KR20100023372A - Cosmetic composition containing phyllanthus urinaria extrancts - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 항노화, 항산화 또는 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1을 억제하고, DNA 손상을 보호하며, 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제하고, 종양괴사인자-α의 생합성을 억제하여 항노화, 항산화 또는 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition having an anti-aging, antioxidant or anti-wrinkle effect, and more particularly, by containing a fox bead extract as an active ingredient, promoting collagen production in the skin, inhibiting MMP-1, and preventing DNA damage. It relates to a cosmetic composition that protects, inhibits the biosynthesis of cyclooxygenase-2, inhibits the biosynthesis of tumor necrosis factor-α, and has an anti-aging, antioxidant or antiwrinkle effect.
인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하 고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.Human skin is changed by a number of internal and external factors as it ages. That is, internally, the secretion of various hormones that regulate metabolism decreases, and the function of immune cells and the activity of cells decreases, thereby reducing the biosynthesis of immune proteins and constituent proteins necessary for living organisms. Due to the increase in the amount of ultraviolet rays reaching the surface of the sun's rays and further increase environmental pollution, free radicals and free radicals, such as free radicals, skin thickness, wrinkles, elasticity is reduced only In addition, the color of the skin becomes dull, skin problems frequently occur, and blemishes, freckles and black mushrooms also increase, causing various changes.
노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해 및 변성이 가속화되어 피부기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.As aging progresses, symptoms such as changes and decreases in the content and arrangement of collagen, elastin, hyaluronic acid and glycoproteins, which are constituents of the skin, appear and are subject to oxidative stress caused by free radicals and active harmful oxygen. In addition, cyclooxygenase-2 (Cox-2, cyclooxygenase), an enzyme that produces proinflammatory cytokine, which is known to cause inflammation, in most cells constituting the skin due to aging or ultraviolet rays. Biosynthesis of the enzyme increases the biosynthesis of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that breaks down skin tissues by these inflammatory factors, and the production of nitric oxide (NO) by iNOS (inducible nitric oxide synthase). It is known to increase. In other words, the biosynthesis of the substrate material is reduced by the reduction of cellular activity and micro-inflammation due to naturally occurring endogenous aging, and by external factors such as the increase of stress caused by various harmful environments and the increase of free radical species caused by sunlight. As a result, decomposition and degeneration are accelerated, and the skin matrix is destroyed and thinned, resulting in various symptoms of skin aging. Therefore, a lot of research is being conducted on the active ingredient that can prevent and improve the phenomenon of aging.
여우구슬(Phyllanthus urinaria)은 어린초 또는 진주초라고도 불리며, 주로 밭이나 풀밭에서 자란다. 높이가 15∼40cm이고, 붉은빛이 돌며 가지가 퍼지며, 가 지에 좁은 날개가 있고, 잎은 어긋나며 2줄로 달려서 깃꼴겹잎같이 보인다. 밑부분에 달걀을 거꾸로 세운 모양의 삼각형의 잎이 몇 개가 있으며, 잎은 타원형이고 끝이 둥글며 가장자리가 밋밋하다. 잎 뒷면은 흰빛이 나며 잎자루는 짧다. 꽃은 1가화이고 7∼8월에 피며 적갈색이다. 화피는 6개, 수술은 3개, 암술은 1개이다. 열매는 삭과(殼果)로 편구형으로 자루가 없고 적갈색이며 옆으로 달린 주름살이 있다. 여우주머니와 비슷하지만 열매에 자루가 없으며, 한국·일본 및 열대·아열대 지방에 널리 분포한다. 또한 여우구슬은 장염, 이질, 전염성 간염 및 신염으로 인한 수종, 요로 감염, 명목, 수아의 감적, 화안목옹, 구창두창 및 무명 소종에 대한 치료 효과가 있고, 화장료에 첨가되어 미백 효능을 나타낼 수 있음이 알려져 있다.Fox bead ( Phyllanthus) urinaria ), also called young or pearlescent, grows mainly in fields or grasses. It is 15 ~ 40cm high, reddish, and branches are spread. It has narrow wings on branches, leaves are alternately arranged in two rows, and look like feathery leafs. There are several triangular leaves with the eggs upside down. The leaves are oval, rounded at the ends, and flat at the edges. The leaf back is white and the petiole is short. Flowers are monogamous, bloom in July-August, and reddish brown. Six cases, three surgery, one pistil. Fruits are capsules, obovate, without sack, reddish brown, with lateral wrinkles. Similar to fox pockets but without fruit sacks, widely distributed in Korea, Japan, and tropical and subtropical regions. Fox beads also have therapeutic effects against species caused by enteritis, dysentery, infectious hepatitis and nephritis, urinary tract infections, nominal, markers of infants, eyeballs, soles and cotton swelling, and can be added to cosmetics for whitening effects. It is known.
대한민국 공개특허공보 제2004-59004호에는 진주초 추출물, 첨미우 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 생성 억제 활성을 갖는 식물 추출물을 함유하는 피부 미백용 조성물이 개시되어 있다.Korean Patent Laid-Open Publication No. 2004-59004 discloses a skin whitening composition containing a plant extract having melanin production inhibitory activity containing at least one selected from the group consisting of pearl leaf extracts, cucurbita extracts, and mixtures thereof as an active ingredient. Is disclosed.
또한 일본공개특허공보 평8-12566호에는 진주초 추출물(Phyllanthus niruri L.), 마티코(Piper elongatum Vahl. & Piper ungustifolium) 및 서양 쐐기풀(Urtica urens)로 이루어진 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상을 배합하여 함유하는 티로시나제 활성 저해제가 개시되어 있다.In addition, Japanese Patent Application Laid-Open No. 8-12566 discloses pearl leaf extract ( Phyllanthus) niruri L.), do Atlantico (Piper elongatum Vahl. & Piper ungustifolium ) and Western Nettle ( Urtica) A tyrosinase activity inhibitor containing a combination of one or two or more selected from the group consisting of urens ) is disclosed .
이에, 본 발명자들은 피부 노화를 억제하는 항노화용 화장품을 연구하던 중 여우구슬 추출물이 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1을 억제하고, DNA 손상을 보호하며, 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제하고, 종양괴사인자-α의 생합성을 억제함으로써 항노화, 항산화 또는 주름개선 효과를 나타내는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.Thus, the present inventors while studying the anti-aging cosmetics to inhibit skin aging, fox bead extract promotes collagen production in the skin, inhibits MMP-1, protects DNA damage, biosynthesis of cyclooxygenase-2 The present invention was found to exhibit anti-aging, antioxidant or anti-wrinkle effect by inhibiting the biosynthesis of tumor necrosis factor-α.
따라서, 본 발명의 목적은 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1을 억제하고, DNA 손상을 보호하며, 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제하고, 종양괴사인자-α의 생합성을 억제하여 항노화, 항산화 또는 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to promote collagen production in the skin, to inhibit MMP-1, to protect DNA damage, to inhibit the biosynthesis of cyclooxygenase-2, to inhibit the biosynthesis of tumor necrosis factor-α It is to provide a cosmetic composition having an anti-aging, antioxidant or anti-wrinkle effect.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition for anti-aging containing the fox bead extract as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antioxidant cosmetic composition containing the fox bead extract as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving wrinkles containing fox bead extract as an active ingredient.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1을 억제하고, DNA 손상을 보호하며, 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 억제하고, 종양괴사인자-α의 생합성을 억제하여 항노화, 항산화 또는 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공할 수 있었다.The cosmetic composition according to the present invention contains the fox bead extract as an active ingredient to promote collagen production in the skin, inhibit MMP-1, protect DNA damage, inhibit the biosynthesis of cyclooxygenase-2, tumor By suppressing the biosynthesis of necrosis factor-α it was possible to provide a cosmetic composition having an anti-aging, antioxidant or anti-wrinkle effect.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명은 여우구슬 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용, 항산화용 또는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for anti-aging, antioxidant or wrinkle improvement containing the fox bead extract as an active ingredient.
본 발명에서 사용하는 여우구슬 추출물은 여우구슬을 당업계에 잘 알려진 방법으로 물 또는 유기용매로 추출하여 제조할 수 있다. 본 발명에서 사용하는 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으며, 또는 이들 유기용매와 물과의 혼합용매를 사용할 수도 있다. 바람직하게는 80% 에탄올을 사용할 수 있다.The fox bead extract used in the present invention may be prepared by extracting the fox bead with water or an organic solvent by a method well known in the art. The organic solvent used in the present invention may be one or more selected from the group consisting of ethanol, methanol, butanol, ether, ethyl acetate and chloroform, or a mixed solvent of these organic solvents and water may be used. Preferably 80% ethanol can be used.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기 여우구슬 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001∼10 중량% 로 함유할 수 있으며, 바람직하게는 0.01∼5 중량%로 함유할 수 있다. 상기 여우구슬 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 항노화, 항산화 및 주름 개선 효과를 얻을 수 없고, 10 중량%를 초과하면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문에 오히려 비효율적이다.The cosmetic composition according to the present invention may contain the fox bead extract in an amount of 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the composition, preferably 0.01 to 5% by weight. If the content of the fox bead extract is less than 0.001% by weight, anti-aging, anti-oxidation and anti-wrinkle effect may not be obtained by the extract.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.Cosmetic compositions according to the invention may be formulated containing a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base. These are all formulations suitable for topical application, for example emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) obtained by dispersing an oil phase in solutions, gels, solids, pasty anhydrous products, aqueous phases and It may be provided in the form of a nonionic vesicle dispersant or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick. These compositions can be prepared according to conventional methods in the art. The composition according to the invention can also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.The cosmetic composition according to the present invention is a fatty substance, an organic solvent, a dissolving agent, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, an ionic or nonionic. Such as type emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants, chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in cosmetics. It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic or dermatology field. Such adjuvants are introduced in amounts generally used in the cosmetic or dermatological arts.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바 디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention is not particularly limited in the formulation, for example, supple cosmetics, astringent cosmetics, nourishing cosmetics, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, eye essence, cleansing cream, cleansing foam, It may be formulated into cosmetics such as cleansing water, packs, powders, body lotions, body creams, body oils and body essences.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실험예 및 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Test Examples. However, these experimental examples and examples are provided only for the purpose of illustration in order to help the understanding of the present invention is not limited to the scope and scope of the present invention.
[실시예 1] 여우구슬 추출물 제조Example 1 Preparation of Fox Bead Extract
건조한 여우구슬 0.5kg에 중량비 4배의 70% 에탄올 수용액 2ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 25℃에서 3일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하였고, 분리된 여액을 감압 농축하여 여우구슬 추출물을 얻었다.2 l of a 70% ethanol aqueous solution of 4 times the weight ratio was added to 0.5 kg of dry fox beads, and the mixture was extracted three times under reflux, and then deposited at 25 ° C. for 3 days. Thereafter, the residue and the filtrate were separated through filter cloth filtration and centrifugation. The separated filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a fox bead extract.
[시험예 1] 여우구슬 추출물의 항산화 효과Test Example 1 Antioxidant Effect of Fox Bead Extract
자외선(UV) 조사에 의하여 세포에서 발생하는 활성산소(ROS; Reactive oxygen species)를 제거하는 능력을 비교하는 실험을 통하여 항산화 효과를 조사하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 양성대조군으로서 일반적으로 항산화 효과를 비교하는데 사용하는 트롤록스(trolox)를 사용하였으며, 시험물질을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.Antioxidant effect was investigated through an experiment comparing the ability to remove reactive oxygen species (ROS) generated in the cells by ultraviolet (UV) irradiation, the results are shown in FIG. As a positive control, trolox, which is generally used to compare antioxidant effects, was used, and a group without treatment of test substance was used as a control.
도 1의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 여우구슬 추출물은 인간 HaCaT 각질형성세포 단층 배양 시스템(human HaCaT keratinocytes monolayer culture system)에서 대조군에 비하여 UV에 의해 생성된 활성 산소를 유의적으로 소거하는 효과를 나타내었다. 이는 항산화 물질의 활성지표로 사용되는 트롤록스와 유사한 정도의 우수한 활성이었으며, 이를 통하여 본 발명의 실시예 1에 의한 여우구슬 추출물이 피부 노화의 원인이 되는 활성 산소를 유의적으로 소거함으로써 피부의 주름 생성 및 탄력 저하를 예방하는 효과를 가질 수 있음을 확인하였다.In the results of Figure 1, the fox bead extract of Example 1 according to the present invention significantly erases the active oxygen generated by UV compared to the control in the human HaCaT keratinocytes monolayer culture system (human HaCaT keratinocytes monolayer culture system) It showed an effect. This was an excellent activity similar to trolox used as an activity indicator of the antioxidant substance, through which the fox bead extract according to Example 1 of the present invention significantly eliminates free radicals that cause skin aging by wrinkles of the skin It was confirmed that it can have an effect of preventing the production and elasticity degradation.
[시험예 2] 단세포 겔 전기영동(Single cell gel electrophoresis; SCGE, Comet assay)에 의한 DNA 산화적 손상에 대한 억제 활성Test Example 2 Inhibitory Activity against DNA Oxidative Damage by Single Cell Gel Electrophoresis (SCGE, Comet Assay)
사람의 정상 섬유아세포를 24hr 배양한 후 실시예 1의 여우구슬 추출물과 비타민 E를 각각 농도별로 처리하고, 12hr 후에 양성대조군인 H2O2(최종농도 10-3M)를 처리한 다음 전기영동법으로 염색한 결과를 형광현미경으로 관찰하였다. 이때 이미지 아날라이저(image analyzer)인 KOMET 3.1(Kinetic Imaging, England)를 사용하여 25개의 각 세포에서 DNA 절단의 결과로 나타난 테일(tail)의 길이(um)를 분석하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.After culturing human fibroblasts for 24hr, the fox bead extract and vitamin E of Example 1 were treated for each concentration, and after 12hr, H 2 O 2 (final concentration 10-3M), which was a positive control, was treated by electrophoresis. The stained result was observed by fluorescence microscope. At this time, the length (um) of the tail resulting from DNA cleavage in each of 25 cells was analyzed using KOMET 3.1 (Kinetic Imaging, England), an image analyzer, and the results are shown in Table 1 below. Indicated.
상기 표 1의 결과에서, 세포 겔 전기영동에 의한 실시예 1의 여우구슬 추출물은 유의성 있는 산화적 DNA 손상 억제 활성을 나타내었으며, 이로 인해 본 발명에 의한 여우구슬 추출물이 히드록실 라디칼(.OH)에 의한 DNA 싱글 스트랜드 브레이크(single strand break)를 억제하는 DNA 산화적 손상억제제로서 작용함을 확인할 수 있었다. In the results of Table 1, the fox bead extract of Example 1 by cell gel electrophoresis showed significant oxidative DNA damage inhibitory activity, whereby the fox bead extract according to the present invention is a hydroxyl radical (.OH) It was confirmed that it acts as a DNA oxidative damage inhibitor that inhibits the DNA single strand break.
[시험예 3] I형 프로콜라겐 분석(Type I Procollagen assay)Test Example 3 Type I Procollagen Assay
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 실시예 1의 여우구슬 추출물 1ppm 및 10ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 3일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 I형 프로콜라겐(type I procollagen)의 양을 정량하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 상기 결과는 실시예 1의 여우구슬 추출물을 포함하지 않은 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군으로 TGF-b를 사용하였다.Human fibroblasts were cultured in a 12-hole plate incubator at a concentration of 10 5 and then replaced with a medium containing 1 ppm and 10 ppm of fox bead extract of Example 1. On day 3 of culture, the cells were harvested and the amount of type I procollagen produced by ELISA was quantified, and the results are shown in FIG. 2. The results were calculated as a comparison with the measured value of the control group that does not contain the fox bead extract of Example 1 as 100, TGF-b was used as a positive control.
도 2의 결과에서 보여지는 바와 같이, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템(Normal human fibroblast monolayer culture system)에서 실시예 1의 여우구슬 추출물은 대조군에 비하여 I형 프로콜라겐 생성을 뚜렷하게 촉진시키는 효과를 나타내었다. 즉, 실시예 1의 여우구슬 추출물은 인체 피부의 노화에 의해 발생하는 콜라겐 생성량 감소 현상을 억제할 수 있었고, 주름 개선효과를 나타내었다. As shown in the results of Figure 2, the fox bead extract of Example 1 in the normal human fibroblast monolayer culture system showed an effect of markedly promoting the production of type I procollagen compared to the control group . In other words, the fox bead extract of Example 1 was able to suppress the decrease in collagen production caused by aging of the human skin, and showed a wrinkle improvement effect.
[시험예 4] MMP-1 발현 억제 분석Test Example 4 Analysis of MMP-1 Expression Inhibition
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 40mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 여우구슬 추출물 1ppm 및 10ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 MMP-1(matrix metalloproteinase I)의 양을 정량하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 상기 결과는 시험물질을 포함하지 않는 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군은 TGF-b를 사용하였다.Human fibroblasts were cultured in a 12-hole plate incubator at a concentration of 10 5 and then irradiated with ultraviolet B at 40 mJ / cm 2, and then replaced with a medium containing 1 ppm and 10 ppm of fox bead extract of Example 1. The cells were harvested on the second day of culture (harvest) to quantify the amount of MMP-1 (matrix metalloproteinase I) produced by the ELISA method, and the results are shown in FIG. 3. The result was calculated as a comparison with the value measured by the UV control group containing no
도 3의 결과에서 보여지는 바와 같이, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템에서 본 발명에 의한 실시예 1의 여우구슬 추출물은 UVB 40 mJ/㎠에 의해서 유도되는 MMP-1의 발현을 유의적으로 억제하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 여우구슬 추출물은 내적 노화 또는 외적 환경요인에 의하여 발생하는 피부조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 저해하여 피부노화를 억제하고 주름개선에 효과가 있음을 확인하였다.As shown in the results of Figure 3, the fox bead extract of Example 1 according to the present invention in the human normal fibroblast monolayer culture system significantly inhibited the expression of MMP-1 induced by UVB 40 mJ / ㎠ . Therefore, the fox bead extract of Example 1 according to the present invention inhibits the biosynthesis of the skin tissue degrading enzyme MMP-1 caused by internal aging or external environmental factors, inhibits skin aging and is effective in improving wrinkles It was.
[시험예 5] 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2(COX-2)의 생합성 억제 효과Test Example 5 Effect of Inhibiting Biosynthesis of Cyclooxygenase-2 (COX-2) by Ultraviolet Rays
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선A를 15J/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 여우구슬 추출물을 각각 0.1pp, 1ppm 및 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 시험물질을 함유하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 농도계(densitometer)로 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Human fibroblasts were cultured in a 12-hole plate incubator at a concentration of 10 5 and then irradiated with UVA at 15 J / cm 2, and the fox bead extract of Example 1 was replaced with a medium containing 0.1pp, 1ppm and 10ppm, respectively. Cells were harvested on the second day of culture (harvest) and the amount of cyclooxygenase-2 (COX-2) produced was quantified using the Western blot method. The UV control group containing no test substance was calculated as 100 and compared with the value measured by a densitometer, and the results are shown in Table 2 below.
상기 표 2의 결과로부터, 실시예 1의 여우구슬 추출물은 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켰으며, COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2(PGE2)에 의한 피부조직분해를 방지하는 것을 확인할 수 있었다. From the results of Table 2, the fox bead extract of Example 1 concentration-dependently reduced the biosynthesis of cyclooxygenase-2 by ultraviolet light, skin tissue degradation by the prostaglandin E2 (PGE2) product of COX-2 Could be prevented.
[시험예 6] 자외선에 의한 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성 억제 효과Test Example 6 Inhibition of Biosynthesis of Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) by UV Light
인체 각질형성세포를 105개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선B를 30mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 여우구슬 추출물을 각각 0.1pp, 1ppm 및 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 6-24시간 후 세포를 수확해서(harvest) ELISA(Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF-α)의 양을 정량하였으며, 시험물질을 처리하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.Human keratinocytes were cultured in a 12-hole plate incubator at a concentration of 10 5 and then irradiated with UVB at 30mJ / cm 2, and the fox bead extract of Example 1 was replaced with a medium containing 0.1pp, 1ppm and 10ppm, respectively. After 6-24 hours of culture, the cells were harvested (harvest) and the amount of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) generated using the ELISA (Pharmingen 555212) method was quantified. The results calculated by comparison with the measured values are shown in Table 3 below.
상기 표 3의 결과로부터, 본 발명에 의한 실시예 1의 여우구슬 추출물이 자외선에 의한 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 종양괴사인자알파의 생합성으로 인해 발생할 수 있는 피부노화를 미연에 방지할 수 있음을 확인하였다. From the results of Table 3, the fox bead extract of Example 1 according to the present invention may be caused by the biosynthesis of tumor necrosis factor alpha by reducing the concentration of biosynthesis of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) by ultraviolet radiation It was confirmed that skin aging can be prevented beforehand.
[실시예 2 및 비교예 1]Example 2 and Comparative Example 1
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 실시예 2 및 비교예 1의 영양크림을 통상적인 방법으로 각각 제조하였다(단위: 중량%)Nutritional creams of Example 2 and Comparative Example 1 were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 4 below (unit: wt%).
[시험예 7] 인체피부를 대상으로 한 피부주름 개선 효과[Test Example 7] skin wrinkle improvement effect on human skin
30-50세의 안면주름이 있는 시험대상자 40명을 대상으로 하여 피검자의 안면 좌부에는 실시예 2를, 우부에는 비교예 1을 3개월간 사용하게 한 후 이들의 피부주름 개선 효과를 비교평가하였다. 크림사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 크림사용 3개월 후 동일 부위를 재측정하였다. 24℃, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름을 레플리카(replica)로 떠서 비시오메타 시스템(Visiometer system; C+K사)으로 피부주름을 측정하였다. 피부주름의 변화량은 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.Forty subjects with facial wrinkles of 30-50 years old were subjected to Example 2 on the left side of the subject and Comparative Example 1 on the right side for 3 months, and then the skin wrinkle improvement effects were compared and evaluated. The skin condition of both sides of the face before the use of the cream was measured and the same site was remeasured three months after the use of the cream. In the constant temperature and humidity room of 24 ° C. and 40% RH, the wrinkles at the tail of the eyes were replicated, and skin wrinkles were measured using a Visiometer system (C + K). The amount of change in skin wrinkles was calculated according to
상기 수학식 1에서, "Tdi"는 D90에서의 측정부위값이며, "Tdo"는 D0에서의 측정부위 값이다.In
상기 수학식 1에 따라 계산한 결과, 비교예 1을 사용한 부위의 피부주름은6.5±4%(평균±표준편차)의 감소치를 나타낸 반면, 실시예 2를 사용한 부위의 피부주름은 39±11%의 감소치를 보여 우수한 피부주름 개선효과를 나타내었다.As a result of the calculation according to
[시험예 8] 인체에서 피부 탄력 개선 효과Test Example 8 Skin Elasticity Improvement Effect in Human Body
30세 이상의 여성 40명을 대상으로 2개조로 나누어, 각 조에 상기 실시예 2 및 비교예 1의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부 탄력 개선 효과를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 표 5의 결과값은 피부탄력측정기의 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 의미한다.Forty women over 30 years old were divided into two sets, and each set of nutritional creams of Example 2 and Comparative Example 1 was applied to the face twice a day for 12 weeks, followed by a skin elasticity tester (Cutometer SEM 575, C + K Electronic Co., Germany) to measure the skin elasticity improvement effect, the results are shown in Table 5 below. The results in Table 5 refer to the properties of skin viscoelasticity of the skin elasticity tester.
상기 표 5의 결과에서 보여지는 바와 같이, 실시예 1의 여우구슬 추출물이 함유된 실시예 2의 영양크림을 사용한 경우 150% 가량 피부탄력 증진효과를 나타내었다.As shown in the results of Table 5, when using the nutrition cream of Example 2 containing the fox bead extract of Example 1 showed about 150% skin elasticity enhancing effect.
상기와 같이, 본 발명에 의한 여우구슬 추출물을 함유한 실시예 2를 사용함으로써 피부 주름 및 피부 탄력을 개선시켜 피부노화를 억제하고 지연시키는데 기여할 수 있음을 확인할 수 있었다.As described above, it could be confirmed that by using Example 2 containing the fox bead extract according to the present invention, skin wrinkles and skin elasticity could be improved to contribute to inhibiting and delaying skin aging.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)Formulation Example 1 Flexible Cosmetic (Skin Lotion)
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)Formulation Example 2 Nutritious Longevity (Milk Lotion)
[제형예 3] 마사지크림Formulation Example 3 Massage Cream
[제형예 4] 팩[Formulation Example 4] Pack
도 1은 실시예 1의 여우구슬 추출물의 활성산소 제거 활성을 보여주는 그래프이다.1 is a graph showing the active oxygen removal activity of the fox bead extract of Example 1.
도 2는 실시예 1의 여우구슬 추출물의 콜라겐 생성량을 측정한 그래프이다.Figure 2 is a graph measuring the collagen production amount of the fox bead extract of Example 1.
도 3은 실시예 1의 여우구슬 추출물의 MMP-1 생합성 저해 효과를 측정한 그래프이다.Figure 3 is a graph measuring the inhibitory effect of MMP-1 biosynthesis of the fox bead extract of Example 1.
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