KR20110100396A

KR20110100396A - 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품

Info

Publication number: KR20110100396A
Application number: KR1020100019350A
Authority: KR
Inventors: 이명기; 김병목; 이영철; 양혜정; 김수경
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2010-03-04
Filing date: 2010-03-04
Publication date: 2011-09-14
Also published as: KR101145426B1

Abstract

본 발명은 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 관한 것으로, 본 발명의 혈류 개선용 조성물은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함한다.
본 발명의 조성물은 콜레스테롤 합성 저해 능력 및 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류를 개선시킨다.

Description

혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품 {Composition for improving blood flow, the preparation method thereof and health functional foods comprising thereof}

본 발명은 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 대한 것으로, 구체적으로 콜레스테롤의 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 능력이 향상된 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 대한 것이다.

최근 들어 혈행 장애로 발생하는 심혈관계 질환은 미국, 유럽, 아시아 등 전 세계적으로 주요한 사망 원인이 되고 있다. 우리나라에서도 심혈관계 질환이 사망원인의 1위를 차지하고 있는데 이는 서구화된 식생활에 따라 동물성 식품의 섭취빈도가 높아져 성인의 경우 혈중 총 콜레스테롤이나 중성지질의 수준이 높아지는 경향때문인 것으로 보인다. 이러한 지질성분의 증가는 혈액의 점성을 증가시키거나 혈류의 흐름을 방해함으로써 뇌졸중을 포함한 심혈관성 질환의 원인이 되는 것으로 알려져 있다.

혈류 관련 기관을 보면, 혈장은 혈액응고와 관련된 coagulation factors로 구성되어 있고, 혈소판, 적혈구, 면역세포 등의 혈액세포들과 다양한 상호 작용을 주고받으며 각 세포 작용의 평형상태를 유지하고 있다. 혈소판은 혈관이 손상되면 활성화되어 손상 부위에 응집됨으로써 지혈 작용을 담당하는 세포이다. 지혈 작용은 손상된 부위로부터의 혈액의 손실을 최소화하고 혈액의 정상적인 순환을 유지하기 위한 방어기전이라 할 수 있다. 정상 혈관에서는 지혈 기전의 활성화 반응과 함께 억제 반응이나 혈괴 분해 반응들이 균형을 이룸으로써 항상성을 유지하고 있다. 그러나 과도한 지혈 작용 및 혈괴의 생성은 혈액의 흐름을 방해하며 혈행 이상을 초래하여 혈전(thrombus)과 같은 병변을 유발한다. 혈전이 생성되면 정맥에서는 혈액순환장애가 야기되어 부종이나 염증 등이 발생하고 동맥에서는 허혈이나 경색을 유발하여 심근경색증, 뇌졸중, 폐동맥 경색증 등의 질환을 초래하게 된다. 이와 더불어 혈소판 활성화시 여러 가지 혈관조절 인자들(serotonin, TXA2, PAF 등)이 유리되어 혈관을 수축시킬 수 있다. 혈관이 수축되면 혈류의 흐름을 막아 혈류 속도가 변화되어 혈소판 활성화가 증폭되며 혈관내피손상이 진행되어 심혈관의 정상적인 기능이 저해된다. 이러한 혈행 이상이 동맥경화, 심근경색, 심허혈질환 및 뇌혈관질환과 같은 혈관계질환 발병의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. (Marcus et al., 1993; Packham et al., 1994; Harker et al., 1994).

혈류개선 관련 의약품들은 국내외로 판매되고 있지만 혈액순환제제의 경우 기능성소재의 단순복합제 형태이며, 일부 기능성 식품들은 약물중독 및 부작용에 의한 문제점이 있다.

상기의 문제점을 해결하고자 본 발명의 목적은 콜레스테롤의 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 능력이 향상된 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하고자 본 발명은,

산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 혈류 개선용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 분자량 50,000 dalton이하의 분획물을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 분자량 30,000 내지 50,000 dalton의 분획물을 포함할 수 있다.

상기 분획물은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물을 유기용매로 추출한 후 분리한 것일 수 있다.

상기 분획물은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물의 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것일 수 있다.

상기 젖산균은 Lactobacillus acidophilus 일 수 있다.

상기 유기용매는 에탄올일 수 있다.

본 발명의 다른 목적을 달성하고자 본 발명은,

산약에 젖산균을 접종하여 발효시키는 발효 단계; 및

상기 발효물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 분획 단계를 포함하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다.

상기 혈류 개선용 조성물의 제조 방법은 상기 발효 단계에 의해 얻어진 발효물을 유기용매로 추출하는 유기용매 추출 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은,

상기 혈류 개선용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 콜레스테롤 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 효과가 향상된다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 천연유래의 물질에서 분리한 것으로 인체에 무해하며 장기간 사용하여도 부작용이 없다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 동맥경화 또는 뇌졸중 등의 성인병의 예방에도 효과가 있다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 각종 건강기능식품으로도 제조 가능하여 간편하게 섭취할 수 있다.

도 1 은 산약을 젖산균으로 발효시킨 산약 발효물을 분자량별로 분리하는 과정을 도식화한 것이다.
도 2 는 담즙산의 표준검량곡선을 나타낸 것이다.

이하, 당업자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 혈류 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 산약 발효물중에서 혈류 개선에 가장 우수한 효과를 보이는 분획물을 분리하여 포함하므로 소량으로도 혈류 개선 효과를 나타낼 수 있으며, 천연 유래의 물질로 인체에 무해하고 장기간 사용하여도 부작용이 없다.

상기 산약은 Dioscorea batatas 또는 Dioscorea japonica의 주피를 제거한 담근체를 그대로 또는 쪄서 말린 약재로서, 주로 점질성 다당류인 mannan과 이외 단백질, 무기질 및 steroid성 saponin 및 phenanthrene 유도체 등으로 구성되어 있으며 항산화, 항염, 항암, 고혈당, 비만, 면역조절 등에 효과가 있다.

상기 발효물은 산약을 젖산균으로 발효시켜 얻을 수 있으며, 바람직하게는, 발효가 용이하도록 산약과 물을 혼합한 산약 현탁액에 젖산균을 접종한 뒤 발효시켜 얻을 수 있다. 상기 산약은 건조하여 분쇄한 분말 형태를 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 현탁액은 산약과 물을 1:5 내지 1:10의 중량비로 혼합한 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1:9의 중량비로 혼합한 것을 사용할 수 있다. 상기 중량비로 산약과 물을 혼합하는 것이 물의 첨가로 인한 산약의 현탁능 및 현탁액의 유동성이 우수하고 음용시 기호도가 높다.

상기 젖산균은 김치의 발효에 관여하여 김치의 특유의 감칠맛과 탄산미를 부여하고 여러 유기산을 생성하는 것으로, 장내에서 콜레스테롤을 흡착 및 분해하는 기능이 있어 혈중 콜레스테롤 함량을 저하시킬 수 있으며, 정장 작용, 동맥경화 예방, 혈전 용해 등의 기능이 있다. 상기 젖산균은 당업계에 공지된 것을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus amylophilus, Lactobacillus casei , Lactobacillus fermentum 또는 Lactobacillus pentosus 를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는, Lactobacillus acidophilus 를 사용할 수 있다. 상기 Lactobacillus acidophilus는 담즙산(bile acid)에 대한 저항성이 높으며, 낮은 pH에서도 장관 상피세포에 흡착하여 소화기관 내에서 생존력이 우수하여 건장증진 효과가 우수할 뿐만 아니라, Lactobacillus acidophilus로 산약을 발효시킨 발효물은 산약 자체보다 건강 증진 효과가 더욱 우수하며 젖산균에 의한 probiotics 기능성이 우수하다.

상기 젖산균은 균수가 1.0×10⁵ 내지 1.0×10⁹cfu/㎖ 되도록 배양하여 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 1.0×10⁷cfu/㎖ 되도록 배양하여 사용할 수 있다. 상기 젖산균의 수가 1.0×10⁵ cfu/㎖ 미만인 경우 발효 속도가 느릴 수 있으며, 1.0×10⁹cfu/㎖을 초과하면 발효속도가 지나치게 빨라 부산물의 생성으로 이취를 발생시킬 수 있다.

상기 젖산균은 산약 또는 산약 현탁액에 대하여 0.5 내지 2 중량부로 접종될 수 있다. 0.5 중량부 미만으로 접종하는 경우 발효 속도가 느리고, 발효가 진행되지 않을 수 있으며, 2 중량부를 초과하여 접종하는 경우 과다한 접종으로 발효가 과다하게 진행되어 부산물로 유기산이 과하게 생성되고 이취가 발생할 수 있다.

상기 발효는 35 내지 40 ℃에서 3 내지 7 일간 진행될 수 있다. 젖산균에 의하여 산약은 젖산발효되고, 젖산발효를 통해 콜레스테롤 합성을 저해하고 담즙산과 결합하여 혈류 개선 효과가 있는 물질이 생성된다. 발효가 35 내지 40 ℃에서 3 내지 7 일간 진행될 때 적정한 발효가 진행되어 혈류 개선 효과가 상승되게 되며, 상기 범위를 벗어나는 경우 발효가 제대로 진행되지 않아 혈류 개선 효과가 미미하거나 발효가 지나치게 되어 생성물이 분해될 수 있다.

상기 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물은 발효물을 원심분리하여 얻어진 상등액을 사용할 수 있다. 상기 발효물을 원심분리하면 상등액과 침전물로 분리되며 이 때, 상등액에 유효 성분이 다량 용해되어 있어 상등액이 침전물보다 콜레스테롤 합성 저해 활성 및 담즙산 결합 능력 등이 우수하여 혈류 개선효과가 상승된다.

상기 분획물은 상기 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물로부터 분리한 분자량 100,000 dalton이하의 분획물일 수 있으며, 바람직하게는 분자량 50,000 dalton이하의 분획물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 분자량 30,000 내지 50,000 dalton의 분획물일 수 있다. 상기 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물중 특정 분자량 범위의 분획물을 분리하는 경우 콜레스테롤의 합성 저해 능력과 담즙산 결합 능력이 더욱 향상되어 혈류 개선 효과가 상승된다.

상기 발효물을 분자량별로 분획하는 방법은 당업계에 공지된 방법을 제한없이 사용할 수 있으나, 바람직하게는 한외여과를 이용하여 분자량별로 분리할 수 있다. 도 1 은 산약을 젖산균으로 발효시킨 산약 발효물을 분자량별로 분리하는 모습을 도식화한 것이다. 도 1 과 같이 분자량별로 분리하여 산약 발효물중 혈류 개선의 유효 성분을 수득할 수 있다.

상기 분획물은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물을 유기용매로 추출한 유기용매 추출물을 분자량에 따라 분리한 것일 수 있다. 상기 유기용매는 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, n-부탄올 및 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 에탄올은 인체에 무해하여 식품에의 적용이 용이하고, 상기 발효물의 에탄올 추출물은 HMG-CoA(3-hydroxy-3-methlglutaryl-CoA) reductase 저해 활성이 우수하여 콜레스테롤 합성을 저해하므로 혈류를 개선시킨다. HMG-CoA reductase는 인체에서 콜레스테롤을 합성할 때 필요한 효소 중 하나로 콜레스테롤 합성의 초기단계를 담당한다. Acetyl CoA가 HMG-CoA synthase에 의하여 HMG-CoA로 전환되며 전환된 HMG-CoA는 HMG CoA reductase에 의하여 최종 콜레스테롤로 합성되므로 HMG-CoA reductase를 저해하면 콜레스테롤 합성도 저해되게 된다. 상기 추출 과정에서 유기용매는 상기 발효물과 4:6 내지 6:4의 중량비로 사용될 수 있다. 상기 유기용매가 상기 비율보다 적은 함량으로 사용되는 경우 추출이 제대로 일어나지 않을 수 있으며, 상기보다 높은 비율로 사용되는 경우 효과의 증가 폭이 크지 않고 오히려 제조공정이 효율적이지 못할 수 있다.

상기 분획물은 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물의 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것일 수 있다. 상기 발효물을 유기용매로 추출한 후 원심분리하면 상등액과 침전물로 분리되며 이 때, 상등액에 유효 성분이 다량 용해되어 있어 상등액이 침전물보다 콜레스테롤 합성 저해 활성 및 담즙산 결합 능력 등이 우수하여 혈류 개선효과가 상승된다.

본 발명은 또한, 발효 단계; 및 분획 단계를 포함하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다. 또한, 유기용매 추출 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 방법에 의해 산약을 발효시켜 혈류 개선 효과를 증진시키는 발효 생성물을 얻을 수 있을 뿐 아니라, 산약 발효물 중 주된 유효성분을 분자량에 따라 분리함으로 혈류 개선 효과를 보다 상승시킬 수 있는 조성물을 얻을 수 있다.

상기 발효 단계는 산약에 젖산균을 접종하여 발효시키는 단계이다.

구체적으로, 산약과 물을 혼합한 산약 현탁액에 젖산균을 접종한 뒤, 35 ℃ 내지 40 ℃에 3 내지 7 일간 보관하여 발효시킬 수 있다. 상기 젖산균은 1.0×10⁵ 내지 1.0×10⁹cfu/㎖ 되도록 30 내지 37 ℃ MRS 배지에서 배양할 수 있으며, 배양한 broth를 원심분리하여 상등액을 버린후 멸균한 saline으로 희석하여 상기 산약 현탁액에 접종할 수 있다. 이 때 사용하는 젖산균은 상술한 바와 같다. 이와 같이 발효시켜 산약의 발효물을 얻을 수 있으며, 발효물 자체를 사용하거나 또는 상기 발효물을 5000 내지 10000 rpm 으로 20 분 내지 30 분간 수 회 원심분리하여 그 상등액을 취하여 사용할 수 있다.

상기 유기용매 추출 단계는 상기 발효로 형성된 발효물에 유기용매를 가하여 추출하는 단계이다. 상기 발효물 또는 상기 발효물의 상등액을 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, n-부탄올 또는 에탄올 등의 유기용매, 바람직하게는 에탄올로 추출하여 유기용매 추출물을 얻을 수 있으며, 유기용매 추출물의 상등액 및 침전물 모두 혈류 개선 효과가 상승되나 상등액이 침전물에 비해 혈류 개선 효과가 더 우수하다.

상기 분획 단계는 상기 발효물 또는 발효물의 유기용매 추출물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 단계이다. 산약을 발효시켜 얻은 발효물 또는 발효물의 유기용매 추출물을 한외여과막을 이용하여 300,000 dalton이상, 300,000 dalton이하, 100,000~300,000 dalton, 100,000 dalton이하, 50,000~100,000 dalton, 50,000 dalton이하, 30,000~50,000 dalton, 30,000 dalton이하, 10,000~30,000 dalton, 10,000 dalton이하의 크기로 순차적으로 여과하여 분자량에 따른 분획물을 얻을 수 있다. 또한, 상기 분획 단계에서 상기 발효물 또는 유기용매 추출물의 상등액을 사용하여 분자량별 분획물을 얻을 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 혈류 개선용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 상기 건강기능식품은 콜레스테롤 합성을 저해하고 담즙산과 결합하는 능력이 우수하여 혈중 콜레스테롤 농도가 저하되므로 혈류가 개선된다.

상기 혈류 개선용 조성물은 각종 음식, 음료, 곡류, 껌, 차, 비타민 복합제 및 엑기스 등과 같은 기호성 식품이나 건강 보조 식품류등에 첨가되어 통상적으로 알려진 방법에 따라 각종 식품을 제조할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸등의 형태로 제형화하여 사용할 수도 있다. 이외에도 일반적인 제형으로 제형화될 수 있으며, 식품에 사용되는 통상적인 첨가제, 예를 들면, 부형제, 증량제, 결합제, 증점제, 유화제, 활택제, 습윤제, 현탁제, 착색료, 향료, 식품 첨가물 등의 성분을 당업자가 적의하게 선택하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 이는 본 발명의 설명을 위한 것일 뿐, 이로 인해 본 발명의 범위가 제한되지 않는다.

< 실시예 1> 산약발효물의 분자량별 분획물의 수득

생명공학연구원 유전자은행에서 분양받은 Lactobacillus acidophilus KCTC3111를 1×10⁷cfu/mL가 되도록 10 mL MRS broth에 배양하였다. 배양한 broth를 3000 rpm에서 10분간 원심분리를 하여 상등액을 버리고 멸균한 saline에 희석한 후, 분말산약과 물을 1:9의 질량비로 혼합한 산약 현탁액에 첨가하여 37 ℃에서 4 일간 발효를 진행하였다. 발효의 모든 과정 및 준비물은 무균 상태를 유지하였다. 4 일간 발효한 산약 발효물을 8000 rpm에서 30분간 2회 원심분리하여 상등액과 침전물로 분리하였다. 상온에서 separate funnel에 상기 발효물의 상등액과 에탄올을 1:1의 중량비로 첨가하고 혼합하여 6 시간 동안 정치시킨 후 침전물과 상등액으로 분리되면 상등액을 취하고 이를 여과한 뒤, 감압농축하여 에탄올 추출물을 얻었다. 상기 에탄올 추출물을 한외여과 필터에 각각 15 mL씩 분주하고 5000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 분리하였다. 이때 사용한 한외여과 필터는 원심분리기(J251, Beckman, Germany)를 이용하여 분리할 수 있는 필터로 micro centrifuge tube형태의 membrane cell(ultrafree-15, Millipore)을 사용하였으며, 한외여과 필터의 pore size는 300,000 dalton, 100,000 dalton, 50,000 dalton, 30,000 dalton 및 10,000 dalton 크기별로 총 5개의 필터를 사용하여 분리하였다. 분리는 4 ℃에서 실시하였으며 분리하여 여과된 상등액 역시 4 ℃에서 보관하며 실험에 사용하였다.

< 실시예 2> 건강기능음료의 제조

상기 실시예 1 에서 제조한 산약 발효물을 에탄올로 추출한 후 얻은 분자량 30,000 내지 50,000 dalton의 분획물을 포함하는 건강기능음료를 하기 표 1 과 같은 조성으로 제조하였다.

성 분	함량(mg)
분자량 30,000 내지 50,000 dalton 분획물	1.28
꿀	522
치옥토산아미드	5
니코틴산아미드	10
염산리보플라빈나트륨	3
염산피리독신	2
이노시톨	30
오르트산	50
물	200

< 실험예 1> HMG - CoA reductase 저해 활성

상기 실시예 1 에서 수득한 분자량별 분획물을 시료로 하여 Kleinsek(1981) 방법을 토대로 일부 수정하여 다음과 같이 HMG-CoA reductase 저해활성을 측정하였다. 분자량별 분획물 0.1 ㎖에 인산완충용액(pH 7.0)을 첨가하여 첨가될 시약에 의한 pH 변화를 감소시킨 후 20 mM dithiotreitol(DTT, D-0632, sigma, U.S.A) 0.1 mL, 3 mM β-NADPH(sigma) 0.1 mL 및 HMG-CoA reductase 0.1 mL을 첨가하고 37 ℃에서 5분간 반응을 유도하였다. 상기 HMG-CoA reductase는 다음과 같은 방법으로 얻었다. 1 주일간 고지방 식이를 섭취한 흰 쥐의 간을 적출하여 간 1 g당 ice cold buffer A(50 mM phosphate buffer pH 7.0 with 0.2 M sucrose)와 2 mM dL-dithiothreitol(DTT, D-0632, sigma aldrich chemical) 2 mL을 첨가한 후 homogenizer로 15초간 균질화하고 15000×g에서 10분간 원심분리하여 상등액을 얻은 뒤, 이를 다시 100000×g에서 75분간 초원심분리한 후 상등액 및 흰색의 지방층제거하여 microsome pellet을 회수하였다. 이 pellet에 buffer A(containing 50 mM EDTA)를 1 g당 1 mL 씩 첨가하여 세척하고 100000×g에서 60분간 원심분리 한 후 상등액을 버리고 buffer B(50 mM phosphate buffer pH 7.0 with 0.1 M sucrose, 2 mM DTT, 50 mM KCl, 30 mM EDTA)을 pellet 1.5 g당 3 mL 가하여 균질화하였다. 다시 같은 buffer를 7 mL 혼합하고 상온에서 15~30분 방치한 후, 100000×g, 20 ℃에서 60분간 초 원심분리하여 상등액을 효소원으로 하였고 사용시까지 -70℃에서 보관하여 사용하였다. 그리하여, 5분간 반응을 유도한 시료에 HMG-CoA(sigma, U.S.A)를 넣고 5분간 반응시키면서 340 nm의 흡광도 변화를 측정하여 다음의 식으로 억제활성을 계산하였다. 그 결과는 하기 표 2 와 같다. 하기 표 2 에서 control 은 한외여과로 분획하기 전의 산약 발효물의 에탄올 추출물을 의미한다.

HMG-CoA reductase inhibition rate(%)= ([1-(T/C)]×100

(T: OD of sample, C: OD of blank)

분자량(dalton)	Inhibition activity (%)
Control	63.4
300,000 이상	18.9
300,000 이하	73.0
100,000~300,000	5.7
100,000 이하	82.1
50,000~100,000	7.3
50,000 이하	88.3
30,000~50,000	95.4
30,000 이하	9.1
10,000~30,000	5.7
10,000 이하	5.3

상기 표 2 에 나타난 바와 같이, 산약을 발효시킨 발효물을 유기용매로 추출한 추출물에 비해 한외여과하여 분자량이 낮아지는 분획물일수록 HMG-CoA reductase 저해 활성이 우수함을 알 수 있다. 즉, 분자량 100,000 이하의 분획물이 control 보다 저해활성이 우수하였으며, 50,000 이하는 더욱 우수하였고 30,000 내지 50,000에서 가장 우수한 저해활성을 나타내었다. 따라서, 분자량 30,000 내지 50,000 사이의 물질이 혈류 개선 효과를 가지고 있을 것으로 추정된다.

< 실험예 2> 답즙산 결합 능력의 측정

담즙산(bile acid)은 콜레스테롤을 전구체로 하여 형성되며 지질의 소화 및 배설에 관여하는 것으로 알려져 있다. 담즙산 또는 담즙산염으로는 cholic acid, deoxycholic acid, taurocholic acid 및 glycocholic acid가 대표적이다. 담즙산은 전구체가 콜레스테롤로서 산약 효소물이 담즙산과 결합하여 배출되면 최종적으로 혈중 콜레스테롤 농도가 저하되므로 상기 실시예에서 제조된 분자량에 따른 분획물을 대상으로 Camire의 방법(1993)으로 다음과 같이 담즙산 결합능력을 측정하였다. 시료 1 mL에 0.1N HCl(Dae-jung, Korea) 용액 2 mL을 가하고 항온수조에서 1 시간동안 진탕교반한 후 1N NaOH(Dae-jung-Korea)용액으로 pH를 7.0으로 조절하였다. 여기에 cholic acid(Sigma, U.S.A), deoxycholic acid(Sigma, U.S.A), taurocholic acid(Sigma, U.S.A) 및 glycocholic acid(Sigma, U.S.A)를 각각 31.25 μmol/mL이 되도록 조제한 0.1 M phosphate buffer 4 mL와 0.01 M phosphate buffer에 porcine pancreation(Sigma, U.S.A)을 10 mg/mL 농도로 녹인 용액 5 mL을 각각 가한 후 항온수조에서 1시간 재 진탕교반 하였다. 교반된 용액에 1.33 M phosphoric acid(Sigma, U.S.A) 2 mL을 가하고 26,890×g에서 10분간 원심분리 한 후 상등액을 취하였고 남은 잔사에 0.01 M phosphate buffer를 가한 후 혼합하여 다시 원심분리를 행하여 상등액을 모두 모았다. 상등액의 pH를 7.0으로 재 조절한 뒤, 위의 용액 0.28 mL와 증류수 3 mL을 test tube에 넣고 test reagent(nitroamide dinucleotide (NAD), nitro blue tetrazolium salt(NBT), diaphorase, 3a-hydroxysteroid dehydrogenase) 0.5 mL을 가하여 5분간 반응시켰다. 그 후 1.33M phosphoric acid를 가하여 반응을 정지시키고 530 nm에서 흡광도를 측정하여 담즙산 표준검량곡선을 통하여 담즙산 결합력을 계산하여 그 결과를 하기 표 3 에 나타내었다. 이 때, 담즙산의 표준검량곡선은 도 2 와 같다.

분자크기	Binding capacity (μM)
분자크기	Cholic acid	Deoxycholic acid	Taurocholic acid	Glycocholic acid
Control	7.6	17.2	7.8	8.4
300,000 이상	3.0	2.8	1.1	0.9
300,000 이하	10.6	18.0	9.2	10.1
100,000~300,000	1.7	0.3	1.1	1.3
100,000 이하	10.9	21.2	11.2	10.0
50,000~100,000	1.2	0.1	1.3	1.8
50,000 이하	10.8	17.7	16.2	15.3
30,000~50,000	11.5	21.4	16.8	15.6
30,000 이하	1.0	1.9	0.7	0.2
10,000~30,000	0.3	0.7	0.3	0.2
10,000 이하	0.0	0.1	0.3	0.1

상기 표 3 에 나타난 바와 같이, 상기 담즙산 결합 능력도 발효물을 에탄올로 추출한 추출물보다 분자량 100,000 이하의 분획물이 우수하였으며, 분자량 30,000 내지 50,000의 분획물이 가장 우수하였다. 그러나, 30,000 이하의 분획물에서는 모든 담즙산의 흡착 능력이 미미하였다.

상기에서 살펴본 바와 같이 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물을 분자량별로 분획한 분획물은 분자량 100,000 이하, 바람직하게는 50,000 이하, 보다 바람직하게는 30,000 내지 50,000 의 분획물이 콜레스테롤 합성 저해 능력과 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선의 활성을 나타내는 유효성분일 것으로 예상된다.

Claims

산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이 분자량 50,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이 분자량 30,000 내지 50,000 dalton의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 분획물이 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물을 유기용매로 추출한 유기용매 추출물로부터 분리한 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 분획물이 산약을 젖산균으로 발효시킨 발효물의 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제4항에 있어서,
상기 유기용매가 에탄올인 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 젖산균이 Lactobacillus acidophilus 인 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물.
산약에 젖산균을 접종하여 발효시키는 발효 단계; 및
상기 발효 단계에서 얻어진 발효물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 분획 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법.
제8항에 있어서,
상기 발효 단계 후에, 상기 발효 단계에 의해 얻어진 발효물을 유기용매로 추출하는 유기용매 추출 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 혈류 개선용 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.