KR20070087624A

KR20070087624A - Ｈｃｖ 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20070087624A
Application number: KR1020077014269A
Authority: KR
Inventors: 카이 린; 비트 웨이드만
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2004-12-23
Filing date: 2005-12-20
Publication date: 2007-08-28
Also published as: JP2008525459A; MA29098B1; BRPI0519345A2; RU2007128099A; AU2005322242A1; AU2005322242B2; US20090104149A1; CA2587793A1; NO20073764L; WO2006071619A1; ZA200703908B; CN101076350A; MX2007007779A; US7897565B2; IL183659A0; EP1830871A1; NZ555143A

Abstract

본 발명은 a) 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물인 제1 작용제와, b) 공동-작용제를 포함하는 제약 조합물에 관한 것이다.

비-면역억제성 시클로스포린, C형 간염, 병용 요법, 항바이러스제

Description

ＨＣＶ 치료용 조성물 {Compositions for HCV Treatment}

본 발명은 제약 화학 분야, 특히 비-면역억제성 시클로스포린 및 C형 간염 감염증의 병용 치료법에 관한 것이다.

본 발명은 비-면역억제성 시클로스포린에 대한 신규 용도에 관한 것이다.

시클로스포린은 통상적으로 약리학적 활성, 특히 면역억제 활성 또는 소염 활성을 보유하고 있는, 구조적으로 별개의 사이클릭, 폴리-N-메틸화 운데카펩티드 부류를 포함한다. 분리되는 첫 번째 시클로스포린은 천연 발생적 진균 대사물 시클로스포린 (Ciclosporin 또는 Cyclosporine)이였고, 이는 시클로스포린 A로서 공지되기도 하였다.

시클로스포린 A가 IL-2의 전사 개시를 차단시킴으로써 T 세포 활성화 과정을 방해하는 작용을 한다는 사실이 널리 정립되었다. 시클로스포린 A는 많은 세포 유형에 존재하고 단백질 폴딩에 관여하는 효소인 펩티딜-프롤릴 시스-트랜스 이소머라제와 동일한 것으로 밝혀진, 시클로필린 (cyclophilin)으로 지칭되는 17 kD 세포질 단백질과 복합체를 형성하는 것으로 밝혀졌다.

그러나, 시클로필린과 결합하는 것이 면역억제 활성에 필수적이긴 하지만, 이러한 활성을 위한 충분한 기준은 아닌 것으로 밝혀졌다. 시클로스포린 A/시클로 필린 복합체는 포스파타제 초분자군에 속하는 칼시네우린 (calcineurin) (CN)으로 지칭되는 세포성 단백질과 연합할 수도 있다. 이러한 결합은 그의 포스파타제 활성을 폐기시켜 전사 인자 NF-AT를 억제시킨다. CN/NF-AT 경로 억제가 시클로스포린 A 매개된 면역억제에 대한 필수 기전이다.

시클로필린과 강력하게 결합하지만 면역억제성은 아닌 시클로스포린이 확인 (동정)되었다. 시클로스포린은 혼합 림프구 반응 (MLR)에서 시클로스포린 A 활성의 5% 이하, 바람직하게는 2% 이하 활성을 지닌 경우에 비-면역억제성인 것으로 간주된다. 이러한 혼합 림프구 반응이 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: T. Meo in "Immunological Methods", L. Lefkovits and B. Peris, Eds., Academic Press, N.Y. pp. 227 - 239 (1979)]. Balb/c 마우스 (암컷, 8 내지 10 주생)로부터의 비장 세포 (0.5 x 10⁶)를, CBA 마우스 (암컷, 8 내지 10 주생)로부터의 0.5 x 10⁶개의 조사되거나 (2000 rads) 또는 미토마이신 C 처리된 비장 세포와 함께 5일 동안 공동-항온 배양하였다. 상기와 같이 조사된 동종 세포는 Balb/c 비장 세포에서 증식성 반응을 유도시키는데, 이는 DNA 내로의 표지된 전구체 혼입에 의해 측정할 수 있다. 자극인자 세포에 조사하였거나 미토마이신 C 처리하였기 때문에, 이들 세포는 증식을 수반하면서 Balb/c 세포에 반응하지 않지만, 그들의 항원성은 보유하고 있다. MLR에서 시험 화합물에 대해 밝혀진 IC₅₀을, 병렬 실험에서 시클로스포린 A에 대해 밝혀진 것과 비교하였다. 또한, 비-면역억제성 시클로스포린은 CN과 하단 NF-AT 경로를 억제할 수 있는 능력이 없다.

EP 0 484 281 A1에는 AIDS 또는 AIDS-관련 장애를 치료하는데 있어서의 비-면역억제성 시클로스포린의 용도가 기재되어 있다. EP 2004/009804에 기재된 바와 같이, 시클로필린과 결합하는 비-면역억제성 시클로스포린은 또한, C형 간염 바이러스 (HCV)에 대한 억제 효과를 지닌 것으로 밝혀졌다.

도 1은 본 발명의 시클로스포린 (NIM811)과, (A) 인터페론-α, (B) BILN2061, (C) LCQ971 또는 (D) NM107를 사용한 병용 치료 효과를 도시한 것이다.

도 2는 NIM811 단독으로 치료하거나 NIM811을 (A) 인터페론-α 또는 (B) BILN2061과 병용해서 치료한 경우의 세포 복제 저하를 비교하여 도시한 것이다.

도 3은 바이러스 RNA에 대한 NIM811과 BILN2061의 조합물의 억제 효과를 도시한 것이다.

발명의 요약

비-면역억제성 시클로스포린이 플라비비리대 (flaviviridae), 특히 C형 간염 바이러스에 대항하여 탁월한 효과를 제공한다는 사실이 밝혀졌다. 이러한 발견에 기초하여, 유효량의 비-면역억제성 시클로스포린을 그의 1종 이상의 공동-작용제, 염, 에스테르, 프로드럭 (prodrug) 또는 유도체와 병용해서 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 감염증을 치료하기 위한 조성물, 방법 및 용도가 제공된다.

본원에 언급된 모든 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 도입된다.

놀랍게도, 시클로필린과 결합하는 비-면역억제성 시클로스포린이 C형 간염 바이러스 (HCV)에 대한 억제 효과를 지니고 있고, 이를 기타 항바이러스 의약품과 병용해서 사용하는 경우에는 이러한 조합물이 특히 유효하다는 사실이 본 발명에 의해 밝혀졌다.

비-A, 비-B형 간염의 주요 원인물질 (병원체)로서 확인된 HCV에 의한 지속적인 감염이 간 질환, 예를 들어 만성 간염, 간경변 또는 간세포 암종과 밀접하게 관련이 있는 것으로 간주되었다. 이들 간 질환의 발생이 공중 위생 상의 큰 문제가 되고 있다. 유효한 항-HCV 요법은 인터페론 알파를 이용한 요법이나 인터페론 알파와 리바비린 (ribavirin)과의 조합물을 이용한 요법 (병용 요법)으로 제한된다. 그러나, 상기 바이러스는 이들 공지된 작용제로 치료받은 HCV 환자들 중의 대략 절반에게서 제거되지 못하기 때문에, 또 다른 (대안적) 항-HCV 작용제에 대한 필요성이 강력히 대두되고 있다.

따라서, 본 발명은 기타 치료제와 병용해서 사용되는 경우에 C형 간염 또는 HCV 유도된 장애를 예방하거나 치료하는데 있어서의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린의 용도를 제공한다. C형 간염 또는 HCV 유도된 장애는, 예를 들어 만성 간염, 간경변 또는 간암, 예를 들면 간세포 암종이다. 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 및 이와 기타 치료제와의 조합물은 또한, 예를 들어 HCV 감염된 어머니에게서 태어난 신생아 또는 상기 바이러스에 노출된 의료 종사자를 예방적 처치하거나, 또는 이식체 수용자, 예를 들어 간 이식체 수용자를 예방적 처치하기 위한 작용제로서 사용하여 이식 후에 HCV 감염이 재발할 수 있는 가능성을 없앨 수 있다.

시클로스포린은 문헌 [참고: Quesniaux in Eur. J. Immunol. 1987 17: 1359 - 1365]에 기재된 경쟁적 ELISA 시험에서 시클로스포린 A와 마찬가지로 인간 재조합 시클로필린과 적어도 1/5 정도 결합하는 경우에 시클로필린과 결합하는 것으로 간주된다. 이러한 시험에서는, 시클로필린을 피복된 BSA-시클로스포린 A와 함께 항온 배양하는 동안에, 시험하고자 하는 시클로스포린를 가하고, 경쟁인자를 수반하지 않은 대조군 반응을 50% 억제시키는데 요구되는 농도를 계산한다 (IC₅₀). 그 결과를 결합 비 (BR)로서 표현하였는데, 이는 시험 화합물의 IC₅₀과 시클로스포린 A 자체의 동시 시험에서의 IC₅₀ 비의 십진법에 대한 로그이다. 따라서, BR 1.0은 시험 화합물이 시클로스포린 A 보다 훨씬 덜하게 인간 시클로필린과 1/10 인자 정도 결합한다는 것을 나타내고, 음성 값은 시클로스포린 A 보다 더 강력하게 결합한다는 것을 나타낸다. HCV에 대항하여 활성인 시클로스포린은 BR 값이 0.7 미만, 예를 들어 0 이하이다.

비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린의 예에는, 예를 들어 다음 화학식 I의 화합물이 포함된다:

상기식에서,

W는 MeBmt, 디히드로-MeBmt 또는 8'-히드록시-MeBmt이고;

X는 αAbu, Val, Thr, Nva 또는 0-메틸 트레오닌 (MeOThr)이며;

R은 Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, 또는 (D)-MeSer(O아세틸)이고;

Y는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu, MeIle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle 또는 MeaThr; N-에틸Val, N-에틸Ile, N-에틸Thr, N-에틸Phe, N-에틸Tyr 또는 N-에틸Thr(O아세틸)이며;

Z는 Val, Leu, MeVal 또는 MeLeu이고;

Q는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu 또는 MeAla이다.

기 W, X, Y, Z, Q 및 R은 독립적으로, 다음의 바람직한 의미를 갖는다:

W는 바람직하게 W'이고, W'는 MeBmt 또는 디히드로-MeBmt이고;

X는 바람직하게 X'이며, X'는 αAbu 또는 Nva이고, 보다 바람직하게는 X"이며, X"는 αAbu이고;

R은 바람직하게 R'이며, R'는 Sar이고;

Y는 바람직하게 Y'이며, Y'는 γ-히드록시-MeLeu, MeVal, MeThr, MeIle, N-에틸Ile 또는 N-에틸Val이며;

Z는 바람직하게 Z'이고, Z'는 Val 또는 MeVal이며;

Q는 바람직하게 Q'이고, Q'는 MeLeu이다.

바람직한 화학식 I의 화합물 군에는 W가 W'이고, X가 X'이며, Y가 Y'이고, Z가 Z'이며, Q가 Q'이고 R이 R'인 화합물이다.

바람직한 화학식 I의 화합물의 예는, 예를 들어 다음과 같다:

a) [디히드로-MeBmt]¹-[γ-히드록시-MeLeu]⁴-시클로스포린; BR* = 0.1; IR<1%

b) [MeVal]⁴-시클로스포린; BR = 0.1; IR<1%

c) [MeIle]⁴-시클로스포린; BR = -0.2; IR<1%

d) [MeThr]⁴-시클로스포린;

e) [γ-히드록시-MeLeu]⁴-시클로스포린; BR = 0.4; IR<1%

f) [에틸-Ile]⁴-시클로스포린; BR = 0.1; IR<2%

g) [에틸-Val]⁴-시클로스포린; BR = 0; IR<2%

h) [Nva]²-[γ-히드록시-MeLeu]⁴-시클로스포린;

i) [γ-히드록시-MeLeu]⁴-[γ-히드록시-MeLeu]⁶-시클로스포린;

j) [MeVal]⁵-시클로스포린; BR = 0.4; IR = 5.3%

k) [MeOThr]²-[(D)MeAla]³-[MeVal]⁵-시클로스포린;

l) [8'-히드록시-MeBmt]¹-시클로스포린; BR = 0.35; IR= 1.8%

m) [MeAla]⁶-시클로스포린; BR = -0.4; IR = 3.2

n) [γ-히드록시-MeLeu]⁹-시클로스포린; BR = 0.15; IR = 2.9.

IR = 시클로스포린 A와 비교한 활성의 비율 (%)로서 표현된 면역억제 비.

비-면역억제성 시클로스포린의 추가 예는 WO 98/28330, WO 98/28329 및 WO 98/28328 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재된 화합물, 예를 들어 다음 화학식 II의 화합물, 또는 그의 제약상 허용 가능한 염이다:

상기식에서,

W_a는

이고;

R_a는 화학식 Ic 또는 Id의 잔기

-CH₂-CH=CH-CH₂-R₄ (Ic) 또는 -CH₂-SH-R'₄ (Id)

[여기에서, R₄는 C_1-4알킬티오, 아미노C_1-4알킬티오, C_1-4알킬아미노C_1-4알킬티오, 디C_1-4알킬아미노-C_1-4알킬티오, 피리미디닐티오, 티아졸릴티오, N-C_1-4알킬이미다졸릴티오, 히드록시C_1-4알킬페닐티오, 히드록시C_1-4알킬페녹시, 니트로페닐아미노 또는 2-옥소피리미딘-1-일이고, R'₄는 C_1-4알킬이다]이며;

X_a는 Abu이고;

R_a는 -NMe-CH(R_b)-CO-이며, R_b는 H 또는 -S-Alk-R₀이고 Alk-R₀는 메틸이거나; 또는 Alk는 직쇄 또는 분지된 C_2-6알킬렌 또는 C_3-6시클로알킬렌이고, R₀는 H; OH; COOH; C_2-5알콕시-카보닐; NR₁R₂이며, R₁ 및 R₂는 각각 독립적으로, H, C_1-4알킬, C_2-4알케닐, C_3-6시클로알킬 및 페닐 (이는 각각 할로겐, C_1-4알콕시, C_2-5알콕시카보닐, 아미노, C_1-4알킬아미노 및/또는 디C_1-4알킬-아미노에 의해 임의로 치환된다), 및 벤질 및 헤테로사이클릭 라디칼 (이러한 벤질 및 헤테로사이클릭 라디칼은 포화 또는 불포화되고 5 또는 6개 환 구성원과 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유한다) 중에서 선택되거나; R₁과 R₂는 이들이 부착된 질소 원자와 함께, 4 내지 6원 헤테로사이클 (이는 질소, 산소 및 황 중에서 선택된 또 다른 헤테로 원자를 함유할 수 있고, C₁ _- ₄알킬, 페닐 또는 벤질에 의해 임의로 치환된다)을 형성하거나; 또는 R₁과 R₂는 각각 독립적으로, 다음 화학식 Ib의 라디칼

(Ib)

(여기에서, R₁과 R₂는 상기 정의된 바와 같고, R₃은 H 또는 C₁ _- ₄알킬이며, n은 2 내지 4의 정수이다)이고;

Y_a는 MeLeu 또는 γ-히드록시-MeLeu이며;

Z_a는 Val이고;

Q_a은 MeLeu인데,

단 Y_a가 MeLeu이면, R_b는 H가 아니다.

화학식 II에서 R₁ 및/또는 R₂가 헤테로사이클릭 잔기인 경우, 이는 피리딜, 테트라히드로피리딜, 피페리딜, 이미다졸릴, 옥사졸릴 또는 티아졸릴일 수 있다. R₁과 R₂가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클릭 잔기를 형성하는 경우에, 예를 들어 이러한 헤테로사이클릭 잔기는 아제티디닐, 피페리딜, 피페라지닐, N-메틸-피페라지닐, N-페닐피페라지닐, N-벤질피페라지닐, 피리딜, 이미다졸릴, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 테트라히드로피리딜, 메틸테트라히드로피리딜 (예: 4-메틸-테트라히드로피리딜) 또는 페닐테트라히드로피리딜 (예: 4-페닐테트라히드로피리딜) 중에서 선택될 수 있다.

화학식 I, 또는 II의 화합물은 각종 방식으로 수득할 수 있는데, 이러한 방식은, 예를 들어 EP 0 484 281 A1, WO 00/01715, WO 98/28330, WO 98/28329 또는 WO 98/28328 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재된 바와 같이, 다음으로서 분류될 수 있다:

1) 발효

2) 생체내 변환

3) 유도체화

4) 부분 합성

5) 총 합성

일련의 추가의 구체적 또는 또 다른 양태에서, 본 발명은 또한 다음을 제공한다:

1.1 치료상 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 1종 이상의 공동-작용제와 병용해서 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에게서 C형 간염 감염증 또는 HCV 유도된 장애를 예방하거나 치료하는 방법.

1.2 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 1종 이상의 공동-작용제와 병용해서 배지에 적용하는 것을 포함하는, 배지 중에서 HCV 복제를 억제하는 방법.

1.3 치료상 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 1종 이상의 공동-작용제와 병용해서 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에게서 HCV 복제를 억제하는 방법.

1.4 치료상 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 1종 이상의 공동-작용제와 병용해서 이식체 수용자에게 투여하는 것을 포함하는, 이식체 수용자에게서 HCV 감염 재발을 예방하는 방법.

2. 상기 정의된 바와 같은 모든 방법에 사용하기 위한 제약 조성물을 제조하는데 있어서의, 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물과, 1종 이상의 공동-작용제의 조합물의 용도.

3. 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 1종 이상의 공동-작용제와 병용해서, 이에 대한 하나 이상의 제약상 허용 가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 모든 방법에 사용하기 위한 제약 조성물.

또 다른 국면에서, 병용 또는 교대 치료에 사용할 수 있는 적합한 공동-작용제에는 다음이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다:

(1) 인터페론 또는 인터페론의 접합체, 예를 들어

(a) 인트론-A (Intron-A^®), 인터페론 알파-2b (공급처: Schering Corporation, Kenilworth, NJ),

(b) PEG-인트론^®, 페그인터페론 알파-2b (공급처: Schering Corporation, Kenilworth, NJ),

(c) 로페론 (Roferon^®), 재조합 인터페론 알파-2a (공급처: Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ),

(d) 페가시스 (Pegasys^®), 페그인터페론 알파-2a (공급처: Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ),

(e) 베레포르 (Berefor^®), 입수 가능한 인터페론 알파 2 (공급처: Boehringer lngelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT),

(f) 수미페론 (Sumiferon^®), 천연 알파 인터페론의 정제된 블렌드 (공급처; Sumitomo, Japan),

(g) 웰페론 (Wellferon^®), 림프아구성 인터페론 알파 n1 (공급처: GlaxoSmithKline),

(h) 인페르젠 (Infergen^®), 컨센서스 알파 인터페론 (공급처: InterMune Pharmaceuticals, Inc., Brisbane, CA and Amgen, Inc., Newbury Park, CA),

(i) 알페론 (Alferon^®), 천연 알파 인터페론의 혼합물 (공급처: Interferon Sciences, and Purdue Frederick Co., CT),

(j) 비라페론 (Viraferon^®);

(k) 접합된 인터페론에는, 예를 들어 인간 알부민과 접합되는 알부페론 (Albuferon) (공급처: Human Genome Science)이 포함된다. 수용성 중합체 또는 폴리알킬렌 옥사이드 단독중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 그의 공중합체 및 그의 블록 공중합체와 접합된 인터페론이 포함된다. 폴리알킬렌 옥사이드계 중합체에 대한 대안으로서, 유효하게 비-항원성인 물질, 예를 들어 덱스트란, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐 알코올, 탄수화물계 중합체 등을 사용할 수 있다. 인터페론-중합체 접합체는 US 4766106, US 4917888, EPA 0 236 987, EPA 0 510 356 및 WO 95/13090에 기재되어 있다. 이러한 중합체성 변형은 항원성 반응을 충분히 저하시키기 때문에, 외래 인터페론이 완전히 자기 유래일 필요는 없다. 중합체 접합체를 제조하기 위해 사용된 인터페론은 포유류 추출물, 예를 들어 인간, 반추동물 또는 소의 인터페론으로부터 제조할 수 있거나, 또는 재조합적으로 생성될 수 있다.

기타 형태의 인터페론에는 인터페론 베타, 감마, 타우 및 오메가, 예를 들어 레비프 (Rebif) (인터페론 베타 1a; 공급처: Serono), 옴니페론 (Omniferon) (천연 인터페론; 공급처: Viragen), 또는 오메가 (Omega) 인터페론 (공급처: Boehringer Ingelheim); 경구용 인터페론, 예를 들어 경구용 인터페론 알파 (공급처: Amarillo Biosciences)이 포함된다.

또 다른 국면에서, 인터페론의 부가 예에는 페길화 인터페론 알파, 예를 들어 페길화 인터페론-α-2a, 페길화 인터페론-α-2b, 페길화 컨센서스 인터페론 또는 페길화 정제된 인터페론-α 생성물이 포함된다. 페길화 인터페론-α-2a는 유럽 특허 제593,868호 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재되어 있고, 예를 들어 상표명 PEGASYS^® (공급처: Hoffmann-La Roche)으로 시판되고 있다. 페길화 인터페론-α-2b는, 예를 들어 유럽 특허 제975,369호 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재되어 있고, 예를 들어 상표명 PEG-INTRON A^® (공급처: Schering Plough)로 시판되고 있다. 페길화 컨센서스 인터페론은 WO 96/11953 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재되어 있다.

(2) 항바이러스제

항바이러스제는 포유류에게서 특정 바이러스의 형성 및/또는 복제를 억제하는데 유효한 화합물 또는 생물학적 제제일 수 있다. 이에는 포유류에게서 특정 바이러스의 형성 및/또는 복제에 필요한 숙주 또는 바이러스성 기전을 방해하는 작용 제, 예를 들어 리바비린 (ribavirin) (1-베타-D-리보푸라노실-1H-1,2,4-트리아졸-3-카복스아미드) (공급처; Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA), 레베톨 (Rebetol^®) (공급처: Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ), 및 코페구스 (Copegus^®) (공급처: Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ), 개발 중인 리바비린 유사체, 예를 들면 레보비린 (Levovirin) 및 비라미딘 (Viramidine) (공급처: Valeant), 및 미조리빈 (Mizoribine) 모노포스페이트가 포함된다;

(3) 프로테아제 억제제

HCV NS3-4A 세린 프로테아제의 억제제, 예를 들어 기질에 의거한 프로테아제 억제제 [참고: Attwood et al., Antiviral peptide derivatives, PCT WO 98/22496, 1998; Attwood et al., Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999, 10, 259-273; Attwood et al, Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, German Patent Pub. DE 19914474; Tung et al. Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 protease; PCT WO 98/17679], 예를 들면 알파케토아미드 및 히드라지노우레아, 및 친전자체에서 종결되는 억제제, 예를 들어 보론산 또는 포스포네이트 [참고: Llinas-Brunet et al. Hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734];

HCV를 치료하기 위한 프로테아제 억제제가 다음 미국 특허에 기재되었다: 예를 들어, HCV 엔도펩티다제 2를 억제하기 위한 특정 부류의 시스테인 프로테아제 억제제가 기재되어 있는 미국 특허 제6,004,933호 (Spruce et al.); C형 간염 바이 러스 NS3 프로테아제의 합성 억제제가 기재되어 있는 미국 특허 제5,990,276호 (Zhang et al.); 미국 특허 제5,538,865호 (Reyes et al.). HCV의 NS3 세린 프로테아제 억제제로서의 펩티드가 WO 02/008251 (Corvas International, Inc.), 및 WO 02/08187 및 WO 02/008256 (Schering Corporation)에 기재되어 있다. HCV 억제제 트리펩티드가 미국 특허 제6,534,523호, 제6,410,531호 및 6,420,380호 (Boehringer lngelheim) 및 WO 02/060926 (Bristol Myers Squibb)에 기재되어 있다 (상기 문헌의 전문이 본원에 참고도 도입된다). HCV의 NS3 세린 프로테아제 억제제로서의 디아릴 펩티드가 WO 02/48172 (Schering Corporation)에 기재되어 있다. HCV의 NS3 세린 프로테아제 억제제로서의 이미다졸에이디논이 WO 02/18198 (Schering Corporation) 및 WO 02/48157 (Bristol Myers Squibb)에 기재되어 있다 (상기 문헌의 전문이 본원에 참고도 도입된다). WO 98/17679 (Vertex Pharmaceuticals) 및 WO 02/48116 (Bristol Myers Squibb)에는 또한, HCV 프로테아제 억제제가 기재되어 있다 (상기 문헌의 전문이 본원에 참고도 도입된다).

(4) 기질에 의거하지 않는 NS3 프로테아제 억제제, 예를 들어 2,4,6-트리히드록시-3-니트로-벤즈아미드 유도체 [참고: Sudo K. et al., Biochemiscal and Biophysical Research Communications, 1997, 238 643-647; Sudo K. et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1998, 9, 186], 예를 들면 RD3-4082 및 RD3-4078;

(5) 스트렙토마이세스 종 (Streptomyces sp.)의 발효 배양 육즙으로부터 분리된, SDS-PAGE 및 자가방사선 촬영술 검정에서 프로테아제에 대항한 활성을 보유 하고 있는 페난트렌퀴논, Sch 68631 [참고: Chu M. et al., Tetrahedron Letters, 1996, 37, 7229-7232]; 진균 페니실륨 그리세오풀붐 (Penicillium griseofulvum)으로부터 분리된 Sch 351633 [참고: Chu M. et al, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9: 1949-1952]; 거머리로부터 분리되고, 몇 가지 세린 프로테아제, 예를 들어 에스. 그리세우스 (S. griseus) 프로테아제 A 및 B, ∀-키모트립신, 키마세 및 서브틸리신 (subtilisin)의 강력한 억제제 [참고: Qasim M.A. et al., Biochemistry 36:1598-1607, 1997]인, 거대분자 에글린 (eglin) c에 의거하여 고안된 선택적 억제제;

(6) 문헌 [참고: Kakiuchi N. et al. J. FEBS Letters 421, 217-220; Takeshita N. et al. Analytical Biochemistry, 1997, 247, 242-246]에서 확인된 티아졸리딘 및 벤즈아닐리드. NS3/4A 융합 단백질과 NS5A/5B 기질을 사용한 역상 HPLC 검정에서 관련 억제를 나타내는 티아졸리딘 유도체 [참고: Sudo K. et al., Antiviral Research, 1996, 32, 9-18], 특히 알킬 장쇄에 의해 치환된 융합 신나모일 부분을 보유하고 있는 화합물 RD-16250, RD4 6205 및 RD4 6193;

(7) HCV NS3-4A 세린 프로테아제 억제제, 예를 들어 BILN 2061 (공급처: Boehringer Ingelheim), VX-950 (공급처: Vertex), SCH-6, SCH-7, 및 SCH-351633 (공급처: Schering-Plough), 및 다음 업체 (GlaxoSmithKline, Bristol Myers Squibb, Abbot, Roche, Merck, Pfizer, 및 Gilead)에 의해 전임상 및 임상 개발 중인 기타 HCV 프로테아제 억제제;

(8) 뉴클레오시드 유사체

텔비부딘 (Telbivudine) (공급처: Idenix) [참고: US 6444652, US6596700, 및 WO0196353]

HCV NS5B RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 뉴클레오시드 또는 비-뉴클레오시드 억제제, 예를 들어 WO 2004/002422에 기재된 바와 같은 2'-C-메틸-3'-O-L-발린 에스테르 리보푸라노실 시티딘 (NM283; 공급처: Idenix).

국제공개공보 WO 01/90121 및 WO 01/92282 (그들의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 플라비바이러스 (HCV 포함) 및 페스티바이러스를 치료하는데 사용하는 것으로 이데닉스 파마슈티칼즈 (Idenix Pharmaceuticals)에 의해 기재된 분지된 뉴클레오시드. 구체적으로 언급하면, 유효량의 생물학적 활성 1', 2', 3' 또는 4'-분지된 B-D 또는 B-L 뉴클레오시드 또는 그의 제약상 허용 가능한 염 또는 프로드럭을, 임의로 제약상 허용 가능한 담체 중에서 단독으로 투여하거나 또는 또 다른 항바이러스제와 병용해서 투여하는 것을 포함하여, 인간 및 기타 숙주 동물에게서 C형 간염 감염증 (및 플라비바이러스 및 페스티바이러스)을 치료하는 방법이 상기 이데닉스 공개공보에 기재되어 있다.

C형 간염 바이러스를 치료하는데 사용하기 위한 뉴클레오시드 유사체의 용도가 기재되어 있는 기타 특허원에는 다음이 포함된다: PCT/CAOO/01316 (WO 01/32153; 2000년 11월 3일자로 출원됨) 및 PCT/CA01/00197 (WO 01/60315; 2001년 2월 19일자로 출원됨) [출원인: BioChem Pharma, Inc. (현재 Shire Biochem, Inc.)]; PCT/US02/01531 (WO 02/057425; 2002년 1월 18일자로 출원됨) 및 PCT/US02/03086 (WO 02/057287; 2002년 1월 18일자로 출원됨) [출원인: Merck & Co., Inc.], PCT/EP01/09633 (WO 02/18404; 2001년 8월 21일자로 공개됨) [출원인: Roche] 및 PCT 공개공보 WO 01/79246 (2001년 4월 13일자로 출원됨), WO 02/32920 (2001년 10월 18일자로 출원됨) 및 WO 02/48165 (Pharmasset, Ltd.) (이들 문헌의 전문이 본원에 참고로 도입된다).

PCT 공개공보 WO 99/43691 (Emory University; 발명의 명칭: "2'- Fluoronucleosides") (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에는 2'-플루오로뉴클레오시드가 기재되었다;

문헌 [참고: Eldrup et al., Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International Conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, GA)]에는 2'-변형된 뉴클레오시드가 기재되었다;

문헌 [참고: Bhat et al., Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae, 2003 (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, Ga); p A75]에는 뉴클레오시드 유사체 및 2'-변형된 뉴클레오시드가 기재되었다;

문헌 [참고: Olsen et al., Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International Conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, Ga) p A76]에는 2'-변형된 뉴클레오시드가 기재되었다;

전임상 화합물에는 R803 (공급처: Rigel), JTK-003 (공급처: Japan Tabacco), HCV-086 (공급처: ViroPharma/Wyeth), R-1479 (공급처: Roche)가 포함된 다.

(9) 뉴클레오티드 폴리머라제 억제제 및 글리오톡신 (gliotoxin) [참고: Ferrari R. et al. Journal of Virology, 1999, 73, 1649-1654], 및 천연 생성물 세룰레닌 (cerulenin) [참고: Lohmann V. et al. Virology, 1998, 249, 108-118];

(10) HCV NS3 헬리카세 억제제, 예를 들어 VP_50406 (공급처: ViroPhama) 및 공급처 (Vertex)로부터의 화합물, 미국 특허 제5,633,388호 및 PCT WO 97/36554에 기재된 기타 헬리카세 억제제;

(11) HCV 게놈, 또는 바이러스 복제에 요구되는 모든 세포성 성분에 대항하여 유도된 안티센스 분자.

바이러스의 5' 비-암호화 영역 (NCR) 중의 서열 연장물에 대해 상보적이거나 [참고: Alt M. et al., Hepatology, 1995, 22, 707-717), 또는 HCV RNA의 코어 암호화 영역 내에 위치한 뉴클레오티드 371-388 및 NCR의 3' 말단을 포함하는 뉴클레오티드 326-348에 대해 상보적인 [참고: Alt M. et al., Archives of Virology, 1997, 142, 589-599; Galderisi U. et al., Journal of Cellular Physiology, 199, 181, 251-257] 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (S-ODN); 예를 들어, ISIS 14803 (공급처: Isis Pharm/Elan), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (공급처: Hybridon, AVI bioPharma 및 Chugai), AVI-4065 (AVI BioPharma), 또는 요법의 효능을 증가시키는 HCV 게놈의 어느 부분에 대해서도 상보적인 안티센스 서열.

(12) IRES-의존성 해독 억제제 [참고: Ikeda N et al., Agent for the prevention and treatment of hepatitis C, Japanese Patent Pub. JP-08268890; Kai Y et al. Prevention and treatment of viral diseases, Japanese Patent Pub. JP-10101591]; 예를 들어, ISIS 14803 (공급처: lsis Pharm/Elan), IRES 억제제 (공급처: PTC Therapeutics, Anadys, Immusol, RiboTargets, 및 SomaGenics);

(13) 리보자임, 예를 들어 뉴클레아제-내성 리보자임 [참고: Maccjak, D.J. et al., Hepatology 1999, 30, abstract 995] 및 미국 특허 제6,043,077호 (Barber et al.), 및 미국 특허 제5,869,253호 및 제5,610,054호 (Draper et al.) (이들 문헌의 전문이 본원에 참고로 도입된다)에 기재된 리보자임, 예를 들어 HEPTAZYME (공급처: RPI, 및 Sirna Therapeutics Inc.);

(14) 바이러스 유입, 어셈블리 및 성숙을 포함한 HCV 생활 주기 중의 기타 표적의 억제제, 예를 들어 당단백질 프로세싱 억제제인 셀고시비르 (Celgosivir) (MBI 3253; 공급처: Migenix), 융합 억제제 (공급처: Trimeris), ACH-0137171 (공급처: Achillion);

(15) 면역 조정제

수용체 작동제, 예를 들어 톨 (toll) 유사 수용체 (TLR) 작동제에는 ANA245, ANA971, ANA975 [참고: US 5041426, 4880784] (공급처: Anadys); TLR-9 작동제인 CpG-10101 (공급처: Coley Pharmaceuticals); IMPDH 억제제, 미코페놀산, 그의 염 또는 프로드럭인 나트륨 미코페놀레이트 또는 미코페놀레이트 모페틸, 또는 메리메보디브 (Merimebodib) (VX-497; 공급처: Vertex); 티모신 알파-1 [자닥신 (Zadaxin) 또는 그의 조합물; 공급처: SciClone]; SCV-07 (공급처: SciClone), 벨레로폰 (Belerofon) (개선된 IFN-α; 공급처: Nautilus); CIVACIR (C형 간염 면역 글로불린; 공급처: NABI), 또는 S1P 수용체 작동제, 예를 들어 FTY720 또는 임의로 인산화된 그의 유사체, 예를 들면 EP 627406A1, EP 778263A1, EP 1002792A1, WO 02/18395, WO 02/76995, WO 02/06268, JP 2002316985, WO 03/29184, WO 03/29205, WO 03/62252 및 WO03/62248 (이들의 전문이 본원이 참고로 도입된다)에 기재된 것; 인터페론-α 및 기타 사이토킨의 강력한 유도제인 이미퀴모드 유사체 레시퀴모드 (Resiquimod) [VML 600] (공급처: 3M Pharmaceuticals)가 포함된다;

(16) 항-섬유성 작용제, 예를 들어 N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 이마티니브 (imatinib) (공급처: Gleevac), IP-501 (공급처: Indevus), 및 인터페론 감마 1b (공급처: InterMune), 피르페니돈 (Pirfenidone) (다중 TGF 베타 작동제, FGF 길항제, PDGF 길항제) (공급처: Intermune, Marnac, Shionogi);

(17) 치료 백신 (공급처: lntercell) (치료적 펩티드 백신 IC41 HCV), 에피임뮨/제네코르 (Epimmune/Genecor), 메릭스 (Merix), 트리펩 (Tripep) (Chiron-VacC), 면역요법 [테라포레 (Therapore); 공급처; Avant], T 세포 요법 (공급처: CellExSys), 모노클로날 항체 XTL-002 (공급처: STL), ANA 246 및 ANA 246 (공급처: Anadys), E2에 대해 유도된 치료 백신 (공급처: Innogenetics), E2 외막 단백질에 대항한 mAb (공급처: XTL Bio), GI-5005 (공급처: Globelmmune Inc), InnoVac-C [참고: WO 9967285; 공급처: Innogenetics], IC-41 (공급처: lntercell), 인터페론 알파-n3 (공급처: Interferon Sciences), 엔게릭스 (Engerix) B (공급처: SmithKline Beecham);

(18) 기타 화합물에는 우르소디올 (Ursodiol) [참고: EP 00269516; 공급처: Axcan Pharma], HE-2000 (DHEA 유사체; 공급처: Colthurst Ltd), EHC-18 (면역조정제; 공급처: Enzo biochem), 히스타민 디히드로클로라이드 (H2 작동제, WO 09104037, 공급처: Estero-Anstalt), 1-아미노-알킬시클로헥산 [참고: 미국 특허 제6,034,134호], 알킬 지질 [참고: 미국 특허 제5,922,757호], 비타민 E 및 기타 항산화제 [참고: 미국 특허 제5,922,757호], 담즙산 [참고: 미국 특허 제5,846,99964호], N-(포스포노아세틸)-L-아스파르트산 [참고: 미국 특허 제5,830,905호], 벤젠디카복스아미드 [참고: 미국 특허 제5,633,388호], 폴리아데닐산 유도체 [참고: 미국 특허 제5,496,546호], 2'3'-디데옥시이노신 [참고: 미국 특허 제5,026,687호], 벤즈이미다졸 [참고: 미국 특허 제5,891,874호], 식물 추출물 [참고: 미국 특허 제5,837,257호, 미국 특허 제5,725,859호 및 미국 특허 제6,056,961호] 및 피페리딘 [참고: 미국 특허 제5,830,905호]; N-(포스포노아세틸)-L-아스파르트산, 벤젠디카복스아미드, 폴리아데닐산 유도체, 당화 억제제, 및 바이러스 감염에 의해 유발된 세포 손상을 차단시켜 주는 비-특이적 세포보호제;

(19) 현재 HCV 치료를 위해 전임상 또는 임상 개발 중인 기타 모든 화합물, 예를 들어 인터루킨-10 (공급처: Schering-Plough), AMANTADINE (Symmetrel) (공급처: Endo Labs Solvay), 카스파제 억제제 IDN-6556 (공급처: ldun Pharma), HCV/MF59 (공급처: Chiron), CEPLENE (히스타민 디클로라이드) (공급처: Maxim), IDN-6556 (공급처: ldun PHARM), T67, 베타-투불린 억제제 (공급처: Tularik), FK788 (공급처: Fujisawa Healthcare), IdB1016 (Siliphos, 경구 실리빈-포스파티딜 콜린 피토솜), 디케이션 (Dication) (공급처: Immtech), 헤모퓨리파이어 (hemopurifier) (공급처: Aethlon Medical), UT 231B (공급처: United Therapeutics); HepeX-C SM1, PPVO-Bay55-8800 (Parapoxvirus ovis) (공급처: Bayer); 레파날린 (Refanalin) (HGF 모방제) (공급처: Angion), R803 (Rigel), JTK-003, JTK-002 및 JTK-109 (공급처: Japan Tobacco), HCV-086 (공급처: ViroPharma/Wyeth), ISIS-14803 (공급처: ISIS Pharmaceuticals), GS-9132 (폴리머라제 억제제; 공급처: Achillion Pharmaceuticals), HCV-793 (공급처: Pharmasset 및 Roche), R1626 (공급처: Roche).

전임상 개발 중인 화합물 또는 약물은, 예를 들어 인터넷 상에서 임상 시험 정보를 검색하고 각각의 회사로부터 방출 정보를 프레스함으로써 당업자가 용이하게 확인할 수 있다.

(20) 병용 요법의 효능을 증가시켜 주는 화합물, 예를 들어 항엽산제, 5-플루오로피리미딘 (5-플루오로우라실 포함), 시티딘 유사체, 예를 들면 β-L-1,3-디옥솔라닐 시티딘 또는 β-L-1,3-디옥솔라닐 5-플루오로시티딘, 항대사제 (퓨린 항대사제, 시타라빈, 푸다라빈, 플록수리딘, 6-머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 및 6-티오구아닌 포함), 히드록시우레아, 유사분열 억제제 (CPT-11 포함), 에토포시드 (Etoposide) (VP-21), 탁솔, 및 빈카 알카로이드, 예를 들면 빈크리스틴 및 빈블라스틴, 알킬화제 (이에는 부술판, 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포파미드, 메클로르에타민, 멜팔란 및 티오테파가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다), 비전통적 알킬화제, 백금 함유 화합물, 블레오마이신, 항종양 항생제, 안트라사이클린, 예를 들면 독소루비신 및 다노마이신, 안트라센디온, 토포이소머라제 II 억제제, 호르몬 작용제 [이에는 코르티코스테로이드 (덱사메타손, 프레드니손 및 메틸프레드니손), 안드로겐, 예를 들어 플루옥시메스테론 및 메틸테스토스테론, 에스트로겐, 예를 들어 디에틸스틸베스테롤, 항에스트로겐제, 예를 들어 타목시펜, LHRH 유사체, 예를 들어 류프롤리드, 항안드로겐제, 예를 들어 플루타미드, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 및 메드록시프로게스테론이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다], 아스파라기나제, 카르무스틴, 로무스틴, 헥사메틸-멜라민, 다카르바진, 미토탄, 스트렙토조신, 시스플라틴, 카르보플라틴, 레바마솔, 및 류코보린. 본 발명의 화합물은 효소 요법제 및 면역 시스템 조정제, 예를 들어 인터루킨, 종양 괴사 인자, 대식세포 집락 자극 인자 및 집락 자극 인자와 병용해서 사용할 수도 있다.

상기 명시된 바와 같은 질병 및 질환을 치료하는데 있어서의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린 ("본 발명의 시클로스포린"으로서 후술된다)의 유용성은, 예를 들어 다음에 기재된 방법에 따라서 표준 동물 또는 임상 시험에서 입증할 수 있다.

실시예 1 시험관내 검정:

세포 배양: HCV 레플리콘 세포주, 클론 A를 공급처 (Apath, LLC)로부터 수득하였다. 이 세포를, 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS, 공급처: Gibco), 2 mM L-글루타민, 1x 비필수 아미노산 (공급처: Gibco), 및 1 mg/ml G418 (공급처: Invitrogen, Carlsbad, CA)을 함유하는 둘벡코 변형 이글스 (Dulbecco's modified Eagle's) 배지 (DMEM, 공급처: Gibco)에서 배양하였다.

HCV 레플리콘 세포주, Huh-Luc/neo-ET를 공급처 (ReBlikon GmbH)로부터 수득하였다. 이 세포를, 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS, 공급처: Gibco), 2 mM L-글루타민, 1x 비필수 아미노산 (공급처: Gibco), 및 0.25 mg/ml G418 (공급처: Invitrogen, Carlsbad, CA)을 함유하는 둘벡코 변형 이글스 배지 (DMEM, 공급처: Gibco)에서 배양하였다.

QRT-PCR에 의거한 HCV 레플리콘 검정: 화합물의 항바이러스 효과를 결정하기 위해, HCV 레플리콘 세포 클론 A를, 2% FBS 및 0.5% DMSO를 보충시킨 DMEM에서 일련으로 희석시킨 화합물로 48시간 동안 처리한 다음, 총 세포내 RNA를 추출하고, HCV RNA 수준을, HCV-특이적 프라이머 (5'-TCT TCA CGC AGA AAG CGT CTA-3' 및 5'-CTG GCA ATT CCG GTG TAC T-3') (서열 1) 및 프로브 (5'-6-FAM-TCC TGG AGG CTG CAC GAC ACT CAT A-TAMRA-3') (서열 2)를 사용하여 실시간 정량적 RT-PCR (Taqman)함으로써 결정하였다. 각 처리에 대해, HCV RNA의 양을 추출된 총 RNA 양에 대항하여 표준화시켰는데, 이는 퀀트 (Quant)-iT 검정 (공급처: Molecular Probe)에서 결정하였다. 각 데이터 점은 세포 배양 중인 6개 복제물의 평균치를 나타낸다. IC₅₀은 레플리콘 세포 내의 HCV RNA 수준을 50% 정도 저하시키는 화합물의 농도이다. 화합물의 세포독성을 모니터링하기 위해, 화합물 처리한지 48시간 후의 레플리콘 세포의 생육도를, 테트라졸륨 화합물 (MTS)에 의거한 검정 (CellTiter 96^® 수성 원 용액 세포 증식 검정, 공급처: Promega, Madison, WI)을 이용하여 결정하였다. CC_5O은 세포 생육도를 50% 정도 저하시키는 화합물의 농도이다.

루시퍼라제에 의거한 HCV 레플리콘 검정: HCV 레플리콘 세포주 Huh-Luc/neo-ET에서는, 루시퍼라제의 발현이 HCV RNA 복제와 해독 제어 하에 있으므로, 이러한 세포 중에서의 루시퍼라제 활성 저하를 측정함으로써 항바이러스 활성을 결정할 수 있다. HCV 레플리콘 세포 (Huh-Luc/neo-ET)를, 10% FBS 및 0.5% DMSO를 보충시킨 DMEM에서 일련으로 희석시킨 화합물로 48시간 동안 처리하였다. 이어서, BrightGlo 시약 (공급처: Promega) 및 LMaxll 판 판독기 (공급처; Molecular Probe)를 사용하여 루시퍼라제 활성을 결정하였다. 상기 언급된 테트라졸륨 화합물 (MTS)에 의거한 검정을 사용하여 화합물의 세포독성을 평가하였다.

실시예 2: 병용 (조합물) 분석

다음 문헌의 저자 [참고: Prichard, M. N. and Shipman, C, 1999, Antivir. Res. 14:181-205]의 의해 개발된 3차원적 분석 방법인 블리스 (Bliss) 독립 모델을 이용하여, 약물-약물 병용 효과를 분석하였다. 이 모델에서는 방정식 Z=X+Y(1-X) [여기서, X 및 Y는 약물 1 또는 약물 2 단독에 의해 각각 야기된 억제를 나타내고, Z는 약물 1과 약물 2를 병용할 경우에 야기된 효과를 나타낸다]을 이용하여 개개 화합물의 용량-반응 곡선으로부터 이론적 부가 효과를 계산하였다. 이론적 부가 표면을 실제적 실험 표면으로부터 공제하면, 병용이 단지 부가적인 경우에는 0% 억제 하의 수평선으로서 여겨질 수 있는 표면이 생성된다. 실험적 용량-반응 표면에 대한 95% 신뢰 간격이 해당 데이터를 통계적으로 평가하기 위해 사용되었다.

9일 항바이러스 RNA 저하 검정을 이용하여, 병용 치료 효과에 관한 분석을 조사하였다. HCV 레플리콘 세포 클론 A를, 10% FBS 및 0.2% DMSO를 보충시킨 DMEM 중의 화합물로 3, 6 또는 9일 동안 처리한 다음, 총 세포내 RNA를 추출하고, HCV RNA 수준을, 상기 언급된 바와 같은 HCV-특이적 프라이머 및 프로브를 사용하여 실시간 정량적 RT-PCR (Taqman)함으로써 결정하였다. 각 처리에 대해, HCV RNA의 양을 추출된 총 RNA 양에 대항하여 표준화시켰는데, 이는 퀀트-iT 검정 (공급처: Molecular Probe)에서 결정하였다. 화합물-처리시킨 세포에서의 HCV RNA 수준을, 처리시키지 않은 세포에서의 수준과 비교함으로써 HCV RNA의 log 저하치를 계산하였다.

상기 언급된 수학적 모델과 검정 시스템을 사용하여, NIM811 ([Melle]⁴-시클로스포린)과 IFN-α의 병용 효과를 조사하였다. HCV 레플리콘 세포를 48시간 동안 각종 농도의 NIM811 및 IFN-α 단독으로 처리하거나 이들을 병용해서 처리하였다. 도 1A에 도시된 바와 같이, 농도-의존적 방식으로 병용해서 사용하는 경우에는 HCV가 보다 강력하게 억제되었다. 중요하게도, 시험된 농도에서 해당 조합물을 사용하는 경우 (병용하는 경우)에는 세포독성의 상당한 증가가 없었다.

또 다른 양태에서, BILN2061은 HCV NS3-4A 세린 프로테아제의 특이적 억제제이다 [참고: Lamarre D, et al. 2003. Nature 426:186]. 상기 언급된 수학적 모델과 검정 시스템을 사용하여, NIM811과 BILN2061의 병용 효과를 조사하였다. HCV 레플리콘 세포를 48시간 동안 각종 농도의 NIM811 및 BILN2061 단독으로 처리하거나 이들을 병용해서 처리하였다. 도 1B에 도시된 바와 같이, 농도-의존적 방식으로 병용해서 사용하는 경우에는 HCV가 보다 강력하게 억제되었다. 중요하게도, 시 험된 농도에서 해당 조합물을 사용하는 경우에는 세포독성의 상당한 증가가 없었다.

LCQ971은 HCV NS5B RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 비-뉴클레오시드 억제제이다 [참고: WO-00185172, WO-02098424, WO-03059356, Dhanak D. et al. 2002. J. Biol. Chem. 277:38322-7]. NIM811과 LCQ971의 병용 효과를 레플리콘 시스템에서 조사하였는데, 여기서는 세포를 48시간 동안 각종 농도의 NIM811 및 LCQ971 단독으로 처리하거나 이들을 병용해서 처리하였다. 도 1C에 도시된 바와 같이, 두 작용제를 병용해서 사용하는 경우에는 농도-의존적 방식의 추가의 HCV 억제가 있었다. 이러한 병용 효과는 블리스 독립 모델을 사용하여 분석된 바와 같이 상승적인 것으로 결정되었다. 중요하게도, 시험된 농도에서 해당 조합물을 사용하는 경우에는 세포독성의 상당한 증가가 없었다.

뉴클레오시드 유사체인 NM107은 HCV NS5B RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 특이적 억제제이다. NM107는 C형 간염을 치료하기 위해 현재 제II상 임상 시험 중인 실험용 약물 NM283의 활성 대사물이다. NIM811과 NM107의 병용 효과를 또한 레플리콘 시스템에서 조사하였는데, 여기서는 세포를 48시간 동안 각종 농도의 NIM811 및 NM107 단독으로 처리하거나 이들을 병용해서 처리하였다. 도 1D에 도시된 바와 같이, 두 작용제를 병용해서 사용하는 경우에는 농도-의존적 방식의 추가의 HCV 억제가 있었다. 이러한 병용 효과는 블리스 독립 모델을 사용하여 분석된 바와 같이 상승적이었다. 중요하게도, 시험된 농도에서 해당 조합물을 사용하는 경우에는 세포독성의 상당한 증가가 없었다.

도 2에 도시된 바와 같이, 0.5 μM NIM811은 처리한지 9일 후에 레플리콘 세포에서 HCV RNA를 1.2-log 저하시킨 반면, 1 μM NIM811은 바이러스 NRA 저하를 3-log 초과 저하시켰다. 중요하게는, 0.5 μM NIM811과 5 U/ml IFN-α의 조합물 (병용)은 HCV RNA를 2.7-log 저하시켰는데, 이는 0.5 μM NIM811 단독이나 5 U/ml IFN-α 단독을 이용한 경우의 저하 수준 (1.2-log) 보다 상당히 더 우수하다. 더우기, 0.5 μM NIM811과 20 U/ml IFN-α의 조합물은 HCV RNA를 3.7-log 저하시켰는데, 이는 훨씬 고 농도의 IFN-α 단독이나 NIM811 단독을 이용한 경우의 저하 수준 보다 더 크다.

유사하게 도 2B에 도시된 바와 같이, NIM811과, HCV NS3-4A 프로테아제의 특이적 억제제인 BILN2061을 병용해서 사용하면, 훨씬 고 농도의 BILN2061 단독이나 NIM811 단독을 이용한 경우의 저하 수준 보다 더 큰 바이러스 RNA 저하가 유발되었다.

실시예 3 내성 빈도 분석

HCV 레플리콘 세포 클론 A를 1 mg/ml G418의 존재 하에 각농 농도의 NIM811 및 BILN2061 단독으로 또는 병용해서 처리하였다. 상기 세포를 2주 동안 BILN2061로 처리한 후에 내성 집락이 형성되기 시작하였다. 처리한지 3주 후에 수집된 세포 배양물이 도 3에 도시되었다. 내성 집락 수가 또한 도시되었다. NIM811과 BILN2061을 단독으로 사용하는 경우 보다 이들 화합물을 병용해서 사용하는 경우에 내성률이 현저하게 감소되었다. 이 데이터는 병용 요법이 내성 출현을 저해시키는데 도움을 줄 수 있다고 제안하고 있다.

실시예 4 임상 시험:

실연 (proof-of-concept) 연구로서, C형 간염 바이러스 감염증에 걸린 총 15명 내지 30명의 환자를 2주 내지 12주간의 연구에 참여시켰다. 각 환자에게 화학식 I의 화합물, 예를 들어 [MeIle]⁴-시클로스포린을 1일 0.5 내지 20 mg/kg의 용량으로 단독으로 경구 투여하거나, 또는 이를 표준 용량의 공동-작용제, 예를 들어 페길화 IFN-α와 병용해서 경구 투여하였다. 각 환자에 대해 C형 간염 바이러스의 치료 전 혈청 수준과 치료 후 혈청 수준을 결정하였다. 본 발명의 시클로스포린 화합물은 단독 성분으로서 투여하거나 또는 기타 항바이러스제, 특히 HCV에 대항하여 활성인 작용제와 병용해서 또는 교대로 투여할 수 있다. 병용 요법에서는, 2가지 이상 작용제의 유효 투여량을 함께 투여하는 반면, 교대 또는 순차-단계 요법에서는 각 작용제의 유효 투여량을 일련으로 또는 순차적으로 투여한다. 일반적으로, 병용 요법이 교대 요법에 비해 전형적으로 바람직한데, 이는 병용 요법이 바이러스에 대해 동시 다발적 스트레스를 유도시키기 때문이다. 제공된 투여량은 해당 약물의 흡수성, 불활성화 및 배출 속도 뿐만 아니라 기타 요인들에 따라서 결정될 것이다. 투여량 값은 경감시키고자 하는 질환의 중증도에 따라서 또한 다양할 것이란 사실을 인지해야 한다. 특별한 모든 대상체에 대해, 개개인의 필요성과 조성물을 투여하는 사람이나 이러한 투여를 관리하는 사람의 전문적 판단에 따라서 일정 시간에 걸쳐 특이적인 투여량 섭생과 스케쥴을 조정해야 한다는 사실을 추가로 인지해야 한다. 바이러스 감염에 대항한 약물의 효능은 해당 화합물을, 약물 내성 바이러스에서 주요 (제1) 약물에 의해 유발된 것과는 상이한 유전자 돌연변이를 유도시키는 제2, 및 아마도 제3 항바이러스성 화합물과 병용해서 또는 이러한 화합물과 교대로 투여함으로써 연장, 증대 또는 복원시킬 수 있다. 또 다른 한편으론, 약물의 약동학, 생체분포도 또는 기타 파라미터는 이러한 병용 또는 교대 요법에 의해 변경될 수 있다.

본 발명의 방법을 실시하는데 요구되는 1일 투여량은, 예를 들어 이용된 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 숙주, 투여 방식, 치료하고자 하는 질환의 중증도에 따라서 다양할 것이다. 환자에게 적합한 [MeIle]⁴-시클로스포린의 1일 투여량은, 예를 들어 0.5 내지 20 mg/kg (경구 또는 정맥내), 바람직하게는 1일 25 내지 75 mg, 1일 75 내지 200 mg, 가장 바람직하게는 1일 200 내지 400 mg이고, 이는 하나 이상의 제약상 허용 가능한 희석제 또는 담체와 함께 투여된다. 해당 투여 형태 중의 공동-작용제의 양은, 예를 들어 0.00001 내지 1000 mg/kg 활성 성분으로 상당히 다양할 수 있다.

사용된 공동-작용제와 관련한 1일 투여량은, 예를 들어 이용된 화합물, 숙주, 투여 방식, 및 치료하고자 하는 질환의 중증도에 따라서 다양할 것이다. 예를 들어, 페길화 인터페론은 매주 총 2백만 내지 1천만 IU, 또는 5백만 내지 1천만 IU, 또는 8백만 내지 1천만 IU 범위의 용량으로, 1주에 1 내지 3회, 예를 들어 1주에 1회 비경구 투여할 수 있다. 다양한 유형의 공동-작용제가 사용될 수 있기 때문에, 그 양은, 예를 들어 1일 0.0001 내지 5,000 mg/kg으로 크게 다양할 수 있다.

C형 간염을 치료하기 위한 현 표준 의료는 페길화 인터페론 알파를 리바비린과 병용해서 사용하는 것인데, 이들의 권장 용량에는 1주 1.5 ㎍/kg 페그인터페론 알파-2b 또는 1주 180 ㎍ 페그인터페론 알파-2a + 유전자형 1 환자의 경우에는 48주 동안 1일 리바비린 1,000 내지 1,200 mg, 또는 유전자형 2/3 환자의 경우에는 24주 동안 1일 리바비린 800 mg이 포함된다.

본 발명의 시클로스포린은 통상적인 모든 경로, 특히 경장적 (enterally), 예를 들어 음료용 용제, 정제 또는 캅셀제 형태로 경구 투여할 수 있거나, 예를 들어 주사용 용제 또는 현탁제 형태로 비경구 투여할 수 있다. 바람직한 제약 조성물은, 예를 들어 UK 2,222,770 A에 기재된 바와 같은 마이크로에멀션에 기초한 것일 수 있다.

전술된 내용에 따라서 본 발명은 다음 추가의 국면으로 제공된다:

4. a) 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물인 제1 작용제와, b) 공동-작용제, 예를 들어 상기 정의된 바와 같은 1종 이상의 공동-작용제를 포함하는 제약 조합물.

5. 치료상 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 및 공동-작용제, 예를 들어 상기 정의된 바와 같은 1종 이상의 공동-작용제를 공동-투여, 예를 들어 동시에 투여하거나 순차적으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 방법.

본원에서 활용된 바와 같은 용어 "공동-투여" 또는 "병용 투여" 등은 선택된 치료제를 단일 환자에게 투여하는 것을 포괄하고, 이에는 이들 작용제를 반드시 동 일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여할 필요가 없는 치료 섭생이 포함된다. 고정된 조합물 또한 본 발명의 범위 내에 속한다. 본 발명의 제약 조합물을 투여하면, 그의 제약상 활성 성분들 중의 단지 한 성분 만을 적용하는 단일제요법과 비교해서 유리한 효과, 예를 들어 상승적 또는 부가적 치료 효과가 유발된다. 상승적 조합물의 한 예가 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린과 IFN-α의 조합물이다.

[MeIle]⁴-시클로스포린 (NIM811)은 본 발명에 따라서 사용하기에 적합한 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린의 한 예이다.

Claims

a) 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린인 제1 작용제와, b) 1종 이상의 공동-작용제, 또는 그의 제약상 허용 가능한 염 또는 에스테르를 포함하는 제약 조성물.
제1항에 있어서, 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린이 다음 화학식 I의 화합물인 조성물:

<화학식 I>

상기식에서,

W는 MeBmt, 디히드로-MeBmt 또는 8'-히드록시-MeBmt이고;

X는 αAbu, Val, Thr, Nva 또는 0-메틸 트레오닌 (MeOThr)이며;

R은 Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, 또는 (D)-MeSer(O아세틸)이고;

Y는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu, MeIle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle 또는 MeaThr; N-에틸Val, N-에틸Ile, N-에틸Thr, N-에틸Phe, N-에틸Tyr 또는 N-에틸Thr(O아세틸)이며;

Z는 Val, Leu, MeVal 또는 MeLeu이고;

Q는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu 또는 MeAla이다.
제1항에 있어서, 공동-작용제가 인터페론, 인터페론의 접합체, 항바이러스제, 헬리카세 억제제, 프로테아제 억제제, 폴리머라제 억제제 및 뉴클레오시드 유사체로 이루어진 군 중에서 선택되는 조성물.
제1항에 있어서, 공동-작용제가 HCV NS5B 폴리머라제의 억제제인 조성물.
제4항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제의 억제제가 2'-C-메틸 리보푸라노실 시티딘 또는 그의 프로드럭인 조성물.
치료상 유효량의 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린과, 인터페론, 인터페론의 접합체, 항바이러스제, 헬리카세 억제제, 프로테아제 억제제, 폴리머라제 억제제 및 뉴클레오시드 유사체로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상의 공동-작용제를 공동-투여하는 것을 포함하는 방법.
제6항에 있어서, 비-면역억제성 시클로필린-결합성 시클로스포린이 다음 화학식 I의 화합물인 방법:

<화학식 I>

상기식에서,

W는 MeBmt, 디히드로-MeBmt 또는 8'-히드록시-MeBmt이고;

X는 αAbu, Val, Thr, Nva 또는 0-메틸 트레오닌 (MeOThr)이며;

R은 Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, 또는 (D)-MeSer(O아세틸)이고;

Y는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu, MeIle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle 또는 MeaThr; N-에틸Val, N-에틸Ile, N-에틸Thr, N-에틸Phe, N-에틸Tyr 또는 N-에틸Thr(O아세틸)이며;

Z는 Val, Leu, MeVal 또는 MeLeu이고;

Q는 MeLeu, γ-히드록시-MeLeu 또는 MeAla이다.
제6항에 있어서, 공동-작용제가 인터페론 또는 인터페론의 접합체인 방법.
제6항에 있어서, 공동-작용제가 HCV NS5B 폴리머라제의 억제제인 방법.
제9항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제의 억제제가 2'-C-메틸-리보푸라노실 시티딘 또는 그의 프로드럭인 방법.