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KR20090031597A - 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체 - Google Patents

콤브레타스타틴류의 고분자 결합체 Download PDF

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Publication number
KR20090031597A
KR20090031597A KR1020097001867A KR20097001867A KR20090031597A KR 20090031597 A KR20090031597 A KR 20090031597A KR 1020097001867 A KR1020097001867 A KR 1020097001867A KR 20097001867 A KR20097001867 A KR 20097001867A KR 20090031597 A KR20090031597 A KR 20090031597A
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KR
South Korea
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group
combretastatins
integer
polymer
polymer conjugate
Prior art date
Application number
KR1020097001867A
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English (en)
Inventor
마사유키 키타가와
케이조우 이시카와
아키라 마스다
카즈토시 타카시오
Original Assignee
니폰 가야꾸 가부시끼가이샤
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Publication date
Application filed by 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤 filed Critical 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤
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Abstract

개체차를 발생시키기 쉬운 생체의 효소에 의존함이 없이 약제의 방출이 가능하고, 유효한 치료 효과를 기대할 수 있으며, 수용성을 갖는 콤브레타스타틴류의 신규 유도체가 요구되고 있다. 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 폴리아스파라긴산이나 폴리글루타민산 등의 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 제공한다.
콤브레타스타틴, 고분자 결합체, 블록 공중합체, 항암제

Description

콤브레타스타틴류의 고분자 결합체{Polymer Conjugate of Combretastatin}
본 발명은 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체, 그의 제조방법 및 그의 용도에 관련된다.
콤브레타스타틴은 1980년대에 아프리카의 수목인 콤브레툼 카프룸(Combretum caffrum) 등에서 단리되어 튜블린 중합 저해 활성이 확인되었다. 특히, 혈관내피 세포에 형태학적인 변화를 일으켜 혈류 억제 활성을 갖는다. 따라서, 고형암 또는 류마티스성 관절염 등의 신혈관 형성에 관련된 질환의 치료제로서 기대되고 있다. 또한, 콤브레타스타틴류의 제조방법은 비특허문헌 1에 개시되어 있다. 그러나, 콤브레타스타틴류는 일반적으로 물에 난용성이기 때문에 수용성을 부여하는 연구나 환부에서 효율적으로 약효를 발휘시키기 위한 연구가 수행되어 왔다.
지금까지는 콤브레타스타틴의 인산에스테르형 프로드럭(prodrug)의 제조방법이 특허문헌 1에 개시되었다. 또한 비특허문헌 2에 아미노기를 갖는 콤브레타스타틴 유도체, 및 그 유도체가 환부에서 선택적으로 약효를 발현하기 위한 아미노산 결합 프로드럭이 기술되어 있다.
한편, 난수용성 항암제로의 수용성 부가 또는 환부로의 집적을 목적으로, 고분자를 담체로 하는 연구도 수행되고 있다. 예컨대, 특허문헌 2나 특허문헌 3에는 폴리에틸렌글리콜을 결합한 프로드럭으로서의 난수용성 항암제의 고분자 유도체에 대하여 기재되어 있다. 그러나, 콤브레타스타틴류의 결합체에 대해서는 기재되어 있지 않다. 또한, 이러한 난수용성 항암제의 고분자 유도체는 구조상 폴리에틸렌글리콜 분자에 대하여 1~2개의 분자밖에 결합할 수 없다. 따라서, 유효량의 약제를 투여하기 위해서는 대량의 폴리머 투여가 필요하다.
특허문헌 4에는 미셀을 형성하여 수용성을 나타내는 폴리에틸렌글리콜 및 폴리아스파라긴산의 블록 공중합체에 약제를 결합한 분자가 기재되어 있다. 특허문헌 5에는 폴리에틸렌글리콜류와 폴리산성아미노산의 블록 공중합체의 측쇄 카르복시산기에 소수성 물질을 결합한 고분자 약물 운반체로서의 고분자 담체가 기재되어 있다. 특허문헌 6에는 폴리에틸렌글리콜류와 폴리글루타민산의 블록 공중합체의 측쇄 카르복시산 및 캄토테신류의 페놀성 수산기를 결합시킨 캄토테신류의 고분자 유도체가 기재되어 있다. 그러나, 특허문헌 4, 특허문헌 5, 특허문헌 6에는 콤브레타스타틴류의 결합체에 대하여 기재되어 있지 않다.
특허문헌 1: 국제공개 제02/06279호 팜플렛
특허문헌 2: 국제공개 제93/24476호 팜플렛
특허문헌 3: 특표평 10-513187호 공보
특허문헌 4: 특허 제2694923호 공보
특허문헌 5: 특허 제3268913호 공보
특허문헌 6: 국제공개 제04/39869호 팜플렛
비특허문헌 1: J. Org. Chem., 66, 8135-8138(2001)
비특허문헌 2: Anti-Cancer Drug Design, 14, 539-548(1999)
발명의 개시
발명이 해결하고자 하는 과제
비특허문헌 2에 기재된 콤브레타스타틴의 프로드럭은 콤브레타스타틴A-4와 비교하여 물에서의 용해도는 증가되어 있다. 그러나, 콤브레타스타틴A-4의 방출은 투여되는 피검체의 혈액 중의 내인성 아미노펩티다제에 의존하기 때문에 방출되는 약제의 효과에 개체 차를 발생시키는 문제가 있다.
특허문헌 1의 콤브레타스타틴의 인산 에스테르형 프로드럭은 콤브레타스타틴A-4와 비교하여 물에서의 용해도는 증가되어 있다. 그러나, 생체 투여직후에 인산 에스테르가 가수분해되는 것이 예상되고, 질환부까지 프로드럭이 전달되어 콤브레타스타틴A-4가 효과적으로 그 효과를 발휘할지가 불명확하다. 특허문헌 2나 특허문헌 3에 기재된 폴리에틸렌글리콜류 부분과 약제의 결합도 생체의 가수분해 효소에 의해 절단되는 것을 이용하여 약제의 운반과 방출을 제어하고 있다. 그러나, 생체의 가수분해 효소는 종차는 물론 동일종에서도 개체 차가 큰 것으로 여겨지고 있다. 따라서, 이러한 문헌에 기재되어 있는 약제 결합체에 대해서는, 약제와의 결합 절단이 생체의 가수분해 효소에 의존하기 때문에 방출되는 약제의 효과에 개체 차를 발생시키는 문제가 있다.
또한, 특허문헌 5에 기재되어 있는 아드리아마이신 결합체는 블록 공중합체와 아드리아마이신이 아미드 결합으로 결합되어 있다. 그러나, 아미드 결합은 화학적으로 안정한 결합 양식이기 때문에 가수분해에 의한 약제의 방출이 느리고, 그 약효에 의문이 있다.
콤브레타스타틴A-4 등의 콤브레타스타틴류 화합물은 유용한 항암제이지만 난용성이다. 따라서, 수용성을 갖고 항암활성이 우수한 신규한 유도체가 요구되고 있다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 검토를 거듭한 결과, 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 가수분해 효소에 의존함이 없이 콤브레타스타틴류를 방출하는 것을 밝혀내고, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 하기의 1)~15)에 관련된다.
1) 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
2) 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분이 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖는 폴리머인 상기 1)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
3) 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖는 폴리머가 폴리아스파라긴산인 상기 2)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
4) 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 하기 일반식(I)로 표시되는 화합물인 상기 1) 내지 3) 중 어느 하나에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
Figure 112009005689449-PCT00001
상기 식에서, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, d, e, f, g, h, i 또는 j는 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내며, 단 d+e는 1~200의 정수를 나타내고, 또 d+e+f+g+h+i+j는 3~200의 정수를 나타내고, 폴리아스파라긴산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다.
5) R1이 (C1~C6)알킬기이고, R2가 (C2~C6)알킬렌기이며, R3가 (C1~C6)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, d, e, f, g, h, i 또는 j가 각각 독립적으로 0~100의 정수이고, 단 d+e가 1~100의 정수이며, 또 d+e+f+g+h+i+j가 6~100의 정수인 상기 4)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
6) R1이 (C1~C3)알킬기이고, R2가 (C2~C4)알킬렌기이며, R3가 (C1~C3)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, d, e, f, g, h, i 또는 j가 각각 독립적으로 0~90의 정수이고, 단 d+e가 1~90의 정수이며, 또 d+e+f+g+h+i+j가 15~90의 정수인 상기 4) 또는 5)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
7) 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분이 폴리글루타민산인 상기 1)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
8) 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 하기 일반식(II)로 표시되는 화합물인 상기 1) 또는 7)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
Figure 112009005689449-PCT00002
상기 식에서, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, k는 1~200의 정수를 나타내며, m, n은 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내고, 단 k+m+n은 3~200의 정수를 나타내고, 폴리글루타민산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다.
9) R1이 (C1~C6)알킬기이고, R2가 (C2~C6)알킬렌기이며, R3가 (C1~C6)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, k가 1~90의 정수이고, m,n이 각각 독립적으로 0~90의 정수이며, 단 k+m+n이 6~90의 정수인 상기 8)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
10) R1이 (C1~C3)알킬기이고, R2가 (C2~C4)알킬렌기이며, R3가 (C1~C3)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, k가 3~60의 정수이고, m,n이 각각 독립적으로 0~60의 정수이며, 단 k+m+n이 6~60의 정수인 상기 8) 또는 9)에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
11) 콤브레타스타틴류가 콤브레타스타틴 A-4인 상기 1) 내지 10) 중 어느 하나에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
12) 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기를 유기용매 중, 탈수축합제를 이용하여 에스테르 결합시켜 수득되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
13) 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기를 유기용매 중, 탈수축합제를 이용하여 에스테르 결합시키는 것을 특징으로 하는 상기 1) 내지 11) 중 어느 하나에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체의 제조방법.
14) 상기 1) 내지 12) 중 어느 하나에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 항암제.
15) 상기 1) 내지 12) 중 어느 하나에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 혈관표적화제.
발명의 효과
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있다. 따라서, 본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 생체의 가수분해 효소에 의존함이 없이 약제 방출이 가능하고, 개체차에 영향을 받기 어려운 유효한 치료 효과를 나타낸다.
발명을 실시하기 위한 최상의 형태
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있다. 본 발명에서 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머는 특별히 제한되는 것은 아니지만, 예컨대 2 이상의 숙신산모노아미드 구조부분을 갖는 폴리머 또는 폴리글리타민산 등을 들 수 있다.
본 발명에서 숙신산 모노아미드 구조부분은 -HNCO-C-C-CO2H 구조를 의미하고, 예컨대 숙신산 모노아미드(-HNCO-CH2-CH2-CO2H)나, 아스파라긴산의 2개의 카르복시산기 중 1개가 아미드화된 구조(-HNCO-CH(-NH-)-CH2-CO2H, 또는 -HNCO-CH2-CH(-NH-)-CO2H) 등을 들 수 있다. 이러한 숙신산 모노아미드 구조부분은 예컨대, 폴리아스파라긴산과 같이 폴리머의 주쇄를 구성하고 있어도 좋고, 또는 덱스트란 등의 폴리알코올, 폴리리신 등의 폴리아민, 폴리아스파라긴산 이외의 폴리카르복시산(예컨대, 폴리젖산 등)으로부터 이루어지는 주쇄 폴리머의 관능기에 결합한 것이어도 좋다.
숙신산 모노아미드 구조부분은 환화구조(숙신산 이미드)로 변화함에 따라 수산기를 갖는 화합물을 유리하는 것으로 여겨진다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체의 폴리머에서 폴리에틸렌글리콜 구조부분으로서는 양 말단 또는 편 말단이 수식된 폴리에틸렌글리콜을 들 수 있고, 양 말단이 수식되어 있는 경우, 그 수식기는 동일해도 상이해도 좋다. 상기 수식기로서는 치환기를 갖고 있어도 좋은 (C1~C6)알킬기를 들 수 있다. 치환기를 갖고 있어도 좋은 (C1~C6)알킬기의 알킬기로서는 하기의 알킬기를 들 수 있고, 바람직하게는 (C1~C4)알킬기를 들 수 있으며, 예컨대 메틸기, 에틸기, n-프로필기, n-부틸기 등이다. 치환기를 갖고 있어도 좋은 (C1~C6)알킬기의 치환기로는 예컨대, 아미노기, 메틸아미노기, 디메틸아미노기, 에틸아미노기, 디에틸아미노기 등을 들 수 있다.
폴리에틸렌글리콜 구조부분의 분자량으로는 300~500000 정도이고, 바람직하게는 500~100000 정도, 보다 바람직하게는 1000~50000 정도이다.
본 발명에서 폴리에틸렌글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 구조부분의 블록 공중합체의 분자량은 500~500000 정도, 바람직하게는 600~100000 정도, 보다 바람직하게는 800~80000 정도이다.
또한, 본 발명에서 분자량은 GPC 법으로 측정한 중량 평균 분자량이다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서, 폴리에틸렌글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 결합하는 콤브레타스타틴류의 결합량은 총 카르복시산기의 1~100%, 바람직하게는 1~90%, 보다 바람직하게는 2~60%이다.
본 발명에서 콤브레타스타틴류는 수산기를 갖고, 또 항종양 활성을 갖고 있는 콤브레타스타틴 골격 화합물, 즉 산소 관능기를 갖고 있는 스틸벤 구조를 갖는 화합물이면 특별히 한정되지는 않는다. 상기 콤브레타스타틴류로는 예컨대, 하기 식으로 표시되는 콤브레타스타틴A-1(III), 콤브레타스타틴A-4(IV), AC-7700(V) 등을 들 수 있다. 콤브레타스타틴류의 수산기로는 예컨대, 하기 식과 같이 페놀성 수산기 및 알코올성 수산기를 들 수 있으며, 그 치환 위치도 한정되지 않는다.
Figure 112009005689449-PCT00003
Figure 112009005689449-PCT00004
Figure 112009005689449-PCT00005
본 발명에서 2 이상의 숙신산 모노아미드 구조부분으로는 폴리아스파라긴산이 바람직하다. 또한 다른 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분으로서는 폴리글루타민산이 바람직하다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체로서 바람직하게는 폴리아스파라긴산을 함유하는 상기 일반식(I)[식 중, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, d, e, f, g, h, i 또는 j는 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내며, 단 d+e는 1~200의 정수를 나타내고, 또 d+e+f+g+h+i+j는 3~200의 정수를 나타내고, 폴리아스파라긴산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다]로 표시되는 화합물, 또는 폴리글루타민산을 함유하는 상기 일반식(II)[식중, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, k는 1~200의 정수를 나타내며, m, n은 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내고, 단 k+m+n은 3~200의 정수를 나타내고, 폴리글루타민산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다]로 표시되는 화합물을 들 수 있다.
일반식(I) 또는 (II)의 R1에서 (C1~C6)알킬기로는 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C6)알킬기를 들 수 있다. 그 중에서도 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C4)알킬기가 바람직하고, 특히 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C3)알킬기가 바람직하다. 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C6)알킬기로는 예컨대 메틸기, 에틸기, n-프로필기, i-프로필기, n-부틸기, t-부틸기, n-펜틸기, n-헥실기 등을 들 수 있다. 특히 메틸기, 에틸기, n-프로필기, i-프로필기가 바람직하고, 메틸기가 가장 바람직하다.
일반식(I) 또는 (II)의 R2로 표시되는 결합기로는 특별히 한정되는 것은 아니지만 (C2~C6)알킬렌기를 들 수 있고, (C2~C4)알킬렌기가 바람직하며, 예컨대 에틸렌기, 트리메틸렌기, 부틸렌기 등을 들 수 있고, 트리메틸렌기가 특히 바람직하다.
상기 일반식(I) 또는 (II)의 R3에서 (C1~C6)아실기로는 특별히 한정되는 것은 아니지만 예컨대 포르밀기, 아세틸기, 프로피오닐기, 피발로일기 등을 들 수 있고, 아세틸기가 바람직하다.
상기 일반식(I) 또는 (II)의 R4에서 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기에 있어서 콤브레타스타틴류로는 상기 콤브레타스타틴류를 들 수 있다. 폴리머 부분의 카르복시산기와 탈수 축합제에 의해 에스테르 결합을 하는 수산기를 가지며, 또 항종양 활성을 갖는 콤브레타스타틴류이면 특별히 한정되지 않는다. 상기 콤브레타스티탄류로는 예컨대 상기 콤브레타스타틴A-4를 들 수 있다.
상기 일반식(I) 또는 (II)의 R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택된 기를 나타내고, R6, R7은 동일해도 상이해도 좋은 (C3~C6)환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기이다. 일반식(I) 또는 (II)의 R5로서는 하나의 분자 중 동일해도 상이해도 좋고, 또 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에 사용되는 폴리머에서 단일이어도 혼합물이어도 좋다.
상기 (C1~C30)알콕시기로는 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C30)알콕시기를 들 수 있고, 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C10)알콕시기가 바람직하며, 예컨대 메톡시기, 에톡시기, n-프로폭시기, i-프로폭시기, n-부톡시기, t-부톡시기 등을 들 수 있고, (C7~C30)아랄킬옥시기로서는 직쇄 또는 분지쇄의 (C7~C30)아랄킬옥시기를 들 수 있고, 직쇄 또는 분지쇄의 (C7~C12)아랄킬옥시기가 바람직하며, 예컨대 4-페닐부톡시기 등을 들 수 있다.
상기 (C1~C30)알킬아미노기 또는 디(C1~C30)알킬아미노기로는 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C30)알킬아미노기 또는 디(C1~C30)알킬아미노기를 들 수 있고, 직쇄 또는 분지쇄의 (C1~C20)알킬아미노기 또는 디(C1~C20)알킬아미노기가 바람직하며, 예컨대 메틸아미노기, 에틸아미노기, n-프로필아미노기, i-프로필아미노기, n-부틸아미노기, t-부틸아미노기, 디메틸아미노기, 디에틸아미노기, 디부틸아미노기 등을 들 수 있다.
상기 카르복시기가 보호된 아미노산으로는 통상의 펩티드 합성에 사용되는 카르복시기가 보호된 아미노산을 들 수 있고, 예컨대 페닐알라닌 벤질 에스테르 등이 바람직하다.
일반식(I) 또는 (II)의 R5에서 -N(R6)CONH(R7)[R6, R7은 동일해도 상이해도 좋은 (C3~C6)환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기임]로서는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예컨대 시클로헥실아미노카르보닐시클로헥실아미노기, 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기 등을 들 수 있다.
본 발명의 상기 일반식(I)로 표시되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서 2 이상의 숙신산 모노아미드 구조부분인 폴리아스파라긴산에는 α-아미노산형, β-아미노산형, 환화한 것 등의 구성 단위가 있지만, 폴리아스파라긴산 모두가 환화한 것은 포함되지 않는다. 이러한 구성단위의 결합순서는 한정되지 않으며, 블록형이어도 랜덤형이어도 좋다. 또한 각 구성단위는 L형이어도 D형이어도 좋다.
상기 일반식(I)로 표시되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서 전체 아스파라긴산 수는 d+e+f+g+h+i+j로 표시되고, 3~200개 정도이며, 바람직하게는 6~100개 정도이고, 특히 바람직하게는 15~90개 정도이다. 전체 아스파라긴산수는 예컨대 폴리에틸렌글리콜 구조부분과 폴리아스파라긴산의 블록 공중합체 제조시에서 반응 주입량에 의해 자유롭게 변경할 수 있다.
전체 아스파라긴산 수(d+e+f+g+h+i+j)에 대한 콤브레타스타틴류에 결합한 아스파라긴산 수(d+e)의 비율은 1~100%, 바람직하게는 3~90%, 보다 바람직하게는 4~60%이다. 또 아스파라긴산 수(d+e)로서 1~200개 정도, 바람직하게는 1~100개 정도, 특히 바람직하게는 1~90개 정도이다. 콤브레타스타틴류의 결합 비율은 예컨대 블록 공중합체와 콤브레타스타틴류의 결합 반응시 반응 주입량에 따라 변경할 수 있으며, 후기하는 바와 같이 반응액의 분석으로 구할 수 있다.
전체 아스파라긴산 수(d+e+f+g+h+i+j)에 대한 α-아미노산형(d+f+h)의 비율은 10~100%이고, 바람직하게는 20~100%이다. 그 비율은 예컨대 폴리아스파라긴산의 보호기의 탈보호 조건 등을 선택하는 것에 의해 적절하게 변경할 수 있다.
본 발명의 상기 일반식(II)로 표시되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서 폴리글루타민산은 α-아미노산형이며, L 형이어도 D형이어도 좋다.
본 발명의 상기 일반식(II)로 표시되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서 전체 글루타민산수는 k+m+n으로 표시되고, 3~200개 정도이며, 바람직하게는 6~90개 정도이고, 특히 바람직하게는 6~60개 정도이다. 전체 글루타민산수는 예컨대 폴리에틸렌글리콜 구조부분과 폴리글루타민산의 블록 공중합체의 제조시에 반응 주입량에 따라 자유롭게 변경할 수 있다.
전체 글루타민산수(k+m+n)에 대한 콤브레타스타틴류에 결합한 글루타민산수(k)의 비율은 1~100%, 바람직하게는 3~90%, 보다 바람직하게는 4~60%이다. 또한, 글루타민산수(k)로서 1~200개 정도, 바람직하게는 1~90개 정도, 특히 바람직하게는 3~60개 정도이다. 콤브레타스타틴류의 결합 비율은 예컨대, 블록 공중합체와 콤브레타스타틴류의 결합 반응시에 반응 주입량에 따라 변경할 수 있고, 또한 반응액의 분석에 의해 구할 수 있다.
상기 일반식(II)로 표시되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체에서 글루타민산 구조의 각 구성부분은 그 결합 순서가 한정되지 않으며 블록형이어도 랜덤형이어도 좋다.
상기 일반식(I) 또는 (II)의 t는 5~11500 정도의 정수이지만, 바람직하게는 8~2300 정도의 정수이며, 보다 바람직하게는 100~300 정도의 정수이다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 수중에서 폴리에틸렌글리콜 구조부분을 외부 쉘(shell)로 하는 미셀을 형성해도 좋다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 폴리에틸렌글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머의 카르복시산기 및 콤브레타스타틴류의 수산기를 유기 용매 중, 탈수 축합제를 이용하여 에스테르 결합시키는 것에 의해 수득되며, 상기 제조방법도 본 발명에 포함된다. 즉, 예컨대 특허문헌 5에 기재된 방법으로 제조되는 폴리에틸렌글리콜 구조부분-폴리아스파라긴산의 블록 공중합체, 또는 특개평 5-955호 공보에 기재된 방법으로 제조되는 폴리에틸렌글리콜 구조부분-폴리글루타민산 블록 공중합체, 필요에 따라 반응시키는 기 이외의 관능기를 보호한 콤브레타스타틴류를 양자가 용해하는 유기 용매 중, 0~180℃, 바람직하게는 5~50℃에서 탈수 축합제를 이용한 축합반응에 따른 제조방법이다. 또한, 상기 축합반응시에 반응 보조제를 사용해도 좋다. 상기 축합반응에 사용하는 유기용매는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 바람직하게는 N-디메틸포름아미드((DMF), 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논(DMI), N-메틸피롤리돈(NMP) 등의 비프로톤성 극성 용매이다. 탈수 출합제는 디시클로헥실카르보디이미드(DCC), 디이소프로필카르보디이미드(DIPC), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드염산염(WSC), 1-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드록시퀴놀리논(EEDQ) 등을 이용할 수 있다. 반응 보조제는 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP) 등을 이용할 수 있다. 축합반응 후, 통상의 분리정제 등의 조작에 의해 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 수득된다. 필요에 따라 탈보호를 수행한다. 예컨대, 콤브레타스타틴류가 AC-7700(V)인 경우에는 아미노기를 t-부톡시카르보닐기 등의 보호기에 의해 보호하고, 블록 공중합체와 축합반응에 제공한 후, 트리플루오로아세트산 등으로 탈보호하는 것에 의헤 제조할 수 있다.
또한, R5가 -N(R6)CONH(R7)기(R6, R7은 동일해도 상이해도 좋은 (C3~C6)환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기)인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체는 상기 카르보디이미드류를 축합제로서 이용하는 반응에 의해서도 수득된다.
일반식(I) 또는 (II)의 화합물 중의 R5가 (C1~C30)알콕시기, (C1~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기 또는 카르복시기가 보호된 아미노산인 화합물의 제조방법으로는, 폴리머의 카르복시산기를 활성화한 후 결합시키고 싶은 양의 대응하는 알코올, 또는 대응하는 아민이나 카르복시기가 보호된 아미노산 등을 염기성 조건 하에서 축합반응시키는 방법, 또는 대응하는 알코올, 대응하는 아민이나 카르복시기가 보호된 아미노산 등을 활성화시킨 후 폴리머에 축합반응시키는 방법 등이 가능하다. 폴리머를 정제한 후에 동일한 반응으로 폴리머 중의 미반응 카르복시산기를 재활성화시키고, 여기에 콤브레타스타틴류의 수산기를 축합시켜도 좋으며 또는 다른 알코올, 아민 등을 반복 반응시켜 R5가 다양한 치환기로 치환되어 있는 혼성체 폴리머를 합성하고, 이어서, 콤브레타스타틴류의 수산기를 축합시켜도 좋다. 또한 콤브레타스타틴류를 축합시킨 후에 (C1~C30)알콕시기, (C1~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기 또는 카르복시기가 보호된 아미노산 등을 도입해도 좋다.
단, 본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체의 제조방법은 상기 방법에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에는 본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 항암제도 포함된다. 또한 본 발명에는 본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 혈관표적화제, 즉, 혈류의 억제에 의한 신혈관 형성에 관련된 질환의 치료제, 예컨대 류마티스성 관절염, 노인황반변성증, 당뇨망박병증 등의 치료제도 포함된다. 상기 고분자 결합체는 주사제, 정제, 산제 등의 통상 사용되는 제형으로 사용할 수 있다. 제제화에 통상 사용되고 있는 약학적으로 허용가능한 담체나 예컨대 결합제, 윤활제, 붕괴제, 용제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 보존제, 무통화제(soothing agent), 색소, 향료 등을 사용할 수 있다. 그 중에서도 주사제로서의 사용이 바람직하고, 예컨대 물, 생리 식염수, 5% 포도당 또는 만니톨 액, 수용성 유기 용매(예컨대, 글리세롤, 에탄올, 디메틸술폭시드, N-메틸피롤리돈, 폴리에틸렌글리콜, 크레모포 등 또는 이들의 혼합액) 또는 물 및 상기 수용성 유기 용매의 혼합액 등이 사용된다.
본 발명의 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체의 투여량은 환자의 성별, 연령, 생리적 상태, 병태 등에 따라 변경될 수 있지만, 예컨대 비경구적으로 통상 성인 1일 당 활성 성분으로서 0.01~500mg/㎡, 바람직하게는 0.1~250mg/㎡를 투여한다. 주사에 의한 투여는 정맥내, 동맥내, 환부(종양부) 등에 수행된다.
도 1은 본 발명의 실시예 1의 화합물 1 및 3((메톡시폴리에틸렌글리콜 유도체-폴리아스파라긴산)-콤브레타스타틴A-4 결합체)와 실시예 2의 화합물 2((메톡시폴리에틸렌글리콜 유도체-폴리글루타민산)-콤브레타스타틴A-4 결합체)의 PBS 용액(pH 7.1, 37℃) 중에서의 콤브레타스타틴A-4 결합체의 전체 결합량에 대한 방출 량의 비율을 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
화합물 1(분자량 5000의 메톡시폴리에틸렌글리콜 부분과 중합수가 30인 폴리아스파라긴산 부분으로 이루어진 블록 공중합체와 콤브레타스타틴A-4의 결합체: 일반식(I)의 R1=Me(메틸기), R2=트리메틸렌기, R3=Ac(아세틸기), R4=콤브레타스타틴A-4 잔기, R5=이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기, d+e+f+g+h+i+j=30, t=113)의 합성
특허문헌 5에 기재된 방법에 의해 제조한 메톡시폴리에틸렌글리콜폴리아스파라긴산 블록 공중합체(아스파라긴산 부분: α형과 β형의 결합체, 중합수 30, 2670mg) 및 비특허문헌 1에 기재된 방법으로 합성한 콤브레타스타틴A-4(600mg)을 DMF(60ml)에 용해하고, DMAP(174mg), DIPC(2.97mg)을 가하여 25℃에서 20시간 교반하였다. 반응액에 에틸아세테이트(180ml), 디이소프로필에테르(720ml)을 가하고, 실온에서 30분간 교반한 후 침전물을 여과하여 에틸아세테이트/디이소프로필에테르(1/4(v/v), 30ml)로 세정하였다. 수득한 침전물을 아세토니트릴/물(1/1(v/v), 100ml)에 용해한 후, 이온 교환 수지(다우 케미칼사제 다우엑스 50(H+), 15ml)의 컬럼에 통과시키고, 아세토니트릴/물(v/v), 20ml)로 용출하였다. 수득한 용출 분획 에 물(60ml)을 가하여 아세토니트릴을 감압하에 유거하고, 그 후 동결 건조하는 것에 의해 화합물 1(2670mg)을 수득하였다.
HPLC(고속액체크로마토그래피:컬럼;이나토실ODS-3(GL 사이언스사제), 용매계;0.1% 인산수용액-아세토니트릴(50%-50%(v/v)에 의해 반응액 중의 미반응 콤브레타스타틴A-4 양을 계량한 바, 화합물 1 중의 콤브레타스타틴A-4 함량은 10.4%(w/w), d+e+f+g+h+i+j에 대한 d+e의 비율은 10.6%이었다. 화합물 1 중, 유리 콤브레타스타틴A-4는 미검출되었다.
또한 R5로서 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기를 부가할 수 있고, 그 존재비는 화합물 1을 중수산화나트륨/중수/중아세토니트릴에 용해한 것의 1H-NMR(수소 핵 자기 공명 스펙트럼)로부터 구할 수 있고, 화합물 1에서 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기가 폴리아스파라긴산에 차지하는 비율, 즉 d+e+f+g+h+i+j에 대한 f+g의 비율은 16.2%이었다. 기타 아스파라긴산은 유리 카르복시산 (h+i) 또는 환상구조 (j)이다.
실시예 2
화합물 2(분자량 12000의 메톡시폴리에틸렌글리콜 부분과 중합수가 23인 폴리글루타민산 부분으로 이루어진 블록 공중합체와 콤브레타스타틴A-4의 결합체)의 합성: 일반식(II)의 R1=Me(메틸기), R2=트리메틸렌기, R3=Ac(아세틸기), R4=콤브레타스타틴A-4 잔기, R5=이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기, k+m+n=23, t=273)의 합성
특개평 5-955호 공보에 기재된 방법에 의해 제조한 메톡시폴리에틸렌글리콜폴리글루타민산 블록 공중합체(581mg)와 비특허문헌 1에 기재된 방법으로 합성한 콤브레타스타틴A-4(100mg)을 DMF(4.5mL)에 용해하고, DMAP(16.5mg), DIPC(0.283ml)을 가하여 20℃에서 40시간 교반하였다. 반응액에 DIPC(0.070ml)을 가하고, 25℃로 승온한 후 1.5시간 계속 교반하였다. 반응액에 에탄올(60ml) 및 디이소프로필에테르(240ml)를 가하고 실온에서 3시간 교반한 후, 침전물을 여과하여 에탄올/디이소프로필에테르(1/4(v/v), 50ml)로 세정하였다. 수득한 침전물을 아세토니트릴/물(1/1(v/v), 50ml)에 용해한 후, 이온교환수지(다우 케미칼사제 다우엑스 50(H+), 15ml) 컬럼에 통과시키고, 아세토니트릴/물(1/1(v/v), 50ml)로 용출하였다. 수득한 용출 분획에 물(3ml)을 가하여 아세토니트릴을 감압하에 유거하고, 그 후 동결 건조하는 것에 의해 화합물 2(550mg)을 수득하였다.
HPLC에 의해 반응액 중의 미반응 콤브레타스타틴A-4의 양을 계량한 바, 화합물 2 중의 콤브레타스타틴A-4 함량은 11.2%(w/w)이었다. 화합물 2 중, 유리 콤브레타스타틴A-4는 미검출되었다.
또한, R5로서 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기를 부가할 수 있고, 그 존재비는 화합물 2를 중수산화나트륨/중수/중아세토니트릴에 용해한 것의 1H-NMR로부터 구할 수 있고, 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기가 폴리아스파라긴산에 차지하는 비율, 즉 k+m+n에 대한 m의 비율은 32%이었다.
실시예 3
화합물 3(분자량 12000의 메톡시폴리에틸렌글리콜 부분과 중합수가 33인 폴리아스파라긴산 부분으로 이루어진 블록 공중합체와 콤브레타스타틴A-4의 결합체: 일반식(I)의 R1=Me(메틸기), R2=트리메틸렌기, R3=Ac(아세틸기), R4=콤브레타스타틴 잔기, R5=이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기 및 O-벤질-페닐알라닐기, d+e+f+g+h+i+j=33, t=273)의 합성
특허문헌 5에 기재된 방법에 의해 제조한 메톡시폴리에틸렌글리콜폴리아스파라긴산 블록 공중합체(아스파라긴산 부분: α형과 β형의 혼합체, 중합수 33,605.4mg) 및 국제공개 제02/06279호 팜플렛에 기재된 방법으로 제조한 콤브레타스타틴A-4(100mg)을 DMF(8.5mL)에 용해하고, 페닐알라닌벤질에스테르염산염(83.4mg), 트리에틸아민(0.04ml), DMAP(16mg) 및 DIPC(0.4ml)를 가하고, 15℃에서 20시간 교반하고, 그 후 다시 25℃에서 4시간 교반하였다. 반응액에 에틸아세테이트(70ml), 헵탄(70ml)을 가하고, 실온에서 30분간 교반한 후 침전물을 여과하여 에틸아세테이트/헵탄(1/1(v/v), 20ml)로 세정하였다. 수득한 침전물을 아세토니트릴/물(1/1(v/v), 20ml)에 용해한 후, 이온 교환 수지(다우케미칼사제, 다우엑스 50(H+), 3ml) 컬럼에 통과시키고, 아세토니트릴/물(1/1(v/v), 20ml)로 용출하였다. 수득한 용출 분획에 물(35ml)을 가하여 아세토니트릴을 감압하에 유거하고, 그 후 동결 건조하는 것에 의해 화합물 3(710mg)을 수득하였다.
HPLC(고속액체크로마토그래피)에 의해 반응액 중의 미반응 콤브레타스타틴A-4 양을 계량한 바, 화합물 3 중의 콤브레타스타틴A-4 함량은 7.9%(w/w), d+e+f+g+h+i+j에 대한 d+e의 비율은 14%이었다. 화합물 3 중, 유리 콤브레타스타틴A-4는 미검출되었다.
R5의 하나로서 도입한 O-벤질-페닐알라닐기는 화합물 3을 아세토니트릴 수산화나트륨 수용액 중 40℃에서 6시간 가수분해하고, 용출한 벤질알코올을 정량하는 것으로부터 구하고, O-벤질-페닐알라닐기가 폴리아스파라긴산에 차지하는 비율, 즉 d+e+f+g+h+i+j에 대한 f+g의 비율은 O-벤질-페닐알라닐기가 결합한 것에 대하여 27%이었다. 또, R5로서 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기도 도입되며, 그 존재비는 화합물 3을 중수산화나트륨/중수/중아세토니트릴에 용해한 것의 1H-NMR(수소핵자기공명 스펙트럼)로부터 구할 수 있다. 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기가 폴리아스파라긴산에 차지하는 비율, 즉 d+e+f+g+h+i+j에 대한 f+g의 비율은 이소프로필아미노카르보닐이소프로필아미노기가 결합한 것에 대하여 15%이었다. 그 결과, R5의 총량이 폴리아스파리긴산에 차지하는 비율, 즉 d+e+f+g+h+i+j에 대한 f+g의 비율은 42%이었다. 기타 아스파라긴산은 유리 카르복시산 (h+i) 또는 환상 구조 (j)이었다.
시험예 1 효소 비존재 하에서 약제 방출
화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 PBS(인산 완충 생리 식염수; pH 7.1)에 폴리머 농도 1mg/ml로 용해하고, 37℃에서 인큐베이트하였다. 상기 고분자 결합체에 의해 방출된 콤브레타스타틴A-4를 HPLC로 분리하고 표준 곡선을 이용하여 정량하였다. 정량치 및 고분자 결합체의 약제 함유량으로부터 구한 전체 약제량의 비 를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이 본 발명의 고분자 결합체(화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3)은 가수분해 효소가 없어도 유의하게 콤브레타스타틴A-4를 방출하였다. 특히 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖는 화합물 1 및 화합물 3은 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖지 않는 화합물 2와 비교하여, 보다 빨리 콤브레타스타틴A-4를 방출하였다. 도 1의 결과는 효소 비존재 하에서 본 발명의 고분자 결합체가 우수한 약제 방출 성능을 갖는 것을 나타낸다.
시험예 2 항종양 작용
마우스 피하에 계대하고 있는 마우스 대장암 Colon 26을 약 2mm 각의 블록으로 하고, 투관침을 이용하여 암컷 CDF1 마우스의 등 부분의 피하에 이식하였다. 종양 이식 후 7일째부터 본 발명의 고분자 결합체(화합물 1) 또는 대조약(콤브레타스타틴A-4)을 각각 콤브레타스타틴A-4 환산한 투여량으로 마우스 꼬리 정맥 내에 단회 투여하였다. 대조군은 약물을 투여하지 않은 군이다. 화합물 1은 5% 포도당 주사액에 용해하여 사용하였다. 콤브레타스타틴A-4는 디메틸술폭시드 및 크레모포 EL(시그마사 제)에 용해하고, 사용시에 5% 포도당 주사액에 용해하여 사용하였다. 투여 후, 종양의 장경(Lmm) 및 단경(Wmm)을 노기스를 이용하여 계측하고, 종양 체적을 (L×W2)/2에 의해 계산하여 투여개시일의 종양 체적에 대한 상대 종양 체적으로서 표 1에 나타내었다.
표 1
Figure 112009005689449-PCT00006
표 1로부터 본 발명의 고분자 결합체(화합물 1)은 콤브레타스타틴A-4 보다 적은 투여량으로 콤브레타스타틴A-4 보다 우수한 항암 활성을 갖는 것을 알 수 있다.
시험예 3 항종양 작용
마우스 피하에 계대하고 있는 마우스 대장암 Colon 26을 약 1mm 각의 블록으로 하고, 투관침을 이용하여 암컷 CDF1 마우스의 등 부분의 피하에 이식하였다. 종양 이식 후 7일째부터 본 발명의 고분자 결합체(화합물 2 및 화합물 3) 또는 비특허문헌 1에 기재된 방법으로 합성한 대조약(콤브레타스타틴A-4 인산에스테르)를 각각 콤브레타스타틴A-4 환산환 투여량으로 마우스 꼬리 정맥 내에 투여하였다. 대조군은 약물을 투여하지 않은 군이다. 화합물 2, 화합물 3 및 대조약은 모두 5% 포도당 주사액에 용해하여 사용하였다. 투여 후 종양의 장경(Lmm) 및 단경(Wmm)을 노기스를 이용하여 계측하고, 종양 체적을 (L×W2)/2에 의해 계산하여 투여개시일의 종양 체적에 대한 상대 종양 체적으로서 표 2에 나타내었다.
표 2
Figure 112009005689449-PCT00007
표 2로부터 본 발명의 고분자 결합체(화합물 2 및 3)은 콤브레타스타틴A-4 인산 에스테르 보다 적은 투여량으로 보다 우수한 항암 활성을 갖는 것을 알 수 있다.

Claims (15)

  1. 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기가 에스테르 결합하고 있는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  2. 제1항에 있어서, 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분이 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖는 폴리머인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  3. 제2항에 있어서, 숙신산 모노아미드 구조부분을 갖는 폴리머가 폴리아스파라긴산인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 하기 일반식(I)로 표시되는 화합물인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
    Figure 112009005689449-PCT00008
    상기 식에서, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, d, e, f, g, h, i 또는 j는 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내며, 단 d+e는 1~200의 정수를 나타내고, 또 d+e+f+g+h+i+j는 3~200의 정수를 나타내고, 폴리아스파라긴산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다.
  5. 제4항에 있어서, R1이 (C1~C6)알킬기이고, R2가 (C2~C6)알킬렌기이며, R3가 (C1~C6)아실기이고, t가 8~2300의 정수이며, d, e, f, g, h, i 또는 j가 각각 독립적으로 0~100의 정수이고, 단 d+e가 1~100의 정수이며, 또 d+e+f+g+h+i+j가 6~100의 정수인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, R1이 (C1~C3)알킬기이고, R2가 (C2~C4)알킬렌기이며, R3가 (C1~C3)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, d, e, f, g, h, i 또는 j가 각각 독립적으로 0~90의 정수이고, 단 d+e가 1~90의 정수이며, 또 d+e+f+g+h+i+j가 15~90의 정수인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  7. 제1항에 있어서, 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분이 폴리글루타민산인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서, 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체가 하기 일반식(II)로 표시되는 화합물인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
    Figure 112009005689449-PCT00009
    상기 식에서, R1은 수소 원자 또는 (C1~C6)알킬기를 나타내고, R2는 결합기를 나타내며, R3은 수소 원자 또는 (C1~C6)아실기를 나타내고, R4는 콤브레타스타틴류의 수산기 잔기를 나타내며, R5는 (C1~C30)알콕시기, (C7~C30)아랄킬옥시기, (C1~C30)알킬아미노기, 디(C1~C30)알킬아미노기, 카르복시기가 보호된 아미노산 및 -N(R6)CONH(R7)로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타내고, R6, R7은 동일하거나 상이해도 좋은 (C3~C6) 환상 알킬기 또는 3급 아미노기로 치환되어도 좋은 (C1~C5)알킬기를 나타내며, t는 5~11500의 정수를 나타내고, k는 1~200의 정수를 나타내며, m, n은 각각 독립적으로 0~200의 정수를 나타내고, 단 k+m+n은 3~200의 정수를 나타내고, 폴리글루타민산의 각 구성단위의 결합순서는 임의이다.
  9. 제8항에 있어서, R1이 (C1~C6)알킬기이고, R2가 (C2~C6)알킬렌기이며, R3가 (C1~C6)아실기이고, t가 8~2300의 정수이며, k가 1~90의 정수이고, m,n이 각각 독립적으로 0~90의 정수이며, 단 k+m+n이 6~90의 정수인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, R1이 (C1~C3)알킬기이고, R2가 (C2~C4)알킬렌기이며, R3가 (C1~C3)아실기이고, t가 100~300의 정수이며, k가 3~60의 정수이고, m,n이 각각 독립적으로 0~60의 정수이며, 단 k+m+n이 6~60의 정수인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 콤브레타스타틴류가 콤브레타스타틴 A-4인 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  12. 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기를 유기용매 중, 탈수축합제를 이용하여 에스테르 결합시켜 수득되는 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체.
  13. 폴리에틸렌 글리콜 구조부분과 2 이상의 카르복시산기를 갖는 폴리머 부분의 블록 공중합체에 있어서, 상기 폴리머 부분의 카르복시산기와 콤브레타스타틴류의 수산기를 유기용매 중, 탈수축합제를 이용하여 에스테르 결합시키는 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체의 제조방법.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 항암제.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 콤브레타스타틴류의 고분자 결합체를 유효성분으로 하는 혈관표적화제.
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