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KR20130118731A - 항증식성 질환 치료에 사용하기 위한 pi3k 억제제로서 피페라지노트리아진 - Google Patents

항증식성 질환 치료에 사용하기 위한 pi3k 억제제로서 피페라지노트리아진 Download PDF

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KR20130118731A
KR20130118731A KR1020127031105A KR20127031105A KR20130118731A KR 20130118731 A KR20130118731 A KR 20130118731A KR 1020127031105 A KR1020127031105 A KR 1020127031105A KR 20127031105 A KR20127031105 A KR 20127031105A KR 20130118731 A KR20130118731 A KR 20130118731A
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KR
South Korea
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compound
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methyl
acryloyl
ethyl
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KR1020127031105A
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블라디미르 크밀자노빅
나타사 크밀자노빅
베른트 지세
마티아스 와이만
Original Assignee
유니버시티 오브 바젤
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Publication date
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Abstract

본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 및 그의 토토머, 용매화물 및 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00011

식 중에서,
R1은 메틸, n-헥실, 아미노에틸, 메틸아미노에틸, 에틸아미노에틸, 디메틸아미노에틸, 아크릴로일아미노에틸, 메타크릴로일아미노에틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, C1-C4-알킬-술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일이거나; 또는 R1은 링크 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸이며, 또 R2 및 R3은, 서로 독립적으로, 수소 또는 C1-C4-알킬이거나, 또는 R2 및 R3은 함께 합쳐져서 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성함. 이들 화합물은 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절되는 질병 또는 장애의 예방 또는 치료, 특히 과증식성 장애를 치료에서 효과적이다.

Description

항증식성 질환 치료에 사용하기 위한 PI3K 억제제로서 피페라지노트리아진{PIPERAZINOTRIAZINES AS PI3K INHIBITORS FOR USE IN THE TREATMENT ANTIPROLIFERATIVE DISORDERS}
본 발명은 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K), 라파마이신의 포유동물 표적(mTOR), DNA-PK 및 ATM 키나제를 억제하는, 벤즈이미다조, 모르폴리노 및 4-치환된 피페라지노 치환기를 갖는 신규 트리아진, 및 약학적으로 허용되는 그의 염에 관한 것이다. 본 발명은 또한 관련 병리학적 상태를 치료하기 위하여 상기 화합물을 사용하는 방법에도 관한 것이다.
단백질 키나제는 성장 인자, 사이토카인 또는 케모카인을 비롯한 세포외 매개제 또는 자극에 반응하여 세포의 활성화, 성장, 분화, 생존 및 이동을 제어하는 신호전달(singaling events)에 관여한다. 일반적으로, 이들 키나제는 2개 그룹, 즉 티로신 잔기를 우선적으로 인산화하는 그룹 및 세린 및/또는 트레오닌 잔기를 우선적으로 인산화하는 그룹으로 대별된다. 상기 티로신 키나제는 막-관통(membrane-spanning) 성장 인자 수용체, 예를 들어 상피세포 성장 인자 수용체(EGFR) 및 Src 패밀리 키나제, Syk 패밀리 키나제 및 Tec 패밀리 키나제를 비롯한 세포질형 비-수용체 키나제를 포함한다.
부적절하게 높은 단백질 키나제 활성은 암, 대사성 질병, 면역 질병 및 염증성 질환을 비롯한 다수의 질병과 관련되어 있다. 이것은 효소의 돌연변이, 과발현 또는 부적절한 활성화에 기인한 제어 메카니즘의 실패에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 유발될 수 있다.
포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)는 광범위한 세포 활성을 조절하고 또 성장 및 대사 제어에 대한 중심인 것으로 인식되어 왔다. PI3K 경로를 표적으로 하는 유전자적으로 변형된 마우스, 및 카우덴 증후군, 결절성 경화증, 모세혈관 확장성 운동실조증(ataxia telangiectasia), X-결합된 근세관성 근병증(myotubular myopathy) 및 샤르코-마리-투스 신경병증을 비롯한 인간 유전 질병의 설명은 포스포이노시티드 신호전달의 세포 및 전신적 역활에서 추가의 통찰력을 제공하였다. 포스포이노시티드 수준, 및 특히 클래스 I PI3K, PtdIns(3,4,5)P3의 생성물의 탈조절(deregulation)은 암, 만성 염증, 알레르기, 대사성 질병, 당뇨병 및 심혈관 문제의 발병에 관여된다.
PI3 키나제/Akt/PTEN 경로는 암 약물 개발을 위한 매력적인 표적인데, 이는 이러한 물질이 암 세포에서 증식을 억제하고, 세포자살(apoptosis) 억제를 반전시키며 또 세포독성제에 대한 내성을 극복할 것으로 기대되고 있기 때문이다. PI3 키나제 억제제는 보고되어 있다[참고: Marone et al., Biochimica et Biophysica Acta 1784:159-185(2008)].
특정 피리미딘 화합물(WO 2008/032033호) 및 트리아진 화합물(WO 02/088112호, WO 2004/03782호, WO 2006/095906호)은 PI3K 및/또는 mTOR 억제제 활성을 갖고 또 암 세포의 성장을 억제하는 것으로 공지되어 있다. 트리아진 화합물 ZSTK474(젠야쿠 고교 제조)는 중요한 독성의 증거 없이 마우스에서 인간 암 이종이식편(xenograft)에 대하여 강력한 항종양 활성을 나타낸 PI3K에 대하여 고도로 활성인 최초로 경구 투여된 트리아진 화합물이다[참조: Yaguchi et al., Journal of the National Cancer Institute, 98:545-556,(2006)]. ZSTK474는 클래스 I 포스파티딜-이노시톨 3-키나제 이소폼(isoform)의 ATP-경쟁성 억제제이다[참고: Kong et al., Cancer Sci, 98:1638-1642(2007)].
발명의 요약
본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 및 그의 토토머, 용매화물 및 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00001
식 중에서,
R1은 메틸, n-헥실, 아미노에틸, 메틸아미노에틸, 에틸아미노에틸, 디메틸아미노에틸, 아크릴로일아미노에틸, 메타크릴로일아미노에틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, C1-C4-알킬-술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일이거나; 또는 R1은 링크 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸이며, 또
R2 및 R3은, 서로 독립적으로, 수소 또는 C1-C4-알킬이거나, 또는 R2 및 R3은 함께 합쳐져서 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성함.
또한 본 발명은 화학식(I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물 및 치료를 필요로 하는 포유동물에 유효량의 화학식(I)의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절되는 질병 또는 이상을 예방 또는 치료하는 방법, 특히 과증식성 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양태는 포유동물에서 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절된 질환이나 상태를 치료 또는 예방하기 위한 화학식(I)의 화합물의 용도, 및 포유동물에서 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절된 질환이나 상태를 치료 또는 예방하기 위한 의약 제조에서 화학식(I)의 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법, 분리하는 방법 및 정제하는 방법, 이전에 정의한 바와 같은 화학식(I)의 화합물을 제조하는데 유용한 신규 중간체, 및 지질 키나제 억제제를 스크리닝하기 위한 스크리닝 방법을 포함한다.
발명의 상세한 설명
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "C1-C4-알킬"은 1 내지 4개 탄소 원자의 포화 직쇄 또는 분기쇄(branched chain) 일가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. C1-C4-알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, sec-부틸 및 tert-부틸이다.
용어 C1-C4-알킬술포닐"은 화학식(I)에 도시된 피페라진의 위치 4에 부착된, -SO2- 기에 연결된 상기 정의된 바와 같은 C1-C4-알킬을 의미한다.
아미노에틸, 메틸아미노에틸, 에틸아미노에틸, 디메틸아미노에틸, 아크릴로일아미노에틸, 메타크릴로일아미노에틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, 및 아크릴로일아미노에틸에서, 상기 아미노 또는 알콕시 작용은 바람직하게는 에틸의 2-위치에 연결된다.
상기 R2 및 R3 치환기는 모르폴린의 중심에 대한 결합에 의해 표시된 바와 같이 화학식(I)에 도시된 모르폴린의 임의 탄소 원자에 연결될 수 있고 또 특정 위치에 연결된 것이 아니다. 이러한 탄소 원자의 예는 위치 2, 3, 5 및 6에서의 탄소 원자이다. 상기 R2 및 R3 치환기는 상이한 탄소 원자 상에 위치하거나 또는 동일 탄소 원자 상에 위치하여 같은자리(geminal) 치환을 생성할 수 있다. 치환기 상기 R2/R3에 대한 위치의 예는 2/2, 2/3, 2/5, 2/6, 3/3, 및 3/5이다. R2 및 R3이 합쳐져서 에틸렌을 나타내면, 동일 위치가 가능하며, 그에 의해 같은자리 치환은 스피로 시클로프로필 작용을 초래하고, 인접(vicinal) 치환은 고리구조의 시클로부탄을 초래하거나, 또는 바람직한 2/5, 2/6 및 3/5 치환은 참으로 브릿지화된 화합물을 초래한다. R2 및 R3이 합쳐져서 메틸렌을 나타내면, 위치 2/3, 2/5, 2/6, 및 3/5가 가능하며, 그에 의해 인접 치환이 고리구조(annulated)의 시클로프로판을 초래하거나, 또는 바람직한 2/5, 2/6 및 3/5 치환은 참으로 브리지화된 화합물을 초래한다.
용어 "키럴"은 거울상의 비-동일성 특성을 갖는 분자를 지칭하는 한편, 용어 "비키럴"은 이들의 거울 상에서 겹쳐질 수 있는 분자를 지칭한다.
용어 "입체이성질체"는 동일한 화학 성분을 갖지만 공간에서 원자 또는 기의 배열에 관하여 상이한 화합물을 지칭한다. "부분입체이성질체"는 2 또는 그 이상의 키럴 중심을 갖는 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성질체는 서로의 거울상이 아니며, 또 이들은 상이한 물리적 특성, 예컨대 융점, 비점, 스펙트럼 특성, 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성질체의 혼합물은 결정화에 의해 또는 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고해상 분해 과정에 의해 분리될 수 있다. "에난티오머"는 서로의 겹쳐지지 않는 거울상인 화합물의 2개의 입체이성질체를 지칭한다.
여기서 일반적으로 사용된 입체화학적 정의 및 명명법은 S. P. Parker, Ed., McRaw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994를 따른다. 본 발명의 화합물은 비대칭적 또는 키럴 중심을 함유할 수 있으므로, 상이한 입체이성질체 형태로 존재한다. 비제한적으로, 부분입체이성질체, 에난티오머 및 아트로프 이성질체(atropisomers), 뿐만 아니라 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물을 비롯한 본 발명의 화합물의 모든 입체이성질체 형태는 본 발명의 일부를 형성한다. 다수의 유기 화합물이 광학 활성 형태로 존재하며, 즉 이들은 면-편광된 광의 평면을 회전하는 능력을 갖는다. 광학 활성 화합물을 기재함에 있어서, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 그의 키럴 중심(들) 근처의 분자의 절대 구조를 나타내기 위해 사용된다. 접두어 d 및 l 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의해 면 편광된 광의 회전을 표시하기 위해 이용되며, (-) 또는 l은 화합물이 좌선성임을 나타낸다. 접두어 (+) 또는 d를 갖는 화합물은 우선성이다. 주어진 화학 구조에서, 이들 입체이성질체는 이들이 서로에 대하여 거울상인 것을 제외하고는 동일하다. 특정 입체이성질체는 에난티오머라고도 불리며, 또 이러한 이성질체의 혼합물은 흔히 에난티오머 혼합물이라 불린다. 에난티오머의 50: 50 혼합물을 라세미 혼합물 또는 라세미체라 불린다.
용어 "토토머(tautomer)" 또는 "토토머 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통하여 상호전환가능한 상이한 에너지를 갖는 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 토토머는 케토-에놀 및 이민-에나민 이성질화와 같이 양성자의 이동을 통하여 상호전환되는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 구절 "약학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용되는 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적 염은, 비제한적으로, 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 비설페이트, 포스페이트, 에시드 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 에시드 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 및 파모에이트(pamoate) 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 염은 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 대이온(counter ion)과 같은 다른 분자의 함입체(inclusion)를 포함할 수 있다. 대이온은 모 화합물의 전하를 안정화하는 유기 또는 무기 부분일 수 있다. 또한, 약학적으로 허용되는 염은 그 구조에 1 이상의 하전 원자를 가질 수 있다. 다수의 하전된 원자가 약학적으로 허용되는 염의 일부이라는 예는 다수의 대이온을 가질 수 있다. 따라서, 약학적으로 허용되는 염은 1 이상의 하전 원자 및/또는 1 이상의 대이온을 가질 수 있다.
본 발명의 화합물이 염기이면, 소망하는 약학적으로 허용되는 염은 당해 분야에서 입수가능한 적합한 방법에 의해, 예를 들어 자유 염기를 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 메탄설폰산, 인산 등과 같은 무기 산과 처리하는 것에 의해 제조될 수 있거나, 또는 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 글루쿠론산 또는 갈락투론산과 같은 피라노시딜산, 시트르산 또는 타르타르산과 같은 α-히드록시산, 아스파르트산 또는 글루탐산과 같은 아미노산, 벤조산 또는 신남산과 같은 방향족 산, p-톨루엔설폰산 또는 에탄설폰산 등과 같은 설폰산 등의 유기산과 처리하는 것에 의해 제조될 수 있다.
용어 "약학적으로 허용되는"은 다른 성분을 포함하는 제제 및/또는 그에 의해 처리될 포유동물에 대하여 화학적으로 및/또는 독성학적으로 혼화성이어야 하는 것을 의미한다.
"용매화물"은 본 발명의 1 이상의 용매가 본 발명의 화합물과 조합 또는 복합한 것을 지칭한다. 용매화물을 형성하는 용매의 예는, 비제한적으로, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산, 및 에탄올아민을 포함한다. 용어 "수산화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
용어 "보호기"는 화합물 상의 다른 작용기와는 반응하면서 특정 작용기만을 차단하거나 보호하기 위해 흔히 사용되는 치환기를 지칭한다. 예를 들어, "아미노-보호기"는 화합물 중의 아미노 작용기를 차단하거나 또는 보호하는 아미노 기에 부착된 치환기이다. 적합한 아미노-보호기는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐, 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐(Fmoc)를 포함한다. 보호기 및 이들의 사용에 대한 일반적 기재는 T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991 참조.
용어 "링커"는, 비제한적으로, 1 내지 20개, 바람직하게는 2 내지 6개의, 경우에 따라 치환된 메틸렌기 사슬을 포함하거나, 또는 1 이상의 메틸렌기가 산소, 카보닐옥시 기, 경우에 따라 치환된 질소, 카복사미드기, 우레아 기, 황, 디설피드 기, 또는 이들의 조합에 의해 치환된 그러한 사슬을 포함한다. 고려되는 치환기는 옥소(카보닐 작용기 생성), C1-C6 알킬, 삼작용성 링커를 생성하는 1 내지 6개 메틸렌기 사슬, 페닐, 삼작용성 링커를 생성하는 페닐렌 또는 천연 산출 아미노산의 잔기이다. 특정 링커는 예컨대, 폴리메틸렌 기, 1 또는 2개 아미드 작용을 포함하는 폴리메틸렌 기, 폴리옥시에틸렌 기, 또는 천연 산출 20개 필수 아미노산의 1 내지 6개로 이루어진 소형 펩티드이다. 상기 링커는 아크릴로일 기의 베타-탄소원자에 연결되거나 또는 아미노에틸 중의 아미노 기에 연결된다. "태그를 갖는 링커"는 아크릴로일 기의 베타-탄소 원자에 연결된 링커 또는 링커의 한쪽 말단에서는 아미노에틸 중의 아미노 기에 또 다른 말단에는 태그에 연결된 링커, 또는 2개의 상이한 태그를 갖는 삼작용성 링커를 의미한다.
용어 "태그"는, 비제한적으로, 비오틴, 애비딘, 스트렙트애비딘, 형광 마커, 천연 산출 아미노산, 또는 고상, 예를 들어 중합체 비이드 또는 플라스틱 또는 유리 슬라이드를 포함한다. 고려되는 형광 마커의 예는 4,4-디플루오로-1,3,5,7-테트라메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-8-프로피온산(BODIPY® 493/503, SE), 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® FL), 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® FL, SE), 6-((4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피오닐)아미노)-헥산산(BODIPY® FL-X, SE), 4,4-디플루오로-5-페닐-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® R6G, SE), 4,4-디플루오로-5,7-디페닐-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® 530/550,SE), 6-((4,4-디플루오로-1,3-디메틸-5-(4-메톡시페닐)-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-2-프로피오닐)아미노)헥산산(BODIPY® TMR-X, SE), 4,4-디플루오로-5-(2-티에닐)-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® 558/568, SE), 4,4-디플루오로-5-스티릴-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산(BODIPY® 564/570, SE), 6-(((4-(4,4-디플루오로-5-(2-티에닐)-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-일)페녹시)아세틸)아미노)헥산산(BODIPY® TR-X, SE), 6-(((4,4-디플루오로-5-(2-티에닐)-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-일)스티릴옥시)아세틸)-아미노헥산산(BODIPY® 630/650-X, SE), Alexa Fluor® 350 카복시산, 5-카복시로다민 6G(5-CR 6G, SE), 로다민 Green™ 카복시산, 히드로클로라이드(5(6)-CR 110, SE)이며, 이들은 1개 말단에서 아민 작용기를 함유하는 링커와 반응하기 위한 숙신이미딜 에스테르로서 통상 적용된다.
용어 "치료하는" 및 "치료"는 치료적 처리 및 예방 또는 방지적 처치를 지칭하며, 그 목적은 암의 발병 또는 퍼짐과 같은 바람직하지 않은 병리학적 변화 또는 장애를 예방 또는 완화(감소)시키는 것이다. 본 발명의 목적을 위하여, 효과적이거나 또는 소망하는 임상적 결과는, 비제한적으로, 검출가능하든 또는 검출될 수 없든 증상의 경감, 질병 정도의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화시키지 않는), 질병 진행의 지연 또는 완화, 질병 상태의 경감 또는 완화, 및 일시적 및 전체적 차도를 포함한다. "치료"는 또한 그러한 치료를 받지 않을 경우 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장시키는 것을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 사람들은 그러한 상태 또는 장애를 이미 갖는 사람들뿐만 아니라 그러한 상태 또는 장애를 가질 경향이 있는 사람 또는 그러한 상태 또는 장애를 예방하기 위한 사람들을 포함한다.
구절 "치료적 유효량"은 (i) 특정 질병, 상태 또는 장애를 치료 또는 방지하는, (ii) 특정 질병, 상태 또는 장애의 1 이상의 증상을 감쇠, 경감 또는 제거하거나, 또는 (iii) 본 명세서에 기재된 특정 질병, 상태 또는 장애의 1 이상의 증상의 개시를 방지 또는 지연하는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 암의 경우, 약물의 치료적 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키며; 주변 기관으로 암 세포가 침투하는 것을 억제(즉, 어느 정도 지연시키고 또 바람직하게는 중지시킴)하며; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 지연시키고 또 바람직하게는 중지시킴)하며; 종양 성장을 어느 정도 억제하고; 및/또는 암과 관련된 1 이상의 증상을 어느 정도 완화시키는 것을 의미한다. 약물이 존재하는 암 세포의 성장을 방지하고 및/또는 치사시킬 수 있는 정도에 따라, 세포증식억제성(cytostatic) 및/또는 세포독성(cytotoxic)일 수 있다. 암 요법의 경우, 효능은 예를 들어 예를 들어, 질병 진행에 걸린 시간(TTP)을 평가하거나 및/또는 반응 속도(RR)를 결정하는 것에 의해 측정될 수 있다.
용어 "암" 및 "암성(cancerous)"은 세포 성장이 조절되지 않는 것을 전형적으로 특징으로 하는 포유동물에서 생리학적 상태를 지칭하거나 또는 설명한다. "종양"은 1 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 예는, 비제한적으로, 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프 악성종양을 포함한다. 이러한 암의 더욱 특별한 예는 편평 상피세포 암(예컨대, 상피 편평 상피세포 암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암("NSCLC")을 비롯한 폐암, 폐의 선암 및 폐의 편평 상피세포 암종, 복막암, 간세포암, 위암 또는 위장관암을 비롯한 위장암, 췌장암, 교모세포종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 대장암, 직장암, 대장직장암, 자궁내막 암종 또는 자궁 암종, 침샘암종, 신장(kidney or renal)암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암종, 항문 암종, 음경 암종뿐만 아니라 머리 및 목암을 포함한다.
"화학요법제"는 암 치료에 유용한 화학 화합물이다. 공지된 화학요법제의 예는 트라츠주맙, 페르투주맙, 에르로티닙, 보르테조밉, 풀베스트란트, 수니팁, 레트로졸, 이마티닙 메실레이트, 피나수네이트, 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 로이코보린, 라파마이신, 라파티닙, 로나파르닙, 소라페닙, 게피티닙, AG1478; 티오테파, 시클로포스파미드와 같은 알킬화제; 부술판, 임프로술판 및 피포술판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레-도파, 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌-멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸로-멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 멜라민; 아세토게닌; 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(합성 유사체 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 포함); 크립토피신; 돌라스타틴; 두오카르마이신(합성 유사체 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴과 같은 니트로스우레아스; 에네디인 항생물질(예컨대, 칼리체아미신, 특히 칼리체아미신 감마 1 및 칼리체아미신 오메가 1과 같은 항생물질; 디네미신 A를 비롯한 디네미신; 클로드로네이트와 같은 비포스포네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생물질 발색단), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아졸-5-옥소-L-노르레우신, 독소루비신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실과 같은 항대사물질; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스탈놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄과 같은 항부신(anti-adrenals); 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 론이다이닌; 마이탄신 및 안사미토신과 같은 마이탄시노이드; 미토구아존; 미토크산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속사트론; 포도필리닌산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK 다당류 복합체; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 트리코테센; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 마노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드; 탁소이드, 예컨대, 파클리탁셀, 파클리탁셀의 알부민-엔지니어링된 나노입자 제제, 및 도세탁셀, 독세탁셀; 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 에토포시드; 이포스파미드; 미토크산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈; 이반드로네이트; CP-11; 토포아이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노익산과 같은 레티노이드; 및 상술한 것의 약학적으로 허용되는 염; 산 및 유도체를 포함한다.
"화학요법제"의 정의에는 다음이 포함된다: (i) 예를 들어, 타목시펜, 타목시펜 시트레이트, 랄록시펜, 드롤옥시펜, 및 토레미핀 시트레이트를 비롯한 항에스트로겐 및 선택적 수용체 조절제(SERMs)와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 또는 억제하는 작용을 하는 항호르몬제; (ii) 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 메게스트롤 아세테이트; 이세메스탄; 포르메스타니, 파드라졸, 보로졸, 레트로졸, 및 아나스트로졸과 같이 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 아로마타제 효소를 억제하는 아로마타제 억제제; (iii) 플루타미드, 닐루타미드와 같은 항-안드로겐; (iv) 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 예를 들어, PKC-알파, Rafl 및 H-Ras와 같은 일탈적인 세포 증식에서 암시되는 신호전달 경로에서 유전자 발현을 억제하는 것; (vii) VEGF 발현 억제제 및 HER2 발현 억제제와 같은 리보자임; (viii) 유전자 요법 백신과 같은 백신, 예를 들어, HLA-B7 및 β2 미크로글로불린을 코딩하는 DNA 서열, 또는 인터루킨-2, 알데스루킨(rlL-2)을 코딩하는 DNA 서열을 함유하는 플라스미드/지질 복합체; 루르토테칸 또는 알바렐릭스와 같은 토포아이소머라제 1 억제제; (ix) 베바시주맙과 같은 항신생물질제; 및 (x) 상술한 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체.
"리포좀"은 약물(본 명세서에 기재된 PI3K 및 mTOR 키나제 억제제 및 경우에 따라 화학요법제와 같은)을 포유동물에 전달하는데 유용한 다양한 유형의 지질, 인지질 및/또는 계면활성제로 구성된 소형 소포(small vesicle)이다. 이 리포좀의 성분은 생물학적 막의 지질 배열과 유사하게 이층 형태로 흔히 배열된다.
용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 사용에 관한 지시, 용법, 용량, 투여, 사용금지 사유 및/또는 경고에 관한 정보를 함유하는 상업적 치료 제품 팩케이지에 통상적으로 포함되는 지시서를 지칭한다.
용어 "포유동물"은, 비제한적으로, 인간, 마우스, 레트, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 말, 소, 돼지 및 양을 포함한다.
본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 및 그의 토토머, 용매화물 및 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00002
식 중에서,
R1은 메틸, n-헥실, 아미노에틸, 메틸아미노에틸, 에틸아미노에틸, 디메틸아미노에틸, 아크릴로일아미노에틸, 메타크릴로일아미노에틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, C1-C4-알킬-술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일이거나; 또는 R1은 링크 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸이며, 또
R2 및 R3은, 서로 독립적으로, 수소 또는 C1-C4-알킬이거나, 또는 R2 및 R3은 함께 합쳐져서 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성함.
R1이 메틸, n-헥실, 2-아미노에틸, 2-(메틸아미노)-에틸, 2-(에틸아미노)에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-메톡시에틸, 2-에톡시에틸, C1-C4-알킬술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일이거나; 또는 R1이 각각 링커 및 태그를 갖는 2-아미노에틸, 아크릴로일 또는 2-(아크릴로일아미노)-에틸인 화합물이 바람직하다.
R1이 메틸, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)-에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 이소-프로필술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일, 특히 메틸, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 또는 아크릴로일, 더욱 특히 메틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 메틸술포닐, 또는 아크릴로일인 화합물이 더욱 바람직하다.
R1이 각각 링커 및 태그를 갖는 2-아미노에틸 또는 아크릴로일이고, 특히 태그가 비오틴, 형광단 또는 중합체 비드인 화합물이 또한 바람직하다.
R2 및 R3이, 서로 독립적으로, 수소, 메틸, 에틸, 또는 이소프로필이거나, 또는 R2 및 R3이 합쳐져서 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성하는 화합물이 더욱 바람직하다. 특히, R2 및 R3이 모두 수소, 1개 수소 및 1개 메틸, 또는 모두 메틸이거나, 또는 합쳐져서 에틸렌 브릿지를 형성하는 화합물이 바람직하다.
더욱 바람직하게는 R2는 (S)-2-메틸, (R)-2-메틸, (R)-3-메틸, 또는 (S)-3-메틸이고, 또 R3이 수소이거나, 또는 R2 및 R3이 (2R,6S)-2,6-디메틸, (2R,6R)-2,6-디메틸, (2R,3R)-2,3-디메틸, (2S,5S)-2,5-디메틸, (3S,5R)-3,5-디메틸, (3S,5S)-3,5-디메틸, 2,5-에틸렌 브릿지, 2,6-에틸렌 브릿지, 3,5-에틸렌 브릿지이거나, 또는 양쪽 모두 수소이다. 가장 바람직하게는, 양쪽 R2 및 R3이 수소인 것이다.
R1이 메틸, n-헥실, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 또는 아크릴로일이고, 또 R2 및 R3이 수소인 화학식(I)의 화합물, 특히 R1이 메틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 메틸술포닐, 또는 아크릴로일이고, 또 R2 및 R3이 수소인 화학식(I)의 화합물, 예컨대 R1이 메틸 또는 메틸술포닐이고 또 R2 및 R3이 수소인 화합물이 가장 바람직하다.
R1이 링커, 및 비오틴, 형광단 또는 중합체 비드를 갖는 2-아미노에틸이고, 또 R2 및 R3이 수소인 화학식(I)의 화합물이 마찬가지로 바람직하다.
가장 바람직한 것은 실시예의 화합물이다.
본 명세서에 나타낸 구조에서, 특정 키럴 원자의 입체화학은 특정되어 있지 않으며, 모든 입체이성질체가 고려되며 본 발명의 화합물로서 포함된다.
본 발명의 화합물은 비용매화된 형태뿐만 아니라 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용되는 용매에 의해 용매화된 형태로 존재할 수 있고 또 본 발명은 이들 용매화된 형태 및 비용매화된 형태 모두를 포함하는 것으로 의도한다. 본 발명의 화합물은 또한 상이한 토토머성 형태(토토머)로 존재할 수 있고, 또 이러한 형태는 본 발명의 범위에 포함된다.
합성 방법
본 발명의 화합물은 특히 본 명세서에 함유된 기재를 참조하여 화학업자에게 잘 알려진 방법과 유사한 방법을 포함한 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발물질은 일반적으로 상업적으로 입수가능하며 또 당업자에게 공지된 방법을 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 예시적 목적을 위해, 하기 도식 1은 본 발명의 화합물뿐만 아니라 중요한 중간체를 제조하는 일반적 방법을 도시한다. 치환기는 할로겐(Hal), 예컨대 염소 또는 브롬에 의해, 상응하는 이급 아민에 의해 트리아진 핵에 도입된다. 이러한 이급 아민에 의한 치환 반응의 순서는 원칙상 자유롭게 변경될 수 있으며, 또 도식 1에 도시된 중간체 쌍을 통하여, 2,4,6-트리할로트리아진(염화 시아누르 또는 브롬화 시아누르)로부터 출발하여 진행할 수 있다. 또한 치환기 R1 은 반응 순서의 임의 단계에서 변형될 수 있다.
반응도식 1
Figure pct00003
예를 들어, 피페라진 치환기를 트리아진 핵에 도입하기 위하여, 피페라진의 1개 질소 원자는 아미노 보호기를 가질 수 있으며, 이어 분리되어 R1이 수소인 화합물을 생성한 다음 디아조메탄 또는 메틸 할라이드와의 반응에 의해 더 변형되어 R1 을 메틸로 전환하며, n-헥실 할라이드와의 반응에 의해 R1을 n-헥실로 전환하고, 보호된 및/또는 치환된 2-아미노에틸 할라이드와의 반응에 의해 R1을 경우에 따라 치환된 2-아미노에틸을 전환하여, 2-에톡시- 또는 2-메톡시에틸 할라이드와의 반응에 의해 R1을 2-에톡시- 또는 2-메톡시에틸로 전환하며, C1-C4-알킬술포닐 할라이드와의 반응에 의해 R1을 C1-C4-알킬술포닐로 전환하거나, 또는 경우에 따라 치환된 아크릴로일 할라이드 또는 무수물과의 반응에 의해 R1을 1개 말단에서 경우에 따라 보호된 아미노 작용을 갖는 링커, 또는 태그를 갖는 아크릴로일, 메타크릴로일 또는 아크릴로일로 전환한다. 2-아미노에틸의 의미를 갖는 R1은 디아조메탄, 메틸 또는 에틸 할라이드, 아크릴로일 할라이드 또는 아크릴로일 무수물 또는 1개 말단에서 할라이드를 갖는 링커 및 태그 또는 다른 말단에서 보호된 아미노 작용과의 반응에 의해 소망하는 유도체로 더 치환될 수 있다. 링커의 아미노 작용은 상기 순서의 마지막 단계에서 태그의 N-히드록시숙신이미드 에스테르와 반응하여 태그를 갖는 소망하는 링커를 생성한다. 다르게는, 할로-치환된 트리아진과의 반응에 사용된 피페라진은 최종 치환기 R1을 이미 가질 수 있다.
개별 반응 단계의 더욱 상세한 기재의 경우, 하기 실시예를 참조한다. 당업자들은 본 발명의 화합물을 합성하기 위하여 다른 합성 경로가 이용될 수 있음을 숙지할 것이다. 특정 출발 물질 및 시약이 도식에 예시되고 이하에 논의되었지만, 다른 출발 물질 및 시약도 또한 용이하게 치환되어 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 또한 이하에 기재된 방법에 의해 제조된 화합물의 다수는 당업자에게 공지된 통상의 화학을 이용하여 본 명세서에 비추어 더욱 변형될 수 있다.
본 발명의 화합물의 제조 방법에 있어서, 반응 생성물을 서로 및/또는 출발 물질로부터 분리하는 것이 유리할 것이다. 각 단계 또는 일련의 단계의 소망하는 생성물은 당해 분야에서 통상적인 수법에 의해 소망하는 정도의 균일성으로 분리 및/또는 정제(이후 분리)된다. 전형적으로 이러한 분리는 다상 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터 결정화, 증류, 승화 또는 크로마토그래피를 포함한다. 크로마토그래피는 예를 들어: 역상 및 정상; 크기 배제; 이온 교환; 고압, 중압 및 저압 액체 크로마토그래피 방법 및 장치; 소규모 분석; 의사이동상(SMB) 및 분취 박층 또는 후층 크로마토그래피뿐만 아니라 소규모 박층 및 플래쉬 크로마토그래피 수법을 비롯한 다양한 방법을 포함할 수 있다. 다른 유형의 분립 방법은 혼합물을 활성탄, 분자체, 이온 교환 매질 등으로부터 선택된 시약과 처리하는 것을 포함한다.
부분입체이성질체 혼합물은 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화와 같은 당업자에게 잘 공지된 방법에 의해 이들의 물리 화학적 차이를 기초로 개별 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 에난티오머는 에난티오머 혼합물을 적절한 광학 활성 화합물(예컨대, 키럴 알코올 또는 모셔(Mosher)의 산 클로라이드와 같은 키럴 보조제)과의 반응에 의해 부분입체이성질체 혼합물로 전환하고, 상기 부분입체이성질체를 분리하고 또 개별 부분입체이성질체를 상응하는 순수한 에난티오머로 전환(예컨대 가수분해)하는 것에 의해 분리될 수 있다. 또한 본 발명의 화합물의 일부는 아트로프 이성질체(예컨대, 치환된 비아릴)일 수 있고 또 본 발명의 일부로 간주된다. 에난티오머는 키럴 HPLC 컬럼의 사용에 의해 분리될 수 있다.
치료 방법
본 발명의 화합물은 치료될 상태에 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 피부내, 척추내 및 경막외 포함), 경피, 직장, 경비, 국소(볼내 및 설하 포함), 질내, 복강내, 폐내 및 코내를 포함한다. 국소 면역억제 치료의 경우, 상기 화합물은 관류(perfusion)에 의해 또는 이식편을 이식하기 전에 상기 억제제와 접촉시키는 것을 포함하는 병반내 투여에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 경로는 예를 들어 수용자의 상태에 따라서 다양할 수 있음을 알 수 있다. 상기 화합물을 경구 투여하는 경우, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 환약, 캡슐, 정제, 등으로서 제제화될 수 있다. 상기 화합물을 비경구 투여할 때, 약학적으로 허용되는 비경구 매개제(vehicle)와 함께 제제화되며 또 이하에 자세히 기재된 바와 같이 단위 용량 주사형태로 제제화된다.
인간 환자를 치료하기 위한 용량은 약 10 mg 내지 약 1000 mg의 본 발명의 화합물 범위일 수 있다. 전형적 용량은 약 100 mg 내지 약 300 mg의 상기 화합물일 수 있다. 용량은 하루에 1회(QID), 하루에 2회(BID), 또는 특정 화합물의 흡수, 분포, 대사 및 분비를 비롯한 약역학적 및 약동학적 특성에 따라서 더 빈번히 투여될 수 있다. 또한, 독성 인자는 투여량 및 투여 처방에 영향을 줄 수 있다. 경구 투여될 때, 환약, 캡슐, 또는 정제는 특정 기간 동안 매일 또는 그보다 덜 빈번하게 소화될 수 있다. 상기 처방은 다수의 요법 주기 동안 반복될 수 있다.
본 발명의 화합물은, 비제한적으로, 지질 키나제, 예컨대 PI3 키나제의 과발현을 특징으로 하는 것을 비롯한 질병, 상태 및/또는 장애를 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 다른 요지는 PI3K 및 mTOR를 비롯한 지질 키나제를 억제하는 것에 의해 치료되거나 또는 예방될 수 있는 질병 또는 상태를 치료 또는 방지하는 방법을 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 치료를 필요로 하는 포유동물에 치료 유효량의 본 발명의 화합물 또는 그를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명에 따라 치료할 수 있는 질병 및 상태는, 비제한적으로, 환자에서 암, 중풍, 당뇨병, 간종대, 심혈관 질병, 알츠하이머 질병, 낭포성 섬유증, 자가면역 질병, 죽상동맥경화증, 혈관재협착, 건선, 알레르기성 장애, 염증, 신경학적 장애, 호르몬-관련 질병, 장기 이식과 관련된 질환, 면역결핍 장애, 파괴성 뼈 장애, 증식성 장애, 전염병, 세포 치사와 관련된 질환, 트롬빈 유도된 혈소판 응집, 만성 골수성 백혈병(CML), 간 질병, T 세포 활성화를 포함한 병리학적 면역 질환 및 CNS 장애를 포함한다.
본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있는 암은, 비제한적으로, 유방암, 난소암, 경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식기관 암, 식도암, 후두암, 교모세포종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각화극세포종, 폐암, 표피양 암종, 대(large)세포 암종, 비-소세포 폐암종(NSCLC), 소세포 암종, 폐암 선암, 골암, 대장암, 샘암, 췌장암, 선암, 갑상선, 난포(follicular) 암종, 비분화된 암종, 유두상 암종, 고환종, 흑색종, 육종, 방광 암종, 간 암종 및 담도암, 신장 암종, 골수성 장애, 림프성 장애, 모상(hairy) 세포, 볼내 및 인두(경구), 입술, 혀, 입, 인두, 소장, 대장-직장, 대장, 직장, 뇌 및 중앙신경계, 호지킨스병 및 백혈병을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있는 심혈관 질병은, 비제한적으로, 혈관재협착, 심장비대, 죽상동맥경화증, 심근경색, 및 울혈성 심부전을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있는 신경퇴행성 질병은, 비제한적으로, 알츠하이머 질병, 파킨슨 질병, 근위축성 측삭경화증, 헌팅톤 질병, 및 뇌허혈, 그리고 외상, 글루타메이트 신경독성 및 저산소증에 의해 유발된 신경퇴행성 질병을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있는 염증성 질병은, 비제한적으로, 류마티스성 관절염, 건선, 접촉 피부염, 및 지연된 과민반응을 포함한다.
본 발명의 다른 요지는 질병 또는 상태에 걸려 있는 포유동물, 예컨대 인간에서 상기 기재된 질병 또는 상태의 치료에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 또한 본 명세서에 기재된 질병 및 상태에 걸린 온혈 동물, 예컨대 인간과 같은 포유동물에서 상기 질병 및 상태의 치료를 위한 의약 제조에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
약학적 조성물
인간을 비롯한 포유동물의 치료적 처리(예방적 치료 포함)를 위해 본 발명의 화합물을 사용하기 위하여, 표준 약학적 기준에 따라서 약학적 조성물로 보통 제제화된다. 본 발명의 상기 요지에 따르면, 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 조합된 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
전형적 제제는 본 발명의 화합물 및 담체, 희석제 또는 부형제를 혼합하여 제조한다. 적합한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 잘 공지되어 있고 또 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 물질을 포함한다. 사용된 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용되는 수단 및 목적에 따라 다양할 것이다. 용매는 일반적으로 포유동물에 투여되기에 안전한 것으로 당업자에게 인지된 용매(GRAS)를 기초로 하여 선택된다. 일반적으로, 안전한 용매는 물과 같은 비독성 수성 용매 및 물에 용해성 또는 혼화성인 다른 비독성 용매이다. 적합한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 400, PEG 300) 등 및 그의 혼합물을 포함한다. 상기 제제는 1 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁제, 보존제, 산화방지제, 불투명제, 활제, 가공보조제, 착색제, 감미제, 향수제, 향미제 및 기타 공지 첨가제를 더 포함할 수 있다.
상기 제제는 통상의 용해 및 혼합 과정을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 괴상(bulk) 약물 물질은 상술한 부형제의 하나 이상의 존재하, 적합한 용매에 용해된다. 본 발명의 화합물은 약학적 투여 형태로 전형적으로 제제화되어 약물의 용이하게 제어가능한 투여량을 제공하며 또 환자가 처방에 순응할 수 있도록 한다.
적용을 위한 약학적 조성물은 약물의 투여에 사용된 방법에 따라서 다양하게 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배를 위한 물품은 내부에 적절한 형태의 약학적 제제가 배치되어 있는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 잘 공지되어 있고 또 병(플라스틱 및 병), 사세(cachets), 앰풀, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 상기 용기는 또한 포장 내용물에 대한 무분별한 접근을 방지하기 위한 부정개봉 방지(tamper-proof) 조립물을 포함할 수 있다. 또한, 상기 용기는 용기 내용물을 설명하는 라벨을 포함한다. 상기 라벨은 적절한 경고문을 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물의 약학적 제제는 다양한 경로 및 투여 유형을 위해 제조될 수 있다. 예를 들어, 소망하는 정도의 순도를 갖는 본 발명의 화합물은 경우에 따라 동결건조된 제제, 분쇄된 분말 또는 수용액 형태의 약학적으로 허용되는 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합될 수 있고, 상기 제제화는 적절한 pH에서 주변 온도에서 소망하는 순도로 생리학적으로 허용되는 담체, 즉 투여량 및 적용된 농도에서 수용자에게 비독성인 담체와 함께 혼합하는 것에 의해 실시될 수 있다. 제제의 pH는 주로 특정 용도 및 화합물의 농도에 따라 달라질 수 있지만, 약 3 내지 약 8 범위일 수 있다. pH 5의 아세테이트 완충액 중에서 제제화가 적합한 구체예이다.
본 명세서에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물은 바람직하게는 멸균성이다. 특히, 생체내 투여에 사용하려는 제제는 반드시 멸균성이어야 한다. 이러한 멸균화는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. 상기 화합물은 보통 고체 조성물로서, 동결건조된 제제 또는 수용액으로서 저장될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 우수한 의료적 행위와 일치하는 투여량, 농도, 스케쥴, 경로, 매개제 및 경로와 같은 방식으로 제제화되고, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료될 특정 장애, 치료될 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 약물 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케쥴, 및 기타 의사들에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 "치료적 유효량"의 화합물은 이러한 고려사항에 의해 조절될 것이며 응집 인자 매개 장애를 방지, 완화 또는 치료하는데 필요한 최소량이다. 이러한 양은 바람직하게는 숙주에게 독성인 양 이하이며 또 숙주가 더 잘 피를 흘릴 수 있게 만든다. 일반적 제의로서, 복용량당 비경구적으로 투여된 초기 약학적 유효량의 억제제는 약 0.01-100 mg/kg 범위, 즉 약 0.1 내지 20개 mg/kg 환자체중/일이며, 사용된 화합물의 전형적 초기 범위는 0.3 내지 15 mg/kg/일이다.
허용되는 희석제, 담체, 부형제 및 안정화제는 이용된 복용량과 농도에서 수용자에게 비독성이며, 또 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기 산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 산화방지제; 보존제(옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸과 같은); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐 피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트화제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염-형성 대이온; 금속 복합체(예컨대, Zn-단백질 복합체); 및/또는 TWEENTM, PLURONICSTM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비-이온성 계면활성제를 포함한다. 활성 약학 성분들은 예를 들어 코아세르베이션 수법에 의해 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 히드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴 마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드성 약물 전달계(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼(macroemulsions)에 포획될 수 있다.
본 발명의 화합물의 서방 제제도 제조될 수 있다. 서방 제제의 적합한 예는 본 발명의 화합물을 함유하는 고상의 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스로서, 상기 매트릭스는 성형 물품 형태, 예컨대 필름, 또는 마이크로캡슐 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔(예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리비닐 알코올)), 폴리락티드, L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 젖산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 화합물의 제제는 소정 양의 본 발명의 화합물을 각각 함유하는 환약, 캡슐, 사세 또는 정제와 같은 개별 단위로서 제조될 수 있다. 압축 정제는 적합한 기계에서 분말 또는 과립 형태와 같은 자유 유동 형태이고, 경우에 따라 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 표면활성제 또는 분산제와 혼합된 활성성분들을 압축하여 제조할 수 있다. 성형 정제는 불활성 액체 희석제에 의해 습윤화된 분말형 활성 성분들의 혼합물을 적합한 기계에서 성형하는 것에 의해 제조될 수 있다. 정제는 경우에 따라 코팅되거나 또는 스코링(scored)될 수 있고 또 활성성분의 느린 방출 또는 제어 방출을 제공하도록 경우에 따라 제형화될 수 있다. 정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 예컨대, 젤라틴 캡슐, 시럽 또는 엘릭서가 경구 용도를 위해 제조될 수 있다. 경구 용도를 위한 본 발명의 화합물의 제제는 약학적 조성물의 제조를 위해 당해 분야에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있고 또 이러한 조성물은 먹기 좋은 제제를 제공하도록 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제를 비롯한 1 이상의 물질을 함유할 수 있다. 정제 제조에 적합한 비독성의 약학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유하는 정제가 허용된다. 이들 부형제는 예를 들어, 칼슘 또는 나트륨 카보네이트, 락토오스, 칼슘 또는 나트륨 포스페이트와 같은 불활성 희석제; 옥수수 녹말, 알긴산과 같은 과립화제 및 붕해제; 녹말, 젤라틴 또는 아카시아와 같은 결합제; 및 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크와 같은 윤활제를 포함한다. 정제는 코팅되지 않거나 또는 위장관에서 붕해 및 흡수를 지연시켜 장기간에 걸쳐 지연 효과를 제공하기 위한 마이크로캡슐화를 비롯한 공지 수법에 의해 코팅될 수 있다. 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간 지연 물질이 단독 또는 왁스와 조합되어 이용될 수 있다.
눈 또는 예컨대 입 및 피부와 같은 기타 외부 조직을 치료하기 위하여, 상기 제제는 예를 들어, 0.075 내지 20% w/w 양의 활성 성분을 함유하는 국소 연고 또는 크림으로 적용된다. 연고로 제제화되면, 활성 성분들은 파라핀성 또는 수혼화성 연고 베이스(base)와 함께 적용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분들은 물속오일(oil-in-water) 크림 베이스에 제제화될 수 있다. 필요한 경우, 크림 베이스의 수상은 다가 알코올, 즉 2 또는 그 이상의 히드록시기를 갖는 알코올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 400 포함) 및 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 국소 제제는 활성 성분이 피부 또는 기타 병든 영역을 통하여 잘 흡수 또는 침투되게 하는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 향상제의 예는 디메틸 설폭사이드 및 관련 유사체를 포함한다. 본 발명의 에멀젼의 오일 상은 공지 방식으로 공지 성분으로부터 구성될 수 있다. 상기 오일 상은 유화제만을 포함할 수 있지만, 바람직하게는 적어도 하나의 유화제와 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일과의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함된다. 오일 및 지방을 모두 포함하는 것이 또한 바람직하다. 합쳐서, 안정화제를 갖거나 또는 갖지 않는 유화제는 소위 유화 왁스를 구성하며, 오일 및 지방과 함께 왁스는 소위 크림 제제의 오일 분산된 상을 형성하는 소위 유화 연고 베이스를 구성한다. 본 발명의 제제에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 Tween® 60, Span® 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다.
본 발명의 화합물의 수성 현탁액은 수성 현탁액 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유한다. 이러한 부형제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 크로스카르멜로오스, 포비돈, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 나트륨 알지네이트, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검과 같은 현탁제, 및천연 산출 포스파티드(예컨대, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물(예컨대, 헵타데카에틸렌옥시세타놀), 에틸렌 옥사이드 및 지방산과 무수 헥시톨로부터 유도된 부분적 에스테르의 축합 생성물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)와 같은 분산제 또는 습윤제를 포함한다. 수성 현탁액은 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트과 같은 1 이상의 보존제, 1 이상의 착색제, 1 이상의 향미제 및 수크로오스 또는 사카린과 같은 1 이상의 감미제를 함유할 수 있다.
본 발명의 화합물의 약학적 조성물은 멸균 주사가능한 수성 또는 오일성 현탁액과 같은 멸균 주사가능한 제제 형태일 수 있다. 이 현탁액은 상술한 바와 같은적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당해 분야에 공지된 방법으로 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 1,3-부탄디올 또는 동결건조된 분말로서 제조된 것 중의 용액과 같은 비-독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 허용되는 매개제 및 용매 중에서 이용될 수 있는 것은 물, 링거 용액 및 등장성 염화 나트륨 용액이다. 또한, 멸균 고정된 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 이 목적을 위해 합성 모노- 또는 디글리세리드를 비롯한 임의 고정 혼합 오일이 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산은 주사가능한 제제에 사용될 수 있다. 수성 및 비수성 멸균 주사 용액은 산화방지제, 완충제, 세균발육저지제 및 제제를 의도하는 수용자의 혈액과 등장으로 만드는 용액을 함유할 수 있다. 수성 및 비수성 멸균 현탁액은 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있다.
눈에 국소 투여하기에 적합한 제제는 또한 적합한 담체, 특히 활성성분용 수성 용매에 활성 성분이 분산 또는 현탁된 점적제를 포함한다. 활성 성분은 바람직하게는 그러한 제제에서 약 0.5 내지 20% w/w, 예를 들어 약 0.5 내지 10% w/w, 예를 들어 약 1.5% w/w의 농도로 존재한다.
입에 국소 투여하기에 적합한 제제는 향미 기제의, 통상 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸트에 활성 성분을 포함하는 로젠지; 젤라틴 및 글리세린과 같은 불활성 베이스 또는 수크로오스 및 아카시아에 활성 성분을 포함하는 파스틸(pastilles); 및 적합한 액체 담체에 활성 성분을 포함하는 구강세척액을 포함한다.
직장 투여에 적합한 제제는 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 베이스를 갖는 좌약으로서 제공될 수 있다. 폐내 또는 경비 투여에 적합한 제제는 경비 통로를 통한 급속한 흡입에 의해 또는 입을 통하여 폐포에 통하도록 흡입하는 것에 의해 투여되는, 0.1 내지 500 미크론(0.1 내지 500 미크론 범위의 입자 크기 포함, 0.5, 1, 30 미크론, 35 미크론 등과 같은 미크론 증가시킴) 범위의 입자 크기를 갖는다. 적합한 제제는 활성 성분의 수성 및 오일상 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제제는 통상의 방법에 따라 제조될 수 있고 또 이하에 기재된 장애를 치료 또는 예방하는데 사용된 이전의 화합물과 같은 다른 치료제와 함께 전달될 수 있다. 질내 투여에 적합한 제제는 활성 성분 이외에 적합한 것으로 공지된 담체를 또한 함유하는 패서리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제로 제공될 수 있다.
상기 제제들은 단일 용량 또는 다용량 용기, 예를 들어 밀봉 앰풀 및 바이얼에 포장될 수 있고 또 사용하기 직전에 주사를 위해 예를 들어 물과 같은 멸균 액체 담체의 부가만을 필요로 하는 냉동건조된(동결건조된) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사액 및 현탁액은 앞서 기재한 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단일 투여 제제는 상기 기재한 바와 같이 매일의 복용량 또는 단위 매일 세분된 복용량을 함유하거나, 또는 활성성분의 적절한 분획을 함유한다.
본 발명은 또한 수의과용 담체와 함께 상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을 포함하는 수의과용 조성물을 제공한다. 수의과용 담체는 조성물을 투여하는데 유용한 물질이며 또 수의과 분야에서 불활성이거나 또는 허용되며 또 활성 성분과 상용성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이들 수의과용 조성물은 비경구적으로, 경구적으로 또는 다른 바람직한 경로에 의해 투여될 수 있다.
조합 요법
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 과증식성 장애(예컨대, 암)와 같이 본 명세서에 기재된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 다른 치료제와 조합되어 적용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 항-과증식성 특성을 갖거나 또는 과증식성 장애(예컨대, 암) 치료에 유용한 제2 화합물과 조합 요법으로서 약학적 조합 제제 또는 투여 처방으로 조합된다. 약학적 조합 제제 또는 투여 처방의 제2 화합물은 바람직하게는 본 발명의 화합물의 활성에 상보적이어서 서로에 대하여 나쁜 영향을 주지 않는다. 이러한 화합물은 의도하는 목적을 위해 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다. 일 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 화학요법제와 조합된 본 발명의 화합물을 포함한다.
조합 요법은 동시에 또는 순차적 처방으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여될 때, 상기 조합물은 2회 또는 그 이상 투여될 수 있다. 조합된 투여는 별개의 제제 또는 단일 약학적 제제를 사용한 공동 투여 및 임의 순서로 연속적 투여를 포함하며, 바람직하게는 활성 성분 모두가 동시에 생물학적 활성을 발휘하기까지는 시간이 걸린다. 상기 공동 투여된 물질에 대한 적합한 복용량은 현재 사용되고 있고 또 새롭게 확인된 물질 및 기타 화학요법제 또는 치료의 조합 작용(상승작용)으로 인하여 감소될 수 있다.
항암 요법의 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 화학요법제, 호르몬제 또는 항체와 조합될 수 있을 뿐만 아니라 외과적 요법 및 방사능요법과 조합될 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 조합 요법은 적어도 하나의 본 발명의 화합물의 투여 및 적어도 하나의 다른 암 치료 방법의 이용을 포함한다. 본 발명의 화합물 및 다른 약학적 활성 화학요법제의 양 및 적합한 투여 시기는 소망하는 조합 치료 효과를 달성하기 위하여 선택될 수 있다.
스크리닝 방법
본 발명은 또한 다음 단계를 포함하는, 지질 키나제에 대한 화합물 결합을 스크리닝하는 방법에도 관한 것이다:
(a) R1이 링커 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸인 화학식(I)의 화합물을 지질 키나제에 결합시키는 단계;
(b) 상기 지질 키나제에 대한 결합을 위해 스크리닝될 화합물과 혼합하는 단계;
(c) 태그의 특성을 기초로 하여 상기 화학식(I)의 화합물의 배치(displacement)를 측정하는 단계; 및
(d) 측정된 배치의 결과로부터 스크리닝된 화합물의 결합을 산출하는 단계.
지질 키나제는 상기 언급된 임의 키나제, 특히 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K), 라파마이신의 포유동물 표적(mTOR), DNA-PK 및 ATM 키나제, 더욱 특히 PI3K 이소폼일 수 있다.
단계(b)에 따라 스크리닝될 화합물과 혼합하는 것은 다수의 상이한 실험 설계로 실시될 수 있다. 예를 들어 스크리닝될 화합물은 단계(a)에 따라 지질 키나제 및 본 발명에 따른 화학식(I)의 화합물로부터 형성된 착물에 적정에 의해 과량의 1개 뱃치(batch)로 또는 동몰량 미만의 1개 뱃치로 부가될 수 있고, 또 배치(displacement)는 태그의 특성에 따라서 시간 의존적 방식으로 다양한 방법에 따라 결정된다. 상기 태그가 형광단이면, 형광단의 양이 측정될 수 있거나, 또는 형광단을 갖는 화합물의 확산이 측정될 수 있으며, 이는 형광단을 갖는 화합물의 분자량 및 그의 다른 분자와의 상호작용성에 따라 달라진다. 형광 소멸물질(fluorescence quencher)을 갖는 FRET 계 및 당해 분야에 잘 공지된 기타 분광학적 방법을 이용할 수 있다. 상기 태그가 비오틴이면, 애비딘과의 접합을 통하여 어떤 측정가능한 라벨도 부착될 수 있으며, 이어 애비딘은 비오틴에 결합된다. 이러한 부가적 단계에 의해, 이러한 측정가능한 라벨이 본 발명의 스크리닝 방법에 사용될 수 있다.
실시예
화합물 5-7, 11 및 12는 도식 2에 기재된 과정에 따라서 합성한다:
도식 2
Figure pct00004
염화시아누르(1)는 염화메틸렌 중의 모르폴린에 의해 -50℃에서 20분간 치환되어 중간체(2)를 생성하였다. 상기 두번째 염화물을 DMF 중의 K2CO3 존재하에서 2-디플루오로메틸-1H-벤조이미다졸을 사용하여 -5℃에서 30분간 치환시킨 다음 실온에서 4시간 동안 교반하여 중간체(3)을 얻었다. 상기 중간체(3)를 K2CO3 및 DMF 존재하, 실온에서 45분간 아미노화시키는 것에 의해 최종 단계는 생성물 4-7, 11 및 12를 생성하였다. 화합물(4)은 대조 목적을 위해 제조된 공지된 화합물 ZSTK474이다.
화합물(8)은 상기 중간체(3)를 BOC-보호된 피페라진에 의해 아미노화한 다음, BOC 보호기 이탈시킨 다음 아크릴산 무수물과 반응시켜 얻었다. 화합물(9)은 중간체(3)를 2-(2-(피페라진-1-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온에 의해 아미노화한 다음 히드라진과의 반응으로 프탈이미드 보호기를 제거하여 얻었다. 화합물(9)는 아크릴산 무수물과 처리되어 화합물(10)을 생성한다.
본 발명의 화합물의 억제제 효능 및 세포 투과성은 흑색종 세포주 A2058 및 TSC2-/-MEF 세포주 상에서 세포내 웨스턴 억제 에세이에 의해 측정된다. 또한, 시험관내 PI3K 알파 억제도 측정하였다(표 1). 결과를 종래 기술의 가장 가까운 화합물과 비교하였다: 젠야꾸의 개발 화합물(EP 1 864 665호의 화합물 4)인 ZSTK474(4), 및 디플루오로메틸 기가 부족한 화합물(17)(EP 1 020 462호의 화합물 39).
화합물(5)을 생성하기 위해 N-메틸피페라진을 또 화합물(6) 및 (7)을 생성하기 위하여 술포닐 함유 피페라진을 사용하는 것은 PI3K에 대하여 이들의 억제제 활성에 대하여 예상치 못한 긍정적인 효과를 가졌다. 화합물(5)에서는 PI3K에 대한 억제제 활성 증가와 mTOR에 대한 선택성 감소가 얻어졌다. 화합물(6)을 생성하기 위하여 더욱 산성이고 또 더욱 용해성인 1-(메틸술포닐)피페라진을 사용한 치환은 흑색종 암 세포주에서 탁월한 억제제 활성을 초래하였다. 1-(에탄술포닐)피페라진을 도입하여 화합물(7)을 생성하면, PI3K에 대한 생물학적 활성은 ZSTK474(4)와 비교하여 약간 감소한 반면, mTOR에 대한 선택성은 눈에 띄게 감소되었다.
화합물(5)의 활성은 또한 종래 기술의 구조적으로 가장 가까운 화합물인 화합물(17)과 비교될 수 있다. 화합물(5)은 화합물(17)에 비하여 실질적으로 더 활성이다.
분자 모델링 실험에 따르면, 술포닐 기의 산소 원자는 표적 단백질과 부가적 수소 결합을 형성할 가능성을 지녀 상기 화합물을 더욱 강력하게 만든다. 또한, 술포닐 기의 극성으로 인하여 이들 화합물은 ZSTK474(4)에 비하여 더 우수한 수용성을 갖는다.
화합물(11)을 생성하기 위하여 N-n-헥실피페라진을 도입할 때, 화합물(9) 및 (12)를 생성하기 위하여 N-(2-아미노에틸)피페라진 및 N-(2-에톡시에틸)피페라진을 도입할 때, 또는 화합물(8) 및 (10)을 생성하기 위하여 N-아크릴로일피페라진 및 N-(2-아크릴로일아미노에틸)피페라진을 도입할 때 더욱 긍정적인 효과가 확인된다. N-(2-아미노에틸)피페라진에 연결된 형광단을 갖는 연장된 사슬의 도입은 여전히 활성 화합물(13)을 생성하였다.
표 1:
Figure pct00005

Figure pct00006
Figure pct00007
4-(4,6- 디클로로 -1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(2)
염화시아누르(10.0 g, 54.2 mmol, 1.0 eq.)를 염화메틸렌(60 ml)에 용해시키고, 또 모르폴린(4.70 ml, 54.2 mmol, 1.0 eq.)을 상기 반응 혼합물에 -50℃에서 적가하고, 동일 온도에서 20분간 교반하고 또 물에 부었다. 염화메틸렌 및 에틸 아세테이트를 사용하여 추출(2회)한 후, 유기층을 MgS04 상에서 건조시키고 또 농축시켰다. 실리카겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(70% 헥산/에틸 아세테이트)에 의해 더 정제하여 표제 화합물을 무색 고체(3.60 g, 28 %)로 수득하였다. RF: 0.72(헥산/에틸 아세테이트, 1:1 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 3.89-3.87(m, 4H), 3.76-3.74(m, 4H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 170.85, 164.50, 66.79, 44.87.
4-(4- 클로로 -6-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(3)
화합물(2)(425 μmol, 1.0 eq.)을 DMF(2 ml)에 용해시키고 또 -5℃로 냉각하며, 무수 탄산 칼륨(1.44 eq.) 및 2-(디플루오로메틸)-1H-벤조[d]-이미다졸(1.4 eq.)을 사용하여 처리한 다음 30분간 교반하고 또 실온에서 4시간 더 교반하였다. 이 반응 혼합물을 물에 의해 희석시키고 또 석출물을 여과하고 소량의 물에 의해 세척하였다. 실리카겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제를 실시하였다. RF: 0.72(염화메틸렌/메탄올, 95:5 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.43(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.90(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71-7.43(m, 3H), 4.00-3.95(m, 4H), 3.86-3.80(m, 4H); 19F NMR(CDCl3, 400 MHz) δ-119.20(d, J = 53.9 Hz, 2F).
중간체(3)와 이급 아민의 반응에 대한 일반적 과정
중간체(3)(270 μmol, 1.0 eq.)를 DMF(5.4 ml)에 용해시켰다. K2C03(3.2 eq.) 및 고리상 이급 아민(1.2 eq.)을 부가하고 또 그 반응 혼합물을 실온에서 45분 내지 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압하에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 염화메틸렌에 용해시키고 또 물에 의해 추출하였다. 분리된 유기층은 물에 의해 세척하고 또 MgSO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에서 제거하고 또 얻어진 잔류물은 실리카겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피를 통하여 정제하였다.
4,4'-(6-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-1,3,5- 트리아진 -2,4-디일) 디모르폴린 (4). ZSTK474
일반적 과정을 따라서, 중간체(3)(100 mg, 270 μmol, 1.0 eq.)를 모르폴린(28.0 μl, 320 μmol, 1.2 eq.)과 45분 동안 커플링시켰다. 염화메틸렌 및 물을 사용한 추출은 표제 화합물을 무색 고체(110 mg, 96%)로 수득하였다. RF: 0.45 (염화메틸렌/메탄올, 95:5 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.34-8.32(m, 1H), 7.90-7.88(m, 1H), 7.56(t, J = 53.6 Hz, 1H), 7.46-7.37(m, 2H), 3.88-3.79(m, 16H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.41, 162.41, 146.60, 142.36, 133.97, 126.19, 124.81, 121.76, 1 16.23, 108.83, 106.44, 67.04, 44.46, 44.37; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -118.41(d, J = 53.9 Hz, 2F).
4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6-(4- 메틸피페라진 -1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(5)
일반적 과정을 따라서, 중간체(3)(100 mg, 270 μmol, 1.0 eq.)를 N-메틸피페라진(36.0 μl, 320 μmol, 1.2 eq.)과 45분간 커플링시켰다. 얻어진 잔류물은 실리카겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(5% 메탄올/염화메틸렌)를 통하여 정제하여 표제 화합물을 무색 고체(100 mg, 85%)로 얻었다. RF: 0.11(염화메틸렌/메탄올, 97:3 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.33(d, J = 8.1Hz, 1H), 7.89(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.71-7.37(m, 3H), 3.93-3.87(m, 8H), 3.79-3.78(m, 4H), 2.52(br. s, 4H), 2.38(s, 3H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.46, 165.17, 142.36, 126.15, 124.76, 121.73, 116.25, 67.08, 55.12, 46.48; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -118.43(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C20H24F2N8O): 계산치. 431.21(M+), 실측치 431.40.
4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6-(4-( 메틸술포닐 )피페라진-1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(6)
일반적 과정에 따라서, 중간체(3)(70.0 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)를 1-메탄술포닐피페라진(37.6 mg, 229 μmol, 1.2 eq.)과 45분간 커플링시켰다. 염화메틸렌에 의해 추출하여 표제 화합물을 무색 고체로 얻으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용된다(90.0 mg, 95%). RF 0.60(염화메틸렌/메탄올 97:3 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.29(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.87(d, J = 7.1Hz, 1H), 7.64-7.36(m, 3H), 4.01(br. s, 4H), 3.87-3.78(m, 8H), 3.33-3.32(m, 4H), 2.80(s, 3H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.38, 165.36, 162.44, 146.50, 146.24, 145.97, 142.32, 133.90, 126.30, 124.90, 121.77, 116.17, 111.25, 108.87, 106.48, 67.02, 47.12, 45.94, 44.52, 44.40, 35.15; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -117.47(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C20H24F2N8O3S): 계산치 495.18(M+), 실측치 495.10.
4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6-(4-( 에틸술포닐 )피페라진-1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(7)
일반적 과정에 따라서, 중간체(3)(70.0 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)를 1-(에탄술포닐)피페라진(40.8 mg, 229 μmol, 1.2 eq.)과 45분간 커플링시켰다. 염화메틸렌 및 물을 사용한 추출로 표제 화합물을 무색 고체로 얻으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용된다(95.0 mg, 98%). RF: 0.50(염화메틸렌/메탄올 97:3 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.32-8.29(m, 1H), 7.90-7.88(m, 1H), 7.66-7.38(m, 3H), 3.99(br. s, 4H), 3.88-3.79(m, 8H), 3.41-3.39(m, 4H), 3.02-2.97(m, 2H), 1.39(t, J = 7.4 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.41, 142.36, 126.29, 124.91, 121.83, 116.14, 110.48, 67.03, 44.71, 26.92, 8.23; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -117.48(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C21H26F2N803S): 계산치 509.19(M+), 531.18(M+Na)+, 실측치 509.10, 531.00.
화합물(8)은 도식 3에 따라 제조한다:
도식 3
Figure pct00008
1-(4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6- 모르폴리노 -1,3,5-트리아진-2-일)피페라진-1-일) 프로프 -2-엔-1-온(8)
4-(4-(2-(디플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-6-(피페라진-1-일)-1,3,5-트리아진-2-일)모르폴린(15)(100 mg, 240 μmol, 1.0 eq.,일반적 과정에 따른 중간체(3) 및 BOC-보호된 피페라진으로부터 탈보호에 의해 얻음)이 염화메틸렌(4.0 ml)에 용해된 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(46.0 μl 264 μmol, 1.1 eq.) 및 아크릴산 무수물(27.7 μl, 240 μmol, 1.0 eq.)을 부가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매 증발 및 실리카겔 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(2% 메탄올/염화메틸렌)를 통한 정제로 표제 화합물을 무색 고체(100 mg, 88%)로 수득하였다. RF: 0.20(염화메틸렌/메탄올, 97:3 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.30(d, J = 7.58 Hz, 1H), 7.87-7.85(m, 1H), 7.66-7.35(m, 3H), 6.63-6.56(m, 1H), 6.34(dd, J = 1.8, 16.7 Hz, 1H), 5.75(dd, J = 1.8, 10.6 Hz, 1H), 3.90-3.86(m, 8H), 3.79-3.67(m, 8H); 19F(CDCl3, 400 MHz) δ; ESI-MS (C22H24F2N802): 계산치 493.20(M+Na)+, 실측치 493.20.
화합물(9) 및 (10)은 하기 도식 4에 따라 제조한다:
도식 4
Figure pct00009
2-(4-(4-(2-( 디플루오로메틸 -1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6- 모르폴리노 -l ,3,5-트리아진-2-일)피페라진-1-일) 에탄아민 (9)
2-(2-(4-(4-(2-(디플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-6-모르폴리노-1,3,5-트리아진-2-일)피페라진-1-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온(16)(70 mg, 119 μmol, 1.0 eq., 중간체(3) 및 2-(2-(피페라진-1-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온으로부터 얻음)을 에탄올(326 μl)에 용해시키고 또 히드라진 일수염 (6.4 μl, 130 μmol, 1.1 eq.)으로 처리하였다. 생성한 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 환류시키고, 백색 침전물이 형성되었다. 슬러리를 냉각시킨 다음 진한 염산(28.4 μl)으로 처리한 다음 1시간 동안 환류시켰다. 슬러리를 실온으로 냉각시키고 백색 고체를 여과제거하였다. 여액을 진공에서 증발시키고 또 잔류물을 물(1.5 ml)에 용해시키며 또 그 용액을 1M NaOH에 의해 pH 11로 만들었다. 수성 상을 NaCl로 포화시키고 또 염화 메틸렌을 사용하여 추출하였다. 모아진 유기 상들을 MgSO4 상에서 건조시키고 증발시킨 다음 진공에서 건조시켜 표제 화합물을 무색 고체로 수득하였다. RF: 0.00(에틸 아세테이트/염화메틸렌, 1:1 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.33(d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.87(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57(t, J = 53.6 Hz, 1H), 7.44-7.36(m, 2H), 3.88-3.85(m, 8H), 3.78-3.77(m, 4H), 2.84(t, J = 6.1Hz, 2H), 2.53-2.47(m, 6H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.45, 165.08, 162.38, 146.36, 142.34, 133.98, 126.12, 124.73, 121.69, 116.27, 108.82, 72.98, 70.91, 70.32, 67.11, 67.05, 62.17, 53.37, 39.07; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -118.44(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C21H27F2N90): 계산치 460.24(M+), 실측치 460.20.
N-(2-(4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6- 모르폴리노 -1,3,5-트리아진-2-일)피페라진-1-에틸) 아크릴아미드 (10)
염화메틸렌(4.0 ml)에 화합물(9)(100 mg, 218 μmol, 1.0 eq.)이 용해된 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(46.0 μl, 264 μmol, 1.1 eq.) 및 아크릴산 무수물(38.0 μl, 218 μmol, 1.0 eq.)을 부가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매 추출 및 반보존적 박층 크로마토그래피(10% 메탄올/에틸 아세테이트)를 통한 정제로 표제 화합물을 무색 고체(53 mg, 47%)로 수득하였다. RF: 0.40(에틸 아세테이트/메탄올, 9:1 v/v); 1H NMR(CDCl3, 500 MHz) δ 8.32(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.87(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66-7.36(m, 3H), 6.31-6.28(m, 2H), 6.17-6.11(m, 1H), 5.65(d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.89-3.86(m, 8H), 3.77(br. s, 4H), 3.52-3.49(m, 2H), 2.62-2.57(m, 6H); 13C NMR(CDCl3, 125 MHz) δ 165.62, 165.05, 164.77, 162.02, 146.17, 145.96, 145.75, 141.94, 133.58, 130.80, 128.20, 126.54, 125.81, 124.42, 121.31, 115.88, 110.36, 108.45, 106.54, 66.66, 56.65, 52.68, 52.52, 44.07, 43.95, 43.47, 43.26, 35.90; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ-117.49(d, J= 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C24H29F2N902): 계산치 514.25(M+), 실측치 514.30 및 536.24(M+Na)+, 실측치 536.20.
4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6-(4- 헥실피페라진 -1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(11)
일반적 과정에 따라서, 중간체(3)(70 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)를 1-헥실피페라진(44.5 μl, 229 μmol, 1.2 eq.)과 45분간 커플링시켰다. 염화메틸렌 및 물을 사용한 추출로 표제 화합물을 무색 고체(90.0 mg, 94%)로 수득하였다. RF: 0.44(염화메틸렌/메탄올, 95:5 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.35-8.33(m, 1H), 7.90-7.88(m, 1H), 7.58(t, J = 53.5 Hz, 1H), 7.45-7.37(m, 2H), 3.89-3.87(m, 8H), 3.79-3.77(m, 4H), 2.51(s, 4H), 2.38(t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.54-1.49(m, 2H), 1.34-1.28(m, 6H), 0.89(t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.48, 165.06, 162.39, 126.11, 124.72, 121.71, 116.28, 67.07, 59.19, 53.38, 44.89, 32.19, 27.63, 27.24, 23.02, 14.47; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -118.44(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C25H34F2N80): 계산치 501.29(M+), 실측치 501.30.
4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -1-일)-6-(4-(2- 에톡시에틸 )피페라진-1-일)-1,3,5- 트리아진 -2-일)모르폴린(12)
일반적 과정에 따라서, 중간체(3)(70 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)를 1-(2-에톡시에틸)피페라진(38.5 μΙ, 229 μmol, 1.2 eq.)과 45분간 커플링시켰다. 염화메틸렌 및 물을 사용한 추출에 의해 표제 화합물을 무색 오일(90.0 mg, 96%)로 수득하였다. RF: 0.28(염화메틸렌/메탄올, 95:5 v/v); 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) δ 8.35-8.33(m, 1H), 7.89-7.87(m, 1H), 7.58(t, J = 53.7 Hz, 1H), 7.45-7.37(m, 2H), 3.90-3.86(m, 8H), 3.79-3.77(m, 4H), 3.60(t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.55-3.50(m, 2H), 2.65(t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.60-2.59(m, 4H), 1.22(t, J = 7.1Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3, 100 MHz) δ 165.46, 165.06, 162.39, 142.36, 134.00, 126.11, 124.73, 121.70, 116.27, 108.82, 68.47, 66.96, 58.37. 53.71, 15.57; 19F(CDCl3, 400 MHz) δ -118.43(d, J = 53.9 Hz, 2F); ESI-MS(C23H30F2N802): 계산치 489.26(M+), 실측치 489.20.
(E)-3-(4-(2-((6-((2-(4-(4-(2-( 디플루오로메틸 )-1H- 벤조[d]이미다졸 -l-일)-6-모 르폴리 노-1,3,5- 트리아진 -2-일)피페라진-1-일)에틸)아미노)-6- 옥소헥실 )아미노)-2- 옥소에톡시 ) 스티릴 )-5,5- 디플루오로 -7-(티오펜-2-일)-5H-디피롤로[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]디아자보리닌-4-윰-5- 우이드 (13)
화합물(9)(1.0 eq., 6.88 μmol, 3.16 mg)이 무수 DMSO-d6(100 μl)에 용해된 용액에, 200 μl DMSO-d6에 용해된 Bodipy 630/650-X(Invitrogen, D10000)(5.00 mg, 7.57 μmol, 1.1 eq.)를 실온에서 부가하였다. 이 반응 혼합물을 NMR-튜브에 두고 NMR에 의해 콘트롤하였다. ESI-MS(C50H53BF4N1204S): 계산치 1005(M+), 실측치 1005.
PI3K 감마 이소폼에 대한 기준 억제제로서 형광단 함유 화합물(13)의 용도
형광단 함유 화합물(13)은 신규 억제제의 결합 상수가 결정되는 형광 상관관계 분광 실험에 의해 기준 억제제로서 사용될 수 있다. 화합물(13)은 PI3K 감마 이소폼에 결합하여, 확산 시간 증가를 초래한다. 효소가 화합물(13)에 의해 포화되면, 화합물(13)의 방출을 관찰하는 것에 의해 새로운 가능한 리간드가 시험될 수 있다. 이것은 확산 시간 감소를 초래한다.

Claims (19)

  1. 하기 화학식(I)의 화합물 및 그의 토토머, 용매화물 및 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00010

    식 중에서,
    R1은 메틸, n-헥실, 아미노에틸, 메틸아미노에틸, 에틸아미노에틸, 디메틸아미노에틸, 아크릴로일아미노에틸, 메타크릴로일아미노에틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, C1-C4-알킬-술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일이거나; 또는 R1은 링크 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸이며, 또
    R2 및 R3은, 서로 독립적으로, 수소 또는 C1-C4-알킬이거나, 또는 R2 및 R3은 함께 합쳐져서 에틸렌 브릿지를 형성함.
  2. 제1항에 있어서, R1은 메틸, n-헥실, 2-아미노에틸, 2-(메틸아미노)에틸, 2-(에틸아미노)에틸, 2-(아크릴로일-아미노)에틸, 2-메톡시에틸, 2-에톡시에틸, C1-C4-알킬술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일인 화학식(I)의 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R1은 각각 링커 및 태그를 갖는 2-아미노에틸, 아크릴로일 또는 2-(아크릴로일아미노)에틸인 화학식(I)의 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R1은 메틸, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 이소-프로필술포닐, 아크릴로일, 또는 메타크릴로일인 화학식(I)의 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R1은 메틸, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 또는 아크릴로일인 화학식(I)의 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R1은 메틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 메틸술포닐, 또는 아크릴로일인 화학식(I)의 화합물.
  7. 제1항에 있어서, R1은 링커, 및 비오틴, 형광단 또는 중합체 비드로부터 선택된 태그를 각각 갖는 2-아미노에틸 또는 아크릴로일인 화학식(I)의 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 서로 독립적으로, 수소, 메틸, 에틸, 또는 이소프로필이거나, 또는 R2 및 R3은 함께 합쳐져서 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성하는 화학식(I)의 화합물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 각각 수소, 1개 수소 및 1개 메틸이거나, 또는 모두 메틸이거나, 또는 합쳐져서 에틸렌 브릿지를 형성하는 일반식(I)의 화합물.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 (S)-2-메틸, (R)-2-메틸, (R)-3-메틸, 또는 (S)-3-메틸이고, 또 R3은 수소이거나, 또는 R2 및 R3은 (2R,6S)-2,6-디메틸, (2R,6R)-2,6-디메틸, (2R,3R)-2,3-디메틸, (2S,5S)-2,5-디메틸, (3S,5R)-3,5-디메틸, (3S,5S)-3,5-디메틸, 2,5-에틸렌 브릿지, 2,6-에틸렌 브릿지, 3,5-에틸렌 브릿지이거나, 또는 양자가 모두 수소인 일반식(I)의 화합물.
  11. 제1항에 있어서, R1은 메틸, n-헥실, 2-아미노에틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 2-에톡시에틸, 메틸술포닐, 에틸술포닐, 또는 아크릴로일이고, 또 R2 및 R3은 수소인 일반식(I)의 화합물.
  12. 제1항에 있어서, R1은 메틸, 2-(아크릴로일아미노)에틸, 메틸술포닐, 또는 아크릴로일이고, 또 R2 및 R3은 수소인 일반식(I)의 화합물.
  13. 제1항에 있어서, R1은 메틸 또는 메틸술포닐이고, 또 R2 및 R3은 수소인 일반식(I)의 화합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화학식(I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 유효량의 화학식(I)의 화합물을 치료를 필요로 하는 포유동물에 투여하는 것을 포함하는, PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절된 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 유효량의 화학식(I)의 화합물을 치료를 필요로 하는 포유동물에 투여하는 것을 포함하는 과증식성 장애를 치료하는 방법.
  17. 포유동물에서 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절되는 질병 또는 상태의 치료 또는 예방을 위한 의약으로서 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 유효량의 화학식(I)의 화합물.
  18. 포유동물에서 PI3 키나제 및/또는 mTOR에 의해 조절되는 질병 또는 상태의 치료 또는 예방을 위한 의약 제조에 사용하기 위한 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 유효량의 화학식(I)의 화합물.
  19. 다음 단계를 포함하는, 지질 키나제에 대한 화합물 결합을 스크리닝하는 방법:
    (a) R1이 링커 및 태그를 갖는 아미노에틸, 아크릴로일 또는 아크릴로일아미노에틸인 화학식(I)의 화합물을 지질 키나제에 결합시키는 단계;
    (b) 상기 지질 키나제에 대한 결합을 위해 스크리닝될 화합물과 혼합하는 단계;
    (c) 태그의 특성을 기초로 하여 상기 화학식(I)의 화합물의 배치를 측정하는 단계; 및
    (d) 측정된 배치의 결과로부터 스크리닝된 화합물의 결합을 산출하는 단계.
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6315848B2 (ja) * 2013-03-13 2018-04-25 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ ミシガン Mek/pi3k二重阻害剤および該阻害剤を使用する治療方法
EP3221307B1 (en) 2014-11-20 2019-07-24 Council of Scientific & Industrial Research Novel 1,3,5 -triazine based pi3k inhibitors as anticancer agents and a process for the preparation thereof
CN105130960B (zh) * 2015-07-31 2018-07-06 沈阳药科大学 1,3,5-三嗪类衍生物及其应用
JP2019519593A (ja) 2016-07-06 2019-07-11 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガンThe Regents Of The University Of Michigan MEK/PI3K及びmTOR/MEK/PI3K生物学的経路の多官能性阻害剤、並びに同多官能性阻害剤を用いた治療方法
CN109810100B (zh) * 2017-11-21 2022-03-11 中国药科大学 含有苯并呋喃的parp-1和pi3k双靶点抑制剂
CN113200969B (zh) * 2021-05-19 2022-11-25 中国药科大学 一种PI3Kα选择性抑制剂及其制备方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005138A1 (fr) * 1997-07-24 1999-02-04 Zenyaku Kogyo Kabushiki Kaisha Composes heterocycliques et agent antitumoral contenant lesdits composes utilises comme ingredients actifs
ATE350376T1 (de) 2001-04-27 2007-01-15 Zenyaku Kogyo Kk Heterocyclische verbindung und antitumormittel, das diese als wirkstoff enthält
EP1518187A1 (de) 2002-07-01 2005-03-30 Ognjen Amidzic Verfahren zur erstellung von daten, die für die beurteilung kognitiver oder sensomotorischer leistungsfähigkeiten oder leistungen von testpersonen verwendbar sind
US7423148B2 (en) * 2002-11-21 2008-09-09 Chiron Corporation Small molecule PI 3-kinase inhibitors and methods of their use
PL1864665T3 (pl) * 2005-03-11 2012-10-31 Zenyaku Kogyo Kk Środek immunosupresyjny obejmujący związek heterocykliczny jako składnik aktywny
WO2008032033A1 (en) 2006-09-14 2008-03-20 Astrazeneca Ab 4-benzimidazolyl-2-morpholino-6-piperazinylpyrimidine derivatives as pi3k and mtor inhibitors for the treatment of proliferative disorders
WO2009066084A1 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 F. Hoffmann-La Roche Ag 2 -morpholinopyrimidines and their use as pi3 kinase inhibitors
EP2276750A2 (en) * 2008-03-27 2011-01-26 Auckland Uniservices Limited Substituted pyrimidines and triazines and their use in cancer therapy
AU2009269087A1 (en) * 2008-07-07 2010-01-14 Xcovery Holding Company Llc PI3K isoform selective inhibitors
EP2411387B1 (en) * 2009-03-27 2015-08-19 VetDC, Inc. Pyrimidinyl and 1,3,5-triazinyl benzimidazole sulfonamides and their use in cancer therapy

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