KR20170002412A

KR20170002412A - 암 면역요법을 위한 cd33 특이적 키메라 항원 수용체들

Info

Publication number: KR20170002412A
Application number: KR1020167030892A
Authority: KR
Inventors: 로만 갈레토
Original assignee: 셀렉티스
Priority date: 2014-04-03
Filing date: 2015-04-02
Publication date: 2017-01-06
Also published as: KR102170533B1; CA2944528A1; WO2015150526A2; US20190002561A1; DK3126390T3; RU2016143155A3; EP3126390A2; ES2765710T3; US20240182565A1; RU2016143155A; CN106795221A; US20170145094A1; EP3126390B1; US9944702B2; RU2701341C2; CA2944528C; AU2015239069B2; WO2015150526A3; JP6673848B2; IL247917A0

Abstract

본 발명은 선택되는 막 항원들에 대한 면역 세포 특이성 및 반응성을 방향전환시킬 수 있는 재조합 키메라 단백질들인 키메라 항원 수용체들 (CAR)에 대한 것이고, 더욱 특히 여기에서 세포외(extracellular) 리간드 결합은 CD33 양성 세포들에 대항하여 특이적 면역성을 부여하는, CD33 단일클론 항체로부터 유래되는 scFV이다. 이러한 CAR들을 지니는 것으로 여겨지는 조작된 면역 세포들은 특히 림프종들 및 백혈병을 치료하는데 적합하다.

Description

암 면역요법을 위한 CD33 특이적 키메라 항원 수용체들{CD33 SPECIFIC CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS FOR CANCER IMMUNOTHERAPY}

본 발명은 대부분의 골수(myeloid) 세포들 상에서 발견되고, 환자들에서 급성(acute) 골수성(myeloid) 백혈병(Leukemia) (AML)을 진단하는데 사용되는 세포 표면 당단백질인, CD33을 향한 반응성 및 면역 세포 특이성의 방향을 전환(redirect)할 수 있는 재조합 키메라 단백질들인 키메라(Chimeric) 항원(Antigen) 수용체들(Receptors) (CAR)에 대한 것이다. 본 발명에 따른 CAR들(CARs)은 T-세포들 또는 NK 세포들에서 발현될 때, CD33을 지닌(bearing) 악성(malignant) 세포들을 치료하는데 특히 유용하다. 그 결과인 조작된 면역 세포들은 면역요법을 위한 효율 및 안전성을 부여하는, 악성 세포들을 향한 높은 정도의 특이성을 보여준다.

엑스 비보(ex vivo)에서 만들어진 자가조직(autologous) 항원-특이적 T 세포들의 이동(transfer)을 수반하는 입양(Adoptive) 면역요법(immunotherapy)은 바이러스 감염들 및 암을 치료하는 유망한 전략이다. 입양 면역요법에 사용되는 T 세포들은 유전공학을 통한 T 세포들의 방향 전환 또는 항원-특이적 T 세포들의 확장(expansion)에 의하여 만들어질 수 있다(Park, Rosenberg et al. 2011). 바이러스 항원 특이적 T 세포들의 이동은 희귀한 바이러스-관련 악성종양들(malignancies) 및 바이러스 감염들 관련 이식(transplant)의 치료에 사용되는 잘 정립된 절차이다. 유사하게, 종양 특이적 T 세포들의 분리 및 이동은 흑색종(melanoma)을 치료하는데 성공적인 것으로 보여져 왔다.

T 세포들에서 신규한 특이성들은 유전자이식(transgenic) T 세포 수용체들 또는 키메라 항원 수용체들 (CARs)의 유전적 이동을 통하여 성공적으로 만들어져 왔다 (Jena, Dotti et al. 2010). CAR들은 단일 융합(fusion) 분자에서 하나 또는 그보다 많은 신호전달(signaling) 도메인들과 관련된 타겟팅 모이어티(moiety)로 구성되는 합성 수용체들이다. 일반적으로 CAR의 결합 모이어티는 유연성(flexible) 링커(linker)에 의하여 연결된(joined) 단일클론 항체의 가벼운(light) 그리고 가변(variable) 단편들(fragments)을 포함하는 단일-체인(single-chain) 항체(antibody) (scFv)의 항원-결합 도메인로 구성된다. 수용체 또는 리간드(ligand) 도메인들에 기초한 결합 모이어티들 또한 성공적으로 사용되어 왔다. 첫 세대 CAR들을 위한 신호전달(signaling) 도메인들이 Fc 수용체 감마(gamma) 체인들 또는 CD3제타(zeta)의 세포질(cytoplasmic) 영역으로부터 유래된다. 첫 세대 CAR들은 T-세포 세포독성을 성공적으로 방향전환(redirect)하는 것으로 보여져 왔다. 그러나, 그것들은 인 비보(in vivo)에서 지속적인(prolonged) 및 확장 및 항-종양 활성을 제공하는데 실패하였다. 공동(co)-자극(stimulatory) 분자들과, 막관통 및 힌지(hinge) 도메인들로부터의 신호전달(Signaling) 도메인들은 인간들에서 몇몇 성공적인 치료적 임상들을 이끈 이 및 삼 세대들의 CAR들을 형성하기 위하여 첨가되었고, 여기에서 T-세포들이 CD19를 발현시키는 악성 세포들에 대항하여 방향전환될 수 있다 (June et al., 2011). 그러나, CD19 ScFv에 대하여 사용되는 신호전달(signaling) 도메인들, 막관통 및 공동-자극 도메인들의 특정 조합은 꽤 항원-특이적이며, 임의의 항원 마커들로 확장될 수 없다.

급성 골수성 백혈병(AML)은 미국에서 매년 13,300 가까운 새 케이스들 및 8,800 건의 매년 사망들을 갖는 두 번째로 가장 흔한 급성 백혈병이다. 백혈병 질환들의 흔히 적용되는 치료는 방사선요법 및/또는 화학요법을 포함한다. 게다가, 특정 상황들 하, 골수 이식의 추가적인 가능성이 적합한 것으로 간주된다. 그러나 이들 치료들은 환자에게 상대적으로 독성이며 매우 자주 질환으로부터의 완전한 치유로 이끌지 않는다. 이런 식으로, 화학요법을 받는 환자들의 65-80%에 대하여 완전한 차도가 달성될 수 있음에도 불구하고, 이들 환자들의 대부분은 재발하는데 (Cros et al., 2004), 이는 화학요법에서 살아남은 세포들이 AML 백혈병(leukaemia) 줄기(stem) 세포들 (AML-LSCs)을 강화하고(enriched), 특히 재-확장될 수 있고 재발을 야기할 수 있는 세포들의 위험한 저장이 되기 때문이다. 백혈병 줄기 세포들은 특히 급성 골수성 백혈병에서 잘 특징되어 왔다. AML-LSC들은 다른 CD33들 사이를 포함하는 일련의 특징적인 세포-표면 항원들을 발현시킨다. 60 세보다 나이가 많은 환자들은 4년 질환 제거 생존율이 10% 내지 15% 뿐으로 나쁜 예후를 갖는다 (Gardin et al., 2007). AML 환자들의 이 높은 재발 비율 및 나이 많은 환자들의 나쁜 예후는 우선적으로 CD33+ 세포들을 타겟팅하는 신규 치료들에 대한 시급한 필요성을 강조한다.

UniProtKB/Swiss-Prot 단백질 데이터베이스 하 P20138로 불리는, CD33 (시알산(Sialic acid)-결합 Ig-유사 렉틴(lectin) 3) 또는 SIGLEC3는 골수 계통(lineage)의 세포들 상에서 발현되는 막관통 수용체이다. 그것은 골수-특이적으로 보통 생각되나, 몇몇 림프 세포들에서도 발견될 수 있다. 그것은 시알산들에 결합하므로, 렉틴들의 SIGLEC 패밀리의 멤버이다.

과거에는, 다른 접근들이 CD33에 대항한 항종양 활성을 갖는 콘쥬게이트되지 않은(unconjugated) 단일클론 항체들을 발달시키는데 이용되었다. 그러나 이들 시도들은 악성 세포들을 특이적으로 다루는 데는 실패햇다.

2000년, 칼리키아마이신콘쥬게이트된(calicheamicinconjugated) 인간화된 항-CD33 단일클론 항체인 젬투주맙오조가마이신(Gemtuzumabozogamicin) (MylotargTM, GO)이 난치성 또는 재발된 AML을 가진 60 세보다 나이 많은 환자들의 치료를 위하여 미국 식품의약품국 (FDA)에서 승인되었다. 그러나 이것은 2010년 6월 21일 시장에서 퇴출되었다; 세포독성 제제 칼리키아마이신(calicheamicin)에 화학적으로 커플링된, 인간화된 항-CD33 IgG-항체로 구성된 GO. 승인-후 연구(SWOG S0106)가 제품의 안전성에 관한 염려를 제기한 반면, 다른 임상 시험들 (British MRC AML-15 및 HOVON-43 시험들)이 어떠한 임상적 이점도 입증하는데 실패하였다 (Maniecki et al., 2011). 부작용들이 간의 정맥폐색(veno-occlusive) 질환들, 폐(pulmonary) 독성 및 심각한 과민 반응들을 포함하는 것으로 발견된 반면, 인 비트로 연구들은 CD33 음성 세포주들을 향한 항원-의존적 세포독성들을 밝혔다 (Schwemmlein ef al, 2006).

더욱 최근에는, CD123, CD16 및 CD33 항체들로부터 면역글로불린 도메인들을 결합하는(combining) 삼(tri)-특이적 폴리펩타이드 분자들이 전에 CD33을 타겟팅하는 치료법들과 맞닥뜨린 특이성 이슈들을 제거하기 위하여 제안되었다 (WO2011/070109).

예전의 정책들에 대한 대안으로써, 본 발명은 상당한 임상적 이점을 갖고 CD33+ 악성 세포들을 타겟팅하기 위하여 면역 세포들에서 발현될 수 있는 CD33 특이적 CAR들을 제공한다.

도 1: 본 발명에 따른 조작된 면역 세포의 도식적 묘사. 이 도면에 나타난 조작된 면역 세포는 CAR를 코드하는 레트로바이러스 폴리펩타이드로 형질도입된 T-세포이다. 이 T-세포는 본 발명의 프레임 내에서 선택적인, 환자 내로 더 좋고 더 안전한 접목(engraftment)을 가능하게 하도록 더 조작된다. X 유전자는 예를 들어, TCR (TCR알파 또는 TCR베타)의 요소를 발현시키는 유전자일 수 있고, Y는 (Campath에 대하여) CD52 또는 (6-티오구아닌에 대하여) HPRT과 같은 면역-억제 약물들에 대한 T-세포들의 민감도에 수반되는 유전자일 수 있다.
도 2: 다른 CAR 아키텍쳐 (V1 내지 V6)의 도식적 묘사.
도 3: V1, V3 또는 V5 구조체로 다른 CAR의 도식적 묘사.
도 4: CAR+ T-세포들이 CD33 발현시키는 세포들 (U937), 또는 CD33를 발현시키지 않는 세포들(Jeko)과 함께 6 시간 동안 공-배양될 때, 세 아키텍쳐들 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통, v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)과 M195 scFv의 탈과립 활성 (% CD8/CD107a+ 세포들 및 CD8+ 세포들에서 평균 형광 강도 (MFI) CD107a). 데이터들은 평균 형광 강도 (MFI) 및 탈과립의 퍼센트 (%)로 나타낸다.
도 5: CAR+ T-세포들 CD33 발현시키는 세포들 (U937), 또는 CD33을 발현시키지 않는 세포들 (Jeko)과 함께 6 시간 동안 공-배양되었을 때, 세 아키텍쳐들 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통, v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)과 m2H12 및 My9.6 scFvs의 탈과립 활성 (CD8/CD107a+ 세포들 및 CD8+ 세포들에서 MFI CD107a %). 데이터들은 평균 형광 강도 (MFI) 및 탈과립의 퍼센트 (%)로 나타낸다.
도 6: CAR+ T-세포들이 CD33의 높은 또는 중간 수준들로 발현시키는 세포들 (각각 U937 및 K562)과, 또는 CD33을 발현시키지 않는 세포들 (Jeko-1)과 6 시간 동안 공-배양되었을 때, 7 구조들(constructions) : M195-V1, M195-V3, M195-V5, m2H12-V1, m2H12-V3 및 My9.6-V1 및 My9.6-V3 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통, v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)의 탈과립 활성 (% CD8/CD107a+ 세포들). 데이터들은 탈과립의 퍼센트 (%)로 나타낸다.
도 7: CD33을 다른 수준들로 발현시키는 세포들 (U937 및 K562)과, 또는 CD33을 발현시키지 않는 세포들 (Jeko-1)과 24 시간 동안 공-배양시킬 때, 항-CD33 CAR expressing T-세포들에 의하여 방출되는 IFN 감마의 양. 공-배양물들과 동일한 조건들에서, 단독으로 배양된 T-세포들로부터의 IFN 감마 방출 또한 보여진다. 시험들은 세 독립적인 기증자들을 이용하여 이루어졌으며, 하나의 대표적 기증자로부터의 결과들이 여기에 보여진다.
도 8: 항-CD33 CAR 발현시키는-T 세포들의 특이적 세포독성 활성. 분석들은 CAR mRNA 형질주입(transfection) 48 시간 후 이루어졌다. T-세포들은 4 시간 동안 U937+Jeko 또는 K562+Jeko 세포들과 공-배양되었다. 세포주들 중 각각에 대하여 세포 생존능이 공-배양 말기에 결정되었고 특이적 세포 용해 퍼센트가 계산되었다.
<표 1>

표 1: 다른 CAR 요소들의 서열
<표 2>

표 2: 다른 CAR 효소들의 서열
<표 3>

Table 3: CAR of structure V-1
<표 4>

표 4: 구조체 V-2의 CAR
<표 5>

표 5: 구조체 V-3의 CAR
<표 6>

표 6: 구조체 V-4의 CAR
<표 7>

표 7: 구조체 V-5의 CAR
<표 8>

표 8: 구조체 V-6의 CAR

발명의 개요

본 발명은 다른 구조를 갖고 다른 CD33 특이적 항체들로부터 유래된 다른 scFV를 포함하는 CD33 특이적 CAR를 만들어 왔다. 본 발명의 선호되는 CAR 폴리펩타이드들은 서열번호 19 내지 42로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 더욱 선호되는 CAR 폴리펩타이드들은 서열번호 68의 아미노산 서열, 또는 서열번호 68과 적어도 80% 동일성(identity)을 포함한다. 인 비트로에서 (예컨대 항 CD3/CD28 코팅된 비드들 및 재조합 IL2과) 비(non)-특이적 활성화 후, 기증자들(donors)로부터의 T-세포들은 바이러스 형질도입(transduction)을 이용하여 이들 CAR들을 발현시키는 폴리뉴클레오타이드들로 형질전환되었다. 특정 예들에서, T-세포들은 더욱 특히 이식편대숙주(Graft versus host) 반응을 방지하기 위하여 TCR (αβ - T-세포 수용체들)의 요소의 붕괴에 의하여, 그리고 더욱 더 특히 CD33 유전자의 그리고 TCR (αβ - T-세포 수용체들)의 요소의 붕괴에 의하여, 비(non)-동종반응성(alloreactive) T-세포들을 만들도록 더 조작되었다.

그 결과인 조작된 T-세포들은 CD33 양성 세포들에 대항하여 인-비트로에서 여러가지 정도로 반응성을 보였으며, 이는 본 발명의 CAR들이 항원 의존적 활성화 및 또한 T-세포들의 증식에 기여하여, 그것들을 면역요법에 유용하게 만든다는 것을 보여준다.

본 발명의 CAR들을 코드하는 폴리펩타이드들 및 폴리뉴클레오타이드 서열들은 본 명세서에 상세히 기재된다.

본 발명의 조작된 면역 세포들은 특히 B-세포 림프종(lymphoma) 또는 백혈병 치료들과 같은 치료적 적용들에 유용하다.

본 발명의 상세한 설명

여기에서 명확하게 정의되지 않는 한, 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 유전자 치료, 생화학, 유전학 및 분자생물학의 영역에서 당업자에 의하여 보통 이해되는 것과 동일한 의미들을 갖는다.

여기에 기재된 것들과 유사하거나 또는 동등한 모든 방법들 및 물질들은 여기에 기재된 적합한 방법들 및 물질들과 함께, 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 여기에서 언급된 모든 공개문헌들, 특허 출원들, 특허들 및 다른 참고문헌들은 그것들 전체가 참고로서 포함된다. 상충되는 경우, 정의들을 포함하는 본 명세서가 이길 것이다. 나아가, 물질들, 방법들 및 예들은 설명적인 것일 뿐이며, 다르게 특정되지 않는 한, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명의 실시는, 다르게 표시되지 않는 한, 통상의 지식 내인, 세포생물학, 세포 배양, 분자생물학, 유전자이식(transgenic) 생물학(biology), 미생물학, 재조합 DNA, 및 면역학의 현재 기술들을 포함할 것이다. 이러한 기술들은 문헌에서 완전히 설명된다. 예컨대, Current Protocols in Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL, 2000, Wiley and son Inc, Library of Congress, USA); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, (Sambrook et al, 2001, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D. Harries & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the series, Methods In ENZYMOLOGY (J. Abelson and M. Simon, eds.-in-chief, Academic Press, Inc., New York), specifically, Vols.154 and 155 (Wu et al. eds.) and Vol. 185, "Gene Expression Technology" (D. Goeddel, ed.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986); and Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986) 참조.

본 발명은 도 2에 나타난 대로, V1, V3 및 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체(structure) 중 하나와 적어도 80% 동일성(identity)를 갖는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR)를 제공하며, 상기 구조체는:

(a) 단일클론 항-CD33 항체로부터 VH 및 VL을 포함하는 세포외(extra cellular) 리간드 결합-도메인,

(b) FcRIIIα 힌지, CD8α 힌지, 및 IgG1 힌지로부터 선택되는 힌지,

(c) CD8α 막관통 도메인 및

(d) 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타(zeta) 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인

을 포함한다.

선호되는 예에서, 본 발명을 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 구조체 V3는 CD8α 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함한다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하며, 이때 상기 CD8α 힌지는 서열번호 4와 적어도 80 % 동일성(identity)을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하는데, 이는 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30과 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

한 예에서, 본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하는데, 이때 상기 구조체 V1은 FcγRIIIα 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함한다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하는데, 이때 상기 FcγRIIIα 힌지는 서열번호 3와 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하는데, 이는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21 및 서열번호 22와 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

한 예에서, 본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR을 제공하는데, 이때 상기 구조체 V5는 IgG1 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함한다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 IgG1 힌지는 서열번호 5와 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이는 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37 및 서열번호 38과 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 VH는 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15 및 서열번호 17로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열과 적어도 80 % 동일성을 갖고 그리고 상기 VL은 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16 및 서열번호 18로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열과 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인은 서열번호 8과 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인은 서열번호 9와 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은 CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 CD8α 막관통 도메인은 서열번호 6과 적어도 80 % 동일성을 갖는다.

본 발명은 상기와 같은, 신호 펩타이드를 더 포함하는 CD33 특이적 CAR를 제공한다.

본 발명은 상기와 같은, CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이때 상기 신호 펩타이드는 서열번호 1 또는 서열번호 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다.

한 예에서, 본 발명은 상기와 같은, CD33 특이적 CAR를 제공하는데, 이는 서열번호 48 내지 71 서열번호 48에 적어도 80 % 동일성, 바람직하게는 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54, 서열번호 56, 서열번호 58, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70과 적어도 80 % 동일성, 더욱 바람직하게는 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70과 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

본 발명은 CD33에 특이적이지 않은 또다른 세포외(extracellular) 리간드 결합 도메인을 더 포함하는 상기와 같은, CD33 특이적 CAR을 제공한다.

한 측면에서 본 발명은 상기 예들 중 임의의 하나에 따른 CAR를 코드하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

한 측면에서 본 발명은 상기와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.

한 측면에서 본 발명은 상기 중 임의의 하나에 따른 CD33 특이적 CAR을 세포 표면 막에서 발현시키는 조작된 면역 세포를 제공한다.

본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이는 염증성(inflammatory) T-림프구들, 세포독성(cytotoxic) T-림프구들, 조절성(regulatory) T-림프구들 또는 헬퍼(helper) T-림프구들로부터 유래된다.

본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 TCR의 발현은 억제된다.

본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 CD33의 발현은 억제된다.

본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 조작된 면역 세포는 적어도 하나의 면역 억제제 또는 화학요법 약물에 내성으로 변형된다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공한다.

본 발명은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 환자는 인간이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 질병은 CD33-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 전암상태의(pre-malignant) 또는 악성(malignant) 암 질병이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 질병은 CD33-발현시키는 세포들의 과잉에 의하여 특징되는 질병이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 질병은 혈액(hematological) 암 질병이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 혈액(haematological) 암 질병은 백혈병이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 백혈병은 급성 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상(melodysplastic) 증후군, 급성 림프성(lymphoid) 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 및 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병 (AML)이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 혈액 암은 악성(malignant) 림프증식성(lymphoproliferative) 장애이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 악성(malignant) 림프증식성(lymphoproliferative) 장애는 림프종이다.

본 발명은 상기와 같은 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포를 제공하는데, 이때 상기 림프종은 다발성 골수종(multiple myeloma), 비(non)-호지킨(Hodgkin's) 림프종, 버킷(Burkitt's) 림프종, 및 여포성(follicular) 림프종 (작은 세포 및 큰 세포)로 구성되는 군으로부터 선택된다.

한 측면에서, 본 발명은 상기 암 세포에 손상(impairment)을 야기하기에 효과적인 양의 상기 조작된 면역 세포와 상기 혈액(hematologic) 암 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 혈액(hematologic) 암 세포를 손상시키는(impairing) 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은:

(a) 면역 세포를 제공하는 단계,

(b) 전술한 대로 적어도 하나의 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 상기 세포의 표면에서 발현시키는 단계

를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법을 제공한다.

본 발명은:

(a) 면역 세포를 제공하는 단계,

(b) 상기와 같이, 상기 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 내로 도입시키는 단계,

(c) 상기 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 선택적으로 발현시키는, 상기 세포 내로 상기 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 단계

를 포함하는 상기와 같은 면역 세포를 조작하는 방법을 제공한다.

본 발명은:

(d) TRC 발현 및/또는 CD33 발현을 억제하는 단계

를 더 포함하는, 상기와 같은 면역 세포를 조작하는 방법을 제공한다.

한 예에서, 전술한 방법의 단계 (a)를 위하여 제공된 면역 세포는 세포 표면에서 TRC 및/또는 CD33의 발현이 억제되고, 선택적으로 암,특히 AML, 을 치료하는데 사용되는 적어도 하나의 약물에 내성인 면역 세포이다.

본 발명은:

(a) CD33에 특이적이지 않은 적어도 하나의 다른 키메라 항원 수용체를 도입하는 단계

를 더 포함하는, 상기와 같은 면역 세포의 조작 방법을 제공한다.

본 발명은 또한:

(a) 상기의 것들 중 임의의 하나에 따른 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 표면에서 발현시키는 면역 세포를 제공하는 단계;

(b) 상기 환자에 상기 면역 세포들을 투여하는 단계

를 포함하는 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.

한 측면에서 본 발명은 상기 면역 세포가 기증자로부터 제공된 상기와 같은 방법을 제공한다.

본 발명은 (본 발명에 따라 조작될) 상기 면역 세포는 환자 자신으로부터 제공되는, 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.

CD33 특이적 키메라 항원 수용체들

본 발명은 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인, 막관통 도메인 및 신호전달(signaling) 전달(transducing) 도메인을 포함하는 항-CD33 키메라 항원 수용체 (CAR 또는 CD33 CAR 또는 CD33 특이적 CAR 또는 항-CD33 CAR)의 새 설계들에 대한 것이다.

더욱 정화하게, 본 발명은 단일클론 항-CD33 항체로부터 VH 및 VL을 포함하는 세포 외(extra cellular) 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8알파(alpha) 힌지 및 IgG1 힌지로부터 선택되는 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함하는 새 CD33 특이적 CAR에 대한 것이다.

여기에서 사용된 대로 용어 "세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인"은 리간드에 결합할 수 있는 올리고- 또는 폴리펩타이드로 정의된다. 바람직하게는, 도메인은 세포 표면 분자와 상호작용할 수 있을 것이다. 예를 들어, 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인은 특정 질환 상태와 관련된 타겟 세포들 상에서 세포 표면 마커로서 작용하는 리간드들을 인식하기 위하여 선택될 수 있다. 선호되는 예에서, 상기 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인은 유연성(flexible) 링커에 의하여 연결(join)되는 타겟 항원 특이적 단일클론 항 CD-33 항체의 가벼운(light) (VL) 그리고 무거운(heavy) (VH) 가변(variable) 단편을 포함하는 단일 체인 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 상기 VL 및 VH은 바람직하게는 표 2에 표시된 대로 M195, m2H12, DRB2 및 My9-6로 가리켜지는 항체들로부터 선택된다.

더 선호되는 예에서, 상기 VL 및 VH는 선택적으로 인간화되는 서열번호 17 및 18를 포함한다.

그것들은 바람직하게는 예를 들어 서열번호 10 서열을 포함하는 유연성(flexible) 링커에 의하여 서로 연결(link)된다. 다시 말해서, 상기 CAR들은 우선적으로 서열번호: 11 내지 서열번호: 18로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90 %, 95 %,97 % 또는 99 % 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 11 및 서열번호: 12의 폴리펩타이드를 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 13 및 서열번호: 14의 폴리펩타이드를 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 15 및 서열번호: 16의 폴리펩타이드를 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 17 및 서열번호: 18의 폴리펩타이드를 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

여기에서 사용된 대로 용어 "재조합 항체"에 의하여, 예를 들어, 박테리오파지(bacteriophage), 효모 발현 시스템 또는 포유류 세포 발현 시스템에 의하여 발현되는 항체 또는 항체 단편과 같은, 재조합 DNA 기술을 이용하여 만들어지는 항체 또는 항체 단편이 의미된다. 그 용어는 항체 또는 항체 단편을 코드하는 DNA 분자의 합성에 의하여 만들어지는 항체 또는 항체 단편을 의미하는 것으로 이해되고, DNA 분자는 항체 또는 항체 단편 단백질, 또는 항체 또는 항체 단편을 특정화하는(specify) 아미노산 서열을 발현하고, 이때 DNA 또는 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려지고 이용가능한 재조합 또는 합성(synthetic) DNA 또는 아미노산 서열을 이용하여 수득되어 왔다.

여기에서 사용된 대로, 용어 "보존적(conservative) 서열 변형들" 또는 "인간화(humanization)"는 (원래의 항-CD33을 이용하여 건설된 CAR의 그것에 비하여) CAR의 특성에 중요하게 영향을 미치거나 변화시키지 않고 그리고/또는 인간 항마우스(antimouse) 항체 (HAMA) 반응의 감소 또는 폐지 그리고 변형된 아미노산 서열을 포함하는 CAR의 활성에 중요하게 영향을 미치지 않는 아미노산 변형들을 가리키는 것으로 의도된다. 이러한 보존적 변형들은 상기 CAR에서 상기 항체 단편 및/또는 상기 CAR 분자의 임의의 다른 부분들에서 아미노산 치환들, 첨가들 및 결실들을 포함한다. 변형들은 부위-특이적 돌연변이 생성(mutagenesis), PCR-매개 돌연변이 생성, 또는 최적화된 생식계열(germline) 서열들을 이용함으로써와 같은, 당업계에 알려진 표준 기술들에 의하여 본 발명의 CAR 분자의 다른 단편들의 임의의 것, 항체 단편 내로, 또는 항체 내로 도입될 수 있다. 따라서, 본 발명은 (인간화된) CD33 CAR을 제공하고, 이때 VH는 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 또는 서열번호 17과 적어도 80% 동일성(identity)을 갖고, VL은 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18과 적어도 80% 동일성을 갖는다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 11 및 서열번호 12의 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%, 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호 13 및 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%, 또는 99 % 동일성을 갖는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호 15 및 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%, 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명의 상기 CAR는 우선적으로 서열번호 17 및 서열번호 18의 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%, 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 세포외(extracellular) 리간드-결합 도메인을 포함한다.

보존적 아미노산 치환들은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄(side chain)를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것들이다. 유사한 측쇄들을 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리들은 업계에서 정의되어 왔다. 이들 패밀리들은 염기성(basic) 측쇄들 (예컨대, 리신, 아르기닌(arginine), 히스티딘), 산성 측쇄들 (예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는(uncharged) 극성 측쇄들 (예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 무극성(nonpolar) 측쇄들 (예컨대, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-가지달린(branched) 측쇄들 (예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄들 (예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 갖는 아미노산들을 포함한다. 이와 같이, 본 발명의 CAR 내 하나 또는 그보다 많은 아미노산 잔기들이 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기들로 대체될 수 있고, 바뀐 CAR가 여기에 기재된 기능 분석들을 이용하여 CD 33에 결합하는 능력에 대하여 테스트될 수 있다.

본 발명에 따른 CAR의 신호(signal) 전달(transducing) 도메인 또는 세포내(intracellular) 신호전달(signaling) 도메인은 타겟에 대한 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인의 결합 후 세포내(intracellular) 신호전달(signaling)의 원인이 되며, 면역 세포 및 면역 반응의 활성화를 야기한다. 다시 말해서, 신호(signal) 전달(transducing) 도메인은 CAR가 발현되는 면역 세포의 정상적인 효과기(effector) 기능들 중 적어도 하나의 활성화의 원인이 된다. 예를 들어 T 세포의 효과기(effector) 기능은 사이토카인들의 분비를 포함하는 헬퍼(helper) 활성 또는 세포용해(cytolytic) 활성일 수 있다. 이와 같이, 용어 "신호(signal) 전달(transducing) 도메인"은 효과기(effector) 신호 기능을 전달하고 전문화된 기능을 수행하기 위하여 세포로 향해지는 단백질의 부분을 가리킨다.

CAR에서의 사용을 위한 신호(signal) 전달(transducing) 도메인의 선호되는 예들은 항원 수용체 이용(engagement) 후 신호(signal) 전달(transduction)을 시작하기 위하여 일제히(in concert) 작동하는 공동-수용체들 및 T 세포 수용체의 세포질(cytoplasmic) 서열들, 이들 서열들의 임의의 유도체(derivate) 또는 변종(variant)에 더하여 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열일 수 있다. 신호 전달(transduction) 도메인은 세포질(cytoplasmic) 신호전달(signaling) 서열의 두 개의 구별되는 클래스들, 항원-의존적 일차(primary) 활성화를 시작하는 것들, 및 두 번째 또는 공동-자극 신호을 제공하기 위하여 항원-독립적 방식으로 작동하는 것들을 포함한다. 일차(Primary) 세포질(cytoplasmic) 신호전달(signaling) 서열은 ITAM들의 면역수용체(immunoreceptor) 티로신-기반의 활성화 모티프들으로 알려진 신호전달(signaling) 모티프들을 포함할 수 있다. ITAM들은 syk/zap70 클래스 티로신 키나제들을 위한 결합 자리들로서 역할을 하는 여러가지 수용체들의 세포질내(intracytoplasmic) 꼬리(tail)에서 발견되는, 잘 정의된 신호전달(signaling) 모티프들이다. 본 발명에서 사용된 ITAM의 예들은 TCR제타, FcR감마, FcR베타, FcR엡실론, CD3감마, CD3델타, CD3엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d로부터 유래된 것들을 제한되지 않는 예들로서 포함할 수 있다. 선호되는 예에서, CAR의 신호전달(signaling) 전달(transducing) 도메인은 (서열번호: 9)로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % - 99 % 또는 100 % 서열 동일성(identity)로 아미노산 서열을 갖는 CD3제타(zeta) 신호전달(signaling) 도메인을 포함할 수 있다.

특정 예에서 본 발명의 CAR의 신호(signal) 전달(transduction) 도메인은 공동-자극 신호 분자를 포함한다. 공동-자극 분자는 효과적인 면역 반응에 요구되는 항원 수용체 또는 그것들의 리간드들 외 세포 표면 분자이다. "공동-자극 리간드"는 T-세포 상에서 동족(cognate) 공동-자극 분자에 특이적으로 결합하고, 이로써, 예를 들어, 펩타이드와 로드된(loaded) MHC 분자와 TCR/CD3 복합체의 결합에 의하여 제공되는 일차 신호에 추가하여, 신호를 제공하고, 증식 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되지 않는, T 세포 반응을 매개하는, 항원 제시 세포 상 분자를 가리킨다. 공동-자극 리간드는 CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, 유도성(inducible) 공동자극(costimulatory) 리간드 (ICOS-L), 세포간(intercellular) 부착(adhesion) 분자 (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, 림포톡신(lymphotoxin) 베타 수용체, 3/TR6, ILT3, ILT4, 작용제(agonist) 또는 톨(Toll) 리간드 수용체에 결합하는 항체 및 B7-H3와 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 공동-자극 리간드는 또한 그 중에서도, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능(function)-관련(associated) 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, B7-H3, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, T 세포 상에 존재하는 공동-자극 분자와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.

"공동-자극 분자"는 공동-자극 리간드과 특이적으로 결합하는 T-세포 상에서 동족(cognate) 결합 파트너를 가리키며, 이로써 증식과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 세포에 의한 공동-자극 반응을 매개한다. 공동-자극 분자들은 MHC 클래스 I 분자, BTLA 및 톨(Toll) 리간드 수용체를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 공동자극 분자들의 예들은 CD27, CD28, CD8, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능(function)-관련(associated) 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다.

선호되는 예에서, 본 발명의 CAR의 신호(signal) 전달(transduction) 도메인은 4-1BB (GenBank: AAA53133.) 및 CD28 (NP_006130.1)의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 공동-자극 신호 분자의 부분을 포함한다. 특히 본 발명의 CAR의 신호(signal) 전달(transduction) 도메인은 서열번호: 8.로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 699 % 또는 100% 서열 동일성(identity)를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명에 따른 CAR는 세포의 표면 막 상에서 발현된다. 이와 같이, 이러한 CAR는 막관통 도메인을 더 포함한다. 적합한 막관통 도메인들의 구별되는 특징들은 세포, 바람직하게는 본 발명에서 면역 세포, 특히 림프구 세포들 또는 자연(Natural) 살해(killer) (NK) 세포들의 표면에서 발현되고, 사전정의된 타겟 세포에 대항하여 면역 세포의 세포 반응으로 향하게 하기 위하여 서로 상호작용하는 능력을 포함한다. 막관통 도메인은 자연으로부터 또는 합성 소스(source)로부터 유래될 수 있다. 막관통 도메인은 임의의 막-결합(bound) 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 제한되지 않는 예들로서, 막관통 폴리펩타이드는 α, β, γ 와 같은 T-세포 수용체의 서브유닛 또는, CD3 복합체를 이루는 폴리펩타이드, IL2 수용체 p55 (α 체인), p75 (β 체인) 또는 γ 체인, Fc 수용체들의 서브유닛 체인, 특히 Fcγ 수용체 III 또는 CD 단백질들일 수 있다. 대체하여 막관통 도메인은 합성일 수 있고, 류신 및 발린과 같은 대부분 소수성 잔기들을 포함할 수 있다. 선호되는 예에서, 상기 막관통 도메인은 인간 CD8 알파 체인으로부터 유래된다 (예를 들어 NP_001139345.1). 막관통 도메인은 상기 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인 및 상기 막관통 도메인 사이의 힌지 영역을 더 포함할 수 있다. 여기에서 사용되는 용어 "힌지(hinge) 영역"은 일반적으로 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인에 막관통 도메인을 연결(link)하는 것으로 기능하는 임의의 올리고- 또는 폴리펩타이드를 의미한다. 특히, 힌지 영역는 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인에 대한 더 나은 유연성(flexibility) 및 접근가능성을 제공하는데 사용된다. 힌지 영역은 300 아미노산들, 바람직하게는 10 내지 100 아미노산들 및 가장 바람직하게는 25 내지 50 아미노산들까지 포함할 수 있다. 힌지 영역은 CD8, CD4 또는 CD28의 세포 외(extracellular) 영역의 전체 또는 부분으로부터, 또는 항체 불변(constant)부(region)의 전체 또는 부분으로부터와 같은, 자연적으로 발생하는 분자들의 전체 또는 일부로부터 유래될 수 있다. 대체하여, 힌지 영역은 자연적으로 발생하는 힌지 영역에 부합(correspond)하는 합성 서열일 수 있고, 또는 완전히 합성 힌지 서열일 수 있다. 선호되는 예에서 상기 힌지 도메인는 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 5로 이 명세서들에서 각각 가리켜지는 인간 CD8 알파 체인, FcγRIIIα 수용체 또는 IgG1의 부분, 또는 이들 폴리펩타이드들과 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 99 % 또는 100% 서열 동일성(identity)을 보이는 힌지 폴리펩타이드를 포함한다.

본 발명에 따른 CAR는 일반적으로 더욱 특히 서열번호 6 또는 7의 폴리펩타이드들와 동일성(identity)을 보이는, CD8α 및 4-1BB로부터 선택되는 막관통 도메인 (TM)을 더 포함한다,

본 발명에 따른 CAR는 서열번호 6의 폴리펩타이드와 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 보이는 CD8α로부터의 막관통 도메인 (TM)을 포함한다. 선호되는 예에서, 본 발명에 따른 CAR는 서열번호 6의 폴리펩타이드와 100% 동일성을 보이는 CD8α로부터의 막관통 도메인 (TM)을 보통 더 포함한다.

타겟 항원들의 하향조절 또는 돌연변이는 보통 항원-소실(loss) 탈출(escape) 변종들(variants)을 창조해내는 암 세포들에서 관찰된다. 이와 같이, 종양 탈출(escape)을 상쇄(offset)하고 면역 세포를 타겟에 더욱 특이적으로 만들기 위하여, 본 발명에 따른 CD33 특이적 CAR는 또다른 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인들을 포함할 수 있어, 타겟 내 다른 구성요소들에 동시에 결합하여 면역 세포 활성화 및 기능을 늘린다. 한 예에서, 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인들은 동일한 막관통 폴리펩타이드과 나란히(in tandem) 위치될 수 있고, 선택적으로 링커에 의하여 분리될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 다른 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인들은 CAR를 이루는(composing) 다른 막관통 폴리펩타이드들 상에 위치될 수 있다. 또다른 예에서, 본 발명은 각각 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는 CAR들의 군집(population)에 대한 것이다. 특히 본 발명은 면역 세포를 제공하는 단계 및 각각 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는 CAR의 군집을 상기 세포의 표면에서 발현시키는 단계를 포함하는 면역 세포들의 조작 방법에 대한 것이다. 또다른 특정 예에서, 본 발명은 면역 세포를 제공하는 단계 및 각각 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는 CAR의 군집을 이루는(composing) 폴리펩타이드들을 코드하는 상기 세포 폴리뉴클레오타이드들 내로 도입하는 단계를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법에 대한 것이다. CAR들의 군집에 의하여, 각각 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는, 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯 또는 그보다 많은 CAR들이 의미된다. 본 발명에 따른 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들은 바람직하게는 타겟에서 다른 구성요소들에 일제히 결합하여 이로써 면역 세포 활성화 및 기능을 늘린다. 본 발명은 또한 각각 다른 세포 외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는 CAR들의 군집을 포함하는 분리된 면역 세포에 대한 것이다.

본 발명은 도 2에 나타난 대로 V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 CD33 특이적 CAR를 제공하며, 상기 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8α 힌지, 및 IgG1 힌지로부터 선택되는 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인를 포함한다.

본 발명은 도 2에 나타난 대로 V1, V3 및 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 CD33 특이적 CAR을 제공하고, 상기 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지 및 CD8 알파 (α) 힌지로부터 선택되는 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

본 발명은 서열번호: 48, 서열번호: 49, 서열번호: 50, 서열번호: 51, 서열번호: 52, 서열번호: 53, 서열번호: 54, 서열번호: 55, 서열번호: 56, 서열번호: 57, 서열번호: 58, 서열번호: 59; 서열번호: 60, 서열번호: 61, 서열번호: 62, 서열번호: 63, 서열번호: 64, 서열번호: 65? 서열번호: 66, 서열번호: 67, 서열번호: 68, 서열번호: 69, 서열번호:70, 서열번호: 71로 구성되는 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 CD33 CAR를 제공하고, 바람직하게는 상기 CAR는 서열번호: 48, 서열번호: 49, 서열번호: 50, 서열번호: 51, 서열번호: 52, 서열번호: 53, 서열번호: 54, 서열번호: 55, 서열번호: 56, 서열번호: 57, 서열번호: 58, 서열번호: 59; 서열번호: 66, 서열번호: 67, 서열번호: 68, 서열번호: 69, 서열번호:70, 서열번호: 71로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열을 포함하고 그리고 더욱 바람직하게는, 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 66, 서열번호: 67, 서열번호: 68, 서열번호: 69, 서열번호:70, 서열번호: 71로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열을 포함하고, 그리고 더더욱 바람직하게는, 상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68의 폴리펩타이드를 포함한다.

본 발명은 또한:

- 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 60, 서열번호: 62, 서열번호: 64, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR),

더욱 바람직하게는, 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70로 구성되는 아미노산 서열들과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%,or 99 % 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 CAR,

더욱 더 바람직하게는, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 아미노산 서열들과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%,or 99 % 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 CAR들

을 제공한다.

바람직하게는 본 발명은 도 2에 나타낸 대로, 구조체 V1를 갖는 CD33 특이적 CAR를 제공하고, 상기 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 도 2에 나타낸 대로, 폴리펩타이드 구조체 V1 중 하나를 갖는 CD33 특이적 CAR를 제공하고, 상기 구조체는 선택적으로 인간화된, M195, m2h12, 및 My9.6로부터 선택되는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

더욱 바람직하게는, 본 발명은 서열번호: 48, 서열번호: 54, 서열번호: 60, 및 서열번호: 66로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 도 2에 나타난 대로 폴리펩타이드 구조체 V1 중 하나를 갖는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR)를 제공하고, 더욱 바람직하게는 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 48, 서열번호: 54, 및 서열번호: 66로 구성되는 아미노산 서열들을 포함하는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

바람직하게는, 본 발명은 도 2에 나타낸 대로 구조체 V3를 갖는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR)을 제공하고, 상기 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

바람직하게는, 본 발명은 도 2에 나타낸 대로 구조체 V3을 갖는 CD33 특이적 CAR을 제공하고, 상기 구조체는 선택적으로 인간화된, M195, m2h12, DRB2, 및 My9.6로부터 선택되는 단일클론 항-CD33 항체로부터 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인을 포함하고, FcRIIIα 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

더욱 바람직하게는 본 발명은 서열번호: 50, 서열번호: 56, 서열번호: 62, 및 서열번호: 68로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 도 2에 나타낸 대로 구조체 V3을 갖는 CD33 특이적 CAR을 제공하고, 더욱 바람직하게는 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 50, 서열번호: 56, 및 서열번호: 68로 구성되는 아미노산 서열들을 포함하는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 도 2에 나타낸 대로 구조체 V5를 갖는 CD33 특이적 CAR를 제공하고, 상기 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, IgG1 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 도 2에 나타낸 대로 구조체 V5를 갖는 CD33 특이적 CAR를 제공하고, 상기 구조체는 선택적으로 인간화된, M195, m2h12, DRB2, 및 My9.6로부터 선택되는 단일클론 항-CD33 항체로부터 VH 및 VL를 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 서열번호: 52, 서열번호: 58, 서열번호: 64, 및 서열번호: 70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 도 2에 나타낸 대로 구조체 V5를 갖는 CD33 특이적 CAR을 제공하고, 더욱 바람직하게는 상기 CAR는 우선적으로 서열번호: 52, 서열번호: 58, 및 서열번호: 70으로 구성되는 아미노산 서열들을 포함하는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 서열번호 1 또는 2의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 선택적 신호 펩타이드; 바람직하게는 선택적 신호 펩타이드는 서열번호 1의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는다. 바람직하게는 신호 펩타이드가 존재한다.

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리된 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에 대한 결합의 원인이다;

- 서열번호 3의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 Fcgamma ( ) RIII알파(alpha) ( )로부터 유래된 힌지;

- 서열번호 6의 폴리펩타이드와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD8알파( )로부터 유래된 막관통 도메인;

- 서열번호: 8로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 %, 99 % 또는 100% 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 4-1BB로부터 유래된 공동-자극 신호 분자;

- 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포내(intracellular) 신호전달(signaling) 도메인;

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 링커에 의하여 VL 도메인와 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL는 CD33에의 결합의 원인이 된다;

- 서열번호 3의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 Fc감마(gamma) ( ) RIII알파 ( )로부터 유래하는 힌지;

- 서열번호 7의 폴리펩타이드와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성인 아미노산 서열을 갖는 4-1BB로부터 유래되는 막관통 도메인 (TM);

-서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달 도메인을 포함하는 세포내(intracellular) 신호전달 도메인

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 서열번호 4의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 인간 CD8 알파 체인로부터 유래된 힌지;

- 서열번호 6의 폴리펩타이드와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD8알파( )로부터 유래되는 막관통 도메인;

- 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인;

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 서열번호 1 또는 2의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 선택적 신호 펩타이드; 바람직하게는 선택적 신호 펩타이드는 서열번호 1의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열를 갖는다. 바람직하게는 신호 펩타이드가 존재한다.

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL는 CD33에 결합하는 것의 원인이 된다;

- 서열번호: 8로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 %, 99 % 또는 100% 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 4-1BB로부터 유래되는 공동-자극 신호 분자;

- 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포내 신호전달(signaling) 도메인

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 링커에 의하여 VL 도메인와 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에의 결합의 원인이 된다;

- 서열번호 5의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 IgG1로부터 유래되는 힌지;

- 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포내 신호전달(signaling) 도메인;

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은:

- 서열번호 1 또는 2의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 선택적 신호 펩타이드; 바람직하게는 선택적 신호 펩타이드는 서열번호 1의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는다. 바람직하게는, 신호 펩타이드가 존재한다.

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에의 결합의 원인이 된다;

- 서열번호: 8로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 %, 99 % 또는 100% 서열 동일성인 아미노산 서열을 r자는 4-1BB로부터 유래되는 공동-자극 신호 분자;

- 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 95% 97%, 99 % 또는 100 % 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달 도메인을 포함하는 세포내(intracellular) 신호전달 도메인

을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 제공한다.

한 예에서, 본 발명은 하기 서열들 - 또는 하기 서열들의 80% 를 갖는 하기 CD33 특이적 CAR의 적어도 하나를 제공한다:

M195-1

서열번호 48:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK GLAVSTISSFFPPGYQ IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

M195-2

서열번호 49:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK GLAVSTISSFFPPGY QIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

M195-3

서열번호 50:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

M195-4

서열번호 51:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKR GRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

M195-5

서열번호 52:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

M195-6

서열번호 53:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGTGYNQKFKSKATLTVDNSSSTAYMDVRSLTSEDSAVYYCARGRPAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSV VKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-1

서열번호 54:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR GLAVSTISSFFPPGYQ IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-2

서열번호 55:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR GLAVSTISSFFPPGYQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-3

서열번호 56:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-4

서열번호 57:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-5

서열번호 58:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

m2H12-6

서열번호 59:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGPELVRPGTFVKISCKASGYTFTNYDINWVNQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNEKFKAKATLTADKSSSTAYLQLNNLTSENSAVYFCASGYEDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIKMTQSPSSMYASLGERVIINCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKR EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-1

서열번호 60:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS GLAVSTISSFFPPGYQ IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-2

서열번호 61:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS GLAVSTISSFFPPGYQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-3

서열번호 62:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-4

서열번호 63:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-5

서열번호 64:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

DRB2-6

서열번호 65:

MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYKFTDYVVHWLKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCARDYRYEVYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPTIMSASPGERVTMTCTASSSVNYIHWYQQKSGDSPLRWIFDTSKVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISTMEAEDAATYYCQQWRSYPLTFGDGTRLELKRADAAPTVS EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-1

서열번호 66:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR GLAVSTISSFFPPGYQ IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-2

서열번호 67:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR GLAVSTISSFFPPGYQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-3

서열번호 68:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-4

서열번호 69:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-5

서열번호 70:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

My9.6-6

서열번호 71:

MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQSEDLAIYYCHQYLSSRTFGGGTKLEIKR EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR.

한 예에서, 본 발명은 이들 CD33 특이적 CAR 중 적어도 하나를 지닌다고 믿어지는 일차(primary) T 세포들을 제공한다.

선호되는 예에서, 본 발명은 서열번호 48 내지 71로부터 선택되는 서열의 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 서열번호 68의 적어도 80%인 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR)를 제공한다.

그리고 더 더욱 바람직하게는, 상기 CAR들은 우선적으로 서열번호:68을 포함하는 아미노산 서열들과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98%, 또는 99 % 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

이 예에서, 상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 81% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 82% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 83% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 84% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 85% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 86% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 87% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR들은 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 88% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 89% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 90% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 91% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 92% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 93% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 94% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 95% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 96% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 97% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 98% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

상기 CAR는 우선적으로 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 99% 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함한다,

한 에에서, 상기 CAR는 서열번호:68로 구성되는 아미노산 서열들과 100% 동일성을 갖는다.

본 발명은 서열번호 48 부터 서열번호 71 까지의 서열들 중 임의의 하나와 (80% 부터 99% 까지) 여기에 기재된 대로 동일성의 퍼센트를 갖는 CAR를 포함한다.

본 발명은

(a) 선택적으로 인간화된, 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인

(b) CD8 힌지,

(c) CD8α 막관통 도메인 및

(d) 4-1BB로부터 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인

을 포함하는 CD33 특이적 CAR를 제공한다.

본 발명은

(b) FcγRIIIα 힌지,

(c) CD8α 막관통 도메인 및

을 포함하는 CD33 특이적 CAR를 제공한다.

폴리뉴클레오타이드들 , 벡터들:

본 발명은 또한 본 발명에 따른 상기 기재된 CAR들 중 임의의 하나를 코드하는 벡터들, 폴리뉴클레오타이드들에 대한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 항-CD33 CAR를 코드하는 상기 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 하나를 포함하는, 벡터에 대한, 바람직하게는 렌티바이러스(lentiviral) 벡터에 대한, 본 발명에 따른 항-CD33 CAR를 코드하는 폴리뉴클레오타이드에 대한 것이다.

폴리뉴클레오타이드는 발현 카세트(cassette) 또는 발현 벡터로 구성될 수 있다. (예컨대 박테리아 숙주 세포 내로 도입을 위한 플라스미드, 또는 곤충 숙주 세포의 형질주입(transfection)을 위한 배큘로바이러스(baculovirus) 벡터와 같은 바이러스 벡터, 또는 플라스미드 또는 포유류 숙주 세포의 형질주입(transfection)을 위한 렌티바이러스와 같은 바이러스 벡터).

특정 예에서, 다른 핵산 서열들이 2A 펩타이드를 코드하는 서열과 같은 리보솜 스킵(skip) 서열을 코드하는 핵산 서열을 포함하는 하나의 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드에 포함될 수 있다. 피코르나바이러스들의 아프타바이러스(Aphthovirus) 하위집단(subgroup)에서 확인된 2A 펩타이드들은 코돈들에 의하여 코드되는 두 아미노산들 사이의 펩타이드 결합의 형성 없이 하나의 코돈에서 옆으로 리보솜 "스킵(skip)"을 야기한다 ((Donnelly and Elliott 2001; Atkins, Wills et al. 2007; Doronina, Wu et al. 2008) 참조). "코돈(codon)"에 의하여 리보솜에 의하여 하나의 아미노산 잔기로 번역되는 mRNA (또는 DNA 분자의 센스 가닥) 상의 세 개 뉴클레오타이드들이 의미된다. 이런 식으로 두 개의 폴리펩타이드들이 폴리펩타이드들이 인(in) 프레임(frame)인 2A 올리고펩타이드 서열에 의하여 분리될 때 mRNA 내 단일의, 근접한 오픈 리딩 프레임으로부터 합성될 수 있다. 이러한 리보솜 스킵 메커니즘들은 당업계에 잘 알려져 있고 단일 메신저 RNA에 의하여 코드되는 몇몇 단백질들의 발현을 위한 몇몇 벡터들에 의하여 사용되는 것으로 알려져 있다.

숙주 세포의 분비 경로 내로 막관통 폴리펩타이드를 향하기 위하여, (리더(leader) 서열, 프리프로(prepro) 서열 또는 프리(pre) 서열로도 알려져 있는) 분비 신호 서열이 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 벡터 서열에서 제공된다. 분비 신호 서열은 막관통 핵산 서열로 사용가능하게 연결(link)된다, 즉, 두 서열들이 바른 리딩 프레임에 연결(join)되고 숙주 세포의 분비 경로 내로 새로 합성된 폴리펩타이드를 향하기 위하여 위치된다. 특정 분비 신호 서열들이 관심있는 핵산 서열에서 다른 곳에 위치될 수 있는데도 불구하고, 분비 신호 서열들은 관심이 있는 폴리펩타이드를 코드하는 핵산 서열에 대해 5'에 보통 위치된다. (예컨대, Welch et al., U.S. 특허 번호. 5,037,743; Holland et al., U.S. 특허 번호. 5,143,830 참조). 선호되는 예에서, 신호 펩타이드는 아미노산 서열 서열번호: 1 및 2를 포함한다.

당업자는 유전 코드의 축퇴를 고려하여, 상당한 서열 변형들이 이들 폴리뉴클레오타이드 분자들 가운데 가능하다는 것을 인식할 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 핵산 서열들은 포유류 세포들에서 발현을 위하여, 바람직하게는 인간 세포들에서 발현을 위하여, 코돈-최적화된다. 코돈-최적화는 정해진 종의 높게(highly) 발현된 유전자들에서 보통 희귀한 코돈들의 흥미있는 서열을 이러한 종의 높게 발현된 유전자들에서 일반적으로 빈번한 코돈들로의 교환를 가리키며, 이러한 코돈들은 교환되는 코돈들과 같은 아미노산들을 코드한다.

CAR들을 지닌 것으로 여겨지는 면역 세포들의 조작 방법들:

본 발명은 전술한 대로 CD33 CAR 중 하나를 코드하는 벡터들 또는 폴리뉴클레오타이드들을 상기 면역 세포들 내로 엑스-비보에서 도입하는 단계를 포함하는 면역요법을 위한 면역 세포들의 제조 방법을 포함한다.

선호되는 예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드들은 면역 세포들에서 안정적으로 발현되는 것을 고려하여, 렌티바이러스 벡터들에 포함된다.

추가의 예들에 따라, 상기 방법은 상기 세포를 유전적으로 변형시켜 동종이계(allogeneic) 이식(transplantation)에 더욱 적합하게 만드는 단계를 더 포함한다.

첫 번째 측면에 따라, 예를 들어, HLA 또는 β2m 단백질 발현을 조절하거나 또는 코드하는 유전자의 불활성화와 조합될 수 있는, WO 2013/176915에 기재된 대로 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 또는 그보다 많은 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시킴으로써, 면역 세포는 덜 동종이계(allogeneic)로 만들어질 수 있다.

따라서, 이식편대 숙주 증후군 및 이식편 거부의 위험이 상당히 감소된다.

또다른 측면에 따라 CD33의 하나 또는 그보다 많은 요소의 발현을 가능하게 하는 적어도 하나의 유전자가 본 발명의 CD33 특이적 CAR 면역 세포들에서 불활성화된다. 항-CD33 CAR를 발현시키는 세포들에서 CD33 표면 발현을 억제시키는 것은 본 발명의 면역 세포들을 발현시키는 항-CD33 CAR를 제조하는(preparing) 방법의 부분이다.

일반적인 방법이 WO 2013/176915에 기재되어 있다. CD33 유전자의 불활성화는 Ig-유사 렉틴들에 결합하는 시알산과 같은 CD33 발현을 조절 또는 코드하는 유전자의 활성화/또는 불활성화와 조합될 수 있어 (Cao H, Crocker PR. Evolution of CD33-related siglecs: regulating host immune functions and escaping pathogen exploitation? Immunology. 2011 Jan;132(1):18-26) CD33의 세포 표면 발현 항-CD33 CAR를 발현시키는 면역 세포들이 억제되고 따라서 항-CD33 CAR 발현시키는 이웃 세포들의 활성을 억제시키거나 또는 생존을 변화시키지 않는다.

또다른 측면에 따라, 면역 세포들은 CD33 양성 악성 세포들을 치료하기 위한 표준 치료로서 사용되는 화학요법 치료들 또는 면역억제 약물들에 대한 그것들의 내성을 개선하기 위하여 유전적으로 더 조작될 수 있다. 예를 들어, 캄파스(Campath) (알렘투주맙(alemtuzumab)) 및 글루코코르티코이드들 치료들의 약물 타겟들인, CD52 및 글루코코르티코이드(glucocorticoid) 수용체들은 세포들을 이들 치료들에 내성으로 만들기 위하여 불활성화될 수 있고 특이적 CD33 CAR들을 지닌 것으로 여겨지지 않는 환자 자신의 T-세포들 이상의 경쟁력있는 이점을 그들에게 줄 수 있다. CD3 유전자의 발현은 또한 억제 또는 감소되어 또다른 면역 억제 약물인 테플리주맙(Teplizumab)에 내성을 부여할 수 있다. HPRT의 발현은 또한 본 발명에 따라 억제 또는 감소되어 특히 급성 림프모구(lymphoblasic) 백혈병의 치료를 위하여 화학요법에서 보통 사용되는 세포증식억제제인, 6-티오구아닌(thioguanine)에 내성을 부여할 수 있다. "GLI1" 유전자의 발현이 감소될 수 있다.

본 발명의 추가의 측면에 따라, 면역 세포들은 PDCD1 또는 CTLA-4와 같은 T-세포들 활성화의 조절인자들로서 작용하는 "면역 체크포인트들"로서 작용하는 단백질들을 코드하는 유전자들을 불활성화시킴으로써, 추가로 처리(manipulated)되어 그것들을 더 활성 또는 고갈(exhaustion)을 제한시킬 수 있다. 발현이 감소 또는 억제되는 유전자들의 예는 표 9에 표시된다.

<표 9>

표 9: 면역 체크포인트 단백질들을 코드하는 유전자들의 목록

선호되는 예에서, 면역 세포들을 더 조작하는 상기 방법은 상기 T 세포들 내로, 전술한 것들과 같이, DNA 절단(cleavage)에 의하여, 유전자들을 선택적으로 불활성화시키기 위하여 특이적 희귀(rare)-절단(cutting) 엔도뉴클레아제(endonuclease)를 코드하는, 폴리뉴클레오타이드들, 특히 mRNA들을 도입하는 단계를 더 포함한다. 더 선호되는 예에서, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제들은 TALE-뉴클레아제들 또는 Cas9 엔도뉴클레아제이다. TAL-뉴클레아제들은 다른 타입들의 희귀-절단 엔도뉴클레아제들보다 더 높은 특이성 및 절단(cleavage)이 지금까지 입증되어 왔으며, 이는 그것들을 일정한 턴오버(turn-over)로 대규모로 조작된 면역 세포들의 생산을 위하여 선택되는 엔도뉴클레아제들로 만든다.

전달 방법들

전술한 다른 방법들은 세포 내로 CAR를 도입하는 단계를 수반한다. 제한되지 않는 예로서, 상기 CAR는 하나의 플라스미드 벡터에 의하여 코드되는 이식유전자들(transgenes)로서 도입될 수 있다. 상기 플라스미드 벡터는 또한 상기 벡터를 받는 세포들의 확인 및/또는 선택을 위하여 제공되는 선택 마커를 포함할 수 있다.

폴리펩타이드들은 세포 내로 상기 폴리펩타이드들를 코드하는 폴리뉴클레오타이드들의 도입의 결과로서 세포에서 인 시츄(in situ)로 합성될 수 있다. 추가적으로, 상기 폴리펩타이드들은 세포 밖에서 생산되어 그 다음에 거기로 도입될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 구조체(construct)를 세포들 내로 도입하는 방법들은 당업계에 알려져 있으며, 제한되지 않는 예들로서 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포의 게놈 내로 통합되는 안정적인 형질전환(transformation) 방법들, 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포의 게놈 내로 통합되지 않는 일시적 형질전환 방법들 및 바이러스 매개 방법들을 포함한다. 상기 폴리뉴클레오타이드들은 를 들어, 재조합 바이러스 벡터들 (예컨대 레트로바이러스들, 아데노바이러스들), 리포솜 등에 의하여 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 일시적 형질전환 방법들은 미세주입(microinjection), 전기천공법(electroporation) 또는 입자 총(particle bombardment), 세포 융합을 포함한다. 상기 폴리뉴클레오타이드들은 세포들에서 발현되는 것을 고려해서, 벡터들, 더욱 특히 플라스미드들 또는 바이러스에 포함될 수 있다.

조작된 면역 세포들

본 발명은 또한 세포들을 조작하기 위한, 상기 방법에 의하여 수득되는 민감함(susceptible) 분리된 세포들 또는 세포주들에 대한 것이다. 특히 상기 분리된 세포는 전술한 대로 적어도 하나의 CAR를 포함한다. 또다른 예에서, 상기 분리된 세포는 그 각각이 세포외(extracellular) 리간드 결합 도메인들을 포함하는 CAR들의 군집을 포함한다. 특히 상기 분리된 세포는 CAR를 코드하는 외인성(exogenous) 폴리뉴클레오타이드 서열를 포함한다. 일반적으로 본 발명의 변형된 면역 세포들은 항원 결합 메커니즘들에 독립적으로 활성화 및 증식된다.

본 발명의 범위에 또한 전술한 방법들 중 어느 하나에 따라 수득되는 분리된 면역 세포, 바람직하게는 T-세포가 포함된다. 상기 면역 세포는 선천적(innate) 및/또는 적응(adaptative) 면역 반응의 개시 및/또는 실행에 기능적으로 관여되는 조혈(hematopoietic) 기원의 세포를 가리킨다. 본 발명에 따른 상기 면역 세포는 줄기 세포로부터 유래될 수 있다. 줄기 세포들은 성체 줄기 세포들, 인간이 아닌 배아 줄기 세포들, 더욱 특히 인간이 아닌 줄기 세포들, 제대혈 줄기 세포들, 간(progenitor) 세포들, 골수 줄기 세포들, 유도된(induced) 다능(pluripotent) 줄기 세포들, 전능성(totipotent) 줄기 세포들 또는 조혈(hematopoietic) 줄기 세포들일 수 있다. 대표적 인간 세포들은 CD34+ 세포들이다. 상기 분리된 세포는 또한 수지상 세포, 살해(killer) 수지상 세포, 비만 세포, NK-세포, B-세포 또는 염증성 T-림프구들, 세포독성(cytotoxic) T-림프구들, 조절성(regulatory) T-림프구들 또는 헬퍼 T-림프구들로 구성되는 군으로부터 선택되는 T-세포일 수 있다. 또다른 예에서, 상기 세포는 CD4+ T-림프구들 및 CD8+ T-림프구들로 구성되는 군으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 세포들의 확장 및 유전적 변형 전, 세포들의 소스가 여러가지 제한되지 않는 방법들을 통하여 대상으로부터 수득될 수 있다. 세포들은 말초 혈액 단핵 세포들, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염의 자리로부터의 조직, 복수(ascites), 흉막 삼출액, 비장 조직, 및 종양들을 포함하는 제한되지 않는 다수의 소스들로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 예들에서, 당업자에게 알려지고 이용가능한 임의의 수의 T 세포주들이 사용될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 세포는 건강한 기증자로부터, 암으로 진단되는 환자로부터, 또는 감염으로 진단된 환자로부터 유래될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 세포는 다른 표현형 특성들을 보이는 세포들의 혼합된 군집의 부분이다. 본 발명의 범위에 또한 전술한 방법에 따른 형질전환된(transformed) T- 세포로부터 수득되는 세포주가 포함된다. 앞의 방법에 의하여 수득되는 민감하고 면역억제 치료에 내성인 변형된 세포들은 본 발명의 범위 내에 포함된다.

선호되는 예로서, 본 발명은 환자들 내로 그것들의 동종이계(allogeneic) 이식(transplantation)을 위한, CD33 양성 세포들을 향하여 반응성이고, 기능적 TCR을 발현시키지 않는, 전술한 바와 같이 CD33 CAR을 지닌 것으로 여겨지는 T-세포들의 군집 또는 T-세포들을 제공한다.

더욱 선호되는 예로서, 본 발명은 환자들에게 그것들의 동종이계(allogeneic) 이식(transplantation)을 위한, 기능적 TCR 또는 CD33를 발현시키지 않고, CD33 양성 세포들에 반응적인, 전술한 대로의 CD33 CAR을 지닌다고 여겨지는 T-세포들 또는 T-세포들의 군집을 포함하는, 본 발명에 따른 조작된 면역 세포들을 제공한다.

더더욱 선호되는 예에서, 본 발명은 CD33 CAR를 지닌다고 여겨지는 T-세포들 또는 T-세포들의 군집을 포함하는, 본 발명에 따른 조작된 면역 세포들을 제공하고, 상기 CD33 CAR는 V1, V3 및 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 구조체는 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcRIIIα 힌지, CD8α 힌지, 및 IgG1 힌지로부터 선택되는 힌지, CD8α 막관통 도메인 및 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함한다.

한 예에서, 본 발명에 따른 조작된 면역 세포들은 선택적으로 인간화되고, M195, m2h12, DRB2, 및 My9.6으로부터, 또는 M195, m2h12, 및 My9.6으로부터 선택되는 단일클론 항-CD33 항체를 포함하는 특이적 CD33 CAR을 포함한다.

더욱 선호되는 예에서, 상기 CD33 CAR은 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 60, 서열번호: 62, 서열번호: 64, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드를 포함하거나, 또는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드를 포함한다.

더욱 더 선호되는 예에서, CD33 CAR을 지니는 것으로 여겨지는 T-세포들은, 기능적 TCR 및 CD33을 발현시키지 않고, 그리고 상기 CD33 CAR는 서열번호: 68의 폴리펩타이드를 포함하고, 선택적으로 인간화된다.

더욱 더 선호되는 예에서, CD33 CAR를 지닌 것으로 여겨지는 T-세포들 또는 T-세포들의 군집, 특히 기능적 TCR 또는 CD33 중 어느 것도 발현시키지 않는 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포들은 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성(identity)을 갖는, 또는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 또는 서열번호: 68과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

이 더욱 더 선호되는 예에서, CD33 CAR를 지닌다고 여겨지는 T-세포들은 기능적 TCR 및 CD33를 발현시키지 않고 그리고 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열, 또는 서열번호: 50, 서열번호: 56, 서열번호: 68로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열 또는 서열번호: 68과 적어도 80 %, 81%, 82%, 83%, 84 %, 85%, 86 %, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.

바람직하게는, 상기 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 TCR알파 KO 및 CD33 KO T 세포이고, AML의 치료에 사용되는 적어도 하나의 약물에 내성이다.

본 발명에 따른 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 항-CD33 CAR를 지닌다고 여겨지는 분리된 면역 T 세포들, 바람직하게는 항-CD33 CAR 세포들를 지닌다고 여겨지는 TCR알파 KO 및/또는 CD33 KO 면역 T 세포들 및 더욱 바람직하게는 AML의 치료를 위하여 사용되는 적어도 하나의 약물에 내성인 항-CD33 CAR 세포들을 지닌다고 여겨지는 TCR알파 KO 및/또는 CD33 KO 면역 T 세포들을 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 T 세포들에서 발현되는 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 서열번호 48 내지 서열번호 71로부터 선택되는 서열들 중 하나를 갖는 항-CD33 CAR, 더욱 바람직하게는 서열번호 48 내지 서열번호 71과 적어도 80% 동일성을 갖는, 그리고 더욱 바람직하게는 서열번호 68과 적어도 80% 동일성을 갖는 항-CD33 CAR를 포함한다. 본 발명에 따른 조작된 면역 세포 (또는 항-CD33 CAR -발현시키는 T 세포들)은, 상기 기재된, 본 발명에 따른 조작된 면역 세포 중 어느 하나를 의미한다.

T 세포들의 활성화 및 확장

T 세포들의 유전적 변형 전 또는 후에, 본 발명의 유전적으로 변형된 면역 세포들은 활성화되고 항원 결합 메커니즘들에 독립적으로 증식하는데도 불구하고, 면역 세포들, 특히 본 발명의 T-세포들은 기재한 바와 같은 방법들을 이용하여 더 활성화되고 유전적으로 확장될 수 있다, 예를 들어, U.S. 특허들 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 U.S. 특허출원 공개 20060121005. T 세포들은 인 비트로 또는 인 비보로 확장될 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 T 세포들은 T-세포의 활성화 신호를 창출하기 위하여 T 세포들의 표면 상에 공동-자극 분자 및 CD3 TCR 복합체를 자극하는 제제와의 접촉에 의하여 확장된다. 예를 들어, 칼슘 이오노포어(ionophore) A23187, 포르볼(phorbol) 12-미리스테이트(myristate) 13-아세테이트(acetate) (PMA), 또는 미토겐성(mitogenic) 렉틴들(lectins) 유사(like) 피토헤마글루티닌(phytohemagglutinin) (PHA)과 같은 화학물질들이 T-세포를 위하여 활성화 신호를 창출하는데 이용될 수 있다.

제한되지 않는 예들로서, T 세포 군집들은 항-CD3 항체, 또는 그것의 항원-binding 단편, 또는 표면 상에 고정된 항-CD2 항체와의 접촉에 의하여, 또는 칼슘 이오노포어와 함께 단백질 키나제 C 활성인자 (예컨대, 브리오스타틴(bryostatin))과의 접촉에 의하여, 와 같이 인 비트로에서 자극될 수 있다. T 세포들의 표면 상 부수적(accessory) 분자의 공동 자극을 위하여, 부수적(accessory) 분자에 결합하는 리간드가 사용된다. 예를 들어, T 세포들의 군집은 T 세포들의 증식을 자극하는데 적합한 조건들 하, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉될 수 있다. T 세포 배양을 위한 적합한 조건들은 혈청(serum) (예컨대, 태아(fetal) 소(bovine) 또는 인간 혈청), 인터류킨-2 (IL-2), 인슐린, IFN-g, 1L-4, 1L-7, GM-CSF, -10, - 2, 1L-15, TGFp, 및 TNF- 또는 당업자에게 알려진 세포들의 성장을 위한 추가의 첨가제들을 포함하는, 증식 및 생존능(viability)에 필요한 인자들을 포함할 수 있는 적합한 배지 (예컨대, 최소(Minimal) 필수(Essential) 배지(Media) 또는 RPMI 배지(Media) 1640 또는, X-비보(vivo) 5, (Lonza))를 포함한다. 세포들의 성장을 위한 다른 첨가제들은 계면활성제, 플라스만네이트(plasmanate) 및 N-아세틸(acetyl)-시스테인(cysteine) 및 2-머캅토에탄올(mercaptoethanoi)과 같은 환원제들을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 배지는 RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, a-MEM, F-12, X-Vivo 1, 및 X-Vivo 20, Optimizer, 첨가된 아미노산들, 소듐(sodium) 피루베이트(pyruvate), 및 비탄민들, 무혈청 또는 적절한 양의 혈청(또는 혈장)이 적절한 양으로 보충된, 또는 호르몬들의 정의된 세트, 및/또는 T 세포들의 성장 및 확장에 충분한 양의 사이토카인(들)을 포함할 수 있다. 항생물질들, 예컨대, 페니실린 및 스트렙토마이신,은 대상 내로 주입(infuse)되는 세포들의 배양들이 아닌, 실험적 배양에서만 포함된다. 타겟 세포들은 성장을 지지하는데 필요한 조건들, 예를 들어, 대기(예컨대, 5% C0₂ 플러스 공기) 및 적절한 온도 (예컨대, 37 ℃) 하 유지된다. 다양한 자극 시간들에 노출되어 온 T 세포들은 다른 특성들을 보일 수 있다.

또다른 특정 예에서, 상기 세포들은 조직 또는 세포들의 공동 배양에 의하여 확장될 수 있다. 상기 세포들은 인 비보에서, 예를 들어 대상 내로 상기 세포를 투여한 후 대상의 혈액에서, 확장될 수 있다.

치료적 적용들

또다른 예에서, 전술한 상기 분리된 세포로부터 유래된 다른 방법들 또는 세포주에 의하여 수득되는 분리된 세포는 의약으로서 이용될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 의약은 그것을 필요로 하는 환자에서 암, 특히 B-세포 림프종들 및 백혈병의 치료를 위하여 사용될 수 있다. 또다른 예에서, 본 발명에 따른 상기 분리된 세포 또는 상기 분리된 세포로부터 유래되는 세포주는 그것을 필요로 하는 환자에서 암의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 그것을 필요로 하는 환자들을 치료하는 방법들에 의존하는데, 상기 방법은 하기 다 단계들 중 적어도 하나를 포함한다:

(a) 전술한 방법들 중 어느 하나에 의하여 수득가능한 면역-세포를 제공하는 단계;

(b) 상기 환자에게 상기 형질전환된(transformed) 면역 세포들을 투여하는 단계,

한 예에서, 본 발명의 상기 T 세포들은 인 비보에서 강한 T 세포 확장을 겪을 수 있고 그리고 연장된 시간 동안 지속될 수 있다.

선호되는 측면에서, 본 발명은 그것을 필요로 하는 환자들을 치료하기 위한 방법들에 의존하고, 상기 방법은 하기 단계들 중 적어도 하나를 포함한다:

(a) 항-CD33 발현시키는 CAR 면역 세포 (또는 본 발명의 조작된 면역 세포 중 임의의 것)을 제조하기 위하여 본 발명의 방법들 중 어느 하나에 의하여 수득가능한 면역-세포를 제공하는 단계

(b) 상기 환자에게 상기 항-CD33 발현시키는 CAR 면역 세포들을 투여하는 단계; 선택적으로, 본 발명의 상기 CD33 CAR T 세포는 인 비보에서 강한 T 세포 확장을 겪을 수 있고 그리고 연장된 시간 동안 지속될 수 있고, 특히 연장된 시간 동안 CD33에 결합할 수 있다.

상기 치료는 개선, 치유 또는 예방일 수 있다. 그것은 자가조직(autologous) 면역요법의 부분 또는 동종이계(allogenic) 면역요법 치료의 부분일 수 있다. 자가조직에 의하여, 환자들을 치료하는데 사용되는 세포들, 세포주 또는 세포들의 군집은 상기 환자로부터 또는 기증자와 양립가능한(compatible) 인간(Human) 백혈구(Leucocyte) 항원(Antigen) (HLA)로부터 비롯된다. 동종이계(allogeneic)에 의하여, 환자들을 치료하는데 이용되는 세포들 또는 세포들의 군집이 상기 환자로부터 비롯되지 않으나 기증자로부터 비롯된다.

한 예에서, 본 발명에 따른 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포가 의약으로서 그것의 사용을 위하여 제공된다.

특정 예에서, 의약으로서 그것의 사용을 위하여 제공되는 본 발명에 따른 상기 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38로부터 선택되는 폴리펩타이드 그리고 더욱 바람직하게는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38의 폴리펩타이드로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다,

더욱 더 바람직하게는, 의약으로서 그것의 사용을 위하여 제공되는 본 발명에 따른 상기 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 60, 서열번호: 62, 서열번호: 64, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드를 포함하고, 또는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 서열번호:70으로 구성되는 군으로부터 선택되는 폴리펩타이드를 포함한다; 이들 CAR 중 임의의 것은 인간화될 수 있다.

한 예에서, 의약으로서 그것의 사용을 위하여 제공되는 본 발명에 따른 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는, 서열번호: 68의 폴리펩타이드 또는 서열번호: 68의 폴리펩타이드와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하고, 선택적으로 인간화된다.

다시 말해서, 본 발명은 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드 중 어느 하나와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하고, 의약으로서 그것의 사용을 위하여 선택적으로 인간화(humanize)되는, 본 발명에 따른 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포에 대한 것이다.

개시된 방법들과 함께 또는 의약으로 사용될 수 있는 조작된 면역 세포들은 앞 부분들에 기재되어 있다. 바람직하게는 조작된 면역 세포들은 일차(primary) T 세포들을 포함할 수 있으며, 이때 혈액 암을 치료하는데 사용되는 적어도 하나의 약물에 선택적으로 내성으로, CD33 발현이 바뀌고, TCR 발현이 바뀐다.

보통, 상기 의약은 CD33-발현시키는 세포-매개 병적인(pathological) 질병(condition) 또는 CD33-발현시키는 세포의 직접적 또는 간접적 활성에 의해 특징되는 질병, 즉, CD33-발현시키는 세포들의 해로운 활성에 연결된 질병을 치료하는데 사용될 수 있다.

상기 의약은 CD33-발현시키는 T 세포들, 특히 과잉의 CD33-발현시키는 T 세포들에 의하여 특징되는 전암상태(pre-malignant) 또는 악성(malignant) 암 질병으로 진단받은 환자들을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 질병들은 B-세포 림프증식성 장애들과 같은 악성(malignant) 림프증식성 장애들 또는 백혈병과 같은, 혈액(hematologic) 암들에서 발견된다.

본 발명에 따른 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포로 치료될 수 있는 CD33-발현시키는 세포의 직접적 또는 간접적 활성에 의하여 특징되는 질병 또는 CD33-발현시키는 세포-매개 병적인(pathological) 질병의 또다른 예는 알츠하이머 질환이다.

림프증식성 장애는 림프종, 특히 다발성 골수종, 비(non)-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 및 여포성 림프종 (작은 세포 및 큰 세포)일 수 있다.

CD33-매개되는 또는 CD33-수반하는 질환 중 어느 하나 특히 악성(malignant) 림프증식성(lymphoproliferative) 장애 또는 백혈병은 치료될 수 있고, 상기 병적인 질병으로 고통받는 환자의 건강 상태는 본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들로 개선될 수 있다.

선호되는 예에서, 본 발명의 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 암은 백혈병, 백혈병과 관련된 질환 또는 그 합병증, 특히 AML, AML 서브타입(subtype), AML-관련 합병증, 및 AML-관련 질병들이다.

본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 또한 예방 또는 치료될 수 있는 백혈병은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상(melodysplastic) 증후군, 급성 림프성 백혈병, 급성 림프모구(lymphoblastic) 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 및 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군이다.

본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 AML 또는 AML 서브타입들은 특히, CD33-양성 세포들을 수반하는, 급성 골수모구(myeloblastic) 백혈병, 최소로 분화된 급성 골수모구 백혈병, 성숙(maturation) 없는 급성 골수모구 백혈병, 과립구(granulocytic) 성숙이 있는 급성 골수모구 백혈병, 전골수세포(promyelocytic) 또는 급성 전골수세포 백혈병 (APL), 급성 골수단핵구(myelomonocytic) 백혈병, 골수 호산구증가증(eosinophilia)과 함께 있는 골수단핵구, 급성 단핵모구성(monoblastic) 백혈병 (M5a) 또는 급성 단핵구(monocytic) 백혈병 (M5b), 적백혈병(erythroleukemia) (M6a) 및 매우 희귀한 순수(pure) 적백혈병(erythroid leukemia) (M6b)을 포함하는 급성 적백혈병(erythroid leukemia), 급성 거대모구성(megakaryoblastic) 백혈병(M7), 급성 호염기(basophilic) 백혈병, 골수섬유증(myelofibrosis) 있는 급성 범골수증(panmyelosis)일 수 있다.

본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 AML의 서브타입들은 또한 t (8;21) (q22;q22), (AML1/ETO)를 동반한 AML, inv (16) (p13;q22) 또는 t (16;16) (p13;q22), (CBFβ/MYH11)를 동반한 AML, t (15;17) (q22;q12), (PML/RARα)를 동반한 AML 및 변종들, t(9;11)(p22;q23), (MLLT3/MLL)를 동반한 AML, t(6;9)(p23;q34) (DEK/NUP214)를 동반한 AML, inv(3)(q21q26) 또는 t(3;3)(q21;q26), (RPN1/EVI1)를 동반한 AML, t(1;22)(p13;q13) (RBM15/MKL1) (megakaryocytic)를 동반한 AML, MDS/MPN 또는 MDS 전으로부터 일어나는 AML을 포함하는 골수형성이상(myelodysplasia)-관련 변화들을 갖는 AML, MDS-관련 세포유전학적(cytogenetic) 이상을 갖는 AML, 및 다중계통( multilineage) 형성이상(dysplasia)을 갖는 AML, 알킬화제/방사선 관련 AML, (AML-M0로도 알려진) 최소한으로 분화된 AML, (AML-M1로도 알려진) 성숙(maturation) 없는 AML, (AML-M2로도 알려진) 성숙을 수반한 AML, (AML-M4로도 알려진) 급성 골수단핵구(myelomonocytic) 백혈병, (AML-M5로도 알려진) 급성 단핵모구성(monoblastic)/단핵구(monocytic) 백혈병, (AML-M6로도 알려진) 급성 적백혈병 및 순수(pure) 적백혈병을 포함한다.

따라서, 특이적 유전적 이상들을 갖는 AML으로 분류된 AML은 본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 질병들이다. 분류는 유도 치료에 대한 반응, 재발 위험, 생존을 예상하기 위하여 핵형의 능력에 기초한다.

따라서, 본 발명의 항-CD33 CAR-발현시키는 T 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 AML은 염색체들 8 및 21 사이의 전위를 가진 AML, 염색체 16에 전위 또는 역위(inversion)를 가진 AML, 염색체들 9 및 11 사이의 전위를 가진 AML, 염색체들 15 및 17 사이의 전위를 가진 APL (M3), 염색체들 6 및 9 사이의 전위를 가진 AML, 염색체 3에 전위 또는 역위를 가진 AML, 염색체들 1 및 22 사이에 전위를 가진 AML(거대모구성)일 수 있다.

본 발명은 특히 이들 particular 세포유전학적(cytogenetic) 마커들과 관련된 AML의 치료에 유용하다.

본 발명은 또한 고용량 시타라빈(cytarabin)의 반복적 투여량들을 이용하여 t(8;21)(q22;q22) 또는 inv(16)(p13q22)/t(16;16)(p13;q22) 확인된 환자들의 치료를 위하여 그리고 올트랜스(all-trans) 레티노산(retinoic acid) (ATRA)을 이용하여 확인된 t(15;17)(q22;q21)를 가진 환자들과 같은 AML의 특이적 세포유전학적(cytogenetic) 서브세트들(subsets)을 갖는 환자들의 치료를 위하여 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 제공한다.

바람직하게는, 본 발명은 열등한(inferior) 완전 완화(remission) 비율들 및 생존을 갖는 것으로 보여 온, -5/del(5q), -7, 3q의 이상 또는 복잡한 핵형과 같은 이상들(aberrations)을 갖는 환자들의 치료를 위하여 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 제공한다.

환자들의 그룹

선호되는 예에서, 본 발명은 60 세 초과(over)의 환자들, 20 세 미만(less)의 환자들, 특히 어린이들에서 백혈병 특히 AML을 위한 약을 제공한다.

더욱 선호되는 예에서, 본 발명은 소아과 치료, 특히 AML, 또는 AML-관련 질환들 또는 합병증들에 대항한 소아과 치료를 제공한다.

더 또다른 선호되는 예에서, 본 발명은 5년 미만(less) 생존 비율의 예상되는 생존으로 말하는 낮은, 나쁜, 또는 불리한 상황을 갖는 AML 환자들의 치료로서 사용된다. 이 그룹에서, 하기 : -5; 5q; -7; 7q-;11q23; 비(non) t(9;11); inv(3); t(3;3); t(6;9); t(9;22) 세포유전학적(cytogenetic) 특성들을 갖는 AML으로 고통받는 환자들은 나쁜-위험 상황(Byrd J.C. et al., December 15, 2002; Blood: 100 (13)과 관련있고, 특히 본 발명의 목적으로 또는 본 발명에 따라 치료되는 것으로 생각된다.

한 예에서, 본 발명의 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 AML 재발의 경우, 또는 난치성 또는 내성 AML의 경우에 치료로서 이용될 수 있다. 바람직하게는, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 또는 그 조합과 적어도 80% 내지 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드로부터 선택되는 폴리펩타이드 그리고 서열번호 1로 구성되는 또는 포함하는, 본 발명의 적어도 하나의 인간화된 항-CD33 CAR를 포함하는 T 세포들이 더욱 바람직하게는, 적어도 하나의 다른 항-암 약물과 조합으로, AML 재발, 또는 난치성 또는 내성 AML을 갖는 환자들에서 사용된다.

또다른 선호되는 예에서, 본 발명의 상기 적어도 하나의 항-CD33 CAR T 세포는 특히 항암 치료 후, 골수 소모(depletion) 동안 또는 골수 이식(transplantation) 전, 골수 파괴(destruction) 후 발생하는 암 세포들 발달을 예방하는데 사용된다.

AML 합병증들

하나의 특정 예에서, 본 발명은 환자, 특히 AML과 관련된 합병증을 겪고 있는 환자의 건강 조건을 개선시키는 의약을 제공한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명의 상기 조작된 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 또는 그 조합과 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 및 서열번호 1을 포함하는 적어도 하나의 항-CD33 CAR을 발현시키고, AML 관련 합병증의 치료를 위한 의약으로 사용된다.

하나의 특정 예에서, 본 발명은 AML로 고통받는 환자, 특히 AML 관련 합병증을 겪는 환자의 건강 상태를 개선하는 의약을 제공하며, 상기 의약은 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 본 발명의 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 포함한다.

합병증 또는 AML과 관련된 질환은 앞의(preceding) 척수형성이상(myelodysplasia) 국면(phase), 이차(secondary) 백혈병, 특히 이차 AML, 높은 백혈구 수치, 및 Auer 로드들(rods)의 부재를 포함할 수 있다. 다른 것들 중 과잉백혈구증가(Hyperleukocytosis), 잔류(residual) 질환(disease), 중추신경계 (CNS)의 관련 및 백혈구울혈(leukostasis)은 또한 합병증 또는 AML와 관련 있는 질환으로 생각된다.

AML 관련 질환들

한 예에서, 본 발명은 또한 AML 관련 병적인 질병의 치료를 위하여 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 AML 관련 병적인 질병의 치료를 위하여, 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 적어도 하나의 항-CD33 CAR을 발현시키는 세포를 제공한다.

본 발명은 급성 골수성 백혈병 및 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군을 위한, AML 관련 골수(myeloid) 신생물들(neoplasms)을 위한 의약, 재발된 또는 난치성 급성 골수성 백혈병의 치료, 성인들에서 재발된 또는 난치성 급성 전골수구성(promyelocytic) 백혈병의 치료, 급성 전골수(promyeloid) 백혈병의 치료, 60세를 넘는(over) 성인들에서 급성 골수성 백혈병의 치료를 제공한다.

또다른 측면에 따라, 본 발명은 AML 관련 질환들, 특히 AML 관련 혈액학적(hematologic) 악성종양의 치료를 위한 조성물을 제공한다.

AML 질병들에 대한 혈액학적 악성종양(malignancy)은 AML에 대한 형질전환의 위험 및 골수성 혈액 세포들의 효과 없는 생산 (또는 형성이상(dysplasia))에 의하여 맺어진 혈액학적 질병들의 다양한 무리인 골수형성이상(myelodysplasia) 증후군들(syndromes) (MDS, 공식적으로 "전백혈병(preleukemia)")로 알려짐)을 포함한다.

또다른 예에서, 본 발명은 다발성 골수종으로 고통받는 환자의 건강 상태를 개선시키는 본 발명에 따른 의약을 제공한다.

다른 병적인 질병들 또는 AML의 위험과 관련된 유전적 증후군들은 본 발명의 적절한 사용으로 개선될 수 있고, 상기 유전적 증후군들은 다운 증후군, 삼염색체성(trisomy), 판코니(Fanconi) 빈혈(anemia), 블룸(Bloom) 증후군, 혈관확장성 운동실조증(Ataxia-telangiectasia), 다이아몬드(Diamond)-블랙판(Blackfan) 빈혈(anemia), 슈바흐만(Schwachman)-다이아몬드(Diamond) 증후군, 리(Li)-프라우메니(Fraumeni) 증후군, 신경섬유종증(Neurofibromatosis) 타입 1, 심각한(Severe) 선천적(congenital) 호중구감소증(neutropenia) (또한 코스트만(Kostmann) 증후군으로도 불림)을 포함한다.

한 예에서, 본 발명은 알츠하이머 질환의 치료를 위하여 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 제공한다. 본 발명은 앞 부분에서 기재된 개시된 방법들과 함께 사용될 수 있는 세포들을 제공하는데, 바람직하게는 세포들은 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포들이고 더욱 바람직하게는 TCR 및 CD33 KO 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포들이다. 상기 치료는 CD33-발현시키는 세포들에 의하여, 특히 과잉의 CD33-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 악성(malignant) 암 질병 또는 전암상태(pre-malignant)인, 진단받은 환자들을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 질병들은 백혈병 또는 악성(malignant) 림프증식성 장애들과 같은 혈액(hematologic) 암들에서 발견된다.

백혈병은 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상(melodysplastic) 증후군, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 및 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군일 수 있다.

치료될 수 있는 암들은 프리(pre)-B ALL (소아과적(pediatric) 징조(indication)), 성인 ALL, 맨틀(mantle) 세포 림프종, 확산된(diffuse) 큰(large) B-세포 림프종 등을 포함하나 이에 제한되지 않는, 혈액 종양들과 같은, 비고형 종양들을 포함할 수 있다. 본 발명의 CAR들로 치료되는 암들의 타입들은 백혈병 또는 림프구성 악성 종양들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 성인 종양들/암들 및 소아 종양들/암들 또한 포함된다.

본 발명에 따른 조작된 면역 세포들로 하는 치료는 사이토카인들 치료, 수지상 세포 치료, 유전자 치료, 호르몬 치료, 레이저 광 치료 및 방사선 치료의 군으로부터 선택되는 암에 대항한 하나 또는 그보다 많은 치료들과 조합될 수 있다.

본 발명의 바람직한 예에 따라, 상기 치료는 면역억제 치료를 겪는 환자들 내로 투여될 수 있다. 과연, 본 발명은 바람직하게는 이러한 면역억제제를 위한 수용체를 코드하는 유전자의 불활성화 때문에 적어도 하나의 면역억제제에 내성으로 만들어진, 세포들 또는 세포들의 군집에 의존한다. 이 측면에서, 면역억제 치료는 환자 내에서 본 발명에 따른 T-세포들의 선택 및 확장을 도와야 한다.

조성물들

본 발명은 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공한다.

한 예에서, 상기 조성물은 의약으로서의 사용을 위하여 제공된다.

또다른 예에서 상기 조성물은 CD33-발현시키는 세포들, 특히 과잉의 CD33-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 질병들의 치료를 위한 의약으로서의 사용을 위하여 제공된다. 이러한 질병들은 B-세포 림프증식성 장애들과 같은 악성(malignant) 림프증식성 장애들 또는 백혈병과 같은 혈액(hematologic) 암들에서 발견된다.

한 측면에 따라, 본 발명은 CD33+세포-매개 질환들의 치료를 위하여 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공한다. 이들 CD33+세포 매개 질환들은 전암상태(pre-malignant) 또는 악성(malignant) 암 질병, 염증, 자가면역 질환들, 알츠하이머 질환을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명에 따른 조성물을 이용하여 치료될 수 있는 CD33-발현시키는 혈액(hematologic) 암 세포는 (급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병 및 골수형성이상(myelodysplasia) 증후군 과 같은) 백혈병 및 (다발성 골수종, 비(non)-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 및 작은 세포- 및 큰 세포-여포성 림프종과 같은) 림프종을 포함하는 악성(malignant) 림프증식성 질병들, 또는 그것의 합병증인 CD33-발현시키는 암 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는 CD33-발현시키는 혈액(hematologic) 암 줄기 세포일 수 있다.

약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물은 환자에서 CD33-발현시키는 혈액(hematologic) 암 세포들의 증식 및/또는 활성을 억제하는, 양을 감소시키는 방법의 사용을 위하여 제공된다. 모범적인 방법은 CD33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 CD 33 CART 세포와 CD33-발현시키는 세포를 포함하는 세포들의 군집을 접촉시키는 단계를 포함한다.

더욱 특이적 측면에서, 본 발명은 그것의 이용을 위하여 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공하고, 특히 그 방법에서 환자에서 CD33를 발현시키는 암 세포들의 군집을 감소 또는 증식을 억제하기 위한 것이며, 그 방법들은 CD33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 CD 33 CART 세포와 CD33-발현시키는 암 세포을 접촉시키는 단계, D33-발현시키는 암 세포에 본 발명의 CD 33 CART 세포를 결합시켜 CD33-발현시키는 암 세포들의 파괴를 야기하는 단계를 포함한다.

특정 측면들에서, 본 발명의 CD 33 CART 세포를 포함하는 조성물은 음성 대조군에 비례하여, CD33-발현시키는 세포들과 관련된 또다른 암 또는 골수성 백혈병의 동물 모델 또는 대상에서 (검출되지 않는 수준으로) 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%로 세포들 및/또는 암 세포들의 양, 수, 총량 또는 퍼센트를 감소시킨다.

본 발명은 또한 CD33-발현시키는 세포들과 관련된 (예컨대, 혈액(hematologic) 암, AML과 관련된) 장애 또는 질병을 예방, 치료 및/또는 관리(managing)하는 방법을 제공하며, 그 방법들은 D33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 CD 33 CART 세포를 포함하는 조성물, 특히 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을, 조성물을 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 한 측면에서, 대상은 인간이다. CD33-발현시키는 세포들과 관련된 장애들의 제한되지 않는 예들은 (알레르기들, 염증성 창자(bowel) 질환들 BD, 알츠하이머 질환과 같은) 염증성 장애들 및 (혈액 암들, 특히 AML 또는 AML 합병증들과 같은) 암들을 포함한다.

본 발명은 또한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명의 항-CD33 CAR를 발현시키는 T 세포를 포함하는 질환을 치료하는 방법 또는 그 사용을 위한 조성물을 제공하고, 바람직하게는, 상기 항-CD33 CAR는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 내지 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 및 서열번호 1를 포함한다. 한 측면에서, 질환은 여기에 기재된 질환들이고, 특히 혈액(hematologic) 암, 더욱 특히 급성 골수성 백혈병 (AML)과 같은) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병 및 골수형성이상(myelodysplasia) 증후군)을 포함하나 이에 제한되지 않는 줄기 세포 암 및 (다발성 골수종, 비(non)-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 및 작은 세포- 및 큰 세포-여포성 림프종과 같은) 림프종을 포함하는 악성(malignant) 림프증식성 질병들, 또는 그 합병증이다.

본 발명은 또한 환장에서 활성 또는 CD33-발현시키는 세포 군집을 감소 또는 증식을 억제시키는 방법에스 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공한다. 모범적인 방법은 CD33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 CD 33 CART 세포와 CD33-발현시키는 세포를 vhg마하는 세포들의 군집을 접촉시키는 단계를 포함하고, 바람직하게는 상기 항-CD33 CAR는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 그 조합으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 내지 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 및 서열번호 1을 포함한다.

본 발명은 (예컨대, 혈액 암과 관련된) CD33-발현시키는 세포들과 관련된 장애 또는 질병을 예방, 치료 및/또는 관리하기 위한 방법에서 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공하고, 그 방법들은 본 발명의 조성물을 그것을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하고, 이때 상기 항-CD33 CAR는 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 그 조합으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% to 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 및 서열번호 1을 포함한다. 한 측면에서, 대상은 인간이다. CD33-발현시키는 세포들과 관련된 장애들의 제한되지 않는 예들은 (루푸스와 같은) 자가면역 장애들, (알레르기들, IBD, 및 천식과 같은) 염증성 장애들 및 (혈액 암들, 특히 AML 또는 AML 합병증들과 같은) 암들을 포함한다.

본 발명은 또한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명의 항-CD33 CAR를 발현시키는 T 세포를 포함하는 그것의 이용을 위한 조성물, 그것을 이용하는 것을 포함하는 질환의 치료 방법을 제공하고, 바람직하게는, 상기 항-CD33 CAR는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% to 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 한 측면에서, 질환은 여기에 기재된 대로 질환들이고, 특히 혈액(hematologic) 암, 더욱 특히 (급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병 및 골수형성이상 증후군과 같은) 백혈병 및 다발성 골수종, 비(non)-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 및 작은- 및 큰- 세포-여포성 림프종과 같은) 림프종을 포함하는 악성 림프증식성 질병들, 또는 그 합병증을 포함하나 이에 제한되지 않는 줄기 세포 암이다.

본 발명은 또한 환자에게서 활성 또는 CD33-발현시키는 세포 군집을 감소 또는 증식을 억제하는 방법에서 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공한다. 모범적인 방법은 CD33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 CD 33 CAR T 세포와 CD33-발현시키는 암 세포를 포함하는 세포들의 군집을 접촉시키는 단계를 포함하고, 바람직하게는 상기 항-CD33 CAR는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 서열과 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다.

본 발명은 또한 CD33-발현시키는 세포들과 관련된 (예컨대, 혈액암과 관련된) 장애 또는 질병을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법에 있어서 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공하고, 그 방법들은 본 발명의 조성물을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 항-CD33 CAR는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% to 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다.

한 측면에서, 대상은 인간이다. CD33-발현시키는 세포들과 관련된 장애들의 제한되지 않는 예들은 (루푸스와 같은) 자가면역 장애들, (알레르기들, IBD, 및 천식과 같은) 염증성 장애들 및 (혈액 암들, 특히 AML 또는 AML 합병증들과 같은) 암들을 포함한다.

본 발명은 또한 CD33-발현시키는 세포들과 관련된 질환의 예방, 치료 및/또는 관리 방법에 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공하고, 그 방법은 CD33-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 조성물을 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 한 예에서, 상기 항-CD33 CAR는 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% 내지 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 한 측면에서, 대상은 인간이다. CD33-발현시키는 세포들과 관련된 질환들의 제한되지 않는 예들은 급성 골수성 백혈병 (AML), 골수형성이상, B-세포 급성 림프성 백혈병, T-세포 급성 림프성 백혈병, 모양(hairy) 세포 백혈병, 출아형(blastic) 형질세포형(plasmacytoid) 수지상(dendritic) 세포 신생물(neoplasm), 만성 골수성 백혈병, 호지킨 림프종을 포함한다.

본 발명은 CD33-발현시키는 세포들과 관련된 암의 재발을 예방 또는 치료하는 방법에 그것의 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 본 발명에 따른 항-CD33 발현시키는 T 세포들을 포함하는 조성물을 제공하고, 그 방법은 본 발명에 따른 조성물을 그것을 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하고, 이때 상기 항-CD33 CAR는, CD 33-발현시키는 세포에 결합하는, 서열번호: 48, 서열번호: 50, 서열번호: 52, 서열번호: 54, 서열번호: 56, 서열번호: 58, 서열번호: 66, 서열번호: 68, 및 서열번호:70으로부터 선택되는 폴리펩타이드와 적어도 80% to 100% 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 또다른 측면에서, 그 방법들은 또다른 치료의 효과적인 양과 조합하여 본 발명에 따른 조성물의 효과적인 양을 그것을 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 CD33의 증가된 수준들과 관련된 질환 또는 장애를 보이며, CD 19의 증가된 발현 수준들과 관련된 질환 또는 장애를 위한 치료를 겪어 온 대상들을 치료하기 위한 방법들 및 조성물들을 제공한다.

본 발명에 따른 세포들 또는 세포들의 군집의 투여는 에어로졸 흡입, 주사(injection), 섭취, 투입(transfusion), 피하주입(implantation) 또는 이식(transplantation)을 포함하는 임의의 편리한 방식으로 수행될 수 있다. 여기에 기재된 조성물들은 피하로, 피부내로(intradermally), 종양 내로(intratumorally), 절 내로(intranodally), 골수 내로(intramedullary), 근육 내로(intramuscularly), 정맥 내(intravenous) 또는 림프 내(intralymphatic) 주사(injection)에 의하여, 또는 복강 내로(intraperitoneally) 환자에게 투여될 수 있다. 한 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 바람직하게는 정맥 내 주사(injection)에 의하여 투여된다.

세포들 또는 세포들 군집의 투여는, 그들 범위들 내의 세포 수들의 모든 정수 값들을 포함하는, kg 체중 당 10⁴-10⁹ 세포들, 바람직하게는 10⁵ 내지 10⁶ 세포들/kg 체중으로 구성될 수 있다. 세포들 또는 세포들 군집은 하나 또는 그보다 많은 투여량들(doses)로 투여될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 효과적인 양의 세포들은 단일 투여량(dose)으로 투여된다. 또다른 예에서, 상기 효과적인 양의 세포들은 일정 시간의 기간 동안보다 하나의 투여량보다 더 투여된다. 투여의 타이밍은 담당의사의 판단 내에서 환자의 임상적 상태에 의존한다. 세포들 또는 세포들 군집은 혈액 은행 또는 기증자와 같은 임의의 소스로부터 수득될 수 있다. 각 필요성이 각기 다른 반면, 업계의 기술 내 특정 질환들 또는 질병들을 위한 정해진 세포 타입의 효과적인 양들의 최적 범위들의 결정. 효과적인 양은 치료적 또는 예방적 이익을 제공하는 양을 의미한다. 투여되는 투여량(dosage)은 수혜자(recipient)의 연령, 건강 및 체중, 만약 있다면, 동시에 하는(concurrent) 치료의 종류, 만약 있다면, 치료의 빈도 및 원하는 효과의 특성에 의존한다.

또다른 예에서, 세포들의 상기 효과적인 양 또는 그들 세포들을 포함하는 조성물은 장관외(parenterally)로 투여된다. 상기 투여는 정맥 내 투여일 수 있다. 상기 투여는 종양 내로 직접적으로 주사(injection)에 의하여 될 수 있다.

본 발명의 특정 예에서, 세포들은 항바이러스 치료, 시도포비르(cidofovir) 및 인터류킨-2, 시타라빈(Cytarabine) (ARA-C로도 알려짐) 또는 MS 환자들을 위한 나탈리지맙(natalizimab) 치료 또는 건선 환자들을 위한 에팔리즈티맙(efaliztimab) 치료 또는 PML 환자들을 위한 다른 치료들과 같은 제제들로 하는 치료를 포함하나 이에 제한되지 않는 많은 관련 치료 양식들(modalies)과 조합하여 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후) 환자에 투여된다. 추가의 예들에서, 본 발명의 T 세포들은 화학요법, 방사선, 사이클로스포린(cyclosporin), 아자티오프린(azathioprine), 메토트렉사트, 마이코페놀레이트(mycophenolate), 및 FK506과 같은 면역억제 제제들, 항체들, 또는 CAMPATH, 항-CD3 항체들 또는 다른 항체 치료들과 같은 다른 면역제거(immunoablative) 제제들, 사이톡신(cytoxin), 플루다라빈(fludaribine), 사이클로스포린(cyclosporin), FK506, 라파마이신(rapamycin), 마이코플리에놀릭산(mycoplienolic acid), 스테로이드들, FR901228, 사이토카인들, 및 방사선 요법(irradiation)과 조합하여 사용될 수 있다. 이들 약물들은 칼슘 의존적 포스파타제 칼시뉴린(사이클로스포린 및 FK506)을 억제하거나 또는 성장인자 유도된 신호전달(signaling) (라파마이신(rapamycin))에 중요한 p70S6 키나제을 억제한다 (Henderson, Naya et al. 1991; Liu, Albers et al. 1992; Bierer, Hollander et al. 1993). 추가의 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 플루다라빈과 같은 화학요법 제제들, 외부(external)-빔(beam) 방사(radiation) 치료(therapy) (XRT), 사이클로포스마이드(cyclophosphamide), 또는 OKT3 또는 CAMPATH와 같은 항체들을 이용하여 T 세포 제거(ablative) 치료, 골수 이식(transplantation)과 함께 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후) 환자에 투여된다. 또다른 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 예컨대 리툭산(Rituxan)인 CD20과 반응하는 제제들과 같은 B-세포 제거(ablative) 치료 후 투여된다. 예를 들어, 한 예에서, 대상들은 고용량 화학요법을 표준 치료를 겪은 후 말초 혈액 줄기 세포 이식(transplantation)가 뒤따른 수 있다. 특정 예들에서, 이식(transplant) 후, 대상들은 본 발명의 확장된 면역 세포들의 투입(infusion)을 받는다. 추가적인 예에서, 확장된 세포들은 수술 전 또는 후 투여된다.

다른 정의들

- 다르게 명시되지 않는 한, "하나(a)," "하나(an)", "그(the)" 및 "적어도 하나"는 교환하여 사용되고 하나 또는 하나보다 많은 것을 의미한다. 폴리펩타이드 서열 내 아미노산 잔기들은 한 문자 코드에 따라 여기에서 설계되고, 여기에서 예를 들어, Q는 Gln 또는 글루타민(Glutamine) 잔기를 의미하고, R은 Arg 또는 아르기닌(Arginine) 잔기를 의미하고 그리고 D는 Asp 또는 아스파르트산(Aspartic acid) 잔기를 의미한다.

- 아미노산 치환은 하나의 아미노산 잔기를 다른 것과의 대체를 의미하며, 예를 들어 펩타이드 서열 내 아르기닌(Arginine) 잔기를 글루타민(Glutamine) 잔기로 대체하는 것은 아미노산 치환이다.

- 핵산들은 하기와 같이 설계된다: 한 문자 코드는 뉴클레오사이드의 염기를 설계하는데 사용된다: a는 아데닌(adenine)이고, t는 티민(thymine)이고, c는 시토신이고, 그리고 g는 구아닌(guanine)이다. 축퇴된 뉴클레오타이드들에 대하여, r은 g 또는 a (퓨린 뉴클레오타이드들)을 나타내고, k는 g 또는 t를 나타내고, s는 g 또는 c를 나타내고, w는 a 또는 t를 나타내고, m은 a 또는 c를 나타내고, y는 t 또는 c (피리미딘 뉴클레오타이드들)를 나타내고, d는 g, a 또는 t를 나타내고, v는 g, a 또는 c를 나타내고, b는 g, t 또는 c를 나타내고, h는 a, t 또는 c를 나타내고, 그리고 n은 g, a, t 또는 c를 나타낸다.

- "여기에서 사용된 대로", "핵산" 또는 "폴리뉴클레오타이드들"은 디옥시리보핵산 (DNA) 또는 리보핵산 (RNA), 올리고뉴클레오타이드들, 폴리메라제 체인 반응 (PCR)에 의하여 생겨난 단편들, 및 라이게이션(ligation), 절단(scission), 엔도뉴클레아제 작용, 및 엑소뉴클레아제 작용에 의하여 생기는 단편들을 가리킨다. 핵산 분자들은 (DNA 및 RNA와 같은) 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들 또는 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들의 유사체들(analogs) (예컨대, 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들의 거울상 이성질체(enantiomeric) 형태들) 또는 둘다의 조합인 모노머들을 포함할 수 있다. 변형된 뉴클레오타이드들은 당 모이어티들 및/또는 피리미딘 또는 퓨린 염기 모이어티들에서의 변화들을 가질 수 있다. 당 변형들은 예를 들어, 하나 또는 그보다 많은 하이드록실(hydroxyl) 기들의 할로겐들, 알킬기들, 아민들 및 아자이도(azido) 기들로의 대체를 포함하고, 또는 당들은 에터(ether)들 또는 에스터(ester)들로 기능기화될 수 있다. 게다가 전체 당 모이어티는 아자(aza)-당들 및 카르보사이클릭 당 유사체들(analogs)과 같은 입체구조적으로 및 전자적으로 유사한 구조들로 대체될 수 있다. 염기 모이어티에서의 변형이 예들은 알킬화된 퓨린들 및 피리미딘들, 아실화된(acylated) 퓨린들 또는 피리미딘들, 또는 다른 잘 알려진 헤테로사이클릭 치환기들을 포함한다. 핵산 모노머들은 포스포다이에스터 결합들에 의하여 또는 이러한 연결들의 유사체들(analogs)에 의하여 연결(linkd)될 수 있다. 핵산들은 단일 가닥 또는 이중가닥일 수 있다.

- 키메라 항원 수용체 (CAR)에 의하여, 예를 들어 특이적 항-타겟 세포 면역 활성을 보이는 키메라 단백질을 만들어내는 T 세포 수용체-활성화 세포내 도메인과 원하는 항원 (예컨대, 종양 항원)을 위한 항체-기반의 특이성인, 타겟 세포 상에 존재하는 요소에 대항한 결합 도메인을 조합하는 분자들이 의도된다. 일반적으로, CAR는 T 세포 항원 수용체 복합체 제타 체인 (scFvFc:ζ)의 세포내 신호전달(signaling) 도메인에 융합되고, T 세포들에서 발현될 때, 단일클론 항체의 특이성에 기반하여 항원 인식을 방향전환하는 능력을 갖는 세포외(extracellular) 단일 체인 항체 (scFvFc)로 구성된다. 본 발명에서 사용되는 CAR의 한 예는 CD33 항원에 대항하여 향하는 CAR이고, 제한되지 않는 예로서 서열번호: 19 내지 42 의 아미노산 서열, 그리고 바람직하게는 서열번호 48 내지 71로부터의 아미노산 서열들을 포함할 수 있다.

- V1 구조체에 의하여

- CD8알파 신호 펩타이드,

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에 결합하는데 원인이 된다,

-- Fc감마(gamma) (γ) RIII알파 (α)로부터의 힌지

- CD8알파(α)로부터 유래된 막관통 도메인

- 41BB 및 CD3 제타 (ζ)로부터 유래된 세포질 도메인

을 조합하는 분자들이 의도된다.

- V2 구조체는 V1 구조체를 갖는 분자들이 의도되고, 이때 막관통 도메인은 41BB로부터 유래된다

V3 구조체에 의하여

- CD8알파 신호 펩타이드,

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에 결합의 원인이다,

- CD8알파 (α)로부터의 힌지

- CD8알파(α)로부터의 막관통 도메인

- 41BB 및 CD3 제타 (ζ)로부터 유래되는 세포질 도메인

을 조합하는 분자들이 의도된다.

- V4 구조체에 의하여 V3 구조체를 가진 분자들이 의도되고 이때 막관통 도메인은 41BB로부터 유래된다.

V5 구조체에 의하여

- CD8알파 신호 펩타이드,

- 링커에 의하여 VL 도메인과 분리되는 VH 도메인, 상기 VH 및 VL은 CD33에의 결합의 원인이 된다,

- IgG1 (α)로부터의 힌지

- CD8알파(α)로부터 유래된 막관통 도메인

- 41BB 및 CD3 제타 (ζ)로부터 유래된 세포질 도메인

를 조합하는 분자들이 의도된다,

- V6 구조체에 의하여 V5 구조체를 갖는 분자들이 의도되고 이때 막관통 도메인은 41BB로부터 유래된다.

본 발명의 CAR 구조체는 도 2에, 바람직하게는 도 3에 나타나 있다.

용어 "화학요법(chemotherapy)"은 화학물질들, 특히 암에 대항하여 사용되는 것들을 이용한 임의의 치료를 가리킨다. - 용어 "엔도뉴클레아제"는 DNA 또는 RNA 분자, 바람직하게는 DNA 분자 내 핵산들 사이에서 결합들의 가수분해 (절단)을 촉매화할 수 있는 임으의 야생형 또는 변종 효소를 가리킨다. 엔도뉴클레아제들은 그것의 서열을 불문하고 DNA 또는 RNA 분자를 절단하는 것이 아니라, "타겟 서열들" 또는 "타겟 자리들"로 더 언급되는 특정 폴리뉴클레오타이드 서열들에서 DNA 또는 RNA 분자을 인식하고 절단한다. 엔도뉴클레아제들은 12 염기쌍들 (bp) 길이보다 더 큰, 더욱 바람직하게는 14-55 bp의 폴리뉴클레오타이드 인식 자리를 전형적으로 가질 때 희귀-절단 엔도뉴클레아제들로 분류될 수 있다. 희귀 절단 엔도뉴클레아제들은 정해진 위치들(locus)에서 DNA 이중(double)-가닥(strand) 파손들(breaks) (DSBs)에 의하여 HR을 상당히 증가시킨다 (Perrin, Buckle et al. 1993; Rouet, Smih et al. 1994; Choulika, Perrin et al. 1995; Pingoud and Silva 2007). 희귀 절단 엔도뉴클레아제들은 예를 들어 호밍(homing) 엔도뉴클레아제 (Paques and Duchateau 2007), FokI와 같은 제한 효소의 촉매적 도메인과 조작된 징크-핑거 도메인들의 융합으로부터 생기는 키메라 징크-핑거 뉴클레아제 (ZFN) (Porteus and Carroll 2005), CRISPR 시스템으로부터의 Cas9 엔도뉴클레아제 (Gasiunas, Barrangou et al. 2012; Jinek, Chylinski et al. 2012; Cong, Ran et al. 2013; Mali, Yang et al. 2013) 또는 화학적 엔도뉴클레아제 (Eisenschmidt, Lanio et al. 2005; Arimondo, Thomas et al. 2006)일 수 있다. 화학적 엔도뉴클레아제들에서, 화학적 또는 펩타이드(peptidic) 절단자(cleaver)는 핵산들의 폴리머로 또는 특정 타겟 서열을 인식하는 또다른 DNA로 콘쥬게이트되고, 이로써 특정 서열에 대하여 절단(cleavage) 활성을 타겟팅한다. 화학적 엔도뉴클레아제들은 또한 특이적 DNA 서열들에 결합하는 것으로 알려진 오소페난트롤린(orthophenanthroline)의 콘쥬게이트들과 같은 합성 뉴클레아제들, DNA cleaving 분자, 및 특이적 DNA 서열들에 결합하는 것으로 알려진 3중(triplex)-형성(forming) 올리고뉴클레오타이드들 (TFOs)을 또한 포함한다 (Kalish and Glazer 2005). 이러한 화학적 엔도뉴클레아제들은 본 발명에 따른 용어 "엔도뉴클레아제" 내에 포함된다.

- "TALE-뉴클레아제" (TALEN)에 의하여 핵산 타겟 서열을 절단하기 위하여 하나의 뉴클레아제 촉매적 도메인 및 전사(Transcription) 활성인자(Activator) 유사(Like) 효과기(Effector) (TALE)로부터 전형적으로 유래되는 핵산-결합 도메인으로 구성되는 융합 단백질이 유도된다. 촉매적 도메인은 바람직하게는 뉴클레아제 도메인이고 더욱 바람직하게는 엔도뉴클레아제 활성, 예를 들어 I-TevI, ColE7, NucA 및 Fok-I를 갖는 도메인이다. 특정 예에서, TALE 도메인은 예를 들어 I-CreI 및 I-OnuI 또는 그것의 기능적 변종과 같은 메가뉴클레아제에 융합될 수 있다. 더욱 선호되는 예에서, 상기 뉴클레아제는 모노머 TALE-뉴클레아제이다. 모노머 TALE-뉴클레아제는 WO2012138927에 기재된 I-TevI의 촉매적 도메인과 조작된 TAL 반복들(repeats)의 융합들과 같은 특이적 인식 및 절단(cleavage)을 위한 이합체화를 요구하지 않는다. 전사(Transcription) 활성인자(Activator) 유사(Like) 효과기(Effector) (TALE)는 박테리아 종 잔토모나스(Xanthomonas)로부터의 단백질들이고, 다수의 반복된 서열들을 포함하고, 각 반복은 핵산 타겟된 서열의 각 뉴클레오타이드 염기에 특이적인 위치 12 및 13 (RVD)에서 두-잔기들을 포함한다. 유사한 모듈식(modular) 염기(base)-당(per)-염기(base) 핵산 결합(binding) 물성들(properties) (MBBBD)을 갖는 결합 도메인들은 또한 다른 박테리아 종들에서 출원인에 의하여 최근에 발견된 새로운 모듈식 단백질들로부터 유래될 수 있다. 신규 모듈식 단백질들은 TAL 반복들보다 더 많은 서열 변동성을 보이는 이점을 갖는다. 바람직하게는 다른 뉴클레오타이드들의 인식과 관련된 RVD들은 C를 인식하기 위한 HD, T를 인식하기 위한 NG, A를 인식하기 위한 NI, G 또는 A를 인식하기 위한 NN, A, C, G 또는 T를 인식하기 위한 NS, T를 인식하기 위한 HG, T를 인식하기 위한 IG, G를 인식하기 위한 NK, C를 인식하기 위한 HA, C를 인식하기 위한 ND, C를 인식하기 위한 HI, G를 인식하기 위한 HN, G를 인식하기 위한 NA, G 또는 A를 인식하기 위한 SN 및 T를 인식하기 위한 YG, A를 인식하기 위한 TL, A 또는 G를 인식하기 위한 VT 및 A를 인식하기 위한 SW이다. 또다른 예에서, 아주 중요한 아미노산들 12 및 13은 뉴클레오타이드들 A, T, C 및 G에 대한 그것들의 특이성을 조절하기 위하여 특히 이 특이성을 향상시키기 위하여 다른 아미노산 잔기들을 향하여(towards) 돌연변이될 수 있다. TALE-뉴클레아제는 유전자 변형들 및 유전자 타겟팅을 자극하기 위하여 사용되어 왔으며 이미 기재되어 왔다 (Boch, Scholze et al. 2009; Moscou and Bogdanove 2009; Christian, Cermak et al. 2010; Li, Huang et al. 2011). 조작된 TAL-뉴클레아제들은 상표면 TALENTM (Cellectis, 8 rue de la Croix Jarry, 75013 Paris, France)으로 상업적으로 이용가능하다.

본 발명에 따른 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 Cas9 엔도뉴클레아제일 수 있다. 최근에 새로운 게놈 조작 수단이 타입 II 원핵(prokaryotic_ CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short palindromic Repeats) 적응(adaptive) 면역 시스템 (검토를 위하여 (Sorek, Lawrence et al. 2013) 참조)로부터 RNA-가이드된 Cas9 뉴클레아제에 기초하여 개발되어 왔다(Gasiunas, Barrangou et al. 2012; Jinek, Chylinski et al. 2012; Cong, Ran et al. 2013; Mali, Yang et al. 2013). CRISPR 관련된(Associated) (Cas) 시스템은 먼저 박테리아에서 발견되었으며, 바이러스 또는 플라스미드인, 외래 DNA,에 대항한 방어로서 기능한다. CRISPR-매개된 게놈 조작은 프로토(proto)-스페이서(spacer) 인접(adjacent) 모티프 (PAM)로서 언급되는, 짧은 서열 모티프애 의하여 자주 측면에 위치하는(flanked) 타겟 서열의 선택에 의하여 먼저 진행된다. 타겟 서열 선택 후, 이 타겟 서열에 상보적인 특이적 crRNA이 조작된다. CRISPR 타입 II 시스템들에서 요구되는 트랜스(Trans)-활성화되는(activating) crRNA (tracrRNA)는 crRNA와 쌍을 이루고(pair) 제공되는 Cas9 단백질에 결합된다. Cas9는 cRNA와 tracRNA의 염기 쌍 형성을 가능하게 하는 모듈식 앵커(anchor)로 작용한다(Deltcheva, Chylinski et al. 2011). 이 삼원(ternary) 복합체에서, 이중 tracrRNA:crRNA 구조들은 동족(cognate) 타겟 서열로 엔도뉴클레아제 Cas9을 향하게 하는 가이드 RNA 로 작용한다. Cas9-tracrRNA:crRNA 복합체에 의한 타겟 인식은 타겟 서열 및 crRNA 사이의 상동성(homology)를 위한 타겟 서열의 스캐닝(scanning)에 의하여 개시된다. 타겟 서열-crRNA 상보성에 추가하여, DNA 타겟팅은 프로토스페이서(protospacer) 에 인접한 짧은 모티프(프로토스페이서 인접 모티프 - PAM)의 존재를 요구한다. 이중(dual)-RNA 및 타겟 서열 사이의 쌍 형성(pairing) 후, Cas9는 그 뒤에 PAM 모티프의 3 염기들 업스트림에 무딘(blunt) 이중 가닥 파손(break)을 도입한다 (Garneau, Dupuis et al. 2010).

희귀-절단 엔도뉴클레아제는 메가뉴클레아제의 이름으로도 알려진, 호밍 엔도뉴클레아제일 수 있다. 이러한 호밍 엔도뉴클레아제들은 업계에 잘 알려져 있다 (Stoddard 2005). 호밍 엔도뉴클레아제들은 DNA 타겟 서열을 인식하고 단일- 또는 이중-가닥 파손(break)을 만들어 낸다. 호밍 엔도뉴클레아제들은 매우 특이적이며, 12 부터 45 염기쌍들 (bp)까지의 길이의 범위, 보통 14 부터 40 bp 까지의 길이의 범위인 DNA 타겟 자리들(sites)을 인식한다. 본 발명에 따른 호밍 엔도뉴클레아제는 예를 들어 LAGLIDADG 엔도뉴클레아제에, HNH 엔도뉴클레아제에, 또는 GIY-YIG 엔도뉴클레아제에 해당할 수 있다. 본 발명에 따른 선호되는 호밍 엔도뉴클레아제는 I-CreI 변종(variant)일 수 있다.

- "전달(delivery) 벡터" 또는 "전달 벡터들"에 의하여 본 발명에서 필요로 하는 제제들/화학물질들 및 분자들 (분자들 또는 핵산들)을 세포 접촉(즉, "접촉하는") 내로 넣기 위하여 또는 세포들 또는 세포이하(subcellular) 구획들(compartments)(즉, "도입하는") 내로 전달하기 위하여, 본 발명에서 사용될 수 있는 임의의 전달 벡터가 의도된다. 그것은 리포좀(liposomal) 전달 벡터들, 바이러스 전달 벡터들, 약물 전달 벡터들, 화학적 담체들, 폴리머 담체들, 리포플렉스들(lipoplexes), 폴리플렉스들(polyplexes), 덴드라이머들(dendrimers), 마이크로버블들(microbubbles) (초음파 조영제들), 나노입자들, 에멀젼들 또는 다른 적당한 이동(transfer) 벡터들을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 전달 벡터들은 분자들, 화학물질들, 마크로분자들 (유전자들, 단백질들) 또는 Diatos에 의하여 개발된 펩타이드들, 플라스미드들과 같은 다른 벡터들의 전달을 가능하게 한다. 이들 경우들에서, 전달 벡터들은 분자 담체들이다. "전달 벡터" 또는 "전달 벡터들"에 의하여 형질주입을 수행하기 위한 전달 방법들이 또한 의도된다.

- 용어들 "벡터" 또는 "벡터들"은 또다른 핵산을 그것이 연결되는 곳으로 이동시킬 수 있는 핵산 분자를 가리킨다. 본 발명에서 "벡터"는 염색체, 비 염색체, 반-합성 또는 합성 핵산들로 구성될 수 있는, 바이러스 벡터, 플라스미드, RNA 벡터 또는 선형 또는 원형 DNA 또는 RNA 분자를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 선호되는 벡터들은 그것들이 연결되는 것으로의 핵산들의 발현 (발현 벡터들) 및/또는 자동 복제(에피좀(episomal) 벡터)가 가능한 것들이다. 많은 수의 적합한 벡터들이 당업자에게 알려져 있고 상업적으로 이용가능하다.

바이러스 벡터들은 레트로바이러스, 아데노바이러스, 파보바이러스(예컨대 아데노관련(adenoassociated 바이러스들), 코로나 바이러스, 오쏘믹소바이러스(orthomyxovirus) (예컨대, 인플루엔자 바이러스), 랩도바이러스(rhabdovirus) (예컨대, 광견병(rabies) 및 수포성(vesicular) 구내염(stomatitis) 바이러스), 파라믹소바이러스(paramyxovirus) (예컨대 홍역(measles) 및 센다이(Sendai))와 같은 음성 가닥 RNA 바이러스들, 피코르나바이러스(picornavirus) 및 알파바이러스(alphavirus)와 같은 양성 가닥 RNA 바이러스들, 및 수두바이러스(poxvirus) (예컨대, 우두(vaccinia), 계두(fowlpox) 및 카나리아두창(canarypox)), 헤르페스바이러스(herpesvirus) (예컨대, 단순헤르페스(Herpes Simplex) 바이러스 타입들 1 및 2, 엡스타이SEpstein)-바(Barr) 바이러스, 시토메갈로바이러스(cytomegalovirus)), 아데노바이러스(adenovirus)를 포함하는 이중-가닥 DNA 바이러스들을 포함한다. 다른 바이러스들은 예를 들어 노르워크(Norwalk) 바이러스, 토가바이러스(togavirus), 플라비바이러스(flavivirus), 레오바이러스들(reoviruses), 파포바이러스(papovavirus), 헤파드나바이러스(hepadnavirus), 및 간염 바이러스를 포함한다. 레트로바이러스들의 예들은 하기를 포함한다: 조류 백혈증(leukosis)-육종(sarcoma), 포유류 C-타입, B-타입 바이러스들, D 타입 바이러스들, HTLV-BLV 그룹, 렌티바이러스(lentivirus), 스푸마바이러스(spumavirus) (Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields, et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996).

- "렌티바이러스 벡터"에 의하여 그것들의 상대적으로 큰 패키징 용량, 감소된 면역원성 및 많은 범위의 다른 세포 타입들을 높은 효율로 안정적으로 형질도입(transduce)하는 그것들의 능력 때문에, 유전자 전달에 매우 유망한 HIV-기반의 렌티바이러스 벡터들이 의미된다. 렌티바이러스 벡터들은 생산자(producer) 세포들 내로 셋 (패키징, 껍질(envelope) 및 이동(transfer)) 또는 그보다 많은 플라스미드들의 일시적 형질주입 후 보통 만들어진다. HIV처럼, 렌티바이러스 벡터들은 세포 표면 상 수용체들과 바이러스 표면 당단백질들의 상호작용을 통하여 타겟 세포에 들어간다. 들어간 직후, 바이러스 RNA는 역전사를 겪는데, 이는 바이러스 역전사효소 복합체에 의하여 매개된다. 역전사의 산물은 아중가닥 선형 바이러스 DNA로, 이는 감염된 세포들의 DNA에 바이러스 통합을 위한 주형이다. "통합하는(integrative) 렌티바이러스 벡터들 (또는 LV)"에 의하여, 제한되지 않는 예로서, 타겟 세포의 게놈으로 통합될 수 있는 이러한 벡터들이 의미된다. "통합되지 않는(non-integrative) 렌티바이러스 벡터들 (또는 NILV)"에 의하여 반대로 바이러스 인테그라제(integrase)의 작용을 통한 타겟 세포의 게놈으로 통합되지 않는 효과적인 유전자 전달 벡터들이 의미된다.

- 전달 벡터들 및 벡터들은 초음파천공(sonoporation), 또는 전기천공 또는 이들 기술들의 파생물들(derivatives)과 같은 임의의 dtpvh 투과화(permeabilization) 기술들과 조합 또는 관련될 수 있다.

- 세포 또는 세포들에 의하여 임의의 진핵(eukaryotic) 살아있는 세포들, 원발성(primary) 세포들 및 인 비트로 배양들을 위한 이들 생물들로부터 유래된 세포주들이 의도된다.

- "원발성(primary) 세포" 또는 "원발성(primary) 세포들"에 의하여 살아있는 조직(즉, 생체검사 물질)로부터 직접 취하고 인 비트로에서 성장을 위하여 확립된, 개체군 배가들을 거의 겪지 않고 그러므로 그러므로 연속적인 종양형성(tumorigenic) 또는 인공적으로 불멸화된(immortalized) 세포주들에 비교하여, 그것들이 유래된 조직들의 특성들 및 주된 기능적 요소들의 더 대표적인, 세포들이 의도된다.

제한되지 않는 예들로서 세포주들은 CHO-K1 세포들; HEK293 세포들; Caco2 세포들; U2-OS 세포들; NIH 3T3 세포들; NSO 세포들; SP2 세포들; CHO-S 세포들; DG44 세포들; K-562 세포들, U-937 세포들; MRC5 세포들; IMR90 세포들; Jurkat 세포들; HepG2 세포들; HeLa 세포들; HT-1080 세포들; HCT-116 세포들; Hu-h7 세포들; Huvec 세포들; Molt 4 세포들로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

이들 세포주들은 모두 관심있는 단백질 또는 유전자를 생산, 발현, 수량화, 검출, 연구하기 위한 세포주 모델들을 제공하기 위하여 본 발명의 방법에 의하여 변혀오딜 수 있고; 이들 모델들은 또한 제한되지 않는 예들로서 화학물질, 바이오연료들, 치료법 및 농업경제학(agronomy)과 같은 여러가지 필드들 및 연구 및 생산에서 관심있는 생물학적으로 활성인 분자들을 스크리닝하는데 사용될 수 있다.

- "돌연변이"에 의하여, 폴리뉴클레오타이드 (cDNA, 유전자) 또는 폴리펩타이드 서열 내로 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷, 열다섯, 스물, 스물다섯, 서른, 마흔, 쉰 또는 그보다 많은 뉴클레오타이드들/아미노산들의 치환, 결실, 삽입이 의도된다. 돌연변이는 유전자의 코딩 서열 또는 그것의 조절성 서열에 영향을 미칠 수 있다. 그것은 또한 코드되는 mRNA의 구조/안정성 또는 게놈 서열의 구조에도 영향을 미칠 수 있다.

- 변종(variant)(들)"에 의하여, 부모(parent) 분자의 아미노산 서열에서 적어도 하나의 잔기의 돌연변이 또는 대체에 의하여 얻어지는 폴리펩타이드 변종, TALE-뉴클레아제 변종, DNA 결합 변종, 변종, 반복 변종이 의도된다.

- "기능적 변종"에 의하여 단백질 또는 단백질 도메인의 촉매적으로 활성인 돌연변이가 의도되고; 이러한 돌연변이는 그것의 단백질 또는 단백질 도메인에 비교하여 동일한 활성, 또는 추가의 물성들, 또는 더 높은 또는 더 낮은 활성을 가질 수 있다.

"동일성(identity)"은 두 개의 핵산 분자들 또는 폴리펩타이드들 사이의 서열 동일성(identity)를 가리킨다. 동일성은 비교의 목적들을 위하여 정렬될 수 있는 각 서열에서의 위치를 비교함으로써 결정될 수 있다. 비교되는 서열에서의 위치가 동일한 염기에 의하여 차지될 때, 그렇다면 그 분자들은 그 위치에서 동일하다. 핵산 또는 아미노산 서열들 사이의 유사도(similarity) 또는 동일성(identity)의 정도는 핵산 서열들에 의하여 공유되는 위치들에서의 동일하거나 또는 매칭되는 뉴클레오타이드들의 수의 기능이다. 여러가지 정렬 알고리즘들 및/또는 프로그랩들이 두 서열들 사이의 동일성(identity)을 계산하기 위하여 사용될 수 있는데, 이는 GCG 서열 분석 패키지 (University of Wisconsin, Madison, Wis.)의 부분으로서 이용가능한 FASTA, 또는 BLAST를 포함하고, 예컨대, 디폴트 세팅으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 여기에 기재된 특정 폴리펩타이드들과 적어도 70%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일성(identity)을 갖는 폴리펩타이드들 및 바람직하게는 상당히 동일한 기능들을 보이는, 그리고 이러한 폴리펩타이드들을 코드하는 폴리뉴클레오타이드가 고려된다. 다르게 표시되지 않는 한, 유사도 점수(score)는 BLOSUM62의 이용에 기초할 것이다. BLASTP가 이용될 때 퍼센트 유사도(similarity) BLASTP 양성 점수에 기초하고 퍼센트 서열 동일성(identity)은 BLASTP 동일성들(identities) 점수에 기초한다. BLASTP "동일성들(Identities)"은 동일한 높은 점수의(socoring) 서열 쌍들에서 총 잔기들의 부분 및 수를 보여주고; BLASTP "양성들(Positives)"은 서로 유사하고 정렬 점수들이 양성 점수들을 갖는 잔기들의 부분(fraction) 및 수를 보여준다. 동일성(identity) 또는 유사도(similarity)의 이들 정도들 또는 여기에 기재된 아미노산 서열들에 대한 유사도(similarity)의 동일성(identity)의 임의의 중간 정도를 갖는 아미노산 서열들이 고려되고 이 공개에 의하여 포함된다. 유사한 폴리펩타이드들의 폴리뉴클레오타이드 서열들이 유전적 코드를 이용하여 추정되고, 기존의 수단들, 특히 유전적 코드를 이용하여 그것의 아미노산 서열을 역번역함으로써 수득될 수 있다.

- "신호(signal)-전달(transducing) 도메인" 또는 "공동-자극 리간드"는 T-세포 상 인접한 공동-자극 분자에 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상 분자를 가리키며, 이로써 예를 들어, 펩타이드로 로드된 MHC 분자와 TCR/CD3 복합체의 결합에 의하여 제공되는 일차(primary) 신호에 추가하여, T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공하고, 이는 증식 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 공동-자극 리간드는 CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, inducible costimulatory igand (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, 림포톡신 베타 수용체, 3/TR6, ILT3, ILT4, 작용제 또는 Toll 리간드 수용체에 결합하는 항체 및 B7-H3에 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 공동-자극 리간드는 또한 그 중에서도, CD27, CD28, 4-IBB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 function-associated 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, B7-H3, CD83에 특이적으로 결합하는 리간드와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, T 세포 상에 존재하는 공동-자극 분자와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.

"공동-자극 분자"는 공동-자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T 세포 상 인접한 결합 파트너를 가리키며, 이로써 증식과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 세포에 의한 공동-자극 반응을 매개한다. 공동-자극 분자들은 MHC 클래스 I 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

여기에서 사용한 대로 "공동-자극 신호(signal)"는 TCR/CD3 라이게이션(ligation)과 같은 일차(primary) 신호와 조합하여, T 세포 증식 및/또는 주요 분자들의 상향조절 또는 하향조절을 이끄는 신호를 가리킨다.

여기에서 사용된 대로 용어 "세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인"은 리간드에 결합할 수 있는 올리고- 또는 폴리펩타이드로 정의된다. 바람직하게는, 그 도메인은 세포 표면 분자와 상호작용할 수 있을 것이다. 예를 들어, 세포 외(extracellular) 리간드-결합 도메인은 특정 질환 상태와 관련된 타겟 세포들 ktd 세포 표면 마커으로서 작용하는 리간드를 인식하도록 선택될 수 있다. 이런 식으로 세포 표면 마커들의 예들은 바이러스, 박테리아 및 기생충 감염들, 자가면역 질환 및 암 세포들과 관련된 것들을 포함한다.

여기에서 사용된 대로 용어 "대상" 또는 "환자"는 인간들 및 인간이 아닌 영장류들을 포함하는 동물 계의 모든 멤버들을 포함한다.

용어들 "암, 특히 AML을 치료하기 위하여 사용되는 약물"은 문헌 PCT/EP2015/055848의 예에 기재된 그리고 암, 특히 AML의 치료를 이해 사용되는 의약을 가리킨다.

본 발명의 상기 기재된 서술은 그것을 만들고 이용하는 공정 및 방식을 제공하여, 당업자가 그것을 만들고 이용하는 것을 가능하게 하며, 이러한 가능하게 하는 것은 특히 원래의 서술의 부분을 이루는 첨부된 특허청구범위들의 주제를 위하여 제공된다.

수치적 제한 또는 범위가 여기에 기재될 때, 그 단점들(endpoints)도 포함된다. 또한 수치적 제한 또는 범위 내 모든 값들 및 부분범위들(subranges)은 마치 명시적으로 써있는 것처럼 명확하게 포함된다.

상기 서술은 당업자가 본 발명을 만들고 이용하는 것을 가능하게 하도록 제시되며, 특정 적용 및 그것의 요구들의 문맥에서 제공된다. 선호되는 실시예들의 여러가지 변형들은 당업자에게 쉽게 분명할 것이며, 여기에서 정의된 포괄적인 원칙들은 다른 실시예들 및 적용들에도 본 발명의 영혼 및 범위로부터 벗어나지 않고, 적용될 수 있다. 이런 식으로, 본 발명은 보여지는 실시예들에 제한되는 것으로 의도되지 않으나, 여기에 기재된 특징 및 원칙들과 일치하는 가장 넓은 범위에 따른다.

일반적 방법들:

일차(primary) T 세포들에서 특이적 유전자(들)의 불활성화

일차(primary) T 세포들에서 특이적 유전자(들)의 불활성화는 T 세포들로 CAR 의 도입 전 또는 후 수행될 수 있다.

적어도 하나의 유전자, 하나의 유전자 또는 두 유전자들이 한 단계 또는 연속적인 단계들에서 불활성화될 수 있다. 선호되는 예에서, 두 유전자들이 동시에 불활성화될 수 있는데, 바람직하게는 TCR알파 유전자 및 CD33 유전자이다.

일반적으로, 헤테로다이머 뉴클레아제, 특히 타겟 유전자 내 스페이서(spacer)에 의하여 분리되는 (반(half) 타겟들이라고 불리는) 두 개의 긴 서열들을 타겟팅하는 TALE-뉴클레아제가 설계되고 생산된다.

각각의 TALE-뉴클레아제 구조체는 적절한 포유류 발현 벡터에서 클로닝될 수 있다. 타겟되는 게놈 서열을 절단(cleaving)하는 TALE-뉴클레아제을 코드하는 mRNA는 프로모터의 다운스트림(downstream) 코딩 서열을 나르는(carrying) 플라스미드로부터 합성될 수 있다.

세포들은 항-CD3/CD28 코팅된 비드들로 전활성화된(preactivated) 정제된 T 세포들이다. 세포들은 반(half) TALE-뉴클레아제들 특히 반(half) TALE-뉴클레아제들 및 스페이서,를 코드하는 2 mRNA들 각각으로 형질주입된다.

세포들은 세포들의 활성화 상태를 평가하기 위하여 검출된 활성화 마커 CD25 및 세포 증식을 측정하기 위하여 가용성(soluble) 항-CD28로 재활성화될 수 있다.

키메라 항원 수용체들

핵산들-벡터들

본 발명의 항-CD33 CAR 를 코드하는 핵산 (mRNA 또는 렌티바이러스 벡터)은 도 2 또는 도 3에 설계된 아키텍쳐(architecture)에 따라 건설된다.

항-CD33 CAR 렌티바이러스 벡터들은 예를 들어 참고로 여기에 포함되는 WO2013176915, WO2013176916, 또는 in WO2014130635에 전에 기재된 대로 제조될 수 있다. 렌티바이러스 벡터들은 Vectalys SA에 의하여 생산된다 (Toulouse, France)

CAR mRNA들은 사이토펄스(Cytopulse) 기술을 이용하여 되는 형질주입들 및 T7 mRNA 폴리메라지를 이용하여 생산될 수 있다.

항-CD33 CAR의 스크리닝 및 선택

- 일차(primary) T-세포 배양물들

T 세포들은 Ficoll 농도 구배 배지를 이용하여 EFS (Etablissement Francais du Sang, Paris, France)에 의하여 제공되는 Buffy 코트 샘플들로부터 정제된다. PBMC 층은 회수되고 T 세포들은 상업적으로 이용가능한 T-세포 농축(enrichment) 키트를 이용하여 정제된다. 정제된 T 세포들은 인간 IL-2 및 다이나비드들(Dynabeads) 인간 T 활성인자 CD3/CD28를 이용하여 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 활성화된다.

CAR mRNA 형질주입( transfection )

다른 CAR 구조체들을 코드하는 CAR mRNA들의 형질주입은 T-세포 정제 및 활성화 4일 4 또는 11일 후에 수행된다.

CAR의 발현을 가능하게 하는 재조합 렌티바이러스 벡터들로의 T-세포 형질도입 재조합 렌티바이러스 벡터들로의 T-세포들의 형질도입은 T-세포 정제/활성화 삼 일 후 수행된다. 렌티바이러스 벡터들은 HEK-293 세포들에서 게놈 및 헬퍼 플라스미드들을 형질주입시킴으로써 Vectalys SA (Toulouse, France)에 의하여 생산된다. 형질도입들은 감염 (MOI)의 여러가지 다수, 특히 5의 MOI에서 수행될 수 있다. T-세포들의 표면에서 CAR 검출은 (LakePharma에 의하여 생산되는) 쥐 IgG1 Fc 단편과 함께 융합된 인간 CD33 단백질의 세포외(extracellular) 도메인 상에 구성하는 재조합 단백질을 이용하여 수행된다.

이 단백질의 CAR 분자에의 결합은 단백질의 마우스 Fc 부분을 타겟팅하는 PE-콘쥬게이트된 이차 항체 (Jackson Immunoresearch)로 검출된다 그리고,

- 탈과립화 분석 ( CD107a 동원(mobilization))

T-세포들은 CD33 단백질의 여러가지 수준들을 발현시키는 동일한 양의 세포들과 함께 배양된다. 공(co)-배양물들은 적어도 6 시간 동안 유지된다. CD107a 염색은 공-배양의 초반에 형광성 항-CD107a 항체의 첨가에 의하여, 세포 자극 동안 수행된다. 6 시간 배양 기간 후, 세포들은 고정가능한 생존능 염료 및 플루오로크롬-콘쥬게이트된 항-CD8으로 염색되고 유동세포분석법에 의하여 분석된다. 탈과립(degranulation) 활성은 CD8+ 세포들 사이의 CD107a 염색을 위한 평균(mean) 형광(fluorescence) 강도(intensity) 신호 (MFI)를 결정함으로써, 그리고 CD8+/CD107a+ 세포들의 %로서 결정된다.

탈과립 분석들은 mRNA 형질주입(transfection) 24 시간 후 수행된다.

- IFN 감마 방출 분석

mRNA 형질주입(transfection) 24 시간 후, 항-CD33 CAR 발현시키는 T-세포들 이 37 ℃에서 24 시간 동안 CD33 단백질의 여러가지 수준들을 발현시키는 세포주들과 함께 배양된다. 상청액들은 회수되고 세포 배양 상청액들에서 IFN 감마 검출은 ELISA 분석에 의하여 이루어진다.

- 세포독성 분석

CD33 CAR 발현시키는 T-세포들은 동일한 웰에서 (여러가지 수준들의 CD33을 발현시키는) 타겟 세포들 또는 (CD33neg) 세포들과 함께 배양된다. 타겟 CD33+ 및 대조군 CD33-타겟 세포들은 37 ℃에서 4 시간 동안의 공-배양 전에, 형광 세포내 염료들(예컨대 CFSE 또는 Cell Trace Violet)로 표지된다. 이 배양 기간 후, 세포들은 고정가능한 생존능 염료로 표지되고 유동세포분석법에 의하여 분석된다. 각각의 세포 군집(타겟 세포들 또는 CD33음성(neg) 대조군 세포들)의 생존능이 결정되고 특이적 세포 용해(lysis)의 %가 계산된다. 세포독성 분석들은 mRNA 형질주입(transfection) 48 시간 후 수행된다.

- 항-종양 마우스 모델

면역 결핍 NOG 마우스들이 CD33 발현시키는-루시페라제 세포들로 정맥내로(iv) 주사된다. 선택적으로 마우스들은 항-CD33 CAR+ T-세포들로 주사 전 항암 치료를 받는다. 마우스들은 그 다음에 CAR 렌티바이러스 벡터로 형질도입되지 않은 T-세포들로 또는 테스트되는 항-CD33 CAR+ T-세포들의 다른 투여량들로 (예컨대 종양 세포주로 주사 2 또는 7일 후) 정맥내로(iv) 조사된다. 생물발광 신호들은 다른 동물들에서 종양 진행을 추적하기 위하여 T-세포 주사 후 D7, 14, 21, 28 및 40에, T-세포 주사일에 (D0) 결정된다.

이 발명을 일반적으로 기재하였으며, 추가의 이해는 설명 목적으로만 여기에 제공되며, 다르게 명시되지 않는 한 제한되는 것으로 의도되지 않는 특정 특이적 예들을 참조하여 얻어질 수 있다.

실시예들

여러가지 항-CD33 항체 단편들을 이용한 CD33 CAR의 건설

CAR의 다른 아키텍쳐들이 설계되었다(도 3), 즉 V1 내지 V6. 첫 단계로서, M195, DRB2, m2H12 및 My9.6 항체로부터의 4 개의 다른 scFv들이 T 세포들에서 키메라 항원 수용체들(CAR들) (서열번호 48 내지 서열번호 71) 을 만들어내기 위하여 건설되었다.

실시예 1: CD33-CAR를 발현시키는 TCR알파 불활성화된 세포들의 증식

- 일차 T-세포 배양물들

T 세포들이 Ficoll 농도 구배 배지를 이용하여 EFS (Etablissement Francais du Sang, Paris, France)에 의하여 제공된 여러가지 버피(buffy) 코팅(coat) 샘플들로부터 정제되었다. PBMC 층이 회수되었고 T 세포들이 상업적으로 이용가능한 T-세포 농축 키트(Stem Cell Technologies)를 이용하여 정제되었다. 정제된 T 세포들이 20ng/mL 인간 IL-2, 5% 인간 혈청, 및 비드:세포 비율 1:1에서 다이나비드들(Dynabeads) 인간 T 활성인자 CD3/CD28 (Life Technologies)로 보충된 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 활성화되었다. 활성화 세포들이 성장하고 20ng/mL 인간 IL-2 및 5% 인간 혈청으로 보충된 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다.

- CAR mRNA 형질주입(transfection)

여러가지 항-CD33 항체 단편들을 이용하여 만들어진 각 CD33 CAR의 형질주입이 T-세포 정제 및 활성화 4 일 또는 11일 후에 이루어졌다. 5 백만 세포들이 다른 CAR 구조체들을 코드하는 mRNA 15μg으로 형질주입되었다. CAR mRNA들이 mMESSAGE mMACHINE T7 키트 (Life Technologies)를 이용하여 생산되었고 RNeasy Mini Spin Columns (Qiagen)을 이용하여 정제되었다. 형질주입들이 3000V/cm에서 두 개의 0.1 mS 펄스들을 적용함으로써, 사이토펄스 기술을 이용하여 이루어졌고, 최종 부피 200μl의 "사이토포레이션(Cytoporation) 버퍼 T" (BTX Harvard Apparatus)로 0.4cm 갭(gap) 큐벳들(cuvettes)에서 325V/cm에서 네 개의 0.2 mS 펄스들(pulses)이 뒤따랐다. 세포들은 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 즉시 희석되었고 5% CO2와 37 ℃에서 배양되었다. IL-2는 20ng/mL에서 전기천공 2 시간 후 첨가되었다.

일차 T 세포들 형질도입

- T-세포 형질도입

재조합 렌티바이러스 벡터들로 T-세포들의 형질도입(transduction) 항CD33 CAR 발현이 T-세포 정제/활성화 삼 일 후 수행되었다. Vectalys SA (Toulouse, France)에 의하여 생산된 렌티바이러스 벡터들이 사용되었다. T-세포들의 표면에서 항-CD33 CAR 검출이 (LakePharma에 의하여 생산된) 쥐 IgG1 Fc 단편과 함께 융합된 인간 CD33 단백질의 세포외(extracellular) 도메인으로 구성되는 재조합 단백질을 이용하여 수행된다. 항-CD33 CAR 분자에 이 단백질의 결합이 단백질의 마우스 Fc 부분을 타겟팅하는 PE-콘쥬게이트된 이차 항체 (Jackson Immunoresearch)으로 검출된다.

T-세포 수용체 알파 불변(constant) 체인 영역 (TRAC) 유전자 내 5-bp 스페이서에 의하여 분리되는 (반(half) 타겟들로 불리는) 두 개의 17-bp 길이 서열들을 타겟팅하는 헤테로다이머 TALE-뉴클레아제가 설계되고 생산되었다. 각각의 반(half)이 표 10에 목록화된 반(half) TALE-뉴클레아제들의 반복들에 의하여 인식된다.

<표 10>

표 10: TCR알파 유전자를 타겟팅하는 TAL-뉴클레아제들

각각의 TALE-뉴클레아제 구조체가 T7 프로모터의 통제 하 포유류 발현 벡터에서 제한효소 소화를 이용하여 서브클로닝(subcloned)되었다. TRAC 게놈 서열을 절단하는 TALE-뉴클레아제를 코드하는 mRNA가 T7 프로모터로부터 다운스트림 코딩 서열을 나르는 플라스미드로부터 합성되었다.

항-CD3/CD28 코팅된 비드들로 72 시간 동안 전활성화된 정제된 T 세포들이 반(half) TRAC_T01 TALE-뉴클레아제들 둘다를 코드하는 2 개의 mRNA들 중 각각으로 형질주입되었다. 형질주입 48 시간 후, 동일한 기증자로부터의 T 세포들의 다른 그룹들이 가각각 전술한 CD33 CAR 중 하나를 코드하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입되었다 (서열번호 19 내지 42). 형질도입 2 일 후, CD3NEG 세포들이 항-CD3 자성 비드들을 이용하여 정제되었고 형질도입 5 일 후, 세포들이 가용성 항-CD28 (5 μg/ml)로 재활성화되었다.

세포 증식이 주 당 2 회 세포 수를 셈으로써 재활성화 후 30일까지 뒤따랐다. 특히 항-CD28로 재활성화될 때, CD33 CAR들을 발현시키는 TCR 알파 불활성화된 세포들에서의 증가된 증식이 형질도입되지 않은 세포들에 비교하여 관찰되었다.

CD33CAR을 발현시키는 인간 T 세포들이 활성화된 상태를 보이는지 여부를 조사하기 위하여, 활성화 마커 CD25의 발현이 형질도입 7 일 후 FACS 7에 의하여 분석된다. CD33 CAR를 코드하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 정제된 세포들이 형질도입되지 않은 세포들에 비교하여 그것들의 활성화를 평가하기 위하여 그것들의 표면에서 CD25 발현에 대하여 분석되었다. 증가된 CD25 발현은 CD28 재활성화 또는 재활성화 없는 조건들 둘 다에서 예상된다.

본 발명은 CD33 특이적 CAR T 세포를 제공하고 이때 세포 표면에서 TCR의 수준은 검출 이하였다(below detected).

실시예 2:

CD33 유전자의 불활성화

CD33 유전자를 불활성화시키기 위하여, CD33 유전자 내 10 또는 15-bp 스페이서에 의하여 분리된 (TALEN 왼쪽(Left)에 의하여 결합된 서열 및 TALEN 오른쪽(Right)에 의하여 결합된 서열로 불리는) 두 서열들을 타겟팅하는 헤테로다이머 TALE-뉴클레아제가 설계되고 하기 기재와 같이 생산되었다. 각각의 반(half) 타겟은 표 11에 목록화된 반(half) TALE-뉴클레아제들의 반복들에 의하여 인식된다. 구조체들은 그 다음에 TCR 알파 유전자를 불활성화시키기 위하여 설계된 그것과 동시에 같이 T 세포들 내로 도입되었다.

<표 11>

표 11: TCR알파 유전자를 타겟팅하는 TAL-뉴클레아제들

그 결과인 세포들에서, CD33의 세포외(extracellular) 도메인이 길이가 짤방진다(truncated). 그 결과인 세포들의 이중 염색 및 유동세포분석법에 의한 분석은 대조군 (가짜(mock)-형질주입(transfected)) 세포들에 비하여 TCR의 그리고 CD33의 세포 표면 발현에서 감소(drop)를 가리킨다.

대체하여, 항-CD3/CD28 코팅된 비드들로 72 시간 동안 전활성화된 정제된 TCR KO T 세포들이 CD33 불활성화를 위하여 이용될 수 있다.

CD33 CAR를 발현시키는 인간 TCR KO 및 CD33 KO T 세포들의 활성화된 상태를 조사하기 위하여, 활성화 마커 CD25의 발현이 형질도입 7 일 후 FACS 7에 의하여 분석된다.

항-CD33 CAR들 T 세포들 및 항-CD33 CAR들이, 이때 TCR 알파 유전자 및/또는 CD33 유전자가 불활성화되고 그리고 이때 CAR가 아키텍쳐들 V1, V3 및 V5에 대응할 때, 생산될 수 있다.

편의를 위하여 세포들은 "T 세포들" 또는 "CD33 CAR"로 지정된다.

실시예 3

여러가지 항-CD33 항체 단편들을 이용하여 만들어낸 CD33 CAR의 탈과립(degranulation ) 활성

전술한 바와 같이 M195, m2H12 및 My9.6의 구조체들 V1, V3 및 V5 의 활성이 인간 일차(primary) T-세포들에서 일시적 발현 후(upon) 처은 결정되었다.

- 탈과립 분석 ( CD107a 동원)

T-세포들은 그 다음에 CD33 단백질의 여러가지 수준들을 발현시키는 세포들의 동일한 양과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/well)에서 배양되었다. 공(co)-배양물들은 5% CO2와 37 ℃에서 6 시간 동안 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다. CD107a 염색은 1μg/ml의 항-CD49d, 1μg/ml의 항-CD28, 및 1x 모넨신(Monensin) 용액과 함께, 공-배양 초기에 형광 항-CD107a 항체의 첨가에 의하여 세포 자극 동안 이루어졌다. 6 시간 배양 기간 후, 세포들은 플루오로크롬(fluorochrome)-콘쥬게이트된 항-CD8 및 고정가능한 생존능 염료로 염색되었고 유동세포분석법에 의하여 분석되었다. 탈과립 활성은 CD8+/CD107a+ 세포들의 %로서 그리고 CD8+ 세포들 중 CD107a 염색을 위한 평균 형광 강도 신호 (MFI)를 결정함으로써 결정되었다. 탈과립 분석들은 mRNA 형질주입(transfection) 24 시간(h) 후 수행되었다.

도 3에 기재된 대로 만들어진 CAR 분자들 중에서, 9 개가 그것들의 탈과립 활성에 대하여 테스트되었고(도 4 내지 도 6) 그것들 중 7 개가 추가의 활성 테스트들을 위하여 선택되었다 : 인터페론 감마 방출 및 세포 용해 (도 7 및 도 8).

세 개의 아키텍쳐들 중 하나 내에 M195, m2H12 또는 My9.6 scFv을 포함하는 CAR의 각각의 탈과립 활성 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통(transmembrane), v3: CD8-힌지/CD8-막관통, 또는 v5: IgG1-힌지/CD8-막관통) 이 CAR+ T-세포들이 CD33 발현시키는 세포들 (U937)과, 또는 검출가능한 수준의 CD33을 발현시키는 세포들 (Jeko 또는 Jeko-1)과, 6 시간 동안 공-발현될 때 측정되었다. 결과들은 도 4 내지 도 6에 나타나 있다.

도 4는 CAR+ T-세포들이 CD33 expressing 세포들 (U937)과, 또는 CD33를 발현시키지 않는 세포들 (Jeko)과 6 시간 동안 공-배양되었을 때, 세 아키텍쳐들 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통(transmembrane), v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)과 M195 scFv의 탈과립 활성 (% CD8/CD107a+ 세포들 및 CD8+ 세포들에서 MFI CD107a)을 보여준다. 데이터들은 평균 형광 활성 (MFI) 및 탈과립의 퍼센트(%)로 나타낸다.

도 5는 CAR+ T-세포들이 CD33를 발현시키는 세포들 (U937), 또는 CD33를 발현시키지 않는 세포들 (Jeko)과 6 시간 동안 공-배양되었을 때, 세 개의 아키텍쳐들 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통, v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)과 m2H12 및 My9.6 scFvs의 탈과립 활성 (% CD8/CD107a+ 세포들 및 MFI CD107a in CD8+ 세포들)을 보여준다. 데이터들은 평균 형광 활성 (MFI) 및 탈과립의 퍼센트(%)로 나타낸다.

도 6은 CAR+ T-세포들이 CD33를 높은 또는 중간 수준들로 발현시키는 세포들 (각각 U937 및 K562), 또는 CD33을 발현시키지 않는 세포들(Jeko-1)과 6 시간 동안 공-배양되었을 때, 7 개의 구조들(construction) : M195-V1, M195-V3, M195-V5, m2H12-V1, m2H12-V3 및 My9.6-V1 및 My9.6-V3 (v1: FcgRIII-힌지/CD8-막관통, v3: CD8-힌지/CD8-막관통, v5: IgG1-힌지/CD8-막관통)의 탈과립 활성 (% CD8/CD107a+ 세포들)을 보여준다. 데이터들은 평균 형광 활성 (MFI) 및 탈과립의 퍼센트(%)로 나타낸다.

M195, M2H12 , 및 My9 .6 로부터 유래된 항-CD33 scFv 항체 단편들을 이용하여 만들어진 CD33 CAR을 발현시키는 T 세포들에 의하여 유도된 세포 용해( lysis ) 및 인터페론 감마 방출

이를 위하여, 여러 기증자들로부터의 T-세포들이 버피-코트 샘플들로붜ㅌ 분리되었고 CD3/CD28 비드들을 이용하여 활성화되었다. 세포들은 활성화 11 후(D11) 다른 후보들을 코드하는 mRNA들로 일시적으로 형질주입되었다.

CAR 활성은 하기와 같이 CD33의 여러가지 수준들을 발현시키는 세포들과 공-배양될 때, IFN 감마 방출 및 세포독성 활성을 측정함으로써 평가되었다.

- IFN 감마 방출 분석

항-CD33 CAR-발현시키는 T-세포들이 CD33 단백질의 여러가지 수준들을 발현시키는 세포주들과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 공-배양들이 5% CO2로 37 ℃에서 24 시간 동안 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다. 이 배양 기간 후 플레이트들이 1500 rpm으로 5 분 동안 원심분리되었고 상청액들이 새 플레이트에서 회수되었다. 세포 배양물 상청액들에서 IFN 감마 검출이 ELISA 분석에 의하여 이루어졌다. IFN 감마 방출 분석들은 mRNA 형질주입(transfection) 24 시간(h) 후 세포 공-배양물을 시작함으로써 수행되었다.

도 7은 다른 수준들의 CD33을 발현시키는 세포들 (U937 및 K562) 또는 CD33을 발현시키지 않는 세포들 (Jeko-1)과 24 시간(h) 공-배양될 때, CD33 car T-세포들 (T 세포들) 에 의하여 방출되는 IFN 감마의 양을 보여준다. 공동-배양물들의 동일 조건들 하 단독 배양된 T-세포들로부터의 IFN 감마 방출은이 또한 보여진다. 시험들은 세 독립적 기증자들에 대하여 이루어졌으며 대표적인 기증자로부터의 결과들이 여기에 보여진다.

M195, M2H12, 및 My9.6로부터 유래된 항-CD33 scFv 항체 단편들을 이용하여 만들어진 CD33 CAR를 발현시키는 T 세포들이 그 다음에 타겟 암 세포들을 발현시키는 CD33+ 을 용해시키는 그것들의 능력에 대해 테스트되었다(U937: 하기와 같이 만성 골수성 백혈병 (CML)을 갖는 환자로부터 유래된 인간 백혈병 단핵구(monocyte) 림프종 세포 및 K562 인간 백혈병 세포.

- 세포독성 분석

항-CD33 CAR-발현시키는 T-세포들이 동일한 웰에서 10,000 대조군 (CD33음성(neg)) 세포들 및 (CD33을 발현시키는) 10,000 타겟 세포들과 함께 96-웰 플레이트들 (100,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 타겟 및 대조군 세포들이 그것들과 CAR+ T-세포들의 공동배양 전에 형광 세포내 염료들 (CFSE 또는 Cell Trace Violet)로 표지되었다. 공-배양물들은 5% CO2로 37 ℃에서 4 시간 동안 배양되었다. 이 배양 기간 후, 세포들이 고정가능한 생존능 염료로 표지되었고 유동세포분석법에 의하여 분석되었다. 각 세포 군집의 생존능(타겟 세포들 또는 CD33음성(neg) 대조군 세포들)이 결정되었고 특이적 세포 용해의 %가 계산되었다. 세포독성 분석들이 mRNA 형질주입(transfection) 48 시간 후 수행되었다.

도 8은 CAR-T 세포들의 특이적 세포독성 활성을 보여준다. 분석들은 CAR mRNA 형질주입 48 시간 후 이루어졌다. T-세포들이 4 시간 동안 U937+Jeko 또는 K562+Jeko 세포들과 공-배양되었다. 각 세포주들에 대한 세포 생존능이 공-배양의 말에 결정되었고 특이적 세포 용해 퍼센트가 계산되었다.

모든 구조들(constructions)이 다른 CARS보다 대조군에 비교하여 전체적으로 더 높은 활성을 보이는 My9.6 V3 (My9.6-3, 서열번호 68) CAR와 활성이었다.

상기 예들은 CD33에 결합하는 VH-링커-VL 서열을 포함하는 전형적인 예인 CAR 구조체들 (V1, V3 및 V5)이 모든 분석에서 활성이라는 것을 입증한다. 구조체들 V1 및 V3을 갖는 CAR들이 탈과립 분석, INFy 방출 분석 및 세포독성 분석에서 특히 활성으로 발견되었다 도 4 내지 8 참조. 본 발명은 그러므로 암 세포들에 대항하여 활성인 항-CD33 CAR 발현시키는 T 세포를 제공한다.

CAR 폴리펩타이드 서열들의 예들

참고문헌들

Arimondo, P. B., C. J. Thomas, et al. (2006). "Exploring the cellular activity of camptothecin-triple-helix-forming oligonucleotide conjugates." Mol Cell Biol 26(1): 324-33.

Atkins, J. F., N. M. Wills, et al. (2007). "A case for "StopGo": reprogramming translation to augment codon meaning of GGN by promoting unconventional termination (Stop) after addition of glycine and then allowing continued translation (Go)." Rna 13(6): 803-10.

Bierer, B. E., G. Hollander, et al. (1993). "Cyclosporin A and FK506: molecular mechanisms of immunosuppression and probes for transplantation biology." Curr Opin Immunol 5(5): 763-73.

Boch, J., H. Scholze, et al. (2009). "Breaking the code of DNA binding specificity of TAL-type III effectors." Science 326(5959): 1509-12.

Choulika, A., A. Perrin, et al. (1995). "Induction of homologous recombination in mammalian chromosomes by using the I-SceI system of Saccharomyces cerevisiae." Mol Cell Biol 15(4): 1968-73.

Christian, M., T. Cermak, et al. (2010). "Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases." Genetics 186(2): 757-61.

Cong, L., F. A. Ran, et al. (2013). "Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems." Science 339(6121): 819-23.

Cros, E. et al. (2004)."Problems related to resistance to cytarabine in acute myeloid leukemia". Leukemia & Lymphoma. 45(6):1123-1132.

Deltcheva, E., K. Chylinski, et al. (2011). "CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III." Nature 471(7340): 602-7.

Donnelly, M. and G. Elliott (2001). "Nuclear localization and shuttling of herpes simplex virus tegument protein VP13/14." J Virol 75(6): 2566-74.

Doronina, V. A., C. Wu, et al. (2008). "Site-specific release of nascent chains from ribosomes at a sense codon." Mol Cell Biol 28(13): 4227-39.

Eisenschmidt, K., T. Lanio, et al. (2005). "Developing a programmed restriction endonuclease for highly specific DNA cleavage." Nucleic Acids Res 33(22): 7039-47.

Gardin, C. et al. (2007). "Postremission treatment of elderly patients with acute myeloid leukemia in first complete remission after intensive induction chemotherapy:results of the multicenter randomized Acute Leukemia French Association (ALFA) 9803 trial". Blood. 109(12):5129-5135.

Garneau, J. E., M. E. Dupuis, et al. (2010). "The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA." Nature 468(7320): 67-71.

Gasiunas, G., R. Barrangou, et al. (2012). "Cas9-crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria." Proc Natl Acad Sci U S A 109(39): E2579-86.

Henderson, D. J., I. Naya, et al. (1991). "Comparison of the effects of FK-506, cyclosporin A and rapamycin on IL-2 production." Immunology 73(3): 316-21.

Jena, B., G. Dotti, et al. (2010). "Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor-specific chimeric antigen receptor." Blood 116(7): 1035-44.

Jinek, M., K. Chylinski, et al. (2012). "A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity." Science 337(6096): 816-21.

June, C. H. et al. (2011). "T Cells with Chimeric Antigen Receptors Have Potent Antitumor Effects and Can Establish Memory in Patients with Advanced Leukemia". Sci. Transl. Med. 3(95):ra73.

Kalish, J. M. and P. M. Glazer (2005). "Targeted genome modification via triple helix formation." Ann N Y Acad Sci 1058: 151-61.

Li, T., S. Huang, et al. (2011). "TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and FokI DNA-cleavage domain." Nucleic Acids Res 39(1): 359-72.

Liu, J., M. W. Albers, et al. (1992). "Inhibition of T cell signaling by immunophilin-ligand complexes correlates with loss of calcineurin phosphatase activity." Biochemistry 31(16): 3896-901.

Mali, P., L. Yang, et al. (2013). "RNA-guided human genome engineering via Cas9." Science 339(6121): 823-6.

Maniecki, M.B. et al.., (2011) "Is hepatotoxicity in patients treated with gemtuzumabozogamicin due to specific targeting of hepatocytes ?". Leukemia Research e84-e86.

Moscou, M. J. and A. J. Bogdanove (2009). "A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors." Science 326(5959): 1501.

Paques, F. and P. Duchateau (2007). "Meganucleases and DNA double-strand break-induced recombination: perspectives for gene therapy." Curr Gene Ther 7(1): 49-66.

Park, T. S., S. A. Rosenberg, et al. (2011). "Treating cancer with genetically engineered T cells." Trends Biotechnol 29(11): 550-7.

Peipp, M., D. Saul, et al. (2004). "Efficient eukaryotic expression of fluorescent scFv fusion proteins directed against CD antigens for FACS applications." J Immunol Methods 285(2): 265-80.

Perrin, A., M. Buckle, et al. (1993). "Asymmetrical recognition and activity of the I-SceI endonuclease on its site and on intron-exon junctions." Embo J 12(7): 2939-47.

Pingoud, A. and G. H. Silva (2007). "Precision genome surgery." Nat Biotechnol 25(7): 743-4.

Porteus, M. H. and D. Carroll (2005). "Gene targeting using zinc finger nucleases." Nat Biotechnol 23(8): 967-73.

Rouet, P., F. Smih, et al. (1994). "Introduction of double-strand breaks into the genome of mouse cells by expression of a rare-cutting endonuclease." Mol Cell Biol 14(12): 8096-106.

Schwemmlein. M. et al. (2006). "A CD33-specific single-chain immunotoxin mediates potent apoptosis of cultured human myeloid leukaemia cells". British Journal of Haematology. 133(2): 141?151

Sorek, R., C. M. Lawrence, et al. (2013). "CRISPR-mediated Adaptive Immune Systems in Bacteria and Archaea." Annu Rev Biochem.

Stoddard, B. L. (2005). "Homing endonuclease structure and function." Q Rev Biophys 38(1): 49-95.

Vitale, C. et al. (2001). ”Surface expression and function of p75/AIRM-1 or CD33 in acute myeloid leukemias: engagement of CD33 induces apoptosis of leukemic cells”. PNAS 98:5764-5769.

<110> CELLECTIS <120> CD33 SPECIFIC CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS FOR CANCER IMMUNOTHERAPY <130> P81401908PCT00 <150> PA201470171 <151> 2014-04-03 <160> 87 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> signal peptide, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 1 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly 20 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> signal peptide, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 2 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro 20 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> FcgRIIIa hinge <400> 3 Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln 1 5 10 15 <210> 4 <211> 45 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(45) <400> 4 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 35 40 45 <210> 5 <211> 231 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(231) <223> IgG1 hinge <400> 5 Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30 Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 85 90 95 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 100 105 110 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 115 120 125 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 180 185 190 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 195 200 205 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(24) <223> CD8alpha transmembrane domain <400> 6 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 20 <210> 7 <211> 27 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(27) <223> 41BB transmembrane domain <400> 7 Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu 1 5 10 15 Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 20 25 <210> 8 <211> 42 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(42) <223> Fragment of 4-1BB (residues 214-255) <400> 8 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(112) <223> fragment of T-cell surface glycoprotein CD3 zeta chain <400> 9 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 10 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 11 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195 heavy chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 11 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser 115 <210> 12 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195 light chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 12 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 13 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12 heavy chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 13 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12 light chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 14 Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 15 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2 heavy chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 15 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2 light chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 16 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 105 110 Thr Val Ser 115 <210> 17 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6 heavy chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 17 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6 light chain variable region, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 18 Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser 20 25 30 Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln 85 90 95 Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 19 <211> 436 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-1 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 19 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly 245 250 255 Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 260 265 270 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 275 280 285 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 290 295 300 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 305 310 315 320 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 325 330 335 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 340 345 350 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 355 360 365 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 370 375 380 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 385 390 395 400 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 405 410 415 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 420 425 430 Leu Pro Pro Arg 435 <210> 20 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-2 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 20 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly 245 250 255 Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 260 265 270 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 275 280 285 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 290 295 300 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 305 310 315 320 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 325 330 335 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 340 345 350 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 355 360 365 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 370 375 380 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 385 390 395 400 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 405 410 415 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 420 425 430 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 <210> 21 <211> 465 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-3 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 21 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile 275 280 285 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 290 295 300 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 305 310 315 320 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 325 330 335 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 340 345 350 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 355 360 365 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 370 375 380 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 385 390 395 400 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 405 410 415 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 420 425 430 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 435 440 445 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 450 455 460 Arg 465 <210> 22 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-4 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 22 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile 275 280 285 Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu 290 295 300 Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys 305 310 315 320 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 325 330 335 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 340 345 350 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 355 360 365 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 370 375 380 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 385 390 395 400 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 405 410 415 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 420 425 430 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 435 440 445 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 450 455 460 Leu Pro Pro Arg 465 <210> 23 <211> 651 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-5 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 23 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 245 250 255 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 260 265 270 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275 280 285 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 290 295 300 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 320 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 325 330 335 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 345 350 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 355 360 365 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 370 375 380 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390 395 400 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 405 410 415 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420 425 430 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 435 440 445 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 450 455 460 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu 465 470 475 480 Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr 485 490 495 Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 500 505 510 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 515 520 525 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 530 535 540 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 545 550 555 560 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 565 570 575 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 580 585 590 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 595 600 605 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 610 615 620 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 625 630 635 640 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 <210> 24 <211> 654 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-6 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 24 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 130 135 140 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val 145 150 155 160 Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu 195 200 205 Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln 210 215 220 Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 225 230 235 240 Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 245 250 255 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 260 265 270 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275 280 285 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 290 295 300 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 320 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 325 330 335 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 345 350 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 355 360 365 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 370 375 380 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390 395 400 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 405 410 415 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420 425 430 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 435 440 445 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 450 455 460 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala 465 470 475 480 Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg 485 490 495 Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 500 505 510 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 515 520 525 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 530 535 540 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 545 550 555 560 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 565 570 575 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 580 585 590 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 595 600 605 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 610 615 620 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 625 630 635 640 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 <210> 25 <211> 434 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-1 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 25 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln 245 250 255 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 260 265 270 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 275 280 285 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 290 295 300 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 305 310 315 320 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 325 330 335 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 340 345 350 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 355 360 365 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 370 375 380 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 385 390 395 400 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 405 410 415 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 420 425 430 Pro Arg <210> 26 <211> 437 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-2 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 26 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln 245 250 255 Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu 260 265 270 Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys 275 280 285 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 290 295 300 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 305 310 315 320 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 325 330 335 Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 340 345 350 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 355 360 365 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 370 375 380 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 385 390 395 400 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 420 425 430 Ala Leu Pro Pro Arg 435 <210> 27 <211> 463 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-3 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 27 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 245 250 255 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 260 265 270 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile 275 280 285 Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val 290 295 300 Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 305 310 315 320 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 325 330 335 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 340 345 350 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 355 360 365 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 370 375 380 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 385 390 395 400 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 405 410 415 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 420 425 430 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 435 440 445 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 28 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-4 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 28 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 245 250 255 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 260 265 270 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser 275 280 285 Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe 290 295 300 Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 305 310 315 320 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 325 330 335 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 340 345 350 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 355 360 365 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 370 375 380 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 385 390 395 400 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 405 410 415 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 420 425 430 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 435 440 445 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 450 455 460 Pro Arg 465 <210> 29 <211> 649 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-5 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 29 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 305 310 315 320 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 370 375 380 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 465 470 475 480 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 485 490 495 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 500 505 510 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 515 520 525 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 530 535 540 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 545 550 555 560 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 565 570 575 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 580 585 590 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 595 600 605 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 610 615 620 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 625 630 635 640 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 <210> 30 <211> 652 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-6 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 30 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp 145 150 155 160 Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 165 170 175 Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 210 215 220 Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 305 310 315 320 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 370 375 380 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 465 470 475 480 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 485 490 495 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 500 505 510 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 515 520 525 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 530 535 540 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 545 550 555 560 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 565 570 575 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 580 585 590 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 595 600 605 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 610 615 620 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 625 630 635 640 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 <210> 31 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-1 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 31 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Gly Leu Ala Val Ser Thr 245 250 255 Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 260 265 270 Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 275 280 285 Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 290 295 300 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 305 310 315 320 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 325 330 335 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 340 345 350 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 355 360 365 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 370 375 380 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 385 390 395 400 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 405 410 415 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 420 425 430 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 440 <210> 32 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-2 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 32 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Gly Leu Ala Val Ser Thr 245 250 255 Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu 260 265 270 Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu 275 280 285 Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 290 295 300 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 305 310 315 320 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 325 330 335 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 340 345 350 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 355 360 365 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 370 375 380 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 385 390 395 400 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 405 410 415 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 420 425 430 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 440 445 <210> 33 <211> 473 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-3 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 33 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu 260 265 270 Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 275 280 285 Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 290 295 300 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 305 310 315 320 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 325 330 335 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 340 345 350 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 355 360 365 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 370 375 380 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 385 390 395 400 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 405 410 415 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 420 425 430 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 435 440 445 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 450 455 460 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 34 <211> 476 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-4 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 34 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro 245 250 255 Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu 260 265 270 Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 275 280 285 Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 290 295 300 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 305 310 315 320 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 325 330 335 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 340 345 350 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 355 360 365 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 370 375 380 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 385 390 395 400 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 405 410 415 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 420 425 430 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 435 440 445 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 450 455 460 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 35 <211> 659 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-5 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 35 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Glu Pro Lys Ser Pro Asp 245 250 255 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 260 265 270 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala 275 280 285 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 290 295 300 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 305 310 315 320 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 325 330 335 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 340 345 350 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 355 360 365 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 370 375 380 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 385 390 395 400 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 405 410 415 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 420 425 430 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 435 440 445 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 450 455 460 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 465 470 475 480 Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 485 490 495 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 500 505 510 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 515 520 525 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 530 535 540 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 545 550 555 560 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 565 570 575 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 580 585 590 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 595 600 605 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 610 615 620 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 625 630 635 640 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 645 650 655 Pro Pro Arg <210> 36 <211> 662 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-6 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 36 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr 130 135 140 Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asp 165 170 175 Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Glu Leu 225 230 235 240 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Glu Pro Lys Ser Pro Asp 245 250 255 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 260 265 270 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala 275 280 285 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 290 295 300 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 305 310 315 320 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 325 330 335 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 340 345 350 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 355 360 365 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 370 375 380 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 385 390 395 400 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 405 410 415 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 420 425 430 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 435 440 445 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 450 455 460 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 465 470 475 480 Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe 485 490 495 Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg 500 505 510 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 515 520 525 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 530 535 540 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 545 550 555 560 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 565 570 575 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 580 585 590 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 595 600 605 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 610 615 620 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 625 630 635 640 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 645 650 655 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 <210> 37 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-1 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 37 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe 245 250 255 Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr 260 265 270 Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg 275 280 285 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 290 295 300 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 305 310 315 320 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 325 330 335 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 340 345 350 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 355 360 365 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 370 375 380 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 385 390 395 400 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 405 410 415 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 420 425 430 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 440 <210> 38 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-2 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 38 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe 245 250 255 Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser 260 265 270 Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val 275 280 285 Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 290 295 300 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 305 310 315 320 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 325 330 335 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 340 345 350 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 355 360 365 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 370 375 380 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 385 390 395 400 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 405 410 415 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 420 425 430 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 440 <210> 39 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-3 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 39 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val 290 295 300 Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys 305 310 315 320 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 325 330 335 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 340 345 350 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 355 360 365 Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 370 375 380 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 385 390 395 400 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 405 410 415 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 420 425 430 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 435 440 445 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 450 455 460 Ala Leu Pro Pro Arg 465 <210> 40 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-4 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 40 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 245 250 255 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 260 265 270 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 275 280 285 Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu 290 295 300 Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg 305 310 315 320 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 325 330 335 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 340 345 350 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 355 360 365 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 370 375 380 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 385 390 395 400 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 405 410 415 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 420 425 430 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 435 440 445 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 450 455 460 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 41 <211> 655 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-5 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 41 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr 245 250 255 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 260 265 270 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu 275 280 285 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 290 295 300 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 305 310 315 320 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 325 330 335 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 340 345 350 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 355 360 365 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 370 375 380 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 385 390 395 400 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 405 410 415 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 420 425 430 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 435 440 445 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 450 455 460 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile 465 470 475 480 Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val 485 490 495 Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 500 505 510 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 515 520 525 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 530 535 540 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 545 550 555 560 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 565 570 575 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 580 585 590 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 595 600 605 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 610 615 620 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 625 630 635 640 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 645 650 655 <210> 42 <211> 658 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9-6-6 polypeptide CAR sequence, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 42 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr 180 185 190 Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Ile 210 215 220 Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr 245 250 255 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 260 265 270 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu 275 280 285 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 290 295 300 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 305 310 315 320 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 325 330 335 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 340 345 350 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 355 360 365 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 370 375 380 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 385 390 395 400 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 405 410 415 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 420 425 430 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 435 440 445 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 450 455 460 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser 465 470 475 480 Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe 485 490 495 Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 500 505 510 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 515 520 525 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 530 535 540 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 545 550 555 560 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 565 570 575 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 580 585 590 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 595 600 605 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 610 615 620 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 625 630 635 640 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 645 650 655 Pro Arg <210> 43 <211> 49 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Target TALEN TRAC_T01, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 43 Thr Thr Gly Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly Ala Thr Ala Thr Cys 1 5 10 15 Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly 20 25 30 Cys Cys Gly Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Gly 35 40 45 Ala <210> 44 <211> 530 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TAL binding domain TRAC_T01-L, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 44 Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys 1 5 10 15 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 20 25 30 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly 35 40 45 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 50 55 60 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 65 70 75 80 Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val 85 90 95 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 100 105 110 Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 115 120 125 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 130 135 140 Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg 145 150 155 160 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 165 170 175 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 180 185 190 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu 195 200 205 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 210 215 220 Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 225 230 235 240 Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala 245 250 255 Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly 260 265 270 Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys 275 280 285 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 290 295 300 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly 305 310 315 320 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 325 330 335 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 340 345 350 Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val 355 360 365 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala 370 375 380 Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 385 390 395 400 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 405 410 415 Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala 420 425 430 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val 435 440 445 Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 450 455 460 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu 465 470 475 480 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 485 490 495 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 500 505 510 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ala 515 520 525 Leu Glu 530 <210> 45 <211> 530 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TAL binding domain TRAC_T01-R, description of Artificial Sequence: synthetic oligopeptide <400> 45 Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys 1 5 10 15 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 20 25 30 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly 35 40 45 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 50 55 60 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His 65 70 75 80 Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val 85 90 95 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 100 105 110 Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu 115 120 125 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala 130 135 140 Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg 145 150 155 160 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 165 170 175 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 180 185 190 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln 195 200 205 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 210 215 220 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 225 230 235 240 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala 245 250 255 Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly 260 265 270 Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys 275 280 285 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 290 295 300 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly 305 310 315 320 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 325 330 335 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 340 345 350 Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val 355 360 365 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 370 375 380 Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 385 390 395 400 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 405 410 415 Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala 420 425 430 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 435 440 445 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 450 455 460 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln 465 470 475 480 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 485 490 495 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 500 505 510 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ala 515 520 525 Leu Glu 530 <210> 46 <211> 2814 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding TRAC_T01-L TALEN, description of Artificial Sequence: synthetic polynucleotide <400> 46 atgggcgatc ctaaaaagaa acgtaaggtc atcgattacc catacgatgt tccagattac 60 gctatcgata tcgccgatct acgcacgctc ggctacagcc agcagcaaca ggagaagatc 120 aaaccgaagg ttcgttcgac agtggcgcag caccacgagg cactggtcgg ccacgggttt 180 acacacgcgc acatcgttgc gttaagccaa cacccggcag cgttagggac cgtcgctgtc 240 aagtatcagg acatgatcgc agcgttgcca gaggcgacac acgaagcgat cgttggcgtc 300 ggcaaacagt ggtccggcgc acgcgctctg gaggccttgc tcacggtggc gggagagttg 360 agaggtccac cgttacagtt ggacacaggc caacttctca agattgcaaa acgtggcggc 420 gtgaccgcag tggaggcagt gcatgcatgg cgcaatgcac tgacgggtgc cccgctcaac 480 ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag 540 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg 600 gtggccatcg ccagcaataa tggtggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 660 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccccagcagg tggtggccat cgccagcaat 720 ggcggtggca agcaggcgct ggagacggtc cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc 780 cacggcttga ccccggagca ggtggtggcc atcgccagcc acgatggcgg caagcaggcg 840 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 900 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 960 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc 1020 agccacgatg gcggcaagca ggcgctggag acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc 1080 caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg gtggccatcg ccagcaatat tggtggcaag 1140 caggcgctgg agacggtgca ggcgctgttg ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc 1200 ccggagcagg tggtggccat cgccagccac gatggcggca agcaggcgct ggagacggtc 1260 cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc cacggcttga ccccggagca ggtggtggcc 1320 atcgccagca atattggtgg caagcaggcg ctggagacgg tgcaggcgct gttgccggtg 1380 ctgtgccagg cccacggctt gaccccccag caggtggtgg ccatcgccag caataatggt 1440 ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 1500 ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc agcaatattg gtggcaagca ggcgctggag 1560 acggtgcagg cgctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg 1620 gtggccatcg ccagcaatgg cggtggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 1680 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagcaat 1740 attggtggca agcaggcgct ggagacggtg caggcgctgt tgccggtgct gtgccaggcc 1800 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca atggcggtgg caagcaggcg 1860 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 1920 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 1980 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgacccctc agcaggtggt ggccatcgcc 2040 agcaatggcg gcggcaggcc ggcgctggag agcattgttg cccagttatc tcgccctgat 2100 ccggcgttgg ccgcgttgac caacgaccac ctcgtcgcct tggcctgcct cggcgggcgt 2160 cctgcgctgg atgcagtgaa aaagggattg ggggatccta tcagccgttc ccagctggtg 2220 aagtccgagc tggaggagaa gaaatccgag ttgaggcaca agctgaagta cgtgccccac 2280 gagtacatcg agctgatcga gatcgcccgg aacagcaccc aggaccgtat cctggagatg 2340 aaggtgatgg agttcttcat gaaggtgtac ggctacaggg gcaagcacct gggcggctcc 2400 aggaagcccg acggcgccat ctacaccgtg ggctccccca tcgactacgg cgtgatcgtg 2460 gacaccaagg cctactccgg cggctacaac ctgcccatcg gccaggccga cgaaatgcag 2520 aggtacgtgg aggagaacca gaccaggaac aagcacatca accccaacga gtggtggaag 2580 gtgtacccct ccagcgtgac cgagttcaag ttcctgttcg tgtccggcca cttcaagggc 2640 aactacaagg cccagctgac caggctgaac cacatcacca actgcaacgg cgccgtgctg 2700 tccgtggagg agctcctgat cggcggcgag atgatcaagg ccggcaccct gaccctggag 2760 gaggtgagga ggaagttcaa caacggcgag atcaacttcg cggccgactg ataa 2814 <210> 47 <211> 2832 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding TRAC_T01-R TALEN, description of Artificial Sequence: synthetic polynucleotide <400> 47 atgggcgatc ctaaaaagaa acgtaaggtc atcgataagg agaccgccgc tgccaagttc 60 gagagacagc acatggacag catcgatatc gccgatctac gcacgctcgg ctacagccag 120 cagcaacagg agaagatcaa accgaaggtt cgttcgacag tggcgcagca ccacgaggca 180 ctggtcggcc acgggtttac acacgcgcac atcgttgcgt taagccaaca cccggcagcg 240 ttagggaccg tcgctgtcaa gtatcaggac atgatcgcag cgttgccaga ggcgacacac 300 gaagcgatcg ttggcgtcgg caaacagtgg tccggcgcac gcgctctgga ggccttgctc 360 acggtggcgg gagagttgag aggtccaccg ttacagttgg acacaggcca acttctcaag 420 attgcaaaac gtggcggcgt gaccgcagtg gaggcagtgc atgcatggcg caatgcactg 480 acgggtgccc cgctcaactt gaccccggag caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc 540 ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 600 ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag 660 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg 720 gtggccatcg ccagccacga tggcggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 780 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagcaat 840 attggtggca agcaggcgct ggagacggtg caggcgctgt tgccggtgct gtgccaggcc 900 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca ataatggtgg caagcaggcg 960 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 1020 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 1080 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc 1140 agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc 1200 caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg gtggccatcg ccagcaataa tggtggcaag 1260 caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc 1320 ccccagcagg tggtggccat cgccagcaat aatggtggca agcaggcgct ggagacggtc 1380 cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc 1440 atcgccagca atggcggtgg caagcaggcg ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg 1500 ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag caggtggtgg ccatcgccag caatattggt 1560 ggcaagcagg cgctggagac ggtgcaggcg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 1620 ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc agccacgatg gcggcaagca ggcgctggag 1680 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg 1740 gtggccatcg ccagcaatat tggtggcaag caggcgctgg agacggtgca ggcgctgttg 1800 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagccac 1860 gatggcggca agcaggcgct ggagacggtc cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc 1920 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca ataatggtgg caagcaggcg 1980 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gacccctcag 2040 caggtggtgg ccatcgccag caatggcggc ggcaggccgg cgctggagag cattgttgcc 2100 cagttatctc gccctgatcc ggcgttggcc gcgttgacca acgaccacct cgtcgccttg 2160 gcctgcctcg gcgggcgtcc tgcgctggat gcagtgaaaa agggattggg ggatcctatc 2220 agccgttccc agctggtgaa gtccgagctg gaggagaaga aatccgagtt gaggcacaag 2280 ctgaagtacg tgccccacga gtacatcgag ctgatcgaga tcgcccggaa cagcacccag 2340 gaccgtatcc tggagatgaa ggtgatggag ttcttcatga aggtgtacgg ctacaggggc 2400 aagcacctgg gcggctccag gaagcccgac ggcgccatct acaccgtggg ctcccccatc 2460 gactacggcg tgatcgtgga caccaaggcc tactccggcg gctacaacct gcccatcggc 2520 caggccgacg aaatgcagag gtacgtggag gagaaccaga ccaggaacaa gcacatcaac 2580 cccaacgagt ggtggaaggt gtacccctcc agcgtgaccg agttcaagtt cctgttcgtg 2640 tccggccact tcaagggcaa ctacaaggcc cagctgacca ggctgaacca catcaccaac 2700 tgcaacggcg ccgtgctgtc cgtggaggag ctcctgatcg gcggcgagat gatcaaggcc 2760 ggcaccctga ccctggagga ggtgaggagg aagttcaaca acggcgagat caacttcgcg 2820 gccgactgat aa 2832 <210> 48 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-1 <400> 48 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 275 280 285 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 290 295 300 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 305 310 315 320 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 325 330 335 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 340 345 350 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 355 360 365 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 370 375 380 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 385 390 395 400 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 405 410 415 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 420 425 430 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 435 440 445 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 49 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-2 <400> 49 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 275 280 285 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 290 295 300 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 305 310 315 320 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 325 330 335 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 340 345 350 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 355 360 365 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 370 375 380 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 50 <211> 486 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-3 <400> 50 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 305 310 315 320 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 325 330 335 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 340 345 350 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 355 360 365 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 370 375 380 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 385 390 395 400 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 405 410 415 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 420 425 430 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 435 440 445 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 450 455 460 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 465 470 475 480 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 51 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-4 <400> 51 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala 305 310 315 320 Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys 325 330 335 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 340 345 350 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 355 360 365 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 370 375 380 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 385 390 395 400 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 405 410 415 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 420 425 430 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 435 440 445 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 450 455 460 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 465 470 475 480 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 52 <211> 672 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-5 <400> 52 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr 485 490 495 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 500 505 510 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 515 520 525 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 530 535 540 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 545 550 555 560 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 565 570 575 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 580 585 590 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 595 600 605 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 610 615 620 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 625 630 635 640 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 645 650 655 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 53 <211> 675 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M195-6 <400> 53 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Asp Val Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala 225 230 235 240 Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile 485 490 495 Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe 500 505 510 Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 515 520 525 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 530 535 540 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 545 550 555 560 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 565 570 575 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 580 585 590 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 595 600 605 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 610 615 620 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 625 630 635 640 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 645 650 655 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 660 665 670 Pro Pro Arg 675 <210> 54 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-1 <400> 54 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 275 280 285 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 290 295 300 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 305 310 315 320 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 340 345 350 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 355 360 365 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 370 375 380 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 405 410 415 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 420 425 430 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 435 440 445 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 55 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-2 <400> 55 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 275 280 285 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 56 <211> 484 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-3 <400> 56 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 305 310 315 320 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 325 330 335 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 340 345 350 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 355 360 365 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 370 375 380 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 385 390 395 400 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 405 410 415 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 420 425 430 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 435 440 445 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 450 455 460 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 465 470 475 480 Leu Pro Pro Arg <210> 57 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-4 <400> 57 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 305 310 315 320 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 58 <211> 670 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-5 <400> 58 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp 485 490 495 Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 500 505 510 Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 515 520 525 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 530 535 540 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 545 550 555 560 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 565 570 575 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 580 585 590 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 595 600 605 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 610 615 620 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 625 630 635 640 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 645 650 655 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 59 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> m2H12-6 <400> 59 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Thr Phe Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Asn Tyr Asp Ile Asn Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asn Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Tyr Glu Asp Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ile Ile Asn Cys 165 170 175 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val 195 200 205 Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 245 250 255 Leu Glu Leu Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe 485 490 495 Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu 500 505 510 Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 60 <211> 465 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-1 <400> 60 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Gly 260 265 270 Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile 275 280 285 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 290 295 300 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 305 310 315 320 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 325 330 335 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 340 345 350 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 355 360 365 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 370 375 380 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 385 390 395 400 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 405 410 415 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 420 425 430 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 435 440 445 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 450 455 460 Arg 465 <210> 61 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-2 <400> 61 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Gly 260 265 270 Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile 275 280 285 Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu 290 295 300 Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys 305 310 315 320 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 325 330 335 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 340 345 350 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 355 360 365 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 370 375 380 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 385 390 395 400 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 405 410 415 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 420 425 430 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 435 440 445 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 450 455 460 Leu Pro Pro Arg 465 <210> 62 <211> 494 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-3 <400> 62 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Thr 260 265 270 Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser 275 280 285 Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 290 295 300 Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp 305 310 315 320 Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 325 330 335 Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 340 345 350 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 355 360 365 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 370 375 380 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 385 390 395 400 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 405 410 415 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 420 425 430 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 435 440 445 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 450 455 460 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 465 470 475 480 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 63 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-4 <400> 63 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Thr 260 265 270 Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser 275 280 285 Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly 290 295 300 Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe 305 310 315 320 Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu 325 330 335 Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 340 345 350 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 355 360 365 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 370 375 380 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 385 390 395 400 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 405 410 415 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 420 425 430 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 435 440 445 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 450 455 460 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 465 470 475 480 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 485 490 495 Arg <210> 64 <211> 680 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-5 <400> 64 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Glu 260 265 270 Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 275 280 285 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 290 295 300 Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 305 310 315 320 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 325 330 335 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 340 345 350 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 355 360 365 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 370 375 380 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 385 390 395 400 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 405 410 415 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 420 425 430 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 435 440 445 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 450 455 460 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 465 470 475 480 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 485 490 495 Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr 500 505 510 Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg 515 520 525 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 530 535 540 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 545 550 555 560 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 565 570 575 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 580 585 590 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 595 600 605 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 610 615 620 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 625 630 635 640 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 645 650 655 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 660 665 670 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 680 <210> 65 <211> 683 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DRB2-6 <400> 65 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Lys Phe Thr Asp Tyr Val Val His Trp Leu Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Ser Gly Asp Ser Pro Leu Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys 195 200 205 Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly 245 250 255 Thr Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Glu 260 265 270 Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 275 280 285 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 290 295 300 Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 305 310 315 320 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 325 330 335 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 340 345 350 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 355 360 365 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 370 375 380 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 385 390 395 400 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 405 410 415 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 420 425 430 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 435 440 445 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 450 455 460 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 465 470 475 480 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 485 490 495 Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser 500 505 510 Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val 515 520 525 Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 530 535 540 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 545 550 555 560 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 565 570 575 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 580 585 590 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 595 600 605 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 610 615 620 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 625 630 635 640 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 645 650 655 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 660 665 670 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 680 <210> 66 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-1 <400> 66 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser 260 265 270 Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala 275 280 285 Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr 290 295 300 Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 305 310 315 320 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 325 330 335 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 340 345 350 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 355 360 365 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 370 375 380 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 385 390 395 400 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 405 410 415 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 420 425 430 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 435 440 445 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 67 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-2 <400> 67 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser 260 265 270 Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr 290 295 300 Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 340 345 350 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 355 360 365 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 370 375 380 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 385 390 395 400 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 68 <211> 490 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-3 <400> 68 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala 260 265 270 Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser 275 280 285 Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr 290 295 300 Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 305 310 315 320 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 325 330 335 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 340 345 350 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 355 360 365 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 370 375 380 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 385 390 395 400 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 405 410 415 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 420 425 430 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 435 440 445 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 450 455 460 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 465 470 475 480 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 69 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-4 <400> 69 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala 260 265 270 Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser 275 280 285 Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr 290 295 300 Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu 305 310 315 320 Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe 325 330 335 Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 340 345 350 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 355 360 365 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 370 375 380 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 405 410 415 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 420 425 430 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 435 440 445 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 450 455 460 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 465 470 475 480 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 70 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-5 <400> 70 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 485 490 495 Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 500 505 510 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 515 520 525 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 530 535 540 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 545 550 555 560 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 565 570 575 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 580 585 590 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 595 600 605 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 610 615 620 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 625 630 635 640 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 645 650 655 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 660 665 670 Leu Pro Pro Arg 675 <210> 71 <211> 679 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> My9.6-6 <400> 71 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 115 120 125 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Met Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser 165 170 175 Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr 180 185 190 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 195 200 205 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 225 230 235 240 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 485 490 495 Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 500 505 510 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 515 520 525 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 530 535 540 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 545 550 555 560 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 565 570 575 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 580 585 590 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 595 600 605 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 610 615 620 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 625 630 635 640 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 645 650 655 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 660 665 670 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 72 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TALEN1_CD33_Exon3 <400> 72 tgcatcccct ctttctcctc actagacttg acccacaggc ccaa 44 <210> 73 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TALEN2_CD33_Exon3 <400> 73 ttctcctcac tagacttgac ccacaggccc aaaatcctca tccctggca 49 <210> 74 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TALEN1_CD33_Exon4 <400> 74 tcctctccta gatgttccac agaacccaac aactggtatc tttccagga 49 <210> 75 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TALEN2_CD33_Exon4 <400> 75 tcctagatgt tccacagaac ccaacaactg gtatctttcc agga 44 <210> 76 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN1 Left exon 3 <400> 76 tgcatcccct ctttctc 17 <210> 77 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN2 Left exon 3 <400> 77 ttctcctcac tagactt 17 <210> 78 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN1 Left exon 4 <400> 78 tcctctccta gatgttc 17 <210> 79 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN2 Left exon 4 <400> 79 tcctagatgt tccacag 17 <210> 80 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> spacer 1 (Exon3) <400> 80 ctcactagac 10 <210> 81 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> spacer2 (Exon3) <400> 81 gacccacagg cccaa 15 <210> 82 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> spacer 1 (Exon4) <400> 82 cacagaaccc aacaa 15 <210> 83 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> spacer 2 (Exon4) <400> 83 aacccaacaa 10 <210> 84 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN1 right exon 3 <400> 84 ttgacccaca ggcccaa 17 <210> 85 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN2 right exon 3 <400> 85 aatcctcatc cctggca 17 <210> 86 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN1 right exon 4 <400> 86 ctggtatctt tccagga 17 <210> 87 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence bound by TALEN2 right exon 4 <400> 87 ctggtatctt tccagga 17

Claims

도 2에 나타낸 대로 V1, V3 및 V5 로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나와 적어도 80% 동일성을 갖는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR)로, 상기 구조체는 : (a) 단일클론 항-CD33 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, (b) FcRIIIα 힌지, CD8α 힌지, 및 IgG1 힌지로부터 선택되는 힌지, (c) CD8α 막관통 도메인 및 (d) 4-1BB로부터의 공동-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인을 포함하는 CD33 특이적 키메라 항원 수용체 (CAR).
제 1항에 있어서,
상기 구조체 V3는 CD8α 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함하는 CD33 특이적 CAR.
제 2항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CD8α 힌지는 서열번호 4와 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29 및 서열번호 30과 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는, 제 2항 또는 제 3항에 따른 구조체 V3의 CD33 특이적 CAR.
제 1항에 있어서,
상기 구조체 V1은 FcγRIIIα 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함하는 CD33 특이적 CAR.
제 5항에 있어서,
상기 FcγRIIIα 힌지는 서열번호 3과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21 and 서열번호 22와 적어도 80 % 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는, 제 5항 또는 제 6항에 따른 구조체 V1의 CD33 특이적 CAR.
제 1항에 있어서,
상기 구조체 V5는 IgG1 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함하는 CD33 특이적 CAR.
제 8항에 있어서,
상기 IgG1 힌지는 서열번호 5와 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37 및 서열번호 38과 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는, 제 8항 또는 제 9항에 따른 구조체 V5의 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH는 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15 and 서열번호 17로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열과 적어도 80 % 동일성을 갖고 그리고 상기 VL은 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16 and 서열번호 18로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서,
4-1BB로부터의 공동-자극 도메인은 서열번호 8과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인은 서열번호 9와 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CD8α 막관통 도메인은 서열번호 6과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
신호 펩타이드를 더 포함하는 CD33 특이적 CAR.
제 15항에 있어서,
상기 신호 펩타이드는 서열번호 1 또는 서열번호 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서,
CD33에 특이적이지 않은 또다른 세포외(extracellular) 리간드 결합 도메인을 포함하는 CD33 특이적 CAR.
제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 따른 CAR를 코드하는 폴리뉴클레오타이드.
제 18항에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 따른 CD33 특이적 CAR를 세포 표면 막에 발현시키는 조작된 면역 세포.
제 20항에 있어서,
염증성 T-림프구들, 세포독성 T-림프구들, 조절성 T-림프구들 또는 헬퍼 T-림프구들로부터 유래되는 조작된 면역 세포.
제 21항에 있어서,
TCR의 발현이 억제되는 조작된 면역 세포.
제 20항 내지 제 22항 중 어느 한 항에 있어서,
CD33의 발현이 억제되는 조작된 면역 세포.
제 20항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조작된 면역 세포는 적어도 하나의 면역 억제 또는 화학요법 약물에 내성으로 변형되는 조작된 면역 세포.
제 20항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서,
치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 25항에 있어서,
환자는 인간인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 25항 내지 제 26항 중 어느 한 항에 있어서,
질병은 CD33-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 전암상태(pre-malignant) 또는 악성(malignant) 암 질병인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 25항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 있어서,
질병은 과잉의 CD33-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 질병인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 25항 내지 제 28항 중 어느 한 항에 있어서,
질병은 혈액 암 질병인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 29항에 있어서,
혈액(haematological) 암 질병은 백혈병인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 30항에 있어서,
상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상(melodysplastic) 증후군, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 및 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 31항에 있어서,
상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병 (AML)인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 29항에 있어서,
상기 혈액 암은 악성(malignant) 림프증식성(lymphoproliferative) 장애인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 33항에 있어서,
상기 악성(malignant) 림프증식성(lymphoproliferative) 장애는 림프종인, 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
제 34항에 있어서,
상기 림프종은 다발성 골수종, 비(non)-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 및 여포성 림프종 (작은 세포 및 큰 세포)로 구성되는 군으로부터 선택되는 치료에의 사용을 위한 조작된 면역 세포.
상기 암 세포의 손상(impairment)을 야기하기 위하여 효과적인 양의 제 20항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 따른 조작된 면역 세포와 상기 혈액(hematologic) 암 세포을 접촉시키는 단계를 포함하는 혈액(hematologic) 암 세포를 손상시키는 방법.
(c) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 상기 세포의 표면에서 발현시키는 단계:
를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법.
(e) 면역 세포를 제공하는 단계,
(f) 상기 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 내로 도입시키는 단계,
(g) 선택적으로 상기 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 발현시키는, 상기 세포 내로 상기 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 단계:
를 포함하는, 제 37항의 면역 세포를 조작하는 방법.
(b) 면역 세포를 제공하는 단계,
(c) 상기 CD33 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 내로 도입시키는 단계,
(d) CD33에 특이적이지 않은 적어도 하나의 다른 키메라 항원 수용체을 도입시키는 단계:
를 포함하는 제 37항 또는 제 38항의 면역 세포를 조작하는 방법.
(c) 제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 따른 CD33 특이적 키메라 항원 수용체들을 표면에서 발현시키는 면역 세포를 제공하는 단계;
(d) 상기 환자에게 상기 면역 세포들을 투여하는 단계
를 포함하는 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법.
제 40항에 있어서,
상기 면역 세포는 기증자로부터 제공되는 방법.
제 40항에 있어서,
상기 면역 세포는 환자 자신으로부터 제공되는 방법.