KR20100116644A

KR20100116644A - 콤브레타스타틴의 제조 방법

Info

Publication number: KR20100116644A
Application number: KR1020107019132A
Authority: KR
Inventors: 마르크 프레데릭; 실비안느 루츠; 조엘 말파르; 필리페 마송; 스테판느 뮈티
Original assignee: 사노피-아벤티스
Priority date: 2008-02-28
Filing date: 2009-02-27
Publication date: 2010-11-01
Also published as: US20110124899A1; WO2009118474A1; EP2562154A1; FR2928148A1; IL225776A0; CA2716541A1; ECSP10010421A; CL2009000463A1; ZA201006137B; SG183658A1; PE20091559A1; MX2010009514A; JP2011513286A; EP2252572A1; CL2012001744A1; CL2012001742A1; FR2928148B1; MA32193B1; AU2009229027A1; CN102015620A

Abstract

본 발명은
· 염기 및 T3P의 존재하에, (Z)-아미노 화합물의 염

을 하기 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체
<화학식 II>

(여기서 PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타냄)와 커플링시켜 하기 화학식 (Z)-(Ib)의 화합물을 수득하는 단계:
<화학식 Z-Ib>

· 이어서, 탈보호하고, 산의 존재하에 (Z)-(Ib)의 고리를 개환시켜 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염의 형태로 수득하는 단계; 및
· 임의로, 염기를 첨가하여 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염기의 형태로 수득하는 단계
로 이루어지며, 상기 (Z)-아미노 화합물의 염은 (Z) 이성질체인 화학식

의 아미노 화합물의 염의 풍부화에 의해 수득되는 것인,
염기 형태 또는 산과의 부가염 형태인 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조 방법에 관한 것이다.
<화학식 A>

Description

콤브레타스타틴의 제조 방법 {METHOD FOR PREPARING COMBRETASTATIN}

본 출원은 염기 형태 또는 산과의 부가염 형태인 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조 방법에 관한 것이다.

<화학식 A>

[선행 기술]

US 6 759 555는 하기 화학식의 콤브레타스타틴의 제조 방법을 기재한다:

상기 식에서, X는 -NH₂ 또는 하기 2개의 기 중 하나를 나타내고:

PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타낸다.

문헌 [Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425] 및 US 2003/0220404도 또한 콤브레타스타틴의 제조 방법을 기재한다.

문헌 [J. Pept. Res. 1999, 54(1), 54-65]는 펩티드 결합 형성에서의 산 활성화제를 비교하여, TDBTU가 최상이라고 결론짓는다.

문헌 [Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3231-3244]는 산 활성화제로서 DCC, HOBt-H₂O를 이용하여 커플링하는 것을 포함하는 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조를 기재한다 (단계 e, 화합물 10).

문헌 [Chem. Commun. 1999, 1847-1848]은 아미드 결합 생성에서의 T3P를 기재하나, T3P는 보다 많은 에피머화를 유발하고, HAPyU보다 불량한 수율을 야기한다고 기재되어 있다 (표 3 참조).

본원 청구항 1에서 청구하는 방법은 상기 문헌에 기재되어 있지도 않고 제시되지도 않는다. 유사하게, 벤질 알코올 및 아세토니트릴을 사용하는 아미노 화합물 염의 풍부화(enrichment)도 기재되어 있지 않으며 T3P를 사용하는 커플링도 기재되어 있지 않다.

[기술적 문제]

콤브레타스타틴 또는 스틸벤 유도체는 강한 세포독성 활성을 발휘하므로, 항암제로서 사용될 수 있다. 그러나, 가장 강력한 세포독성 활성을 발휘하는 것은 (Z) 이성질체이다. 이들 화합물은 특히 US 5 731 353, US 5 561 122 또는 US 6 759 555에 기재되어 있다. 본 출원인은 콤브레타스타틴 (A)의 제조 방법을 개선시켰다.

[발명의 간략한 설명]

본 발명은

염기 및 하기 화학식 (III)의 T3P의 존재하에,

<화학식 III>

(Z)-아미노 화합물

또는 (Z)-아미노 화합물의 염

(B^-는 반대음이온을 나타냄)을 하기 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체

<화학식 II>

(여기서 PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타냄)와 커플링시켜 하기 화학식 (Z)-(Ib)의 화합물을 수득하는 단계;

<화학식 Z-Ib>

이어서, 탈보호하고, 산의 존재하에 (Z)-(Ib)의 고리를 개환시켜 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염 (-NH₃ ⁺)의 형태로 수득하는 단계; 및

임의로, 염기를 첨가하여 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염기 (-NH₂)의 형태로 수득하는 단계

로 이루어지며, 상기 (Z)-아미노 화합물의 염은

· 아세토니트릴 중 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 혼합물의 현탁액에 벤질 알코올을 첨가하는 단계, 이어서

· (Z) 이성질체가 풍부한(enriched) 아미노 화합물의 염을 기계적으로 분리하는 단계

로 이루어지는, (Z) 이성질체인 화학식

(B^-는 반대음이온을 나타냄)의 아미노 화합물의 염의 풍부화에 의해 수득되는 것인,

염기 형태 또는 산과의 부가염 형태인 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조 방법에 관한 것이다.

<화학식 A>

또한, 본 발명은

· 아세토니트릴 중 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 혼합물의 현탁액에 벤질 알코올을 첨가하는 단계, 및

· (Z) 이성질체가 풍부한 아미노 화합물의 염을 기계적으로 분리하는 단계

로 이루어지는, (Z) 이성질체인 화학식

(B^-는 반대음이온을 나타냄)의 아미노 화합물의 염의 풍부화에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 염기의 존재하에 (Z)-아미노 화합물 또는 (Z)-아미노 화합물의 염을 이중으로 보호된 L-세린 유도체와 커플링시키기 위한, 하기 화학식 (III)의 T3P의 용도에 관한 것이다.

<화학식 III>

아세토니트릴 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 중량으로 표현했을 때 5 내지 17, 바람직하게는 10 내지 12이다. 풍부화를 수행하는 온도는 바람직하게는 20 내지 70℃이다. 벤질 알코올 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 중량으로 표현했을 때 1 내지 4, 바람직하게는 2 내지 3이다.

[본 발명의 상세한 설명]

하기 반응식 1은 콤브레타스타틴 (A)의 제조 방법의 반응 단계 (i) 내지 (iv)를 기재한다:

<반응식 1>

단계 (i): 염기의 존재하에 니트로메톡시벤즈알데히드와 트리메톡시벤질포스포늄 브로마이드 또는 클로라이드 사이의 위티그(Wittig) 반응, 이로써 2-메톡시-5-[2-(3,4,5-트리메톡시페닐)비닐]니트로벤젠의 2개의 (Z) 및 (E) 이성질체 ((Z)- 및 (E)-니트로)의 혼합물 형태인 니트로 화합물의 염이 생성됨;

단계 ( ii ): 혼합물의 환원, 이로써 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 혼합물이 생성되며, 이는 염 (B^-는 반대음이온, 예를 들면 Cl^- 또는 SO₄ ² ^-를 나타냄)으로 변환되고, 그 후 (Z)-아미노 화합물을 분리하는 단계가 후속됨;

단계 (iii): (Z)-아미노 화합물의 염의, -OH 및 아미노 관능기에서 이중으로 보호된 L-세린 유도체 (하기 화학식 (II)의 화합물)와의 커플링, 이로써 화합물 (Z)-(Ib)이 생성됨.

<화학식 II>

PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타내고, 예를 들면, tert-부톡시카르보닐 (BOC), 벤질옥시카르보닐 (CBZ) 또는 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐 (FMOC)일 수 있음;

단계 (iv) 및 (v): 탈보호 및 고리 개환, 이로써 염화 또는 비염화 형태인 콤브레타스타틴 (A)이 생성됨.

단계 (i)은 US 5 731 353 및 또한 문헌 [Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425] (반응식 1)에 기재되어 있다. 반응은 염기, 바람직하게는 강염기, 예컨대 MeONa 또는 NaH의 존재하에 유기 용매, 예컨대 방향족 용매 (예를 들면, 톨루엔) 중에서 수행한다. (Z)/(E) 비는 약 75/25이다.

US 6 759 555에 기재된 환원 단계 (ii)는 과량의 철 ((Ia)에 비해 2 당량 초과)의 존재하에 수행한다. US 5 525 632 (실시예 2, 단계 2)에 기재된 바와 같은 아연의 존재하의 환원도 또한 가능하나, 이는 완전하지 않아 (수율=49.3％), 그 결과 다량의 "아조" 부산물이 또한 형성된다. 충분한 순도의 (Z)-아미노 화합물은 그 후에 하나 이상의 복잡한 분리(들)에 의해 수득된다. 환원 후의 분리는 연속적 결정화에 의해 수행된다. 첫번째 결정화는 (E)-아미노 화합물의 제거를 가능하게 하고, 그 다음 두번째 결정화는 (Z)-아미노 화합물의 단리를 가능하게 한다 (US 6 759 555, 실시예 1 참조).

단계 (iii)의 커플링은 유리하게는 산 활성화제, 예컨대 EDCI (1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 클로라이드), DCC (디시클로헥실카르보디이미드), TOTU (O-[에톡시카르보닐]시아노메틸렌아미노)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), HBTU (O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), PivCl (피발로일 클로라이드) 또는 N,N-카르보닐디이미다졸의 존재하에 수행된다. 용어 "산 활성화제" ("커플링제")는, 그 기능이 펩티드 결합의 형성을 촉진하기 위하여 산 관능기 -COOH를 활성화시키는 것인 화합물을 나타내기 위하여 사용된다. 산 활성화제에 대한 더 많은 상세정보에 대해서는, 알드리치 케미칼(Aldrich Chemical)사에서 편찬한 평론 [ChemFiles Vol.7, No. 2, page 3] 또는 [Tetrahedron report No. 672, 2004, 60, 2447-2467, "Recent development of peptide coupliing reagents in organic synthesis"]을 참조할 수 있다. 평론 [Tetrahedron 2005, 61, 10827-10852]는 다수의 산 활성화제가 이용가능함을 개시하고 있다.

단계 (iv)는 고리 개환을 촉진하고 콤브레타스타틴 (A)를 염 (-NH₃ ⁺)의 형태로 수득하기 위하여 산의 존재하에 수행한다. 이는 탈보호/고리 개환과 관련된다. 염산, 예컨대 메탄올성 용액의 형태인 것이 BOC의 존재하에 유리하게 사용되며, 히드로클로라이드가 수득된다. 염기의 형태인 콤브레타스타틴 (A)는 염기, 예컨대 수산화나트륨을 사용하여 염을 중화시킴으로써 수득된다 (실시예 1-단계 (iii) 참조).

본 발명에 따른 방법

본 발명의 방법은 반응식 1의 동일한 단계를 반복하나, 단계 (ii) 및 (iii)은 개선되었다. 사실상, 본 발명에서, 단계 (ii) 동안, 아미노 화합물의 염의 (Z) 이성질체는

로 이루어지는 방법에 의해 수득된다.

따라서, (Z) 이성질체는 "풍부화"에 의해 수득되는데, 이 용어는 상기 기재된 방법의 2개 단계의 마지막에 (Z) 이성질체의 비율이 (E) 이성질체에 비해 증가된 것을 의미하며, 또한 당업자는 (Z) 및 (E) 이성질체의 혼합물로부터 (Z) 이성질체를 분리하는 방법에 대해 말할 수 있다. (재)결정화에 비해, 풍부화는 실행하기가 직접적이고 간단하다는 장점을 가진다. 이는 낮은 함량의 잔류 (E) 이성질체 (이는 <1 mol％ 이하일 수 있음; 생성물의 순도가 (Z)에 대해 99.93％ 및 (E)에 대해 0.07％인 실시예 1 참조)를 갖는 (Z) 이성질체가 풍부한 아미노 화합물을 수득하는 것을 가능하게 한다. 기계적 분리는 예를 들면, 여과 또는 원심분리일 수 있다. 기계적 분리의 마지막에, (Z) 이성질체의 염을 임의로 세척하고 건조시킬 수 있다.

현탁액은 바람직하게는 중량으로 표현했을 때 5 내지 17, 바람직하게는 10 내지 12의 아세토니트릴 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율을 갖는다 (즉, 현탁액 중 아세토니트릴의 중량이 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 중량의 5 내지 17배임).

첨가되는 벤질 알코올의 양은 바람직하게는, 벤질 알코올 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율이 중량으로 표현했을 때 1 내지 4, 바람직하게는 2 내지 3 (즉, 첨가된 벤질 알코올의 중량이 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 중량의 1 내지 4배)이도록 하는 양이다. 상기 비율은 최종 생성물에 대한 높은 (Z)/(E) 비를 유지하는 것을 가능하게 한다. 벤질 알코올의 기능은 (E)-아미노 화합물의 염을 우선적으로 용해시키는 것이다.

풍부화는 20 내지 70℃, 유리하게는 30 내지 70℃, 바람직하게는 35 내지 65℃의 온도에서 수행하는 것이 바람직하다. 70℃ 초과의 온도에서, 아미노 화합물은 서서히 분해되기 시작한다.

현탁액의 바람직한 제조 방법을 이하에 기재한다. (Z)- 및 (E)-니트로 화합물을 물 및 알코올의 혼합물, 예를 들면 물/메탄올 혼합물일 수 있는 용매에서 나트륨 디티오나이트 (Na₂S₂O₄)를 사용하여 환원시킨다. 환원 후, 강산 (예를 들면, HCl 또는 H₂SO₄)을 반응 매질로 도입시키며, 상기 산은 반응 중간체와, 그리고 또한 디티오나이트 및 디술파이트 잔류물과도 반응한다. 그 다음, (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염 (예를 들면, 히드로클로라이드 또는 술페이트)의 혼합물을 수득한다. 이어서, 강염기를 첨가하여 유리 염기 (-NH₃ ⁺ → -NH₂)를 수득하고, 이를 유기 용매, 예를 들면 염소화 용매, 예컨대 디클로로메탄 (DCM)으로 추출한다. 알코올 중의 강산을 유기상에 첨가한 후, 알코올을 아세토니트릴로 치환시켜 아세토니트릴 중 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 현탁액을 수득한다. 강산은 HCl 또는 H₂SO4일 수 있다 (B^- = Cl 또는 SO₄ ^-). 용매 치환은 진공하에 알코올을 다소 완전히 제거한 후에 아세토니트릴을 첨가함으로써 수행할 수 있다. 아세토니트릴의 첨가는 또한 진공하의 알코올 제거와 동시에 수행할 수도 있다. 알코올은 바람직하게는 저급 알코올, 예컨대 메탄올 또는 에탄올이다.

단계 (iii)의 경우, (Z)-아미노 화합물의 염과 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체 사이의 커플링은 염기의 존재하에 산 활성화제로서 프로판포스폰산 무수물 (T3P)을 사용하여 유기 용매 중에서 수행한다. 염기의 기능은 산 종을 포획하여 염을 유리 염기 쪽으로 이동시키는 것이다. 첨가되는 염기의 양은 (Z)-아미노 화합물의 염에 대해 2 내지 3 당량이다 (2.7 당량을 사용한 실시예 1 참조). T3P 및 염기의 존재하에 (Z)-아미노 화합물을 화학식 (II)의 화합물과 직접 커플링하는 것도 가능하며, 이 경우 첨가되는 염기의 비율은 보다 작고, 1 내지 2 당량이다 (염으로부터 출발시보다 대략 1 당량 적음).

염기는 3급 아민, 예컨대 트리에틸아민 (TEA), 디이소프로필에틸아민 (DIEA), N-메틸모르폴린 (NMM) 또는 메틸피페리딘일 수 있다. 유기 용매는 디클로로메탄 (DCM), 톨루엔, 메틸 이소부틸 케톤 (MIBK), 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란 (THF), Me-테트라히드로푸란 (Me-THF) 또는 시클로펜틸 메틸 에테르일 수 있다.

T3P는 하기 화학식 (III)을 갖는다.

<화학식 III>

다른 산 활성화제에 비해 T3P를 사용하는 것의 장점은, T3P의 부산물은 쉽게 제거할 수 있고 (부산물이 모두 물에 가용성임) T3P가 저렴한 활성화제라는 것이다. 또한, 반응이 "원 팟" 과정에 따라 함께 모아진 (Z)-아미노 화합물 (염 또는 염기 형태) 및 화합물 (II)의 존재하에 수행될 수 있고, 따라서 (Z)-아미노 화합물 (염 또는 염기 형태) 및 화합물 (II)가 동일한 용기에서 T3P 및 염기의 존재하에 함께 반응한다. 모든 커플링 시약의 경우가 다 이러한 것은 아닌데, 왜냐하면 PivCl (피발로일 클로라이드)과 같은 일부 시약은 동일한 반응을 위해서, (Z)-아미노 화합물의 염을 첨가할 수 있기 이전에 화합물 (II)의 산 관능기의 앞선 활성화가 요구되기 때문이다.

최종적으로, 본 출원인은 T3P가 비대칭 중심의 에피머화를 유발하지 않으므로, 이로 인해 콤브레타스타틴 (A)을 양호한 순도 및 양호한 수율로 수득하는 것이 가능해짐을 주목하였다. 또한, T3P가 커플링 생성물 면에서 양호한 수율을 얻는 것을 가능하게 함을 주목하였다 (표 III 참조).

커플링 반응은 일반적으로 5℃ 내지 70℃, 예를 들면 DCM의 환류 온도에서 수행한다. (Z)-아미노 화합물에 대한 T3P의 비율은 1 내지 2 당량, 바람직하게는 1.5 내지 1.8 당량이다.

[실시예]

실시예 1 (본 발명에 따른 실시예)

단계 (i):

나트륨 메톡시드 (5.66 kg, 29.34 mol)의 용액을 5-10℃의 온도에서, 톨루엔 (91.1 L), 트리메톡시벤질포스포늄 브로마이드 (15.35 kg, 29.33 mol) 및 4-메톡시-3-니트로벤즈알데히드 (5.06 kg, 27.93 mol)를 포함하는 혼합물에 넣었다. 반응의 마지막에, 아세트산 0.32 L (5.59 mol)를 넣었다. 매질을 20℃에서 유지시킨 후, 이를 여과하였다. 케이크를 톨루엔 (11.1 L)으로 세척하였다. 여과물을 물 (20.2 L)로 수회 세척한 후, 진공하에 농축시켰다. 이어서, 이소프로필 알코올 (87.6 L)을 도입하고, 매질을 농축시킨 다음, 냉각시켰다. 이어서, 현탁액을 10℃에서 여과하였다. 단리된 생성물을 진공하에 건조시켰다 (6.46 kg, 52.2％). 단리된 생성물의 순도는 (Z)에 대해 약 78％, (E)에 대해 약 22％이었다.

단계 (ii):

50℃의 물 (80 ml)을 메탄올 (100 ml), 환원될 (Z)- 및 (E)-니트로 화합물 (20 g, 0.058 mol) 및 나트륨 디티오나이트 (36.8 g, 0.179 mol, 3.1 당량)을 포함하는 매질에 넣었다. 반응이 완료되면 (50℃에서 1시간 동안 두었음), 염산 (36.3 ml, 0.406 mol)을 첨가하였다. 물 (70 ml) 및 DCM (80 ml), 이어서 수산화나트륨 (lye 30.5％, 10N)을 pH=7까지 넣음으로써 처리하였다. DCM (20 ml)으로 재추출한 후 수성상을 제거한 다음, DCM 상을 진공하에 농축시키고 (35℃에서 대략 200 mbar), 아세토니트릴 (160 ml)로 대체하고, 감압하에 DCM에서 아세토니트릴로 용매 변경을 수행하여 대략 200 ml의 반응물 부피를 유지하였다. 메탄올성 염산 (27 ml, 0.081 mol)을 넣은 후, 용매를 감압하에 (90 mbar) 증발시켜 대략 233 ml의 일정한 부피에서 메탄올-아세토니트릴에서 아세토니트릴로의 용매 변경을 수행하였다. 용매 변경의 마지막에, 총 부피 (용매 + 유기 화합물)를 280 ml로 조정하였다.

이어서, 현탁액을 백색 브로쓰(broth)의 형태로 수득하였다. 이어서, 벤질 알코올 (46 ml)을 45±3℃에서 현탁액에 첨가하였다. 25℃로 냉각시킨 후, 매질을 여과하고, 아세토니트릴 (30 ml) 및 벤질 알코올 (3.3 ml)로 세척하였다. 이어서, 단리된 생성물을 진공하에 건조하였다 (11.7 g, 74.4％). 상기 생성물은 HPLC로 측정시, (Z)에 대해 99.93％ 및 (E)에 대해 0.07％의 순도를 가졌다. 단계 (ii)의 마지막에, 양호한 순도를 갖는 (Z)-아미노 화합물의 염을 간단히 그리고 직접적으로 수득하였다.

단계 (iii):

20℃의 TEA (53.4 ml, 0.383 mol), 이어서 DCM 중 T3P의 용액 (154 g, 0.242 mol)을 DCM (500 ml), 히드로클로라이드 형태의 (Z)-아미노 화합물 (50 g, 0.142 mol) 및 PG=BOC를 갖는 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 (L-세린-N-BOC-아세토니드; 41.8 g, 0.170 mol)을 포함하는 매질에 넣었다. 매질을 환류시킨 후, 물 (500 ml)을 첨가하였다. 침전 및 농축에 의해 분리한 후, 메탄올성 염산 (189.5 ml, 1.136 mol) 및 메탄올 (189.5 ml)을 첨가하였다. 물 (300 ml)을 매질에 첨가한 후, 침전에 의해 상을 분리하였다. 이소프로필 아세테이트 (650 ml)를 수성 상에 첨가한 후, 수산화나트륨 (115 ml, 1.150 mol)을 20℃에서 넣었다. 침전에 의해 분리되어 세척된 유기상을 진공하에 농축시킨 다음, 65℃로 가열하였다. 메탄올 (35 ml), 이어서 메탄올성 염산 (47.4 ml, 0.142 mol)을 상기 온도에서 첨가하였다. 냉각 및 여과한 후, 생성물을 단리하였다 (49.6 g, 79.5％). 최종 생성물은 99.2％의 순도를 가졌다.

실시예 2 (본 발명에 따른 실시예)

히드로클로라이드 형태인 (Z)-아미노 화합물 Z-아미노스틸, HCl (50.0 g), N-BOC-아세토니드 (41.8 g) 및 500 mL의 DCM을 재킷이 장착된 1.6 L 반응기에 적재시켰다. 이어서, 53.4 mL의 트리에틸아민 (2.7 당량)을 22±3℃에서 넣은 후, DCM 중 T3P의 50％ 용액 (1.7 당량)을 넣었다. 혼합물을 DCM의 환류에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 22±3℃로 냉각시키고, 500 mL의 탈염수를 첨가하였다. 혼합물을 침전에 의해 분리되도록 두고, 상을 분리하였다. DCM 상을 6 중량％의 인산수소나트륨 수용액 500 mL (30 g)로 세척한 후, 탈염수 500 mL로 세척하였다. DCM 상을 약 40-50℃에서 360 내지 150 mbar의 감압하에 농축시켰다. 이어서, 3 mol/l의 메탄올 중 HCl 용액 (379 ml, 8 당량)을 넣은 후, 300 mL의 탈염수를 넣었다. 혼합물을 침전에 의해 분리되도록 두고, 상을 분리하였다. DCM/메탄올 상을 탈염수 (200 ml)로 재추출하고, 상을 분리하였다. 650 mL의 이소프로필 아세테이트, 이어서 115 mL의 30％ 수산화나트륨 용액 (8.1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 침전에 의해 분리되도록 두고, 유기상을 400 mL의 탈염수로 세척하였다. 혼합물을 침전에 의해 분리되도록 두고, 상을 분리하였다. 이어서, 300-350 ml가 수득될 때까지 유기상을 160 내지 60 mbar의 감압하에 농축시키고, DCM→이소프로필 아세테이트 용매 변화를 수행하였다. 이어서, 혼합물을 62℃에서 가열하고, 35 mL의 메탄올을 첨가하고, 3 mol/l의 메탄올 중 염산 용액 (47.4 ml, 1 당량)을 넣었다. 생성된 생성물을 주위 온도로 냉각되도록 두고, 백색 브로쓰를 여과하였다. 최종 고체를 세척하였다.

실시예 3-6에서, 처음에 상이한 양의 (Z)- 및 (E)-니트로 화합물을 가지고 단계 (ii)를 반복하였다. 아세토니트릴 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 10.8로 고정하고, 벤질 알코올 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 그에 관한 한 가변적이었다.

실시예 3 (본 발명에 따른 실시예)

50℃의 물 (60 ml)을 메탄올 (50 ml), 환원될 (Z)- 및 (E)-니트로 화합물 (15 g, 0.043 mol) 및 나트륨 디티오나이트 (27.2 g, 0.133 mol)를 포함하는 매질에 넣었다. 반응이 완료되면, 염산 (26.2 ml, 0.314 mol)을 첨가하였다. 물 및 DCM, 및 이어서 수산화나트륨을 pH=7까지 넣음으로써 처리하였다. 메탄올성 염산 (18.9 ml, 0.0586 mol)을 DCM 상에 첨가한 후, 용매를 아세토니트릴로 대체하였다. 이어서, 브로쓰를 수득하였다. 이어서, 벤질 알코올 (31 ml)을 50℃에서 현탁액에 첨가하고, 65℃에서 2 시간 동안 유지하였다. 냉각시킨 후, 매질을 여과하고 세척하였다. 이어서, 단리된 생성물을 진공하에 건조시켰다.

실시예 4-6: 실시예 3과 동일하나, 상이한 양의 벤질 알코올을 사용.

<표 I>

아세토니트릴 / Z+E 아미노 염 비율 = 10.8

실시예 5 및 7-9에서, 벤질 알코올 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 2.25로 고정하고, 아세토니트릴 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율은 가변적이었다.

<표 II>

벤질 알코올 / Z+E 아미노 염 비율 = 2.25

실시예 10-14는 T3P 이외의 커플링제를 사용한 커플링 (단계 (iii))의 결과를 기재한다.

실시예 10 (비교예): TOTU의 사용

단계 (iii)의 조건을 반복하였으나, 단, 산 활성화제로서 TOTU의 존재하에 (TOTU 1 당량 + TEA 5 당량) 수행하였다. 최종 수율은 단지 71％이었다.

실시예 11 (비교예): TOTU의 사용

5℃의 TEA (0.71 g, 7.0 mmol), 이어서 TOTU (0.46 g, 1.4 mmol)를 DCM (10 ml), 히드로클로라이드 형태의 (Z)-아미노 화합물 (0.50 g, 1.4 mmol) 및 PG=BOC를 갖는 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 (L-세린-N-BOC-아세토니드; 0.35 g, 1.4 mmol)을 포함하는 매질에 넣었다. 매질을 5℃에서 24 시간 동안 유지한 후, 물 (5 ml)을 첨가하였다. 침전에 의해 분리한 후, 유기상을 HPLC로 분석하였다. 정량적으로 측정된 커플링 생성물의 수율은 50.1％이고, 그의 순도는 69.3％이었다.

실시예 12 (비교예): BOP-Cl (비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로라이드)의 사용

5℃의 NMM (0.42 g, 4.2 mmol), 이어서 BOP-Cl (0.72 g, 2.8 mmol)을 DCM (5 ml), (Z)-아미노 화합물 (0.50 g, 1.4 mmol) 및 PG=BOC를 갖는 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 (L-세린-N-BOC-아세토니드; 0.35 g, 1.4 mmol)을 포함하는 매질에 넣었다. 매질을 5℃에서 24 시간 동안 유지한 후, 물 (5 ml)을 첨가하였다. 침전에 의해 분리한 후, 유기상을 HPLC로 분석하였다. 정량적으로 측정된 커플링 생성물의 수율은 29.1％이고, 그의 순도는 91.6％이었다.

실시예 13 (비교예): PyClOP (클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트)의 사용

5℃의 NMN (0.42 g, 4.2 mmol), 이어서 PyClOP (1.2 g, 2.8 mmol)를 에틸 아세테이트 (10 ml), (Z)-아미노 화합물 (0.50 g, 1.4 mmol) 및 PG=BOC를 갖는 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 (L-세린-N-BOC-아세토니드; 0.70 g, 2.8 mmol)을 포함하는 매질에 넣었다. 매질을 5℃에서 24 시간 동안 유지한 후, 물 (5 ml)을 첨가하였다. 침전에 의해 분리한 후, 유기상을 HPLC로 분석하였다. 정량적으로 측정된 커플링 생성물의 수율은 53.3％이고, 그의 순도는 83.9％이었다.

실시예 14 (비교예): PyBROP (브로모-트리스-피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트)의 사용

25℃의 NMN (0.42 g, 4.2 mmol), 이어서 PyBROP (0.65 g, 1.4 mmol)를 Me-CN (5 ml), (Z)-아미노 화합물 (0.50 g, 1.4 mmol) 및 PG=BOC를 갖는 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 (L-세린-N-BOC-아세토니드; 0.35 g, 1.4 mmol)을 포함하는 매질에 넣었다. 매질을 25℃에서 24 시간 동안 유지한 후, 물 (5 ml)을 첨가하였다. 침전에 의해 분리한 후, 유기상을 HPLC로 분석하였다. 정량적으로 측정된 커플링 생성물의 수율은 24.9％이고, 그의 순도는 75.4％이었다.

<표 III>

T3P는 TOTU, BOP-Cl, PyClOP 또는 PyBROP보다 커플링 생성물 면에서 보다 양호한 수율을 얻는 것을 가능하게 함이 주목된다.

Claims

· 염기 및 하기 화학식 (III)의 T3P의 존재하에,
<화학식 III>

(Z)-아미노 화합물
또는 (Z)-아미노 화합물의 염
(B^-는 반대음이온을 나타냄)을 하기 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체
<화학식 II>

(여기서 PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타냄)와 커플링시켜 하기 화학식 (Z)-(Ib)의 화합물을 수득하는 단계;
<화학식 Z-Ib>

· 이어서, 탈보호하고, 산의 존재하에 (Z)-(Ib)의 고리를 개환시켜 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염의 형태로 수득하는 단계; 및
· 임의로, 염기를 첨가하여 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염기의 형태로 수득하는 단계
로 이루어지며, 상기 (Z)-아미노 화합물의 염은
· 아세토니트릴 중 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 혼합물의 현탁액에 벤질 알코올을 첨가하는 단계, 이어서
· (Z) 이성질체가 풍부한(enriched) 아미노 화합물의 염을 기계적으로 분리하는 단계
로 이루어지는, (Z) 이성질체인 화학식
(B^-는 반대음이온을 나타냄)의 아미노 화합물의 염의 풍부화(enrichment)에 의해 수득되는 것인,
염기 형태 또는 산과의 부가염 형태인 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조 방법.
<화학식 A>
· 아세토니트릴 중 (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 혼합물의 현탁액에 벤질 알코올을 첨가하는 단계, 및
· (Z) 이성질체가 풍부한 아미노 화합물의 염을 기계적으로 분리하는 단계
로 이루어지는, (Z) 이성질체인 화학식
(B^-는 반대음이온을 나타냄)의 아미노 화합물의 염의 풍부화 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 기계적 분리가 여과인 방법.
· 염기 및 T3P의 존재하에, (Z)-아미노 화합물
또는 (Z)-아미노 화합물의 염
(B^-는 반대음이온을 나타냄)을 하기 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체:
<화학식 II>

(여기서 PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타냄)와 커플링시켜 하기 화학식 (Z)-(Ib)의 화합물을 수득하는 단계;
<화학식 Z-Ib>

· 이어서, 탈보호하고, 산의 존재하에 (Z)-(Ib)의 고리를 개환시켜 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염의 형태로 수득하는 단계; 및
· 임의로, 염기를 첨가하여 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴을 염기의 형태로 수득하는 단계
로 이루어지는, 염기 형태 또는 산과의 부가염 형태인 하기 화학식 (A)의 콤브레타스타틴의 제조 방법.
<화학식 A>
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, PG가 BOC, CBZ 또는 FMOC를 나타내는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, B^-가 Cl^- 또는 SO₄ ^2-를 나타내는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, PG가 BOC를 나타내고, B^-가 Cl^-을 나타내는 것인 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 염기가 3급 아민인 방법.
제8항에 있어서, 염기가 트리에틸아민 (TEA), 디이소프로필에틸아민 (DIEA), N-메틸모르폴린 (NMM) 또는 메틸피페리딘인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, (Z)-아미노 화합물 또는 (Z)-아미노 화합물의 염 및 화학식 (II)의 화합물이 동일한 용기에서 T3P 및 염기의 존재하에 함께 반응하는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 아세토니트릴 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율이 중량으로 표현했을 때 5 내지 17, 바람직하게는 10 내지 12인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 풍부화를 수행하는 온도가 20 내지 70℃인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 벤질 알코올 / (Z)- 및 (E)-아미노 화합물의 염의 비율이 중량으로 표현했을 때 1 내지 4, 바람직하게는 2 내지 3인 방법.
화학식
의 (Z)-아미노 화합물 또는 화학식
(B^-는 반대음이온을 나타냄)의 (Z)-아미노 화합물의 염을 하기 화학식 (II)의 이중으로 보호된 L-세린 유도체
<화학식 II>

(여기서 PG는 아민 관능기를 보호하는 기를 나타냄)와 커플링시키기 위한, 하기 화학식 (III)의 T3P의 용도.
<화학식 III>
제14항에 있어서, PG가 BOC, CBZ 또는 FMOC를 나타내고/거나 B^-가 Cl^- 또는 SO₄ ^2-를 나타내는 것인 용도.
제14항 또는 제15항에 있어서, 염기가 3급 아민인 용도.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, (Z)-아미노 화합물 또는 (Z)-아미노 화합물의 염 및 화학식 (II)의 화합물이 동일한 용기에서 T3P 및 염기의 존재하에 함께 반응하는 것인 용도.