KR20040030599A

KR20040030599A - Ｈｉｖ 항원 및 ｈｓｖ 항원 및/또는 ｈｐｖ 항원을포함하는 다가 백신

Info

Publication number: KR20040030599A
Application number: KR10-2003-7014037A
Authority: KR
Inventors: 서지 데브러스; 나탈리에 루이즈 매시; 제랄드 보스
Original assignee: 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Priority date: 2001-04-27
Filing date: 2002-04-25
Publication date: 2004-04-09
Also published as: JP2004531540A; MXPA03009698A; NZ529039A; NO20034695D0; GB0110431D0; US20040131638A1; IL158428A0; BR0209161A; NO20034695L; AR034312A1; WO2002087614A2; EP1381390A2; HUP0303942A3; MY134041A; CN1522153A; PL367134A1; CZ20032942A3; HUP0303942A2; AU2002310802B2; ZA200308188B

Abstract

본 발명은 하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원과,

(i) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(ii) 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.

Description

ＨＩＶ 항원 및 ＨＳＶ 항원 및/또는 ＨＰＶ 항원을 포함하는 다가 백신 {MULTIVALENT VACCINE COMPRISING AN ＨＩＶ ANTIGEN AND AN ＨＳＶ ANTIGEN AND/OR AN ＨＰＶ ANTIGEN}

본 발명은 신규한 백신 제형, 이를 제조하는 방법 및 이들의 예방 및 치료용 용도에 관한 것이다. 특히 본 발명은 ＨＩＶ 감염 위험이 있는 환자에게 투여하기 위한 조합 백신에 관한 것이다.

ＨＩＶ-1 및 ＨＩＶ-2는 세계적으로 중요한 건강 문제 중의 하나로 간주되는 후천성 면역 결핍 증후군(AIDS)의 원인이다. 비록 전 세계적으로 백신을 제조하기 위한 광범한 연구가 수행되고 있으나, 이러한 연구가 아직 성공하지는 못하였다.

ＨＩＶ 외피 당단백질 gp120은 숙주 세포에의 부착에 이용되는 바이러스 단백질이다. 이러한 부착은 두개의 케모카인 수용체 CCR-4 또는 CXCR-5 중의 하나와 CD4로서 공지된, 헬퍼 T-세포 및 대식세포의 두개의 표면 분자에 결합함으로써 매개된다. gp120은 우선 보다 큰 전구체 분자(gp160)로서 발현되고, 이후 사후-번역적으로 절단되어 gp120 및 gp41을 생성한다. gp120 단백질은 바이러스의 막으로 삽입되는 gp41 분자와의 결합에 의해 비리온의 표면상에 계속 유지된다.

gp120 단백질은 중화 항체의 주요한 표적이나, 불행히도 단백질의 대부분의 면역원성 영역(V3 루프)이 또한 단백질의 가장 가변적인 부분이다. 따라서,gp120(또는 이의 전구체 gp160)만을 백신 항원으로서 이용하여 항체의 중화를 유도하는 것은 대체로 보호성 백신에 대한 제한된 이용으로 고려될 뿐이다. 또한 gp120 단백질은 세포독성 T 림프구(CTL)에 의해 인식되는 에피토프를 함유한다. 이러한 효과기 세포는 바이러스-감염 세포를 제거할 수 있고, 따라서 제 2의 주요한 항바이러스성 면역 메커니즘을 구성한다. 중화 항체의 표적 영역과 반대로, 몇몇 CTL 에피토프는 상이한 ＨＩＶ 균주 사이에서 비교적 유지되는 것으로 나타난다. 이러한 이유로 gp120 및 gp160은 세포-매개성 면역 반응(특히 CTL)의 유도를 보조하는 백신에서 유용한 항원성 성분으로 고려된다.

ＨＩＶ-1의 비외피 단백질이 개시되었고, 예를 들어gag및pol유전자의 생성물과 같은 내부구조 단백질 및, Rev, Nef, Vif 및 Tat와 같은 그밖의 비구조성 단백질을 포함한다. 문헌[Greene 등, New England J. Med, 324, 5, 308 이하(1991) 및 Bryant 등, (Ed. Pizzo), Pediatr. Infect. Dis. J., 11, 5, 390 이하(1992)]

ＨＩＶgag유전자는, 미성숙 바이러스 유사 입자(VLP)로 자연스럽게 어셈블링될 수 있는 전구체 단백질 p55를 엔코딩한다. 이후 전구체는 단백질분해적으로 주요한 구조 단백질 p24(캡시드) 및 p18(매트릭스)과, 수개의 소단백질로 절단된다.

ＨＩＶ Tat 및 Nef는 초기출현 단백질이고, 즉 이들은 구조 단백질의 감염 및 부재하에 조기 발현된다.

ＨＳＶ-2는 생식기 포진의 주된 원인체이다. ＨＳＶ-1은 구순 포진의 병원체이다. 동시에, 이들 바이러스는 주로 신경원의 신경절 세포에서 급성 질환을 유발하고 잠복성 감염을 확립시킬 수 있는 능력을 특징으로 한다.

생식기 포진은 매년 500,000건의 임상 건수가 보고되며(일차감염 및 재발감염), 미국에서만 약 5백만의 환자에게서 발생하는 것으로 추정된다. 일차감염은 통상적으로 사춘기 이후에 발생하며 국소 양상의 통증이 있는 피부 병변이 특징이고, 2 내지 3주 동안 지속된다. 환자의 50%는 일차감염 이후 6개월 이내에 질환이 재발될 것이다. 환자의 약 25%는 매년 10 내지 15회의 질환의 재발 에피소드를 겪을 수 있다. 면역손상 환자에서의 재발 발생률 빈도는 통계적으로 정상 환자군에서 보다 높다.

ＨＳＶ-1 및 ＨＳＶ-2 바이러스는 모두 바이러스의 표면에 위치하는 수많은 당단백질 성분을 지닌다. 이들은 gB, gC, gD 및 gE 등으로 공지되어 있다.

당단백질 D는 바이러스의 막에 존재하고, 또한 감염된 세포의 세포질에서 발견된다 (Eisenberg R.J. 등; J of Virol 1980 35 428-435). 이것은 시그날 펩티드를 포함하는 393개의 아미노산을 포함하고 약 60 kD의 분자량을 갖는다. 무엇보다도 이것이 ＨＳＶ 외피 당단백질의 가장 큰 특징이다 (Cohen 등, J.Virology 60 157-166). 생체내에서 바이러스가 세포막에 부착할 때 중심적인 역할을 하는 것이 공지되어 있다. 게다가, 당단백질 D는 생체내에서 중화 항체를 유도할 수 있는 것으로 나타나 있다 (Eing 등, J.Med.Virology 127:59-65). 그러나 잠복성 ＨＳＶ-2 바이러스는, 환자의 혈청에 높은 역가의 중화 항체가 존재함에도 불구하고, 여전히 재활성화될 수 있고 질환의 재발을 유도할 수 있다.

파필로마바이러스는 DNA 종양 소바이러스이고, 고도로 특이적인 종이다. 지금까지, 70개 이상의 독특한 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 유전형이 개시되었다. ＨＰＶ는 일반적으로 피부에 특이적이거나 (예컨대, ＨＰＶ-1 및 -2) 점막 표면에 특이적이고 (예컨대, ＨＰＶ-6 및 -11), 대체로 수개월 또는 수년간 지속되는 양성 종양(혹)을 야기시킨다. 이러한 양성 종양은 환자를 괴롭힐 수는 있으나 생명을 위협할 정도는 아니며, 약간의 예외는 있다.

또한 몇몇 ＨＰＶ는 암과 관련이 있다. ＨＰＶ와 사람 암의 가장 강력하고 명확한 관계는 ＨＰＶ-16 및 ＨＰＶ-18과 자궁경부암 사이에 존재한다. 자궁경부암은 개발 도상국에서 가장 흔한 악성 질환이고, 세계적으로 매년 약 500,000건의 발병 건수가 보고된다. 현재는 백신을 이용하여 기구적으로, 초기 ＨＰＶ-16 감염, 심지어 확립된 ＨＰＶ-16-함유 암에 맞서 적극적으로 투병할 수 있다. ＨＰＶ-16에 대한 예방 및 치료적 백신화의 전망에 대한 검토로서 Cason J., Clin. Immunother. 1994; 1(4) 293-306 및 Hagenesee M.E., Infections in Medicine 1997 14(7) 555-556, 559-564를 참조한다.

특히 흥미로운 그밖의 ＨＰＶ에는 혈청형 31, 33 및 45가 있다.

오늘날, 상이한 유형의 ＨＰＶ가 분리되었고, 세균에서 클로닝 시스템의 도움과, 보다 최근에 PCR 증폭에 의해 이들의 특성이 밝혀졌다. 충분히 규명된 소 파필로마바이러스 유형 1(BPV1)을 이용하여, 비교적인 근거에 입각하여 ＨＰＶ 게놈의 분자 기구를 명백히 하였다.

비록 미소한 차이는 있을지라도, 모든 ＨＰＶ 게놈이 7개 이상의 초기출현유전자, E1 내지 E7 및 2개의 원숙(late) 유전자, L1 및 L2를 지닌다. 추가로, 상류 조절 영역은 ＨＰＶ 게놈의 대부분의 전사적 사건을 조절하는 것으로 나타난 조절 서열을 갖는다.

E1 및 E2 유전자는 각각 바이러스 복제 및 전사적 조절과 관련되며, 바이러스 통합에 의해 붕괴되는 경향이 있다. E6 및 E7, 및 또한 최근의 입증으로 포함된 E5는 바이러스 형질전환과 관련이 있다.

ＨＰＶ 16 및 18과 같은 자궁경부암에 영향을 미치는 ＨＰＶ에서, 바이러스 DNA의 통합 이후 발암 진행이 개시된다. 통합은 캡시드 단백질 L1 및 L2를 코드화하는 유전자의 활성을 잃게 하며, 정상 세포의 분화를 점진적으로 감소시키고 암종의 전개를 야기시키는 두개의 초기출현 단백질 E6 및 E7의 지속적인 과발현을 일으킨다.

자궁경부암은 여성에게 흔하며, 전암성 중간기로부터 종종 사망에 이르게 하는 침습성 암종까지 전개된다. 질환의 중간기는 자궁경부 상피내종양으로서 공지되어 있고 1기부터 3기까지 중증도가 증가한다.

임상적으로 여성의 항문성기관에 대한 ＨＰＶ 감염은 자궁경부 편평 콘딜로마로서 자각되고, 이것을 증명하는 것이 자궁경부 편평 상피의 표면 세포 및 중간 세포에 우세하게 영향을 미치는 코일로싸이도증이다.

바이러스에 의한 세포병변 효과의 결과인 코일로싸이도증은 핵주위에 투명한 후광을 지닌 다핵 세포로서 나타난다. 상피는 혹 모양의 병변을 초래하는 비정상적인 각화로 인해 두꺼워진다.

ＨＰＶ 16 또는 18 혈청에 대해 양성인 이러한 편평 콘딜로마는, 그 자체가 침습성 자궁경부암의 전구 병변으로 간주되는 자궁경부 상피내종양(CIN) 및 상피내암종(CIS)으로 전개되는 매우 위험한 인자이다.

WO 96/19496호는 사람의 파필로마 바이러스 E6 및 E7 단백질의 변종, 특히 E6 및 E7의 두개 단백질 모두에 결실이 있는 E6/E7의 융합 단백질에 대해 기술한다. 이러한 결실 융합 단백질은 면역원성이다.

ＨＰＶ L1을 기재로 한 백신이 WO 94/00152호, WO 94/20137호, WO 93/02184호 및 WO 94/05792호에 개시되어 있다. 이러한 백신은 단량체로서의 L1 항원, 캡소미어 및 바이러스 유사 입자를 포함할 수 있다. 이러한 입자는 추가로 L2 단백질을 포함할 수 있다. L2를 기재로 한 백신이 예를 들어 WO 93/00436호에 개시되어 있다. 그밖의 ＨＰＶ 백신은, E7 등의 초기출현 단백질 또는 L2 내지 E7 등의 융합 단백질을 기재로 한다.

ＨＩＶ의 전달은 그밖의 성매개 감염 병원체에 의해 야기되는 생식기 병변을 통해 증가된다 (Fleming, DT, Wasserheit, J.N. From epidemiological synergy to public health policy and practice: the contribution of other sexually transmitted diseases to sexual transmission of ＨＩＶ infection. Sex. Transm. Infect. 1999; 75:3-17). 생식기 병변의 주요 원인은 단순포진 바이러스(ＨＳＶ)와 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ)이다. 예를 들어, ＨＳＶ-2 감염은 ＨＩＶ가 매우 유행하는 아프리카의 국가들에서 빈번하게 진단된다. 중앙 아프리카 공화국에서의 역학적 조사 결과, ＨＳＶ와 ＨＩＶ 사이에 상당한 관련성이 있음이 밝혀졌다(Mbopi-Keou, F.-X., Gresenguet, G., Mayaud, P., Weiss, H.A., Gopal, R., Matta, M., Paul, J.-L., Brown, D.W.G., Hayes, R.J., Mabey, D.C.W., Belec, L. Interactions between Herpes Simplex Virus type 2 and human Immunodeficiency Virus type 1 infection in African women: opportunities for intervention. J. Infect. Dis. 2000; 182:1090-1096). ＨＩＶ-1 양성혈청의 여성에서 ＨＳＶ-2 항체, 바이러스 박리 및 ＨＳＶ-2 DNA는 상당히 높은 비율로 존재한다. 또한, ＨＳＶ-2 DNA 및 ＨＩＶ-1 RNA의 존재 간에 상관 관계가 성립한다. 이러한 발견은, ＨＩＶ의 높은 전달 영역에서 두개 병원체간의 상호작용을 예시하는 것이다.

여전히 ＨＩＶ의 효과적인 치료 및 예방에 대한 필요성이 존재한다. 본 발명은 이러한 요구를 충족시킨다.

첫번째 양태에서, 본 발명은

(a) 하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원과

(b) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(c) 하나 이상 또는 수개의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 백신 조성물을 제공한다.

본 발명은 필수적으로 ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ 모두에 대하여 유효한 조합 백신을 제공한다. 본 발명자들은, 이들 바이러스로부터의 항원을 동시에 또는 공동 투여함에 의해 모든 항원에 대한 면역 반응을 야기함을 입증한다. ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ 모두에 대한 면역화 결과, ＨＩＶ 감염에 대한 보다 양호한 보호를 초래할 수 있다 (역도 또한 같음). ＨＩＶ에 대하여 부분적으로 유효한 예방용 백신이라도, 예를 들어 예방적 또는 치료적 ＨＳＶ 또는 ＨＰＶ 백신의 첨가 또는 공동 투여에 의해 그 효과를 상당히 개선시킬 수 있다.

또한, 본 발명은 ＨＳＶ 백신 및/또는 ＨＰＶ 백신과 함께 ＨＩＶ 백신을 동시 투여하는 방법을 제공한다. 동시 투여는 백신 전달 이전에 적절한 항원의 혼합에 의해 달성되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 하나 이상의 ＨＩＶ 항원을 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및/또는 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원과 함께 공동 전달하는 방법에 관한 것이다. 공동 전달은 실제로 이러한 항원 조합물을 동시 투여하거나 공동 투여하는 것이다. 공동 투여는 동일한 투여 부위에서 이루어지거나, 보다 바람직하게는 상이한 투여 부위에서 이루어질 수 있다.

따라서 본 발명의 백신 조성물은 공동 투여용으로 혼합된 항원 조제물 및 항원의 조합물을, 예를 들어 키트의 형태로 모두 포함한다.

다수의 백신 항원을 동일한 백신 제형으로 투여하거나 별개의 제형으로 동시 투여하는 것은 단일한 백신 항원에 대한 면역 반응의 유도를 간섭할 수 있다 (Schmitt 등, Primary vaccination of infants with diphtheria-tetanus-acellular pertussis-hepatitis B virus-inactivated polio virus and Haemophilus influenzae type b vaccines given as either separate or mixed injections. J.Pediatr. 2000, 137:304-312). 본 발명에 따른 특정 백신 조성물은 어떠한 간섭도 나타내지 않는 것으로 밝혀졌고, 즉, 다시 말해, 본 발명의 조성물 중의 개개 항원에 대한 면역 반응은 각 항원에 의해 개별적으로 수득되는 것과 실질적으로 동일하다.

본 발명의 바람직한 양태에서, 본 발명의 다수의 백신 항원을 동일한 백신 제형으로 투여하거나 별개의 제형으로 공동 투여하는 것은 개개 항원 성분의 면역원성에 실제로 아무런 영향도 미치지 않는다.

또한 본 발명은, 항원(들) 또는 바이러스 성분이 여전히 면역 반응, 바람직하게는 보호성 면역 반응을 발생시킬 수 있다면, 조합 백신의 하나의 바이러스 성분에서 얻은 항원 또는 항원들(예컨대, ＨＰＶ 성분으로부터의 항원)에 대한 면역 반응을 그밖의 바이러스 성분들로부터 얻은 항원의 부재하에 바이러스 성분의 투여에 의해 발생되는 반응에 비해 감소시키기 위한 조성물에 관한 것이다.

조합 백신은 단독의 개개 백신 성분과 비교하여 하나 이상의 질환(ＨＩＶ, ＨＳＶ 또는 ＨＰＶ)에 대한 활성 또는 유효성을 바람직하게 증가시킨다.

바람직한 양태에서, 백신의 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ 성분은 ＨＩＶ 전달과 관련된 병변의 수 및/또는 중증도 및/또는 전달 효과를 감소시킬 정도로 충분히 면역원성이다.

또한 본 발명은

(a) 하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원과,

(b) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(c) 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 키트를 제공한다.

이 키트는 ＨＩＶ 및/또는 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ 감염 또는 질환에 대한 필요한 보호 또는 치료를 제공하기 위해 본 발명에 이용될 수 있는 개별적이거나 조합된 백신 조합물을 제공한다.

본 발명의 백신 조성물은 특히 ＨＩＶ 및/또는 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ의 감염 위험이 있는 사람에게 투여시 매우 이롭다. 이미 ＨＳＶ 또는 ＨＰＶ에 감염된 대상이라도 조합 백신이 이로울 수 있는데 그 이유는, 예를 들어, 이러한 대상을 면역화하는 것이 음성혈청의 성교 상대에 대한 바이러스의 전달을 감소시킬 수 있고, 따라서 감염에 대해 상대를 보호할 수 있기 때문이다. 따라서 본 발명은 본 발명의 백신에 의한 치료를 포함하는 방법으로서, ＨＩＶ 바이러스 전달 등의 바이러스 전달을 감소시키거나 예방하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 백신은 감염 및/또는 질환의 예방 또는 치료에 이용하기 적절하다.

또한 본 발명의 백신 조합물이 애쥬번트를 포함하는 것이 바람직하다.

한 구체예에서, 본 발명의 애쥬번트는 TH1 세포 반응, 또한 본원에서 TH1 유형 반응이라 지칭되는 세포 반응의 선택적인 자극제이다.

면역 반응은 크게, 체액성 면역 반응 또는 세포 매개성 면역 반응(통상적으로 각각 항체 및 세포 효과기의 보호 메카니즘을 특징으로 함)의 두개의 극수 범주로 나누어질 수 있다. 이러한 반응 범주는 TH1 유형 반응(세포-매개 반응) 및 TH2 유형 면역 반응(체액성 반응)으로 지칭된다.

극수 TH1 유형 면역 반응은 항원 특이적인, 일배체형 제한된 세포독성 T 림프구, 및 천연 살세포 반응의 발생을 특징으로 한다. 마우스에서, TH1 유형 반응은 종종 IgG2a 아형의 항체 생성을 특징으로 하는 반면, 사람에서 이들은 IgG1형 항체에 상응한다. TH2 유형 면역 반응은, 마우스의 IgG1을 포함하는 일정 범위의 면역글로불린 이소형의 생성을 특징으로 한다.

이러한 두 유형의 면역 반응을 전개시키는 배후의 추진력은 시토카인인 것으로 고려된다. 높은 수준의 TH1 유형 시토카인은 주어진 항원에 대해 세포 매개성 면역 반응을 유도하려는 경향을 띠는 반면, 높은 수준의 TH2 유형 시토카인은 항원에 대해 체액성 면역 반응을 유도하려는 경향을 띤다.

TH1 및 TH2 유형 면역 반응의 구별은 명확하지 않다. 실제로, 개체는 TH1이 우세하거나 TH2가 우세하다고 개시된 대로 면역 반응을 지지할 것이다. 그러나, 모스만(Mosmann) 및 코프만(Coffman)이 쥐과의 CD4 + ve T 세포 클론에 대해 기술한대로, 종종 시토카인 과를 참작하는 것이 편리하다 (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, p145-173). 통상적으로, TH1 유형 반응은 T-림프구에 의한 INF-γ의 생산과 관련된다. 종종 TH1 유형 면역 반응의 유도와 직접 관련된 그밖의 시토카인이 IL-12 등의 T-세포에 의해 생산되지 않는다. 대조적으로, TH2 유형 반응은 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 및 종양 괴사 인자-β(TNF-β)의 분비와 관련된다.

특정 백신 애쥬번트가 TH1 또는 TH2 유형 시토카인 반응의 자극에 특히 적절한 것으로 공지되어 있다. 통상적으로 백신화 또는 감염 이후 면역 반응의 TH1:TH2 균형을 나타내는 가장 좋은 지표는, 항원으로 재자극 후 시험관내에서 T림프구에 의해 생성된 TH1 또는 TH2 시토카인의 직접 측정치, 및/또는 항원 특이적인 항체 반응의 IgG1:IgG2a 비에 대한 측정치(적어도 마우스에서)를 포함한다.

따라서, TH1 유형 애쥬번트는 시험관내에서 항원으로 재자극시 높은 수준의 TH1 유형 시토카인을 생성하는 단리된 T-세포군을 자극하고 TH1 유형 이소형과 관련된 항원 특이적인 면역글로불린 반응을 유도하는 것이다.

TH1 세포 반응을 선택적으로 자극할 수 있는 애쥬번트가 국제 특허 출원 제 WO 94/00153호 및 WO 95/17209호에 개시되어 있다.

3 데-O-아실화 모노포스포릴 지질 A(3D-MPL)가 이러한 애쥬번트 중 하나이다. 이것은 GB 2220211호 (Ribi)에서 공지되었다. 이것은 화학적으로 3 데-O-아실화 모노포스포릴 지질 A와 4, 5 또는 6 아실화 사슬의 혼합물이고, 리비(Ribi) Immunochem, Montana에 의해 제조된다. 3 데-O-아실화 모노포스포릴 지질 A의 바람직한 형태가 유럽 특허 제 0 689 454 B1호에 기재되어 있다 (SmithKline Beecham Biologicals SA). 그밖의 해독된 세균성 LPS 분자, 예컨대 MPL을 또한 이용할 수 있고, 본원에서 3D-MPL에 대한 언급은, 적절하다면, 이렇게 해독된 LPS 분자를 포함하도록 의도된다. 그밖의 정제된 합성 지질다당류가 개시되었다 (US 6,005,099 및 EP 0 729 473 B1호; Hilgers 등, 1986,Int.Arch.Allergy.Immunol., 79(4):392-6; Hilgers 등, 1987, Immunology, 60(1):141-6; 및 EP 0 549 074 B1호).

3D-MPL의 입자는 0.22 미크론의 막을 통과하여 무균 여과될 정도로 충분히 작은 것이 바람직하다 (유럽 특허 제 0 689 454호에 기술됨). 3D-MPL은 용량 당 10㎍ 내지 100㎍, 바람직하게는 25㎍ 내지 50㎍의 범위로 존재할 것이고, 이 때 항원은 통상적으로 용량 당 2㎍ 내지 50㎍의 범위로 존재할 것이다.

3D-MPL의 바람직한 형태는 소입자의 직경이 0.2㎛ 미만인 에멀젼의 형태이고, 이것의 제조 방법이 WO 94/21292호에 개시되어 있다. 모노포스포릴 지질 A 및 계면활성제를 포함하는 수성 제형이 WO 9843670A2에 개시되어 있다.

본 발명의 애쥬번트 조합물로 제형화된 세균성 지질 다당류 유래의 애쥬번트는 정제될 수 있고, 세균원으로부터 가공되거나, 또는 선택적으로 합성될 수 있다. 예를 들어, 정제된 모노포스포릴 지질 A가 리비(Ribi)(상술함)에 개시되었고, 살모넬라(Salmonella) 종에서 유래된 3-O-탈아실화 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A는 GB 2220211호 및 US 4912094호에 개시되었다. 특히 바람직한 세균성 지질다당류 애쥬번트는 US 6,005,099호 및 EP 0 729 473 B1호에 개시된 3D-MPL과 β(1-6)글루코사민 이당류이다.

따라서, 본 발명에 이용될 수 있는 LPS 유도체는 LPS 또는 MPL 또는 3D-MPL과 구조가 유사한 이러한 면역자극제들이다. 본 발명의 또다른 양태에서, LPS 유도체는 아실화 단당류일 수 있고, 이것은 상기 MPL 구조에 대한 하위부분이다.

LPS의 바람직한 유도체는 하기 구조식의 정제되거나 합성된 지질 A이다:

상기 식에서, R²는 H이거나 PO₃H₂이고; R₃는 아실 사슬이거나 β-히드록시미리스토일이거나 하기 구조식을 갖는 3-아실옥시아실 잔기이다:

X와 Y는 0에서 약 20까지의 값을 갖는다.

사포닌이 락카일-두보이스,엠(Lacaille-Dubois,M) 및 바그너 에이치.(Wagner H.)에 교시된다 (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386). 사포닌은 식물 및 해양 동물계에 널리 분포된 스테로이드 또는 트리테르펜 글리코시드이다. 사포닌은 물에서 교란시 거품이 이는 콜로이드성 용액을 형성하고 콜레스테롤을 침전시키는것으로 알려져 있다. 사포닌이 세포막에 근접할 때, 이들은 막에 구멍 같은 구조를 생성함으로써 막의 파열을 초래한다. 적혈구의 용혈은 이러한 현상의 예이며, 이것은 모두는 아니나, 특정 사포닌의 특성이다.

사포닌은 전신 투여용 백신에서 애쥬번트로서 공지되어 있다. 애쥬번트와 사포닌의 용혈 특성이 당해 분야에서 광범하게 연구되어왔다 (Lacaille-Dubois and Wagner, 상술함). 예를 들어, Quil A(남아메리카 나무 퀼라자 사포나리아 몰리나의 목피에서 유도됨), 및 이의 분획이 US 5,057,540호 및 "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C.R.,Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12(1-2):1-55; 및 EP 0 362 279 B1호에 개시되어 있다. Quil A의 분획을 포함하여, 면역 자극 복합체(ISCOMS)라 지칭되는 미립자 구조는 용혈성이며, 백신을 제조하는데 사용되어왔다 (Morein, B., EP 0 109 942 B1호; WO 96/11711호; WO 96/33739호). 용혈성 사포닌 QS21 및 QS17(Quil A의 HPLC 정제 분획)은 유효한 전신성 애쥬번트로서 기술되었으며, 이들의 제조 방법이 미국 특허 제 5,057,540호 및 EP 0 362 279 B1호에 기재되어 있다. 전신성 백신화 연구에 이용되어온 그밖의 사포닌으로는 집소필라(Gypsophila) 및 사포나리아(Saponaria)와 같은 그밖의 식물종에서 유래된 것들이 있다 (Bomford 등, Vaccine, 10(9):572-577, 1992).

또다른 바람직한 애쥬번트는, 예를 들어 상기 기술한대로 사포닌을 포함한다.

바람직한 애쥬번트는 QS21, 퀼라자 사포나리아 몰리나의 목피에서 유도되는 HPLC 정제된 무독성 분획을 포함한다. 임의로 이것을 3 데-O-아실화 모노포스포릴지질 A(3D-MPL)와, 임의로 담체와 함께 혼합시킬 수 있다.

QS21을 함유하는 무-리액토겐성 애쥬번트 제형은 이미 기술되었다 (WO 96/33739호). QS21을 포함하는 이러한 제형 및 콜레스테롤은 항원과 함께 제형화될 때 성공적인 TH1 자극 애쥬번트가 되는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 일부를 형성하는 백신 조성물은 QS21 및 콜레스테롤의 조합물을 포함할 수 있다.

추가로, TH1 세포 반응의 선택적인 자극제가 되는 애쥬번트는, WO 96/02555호에서 기술한대로 면역조절성 올리고누클레오티드, 예를 들어 비메틸화 CpG 서열을 포함한다.

백신으로 제형화되는 CpG는 일반적으로 유리 항원과 함께 (WO 96/02555호; McCluskie 및 Davis, 상술함) 유리 용액으로 투여되거나, 항원에 공유적으로 컨쥬게이션되어 (WO 98/16247호) 투여되거나, 수산화 알루미늄 등의 담체와 함께 제형화된다 ((간염 표면 항원) Davis 등, 상술함; Brazolot-Millan 등,Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8). 그밖의 바람직한 애쥬번트 조합물은 CpG와 사포닌을 포함한다.

TH1 세포 반응의 선택적인 자극제가 되는 애쥬번트를 제공하기 때문에, 상기에서 언급한 것들과 같은 상이한 TH1 자극 애쥬번트의 조합물이 또한 고려된다. 예를 들어, QS21을 3D-MPL과 함께 제형화할 수 있다. QS21:3D-MPL의 비는 통상적으로 1:10 내지 10:1, 바람직하게는 1:5 내지 5:1, 종종 실제로 1:1일 것이다. 최적의 상승효과를 얻기 위한 바람직한 범위는 2.5:1 내지 1:1의 3D-MPL:QS21이다.

본 발명의 백신 조성물에 또한 담체가 존재하는 것이 바람직하다. 담체는수중유형(oil in water) 에멀젼이거나, 인산알루미늄 또는 수산화 알루미늄 등의 알루미늄염일 수 있다.

바람직한 수중유형 에멀젼은 스쿠알렌, 알파 토코페롤 및 트윈 80과 같은 대가가능한 오일을 포함한다. 특히 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 백신 조성물 중의 항원은 이러한 에멀젼에서 QS21 및 3D-MPL과 조합된다. 추가로, 수중유형 에멀젼은 스팬 85 및/또는 레시틴 및/또는 트리카프릴린을 함유할 수 있다.

특히 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 백신 조성물 중의 항원은 3D-MPL 및 명반과 조합된다.

통상적으로 사람에게 투여하기 위한 QS21 및 3D-MPL은 용량 당 1㎍ 내지 200㎍, 예컨대 10㎍ 내지 100㎍, 바람직하게는 10㎍ 내지 50㎍의 범위로 백신 중에 존재할 것이다. 통상적으로 수중유형은 2 내지 10%의 스쿠알렌, 2 내지 10%의 알파 토코페롤 및 0.3 내지 3%의 트윈 80을 포함할 것이다. 스쿠알렌 : 알파 토코페롤의 비는 동일하거나 1 미만인 것이 바람직하고, 이에 의해 보다 안정한 에멀젼을 제공한다. 또한 스팬 85는 1%의 수준으로 존재할 수 있다. 몇몇 경우, 본 발명의 백신이 추가로 안정화제를 함유하는 것이 바람직할 수 있다.

무독성 수중유형 에멀젼은 수성 담체 중에 무독성 오일, 예컨대 스쿠알란 또는 스쿠알렌, 유화제, 예컨대 트윈 80을 함유하는 것이 바람직하다. 수성 담체는, 예를 들어 인산염 완충 염수일 수 있다.

수중유형 에멀젼에 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 함유하는, 특히 유효한 애쥬번트 제형이 WO 95/17210호에 개시되어 있다.

QS21, 3D-MPL과 병용하여 ＨＩＶ gp120 및 Nef-Tat 단백질을 수중유형 에멀젼에 포함하는 애쥬번트 및 항원의 바람직한 조합물이 WO 95/17210호에 개시되어 있다.

본 발명에 이용하기 위해 애쥬번트에 항원을 최적화시키는 방법은 당업자에게 자명하다.

본 발명의 또다른 양태에서, 백신은 대상이 되는 하나 이상의 ＨＩＶ, ＨＳＶ 또는 ＨＰＶ 폴리펩티드를 제위치에서 생성하도록 이들을 엔코딩하는 DNA를 함유할 수 있다. DNA는, 플라스미드 DNA와 같은 핵산 발현 시스템, 세균 및 바이러스 발현 시스템을 포함하여, 당업자에게 공지된 여하한 다수의 전달 시스템내에 존재할 수 있다. 수많은 유전자 전달 기술이 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 그 예가 롤랜드(Rolland) 문헌[Crit. Rev. Therap. Drug Crrier Systems 15:143-198, 1998] 및 본원에서 인용된 참고문헌들에 기재되어 있다. 적절한 핵산 발현 시스템은 환자에서 발현되는 필수적인 DNA 서열을 포함한다 (예컨대 적절한 프로모터 및 종결 시그날). 발현 시스템이 바이러스 또는 세균 등의 재조합 생유기체일 때, 대상이 되는 유전자는 살아있는 재조합 바이러스 또는 세균의 게놈으로 삽입될 수 있다. 생벡터를 이용한 접종 및 생체내 감염은 항원의 생체내 발현을 야기하고 면역 반응을 유도할 것이다. 이러한 목적에 이용되는 바이러스 및 세균은, 예를 들어 다음을 포함한다: 폭스바이러스(예컨대, 백시니아, 조류폭스, 카나리폭스, 개질된 폭스바이러스, 예컨대 개질된 바이러스 안카라(MVA)), 알파바이러스(신드비스 바이러스, 셈리키 포레스트 바이러스, 베네수엘리언 에콰인 엔세팔리티스 바이러스),플라비바이러스(황열 바이러스, 뎅기 바이러스, 일본뇌염 바이러스), 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 피코르나바이러스(폴리오바이러스, 리노바이러스), 헤르페스바이러스(바리셀라 조스터 바이러스 등), 리스테리아, 살모넬라, 시겔라, 네이세리아, BCG. 이러한 바이러스 및 세균은 독성이거나, 생백신을 수득하기 위해 다양한 방법으로 약독화될 수 있다. 또한 이러한 생백신이 본 발명의 일부를 구성한다.

따라서, 본 발명에 따른 바람직한 백신의 ＨＩＶ, ＨＳＶ 또는 ＨＰＶ 성분은 요망하는 단백질을 엔코딩하는 폴리누클레오티드의 형태로 제공될 수 있다. 폴리누클레오티드는, 예를 들어 단일 단백질을 엔코딩하는 벡터의 형태이거나, 세개의 병원체 중의 하나 이상으로부터의 다중 항원을 발현시키는 단일 벡터일 수 있다.

추가로, 본 발명에 따른 면역화는 단백질 및 DNA-기재 제형의 조합물을 이용하여 수행될 수 있다. 프라임-부스트(Prime-boost) 면역화는 광범한 면역 반응을 유도하는데 효과적인 것으로 고려된다. 애쥬번트 단백질 백신은 주로 항체와 T 헬퍼 면역 반응을 유도하는 반면, 플라스미드 또는 생백터로서 DNA의 전달은 강력한 세포독성 T 림프구(CTL) 반응을 유도한다. 따라서, 단백질 및 DNA 백신화의 조합은 매우 다양한 면역 반응을 제공할 것이다. 이것은, 중화 항체 및 CTL이 모두 ＨＩＶ에 대한 면역 방어에 중요한 것으로 고려되기 때문에, 특히 ＨＩＶ와 관련하여 적절하다.

본 발명에 따라서, ＨＩＶ와, ＨＳＶ 및 ＨＰＶ 항원 중의 어느 하나 또는둘 모두에 의해 단독으로 수행되거나 이들을 조합하여 수행되는 백신화 스케쥴은 단백질 항원 및 상기 언급한 단백질을 엔코딩하는 DNA의 순차적("프라임-부스트")인 투여 또는 동시 투여에 의해 이루어질 수 있다. DNA는 플라스미드 DNA나 재조합 생백터의 형태, 예컨대 폭스바이러스 벡터 또는 본원에서 개시한 것과 같은 여하한 그밖의 적절한 생백터로서 전달될 수 있다. 단백질 항원을 일회 또는 수회 주입함에 이어 한번 이상의 DNA 투여가 이루어지거나, 먼저 DNA를 일회 이상 투여하고, 이어서 한 번 이상의 단백질 면역화가 이루어질 수 있다.

추가로 본 발명의 구체예에서, ＨＩＶ와, ＨＳＶ 및 ＨＰＶ 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두에 의해 단독으로나 조합으로 이루어지는 백신화 스케쥴은 상이한 DNA 전달 방식을 병용하여 상기 언급한 단백질을 엔코딩하는 DNA의 순차적("프라임-부스트")인 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 우선 네이키드 DNA를 한번 이상 투여하고, 이어서 재조합 생벡터의 형태로 DNA를 일회 이상 투여할 수 있다.

본 발명의 ＨＩＶ 항원은, ＨＩＶ 외피 단백질 또는 이의 유도체를 조절 단백질 또는 비구조 단백질, 예컨대 Gag, Pol, Rev, Nef, Vif 또는 Tat와 병용하여 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물 중의 ＨＩＶ 항원(들)은,

(a) ＨＩＶ Nef 단백질 또는 이의 유도체;

(b) ＨＩＶ Tat 단백질 또는 이의 유도체;

(c) ＨＩＶ Tat 단백질 또는 이의 유도체에 결합된 ＨＩＶ Nef 단백질 또는 이의 유도체;

(d) ＨＩＶ Env 단백질 (gp160 또는 gp120) 또는 이의 유도체;

(e) gp120 또는 이의 유도체와 조합된 ＨＩＶ Tat 단백질 또는 이의 유도체에 결합된 ＨＩＶ Nef 단백질 또는 이의 유도체;

(f) ＨＩＶ Gag 또는 Pol 단백질 또는 이의 유도체인 것이 바람직하다.

가장 바람직한 것은, 본원에서 그 전체 내용이 참고문헌으로 인용되는 WO 01/54719호에 개시된대로, gp120과 조합된 nef-tat 융합물이다. 바람직하게는 Tat, Nef 또는 Nef-Tat가 ＨＩＶ의 치료 및 예방에 있어서 gp120과 함께 상승적으로 작용하고, 가장 바람직하게는 nef-tat 및 gp120 사이에서 상승 작용을 한다.

본 발명의 범위내에 있는 유도체는 바람직하게 5 내지 10개의 히스티딘 잔기를 포함하는 C-말단의 히스티딘 테일을 갖는 분자를 포함한다. 일반적으로 n개의 잔기를 함유하는 히스티딘 테일을 본원에서 His(n)으로서 표시한다. 히스티딘(또는 'His') 테일의 존재가 정제를 돕는다.

바람직한 구체예에서, 일부 또는 모든 단백질이 5 내지 10개, 바람직하게는 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 히스티딘 테일에 의해 발현된다. 이들이 정제를 보조하는데 유리하다. 효모(사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae))에서 Nef(Macreadie I.G.등, 1993, Yeast 9(6) 565-573) 및 Tat(Braddock M 등, 1989, Cell 58(2) 269-79)의 별개의 발현이 보고되었다. 융합 구조물 Nef-Tat-His의 발현이 WO 99/16884호에 개시되어 있다.

또한 본 발명의 범위내에 있는 유도체는 돌연변이된 단백질을 포함한다. "돌연변이"라는 용어는 본원에서, 부위 유도성 변이유발을 위해 널리 공지된 기술을이용하거나 여하한 그밖의 공지기술을 이용하여, 하나 이상의 아미노산의 결실, 첨가 또는 치환이 이루어진 분자를 의미하기 위해 이용된다. 이 정의는 ＨＩＶ 항원에 제한된 것이 아니며 본 발명의 백신에 이용되는 모든 항원에 적용된다. 그밖의 적절한 유도체 형태는 융합 단백질, 가교된 단백질, 단백질 절단물 및, 이러한 유도체를 엔코딩하는 누클레오티드를 포함하는 코돈 최적 서열이다.

또한 항원의 유도체는 원시 항원처럼 실제로 면역원성인 것이 바람직하고, 원시 항원과 같이 실제로 면역원성인 항원을 엔코딩한다.

본 발명의 조성물 중의 ＨＰＶ 항원은 ＨＰＶ 16 및/또는 18, 또는 ＨＰＶ 6 및/또는 11, 또는 ＨＰＶ 31, 33, 45, 52, 58, 35, 56 및 59에서 유래되는 것이 바람직하다.

한 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물 중의 ＨＰＶ 항원은 ＨＰＶ의 주요한 캡시드 단백질 L1과, 특히 ＨＰＶ 16 및/또는 ＨＰＶ 18로부터의 L2 단백질을 임의로 포함한다. 이 구체예에서, L1 단백질의 바람직한 형태는 절단된 L1 단백질, 가장 바람직하게는 C 말단의 절단물이다. 임의로 L1-L2 융합에서 L1이 바이러스 유사 입자(VLP)의 형태인 것이 바람직하다. 바이러스 유사 입자를 제조하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. L1 단백질은 또다른 ＨＰＶ 단백질, 특히 L1-E7 융합을 형성하기 위한 E7에 융합될 수 있다. L1-E 또는 L1-L2-E를 포함하는 키메라 VPL들이 특히 바람직하다.

또다른 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 조성물 중의 ＨＰＶ 항원은 E6 또는 E7 단백질, 특히 T 세포 에피토프를 지닌 면역성 융합 파트너에 결합된 E6 또는 E7로부터 유래된다.

본 발명의 구체예의 바람직한 형태에서, 면역성 융합 파트너는 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenza) B의 단백질 D에서 유래된다. 단백질 D 유도체는 단백질의 대략 처음 1/3, 특히 N-말단의 처음 약 100 내지 110개의 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 구체예에서 바람직한 융합 단백질은 ＨＰＶ 16으로부터의 단백질 D-E6, ＨＰＶ 16으로부터의 단백질 D-E7, ＨＰＶ 18로부터의 단백질 D-E7 및 ＨＰＶ 18로부터의 단백질 D-E6을 포함한다. 단백질 D 부분은 단백질 D의 처음 1/3을 포함하는 것이 바람직하다.

추가로 본 발명의 또다른 구체예에서, ＨＰＶ 항원은, 특히 ＨＰＶ 6 및/또는 ＨＰＶ 11로부터의 L2-E7 융합물의 형태이다.

본 발명의 ＨＰＶ 단백질은 이.콜라이(E.coli)에서 발현되는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예에서, 단백질은 5개 내지 9개, 특히 6개의 히스티딘 잔기를 포함하는 히스티딘 테일을 이용하여 발현된다. 이들이 정제를 보조하는데 유리하다. 이러한 단백질의 제조방법에 대한 설명은 WO 99/10375호로서 공개된 영국 특허 출원 제 GB 9717953.5호에 충분히 개시되어 있다.

백신 조성물 중의 ＨＰＶ 항원은 Al(OH)₃위에 흡착될 수 있다.

본 발명의 조성물 중의 ＨＳＶ 항원은 ＨＳＶ-2에서 유래되는 것이 바람직하고, 통상적으로 당단백질 D이다. 당단백질 D는 바이러스의 막에 존재하고, 또한감염된 세포의 세포질에서 발견된다 (Eisenberg R.J. 등; J of Virol 1980,35, 428-435). 이것은 시그날 펩티드를 포함하는 393개의 아미노산을 포함하고 약 60 kD의 분자량을 갖는다. 무엇보다도 이것이 ＨＳＶ 외피 당단백질의 가장 큰 특징이다 (Cohen 등, J.of Virology,60, 157-166). 생체내에서 바이러스가 세포막에 부착할 때 중심적인 역할을 하는 것이 공지되어 있다. 게다가, 당단백질 D는 생체내에서 중화 항체를 유도할 수 있는 것으로 나타나 있다 (Eing 등, J.Med.Virology 127:59-65). 그러나 잠복성 ＨＳＶ-2 바이러스는, 환자의 혈청에 높은 역가의 중화 항체가 존재함에도 불구하고, 여전히 재활성화될 수 있고 질환의 재발을 유도할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, ＨＳＶ 항원은, 막의 앵커 영역이 결여된 절단 단백질의 C 말단의 끝에 아스파라긴 및 글루타민이 첨가된 아미노산이 1개 내지 306개인 천연 발생의 당단백질을 포함하는 308개 아미노산의 절단된 ＨＳＶ-2 당단백질 D이다. 이러한 형태의 단백질은 절단되어 283개의 성숙한 아미노산 단백질을 생성하는 시그날 펩티드를 포함한다. 중국산 햄스터의 난소 세포에서 이러한 단백질을 생산하는 방법이 제넨테크(Genentech)의 유럽 특허 EP-B-139 417호에 개시된 바 있다.

성숙한 재조합 ＨＳＶ-2 당단백질 D 절단물을 본 발명의 백신 제형에 이용하는 것이 바람직하고, 이것은 rgD2t로서 지칭된다.

애쥬번트 3D-MPL과 병용된 ＨＳＶ-2 항원의 조합물이 WO 92/16231호에 개시되어 있다.

가장 바람직한 것은 L1(전장 또는 절단됨) 및/또는 ＨＳＶ로부터의 rgD2t를 포함하는 ＨＰＶ VLP와 조합된 nef-tat 융합물 및 gp120을 포함하는 백신이다.

본 발명은 추가의 양태에서 본원에서 기술한 의학적 치료 용도, 특히 ＨＩＶ 감염, 사람 파필로마바이러스 감염 및 단순포진 바이러스 감염의 치료용 또는 예방용 백신 제형을 제공한다.

본 발명의 백신은 면역보호적 양의 항원을 함유할 것이고, 공지의 기술에 의해 제조될 수 있다.

백신 조제물이 문헌[Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61 Vaccine Design - the subunit and adjuvant approach, edited by Powell and Newman, Plenurn Press, 1995]에 개략적으로 개시되어 있다. 신규 백신의 경향 및 개발(New trends and Developments in Vaccines)이 볼러(Voller) 등, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978에 의해 발행되었다. 리포솜내의 캡슐화에 대하여, 예를 들어 풀러톤(Fullerton)의 미국 특허 4,235,877호에 개시되었다. 거대분자로의 단백질의 컨쥬게이션에 대하여 리카이트(Likhite)의 미국 특허 4,372,945호 및 아르모(Armor) 등의 미국 특허 4,474,757호에 개시되었다.

각 백신 용량에서 단백질의 양은 통상의 백신에서 현저한 부작용 없이 면역보호적 반응을 유도하는 양이 되도록 선택된다. 이러한 양은 특정 면역원의 사용에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 각 용량은 1 내지 1000㎍의 단백질, 바람직하게는 2 내지 100㎍, 가장 바람직하게는 4 내지 40㎍의 단백질을 포함할 것으로 예상된다. 특정 백신에 대한 최적량은, 대상물에서 항체 역가와 그밖의 반응을 관찰하는 표준 연구에 의해 확정될 수 있다. 대상물은 초기 백신화에 이어서, 약 4 내지 8주 간격으로 일회 또는 수회 추가접종될 수 있다.

ＨＩＶ 및/또는 ＨＰＶ 및/또는 ＨＳＶ 감염의 어느 하나 또는 둘 모두에 감염되기 쉬운 사람을 백신화하는 것에 추가하여, 상기 바이러스에 감염된 사람을 면역치료적으로 치료하기 위해 본 발명의 약제 조성물을 이용할 수 있다.

따라서, 본 발명은 ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ 모두에 대한 유효량의 백신을 이러한 치료가 필요한 개체에게 전달하는 것을 포함하는 치료방법에 관한 것이다. 이 방법은 ＨＩＶ 및/또는 ＨＰＶ 및/또는 ＨＳＶ에 의해 야기되는 감염 또는 질환을 적절하게 예방하거나 치료하기 위한 것이다.

본 발명의 양태에서, 본원에서 기술한 백신의 제조방법이 제공되고, 이 방법은 사람 면역결핍성 바이러스 항원을, 사람 파필로마 바이러스 항원 및 단순포진 바이러스 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두와 혼합시키는 단계를 포함한다. 대안적으로, 제조방법은 적절한 항원을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 혼합하거나, 폴리누클레오티드 및 단백질을 혼합하여 본 발명의 백신을 제조하는 단계를 포함한다. 항원은, TH1 유도성 애쥬번트, 예를 들어 3D-MPL과 같은 애쥬번트 및, 바람직하게는, 예를 들어 명반 등의 담체와 함께 제형화되는 것이 바람직하다.

소망에 따라, 그밖의 항원을 편리한 순서로 첨가하여, 본원에서 기술한 다가 백신 조성물을 제조할 수 있다.

본 발명의 백신 조제물은 상기 백신을 하기 경로에 의해 투여함에 의해, 감염되기 쉽거나 질환에 걸린 포유류를 보호하거나 치료하는데 이용될 수 있다:

(a) 점막 경로, 예컨대 경구/협측/장내/질/직장 또는 비강 경로;

(b) 비경구 전달, 예를 들어 근육내, 또는 피하 투여; 또는

(c) 경피, 진피내, 상피내, 국소 또는 경피성 투여.

또한 본 발명은 본 발명의 백신을 포함하는 전달 장치에 관한 것이고, 이것은, 예를 들어 진피내 또는 점막 전달에 적합한 장치이거나 유전자 건이다. 적절한 전달 장치가 당해 분야에 널리 공지되어 있다.

임의로 상기 나열된 경로를 병용하여 본 발명의 백신 조제물을 투여할 수 있다.

예시가 되는 하기 구체예에 의해 본 발명을 설명하나, 본 발명을 이에 제한하는 것은 아니다.

도 1 및 도 2는 본 발명의 상이한 제형에서 gp120, Nef, Tat 및 ＨＳＶ gDt2에 대한 항체 반응을 도시한다.

도 3 내지 도 6은 본 발명의 상이한 제형에서 gp120, Nef, Tat 및 ＨＰＶ에 대한 항체 반응을 도시한다.,

실시예 1 - ＨＩＶ/ＨＳＶ 면역화

10개의 마우스 군을 ＨＩＶ 항원(본원에서 참고문헌으로 이용되는 WO/0154719호에 개시된 gp120/nef-tat 융합 단백질) 및/또는 ＨＳＶ 항원 gD2t(예를 들어, WO 92/16231호)의 조합물을 이용하여 2주 간격으로(0일 및 14일) 2회 면역화하였다. 20㎍의 gp120과 4㎍의 nef-tat 단백질을, 4㎍의 gD2t와 함께 이용하였다. 항원을 애쥬번트 'A' 또는 'B'로 제형화하였고, 'A'는 특허 출원 WO95/17210에 개시된 QS21 및 3D MPL을 함유하는 수중유형 에멀젼이고 'B'는 특허 출원 WO/0023105호에 개시된 3D MPL 및 알루미늄염의 조합물이다. 어느 한쪽의 애쥬번트 또는 둘 모두의 애쥬번트에 음성 대조군을 단독으로 포함시켰다. 추가 면역화 2주 후에(28일) 동물을 치사시키고 이들 제형에 의해 유도된 면역 반응의 검정을 위해 혈청을 수집하였다.

항체 반응

각 군의 면역화 마우스에서 얻은 혈청을 gp120-, Nef-, Tat- 및 gD-특이적 항체 반응에 대해 개별적으로 검정하였다. 표준 ELISA 분석을 이용하였고, 이러한 방법은 본 발명의 백신에 이용된 항원의 적합성을 평가하기 위해 이용될 수 있다.

도 1 및 도 2의 결과로부터 ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 항원의 동시 전달과 ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 항원의 공동 전달(별개의 주사 부위)이 모두 각 성분에 대한 면역 반응을 일으킴을 알 수 있다.

실시예 2 - ＨＩＶ/ＨＰＶ 면역화

ＨＩＶ와 ＨＰＶ의 조합물을 시험하기 위해 실시예 1과 전반적으로 동일한 프로토콜을 이용하였다. 이들 실험에서 ＨＳＶ의 gD 성분을 ＨＰＶ 16 및 ＨＰＶ 18의 L1 VLP(각 VPL은 2㎍임)로 대신하였다.

도 3 및 도 4는 ＨＰＶ 16 및 18 L1 VLP에 대하여 생성된 평균 항체 역가를 도시한다. 도 5 및 도 6은 ＨＩＶ 성분 Nef, tat 및 gp120에 대하여 생성된 평균 중간점 항체 역가를 도시한다.

도 3 내지 도 6의 결과로부터 ＨＩＶ 및 ＨＰＶ 항원의 동시 전달과 ＨＩＶ 및 ＨＰＶ 항원의 공동 전달(별개의 주사 부위)이 모두 각 성분에 대한 면역 반응을 일으킴을 알 수 있다.

Claims

(a) 하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원과,

(b) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(c) 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 백신 조성물.
제 1항에 있어서, ＨＩＶ 항원이 gp160, gp120, nef, tat, nef-tat 또는 tat-nef 융합 단백질, gag, pol 및 이의 면역 활성 유도체로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 2항에 있어서, 백신이 ＨＩＶ 항원 gp120 및 nef-tat 융합 단백질을 포함함을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 2항 또는 제 3항에 있어서, Tat, Nef 또는 Nef-Tat가 gp120과 상승적으로 작용함을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중의 어느 한 항에 있어서, ＨＰＶ 항원이 임의로 융합 단백질 또는 절단물 형태의 L1, L2, E6 및 E7, 및 이의 조합물로 구성된 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 5항에 있어서, ＨＰＶ 항원이 L1 단백질 또는 이의 C 말단 절단물을 포함하는 바이러스 유사 입자임을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 1항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, ＨＳＶ 항원이 ＨＳＶ-2gD 또는 이의 절단물임을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 1항 내지 제 7항 중의 어느 한 항에 있어서, 추가로 애쥬번트를 포함함을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 8항에 있어서, 애쥬번트가 TH1-세포 반응의 선택적인 자극제임을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 9항에 있어서, TH1-세포 반응의 선택적인 자극제가 3D-MPL, 바람직하게는 3D-MPL의 입자 크기가 대략 100nm 이하인 3D-MPL, QS21, QS21과 콜레스테롤의 혼합물 및 CpG 올리고누클레오티드, 및 이의 조합물을 포함하는 애쥬번트의 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 9항 또는 제 10항에 있어서, 추가로 수중유형 에멀젼을 포함함을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 11항에 있어서, ＨＩＶ gp120 및 ＨＩＶ Tat를 지닌 ＨＩＶ Nef의 융합 단백질을 QS21, 3D-MPL 및 수중유형 에멀젼과 병용하여 포함함을 특징으로 하는 백신 조성물.
제 1항 내지 제 12항 중의 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 항원이 DNA 또는 생백터의 형태임을 특징으로 하는 백신 조성물.
(a) 하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원과,

(b) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(c) 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두를 포함하는 백신화 키트.
ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ에 대한 유효량의 백신을 이러한 치료가 필요한 개체에게 전달하는 것을 포함하는 의학적 치료 방법.
제 15항에 있어서, ＨＩＶ 및 ＨＳＶ에 대한 백신의 전달을 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 15항에 있어서, ＨＩＶ 및 ＨＰＶ에 대한 백신의 전달을 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 15항 내지 제 17항 중의 어느 한 항에 있어서, ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ로부터의 항원의 혼합물을 함유하는 단일 백신의 전달을 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 15항 내지 제 17항 중의 어느 한 항에 있어서, ＨＩＶ 및 ＨＳＶ 및/또는 ＨＰＶ에 대한 백신을 별개의 투여 부위에서 공동투여함을 특징으로 하는 방법.
ＨＩＶ 또는 ＨＳＶ 감염이나 질환의 예방 또는 치료용 약제의 제조에서 ＨＰＶ 항원의 용도.
ＨＩＶ 또는 ＨＰＶ 감염이나 질환의 예방 또는 치료용 약제의 제조에서 ＨＳＶ 항원의 용도.
제 20항 또는 제 21항에 있어서, ＨＩＶ 감염이나 질환의 예방 또는 치료용 용도.
하나 이상의 사람 면역결핍성 바이러스(ＨＩＶ) 항원을,

(i) 하나 이상의 단순포진 바이러스(ＨＳＶ) 항원 및

(ii) 하나 이상의 사람 파필로마바이러스(ＨＰＶ) 항원 중의 어느 하나 또는 둘 모두와 조합하는 것을 포함하는 제 1항 내지 제 13항 중의 어느 한 항에 따른 백신의 제조 방법.
제 1항 내지 제 13항 중의 어느 한 항에 따른 백신에 의한 치료를 포함하여, ＨＩＶ 바이러스 전달을 감소시키는 방법.