, 수용체-Fc 융합 또는 바이오티닐화된 수용체는 검정 완충액 (0.5% BSA 및 0.05% TWEEN®20을 가진 PBS)를 이용하여 연속으로 희석되었고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 결합된 수용체-Fc 또는 바이오티닐화된 수용체의 양은 30 분 동안 항-인간-Fc-HRP (Life Technologies) 또는 고친화도 스트렙타비딘-HRP (ThermoFisher Scientific, Inc.) 각각으로 인큐베이팅에 의해 검출되었다. 경쟁 ELISA는 차단 이후, 일정한 농도의 수용체-Fc 융합 또는 바이오티닐화된 수용체 (수용체의 농도는 EC60으로 설정되었다)를 함유하는 연속으로 희석된 펩타이드의 혼합물이 첨가되었고 1시간 동안 인큐베이션된 것을 제외하고 상기에 기재된 바와 같이 동일한 방식으로 수행되었다. 모든 재조합 인간 단백질 및 항체는 R &D Systems (Minneapolis, MN)으로부터 구매되었다.
SPR 결합 검정.
VEGF-A의 억제제의 결합 동력학 및 친화성은 0.1% DMSO (v/v)를 함유하는 HBS-EP 완충액 (10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA 및 0.005% v/v 계면활성제 P20)을 이용하여 37℃에서 BIACORETM 3000 기기 (GE Healthcare)의 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 평가되었다. 검정의 포멧에 의존하여 어느 한쪽 스트렙타비딘 센서 (SA) 또는 덱스트란-코팅된 (CM5) 센서는 아래에 기재된 바와 같이 이용되었다.
SA 센서로 이용하기 위해, VEGF-A는 2시간 동안 빙상 PBS에서, 1:1.5 몰비 각각으로 EZ-링크 NHS-PEG4-바이오틴 (Pierce)으로 단백질 인큐베이팅에 의해 먼저 바이오티닐화되었다 (2 이하 바이오틴/ VEGF-A). 반응은 그 다음 10 몰 과잉의 글리신 pH 8.0의 첨가로 켄칭되었고 샘플은 Amicon 0.5 mL 3000 MWCO 초고-원심 필터 (EMD Millipore)를 이용하여 PBS에 완충액 교환되었다. 단백질의 바이오티닐화 상태는 LC-MS 분석에 의해 확인되었다. 바이오티닐화된 VEGF-A는 그 다음 약 ~400의 공명 유닛 (RU) 신호까지 표면에서 포착되었다. CM5 센서에서 VEGF-A의 고정화를 위하여, 표면은 공급자 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 및 N-하이드록시석신이미드 (EDC/NHS)의 혼합물로 먼저 활성화되었다. VEGF-A는 그 다음 커플링 완충액 (0.1 M 아세테이트 완충액, pH 5.0)로 희석되었고 신호가 약 ~400 RU에 도달한 때까지 주사되었고 그 다음 잔류 활성화된 부위를 약화시키기 위해 1 M 에탄올아민 pH 8.0으로 세정되었다.
포착 단계 이후, 일련의 펩타이드 농축물은 0.1%로 DMSO 농도를 매칭하면서 HBS-EP 완충액에서 제조되었고 80 μL/분의 유량으로 주사되었다. 수득한 센서그램은 그 다음 스크러버 2.0 (BioLogic Software)를 이용하여 반응속도 데이터 및 친화성을 수득하기 위해 1:1 결합 모델을 이용하여 분석되었다.
CKP 합성 및 폴딩.
선형 전구체 LRP6 펩타이드는 0.1M 중탄산암모늄 (pH 9)내에 DMSO (0.5mg/mL), 50% DMSO내 1mM 환원된 글루타티온에 용해되었고 24h 동안 실온에서 진탕하면서 인큐베이션되었다. 폴딩된 CKPs는 C18 칼럼에서 RP-HPLC에 의해 정제되었고 그 다음 수집된 분획은 질량 분광분석법에 의해 분석되었고, 풀링되엇고 사용에 앞서 동결건조되었다.
세포 배양 및 형질감염.
HEK293 세포는 하기로 안정적으로 형질감염되었다: 개똥벌레 루시퍼라아제 Wnt 리포터 (Gong 등 (2010) PLoS ONE 5,9: e12682). 그리고 pRL-SV40 레닐라 루시퍼라아제 (Promega)는 10% FBS, 2 mM GLUTAMAXTM 및 40 μg/ml 하이그로마이신으로 보충된 DMEM:F12 (50:50)내 90% 합류점으로 성장되었다. 세포는 24시간 동안 37 ℃에서 5% CO2 가습된 인큐베이터에서 인큐베이션되었다. 인큐베이션 이후, 세포는 트립신화 (PBS내 0.05% Gibco 15400-54)되었고 그 다음 10% FBS, 2 mM GLUTAMAXTM으로 보충된 DMEM:F12 (50:50)내 4x105 세포/ml로 희석되었다. 20,000 세포는 하기의 개별 웰에 장입되었고: 백색 마이크로테스트 96-웰 optilux 플레이트 (카탈로그 번호353947) 그리고 ~24h 동안 인큐베이션되었다. 각각의 웰은 Wnt1-pCDNA3.2 (5ng/웰) 또는 Wnt3a-pCDNA3.2 (25ng/웰)로 FUGENE® HD를 이용하여 형질감염되었고 그 다음 24h 동안 성장되었다. 모든 LRP6-결합 변이체는 DMSO에서 희석되었고 6시간 동안 0, 0.1, 0.1, 1.0, 10, 및 100 μM의 펩타이드 농도에서 1%의 최종 DMSO 농도로 세포에 첨가되었다. 재조합 Wnt3a (5036-WN-010/CF, R&D Systems)으로 자극을 위하여 50ng/mL로 PBS에서 희석되었고 지시된 CKP를 가진 인큐베이션 배지에 첨가되었다.
모든 검정에서 루시퍼라아제 반응은 그 다음, 각각의 시약의 절반 용적 이용을 제외하고, 제조자의 지침에 따라 Promega's DUAL-GLO® 키트로 측정되었다. 개똥벌레 발광 및 레닐라 발광은 Perkin Elmer ENVISIONTM 다중표지 측정장치에서 측정되었다. 개똥벌레 발광의 비:레닐라 발광은 계산되었고 대조군 세포 발현에서 비로 정규화되었거나 지시된 Wnt 단백질로 처리되었다. 억제성 상수는 log(억제제) 대 정규화된 반응 - 가변성 기울기 Y=100/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope)) 이용을 이용하는 Prism Graphpad내 정규화된 데이터를 이용하여 계산되었다. 통계적 유의도는, 알파=5.000%으로, Holm-Sidak 방법을 이용하여 결정되었다. 연산은 모든 열이 동일한 산란검출기 (SD)를 가진 집단으로부터 샘플이고 IC50이 유의미한 경우 P<0.05에서 추가 제곱합 F 시험을 이용하여 상당히 상이한 것으로 확인되었다고 추정한다.
실시예 2A:VEGF-A를 결합시키는 비-자연 발생 EETI-II 변이체의 생성
EETI-II (도1)은 M13 박테리오파아지의 표면에서 표시용 스캐폴드로서 선택되었다. EETI-II는 M13 메이저 코트 단백질 p8의 N 말단에 융합되었다. 더욱이, gD-태그는 표시 수준을 증명하기 위해 EETI-II 서열의 N 말단 조작되었다. 3 펩타이드 파아지 라이브러리는 아래와 같이 EETI-II 프레임워크에 기반하여 생성되었다: 루프 1 아미노산 잔기가 무작위화되었고 루프 길이가 다양하였던 (6, 8, 10 잔기) 라이브러리 I; 루프 5 아미노산 잔기가 무작위화되었고 원상태 루프 길이가 고정되었던 라이브러리 II; 및 양쪽 루프 1 및 5가 동시에 아미노산 함량으로 무작위화되었고 루프 1 길이가 6 내지 10 아미노산 잔기로 다양한 한편 루프 5 길이가 고정되었던 라이브러리 III.함께, 3 라이브러리는 3 x 1010 특유의 구성원을 함유하였고 VEGF-A에 대해 선택의 라운드를 통해 사이클링되었다.
VEGF-A에 대한 패닝은 hVEGF8-109에 결합하였던 13 특유의 변이체를 생성하였다 (참고 표 19). 이들 변이체는 루프 1 또는 둘 모두 루프 1 및 5내 동시에 아미노산 조성물의 변동을 함유하였다. 또한, 수많은 변이체는 EETI-II에서 존재하는 원상태 루프에 비교된 더 긴 루프를 가졌다. 보존된 YXS 모티프는 루프 5에서 또한 분명하였다. 우리는 이들 특유의 변이체 중 7개에 대응하는 가용성 폴딩된 시스틴-노트 펩타이드를 생성하였고, 이들 모두는 파아지 경쟁 ELISA에서 hVEGF-A에 결합을 실증하였다 (표 19). 또한, 우리는 세포 검정에서 변이체의 일부를 평가하였고 이들은 저 μM에서 IC50으로 인간, 마우스 및 랫트 VEGF-A 활성의 교차종 억제를 실증하였다.
이들 변이체의 효력을 더욱 개선하기 위해, 우리는 VEGF_CKP7 및 VEGF_CKP9를 따랐다. 연질 무작위화는 VEGF-CKP7 프레임워크 내에 루프 1 및 5에서 실시되어, 인간 VEGF-A에 결합하였던 16 특유의 변이체를 초래하였다 (참고 표 21 아래).
연질 무작위화는 VEGF-CKP9 프레임워크 내에 루프 1 및 5에서 실시되어, 인간 VEGF-A에 결합하였던 16 특유의 변이체를 초래하였다 (참고 표 22-24 아래).
이들 클론은 파아지 적정 검정에서 추가 검증을 위하여 선택되었고, 이들 서열 중 10개에 대응하는 가용성 폴딩된 형태는 추가 시험관내 평가를 위하여 생성되었다 (참조 표 25 아래). 변이체의 상기 세트로부터, VEGF_CKP9.2, VEGF_CKP9.54 및 VEGF_CKP9.63은, 100 - 200 nM 범위에서 IC50으로, 시험관내 및 세포 검정에서 모 VEGF-CKP9와 비교된 VEGF-A에 대해 개선된 효력을 나타냈다 (참조 표 25).
효력을 향상시키기 위해, 우리는 선도 9.54 및 9.63 분자를 선택하였고 루프 2가 무작위화되었던 이들 프레임워크에 기반된 신규한 파아지 라이브러리를 생성하였다. 신규한 라이브러리는 hVEGF-A에 대해 패닝되었고 모 9.54 및 9.63 분자 (참고 표 26 및 27 아래, 각각)과 비교된 VEGF-A에 대해 상당히 개선된 효력을 실증하였던 수많은 루프 2 변이체가 산출되었고, 가장 강력한 분자는 0.5 - 2 nM 범위에서 IC50을 나타냈다 (참고 표 28 아래).
hVEGF-A (8-109)에 대하여 VEGF_CKP9.63.1, VEGF_CKP9.63.27, VEGF_CKP9.63.44, VEGF_CKP9.63.69, 및 VEGF_CKP9.63.12의 친화성 / 효력은 표 29에서 아래 보여진다.
변이체 VEGF_CKP9.54.90 (참고 표 26의 제2 열) 및 VEGF_CKP9.63.12 (참고 표 27의 제6 열), 뿐만 아니라 친계 변이체 VEGF_CKP9.54 (참고 표 24의 제12 열) 및 VEGF_CKP9.63 (참고 표 24의 제15 열)은, 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정된 바와 같이, 인간, 마우스, 랫트 및 토끼 VEGF-A와 유사한 친화성으로 결합한다. 참고 표 30 아래.
VEGF_CKP9.54.90은 또한 VEGF-A에 고도로 선택적이고 다른 VEGF 동형체 예컨대 VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D 또는 다른 성장 인자 예컨대 P1GF, EGF, NGF, IGF 및 PDGF에 결합하지 않거나 상기의 활성을 억제시키지 않는다. 하기에서 나타낸 바와 같이: 도2A 및 2B, 변이체 VEGF_CKP9.54.90은 VEGF-A와 KDR 사이 상호작용 뿐만 아니라 VEGF-A와 Flt-1 사이 상호작용을 방해하지만, VEGF-B와 Flt-1 사이, VEGF-C와 Flt-4 사이, VEGF-D와 Flt-4 사이, PIGF-2와 Flt-1 사이, EGF와 EGFR 사이, PDGF와 PDGFR 사이, NGF와 NGFR 사이, 또는 IGF와 IGFR 사이 상호작용을 방해하지 않는다.
EETI-II와 달리, VEGF_CKP9.54.90, VEGF_CKP9.54, 및 VEGF_CKP9.63.12는 펩타이드 기질 절단 검정에서 측정된 경우 트립신 프로테아제 활성을 억제시키지 않는다 (Stanger 등 (2014) FEBS Lett.588 (23), 4487-96). 참고 도3. 그러나, VEGF_CKP9.54.90 및 VEGF_CKP9.63.12는 트립신 소화에 저항의 정도를 유지시킨다 (참고 도4). VEGF_CKP9.54.90의 대략 20%는 37 ℃에서 트립신으로 24 h 인큐베이션 이후 루프 2이내 Arg13에서 절단되었다.
VEGF_CKP9.54, VEGF_CKP9.63, 및 VEGF_CKP9.54.90 각각은 거의 3회전 알파-나선을 함유하고 각각은 하기의 것과 구별되는 디설파이드 서명을 채택한다: 야생형 EETI-II (VEGF_CKP9.54.90에 대하여 C1-C4, C2-C3, C5-C6 대야생형 EETI-II에 대하여 C1-C4, C2-C5, C3-C6). 참고 도5. 나선의 한쪽에, VEGF_CKP9.54.90은, 루프 1, 2 및 3, 그리고 알파-나선의 ~ 1.5회전을 포함하는, 2 디설파이드 결합 (C1-C4 및 C2-C3)에 의해 브릿징되는 융합된 이환형 구조를 형성한다. 루프 5는 나선의 반대 측에서 형성하고 C5-C6 디설파이드 결합에 의해 구속된다.
VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54, VEGF_CKP9.63, 및 VEGF_CKP9.54.90의 공-결정 구조는 수득되었다. VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54, VEGF_CKP9.63, 및 VEGF_CKP9.54.90의 공-결정 구조는 고도로 유사하다. 참고 도5 및 6 VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54의 공-결정 구조에 대하여. VEGF_CKP9.54, VEGF_CKP9.63, 및 VEGF_CKP9.54.90의 구조가 고도로 유사한 것을 고려하면, (참고 도5 및 6) 추가 연구는 VEGF_CKP9.54.90으로 수행되었다. VEGF_CKP9.54.90의 잔기 Phe15 - Tyr26에 의해 한정된 나선은 VEGF-A 표면과 광범위한 소수성 및 극성 상호작용을 형성한다 (참고 표 31 아래). 추가로, ~3회전 알파-나선 내에서 형성하고 상기를 안정화시키는 골격 H-결합의 네트워크가 있다. 일반적으로, VEGF_CKP9.54.90은, 골격-골격, 측쇄-골격 및 측쇄-측쇄 상호작용을 포함하여, 분자내 극성 및 소수성 접촉에 의해 안정화된, 압축 및 강성 구조를 나타낸다 (표 32). VEGF-A를 접촉시키는 VEGF_CKP9.54.90의 표면은 소수의 극성 측쇄를 가진 사실상 주로 소수성이고 (표 31), 반면에 VEGF-A와 상호작용하지 않는 펩타이드의 반대편 표면은 용매-노출되고 사실상 주로 극성이다.
VEGF-A에서 VEGF_CKP9.54.90의 결합 계면은 천연 수용체 및 G6.31 항체의 것과 중첩한다 (도7 및 8). 펩타이드 계면에 있는 VEGF-A상의 접촉 잔기는 표 33에서 요약되고 하기에서 보여진다: 도9. VEGF-A에서 VEGF_CKP9.54.90의 결합 에피토프는 라니비주맙 및 베바시주맙의 것과 구별되고 (도10), 인간 VEGF-A와 그것의 상호작용이 설치류에서 Ser로 치환되는 핵심 Gly88 잔기에 의존적이기 때문에 마우스 또는 랫트 VEGF-A에 결합하지 않는다. VEGF_CKP9.54.90의 결합 방식은 Gly88에 실질적으로 의존적이지 않은 것을 시사하고, 상기 언급은 펩타이드가 양쪽 인간 및 설치류 VEGF-A에 효율적으로 결합하였다는 관찰에 의해 입증된다. 부위 지향적 돌연변이유발은 결정 구조로부터 관측된 단백질 - 펩타이드 계면에서 수많은 접촉을 입증하는데 이용되었다. 기대된 대로, VEGF-A에서 Y21A, Q89A 및 F17A/M81A 돌연변이는 VEGF-A에서 VEGF_CKP9.54.90의 감소된 결합으로 이어졌다. 참고 도11. 그러나, K48A 돌연변이는, G6.31 항체로 관측되는 것과 유사한 행동을, ~ 2-3 배만큼 VEGF_CKP9.54.90의 결합을 향상시켰다 (Fuh 등 (2006) J. Biol. Chem. 281, 6625-6631). 참고 표 34 아래 및 도11.
다음으로, VEGF-A 결합 변이체 VEGF_CKP9.54.90, VEGF_CKP9.63.12, 및 VEGF_CKP9.63.44는 맥락막 신생혈관형성의 VEGF-A 유도된 모델에서 그것의 생체내 효능에 대하여 평가되었다. 레이저-연소된 스팟은 랫트 눈에서 창출되었고 신규한 혈관의 형성은 상이한 간격에서 초자체내로 투여되었던 펩타이드의 존재 및 부재 하에 14-일 기간후 모니터링되었다. 펩타이드 VEGF_CKP9.54.90은, 대조군 눈과 비교된 펩타이드-처리된 눈에서 신생혈관 면적에서 관측된 상당한 감소에 의해 측정된 바와 같이, 랫트 눈에서 레이저-유도된 맥락막 신생혈관형성의 효과적인 억제를 실증하였다. 참고 도12.
VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.54.90의 공-결정 구조는 루프 3 및 4내 원상태 아미노산 잔기가 필연적으로 VEGF-A에 결합을 위하여 최적의 배향이 아님을 드러냈고 (참고 도9) 그리고 VEGF-A 표면과 그것의 상호작용을 향상시키기 위해 또는 펩타이드 폴딩 및 안정성을 개선할 수 있는 펩타이드 내에 분자내 상호작용을 유도하기 위해 변형될 수 있다. 따라서, 선도 분자의 효력 및 행동의 추가 개선을 목표로, 신규한 파아지 라이브러리는 단지 루프 3 및 4가 무작위화되었던 9.54, 54.1 및 9.63, 63.12의 서열에 기반하여 작제되었다. 이들 특이적인 프레임워크는, 선도 분자보다 약간 더 약하여도, 친화성의 개선을 검출하기 위한 검정에서 충분한 동적 범위를 허용하기 위해 선택되었다. VEGF-A에 개선된 결합을 보여주었던 루프 3 및 4에서 변동을 함유하는 많은 신규한 클론은 확인되었다. 수득된 서열의 14개는 선택되었고 선도 VEGF_CKP9.54.90 또는 VEGF_CKP9.63.12 분자 내에 루프 3 및 4에서 그라프팅되었고, 대응하는 가용성 분자는 그 다음 폴딩된 형태로 생성되었다. 14개 친화성-성숙된 변이체의 아미노산 서열은 아래 표 35 에서 제공된다.
L3/L4 변동을 함유하는 모든 가용성 분자는 54.90 또는 63.12.12에 비해 세포 검정에서 개선된 효력을 보여주었다. 3개의 선도 분자, VEGF_CKP9.54.90.67, VEGF_CKP9.54.90.53 및 VEGF_CKP9.63.12.12는 약 0.5 내지 약 1 nM 범위에서 세포 IC50 값을 가졌다. 참고 도13 및 표 36 아래.
VEGF-A와 복합체로 VEGF_CKP9.63의 공-결정 구조는 루프1 이내 위치 8에서 Tyr 잔기가 VEGF-A에서 Gln22의 측쇄와 수소 결합을 형성할 수 있다는 것을 드러냈다. 참고 도14. VEGF_CKP9.54로부터 유래된 변이체 (예컨대 표 35에서 변이체)에서 위치 8에서 아미노산은 Phe이다. 따라서, 우리는 수득한 F8Y 변이체의 친화성 및/또는 용해도 개선의 목표로 표 35내 변이체의 일부에서 Phe8을 Tyr I로 돌연변이시키도록 애썼다. F8Y 돌연변이는 하기의 일부의 친화성 / 효력에 관한 보통의 개선을 보여주었고: 분자 (예를 들면, VEGF_CKP9.54.1.F8Y, VEGF_CKP9.54.90.F8Y, 및 VEGF_CKP9.54.90.67.F8Y), 반면에 소수의 다른 사례에서 최소 또는 약간 부정적 효과를 실증하였다 (예를 들면, VEGF_CKP9.54.90.13.F8Y 및 VEGF_CKP9.54.90.62.F8Y). (표면 플라즈몬 공명에 의해 결정된 바와 같이) 특정 변이체의 결합 친화성이 비교되는 경우, 표 37, 그리고 (세포성 IC50에 의해 결정된 바와 같이) 특정 변이체의 효력이 비교되는 경우 표 38 참고. F8Y 치환은 VEGF_CKP9.54.90.67.F8Y의 용해도를 약 2 mg/ml 만큼 개선하는데 도왔다. VEGF_CKP9.54.90.67.F8Y는 추가 후속조치 연구에 선택되었다.
다양한 CKP 변이체의 산화적 안정성은 아래와 같이 분석되었다: 5μL의 11mM AAPH (Calbiochem 카탈로그 번호100110)은 물에서 (20mM 히스티딘 아세테이트 pH 5.5내 1mg/mL 펩타이드로서 제조된) 50uL의 변이체 펩타이드 샘플에 첨가되었고 혼합물은 16시간 동안 40°C에서 인큐베이션되었다. 인큐베이션의 마지막에, 샘플은 27.5uL의 40mM 메티오닌의 첨가, 그 다음 pH 5.5에서 160ul의 20mM 히스티딘 아세테이트, 100mM 수크로오스의 첨가로 켄칭되어 샘플을 희석시켰다. 반응은 LC-MS에 의해 분석되었다.
VEGF_CKP9.54.90이 루프 1내에 Met5에서 ~ 30% 산화를 경험하였던 것이 관측되었다. 비천연 아미노산 노르류신으로 Met 5의 대체가 VEGF_CKP9.54.90을 산화에 완전히 저항성으로 만들었다. 노르류신으로 Met5의 대체는 또한 결합 효율에 관한 양호한 효과를 가졌다 (~ 2-배 개선). 변이체 VEGF_CKP9.54.90.67 F8Y M5Nle, VEGF_CKP9.54.90.53 M5Nle 및 VEGF_CKP9.63.12.12 M5Nle는 생산되었다. Met5Nle 변이체의 모든 3 Met5Nle는 그것의 모 분자와 비교하여 ~ 1.5 - 2 x 만큼 세포 효력에서 보통의 개선을 보여주었다.
다음으로, VEGF-A 결합 친화성에 관한 VEGF_CKP9.54.90의 루프 1내 Trp9에서 나프탈렌계 아미노산 치환의 효과는 평가되었다. VEGF로 복합체화된 VEGF_CKP9.54.90의 결정 구조는 VEGF_CKP9.54.90의 Trp9 잔기 (및 이로부터 유래된 변이체)가, 더 큰 고리계를 맞춤화할 수 있는 잔류 공간으로, VEGF-A 표면과 상호작용하는 것을 지시한다. 상기 가설을 시험하기 위해, 우리는 Trp9의 인돌 고리가 1- 또는 2-나프틸 이성질체로 대체되었던 VEGF_CKP9.54.90의 가용성 변이체를 생성하였다. 이들 분자는 모 VEGF_CKP9.54.90에 비해 감소된 세포 효력을 보여주었다. F8Y 치환 및/또는 비천연 아미노산 치환을 포함하는 VEGF_CKP9.54.90-유래된 변이체의 효력에 관한 추가 데이터는 표 38에서 제공된다:
선도 VEGF_CKP9.54.90 단축.변이체 VEGF_CKP9.54.90 F7Y Δ2G)를 생성하기 위해 N- 및 C-말단에서 2 글리신 잔기 트리밍에 의한 F8Y은 VEGF_CKP9.54.90에 비해 세포 효력의 약간의 감소를 초래하였다. 참고 표 38 상기.
실시예 2B:C-말단 아미노산 연장을 포함하는 VEGF-A-결합 비-자연 발생 EETI-II 변이체의 생성
VEGF-A용 향상된 친화성을 가진 추가의 펩타이드 변이체를 확인하기 위해, 우리는 하기를 선택하였고: 9.54 (서열식별번호:52), 9.54.1 (서열식별번호:99) 분자 그리고 2개 추가의 아미노산이 그것의 C-말단에 첨가되었던 이들 프레임워크에 기반된 신규한 파아지 라이브러리를 생성하였다.
9.54 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 22 클론은 확인되었다 (표 39). 이들 히트는 루프 2 이내, 루프 2 및 4 이내, 또는 루프 2, 4, 및 5 이내 아미노산 조성물에서 변동을 함유하였다.
9.54.1 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 클론은 확인되었다 (표 40).
(표 39에서) 클론 9.54-28은, (상기 기재된) 파아지 경쟁 ELISA에 의해 결정된 바와 같이, 9.54와 비교된 hVEGF-A (8-109)에 대하여 대략 10-배 개선된 결합 친화성을 보여주었다. (참고 도 15). (표 40에서) 클론 9.54.1-2, 9.54.1-36, 9.54.1-42, 9.54.1-63, 및 9.54.1-90은 또한, 파아지 경쟁 ELISA에 의해 결정된 바와 같이, 9.54.1과 비교된 hVEGF-A (8-109)에 대하여 대략 10-배 개선된 결합 친화성을 보여주었다. (참고 도 15).
펩타이드 9.63 (서열식별번호:55), 및 9.63.44 (서열식별번호:125)는 상기 기재된 바와 같이 추가 변형을 위하여 선택되었다. 이들 프레임워크에 기반된 신규한 파아지 라이브러리는 생성되었고 여기에서 2개 추가의 아미노산이 그것의 C-말단에 첨가되었다.
9.63 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 28 클론은 확인되었다 (표 41). 이들 히트는 루프 2 및 4 이내 아미노산 조성물에서 변동을 함유하였다.
9.63.44 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 17 클론은 확인되었다 (표 42). 이들 히트는 루프 4 이내 아미노산 조성물에서 변동을 함유하였다. 클론 9.63.44-55는 루프 2 이내 아미노산 조성물에서 변동을 함유하였고, 클론 9.63.44-10은 루프 3 이내 아미노산 조성물에서 변동을 함유하였다. 흥미롭게도 표 42에서 클론 9.63.44-12 및 표 41에서 클론 9.63-70은 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
(표 42에서) 클론 9.63.44-1 내지 9.63.44-14는, 파아지 경쟁 ELISA에 의해 결정된 바와 같이, 9.63.44와 비교된 hVEGF-A (8-109)에 대하여 개선된 결합 친화성을 보여주었다. (참고 도16A 및 16B).
종합하면, 상기 결과는 하기를 나타낸다: 하기의 확장이: 선도 펩타이드 9.54 (서열식별번호:52), 9.54.1 (서열식별번호:99), 9.63 (서열식별번호:55), 및 9.63.44가 그것의 C-말단에 2 아미노산 첨가에 의해 hVEGF-A (8-109)에 대하여 ~10-배 더 큰 결합 친화성을 갖는 변이체를 생산하였다.
다음으로, 펩타이드 9.54.90 (서열식별번호:102) 및 63.12.12.M5L (서열식별번호:386)은 상기 기재된 바와 같이 추가 변형을 위하여 선택되었다. 간단히 신규한 파아지 라이브러리는 2개 추가의 아미노산, 3개 추가의 아미노산, 또는 4개 추가의 아미노산이 C-말단에서 첨가되었던 9.54.90에 기반하여 생성되었다. 라이브러리의 제2 세트는 2개 추가의 아미노산이 C-말단에서 첨가되었던 63.12.12.M5L에 기반하여 생성되었다.
2-아미노산 C-말단 연장을 포함하는 9.54.90 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 6 클론은 확인되었다 (표 43).
3-아미노산 C-말단 연장을 포함하는 9.54.90 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 10 클론은 확인되었다 (표 44).
4-아미노산 C-말단 연장을 포함하는 9.54.90 라이브러리로부터 모든 펩타이드는 3아미노산 C-말단 연장을 함유하였다.
2-아미노산 C-말단 연장을 포함하는 63.12.12.M5L 라이브러리로부터, hVEGF-A (8-109)용 결합 신호가 BSA (배경)보다 3 배 초과 더 높은 9 클론은 확인되었다 (표 45).
실시예 2C:C-말단 아미노산 연장을 포함하는 VEGF-A-결합 비-자연 발생 EETI-II 변이체의 특성규명
상기 표 43-45 에서 제공된 변이체는 hVEGF-A (8-109)에 대하여 더 큰 결합 친화성을 가진 변이체를 확인하기 위해 상기 기재된 바와 같이 파아지 경쟁 ELISA를 통해 분석되었다.
예를 들면, 하기를 포함하는, hVEGF (8-109)용 더 큰 친화성을 증명하는 클론 (예를 들면, 예컨대 표 39-45에서 제공된 것): 9.54.1-2, 9.54.1-36, 9.54.1-42, 9.54.1-63, 및 9.54.1-90, 및 9.63.44-1 - 9.63.44-14,은 그 다음 추가 시험관내 평가, 예컨대, 상기 기재된 바와 같이, 파아지 경쟁 ELISAs 및 VEGF-KDR 상호작용 ELISAs에서 억제 활성을 위하여 선택되었다.
클론은 그 다음, hVEGF-A (8-109), hVEGF-A 165, 마우스 VEGF-A 164, 랫트 VEGF-A, 및 토끼 VEGF-A를 포함하는, 다양한 VEGF 동형체에 대하여 그것의 친화성을 결정하기 위해 표면 플라즈몬 공명을 통해 분석되었다.
추가 분석은 VEGF-A에 대하여 클론 특이성을 평가하기 위해 수행된다. 예를 들면, 경쟁 ELISAs은 상기 기재된 바와 같이 VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, PlGf-2, NGF, EGF, PDGF-β, 또는 IGF-1로 수행된다.
클론은 또한 펩타이드 기질 절단 검정에서 측정된 바와 같이 트립신 프로테아제 활성을 억제시키는 그것의 능력에 대하여 분석된다 (Stanger 등 (2014) FEBS Lett. 588 (23), 4487-96).
예를 들면, 하기를 포함하는, 다양한 hVEGF 돌연변이체용 클론의 결합 동력학 및 친화성: Y21A, K48A, Q89A, 및 F17A/M81A, 은 상기 기재된 바와 같이 결정된다.
다음으로, 클론은, 상기 기재된 바와 같이, 맥락막 신생혈관형성의 VEGF-A 유도된 모델에서 그것의 생체내 효능에 대하여 평가된다.
변이체의 산화적 안정성은 상기 기재된 바와 같이 분석된다.
실시예 3:LRP6을 결합시키는 비-자연 발생 EETI-II 변이체의 생성
실시예 2A에서 기재된 미접촉 EETI-II 라이브러리는 LRP6 E1E2 단백질에 대해 선택의 라운드를 통해 사이클링되었다. LRP6 E1E2를 결합하였던 22 특유의 클론은 확인되었다 (표 46). 이들 초기 히트는 루프 1 및 5 이내 아미노산 함량에서 변동을 함유하였다. 몇 개의 변이체에서, 루프 1은 원상태 EETI-II 프레임워크의 것과 비교된 더 긴 길이를 나타냈다. 현저히, LRP6에 결합하였던 새로 방출된 서열은 내인성 LRP6 리간드인 원상태 Dkk1 분자 내에 존재한 모티프 (NAI)와 유사한 루프 1 (NXI)에서 공통 모티프를 함유하였다. 새로 방출된 변이체는 천연 리간드에서 발생하는 모티프를 반복하였다.
LRP6의 세포외 도메인은 Wnt 신호전달을 보급하기 위해 프리즐레드 수용체 및 Wnt 단백질과 상호작용하는 4개 프로펠러 도메인 (E1-E4)으로 구성된다. 모듈러 접근법을 이용하여, LRP6은 특이적인 Wnt 동형체, 각각에 그것의 E1-E2 또는 E3-E4 도메인의 선택적 결합을 통해 Wnt1 또는 Wnt3a 신호전달 사이를 구별한다 (Hannoush 등 (2010) J. Biol. Chem. 285, 9172-9179). Wnt1 및 Wnt3a 신호전달 아암을 약리적으로 기술하기 위해, 우리는 LRP6 E1-E2에 선택적으로 결합하는 리간드를 확인하도록 애썼다.
확인된 서열 중에서, R1, LRP6_CKP6 및 LRP6_CKP19 는 Wnt1 또는 Wnt3a 신호전달에 대해 그것의 약리적 활성을 시험하기 위해 가용성 폴딩된 형태로 생성되었다. 아래 표 47 및 48에서 보여진 바와 같이, 세포 기반 신호전달 리포터 검정에서 Wnt1 또는 Wnt3a를 향하여 R77에 의해 상당한 선택성은 관측되지 않았다. 다른 한편으로, R1 및 R19는 루시퍼라아제 리포터 검정에서 측정된 바와 같이 Wnt3a에 비해 Wnt1 신호전달을 향하여 선택적 억제 (Wnt3a보다 Wnt1에 대하여 160-배 및 11-배, 각각)을 보여주어, 이들 변이체가 LRP6 E3-E4 도메인 (IC50 > 44 μM)을 표적하지 않는다는 언급을 지지하였다. 전적으로, 데이터는 새로 방출된 변이체의 특이성 그리고 천연 리간드에서 발생하는 모티프 모방에서 그것의 효과를 집중한다. 더욱 중요하게는, 확인된 변이체는 Wnt1 및 Wnt3 신호전달을 문의하기 위해 약리적 수단을 제공한다.
표 47 및 48에서 F1, F2, 및 F3은 R1, LRP6_CKP6, 및 LRP6_CKP19의 정제 동안 수득되었던 피크 분획 1, 2, 및 3, 각각을 지칭한다.
이전의 실시예는 단지 설명 목적으로 제공되고, 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 제한하도록 의도되지 않는다. 본 명세서에서 보여준 및 기재된 것에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명으로부터 당해 분야의 숙련가에게 분명해질 것이고 첨부된 청구항들의 범위 내에 해당할 것이다.
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<212> PRT
<213> Ecballium elaterium
<400> 1
Gly Cys Pro Arg Ile Leu Met Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Arg Asp Leu Asp Val Lys Trp Asp
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<223> Synthetic Construct
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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<223> Synthetic Construct
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Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Gln Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
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20 25 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Gln Leu Met Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Arg Asp Leu Asp Val Lys Trp Asp Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Phe Cys Gln Tyr Tyr Ser Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 25
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Arg Thr Pro Trp Glu Pro His Asp Ile Thr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
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20 25 30
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<211> 32
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Thr Thr Pro Trp Pro Pro His Glu Ile Met Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gly Cys Val Thr Pro Trp Lys Pro His Trp Ile Asn Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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<220>
<223> Synthetic Construct
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Gln Arg Thr Gln Pro Phe Trp Gly
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<220>
<223> Synthetic Construct
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Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly
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<211> 8
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Construct
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Asp Pro Met Gln Pro Phe Trp Gly
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<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Asp Ile Met Gln Pro Leu Trp Gly
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Gln Leu Leu Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Asn Pro Met Leu Pro Leu Trp Gly
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 39
Lys Leu Phe Glu Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = Q or D or K or N or A or R or H
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = L or V or I or R or P or V
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
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<220>
<221> VARIANT
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Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Trp Gly
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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His Phe Tyr Asn Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Leu Trp Tyr Lys Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Arg Trp Tyr His Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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Arg Trp Tyr Gln Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 45
Gln Tyr Tyr Gln Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
His Trp Tyr Asn Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 47
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
Gly Cys Gln Ile Ser Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Phe Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 49
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 49
Gly Cys Asp Arg Met Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Leu Trp Tyr Lys Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 50
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 50
Gly Cys Asn Leu Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr His Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 51
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 51
Gly Cys Gln Arg Thr Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 52
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 53
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 53
Gly Cys Asn Pro Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 54
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 54
Gly Cys Asp Pro Met Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 55
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 55
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 56
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 56
Gly Cys Asp Ile Met Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 57
Gly Cys Gln Leu Leu Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
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<211> 30
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 58
Gly Cys Asn Pro Met Leu Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 59
Gly Cys Lys Leu Phe Glu Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Glu Ser Cys Gly
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<211> 10
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 60
Lys Asn Pro Leu Phe Asn Trp Ala Leu Tyr
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 61
Gln Asp Pro Thr Val Asn Trp Ala Val Tyr
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<211> 10
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 62
Gln Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Glu Tyr
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<220>
<223> Synthetic Construct
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<220>
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Leu Asp Pro Ser Phe Asn Trp Ser Leu Tyr
1 5 10
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 66
Arg Asp Leu Thr Ile Asn Trp Ala Leu Phe
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<220>
<223> Synthetic Construct
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<223> Synthetic Construct
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Gln Asp Pro Lys Leu Asn Trp Ala Val Tyr
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<220>
<223> Synthetic Construct
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Leu Asp Pro Ser Phe Asp Trp Ala Leu Tyr
1 5 10
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<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
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<221> VARIANT
<222> (4)
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 71
Gln Leu Phe Asp Ser
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 72
Gln Phe Tyr Gln Ser
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Gln Leu Tyr Gln Ser
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
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Gln Met His Gln Ser
1 5
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 75
Gln Met Tyr Asn Ser
1 5
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 76
Gln Met Tyr Asp Ser
1 5
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 77
Gln His Tyr Lys Thr
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Gln Leu Phe Asn Ser
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 79
Gln Leu Tyr Asn Ser
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<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
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<221> VARIANT
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<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 81
Gly Cys Lys Asn Pro Leu Phe Asn Trp Ala Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Leu Phe Asp Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 82
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 82
Gly Cys Gln Asp Pro Thr Val Asn Trp Ala Val Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Phe Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 83
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 83
Gly Cys Gln Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Glu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Leu Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 84
Gly Cys Gln Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Glu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 85
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 85
Gly Cys Gln Asp Pro Ser Leu Asn Trp Ala Asp Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met His Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 86
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 86
Gly Cys Leu Asp Arg Thr Leu Asn Trp Ala Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 87
Gly Cys Leu Asp Pro Ser Phe Asn Trp Ser Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Asp Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 88
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 88
Gly Cys Arg Asp Leu Thr Ile Asn Trp Ala Leu Phe Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Phe Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 89
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 89
Gly Cys Leu Asp Pro Thr Val Asn Trp Ala Leu Phe Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln His Tyr Lys Thr Cys Gly
20 25 30
<210> 90
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 90
Gly Cys Gln Asp Pro Lys Leu Asn Trp Ala Val Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Leu Phe Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 91
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 91
Gly Cys Leu Asp Pro Ser Phe Asp Trp Ala Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Leu Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 92
Pro Arg Ile Leu Met Arg
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 93
Lys Gln Asp Ser Asp
1 5
<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 94
Gly Gln Ser Phe Glu
1 5
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 95
Gly Leu Asp Tyr Asp
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 96
Gly Pro Asp Leu Gln
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 97
Gly Arg Asp Phe Glu
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = S or F or Y or L or F or Q or M
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = D or E or N or A or L or F or H or Q
<400> 98
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 99
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 99
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 100
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 100
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Leu Asp Tyr Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 101
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 101
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Pro Asp Leu Gln
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 102
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 102
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 103
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 103
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Gln Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 104
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 104
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Glu Arg Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 105
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 105
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 106
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 106
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Asn Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 107
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Gln Thr Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 108
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 108
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Tyr Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 109
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 109
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Phe Ile Asn Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 110
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 111
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 111
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Thr Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 112
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 112
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Phe Tyr Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 113
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 113
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 114
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 114
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Tyr Arg Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 115
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = K or P or Q or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = K or T or L or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = W or T or M or L
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = Q or R or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = W or F or P or V
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = W or K or F
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = Y or Q or W
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> Xaa = M or Y or G or D
<400> 115
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 116
<400> 116
000
<210> 117
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 117
Gly Glu Asn Phe Leu
1 5
<210> 118
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 118
Gly Pro Asp Ile Asp
1 5
<210> 119
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 119
Gly Arg Asp Met Asp
1 5
<210> 120
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 120
Glu Met Asp Phe Asp
1 5
<210> 121
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = K or G or D or A or E
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = Q or E or R or V or P or D or M or G or N or L or A or F
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = D or N or Y or S
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = S or F or L or I or M or Y or V or N or E
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = D or L or Q or S or E or T or L or A or N
<400> 121
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 122
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 122
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Glu Asn Phe Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 123
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 123
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 124
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 124
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Met Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 125
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 125
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 126
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 126
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Glu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 127
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 127
Asp Val Met Lys Pro Met Trp Gly
1 5
<210> 128
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 128
Asp Val Leu Asp Pro Thr Trp Gly
1 5
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 129
Asp Val Leu Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 130
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = M or L
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = Q or K or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = Y or M or T or L
<400> 130
Asp Val Xaa Xaa Pro Xaa Trp Gly
1 5
<210> 131
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 131
Gln Trp Tyr Asn Ser
1 5
<210> 132
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 132
Leu Trp Tyr Asn Ser
1 5
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 133
Arg Trp Tyr Asn Ser
1 5
<210> 134
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = H or L or Q or R
<400> 134
Xaa Trp Tyr Asn Ser
1 5
<210> 135
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 135
Gly Cys Asp Val Met Lys Pro Met Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 136
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 136
Gly Cys Asp Val Leu Asp Pro Thr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Leu Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 137
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 137
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 138
<400> 138
000
<210> 139
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 139
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Phe Val Arg Cys Leu Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 140
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 140
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 141
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 141
Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 142
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 142
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 143
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = norleucine
<400> 143
Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 144
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 144
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 145
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 145
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 146
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 146
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 147
Arg Thr Asn Arg Val Lys Gly Gly
1 5
<210> 148
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 148
Val Asn Arg Val Arg Gly
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 149
Met Asn His Val Lys Ala Arg Arg
1 5
<210> 150
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 150
Arg Ser Val Asn Lys Ile
1 5
<210> 151
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 151
Val Asn Lys Ile Lys Gly
1 5
<210> 152
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 152
Arg Asn Ser Ile Lys Arg
1 5
<210> 153
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 153
Val Ser Asn Arg Val Asn Lys Gly
1 5
<210> 154
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 154
Arg Gly Asn Ile Ile Lys
1 5
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 155
Arg Ser Gly Asn Thr Ile Arg Lys Arg Glu
1 5 10
<210> 156
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 156
Ala Ser Ser Asn Ser Ile Arg Gln Gly Trp
1 5 10
<210> 157
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 157
Arg Ser Asn Arg Ile Arg
1 5
<210> 158
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 158
Arg Ser Asn Lys Leu Arg Glu Ala Arg Gly
1 5 10
<210> 159
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 159
Val Asn Ser Val Lys Arg
1 5
<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 160
Gly Ser Asn Lys Ile Arg Pro Arg
1 5
<210> 161
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 161
Asn Arg Ile Arg Asn Ser
1 5
<210> 162
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 162
Ser Arg Asn Ser Ile Lys
1 5
<210> 163
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 163
Ser Asn Tyr Val Lys Arg
1 5
<210> 164
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 164
Arg Ala Asn Arg Val Ser Gly Arg
1 5
<210> 165
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 165
Ser Asn Arg Val Lys Val Arg Ala
1 5
<210> 166
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 166
Glu Asn Arg Thr Lys Gly
1 5
<210> 167
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 167
Gly Asn Lys Ile Arg Ala
1 5
<210> 168
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 168
Ala Asn Arg Val Lys Arg Thr Ser
1 5
<210> 169
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 169
Ser Gly Gly Arg Asp
1 5
<210> 170
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 170
Gly Ser Ser Arg Asn
1 5
<210> 171
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 171
Gly Val Glu Gly Arg
1 5
<210> 172
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 172
Ser Val Gly His Gly
1 5
<210> 173
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 173
Asn Glu Ser Arg Gly
1 5
<210> 174
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 174
Gly Gly Pro Gly Gly
1 5
<210> 175
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 175
Gly Pro Lys Ser Asn
1 5
<210> 176
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 176
Tyr Gly His Gly Asp
1 5
<210> 177
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 177
Gly Ser Arg Gln Asp
1 5
<210> 178
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 178
Ser Arg Gly Val Asn
1 5
<210> 179
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 179
Gly Pro Asn Asp Phe
1 5
<210> 180
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 180
Gly Arg Gly Asp Tyr
1 5
<210> 181
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 181
Ala Ser Gly Ser Ser
1 5
<210> 182
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 182
Ser Pro Gly Gly Arg
1 5
<210> 183
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 183
Gly Phe Arg Gly Thr
1 5
<210> 184
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 184
Arg Asp Arg Val Gly
1 5
<210> 185
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = V or R or N or S or E or G
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = N or S or G or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = R or V or K or S or N or I or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = V or N or I or R or S or T
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = R or K or I or N
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = G or I or R or K or S or A
<400> 185
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 186
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = A or R or M or V or G or S
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = N or T or S or A
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = R or N or H
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = V or R or K
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = K or V or I
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = R or K or A or N or S or V
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = T or G or R or K or P
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> Xaa = S or G or R or A
<400> 186
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 187
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = R or A or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = S or A
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = G or S or N or I
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = N or K
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = T or S or L or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = I or R or V
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = R or E or K
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> Xaa = K or Q or A or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)
<223> Xaa = R or G or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)
<223> Xaa = E or W or G or R
<400> 187
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 188
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = G or S or N or Y or A or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = P or G or S or V or E or R or F or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = N or G or S or E or P or K or H or R
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = G or R or H or S or Q or V or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = F or D or N or R or G or Y or S or T
<400> 188
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 189
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 189
Gly Cys Arg Thr Asn Arg Val Lys Gly Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 190
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 190
Gly Cys Val Asn Arg Val Arg Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Ser Gly Gly Arg Asp Cys Gly
20 25
<210> 191
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 191
Gly Cys Met Asn His Val Lys Ala Arg Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 192
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 192
Gly Cys Arg Ser Val Asn Lys Ile Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Gly Ser Ser Arg Asn Cys Gly
20 25
<210> 193
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 193
Gly Cys Val Asn Lys Ile Lys Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Gly Val Glu Gly Arg Cys Gly
20 25
<210> 194
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 194
Gly Cys Arg Asn Ser Ile Lys Arg Cys Lys Gln Asn Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Ser Val Gly His Gly Cys Gly
20 25
<210> 195
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 195
Gly Cys Val Ser Asn Arg Val Asn Lys Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 196
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 196
Gly Cys Arg Gly Asn Ile Ile Lys Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Asn Glu Ser Arg Gly Cys Gly
20 25
<210> 197
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 197
Gly Cys Arg Ser Gly Asn Thr Ile Arg Lys Arg Glu Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Gly Pro Gly Gly Cys Gly
20 25 30
<210> 198
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 198
Gly Cys Ala Ser Ser Asn Ser Ile Arg Gln Gly Trp Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Lys Ser Asn Cys Gly
20 25 30
<210> 199
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 199
Gly Cys Arg Ser Asn Arg Ile Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Tyr Gly His Gly Asp Cys Gly
20 25
<210> 200
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 200
Gly Cys Arg Ser Asn Lys Leu Arg Glu Ala Arg Gly Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Ser Arg Gln Asp Cys Gly
20 25 30
<210> 201
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 201
Gly Cys Val Asn Ser Val Lys Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Ser Arg Gly Val Asn Cys Gly
20 25
<210> 202
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 202
Gly Cys Gly Ser Asn Lys Ile Arg Pro Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Asp Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 203
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 203
Gly Cys Asn Arg Ile Arg Asn Ser Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Gly Arg Gly Asp Tyr Cys Gly
20 25
<210> 204
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 204
Gly Cys Ser Arg Asn Ser Ile Lys Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Ala Ser Gly Ser Ser Cys Gly
20 25
<210> 205
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 205
Gly Cys Ser Asn Tyr Val Lys Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Ser Pro Gly Gly Arg Cys Gly
20 25
<210> 206
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 206
Gly Cys Arg Ala Asn Arg Val Ser Gly Arg Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 207
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 207
Gly Cys Ser Asn Arg Val Lys Val Arg Ala Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 208
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 208
Gly Cys Glu Asn Arg Thr Lys Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Gly Phe Arg Gly Thr Cys Gly
20 25
<210> 209
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 209
Gly Cys Gly Asn Lys Ile Arg Ala Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Arg Asp Arg Val Gly Cys Gly
20 25
<210> 210
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 210
Gly Cys Ala Asn Arg Val Lys Arg Thr Ser Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 211
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 211
Gly Glu Ser Leu Ser
1 5
<210> 212
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = 3,4-difluoro-L-phenylalanine, 3,4-dichloro-L-phenylalanine,
4-chloro-L-phenylalanine, 3-F,4-Cl-L-phenylalanine, 2-pyridone(NH
para)-L-alanine, pyridone(NH meta)-L-alanine, or sulfotyrosine
<400> 212
Asn Ile Met Leu Pro Xaa Trp Gly
1 5
<210> 213
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = 1-Naphthyl alanine, 2-Naphthyl alanine, or 2-chloroindole
<400> 213
Asn Ile Met Leu Pro Phe Xaa Gly
1 5
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = norleucine
<400> 214
Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 215
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 215
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 216
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> glycine can be capped with C(=O)-oxetane-3yl
<400> 216
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 217
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 217
Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu Cys
1 5 10 15
Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys
20 25
<210> 218
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 218
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 219
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)
<223> Xaa = 1-naphthylalanine, or 2-naphthylalanine
<400> 219
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Xaa Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 220
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = 3-fluorotyrosine, or 4-fluorophenylalanine
<400> 220
Gln Tyr Xaa Gln Ser
1 5
<210> 221
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = PEG6-propargylglycine
<400> 221
Xaa Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 222
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 222
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Asn Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 223
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 223
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Phe Tyr Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 224
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 224
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 225
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 225
Glu Thr Asp Trp Tyr Pro His Gln Ile Asp
1 5 10
<210> 226
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 226
Gly Glu Thr Val Phe Glu Gln Phe Leu Trp
1 5 10
<210> 227
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 227
His Met Met Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 228
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 228
Lys Lys Trp Gln Trp Trp Tyr Met
1 5
<210> 229
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 229
Pro Ala Ile Gln Asn Trp Lys Glu His Pro
1 5 10
<210> 230
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 230
Gln Leu Met His Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 231
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 231
His Met Met Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 232
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = E or G or P or Q or R or T or V
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = T or E or A or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = D or T or I or P
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = W or V or Q or T or W
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = Y or F or N or E or P or K
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = P or E or W or N or P
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = H or Q or K or W or H
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> Xaa = Q or F or E or A or D or W
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)
<223> Xaa = I or L or H
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)
<223> Xaa = D or W or P or Y or T or M or N
<400> 232
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 233
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 233
Gly Pro Asn Gly Phe
1 5
<210> 234
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 234
Gly Pro Asn Gly Phe
1 5
<210> 235
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 235
Glu Met Tyr Asp Ala
1 5
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 236
Tyr Pro Trp Thr Glu
1 5
<210> 237
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 237
Ser Trp Trp Pro Ser Leu
1 5
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 238
His Trp Tyr Arg Ser
1 5
<210> 239
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 239
Gly Cys Glu Thr Asp Trp Tyr Pro His Gln Ile Asp Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 240
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 240
Gly Cys Gly Glu Thr Val Phe Glu Gln Phe Leu Trp Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 241
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 241
Gly Cys His Met Met Tyr Asp Tyr Cys Lys Gln Asp Ser Asp Cys Leu
1 5 10 15
Ala Gly Cys Val Cys Glu Met Tyr Asp Ala Cys Gly
20 25
<210> 242
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 242
Gly Cys Lys Lys Trp Gln Trp Trp Tyr Met Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Tyr Pro Trp Thr Glu Cys Gly
20 25 30
<210> 243
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 243
Gly Cys Pro Ala Ile Gln Asn Trp Lys Glu His Pro Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Ser Trp Trp Pro Ser Leu Cys
20 25 30
Gly
<210> 244
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 244
Gly Cys Gln Leu Met His Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Arg Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 245
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 245
His Leu Phe Glu Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 246
Gln Val Met Arg Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 247
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 247
Gln Val Met Gln Pro Ala Trp Gly
1 5
<210> 248
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 248
His Arg Leu Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 249
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 249
Glu Leu Leu Gln Pro Ser Trp Gly
1 5
<210> 250
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 250
Asn Val Leu Leu Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 251
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 251
Asp Leu Met Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 252
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 252
Asn Pro Met Leu Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 253
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 253
Gln Val Leu Gln Pro Ser Trp Gly
1 5
<210> 254
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 254
Gln Leu Leu Glu Pro Met Trp Gly
1 5
<210> 255
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 255
Lys Leu Leu Gln Pro Met Trp Gly
1 5
<210> 256
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 256
Asp Arg Met Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 257
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 257
Lys Ile Met Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 258
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 258
Asn Leu Met His Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 259
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 259
Ala Leu Leu Gln Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 260
Arg Leu Leu Glu Pro Ser Trp Gly
1 5
<210> 261
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 261
His Leu Leu Leu Pro Leu Trp Gly
1 5
<210> 262
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 262
Gln Trp Tyr Lys Ser
1 5
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 263
Leu Trp Tyr Asp Ser
1 5
<210> 264
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 264
Gln Trp Tyr Gln Ser
1 5
<210> 265
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 265
Gly Cys His Leu Phe Glu Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 266
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 266
Gly Cys Gln Val Met Arg Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 267
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 267
Gly Cys Gln Val Met Gln Pro Ala Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 268
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 268
Gly Cys His Arg Leu Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 269
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 269
Gly Cys Glu Leu Leu Gln Pro Ser Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 270
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 270
Gly Cys Asn Pro Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 271
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 271
Gly Cys Asn Val Leu Leu Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 272
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 272
Gly Cys Asp Ile Met Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 273
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 273
Gly Cys Asp Leu Met Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 274
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 274
Gln Met Phe Asn Ser
1 5
<210> 275
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 275
Gly Cys Gln Val Leu Gln Pro Ser Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 276
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 276
Gly Cys Gln Leu Met Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 277
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = norleucine
<400> 277
Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 278
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 278
Gly Cys Gln Leu Met Gln Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr His Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 279
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 279
Gly Cys Gln Leu Leu Glu Pro Met Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 280
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 280
Gly Cys Lys Leu Leu Gln Pro Met Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 281
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 281
Gly Cys Asp Arg Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Trp Tyr Lys Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 282
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 282
Gly Cys Lys Ile Met Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Leu Trp Tyr Asp Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 283
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 283
Gly Cys Asn Leu Met His Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 284
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 284
Gly Cys Ala Leu Leu Gln Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 285
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 285
Gly Cys Arg Leu Leu Glu Pro Ser Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Trp Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 286
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 286
Gly Cys His Leu Leu Leu Pro Leu Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Trp Tyr His Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 287
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 287
Asp Asp Pro Ser Phe Asp Trp Ser Val Tyr
1 5 10
<210> 288
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 288
Trp Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Leu Tyr
1 5 10
<210> 289
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 289
Gln Asp Pro Thr Leu Asn Trp Ala Thr Tyr
1 5 10
<210> 290
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 290
Glu Asp Pro Thr Val Asp Trp Ala Gln Tyr
1 5 10
<210> 291
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 291
Lys Asp Thr Thr Phe Asn Trp Gly Leu Phe
1 5 10
<210> 292
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 292
Arg Met Tyr Asp Ser
1 5
<210> 293
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 293
Gly Cys Asp Asp Pro Ser Phe Asp Trp Ser Val Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Arg Met Tyr Asp Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 294
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 294
Gly Cys Trp Asp Pro Thr Phe Asn Trp Ala Leu Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Asp Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 295
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 295
Gly Cys Gln Asp Pro Thr Leu Asn Trp Ala Thr Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 296
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 296
Gly Cys Glu Asp Pro Thr Val Asp Trp Ala Gln Tyr Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Met Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 297
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 297
Gly Cys Lys Asp Thr Thr Phe Asn Trp Gly Leu Phe Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Leu Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 298
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 298
Gly Pro Glu Leu Asn
1 5
<210> 299
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 299
Gln Ala Asp Tyr Ala
1 5
<210> 300
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 300
Gly Val Asp Tyr Leu
1 5
<210> 301
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 301
Gly Thr Asn Phe Leu
1 5
<210> 302
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 302
Ser Arg Asp Phe Asp
1 5
<210> 303
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 303
Asn Arg Asp Phe Leu
1 5
<210> 304
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 304
Gly Trp Asp Gln Phe
1 5
<210> 305
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 305
Gly Lys Asp Phe His
1 5
<210> 306
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 306
Ser Gly Asp Phe Ala
1 5
<210> 307
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 307
Gly Lys Glu Leu Asn
1 5
<210> 308
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 308
Gly Trp Ser Met Asp
1 5
<210> 309
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 309
Gly Tyr Asp Leu Gln
1 5
<210> 310
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 310
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Pro Glu Leu Asn
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 311
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 311
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gln Ala Asp Tyr Ala
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 312
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 312
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Val Asp Tyr Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 313
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 313
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Thr Asn Phe Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 314
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 314
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Ser Arg Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 315
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 315
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Asn Arg Asp Phe Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 316
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 316
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Trp Asp Gln Phe
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 317
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 317
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Lys Asp Phe His
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 318
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 318
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Ser Gly Asp Phe Ala
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 319
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 319
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Lys Glu Leu Asn
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 320
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 320
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Trp Ser Met Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 321
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 321
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Tyr Asp Leu Gln
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 322
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 322
Gly Arg Asp Leu Gln
1 5
<210> 323
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 323
Gly Val Asp Leu Ser
1 5
<210> 324
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 324
Gly Asp Asp Leu Glu
1 5
<210> 325
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 325
Gly Val Asp Met Thr
1 5
<210> 326
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 326
Gly Met Asp Ile Glu
1 5
<210> 327
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 327
Asp Gly Asp Tyr Gln
1 5
<210> 328
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 328
Gly Asn Asp Val Ser
1 5
<210> 329
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 329
Ala Gly Asp Glu Leu
1 5
<210> 330
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 330
Gly Leu Asp Glu Glu
1 5
<210> 331
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 331
Asp Gly Asp Phe Asp
1 5
<210> 332
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 332
Ala Gly Asp Phe Glu
1 5
<210> 333
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 333
Gly Asn Ser Phe Glu
1 5
<210> 334
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 334
Gly Gln Asp Leu Thr
1 5
<210> 335
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 335
Gly Glu Asn Leu Ala
1 5
<210> 336
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 336
Gly Gln Asp Tyr Asn
1 5
<210> 337
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 337
Gly Ala Asp Leu Ser
1 5
<210> 338
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 338
Gly Phe Asp Met Asp
1 5
<210> 339
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 339
Asp Leu Asn Tyr Glu
1 5
<210> 340
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 340
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Leu Gln
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 341
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 341
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Val Asp Leu Ser
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 342
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 342
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Asp Asp Leu Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 343
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 343
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Val Asp Met Thr
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 344
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 344
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Met Asp Ile Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 345
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 345
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Asp Gly Asp Tyr Gln
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 346
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 346
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Asn Asp Val Ser
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 347
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 347
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Ala Gly Asp Glu Leu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 348
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 348
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Leu Asp Glu Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 349
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 349
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Asp Gly Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 350
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 350
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Ala Gly Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 351
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 351
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Asn Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 352
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 352
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Gln Asp Leu Thr
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 353
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 353
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Glu Asn Leu Ala
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 354
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 354
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Gln Asp Tyr Asn
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 355
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 355
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Ala Asp Leu Ser
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 356
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 356
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Phe Asp Met Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 357
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 357
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Asp Leu Asn Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 358
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = Q or H or E or N or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = L or V or R or P or I
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = M or F or L
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = Q or E or R or L
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = F or A or L or S
<400> 358
Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Trp Gly
1 5
<210> 359
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = R or H
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = N or Q or H
<400> 359
Xaa Trp Tyr Xaa Ser
1 5
<210> 360
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = H or L or R or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = W or F or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = Q or N or K or H or D or E
<400> 360
Xaa Xaa Tyr Xaa Ser
1 5
<210> 361
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<400> 361
Xaa Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 362
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> Xaa = sulfotyrosine, 3,4-difluoro-L-phenylalanine,
3,4-dichloro-L-phenylalanine, 4-chloro-L-phenylalanine,
3-F,4-Cl-L-phenylalanine, 2-pyridone(NH para)-L-alanine, or
pyridone(NH meta)-L-alanine
<400> 362
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Xaa Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 363
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 363
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 364
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 364
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 365
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 365
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 366
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 366
Gly Cys Gln Ala Ile Asn Arg Val Lys Arg Gln Arg Cys Lys Gln Asp
1 5 10 15
Ser Asp Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gly Pro Asn Gly Phe Cys Gly
20 25 30
<210> 367
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 367
Gln Ala Ile Asn Arg Val Lys Arg Gln Arg
1 5 10
<210> 368
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 368
Asn Pro Met Leu Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 369
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 369
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Pro Leu
20 25 30
Ile
<210> 370
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 370
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Asn Tyr
20 25 30
Gln
<210> 371
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 371
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Pro Leu
20 25 30
Gln
<210> 372
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 372
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Thr Phe
20 25 30
Gln
<210> 373
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 373
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Asp Leu
20 25 30
Val
<210> 374
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 374
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Glu His
20 25 30
Lys
<210> 375
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 375
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Tyr Leu
20 25 30
Ser
<210> 376
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 376
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Trp Asp
20 25 30
Tyr
<210> 377
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 377
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Trp Pro
20 25 30
His
<210> 378
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 378
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Pro His
20 25 30
Gln
<210> 379
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 379
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Phe His
20 25 30
<210> 380
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 380
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Ile Ala
20 25 30
<210> 381
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 381
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 382
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 382
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Thr Arg
20 25 30
<210> 383
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 383
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Val His
20 25 30
<210> 384
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 384
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Leu Ser
20 25 30
<210> 385
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 385
Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 386
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 386
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 387
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 387
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Thr
20 25 30
<210> 388
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 388
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Trp Lys
20 25 30
<210> 389
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 389
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Leu
20 25 30
<210> 390
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 390
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asp Glu
20 25 30
<210> 391
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 391
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gln Phe
20 25 30
<210> 392
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 392
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Glu Gln
20 25 30
<210> 393
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 393
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Thr
20 25 30
<210> 394
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 394
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Leu
20 25 30
<210> 395
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 395
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Leu
20 25 30
<210> 396
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 396
Asn Ile Leu Leu Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 397
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 397
Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 398
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 398
Asn Ile Met Ser Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 399
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 399
Asn Ile Met Thr Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 400
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 400
Asn Ile Met Gln Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 401
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 401
Asn Ile Met Asn Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 402
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 402
Asn Ile Met Glu Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 403
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 403
Asn Ile Met Asp Pro Phe Trp Gly
1 5
<210> 404
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = benzyl-L-proline, 4-fluoro-benzyl-L-proline,
3-OH-L-proline, 3-fluoro-L-proline, or
trifluoromethyl-benzyl-L-proline
<400> 404
Asn Ile Met Leu Xaa Phe Trp Gly
1 5
<210> 405
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 405
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 406
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 406
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 407
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 407
Gly Cys Asn Ile Met Ser Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 408
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 408
Gly Cys Asn Ile Met Thr Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 409
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 409
Gly Cys Asn Ile Met Gln Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 410
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 410
Gly Cys Asn Ile Met Asn Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 411
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 411
Gly Cys Asn Ile Met Glu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 412
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 412
Gly Cys Asn Ile Met Asp Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 413
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = benzyl-L-proline, 4-fluoro-benzyl-L-proline,
3-OH-L-proline, 3-fluoro-L-proline, or
trifluoromethyl-benzyl-L-proline
<400> 413
Gly Cys Asn Ile Met Leu Xaa Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 414
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 414
Asn Ile Met Leu Pro Ser Trp Gly
1 5
<210> 415
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 415
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Ser Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 416
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)
<223> Xaa = N-methyl indole, N-ethyl indole, N-isopropyl indole, or
5-aza-indole
<400> 416
Asn Ile Met Leu Pro Tyr Xaa Gly
1 5
<210> 417
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)
<223> Xaa = N-methyl indole, N-ethyl indole, N-isopropyl indole, or
5-aza-indole
<400> 417
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Xaa Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 418
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = 4-methyl-L-phenylalanine, 2-naphthyl-L-alanine,
2-quinolyl-Alanine, 4-biphenyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = 3-(3-quinolinyl)-L-alanine, 3-(2-quinolinyl)-L-alanine,
3-(2-quinoxalinyl)-L-alanine, 4-methyl-2-pyridyl-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = 4-ethyl-2-pyridyl-L-alanine, benzothiazole-L-alanine, or
benzothiophene-L-alanine, 3-isoquinolinyl-L-alanine
<400> 418
Gly Arg Asp Xaa Glu
1 5
<210> 419
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)
<223> Xaa = 4-methyl-L-phenylalanine, 2-naphthyl-L-alanine,
2-quinolyl-Alanine, 4-biphenyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)
<223> Xaa = 3-(3-quinolinyl)-L-alanine, 3-(2-quinolinyl)-L-alanine,
3-(2-quinoxalinyl)-L-alanine, 4-methyl-2-pyridyl-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)
<223> Xaa = 4-ethyl-2-pyridyl-L-alanine, benzothiazole-L-alanine,
benzothiophene-L-alanine, or 3-isoquinolinyl-L-alanine
<400> 419
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Xaa Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 420
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = t-butyl-L-alanine, cyclobutyl-L-alanine,
cyclopentyl-L-alanine, or 5,5,5-Trifluoro-L-leucine
<400> 420
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Xaa Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 421
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 421
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ser Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 422
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 422
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Thr Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 423
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 423
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Glu Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 424
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 424
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Leu Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 425
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 425
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 426
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = t-butyl-L-glycine (also known as L-tert-Leucine),
t-butyl-L-alanine, L-cyclopentylglycine, cyclopentyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = L-cyclobutyl-L-glycine, cyclobutyl-L-alanine, or
5,5,5-Trifluoro-L-leucine
<400> 426
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Xaa Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 427
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa = 2-pyridone, 3,4-hydroxy phenylalanine, 3,4-fluoro
phenylalanine, or 3-Fluoro,4-OH phenylalanine
<400> 427
Gln Xaa Tyr Gln Ser
1 5
<210> 428
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (25)
<223> Xaa = 2-pyridone, 3,4-hydroxy phenylalanine, 3,4-fluoro
phenylalanine, or 3-Fluoro,4-OH phenylalanine
<400> 428
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Xaa Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 429
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = 2-Chloro Tyrosine, 2-Methyl Tyrosine, 2-Ethyl Tyrosine, or
1-naphthol alanine
<400> 429
Gln Tyr Xaa Gln Ser
1 5
<210> 430
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (26)
<223> Xaa = 2-Chloro Tyrosine, 2-Methyl Tyrosine, 2-Ethyl Tyrosine, or
1-naphthol alanine
<400> 430
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Xaa Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 431
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 431
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Ser
20 25 30
<210> 432
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = D-serine, L-beta-homoserine, L-beta-alanine, N-alpha-methyl
Glycine, glycine amide, glycine ester of glycerol
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine ester of glycol, glycine ester of oxetane-3-yl
alcohol, glycine morpholine amide
<400> 432
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 433
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = norleucine
<400> 433
Asn Ile Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 434
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 434
Asn Ile Leu Gln Pro Tyr Trp Gly
1 5
<210> 435
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 435
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 436
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 436
Gly Cys Asn Ile Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 437
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = norleucine or cyclobutyl-L-alanine
<400> 437
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Xaa Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 438
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 438
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 439
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine, cyclobutyl-L-alanine or norleucine
<400> 439
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Xaa Glu Gln Cys Xaa Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 440
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine or cyclobutyl-L-alanine
<400> 440
Gly Cys Asn Ile Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Xaa Glu Gln Cys Xaa Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 441
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine or t-butyl-L-alanine
<400> 441
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Xaa Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 442
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine or cyclobutyl-L-alanine
<400> 442
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Xaa Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 443
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 443
Xaa Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 444
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 444
Xaa Cys Asn Ile Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 445
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 445
Xaa Cys Asn Ile Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 446
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 446
Xaa Cys Asn Ile Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Glu Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 447
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine or t-butyl-L-alanine
<400> 447
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Xaa Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 448
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine
<400> 448
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Xaa Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 449
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine or cyclobutyl-L-alanine
<400> 449
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Xaa Ser Asn Cys Xaa Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 450
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine or cyclobutyl-L-alanine
<400> 450
Gly Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Xaa Ser Asn Cys Xaa Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 451
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (22)
<223> Xaa = cyclobutyl-L-glycine or cyclobutyl-L-alanine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 451
Xaa Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Xaa Ser Asn Cys Xaa Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 452
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 452
Xaa Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 453
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)
<223> Xaa = acetylglycine
<220>
<221> VARIANT
<222> (30)
<223> Xaa = glycine amide
<400> 453
Xaa Cys Asp Val Leu Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asn Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Xaa
20 25 30
<210> 454
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> Xaa = M or L
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = L or S or T or Q or N or E or D
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)
<223> Xaa = F or Y or S
<400> 454
Asn Ile Xaa Xaa Pro Xaa Trp Gly
1 5
<210> 455
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 455
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Phe His
20 25 30
<210> 456
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 456
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Leu
20 25 30
<210> 457
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 457
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gly Glu
20 25 30
<210> 458
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 458
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Val Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Ser Ile
20 25 30
<210> 459
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 459
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gly Arg
20 25 30
<210> 460
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 460
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Arg Pro
20 25 30
<210> 461
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 461
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gln Tyr
20 25 30
<210> 462
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 462
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Glu Asn
20 25 30
<210> 463
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 463
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Asp Thr
20 25 30
<210> 464
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 464
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gln His
20 25 30
<210> 465
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 465
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gln Asn
20 25 30
<210> 466
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 466
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Glu Glu
20 25 30
<210> 467
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 467
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Asp Asp
20 25 30
<210> 468
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 468
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Asp Gly
20 25 30
<210> 469
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 469
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Leu Glu
20 25 30
<210> 470
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 470
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Thr Asp
20 25 30
<210> 471
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 471
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Ser Glu
20 25 30
<210> 472
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 472
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Pro Glu
20 25 30
<210> 473
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 473
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Thr Asn
20 25 30
<210> 474
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 474
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Pro His
20 25 30
<210> 475
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 475
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Met Asp
20 25 30
<210> 476
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 476
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Ser Asp
20 25 30
<210> 477
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 477
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Ile Ala
20 25 30
<210> 478
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 478
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 479
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 479
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Thr Arg
20 25 30
<210> 480
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 480
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Val His
20 25 30
<210> 481
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 481
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 482
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 482
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Phe Ser
20 25 30
<210> 483
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 483
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gly Lys
20 25 30
<210> 484
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 484
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Tyr Leu
20 25 30
<210> 485
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 485
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asp Leu
20 25 30
<210> 486
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 486
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Glu Lys
20 25 30
<210> 487
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 487
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Thr Asp
20 25 30
<210> 488
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 488
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gln Val
20 25 30
<210> 489
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 489
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Leu
20 25 30
<210> 490
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 490
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Tyr Ala
20 25 30
<210> 491
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 491
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ala Ser
20 25 30
<210> 492
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 492
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Arg
20 25 30
<210> 493
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 493
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Thr
20 25 30
<210> 494
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 494
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Trp Asp
20 25 30
<210> 495
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 495
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Met
20 25 30
<210> 496
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 496
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Thr Arg
20 25 30
<210> 497
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 497
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Lys Gln Asp Ser Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Glu Asn
20 25 30
<210> 498
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 498
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asn Asn
20 25 30
<210> 499
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 499
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Glu
20 25 30
<210> 500
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 500
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gly Ile
20 25 30
<210> 501
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 501
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Val Glu
20 25 30
<210> 502
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 502
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Leu
20 25 30
<210> 503
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 503
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Leu
20 25 30
<210> 504
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 504
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Pro
20 25 30
<210> 505
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 505
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asn Asp
20 25 30
<210> 506
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 506
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Leu Gln
20 25 30
<210> 507
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 507
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asp Glu
20 25 30
<210> 508
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 508
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Thr
20 25 30
<210> 509
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 509
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Ile Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gln Val
20 25 30
<210> 510
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 510
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gly Ile
20 25 30
<210> 511
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 511
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Tyr Met
20 25 30
<210> 512
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 512
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gly Gln
20 25 30
<210> 513
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 513
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Thr Pro
20 25 30
<210> 514
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 514
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Val Asn
20 25 30
<210> 515
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 515
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Phe Asn
20 25 30
<210> 516
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 516
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Glu Pro
20 25 30
<210> 517
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 517
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asn Ser
20 25 30
<210> 518
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 518
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Thr
20 25 30
<210> 519
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 519
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Arg Tyr
20 25 30
<210> 520
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 520
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Phe Ser
20 25 30
<210> 521
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 521
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gln Val
20 25 30
<210> 522
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 522
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Tyr Ala
20 25 30
<210> 523
<211> 32
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 523
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Arg
20 25 30
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 524
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1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Pro Thr
20 25 30
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 525
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Ser Met
20 25 30
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<211> 32
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 526
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 527
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Thr Ser
20 25 30
<210> 528
<211> 32
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 528
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
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20 25 30
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 529
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1 5 10 15
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 530
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Asp Leu
20 25 30
<210> 531
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 531
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Val Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Gln Phe
20 25 30
<210> 532
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 532
Gly Cys Asp Val Met Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Glu Met Asp Phe Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly Trp Lys
20 25 30
<210> 533
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 533
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Gln Ser Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Gly Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly Leu Ser
20 25 30
<210> 534
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
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Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Xaa
1 5 10 15
Cys Leu Ser Xaa Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 535
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = N, K, or ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 535
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Xaa
1 5 10 15
Cys Leu Ser Xaa Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 536
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 536
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Lys Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 537
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = ornithine
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Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Asp
1 5 10 15
Cys Leu Ser Xaa Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
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<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = N, K, or ornithine
<400> 538
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Met Glu Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 539
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = N or K or ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 539
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Met Glu Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 540
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = D or E
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = N or K or ornithine
<400> 540
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Val Ser Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 541
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = N or K or ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 541
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Val Ser Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 542
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 542
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Lys Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 543
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 543
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Lys Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 544
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = ornithine
<400> 544
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Met Glu Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 545
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 545
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Lys Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 546
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = ornithine
<400> 546
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 547
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 547
Gly Cys Asn Ile Leu Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 548
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 548
Gly Cys Asn Ile Leu Gln Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Val Ser Gln Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 549
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 549
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Lys
1 5 10 15
Cys Leu Ser Xaa Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 550
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 550
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Lys
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asp Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 551
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 551
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Lys
1 5 10 15
Cys Leu Ser Glu Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 552
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 552
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Xaa
1 5 10 15
Cys Leu Ser Xaa Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 553
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 553
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Xaa
1 5 10 15
Cys Leu Ser Asp Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 554
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 554
Gly Cys Asp Val Xaa Gln Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Pro Asp Ile Xaa
1 5 10 15
Cys Leu Ser Glu Cys Ile Cys His Trp Tyr Asn Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 555
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 555
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys
1 5 10 15
Cys Met Glu Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 556
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 556
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys
1 5 10 15
Cys Met Glu Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 557
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<400> 557
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys
1 5 10 15
Cys Met Glu Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 558
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 558
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Met Glu Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 559
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 559
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Met Glu Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 560
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(16)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 560
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Met Glu Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 561
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 561
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys
1 5 10 15
Cys Val Ser Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 562
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = norleucine
<400> 562
Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys Cys
1 5 10 15
Val Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25
<210> 563
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> Xaa = norleucine
<400> 563
Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Lys Cys
1 5 10 15
Val Ser Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25
<210> 564
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = D or E
<400> 564
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Val Ser Xaa Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 565
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 565
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Val Ser Asp Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 566
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> Xaa = norleucine
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa = ornithine
<400> 566
Gly Cys Asn Ile Xaa Leu Pro Phe Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Xaa
1 5 10 15
Cys Val Ser Glu Cys Ile Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
<210> 567
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 567
Arg Trp Tyr Glu Ser
1 5
<210> 568
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa = ornithine
<400> 568
Gly Cys Asn Ile Met Leu Pro Tyr Trp Gly Cys Gly Arg Asp Phe Glu
1 5 10 15
Cys Leu Ala Xaa Cys Val Cys Gln Tyr Tyr Gln Ser Cys Gly
20 25 30
Claims (138)
- 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)로서, 상기 CKP는 시스틴 스캐폴드 구조를 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP):
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6 (서열식별번호: 2), X1X2X3X4X5X6X7 (서열식별번호: 3), X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4), X1X2X3X4X5X6X7X8X9 (서열식별번호: 5), 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 (서열식별번호: 6)로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5 (서열식별번호: 7)를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5 (서열식별번호: 7)를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
상기 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드;
상기 CKP는 500 pM 이상의 친화도로 VEGF-A에 결합한다. - 청구항 1에 있어서, 상기 CKP는 서열식별번호:1에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질과 관련하여 변경된 디설파이드 결합 연결성을 가지며; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6인, CKP.
- 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, Z1 및/또는 Z2는 G인, CKP.
- 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, L1에서:
X3은 I가 아니고;
X5은 M이 아니고/거나;
X6은 R이 아닌, CKP. - 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, L1에서:
X1은 P, Q, R, T, V, D, N, K, L, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 T, D, L, V, I, R, P, N 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 T, P, M, L, S, F, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 R, T, Q, D, W, L, E, S, K, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 F, P, V, E, K, L, I, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X6은 K, N, F, P, L, Y, T, D, M, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 Q, W, H 및 X로부터 선택된 아미노산이고/거나;
X8은 Y, A, G, D, E, W, S, 및 X로부터 선택된 아미노산이고,
여기서 X는 및 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 5에 있어서, L1에서:
X9은 L, I, V, D, E 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 5 또는 청구항 6에 있어서, L1에서:
X10은 Y, T, M, N, F, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2는 프롤린 (P)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4는 글리신 (G)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L5에서:
X1은 G, Q, H, R, L, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 P, M, W, Y, F, L, 및 H로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 N, F, H, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 G, Q, D, N, K, H, E, 및 S로부터 선택된 아미노산이고/거나;
X5은 F, S, 및 T로부터 선택된 아미노산인, CKP. - 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4)를 갖는, CKP:
여기서,
X1은 P, Q, 및 R로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 T, L, 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 T, M 및 L로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 R, Q, 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 F, P, 및 V로부터 선택된 아미노산이고;
X6은 K 및 F로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 Q 및 W로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X8은 Y, G, 및 D로부터 선택된 아미노산이다. - 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 X9X10 (서열식별번호: 6)를 갖는, CKP:
여기서,
X1은 Q, R, T 및 V로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 T 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 P이고;
X4은 T 및 W로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 F, E, P, 및 K로부터 선택된 아미노산이고;
X6은 N 및 P로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 W 및 H로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X8은 A, D, E, 및 W로부터 선택된 아미노산이고;
X9은 L 및 I로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X10은 Y, T, M 및 N으로부터 선택된 아미노산이다. - 청구항 11 또는 청구항 12에 있어서, L5에서:
X1은 G, H, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 P, M, W, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 N 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 G, Q, 및 S로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X5은 F 및 S로부터 선택된 아미노산인, CKP. - 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4)를 갖는, CKP:
여기서,
X1은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 V, I, R, L, 및 P로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 L, S, M, T, 및 F로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 Q, L, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 P이고;
X6은 F, L, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 W이고; 그리고
X8은 G이다. - 청구항 14에 있어서, L5에서:
X3은 Y이고;
X5은 S이고; 그리고
여기서 X1, X2 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고, X4은 G가 아니고/거나, X5은 F가 아닌, CKP. - 청구항 14 또는 청구항 15에 있어서, L5에서:
X1은 H, L, R, 및 Q로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 W, F, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 Y이고;
X4은 Q, N, K, H, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X5은 S인, CKP. - 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 X9 X10 (서열식별번호: 6)를 갖는, CKP:
여기서,
X1은 K, Q, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 P 및 L로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 L, T, S 및 K로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 F, V, I, 및 L로부터 선택된 아미노산이고;
X6은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 W이고;
X8은 A 및 S로부터 선택된 아미노산이고;
X9은 L, V, E 및 D로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X10은 Y 및 F로부터 선택된 아미노산이다. - 청구항 17에 있어서, L5에서:
X1은 Q이고;
X2은 L, F, M, 및 H로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 F, Y, 및 H로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 D, Q, N, 및 K로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X5은 S 및 T로부터 선택된 아미노산인, CKP. - 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, L2에서, X1은 K이고, X2은 Q이고, X3은 D이고, X4은 S이고, 그리고 X5은 D인, CKP.
- 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4) 를 갖는, CKP:
여기서,
X5은 P이고;
X7은 W이고;
X8은 G이고; 그리고
여기서 X1, X2, X3, X4 및 X6 각각은 임의의 아미노산이고, 단, X1은 P가 아니고, X2은 R이 아니고, X3은 I가 아니고/거나 X6은 R이 아니다. - 청구항 1 내지 5 및 18 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4) 를 갖는, CKP:,
여기서,
X1은 N 및 D로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 I 및 V로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 M 및 L로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 L, Q, D 및 K로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 P이고;
X6은 F, Y, T, L, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고;
X7은 W이고; 그리고
X8은 G이다. - 청구항 14 내지 15 및 20 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, L5에서:
X1은 Q, H, L, 및 R로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 Y 및 W로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 Y이고;
X4은 Q 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
X5은 S인, CKP. - 청구항 14 내지 15 및 20 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, L5에서:
X3은 Y이고;
X5은 S이고; 그리고
여기서 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산이고, 단,
X1은 G가 아니고, X2은 P가 아니고/거나, X4은 G가 아닌, CKP. - 청구항 20 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, L2에서:
X1은 G 또는 E로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 Q, L, P, R, E, 및 M으로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 S, D, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 F, Y, L, M, 및 I로부터 선택된 아미노산이고/거나;
X5은 E, D, Q, L, 및 S로부터 선택된 아미노산인, CKP. - 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, L3에서, X1은 L이고, X2은 A이고, 그리고 X3은 G인, CKP.
- 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, L4에서, X1은 V 또는 F인, CKP.
- 청구항 1 내지 7, 11 내지 12, 14, 17, 19 내지 21, 및 24 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2는 프롤린 (P)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 7, 11 내지 12, 14, 17, 19 내지 21, 및 24 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4는 글리신 (G)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 7, 11 내지 12, 14, 17, 19 내지 21, 및 24 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 여기서 L5에서:
X1은 G를 제외한 임의의 아미노산이고;
X2은 P를 제외한 임의의 아미노산이고;
X3은 N을 제외한 임의의 아미노산이고;
X4은 G를 제외한 임의의 아미노산이고; 그리고/또는
X5은 F를 제외한 임의의 아미노산인, CKP. - 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4) 를 갖는, CKP:
여기서,
X1은 N, D, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 I, V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 M 또는 X이고;
X4은 L, Q, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 P 또는 X이고;
X6은 F, Y, 또는 X이고;
X7은 W 또는 X이고; 그리고
X8은 G 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산이다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 28에 있어서, L3에서, 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고, 단, X1은 류신 (L)이 아니고, X2은 알라닌 (A)이 아니고, 그리고 X3은 글리신 (G)이 아니고, 여기서 상기 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
- 청구항 28 또는 청구항 29에 있어서, L3에서:
X1은 M, F, L V, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 S, N, Q, I, Y, E, V, T, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 D, Q, T, N, E, R, 및 X로부터 선택된 아미노산이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 28 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, L4에서, X1은 V를 제외한 임의의 아미노산 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
- 청구항 28 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, L4에서, X1은 I, L, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드.
- 청구항 28 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, L5에서:
X3은 Y 또는 X이고;
X5은 S 또는 X이고; 그리고
여기서 X1, X2, 및 X4 각각은 임의의 아미노산 또는 X이고, 단, X1은 G가 아니고, X2는 P가 아니고/거나 X4은 G가 아니고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 1 내지 7, 11 내지 12, 14, 17, 19 내지 21, 및 24 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2는 프롤린 (P)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 7, 11 내지 12, 14, 17, 19 내지 21, 및 24 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4는 글리신 (G)이 아닌, CKP.
- 청구항 28 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, L5에서:
X1은 Q, H, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 Y, W, 및 X로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 Y 또는 X이고;
X4은 Q, N, 또는 X이고;
X5은 S 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 28 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, L2에서:
X1은 G 또는 X이고;
X2은 R, P, 또는 X이고;
X3은 D 또는 X이고;
X4는 F, I, 또는 X이고; 그리고
X5은 E, D, 또는 X이고, 여기서 X는 하기로 구성된 군으로부터 비천연 아미노산인, CKP: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드. - 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECLQQCICQYYQSCG (서열식별번호: 103) 를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVERCICQYYQSCG (서열식별번호: 104)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호: 105)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMNQCICQYYQSCG (서열식별번호: 106)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMQTCICQYYQSCG (서열식별번호: 107)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVYQCICQYYQSCG (서열식별번호: 108)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECFINCICQYYQSCG (서열식별번호: 109)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호: 110)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVTECICQYYQSCG (서열식별번호: 111)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECFYECICQYYQSCG (서열식별번호: 112)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 113)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호: 114)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호: 139)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 140)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 142)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호: 144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호: 145), (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)를 포함하는, CKP.
- 청구항 28 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 서열 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 224) (여기서 X는 노르류신임)를 포함하는, CKP.
- 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP): GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 113), GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호: 114), GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호: 139), GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 140), GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 142), GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호: 144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호: 145), (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임), 및 GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 224) (여기서 X는 노르류신임).
- 청구항 59에 있어서, GCNIMLPFWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 113)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCNIMLPFWGCGRDFECVYRCICQYYQSCG (서열식별번호: 114)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCDVMQPYWGCGPDIDCFVRCLCHWYNSCG (서열식별번호: 139)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCDVMQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 140)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCNIMLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 142)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCNIXLPFWGCGRDFECMSDCICQYYQSCG (서열식별번호: 144) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCNIXLPFWGCGRDFECVSQCICQYYQSCG (서열식별번호: 145), (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCNIXLPYWGCGRDFECMEQCICQYYQSCG (서열식별번호: 146) (여기서 X는 노르류신 (Nle)임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59에 있어서, GCDVXQPYWGCGPDIDCLSNCICHWYNSCG (서열식별번호: 224) (여기서 X는 노르류신임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 59 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP는 VEGF-A에 결합하는, CKP.
- 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP): GCDVX1QPYWGCGPDI-D/E-CLS-N/K/X2-CICHWYNSCG (서열식별번호: 534), GCDVX1QPYWGCGPDI-N/K/X2-CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호: 535), GCNIX1LPYWGCGRDF-D/E-CME-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호: 538), GCNIX1LPYWGCGRDF-N/K/X2-CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호: 539), GCNIX1LPFWGCGRDF-D/E-CVS-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호: 540), 및 GCNIX1LPFWGCGRDF-N/K/X2-CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호: 541) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임).
- 청구항 70에 있어서, GCDVX1QPYWGCGPDI-D/E-CLS-N/K/X2-CICHWYNSCG (서열식별번호: 534) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 71에 있어서, GCDVXQPYWGCGPDIDCLSKCICHWYNSCG (서열식별번호: 536) (여기서 X는 노르류신임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 71에 있어서, GCDVX1QPYWGCGPDIDCLSX2CICHWYNSCG (서열식별번호: 537) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2는 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70에 있어서, GCDVX1QPYWGCGPDI-N/K/X2-CLS-D/E-CICHWYNSCG (서열식별번호: 535) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70에 있어서, GCNIX1LPYWGCGRDF-D/E-CME-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호: 538) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 75에 있어서, 하기에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP: GCNIXLPYWGCGRDFECMEKCICQYYQSCG (서열식별번호: 543) (여기서 X는 노르류신임).
- 청구항 75에 있어서, GCNIX1LPYWGCGRDFECMEX2CICQYYQSCG (서열식별번호: 544) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70에 있어서, GCNIX1LPYWGCGRDF-N/K/X2-CME-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호: 539) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70에 있어서, GCNIX1LPFWGCGRDF-D/E-CVS-N/K/X2-CICQYYQSCG (서열식별번호: 540) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 79에 있어서, GCNIXLPFWGCGRDFECVSKCICQYYQSCG (서열식별번호: 545) (여기서 X는 노르류신임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 79에 있어서, GCNIX1LPFWGCGRDFECVSX2CICQYYQSCG (서열식별번호: 546) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70에 있어서, GCNIX1LPFWGCGRDF-N/K/X2-CVS-D/E-CICQYYQSCG (서열식별번호: 541) (여기서 X1은 노르류신이고, 그리고 X2은 오르니틴임)에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는, CKP.
- 청구항 70 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP는 VEGF-A에 결합하는, CKP.
- VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)로서, 시스틴 스캐폴드 구조를 포함하는, CKP:
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2
여기서,
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산, 1종 초과의 아미노산, 또는 비천연 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고; L5는 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고;
여기서 상기 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드, 및
상기 CKP는 하기 서열식별번호에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 야생형 에크발리움 엘라테리움 트립신 억제제 EETI-II 단백질과 관련하여 변경된 디설파이드 결합 연결성을 갖는다: 1; 상기 변경된 디설파이드 결합 연결성은 C1-C4, C2-C3 및 C5-C6이고; 그리고 상기 CKP는 적어도 20%의 퍼센트 알파 나사선구조 함량을 갖는다. - 청구항 84에 있어서, 상기 CKP는 500 pM 이하의 친화도로 VEGF-A에 결합하는, CKP.
- 청구항 1 내지 58 및 84 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정되는, CKP.
- 청구항 84 내지 86 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X2는 프롤린 (P)이 아닌, CKP.
- 청구항 84 내지 86 중 어느 한 항에 있어서, L5에서, 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고, 단, X4는 글리신 (G)이 아닌, CKP.
- 청구항 1 내지 88 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 상기 펩타이드의 C-말단 카복실기는 캡핑되고;
(b) 상기 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 캡핑되고; 또는
(c) 상기 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민의 C-말단 카복실기는 캡핑되는, CKP. - 청구항 89에 있어서,
(a) 상기 펩타이드의 C-말단 카복실기는 아미드화되고;
(b) 상기 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화되고; 또는
(c) 상기 펩타이드의 C-말단 카복실기는 아미드화되고 상기 펩타이드 (CKP)의 N-말단 아민은 아세틸화되는, CKP. - 청구항 1 내지 90 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP는 VEGF-A 활성을 억제하는, CKP.
- 청구항 1 내지 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP는 약 0.5 nM 내지 약 1.0 nM의 IC50로 VEGF-A 활성을 억제하는, CKP.
- 청구항 1 내지 92 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-자연 발생 EETI-II 스캐폴드 단백질은 인간 VEGF-A, 마우스 VEGF-A, 및 랫트 VEGF-A에 결합하는, CKP.
- VEGF-A에 결합하기 위해 항체 G6.31과 경쟁하는 비-자연 발생 CKP.
- VEGF-A에 결합하기 위해 청구항 1 내지 94 중 어느 한 항의 CKP와 경쟁하는 비-자연 발생 CKP.
- VEGF-A 상의 에피토프에 결합하는 비-자연 발생 CKP로서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 적어도 하나를 포함하는, 비-자연 발생 CKP: V14, V15, F17, D19, Y21, Q22, Y25, I46, K48, N62, D63, L66, M81, I83, K84, P85, H86, G88, Q89, I91, C104, R105, 및 P106.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 K48, N62, 및 D63로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 Y21, Y25, 및 P106로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 H86 및 Q89로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 M81, D19, 및 Q22로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 F17, M81, 및 I91로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 V14, F17, D19, Q22, M81, 및 I91로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 96에 있어서, 상기 잔기는 Y25로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 치료제에 접합되는, CKP.
- 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 표지에 접합되는, CKP.
- 청구항 105에 있어서, 상기 표지는 방사선동위원소, 형광 염료, 및 효소로 구성된 군으로부터 선택되는, CKP.
- 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항의 CKP를 인코딩하는 단리된 핵산.
- 청구항 107의 핵산 분자를 인코딩하는 발현 벡터.
- 청구항 108의 발현 벡터를 포함하는 세포.
- 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항의 CKP를 생성하는 방법으로서, 청구항 109의 세포를 배양하고 상기 세포 배양으로부터 CKP를 회수하는, 방법.
- 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP를 화학적으로 합성하는 것을 포함하는, CKP의 생성 방법.
- 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항의 CKP 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
- 대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하는 방법으로서, 유효량의 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항의 CKP 또는 청구항 112의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
- 청구항 113에 있어서, 상기 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환인, 방법: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP).
- 청구항 113 또는 114에 있어서, 상기 CKP 또는 상기 조성물은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
- 청구항 115에 있어서, 상기 이식가능 디바이스는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
- 대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하기 위한, 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항의 CKP 를 포함하는 조성물.
- 청구항 117에 있어서, 상기 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환인, 조성물: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP).
- 청구항 117 또는 118에 있어서, 상기 조성물은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여되는, 조성물.
- 청구항 119에 있어서, 상기 이식가능 디바이스는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 것에 사용되는, 조성물: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
- 대상체에서 혈관신생 및/또는 혈관 투과도 또는 누출을 특징으로 하는 안구 질환을 치료하기 위한, 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항의 CKP를 포함하는 조성물의 용도.
- 청구항 121에 있어서, 상기 안구 질환은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 안구내 신생혈관 질환인, 용도: 증식성 망막증, 맥락막 신생혈관형성 (CNV), 연령 관련 황반 변성 (AMD), 당뇨병성 및 다른 허혈-관련된 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 폰 힙펠-린도우병, 눈의 히스토플라마증, 중심 망막 정맥 폐색 (CRVO)과 망막 분지 정맥 폐색 (BRVO)를 포함하는 망막 정맥 폐색 (RVO), 각막 신생혈관형성, 망막 신생혈관형성, 및 미숙아 망막증 (ROP).
- 청구항 121 또는 122에 있어서, 상기 약제은 이식가능 디바이스를 통해 상기 대상체에게 투여되는, 용도.
- 청구항 123에 있어서, 상기 이식가능 디바이스가 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 용도: 안구 삽입물, 서방출 데포, 안구 플러그/저장소, 비-생분해성 안구 충전물 또는 생분해성 안구 충전물.
- 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CKP는 지효성 전달용으로 제형화되는, CKP.
- 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항의 CKP 및 PLGA를 포함하는 제형.
- 청구항 126에 있어서, 상기 PLGA는 PLGA 로드인, 제형.
- 인간 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)로서 시스틴 스캐폴드 구조를 포함하는, 상기 CKP:
Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2;
여기서:
Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고;
L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6, X1X2X3X4X5X6X7, X1X2X3X4X5X6X7X8, X1X2X3X4X5X6X7X8X9, 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고;
L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이고;
L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산이고;
L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고; 그리고
L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산이다. - 청구항 128에 있어서, Z1 및/또는 Z2은 G인, CKP.
- 청구항 128 또는 129에 있어서, L1에서:
X1은 R, V, M, A, G, N, S, 및 E으로부터 선택된 아미노산이고;
X2은 T, N, S, G, R, 및 A로부터 선택된 아미노산이고;
X3은 N, R, H, V, K, S, G, I, 및 Y로부터 선택된 아미노산이고;
X4은 R, V, N, I, K, S, 및 T으로부터 선택된 아미노산이고;
X5은 V, R, K, I, T, S, L, 및 N으로부터 선택된 아미노산이고; 그리고
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