KR20060018267A

KR20060018267A - Ｔｈ１형 면역질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR20060018267A
Application number: KR1020057023917A
Authority: KR
Inventors: 도시유키 호리
Original assignee: 다이이치 아스비오파마 가부시키가이샤
Priority date: 2003-06-13
Filing date: 2004-06-11
Publication date: 2006-02-28
Also published as: EP1637162A1; JPWO2004110489A1; CN1816353A; CA2528883A1; CN1816353B; US20070270337A1; EP1637162A4; WO2004110489A1; BRPI0411410A

Abstract

본 발명은 Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 구체적으로는 수지상 세포에서 발현되는 ANP 수용체인 GC-A에 작용하여 수지상 세포의 사이토카인 생산을 조절하고, cGMP 생산을 촉진함으로써, T 세포를 Th2형세포로 분화시킬 수 있는 물질을 유효 성분으로서 함유하는 약학 조성물을 제공한다.

Th1형 면역 질환, Th2형 면역 질환, 수지상 세포, 사이토카인.

Description

Ｔｈ１형 면역질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 {MEDICINAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING Th1 TYPE IMMUNOLOGICAL DISEASE}

본 발명은, 수지상 세포에서 발현되는 나트륨이뇨펩티드(NP) 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A(GC-A)에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트(cGMP) 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 유효성분으로 하는 Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

면역계는 본래, 외래 이물질 (미생물 등)을 인식하여 제거하기 위한 방어 기전으로서 진화되어 왔다. 이를 위해, 생체는 자기 세포 또는 자기 조직과 외래의 이물질(비자기)을 구별하여, 비자기 항원을 신속하고 효과적으로 제거하는 후천적 면역을 발달시켜, 자기 항원에는 반응하지 않을 뿐 아니라, 자기 항원에 대하여 반응을 하더라도 이에 대하여는 면역반응을 유발하지 않는다(면역관용). 이러한 면역계에서, 중심적인 역할을 담당하고 있는 것은 T 세포이다. 미분화된 말초혈액의 나이브(naive) T 세포(Thp)는 항원 자극에 의해 증식, 분화를 개시한다. 이 경우, Thp는 대식세포 또는 수지상세포 등과 같은 항원 제시 세포에 의해 제시된 항원 및 활성화와 관련된 분자로부터의 신호에 반응하여 이들 표면상의 T 세포 수용체를 통하여 활성화되어 IL-2를 분비하며, 증식한다. 그 후, 상기 활성화된 Thp 세포는 거의 모든 사이토카인을 생산할 수 있는 Th0 세포로 분화한 후, Th1 또는 Th2로 성숙하게 되는데, Th1 또는 Th2로의 성숙은 예를 들면 항원자극 또는 항원제시세포로부터의 자극의 유형 및 강도에 의존하여 결정되는 분화의 최종 방향에 따라 결정되는 것으로, 이에 따라 각 세포 유형에 특이적인 사이토카인의 생산의 유도 및 뒤이은 증식 및 세포독성 활성 등이 유도되는 것이다. 즉, 인터루킨-12(IL-12)는 세포성 면역에 관여하는 Th1 세포로의 분화를 유도하고, 분화한 Th1 세포는 인터루킨-2(IL-2)나 인터페론-γ(IFN-γ) 등의 사이토카인을 생산한다. 반면, 인터루킨-4(IL-4)는 체액성면역에 관여하는 Th2 세포로의 분화를 유도하고, 이는 인터루킨-4, 10(IL-4,10) 등의 사이토카인을 생산한다. 상기 각 유형의 세포에 의해 생산된 사이토카인은, Th1 또는 Th2세포로의 분화 및 상기 각 유형의 세포에 의해 생산된 사이토카인의 작용을 상호 견제하여 적절한 Th1/Th2 균형을 유지한다.

최근, 이들 Th1/Th2의 불균형이 면역 질환의 발병원인으로 생각되고 있다. 우세한 면역반응(Th1형 면역)이 Th1에 치우쳤을 경우, 세포성 면역이 증강되어 암이나 감염증에 대한 면역 반응은 촉진되지만, 자기조직에 대한 손상을 일으키며, 이는 자가면역 질환의 발병 원인이 된다. 조직의 손상이나 감염은 계속 염증반응을 일으키고, 이는 조직의 섬유화 및/또는 장기의 기능장애를 가져온다.

정상적인 면역반응에서 있어서도, 치료적관점에서 장기 이식에 수반하는 거부반응이나 골수(조혈모세포)이식에 수반하는 이식편대숙주병(graft versus host disease)을 억제하는 것이 바람직하다. 상기와 같이 유도된 면역반응은 기본적으로 그 원리에 있어 동일하며, Th1형 면역이 주를 이루고 있다.

Th1형 면역에 기인하는 비정상적 면역에 의해 발병하는 Th1형 면역 질환은, 예를 들면 이식에 대한 거부반응, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병, 및 자가면역성 간염, 만성 류머티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 및 전신홍반루푸스 등을 포함하는 자가면역 질환, 또한 이들 질환에 기인하는 조직의 손상이나 감염에 따라 일어나는 염증반응, 섬유화, 장기 기능장애 등을 들 수 있다.

Th1형 면역에 기인하는 자가면역 질환 및/또는 이식과 관련된 면역 및 이들 질환과 관련된 만성적인 활동성 면역 염증반응의 치료에는 Th1형 면역의 선택적인 억제가 요구된다. 이와 같은 상황에서, 현재는 T 세포 활성화 기전에 관여하는 매개인자의 제어를 포함하는 치료에 기대를 걸고 있으며, 시클로스포린이나 FK506에 의한 T 세포에 대한 강력한 면역 억제 효과, 항사이토카인 요법, 항접착 분자(활성화 관련 분자)요법, 단일 클론 항체 요법 등이 주목되고 있다.

그러나, 이들 요법은, 스테로이드제, 핵산 합성시스템에 작용하는 특정 종류의 면역 억제제 또는 인터페론 제재를 사용하는 기존의 요법과 마찬가지로, Th1형 면역에 선택적이라고는 말하기 어렵다. 감염증 악화, 당뇨병, 혈전, 달덩이 얼굴, 신부전, 발열 등을 포함하는 각종 부작용 등과 같은 여전히 해결되어야 할 문제로서, 따라서, 안전성, 유효성이 뛰어난 약제의 개발이 요구된다.

자가면역 질환은 전신성 질환일 뿐만 아니라, 대부분의 모든 장기에서도 발 생하는 질환이다. 또 향후, 장기 이식 수술이나 조혈모세포 이식의 발전과 더불어 거부반응 또는 이식편대숙주병의 문제도 함께 증가할 것이다. 이와 같은 상황을 고려해 볼 때, Th1형 면역이 중심적인 역할을 담당하고 있는 질환은 광범위하며, 이러한 질환에 대한 유효한 치료제의 개발이 필요하다. 실제, Th1형 면역 억제 작용을 가지는 약제로서는, 세로토닌 lA 수용체 길항제 (J Immunol 153: 489-498, (1994), 펜톡시필린 (J Cardiovasc Pharmaco1 25 Suppl 2: S 75-79, 1995), 베타 2-아드레날린 수용체 작용제 (J Immunol 158: 4200-4210, 1997, J Clin Invest l00: 1513-1519, 1997), 아데닐레이트 사이클라제 활성화제인 일로프로스트(J Autoimmun l0: 519-529, 1997), P38 MAP 카이나제 저해제인 피리디닐 이미다졸 화합물 SB203580 (EMBO J 17: 2817-2829, 1998, Int Immuno112: 253-261, 2000), 릴소필린 (J Immunol 163: 6567-574, 1999), 아데노신 A2a 수용체 작용제인 CGS-21680 (J Immunol 164: 436-442, 2000), NO-아스피린 (Gastroentero1ogyl 18: 404-421, 2000) 및 1,25-디히드록시 비타민 D3 (Eur J Immunol 30: 498-508, 2000) 등이 보고되어 있다. 그러나, Th1형 면역을 선택적으로 억제하고, 부작용이 경감된 임상에 사용 가능한 의약품은 개발되어 있지 않다.

최근 크론병이 Th1형의 질환인 것으로 규명되어, 상기 질환에 대하여, IL-12 및 lL-10이 치료 표적으로서 주목되었다 (Saishin Igaku, The Latest Medicine, 최신 의학 90: 1076-1081, 2004). 즉, IL-12는 활성화 대식세포 또는 수지상 세포로부터 분비되어 나이브 T 세포의 Th1 세포로의 분화에 있어 중심적인 역할을 담당하고 있다. 동물모델에서 항 lL-12 항체가 치료 효과를 나타내는 것으로 보고되었 으며, 따라서, IL-12는 인간 크론병의 치료에 있어 잠재적 표적이 될 것으로 생각되었다. 마찬가지로, IL-10은 Th1 세포로부터의 사이토카인 생성을 억제하는 분자이며, IL-10 녹아웃 마우스에서는 Th1 반응이 증강되고, 장염이 자연 발병하기 때문에 (Clin lnvest Med 2001; 24: 250-257), IL-10도 크론병의 치료에 있어, 표적 분자가 될 것으로 기대된다. 실제로, 크론병에 대하여 재조합 IL-10의 효과를 시험하여 개선 효과를 볼 수 있었지만, 그 효력은 충분하지 않았으며, 두통, 발열, 빈혈 등의 부작용이 확인되었다 (Gastroenterology, 2000; 19: 1473-1482). 혈중 고농도의 IL-10의 지속은 면역 활성화 작용을 하는 것으로 암시되어, 단지 병소에서만 생리적 농도의 IL-10 생산을 가능하게 하는 치료법이 요구되어 왔다. 최근, 중등도 내지 중증의 크론병에 대하여 항-TNFα항체인 인플릭시매브를 적용하여 유효성이 확인되었다. 그러나, 상기 항체도 고빈도의 부작용이 보고되어, 그 사용은 제한적이다.

반면, 다발성 경화증은 자가면역 질환 중에서도 특히 Th1형 면역이 우세한 질환이다. 재발성-관해(relapsing-remission) 유형에서도, Th2 편향 (polarization)이 관해 동안 관찰되었기 때문에, Th2 편향이 병리적 상태를 치료할 수 있을 것으로 기대되었다. 현재 사용되는 다발성 경화증 치료약으로는, 급성기에는 스테로이드제, 재발-관해 유형에는 인터페론β1b, 1차 진행형에는 각종 면역 억제제 등이 있다. 이들 약제는 다양한 부작용이 지적되었으며, 또 유효성도 충분하지 않으므로, 신뢰할 만한 증상의 호전, 진행의 방지, 부작용의 경감이 해결되어야 할 문제로 남아있다.

따라서, 상기 두 질환에 대해서, 보다 선택적으로 Th1형 면역을 억제하고, 부작용을 경감할 수 있는 의약품의 개발이 필요하지만, 현재 임상적으로 사용 가능한 의약은 존재하지 않는다.

수지상 세포는 림프기관의 T 영역에 있는 나이브 T 세포를 가장 강력하게 활성화할 수 있는 유일한 항원 제시 세포이며, 생체 방어의 항상성의 유지에 있어서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다 (Banchereau, J. et al. Nature, Vol. 392, p245, 1998). 비록 수지상 세포는 통상적으로 T 세포의 활성화 능력의 낮은 미숙한 상태로 조직에 존재하지만, 병원체나 손상된 조직으로부터 방출되는 염증성 매개체에 의해 성숙·활성화 자극을 받으면, 항원 유래의 펩티드를 MHC 복합체와 결합시켜 펩티드-MHC 복합체를 나이브 T 세포에 제시한다. 동시에 수지상 세포는 공자극 분자의 발현을 증강시켜, 각종 사이토카인의 생산을 야기하여, T 세포를 모이게 하여, 항원 특이적 세포를 활성화하여 면역반응을 유도한다 (Iyoda Tomonori, Inaba Kayo, Protein, Nucleic Acid and Enzyme, Vol. 47, p. 2133, 2002). 나아가, 인간 수지상 세포에는 적어도 2종의 전구 세포가 존재한다. 단핵구 계통의 전구세포는 GM-CFS와 IL-4의 자극에 의해 분화하고, 또한, CD40L의 자극에 의해 생산된 IL-12의 작용에 의해, 나이브 T 세포를 Th1 세포로 분화시킨다. 형질세포 계통의 전구세포는 바이러스 및/또는 CpG 올리고 뉴클레오타이드, IL-3 및 CD40L로의 자극시, 약한 IL-12 생산능을 갖는 수지상 세포로 분화하고, 나이브 T 세포를 Th2 세포로 분화시킨다(Ohteki Toshiaki, Igaku no Ayumi (Progress in Medicine), Vol. 205, p. 57, 2003). 즉, 수지상 세포는 면역계에 있어서 Th1/Th2 의 균형 조절에 중요한 역할을 담당하는 세포이다. 따라서, 수지상 세포에 특이적으로 작용하여 그의 활성 또는 사이토카인 발현을 조절하여, 나이브 T 세포의 Th1 세포로의 분화 및 증식을 억제하여, 나이브 T 세포를 Th2형으로 편향시킬 수 있는 약제가 개발될 수 있다면, 이러한 약제는, Th1형 면역에 기인하는 비정상적 면역(특히 크론병 또는 다발성 경화증)에 대한 근원적인 치료 또는 예방약이 될 수 있을 것으로 기대된다. 그러나 현재까지 그와 같은 작용을 가진 유력한 약제는 존재하지 않는다.

한편, GC-A에 작용하여, 2차 신호전달자인 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질로서 펩티드성 물질, 특히 나트륨이뇨펩티드를 들 수 있다. 이러한 펩티드에는 ANP(심방성 나트륨이뇨펩티드), BNP(뇌성 나트륨이뇨펩티드) 및 CNP(C형 나트륨이뇨펩티드)의 3종류가 있으며, 이들 각 펩티드에 대한 NP 수용체로서, GC-A, GC-B(구아닐릴 사이클라제 A, B) 및 NPR-C(NP 수용체-C)의 3종류가 있다. GC-A 및 GC-B는 막결합형 구아닐릴 사이클라제 구조를 취하며, ANP 및 BNP는 GC-A의 특이적 리간드이며, CNP는 GC-B의 특이적 리간드이고, 이들은 각각의 수용체에 결합 후, 세포 내의 cGMP를 상승시킴으로써 이뇨 작용 및 혈관 확장 작용 등의 생리 작용을 하는 것으로 규명되었다. 또한, NPR-C는 cGMP 생산과 관련되어 있지 않으며, 이는 호르몬의 대사, 클리어런스에 관여하고 있는 것으로 알려져 있다 (Suzuki, T. et al. Cardiovasc. Res.Vol.51, p489,2001).

ANP는 심장로부터 분비되어 물-전해질 대사 및 혈압의 조절에 중요한 역할을 수행하는 펩티드 호르몬이다. 인간 및 동물모델에 있어서, 심장비대 및 심부전의 중증도에 따라, 혈중 ANP 농도가 상승하는 것으로 알려져 있으며, ANP는 심부전의 병리적 상태에서 보상적으로 작용하는 것으로 생각된다. 실제로 심부전 환자에 있어서 ANP 투여에 의해 혈관 확장 작용 및 이뇨 작용이 나타나고, 심장의 전부하 및 후부하가 경감되어 혈행동태 개선 효과가 인정되었다 (Suzuki, T.etal.Cardiovasc.Res.Vol.51, p489, 2001).

ANP의 수용체인 GC-A는 심혈관계만 아니라, 백혈구에도 발현하며, 이는 ANP가 조혈 세포에서도 생리적 기능을 담당할 가능성을 시사하는 것이다. 구체적으로 ANP가 호중구의 이동을 촉진하며 (Izumi, T. et al.J.Clin.Invest· Vo1.108, p203, 2001), 래트 흉선세포의 증식을 억제하고 (Vollmar, A.M., K.N., et al.Endocrino1ogy.Vol.137, 1706, 1996), 인간 자연살해세포(NK)의 세포독성을 증강하며 (Moss, R.B., and M.G.Golightly, Peptides, Vol.2, p851, 1991), 마우스 대식세포로부터 NO나 TNFα 생산을 억제하는 (Kiemer, A. K., and A. M. Vollmar. J. Biol.Chem.Vol.273, p13444, 1998) 것으로 보고되었다.

그러나, 마우스 단핵구 유래의 대식세포와 달리, 인간 단핵구는 ANP 수용체를 발현하지 않고, ANP는 인간 단핵구에서는 생리적 활성(cGMP 생산 포함)이 없는 것으로 보고되었다 (Sprenger H., et al., Immunobiol.Vol.183, p94, 1991). 따라서, GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질과 관련하여서는, 면역계에 관여하는 인간 단핵구 유래의 수지상 세포에 있어, 그의 생리 기능이나 병생리적 의의, 또는 면역 조절 작용에 대하여는 전혀 보고된 바가 없었다.

발명의 개시

발명이 해결하려고 하는 과제

따라서, 상기 종래기술 및 문제점을 감안하여, 본 발명은 부작용이 없으며, 임상적으로 적용가능한 Th1형 면역에 선택적인 억제제를 제공하는 것으로, 이의 기전은 Th1형 사이토카인 생산의 억제, 및 자가면역 질환, 장기 이식의 거부반응, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병, 자가면역 질환 및 관련 질환에 기인하는 조직의 손상, 감염과 연관된 염증반응 및 조직의 섬유화 및 장기 기능장애를 포함하는, Th1형 면역질환을 표적으로 하는 것을 기본으로 한다. 더욱 상세하게는, 본 발명의 목적은 수지상 세포에서 발현되는 NP수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시키고, 이에 의해 수지상 세포의 사이토카인의 생산을 조절하고 T 세포를 Th2 세포로 분화할 수 있는 물질을 유효성분으로 포함하는 Th1형 면역 질환(특히 크론병 또는 다발성 경화증)의 예방 또는 치료에 제공되는 약학 조성물을 제공하는 것이다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명의 약학 조성물의 유효성분으로서 이용할 수 있는 물질은, NP 수용체인 GC-A를 통하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 특성을 갖는 한, 임의의 물질이 사용될 수 있다. 펩티드성 물질이 바람직하지만, 활성성분에 대하여 특정한 제한은 없기 때문에, 펩티드성 물질 이외에도 NP 수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP의 생산을 증강시킬 수 있는 임의의 화합물이 사용될 수 있다.

펩티드성 물질로서는, 나트륨이뇨펩티드가 바람직하고, 예를 들면 심방성 나트륨이뇨펩티드(이하 ANP), 뇌성 나트륨이뇨펩티드(이하, BNP) 등을 들 수 있다.

비록, ANP로서 28개의 아미노산으로 이루어지는 인간 유래α-hANP (서열 번호: 1) 또는 래트 유래α-rANP(서열 번호: 2)를 사용할 수 있으나, 본 발명에 유효성분으로서 사용되는 펩티드는 ANP의 링 구조(Cys을 기본으로 하는 이황화결합) 및 상기 링 구조에서 계속되는 C-말단부를 갖는 펩티드일 수 있다. 해당 펩티드로서는α-hANP의 7-28 위치의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드(서열 번호: 3)를 들 수 있다. AINP로는 특히 인간 유래의α-hANP가 바람직하다.

BNP로는 32개의 아미노산으로 이루어지는 인간 BNP(서열 번호: 4) 등을 들 수 있다.

또한, 본 발명의 NP수용체인 GC-A를 통하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 특성을 갖는 물질은, 천연 유래의 순수하게 단리, 정제된 물질 또는 화학 합성법 또는 유전자 재조합법에 의해 제조된 물질일 수 있다. 당업자라면, 예를 들면 상기 물질(α-hANP 등)의 아미노산 서열에 근거하여, 적절한 공지의 방법을 사용하여 해당 서열 중의 아미노산 잔기의 결실, 치환, 부가, 삽입 등의 변형을 수행함으로써 물질을 수득할 수 있다. 이러한 임의의 방법으로 수득된 임의의 물질은 NP 수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 한 본 발명에 사용될 수 있다. 해당 물질로서는, 상기 열거한 물질에 부가하여, 개구리 ANP(서열 번호: 5), 돼지 BNP(서열 번호: 6), 래트 BNP(배열번호: 7), 닭 NP(서열 번호: 8) 등을 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 유효 성분으로서 이용할 수 있는 물질은, 무기산( 예를 들면 염산, 황산, 인산) 또는 유기산 (예를 들면 포름산, 초산, 부티르산, 숙신산, 시트르산)과의 산부가염으로서 사용될 수 있다. 상기 물질은 또한 금속염(예를 들면, 나트륨, 칼륨, 리튬 또는 칼슘염)의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물 중에 유효 성분으로 사용되는 물질은 자유형 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물 중에 유효 성분으로서 이용할 수 있는 물질 또는 그 약학적으로 허용가능한 염은, 공지의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합하여 약학 제제에 일반적으로 사용되는 투여 방법, 즉 경구 투여 방법, 또는 정맥내 투여, 근육내 투여 또는 피하 투여 등의 비경구 투여 방법에 따라 투여하는 것이 바람직하다.

유효 성분이 펩티드성 물질인 경우, 소화관 내에서 분해되기 어려운 제제, 예를 들면 활성 성분인 펩티드를 리포좀으로 피막한 마이크로 캡슐제로서 경구 투여할 수도 있다. 또한, 직장, 비강내, 또는 설하 등의 소화관 이외의 점막을 통하여 흡수되도록 하는 투여 방법도 가능하다. 이 경우는 좌제, 비스프레이, 설하 정제 등의 형태로 투여할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 유효 성분으로서 이용할 수 있는 물질의 투여량은, 질환의 종류, 환자의 연령, 체중, 증상의 정도 및 투여 경로 등에 따라 상이하지만, 일반적으로 0.1μg/kg-100mg/kg의 범위에서 투여할 수 있고, 0.5μg/kg-5mg /kg로 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명을 통하여, 나트륨이뇨펩티드 수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 유효 성분으로 하는 조성물이, 수지상 세포에 특이적으로 작용하여 그의 사이토카인의 생산을 조절하고, 나이브 T 세포의 Th2로의 편향을 유도함으로써 Th1형 면역 반응을 억제하여, Th1형 면역 질환에 효과적이라는 것을 증명하였다. 특히, 유효 성분으로서 ANP를 사용한 경우, ANP 단독으로는 수지상 세포로부터의 사이토카인의 생산 및 T 세포의 증식 반응에는 영향이 없으며, 단지, LPS (리포다당)-자극 반응에 대해서만 조절작용을 나타내었다. 이는 ANP가 정상 면역기능에는 큰 영향을 미치지 않으며, 자극시의 과잉 반응만을 억제한다는 것을 의미하는 것으로, 즉, ANP가 부작용이 적으며, 안전하게 사용될 수 있는 유용한 물질임을 나타내는 것이다.

그리고, LPS는 그람음성균의 외막의 주요 구성 성분으로서, 병원체에 고유한 구성 성분의 인식에 극히 중요하다. LPS는 수지상 세포에서 발현되는, Toll 모양 수용체(TLR) 패밀리라고 불리는 막단백 수용체 그룹의 일원인 TLR4에 의해 인식되며, 이 경우, LPS는 수지상 세포의 성숙 및 활성화를 자극하여 사이토카인 및 CD40 등의 보조 기능 분자의 발현을 유도한다.

본 발명에 있어서, 인간 유래의 수지상 세포 및 나이브 T 세포를 사용한 일련의 실험을 통하여, 인간 수지상 세포에서 GC-A가 발현되며, NP 수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질이 수지상 세포에 있어서의 사이토카인 생산 조절 작용을 가지며, T 세포의 Th2형 세포로의 편향 효과가 있음을 증명하였다. 이는 임상적으로 유용한 결과이다.

상기로부터, NP수용체인 GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질이 수지상 세포에서 발현되는 GC-A에 작용하여, 나이브 T 세포를 Th2형으로 편향시킴으로써 면역계에 있어서의 T 세포의 Th1/Th2 균형을 조절할 수 있음을 알 수 있다. 따라서, 상기 물질을 투여하여 Th1형 면역 질환(특히 크론병 또는 다발성 경화증)을 개선할 수 있다. Th1형 면역 질환이 아직 나타나지 않은 질환 이전의 상태의 경우에도, Th1 및 Th2의 비율을 통상적인 방법에 의해 측정하여, Th1의 비율이 Th2의 비율보다 높은 경우는, 상기 물질을 투여해 면역계에 있어서의 Th1/Th2 균형을 조절함으로써 Th1형 면역 질환의 발생을 예방할 수 있다.

상기의 맥락에서, 본 발명은 다음의 사항을 포함한다.

(1) 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트의 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 유효 성분으로 포함하는 Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.

(2) 상기 (1)에 있어서, Th1형 면역 질환은, 이식에 수반하는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(3) 상기 (2)에 있어서, 자가면역 질환은, 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군 및 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(4) 상기 (3)에 있어서, 자가면역 질환이, 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(5) Th1형 면역 질환에 기인하는 조직손상, 감염과 연관된 염증반응, 섬유증 또는 기관장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 유효성분으로서 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 포함하는 약학 조성물.

(6) 상기 (1) 또는 (5)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(7) 상기 (6)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(8) 상기 (7)에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드가 인간 유래인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

(9) 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.

(10) 상기 (9)에 있어서, 상기 Th1형 면역 질환은 이식에 수반하는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포) 이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(11) 상기 (10)에 있어서, 상기 자가면역 질환이, 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 및 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(12) 상기 (11)에 있어서, 자가면역 질환이, 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(13) 상기 (9)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(14) 상기 (13)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(15) 상기 (14)에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(16) 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질의, Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조에 사용되는 용도.

(17) 상기 (16)에 있어서, 상기 Th1형 면역 질환이, 이식에 수반하는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.

(18) 상기 (17)에 있어서, 상기 자가면역 질환이, 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 및 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.

(19) 상기 (18)에 있어서, 상기 자가면역 질환이, 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 용도.

(20) 상기 (16)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 용도.

(21) 상기 (20)에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 용도.

(22) 상기 (21)에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 용도.

(23) 면역계의 Th1/Th2 균형을 조절하는 방법에 있어서, 상기 방법은 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 수지상 세포에 처리하여, 이에 의해 T 세포의 Th2 세포로의 편향을 유도하는 것을 특징으로 하는 면역계의 Th1/Th2 균형 조절 방법.

(24) 상기 (23) 에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.

(25) 상기 (24) 에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.

(26) 상기 (25)에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 방법.

발명의 효과

본 발명에 따른, 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 수지상 세포에 작용하여 Th2로의 편향을 유도하여, T 세포를 Th2형 세포로 분화시킴으로써, IL-12 및 TNFα의 생산은 억제하고, IL-10의 생산은 증강시켜, Th1형 면역 반응을 억제하는 효과를 가진다. 따라서, 상기 물질을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물은 면역계의 Th1/Th2 균형을 조절함으로써 Th1형 면역 질환(특히 크론병 또는 다발성 경화증)의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서 매우 유용하다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명자는, 인간 말초혈액으로부터 단리, 배양된 수지상 세포에 있어서의 ANP 수용체(GC-A) 발현 및 ANP의 cGMP 생산 촉진 활성을 검토하였으며, 또한 수지상 세포에 있어서의 ANP의 생리 기능을 규명하기 위해, 수지상 세포의 분화, 임파구 증식, 사이토카인 발현 및 Th1/Th2 편향성에 대한 ANP의 영향을 검토한 결과, GC-A에 작용하여 cGMP 생산을 증강시킬 수 있는 물질이 Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료에 유용하다는 것을 발견하였다.

A. 인간수지상 세포의 단리, 및 NP 수용체 발현 및 cGMP 생산 촉진 연구를 실험 방법

1. 인간 말초 혈액 유래의 수지상 세포의 단리와 배양

실험에는 건강한 제공자로부터 얻은 말초 혈액(쿄토 적십자 센터에서 제공)의 백혈구층(buffy coats)을 사용하였다. 말초혈액 단핵구 분획을 Ficoll-Paque를 사용한 밀도 구배 원심분리에 의해 분리한 후, 상기 분획을 MACS CD14를 사용한 자기 비드컬럼에 적용하거나, 또는 세포 배양용 플라스크에서 37℃로 1시간 배양해 접착 세포를 선별함으로써 단핵구를 분리하였다. 미성숙 수지상 세포는, 2×10⁵세포/ml의 단핵구를 10% 소태아 혈청, 50ng/mL 인간 GM-CSF, 및 20ng/mL 인간 IL-4의 존재하에서 7일간 37℃로 배양함으로써 얻었다.

2. NP 수용체의 RT - PCR

RNA 단리용 키트를 사용하여 단핵구 또는 수지상 세포로부터 총 RNA를 추출한 후, lμg의 총 RNA와 올리고(dT)프라이머를 사용하여 조류 골수아세포증바이러스 유래 역전사 효소에 의해 단일 가닥의 cDNA를 합성하였다.

프라이머로서 하기를 사용하였다.

NP수용체의 경우는 35 사이클의 PCR, β-액틴의 경우는 25 사이클의 PCR을 실시하였다. 상기 PCR 산물을 1.5 ~ 2%의 아가로스겔로 분리하고, 에씨디움브로마이드로 염색한 후 UV 투시 장치로 검출하였다.

3. cGMP 생산활성의 측정

1×10⁵세포/시료의 세포를 500μL의 10mM HEPES, 0.5mM 3-이소부틸- 1-메틸잔틴, 및 1μM 포스폴라미돈을 포함하는 배양액에서 37℃로 10분간 인큐베이션 한 후, ANP 또는 CNP를 최종 농도 10^- ^l2 ~ 10^-6M 로 되도록 첨가한 후 15분간 인큐베이션 하였다. 그 후, 세포를 세정, 파괴 후, 세포내 cGMP 농도를 ELISA법으로 측정하였다.

B. 수지상 세포에 의해 유도된 나이브 T 세포 증식, 사이토카인 생산 및 나 이브 T 세포 분화의 실험 방법

1. 활성화 수지상 세포에 의해 유도된 T 세포 증식 반응

나이브 T 세포(나이브 CD4⁺세포)는, MACS CD4⁺T 세포 단리용 자기 비드를 사용하여 제대혈 유래의 단핵구 분획으로부터 분리하였다. 수지상 세포를 ANP (10^-7M)의 존재하 또는 비존재하에서 리포다당(LPS, 1μg/mL)과 24시간 배양하여 활성화 하였다. 상기 세포를 세정하고, 방사선을 조사(30Gy)하여, 증식 능력을 잃게 한 후, 나이브 T 세포( 1×10⁵세포/wel1)와 함께 6일간 배양하였다. [메틸-³H]-티미딘(0.5μCi/well) 혼입을 8시간 동안 측정하여, T 세포의 증식 능력을 평가하였다.

2. 수지상 세포로부터의 사이토카인 생산의 측정

수지상 세포를, ANP( 10^-8M 내지 10^-6M) 또는 CNP( 10^-6M)의 존재하 또는 비존재하에서 LPS(1μg/mL)와 24시간 동안 인큐베이션하고, 배양 상층액 중의 IL-12, IL-10, TNFα농도를 ELISA법으로 측정하였다.

3. 나이브 T 세포의 세포내 사이토카인 발현 분석 (수지상 세포 유도된 Th1/Th2 편향성 검토)

수지상 세포는 미리 ANP( 10^-7M)의 존재하 또는 비존재하에서 LPS(1μg/mL)와 24시간 인큐베이션하여 활성화 한 후, 방사선을 조사(30Gy)하여 증식 능력을 잃게 하였다. 상기 수지상 세포( 1×10⁵세포/well)와 제대혈로부터 분리한 나이브 T 세포( 1×10⁶세포/well)를 6일간 공배양하였다. 이후, IL―2(50U/mL) 존재하에서 T 세포를 8일간 증식시킨 후, T 세포를 회수하고, 50ng/mL의 포볼에스테르(PMA) 및500ng/mL의 이오노마이신으로 4시간 동안 자극하였다. 상기 인큐베이션 종료 2시간 전에 브레펠딘 A(10μg/mL)를 첨가하였다. 세포를 2% 포르말린으로 고정한 후에, 2% FBS 및 0.5%사포닌을 포함하는 배지로 처리하여 세포막을 손상시켰다. 그 후, 세포내 사이토카인을 FITC로 표지된 항-IFN-γ단일 클론 항체 및, PE로 표지된 항-IL-4단일 클론 항체로 염색한 후 세포흐름측정법으로 분석하였다. lFN-γ양성 세포를 Th1형 세포, IL-4 양성 세포를 Th2형 세포로 간주하였다.

도 1은 인간 단핵구(monocyte) 및 미성숙 수지상 세포(immature DC)에 있어서의 세 가지 종류의 NP 수용체, 즉 GC2-A에 GC-B 및 NPR-C의 mRNA 발현을 RT-PCR 방법으로 분석한 결과이다. 각 수용체 mRNA의 양성 대조군으로서 태반시료를 사용하였다. 또, RNA의 순도, cDNA 합성의 타당성을 β-액틴 cDNA의 증폭에 의해 확인하였다. 도 1은 미성숙 수지상 세포에서만 GC-A mRNA 가 특이적으로 발현하는 것을 나타낸다.

도 2는 인간 단핵구(monocyte, 흑색 사각형) 및 미성숙 수지상 세포(immature DC, 흰색 사각형)에 있어서의 ANP (윗 그림) 및 CNP (밑그림)의 cGMP 생산 활성을 나타내는 도면이다. 각 수치는 1 × 10⁵세포당 cGMP 농도를 나타낸다. 도 2는 ANP는 극히 낮은 농도에서 수지상 세포에서의 cGMP 생산을 촉진하는 것을 나타낸다.

도 3은, LPS-자극된 수지상 세포에 대한 동종 나이브 CD4 T 세포의 증식 반응에 미치는 ANP의 효과를 나타낸다. 수지상 세포를 LPS(1μg/mL), ANP( 10^-7M), LPS+ANP 또는 이들의 비존재하에서 24시간 배양하고, 조사(irradiation) 후, 나이브 T 세포와 함께 6일간 배양하였다. 이때 나이브 T 세포의 세포 증식 능력은[³H]-티미딘 혼입 능력에 의해 평가하였다. 심볼: 흰색 원, 비처리; 흑색 원, ANP 10^-7M 처리; 흰색 사각형, LPS 1μg /mL 처리; 흑색 사각형, ANP+LPS 처리. 각 수치는 5회 실험결과의 평균값±표준편차로서 나타낸다. *는 그 외의 군과 p< 0.05의 통계학적 유의성이 있는 것을 나타낸다. 유의성은 Student t 데스트로 검정하였다.

도 4는 LPS 자극된 수지상 세포의 사이토카인 생산에 미치는 ANP 및 CNP의 영향을, 1 × 10⁵세포/튜브의 수지상 세포를 ANP( 10^-8~ 10^-6M) 또는 CNP( 10^-6M)의 존재하 또는 비존재하에서 LPS(1μg/mL)와 24시간 인큐베이션 한 후 매질 중의 IL-12, TNF-α, IL-10 면역 활성으로서 나타낸 결과이다.

도 5는 LPS 또는 LPS+ANP로 전 처리한 수지상 세포와 공배양하고, 또한 IL-2 함유 배양배지 중에서 증식시킨 나이브 T 세포에 있어서, IFN-γ, 또는 IL-4의 세포내 생산을 세포흐름측정법으로 측정한 결과를 나타낸다. 도면 중의 숫자는, 각 분획에 있어서의 백혈구의 백분율을 나타낸다. 시료 #1, 시료 #2는, 각각 상이한 제공자 유래의 수지상 세포를 사용한 결과를 나타낸다.

이하로, 본 발명을 실시예로부터 보다 구체적으로 설명한다.

실시예 1 미성숙 수지상 세포에서의 GC -인간 mRNA 발현 및 ANP -유도된 cGMP 생산의 증강

본 발명자들은 우선, 세 가지 종류의 NP 수용체 mRNA의 수지상 세포 또는 단핵구에서의 발현여부에 대하여 검토하였다. 정상인 말초혈액으로부터 얻은 단핵구, 및 미성숙 수지상 세포로부터 RNA를 추출하고, RT-PCR 방법으로 NP 수용체인 GC-A, GC-B, 및 NPR-C의 mRNA 발현을 검토하였다. 결과를 도 1에 나타낸다.

양성 대조군으로 사용한 태반 유래 RNA에는 세 가지 종류의 모든 NP 수용체 mRNA의 발현이 인정되었다. 단핵구에서는 어떤 유형의 NP 수용체 mRNA 발현도 관찰되지 않는 반면, 미성숙 수지상 세포에서는 단지 GC-A mRNA의 발현만이 관찰되었다. 이로부터, 단핵구는 NP 수용체 mRNA를 발현하지 않지만, 단핵구 유래의 수지상 세포는 GC-A mRNA를 특이적으로 발현함을 알 수 있다.

다음으로, 수지상 세포에서의 GC-A 발현의 생리적 기능을 규명하기 위하여, AMP의 cGMP 생산 활성을 수지상 세포 및 단핵구 모두에서 검토하였다. 대조군으로서, GC-B에 특이적 리간드인 CNP를 사용하였다. 결과를 도 2에 나타낸다.

ANP는 낮게는 10^-12M의 저농도에서 농도 의존적으로 수지상 세포내의 cGMP 농도를 상승시켰지만, 단핵구에서는 어떤 농도에서도 cGMP 농도를 상승시키지 않았다. 마찬가지로, CNP는 단핵구 및 수지상 세포 중 어느 세포에서도 세포내 cGMP 농도에 영향을 주지 않았다. 이러한 결과는, 도 1에 나타낸 GC2A mRNA 발현의 결 과와 부합하는 것이며, GC-A가 수지상 세포에서 특이적으로 발현되며, 상기 수용체가 ANP에의 결합을 통하여 수지상 세포에서 생리 활성을 담당할 가능성을 강하게 시사하는 것이다.

실시예 2 수지상 세포의 사이토카인 발현 및 Th2 편향성에 미치는 ANP 영향의 검토

실시예 1의 결과로부터, ANP가 수지상 세포에 작용하여, 면역 반응을 조절할 수 있다는 것이 판명되었다.

수지상 세포의 중요한 기능은, 나이브 T 세포로 하여금 항원 특이적인 면역 반응을 야기하도록 하는 것이다. 우선, 수지상 세포를 성숙, 활성화시키는 것으로 알려져 있는 LPS의 존재하 또는 비존재하에서 ANP를 수지상 세포에 첨가하여, 나이브 T 세포의 활성화·증식 반응에 미치는 영향을 검토하였다. 결과를 도 3에 나타낸다.

ANP는 단독으로는 나이브 T 세포의 증식 반응에 영향을 주지 않았지만, LPS를 수지상 세포에 첨가하면, 매우 분명하게 T 세포의 증식 반응을 야기하였다.

한편, ANP와 LPS를 동시에 첨가하면, LPS로 처리된 수지상 세포에 의해 유도된 T 세포의 증식 반응이 거의 완전하게 억제되는 것으로 나타났다.

따라서, ANP는 LPS 유도된 수지상 세포의 활성화 신호 또는 수지상 세포의 기능에 영향을 줄 수 있는 것으로 나타났다.

수지상 세포에 의해 생산된 사이토카인은 수지상 세포와 T 세포의 상호작용 에 있어 매우 중요한 작용을 수행하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, 수지 상 세포의 사이토카인 발현에 대한 ANP의 효과를 검토하였다. 결과를 도 4에 나타낸다.

LPS는 수지상 세포의 IL-12, TNF-α 및 IL-10의 생산을 촉진시키는 것으로 나타났다. 대조적으로, ANP는 농도 의존적으로 IL-12 및 TNFα의 농도를 저하시킨 반면, IL-10의 농도는 증가시켰다. 그리고, LPS로 자극되지 않은 수지상 세포는 IL-12, TNF-α, IL-10의 생산 능력이 낮으며, ANP는 단독으로는 사이토카인 생산에는 영향을 주지 않았다.

나아가, GC-B의 리간드인 CNP는 사이토카인 발현에 영향을 주지 않으므로, LPS로 자극시 관찰된 ANP의 작용은 수지상 세포에서 발현되는 GC-A를 통한 것으로 확인되었다.

수지상 세포에 의해 생산되는 사이토카인 중 IL-12는 대표적인 Th1형 사이토카인이며, IL-10은 활성화된 단핵구, NK 세포 및 Th1 세포에 의해 생산되는 사이토카인(IL-12 포함)의 활성을 블록하는 것으로 알려져 있다. ANP는 LPS로 유도된 수지상 세포로부터의 IL-12 생산을 억제하지만, IL-10 생산은 증강시키는 것으로 나타났으며, 이는 ANP가 수지상 세포를 Th2형 세포로 편향할 수 있는 가능성을 나타낸다.

ANP가 수지상 세포의 Th2 세포로의 편향을 유도할 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, 추가의 실험을 수행하여 수지상 세포를 ANP의 존재하에서, LPS로 자극시에, 나이브 T 세포가 Th1, Th2 중 어느 유형의 세포로 분화, 증식하는 지를 결정하였다. LPS는 수지상 세포의 Toll-like receptor 4에 작용하여 IL-12발현을 촉진 시켜, 나이브 T 세포를 높은 IL-12 생산능을 갖는 Th1형 세포로 편향시키는 것으로 알려져 있다 (Akira S, et al. Nat.Immunol.Vol.2, p675, 2001).

LPS 단독, 또는 LPS 및 ANP로 자극된 수지상 세포를 나이브 T 세포와 상호작용시킨 후에, T 세포를 IL-2를 포함하는 배양배지 중에서 증식시켜, Th1형 세포가 발현하는 사이토카인으로서 IFN-γ, Th2형 세포가 발현하는 사이토카인으로서 IL-4의 농도를 세포흐름측정법을 사용하여 분석하였다. 도 5는 상기 두 가지의 T 세포 시료에 대한 분석 결과를 나타낸다. 도 5에 있어서, IFN-γ 양성, IL-4 음성 세포는 Th1형의 헬퍼 T 세포로의 분화 및 증식, IL-4 양성, IFN-γ음성 세포는 Th2형의 헬퍼 T 세포로의 분화 및 증식을 나타낸다.

시료# 1 및 시료# 2 모두에 있어서, LPS 단독 처리군과 비교하여, ANP 및LPS 모두로 처리된 군에서는, 분명하게 IL-4 생산은 증가하고, IFN-γ 생산은 감소하는 것으로 나타났다. 또한 다른 시료에 대하여도 마찬가지의 결과를 얻었다.

본 실시예의 결과는 ANP가 수지상 세포의 IL-10 생산은 촉진시키고, IL-12의 생산은 감소시킴으로써 LPS의 기능에 길항적으로 작용하며, 또한 수지상 세포의 Th2형 세포로의 편향을 유도하여 T 세포를 Th2형 헬퍼 T 세포로 분화시킴으로써, Th1형 면역 반응을 억제함을 나타낸다.

<110> DAIICHI SUNTORY PHARMA CO.,LTD. <120> MEDICINAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING Th1 TYPE IMMUNOLOGICAL DISEASE <130> PCT/JP2004/008205 <160> 16 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly 5 9 14 19 Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr 24 29 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Rat <400> 2 Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Ile Asp Arg Ile Gly 5 9 14 19 Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr 24 29 <210> 3 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly 5 9 14 19 Cys Asn Ser Phe Arg Tyr 24 <210> 4 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp 5 9 14 19 Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg His 24 29 34 <210> 5 <211> 24 <212> PRT <213> Frog <400> 5 Ser Ser Asp Cys Phe Gly Ser Arg Ile Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser 5 9 14 19 Gly Met Gly Cys Gly Arg Arg Phe 24 <210> 6 <211> 32 <212> PRT <213> Pig <400> 6 Ser Pro Lys Thr Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Leu Asp 5 9 14 19 Arg Ile Gly Ser Leu Ser Gly Leu Gly Cys Asn Val Leu Arg Arg Tyr 24 29 34 <210> 7 <211> 45 <212> PRT <213> Rat <400> 7 Ser Gln Asp Ser Ala Phe Arg Ile Gln Glu Arg Leu Arg Asn Ser Lys 5 9 14 19 Met Ala His Ser Ser Ser Cys Phe Gly Gln Lys Ile Asp Arg Ile Gly 24 29 34 Ala Val Ser Arg Leu Gly Cys Asp Gly Leu Arg Leu Phe 39 44 49 <210> 8 <211> 29 <212> PRT <213> Chick <400> 8 Met Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Ile Asp Arg Ile Gly 5 9 14 19 Ser Leu Ser Gly Met Gly Cys Asn Gly Ser Arg Lys Asn 24 29 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 9 gggaacctca agtcatccaa c 21 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 10 atgaagggca aaggcaaggt 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 11 tctagaaaat gacagcatca 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 12 tgacaacttt gatgtctaca 20 <210> 13 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 13 gaaggtatcg ccgggcaggt gtcc 24 <210> 14 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 14 tcttcccgta attcccgatg tttt 24 <210> 15 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 15 tcctgtggca tccacgaaac t 21 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PRIMER <400> 16 gaagcatttg cggtggacga t 21

Claims

나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 유효 성분으로 포함하는 Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 Th1형 면역 질환은 이식에 수반되는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 2 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은, 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 3 항에 있어서, 자가면역 질환은 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 5 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 6 항에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
Th1형 면역 질환을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 투여하는 단계를 포함하는, Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 Th1형 면역 질환은 이식에 수반되는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 9 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 10 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 12 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
제 13 항에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 Th1형 면역 질환의 치료 방법.
나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구 아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질의, Th1형 면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조를 위한 용도.
제 15 항에 있어서, 상기 Th1형 면역 질환은 이식에 수반하는 거부반응에 기인하는 질환, 골수(조혈모세포)이식에 의한 이식편대숙주병 및 자가면역 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
제 16 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 자가면역성 간염, 만성 류마티스성 관절염, 인슐린 의존성 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증, 자가면역성 심근염, 건선, 피부경화증, 중증근육무력증, 다발성 근육염/피부 근육염, 하시모토병, 자가면역 혈구감소증(예를 들면, 적혈구무형성증, 재생 불량성 빈혈 등), 쇼그렌 증후군, 혈관염 증후군, 전신홍반루푸스로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
제 17 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 크론병 또는 다발성 경화증인 것을 특징으로 하는 용도.
제 15 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 용도.
제 19 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 용도.
제 20 항에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 용도.
면역계의 Th1/Th2 균형을 조절하는 방법에 있어서, 상기 방법은 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질을 수지상 세포에 처리하여 T 세포의 Th2 세포로의 편향을 유도하는 단계를 포함하는, 면역계의 Th1/Th2 균형 조절 방법.
제 22 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드 수용체인 구아닐릴 사이클라제 A에 작용하여 사이클릭 구아노신 모노포스페이트 생산을 증강시킬 수 있는 물질은 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 Th1/Th2 균형 조절 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 나트륨이뇨펩티드는 심방성 나트륨이뇨펩티드 또는 뇌성 나트륨이뇨펩티드인 것을 특징으로 하는 Th1/Th2 균형 조절 방법.
제 24 항에 있어서, 상기 심방성 나트륨이뇨펩티드는 인간 유래인 것을 특징 으로 하는 Th1/Th2 균형 조절 방법.