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KR20120139310A - Oral composition for preventing or treating caries and periodontal disease - Google Patents

Oral composition for preventing or treating caries and periodontal disease Download PDF

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Publication number
KR20120139310A
KR20120139310A KR1020110059045A KR20110059045A KR20120139310A KR 20120139310 A KR20120139310 A KR 20120139310A KR 1020110059045 A KR1020110059045 A KR 1020110059045A KR 20110059045 A KR20110059045 A KR 20110059045A KR 20120139310 A KR20120139310 A KR 20120139310A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
periodontal disease
fraction
atcc
weight
Prior art date
Application number
KR1020110059045A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
허성오
최동주
김안숙
진대성
Original Assignee
한림대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한림대학교 산학협력단 filed Critical 한림대학교 산학협력단
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Abstract

PURPOSE: An oral composition containing Lonicera japonica thunberg extract is provided to ensure antibacterial and anti-inflammatory effects and to prevent and treat oral diseases and gingival diseases. CONSTITUTION: An oral composition for preventing and treating periodontal diseases contains 0.1-40 wt% of Lonicera japonica Thunberg extract as an active ingredient. The extract is a 70% ethanol extract, a hexane fraction, a dichloromethane(CH2Cl2) fraction, an ethyl acetate(EtOAc) fraction, a butanol fraction(BuOH) fraction, or a water(H_2O) fraction. The extract has an antibacterial effect against Fusobacterium nucleatum(ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis(ATCC 33277), Treponema denticola(ATCC 35405), Tannerella forsythia(ATCC 43037), Aggregatibacter actinomycetemcomitans(ATCC 43718), or Prevotella intermedia(ATCC 25611). [Reference numerals] (AA) Anhuisheng Lonicera japonica Thunberg; (BB,DD,FF) Concentration(μg/ml); (CC) Hubei sheng Lonicera japonica Thunberg; (EE) Dongbei 3 sheng Lonicera japonica Thunberg

Description

치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물{Oral composition for preventing or treating caries and periodontal disease}Oral composition for preventing or treating caries and periodontal disease

본 발명은 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 금은화 추출물을 유효성분으로 포함하여 치주질환에 대한 우수한 항염 및 항균효과를 가지는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an oral composition for preventing and treating periodontal disease, and more particularly, to an oral composition for preventing and treating periodontal disease having an excellent anti-inflammatory and antimicrobial effect on periodontal disease, including the gold silver extract as an active ingredient.

치주질환은 세균에 의해 야기되는 치아지지 조직의 염증상태를 말하며, 치은염 및 치주염으로 분리할 수 있다. 발병원인은 불량한 구강 위생상태로 인한 구강 세균이 치면세균막을 형성하는데 있다. 치면세균막이란 침에 있는 끈끈한 물질을 접착제로 이용하여 세균이 치아 표면에 달라붙은 후 증식한 세균덩어리를 말한다. 치면세균막은 그냥 방치해두면, 염증이 생겨 가끔 잇몸에서 피가 나고, 구취가 나는 경우가 있으며, 이러한 증상을 치은염이라고 한다.Periodontal disease refers to an inflammatory state of tooth support tissue caused by bacteria, and can be separated into gingivitis and periodontitis. The cause is caused by oral bacteria due to poor oral hygiene to form dental plaque. Toothpaste bacterium refers to a mass of bacteria that grows after the bacteria adhere to the tooth surface by using a sticky substance in the saliva as an adhesive. If left untreated, the bacterial membranes are inflamed and sometimes bleed from the gums and cause bad breath. These symptoms are called gingivitis.

치은염이 더 진행되면 치아와 잇몸사이의 벌어진 틈이 더 깊어져서 치주낭이 생기고, 여기에 치주질환을 일으키는 세균들이 번식하여 치주염이 발생된다. 치주염이 진행되면 칫솔질과 같은 약한 자극에도 잇몸에서 피가 나기도 하며 붓고, 종종 급성염증으로 변화되어 통증을 유발한다. 이러한 염증은 골을 만드는 기능은 저하시키고, 골을 흡수하는 작용이 높아져서 치조골이 점점 낮아지게 되어 치조골이 파괴되고 결국 치아를 상실하게 된다.As the gingivitis progresses further, the gap between the teeth and the gums deepens and the periodontal sac develops, and the periodontal disease occurs due to the growth of bacteria causing the periodontal disease. As periodontitis progresses, even weak stimuli such as brushing may bleed and swell the gums, often turning into acute inflammation, causing pain. This inflammation lowers the function of making bones, and the bone absorbing effect is increased, the alveolar bone becomes lower and lower, and the alveolar bone is destroyed and eventually loses teeth.

진행된 치주염은 치아 상실을 일으키는데, 40세 이후의 성인에 있어서 치아를 뽑게 되는 원인 중 치주염이 차지하는 비율이 40%나 된다는 보고가 있을 정도로 치주염으로 인한 치아상실은 심각한 문제이다.Advanced periodontitis causes tooth loss. Tooth loss due to periodontitis is a serious problem in the adult population after 40 years of age, 40% of the causes of tooth extraction are reported.

치주질환에서의 치주인대와 치조골의 파괴는 이들 조직의 주성분인 교원질(collagen)의 분해에 의한 것이다. 정확한 기작은 아직 밝혀져 있지는 않지만, 교원질의 분해는 숙주가 분비하는 콜라게나아제와 치주질환 원인균으로부터 분비된 중성 단백질 분해 효소에 의한 것으로 알려져 있다. 따라서 콜라게나아제 효소 및 단백질 분해 효소의 활성을 억제함으로써 치주질환의 진행을 억제하려는 연구가 시도되고 있다.The destruction of periodontal ligament and alveolar bone in periodontal disease is due to the degradation of collagen, a major component of these tissues. Although the exact mechanism is not yet known, the degradation of collagen is known to be caused by collagenase secreted by the host and neutral protease secreted by the causative agent of periodontal disease. Therefore, studies have been attempted to inhibit the progression of periodontal disease by inhibiting the activity of collagenase enzyme and protease.

치주질환의 치료는 환자의 개선된 구강위생의 확립, 비외과적 혹은 외과적인 치석제거술, 치근활택술, 치은소파술과 신부착을 응용한 치주조직의 재생술들이 이용되어져 왔다. 그러나 이런 외과적인 치료 방법은 치료를 위해 치과를 가야하는 번거로움이 있고, 또한 병의 예방보다는 병이 어느 정도 진행되었을 경우 행하는 치료에 국한되어 치료를 하지 않을 경우 만성으로 진행되는 경우가 대부분이다.The treatment of periodontal disease has been used for the establishment of improved oral hygiene, non-surgical or surgical calculus removal, root graft, gingival sopa and regeneration of periodontal tissue. However, this surgical treatment is cumbersome to go to the dentist for treatment, and most of the time to go to the chronic treatment when the treatment is not limited to the treatment that is performed to some extent rather than prevention of the disease.

부가적인 치료로 전신적인 항생제의 복용과 국소 서방형 제재가 사용되어 왔으나, 불필요한 부위에도 약물이 너무 많이 전달되어 그로 인한 부작용이 있다. 또한, 최근 사용되는 항생제에 대한 내성을 나타내는 치주질환균이 분리된 예가 보고되고 있어 심각한 문제점을 안고 있다.As an additional treatment, systemic antibiotics and topical sustained release formulations have been used, but too much of the drug is delivered to unnecessary areas, resulting in side effects. In addition, recently, an example of isolated periodontal disease bacteria showing resistance to antibiotics has been reported has serious problems.

이러한 외과적 치료의 한계성과 항생제 사용의 문제점을 보완하기 위하여 항세균성, 항치태제재가 함유된 치약, 구강청정제 등의 구강 조성물의 사용은 치아 우식증, 치주질환 등의 세균성 구강질환의 예방 및 치료 보조제로서 효과가 보고되었다.In order to supplement the limitations of the surgical treatment and the use of antibiotics, the use of oral compositions such as antibacterial, toothpaste containing anti-mortar preparations, and mouthwashes is an aid for the prevention and treatment of bacterial oral diseases such as dental caries and periodontal disease. The effect was reported as.

식물 추출물을 대상으로 한 치주질환 치료제에 대한 기술로, 국내등록특허 제138248호에는 식물 추출물을 함유한 구강위생 증진용 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 국내등록특허 제121550호에는 포공영을 함유하는 구강용 조성물에 대하여 개시하고 있다. 또한, 국내등록특허 제313491호에는 항균성 식물추출물을 함유하는 치약 조성물에 관한 것으로, 금초, 마로니에, 포공영, 맹종죽, 오배자, 황금, 측백엽, 은행엽 등을 함유하는 구강위생용 조성물에 대하여 개시하고 있다. 그러나, 상기 특허들에 사용된 원료들은 안전성이 확보되지 않은 것으로 구강위생용 조성물로서의 개발이 어려운 천연물이 대부분이다. 상기 선행기술들과 같이 안전성이 확보되지 않은 원료를 이용한 구강위생용 제품의 개발은 그 원료의 안전성을 입증하기 위한 시간적, 물질적 투자의 비율이 매우 높아 근시일내 제품화가 어렵다는 문제가 있다.As a technology for treating periodontal disease targeting plant extracts, Korean Patent No. 138248 discloses a composition for enhancing oral hygiene containing a plant extract, and Korean Patent No. 121550 uses a pogongyoung for oral use. The composition is disclosed. In addition, Korean Patent No. 313491 relates to a toothpaste composition containing an antimicrobial plant extract, and discloses a composition for oral hygiene containing a vinegar, horse chestnut, pogongyoung, bamboo shoots, gall bladder, gold, white leaf, ginkgo biloba, etc. . However, the raw materials used in the above patents are not secured, and most of them are difficult to develop as a composition for oral hygiene. The development of oral hygiene products using raw materials that are not secured as in the prior arts has a problem that it is difficult to commercialize them in the near future due to the high ratio of time and material investment to prove the safety of the raw materials.

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 치주질환 원인균에 대하여 우수한 항염 및 항균효과를 가지는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In order to solve the problems of the prior art as described above, an object of the present invention is to provide an oral composition for preventing and treating periodontal disease having excellent anti-inflammatory and antimicrobial effect against periodontal disease-causing bacteria.

또한 본 발명은 치주질환뿐 아니라 충치, 구강 질환 및 잇몸 질환에 대한 항염 및 항균효과를 가지는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is another object of the present invention to provide an oral composition for preventing and treating periodontal disease having anti-inflammatory and antimicrobial effects against periodontal disease as well as caries, oral disease and gum disease.

또한 본 발명은 치주질환, 충치, 구강 질환 및 잇몸 질환에 대한 항염 및 항균효과를 가지는 치주질환용 건강식품 조성물, 의약외품 또는 의약품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In another aspect, the present invention is to provide a health food composition, quasi-drugs or pharmaceutical composition for periodontal disease having anti-inflammatory and antimicrobial effect against periodontal disease, caries, oral disease and gum disease.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides an oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that it comprises 0.1 to 40% by weight of the extract of gold gilding as an active ingredient.

보다 바람직하게, 본 발명의 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물은 금은화 추출물을 10~20중량%로 포함하는 것이다.More preferably, the oral composition for preventing and treating periodontal disease of the present invention is to contain the gold and silver extract 10 to 20% by weight.

상기 금은화 추출물은 70% 에탄올(EtOH) 엑기스, 헥산(hexane) 분획물, 디클로로메탄(CH2Cl2) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 또는 물(H2O) 분획물인 것이 바람직하다.The sterling extract is 70% ethanol (EtOH) extract, hexane (hexane) fraction, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) fraction, ethyl acetate (EtOAc) fraction, butanol (BuOH) fraction or water (H 2 O) fraction. desirable.

특히, 상기 금은화 추출물은 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum, ATCC 25586), 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis, ATCC 33277), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola, ATCC 35405), 테네렐라 포르시티아(Tannerella forsythia, ATCC 43037), 에그리가티박터 액티노마이세템코미탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, ATCC 43718) 및 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia, ATCC 25611)의 치주질환 원인균에 대하여 우수한 항염 및 항균효과를 나타낸다.In particular, the gold coin extract is Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Treponema denticola (ATCC 35405), Tenerella Fort Excellent anti-inflammatory and antimicrobial effects against periodontal diseases of Tannerella forsythia ( ATCC 43037), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43718) and Prevotella intermedia (ATCC 25611) Indicates.

상기와 같은 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물은 치약, 구강청정제, 구강세정제, 잇몸 마사지 크림 또는 가식성 필름 등의 제형으로 제조될 수 있다.The oral composition for preventing and treating periodontal disease as described above may be prepared in a formulation such as toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum massage cream or edible film.

또한 본 발명은 금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환용 건강식품 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a health food composition for periodontal disease, characterized in that it comprises 0.1 ~ 40% by weight of the extract of the gold silver flower.

또한 본 발명은 금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환용 의약외품 또는 의약품 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a quasi-drug or pharmaceutical composition for periodontal disease, characterized in that it comprises 0.1 ~ 40% by weight of the extract of gold silver.

본 발명의 구강 조성물은 치주질환 원인균에 대하여 우수한 항염 및 항균효과를 가지는 동시에 충치 예방, 구강 질환 및 잇몸 질환의 예방과 치료에 큰 효과가 있다. 또한, 본 발명의 구강 조성물은 안전성이 입증된 천연추출물을 원료로 하여 인체에 안전하며, 사용에 따른 부작용이 전혀 없다.The oral composition of the present invention has an excellent anti-inflammatory and antimicrobial effect against the causative bacteria of periodontal disease and at the same time has a great effect on the prevention and treatment of caries, oral disease and gum disease. In addition, the oral composition of the present invention is safe to the human body using natural extracts that have proven safety, and there are no side effects of use.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따라 산지별(안위성, 호북성, 동북3성) 금은화로부터 추출한 70% 에탄올 엑기스를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따라 안위성 금은화로부터 분획물을 분리하는 공정 및 분리된 분획물을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따라 호북성 금은화로부터 분획물을 분리하는 공정 및 분리된 분획물을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따라 동북3성 금은화로부터 분획물을 분리하는 공정 및 분리된 분획물을 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따라 치주질환 원인균(푸조박테리움 뉴클레아툼)에 대한 산지별 금은화 추출물의 항균시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따라 치주질환 원인균(포르피로모나스 긴기발리스에)에 대한 산지별 금은화 추출물의 항균시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일실시예에 따라 치주질환 원인균(트레포네마 덴티콜라)에 대한 산지별 금은화 추출물의 항균시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일실시예에 따라 치주질환 원인균(테네넬라 포르시티아)에 대한 산지별 금은화 추출물의 항균시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일실시예에 따라 치은섬유모세포에 대한 본 산지별 금은화 추출물의 70% 에탄올 엑기스(고형분)에 대한 세포독성 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 일실시예에 따라 조골세포에 대한 본 산지별 금은화 추출물의 70% 에탄올 엑기스(고형분)에 대한 세포독성 시험결과를 나타낸 그래프이다.
Figure 1 shows a 70% ethanol extract extracted from the gold (silver seongsui, Hubei, Northeast 3 star) gold and silver coins according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 shows a process for separating the fractions and the separated fractions from the safe gold silver coin according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 shows a process for separating fractions and separated fractions from Hubei gold and silver coins according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 shows a process for separating the fractions from the northeastern three gold and silver coins according to an embodiment of the present invention and the separated fractions.
Figure 5 is a graph showing the antimicrobial test results of the gold-silver extract of each region for periodontal disease-causing bacteria (Pugeotbacterium nucleatum) according to an embodiment of the present invention.
Figure 6 is a graph showing the antimicrobial test results of the extract of the gilding silver for each region against periodontal disease causing bacteria (porphyromonas gingivalis) according to an embodiment of the present invention.
Figure 7 is a graph showing the results of the antibacterial test of the gold-silver extract of each region for periodontal disease-causing bacteria (treponema denticola) according to an embodiment of the present invention.
Figure 8 is a graph showing the antimicrobial test results of the gold silver extract of each region for periodontal disease-causing bacteria (Tenella Forsythia) according to an embodiment of the present invention.
Figure 9 is a graph showing the results of cytotoxicity test for 70% ethanol extract (solid content) of the gold and silver extract of each region for gingival fibroblasts according to one embodiment of the present invention.
Figure 10 is a graph showing the cytotoxicity test results for the 70% ethanol extract (solid content) of the gold and silver extract of each region for osteoblasts according to an embodiment of the present invention.

이하 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자는 치주질환을 유발하는 수종의 혐기성 세균에 대한 직접적인 항균활성을 검정하여 금은화 추출물이 치주질환 원인균에 대한 생육억제능이 있음을 검증하고, 치주질환 전문 치료제로 사용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors verified direct antimicrobial activity against several anaerobic bacteria causing periodontal disease, and verified that gold and silver extracts had growth inhibition ability against the periodontal disease-causing bacteria, and confirmed that the present invention can be used as a treatment for periodontal disease. It was completed.

본 발명의 치주질환 예방 및 치료용 조성물은 금은화 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.The composition for preventing and treating periodontal disease of the present invention is characterized in that it comprises a gold silver extract as an active ingredient.

상기 금은화(Lonicera japonica thunberg)는 인동과의 인동덩굴 또는 그 변종의 꽃봉오리를 말한다. 차갑고 독이 없으며 맛은 달다. 외감성으로 열이 나며 가슴 속이 답답하고 편안치 않은 증상과 갈증이 있을 때 차로 달여서 마신다. 종기와 피부가 헐어 독이 퍼졌을 때 유효하며, 맹장염, 복막염, 자궁내막염, 내부장기염증 등의 염증제거 및 고름을 내보내주는 작용이 있다. 또한, 이질에 농이 섞인 변을 배설할 때도 유효하다.The Lonicera japonica thunberg refers to a bud of a honeysuckle or a variant thereof. Cold and nonpoisonous, sweet taste When you have a fever with an external feeling and you feel stuffy in your chest and have uncomfortable symptoms and thirst, drink it by car. It is effective when the boil and skin are torn and the poison spreads, and it removes inflammation and pus from appendicitis, peritonitis, endometritis and internal organ inflammation. It is also effective when excreting feces mixed with dysentery.

상기 금은화는 열독으로 인한 피부의 조직괴사에도 신속한 효과를 보이고, 초기 유선염에도 치료율이 높다. 열을 내리고 독을 풀며 경맥을 잘 통하게 하며, 강한 항균작용으로 여러 가지 염증성 질환과 감기로 인한 발열, 외과의 부스럼 등에 적용한다. 바이러스 억제 작용이 있으므로 유행성 감기나 악성 유행성 감기, 호흡기 질병, 매독에 효과가 좋고, 고열로 의식 불명이나 수족마비가 일어났을 때도 쓰이며, 인후통, 대장염, 위궤양, 방광염, 인두염, 편도선염, 기관지염, 결막염 및 부스럼, 유행성 이하선염으로 인한 고열, 화농성 감염증 등을 치료한다. 또한, 항균작용이 있어서 황색포도상구균, 용혈성연쇠상구균, 폐렴쌍구균, 백일해균, 이질균, 녹농균, 콜레라균, 대장균의 발육을 억제하고, 항염증에 효능이 있어 염증의 증식을 막으면서 해열작용과 백혈구의 탐식작용을 촉진시킨다. 혈청콜레스테롤을 일정하게 내리고, 실험성 궤양에 가벼운 예방효과를 보인다. The silver coin has a rapid effect on the tissue necrosis of the skin due to heat poisoning, the treatment rate is high even in the early mastitis. It lowers the heat, loosens the poison and makes the meridians pass through. It has strong antibacterial effect, which is applied to various inflammatory diseases, fever due to cold, and surgeon's swelling. It is effective for epidemic or malignant pandemic, respiratory disease, syphilis due to virus suppression effect, and is also used for unconsciousness or hand and hand paralysis due to high fever, sore throat, colitis, gastric ulcer, cystitis, pharyngitis, tonsillitis, bronchitis, conjunctivitis and Treat swelling, high fever caused by mumps, and purulent infections. In addition, it has antibacterial activity, inhibits the growth of Staphylococcus aureus, hemolytic Streptococcus, pneumococcal pneumoniae, pertussis, dysentery, Pseudomonas aeruginosa, cholera and Escherichia coli, and is effective in anti-inflammatory and antipyretic action Promote the phagocytosis of white blood cells. Serum cholesterol is lowered consistently and lightly prevents experimental ulcers.

상기 금은화로는 통상의 것을 사용하거나, 시판되는 것을 구입하여 사용할 수 있음은 물론이며, 본 발명에서는 중국의 안위성, 호북성, 동북3성에서 생산된 것을 사용하였다.As the gold and silver coins, a normal one or a commercially available one can be purchased and used, of course, in the present invention, those produced in Anhui, Hubei, and Northeastern three provinces of China were used.

상기 금은화 추출물은 물, 알코올 등의 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법에 따라 추출할 수 있다. The sterling silver extract can be extracted according to a conventional extraction method such as cold needle, warm needle, heating using a solvent such as water and alcohol.

보다 구체적으로 상기 금은화 추출물은, 먼저 70% 에탄올(EtOH)로 70℃에서 환류(reflux)시켜 3시간씩 5회 추출하여 70% 에탄올 엑기스를 제조한다. 그 다음, 상기 70% 에탄올 엑기스에 증류수를 가하여 현탁시킨 후, 동량의 헥산(hexane)을 가하고 진탕 방치한 후 분획하여 헥산 분획물과 수층을 분리하고, 계속하여 수층에 동량의 디클로로메탄(CH2Cl2), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH)로 순차적으로 가하여 동일한 방법에 따라 분획하여 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물을 분리한 다음, 수층을 농축하여 물(H2O) 분획물을 얻을 수 있다.More specifically, the sterling silver extract is first refluxed at 70 ° C. with 70% ethanol (EtOH) and extracted five times for 3 hours to prepare 70% ethanol extract. Then, suspended by adding distilled water to the 70% ethanol extract, the same amount of hexane (hexane) was added to the mixture, left to shake, and fractionated to separate the hexane fraction and the water layer, and then the same amount of dichloromethane (CH 2 Cl 2 ), ethyl acetate (EtOAc) and butanol (BuOH) were added sequentially and fractionated according to the same method to separate the dichloromethane fraction, ethyl acetate fraction and butanol fraction, and then the aqueous layer was concentrated to give a water (H 2 O) fraction. You can get it.

상기 금은화는 본 발명의 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물에 0.1~40중량%로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 10~20중량%로 포함되는 것이다. 그 함량이 0.1중량% 미만일 경우에는 원하는 만큼의 치주질환 원인균에 대한 항염 및 항균효과를 볼 수 없으며, 40중량%를 초과할 경우에는 사용량에 따른 항염 및 항균효과가 미미하고, 구강용 치료제로 제조가 어려울 수 있다.The gold and silver is preferably contained in 0.1 to 40% by weight, more preferably 10 to 20% by weight in the oral composition for preventing and treating periodontal disease of the present invention. If the content is less than 0.1% by weight can not see the anti-inflammatory and antimicrobial effect on as many periodontal disease-causing bacteria as desired, if more than 40% by weight of the anti-inflammatory and antimicrobial effect according to the amount used is small, prepared as an oral treatment Can be difficult.

구강 내 세균으로는, 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis), 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum), 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia), 프리보텔라 로쉐이(Prevotella loescheii), 트리포네마 덴티콜라(Treponema denticola), 포르피로모나스 엔도돈탈리스(Porphyromonas endodontalis), 펩토코커스 아나에로비우스(Peptococcus anaerobius), 미크로스 프리보티(Micros prevotii), 에우바스테리움 리모숨(Eubasterium limosum), 센티페디아 페리오돈티(Centipedia periodontii), 셀레노모나스 아르테리미디스(Selenomonas arterimidis), 푸조박테리움 페리오돈티쿰(Fusobacterium periodonticum), 에우박테리움 속(Eubacterium spp.), 박테리오데스 속(Bacteroides spp.)을 들 수 있으며, 치주병에 관계하는 세균으로서, 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis), 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum), 액티노바실러스 액티노마이세템코미탄스(Actinobacillus actinomycetemcomitans), 캄피로박터 렉터스(Campylobacter rectus), 테네렐라 포르시티아(Tennerella forsythia), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola), 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia), 액티노마이세스 비스코소스(Actinomyces Viscosos), 스트렙토코커스 뮤턴스(Streptococcus mutans), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus)를 들 수 있다.Oral bacteria include Porphyromonas gingivalis , Fusobacterium nucleatum , Prevotella intermedia , Prevotella loescheii , Triponema denticola ( Treponema denticola ), Porphyromonas endodontalis , Peptococcus anaerobius , Micros prevotii , Eubasterium limosum , Centipedia perio Centipedia periodontii , Selenomonas arterimidis , Fusobacterium periodonticum , Eubacterium spp. , Bacteroides spp. , as the bacteria involved in periodontal disease, fatigue Fort Monastir long lease Bangui (Porphyromonas gingivalis), Peugeot tumefaciens New Lea Tomb (Fusobacterium nucleatum), liquid Martino Bacillus liquid Martino Mai setem Cormier Tansu (Actinobacillus actinomycetemcomitans), Kam fatigue bakteo selector switch (Campylobacter rectus), tene Pasteurella formate when thiazol (Tennerella forsythia), Trail Four nematic denti coke (Treponema denticola) , Prevotella intermedia , Actinomyces Viscosos , Streptococcus mutans , Streptococcus sobrinus .

이들 세균 중, 특히 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis) 및 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum)에 대하여 활성을 나타내는 항균제는 구강 내 세균의 감소에 유효하다고 사료된다.Among these bacteria, antimicrobial agents that are particularly active against Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum are believed to be effective in reducing oral bacteria.

포르피로모나스 긴기발리스는 그람 음성 혐기성 세균으로, 치주병 원인균의 대표적인 것임과 동시에, VSC를 생산하여 구취의 원인균으로 알려져 있다. 포르피로모나스 긴기발리스는 강한 부착능을 가지며, 복수의 균종과 공응집한다(제 1 치과출판 발행, 계간 치과 의료 20(1) 31-39, 2006). 또한, 포르피로모나스 긴기발리스는 콜라게나아제나 긴기펜인 등의 프로테아제나, 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제를 생산하여, 숙주의 면역 응답을 저해한다. 포르피로모나스 긴기발리스가 분비하는 긴기페인이 액티노마이세스 비스코커스의 공응집에 공헌한다는 보고도 있다.Porphyromonas gingivalis is a Gram-negative anaerobic bacterium that is representative of periodontal causative bacteria and is known as a causative agent of bad breath by producing VSC. Porphyromonas gingivalis has strong adhesion and co-aggregates with a plurality of fungal species (published first dental publication, quarterly dental care 20 (1) 31-39, 2006). In addition, porphyromonas gingivalis produces proteases such as collagenase and gingifen, and superoxide dismutase, thereby inhibiting the host's immune response. It is also reported that Ginaffein, which is secreted by Porphyromonas gingivalis, contributes to the coagulation of Actinomyces viscous.

푸조박테리움 뉴클레아툼도 그람 음성 혐기성 세균으로, 치주병의 원인균임과 동시에, VSC를 생산하여 구취의 원인균으로서 알려져 있다. 푸조박테리움 뉴클레아툼은 치주 조직 세균에 독성을 나타내는 지방산을 생산하여, 숙주의 면역 응답을 저해하고, 더 나아가 스피로헤타 등의 증식을 촉진한다.Peugeot bacterium nucleatum is also a Gram-negative anaerobic bacterium and is known to be a causative agent of periodontal disease and to produce VSC and to cause bad breath. Peugeot bacterium nucleatum produces fatty acids that are toxic to periodontal tissue bacteria, inhibits the host's immune response and further promotes the growth of spiroheta and the like.

이상과 같이, 포르피로모나스 긴기발리스 및 푸조박테리움 뉴클레아툼은 숙주의 면역 응답을 저해하여, 그 외의 구강 내 세균의 증식을 조장하고, 프라그의 형성에 공헌한다.As described above, Porphyromonas gingivalis and Peugeot bacterium nucleatum inhibit the host's immune response, promote the growth of other oral bacteria and contribute to the formation of plaque.

본 발명에서는 치주질환 원인균에 대한 금은화 추출물의 항균효과를 검증하기 위하여, 상기와 같이 분리한 금은화의 70% 에탄올(EtOH) 엑기스, 헥산(hexane) 분획물, 디클로로메탄(CH2Cl2) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(H2O) 분획물을 사용하여 치주질환 원인균인 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum, ATCC 25586), 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis, ATCC 33277), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola, ATCC 35405), 테네렐라 포르시티아(Tannerella forsythia, ATCC 43037), 에그리가티박터 액티노마이세템코미탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, ATCC 43718) 및 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia, ATCC 25611)에 대한 생육억제능을 시험하였다.In the present invention, in order to verify the antimicrobial effect of the sterling silver extract on the causative bacteria of periodontal disease, 70% ethanol (EtOH) extract, hexane (hexane) fraction, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) fraction, ethyl of the gold sinter isolated as described above Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis , the cause of periodontal disease, using acetate (EtOAc), butanol (BuOH) and water (H 2 O) fractions ATCC 33277), Treponema denticola (ATCC 35405), Tannerella forsythia ( ATCC 43037), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43718) and Prebotela Growth inhibition against intermedia ( Prevotella intermedia , ATCC 25611) was tested.

상기와 같은 본 발명의 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물은 치은염, 치주염 등 치주질환에 효과가 있으며, 항생물질이 아니면서도 잇몸의 염증을 감소시켜 줄 뿐만 아니라 잇몸을 튼튼하게 하여 세균 감염으로부터 저항할 수 있게 한다.Oral composition for preventing and treating periodontal disease of the present invention as described above is effective in periodontal disease, such as gingivitis, periodontitis, not only reduce the inflammation of the gums but also antibiotics to resist from bacterial infection by strengthening the gums. To be able.

본 발명의 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물은 그 제형에 있어 특별히 한정되지 않고 통상의 제형을 가질 수 있으며, 구체적으로는 치약, 구강세정제, 구강청정제, 잇몸 마사지 크림, 가식성 필름 등의 제형을 가질 수 있다. 본 발명에서 제공하는 구강 조성물은 그 제형에 따라 제제화에 필요한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 예를 들면, 구강 조성물의 제형이 치약류인 경우, 연마제, 습윤제, 기포제, 결합제, 감미제, pH조절제, 방부제, 약효성분, 향료, 증백제, 색소, 용제 등을 첨가하여 제조할 수 있다. The oral composition for preventing and treating periodontal disease of the present invention is not particularly limited in the formulation and may have a conventional formulation, and specifically, formulations such as toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum massage cream, and edible film. Can have The oral composition provided by the present invention may contain various bases and additives necessary for formulation according to the formulation, and the type and amount of these components can be easily selected by those skilled in the art. For example, when the formulation of the oral composition is a toothpaste, it may be prepared by adding an abrasive, a humectant, a foaming agent, a binder, a sweetening agent, a pH adjusting agent, a preservative, an active ingredient, a flavoring agent, a whitening agent, a pigment, a solvent, and the like.

또한 본 발명은 상기와 같은 금은화 추출물을 유효성분으로 포함하는 치주질환 개선을 목적으로 하는 건강식품 조성물, 의약외품 또는 의약품 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a health food composition, quasi-drugs or pharmaceutical compositions for the purpose of improving periodontal disease, including the above-mentioned sterling silver extract as an active ingredient.

본 발명의 금은화 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 금은화 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 금은화 추출물이 원료에 대하여 50 중량부 이하, 바람직하게는 25 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.In the case of using the silver coin extract of the present invention as a food additive, the silver coin extract may be added as it is or used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, in the preparation of food or beverages, the sterling extract of the present invention is added in an amount of 50 parts by weight or less, preferably 25 parts by weight or less based on the raw material. However, in the case of long-term consumption intended for health and hygiene purposes or for health control purposes, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount exceeding the above range .

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초코릿, 캔디류, 젤리류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 검류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of the food. Examples of foods to which the substance may be added include meat, sausages, bread, chocolate, candy, jelly, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, drinks, tea , Drinks, alcoholic beverages, vitamin complexes, etc., and includes all of the health food in the usual sense.

본 발명의 금은화 추출물이 음료로 사용될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.1~20g, 바람직하게는 약 1~10g이다.When the sterling silver extract of the present invention is used as a beverage, it may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general beverages. The above-mentioned natural carbohydrates are sugars such as monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as string and cyclodextrin, xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.1-20 g, preferably about 1-10 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 금은화 추출물이 음료로 사용될 경우 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 금은화 추출물이 음료로 사용될 경우 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 금은화 추출물 함유 음료 100중량부 당 0.05~50중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, when the silver coin extract of the present invention is used as a beverage, various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, Preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like. In addition, when the sterling extract of the present invention is used as a beverage, it may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The ratio of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.05 to 50 parts by weight per 100 parts by weight of the beverage containing the gold coin extract of the present invention.

이하에서는 실시예를 들어 본 발명에 관하여 더욱 상세하게 설명할 것이나. 이들 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것으로 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. These embodiments are for purposes of illustration only and are not intended to limit the scope of protection of the present invention.

실시예 1. 금은화 추출물 제조Example 1 Preparation of Gold Coin Extract

1-1. 70% 에탄올 엑기스 추출1-1. 70% Ethanol Extract

중국 안위성, 호북성, 동북3성에서 구입한 금은화 15g씩을 70% 에탄올(EtOH)로 70℃에서 환류(reflux)시켜 3시간씩 5회 추출하여 70% 에탄올 엑기스를 얻었다. 이렇게 수득한 금은화는 각각 8.3g, 4.7g, 7.6g이었다. 15 g of gold and silver coins purchased from Anhui, Hubei, and Northeast China were refluxed at 70 ° C. with 70% ethanol (EtOH), and extracted three times for 5 hours to obtain 70% ethanol extract. The gold coins thus obtained were 8.3 g, 4.7 g and 7.6 g, respectively.

상기와 같이 수득한 각각의 70% 에탄올 엑기스 중 가장 수득률이 많은 것은 안위성 금은화로, 고형분의 무게가 300㎎이었고, 호북성 금은화와 동북3성의 금은화의 경우 각각 고형분의 무게가 100㎎이었다(도 1).Among the 70% ethanol extracts obtained as described above, the highest yield was the anhydrous gold and silver coins, and the weight of the solids was 300 mg, and the weight of the solids was 100 mg for the Hubei gold and the northeast gold coins respectively (Fig. 1). ).

1-2. 금은화 분획물 분리1-2. Gold and Silver Fraction Separation

중국 안위성, 호북성, 동북3성에서 구입한 금은화 20g씩을 70% 에탄올(EtOH)로 70℃에서 환류(reflux)시켜 3시간씩 5회 추출하여 70% 에탄올 엑기스를 얻었다. 20 g of gold and silver coins purchased from Anhui, Hubei, and Northeast China, were refluxed at 70 ° C. with 70% ethanol (EtOH), and extracted five times for 3 hours to obtain 70% ethanol extract.

이렇게 얻어진 금은화의 70% 에탄올 엑기스에 증류수를 가하여 현탁시켜 200㎖로 맞추었다. 여기에 동량의 헥산(hexane)을 가하고 진탕 방치한 후 분획하여 헥산 분획물과 수층을 분리하고, 상기 수층에 동량의 디클로로메탄(CH2Cl2)을 가하고 진탕 방치한 후 분획하여 디클로로메탄 분획물과 수층을 분리하였다. 또, 상기 분리한 수층에 동량의 에틸아세테이트(EtOAc)를 가하고 진탕 방치한 후 분획하여 에틸아세테이트 분획물과 수층을 분리하였다. 계속해서 상기 수층에 부탄올을 가하고 진탕 방치한 후 분획하여 부탄올 분획물과 수층을 분리한 다음, 상기 수층을 농축하여 물(H2O) 분획물을 얻었다.Distilled water was added to the 70% ethanol extract of the gold and silver coins thus obtained, and it suspended and adjusted to 200 ml. The same amount of hexane (hexane) was added thereto, and the mixture was left to stand for shaking, and then fractionated to separate the hexane fraction and the aqueous layer. The same amount of dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) was added to the aqueous layer, followed by shaking. Was separated. In addition, the same amount of ethyl acetate (EtOAc) was added to the separated aqueous layer, and the mixture was left to shake and fractionated to separate the ethyl acetate fraction and the aqueous layer. Subsequently, butanol was added to the aqueous layer, and the mixture was left to shake. The mixture was separated, the butanol fraction was separated from the aqueous layer, and the aqueous layer was concentrated to obtain a water (H 2 O) fraction.

상기 수득한 산지별(안위성, 호북성, 동북3성) 금은화에 대한 헥산(hexane) 분획물, 디클로로메탄(CH2Cl2) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(H2O) 분획물의 분리공정과 이렇게 수득된 분획물은 도 2 내지 4에 나타내었다.Hexane (hexane) fraction, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) fraction, ethyl acetate (EtOAc) fraction, butanol (BuOH) fraction and water (H) 2 O) The separation process of the fractions and the fractions thus obtained are shown in Figures 2 to 4.

또한, 산지별(안위성, 호북성, 동북3성) 금은화 20g에 대한 분획물의 중량을 측정하여 하기 표 1에 나타내었다.In addition, the weight of the fractions for 20g gold silver coins by each region (anseong, Hubei, Northeast 3 star) was measured and shown in Table 1 below.

하기 표 1의 단위는 g이다.The units in Table 1 are g.

구분division 안위성 금은화Anseong Gold Coin 호북성 금은화Hubei gold and silver coins 동북3성 금은화Northeast 3 Star Gold and Silver Coin 헥산 분획물Hexane fraction 0.0240.024 0.0710.071 0.0320.032 디클로로메탄 분획물Dichloromethane fractions 0.1220.122 0.1480.148 0.1180.118 에틸아세테이트 분획물Ethyl acetate fraction 0.3570.357 0.2950.295 0.3980.398 부탄올 분획물Butanol fraction 4.284.28 3.073.07 3.533.53 물 분획물Water fraction 3.5363.536 1.831.83 3.4523.452 합계Sum 8.3198.319 5.4145.414 7.537.53 recovery rate(%)recovery rate (%) 75.6375.63 87.3287.32 75.3075.30

실시예 2. 항균 시험Example 2. Antibacterial Test

금은화 추출물의 치주질환 예방 및 치료 효과를 측정하기 위하여, 상기 실시예 1에서 수득한 안위성, 호북성, 동북3성 금은화의 70% 에탄올 엑기스, 헥산(hexane) 분획물, 디클로로메탄(CH2Cl2) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(H2O) 분획물을 사용하여 치주질환 원인균에 대한 항균시험을 실시하였다.In order to measure the effect of preventing and treating periodontal disease of the sterling silver extract, 70% ethanol extract, hexane fraction, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) Antibacterial test was performed on the causative bacteria of periodontal disease using fractions, ethyl acetate (EtOAc) fractions, butanol (BuOH) fractions and water (H 2 O) fractions.

치주질환 원인균으로는 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum, ATCC 25586), 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis, ATCC 33277), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola, ATCC 35405), 테네렐라 포르시티아(Tannerella forsythia, ATCC 43037), 에그리가티박터 액티노마이세템코미탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, ATCC 43718) 및 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia, ATCC 25611)를 사용하였다.Periodontal disease causes include Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Treponema denticola (ATCC 35405), and Tenerella forsythia. Tannerella forsythia ( ATCC 43037), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43718) and Prevotella intermedia (ATCC 25611) were used.

에그리가티박터 액티노마이세템코미탄스는 BHI(brain-heart infusion) 액체배지에, 푸조박테리움 뉴클레아툼, 프리보텔라 인터미디어 및 포르피로모나스 긴기발리스는 BHI에 헤민(hemin)과 비타민 K(vitamin K)를 포함한 액체배지에, 트레포네마 덴티콜라는 TYGVS와 BHI를 1:1의 비율로 혼합한 배지에, 테네넬라 포르시티아는 modified NOS(New Oral Spirochete) media를 이용한 배지에 각각 2×106 cells/㎖의 농도로 희석하고 150㎕로 접종하여, 37℃에서 24~48시간 동안 전배양하였다. Eggrigatibacter actinomycetemcomitans is in a brain-heart infusion (BHI) liquid medium, while Peugeot bacterium nucleatum, pribotella intermedia, and porphyromonas gingivalis are BHI in hemin and vitamin K. In liquid medium containing (vitamin K), Treponema Denticola was mixed with TYGVS and BHI in a 1: 1 ratio, and Tenenella Porcitia was added to media using modified NOS (New Oral Spirochete) media. Diluted to a concentration of × 10 6 cells / ㎖ and inoculated with 150 μl, pre-incubated at 37 ℃ for 24 to 48 hours.

먼저, 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 무수알코올로 용해시키고, 나머지 70% 에탄올 엑기스, 부탄올 분획물 및 물 분획물은 증류수에 용해시킨 후, 0.2㎛ 필터로 여과 멸균하여 시료를 제조하였다.First, the hexane fraction, dichloromethane fraction and ethyl acetate fraction were dissolved in anhydrous alcohol, the remaining 70% ethanol extract, butanol fraction and water fraction was dissolved in distilled water, and then filtered and sterilized with a 0.2㎛ filter to prepare a sample.

각각의 시료를 microtitre plate에 계단희석(serial dilution)을 이용하여 희석한 후, 각각의 시료에 상기 전배양한 치주질환 원인균들을 최종 부피가 150㎕가 되도록 접종하였다. 이들을 혐기조건 하 37℃에서 24~48시간 동안 정치배양한 후, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)로 650nm에서 흡광도를 측정하여 치주질환 원인균에 대한 생육억제능을 시험하였다. 각 치주질환 원인균에 대한 산지별 금은화 추출물의 항균시험 결과를 도 5 내지 8에 나타내었다.Each sample was diluted using serial dilution on a microtitre plate, and each sample was inoculated with a final volume of 150 μl of the pre-cultured periodontal causative bacteria. These were incubated at 37 ° C. for 24 to 48 hours under anaerobic conditions, and then absorbed at 650 nm with an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) to test their growth inhibition ability against the causative agent of periodontal disease. 5 to 8 shows the results of the antibacterial test of the gold and silver extract of each region for each periodontal disease-causing bacterium.

도 5 내지 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 금은화 엑기스 및 각각의 분획물은 치주질환 원인균인 푸조박테리움 뉴클레아툼(도 5), 포르피로모나스 긴기발리스에(도 6), 트레포네마 덴티콜라(도 7) 및 테네넬라 포르시티아(도 8)에 대하여 매우 우수한 항균활성을 나타냄을 확인할 수 있었다. As shown in Figures 5 to 8, the gold and silver extract of the present invention and each fraction is the cause of periodontal disease, Peugeot bacterium nucleatum (Fig. 5), Porphyromonas gingivalis (Fig. 6), treponema denti It was confirmed that the antimicrobial activity was very excellent against coke (FIG. 7) and Tennessella porcitia (FIG. 8).

이같은 결과를 통하여, 본 발명의 구강 조성물에 함유되는 금은화 추출물은 치주질환 원인균의 생육을 억제하여 치주질환의 예방 및 치료에 효과가 있을 것임을 예측할 수 있었다.Through these results, it was predicted that the sterling silver extract contained in the oral composition of the present invention would be effective in preventing and treating periodontal disease by inhibiting growth of periodontal disease causing bacteria.

실시예 3. 세포독성 시험Example 3. Cytotoxicity Test

금은화 추출물의 세포독성을 시험하기 위하여, 치은섬유모세포 및 조골세포를 다음과 같은 조건으로 배양한 후 시험에 사용하였다. To test the cytotoxicity of the sterling silver extract, gingival fibroblasts and osteoblasts were cultured under the following conditions and used for the test.

치은섬유모세포(gingival fibroblast cell line)로는 초대배양된 인간 GF 세포를 10% FBS(PAA Laboratories, Etobicoke, ON, Canada), 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 DMEM high glucose 배지(PAA Laboratories, Linz, Austria)에서 80% confluence에 도달할 때까지 37℃, 5% 이산화탄소, 99% 습도 조건에서 배양하였다. 배지는 3일마다 바꿔주었다. 조골세포(Osteoblast like cell line)로는 MG63(ATCC, Manassas, VA, USA)을 상기 치은섬유모세포와 동일한 DMEM 배지에서 배양하였다. Gingival fibroblast cell lines were used to treat supercultured human GF cells with 10% FBS (PAA Laboratories, Etobicoke, ON, Canada), DMEM high glucose medium supplemented with 1% penicillin / streptomycin (PAA Laboratories, Linz, Incubated at 37 ° C., 5% carbon dioxide, and 99% humidity until 80% confluence was reached. The medium was changed every three days. As osteoblast like cell line, MG63 (ATCC, Manassas, VA, USA) was cultured in the same DMEM medium as the gingival fibroblasts.

먼저, 상기 실시예 1에서 수득한 안위성, 호북성, 동북3성 금은화의 70% 에탄올 엑기스(고형분)를 DMSO로 녹이고, 0.2㎛ 셀룰로오즈 필터를 이용하여 여과멸균하였다.First, 70% ethanol extract (solid content) of anisotropic, Hubei, and northeastern gold and silver coins obtained in Example 1 was dissolved in DMSO, and filtered and sterilized using a 0.2 μm cellulose filter.

상기 준비한 치은섬유모세포 및 조골세포를 각각 웰당 3×103개가 되도록 96웰에 분주하여 배양하였다. 24시간 배양한 후 free media로 바꿔주었다. 그 다음, 상기 안위성, 호북성, 동북3성 금은화의 70% 에탄올 엑기스를 웰당 1, 5, 10, 50, 100㎍/㎖의 농도로 넣은 후 혐기조건 하 37℃에서 24~72시간 동안 배양한 후, MTT assay(540㎚)를 통하여 얻어진 실험시간에 따른 세포주 생존결과(생존한 세포수)를 도 9 및 10에 나타내었다. 실험결과는 반복실험에 의한 평균값이다.The prepared gingival fibroblasts and osteoblasts were cultured in 96 wells so that 3 × 10 3 cells per well were obtained. After 24 hours of incubation was changed to free media. Then, 70% ethanol extracts of the anisotropic, Hubei, and northeastern three silver coins were added at a concentration of 1, 5, 10, 50, 100 ㎍ / ml per well, and then incubated at 37 ° C. for 24 to 72 hours under anaerobic conditions. Thereafter, cell line survival results (survival cell numbers) according to the experimental time obtained through the MTT assay (540 nm) are shown in FIGS. 9 and 10. The experimental result is an average value from repeated experiments.

도 9 및 10에 나타낸 바와 같이, 치은섬유모세포에 안위성, 호북성, 동북3성의 금은화 70% 에탄올 엑기스를 처리한 경우 금은화 추출물을 처리하지 않은 대조구와 비교하여 시간이 경과함에 따라 세포 생존수가 현저하게 나타났으며, 이같은 결과를 통하여 본 발명의 구강 조성물에 함유되는 금은화 추출물은 치은섬유모세포(도 9) 및 조골세포(도 10)에 대한 세포독성이 없이 우수함을 알 수 있었다.As shown in Figures 9 and 10, when the gingival fibroblasts were treated with 70% ethanol extracts of ophthalmic, Hubei, and northeastern three, the survival rate of the cells was remarkably increased over time compared to the control without the treatment of the sterling silver extract. It was found from these results that the gilding extract contained in the oral composition of the present invention is excellent without cytotoxicity to gingival fibroblasts (FIG. 9) and osteoblasts (FIG. 10).

제조예 1. 치약 제조Preparation Example 1 Toothpaste

탄산칼슘 48.0중량%, 글리세린 20.0중량%, 카르복시메틸셀룰로오스 2.0중량%, 라우릴황산나트륨 2.0중량%, 향료 1.0중량%, 사카린 0.1중량%, 상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 3.0중량%, 클로로헥시딘 0.01중량% 및 잔량의 물을 혼합하여 통상의 치약 제조방법에 따라서 치주질환 예방 및 치료 효과를 지니는 치약을 제조하였다.48.0 wt% calcium carbonate, 20.0 wt% glycerin, 2.0 wt% carboxymethylcellulose, 2.0 wt% sodium lauryl sulfate, 1.0 wt% fragrance, 0.1 wt% saccharin, 3.0 wt% anhydrous gold silver 70% ethanol extract of Example 1 , 0.01% by weight of chlorohexidine and the residual amount of water were mixed to prepare a toothpaste having the effect of preventing and treating periodontal disease according to a conventional toothpaste manufacturing method.

제조예 2. 구강청정제(가글) 제조Preparation Example 2 Preparation of Mouth Cleaning Agent (Gagle)

상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.1중량%, 글리세린 35.5 중량%, 폴리아크릴레이트 나트륨 5.0중량%, 소디움라우릴 설페이트 1.0중량%, 사카린 나트륨 0.1중량%, 에탄올 5.0중량%, 착향 1.3중량% 및 잔량의 물을 혼합하여 통상의 구강청정제 제조방법에 따라 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 구강청정제(가글)를 제조하였다.0.1% by weight of safety gold silver ethanol extract of Example 1, glycerin 35.5% by weight, polyacrylate sodium 5.0% by weight, sodium lauryl sulfate 1.0% by weight, saccharin sodium 0.1% by weight, ethanol 5.0% by weight, flavor 1.3 By mixing the weight percent and the residual amount of water to prepare a mouthwash (gagle) having the effect of preventing and treating periodontal disease according to a conventional mouthwash preparation method.

제조예 3. 구강 스프레이 제조Preparation Example 3 Preparation of Oral Spray

상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.1중량%, 글리세린 35.5 중량%, 폴리아크릴레이트 나트륨 5.0중량%, 소디움라우릴 설페이트 1.0중량%, 사카린 나트륨 0.1중량%, 에탄올 5.0중량%, 착향 1.3중량% 및 잔량의 물을 혼합하여 통상의 구강 스프레이 제조방법에 따라 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 구강 스프레이를 제조하였다.0.1% by weight of safety gold silver ethanol extract of Example 1, glycerin 35.5% by weight, polyacrylate sodium 5.0% by weight, sodium lauryl sulfate 1.0% by weight, saccharin sodium 0.1% by weight, ethanol 5.0% by weight, flavor 1.3 By mixing the weight percent and the residual amount of water to prepare an oral spray having a periodontal disease prevention and treatment according to the conventional oral spray manufacturing method.

제조예 4. 츄잉검 제조Preparation Example 4 Chewing Gum Preparation

검 베이스 20.0중량%, 설탕 54.7중량%, 글루코오스 15.0중량%, 물엿 9.3중량%, 향료 0.5중량%, 및 상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.5중량%를 혼합하여 통상의 츄잉검 제조방법에 따라 츄잉검의 성질을 잃지 않고 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 츄잉검을 제조하였다.Preparation of chewing gum by mixing 20.0% by weight of gum base, 54.7% by weight of sugar, 15.0% by weight of glucose, 9.3% by weight of starch syrup, 0.5% by weight of fragrance, and 0.5% by weight of safety gold and silver coin 70% ethanol extract of Example 1 According to the method was prepared chewing gum that has the effect of preventing and treating periodontal disease without losing the properties of chewing gum.

제조예 5. 캔디 제조Preparation Example 5 Candy Preparation

설탕 49.6중량%, 물엿 33.0중량%, 구연산 1.0중량%, 향료 0.2중량%, L-멘톨 1.0중량%, 상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.8중량% 및 물 14.4중량%를 혼합하여 통상의 캔디 제조방법에 따라 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 츄잉검을 제조하였다.Sugar 49.6% by weight, starch syrup 33.0% by weight, citric acid 1.0% by weight, flavor 0.2% by weight, L- menthol 1.0% by weight, 0.8% by weight of anhydrous gold and silver ethanol extract of Example 1 and 14.4% by weight of water Chewing gum having an effect of preventing and treating periodontal disease was prepared according to a conventional candy manufacturing method.

제조예 6. 쵸콜릿 제조Preparation Example 6 Chocolate Preparation

카카오버터 20.0중량%, 전지분유 20.0중량%, 카카오버터 17.0중량%, 분당 41.75중량%, 레시틴 0.45중량%, 향료 0.2중량% 및 상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.6중량%를 혼합하여 통상의 초콜릿 제조방법에 따라 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 초콜릿을 제조하였다.Cacao butter 20.0% by weight, whole milk powder 20.0% by weight, cacao butter 17.0% by weight, 41.75% by weight, lecithin 0.45% by weight, fragrance 0.2% by weight and 0.6% by weight of anhydrous gold and silver ethanol extract of Example 1 To prepare a chocolate having a periodontal disease prevention and treatment according to the conventional chocolate production method.

제조예 7. 음료 제조Preparation Example 7 Beverage Preparation

오렌지 과즙 30.0중량%, 이성화당 15.33중량%, 구연산 0.1중량%, 비타민C 0.04중량%, 향료 0.1중량%, 상기 실시예 1의 안위성 금은화 70% 에탄올 엑기스 0.01중량% 및 물 54.42중량%를 혼합하여 통상의 음료 제조방법에 따라 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 음료를 제조하였다.Orange juice 30.0% by weight, isomerized sugar 15.33% by weight, citric acid 0.1% by weight, vitamin C 0.04% by weight, fragrance 0.1% by weight, 0.01% by weight of anhydrous gold and silver ethanol extract of Example 1 and 54.42% by weight of water To prepare a beverage having the effect of preventing and treating periodontal disease according to the conventional beverage production method.

제조예 8. 가식성 필름 제조Preparation Example 8 Preparation of Edible Film

통상의 가식성 필름에 금은화 추출물 10~20중량%를 함유하도록 하여 치주질환 예방 및 치료 효과가 있는 가식성 필름을 제조하였다.To prepare a edible film having the effect of preventing and treating periodontal disease by containing 10 to 20% by weight of the gold gilde extract in a conventional edible film.

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한 첨부된 청구 범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.Although the present invention has been described as the preferred embodiment mentioned above, it is possible to make various modifications or variations without departing from the spirit and scope of the invention. The appended claims also cover such modifications and variations as fall within the spirit of the invention.

Claims (7)

금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물.Oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that it comprises 0.1 to 40% by weight of the gold silver extract as an active ingredient. 제1항에 있어서,
상기 금은화 추출물은 구강 조성물에 10-20중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물.
The method of claim 1,
The silver coin extract oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that it comprises 10-20% by weight in the oral composition.
제1항에 있어서,
상기 금은화 추출물은 70% 에탄올(EtOH) 엑기스, 헥산(hexane) 분획물, 디클로로메탄(CH2Cl2) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, 부탄올(BuOH) 분획물 및 물(H2O) 분획물 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물.
The method of claim 1,
The sterling extract is any one of 70% ethanol (EtOH) extract, hexane (hexane) fraction, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ) fraction, ethyl acetate (EtOAc) fraction, butanol (BuOH) fraction and water (H 2 O) fraction Oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that one.
제1항에 있어서,
상기 금은화 추출물은 푸조박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum, ATCC 25586), 포르피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis, ATCC 33277), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola, ATCC 35405), 테네렐라 포르시티아(Tannerella forsythia, ATCC 43037), 에그리가티박터 액티노마이세템코미탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, ATCC 43718) 및 프리보텔라 인터미디어(Prevotella intermedia, ATCC 25611) 중 어느 하나의 치주질환 원인균에 대한 항균작용을 가지는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물.
The method of claim 1,
The silver coin extract is Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Treponema denticola (ATCC 35405), Tenerella porcitia ( Tannerella forsythia, ATCC 43037), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43718) and Prevotella intermedia (ATCC 25611) have antibacterial activity against the causative agent of periodontal disease Oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that.
제1항에 있어서,
상기 조성물의 제형이 치약, 구강청정제, 구강세정제, 잇몸 마사지 크림 또는 가식성 필름인 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 구강 조성물.
The method of claim 1,
Oral composition for preventing and treating periodontal disease, characterized in that the formulation of the composition is a toothpaste, mouthwash, mouthwash, gum massage cream or edible film.
금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환용 건강기능식품 조성물.Gold functional flower composition for periodontal disease, characterized in that containing 0.1 ~ 40% by weight as an active ingredient. 금은화 추출물 0.1~40중량%를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환용 의약외품 또는 의약품 조성물.Quasi silver extract or quasi-drugs or pharmaceutical compositions for periodontal disease, characterized in that it comprises 0.1 to 40% by weight as an active ingredient.
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KR20190094988A (en) * 2018-02-06 2019-08-14 주식회사 엘지생활건강 Composition for prevention or treatment of oral disease comprising Sunflower oil

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