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KR20120140450A - Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell - Google Patents

Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell Download PDF

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KR20120140450A
KR20120140450A KR1020110060194A KR20110060194A KR20120140450A KR 20120140450 A KR20120140450 A KR 20120140450A KR 1020110060194 A KR1020110060194 A KR 1020110060194A KR 20110060194 A KR20110060194 A KR 20110060194A KR 20120140450 A KR20120140450 A KR 20120140450A
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KR
South Korea
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composition
skin
mesenchymal stem
differentiation
adipocyte
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KR1020110060194A
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신동욱
노민수
박수남
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(주)아모레퍼시픽
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Abstract

PURPOSE: A composition with Nelumbinis Semen extracts as an active ingredient for promoting the differentiation of adipocyte in human mesenchymal stem cell is provided to promote differentiating the adipocyte from a human mesenchymal stem cell to produce lipid droplet, enhance the electricity and the volume of skin and reduce wrinkles. CONSTITUTION: A composition for skin external application for promoting the differentiation of adipocyte contains Nelumbinis Semen extracts as an active ingredient. The composition promotes differentiating adipocyte from a mesenchymal stem cell. The mesenchymal stem cell is a human mesenchymal cell. The composition increases adipocyte tissue. For the total weight of the composition, a Nelumbinis Semen extract weighs ranging from 0.001 to 30%. The composition enhances the volume of skin and the elasticity of skin, and reduces skin wrinkles. A pharmaceutical composition for promoting the differentiation of a adipocyte cell contains Nelumbinis Semen as an active ingredient. A Nelumbinis Semen extract is administered from 0.001mg /kg /day-2000mg /kg /day. [Reference numerals] (AA) Relative revelation amount; (BB) Negative control group; (CC) Ligustri Fructus; (DD) Veratri Rhizoma Et Radix; (EE) Forsythiae Fructus; (FF) Nelumbo semen

Description

인간 중간엽줄기세포의 분화 촉진용 조성물{Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell}Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell}

본 발명은 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화를 촉진하는 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하여 인간 중간엽줄기세포를 지방세포로 분화하는 것을 촉진시킴으로써 지방체(Lipid droplet)를 생성하여 피부의 볼륨과 탄력을 증진시키고 주름을 개선시키는 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cells into adipocytes, and more particularly, by containing the extract of the soft muscle meat as an active ingredient to promote differentiation of human mesenchymal stem cells into adipocytes. Lipid droplets) to improve the volume and elasticity of the skin and to improve the wrinkles.

진피 아래에 존재하는 피하지방 층은 지방세포(adipocyte)의 소엽으로 구성되어 있는데, 외부의 열에 대해 피부 내부의 기관의 보호 및 충격을 흡수하는 쿠션 역할을 하며 영양성분을 트리글리세라이드(Triglyceride)의 형태로 지방체 (Lipid droplet)라는 세포 소기관에 저장하여 필요 시 에너지원으로 사용하기도 한다. 그러나 나이가 들어감에 따라 자연적인 요인과 각종 외부 자극에 의해 피부는 손상을 입게 되는데, 특히 진피에서 탄력을 담당하는 교원섬유(콜라겐), 탄력섬유(엘라스틴)의 활성 및 발현이 저하되며 탄력이 줄어듦과 동시에, 피하지방에서도 지방생성이 감소함으로써 결국에는 피부 전반적으로 각 구성 세포들의 본래 기능이 제대로 이루어지지 않게 되어 탄력 손실에 따른 주름 생성 등의 피부 노화 현상이 발생하게 된다. The subcutaneous fat layer under the dermis is composed of the lobules of adipocytes, which act as a cushion to absorb and protect the organs inside the skin against external heat, and the nutrients form triglycerides. They are stored in organelles called lipid droplets and used as energy sources when needed. However, with age, the skin is damaged by natural factors and various external stimuli. In particular, the activity and expression of collagen and elastic fiber (elastin), which are responsible for elasticity in the dermis, are reduced and elasticity is reduced. At the same time, in the subcutaneous fat, the production of fat decreases, and eventually, the constituent cells of the entire skin do not function properly, resulting in skin aging such as wrinkles caused by loss of elasticity.

현대 사회에서 특히 여성들에게 피부는 그들의 건강에 대한 주요한 지표가 되고 있으며, 따라서 나이가 들어감에 따라 탄력을 잃는 피부는 여성들에게 민감한 문제로 대두되고 있다. 특히 얼굴 부위의 피부는 다른 피부 부위에 비해서 두께가 얇은 편으로 체중이나 나이 등의 요인으로 인해 처지고 탄력을 잃기 쉽다. 또한 폐경기 여성들에게서 주로 발생하는 호르몬, 혈액, 지방, 뼈 등의 대사 이상으로 인한 얼굴의 탄력 저하 및 지방의 감소는 여성들로 하여금 여성성에 대한 큰 상실감을 느끼게 한다. 이처럼 현대 사회 여성들에게 아주 민감한 문제들에 대해서 지방조직의 볼륨을 증가시키는 것이 하나의 해결책으로 대두되고 있으며, 많은 여성들이 부작용과 경제적인 부담이 따르는 성형수술을 통해서 피부의 탱탱함을 유지 혹은 증가시키고자 한다.In modern society, especially for women, skin is a major indicator of their health, and skin that loses elasticity as it gets older is becoming a sensitive issue for women. Particularly, the skin of the face area is thinner than other skin areas and is liable to lose its elasticity due to factors such as weight and age. In addition, the loss of elasticity and fat in the face caused by metabolic abnormalities such as hormones, blood, fat and bones, which are mainly caused by menopausal women, make women feel a great loss of femininity. Increasing the volume of local organizations is becoming a solution to these very sensitive issues for modern women, and many women are trying to maintain or increase the firmness of their skin through plastic surgery with side effects and economic burdens. do.

이러한 피부의 탄력 저하를 개선하고자 현재 널리 사용되고 있는 방법이 지방이식수술이다. 지방이식수술은 튜립 니들(tulip needle) 모양의 끝이 날카롭지 않은 바늘을 갖는 주사기를 이용하여 자신의 지방을 채취해 탄력이 떨어져 보이는 피부의 각 부위에 이식하는 수술이다. 이러한 지방 이식은 나이가 들어감에 따라 노화되는 피부의 주름 개선을 비롯하여, 입술선, 턱선, 이마선의 교정, 코 성형과 화상이나 상처로 인해 함몰된 피부, 암 절제 수술로 상실된 부분 등에 적용하여 채워주면서 좋은 성과를 보이고 있다. 하지만 지방이식수술 이후에 이식 부피의 40~60%가 다시 인체 내에 흡수된다는 것이 보고되었고(S Eremia et al., Dermatol . Sur. 2000, 26: 1150-1158; Fulton JE et al., Dermatol . Clin . 2001, 19(3): 523-530), 피부가 얇고 피하지방이 적은 부위에서의 지방이식수술은 세포 덩어리가 만져지는 등의 문제가 제기되며, 실제로 이식한 지방의 생존율과 생존기간이 기대에 미치지 못해 재이식이 필요한 경우가 발생한다. 따라서, 이러한 문제점들이 있는 지방이식수술을 대체하면서 피하지방층을 충분히 증가시킬 수 있는 조성물에 대한 요구가 높아지고 있다.To improve the elasticity of the skin, a widely used method is fat transplant surgery. Fat transplant surgery is a surgical operation using a syringe with a tulip needle shaped tip and a needle that is not sharp. These fat grafts can be applied to the areas that have been lost due to the aging skin, wrinkles of the aging skin, lip, chin, forehead, nose, It is showing performance. However, it has been reported that 40-60% of the graft volume is absorbed back into the body after liposuction (S Eremia et al., Dermatol . Sur. 2000, 26: 1150-1158; Fulton JE et al., Dermatol . Clin 2001, 19 (3): 523-530), fat transplantation of skin is thin subcutaneous fat area is less raised a problem of which the cell mass touched, actually the transplanted fat survival and survival expectancy There is a case in which replanting is not necessary. Accordingly, there is a growing demand for a composition capable of sufficiently increasing the subcutaneous fat layer while replacing the fat grafting surgery with these problems.

현재 판매되고 있는 피부 탄력 증진 효능을 가진 화장품의 대부분은 피부의 주름 제거 또는 진피 강화 등의 일반적인 효능을 가진 성분을 사용한 것이다. 피부 탄력의 저하는 노화나 자외선 등에 의해 유발되는 콜라겐(collagen)과 엘라스틴(elastin)의 생성 저하 또는 파괴에 기인한다. 이러한 탄력 감소의 원인이 되는 콜라겐 및 엘라스틴의 감소를 억제하려는 목적으로 여러 가지 물질들이 개발되어 사용되고 있다. 그 중 대표적으로 사용되고 있는 것이 레티놀과 레티노익산 등의 레티노이드이다. 레티노이드는 탁월한 탄력개선 효과를 나타내지만(Dermatology therapy 1998, 16, 357-364), 소량만을 피부에 적용하여도 자극이 나타난다는 단점을 가진다. 따라서 최근 들어 이러한 원료들의 피부 자극 문제를 해소하기 위해 보다 안전하고 피부에 자극이 없는 천연 식물성 원료를 이용한 화장품 개발에 대한 요구가 높아지고 있다. Most of the cosmetic products that have the skin elasticity enhancing effect currently sold are those using common ingredients such as skin wrinkle removal or dermis strengthening. The lowering of skin elasticity is caused by degradation or destruction of collagen and elastin caused by aging or ultraviolet rays. Various materials have been developed and used for the purpose of inhibiting the reduction of collagen and elastin, which are the causes of such elasticity reduction. Among them, retinoids such as retinol and retinoic acid are typically used. Retinoids exhibit excellent resilience (Dermatology therapy 1998, 16, 357-364), but they suffer from the disadvantage that irritation occurs even when only a small amount is applied to the skin. Therefore, in order to solve the skin irritation problem of these raw materials, there is an increasing demand for the development of cosmetics using natural vegetable raw materials which are safer and have no irritation to the skin.

한편, 피부의 기본적인 구조가 피하지방조직에 의해서 유지되고, 이러한 피하지방조직은 피부의 볼륨과 강도를 좌우하는 역할을 하므로, 상기 설명한 바와 같이 기존에 사용되고 있던 피부 외곽층의 진피나 표피에 탄력을 부여하는 방법보다 지방조직의 부피를 증가시키는 것이 피부의 볼륨감 유지 및 주름 개선에 좋은 해결책이 될 수 있으며, 이와 관련되어 최근 논문들이 발표되었다 (Kim WS et al., Sci. 2009, 53(2):96-102;Trottier V et al., Stem cells. 2008 26(10):2713-23;Park Bs et al., Dermatol. Surg. 2008, 34(10):1323-1326).Meanwhile, since the basic structure of the skin is maintained by the subcutaneous fat tissue, and the subcutaneous fat tissue plays a role in determining the volume and strength of the skin, elasticity is applied to the dermis or epidermis of the outer skin layer that has been used as described above. Increasing the volume of adipose tissue, rather than applying it, may be a good solution for maintaining the volume of the skin and improving wrinkles, and recent papers have been published (Kim WS et al., Sci. 2009, 53 (2). ): 96-102; Throtttier V et al., Stem cells. 2008 26 (10): 2713-23; Park Bs et al., Dermatol. Surg. 2008, 34 (10): 1323-1326).

지방세포를 이용한 연구는 다양한 분야에서 활발하게 진행되고 있다. 일반적으로 사용되는 지방전구세포(preadipocyte)는 인슐린과 같은 분화 유도 물질에 의해 지방세포로 분화되는 특성을 가지고 있기 때문에, 널리 사용되는 세포이다. 이러한 지방세포를 이용한 연구에 있어서 최근 주목을 받고 있는 것이 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell), 지방 유래 줄기세포 (adipocyte derived stem cell)이다. 이들 줄기세포는 일반적으로 지방전구세포를 지방세포로 분화시키는 데 사용되는 방법과 유사한 방법을 이용하여 분화시킬 수 있기 때문에(Xu Y et al., Exp. Cell Res. 2006, 312, 1856-1864), 지방세포 분화 연구에 널리 이용되고 있다 (Pittenger MF et al., Science 1999, 284, 143-146).
Studies using adipocytes have been actively conducted in various fields. A commonly used preadipocyte is a widely used cell because it has the property of differentiating into adipocytes by differentiation inducers such as insulin. Mesenchymal stem cells and adipocyte-derived stem cells are recently attracting attention in research using such adipocytes. These stem cells can generally be differentiated using methods similar to those used to differentiate adipocytes into adipocytes (Xu Y et. al ., Exp. Cell Res. 2006, 312, 1856-1864), widely used in the study of adipocyte differentiation (Pittenger MF et al ., Science 1999, 284, 143-146).

이에 본 발명자들은 지방조직을 이루는 지방세포의 분화를 촉진시키는 생약 추출물을 찾고자 노력한 결과, 연자육 추출물을 중간엽줄기세포에 처리할 경우 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 과정을 효과적으로 촉진함을 발견하고 본 발명을 완성하였다. Therefore, the present inventors have tried to find a herbal extract that promotes the differentiation of fat cells that make up the adipose tissue, and found that the mesenchymal stem cells effectively promote the process of differentiating mesenchymal stem cells into adipocytes when the extracts were treated on mesenchymal stem cells. This invention was completed.

따라서, 본 발명의 목적은 인간 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화를 촉진시키는 생약 추출물을 함유하여 피부 볼륨감 및 탄력을 증가시키고 주름을 개선시킬 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition containing an herbal medicine extract that promotes differentiation of human mesenchymal stem cells into adipocytes, thereby increasing skin volume and elasticity and improving wrinkles.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 피부 외용제 조성물 및 약학 조성물을 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides a skin external preparation composition and pharmaceutical composition for promoting adipocyte differentiation containing the extract of lotus root meat as an active ingredient.

본 발명에 의한 조성물은 연자육 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것을 촉진시킴으로써 미용 또는 성형 목적의 지방조직 증가에 유용하며, 따라서 피부 볼륨 및 탄력을 증가시키고 피부 주름을 개선시키는 도움이 된다.
The composition according to the present invention is useful for increasing adipose tissue for cosmetic or cosmetic purposes by promoting the differentiation of mesenchymal stem cells into adipocytes by containing the extract of lotus root as an active ingredient, thus increasing skin volume and elasticity and reducing skin wrinkles. It is helpful to improve.

도 1은 IDXT 조건 하에서 연자육 추출물을 처리 후, 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 후에 현미경으로 관찰한 것을 나타낸 사진이다.
도 2는 연자육 추출물을 처리한 후 중간엽줄기세포의 IDXT 대비 상대적 지방분화 수치를 나타낸 그래프이다.
Figure 1 is a photograph showing the observation under a microscope after induction of adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells after treatment of the extract of the lotus leaf under IDXT conditions.
Figure 2 is a graph showing the relative fat differentiation value compared to IDXT of mesenchymal stem cells after the treatment of the extract of the lotus leaf.

본 발명은 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for promoting adipocyte differentiation containing an extract of lotus root meat as an active ingredient.

본 발명에서 사용하는 용어 "지방세포분화"는 동물, 바람직하게는 포유동물의 지방전구세포 또는 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것이고, 보다 바람직하게는 인간의 중간엽줄기세포가, 가장 바람직하게는 인간의 골수로부터 유래한 중간엽줄기세포가 지방세포로 분화하는 것이다.As used herein, the term "fat cell differentiation" refers to the differentiation of adipocytes or mesenchymal stem cells of an animal, preferably a mammal, into adipocytes, and more preferably human mesenchymal stem cells. Preferably, mesenchymal stem cells derived from human bone marrow differentiate into adipocytes.

본 발명에서 사용하는 생약 추출물은 하기와 같다. The herbal extract used in the present invention is as follows.

연자육(Nelumbinis Semen)은 연꽃의 성숙한 종자로서 저수지와 같은 연못에서 자라는 수생식물이다. 주로 비장이 허약한 증상에 많이 사용하여 설사를 멈추게 하며, 가슴이 마구 뛰고 불면증의 증상을 치료한다. 또한 신(腎)기능을 높여 유정(遺精) 및 몽정(夢精)을 치료하며 부인의 백대하를 치료한다. 연꽃의 잎인 하엽은 여름설사, 두통, 어지럼증에 사용한다. 토혈, 코피, 대변출혈, 자궁출혈을 그치게 하고, 산후에 어혈로 인한 어지럼증을 치료한다. 연꽃의 뿌리인 우절은 각혈, 토혈, 코피, 대변 출혈, 치질 출혈, 소변출혈, 자궁 출혈 등에 지혈 효과가 탁월하다. 연꽃의 과방인 연방은 자궁출혈, 월경과다, 대변출혈을 그치게 하고, 치질과 탈항, 악창(惡瘡)에도 활용된다. 연꽃의 암술인 연수는 꿈이 많고 몽정, 유정, 토혈과 자궁 출혈, 대하, 이질에 사용한다. 종자안에 있는 녹색의 배아인 연자심은 번민(煩悶)이 많고 불안하며 헛꿈을 꾸고 구갈과 유정, 토혈, 안구출혈 등에 사용한다. 약리작용으로 비암(鼻癌)과 인후함 억제작용이 보고되었다. (출처, 네이버 백과사전)
Nelumbinis Semen is a mature seed of lotus, aquatic plants that grow in ponds like reservoirs. The spleen is mainly used for fragile symptoms to stop diarrhea, and the heart beats and treats the symptoms of insomnia. In addition, by increasing the function of the kidneys (유 精) and dreams (치료 精) to treat the wife's white crabs. The lower leaves, the leaves of lotus, are used for summer diarrhea, headaches and dizziness. Stop blood, nosebleeds, stool bleeding, uterine bleeding, and cure dizziness caused by bleeding after giving birth. The root of lotus, the root, has excellent hemostatic effect on keratin, hemostasis, nosebleed, fecal bleeding, hemorrhoidal bleeding, urine bleeding, and uterine bleeding. The Commonwealth of Lotus, which stops uterine bleeding, excessive menstruation and stool bleeding, is also used for hemorrhoids, prolapse and swelling. Yeonsu, a pistil of lotus, has many dreams, and is used for dreams, oil wells, bleeding and uterine bleeding, crayfish, and dysentery. Yeonsimsim, a green embryo in seeds, has a lot of anxiety, anxiety, shame, and it is used for dry mouth, oil well, hemostasis, and eye bleeding. Pharmacological action has been reported to inhibit nasal cancer and throat. (Source, Naver Encyclopedia)

본 발명에서 사용하는 연자육 추출물은 물 또는 에탄올과 같은 유기용매를 사용하여 당업계에 잘 알려진 통상적인 추출 방법에 의해 추출할 수 있다. Soft lotus extract used in the present invention can be extracted by conventional extraction methods well known in the art using an organic solvent such as water or ethanol.

본 발명의 조성물은 중간엽줄기세포(Mesenchymal Stem Cell, MSC)의 분화를 촉진함으로써, 피하지방층을 구성하거나 지방세포를 제공하여 피부에 대하여 볼륨과 탄력을 부여하고 주름을 개선시키는 효능을 제공하며, 피부 외용제 조성물 또는 약학 조성물로서 제공될 수 있다.The composition of the present invention promotes the differentiation of Mesenchymal Stem Cell (MSC), thereby constituting a subcutaneous fat layer or providing an adipocyte to provide volume and elasticity to skin and improve wrinkles, As an external preparation for skin or as a pharmaceutical composition.

본 발명에 의한 조성물이 피부 외용제 조성물로 사용될 경우에 신체 부위에 따라, 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않는다. 구체적으로 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지 크림, 영양 크림, 팩, 젤 또는 피부 점착 타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있다. When the composition of the present invention is used as a composition for external application for skin, it is not particularly limited in its formulation depending on the body part. Specifically, it may be a cosmetic composition having a formulation of a softening agent, a nutritional lotion, a massage cream, a nutritional cream, a pack, a gel or a skin adhesive type cosmetic composition and may be a cosmetic composition such as a lotion, ointment, gel, cream, patch or spray It may be a transdermal dosage form.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 연자육 추출물을 유효성분으로 피부 외용제 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~ 30중량%의 양으로 함유한다.The external preparation for skin composition according to the present invention contains the extract of the soft lotus meat as an active ingredient in an amount of 0.0001 to 30% by weight based on the total weight of the external preparation for skin composition.

또한 각 제형에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기한 본 발명의 연자육 추출물 이외의 다른 성분들을 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.In addition, in the composition for external application for skin according to each formulation, other ingredients other than the soft extract of the present invention described above may be appropriately selected and blended by those skilled in the art without difficulty according to the formulation or use purpose of other external preparation for skin, in which case, At the same time, synergistic effects may occur.

또한, 본 발명에 의한 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우에, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다. In addition, when the composition according to the present invention is used as a pharmaceutical composition, a pharmaceutical adjuvant such as a preservative, a stabilizer, a wetting agent or an emulsifying accelerator, a salt for controlling osmotic pressure and / or a buffer, And may be formulated into various oral or parenteral dosage forms according to conventional methods.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신) 및 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 그러나, 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 생약 추출물의 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다. 일반적으로 생약 추출물의 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일이다.Examples of formulations for oral administration include tablets, pills, hard and soft capsules, liquids, suspensions, emulsions, syrups, granules, etc. These formulations may contain, in addition to the active ingredient, a diluent such as lactose, dextrose, Mannitol, sorbitol, cellulose and glycine) and lubricants (such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts and polyethylene glycols). The tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch, agar, alginic acid or its sodium salt Such as disintegrants, absorbents, coloring agents, flavoring agents, and sweetening agents. Tablets may be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods. Also representative of parenteral formulations are injectable formulations, preferably aqueous isotonic solutions or suspensions. However, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of several relevant factors such as the severity of the symptom, the route of administration chosen, the subject's age, sex, weight and health condition, and therefore the dosage of the herbal extracts. Does not limit the scope of the invention in any way. Generally, the dosage of the herbal extracts ranges from 0.001 mg / kg / day to approximately 2000 mg / kg / day. A more preferred dosage is 0.5 mg / kg / day to 2.5 mg / kg / day.

본 발명에 의한 중간엽줄기세포의 분화를 촉진시키는 미용 또는 성형용 조성물의 적용 부위는 신체의 모든 지방 조직을 포함하며, 특정 부위에 한정하지는 않지만, 예를 들면, 지방층이 많은 여성의 가슴, 엉덩이 부위를 포함할 수 있다. 또한 상기 지방조직의 증가 효과로는 미용 또는 성형 목적의 지방조직 증가 효과가 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
The application site of the cosmetic or molding composition for promoting differentiation of mesenchymal stem cells according to the present invention includes all the adipose tissues of the body and is not limited to a specific site. For example, a breast, a hip Region. In addition, the effect of increasing the adipose tissue may be an effect of increasing adipose tissue for cosmetic or cosmetic purposes, but is not limited thereto.

이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

[참고예 1] 생약 추출물의 제조[Reference Example 1] Preparation of crude drug extract

여로, 여정실, 연교, 연자육을 각각 30g을 에탄올(95.0~95.5v/v%), 200ml에 넣은 다음 ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR(DIONEX Corporation) 기기를 이용하여 50℃에서 1500psi 압력하에 20분간 분쇄하였다. 또한 초음파 세척기(BRANSON Ultrasonics corporation) 소니케이터 기기를 이용하여 50℃에서 3일 정도 추가 분쇄하였다. 이렇게 분쇄된 각 추출물을 모듈 스핀 40(Modul spin 40; Biotron corporation) 기기를 이용하여 40℃에서 24시간 동안 건조하여 각 추출물 시료를 제조하였다.
For example, 30 g each of the journey room, the pontoon, and the soft meat were put in 200 ml of ethanol (95.0 to 99.5v / v%), and then pulverized for 20 minutes at 1500 ° C. under a pressure of 1500 psi at 50 ° C. using an ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR (DIONEX Corporation) instrument. Further, it was further pulverized at 50 DEG C for 3 days using an ultrasonic washing machine (BRANSON Ultrasonics corporation). Each of the thus-pulverized extracts was dried at 40 ° C for 24 hours using a Modul spin 40 (Biotron corporation) apparatus to prepare samples of each extract.

[시험예 1] 인간의 골수 유래 중간엽줄기세포의 지방세포로의 분화 촉진 효능 및 정량적 측정[Test Example 1] Efficacy and quantitative measurement of promoting differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells into adipocytes

인간의 골수 유래 중간엽줄기세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)를 론자사(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하여 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 지방세포 분화는 인도메타신(indomethacin) 대신 트로글리타존(Troglitazone)을 사용하여 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 점을 제외하고 론자사에서 권장하는 방법을 사용하여 달성하였다. 구체적으로, 중간엽줄기세포의 배양액에 인슐린 1 μg/ml, 덱사메타손 (Dexamethasone, DEXA) 1 μM, 이소부틸메틸크산틴(isobutyl methyl xanthine, IBMX) 0.5 mM 을 넣고 배양하여 줄기세포를 지방세포로 분화시켰으며, 지방세포 분화 유도 시에 IDXT 조건하에서 연자육 추출물을 각각 10 ppm씩 배지에 첨가하였다. 또한, 비교를 위하여 여로, 여정실, 연교 추출물을 10 ppm씩 배지에 첨가하였다. 양성 대조군으로는 트로글리타존(Troglitazone; TRO) 2mM을 사용하여, IDX 배지와 같이 처치하였다. 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 시작한 지 14일 후, 세포 배양액을 제거하고, 10 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 10% 포르말린/PBS 용액 0.2 ml/cm2을 사용하여 세포를 10분간 고정시켰다. 고정된 세포를 60% 이소프로판올 용액 0.5 ml/cm2로 1회 세척하고, 오일레드오(Oil Red O)를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액 0.2 ml/cm2로 10분간 지방세포 내의 지질체를 염색하였다. 이어서, 헤마톡실린(hematoxylin)으로 재염색을 행하여 세포핵을 쉽게 구분되도록 한 후 현미경으로 관찰하였고, 연자육 추출물을 처리한 경우의 결과를 도 1에 나타내었다. Human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) were purchased from Lonza, Inc. (Walkersville, MD, USA) and cultured according to Lonza's guidelines. Adipocyte differentiation was achieved using the method recommended by Ron, except that troglitazone was used instead of indomethacin to induce adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells. Specifically, 1 μg / ml of insulin, 1 μM of dexamethasone (DEXA) and 0.5 mM of isobutyl methyl xanthine (IBMX) were cultured in the culture of mesenchymal stem cells to differentiate stem cells into adipocytes. At the time of inducing adipocyte differentiation, 10 ppm each of the extracts of the lotus root meat was added to the medium under IDXT conditions. In addition, for comparison, Journey, Journey, and Fructus extracts were added to the medium by 10 ppm. As a positive control, Troglitazone (TRO) 2 mM was used and treated with IDX medium. After 14 days of adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells, the cell culture was removed, the cells were washed with 10 ml of Phosphate Buffered Saline (PBS), and then 0.2 ml / cm of 10% formalin / PBS solution. Cells were fixed for 10 minutes using 2 . The fixed cells were washed once with 0.5 ml / cm 2 of 60% isopropanol solution, and stained with lipids in adipocytes with 0.2 ml / cm 2 stained with Oil Red O in 60% isopropanol for 10 minutes. It was. Subsequently, re-staining with hematoxylin (hematoxylin) was performed to make cell nuclei easily distinguished, and then observed under a microscope.

도 1을 보면, 여로, 여정실, 연교 추출물을 처리한 경우는 IDXT 조건 하에서 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 정도와 차이가 크지 않았으나, 반면 IDXT 조건하에서 연자육 추출물을 첨가한 다음 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 경우에는 IDXT 조건 하에서 중간엽줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 경우보다 지방세포의 분화가 더 효과적으로 일어남을 확인할 수 있다.Referring to Figure 1, the case of treatment of the yeast, Journey, Yeongyo extract was not significantly different from the degree of inducing adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells under IDXT conditions, whereas mesenchymal stem was added after the addition of the extract of lotus leaf muscle under IDXT conditions. Induction of adipocyte differentiation of cells can be confirmed that the differentiation of adipocytes occurs more effectively than induction of adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells under IDXT conditions.

이후 염색된 오일레드오를 100% 이소프로판올 용액으로 용출시킨 후 500 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이 때, 각 데이터 값은 인슐린 대조군으로 보정하였다. 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다. 또한 연자육 추출물을 각각 처리한 경우 중간엽줄기세포의 IDXT 대비 지방분화 촉진 증가율은 하기 표 1에 나타내었다.Then, the dyed oil red oi was eluted with a 100% isopropanol solution, and the absorbance was measured at a wavelength of 500 nm. The results are shown in Fig. At this time, each data value was corrected with an insulin control group. These increases were statistically significant, and statistical tests were verified by both Student's t test, indicating a significant difference when the p-value was less than 0.05. In addition, the increase in fat differentiation promotion compared to IDXT of mesenchymal stem cells, respectively, when treated with the extract of the soft muscle is shown in Table 1 below.

생약명Herbal medicine 학명Scientific name IDXT 대비(증가율)IDXT vs. Growth Rate 여로Way VeratriVeratri RhizomaRhizoma 1% 증가1% increase 여정실Journey Room LigustriLigustri FructusFructus 21% 증가21% increase 연교Abalone ForsythiaeForsythiae FructusFructus 27% 증가27% increase 연자육Lotus root NelumbinisNelumbinis SemenSemen 75% 증가75% increase

표 1 및 도 2의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 연자육 추출물은 각각 중간엽줄기세포의 세포 사멸을 유도하지 않으면서 지방세포의 분화를 촉진하며, 여로, 여정실, 연교 추출물을 각각 처리한 경우와 비교하여 훨씬 효과적으로 지방세포의 분화를 촉진시킬 수 있음을 확인할 수 있다.
As can be seen from the results of Table 1 and Figure 2, the extracts of the lotus leaf muscle according to the present invention promotes the differentiation of adipocytes without inducing cell death of mesenchymal stem cells, respectively, and the extracts of the yeast, journey, and ducts, respectively It can be seen that it can promote the differentiation of adipocytes much more effectively than when treated.

[시험예 2] 피부 볼륨감 증진 효과 측정[Test Example 2] Measuring effect of enhancing skin volume

본 발명의 연자육 추출물의 사용시 인체 피부의 볼륨감 증진 및 주름 개선 효과를 알아보기 위하여 20명의 임상시험 참가자를 대상으로 설문조사를 실시하였다.In order to find out the effect of improving the volume and wrinkles of human skin when using the extract of the present invention, a questionnaire was conducted among 20 clinical trial participants.

구체적으로 하기 표 2에 나타낸 바와 같은 연자육 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 2.0중량%의 양으로 함유한 영양크림을 매일 1회씩 8주간 목 부위의 피부에 도포를 하도록 하였으며, 그 후에 볼륨감 증진 및 주름 개선 효과에 대하여 설문조사를 하였다. 효과가 좋은 경우는 ○, 보통인 경우는 △, 효과가 없는 경우는 X로 표시하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.Specifically, the nourishing cream containing the extract of lotus root meat as shown in Table 2 in an amount of 2.0% by weight based on the total weight of the composition was applied to the skin of the neck area once a day for 8 weeks, after which volume enhancement and wrinkles were applied. A survey was conducted on the effectiveness of the improvements. When the effect is good, it is indicated by o, when it is normal, when it is not, when it is not, it is indicated by X. The results are shown in Table 3 below.

배합성분Compounding ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 정제수Purified water To 100To 100 연자육 추출물Lotus root extract 2.02.0 식물성 경화유Vegetable hydrogenated oil 1.51.5 스테아린산Stearic acid 0.60.6 글리세롤 스테아레이트Glycerol stearate 1.01.0 세테아닐 알콜Cetearyl alcohol 2.02.0 폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 & 소디움 스테아로일 락틸에이트Polyglyceryl-10 Pentastearate & Behenyl Alcohol & Sodium Stearoyl Lactylate 1.01.0 아라키딜 베헤닐알콜Arachidyl behenyl alcohol 1.01.0 세틸아릴알콜&세테아릴글루코사이드Cetylaryl alcohol & cetearyl glucoside 2.02.0 PEG-100 스테아레이트&글리세롤올레이트&프로필렌글리콜PEG-100 Stearate & Glycerololate & Propylene Glycol 1.51.5 카프릴릭/카르릭 트리글리세라이드Caprylic / Carlic Triglycerides 11.011.0 사이클로메디콘Cyclomedicon 6.06.0 방부제, 향Preservative, incense 적량Suitable amount 트리에탄올 아민Triethanolamine 0.10.1

생약명Herbal medicine 볼륨감 증진 효과(명)Volume enhancement effect (persons) XX 여로Way 22 22 1616 여정실Journey Room 44 55 1111 연교Abalone 55 44 1111 연자육Lotus root 1515 33 22

상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이 여로, 여정실, 연교을 각각 사용한 경우에는 피부 볼륨감 및 주름 개선 효과가 좋지 않지만, 반면 본 발명의 연자육 추출물을 함유한 조성물을 사용할 경우에는 대부분의 시험 참가자들에 대하여 피부 볼륨감 증진 및 주름 개선 효과가 좋은 것을 확인할 수 있다.As can be seen in Table 3 above, the use of the route, the journey room, and the bridge is not good for improving the skin volume and wrinkles, while using the composition containing the extract of the present invention, most of the test participants It can be seen that skin volume enhancement and wrinkle improvement are good.

상기 실험결과로부터 연자육 추출물을 함유한 조성물을 각각 얼굴 피부에 도포, 피부에 침습 또는 복용하면 상기 추출물의 유효성분이 지방조직의 부피를 증가시키게 되고, 따라서 피부의 볼륨감 및 탄력을 증가시키며 피부 주름을 개선시키는 효과를 얻을 수 있음을 알 수 있다.
From the results of the experiment, when each of the compositions containing the extract of lotus root meat is applied to the face skin, invading or taking the skin, the active ingredient of the extract increases the volume of adipose tissue, thus increasing the volume and elasticity of the skin and reducing the skin wrinkles. It can be seen that the effect of improving can be obtained.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.Examples of formulations for the composition of the present invention are illustrated below.

[제제예 1] 정제Preparation Example 1 Tablet

본 발명에 따른 연자육 중에서 1종의 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
Tablets were prepared by mixing 100 mg of one extract, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate in tablets according to the present invention.

[제제예 2] 캡슐제[Formulation Example 2]

본 발명에 따른 연자육 중에서 1종의 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.In the lotus root according to the present invention, 100 mg of one extract, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate were mixed, followed by filling into a gelatin capsule according to a conventional method for preparing a capsule to prepare a capsule.

Claims (11)

연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 피부 외용제 조성물.Skin external preparation composition for promoting the differentiation of fat cells containing lotus root extract as an active ingredient. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell)가 지방세포로 분화되는 것을 촉진하는 것임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.The composition for external application for skin according to claim 1, wherein the composition promotes differentiation of mesenchymal stem cells into adipocytes. 제 2항에 있어서, 상기 중간엽줄기세포가 인간의 중간엽줄기세포임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물. The composition for external application of skin according to claim 2, wherein the mesenchymal stem cells are human mesenchymal stem cells. 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 지방조직을 증가시키는 것임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.3. The composition for external application for skin according to claim 2, wherein the composition increases fat tissue. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 연자육 추출물 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30중량%의 양으로 함유함을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.The composition for applying the external of the skin according to claim 1, wherein the composition is contained in an amount of 0.0001 to 30% by weight based on the total weight of the lotus root extract composition. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 볼륨을 증가시킴을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.The composition for external application for skin according to claim 1, wherein the composition increases skin volume. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 피부탄력을 증가시킴을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.The external preparation composition for skin according to claim 1, wherein the composition increases skin elasticity. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름을 개선시킴을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.The composition for external application for skin according to claim 1, wherein the composition improves skin wrinkles. 연자육 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방세포 분화 촉진용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for promoting the differentiation of fat cells containing the extract of lotus root as an active ingredient. 제 9항에 있어서, 상기 조성물은 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell)가 지방세포로 분화되는 것을 촉진하는 것임을 특징으로 하는 약학 조성물.10. The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the composition promotes the differentiation of mesenchymal stem cells into adipocytes. 제 9항에 있어서, 상기 조성물은 연자육 추출물의 투여량이 0.001mg/kg/일 내지 2000mg/kg/일임을 특징으로 하는 약학 조성물.
The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the composition has a dose of 0.001 mg / kg / day to 2000 mg / kg / day.
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