KR20070109261A - 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계질환의 예방 및 치료제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 상표초 추출물, 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것으로, 구체적으로 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수한 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 상기와 같은 효과가 있으므로 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 상기 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제{ therapeutic agent comprising Mantidis ootheca extracts, N-acetyldopamine or biphenol compounds isolated from the same for prevention and treatment of cardiovascular disease}

본 발명은 상표초 추출물, 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것으로, 보다 상세하게는 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수한 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것이다.

최근 성인병 증가와 아울러 동맥경화 등 혈관장애 질환이 크게 증가되고 있다. 대표적인 혈관장애 질환으로서 동맥경화는 지질대사와 관련된 유전적 요인과 식습관, 흡연, 운동부족 등의 환경적 요인에 의하여 동맥이 경화되는 질환으로, 뇌 동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인하여 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 뇌동맥경화의 경우에는 두통, 현기증, 정신장애 등을 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며, 관상동맥경화의 경우에는 심장부에 동통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화로 인한 질병이 현대 사회에 있어, 특히 50~60대의 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다.

동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 '손상에 대한 반응가설(responce-to-injury hypothesis)'로서, 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가, 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다. 내피세포가 기능부전 상태로 되면 세포부착물질이 크게 발현되고 세포 투과성이 증가되어 혈중 면역세포, 혈소판, 지방질 등의 부착성 및 조직으로의 투과성이 증가되며, 이들 면역세포들에 의한 염증매개인자 및 성장인자의 분비 등의 염증반응 때문에 동맥경화성 병변이 발생하고 발달하게 된다는 것이다(Ross, R., N. Engl. J. Med., 340: 115-126, 1999). 이때 혈중 저밀도 지단백질(low-density lipoprotein; LDL)이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등을 거쳐 변형-LDL(modified-LDL; MLDL)로 변화하게 되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근을 자극하고 손상을 유발한다(Steinberg, D., J. Biol. Chem., 272: 20963-20966, 1997; Griendling, K.K. et al., Circulation, 96: 3264-3265, 1997; Bavab, M. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 16: 831-42, 1996). 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1; VCAM-1)의 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적되고, 축적된 LDL 및 산화된 MLDL은 다시 대식세포, T 임파구 등의 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진시키게 된다(Rajavashisth, T.B. et al., Nature, 344: 254-257, 1990; Quinn, M. T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 2995-2998, 1987). 그 다음, 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정이 이루어진다. 상기 과정을 통해 병변 조직은 MLDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며(Fuster, V. et al., Artherosclerosis and coronary artery disease, vol 1, 539-555, 585-594; vol. 2, 492-510, 1st Edition, Lippincott, 1996), 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다(Ross, R., N. Engl. J. Med., 340: 115-126, 1999).

LDL 산화는 동맥경화를 유발하는 초기 요인으로 가장 중시되고 있다. 생체 내외에서 생성되는 산화적 스트레스(oxidative stress)는 혈액 내의 LDL을 산화된-LDL(oxidized-LDL)로 변형시키게 되고, 이것이 부착분자(adhesion molecule)를 통해 맥관내막(intima) 내로 유입된다. 유입된 산화된-LDL을 단핵구(monocyte)가 탐식하여 거품세포(foam cell)를 형성하면서 동맥경화 초기 병변인 지방선조(fatty streak)를 생성하게 된다. 동맥경화 초기 병변의 특징은 동맥 내피세포에서 생성되는 부착분자인 VCAM-1, ICAM-1(intracellular adhesion molecule-1) 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이 발현된다는 것인데, 이들은 전사인자(transcription factor)인 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 유도된다. NF-κB는 p50과 p65로 구성된 이형이합체(hetero dimer)로서 많은 세포의 타겟 유전자(target gene)를 조절하는데 포함되는 전사인자이다. 활성화된 NF-κB는 IL-1, VCAM-1, ICAM-1 및 죽상동맥경화(atherosclerosis)의 진행에 관여하는 다른 인자들과 같이 특이적인 프로모터 유전자(promoter gene)에 결합하여 다양한 염증인자의 발현을 조절하며, 활성 산소종이나 사이토카인(cytokine) 등과 같은 다양한 요인에 의해 활성화된다.

항산화제 및 유리기 소거제는 이러한 NF-κB의 활성을 저해하는 것으로 밝혀지고 있으므로 항산화제를 적절히 섭취할 경우 생체 내(in vivo)에서 LDL의 산화를 저해하고 부착분자의 발현을 억제하며 NF-κB의 활성을 감소시켜 동맥경화를 억제할 것으로 기대되며, 이에 대한 연구들이 진행되고 있다(대한민국 공개특허 제2003-0014155호). 따라서, 고지혈증이나 동맥경화 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질 강하제를 함께 투여하는 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.

또한, 혈중 콜레스테롤 농도가 높으면 관상동맥성 심혈관 질환이 유발되기 쉬우므로, 혈중 콜레스테롤 농도를 줄이기 위해서 콜레스테롤 및 지방의 섭취를 줄이는 식이요법을 시행하거나 지질대사와 관련된 효소를 저해함으로써 콜레스테롤의 흡수를 억제하고 생합성을 저해하여 LDL량을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔다 (Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, D. et al., N. Engl. J. Med., 320: 915-924, 1989).

현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA (butylatedhydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxy toluene)는 LDL 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시키며 병변형성을 감소시키는 항산화력은 우수하나, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.

한편, 상표초(Mantidis ootheca)는 한방 및 민간요법에서 사용되는 약용곤충으로서 사마귀의 알둥지를 의미하며, '당랑자'라고도 한다. 상표초는 유원주형 모양이고, 길이 약 3-4 cm, 지름이 2-3 cm이며, 바깥면은 황갈색 또는 적갈색으로 냄새는 거의 없고, 맛이 짜면서 달며 독이 없다. 한방에서는 옛날부터 보신작용, 고정축뇨 효능이 있다. 또한, 유정백탁, 적백대하, 소변빈삭, 소아급경 등의 치료에도 사용된다. 그러나 아직까지 약용곤충인 상표초의 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에 대한 항산화 활성에 대해서는 발표된 바 없다.

이에, 본 발명자들은 부작용이 적은 새로운 동맥경화, 관상동맥 심장병 및 심근경색 등과 같은 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 천연물에서 탐색하던 중, 약용곤충인 상표초의 추출물 및 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에서 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 DPPH 라디칼 소거 활성이 우 수함을 확인하고 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 상표초 추출물, 그로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공하고자 한다.

본 발명은 상표초를 용매로 추출하여 제조하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상표초로부터 추출한 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 포함하는 항산화제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.

아울러, 본 발명은 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 상기 화학식 1 및 2로 표시되는 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공한다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명은 상표초를 용매로 추출하여 제조하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물을 제공한다.

구체적으로, 본 발명자들은 상표초를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후, 그늘에서 건조한 후, 건조된 상표초에 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 하였다. 추출 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매가 바람직하며, 가장 바람직하게는 에탄올이다. 또한, 추출시간은 바람직하게 3일이며, 상기에서 얻은 추출물을 여과하고 농축하여 조추출물을 수득하였다.

상기에서 수득한 조추출물에 물을 가하여 현탁시키고, 비극성 용매, 바람직하게는 n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획화하여, n-헥산 가용추출물, 클로로포름 가용추출물 및 에틸아세테이트 가용추출물을 수득하였다. 각 가용추출물에 대해 항산화 효과를 측정하여 에틸아세테이트 가용추출물에서 항산화 효과가 가장 우수함을 확인하였다(표 1 참조).

또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 포함하는 항산화제를 제공한다.

아세틸도파민계 화합물은 하기 화학식 1로 표시되는 N-2-(3,4-다이하이드록시페닐)-에틸 아세트아마이드 N-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-ethyl]-acetamide이고 바이페놀 화합물은 하기 화학식 2로 표시되는 3,5,3',5'-테트라-테트-부틸다이페닐-2,2'-다이올(3,5,3',5'-Tetra-tert-butyl-diphenyl-2,2'-diol)이다.

상기 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있고, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 포함한다.

또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 상기 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 제조하는 방법을 제공하며, 이는

(1) 상표초에 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부 터 선택된 용매를 첨가하여 조추출물을 제조하는 단계;

(2) 상기 단계 1에서 얻은 조추출물에 물을 가하여 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차 분획하여 에틸아세테이트 가용추출물을 얻는 단계; 및

(3) 상기 단계 2에서 얻은 에틸아세테이트 가용추출물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하여 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 수득하는 단계를 포함한다.

구체적으로, 상기에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물을 여과한 다음, 이동상 용매로 클로로포름, 메탄올 및 이들의 혼합용매를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 실시, 13개의 분획물(분획 1 ~ 13)로 분리하였다. 이때, 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 2 내지 5를 모아 2차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 15개의 분획물(분획 1 ~ 15)로 분리하였다(이때, 이동상 용매는 클로로포름과 메탄올 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 10 : 1인 혼합용매). 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 2 및 9, 10을 수득한 후, 분획물 2는 3차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 13개의 분획물(분획 1 ~ 13)로 분리하였다(이 때, 이동상 용매는 핵산과 에틸아세테이트의 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 1 : 1인 혼합용매). 이어서, 상기에서 수득한 활성분획물 2와 3을 4차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 화합물 2를 수득하였다. 2차 실리카겔 크로마토그래피 분리과정에서 LDL-항산화 활성이 우수한 분획물 9, 10을 모아 3차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 5개의 분획물 (분획 1 ~ 5)로 분리하였다(이때, 이동상 용매는 클로로포름과 메탄올 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 8 : 1인 혼합용매). 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 4 및 5를 수득한 후, 이 분획물 4와 5에 대해 역상 C-18(RP-18) 컬럼을 고정상으로 하고 메탄올과 물의 혼합용매, 바람직하게 1:1(v/v)로 혼합된 혼합용매를 이동상으로 하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 7개의 분획물을 수득하였다. 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 분획물 4로부터 화합물 1을 수득하였다.

아울러, 본 발명은 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 상기 화학식 1 및 2로 표시되는 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공한다.

본 발명의 상표초 추출물 및 이로부터 분리한 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올의 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성을 TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) 방법으로 측정한 결과, 저밀도 지질단백질의 산화에 대한 저해 효과 및 DPPH 라디칼 소거 활성이 양성 대조군으로 사용한 프로부콜보다 우수하게 나타나므로 항산화 효과가 우수하다(표 1 참조). 마우스를 대상으로 실시한 급성 독성실험에서도 폐사한 개체가 없었으며 독성에 의한 변화를 나타내지 않았다.

따라서, 본 발명에 따른 상표초 추출물 및 이로부터 분리한 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐- 2,2'-다이올은 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 치료제는 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.0001 ~ 50 중량부로 포함한다.

본 발명의 치료제는 상기 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1 종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 치료제는 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당해 기술분야의 적정한 방법으로 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 치료제는 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 상표초 추출물일 경우 10 ~ 2,000 ㎎/㎏ 이며, 바람직하게는 50 ~ 500 ㎎/㎏이다. 또한, 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물일 경우 약 0.1 ~ 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.5 ~ 10 ㎎/㎏이며, 이것을 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 효과 있다.

본 발명의 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여 독성시험에 의한 50% 치사량(LD₅₀)은 적어도 1,000 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단된다.

본 발명의 치료제는 심장순환계 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 치료제는 심장순환계 질환의 개선을 목적으로 하는 건강식품의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용 될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물은 원료에 대하여 1 ~ 20 중량부, 바람직하게는 5 ~ 10 중량부의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 건강음료는 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강음료는 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 하기의 실시예 및 실험예에 의해 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 상표초 조추출물의 제조

건조된 상표초(운남성, 중국) 200 g에 500 ㎖의 물을 가하고 90 ℃에서 4 시간 동안 끓인 후 여과하여 추출액 및 고상 잔류물을 수득하였다. 이를 감압농축하여 3 g의 상표초 열수 추출물을 수득하였다.

또한, 건조된 상표초 500 g에 95% 에탄올(EtOH) 2000 ㎖를 가하여 실온에서 3 일 동안 방치시킨 후, 여과지로 여과하고 농축하여 상표초 에탄올 추출물인 유성물질 62.3 g을 수득하였다.

상기 열수 추출물 및 에탄올 추출물에 대해 하기 실험예 1의 방법에 따라 항산화 활성을 측정한 결과, 에탄올 추출물의 항산화 활성이 우수하여 이하 실시예에 서 에탄올 추출물을 사용하였다(표 1).

<실시예 2> 상표초의 비극성 용매 가용추출물의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 상표초의 에탄올 추출물에 물 200 ㎖을 가하여 현탁시키고, n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl₃) 및 에틸아세테이트(EtOAc) 순으로 분획하여, n-헥산 가용추출물(n-hexane-soluble) 20.3 g, 클로로포름 가용추출물(CHCl₃-soluble) 6.3 g 및 에틸아세테이트 가용추출물(EtOAc-soluble) 2.7 g을 각각 수득하였다.

상기 각 분획에 대해 실험예 1과 같은 방법으로 항산화 효과를 측정한 결과, 에틸아세테이트 가용추출물에서 항산화 활성이 우수함을 확인하고 하기 실시예에서 사용하였다(표 1).

<실시예 3> 상표초의 에틸아세테이트 가용추출물로부터 본 발명의 화합물의 분리

상기 실시예 2에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물 2.7 g을 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 4 단계에 걸쳐 분리하였다.

첫 번째로 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ7 × 40 cm)에 클로로포름 100%, 클로로포름:메탄올 = 95:1, 90:1, 60:1, 30:1, 10:1, 5:1, 1:1(v/v) 및 메탄올 100%의 이동상 용매 조건으로 각각 500 ㎖ 씩을 전개시켜, 13 개의 분획물(Fr.1~13)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2 ~ 5 분획물(클로로포름:메탄올 = 90:1 및 60:1 용매조건, 수득량 1.18 g)을 분리하여, 두 번째 컬럼 크로마토그래피법을 수행하였다. 두 번째로 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ4.5 × 30 cm)에 클로로포름:메탄올 = 10:1(v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 400 ㎖ 씩을 전개시켜, 15개의 분획물(Fr.1~15)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2 분획물(수득량 331 mg) 및 9~10 분획물(230 mg)을 분리하였다.

세 번째 컬럼은 두 부분으로 나누어서 실행하였다. 첫 부분은 분획물 2를 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ2.5 × 28 cm)에 핵산: 에틸아세테이트= 1:1(v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 300 ㎖ 씩을 전개시켜, 13개의 분획물(Fr.1~13)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2~3 분획물(핵산: 에틸아세테이트= 1:1 용매조건, 수득량 30.6 mg)을 분리하였다. 분획물 2-3을 4 번째(1-4) 실리카겔 컬럼 (실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ2.5 × 28 cm)에 핵산: 에틸아세테이트= 1:1(v/v)의 이동상 용매 조건으로 각각 100 ㎖ 씩을 전개시켜, 7개의 분획물(Fr.1~7)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 분획물 1(핵산: 에틸아세테이트= 1:1 용매조건)로부터 정제된 화합물 2를 수득하였으며, 수득량은 7.6 mg 이었다.

두 번째 실리카겔 컬럼을 통해 얻은 분획물 9-10을 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ3.2 × 28 cm)에 클로로포름:메탄올 = 10:1 (v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 300 ㎖ 씩을 전개시켜, 5개의 분획물(Fr.1~5)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 4~5 분획물(클로로포름:메탄올 = 10:1 용매조건, 수득량 95.3 mg)을 분리하여, 네 번째(2-4) 역상 C-18 컬럼 크로마토그래피(Licroprep RP-18 : Merck, Art 13900, 컬럼크기: φ2.5 × 15 cm)를 수행하였다. 이때, 메탄올:물 = 1:1(v/v)의 이동상 용매조건으로 각각 50 ㎖ 씩 전개시켜, 7개의 분획물을 수득하였으며, 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 항산화 활성이 가장 뛰어난 분획물 4로부터 정제된 화합물 1을 수득하였으며, 수득량은 19 ㎎ 이었다.

<실시예 4> 본 발명의 화합물의 구조 분석

상기 실시예 3에서 수득한 세 화합물의 구조 분석을 위하여 하기와 같은 분석을 실시하였다.

VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima, Micromass, UK)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기(DIP-181 digital polarimeter, Jasco, Japan)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기 공명(NMR) 분석(AMX 500, Bruker, Germany)을 통하여 ¹H NMR, ¹³C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다.

이상의 기기분석 결과를 발표된 문헌(Naoki, N. et al., Chem. Pharm. Bull, 48: 1749-1752, 2000)의 것과 비교 분석한 결과, 본 발명의 화합물 1은 화학식 1 로 표시되며, 화합물 1은 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드 (N-(2-(3,4-Dihydroxy-phenyl)-ethyl)-acetamide)이며, Alexakis et al.의 문헌(J. Org. Chem., 69; 5660-5667, 2004)을 참고하여 상기 화학식 2로 표시되는 화합물 2는 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올(3,5,3',5'-Tetra-tert-butyl-diphenyl-2,2'-diol)으로 각각 동정되었다.

(화합물 1)

1) 물성: 적갈색 분말

2) 분자량: 195

3) 분자식: C₁₀H₁₃NO₃

4) ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ 1.86 (3H, s, H-4), 2.60 (2H, t, J = 7.0 Hz, H-2), 3.34 (2H, t, J = 7.1 Hz, H-1), 6.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5'), 6.62 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2'), 6.49 (1H, dd, J = 7.9 Hz, J = 1.2 Hz, H-6')

6) ESI-MS m/z: 218(M+Na)⁺, 196(10), 199(15), 217(20), 218(100)

(화합물 2)

1) 물성: 백색 분말

2) 분자량: 410

3) 분자식: C₂₈H₄₂O₂

4) ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ 1.30 (18H, s, 5-t-butyl), 1.43 (18H, s, 3-t-butyl), 5.19 (2H, s, -OH), 7.09 (2H, d, J = 2.1 HZ, H-4), 7.37 (2H, d, J = 2.1 Hz, H-6)

7) EIMS (rel. int.) m/z: 410(M)⁺, 57 (70), 190 (35), 283 (15), 339 (35), 354 (10), 395 (60), 410 (90).

<실험예 1> TBARS 법을 이용한 본 발명의 화합물의 항산화 활성 측정

본 발명의 상표초 추출물, 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성을 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

항산화 활성은 저밀도 지질단백질의 산화를 유도(Cu²⁺-mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있는 Cu²⁺로 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데히드(dialdehyde)를 TBARS(Thiobarbituric Acid Reactive Substances)법으로 측정하였다(Packer, L. Ed., Methods in Enzymology. Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego, 1994).

사람으로부터 혈장 300 ㎖를 채취하여, 초원심분리기로 100,000 × g에서 24 시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질단백질(VLDL)/킬로마이크론(chylomicron)층을 제거하고, 나머지 용액의 비중을 1.063 g/㎖로 맞춘 후, 100,000 × g에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질단백질 25 ㎖(1.5~2.5 ㎎ 단백질/㎖)을 분리하였다. 상기에서 분리한 저밀도 지질단백질 20 ㎕(단백질 농도, 50~100 ㎍/㎖)을 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 210 ㎕와 혼합하고, 상기 실시예 1에서 제조한 각 용매추출물, 각 분획 및 화합물들의 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다. 이때, 화합물들은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매인 DMSO 만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 프로부콜(Probucol, Sigma-Aldrich Co.)을 첨가한 것을 사용하였다. 상기 용액에 0.25 mM CuSO₄ 10 ㎕를 첨가하여 37 ℃에서 4시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ㎖를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 다음으로, 0.05N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ㎖를 첨가하고 10 초간 교반시킨 후 95 ℃에서 5분 동안 가열하여 발색 반응을 일으키고, 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이후, 용액을 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데히드(malondialdehyde, MDA)의 양을 측정하였다.

한편, 말론디알데히드의 표준곡선을 구하기 위하여, 말론알데히드 비스(디메틸아세탈)(malonaldehyde bis(dimethylacetal))의 저장용액(Sigma-Aldrich Co.)을 희석하여 0~10 nmol 말론디알데히드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 만들어 상기와 같은 방법으로 발색시키고 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여, 말론디알데히드의 표준곡선을 구하였다. 상기 표준곡선을 이용하여 본 발명의 화합물들로부터 생성된 말론디알데히드의 양을 정량하였다. 결과는 표 1에 나타내었다.

표 1에 나타난 바와 같이, 상기 실시예 1에서 수득한 열수 추출물은 40 ㎍/㎖에서 52%의 항산화 효과를 나타내는 반면, 에탄올 추출물은 같은 농도에서 64%의 항산화 효과를 나타내어 에탄올 추출물의 항산화 효과가 더 좋음을 확인하였다.

또한, 상기 실시예 2에서 수득한 각 용매추출물 가운데 에틸아세테이트 용매추출물이 40 ㎍/㎖ 농도에서 저밀도 지질단백질에 대해 79%의 항산화 효과를 나타내어 n-헥산, 클로로포름 가용추출물에 비해 가장 우수한 항산화 활성이 있음을 확인하였

또한, 실시예 3에서 수득한 화합물 1인 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 화합물 2인 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올의 항산화 활성은 IC₅₀ 값이 각각 5.7 μM, 44.7 μM로 화합물 1은 양성 대조군의 IC₅₀보다 낮게 나타나 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성이 우수함을 확인하였다.

<실험예 2> DPPH 소거능을 이용한 본 발명의 화합물의 항산화 활성 측정

본 발명의 상표초 추출물, 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 라디칼 소거능을 통한 항산화 활성을 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrasyl)는 매우 안정한 자유 라디칼인데, 화합물의 처리에 의한 DPPH 잔존 정도로 라디칼 소거능을 측정하였다(Royt, P. W. et al., Bioorg. Chem. 29 : 387-397, 2001).

MeOH로 녹인 시료(최종농도 100 μM) 500 ㎕에 라디칼 DPPH 용액(최종농도 100 μM, Sigma-Aldrich Co.) 1 ml을 넣는다. 대조군으로는 라디칼 DPPH 용액 1 ml과 MeOH 500 ㎕를 사용하였고, 공시험(blank)으로는 MeOH 1.5 ml만 넣어서 517 nm에서 20분 동안 UV-가시 분광광도계(visible spectrometer)로 측정하였다. DPPH 방법에 사용한 기기는 8453 UV-Visible Spectrophotometer(Agilent Technologies Co.)를 사용하였다.

그 결과 화합물 1, 2를 첨가하고 10 분 후, 남아있는 라디칼은 각각 4.3%, 58.1% 였고, 대조군으로 쓰인 프로부콜(probucol)은 38.7%로 나타났다. 화합물 1은 프로부콜보다 높은 라디칼 소거능을 나타내었다.

따라서, 본 발명의 상표초 추출물 및 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물은 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수함으로, 이를 포함하는 제제는 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

<실험예 3> 급성 독성실험

본 발명의 상표초 추출물 및 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물들에 대한 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

4주령의 특정 병원체 부재(SPF, specific pathogens free) ICR계 마우스를 암수 각각 3 마리씩 3개군(암수 각각 3마리/실험군)으로 나누어, 온도 22± 3℃, 습도 55± 10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험 동물용 사료(마우스 및 랫트용, (주)제일제당, 서울, 대한민국) 및 음수를 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.

상기 실시예 3에서 제조한 화합물 1 및 2를 0.5% 트윈(tween) 80에 50 ㎎/㎖ 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.04 ㎖(100 ㎎/㎏), 0.2 ㎖(500 ㎎/㎏) 및 0.4 ㎖(1,000 ㎎/㎏)씩 경구 투여하였다. 시료는 단회 경구 투여하였으며, 투여 후 7 일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여 당일은 투여 후 1 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7 일째까지는 매일 오전, 오후 1 회 이상씩 일반 증상의 변화 및 사망 동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 7 일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1 일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 화합물 1및 2에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.

실험 결과, 시료를 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상이 나타나지 않았고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

따라서, 본 발명의 화합물들은 모든 마우스에서 1,000 ㎎/㎏까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)이 1,000 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 치료제를 위한 제제예를 예시한다.

<제제예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사액제의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물각각 을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

<제제예 2> 식품의 제조

본 발명의 화합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

<2-1> 조리용 양념의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 0.2 ~ 10 중량부로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.

<2-2> 토마토 케찹 및 소스의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 0.2 ~ 1.0 중량부를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.

<2-3> 밀가루 식품의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

<2-4> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 1.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-5> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-6> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 1.0 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-7> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 을 진공 농축기에서 감압, 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 건조분말(1 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부)

<제제예 3> 음료의 제조

<3-1> 탄산음료의 제조

설탕 5~10%, 구연산 0.05 ~ 0.3%, 카라멜 0.005 ~ 0.02%, 비타민 C 0.1 ~ 1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79 ~ 94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85 ~ 98℃에서 20 ~ 180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5 ~ 0.82% 주입하여 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

<3-2> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

<3-3> 야채쥬스의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 0.5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

<3-4> 과일쥬스의 제조

본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

본 발명의 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물은 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수하므로 이를 포함하는 조성물은 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (12)

1. 상표초를 용매로 추출하여 제조하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 용매는 C₁ 내지 C₄ 알코올인 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물.
4. 제 1항에 있어서, 상기 용매는 에탄올인 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물.
5. 제 1항에 있어서, 상표초의 에탄올 추출물을 n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차 분획하여 수득한 에틸아세테이트 가용추출물인 것을 특징으로 하 는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물.
6. 하기 화학식 1로 기재되는 아세틸도파민계 화합물인 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드를 유효성분으로 함유하는 항산화제.

   <화학식 1>

   
7. 하기 화학식 2로 기재되는 바이페놀 화합물인 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올을 함유하는 항산화제.

   <화학식 2>

   
8. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 상표초 추출물, 제 6항의 화합물 또는 제 7항의 화합물을 유효성분으로 함유하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료제.
9. 제 8항에 있어서, 건강식품 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료제.
10. 제 8 항에 있어서, 상기 심혈관계 질환은 관상동맥 심장병, 동맥경화 및 심근경색으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것임을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료제.
11. (1) 상표초에 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 첨가하여 조추출물을 제조하는 단계;

    (2) 상기 단계 1에서 수득한 조추출물에 물을 가하여 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차 분획하여 에틸아세테이트 가용추출물을 수득하는 단계; 및

    (3) 상기 단계 2에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하여 아세틸도파민계 화합물, 바이틸페놀 화합물을 얻는 단계를 포함하는 제 7항의 아세틸도파민계 화합물 및 제 8항의 바이페놀 화합물의 제조방법.
12. 제 11항에 있어서, 단계 3의 크로마토그래피는 실리카겔 크로마토그래피인 것을 특징으로 하는 제조방법.