KR20080106219A

KR20080106219A - 소수성 화합물의 안정화제

Info

Publication number: KR20080106219A
Application number: KR1020087021483A
Authority: KR
Inventors: 다카코 니시야; 야스키 가토
Original assignee: 나노캬리아 가부시키가이샤
Priority date: 2006-03-06
Filing date: 2007-03-05
Publication date: 2008-12-04
Also published as: JPWO2007102608A1; HK1126690A1; CN101394866B; CN101394866A; TW200812641A; WO2007102608A1

Abstract

본 발명은 소수성 화합물, 특히 히노키티올을 안정화시키기 위한 안정화제로서, 적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제를 제공한다.

소수성 세그먼트, 친수성 세그먼트, 안정화제

Description

소수성 화합물의 안정화제{STABILIZER FOR HYDROPHOBIC COMPOUNDS}

본 발명은 열이나 광에 대하여 불안정한 소수성 화합물 특히, 히노키티올을 안정화하기 위한 안정화제로서, 적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머(block co-polymer)로 이루어지는 안정화제, 및 그것을 이용한 안정화 방법에 관한 것이다.

천연물, 합성물에 상관없이, 화합물에 따라서는 뛰어난 활성을 가짐에도 불구하고, 안정성의 결여를 이유로 의약, 식품, 농약 등에서의 실제 사용이 꺼려지는 경우가 많다. 예를 들어, 일본 아오모리 노송나무의 산성유에는, 히노키티올(β-측백추출물(β-thujaplicin))을 비롯하여, β-도라브린(dolabrin), γ-측백추출물, α-측백추출물 그리고 4-아세틸트로폴론 등의 7원환을 가진 화합물이 존재한다. 이들 중, 히노키티올은 1963년 노조에 등에 의해 대만 히노키로부터 단리(單離)되어 그 화학구조식이 결정되었고, 생리활성에 관하여 항미생물 활성, 세포 장해작용, 금속 프로테아제 저해활성, 티로시나아제 저해활성, 식물성장 저해활성 등 많은 생리활성이 있는 것이 보고되었다('의약저널 39' 1283~1294(2003): 'Antimicrob. Agents Chemother. 49', 2519~2521(2005); 'Arch. Pharm. Res. 22', 335~339(1999)). 그 다양한 생리활성에 의해, 식품 보존(일본특허공개 평6-277019 호 공보, 일본특허공개 평6-153788호 공보), 변색 방지(일본특허공개 소59-085279호 공보), 아연과 조합한 감염치료약(WO 93/17559)으로의 응용이 연구되어 왔다. 하지만, 히노키티올이 본래 승화성 물질이고, 또한 광에 의해 빠르게 분해되기 때문에(도 1), 통상의 환경하에서는 사용이 제한되고, 충분한 실용화에는 이르지 못하였다('J. Am. Chem. Soc. 83', 1768~1769(1961); 'Can. J. Microbiol. 19' 1177~1180(1973); 'Biosci. Biotechnol. Biochem. 67' 1996~1998(2003)).

히노키티올의 안정화에 관하여, 유기산을 배합하고, pH를 5.0~6.0으로 조절하는 방법(일본특허공개 평9-188620호 공보), 계면활성제 등을 이용하여 유화분산시키는 방법(일본특허공개 평10-291906호 공보), 히노키티올을 알루미늄과의 염 또는/및 알루미늄 화합물과의 착화합물로 하는 방법(WO 97/02025) 등이 있는데, 모두 충분한 안정성을 꾀하고 있지 않다.

본 발명의 과제는, 열안정성, 광안정성 등 안정성이 떨어지는 소수성 화합물의 안정화에 있다.

본 발명은 아래의 형태를 포함한다.

[1] 소수성 화합물을 안정화시키기 위한 안정화제로서, 적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제.

[2] 친수성 세그먼트가 폴리에틸렌글리콜인 [1]에 기재된 안정화제.

[3] 소수성 세그먼트가 폴리아미노산 또는 그 유도체인 [1] 또는 [2]에 기재된 안정화제.

[4] 폴리아미노산이 폴리글루타민산, 폴리아스파라긴산, 그들의 유도체 및 그들 중의 1개 또는 복수개의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [3]에 기재된 안정화제.

[5] 블록 코폴리머가 하기 화학식 1 또는 화학식 2인 [1] 내지 [4] 중 어느 하나에 기재된 안정화제:

[화학식 1]

또는

[화학식 2]

(상기 식 중, R₁ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소원자 또는 보호되어 있어도 되는 관능기가 치환한 혹은 미치환된 저급 알킬기를 나타내고, R₂는 수소원자, 포화 또는 불포화의 C₁~C₂₉ 지방족 카르보닐기 또는 아릴카르보닐기를 나타내고, R₄는 수산기, 포화 또는 불포화의 C₁~C₃₀ 지방족 옥시기 또는 아릴-저급 알킬옥시기를 나타내고, R₅는 벤질기, 알킬벤질기 또는 알릴기를 나타내고, L₁은 -NH-, -O-, -CO-, -CH₂-, -O-Z-S-Z-, -O-Z-NH- 및 -OCO-Z-NH-(여기서, Z는 독립적으로 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, L₂는 -OCO-Z-CO- 및 -NHCO-Z-CO-, -O-Z-NH-(여기서, Z는 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, n은 10~2500의 정수이고, x 및 y는 동일하거나 서로 다르며, 그들의 합계가 10~300이 되는 정수이고, 그리고 x 대 y가 1:1 ~ 0:1의 범위내에 있으며, x 및 y는 각각 임의로 존재하고, q는 1 또는 2의 정수이다).

[6] 소수성 화합물이 항생제, 항균제, 항종양제, 항염증제, 해열제, 진통제, 항유종제, 진해거담제, 진정제, 근육이완제, 항간질제, 항궤양제, 항우울제, 항알레르기제, 강심제, 항부정맥제, 혈관확장제, 혈압강하제, 당뇨치료제, 항상성제, 폴리펩티드, 호르몬제, 항산화제, 잇몸치료제 및 비타민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [1] 내지 [5] 중 어느 하나에 기재된 안정화제.

[7] 소수성 화합물이 히노키티올, CoQ10, 비타민 E 또는 그 유도체, 비타민 A 또는 그 유도체, 비타민 C 유도체, α-리포산 및 폴리페놀로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [1] 내지 [6] 중 어느 하나에 기재된 안정화제.

[8] 소수성 화합물이 히노키티올인 [7]에 기재된 안정화제.

[9] 소수성 화합물의 안정화 방법으로서,

적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제와 상기 소수성 화합물을 혼합하여, 상기 블록 코폴리머와 상기 소수성 화합물을 상호작용시키는 단계; 또는

적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제에 의해 상기 소수성 화합물을 봉입(封入)하여 미셀(micell)을 형성하는 단계;를 포함하여 이루어지는 방법.

[10] 친수성 세그먼트가 폴리에틸렌글리콜인 [9]에 기재된 방법.

[11] 소수성 세그먼트가 폴리아미노산 또는 그 유도체인 [9] 또는 [10]에 기재된 방법.

[12] 폴리아미노산이 폴리글루타민산, 폴리아스파라긴산 또는 그들의 유도체 및 그들 중의 1개 또는 복수개의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [11]에 기재된 방법.

[13] 블록 코폴리머가 하기 화학식 1 또는 화학식 2인 [9] 내지 [12] 중 어느 하나에 기재된 방법:

[화학식 1]

또는

[화학식 2]

[14] 소수성 화합물이 항생제, 항균제, 항종양제, 항염증제, 해열제, 진통제, 항유종제, 진해거담제, 진정제, 근육이완제, 항간질제, 항궤양제, 항우울제, 항알레르기제, 강심제, 항부정맥제, 혈관확장제, 혈압강하제, 당뇨치료제, 항상성제, 폴리펩티드, 호르몬제, 항산화제, 잇몸치료제 및 비타민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 기재된 방법.

[15] 소수성 화합물이 히노키티올, CoQ10, 비타민 E 또는 그 유도체, 비타민 A 또는 그 유도체, 비타민 C 유도체, α-리포산 및 폴리페놀로 이루어지는 군으로부터 선택되는 [9] 내지 [14] 중 어느 하나에 기재된 방법.

[16] 소수성 화합물이 히노키티올인 [15]에 기재된 방법.

본 발명의 블록 코폴리머를 사용함으로써, 광 및/또는 열에 의해 이성화 반응이 일어나는 광범위한 소수성 화합물의 안정화를 도모할 수 있다.

도 1은 히노키티올의 구조 및 그 이성화를 나타낸다.

도 2는 히노키티올의 광안정성에 대한 여러가지 캐리어의 영향을 나타낸다.

도 3은 히노키티올의 열안정성에 대한 여러가지 캐리어의 영향을 나타낸다.

본 발명은 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 소수성 화합물에 범용가능한 안정화제를 제공한다. 하나의 형태로서 본 발명에 따른 안정화제는 히노키티올을 안정화시키고, 도데실 황산 나트륨(SDS)에 의한 SDS 미셀화 히노키티올, 난황 레시틴에 의한 리포솜화 히노키티올, 폴리메틸메타크릴레이트의 나노입자에 함유된 히노키티올과 비교하여, 광이나 열에 대하여 높은 안정성을 나타내는 것이 확인되었다.

본 발명에 있어서 사용할 수 있는 블록 코폴리머는 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 포함하여 이루어지는 블록 코폴리머이고, 이 블록 코폴리머들은 본 발명의 목적에 따르는 것이면 어떠한 친수성 세그먼트와 어떠한 소수성 세그먼트를 포함하는 것이어도 되는데, 구체적으로는 다음과 같은 것을 포함한다.

한정되는 것은 아니지만, 친수성 세그먼트로서는, 폴리(에틸렌글리콜)[또는 폴리(에틸렌옥시드)], 폴리사카라이드, 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(비닐알코올), 폴리(아크릴아미드), 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴산), 폴리(메타크릴산 에스테르), 폴리(아크릴산 에스테르), 폴리아미노산, 폴리(사과산), 혹은 이들의 유도체 유래의 세그먼트를 들 수 있다. 여기서, 폴리사카라이드로는 전분, 덱스트란, 프록탄(fructan), 갈락탄 등을 들 수 있다. 이들 중, 폴리(에틸렌글리콜)세그멘트는 한쪽 말단에 여러가지 관능기를 가지는 것이 제공되고 있으며, 또한 세그멘트의 크기도 제어된 것이 쉽게 이용할 수 있기 때문에 바람직하다.

한편, 한정되는 것은 아니지만, 소수성 세그먼트로서는, 폴리[(메타)아크릴산알킬-코-(메타)아크릴산], 폴리(아스파라긴산 유도체)나 폴리(글루타민산 유도체), 예를 들어 폴리(β-벤질아스파르테이트), 폴리(β-벤질-L-아스파르테이트-코-아스파라긴산), 폴리(β-알킬아스파르테이트), 폴리(β-알킬아스파르테이트-코-아스파라긴산), 폴리(β-알릴아스파르테이트-코-아스파라긴산), 폴리(β-아랄킬아스파르테이트-코-아스파라긴산), 폴리(β-아랄킬아스파르테이트), 폴리(β-아랄킬아스파르테이트-코-아스파라긴산), 폴리(β-알킬아스파르타미드), 폴리(β-알킬아스파르타미드-코-아스파라긴산), 폴리(β-아랄킬아스파르타미드), 폴리(β-아랄킬아스파르타미드-코-아스파라긴산), 폴리(γ-벤질글루타메이트), 폴리(γ-벤질-L-글루타메이트-코-글루타민산), 폴리(γ-알킬글루타메이트), 폴리(γ-알킬글루타메이트-코-글루타민산), 폴리(γ-알릴글루타메이트-코-글루타민산), 폴리(γ-아랄킬글루타메이트), 폴리(γ-아랄킬글루타메이트-코-글루타민산), 폴리(γ-알킬글루타미드), 폴리(γ-알킬글루타미드-코-글루타민산), 폴리(γ-아랄킬글루타미드), 폴리(γ-아 랄킬글루타미드-코-글루타민산), 폴리(락티드), 폴리(락티드-코-글리콜리드), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리(δ-발레로락톤) 및 폴리(γ-부틸로락톤) 등의 폴리(아미노산 유도체)를 들 수 있다.

임의로 이와 같은 폴리(아미노산 유도체) 세그먼트 중, 측쇄에 카르복실기를 가지는 것은, 그 자체 공지의 예를 들어, 폴리(β-벤질-L-아스파라긴산) 또는 폴리(γ-벤질-L-글루타민산)의 벤질기를 가수분해에 의해 제거한 후, 상당하는 알코올 또는 아민에 의해 에스테르 또는 아미드로 변환하고, 이 때 알코올 또는 아민의 반응량을 변화시킴으로써, 원하는 비율로 카르복실기를 측쇄에 가지는 소수성 세그먼트로 할 수 있다. 이 때, 폴리(β-벤질-L-아스파라긴산)은 가수분해에 의해 β 전위(轉位)한 아스파라긴산이 발생한다. β 전위를 일으키지 않은 아스파라긴산과 β 전위를 일으킨 아스파라긴산의 비는 약 1:3인 것이 알려져 있다. β 전위를 일으킨 아스파라긴산 및 그 유도체를 가지는 소수성 세그먼트가 본 발명에 포함되는 것은 말할 것도 없다. 아스파라긴산, 글루타민산은 어느 광학활성형의 것이거나 그들의 혼합물일 수 있다. 이상의 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트는 그 자체로 이미 알려진 연결기, 예를 들어, 에스테르 결합, 아미드 결합, 이미노기, 탄소-탄소결합, 에테르 결합 등을 통하여 연결될 수 있다.

특히, 제조가 용이하고 본 발명에서 바람직하게 사용할 수 있는 블록 코폴리머로는, 아래의 화학식 1 및 화학식 2로 나타내는 것을 들 수 있다.

[화학식 1]

또는

[화학식 2]

상기 식 중, R₁ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소원자 또는 보호되어 있어도 되는 관능기가 치환한 혹은 미치환된 저급 알킬기를 나타내고, R₂는 수소원자, 포화 또는 불포화의 C₁~C₂₉ 지방족 카르보닐기 또는 아릴카르보닐기를 나타내고, R₄는 수산기, 포화 또는 불포화의 C₁~C₃₀ 지방족 옥시기 또는 아릴-저급 알킬옥시기를 나타내고, R₅는 벤질기, 알킬벤질기 또는 알릴기를 나타낸다(단, R₅는 하나의 블록 코폴리머 내의 각 아미노산 유닛에서 임의로 선택할 수 있다). L₁ 및 L₂는 각각 독립적으로 연결기를 나타내고, n은 10~2500의 정수이며, x는 10~300이 되는 정수이고, y는 1 또는 2의 정수를 나타낸다. 보호되어 있어도 되는 관능기로서는 히드록실기, 아세탈, 케탈, 알데히드, 당 잔기 등을 들 수 있다. R₁ 및 R₃이 보호되어 있어도 되는 관능기가 치환한 저급 알킬기를 나타내는 경우의 친수성 세그먼트는, 예를 들 어, WO96/33233, WO96/32434, WO97/06202에 기재된 방법에 따를 수 있다. 저급 알킬이란, 탄소수가 예를 들어 7개 이하, 바람직하게는 4개 이하인 직쇄 또는 분기쇄 알킬기를 의미하고, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸기 등이 포함된다.

연결기는 주로 블록 코폴리머의 제조방법에 따라 변할 수 있기 때문에 한정되지는 않지만, 구체적인 것으로, L₁이 -NH-, -O-, -O-Z-NH-, -CO-, -CH₂-, -O-Z-S-Z- 및 -OCO-Z-NH-(여기서, Z는 독립적으로 C₁~C₄ 알킬렌기이다)로 이루어지는 군으로부터 선택되고, L₂가 -OCO-Z-CO- 및 -NHCO-Z-CO-(여기서, Z는 C₁~C₄ 알킬렌기이다)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 기를 들 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 특히 바람직한 블록 코폴리머는, 폴리에틸렌글리콜(PEG)-폴리(β-벤질-L-아스파라긴산) 블록 코폴리머(이하, 간단히 'PEG-PBLA'라고 하는 경우가 있다)이다. PEG-PBLA는 예를 들어, PEG-PBLA-5-20-100(PEG의 분자량이 5000, 아스파라긴산의 중합도가 20, 벤질화율이 100%), PEG-PBLA-12-40-50(PEG의 분자량이 12,000, 아스파라긴산의 중합도가 40, 벤질화율이 50%), PEG-PBLA-12-50-50(PEG의 분자량이 12,000, 아스파라긴산의 중합도가 50, 벤질화율이 50%)이어도 된다.

본 발명의 하나의 태양으로서는, 소수성 화합물을 블록 코폴리머에 의해 미셀화(약물을 미셀 안에 내포)함으로써 안정화시킬 수 있다. 예를 들어, 히노키티올은 광 및/또는 열에 의한 이성화 반응에 의해 분해되는데, 블록 코폴리머에 의한 이성화 반응의 저해는, 히노키티올/블록 코폴리머 1mg/1.2mg을 출발물질로 하였을 경우(히노키티올이 블록 코폴리머에 대하여 크게 과잉인 상태)에도 확인된다. 따라서, 히노키티올에 블록 코폴리머를 상호작용시키는 것 만으로도 이성화 반응에 대한 입체적 저해가 일어나 히노키티올이 안정화되는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제는, 광 및/또는 열에 의해 이성화 반응이 일어나는 광범위한 소수성 화합물에 대하여 사용할 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 블록 코폴리머에 의해 안정화되는 화합물은 히노키티올로 한정되지 않고, 예를 들어 광 및/또는 열에 의해 이성화 반응이 일어나는 광범위한 화합물을 들 수 있으며, 특별히 한정되지는 않지만, 항생제, 항균제, 항종양제, 항염증제, 해열제, 진통제, 항유종제, 진해거담제, 진정제, 근육이완제, 항간질제, 항궤양제, 항우울제, 항알레르기제, 강심제, 항부정맥제, 혈관확장제, 혈압강하제, 당뇨치료제, 항상성제, 폴리펩티드, 호르몬제, 항산화제, 잇몸치료제 및 비타민 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 히노키티올, 암포테리신(amphotericin), 니스타틴, 파모산피르비늄(pyrvinium pamoate), 메토트렉사트, 마이토마이신C, 다우노루비신, 아드리아마이신(adriamycin), 시스플라틴, DACH 플라틴, 파클리탁셀(paclitaxel) 및 그 유도체, 빈크리스틴, 캄포테신(camptothecin) 및 그 유도체, 스테로이드, 인도메타신, 살리실산 메틸, 펜타닐, 히노키티올, CoQ10, 비타민 E 또는 그 유도체, 비타민 A 및 그 유도체, 비타민 C 유도체, α-리포산 및 폴리페놀 등을 들 수 있다.

특히 바람직한 소수성 화합물은 히노키티올이다. 본 발명에 따라, 히노키티 올의 열분해, 광분해시에 발생하는 수퍼옥사이드 음이온 라디칼(superoxide anion radical)이나 하이드록실 라디칼의 영향을 대폭 억제하여, 히노키티올을 여러가지 목적을 위하여 효과적으로 사용할 수 있는 조성물을 제공할 수 있다.

안정화제로서 사용되는 블록 코폴리머의 양은 블록 코폴리머의 분자량, 화합물의 종류에 따라 적절히 변화시킬 수 있으며, 특별히 한정되지는 않지만, 몰비로 화합물 1에 대하여 블록 코폴리머 0.0001~10, 바람직하게는 0.001~1로 할 수 있다.

본 발명의 태양인 하나의 안정화 방법으로서, 소수성 화합물을 본 발명에 따른 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제로 봉입하여 미셀을 제조하는 경우, 그 방법은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 일본특허공개 2003-26812호 공보 또는 일본특허공개 2003-342168호 공보에 개시된 방법에 따라 실시할 수 있다. 구체적인 일례로는, 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트로 구성되는 블록 코폴리머 및 소수성 화합물을 휘발성의 유기용매 예를 들어, 메틸알코올, 이소프로필알코올, 아세톤, 아세토니트릴, 초산메틸, 초산에틸, 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 시클로헥산 등 및 이들의 혼합용매 등 상온에서 휘산성을 가지는 용매에 용해한 후, 해당 유기용매를 제거하고, 얻어지는 필름을 물에 균일하게 분산하기에 충분한 시간, 예를 들어 2시간~24시간, 적정 온도 예를 들어 4℃~실온에서 교반한다. 얻어진 용액을 적절히 초음파 조사하고, 동적 광산란광도계(예를 들어, 오오츠카덴시사 제품 DLS-7000DH)를 사용하여 입자직경을 측정하고, 겔 여과(예를 들어, PD-10 컬럼, GE헬스케어 바이오사이언스사 제품)로 미셀에 혼입되지 않은 화합물을 분리한다.

또한, 소수성 화합물을 본 발명에 따른 블록 코폴리머 안정화제와 상호작용 시켜 안정화를 도모하는 경우, 양자를 적당한 용매 안에서 혼합하고, 상호작용하지 않은 소수성 화합물(혼합되지 않은 화합물)을 제거하면 된다.

본 발명의 안정화제는 의약품, 농약, 식품 등 여러가지 용도에 바람직하다. 예를 들어, 의약품의 제형으로는 특별히 한정되지 않지만, 환제, 과립, 시럽, 캡슐, 주사제, 좌제, 흡인제, 패치 등을 들 수 있다.

이하, 비교예, 실시예를 나타내어 본 발명을 구체적으로 나타낸다.

실시예

이하에서는 폴리에틸렌글리콜-폴리(β-벤질-L-아스파라긴산)블록 코폴리머를 간단히 'PEG-PBLA'라고 한다. 또한, 예를 들어, 블록 코폴리머의 PEG 사슬의 평균분자량이 12,000, 폴리아미노산 사슬 40 잔기, 폴리아미노산 측쇄의 벤질화비율이 50%인 경우, 각 블록 코폴리머 뒤에 12-40-50이라고 표기한다.

(실시예 1: 블록 코폴리머에 의한 히노키티올의 안정화)

히노키티올(와코사, 오사카) 1mg과 PEG-PBLA-5-20-100, PEG-PBLA-12-40-50 또는 PEG-PBLA-12-50-50 10mg을 스크류관에 칭량하고, 디클로로메탄 안에 용해한 후, 디클로로메탄을 질소기류하에서 휘발시켜, 히노키티올과 블록 코폴리머로 이루어지는 필름을 얻었다. 이 필름에 3ml의 초순수를 더하고, 차광하 4℃에서 12시간 교반하였다. 얻어진 미셀 용액을 5분간 초음파 조사하고, 입경을 측정하고, 겔 여과(PD-10 컬럼)로 미셀과 혼입되지 않은 히노키티올을 분리하였다. 히노키티올은 수중에서 330nm에 극대 흡수를 나타내는데, 블록 코폴리머 미셀로 봉입된 히노키티올은 324nm와 372nm에 극대 흡수를 나타낸다. 얻어진 미셀에서의 히노키티올의 혼 입율(미셀에 혼입된 약물량의 출발량에 대한 비율, wt/wt%), 봉입율, 미셀의 사이즈를 아래의 표 1에 나타낸다. 한편, 약물의 혼입율은, 혼입되지 않은 약물량을 몰 흡광계수로부터 구하고, 이 값을 약물의 출발량에서 뺀 값을 미셀에 혼입된 약물값으로서 구한다. 봉입율은, 폴리머의 출발량에 대한 미셀에 혼입된 약물량의 비율(wt/wt%)로 한다. 폴리머 미셀의 입자직경은 당업자에게 주지된 방법에 의해 측정할 수 있으며, 예를 들어, 동적 광산란광도계(오오츠카덴시사 제품 DLS-7000DH)를 이용하여 그 설명서에 따라 측정할 수 있다.

[표 1] 미셀화 히노키티올

히노키티올 1mg을 모든 실험에 사용하였다.

폴리머 10mg, 히노키티올 1mg을 출발물질로 하였을 경우, 히노키티올의 혼입율은 PEG-PBLA-5-20-100, PEG-PBLA-12-50-50, PEG-PBLA-12-40-50을 이용하였을 경우에 가장 높아 47~49%가 되며, 봉입율은 4.7~4.9%였다(표 1 참조).

출발물질로서 사용하는 히노키티올의 양을 1mg으로 하고, PEG-PBLA-12-50-50의 양을 5mg, 2.5mg, 1.2mg, 0.5mg, 0.1mg으로 하였을 경우, 혼입되는 히노키티올의 양은 폴리머의 양이 감소함에 따라 감소하는데, 폴리머양이 2.5mg, 1.2mg, 0.5mg에서는 거의 일정해지며, 봉입율이 높아지고, 미셀의 크기가 커졌다(표 1 참조).

(실시예 2: 블록 코폴리머에 의한 히노키티올의 광에 대한 안정성)

미셀화 히노키티올(표 1에 나타낸 실험 1~ 실험 6의 샘플)의 수용액을, 실험실의 광 아래에서 실온에서 보존하고, 이들의 흡수강도 변화를 시간의 경과에 따라 측정하면, 도 2에 나타내는 바와 같이, 324nm에서의 흡수강도는 1일후에 85%, 7일후에도 53%, 14일후에도 40%로 유지되고 있어, 미셀화에 의해 히노키티올의 광분해가 억제되고 있는 것이 나타났다. 한편, 도 2에 나타내는 결과는 실험 1~ 실험 6의 미셀의 324nm에서의 흡수 평균값을 나타낸다. 즉, 도 1에 나타낸 이성화 반응은, 미셀화에 의해 입체적으로 저해되는 것으로 생각된다. 또한, 이러한 이성화 반응의 저해는 히노키티올/블록 코폴리머 1mg/1.2mg을 출발물질로 하였을 경우(히노키티올이 블록 코폴리머에 대하여 크게 과잉인 상태)에도 관측되기 때문에, 히노키티올이 블록 코폴리머와 상호작용하고 있는 상태에서도 이성화 반응에 대한 입체적 저해가 일어나고 있는 것이 시사된다.

(실시예 3: 블록 코폴리머에 의한 미셀화 히노키티올의 열에 대한 안정성)

미셀화한 히노키티올(표 1에 나타낸 실험 1~ 실험 6의 샘플)의 수용액을, 차광하 37℃에서 보존시키고, 그들의 흡수강도 변화를 시간의 경과에 따라 측정하면, 324nm 흡수극대는 14일후에도 97%로 유지되고 있어, 미셀화에 의해 히노키티올의 열분해가 완전히 억제되고 있는 것을 나타내고 있다(도 3). 열분해의 경우의 스펙트럼적 변화는 광분해의 경우와 완전히 같기 때문에, 광분해의 경우에도 열분해의 경우에도 분해물은 시클로펜텐 유도체이며, 열분해 저해도 광분해 저해와 마찬가지의 메커니즘으로 일어나고 있는 것으로 생각된다.

(비교예 1: 혼입되지 않은 히노키티올의 광 또는 열에 대한 안정성)

혼입되지 않은 히노키티올의 광 또는 열에 대한 안정성 평가는, 실험예 2, 3과 마찬가지 방법으로 실시하였다. 혼입되지 않은 히노키티올 수용액을 실험실의 광아래에서 실온에서 보존하고, 330nm에서의 흡수강도를 시간의 경과에 따라 측정하면, 흡수강도는 1일후에 이미 64%로 감소하고, 8일후에는 9%, 14일후에는 6%로까지 감소하였다(도 2). 차광하 37℃에서는 혼입되지 않은 히노키티올의 330nm에서의 흡수강도가 8일후에는 57%로 감소하고, 14일후에는 41%까지 감소하였다(도 3).

(비교예 2: 도데실 황산 나트륨(SDS)에 의한 히노키티올의 미셀화)

SDS(와코사, 오사카) 7.2mg과 히노키티올 453㎍을 초순수 2.5ml에 녹이고, 교반한 후 겔 여과로 정제하면, 입경 130nm의 미셀이 얻어진다. 히노키티올의 혼입율은 12.4%, 봉입율은 0.8%로, SDS에 의한 미셀화 히노키티올은 328nm와 387nm에 흡수 극대를 나타내었다. SDS에 의한 미셀화 히노키티올의 광 또는 열에 대한 안정성 평가는 실시예 2, 3 및 비교예 1과 마찬가지 방법으로 실시하였는데, 단 328nm에서의 흡수강도를 측정하였다. SDS 미셀화 히노키티올의 328nm에서의 흡수강도는, 실험실의 광 아래에서 상온에서 보존하면, 1일후에는 65%로 감소하고, 7일후에는 40%, 14일후에는 30%로까지 감소하였다(도 2). 차광하 37℃에서는 328nm에서의 흡수강도가 1일후에는 33%로 감소하고, 7일후에는 17%, 14일후에는 14%까지 감소하였다(도 3).

(비교예 3: 히노키티올 함유 리포솜)

난황 레시틴(와코사, 오사카) 30mg을 2ml의 디클로로메탄에 용해한 후, 디클로로메탄을 질소기류하에서 휘발시켜 난황 레시틴 필름을 얻었다. 이 필름에 3ml의 초순수에 녹인 1mg의 히노키티올을 더하고, 차광하 4℃에서 교반하여, 15분간 초음파 조사하고, 겔 여과로 정제하면, 입경 약 200nm의 입자가 얻어졌다. 히노키티올의 혼입율은 23.7%, 봉입율은 0.8%이고, 리포솜화 히노키티올은 324nm와 372nm에 흡수극대를 나타내었다. 난황 레시틴에 의한 리포솜화 히노키티올의 광 또는 열에 대한 안정성 평가는, 실시예 2, 3 및 비교예 1과 마찬가지 방법으로 실시하였다. 리포솜화 히노티키올의 324nm에서의 흡수강도는, 실험실의 광 아래에서 상온에서 보존하면, 1일후에 38%로 감소하고, 3일후에는 이미 0%가 되었다(도 2). 차광하 37℃에서는 324nm에서의 흡수강도가 1일후에는 75%로 감소하고, 7일후에는 25%, 14일후에는 10%로까지 감소하였다(도 3).

(비교예 4: 히노키티올 함유 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA) 나노입자)

히노키티올 100mg과 PMMA(와코사, 오사카) 2g을 디클로로메탄 28ml에 용해시키고, 이것을 SDS 1g을 포함하는 초순수 200ml에 더하여 교반한 후, 초고압 호모지나이저(homogenizer)(마이크로플루이다이저, Microfluidics Corporation, MA, USA)에 넣어 압력 1000bar, 유속 150ml/min의 조건에서 유화물을 작성하고, 디클로로메탄을 증발, 제거한 후, SDS와 혼입되지 않은 히노키티올을 투석으로 제거하면, 입경 약 55nm의 입자가 얻어졌다. PMMA 나노입자에 내포된 히노키티올은 324nm와 366nm에 흡수 극대를 가지며, 광 또는 열에 대한 안정성 평가는 실시예 2, 3 및 비 교예 1과 마찬가지의 방법으로 실시하였다. PMMA 나노입자에 함유된 히노키티올의 324nm에서의 흡수강도는, 실험실의 광 아래에서 상온에서 보존하면, 1일후에는 72%로 감소하고, 7일후에는 25%, 14일후에는 22%로 감소하였다(도 2). 차광하 37℃에서는 PMMA 나노입자에 함유되는 히노키티올은 안정적이며, 14일후에도 92%의 흡수강도를 유지하였다(도 3).

명세서 내용 중에 기재되어 있음.

Claims

소수성 화합물을 안정화시키기 위한 안정화제로서, 적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제.
제 1 항에 있어서,

친수성 세그먼트가 폴리에틸렌글리콜인 안정화제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

소수성 세그먼트가 폴리아미노산 또는 그 유도체인 안정화제.
제 3 항에 있어서,

폴리아미노산이 폴리글루타민산, 폴리아스파라긴산, 그들의 유도체 및 그들 중의 1개 또는 복수개의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 안정화제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,

블록 코폴리머가 하기 화학식 1 또는 화학식 2인 안정화제:

[화학식 1]

또는

[화학식 2]

(상기 식 중, R₁ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소원자 또는 보호되어 있어도 되는 관능기가 치환한 혹은 미치환된 저급 알킬기를 나타내고, R₂는 수소원자, 포화 또는 불포화의 C₁~C₂₉ 지방족 카르보닐기 또는 아릴카르보닐기를 나타내고, R₄는 수산기, 포화 또는 불포화의 C₁~C₃₀ 지방족 옥시기 또는 아릴-저급 알킬옥시기를 나타내고, R₅는 벤질기, 알킬벤질기 또는 알릴기를 나타내고, L₁은 -NH-, -O-, -CO-, -CH₂-, -O-Z-S-Z-, -O-Z-NH- 및 -OCO-Z-NH-(여기서, Z는 독립적으로 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, L₂는 -OCO-Z-CO- 및 -NHCO-Z-CO-, -O-Z-NH-(여기서, Z는 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, n은 10~2500의 정수이며, x 및 y는 동일하거나 서로 다 르며, 그들의 합계가 10~300이 되는 정수이고, 그리고 x 대 y가 1:1 ~ 0:1의 범위내에 있으며, x 및 y는 각각 임의로 존재하고, q는 1 또는 2의 정수이다).
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

소수성 화합물이 항생제, 항균제, 항종양제, 항염증제, 해열제, 진통제, 항유종제, 진해거담제, 진정제, 근육이완제, 항간질제, 항궤양제, 항우울제, 항알레르기제, 강심제, 항부정맥제, 혈관확장제, 혈압강하제, 당뇨치료제, 항상성제, 폴리펩티드, 호르몬제, 항산화제, 잇몸치료제 및 비타민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 안정화제.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

소수성 화합물이 히노키티올, CoQ10, 비타민 E 또는 그 유도체, 비타민 A 또는 그 유도체, 비타민 C 유도체, α-리포산 및 폴리페놀로 이루어지는 군으로부터 선택되는 안정화제.
제 7 항에 있어서,

소수성 화합물이 히노키티올인 안정화제.
소수성 화합물의 안정화 방법으로서,

적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루 어지는 안정화제와 상기 소수성 화합물을 혼합하여, 상기 블록 코폴리머와 상기 소수성 화합물을 상호작용시키는 단계; 또는

적어도 친수성 세그먼트와 소수성 세그먼트를 가지는 블록 코폴리머로 이루어지는 안정화제에 의해 상기 소수성 화합물을 봉입(封入)하여 미셀(micell)을 형성하는 단계;를 포함하여 이루어지는 방법.
제 9 항에 있어서,

친수성 세그먼트가 폴리에틸렌글리콜인 방법.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,

소수성 세그먼트가 폴리아미노산 또는 그 유도체인 방법.
제 11 항에 있어서,

폴리아미노산이 폴리글루타민산, 폴리아스파라긴산 또는 그들의 유도체 및 그들 중의 1개 또는 복수개의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,

블록 코폴리머가 하기 화학식 1 또는 화학식 2인 방법:

[화학식 1]

또는

[화학식 2]

(상기 식 중, R₁ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소원자 또는 보호되어 있어도 되는 관능기가 치환한 혹은 미치환된 저급 알킬기를 나타내고, R₂는 수소원자, 포화 또는 불포화의 C₁~C₂₉ 지방족 카르보닐기 또는 아릴카르보닐기를 나타내고, R₄는 수산기, 포화 또는 불포화의 C₁~C₃₀ 지방족 옥시기 또는 아릴-저급 알킬옥시기를 나타내고, R₅는 벤질기, 알킬벤질기 또는 알릴기를 나타내고, L₁은 -NH-, -O-, -CO-, -CH₂-, -O-Z-S-Z-, -O-Z-NH- 및 -OCO-Z-NH-(여기서, Z는 독립적으로 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, L₂는 -OCO-Z-CO- 및 -NHCO-Z-CO-, -O-Z-NH-(여기서, Z는 C₁~C₄ 알킬렌기임)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 연결기를 나타내고, n은 10~2500의 정수이며, x 및 y는 동일하거나 서로 다 르며, 그들의 합계가 10~300이 되는 정수이고, 그리고 x 대 y가 1:1 ~ 0:1의 범위내에 있으며, x 및 y는 각각 임의로 존재하고, q는 1 또는 2의 정수이다).
제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,

소수성 화합물이 항생제, 항균제, 항종양제, 항염증제, 해열제, 진통제, 항유종제, 진해거담제, 진정제, 근육이완제, 항간질제, 항궤양제, 항우울제, 항알레르기제, 강심제, 항부정맥제, 혈관확장제, 혈압강하제, 당뇨치료제, 항상성제, 폴리펩티드, 호르몬제, 항산화제, 잇몸치료제 및 비타민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
제 9 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,

소수성 화합물이 히노키티올, CoQ10, 비타민 E 또는 그 유도체, 비타민 A 또는 그 유도체, 비타민 C 유도체, α-리포산 및 폴리페놀로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법.
제 15 항에 있어서,

소수성 화합물이 히노키티올인 방법.