KR20040000404A

KR20040000404A - 티오펩타이드 화합물

Info

Publication number: KR20040000404A
Application number: KR10-2003-7011850A
Authority: KR
Inventors: 가즈마 가미기리; 마사또 와따나베; 고지 나가이; 나까꼬 아라오; 겐이찌 스즈무라; 겐이찌 스즈끼; 류이찌로 구라네; 마사까즈 야마오까; 야스히로 가와노
Original assignee: 야마노우치세이야쿠 가부시키가이샤; 내셔날 인스티튜트 오브 어드밴스드 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지
Priority date: 2001-03-13
Filing date: 2002-03-12
Publication date: 2004-01-03
Also published as: CA2440353A1; US7030085B2; JP4057426B2; JPWO2002072617A1; US20040097702A1; WO2002072617A1; EP1369425A1

Abstract

본 발명은 바실루스(Bacillus)속에 속하는 미생물을 배양하고, 그 배양물로부터 신규 티오펩타이드 화합물 QN3323류 및 공지된 화합물 티오실린 Ⅰ/Ⅱ 등을 채취했다. 해당 티오펩타이드 화합물은 양호한 항균 활성을 갖고 있고, 의약, 특히, 다제 내성균 감염증 치료제로서 유용하다.

Description

티오펩타이드 화합물{Thiopeptide Compounds}

종래부터 미생물이 생산하는 여러가지 항생 물질에는 페니실린, 세팔로스포린, 카바페넴(carbapenems) 등의 β락탐계 항생 물질, 에리트로마이신, 죠사마이신, 록타마이신 등의 매크로라이드 항생 물질, 카나마이신, 겐타마이신, 토브라마이신 등의 아미노 글리코시드 항생 물질 등이 잘 알려져 있다. 이와 같은 항생 물질, 및 이들을 화학 합성적 수법에 의해 개량시킨 화합물 중에는 임상상, 매우 유효한 항균제로서 유효하게 이용되고 있는 것이 많이 있다.

그러나, 최근 이러한 항생 물질에 대해 높은 내성도를 갖는 메티실린 내성 스타필로코쿠스 아우레우스(이하, MRSA라고 함)이 임상용으로 많이 출현하여 사회적으로 중대한 문제가 되고 있다. 또한, 1996년에는 일본에서 MRSA에 대한 치료약으로 다용되어 온 반코마이신에 대하여 높은 내성도를 갖는 엔테로코쿠스 파에칼리스(반코마이신 내성 엔테로코쿠스 파에칼리스속, 이하, VRE라고 함)의 임상 분리가보고되어 있다. 이 외에도 녹농균 및 폐렴 간균 등에서도 여러가지 약제에 대해 높은 내성도를 갖는 균이 출현하고 있다. 이러한 균은 다제 내성균이라고 불리며, 최근 임상상으로 특히 문제가 되고 있고, 다제 내성균에 대한 유효한 항생 물질의 개발이 절실히 요망되고 있다.

티아졸을 환의 구성 성분으로 갖는 대환상 화합물은 티오펩타이드 화합물로 총칭되며 여러가지 화합물이 보고되고 있다. 이들은 환의 원수나 환을 구성하는 원소의 차이 뿐만 아니라, 티오실린 Ⅰ와 같이 단환식 대환상 구조를 갖는 화합물이나 글리코티오헥시드 α(Glycothiohexide α, J. Antibiotics 47: 894, 1994)와 같이 삼환식 대환상 구조를 갖는 화합물과 같은 환 구조가 상이한 화합물이 보고되어 있다. 티오실린 Ⅰ(Thiocillin Ⅰ), 티오실린 Ⅱ 및 마이크로콕신 P2(Micrococcin P2)는 공통의 단환식 대환상 구조를 갖는 화합물로서 이들의 그램 양성 세균에 대한 항균 활성이 보고되어 있다 (J. Antibiotics 29: 366-374, 1976; J. Chem. Soc., Chem. Co㎜un. 1978(6), 256-8; 국제 공개 WO97/48408호 공보). 그러나, 해당 화합물의 MRSA나 VRE 등의 다제 내성균에 대한 항균 활성에 관해서는현재까지 보고되어 있지 않다.

티오펩타이드 화합물 중에서, 글리코티오헥시드 α(J. Antibiotics 47: 894, 1994), 아미티아마이신 A(Amythiamicin A, J. Antibiotics 47: 668, 1994; 동 47: 1153, 1994), 술포마이신(Sulfomycin, J. Nat. Prod., 62: 1562, 1999) 및 프로모인두신(Promoinducin, Biosci. Biotechnol. Biochem. 59: 876, 1995)의 항MRSA 또는 항VRE 활성이 보고되어 있다. 글리코티오헥시드 α는 삼환식 대환상 구조를 갖는 화합물이다. 또한, 아미티아마이신 A, 술포마이신 및 프로모인두신은 단환식 대환상 구조를 갖지만, 환을 구성하는 아미노산이 상기 티오실린 등과는 상이하고, 환의 원수도 티오실린보다 많은 환상 화합물이다.

본 발명은 티오펩타이드 화합물을 유효 성분으로 하는 MRSA 및 VRE 등의 다제(多劑) 내성균 감염증 치료제에 관한 것이다. 또한, 신규인 티오펩타이드 화합물 QN3323류 및 그의 제조 방법, 및 이들을 유효 성분으로 함유한 의약에 관한 것이다.

도 1은 QN3323-Y1의 DMSO-d₆중에서의¹H NMR도이고, 도 2는 QN3323-Y1의 DMSO-d₆중에서의¹³C NMR도이다.

<산업상의 이용가능성>

본 발명의 화합물(I)은 MRSA 및 VRE 등의 다제 내성균에 대한 항균 활성을 갖기 때문에 다제 내성균 감염증 치료제, 특히 MRSA 또는 VRE 감염증 치료제로서 유용하다. 또한, 신규 화합물인 본 발명의 화합물(I')는 의약제제의 활성 성분으로서 유용하고, 특히 항균 활성을 갖기 때문에 항균제로서 유용하다.

본 발명의 화합물 또는 이 염의 1종 또는 2종 이상을 유효 성분으로 함유하는 제제는 통상적으로 제제화에 사용되는 담체나 부형제, 그 밖의 첨가제를 사용하여 제조된다.

투여는 정제, 환제, 캡슐제, 과립제, 산제, 액제 등에 의한 경구 투여, 또는 정맥 주사, 근육 주사 등의 주사제, 좌약제, 경피제, 경비제 또는 흡입제 등에 의한 비경구 투여 중 어느 하나의 형태일 수 있다.

본 발명에 의한 경구 투여를 위한 고체 조성물로는 정제, 산제, 과립제 등이 사용된다. 이러한 고체 조성물에서는 하나 또는 그 이상의 활성 물질이 하나 이상의 불활성인 부형제, 예를 들면 락토스, 만니톨, 포도당, 히드록시프로필셀룰로오스, 미결정 셀룰로오스, 전분, 폴리비닐피롤리돈, 메타규산알루미늄산마그네슘 등과 혼합된다. 조성물은 통상법에 따라서 불활성인 첨가제, 예를 들면 스테아르산마그네슘 등의 활택제나 카르복시메틸전분나트륨 등의 붕괴제, 용해 보조제를 함유할 수도 있다. 정제 또는 환제는 필요에 따라 당의 또는 위용성 또는 장용성 코팅제로 피막할 수도 있다.

경구 투여를 위한 액체 조성물은 약제적으로 허용되는 유제, 액제, 현탁제, 시럽제, 엘릭시르제 등을 포함하고, 일반적으로 사용되는 불활성인 용제, 예를 들면 정제수, 에탄올을 포함한다. 이 조성물은 불활성인 용제 이외에 가용화제, 습윤제, 현탁화제와 같은 보조제, 감미제, 교미제, 방향제, 방부제를 함유하고 있을 수도 있다.

비경구 투여를 위한 주사제로는 무균의 수성 또는 비수성의 액제, 현탁제, 유제를 포함한다. 수성인 용제로는 예를 들면 주사용 증류수 및 생리 식염수가 포함된다. 비수성인 용제로는 예를 들면, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브유와 같은 식물유, 에탄올과 같은 알코올류, 폴리소르베이트 80(상품명) 등이 있다. 이러한 조성물은 또한 등장화제, 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제, 용해 보조제를 포함할 수도 있다. 이들은 예를 들면 박테리아 보유 필터를 통과시키는 여과, 살균제의 배합 또는 조사에 의해서 무균화된다. 또한, 이들은 무균의 고체 조성물을 제조하여, 사용 전에 무균수 또는 무균의 주사용 용매에 용해, 현탁하여 사용할 수 있다.

투여량은 증상, 투여 대상의 연령, 성별 등을 고려하여 개개의 경우에 따라서 적절하게 결정되지만, 통상적으로 성인 1일당 경구 투여의 경우, O.1 내지 1OOO mg, 비경구 투여의 경우, 0.1 내지 500 mg 정도가 적당하고, 이것을 1일에 1회 내지 복수회 투여한다. 투여량은 여러가지 조건으로 변동한다.

<발명을 실시하기 위한 최량의 형태>

이하의 실시예에 기초하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 본 발명의 화합물은 하기 실시예에 한정되는 것이 아니다.

<실시예 1>

글루코스 10 g, 감자 전분 20 g, 폴리펩톤 5 g, 효모엑기스 5 g, 탄산칼슘 4 g, 증류수 1 L을 포함하는 배지(멸균 전 pH 7.0)을 100 ㎖씩 500 ㎖ 용기의 삼각 플라스크에 나누어 주입하고, 121 ℃에서 20분간 멸균했다. 베넷트 한천 배지에 양호하게 생육시킨 바실루스 에스피 QN03323주를 긁어서 접종하고, 28 ℃, 220 회전/분의 조건으로 3일간 진탕 배양하여 종배양액으로 했다. 이어서, 글루코스 5 g, 박트펩톤(Difco사 제조) 5 g, 효모 엑기스 2 g, 증류수 1 L을 포함하는 배지(멸균 전 pH 7.5)을 100 ㎖씩 500 ㎖ 용기의 삼각 플라스크 100 개에 나누어 주입하고, 121 ℃에서 20분간 멸균하였다. 이 배지에 상기 종배양액을 2 ㎖씩 접종하여, 28 ℃, 220 회전/분의 조건으로 3일간 진탕 배양했다.

이와 같이 하여 배양시킨 배양액 10 L을 pH 7.0으로 조정하여, 아세톤 40 L을 첨가했다. 이 추출액을 충분히 교반한 후, 여과하고, 감압하에 아세톤을 제거하였다. 아세트산에틸 12 L을 첨가하고, 충분히 교반한 후, 아세트산 에틸층을 감압하에 농축하여, 아세트산에틸을 충분히 제거했다. 잔류물을 세파덱스 LH-20(아마샴ㆍ파마시아ㆍ생물 공학사 제조, φ30×350 ㎜) 칼럼 크로마토그래피에 사용하고, n-헥산-디클로로메탄-메탄올(4:5:1)로 전개하여, 활성 분획을 얻었다. 활성분획을 실리카겔 박층 크로마토그래피(키젤겔 60F254, 20 ㎜×20 ㎜, 머크사 제조)에 사용하고, 클로로포름-메탄올(15:1)로 전개하여, 활성 분획을 얻었다. 활성 분획을 ODS 칼럼(φ 20×250 ㎜; 데베로실팩, 노무라 화학사 제조)에 사용하고, 70 ％ 메탄올 수용액을 용출 용매로서 유속 9.0 ㎖/분과 검출 파장 210 nm의 조건하에 활성 물질의 피크를 분취하고, 본 발명의 화합물 QN3323-A(5.0 mg) 및 QN3323-B(1.5 mg)을 단리했다. 또한, 공지된 화합물 티오실린 Ⅰ(11 mg) 및 티오실린 Ⅱ(5.3 mg)를 동일하게 하여 단리했다.

<실시예 2>

실시예 1과 동일한 방법에 의해 얻은 배양액 100 L을 원심 분리하고, 그 상청액을 다이아이온 HP-20(미츠비시 화학사 제조) 칼럼 크로마토그래피 (10 L)에 사용했다. 침전물은 80 ％ 아세톤 수용액(25 L)으로 추출하고, 감압하에 농축하여 아세톤을 제거한 후, 상기한 다이아이온 HP-20 칼럼 크로마토그래피에 사용했다. HP-20 칼럼을 물(30 L) 및 30 ％ 아세톤 수용액(30 L)으로 세정한 후, 90 ％ 아세톤 수용액(30 L)으로 용출하였다. 용출 분획을 감압하에 농축하고 아세톤을 증류 제거하였다. 농축액을 아세트산 에틸 10 L로 2회 추출하고, 아세트산에틸층을 감압하에 농축하여 건고한 후에 실리카겔(Kieselgel 60, 머크사 제조) 칼럼 크로마토그래피(φ 65 ㎜×130 ㎜)에 사용하고, 클로로포름-메탄올(9:1 및 5:1) 용액으로 용출했다. 활성 분획을 농축한 후, 중압 실리카겔(ULTRA PACK SI-40C, 야마젠사 제조, φ 37 ㎜× 300 ㎜) 칼럼 크로마토그래피에 사용하고, 클로로포름-메탄올 (20:1) 용액으로 용출하고, 활성 분획을 분취하고, QN3323-A (91.7 mg), QN3323-B(27.3 mg), QN3323-Y1(161 mg), 티오실린 Ⅰ(870 mg) 및 티오실린 Ⅱ(305.3 mg)을 얻었다.

또한, 중압 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 얻어진 활성 분획을 추가로 ODS HLPC(Develosil C30 UG-5, 노무라 화학사 제조, φ 20 ㎜×250 ㎜)에 사용하고, 50 ％ 아세토니트릴 수용액으로 용출하여, 활성 분획을 분취하고, 마이크로콕신 P2(4.1 mg)를 얻었다.

상기한 수법으로 추출, 정제, 및 단리된 화합물 중에서, 본 발명의 화합물 QN3323-A, QN3323-B 및 QN3323-Y1의 물성치를 하기 표 1 내지 3 및 도 1 내지 2에 나타낸다. 또한, 단리된 티오실린 Ⅰ, 티오실린 Ⅱ 및 마이크로콕신 P2에 대해서도 물성치를 측정하고, 공지된 화합물과 동일한 것을 확인하였다.

상기 표 1 내지 3 및 도 1 내지 2의 물리 화학적 성형 등으로부터 물질의 구조를 하기 화학식에 나타낸 바와 같이 결정했다.

QN3323-A 및 B는 C(36) 위치가 카르보닐로 되어 있는 점에서 티오실린 Ⅰ 및 Ⅱ와 구조가 상이하다. 또한, QN3323-Y1은 C(10)과 C(43) 사이의 이중 결합이 E형이 되어있는 점에서, 티오실린 Ⅰ와 구조가 상이하다.

<실시예 3>

항균 활성

상기 실시예 1에 의해 얻어진 본 발명의 화합물 QN3323-A, QN3323-B, QN3323-Y1, 티오실린 Ⅰ, 티오실린 Ⅱ 및 마이크로콕신 P2의 스타필로코쿠스 아우레우스 FDA209P(Staphylococcus aureus FDA209P: S. aureus), 스타필로코쿠스 에피데르미디스 ⅡD866(Staphylococcus epidermidis ⅡD866: S. epidermidis), 엔테로코쿠스 파에칼리스 ⅡD682(Enterococcus faecalis ⅡD682: E. faecalis) 및 엔테로코쿠스 파에시움 CAY09_1(Enterococcus faecium CAY09_1: E. faecium), 및 내성균인 스타필로코쿠스 아우레우스 CAY32001(MRSA)(Staphylococcus aureus CAY32001(MRSA): S. aureus(MRSA)) 및 엔테로코쿠스 파에시움 CAY09_2(VRE) (Enterococcus faecium CAY09_2(VRE): E. faecium(VRE))에 대한 최소 발육 저지 농도(MIC)를 일본화학요법학회 표준법에 준하여 측정하였다 [CHEMOTHERAPY 1981년 29(1): 76 최소 발육 저지 농도(MIC)측정법 재개정에 대해서)]. 단, 에스. 아우레우스 (MRSA)는 32 ℃에서 배양했다. 측정한 결과를 하기 표 4에 나타낸다.

<실시예 4>

마우스 감염 모델에 대한 치료 효과

본 발명의 화합물 QN3323-A, QN3323-B, 티오실린 Ⅰ 및 티오실린 Ⅱ의 마우스 감염 모델에 대한 치료 효과를 측정했다. 즉, 37 ℃에서 16 시간 배양한 스타필로코쿠스 아우레우스 스미스(Staphylococcus aureus Smith)주를 3 ％ 부타무틴 (도쿄 화성사) 용액에 현탁하여, 숫컷 ICR(CD-1) 4주령 마우스(닛본 챨스ㆍ리버사, SPF)의 복강내에 감염시켰다 (약 3×10⁶CFU/마우스). 이어서, 용해액(10 ％ DMSO, 10 ％ HCO-60(닛코 케미칼즈 가부시끼 가이샤), 80 ％ 생리적 식염수)에 용해시킨 본 발명의 화합물을 감염 2 시간 후에 피하에 투여하였다. 치료 후 4일 내지 7일째의 관찰 결과를 사용하여, 프로빗(probit)법에 의해 ED 50의 값을 산출했다. 측정 결과를 하기 표 5에 나타낸다.

이상으로부터 본 발명의 신규티오펩타이드 화합물 (Ⅰ')은 양호한 항균 활성을 가지며, 특히 MRSA 및 VRE 등의 다제 내성균에도 양호한 항균활성을 갖기 때문에 의약, 특히 항균제, 그 중에서도 다제 내성균 감염증의 예방ㆍ치료제로서 유용하다. 또한, 공지된 티오실린 Ⅰ, 티오실린 Ⅱ 및 마이크로콕신 P2도, MRSA 및 VRE 등에 양호한 항균 활성을 갖기 때문에 다제 내성균 감염증, 특히 MRSA 또는 VRE 감염증의 예방ㆍ치료제로서 유용하다.

본 발명자들은 천연에 존재하는 미생물이 생산하는 항생 물질의 탐색을 목적으로 예의 검토를 하였더니, 바실루스(Bacillus)속에 속하는 균주가 MRSA 및 VRE 등의 다제 내성균을 포함하는 균에 대한 항균 활성을 나타내는 화합물을 생산하는것을 발견하였다.

그리고, 해당 균주의 배양액을 상세히 검토하여 본 균주의 배양액으로부터 강한 항균 활성을 갖는 신규 티오펩타이드 화합물 QN3323-A, QN3323-B 및 QN3323-Y1 및 공지된 티오펩타이드 화합물인 티오실린 Ⅰ, 티오실린 Ⅱ 및 마이크로콕신 P2를 단리하는 것에 성공하고, 또한 이들 화합물이 항MRSA 활성 및 항VRE 활성을 갖는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은 하기 화학식 I로 표시되는 티오펩타이드 화합물, 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 다제 내성균 감염증 치료제, 특히 MRSA 또는 VRE 감염증 치료제에 관한 것이다.

식 중, A는 CH-OH 또는 C=O을, R은 H 또는 CH₃을, R'는 H 또는 OH를 각각 나타낸다.

또한, 본 발명은 이 바실루스속에 속하는 바실루스 에스피(Bacillus sp.)QN03323주(FERM BP-7864)를 배양하고, 이 배양액으로부터 상기 화학식 I로 표시되는 티오펩타이드 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 티오펩타이드 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 하기 화학식 I'로 표시되는 신규 티오펩타이드 화합물 또는그의 제약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.

식 중, A는 CH-OH 또는 C=O을, R은 H 또는 CH₃을, R^a및 R^b는 H 또는 CH₃을 각각 나타내되,

단, R^a가 H일 때 R^b는 CH₃을, R^a가 CH₃일 때 R^b는 H를 나타내고,

A가 CH-OH일 때, R^a는 H이고 R^b는 CH₃을 각각 나타낸다.

바람직하게는, 이하의 화합물이다:

(1) A가 C=O이고, R이 H이고, R^a가 CH₃이고, R^b가 H인 화합물(QN3323-A),

(2) A가 C=O이고, R이 CH₃이고, R^a가 CH₃이고, R^b가 H인 화합물(QN3323-B) 또는,

(3) A가 CH-OH이고, R이 H이고, R^a가 H이고, R^b가 CH₃인 화합물(QN3323-Y1).

또한, 본 발명은 바실루스속에 속하며, 상기 화학식 I'로 표시되는 티오펩타이드 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배양하고, 그의 배양액으로부터 상기 티오펩타이드 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 티오펩타이드 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 I'로 표시되는 티오펩타이드 화합물, 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 의약, 특히 항균제에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 티오펩타이드 화합물 Ⅰ는 바실루스(Bacillus)속에 속하는 이 화합물 생산균을 영양 배지로 하여 배양하고, 이 화합물이 축적된 배양물로부터 통상법에 의해서 얻어진다. 이 화합물의 제조 방법에서 사용되는 미생물은 바실루스속에 속하며, 해당 화합물의 생산능을 갖는 미생물이면 모두 사용할 수 있다. 이러한 미생물로는 예를 들면, 오키나와껭 야에야마군 다께도미쪼(이리오모떼시마)의 해안에서 채집된 미동정 해면으로부터 분리된 바실루스속에 속하는 그램 양성 세균QN03323주를 들 수 있다. 본 균주의 균학적 성형은 다음과 같다.

1) 형태적 성질

본 균주는 그램 양성의 건균으로서 운동성이 확인되었다. 세포의 크기는 1 내지 1.7×5 내지 8 ㎛이다. 세포 중에 1개의 타원형의 포자 형성이 확인되었다.

2) 배양적 성질

육즙 한천 배지 상에서 백색 콜로니를 형성한다. 콜로니는 원형으로 표면에 광택이 없고, 주변은 거칠다. 육즙 액체 정치 배양에서는 배지 전체가 혼탁하거나 균체가 침전하여, 배지 표면에 피막을 형성하지 않는다. 육즙 젤라틴 천자(穿刺) 배양에서는 젤라틴을 액화하였다. 리트머스 밀크에서의 배양에서는 펩톤화되어 중성이며 응고는 확인되지 않았다.

3) 생리학적 성질

QN03323주의 생리적 성질은 이하와 같다.

질산염의 환원: 양성; 탈질소 반응: 음성;

MR 테스트: 음성; VP 테스트:양성;

인돌의 생성: 음성; 황화수소의 생성: 음성;

전분의 가수분해: 양성; 시트르산의 이용: 음성;

질산염의 이용: 음성; 암모늄염의 이용: 음성;

수용성 형광색소의 생성:음성;우레아제:양성;

옥시다아제: 양성; 카탈라아제:음성;

생육 온도 범위: 10 내지 45 ℃ ; 최적 생육 온도: 28 내지 40 ℃;

생육 pH 범위: pH 5 내지 9; 최적 생육 pH: pH 6 내지 8;

혐기 조건에서의 생육: 양성; 아르기닌 분해 반응: 양성;

3 ％ NaCl 첨가 육즙 배지에서의 생육: 양성;

6 ％ NaCl 첨가 육즙 배지에서의 생육: 양성

(당에서 산을 생산)

L-아라비노스:음성; D-갈락토스: 음성;

D-크실로스: 음성: 말토스:양성;

D-글루코스: 양성; 트레할로스: 양성;

D-만노스:양성; 락토스: 음성:

D-프럭토스: 양성; D-소르비톨: 음성;

슈크로스: 양성; 글리세린: 양성:

이노시톨: 음성; 전분:양성;

D-만니톨: 음성

이상의 미생물학적 성질을 통합하면 본 균주는 그램 양성 통성 혐기성 건균으로 운동성을 갖는다. 생육 온도 범위는 10 내지 45 ℃이고, 질산염의 환원, 전분의 가수분해, 우레아제, 옥시다아제 시험, 젤라틴의 액화 반응, 아르기닌 분해 반응이 양성이고, D-글루코스, D-만노스, D-프럭토스, 슈크로스, 말토스, 트레할로스, 글리세린, 전분에서 산을 생산한다. 한편, 탈질소 반응, 인돌의 생성, 황화수소의 생성, 시트르산의 이용성, 무기 질소원의 이용성, 카탈라아제 시험 결과는 음성이다.

상기 성질에 기초하여, 문헌[Bergey's Manual of Systematic Bacterilogy, 1989) 및 그 밖의 문헌에 의해서 검색한 결과, 본 균주는 바실루스속에 속하는 세균이라고 판단하고, 바실루스 에스피(Bacillus sp.) QN03323이라고 명명했다.

또한, 본 균주는 바실루스 에스피 QN03323으로서 내셔날 인스티튜트 오브 어드밴스드 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지(일본국 이바라기현 쯔꾸바시 히가시 1-1-1 중앙 제6(우편번호 305-8566))에 수탁번호 FERM BP-7864호(기탁일 2001년 2월 14일)로서 국제 기탁되어 있다. 또한, 미생물은 인공적으로 또는 자연적으로 이변을 일으키기 쉽기 때문에, 본 발명에서 사용되는 바실루스 에스피 QN03323주는 천연으로부터 분리된 미생물 외에, 자외선, 방사선, 화학약제 등으로 인공적으로 이변시킨 것 및 이들의 천연 이변주에 대해서도 포함한다.

(생산 방법)

본 발명의 화합물은 바실루스속에 속하며, 본 발명의 화합물의 생산능을 갖는 미생물을 배양함으로써 얻어진다. 배양은 일반 미생물의 배양 방법에 준하여 행해진다.

배양에 사용되는 배지로는 본 발명 화합물 생산능을 갖는 미생물(예를 들면, 바실루스 에스피 QN03323주)이 이용하는 영양원을 함유하는 배지일 수 있고, 합성배지, 반합성 배지 또는 천연 배지가 사용된다. 배지의 조성은 예를 들면 탄소원으로는 L-아라비노스, D-크실로스, D-글루코스, D-프럭토스, 슈크로스, 이노시톨, L-람노스, 라피노스, D-만니톨, 만노스, 멜리비오스, 락토스, D-갈락토스, 말토스, 트레할로스, 살리신, 크산틴, 키틴, 전분, 포도당, 덱스트린, 글리세린, 식물유 등을, 질소원으로는 육즙, 펩톤, 글루텐밀, 면실박, 대두분, 낙화생분, 어분, 콘스티블리카, 건조 효모, 효모 엑기스, 염화암모늄, 황산암모늄, 질산암모늄, 요산 그 밖의 유기, 무기의 질소원이 사용된다. 또한, 금속염으로는 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 아연, 철, 코발트 등의 황산염, 질산염, 탄산염, 인산염 등이 필요에 따라서 첨가된다.

또한, 필요에 따라서 메티오닌, 시스테인, 시스틴, 티오황산염, 올레산메틸, 라드유, 실리콘유, 계면활성제 등의 생성 촉진 물질 또는 소포제를 첨가할 수 있다.

배양 조건으로는 호기적 조건하에서 배양하는 것이 일반적으로 유리하고, 배양 온도의 범위는 10 내지 45 ℃이고, 바람직하게는 25 내지 30 ℃ 부근에서 행해진다. 배지의 pH는 약 5 내지 9, 바람직하게는 약 6 내지 8의 범위로 조정하면 바람직한 결과를 얻을 수 있다. 배양 기간은 배지의 조성, 온도 조건에 따라서 적절하게 설정되지만, 통상적으로 1일 내지 20일 정도, 바람직하게는 2일 내지 5일 정도이다.

배양물에 의해 본 발명 화합물을 단리 정제하기 위해서는 통상적인 미생물의 배양물로부터 생리 활성 물질을 단리 정제하는 방법이 적용된다. 배양물로부터 적당한 유기 용매로 추출하여, 그 추출물로부터 유효 물질을 단리 정제한다. 즉, 항균 활성을 지표로서 적당한 용제에 대한 용해성 및 용해도의 차이 등을 이용하는 일반적인 생리 활성 물질의 제조에 사용되는 수단에 의해서 분리, 정제된다. 이러한 방법은 필요에 따라서 단독으로 사용되고, 또는 임의의 순서로 조합하여 반복적으로 적용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 산부가염을 형성하는 경우가 있고, 이들 염으로는 제약학적으로 허용되는 염이고, 구체적으로는, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 무기산, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 마이렌산, 락트산, 말산, 주석산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 아스파라긴산, 글루타민산 등의 유기산의 산부가염을 들 수 있다. 본 발명의 화합물의 염은 분리, 정제에 의해 얻어진 본 발명의 화합물을, 또는 배양물로부터의 분리, 정제의 도중 단계에서 통상적인 조염 처리를 행함으로써 얻어진다.

본 발명의 티오펩타이드 화합물 (I) 또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염은 부제(chiral) 탄소 원자 및 이중 결합을 갖기 때문에 이들에 기초한 광학 이성체나 기하이성체 등이 존재한다. 본 발명의 화합물은 이러한 이성체의 혼합물 또는 단리된 것을 포함한다. 또한, 본 발명은 티오펩타이드 화합물 (I) 또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염의 각종 수화물이나 용매화물 및 이러한 결정 및 그 결정다형인 물질까지 포함된다. 또한, 본 발명의 화합물에는 약리학적으로 허용되는 프로드러그도 포함된다. 약리학적으로 허용되는 프로드러그라 함은 가용매 분해에 의해 또는 생리학적 조건하에서 본 발명의 OH 등으로 변환할 수 있는 기를 갖는 화합물이다. 프로드러그를 형성하는 기로는 문헌[Prog. Med., 5, 2157-2161 (1985)] 및 ["의약품의 개발"(히로가와 서점, 1990년) 제7권 분자 설계 163-198]에 기재된 기를 들 수 있다.

Claims

하기 화학식 I로 표시되는 티오펩타이드 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 다제(多劑) 내성균 감염증 치료제.

<화학식 I>

식 중, A는 CH-OH 또는 C=O을, R은 H 또는 CH₃을, R'는 H 또는 OH를 각각 나타낸다.
제1항에 있어서, 메티실린 내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA) 또는 반코마이신 내성 엔테로코쿠스 파에칼리스속(VRE) 감염증을 치료하기 위한 것인 치료제.
바실루스 에스피(Bacillus sp.) QN03323주(FERM BP-7864)를 배양하고, 그의 배양물로부터 제1항에 기재된 화학식 I로 표시되는 티오펩타이드 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 화학식 I의 티오펩타이드 화합물의 제조 방법.
하기 화학식 I'로 표시되는 티오펩타이드 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.

<화학식 I'>

식 중, A는 CH-OH 또는 C=O을, R은 H 또는 CH₃을, R^a및 R^b는 H 또는 CH₃을 각각 나타내되,

단, R^a가 H일 때 R^b는 CH₃을, R^a가 CH₃일 때 R^b는 H를 나타내고,

A가 CH-OH일 때, R^a는 H이고 R^b는 CH₃을 각각 나타낸다.
제4항에 있어서, A가 C=O이고, R이 H이고, R^a가 CH₃이고, R^b가 H인 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
제4항에 있어서, A가 C=O이고, R이 CH₃이고, R^a가 CH₃이고, R^b가 H인 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
제4항에 있어서, A가 CH-OH이고, R이 H이고, R^a가 H이고, R^b가 CH₃인 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염.
바실루스(Bacillus)속에 속하며, 제4항에 기재된 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배양하고, 그 배양물로부터 제4항에 기재된 화합물을 채취하는 것을 특징으로 하는 제4항에 기재된 화합물의 제조 방법.
제4항에 기재된 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 의약.
제9항에 있어서, 항균제인 의약.