KR20150022996A - 암 면역요법을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다량의 GM-CSF를 분비하도록 유전자조작된 동종이계 인간 종양 세포주와 함께 제형화된 스팅(인터페론 유전자의 자극제)으로서 알려진 최근에 발견된 세포질 수용체를 통해 DC를 활성화시키는 소분자 면역 자극제-사이클릭-다이-뉴클레오타이드(CDN)에 의존하는 병용요법을 제공한다. 이 병용요법은 강력한 DC 활성화 자극과 결합되어 다수의 종양 관련 항원, DC 동원 및 증식의 이상적인 상승효과를 제공할 수 있다.

Description

암 면역요법을 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR CANCER IMMUNOTHERAPY}

본 출원은 2012년 6월 8일 출원된 미국 가출원 특허 제61/657,574호에 대한 우선권을 주장하며, 이 기초출원은 표, 도면 및 특허청구범위를 모두 포함하여 본 명세서에 그 전문이 포함된다.

본 발명의 배경기술의 다음의 논의는 단지 본 발명을 이해함에 있어서 독자에게 도움을 주기 위해 제공되며, 본 발명에 대한 선행 기술을 기재하거나 또는 구성하기 위한 것으로 용인되지 않는다.

인간 면역계는 일반적으로 "선천성 면역(innate immunity)"과 "적응 면역(adaptive immunity)"으로서 지칭되는 2가지 부문으로 나누어질 수 있다. 면역계의 타고난 부문은 대부분 보체계 및 케모카인/사이토카인 시스템; 및 비만 세포, 대식세포, 수지상 세포(dendritic cell: DC), 및 자연살해세포를 포함하는 다수의 전문화된 세포 유형을 포함하는, 다수의 가용성 인자를 통해 초기 염증 반응을 초래한다. 대조적으로, 적응 면역 부문은 항원에 대한 면역 기억에서 중요한 역할을 하는 CD8+ 및 CD4+ T 세포 반응과 함께 지연되고 더 긴 지속적 항체 반응을 수반한다. 면역계의 세번째 부문은 γδ T 세포 및 제한된 T 세포 수용체 레퍼토리를 지니는 T 세포, 예컨대 NKT 세포 및 MAIT 세포를 수반하는 것으로 확인될 수 있다.

항원에 대해 효과적인 면역 반응을 위해, 항원 제시 세포(antigen presenting cell: APC)는 T 세포에 대해 적절한 MHC 환경에서 항원을 처리하고 나타내어야 하고, 이어서, 세포독성의 T 세포 자극 및 헬퍼 T 세포를 야기할 것이다. 항원 제시 후에, APC와 T 세포 둘 다에 대한 공동자극의 성공적인 상호작용이 일어나야 하거나 또는 활성화가 중단될 것이다. GM-CSF 및 IL-12는 다수의 종양 모델에서 효과적인 전염증 분자로서 작용한다. 예를 들어, T 세포의 활성화에 필요한 효과적인 항원-제시 세포로의 미엘로이드 전구체 세포의 성숙을 활성화하기 위해 추가적인 신호가 필요함에도 불구하고, GM-CSF는 미엘로이드 전구체 세포가 증식하고 수지상 세포(DC)로 분화되도록 유발한다. 효과적인 면역 요법에 대한 장벽은 적절한 규모 및 기능의 세포독성 CD8 T 세포 유발, 만들어진 T 세포의 악성 세포의 부위에 대한 불량한 수송, 및 유발된 T 세포 반응의 불량한 잔류성(persistence)을 제한할 수 있는 표적화된 항원에 대한 내성을 포함한다.

종양-세포 파편의 식균작용을 하는 DC는 주요 조직 적합 유전자 복합체(major histocompatibility complex: MHC) 제시를 위한 물질을 처리하고, 보조자극 분자의 발현을 상향조절하며, 종양-특이적 림프구를 자극하기 위한 구역 림프절을 이동시킨다. 이 경로는 종양관련항원과 반응하는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 증식 및 활성화를 야기한다. 사실, 이러한 세포는 환자의 혈액, 림프구 조직, 및 악성병변에서 빈번하게 검출될 수 있다.

면역 검사점 저해제 또는 다른 요법과 조합을 통해 -직접적으로 또는 간접적으로- 치료 백신접종의 효력을 높이는 병용 치료와 함께 면역 회피에 놓인 메커니즘에 대한 새로운 통찰력은 효과적인 항종양 면역을 유발하는 백신 개발을 위한 기초로서 작용하였다.

GM-CSF를 분비하도록 유전적으로 변형된 종양 세포는 종양에 효과적인 면역 반응을 만들기 위한 노력에서의 다양한 전략에서 사용되었지만, 그러나 전신 사이토카인 투여는 무작위 통제 시험(randomized controlled trial)에서 직접적인 항암 반응을 유발하지 않았다. 환자에 피하로 주사된 방사선조사 GM-CSF-분비 종양 세포는 DC, 대식세포 및 과립구를 포함하는 국소 반응을 자극하는 것으로 나타났다. 매우 다수의 APC 축적은 이 모델에서 GM-CSF의 한 가지 기능이 종양 항원 제시의 증가를 수반한다는 것을 시사한다. 게다가, 종양 세포 백신은 환자에서 안전한 것으로 나타났다. 그러나, 이 접근의 임상 효능은 아직 증명되고 있다.

감염과 관련하여, 톨-유사 수용체(Toll-like receptor: "TLR") 작용물질(agonist)은 수지상 세포 활성화 면역원성을 제공하는 것으로 나타난 반면, TLR 신호처리의 결여는 내성을 야기할 수 있다. 혼합 백신(combinatorial vaccine)의 일부로서 주어질 때 국소화된 TLR 자극이 항종양 반응을 향상시킬 수도 있다는 것이 이들 연구로부터의 암시된다. WO2011139769호는 TLR4 자극과 함께 조합된 GM-CSF-분비 종양 세포(GM-CSF-secreting tumor cell: GVAX) 백신의 제형 및 용도를 기재하는데, 이는 알려진 바에 의하면, 별개의 뮤린 모델에서 항종양 효능을 제공한다. 그러나 인간에서 그의 효능은 증명되어야 하는 채로 남아있다.

전통적인 치료적 접근으로는 곤란할 수 있는 암과 같은 질병을 치료하기 위한 면역학적 전략을 위한 개선된 조성물 및 방법에 대한 필요가 남아있다.

본 발명의 목적은 암 치료를 위한 병용 요법을 제공하는 것이다.

제1 양상에서, 본 발명은:

인터페론 유전자의 자극제(STimulator of INTerferon Gene: "스팅(STING)")에 결합하고, 스팅-의존적 TBK1 활성화를 유발하는 하나 이상의 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드(cyclic purine dinucleotide: "CDN"); 및

수지상 세포 유발, 동원(recruitment) 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키며 분비시키는 불활성화 종양 세포를 포함하는, 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 이후에 기재되는 바와 같이, 다수의 CDN는 본 발명에서의 용도를 발견한다. 바람직한 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는 c-다이-AMP, c-다이-GMP, c-다이-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP, c-GMP-IMP, 및 이들의 유사체 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이 열거는 제한하는 것으로 의미되지 않는다.

유사하게는, 바람직한 보조자극제는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 포함하며, GM-CSF, CD40 리간드, IL-12, CCL3, CCL20 및 CCL21 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이 열거는 제한하는 것으로 의미되지 않는다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 애주번트(adjuvant) 및 비히클을 함유하는 제형으로 다양한 비경구 및 경구 경로에 의해 치료가 필요한 개체에 투여될 수 있다. 바람직한 경로는 비경구이며, 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 진피내, 척추강내 및 경막외 투여 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 피하 투여에 의한 투여가 특히 바람직하다. 바람직한 약제학적 조성물은 수성 또는 수중유 에멀전으로서 제형화된다.

본 발명의 조성물은 하나 이상의 추가적인 약제학적 활성 성분, 예컨대 애주번트, 지질, 예컨대 디기토닌, 리포솜, CTLA -4 및 PD -1 경로 길항물질(pathway Antagonist), PD-1 경로 차단제, 선천성 면역을 유발하는 불활성화된 박테리아(예를 들어, 불활성화 또는 약독화 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)), 톨-유사 수용체(TLR)를 통해 선천성 면역 활성화를 매개하는 조성물, (NOD)-유사 수용체(NLR), 레티노산 유발성 유전자-기반(RIG)-I-유사 수용체(RLR), C-형 렉틴 수용체(CLR), 병원소-관련 분자 패턴(pathogen-associated molecular pattern: "PAMP"), 화학치료제 등을 포함하거나, 또는 이들과 함께 투여될 수 있다.

본 명세서에서 이후에 기재되는 바와 같이, 하나 이상의 지질과 함께 제형화된 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는 개선된 수지상 세포 활성화 활성을 포함하여 개선된 특성을 나타낼 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 하나 이상의 CDN 및 하나 이상의 지질을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 특정 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 CDN은 디기토닌, 리포솜 제형 및/또는 수중유 에멀전과 함께 제형화된다. 본 발명의 이들 제형은 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키고 분비하는 불활성화 종양 세포 없이 투여될 수 있지만, 특정 실시형태에서, 하나 이상의 지질과 함께 CDN의 제형은 하나 이상의 이러한 세포주와 함께 제공된다.

관련된 양상에서, 본 발명은 개체에서 암에 대해 면역 반응을 유발하기 위한 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 치료가 필요한 개체에 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 불활성화된 종양 세포 또는 상이한 종양 세포의 혼합물은 개체의 암에 대해 유형-매칭된다(type-matched).

특정 실시형태에서, 불활성화된 종양 세포 또는 상이한 종양 세포의 혼합물은 동종이계(allogeneic) 종양 세포 또는 자가 유래(autologous) 종양 세포 또는 둘의 혼합물이다.

본 발명의 방법은 환자가 결장직장암, 상부 호흡-소화(aero-digestive) 편평상피암, 폐암, 뇌암, 간암, 위암, 육종, 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 난소암, 자궁암, 유방암, 흑색종, 전립선암, 췌장암종, 및 신장암종에 대해 치료되는 것에 관련될 수 있다.

도 1은 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드("CDN")-매개 신호처리를 도시한 도면. 정규(canonical) 비스-(3', 5') 연결, 또는 비-정규 2', 5' 및 3',5' 연결을 지니는 포스페이트 브릿지에 의해 대안적으로 결합되는 2개의 퓨린 뉴클레오사이드를 지니는 CDN(예를 들어, c-다이-AMP c-다이-GMP, c-AMP-GMP)을 c[G(2',5')pA(3',5')p]로써 표시한다. 정규 또는 비-정규 CDN은 NF-kB 의존적 전염증성 사이토카인 둘 다의 생성, 및 사이토졸 수용체 스팅(인터페론 유전자의 자극제)에 대한 결합에 의한 IFN-β, TBK-1/IRF-3 경로를 통한 신호처리의 활성화를 유발하며, IFN 수용체에 결합을 통한 DC의 자가분비와 췌장 활성화 그리고 후속 신호처리를 초래한다..
도 2a는 HIV Gag에 대한 CDN-면역보강 T-세포 반응을 도시한 도면.
도 2b는 도면에 나타낸 백신 조성물을 이용하여 마우스의 면역화 후에 PBMC에서 1차 및 2차 OVA-특이적 CD4 및 CD8 T 세포 반응을 도시한 도면.
도 2c는 모델 항원으로서 OVA를 사용하는 CDN-면역보강 백신에 의해 유발된 면역 반응을 도시한 도면.
도 3A는 GVAX/CDN 병용 백신("스팅백스(Stingvax)"로서 지칭됨)에 반응한 B16 흑색종의 성장 저해를 도시한 도면.
도 3B는 GVAX/CDN 병용 백신에 반응한 TRAMP-GM 세포 및 골수-유래 대식세포에서 인터페론-β 유발을 도시한 도면.
도 4는 GVAX/CDN 병용 백신에 반응한 B16 흑색종의 성장 저해의 농도 의존도를 도시한 도면.
도 5는 GVAX/CDN 병용 백신에 반응한 B16 흑색종 종양의 CD8+ T-세포 침윤을 도시한 도면.
도 6은 GVAX/CDN 병용 백신에 반응한 성숙 인터페론 γ-생성 비장 DC(CD11c+ 세포)의 유발을 도시한 도면.
도 7은 보조자극 분자의 발현에 의해 평가되는 바와 같은 CDN 처리 시 인간 수지상 세포의 유발을 도시한 도면.
도 8은 사이클릭-다이-GMP(CDG), 인터페론 자극 DNA(ISD) 및 폴리 이노신-사이토신(폴리 I:C)을 포함하는, 선천성 면역의 다양한 활성체에 의한 자극 후에, 15개의 독립적 공여체로부터 단리된 배양된 인간 말초혈액 단핵 세포에서 IFN-α의 발현을 도시한 도면.
도 9는 "스팅백스"의 상승적 작용 메커니즘을 도시한 도면.

거세-저항성 전이 전립선암(castration-resistant metastatic prostate cancer: mCRPC)의 치료를 위한 프로벤지(Provenge)(등록상표)(덴드리온 코퍼레이션(Dendreon Corporation))의 FDA 승인은 치료 영역으로서 활성 암 면역요법을 입증하였고, 해당 분야에 새로운 힘을 불어넣었다. 그러나, 자가 유래 수지상 세포(DC) 기반 백신으로서, 프로벤지(등록상표)는 비현실적이고, 복잡하며, 비싸고, 대단하지는 않은 -중요하긴 하지만- 생존 이점만을 제공한다. 개선된 암 백신은 프로벤지(등록상표)만큼 효과적일뿐만 아니라, 더 실용적이고, 바람직하게는 객관적 반응을 유발할 수 있어야 한다. 이 방향에서의 일 단계는 PSA 및 3가지의 공동자극 분자를 암호화하는 재조합 폭스 바이러스-기반 백신인 ProstVac VF이다(B7.1, ICAM-1 및 Lfa-3). ProstVac VF는 mCRPC를 지니는 사람 중에서 수행된 무작위 2상 연구에서 전반적인 생존을 증가시키는 것으로 나타났고 - 생존 이점은 p<0.05 통계학적 유의도에 도달하지 않았지만 - 현재 3상 효능 연구에서 평가되고 있다. 이들 백신은 전립선 조직과 전립선암 둘 다에 의해 발현되는 단일 항원을 사용한다. 치료적 백신접종 전략을 이용하여 다양한 암 항원을 표적화하는 것은 항원-상실 변이체, 종양-관련 항원 발현 프로파일에서 환자 간의 차이 또는 MHC 단상형 차이의 잠재적인 부정적 영향, 단일 TAA 백신접종 전략에 의한 모든 문제를 감소시키는 것이 바람직하다.

본 발명은 고량의 DC 성장인자인 GM-CSF를 분비하도록 유전자조작된 조사된 동종이계 인간 종양 세포주를 이용하여 제형화된 스팅(인터페론 유전자의 자극제(Stimulator of Interferon Genes))으로서 알려진 최근에 발견된 세포질 수용체를 통해 DC를 활성화하는 소분자 면역 자극제 - 사이클릭-다이-뉴클레오타이드(CDN)-에 의존하는 신규하고 고도로 활성인 병용요법에 관한 것이다. 이 병용요법은 강력한 DC 활성화 자극(CDN)과 결합된 다양한 종양관련항원, DC 동원 및 증식(GM-CSF)의 이상적인 상승효과를 제공할 수 있다.

CDN 사이클릭-다이-AMP(리스테리아 모노사이토제네스에 의해 생성됨) 및 그의 유사체 사이클릭-다이-GMP(레지오넬라 뉴로필라(Legionella pneumophila)에 의해 생성됨)는 스팅으로서 알려진 PRR(병원균 인식 수용체(Pathogen Recognition Receptor))에 결합되는 PAMP(병원균 관련 분자 패턴(Pathogen Associated Molecular Pattern))로서 숙주 세포에 의해 인식된다. 스팅은 TANK 결합 키나제(TBK1)-IRF3 신호처리 축을 활성화하는 숙주 포유류 세포의 세포질에서의 어댑터 단백질인데, 이는 선천성 면역을 강하게 활성화하는 IFN-β 및 다른 IRF-3 의존적 유전자 산물의 유발을 야기한다. 이는 세포내 병원균에 의한 감염을 감지하고 반응에서 IFN-β의 생성을 유발하여 항원-특이적 CD4와 CD8 T 세포뿐만 아니라 병원균-특이적 항체로 이루어진 적응 보호 병원균-특이적 면역 반응의 발생을 야기하는, 숙주 사이토졸 감시 경로의 구성성분인 것으로 현재 인식된다.

정의

인간, 포유류, 포유류 대상체, 동물, 수의과적 대상체, 위약 대상체, 연구 대상체, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "투여"는 외인성 리간드, 시약, 위약, 소분자, 약제학적 작용제, 치료제, 진단제, 또는 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 대한 조성물 등의 접촉을 지칭하지만, 이들로 제한되지 않는다. "투여"는, 예를 들어, 치료적, 약동학적, 진단적, 연구, 위약, 및 실험 방법을 지칭할 수 있다. 세포의 치료는 세포에 대한 시약의 접촉뿐만 아니라 유체에 대한 시약의 접촉을 포함하며, 여기서 유체는 세포와 접촉된다. "투여"는, 예를 들어 세포의, 시약, 진단적 결합 조성물에 의한 또는 다른 세포에 의한 시험관내 및 생체밖 처리를 포함한다. "함께 투여되는"은 2 이상의 작용제가 단일 조성물로서 투여되는 것을 나타내는 것을 의미하지 않는다. 단일 조성물로서 투여가 본 발명에 의해 상정되지만, 이러한 작용제는 동시 또는 상이한 시간일 수도 있고, 투여의 동일 경로 또는 상이한 경로에 의할 수도 있는, 별개의 투여로서 단일 대상체에 투여될 수 있다.

"정제된" 및 "단리된"은 구체화된 종이 적어도 50중량%를 차지하고, 더 종종 적어도 60중량%를 차지하며, 전형적으로는 적어도 70중량%를 차지하고, 더 전형적으로는 적어도 75중량%를 차지하며, 가장 전형적으로는 적어도 80중량%를 차지하고, 보통은 적어도 85중량%를 차지하며, 더 보통으로는 적어도 90중량%를 차지하고, 가장 보통으로는 적어도 95중량%를 차지하며 및 통상적으로는 적어도 98중량% 또는 그 초과인 조성물에 존재하는 종을 의미한다. 물, 완충제, 염, 세정제, 환원제, 프로테아제 저해제, 안정제(알부민과 같은 첨가된 단백질을 포함) 및 부형제의 중량은 일반적으로 순도의 결정을 위해 사용되지 않는다.

리간드/수용체, 핵산/상보적 핵산, 항체/항원, 또는 다른 결합쌍(예를 들어, 사이토카인 수용체에 대한 사이토카인)(본 명세서에서 각각 일반적으로 "표적 생체분자" 또는 "표적"으로서 지칭됨)을 언급할 때 "특이적으로" 또는 "선택적으로" 결합한다는 단백질 및 다른 생물물질의 이종성 집단에서 표적의 존재와 관련된 결합 반응을 나타낸다. 특이적 결합은 결합 화합물, 핵산 리간드, 항체, 또는 상정된 방법의 항체의 항원-결합 부위로부터 유래된 결합 조성물이 비-표적 분자보다 종종 적어도 25% 초과, 더 종종으로는 적어도 50% 초과, 가장 종종은 적어도 100%(2배) 초과, 정상적으로는 적어도 10배 초과, 더 정상적으로는 적어도 20-배 초과, 및 가장 정상적으로는 적어도 100-배 초과의 친화도로 그의 표적에 결합하는 것을 의미할 수 있다.

"리간드"는 소분자, 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드, 당류, 다당류, 글라이칸, 당단백질, 당지질, 또는 표적 생체분자에 결합하는 이들의 조합물을 지칭한다. 이러한 리간드는 수용체의 작용물질 또는 길항물질일 수 있지만, 리간드는 또한 작용물질 또는 길항물질이 아닌 결합제를 포함하고, 작용물질 또는 길항물질 특성을 갖지 않는다. 리간드의 그의 동족 표적에 대한 특이적 결합은 종종 "친화도"라는 단어로 표현된다". 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 리간드는 약 10⁴ M^-1 내지 약 10⁸M^-1의 친화도로 결합한다. 친화도는 K_d = k_off/k_on(k_off는 해리 상수이고, K_on은 결합 상수이며, K_d는 평형상수임)로서 계산된다.

친화도는 다양한 농도(c)에서 표지 리간드의 결합된 분획(r)을 측정함으로써 평형상태에서 결정될 수 있다. 데이터는 스캐차드 방정식을 사용하여 그래프화한다: r/c = K(n-r): 여기서 r = 결합 리간드의 몰/평형상태에서 수용체의 몰; c = 평형상태에서 유리 리간드 농도; K = 평형 결합 상수; 및 n = 수용체 분자 당 리간드 결합부위의 수. 그래프 분석에 의해, r/c를 Y-축에 r을 X-축에 대해 플롯팅하고, 이에 의해 스캐차드 플롯을 만든다. 스캐차드 분석에 의한 친화도 측정은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991; Nelson and Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988] 참조. 대안에서, 친화도는 등온적정 열량측정(isothermal titration calorimetry: ITC)에 의해 측정될 수 있다. 전형적인 ITC 실험에서, 리간드의 용액은 그의 동족 표적 용액 내로 적정된다. 그들의 상호작용 시 방출된 열(ΔH)은 시간에 따라 모니터링된다. 연속적 양의 리간드가 ITC 세포 내로 적정됨에 따라, 흡수 또는 방출된 열의 양은 결합량에 직접 비례한다. 시스템이 포화에 도달함에 따라, 열 신호는 희석 열만이 관찰될 때까지 열 신호는 감소된다. 이어서, 결합 곡선은 세포 내 리간드와 결합 상대의 비에 따라 각각의 주입으로부터의 열의 플롯으로부터 얻어진다. 결합 곡선은 적절한 결합 모델에 따라 분석되어 K_B, n 및 ΔH를 결정한다. K_B = 1/K_d임을 주의한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 인간 또는 비-인간 유기체를 지칭한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물은 인간과 수의과적 질병 둘 다에 적용가능하다. 특정 실시형태에서, 대상체는 "환자", 즉, 질병 또는 병태를 위해 의학적 치료를 받는 살아있는 인간이다. 이는 병적 증상에 대해 조사받고 있는 정해지지 않는 병을 지니는 사람을 포함한다. 본 발명의 조성물 및 방법에 의해 표적화되고 있는 특정 암의 현재의 진단이 있는 대상체가 바람직하다. 본 명세서에 기재된 조성물에 의한 치료를 위한 바람직한 암은 전립선암, 신장암종, 흑색종, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 결장암, 두경부암, 폐암 및 유방암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

"치료적 유효량"은 환자 유익을 나타내기에, 즉, 치료 중인 병태 증상의 감소, 예방 또는 개선을 야기하는데 충분한 시약 또는 약제학적 조성물의 양으로서 정의된다. 작용제(agent) 또는 약제학적 조성물이 진단제를 포함할 때, "진단적 유효량"은 신호, 영상 또는 다른 진단적 변수를 만들기에 충분한 양으로서 정의된다. 약제학적 제형의 유효량은 개체의 민감도, 개체의 연령, 성별 및 체중, 및 개체의 특이 반응과 같은 인자에 따라 다를 것이다. "유효량"은 의학적 병태 또는 장애 또는 이들의 원인이 되는 과정의 증상 또는 징후를 개선시키거나, 반전시키거나, 완화시키거나, 예방하거나 또는 진단할 수 있는 양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 달리 지시되지 않는다면, 명확하게 또는 문맥에 의해 "유효량"은 병태를 개선시키는데 충분한 최소량으로 제한되지 않는다.

"치료" 또는 "치료하는"(병태 또는 질병에 대해)은 바람직하게는 임상결과를 포함하는 유익하거나 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근이다. 본 발명의 목적을 위해, 질병과 관련하여 유익하거나 또는 원하는 결과는 다음의: 질병의 예방, 질병과 관련된 병태의 개선, 질병의 치유, 질병 중증도의 저감, 질병 진행의 지연, 질병과 관련된 하나 이상의 증상의 완화, 질병으로 고통받는 대상의 삶의 질 증가 및/또는 생존 연장 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 마찬가지로, 본 발명의 목적을 위해, 병태와 관련한 유리하거나 또는 원하는 결과는 다음의: 병태의 예방, 병태의 개선, 병태의 치유, 병태 중증도의 저감, 병태 진행의 지연, 병태와 관련된 하나 이상의 증상의 완화, 병태로 고통받는 대상의 삶의 질 증가 및/또는 생존 연장 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물이 암의 치료를 위해 사용되는 경우의 실시형태에서, 유리하거나 또는 원하는 결과는 다음 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 종양성 또는 암성 세포의 증식의 감소(또는 파괴), 암에서 발견되는 종양성 제포 전이의 감소, 종양 크기의 수축, 암으로부터 초래되는 증상의 감소, 암으로 고통받는 대상의 삶의 질 증가, 질병을 치료하기 위해 필요한 다른 의약의 투약량 감소, 암 진행의 지연, 및/또는 암을 갖는 환자의 생존 증가. 문맥에 따라서, 대상체의 "치료"는, 예를 들어 대상체가 시약의 투여에 의해 개선될 것으로 예상되는 장애를 포함하는 상황에서, 대상체가 치료가 필요하다는 것을 암시할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 항원 또는 에피토프와 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자들, 또는 이들의 단편으로부터 유래되거나, 이들 후에 모델링되거나 또는 이들에 의해 실질적으로 암호화된 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 예를 들어 문헌[Fundamental Immunology, 3rd Edition, W.E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993); Wilson (1994; J. Immunol. Methods 175:267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25:85-97] 참조. 용어 항체는 항원-결합 부분, 즉, "항원 결합 부위"(예를 들어 (i) VL, VH, CL 및 CHl 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 브릿지에 의해 연결되는 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CHl 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 단일 암(arm)의 항체의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는, 항원에 결합하는 능력을 보유하는 단편, 하위서열, 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)을 포함한다. 단일쇄 항체는 또한 용어 "항체"에서 참조로서 포함된다.

면역조절 세포주

"불활성화된 종양 세포"는 세포의 분할을 방지하도록 처리된 종양 세포(환자에 대한 "자가 유래 세포" 또는 "동종 이계")를 의미한다. 본 발명의 목적을 위해, 이러한 세포는 그들의 면역원성 및 그들의 대사 활성을 보존한다. 이러한 종양 세포는 암요법의 부분으로서 환자내에서 발현된 이식유전자를 발현시키도록 유전적으로 변형된다. 따라서, 본 발명의 조성물 또는 백신은 치료를 받고 있는 환자에 대해 자가 유래 또는 동종이계인 종양성(예를 들어, 종양) 세포를 포함하며, 가장 바람직하게는 환자에 고통을 주는 것과 동일한 일반적 유형의 종양 세포이다. 예를 들어, 흑색종으로 고통받는 환자는 전형적으로는 흑색종으로부터 유래된 유전적으로 변형된 세포가 투여될 것이다. 방사선조사의 사용과 같은 본 발명에서 사용을 위한 종양 세포를 불활성화하기 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다.

본 발명의 불활성화된 종양 세포는 하나 이상의 보조자극 분자 또는 작용제와 함께 환자에 투여된다. 바람직한 보조자극제는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 포함한다. 이러한 보조자극제를 평가하기 위한 방법은 문헌에 잘 공지되어 있다. DC의 유발 및 성숙은 전형적으로 CD80 및 CD86과 같은 특정 막의 증가된 발현 및/또는 자극 후 IL-12 및 I형 인터페론과 같은 전염증성 사이토카인의 분비에 의해 평가된다.

바람직한 실시형태에서, 불활성화된 종양 세포 그 자체는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키고 분비시키도록 변형된다. 본 발명은 GM-CSF의 사용과 관련하여 예시적인 용어로 설명된다. 따라서, 예로서, 종양 세포는 본 명세서에 명확하게 참조로서 포함된 미국 특허 제5,637,483호, 제5,904,920호, 제6,277,368호 및 제6,350,445호뿐만 아닐 미국 특허 공개 제20100150946호에 기재되어 있는 바와 같은 GM-CSF를 암호화하는 이식유전자를 발현시킬 수 있다. 췌장암의 치료를 위한 GM-CSF-발현 유전적 변형 암 세포 또는 "사이토카인-발현 세포 백신"의 형태는 미국 특허 제6,033,674호 및 제5,985,290호에 기재되어 있으며, 이들 둘다 본 명세서에 명확하게 참조로서 포함된다.

GM-CSF 대신에 또는 함께 이러한 불활성화된 종양 세포 및/또는 방관자(bystander) 세포에 의해 발현될 수 있는 다른 적합한 사이토카인은 CD40 리간드, IL-12, CCL3, CCL20 및 CCL21 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이 열거는 제한하는 것을 의미하지 않는다.

대상체에 투여되는 불활성화된 종양 세포는 관심 대상의 하나 이상의 사이토카인을 발현시키는 것이 바람직하지만, 종양 세포주는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키고 분비하는 불활성화 방관자 세포주를 동반할 수 있다. 방관자 세포주는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 모든 사이토카인을 제공할 수 있거나, 또는 불활성화된 종양 세포에 의해 발현되고 분비되는 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 사이토카인을 보충할 수 있다. 예로서, 면역조절 사이토카인-발현 방관자 세포주는 미국 특허 제6,464,973호 및 제 8,012,469호, 문헌[Dessureault et al., Ann. Surg. Oncol. 14: 869-84, 2007, 및 Eager and Nemunaitis, Mol. Ther. 12: 18-27, 2005]에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 명확하게 참조로서 포함된다.

"과립구-대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF) 폴리펩타이드"는 면역조절 활성을 가지며 젠뱅크 등록번호 AAA52122.1에 대해 적어도 약 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 사이토카인 또는 이의 단편을 의미한다.

사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드

본 명세서에 기재된 바와 같은, 이들 보조자극제 중 다른 것은 스팅에 결합하고 스팅-의존적 TBK1 활성화를 유발하는 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드이다. 포함될 수 있는 다른 보조자극 분자는 본 명세서에서 이후에 기재된다.

원핵세포뿐만 아니라 진핵세포는 세포 신호처리 및 세포내- 및 세포간 상호작용을 위해 다양한 소분자를 사용한다. cGMP, cAMP 등과 같은 사이클릭 뉴클레오타이드는 원핵- 및 진핵 세포에서 활성을 조절하고 개시하는 것으로 알려져 있다. 진핵 세포와 달리, 원핵 세포는 또한 조절 분자로서 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드를 사용한다. 원핵 세포에서, 2개의 GTP 분자의 축합은 효소 다이구아닐레이트 사이클라제(diguanylate cyclase: DGC)에 의해 촉매되어, 박테리아에서 중요한 조절자를 나타내는 c-다이GMP를 제공한다.

최근의 연구는 사이클릭 diGMP 또는 이의 유사체가 또한 면역 또는 염증 반응을 자극하거나 또는 증진시킬 수 있거나 또는 포유류에서 애주번트(adjuvant)로서 작용함으로써 백신에 대해 면역 반응을 증진시킬 수 있다는 것을 시사한다. 병원균-유래 DNA의 사이토졸 검출은 TANK 결합 키나제 1(TBK1) 및 그의 하류 전사 인자, IFN-조절 인자 3(IRF3)을 통한 신호처리를 필요로 한다. 스팅(IFN 유전자의 자극제; 또한 MITA, ERIS, MPYS 및 TMEM173으로서 알려져 있음)으로 불리는 막관통 단백질은 이들 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드에 대한 신호처리 수용체로서 작용하는데, 이는 TBK1-IRF3 신호처리 축 및 스팅-의존적 I형 인터페론 반응의 자극을 야기한다. 예를 들어, 도 1 참조. 문헌[Burdette et al., Nature 478: 515-18, 2011]은 스팅이 사이클릭 다이구아닐레이트 모노포스페이트에 직접 결합되지만, 다른 관련없는 뉴클레오타이드 또는 핵산에는 결합되지 않는다는 것을 입증하였다.

본 발명에서 사용을 위한 적합한 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는, 예를 들어 미국 특허 제7,709458호 및 제7,592,326호; WO2007/054279호; 및 문헌[Yan et al., Bioorg. Med. Chem Lett. 18: 5631 (2008)]에서의 일부 상세한 설명에서 기재되고 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 참조로서 포함된다. 바람직한 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는 c-다이-AMP, c-다이-GMP, c-다이-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP 및 c-GMP-IMP, 및 포스포로티오에이트 유사체를 포함하는 이들의 유사체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

애주번트

상기 기재한 불활성화된 종양 세포(들) 및 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드(들)에 추가로, 본 발명의 조성물은 그의 애주번트 특성 때문에 불활성화된 종양 세포(들) 상에 존재하는 암 항원에 반응하기 위해 면역계를 자극하도록 작용할 수 있는 하나 이상의 추가적인 물질을 더 포함할 수 있다. 이러한 애주번트는 지질, 리포솜, 선천성 면역을 유발하는 불활성화 박테리아(예를 들어, 불활성화 또는 약독화 리스테리아 모노사이토제네스), 톨-유사 수용체(TLR)를 통해 선천적 면역 활성화를 매개하는 조성물, (NOD)-유사 수용체(NLR), 레티노산 유발성 유전자 기반(RIG)-I-유사 수용체(RLR) 및/또는 C-형 렉틴 수용체(CLR)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. PAMP의 예는 리포단백질, 리포폴리펩타이드, 펩티도글라이칸, 자이모산, 리포다당류, 네이세리아 포린(neisserial porin), 플라젤린, 프로필린, 갈락토세라마이드, 뮤라밀 다이펩타이드를 포함한다. 펩티도글라이칸, 리포단백질 및 리포테이코산은 그램 양성의 세포벽 성분이다. 리포다당류는 대부분의 박테리아에 의해 발현되며, MPL이 일 예이다. 플라젤린은 병원성 및 공생성 박테리아에 의해 분비되는 박테리아 편모의 구조적 성분을 지칭한다. α-갈락토실세라마이드(Galactosylceramide: α-GalCer)는 자연살해 T(NKT) 세포의 활성체이다. 뮤라밀 다이펩타이드는 모든 박테리아에 대해 흔한 생활성 펩티도글라이칸 모티프이다. 이 열거는 제한하도록 의미하지 않는다. 바람직한 애주번트 조성물은 이하에 기재된다.

CTLA -4 및 PD -1 경로 길항 물질

CTLA-4는 적응 면역 반응의 중요한 음성 조절자가 되는 것으로 생각된다. 활성화된 T 세포는 CD28보다 더 높은 친화도로 항원-제시 세포 상의 CD80 및 CD86에 결합하는 CTLA-4를 상향조절하고, 따라서 T-세포 자극, IL-2 유전자 발현 및 T-세포 증식을 저해한다. CTLA4 차단의 항종양 효과가 결장 암종, 전이 전립선암, 및 전이 흑색종의 뮤린 모델에서 관찰되었다.

이필리무맵(Ipilimumab)(예보이(Yervoy)(상표명)) 및 트레멜리무맵(tremelimumab)은 인간 CTLA4와 결합하고 CD80 및 CD86과 그의 상호작용을 방지하는 인간화된 단클론성 항체이다. 이필리무맵 및 트레멜리무맵을 사용하는 I 상 및 II 상 연구는 암 환자에서 임상적 활성이 입증되었다. 유사한 전략에 의해 표적화될 수 있는 다른 음성 면역 조절자는 세포예정사 1, B 및 T 림프구 감쇠인자, 형질전환 성장인자 베타 β, 인터류킨-10, 및 혈관 내피 성장인자를 포함한다.

PD-1는 활성화된 T-세포에 대해 발현된 적응 면역 반응의 다른 음성 조절자이다. PD-1은 B7-H1 및 B7-DC에 결합하고, PD-1의 맞물림은 T-세포 활성화를 억제한다. 항종양 효과는 PD-1 경로 차단에 의해 입증되었다. BMS-936558, MK3475, CT-011, AMP-224 및 MDX-1106은 본 발명에서의 용도를 찾을 수 있는 PD-1 경로 차단제의 예가 되는 것으로 문헌에 보고되어 있다.

TLR 작용물질( Agonist )

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "톨 유사 수용체"(또는 "TLR")는 미생물제를 감지하고/하거나 적응 면역 반응을 개시하는 단백질 또는 이의 단편의 톨-유사 수용체 패밀리의 구성원을 지칭한다. 일 실시형태에서, TLR은 수지상 세포(DC)를 활성화한다. 톨 유사 수용체(TLR)는 미생물 병원균을 인식하는 선천성 면역계의 센서로서 처음에 동정된 패턴 인식 수용체의 패밀리이다. TLR은 류신-풍부 반복체의 엑토도메인, 막관통 도메인 및 세포내 TIR(톨/IL-1R) 도메인을 함유하는 보존된 막 확장 분자의 패밀리를 포함한다. TLR은 종종 "PAMP"(병원균 연관 분자 패턴(pathogen associated molecular pattern))로서 지칭되는 미생물 내 별개의 구조를 인식한다. TLR에 대한 리간드 결합은 염증 및 면역에 수반된 인자의 생성을 유발하는 세포내 신호처리 경로의 캐스케이드를 불러일으킨다.

인간에서, 10종의 TLR가 동정되었다. 세포 표면 상에서 발현된 TLR은 TLR-1, -2, -4, -5 및 -6을 포함하는 반면, TLR-3, -7/8 및 -9는 ER 구획에 의해 발현된다. 인간 수지상 세포 서브세트는 별개의 TLR 발현 패턴에 기반하여 동정될 수 있다. 예로서, DC(mDC)의 골수성 또는 "통상적인" 서브세트는 자극될 때 TLR 1 내지 8을 발현시키고, 활성화 마커(예를 들어 CD80, CD86, MHC 클래스 I 및 II, CCR7), 전염증성 사이토카인 및 케모카인의 캐스케이드가 생성된다. 이 자극 및 얻어진 발현의 결과는 항원-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 프라이밍이다. 이들 DC는 항원을 취하는 증진된 능력을 획득하며, 그들을 T 세포에 적절한 형태로 제시한다. 대조적으로, DC(pDC)의 형질 세포 서브세트는 NK 세포뿐만 아니라 T-세포의 얻어진 활성화에 의해 활성화 시 TLR7 및 TLR9만을 발현시킨다. 사멸 종양 세포는 DC 기능에 유해하게 영향을 미칠 수 있기 때문에, TLR 작용물질에 의해 DC를 활성화하는 것은 암 치료에 대한 면역요법 접근에서 항종양 면역을 점화하는데 유리할 수 있는 것으로 시사되었다. 또한 방사선 및 화학요법을 사용하는 유방암의 성공적인 치료는 TLR4 활성화를 필요로 하는 것으로 시사되었다.

당업계에 공지되고 본 발명에서의 용도를 발견하는 TLR 작용물질은 다음을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다:

Pam3Cys, TLR-1/2 작용물질;

CFA, TLR-2 작용물질;

MALP2, TLR-2 작용물질;

Pam2Cys, TLR-2 작용물질;

FSL-1, TLR-2 작용물질;

Hib-OMPC, TLR-2 작용물질;

폴리리보신산:폴리리보사이티딘산(폴리 I:C), TLR-3 작용물질;

폴리아데노신산-폴리유리딜산(폴리 AU), TLR-3 작용물질;

폴리-L-리신 및 카복시메틸셀룰로스에 의해 안정화된 폴리이노신산-폴리사이티딜산(Hiltonol(등록상표)), TLR-3 작용물질;

모노포스포릴 지질 A(MPL), TLR-4 작용물질;

LPS, TLR-4 작용물질;

박테리아 플라젤린, TLR-5 작용물질;

시알릴-Tn (STn), 다수의 인간 암 세포 및 TLR-4 작용물질 상의 MUC1 뮤신과 관련된 탄수화물;

이미퀴모드, TLR-7 작용물질;

레시퀴모드, TLR-7/8 작용물질;

록소리빈, TLR-7/8 작용물질; 및

비메틸화 CpG 다이뉴클레오타이드(CpG-ODN), TLR-9 작용물질.

이들의 애주번트 품질 때문에, TLR 작용물질은 바람직하게는 다른 백신, 애주번트 및/또는 면여겨 조절제와 병용하여 사용되고, 다양한 조합으로 배합될 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 스팅에 결합하고 스팅-의존적 TBK1 활성화를 유발하는 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 수지상 세포 유발, 동원 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키고 분비하는 불활성화된 종양 세포는 치료적 목적을 위해 하나 이상의 TLR 작용물질과 함께 투여될 수 있다.

액체 및 리포솜

리포솜은 인지질의 하나("유니라멜라(unilamellar)") 또는 그 초과("멀티라멜라(multilamellar)") 층으로부터 형성된 소포이다. 인지질 구성요소의 양친매성 특징 때문에, 리포솜은 전형적으로 친수성 외면을 제시하고 친수성 코어를 에워싸는 소수성 층을 포함한다. 친수성/소수성 성분의 포함에서 리포솜의 다재다능, 그들의 비독성 특성, 생체분해성, 생체양립가능성, 애주번트 활성, 세포 면역의 유발, 지속방출 특성 및 대식세포에 의한 신속한 흡수는 그들을 항원 전달을 위한 매력적인 후보로 만든다.

본 명세서에 전문이 참조로서 포함되는 WO2010/104833호는 하기를 포함하는 리포솜 제제를 기재한다:

a) 수성 비히클;

b) 리포솜으로서

(i) 다이미리스토일포스파티딜콜린(dimyristoylphosphatidylcholine: "DMPC"),

(ii) 다이미리스토일포스파티딜글라이세롤(dimyristoylphosphatidylglycerol: "DMPG"), 다이미리스토일트라이메틸암모늄 프로판(dimyristoyltrimethylammonium propane: "DMTAP"), 또는 DMPG와 DMTAP 둘 다,

및

(iii) 적어도 하나의 스테롤 유도체를 포함하는, 리포솜; 및

c) 하나 이상의 면역원성 폴리펩타이드(들) 또는 상기 적어도 하나의 스테롤 유도체의 1% 내지 100%에 공유적으로 결합된 탄수화물(들).

상기 언급한 "면역원성 폴리펩타이드(들) 또는 탄수화물(들)"과 함께 또는 없이 본 명세서에서 베시백스(VesiVax)(등록상표)(몰레큘러 익스프레스 인코포레이티드(Molecular Express, Inc.))로서 지칭되는 이러한 리포솜 제형은 하나 이상의 추가적인 성분, 예컨대 펩티도글라이칸, 리포펩타이드, 리포다당류, 모노포스포릴 지질 A, 리포테이코산, 레시퀴모드, 이미퀴모드, 플라젤린, 비메틸화된 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오타이드, 베타-갈락토실세라마이드, 뮤라밀 다이펩타이드, 올-트랜스 레티노산, 이중-가닥 바이러스 RNA, 열충격 단백질, 다이옥타데실다이메틸암모늄 브로마이드, 양이온성 계면활성제, 톨-유사 수용체 작용물질, 다이미리스토일트라이메틸암모늄프로판, 비유사 수용체 작용물질을 함유할 수 있다. 유리하게는, 이들 리포솜 제형은 본 발명에 따른 하나 이상의 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드를 전달하기 위해 사용될 수 있다.

게다가, 상기 논의한 리포솜 제형은 면역원성 폴리펩타이드 또는 탄수화물을 리포솜에 부착하기 위한 앵커로서 "스테로이드 유도체"를 사용하지만, 스테로이드는 단순히 콜레스테롤과 같은 비컨쥬이트 스테로이드로서 제공될 수 있다.

지질 혼합물로부터 리포솜을 제조하기 위한 적합한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Basu & Basu, Liposome Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology ), Humana Press, 2002; Gregoriadis, Liposome Technology, 3 ^rd Edition, Informa HealthCare, 2006] 참조. 바람직한 방법은 이들에 기재되어 있는 압출, 균질화 및 초음파처리 방법을 포함한다. 지질 혼합물을 건조시키는 단계 다음에 수성 비히클에서의 수화 및 초음파처리로 리포솜을 형성하는 단계를 포함하는 본 발명에서 사용을 위한 리포솜의 제조를 위한 예시적인 방법은 WO2010/104833호에 기재되어 있다.

특정 실시형태에서, 특정 평균 크기 범위 내에서 리포솜이 제공된다. 리포솜 크기는, 예를 들어 사전 선택된 기공 크기를 갖는 막을 통한 리포솜을 포함하는 수성 비히클의 압출 및 막을 통해 유동된 물질의 수집에 의해 선택될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 리포솜은 실질적으로는 직경 50 내지 500㎚, 더 바람직하게 실질적으로는 직경 50 내지 200㎚, 및 가장 바람직하게 실질적으로는 직경 50 내지 150㎚가 되도록 선택된다. 본 명세서의 본 문맥에서 사용되는 바와 같은 용어 "실질적으로"는 리포솜의 적어도 75%, 더 바람직하게는 80%, 및 가장 바람직하게는 적어도 90%가 지정 범위 내에 있다는 것을 의미한다.

본 발명에서의 용도를 찾을 수 있는 다른 지질 및 지질-유사 애주번트는 수중유(o/w) 에멀전(예를 들어, 문헌[Muderhwa et al., J. Pharmaceut. Sci. 88: 1332-9, 1999)] 참조), 베시백스(등록상표) TLR(몰레큘러 익스프레스 인코포레이티드), 디기토닌(예를 들어, 미국 특허 제5,698,432호 참조) 및 글루코피라노실 지질(예를 들어, 미국 특허 공개 제20100310602호)을 포함한다.

화학치료제

추가적인 실시형태에서, 상기 방법은 환자의 종양에 대한 추가적인 치료로서 유효량의 1종 이상의 화학치료제를 대상체에 투여하는 단계를 추가로 수반한다. 특정 실시형태에서, 1종 이상의 화학치료제는 아비라테론 아세테이트, 알트레타민, 무수빈블라스틴, 오리스타틴, 벡사로텐, 바이칼루타마이드, BMS 184476, 2,3,4,5,6-펜타플루오로-N-(3-플루오로-4-메톡시페닐)벤젠 설폰아마이드, 블레오마이신, N,N-다이메틸-L-발릴-L-발릴-N-메틸-L-발릴-L-프롤릴-1-L프롤린-t-뷰틸아마이드, 카켁틴, 세마도틴, 클로람뷰실, 사이클로포스파마이드, 3',4'-다이데하이드로-4'-데옥시-8'-노르빈-칼류코블라스틴, 도세탁솔, 도세탁셀, 사이클로포스파마이드, 카보플라틴, 카무스틴, 시스플라틴, 크립토피신, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카바진(DTIC), 닥티노마이신, 다우노루비신, 데시타빈 돌라스타틴, 독소루비신(아드리아마이신), 에토포사이드, 5-플루오로유라실, 피나스테라이드, 플루타마이드, 하이드록시유레아 및 하이드록시유레아탁산, 이포스파마이드, 리아로졸, 로니다민, 로무스틴(CCNU), MDV3100, 메클로르에타민(질소 머스터드), 멜팔란, 미보뷸린 이세티오네이트, 리족신, 세테네프(sertenef), 스트렙토조신, 미토마이신, 메토트렉세이트, 탁산, 닐루타마이드, 오나프리스톤, 파클리탁셀, 프레드니무스틴, 프로카바진, RPR109881, 스트라무스틴 포스페이트, 타목시펜, 타소네민(tasonermin), 탁솔, 트레티노인, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 설페이트 및 빈플루닌으로부터 선택된다.

약제학적 조성물

본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적"은 질병의 치유, 치료 또는 예방에서 사용을 위해 의도되면서, 처방에 의해 또는 처방전 없이 살 수 있는 약물 제품으로서 미식품 의약국(또는 이의 미국 외에서의 동일 기관)에 의해 승인 과정을 받은 화학물질을 지칭한다. 이러한 조성물의 제형 및 투여를 위한 기술의 상세한 설명은 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21^st Edition (Mack Publishing Co., Easton, PA) 및 Nielloud and Marti-Mestres, Pharmaceutical Emulsions and Suspensions: 2^nd Edition (Marcel Dekker, Inc, New York)]에서 찾을 수 있다.

본 개시내용의 목적을 위해, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 애주번트 및 비히클을 함유하는 제형에서 경구, 비경구, 흡입 스프레이, 국소 또는 직장으로를 포함하는 다양한 수단에 의해 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 비경구는 다양한 주입 기술을 이용하는 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 진피내, 척추강내 및 경막외 주사를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 동맥내 및 정맥내 주사는 카테터를 통한 투여를 포함한다. 관상동맥 스텐트 및 관상동맥 저장소가 또한 상정된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 경구는 경구 섭취, 또는 설하 또는 협측 경로에 의한 전달을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 경구 투여는 유체 음료, 에너지바뿐만 아니라 알약 제형을 포함한다.

약제학적 조성물은 의도된 투여 방법에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 경구용으로 사용될 때, 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀전, 경질 또는 연질 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르가 제조될 수 있다. 경구용으로 의도된 조성물은 약제학적 조성물의 제조를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있고, 이러한 조성물은 맛좋은 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제를 포함하는 하나 이상의 작용제를 함유한다. 정제의 제조에 적합한 비독성의 약제학적으로 허용가능한 부형제와 혼합된 약물 화합물을 함유하는 정제가 허용가능하다. 이들 부형제는, 예를 들어 비활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘 또는 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 메이즈 전분 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제; 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크일 수 있다. 정제는 비코팅일 수 있거나, 또는 위장관에서의 붕괴 및 흡수를 지연시키기 위한 장용 코팅, 결장 코팅 또는 마이크로캡슐을 포함하는 공지된 기법에 의해 코팅될 수 있고/있거나 장기간에 걸쳐 지속 작용을 제공한다. 예를 들어, 글라이세릴 모노스테아레이트 또는 글라이세릴 다이스테아레이트와 같은 시간 지연 물질은 단독으로 또는 왁스와 함께 사용될 수 있다.

경구용 제형은 또한 약물 화합물이 비활성 고체 희석제, 예를 들어 인산칼슘 또는 카올린과 혼합되는 경질 젤리틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 유성 매질, 예컨대 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있다.

약제학적 조성물은 수성-현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합하여 수성 현탁액으로서 제형화될 수 있다. 이러한 부형제는 현탁제, 예컨대, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트래거캔스검 및 아카시아검 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 자연적으로 생기는 포스파타이드(예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방산 알코올과의 축합 생성물(예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분적 에스터의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시-벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.

유성 현탁액은 식물성 오일, 예컨대 낙화생 오일, 올리브 오일, 참깨 오일 또는 코코넛 오일 또는 미네랄 오일, 예컨대 액체 파라핀 중에서 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 경구 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 맛 좋은 경구 제제를 제공하기 위해 감미제, 예컨대 상기 제시한 것 및 향미제가 첨가될 수 있다. 이들 조성물은 아스콜브산과 같은 항산화제의 첨가에 의해 보존될 수 있다.

물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한 본 개시내용의 분산성 분말 및 과립은 분산제 또는 습윤제, 현탁제, 및 하나 이상의 보존제와 혼합하여 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 상기 개시한 것에 의해 예시된다. 추가적인 부형제, 예를 들어 감미제, 향미제 및 착색제가 또한 제공될 수 있다.

본 개시내용의 약제학적 조성물은 또한 수중유 에멀전의 형태일 수 있다. 유성상은 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일 또는 낙화생 오일, 미네랄 오일, 예컨대 액체 파라핀 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 자연적으로 생기는 검, 예컨대 아카시아검 및 트래거캔스검, 자연적으로 생기는 포스파타이드, 예컨대 대두 레시틴, 에스터 또는 지방산으로부터 유래된 부분적 에스터 및 헥시톨 무수물, 예컨대 솔비탄 모노올레이트 및 이들 부분적 에스터와 에틸렌 옥사이드, 예컨대 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트의 축합 생성물을 포함한다. 에멀전은 또한 감미제 및 향미제를 함유할 수 있다.

시럽 및 엘릭시르는 감미제, 예컨대 글라이세롤, 솔비톨 또는 수크로스와 함께 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한 진통제, 보존제, 향미제 또는 착색제를 함유할 수 있다.

본 개시내용의 약제학적 조성물은 멸균 주사용 제제, 예컨대 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 이 현탁액은 상기 언급한 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하는 당업계에 공지된 것에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 제제는 또한 비독성의 비경구로 허용가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄-다이올 중의 용액일 수 있거나 또는 동결건조 분말로서 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에서 링거액 및 등장 식염 용액이다. 추가로, 멸균 고정오일은 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 이 목적을 위해, 합성 모노- 또는 다이글라이세라이드를 포함하는 임의의 배합 고정오일이 사용될 수 있다. 추가로, 올레산과 같은 지방산이 마찬가지로 주사용 제제에서 사용될 수 있다.

단일 투약 형태를 생성하기 위해 담체 재료와 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 처리된 숙주 및 특정 투여 방식에 따라서 다를 것이다. 예를 들어, 인간에 경구 투여용으로 의도된 시간-방출 제형은 전체 조성물의 약 5 내지 약 95%로 다를 수 있는 적절하고 편리한 양의 담체 물질과 함께 조제되는 대략 20 내지 500㎎의 활성 물질을 함유할 수 있다. 투여를 위해 용이하게 측정가능한 양을 제공하는 약제학적 조성물이 제조되는 것이 바람직하다. 전형적으로, 전신으로 투여되는 유효량은 약 0.1㎎/㎏ 내지 약 100㎎/㎏이고, 예를 들어, 대상체(예를 들어, 인간과 같은 포유류)의 연령 및 체중, 치료를 필요로 하는 정확한 병태 및 그의 중증도, 투여경로를 포함하는 다수의 인자에 따르며, 궁극적으로 담당 의사 또는 수의사의 재량에 의할 것이다. 그러나, 임의의 특정 환자에 대한 구체적 용량 수준은 당업자에 의해 잘 이해되는 바와 같이 사용되는 구체적 화합물의 활성, 치료되는 개체의 연령, 체중, 일반적 건강상태, 성별 및 식이요법; 투여 시간 및 경로; 배설 속도; 이전에 투여된 다른 약물; 및 치료 받은 특정 병태의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 따를 것으로 이해될 것이다.

상기 주목한 바와 같이, 경구 투여에 적합한 개시내용의 제형은 분말 또는 과립으로서 사전 결정된 양의 활성 성분을 각각 함유하는 캡슐, 사쉐 또는 정제와 같은 별개의 단위로서; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 액체 에멀전 또는 유중수 액체 에멀전으로서 제공될 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 볼루스, 연약(electuary) 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.

정제는 선택적으로 하나 이상의 부수적 성분과 함께 압출 또는 몰딩에 의해 만들어질 수 있다. 압축 정제는 적합한 기계에서 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태로 활성 성분을 압축시킴으로써 제조될 수 있으며, 선택적으로 결합제(예를 들어, 포비돈, 젤라틴, 하이드록시프로필 에틸 셀룰로스), 윤활제, 비활성 희석제, 보존제, 붕괴제(예를 들어 전분글라이콜산나트륨, 가교 포비돈, 가교 카복시메틸셀룰로스 나트륨) 표면 활성 또는 분산제와 혼합된다. 몰딩 정제는 비활성 액체 희석제에 의해 촉촉하게 된 분말 화합물의 혼합물을 사용하여 적합한 기계에서 만들어질 수 있다. 정제는 선택적으로 코팅되거나 또는 스코어링될 수 있고, 원하는 방출 프로파일을 제공하도록 비율을 달리 해서, 예를 들어 하이드록시프로필 메틸셀룰로스를 사용하여 그 안의 활성 성분의 서방출 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 정제는 선택적으로 위 이외의 다른 소화관의 부분에서 방출을 제공하도록 장용 또는 결장용 코팅과 함께 제공될 수 있다. 이는 이러한 화합물이 산 가수분해에 민감할 때, 화학식 1의 화합물에 의하는 것이 특히 유리하다.

입에서 국소 투여에 적합한 제형은 가향 베이스, 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트래거캔스 중에 활성 성분을 포함하는 로젠지; 젤라틴 및 글라이세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 비활성 베이스 중에 활성 성분을 포함하는 파스틸(pastille); 및 적합한 액체 담체 중에 활성 성분을 포함하는 구강세정제를 포함한다.

직장 투여용 제형은, 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 베이스와 함께 좌약으로서 제공될 수 있다.

질 투여에 적합한 제형은 활성 성분에 추가로 당업계에서 적절한 것으로 공지된 이러한 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 거품 또는 스프레이 제형으로서 제공될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충제, 세균 발육 저지제 및 의도된 수용인의 혈액과 등장성인 제형을 제공하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 등장성 멸균 주사용 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제형은 단위 용량 또는 다회 용량 밀봉 용기, 예를 들어 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 냉동 건조(동결건조) 조건에서 저장될 수 있다. 주사 용액 및 현탁액은 앞서 기재한 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 약제학적으로 허용가능한 염은 아세테이트, 피리딘, 암모늄, 피페라진, 다이에틸아민, 니코틴아마이드, 폼산, 유레아, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 아연, 리튬, 신남산, 메틸아미노, 메탄설폰산, 피크르산, 타트타르산, 트라이에틸아미노, 다이메틸아미노 및 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가적인 약제학적으로 허용가능한 염은 당업자에게 공지되어 있다.

특정 환자에 대한 유효량은 치료되는 병태, 환자의 전반적인 건강상태, 및 투여 경로 및 용량 및 부작용의 중증도와 같은 인자에 따라서 다를 것이다. 치료 및 진단 방법에 대한 가이드를 이용가능하다(예를 들어, 문헌[Maynard, et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FL; Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK] 참조).

유효량은 1 용량으로 주어질 수 있지만, 1 용량으로 제한되지 않는다. 따라서, 투여는 약제학적 조성물의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20회 이상의 투여일 수 있다. 본 방법에서의 약제학적 조성물이 1회 이상 투여될 때, 투여는 1분, 2분, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10분 이상의 시간 간격만큼, 약 1시간, 2시간, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간 등만큼 떨어질 수 있다. 시간과 관련하여, 용어 "약"은 + 또는 - 30분 내의 임의의 시간 간격을 의미한다. 투여는 또한 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일 및 이들의 조합의 시간 간격만큼 떨어질 수 있다. 본 발명은 시간이 동일하게 떨어진 투약 간격으로 제한되지는 않지만, 동일하지 않는 간격에서의 용량을 포함한다.

예를 들어, 1회/주, 2회/주, 3회/주, 4회/주, 5회/주, 6회/주, 7회/주, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회 등의 투약 스케줄을 본 발명에 대해 이용가능하다. 투약 스케줄은, 예를 들어, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 및 12개월 시간의 전체 기간 동안의 투약을 포함한다.

상기 투약 스케줄의 주기가 제공된다. 주기는, 예를 들어 약 7일마다; 14일마다; 21일마다; 28일마다; 35일마다; 42일마다; 49일마다; 56일마다; 63일마다; 70일마다 등으로 반복될 수 있다. 비투약 간격은 간격이, 예를 들어, 7일; 14일; 21일; 28일; 35일; 42일; 49일; 56일; 63일; 70일 등일 수 있는 경우의 주기 간에 일어날 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "약"은 + 또는 - 1일, + 또는 -2일, + 또는 -3일, + 또는 -4일, + 또는 -5일, + 또는 -6일 또는 + 또는 -7일을 의미한다.

추가적인 치료제와 공동투여를 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다 (Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA).

주목한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 바람직하게는 비경구 또는 장 전달을 위한 약제학적 조성물로서 제형화된다. 동물에 투여를 위한 전형적인 약제학적 조성물은 염, 보존제, 완충제 등을 포함하는 비독성 부형제, 수성 용액과 같은 약제학적으로 허용가능한 비히클을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences , 15 th Ed ., Easton ed. , Mack Publishing Co., pp 1405-1412 and 1461- 1487 (1975); The National Formulary XIV , 14 th Ed ., American Pharmaceutical Association, Washington, DC (1975)] 참조. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 식물성 오일 및 주사용 유기 에스터, 예컨대 에틸올레이트이다. 수성 담체는 물, 알코올/수성 용액, 식염수 용액, 비경구 비히클, 예컨대 염화나트륨, 링거 덱스트로스 등을 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제를 포함한다. 보존제는 항균제, 항산화제, 킬레이트제 및 비활성 기체를 포함한다. 약제학적 조성물의 다양한 성분의 pH 및 정확한 농축은 당업계의 일상적인 기술에 따라 조절된다.

특정 백신(상동성 부스팅)의 반복 투여는 체액 반응을 촉진시키는데 효과적인 것으로 증명되었다. 이러한 접근은 벡터에 대한 사전 면역이 강한 항원 제시 및 적절한 염증 신호의 생성을 손상시키는 경향이 있기 때문에 세포 면역을 촉진시키는데 효과적이지 않을 수도 있다. 이 문제를 둘러싼 일 접근은 상이한 항원-전달 시스템(이종성 부스팅)을 사용하는 백신의 연속적 투여였다. 이종성 부스팅 요법에서, 적어도 하나의 프라임 또는 부스트 전달은 본 명세서에 기재된 불활성화된 종양 세포/사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드 조성물의 전달을 포함한다. 요법의 이종성 암(arm)은 다음의 전략 중 하나 이상을 사용하는 항원의 전달을 포함할 수 있다:

병원균을 침입시키는데 비효과적이거나 또는 비효율적으로 만드는 일부 변성 조건에 의해 처리된 입자인, 관심 대상의 항원을 포함하는 불활성화 박테리아 또는 바이러스;

병원균 또는 이의 재조합 형태를 함유하는, 병원균 또는 조직 샘플의 세포 배양물로부터 정제된 전형적으로 자연적으로 생성된 항원인, 정제된 항원;

대상체의 숙주 세포에서 항원을 발현시키고/발현시키거나 분비하도록 재조합적으로 유전자 조작된 살아있는 바이러스 또는 박테리아 전달 벡터. 이들 전략은 바이러스 또는 박테리아 벡터가 비병원성 및 비독성이 되도록 약독화시키는 것에(예를 들어, 유전적 조작을 통해) 의존함;

항원과 함께 로딩되거나 또는 항원을 암호화하는 핵산을 포함하는 조성물(예를 들어, 거세-저항성 전이 전립선암의 치료를 위한 프로벤지(등록상표)(덴드리온 코퍼레이션))를 이용하여 형질감염된 세포를 포함하는, 항원 제시 세포(APC) 벡터, 예컨대 수지상 세포(DC) 벡터;

리포솜 항원 전달 비히클; 및

유전자 총, 전기천공법, 박테리아 고스트, 마이크로스피어, 마이크로입자, 리포솜, 다중양이온성 나노입자 등에 의해 투여될 수 있는 네이키드(naked) DNA 벡터 및 네이키드 RNA 벡터.

프라임 백신 및 부스트 백신은 다음의 경로 중 임의의 하나 또는 조합에 의해 투여될 수 있다. 일 양태에서, 프라임 백신 및 부스트 백신은 동일 경로에 의해 투여된다. 다른 양태에서, 프라임 백신 및 부스트 백신은 상이한 경로에 의해 투여된다. 용어 "상이한 경로"는 신체 상에서 상이한 부위, 예를 들어 경구, 비경구, 장용, 비경구, 직장, 노드내(intranode)(림프절), 정맥내, 동맥, 피하, 근육내, 종양내, 종양주위, 종양내, 주입, 점막, 비강, 뇌척수 공간 내, 뇌척수액 등인 부위뿐만 아니라 상이한 방식, 예를 들어 경구, 정맥내 및 근육내를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

유효량의 프라임 또는 부스트 백신은 1 용량으로 주어질 수 있지만, 1 용량으로 제한되지 않는다. 따라서, 투여는 백신의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20회 이상의 투여일 수 있다. 백신이 1회 이상 투여되는 경우, 투여는 1분, 2분, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10분 이상의 시간 간격만큼, 약 1시간, 2시간, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간 등의 간격만큼 떨어질 수 있다. 시간과 관련하여, 용어 "약"은 + 또는 - 30분 내의 임의의 시간 간격을 의미한다. 투여는 또한 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일 및 이들의 조합의 시간 간격만큼 떨어질 수 있다. 본 발명은 시간에 맞춰 동일한 간격의 투약 간격이고, 이들로 제한되지 않지만, 제1일, 제4일, 제7일 및 제25일에서의 투여로 이루어진 프라이밍 스케줄과 같은 동일하지 않은 간격을 포함하여 바로 비제한적 예를 제공한다.

참고문헌

실시예

다음의 실시예는 본 발명을 예시하는 역할을 한다. 이들 실시예는 본 발명의 범주를 어떤 방법으로 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1

TAA의 넓은 레퍼토리에 대해 면역을 자극하기 위한 일 접근은 DC 동원, 분화 및 성숙을 자극하는 1차 사이토카인인 GM-CSF를 분비하도록 유전자 조작된 동종이계 인간 종양 세포주에 기반한 백신인 "GVAX"이다. GVAX 백신은 몇몇 암 적응증에서 다수의 임상 시험에 기반하여 형성되었고, 안전하며, 잘 용인되고, 면역원성인 것으로 나타났으며 일부 임상적 이점을 제공하는 것으로 나타났다. 시행이 전반적인 생존에서 개선의 그의 미리 정한 주 평가변수(primary endpoint)를 충족시키는 30% 미만의 기회를 갖는다는 것을 초기의 계획하지 않은 무익성 분석(futility analysis)이 나타내었을 때, mCRPC를 지니는 인간에서 전립선 GVAX 면역요법(G)을 도세탁셀 + 프레드니손(D + P)과 비교하는 3상 임상 연구를 후원자에 의해 조기에 종결시켰다. 그러나, 연구에 대해 600명 초과 환자의 지속적 후속조치 및 분석은 G 암(arm)에 대한 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선이 대략 21개월에 D + P 암을 위로 교차된다는 것을 나타내었다. 더 나아가, 할라비(Halabi) 노모그램에 기반한 기준에서 18개월 이상의 예측 생존 시간을 지니는 환자는 화학요법에 비해 GVAX로 처리할 때 30% "꼬리"의 장기간 생존자에 유리한 2.5개월의 생존을 가졌다. 이들 결과는 GVAX 전립선 면역요법이 화학요법 이상으로 유리한 생존을 제공하는데, 이는 대응적으로 위약에 비해 대략 2개월 생존 이점을 나타낸다는 것을 나타내었다.

TLR-표적화 애주번트는 MyD88- 및 TRIF-의존적 경로를 통한 신호가 전형적으로 CD8 T 세포 면역의 불량한 유발자라는 것을 개별적으로 사용하였기 때문에, 본 발명자들은 세포질 스팅 수용체를 통해 신호를 처리하는 CDN이 클래스 I-과 클래스 II-제한 면역 둘 다의 프라이밍을 촉진할 수 있는지 여부를 평가하였다. CDN은 백신 재조합 단백질 Ag, HIV Gag 또는 OVA에 특이적인 Th1 CD4와 CD8 T 세포 둘 다의 프라이밍을 유발하였다. Balb/c 마우스를 2% 수중유 애주번트(애다백스(Addavax), 인비트로젠(Invivogen)) 및 도 2에서 표시한 용량 수준에서 CDN으로 제형화된 5㎍의 HIV Gag 단백질과는 3주 떨어져서 꼬리(s.c)의 맨 아래부분에 2회 피하로 백신접종하였다.

도 2a에서 나타내는 바와 같이, CDN-면역보강 HIV Gag 백신은 다기능성 Ag-특이적 Th1 CD4 T 세포 반응을 유발한다. I-A^d 제한 HIV Gag 에피토프에 의한 자극 후 IFN-γ, IL-2 및 TNF-α 양성 비장세포의 세포내 사이토카인 염색에 의한 부스팅 후 제5일에 2차 CD4 T 세포 반응을 측정하였다. 막대는 개개 마우스를 나타낸다. 도 4B에서 나타내는 바와 같이, CDN-의존적 백신 유발 T 세포 반응의 규모는 베시백스(등록상표) 리포솜을 지니는 CDN의 제형에 의해 향상된다.

도 2에서 나타낸 백신 조성물을 이용하는 5마리 C57BL/6 마우스 그룹의 s.c 면역화 후에 PBMC에서의 1차(1) 및 2차(2) OVA-특이적 CD4 및 CD8 T 세포를 IFN-γ ELISPOT에 의해 측정하였고, 결과를 도 2c에 도시한다. 5마리 C57BL/6 마우스의 그룹을 3주 간격으로 2회 s.c.로 도면에 표시한 백신에 의해, 또는 i.v.로 주어지는 Lm-OVA의 5x10⁶ CFU에 의해 면역화하였다. 부스팅 후 4주에, 마우스를 VV-OVA의 5x10⁵ PFU로 시험감염시켰고, 5일 후에 난소를 채취하였으며, 처리하였고, VV-OVA를 플라크 분석에 의해 정량화하였다.

도면에서 나타내는 바와 같이, 백신 효능은 제형에 대해 의존적이었고, 본 발명자들의 초기 결과는 세포기질 내로 백신을 효율적으로 전달할 가능성에 기인하여 베시백스(등록상표) 리포솜을 지니는 제형이 최적이라는 것을 나타낸다. 주목할만하게도, CDN-면역보강 OVA로 백신접종한 마우스를 종두증 바이러스로 시험감염에 의해 완전히 보호하였다. 음성 대조군의 주어진 HBSS와 비교에 의해, 이 수준의 보호는 4 로그를 초과하였다. CDN-면역보강 백신에 의해 얻어지는 보호 수준은 MPL-면역보강 OVA(50㎍의 인간 MPL 용량을 사용) 또는 리스테리아-OVA 백신보다 더 양호하였다.

도 7은 보조자극 분자, 예컨대 CD80 및 CD86의 발현에 의해 평가되는 바와 같이 CDN 처리 시 인간 수지상 세포의 유발을 도시한다. 이 실험에서, CD14+ 단핵구를 PBMC로부터 단리시켰고, GM-CSF 및 IL-4의 존재에서 배양시켰다. 제6일에, 10⁵ DC를 도면에 나타낸 바와 같이 100ng/ML LPS, 20μM CDN(c-다이-AMP); 369㎍ 리포솜(베시백스(등록상표)), 또는 리포솜 + CDN로 처리하였다. 나타난 보조자극 분자를 유세포분석에 의해 48시간 후에 검출하였다. 주목한 바와 같이, 리포솜은 수지상 세포 성숙을 유발하는 CDN의 능력을 실질적으로 개선시킨다.

실시예 2.

B16 흑색종 종양 모델은 공격적이고 불량하게 면역원성이며, 방사선 조사된 GM-CSF 분비 B16 흑색종 종양 세포(B16-GM)에 의한 치료적 백신접종은 CTLA-4 또는 PD-1과 같은 면역 검사점의 차단과 조합되지 않는다면 효과적이지 않았다. 이 실시예에서, 본 발명자들은 스팅백스(디기토닌과 함께 제형화되고 방사선 조사된 B16-GM과 함께 인큐베이션된 CDN)의 단일 주사가 종양이 감지가능하고 확립되었을 때 B16 종양 세포 이식 후에 제7일에 투여될 때, 확립된 감지가능한 B16 종양의 성장을 상당히 저해한다는 것을 나타낸다.

5x10⁴ B16 흑색종 세포를 C57BL/6 마우스의 풋패드에 접종하였고, 7일에 종양이 감지되었을 때, 마우스에 도 3에서 나타낸 백신을 이용하여 대측성 대퇴부에서 1회 s.c.로 주사하였다. 다음 양의 백신 성분을 각각의 주사에 대해 사용하였다: 방사선 조사 B16 GM-CSF (GVAX), 1.5x10⁶ 세포; CDN만, 20 ng; 디기토닌, 10㎍/㎖. 스팅백스를 20℃에서 30분 동안 CDN 및 디기토닌과 함께 방사선 조사 B16 GM-CSF의 인큐베이션에 의해 제조하였고, PBS로 3x 세척하였으며, 200㎕의 PBS 중에서 재현탁시킨 후에 얻어진 조성물을 주사하였다. 또한 제형 정보에 대해 문헌[Woodward et al., Supporting online material 27 May 2010 on Science Express DOI: 10.1126/science.1189801]을 참조한다. 종양 성장을 매일 측정하였다. 성장은 Rx 그룹 없음에 대해 스팅백스에 의해 유의하게 저해되었다(P<0.01). 도 3A에서 나타낸 바와 같이, 보체 중 하나 단독으로 처리가 미처리 대조군 마우스에 비해 종양 성장에 대해 영향이 없었기 때문에, 종양 저해는 CDN과 B16-GM의 조합에 의존적이었다. 추가적으로, B16 종양 상에서 발현된 내인성 레트로바이러스-특이적 Ag인 p15E에 특이적인 CD8 T 세포 반응은 B16-GM 처리 마우스에 비해 스팅백스-처리 종양-보유 마우스에서 향상되었다(데이터 미제시).

이들 데이터로부터, 스팅-표적화 CDN과 방사선 조사 GM-분비 종양 세포 백신 간의 상승효과는 IFN-β의 CDN-의존적 유발이 GM-CSF-분화 DC의 활성화를 야기하고, 따라서 강한 "신호 3"을 제공하며, 더 효과적인 항종양 T 세포 반응을 야기할 것을 필요로 하는 것으로 믿어진다. 이런 이유로, 본 발명자들은 CDN이 TRAMP-GM 세포에서 IFN-β의 생성을 직접적으로 유발할 수 있는지 여부를 결정하였다. 도 3B에서 나타내는 바와 같이, 디기토닌과 함께 제형화될 때, CDN은 TRAMP-GM과 1차 대식세포 둘 다에서에서 IFN-β의 발현을 유발하였지만, 기능성 스팅 단백질이 없는 골든 티켓(goldenticket: gt) 마우스로부터의 대식세포에서는 발현을 유발하지 않았다.

도 4는 스팅-표적화 CDN/GVAX 조합에 의해 나타난 치료적 이점의 용량-의존도를 입증한다. 이 실험에서, 5x10⁴ B16 흑색종 세포를 C57BL/6 마우스의 풋패드에 접종하였다. 일단 종양이 제6일에 감지되면, 2, 20 또는 200ng CDN/동물에서 GVAX(B16 GM-CSF(GVAX), 1.5x10⁶ 세포) 또는 CDN/GVAX 조합을 대측성 대퇴에 피하로 주사하였다. 병용 치료의 경우에, CDN을 10㎍/㎖에서 30분 동안 20℃에서 디기토닌과 함께 제형화하였고, 후속적으로 PBS로 4x 세척하여 상기 기재한 바와 같은 주사 전에 미혼입 CDN을 제거하였다. 종양 용적을 전체 20마리 동물/처리군에서 매일 측정하였다. 도면에 나타내는 바와 같이, CDN의 농도가 2ng/동물 내지 20ng/동물로 증가됨에 따라 항종양 반응은 증가되었지만, 투약량을 200ng/㎖까지 증가시킴에 의해 추가적인 증가는 관찰되지 않았다.

도 5는 CDN/GVAX 조합에 대한 상승적 항종양 반응의 추가적인 증거를 제공한다. 이 도면에서, B16 흑색종 세포를 동물로부터 채취하였고, 세포를 면역조직화학을 위해 슬라이드 상에 고정하였다. 플루오레세인-표지 항-CD8 항체를 용해시켜 종양 내로 CR8+ T-세포 침윤을 시각화하였다. DAPI를 사용하여 종양 세포의 핵을 대비 염색하였다. 도면에서 나타낸 4개의 패널은 미처리 B16 흑색종 세포(A), 및 CDN(B), GVAX(C) 및 CDN/GVAX(D)로 처리한 세포이다. 나타낸 바와 같이, CDN 또는 GVAX 단독 중 하나에 비해 CDN/GVAX에 의해 CD*+ T-세포 종양 침윤에서의 실질적인 개선을 관찰하였다.

유사하게는, 도 6은 CDN 또는 GVAX 중 하나 단독에 비해 CDN/GVAX 에 의한 성숙 인터페론 γ-생성 비장 DC(CD11c+ 세포)의 개선된 유발을 입증한다. 본 실험에서, 마우스를 상기 기재한 바와 같이 처리하였고, 2마리 마우스/그룹으로부터의 비장을 채취하였다. 전체 비장세포를 채취하였고, 항-CD11c 및 항-IFNa 컨쥬게이트로 염색하였다. 처리(미처리 B16, CDN, CDN + 디기토닌, GVAX 및 CDN/GVAX + 디기토닌)를 도면에 나타낸다.

실시예 3.

도 9는 방사선 조사 GM-CSF 발현 동종이계 종양 세포와 함께 공동제형화한 스팅-활성화 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드인 "스팅백스"(GVAX; 스팅 + GVAX = 스팅백스)의 상승적 작용 메커니즘을 도시한다. GVAX 종양 세포 백신은 면역계에 대해 다수의 종양 관련 항원의 편파적이지 않은 제시를 제공한다. GVAX에 의해 생성된 GM-CSF는 주사 부위에 대해 수지상 세포(DC)를 동원시킨다. CDN은 동원시킨 DC를 활성화시키는데, 이는 결국 종양과 소통하고 종양을 사멸시키는 강력한 항원-특이적 CD4 및 CD8 T 세포를 활성화시키거나 또는 프라이밍하고, 임상적 이점을 초래한다. 스팅백스는 GM-CSF 동원 DC에 대해 데포로서 작용함으로써 또는 자가 분비 신호처리를 통해 종양 반응을 향상시킬 수 있고, 조합으로 GM-CSF 동원 DC를 활성화시키는 TBK-1/IRF-3 의존적 IFN-β와 NF-κB 전염증성 사이토카인을 둘 다 발현시킨다.

스팅백스의 증가된 항-종양 효능에 대한 메커니즘은 스팅에 대한 CDN의 직접 결합에 의해 매개되는 선천성 면역의 활성화에 기인하며, 이 수용체에서의 입체배좌 변화를 촉발하고, TBK-1/IRF-3 축을 통한 신호처리 및 IFN-α 및 IFN-β를 포함하는 1형 인터페론(IFN)의 활성화를 야기하는 것으로 믿어진다. GVAX 종양 세포 백신에 의해 생성된 GM-CSF는 주사 부위에 수지상 세포(DC)를 동원시킨다. CDN은 동원시킨 DC를 활성화시키는데, 이는 결국 종양과 소통하고, 종양을 사멸시키는 강력한 항원-특이적 CD4 및 CD8 T 세포를 활성화시키거나 또는 프라이밍하고, 임상적 이점을 초래한다.

선천성 면역을 활성화시키는 CDN 효능의 특징으로서 IFN-α의 수준을 결정하기 위해, 15개의 독립적 인간 공여체로부터 단리시킨 1x 10⁶개의 1차 인간 PBMC를 50μM의 c-다이-GMP(CDG), 1㎍/㎖의 인터페론 자극 DNA(ISD) 또는 이펙틴(Effectene) 형질감염 시약(퀴아젠(Qiagen))을 이용하는 4㎍/㎖의 폴리(I:C)와 함께 37℃, 5% CO₂에서 30분 동안 96웰 U 바닥 플레이트에서 인큐베이션시켜 분자를 PBMC 내로 옮겼다. ISD(인터페론 자극 DNA)는 TLR 독립적이며(Stetston, D.B. et. al. Immunity 24, 93-103, January 2006) cGAS를 통해 신호를 처리하고, 따라서 스팅-의존적인 한편, 폴리(I:C)는 TLR3과 RIG-I 경로 둘 다를 통해 신호처리할 수 있으며, 따라서 스팅-독립적이다. 30분 후에, 세포를 세척하였고, 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지로 대체하였으며, 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션시켰다. 24시간 인큐베이션 후에, IFN-α 수준을 혈구 계산 비드 어레이(CBA, BD 바이오사이언스(BD Biosciences))에 의해 결정하였다(도 8). 이들 결과는 사이클릭-다이-GMP가 다수의 독립적 공여체로부터 제조된 인간 백혈구에서 선천성 면역을 활성화시키며, 따라서 스팅백스의 작용 메커니즘을 뒷받침한다는 것을 입증한다.

당업자는 본 발명이 목적을 수행하고 언급한 결과 및 이점뿐만 아니라 그에 내재하는 것을 얻는데 적합하다는 것을 용이하게 인식한다. 본 명세서에서 제공된 예는 대표적인 바람직한 실시형태이며, 예시적이고, 본 발명의 범주에 대한 제한으로서 의도되지 않는다.

본 발명은 다음의 설명에서 제시되거나 도면에서 도시된 구성성분의 구성의 배열에 대해 그리고 상세한 설명에 대해 그의 적용이 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명은 다양한 방법으로 기재되고 실행되며 수행되는 것에 추가되는 실시형태가 가능하다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 어구 및 용어뿐만 아니라 요약은 설명의 목적을 위한 것이며, 제한되는 것으로 간주되어서는 안 된다는 것이 이해되어야 한다.

이와 같이, 당업자는 본 개시내용이 기반으로 하는 개념이 본 발명의 몇몇 목적을 수행하기 위한 다른 구조, 방법 및 시스템을 설계하기 위한 기초로서 용이하게 이용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 이러한 동등한 구성물이 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어나지 않는 한, 특허청구범위가 이러한 동등 구성물을 포함하는 것으로 간주된다는 것은 중요하다.

본 발명은 당업자가 그것을 제조하고 사용하는데 충분히 상세하게 기재되고 예시되었지만, 다양한 변화, 변형 및 개선은 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어나는 일 없이 명확하여야 한다. 본 명세서에 제공된 예는 대표적인 바람직한 실시형태이며, 예시적이고, 본 발명의 범주에 대한 제한으로서 의도되지 않는다. 당업자에 대해 그 안의 변형 및 다른 용도가 생길 것이다. 이들 변형은 본 발명의 범주 내에 포함되며, 특허청구범위에 의해 정해진다.

치환 및 변형을 달리하는 것은 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어나는 일 없이 본 명세서에 개시된 본 발명으로 만들어질 수 있다는 것이 당업자에게 용이하게 명확할 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 특허 및 간행물은 본 발명이 속하는 당업자의 수준을 나타낸다. 모든 특허 및 간행물은 각각의 개개 간행물이 참조로서 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 나타나는 것과 같은 동일한 정도로 본 명세서에 참조로서 포함된다.

본 명세서에 적합하게 예시적으로 기재된 본 발명은 본 명세서에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 구성요소 또는 구성요소들, 제한 또는 제한들 없이 실행될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 명세서의 각각의 예에서 임의의 용어 "포함하는", "본질적으로 이루어지는" 및 "이루어지는"은 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다. 사용된 용어 및 표현은 설명의 용어로서 그리고 제한하지 않고 사용되며, 이러한 용어 및 표현의 사용에서 나타내고 기재한 특징의 임의의 동등물 또는 이의 일부를 제외하는 것을 의도하지 않지만, 다양한 변형은 특허청구된 본 발명의 범주 내에서 가능하다는 것이 인식된다. 따라서, 본 발명은 바람직한 실시형태 및 선택적 특징에 의해 구체적으로 개시되었지만, 개시된 본 명세서의 개념의 변형 및 변화는 당업자에 의존할 수 있고, 이러한 변형 및 변화는 첨부되는 특허청구범위에 의해 정해지는 바와 같은 본 발명의 범주 내인 것으로 고려된다는 것이 이해되어야 한다.

다른 실시형태는 다음의 특허청구범위 내에서 제시된다.

Claims (19)

1. 스팅(STING)에 결합하고 스팅-의존적 TBK1 활성화를 유발하는 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드; 및
   수지상 세포(dendritic cell) 유발, 동원(recruitment) 및/또는 성숙을 자극하는 하나 이상의 사이토카인을 발현시키고 분비하는 불활성화된 종양 세포를 포함하는 조성물.
2. 제1항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함하는 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 GM-CSF를 발현시키고 분비하는 것인 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 CCL20을 발현시키고 분비하는 것인 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 CCL3을 발현시키고 분비하는 것인 조성물.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 IL-12p70을 발현시키고 분비하는 것인 조성물.
7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 FLT-3 리간드를 발현시키고 분비하는 것인 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, CTLA-4 길항물질(antagonist) 및 TLR-4 작용물질(agonist) 중 하나 이상을 더 포함하는 조성물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양 세포는 방사선을 이용하는 처리에 의해 불활성화되는 것인 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는 c-다이-AMP, c-다이-GMP, c-다이-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP 및 c-GMP-IMP, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이클릭 퓨린 다이뉴클레오타이드는 하나 이상의 지질과 함께 제형화되는 것인 조성물.
12. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질은 디기토닌을 포함하는 것인 조성물.
13. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질은 리포솜을 형성하는 것인 조성물.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 항에 있어서, 하나 이상의 애주번트를 더 포함하는 조성물.
15. 제14항에 있어서, 상기 하나 이상의 애주번트는 CpG 및/또는 모노포스포릴 지질 A를 포함하는 것인 조성물.
16. 개체에서 암에 대한 면역반응을 유발하는 방법으로서,
    제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 상기 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 불활성화된 종양 세포, 또는 상이한 종양 세포들의 혼합물이 상기 개체의 암에 대해 유형-매칭된(type-matched) 것인, 개체에서 암에 대한 면역반응을 유발하는 방법.
17. 제16항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포, 또는 상이한 종양 세포들의 혼합물은 동종이계 종양 세포주 또는 동종이계 종양 세포주들인 것인, 개체에서 암에 대한 면역반응을 유발하는 방법.
18. 제16항에 있어서, 상기 불활성화된 종양 세포는 자가 유래(autologous) 종양 세포인 것인, 개체에서 암에 대한 면역반응을 유발하는 방법.
19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양 세포는 결장직장암 세포, 상부 호흡-소화(aero-digestive) 편평상피암 세포, 폐암 세포, 뇌암 세포, 간암 세포, 위암 세포, 육종 세포, 백혈병 세포, 림프종 세포, 다발성 골수종 세포, 난소암 세포, 자궁암 세포, 유방암 세포, 흑색종 세포, 전립선암 세포, 췌장암종 세포 및 신장암종 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 개체에서 암에 대한 면역반응을 유발하는 방법.

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