[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

KR102729675B1 - 새로운 아연 복합체, 이의 제조 및 용도 - Google Patents

새로운 아연 복합체, 이의 제조 및 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102729675B1
KR102729675B1 KR1020217008124A KR20217008124A KR102729675B1 KR 102729675 B1 KR102729675 B1 KR 102729675B1 KR 1020217008124 A KR1020217008124 A KR 1020217008124A KR 20217008124 A KR20217008124 A KR 20217008124A KR 102729675 B1 KR102729675 B1 KR 102729675B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
glutamylhistamine
gamma
complex
zinc
compound
Prior art date
Application number
KR1020217008124A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20210046047A (ko
Inventor
블라디미르 예브게니예비치 네볼신
Original Assignee
오브쉐스트보 에스 오그라니첸노이 오트베트스트벤노스티주 “제트 테라퓨틱스”
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2018130491A external-priority patent/RU2697580C1/ru
Application filed by 오브쉐스트보 에스 오그라니첸노이 오트베트스트벤노스티주 “제트 테라퓨틱스” filed Critical 오브쉐스트보 에스 오그라니첸노이 오트베트스트벤노스티주 “제트 테라퓨틱스”
Publication of KR20210046047A publication Critical patent/KR20210046047A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102729675B1 publication Critical patent/KR102729675B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F3/00—Compounds containing elements of Groups 2 or 12 of the Periodic Table
    • C07F3/06—Zinc compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/315—Zinc compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders

Abstract

본 발명은 1/1의 금속/리간드 비율을 갖는 새로운 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 하기 식의 화합물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 복합체는 상피 조직의 장벽 기능을 회복하고 면역 세포의 비정상적 활성을 억제하는 것을 돕는다. 본 발명은 또한 상기 아연 복합체의 복합체 제조 방법 및 아토피성 피부염 및 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 비정상적 염증성 반응의 발생과 관련된 다른 질환의 치료를 위한 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 글루타미닐 시클라아제를 억제하기 위한 제조된 복합체의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

새로운 아연 복합체, 이의 제조 및 용도
본 발명은 새로운 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체에 관한 것으로, 이는 상피 조직의 장벽 기능을 회복시키고 면역 세포의 비정상적 활성을 억제한다. 본 발명은 또한 아토피성 피부염 및 손상된 상피 조직의 장벽 기능 및 비정상적 염증성 반응의 발생과 관련된 다른 질환을 위한 명시된 아연 복합체의 제조 및 용도에 관한 것이다.
상피 장벽은 인간 및 동물 유기체에서 중요한 역할을 한다. 상피 장벽은 다양한 물질, 알레르겐, 및 세균이 신체의 내부 환경으로 침투하는 것을 방지한다. 상피 조직의 장벽 기능의 손상은 구강의 염증성 질환(구내염, 치은염, 인두염 등), 위장관의 질환(대장염, 장염, 장의 자가중독, 과민성 대장 증후군, 흡수장애 증후군, 재발성 설사 등), 알레르기성 질환(알레르기성 비염, 기관지 천식, 아토피성 피부염 등)과 같은 여러 질환의 발병기전에 크게 기여한다 [Recent Pat Antiinfect Drug Discov. 2015; 10 (2): 84-97; Current Pediatrics. 2013; 12 (2): 12-19; Bulletin of Siberian Medicine. 2017; 16 (2) 32-46]. 염증성 및 알레르기성 질환의 발생에서 상피 조직의 장벽 기능의 핵심 역할을 고려할 때, 상피 조직의 장벽 기능을 복원하는 것을 목표로 하는 전략은 인간의 많은 병리학적 상태에 대한 치료를 위해 제일 중요하다. 특히, 국소적 치료는 손상된 상피를 회복하고, 피부의 장벽 기능을 개선하고, 피부에 수분을 공급할 뿐만 아니라, 2차 감염을 예방 및 제거하는 것을 목표로 하는, 아토피성 피부염의 치료에서 가장 중요하다 [Pediatrics. 2014 Dec; 134 (6): e1735-44].
아연은 피부의 장벽 기능을 유지하는 핵심 미량 원소 중 하나이며, 따라서 그의 항-염증, 항산화 및 항균 특성으로 인해 피부과학에서 가장 많이 사용되는 미량 원소 중 하나이다 [FEMS Microbiol Lett. 2008 Feb; 279 (1): 71-76]. 아연은 상피 재형성을 제어하는 매트릭스 메탈로프로테이나아제의 필수 구성요소이며 상피 세포 성장, 상처 치유 및 피부 장벽 기능의 유지에서 핵심적인 역할을 한다 [Front Biosci (Landmark Ed). 2017 Mar 1; 22: 1469-1492]. 최근 연구에 따르면 아토피성 피부염 증상의 심각성은 환자의 적혈구 내 아연 농도와 음의 상관관계가 있는 것으로 나타났다 [Postepy Dermatol Alergol. 2016 Oct; 33 (5): 349-352]. 또한, 아연 화합물의 사용은 전임상 및 임상 연구에서 아토피성 피부염 증상의 심각성을 감소시킨다 [Biol Trace Elem Res. 2017 Sep; 179 (1): 110-116; Clin Cosmet Investig Dermatol. 2013 May 6; 6: 115-21; Acta Derm Venereol. 2014 Sep; 94 (5): 558-62]. 아토피성 피부염의 동물 모델에 아연 화합물을 사용한 결과 상피 조직의 두께가 회복되고 피부의 국소적 염증의 심각성이 감소하는 것으로 나타났다 [Dermatol Ther. 2018 Jul 17: e12659].
많은 경우에 상피 조직의 장벽 기능의 손상은 비정상적 염증 반응의 발생과 관련되어 있으며, 이는 결국, 추가의 세포 파괴 및 상피의 장벽 기능의 저하를 유도함에 유의해야 한다. 예를 들어, 아토피성 피부염 환자의 경우, 피부의 장벽 기능의 손상은 황색포도상구균(S. Aureus)을 포함하는 기회감염성 세균에 의한 그의 군체형성을 초래할 수 있다 [Br J Dermatol. 1998 Dec; 139 Suppl 53: 13-6]. 기회감염성 미생물로 피부가 세균에 오염되면 과도한 염증성 반응의 발생 및 전-염증성 사이토카인을 생성하는 면역 세포(주로 림프구, 호산구, 수지상 및 비만 세포)의 비정상적 주화성이 초래된다. 면역 세포에 의해 분비되는 전-염증성 사이토카인 및 활성 산소 종은 자가-지속성 긍정적 피드백 역할을 하는 피부 장벽 기능의 추가적인 저하를 유도함으로써 질환이 만성 단계로 반드시 진행되도록 한다 [J. Clin. Diagn. Res. 2013 Dec; 7 (12): 2683-2685]. 따라서, 면역 세포의 주화성을 억제하여 면역 세포의 비정상적 활성을 억제하는 것은 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 인간 및 동물의 다른 질환의 치료에서 핵심이 될 수 있다.
CCL 계열(CCL2, CCL7, CCL8, CCL13)의 케모카인은 포유동물류에서 단핵구, 대식세포, 호산구, T-림프구 및 수지상 세포의 주화성에 강력한 인자이다 [Biochem. J. 2012 Mar 1; 442 (2): 403-12; Postepy Dermatol. Alergol. 2014 May; 31 (2): 84-91]. CCL 계열(CCL2, CCL7, CCL8, CCL13), 프랙탈카인, 뿐만 아니라 다른 여러 호르몬 및 분비 단백질의 일원은 피로글루탐산(pE) 잔기를 함유하고, 그의 역할은 아미노펩티다아제에 의한 분해로부터 보호하는 것이다 [Chem Immunol. 1999; 72: 42-56; Biochemistry. 1999 Oct 5; 38 (40): 13013-25]. N-말단 잔기의 피로글루타민화는 효소 글루타미닐 시클라아제(QPCT 또는 QC)에 의해 촉매작용된다 [J Biol Chem. 2003 Dec 12; 278 (50): 49773-9; J Mol Biol. 2008 Jun 20; 379 (5): 966-80]. 실험 연구 과정에서, 글루타미닐 시클라아제 억제는 비-피로글루타민화 형태의 케모카인 CCL2, CCL7, CCL8 및 CCL13의 화학유인물질(chemoattractant) 활성을 급격히 감소시키는 것으로 나타났다 [Biochem. J. (2012) 442, 403-412) and fractalkine (Biosci Rep. 2017 Aug 23; 37 (4)]. 따라서, CCL 계열의 케모카인의 피로글루타민화는 면역 세포의 CCL-매개 주화성에 필요한 단계이므로, 글루타미닐 시클라아제의 억제를 목표로 하는 전략은 비정상적 염증성 반응을 조절하고 면역 세포의 활성을 감소시킬 수 있는 전략을 나타낼 수 있다.
현재까지, 글루타미닐 시클라아제 억제제의 아연 복합체, 뿐만 아니라 그의 제조 및 치료적 용도는 서술되지 않았다. 동시에, 황지질 [WO 2017/046256, publ. 03/23/2017, HOCHSCHULE ANHALT, DE], 플라보노이드 유도체 [Bioorg Med Chem. 2016 May 15; 24 (10): 2280-6], 피리딘 유도체 [US 2015/0291632, publ. 15.10.2015, Dow AgroSciences LLC, US] 및 최근에 서술된 몇몇 소분자 [J. Med. Chem. 2017 Mar 23; 60 (6): 2573-2590; WO 2014/193974, US 2015/0291557]를 포함하여, 글루타미닐 시클라아제 억제제가 알려져 있다. 또한, 글루타미닐 시클라아제 억제제는 프로바이오드러그 주식회사 회사의 간행물에 서술되어 있다 [J. Biol. Chem. 2003 Dec 12; 278 (50): 49773-9]. 이들 기사는 이미다졸 유도체를 기반으로 한 글루타미닐 시클라아제 억제제를 서술한다. 그러나, 프로바이오드러그 주식회사의 간행물은 우선 글루타미닐 시클라아제 억제제의 아연 복합체는 포함하지 않고, 프로바이오드러그 주식회사 회사에서 공개한 화합물의 구조는 질소 원자 중 하나에 위치한 지방족 치환체를 함유하는 이미다졸을 포함한다. 지방족 치환체의 도입은 화합물의 대사적 안정성을 감소시킨다. 또한, 지방족 치환체의 존재는 화합물의 소수성을 증가시키고 화합물의 전신성 생체이용률을 증가시키며, 이는 아토피성 피부염 및 상피 조직의 손상된 장벽 기능과 관련된 다른 질환의 치료에 명백히 불필요하다.
현재까지 아토피성 피부염 또는 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및/또는 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 치료에 사용될 수 있는 글루타미닐 시클라아제 억제제의 아연 복합체를 기반으로 하는 어떠한 약물도 알려져 있지 않고, 따라서, 글루타미닐 시클라아제 억제제의 아연 복합체를 기반으로 하는 새로운 효과적인 약물의 개발 및 치료적 용도에 대해 충족되지 않은 욕구가 여전히 남아 있다.
본 발명의 목적은 상피 조직의 장벽 기능을 회복하는 데에 효과적이고 아토피성 피부염 또는 상피의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 치료에서 글루타미닐 시클라아제 효소를 억제할 수 있는 새로운 효과적인 화학적 화합물을 개발하는 것이다.
본 발명의 목적은 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 질환, 특히 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 다른 질환의 치료에 효과적인 새로운 약물을 개발하는 것이다.
본 발명의 기술적 결과는 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및/또는 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 치료에 효과적인 새로운 화학적 화합물을 제공하는 것이다.
명시된 기술적 결과는 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 화합물(금속:리간드 비율 = 1:1)을 제공함으로써 달성된다.
이 설명에 상세히 서술되는, 수행된 연구를 기반으로, 출원인은 생성된 복합체의 구조가 다음 구조식으로 서술될 수 있음을 제안한다.
명시된 아연 복합체(화합물 1) 또는 이의 수화물, 용매화물, 또는 약학적으로 허용가능한 염은, 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 치료에 효과적이다.
본 발명의 또 다른 기술적 결과는 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 상기 제조된 감마-L-글루타밀히스타민(화합물 1)의 아연 복합체 또는 이의 수화물/용매화물의 용도이다.
본 발명의 또 다른 기술적 결과는 면역 세포의 비정상적 활성, 특히 면역 세포의 비정상적 주화성과 관련된 장애의 예방 및/또는 치료를 위한 약학적 조성물의 제조에서의 새로운 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체 또는 이의 수화물, 용매화물, 또는 약학적으로 허용가능한 염의 용도이다.
또한, 본 발명은 유효량의 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 작용제/부형제를 함유하는, 아토피성 피부염 뿐만 아니라 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환을 예방 및/또는 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제이다.
본 발명은 또한 아토피성 피부염, 뿐만 아니라 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 유기체에서 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본 발명 실시양태의 특정 경우에, 대상체는 인간 또는 동물이다.
감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체는 선행 기술에서 서술되지 않았지만, 감마-L-글루타밀히스타민의 유사펩티드가 알려져 있으며, 랫트 및 연체동물 신경 조직에서 미량으로 먼저 단리되었다 [J. Neurochem. -1976. -vol. 27. -pp. 1461-1463; J. Neurochemistry. -1977. -vol. 29. -pp. 633-638.]. 감마-L-글루타밀히스타민의 생성은 특허 RU2141968, publ. (1999년 11월 27일)에 서술되어 있다. 감마-L-글루타밀히스타민을 기반으로 한 크림의 용도는 특허 RU 2233152, publ. (2004년 7월 27일)에 서술되어 있다.
도 1. 감마-L-글루타밀히스타민 유사펩티드(리간드) 샘플의 IR 스펙트럼.
도 2. 실시예 1에 따른 염화 아연 및 감마-L-글루타밀히스타민의 용액을 혼합함으로써 제조되는 생성물 샘플의 IR 스펙트럼.
도 3. 실시예 2에 따른 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 샘플의 IR 스펙트럼.
도 4. 실시예 3, 합성 "A"와 관련된 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 샘플의 IR 스펙트럼.
도 5. 실시예 3, 합성 "B"와 관련된 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 샘플의 IR 스펙트럼.
도 6. 실시예 2에 따른 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체를 함유하는 1H 샘플의 핵자기 공명 스펙트럼.
도 7. 조직학적 분석 데이터에 따라 아토피성 피부염의 마우스 모델에서 피부 병변에 적용된 화합물 1(0.01%)을 함유하는 크림의 약리학적 작용.
도 8. 감염된 마우스 귀의 피부의 조직학적 구획(아토피성 피부염의 동물 모델).
위에서 언급한 바와 같이, 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체는 선행 기술에 서술되지 않았지만, 유사펩티드 감마-L-글루타밀히스타민은 랫트 및 연체동물 신경 조직에서 미량으로 먼저 단리된 물질로서 알려져 있다 [J. Neurochem. -1976. -vol. 27.-pp. 1461-1463; J. Neurochemistry. -1977. -vol. 29. -pp. 633-638]. 감마-L-글루타밀히스타민의 제조는 또한 특허 RU 2141968에 개시되어 있다. 이들 연구는 아라키돈산의 대사를 조절할 수 있고, 진성 당뇨병, 비만, 관상 동맥 질환, 스트레스 상태, 간염, 간경변, 독성 간 손상, 알코올중독, 방사선 손상, 및 노인학적 변화의 징후를 예방할 수 있는, 항산화, 항라디칼, 지질-조절, 저혈당, 항-천식, 항바이러스, 항균, 항-종양, 항-염증, 항전이, 강장 작용이 있는 유사펩티드인, 감마-L-글루타밀히스타민을 서술한다.
동시에, 이들 연구는 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체에 대한 어떠한 데이터, 이의 제조 방법 또는 이들의 생물학적 활성에 대한 연구 데이터도 제공하지 않는다. 동시에, 이들 조건에서는 아연 염 및 유리 감마-L-글루타밀히스타민의 혼합물이 형성되기 때문에, 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체는 아연 염 및 감마-L-글루타밀히스타민의 단순한 혼합에 의해 수득될 수 없음에 유의해야 한다.
본 발명에 대해 연구하면서, 저자/출원인은 1/1의 금속/리간드 비율을 갖는 감마-L-글루타밀히스타민의 안정한 아연 복합체를 생성하는 방법을 개발하였다.
(화합물 1).
출원인에 의해 제조된 감마-L-글루타밀히스타민 아연 복합체(화합물 1)의 특정 약리학적 활성에 초점을 맞춘 연구 과정에서, 아토피성 피부염 모델에서, 화합물 1은 감마-L-글루타밀히스타민의 유리 리간드에 비해 상당히 더 높은 치료적 활성을 입증하는 것으로 나타났다. 피부에 화합물 I(0.01% wt 크림)을 투여하면 염증 세포(단핵구, 수지상 세포, 호산구 및 호중구)가 피부의 표피 및 진피로 유입되는 것을 온전한 동물의 수준으로 감소시킬 뿐만 아니라, 아토피성 피부염의 다른 미세한 징후를 감소시킨다. 따라서, 화합물 1은 면역 세포의 주화성에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 면역 세포의 유입을 감소시키는 것은 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 여러 질환의 치료에 사용될 수 있다.
출원인에 의해 수행된 조사 연구는 화합물 1의 관찰된 치료적 효과가 글루타미닐 시클라아제의 활성을 억제하는 이 화합물의 능력과 관련이 있음을 보여주었다.
따라서, 화합물 1(금속/리간드 비율 1/1을 갖는 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체)은 아토피성 피부염 및 손상된 상피 조직의 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 다른 질환의 치료에 유용한 새로운 화학적 화합물이다.
용어 및 정의
용어 "화합물 I"은 1:1의 금속:리간드 비율을 갖는 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체를 지칭한다.
구체적으로, 이 복합체는 다음의 구조식으로 표시되거나:
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.
온도와 관련하여 사용될 때 용어 "C"는 백분도(centigrade) 또는 섭씨(Celsius) 온도 규모를 의미한다.
용어 "IC 50 "은 효소의 절반-최대(half-maximal) 억제를 초래하는 시험 화합물 농도를 나타낸다.
용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 용매, 예를 들어, 에탄올 중 하나 이상의 분자를 함유하는 분자 복합체를 서술하기 위해 사용된다. 용어 "수화물"은 명시된 용매가 물일 때 사용된다.
이 문헌에서 면역 세포의 "비정상적 활성"이라는 용어는 병리가 없는 대상체 내 면역 세포 활성의 기준선 수준과 상당히 다른 활성을 지칭한다. 비정상적 활성은 면역 세포의 장기 또는 조직으로의 과도한 유입, 면역 세포의 활성화로 이어지는 과정의 중단, 면역 세포 사멸과 관련된 과정의 조절완화(deregulation), 뿐만 아니라 다른 요인에 의해 야기될 수 있다.
용어 "부형제"는 의약품의 조성물에 포함되거나 또는 의약품의 제조 방법, 제조에 사용되어 필요한 물리화학적 특성을 부여하는, 무기 또는 유기 기원의 임의의 약학적으로 허용가능한 물질을 의미한다.
용어 "글루타미닐 시클라아제"는 다양한 펩티드 기질에서 N-말단 글루타민의 피로글루타민으로의 전환에 관여하는 아미노아실트랜스퍼라아제 효소를 지칭한다. N-말단 피로글루타메이트의 형성은 생물학적으로 활성의 펩티드, 호르몬, 및 케모카인(예를 들어, 갑상선자극호르몬-분비 호르몬, β-케모카인 리간드-2)이 엑소펩티다아제에 의해 분해되는 것으로부터 보호하고 어떤 경우에는 이들의 수용체에 대한 리간드의 친화성을 증가시킬 수 있다.
용어 "주화성(chemotaxis)"은 화학적 자극에 반응하여 세포의 지시된 움직임을 지칭한다. 주화성은 주화성 매개체의 농도 구배에 반응하는 세포의 능력을 기초로 한다. 주화성은 면역 세포가 혈관 층(bed)을 떠나 손상된 조직으로 이동하는 과정이다. 주화성에서 주된 역할은 주화성 물질, 또는 화학유인물질에 의해 수행된다. CCL2 케모카인은 단핵구 및 대식세포에 대한 가장 강력한 화학유인물질 중 하나이다.
용어 "치료", "치료법" "치료하는"은 포유동물류, 바람직하게는 인간에서, 병리학적 상태를 치료하는 것을 포함하고, a) 개선하는 것, b) 질환의 진행을 중단시키는 것(종결시키는 것), c) 질환의 중증도를 완화시키는 것, 즉 질환의 퇴행의 개시, d) 용어가 적용되는 질환 또는 상태, 또는 상기 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상의 반전을 포함한다.
용어 "예방요법(prophylaxis)" 또는 "예방"은 질환의 임상적 단계의 발생의 가능성을 감소시키는 것을 목표로 하는, 포유동물류, 바람직하게는 인간에서, 위험 인자의 제거, 뿐만 아니라 질환의 준임상 단계의 예방적 치료를 포함한다. 예방적 치료법을 위한 대상체는 일반 인구에 비해 임상적 질환의 증가된 위험과 관련이 있는 것으로 알려진 요인을 기준으로 선택된다. 예방 치료법은 a) 1차 예방 및 b) 2차 예방을 포함한다. 1차 예방은 질환의 임상적 단계에 아직 도달하지 않은 환자를 위한 예방적 치료/예방적 조치를 지칭한다. 2차 예방은 질환의 동일하거나 유사한 임상적 상태의 재발을 방지하는 것이다.
본 발명의 대상인, 화합물 I은, 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성과 관련된 질환의 치료, 특히, 면역 세포의 비정상적 주화성과 관련된 질환의 치료, 바람직하게는 아토피성 피부염의 치료법에 있어서 가능성을 보여준다. 일부 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 상피 조직의 손상된 장벽 기능 및 면역 세포의 비정상적 활성에 의해 야기되는 다른 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.
화합물의 치료적 사용 방법
본 발명의 대상은 또한 적절한 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 치료적으로 유효량은 환자가 치료(예방요법)에 대해 원하는 반응을 나타낼 가능성이 가장 높은 방식으로 환자에게 투여되거나 전달되는 화합물의 양이다. 필요한 정확한 양은 대상체의 연령, 체중 및 일반적인 상태, 질환의 중증도, 약물 투여의 방법, 다른 약물과 병용되는지 여부 등에 따라 대상체마다 다를 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 질환을 치료 또는 예방하는 데 효과적인 임의의 양으로 및 임의의 투여 경로로 필요한 대상체에게 투여될 수 있다(국소적 투여의 경로가 바람직하다).
상기 화합물을 특정 적합한 약학적으로 허용가능한 담체와 원하는 용량으로 혼합한 후, 본 발명의 조성물은 인간 또는 다른 동물 등에 국소적으로 투여될 수 있다.
투여는 하루에, 일주일에 (또는 임의의 다른 시간 간격으로) 한 번 또는 여러 번, 또는 때때로 필요에 따라, 수행될 수 있다. 또한, 화합물은 명시된 일수(예를 들어, 2-10일) 동안 매일 대상체에게 투여될 수 있으며, 이어서 약제가 투여되지 않는 간격(예를 들어, 1-30일)이 이어질 수 있다.
본 발명의 화합물이 병용 치료 요법의 일부로서 사용되는 경우, 각각의 병용 치료법 성분의 복용량은 원하는 치료 기간 동안 투여된다. 병용 치료법을 구성하는 활성 성분은 일괄적으로, 모든 성분을 함유하는 용량의 형태로, 또는 성분의 개별 용량의 형태로 대상체에게 투여될 수 있다.
약학적 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 (또는 전구약물 또는 다른 약학적으로 허용가능한 유도체) 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 아주반트, 희석제 및/또는 부형제, 예컨대 이 화합물의 약리학적 활성에 영향을 미치지 않으며 치료량의 화합물을 전달하기에 충분한 복용량으로 투여될 때 비-독성인 조건 하에서, 본 발명의 화합물과 조합하여 대상체에게 공동-투여될 수 있는 것을 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체를 생성하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 극성 용매, 바람직하게는 극성 용매에서 아연 아세테이트 및 감마-L-글루타밀히스타민의 혼합물을 교반하는 단계, 생성된 침전물을 단리하는 단계, 및 1/1의 금속/리간드 비율을 갖는 감마-L β-글루타밀히스타민의 아연 복합체를 나타내는 생성된 생성물을 건조하는 단계를 포함한다. 바람직한 용매는 메탄올 또는 물, 또는 이의 조합이다. 상기 방법은 바람직하게는 수성 아연 아세테이트, 특히 아연 아세테이트 디하이드레이트를 사용한다. 혼합물의 교반은 섭씨 15 내지 50도의 온도 범위, 바람직하게는 메탄올이 용매로서 사용되는 경우 섭씨 15 내지 40도 또는 물이 용매로서 사용되는 경우 섭씨 15 내지 90도의 온도에서 수행된다.
본 발명의 화합물은 이의 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 유기 및 무기 산 부가 염, 예를 들어, 히드로클로라이드 또는 아세테이트가 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 본 발명의 화합물을 포함하며, 상기 약학적으로 허용가능한 담체는 본 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 용매, 희석제, 분산액 또는 현탁액, 계면활성제, 등장제, 증점제 및 유화제, 보존제, 결합제, 윤활제 등, 특정 투여 형태에 적합한 것을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체로서 작용할 수 있는 적합한 물질은 모노- 및 올리고당류, 및 이의 유도체; 젤라틴; 탈크; 코코아 버터 및 좌약 왁스와 같은 부형제; 땅콩, 목화씨, 사프롤, 참깨, 올리브, 옥수수, 및 대두 오일과 같은 오일; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; 한천; 수산화 마그네슘 및 수산화 알루미늄과 같은 완충제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장성 용액, 링거(Ringer) 용액; 에틸 알코올 및 인산염 완충액을 포함한다. 또한, 상기 조성물은 나트륨 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 다른 비-독성의 양립가능한 윤활제, 뿐만 아니라 착색제, 필름 형성제, 감미제, 향료 및 방향제, 보존제 및 항산화제를 포함할 수 있다.
본 발명의 대상은 또한 약학적 조성물의 부류인, 투여 형태를 포함하며, 상기 조성물은 치료적으로 유효한 복용량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 특정 경로의 투여를 위해, 예를 들어 대상체에게 국소적으로 투여되기 위해, 최적화된다.
본 발명의 투여 형태는 리포좀 방법, 마이크로캡슐화 방법, 나노형 제조 방법, 또는 본 기술분야에 공지된 다른 방법에 의해 제조된 제형물을 함유할 수 있다.
국소적 투여를 위해, 약리학적으로 양립가능한 작용제, 예를 들어, 프로필렌 글리콜 또는 부틸렌 글리콜을 함유하는 연고, 크림 및 현탁액과 같은, 본 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 형태가 사용될 수 있다.
약학적 조성물의 예
본 발명에 서술된 화합물은 다음 조성물의 형태로 인간 또는 동물의 질환을 예방 및/또는 치료하기 위해 사용될 수 있다:
연고, ㎖
활성 성분 40 ㎎
에탄올 300 ㎕
물 300 ㎕
1-도데실아자시클로헵타논 50 ㎕
최대 1 ㎖까지 프로필렌 글리콜
크림 I 중량%
활성 성분 0.005-0.5
오일 성분 10.0-15.0
화장료 스테아린 2.0-3.0
유화제 1.0-3.0
에멀젼 왁스 1.0-3.0
트리에탄올아민 0.1-0.6
비타민 A 0.003-0.05
증류된 글리세린 2.0-3.0
항산화제 0.05-0.075
보존제 0.15-0.25
티트리 오일 0.3-0.5
최대 100%까지 정제된 식수
크림 II 중량%
활성 성분 0.01
식물성 오일 15.0
화장료 스테아린 0.75
유화제 PG-3 2.25
에멀젼 왁스 2.25
트리에탄올아민 0.1
비타민 A 0.028
소르비톨 2.0-3.0
비타민 E 1.5
모노뮬스® 90-O 18 0.75
니파졸 0.2
니파진 0.3
티트리 오일 0.3-0.5
최대 100%까지 정제된 식수
크림 III 중량%
활성 성분 0.1
식물성 오일 15.0
화장료 스테아린 0.75
유화제 PG-3 2.25
에멀젼 왁스 2.25
트리에탄올아민 0.1
비타민 A 0.028
소르비톨 2.0-3.0
비타민 E 1.5
모노뮬스® 90-O 18 0.75
니파졸 0.2
니파진 0.3
티트리 오일 0.3-0.5
최대 100%까지 정제된 식수
크림 IV 중량%
활성 성분 0.3
식물성 오일 15.0
화장료 스테아린 0.75
유화제 PG-3 2.25
에멀젼 왁스 2.25
트리에탄올아민 0.1
비타민 A 0.028
소르비톨 2.0-3.0
비타민 E 1.5
모노뮬스® 90-O 18 0.75
니파졸 0.2
니파진 0.3
티트리 오일 0.3-0.5
최대 100%까지 정제된 식수
연고의 경우, 바람직한 오일 성분은 식물성 오일, 미네랄 오일, 또는 이의 혼합물이다. 식물성 오일은 올리브유, 해바라기유, 또는 둘의 혼합물일 수 있다. 미네랄 오일은 액체 바셀린일 수 있다. 글리세롤 내 불포화 지방산의 폴리에스테르(유화제 PG-3)는 유화제로서 사용될 수 있다. 비타민 A는 레티놀 팔미테이트로서 존재할 수 있다. 바람직한 항산화제는 토코페롤 아세테이트이고, 보존제는 파라옥시벤조산의 적어도 하나의 저급 알킬 에스테르, 예를 들어, 메틸 또는 프로필 에스테르이다.
이들 제형물은 표준 약학적 절차에 따라 제조될 수 있다.
병용 치료법에서 화합물 I의 용도
본 발명의 화합물 I은 독립형 활성 성분으로서 투여될 수 있는 한편, 이는 하나 이상의 다른 작용제와 병용될 수도 있으며, 특히, 상기 다른 작용제는 항생제, NSAID(비-스테로이드성 항염제) 또는 다른 항염제, 글루코코르티코스테로이드, 칼시뉴린 억제제, 항히스타민제, 막 안정화제, 면역촉진제 등으로 나타낼 수 있다. 함께 투여되는 경우, 치료제는 동시에 또는 상이한 시간에 순차적으로 투여되는 상이한 투여 형태일 수 있거나, 또는 치료제는 단일 투여 형태로 조합될 수 있다.
다른 약제와 조합되는 본 발명의 화합물과 관련된 "병용 치료법"이라는 문구는 약물 병용의 유익한 효과를 제공하는 모든 작용제의 동시 또는 순차적 투여를 의미한다. 공동-투여는, 특히, 예를 들어, 하나의 연고, 크림, 정제, 캡슐, 주사 또는 다른 형태의 작용제를, 고정된 비율의 활성 물질과 함께 공동-전달하는 것, 뿐만 아니라 각 화합물을 각각 여러가지 별도의 투여 형태로 동시에 전달하는 것을 의미한다.
따라서, 본 발명의 화합물의 투여는 항균제, 세포증식억제 및 세포독성 약물, 약물 중 하나의 증상 또는 부작용을 억제하기 위한 약물의 사용을 포함하는, 예방 의학 분야의 통상의 기술자에게 공지된 추가적인 치료법 및 관련 질환의 치료와 조합하여 수행될 수 있다.
제형물이 투여 형태로 표시되는 경우, 이러한 조합은 허용가능한 복용량 범위에서 본 발명의 화합물을 포함해야 한다. 본 발명의 화합물 I은 이들 약물의 조합이 불가능한 경우, 다른 작용제와 함께 순차적으로 환자에게 투여될 수도 있다. 본 발명은 투여 순서에 제한되지 않는다; 본 발명의 화합물은 다른 약제의 투여 전 또는 후에 대상체에게 공동-투여될 수 있다.
본 발명 실시양태의 실시예
샘플의 원소 분석
샘플의 원소 조성물 연구는 멀티 EA 5000 원소 분석기, 애널리틱 예나(Analytik Jena)를 사용하여 수행되었다. 분석을 위해, 샘플의 칭량된 부분 약 20 ㎎ (정확히 칭량됨)을 오토샘플러 셀에 넣었다. 장치에 불활성 기체(헬륨)를 채운 후, 질소, 탄소, 및 수분으로부터 정제된 10 cm3의 산소를 첨가하고 연구 샘플을 ~1000℃의 온도에서 연소시켰다. 과잉 산소를 제거하기 위해, 연소 생성물을 750℃의 온도에서 금속성 구리 위로 통과시켰다. 이후 기체의 혼합물(CO2, N2, 및 H2O)을 흡착 트랩으로 통과시켜 수분을 수집하고 수소의 양을 측정하였다. 이후 질소 및 일산화탄소의 혼합물을 가스 크로마토그래피 컬럼에 공급하여 성분으로 분리하고, 이를 운반 가스에 의해 화학발광 검출기 CLD(기체 혼합물 내 질소 함량 분석을 위함) 및 NDIR 적외선 검출기(기체 혼합물 내 일산화탄소의 함량을 분석하기 위함)에 옮겼다. 시험 샘플에서 측정된 요소 각각의 함량의 계산은 소프트웨어 패키지 멀티윈(multiWin)을 사용하여 수행하였다.
IR 스펙트럼은 IFS-113v 브루커 IR 분광계에서 4000 ... 400 cm-1 범위에서 1 cm-1의 해상도로 기록되었다. 샘플을 제조하기 위해, 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체를 KBr로(KBr 100 ㎎당 물질 5㎎) 분쇄하고, 정제로 압축하고, 스펙트럼을 평가하는 데 사용하였다.
실시예 1 (본 발명에 포함되지 않음). 염화 아연과 감마-L-글루타밀히스타민의 혼합
이 실시예는, 이러한 조건 하에서 아연 염 및 유리 감마-L-글루타밀히스타민의 혼합물의 형성으로 인해, 아연 염 및 감마-L-글루타밀히스타민과 같은 성분의 단순한 혼합에 의해서 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체가 제조될 수 없음을 입증한다. 예를 들어, 염화 아연 수용액을 감마-L-글루타밀히스타민과 1:2의 비율로 혼합하고 수성 암모니아를 (매질이 약 알칼리성이 될 때까지) 첨가한 후 생성물 침전으로 백색 결정성 물질이 형성된다. 원소 분석 데이터(표 1 참조)는 복합체 화합물에 대해 계산된 값에 근접한 데이터 값을 보여주지만, 복합체 형성의 근거로서 간주할 수는 없다. 샘플에서 탄소와 질소의 과소평가된 함량은 분석 중에 부분적으로 물을 잃는 수산화 아연의 형성 가능성을 나타내며, 다른 원소의 값에 대한 과소평가를 초래할 수 있다. 추가적인 냉수 세척 후 복합체에 대한 반복적인 원소 분석은 샘플 내 수소 양의 훨씬 더 큰 과대평가를 초래한다.
염화 아연과 감마-L-글루타밀히스타민의 반응으로부터 단리된 샘플에 대한 원소 분석 데이터
C H N
(수 처리 전) 발견됨 40.12 5.81 18.61
(수 처리 후) 발견됨 39.62 5.99 18.03
계산됨 44.17 5.56 20.60
또한, IR 분광법의 데이터에 따르면, 원래 감마-L-글루타밀히스타민 및 혼합 생성물의 IR 스펙트럼은 일치한다(도 1 및 2 참조). 이동(shift)의 부재 및 C=O, -OH 및 -NH 군의 흡수 밴드의 상대적 강도의 일치는, 실시예 1에서 염화 아연을 감마-L-글루타밀히스타민과 혼합함으로써, 원래의 감마-L-글루타밀히스타민은 단리되었고, 아연은 무기 화합물의 형태로 방출됨을 나타낸다.
실시예 2. 본 발명에 따른 아연 복합체의 제조(방법 1)
추가적인 연구에서, 저자는 수성 아연 아세테이트의 사용을 포함하는, 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체를 수득하는 방법을 개발하였다.
2.20 g (0.01 몰) Zn(CH3COO)2*2H2O를 20 ㎖의 메탄올에 용해시키고, 격렬하게 교반하면서, 실온에서 메탄올 50 ㎖ 중 새로 제조된 나트륨 메톡사이드 1.08 g (0.02 몰) 및 감마-L-글루타밀히스타민 2.40 g (0.01 몰)의 용액에, 한 방울씩 첨가하였다. 대략 절반 부피의 아연 아세테이트 용액을 첨가한 후, 백색 침전물이 형성되는 것을 관찰하였다. 모든 아연 아세테이트 용액을 첨가한 후, 약 4시간 동안 계속해서 교반하고, 생성물을 여과하고, 물(4×10 ㎖)로 세척하고 그 중량이 일정하게 유지될 때까지 65℃에서 진공 건조시켰다. 수율 2.67 g (88%).
상기 방법 실시양태의 이 기술의 두 번의 시행을 수행하였고 각 시행에서 원소 분석을 위한 샘플을 수득하였다. 상기 방법의 실행의 결과로서의 이들 두 샘플의 원소 분석 데이터의 분석에 따르면, 감마-L-글루타밀히스타민/아연의 몰비 - 1/1을 가진 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체가 형성된다(표 2 참조).
아연 아세테이트와 감마-L-글루타밀히스타민의 반응 혼합물로부터 단리된 샘플의 원소 분석 데이터
C H N
발견 1 39.17 4.73 18.02
발견 2 37.26 4.80 18.110
계산됨 39.56 4.65 18.45
후속조치로 아연의 착물화(complexometric) 적정을 수행하여 복합체 조성물 및 수득된 금속/리간드 비율을 확인하였다. 아연 함량을 측정하기 위해, 생성물을 다음과 같이 광물화하였다: ~70㎎으로 칭량된 생성물의 샘플을 샘플이 완전히 탄화될 때까지 5배 양의 농축 황산으로 가열하였다. 이후, ~1.5 ㎖의 30 부피% 과산화수소를 잔류물에 첨가하고 ~10분 동안 가열하였다. 잔류물을 25 ㎖ 원뿔형 플라스크로 옮기고, ~10 ㎖의 암모니아 완충액 혼합물(pH=10) 및 소량의 에리오크롬 블랙 T의 건조 지시약을 첨가하였다. 지시약이 완전히 용해되고 용액이 라즈베리색이 될 때까지 플라스크의 내용물을 완전히 혼합하였다. 진홍색이 보라색을 거쳐 밝은 파란색으로 변할 때까지 샘플을 0.02 M EDTA 용액으로 적정하였다. 마지막으로, 제조된 생성물 내 아연의 함량은 21.5%로 나타났고, 이는 금속:리간드 비율이 1:1인 아연 복합체에 해당되는 이론적으로 계산된 값(21.1%)과 일치하는 것이다.
생성물의 IR 스펙트럼(도 3 참조)에서, 2개의 강한 카르보닐기 밴드가 관찰된다: 1616 cm-1 및 1646 cm-1. 동시에, 흡착의 구조 및 진동수는 유리 감마-L-글루타밀히스타민의 스펙트럼(도 1 참조)의 그것과 상당히 다르다: 카르복실기의 밴드는 아연과의 배위로 인해 더 높은 진동수로 이동한다. 또한, 생성물의 IR 스펙트럼에는, 감마-L-글루타밀히스타민의 스펙트럼에는 없는, 3276 cm-1에서의 강한 흡착 밴드가 있다. 이는 아미드 조각의 N-H 결합, 또는 이미다졸 시스템의 N-H 결합의 진동에 기인할 수 있다. 또한, 생성물의 IR 스펙트럼에서, 감마-L-글루타밀히스타민의 스펙트럼에 비해, CH 결합의 지문 및 진동의 영역에서 여러가지 변화가 있으며, 이는 샘플에 유리 감마-L-글루타밀히스타민이 없음을 나타낸다.
제조된 생성된 생성물은 NMR 스펙트럼을 기록하는 데 사용되는 용매에 불용성이다.
예를 들어, 도 6은 작동 진동수가 500.13 MHz인 브루커 DRX500,13400 장치에 기록된 D2O NMR 스펙트럼을 보여준다.
이는 주로 중수소화되지 않은 용매의 잔류 신호, 및 원래의 감마-L-글루타밀히스타민에 해당하는 저-강도 신호를 함유한다.
이는 불순물이 없고 수성 현탁액에서 생성된 생성물의 해리가 미미함을 나타낸다.
실시예 3. 본 발명에 따른 아연 복합체의 수득(방법 2)
본 발명에 따른 본 방법의 변형의 목적은 생성된 생성물의 여과성을 개선할 뿐만 아니라, 반응 혼합물 내에 수산화 아연이 가장 균일하게 분포하도록 하는 것이다.
수산화 아연의 표면에 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체가 형성되면 반응이 더 진행되는 것을 막기 때문에, 분포 균일성의 문제는 스케일업을 위해 이 기술에서 매우 중요하다. 이 문제를 해결하기 위해, 수산화 나트륨 및 아연 아세테이트 용액을 동시에 첨가하여 수산화 아연을 인시츄 수득하는 것이 제안된다.
합성 "A": 70℃로 가열된 현탁액에, 물 150 ㎖ 중의 감마-L-글루타밀히스타민 12.0 g (0.05 몰), 2M 수산화 나트륨 수용액 50 ㎖ 및 물 80 ㎖ 중의 아연 아세테이트 디하이드레이트 11.0 (0.05 몰)의 용액을, 두 개의 깔때기를 사용하여 동시에, 한 방울씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고 밤새 방치하였다. 침전물을 여과하고, 3×50 ㎖ 물로 여과기에서 세척하고 그것이 일정한 중량에 도달할 때까지 45-50℃에서 진공 건조시켰다. 수율은 21.5 g(생성물의 71%)이었다.
이 방법으로 수득된 다결정성 복합체는 나트륨 메톡사이드를 사용하여 메탄올 내에서 수득된, 실시예 2에 따른 복합체에 비해, 여과액의 형태로 분리하기가 더 쉬웠다.
이 기술은 합성 "B"에 따라 스케일업되고 재현되었다.
합성 "B": 70℃로 가열된 현탁액에, 물 300 ㎖ 중의 감마-L-글루타밀히스타민 24.0 g (0.1 몰), 2M 수산화 나트륨 수용액 100 ㎖ 및 물 120 ㎖ 중의 아연 아세테이트 디하이드레이트 22.0 (0.1 몰)의 용액을, 두 개의 깔때기를 사용하여 동시에, 한 방울씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고 밤새 방치하였다. 침전물을 여과하고, 물 4×50 ㎖로 여과기에서 세척하고, 그 무게가 44.1 g (생성물의 71%)으로, 일정하게 남아있을 때까지 45-50℃에서 진공 건조시켰다.
이 방법의 두 번의 시행을 수행하였으며 각 시행에서 원소 분석을 위한 샘플을 수득하였다. 이들 두 샘플의 원소 데이터의 분석에 따르면, 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체는 반응의 결과로서 감마-L-글루타밀히스타민/아연 - 1/1의 몰비로 형성된다(표 3 참조).
감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 원소 분석 결과(방법 2)
C N H
발견1 방법 2 ≪A≫ 39,52 18,26 4,72
발견2 39,44 17,96 4,66
발견1 방법 2 ≪B≫ 39,54 18,18 4,52
발견2 39,49 17,99 4,47
계산됨 39.56 18.45 4.65
생성된 생성물의 IR - 스펙트럼(도 4 및 5 참조)은 방법 1에 의해 합성된 감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 스펙트럼과 유사하고 이들 스펙트럼은 지문 영역에서 큰 차이가 없다.
아연의 착물화 적정을 수행하여 복합체 조성물 및 수득된 금속/리간드 비율을 확인하였다(표 4 참조). 그 결과, 방법 2에 의해 수득된 생성물 중 아연 함량은 ~22.0%를 나타냈고, 이는 금속:리간드 비율이 1:1인 아연 복합체에 해당되는 이론적으로 계산된 값(21.1%)과 일치하는 것이다.
감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체의 착물화 적정 결과
방법 적정 결과
방법1 (Zn2+)		 적정 결과
방법 2 (Zn2+)		 계산됨
방법 1 21,53 % 22,03% 21,87%
방법 2 ≪A≫ 22,18 % 21,95 %
방법 2 ≪B≫ 21,55 % 22,13 %
화합물 1 복합체의 생물학적 활성의 특징화
본 발명의 화합물 1의 생물학적 활성은 시험관내 및 생체내 다양한 실험에서 연구되었다. 특히, 아토피성 피부염의 생체내 모델에서 화합물 1의 활성에 초점을 맞춘 실험에서 면역 세포의 주화성에 대한 화합물 1의 억제 효과가 나타났다. 시험관내 화합물 1의 생물학적 활성에 대한 연구는 화합물 1이 효소 글루타미닐 시클 라아제의 억제제이고, 따라서, 면역 세포의 주화성에 대한 화합물 1의 효과는 글루타미닐 시클라아제의 활성의 억제에 의해 매개될 수 있음을 확립하였다.
실시예 4. 시험관내 인간 글루타미닐 시클라아제의 효소 활성에 대한 화합물 1의 효과의 연구.
시험관내에서 글루타미닐 시클라아제의 효소 활성에 대한 (본 발명의 대상인) 화합물 1의 효과에 대한 연구에서, 재조합 세포내 인간 글루타미닐 시클라아제에 대한 화합물 1의 직접적인 억제 효과가 발견되었다.
다양한 화합물 1 농도에서 글루타미닐 시클라아제의 활성은 형광 기질 L-글루타미닐 2-나프틸아미드(Gln-bNA)를 사용하여 25℃에서 연구되었다 [Anal Biochem. 2002 Apr 1; 303 (1): 49-56]. 부피가 100㎕인 반응 혼합물은 50 μM의 형광 기질; ~0.2 단위의 인간 피로글루타미닐 아미노펩티다아제(1 단위는 분당 1 마이크로몰의 pGlu-bNA를 가수분해하는 양으로서 정의됨), 및 50 마이크로몰 트리스아미노메탄 HCl 및 5% 글리세롤, pH 8.0에서 재조합 세포내 인간 글루타미닐 시클라아제(gQC)의 분취량을 함유하였다. 화합물 1과 함께 인큐베이션된 글루타미닐 시클라아제의 분취량을 반응 혼합물에 5분 동안 첨가하여 반응을 개시하였다.
반응의 추가적인 진행을 분광광도법적으로 모니터링하였다(여기 및 방출 파장은 320 및 410 nm였다). 효소 활성은 보정 곡선을 기초로 계산된, 방출된 2-나프틸아미드(bNA)의 양에 의해 측정되었다. IC50 값은 "억제제 농도" - "효소 활성" 곡선의 비선형 회귀를 사용하여 계산되었다.
상기 실험은 화합물 1이 IC50 = 26 μM로 글루타미닐 시클라아제의 활성을 억제함을 입증하였다.
실시예 5. 마우스 아토피성 피부염 모델에서 화합물 1의 활성의 연구
실험적 기술. 아토피성 피부염의 모델에서 화합물 1 활성에 대한 연구는 표준 기술을 사용하여 수행되었다 [Evidence-based Complementary and Alternative Medicine. 2012. Article ID 545497, 9 pages]. 실험군의 경우, 동물의 체중이 성별 내 평균 값에서 ±20% 이하인, 편차의 징후가 없는 평균적인 외관의 동물을 선택하였다.
실험의 0일 및 12일에, balb/c 품종의 수컷 마우스를 신체를 민감하게 하기 위해 등에 앞서 면도한 영역에 에탄올 중 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB)의 2% 용액 100㎕로 처리 및 적용하였다. 17일에, DNCB의 2% 알코올 용액 20㎕를 동물의 "시험" 오른쪽 귀에 1시간 간격으로 2회 적용하였다. 활성 물질 함량이 0.01 중량%인 화합물 1 크림을 2회: DNCB를 귀에 마지막으로 적용한 후 1시간 및 13시간에, "시험" 오른쪽 귀에, 국소적으로 투여하였다. 다음은 비교/참조/대조 약제로서 사용되었다: 메틸프레드니솔론 아세포네이트(0.1% 외용 연고), 피리티온 아연(0.2% 외용 크림), 피메크롤리무스(1% 외용 크림) 및 감마-L-글루타밀히스타민 0.01%를 함유하는 외용 크림. 18일에, 동물을 안락사시키고 감염된 귀의 조직학적 분석을 수행하였다. 5㎛ 두께의 조직학적 구획을 헤마톡실린-에오신으로 염색하였다. 피부염을 보여주는 미세한 변화의 평가는 다음 척도에 따라 수행하였다:
1) 극세포증(Acanthosis) - 유두 간 과정이 길어짐에 따라 표피와 상피가 두꺼워짐.
0점 - 병리 없음;
0.5점 - 병리가 발견되었지만, 매우 약하게 표현됨;
1점 - 중등 내지 중증의 병리;
2점 - 중증의 병리.
2) 과다각화증은 각질층의 현저한 두꺼워짐 또는 정상적인 탈락의 지연을 특징으로 하는 피부 상태의 비-염증성 특징이다:
0점 - 병리 없음;
0.5점 - 병리가 발견되었지만, 매우 약하게 표현됨;
1점 - 지시된 병리의 명확한 존재.
3) 농포(농양) - 화농성 내용물을 가진 공동의(cavitary) 급성 염증성 요소:
0.5점 - 병리의 단일 징후;
1점 - 경미한 병리;
2점 - 중등 내지 중증의 병리;
3점 - 중증의 병리;
4점 - 완전한 병리.
4) 낭종은 원형 또는 타원형의 구조로, 층화된 편평 각화 상피가 늘어서 있고 각질 덩어리의 층으로 채워져 있으며, 이는 상피의 과다형성(극세포증)이 존재할 때 발생한다.
0점 - 병리 없음;
0.5점 - 병리가 발견되었지만, 매우 약하게 표현됨;
1점 - 지시된 병리의 명확한 존재.
5) 염증:
0점 - 병리 없음;
0.5점 - 병리의 단일 징후;
1점 - 경미한 병리;
2점 - 중등 내지 중증의 병리;
3점 - 중증의 병리;
4점 - 완전한 병리.
6) 부종:
0점 - 병리 없음;
0.5점 - 병리의 단일 징후;
1점 - 경미한 병리;
2점 - 중등 내지 중증의 병리;
3점 - 중증의 병리;
4점 - 완전한 병리.
수득된 데이터는 데이터 세트에서 특이값을 검출하는 데 사용되는 검정인 최대 정규화 잔차 검정이라고도 알려진, 그럽스(Grubbs) 검정을 사용하여 검증되었다. 이 검정에서 "특이값"으로 식별된 값은 추가 분석에 사용되지 않았다. 모든 데이터에 대해 기술 통계가 사용되었다. 평균(M) 및 평균의 표준 오차(m)가 계산되었다. 실험에서 수득된 값의 정규 분포는 콜모고로프-스미르노프(Kolmogorov-Smirnov) 검정을 사용하여 검증되었다. 정규 분포의 경우, 스튜던트의 t-검정을 사용하여 군 간의 차이를 평가하였다. 비정규 분포의 경우, (던의 사후-분석과 함께) 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 검정을 사용하여 여러 군을 비교하였다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어 5.0을 사용하여 통계 분석을 수행하였다. 차이는 5% 신뢰 수준에서 결정되었다.
실험 결과를 도 7 및 8에 나타낸다. 도 7에 나타낸 데이터에서 알 수 있는 바와 같이, 조직학적 분석에 따른 화합물 1 (0.01 중량%)을 함유하는 크림이 마우스 아토피성 피부염 모델의 피부 병변에 미치는 약리학적 효과는 다음에 의해 평가되었다: a) 극세포증(점수), b) 과다각화증(점수), c) 농포(점수), d) 낭종(점수), e) 염증(점수), f) 부종(점수). 실험은 근거-기반 상호보완 및 대체 의학. 2012. 문서 ID 545497, 9면에 따라 수행되었다. 비고: * - 온전한 군과의 차이의 유의성(P<0.05), & - 대조군과의 차이의 유의성(P<0.05).
도 8은 x20의 배율로, 헤마톡실린-에오신으로 염색된, 마우스 아토피성 피부염 모델에서 감염된 귀의 피부의 조직학적 구획을 보여준다.
A - 온전한 동물의 군; B - 병리 대조군; C - 어드밴튼(Advantan) (메틸프레드니솔론 아세포네이트, 연고 0.1%); D - 피메크롤리무스(엘리델 1% 크림); E - 화합물 I 크림 0.01%. 1 - 표피; 2 - 진피; 3- 염증성 침투. 실험은 근거-기반 상호보완 및 대체 의학. 2012. 문서 ID 545497, 9면에 따라 수행되었다.
화합물 1 (0.01 중량% 크림)을 피부에 적용하는 것은 염증성 세포(단핵구, 수지상 세포, 호산구 및 호중구)가 피부의 표피 및 진피로 유입되는 것, 뿐만 아니라 아토피성 피부염의 다른 미세한 징후를 온전한 동물의 수준으로 감소시켰다. 작용 측면에서, 화합물 1(감마-L-글루타밀히스타민의 아연 복합체)은 감마-L-글루타밀히스타민 리간드의 작용에 비해 상당한 개선을 보인다는 점에 유의하는 것이 중요하다. 따라서, 화합물 1의 치료적 활성은 감마-L-글루타밀히스타민 단독의 활성에 의해 설명될 수 없다. 효과 면에서, 화합물 1 크림은 참조 약물: 메틸프레드니솔론 아세포네이트, 아연 피리티온 및 피메크롤리무스에 비해 우수한 성능을 나타냈다. 수득된 결과를 통해 화합물 1이 아토피성 피부염의 치료에서 개선된 치료적 효과를 입증했다는 결론을 내릴 수 있다.
결론
따라서, 수행된 연구는 화합물 1이 글루타미닐 시클라아제 효소를 억제하는 데 효과적임을 보여주었다. 아토피성 피부염의 모델에서, 화합물 1은 생체내 염증성 세포(단핵구, 수지상 세포, 호산구 및 호중구)의 유입, 뿐만 아니라 아토피성 피부염의 다른 미세한 징후를 억제하는 것으로 나타났다.
본 발명은 개시된 실시양태를 참조하여 설명되었지만, 상세히 설명된 특정 실험은 본 발명을 설명하기 위한 목적으로만 제공되며 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하는 것으로 해석되어서는 안됨은 본 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 본 발명의 본질을 벗어나지 않으면서 다양한 변형이 가능함을 이해해야 한다.

Claims (17)

  1. 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염으로서,
    상기 복합체의 고체 샘플의 IR 스펙트럼은 1616 cm-1, 1646 cm-1, 및 3276 cm-1에서의 밴드를 보여주는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  2. 아연 아세테이트 및 감마-L-글루타밀히스타민의 혼합물을 극성 용매에서 교반하는 단계;
    생성물을 침전시키는 단계; 및
    1:1의 금속:리간드의 비율을 갖는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체인, 생성된 생성물을 건조하는 단계;를 포함하는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체의 제조 방법.
  3. 청구항 2에 있어서,
    상기 용매는 메탄올, 물, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  4. 청구항 2에 있어서,
    수성 아연 아세테이트가 사용되는 방법.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 수성 아연 아세테이트는 아연 아세테이트 디하이드레이트인 방법.
  6. 청구항 3에 있어서,
    상기 혼합물의 혼합은 메탄올이 용매로서 사용되는 경우 섭씨 15 내지 50도의 온도에서 수행되고, 물이 용매로서 사용되는 경우 섭씨 15 내지 90도의 온도에서 수행되는 방법.
  7. 청구항 2의 방법에 의해 수득되는, 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체.
  8. 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체로서,
    금속/리간드의 몰 비율이 1/1인 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체.
  9. 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체로서,
    상기 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체는 하기 원소 분석 결과를 갖는 것을 특징으로 하는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체:

    또는
    .
  10. 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체로서,
    상기 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체는 하기 착물화 적정 결과를 갖는 것을 특징으로 하는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체:
    .
  11. 청구항 7에 있어서,
    아연 아세테이트 및 감마-L-글루타밀히스타민의 등몰의 혼합물을 용매에서 교반한 후, 복합체를 생성물로서 단리함으로써 제조되는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체.
  12. 청구항 7에 있어서,
    상기 복합체의 고체 샘플의 IR 스펙트럼은 1616 cm-1, 1646 cm-1, 및 3276 cm-1에서의 밴드를 보여주는 감마-L-글루타밀히스타민과의 아연 복합체.
  13. 아토피성 피부염을 예방 및/또는 치료하기 위한 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항의 복합체를 포함하는 약학적 조성물.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
KR1020217008124A 2018-08-22 2019-08-22 새로운 아연 복합체, 이의 제조 및 용도 KR102729675B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018130491 2018-08-22
RU2018130491A RU2697580C1 (ru) 2018-08-22 2018-08-22 Новый цинковый комплекс, его получение и применение для терапии заболеваний человека и животных
PCT/RU2019/050135 WO2020040670A1 (ru) 2018-08-22 2019-08-22 Новый цинковый комплекс, его получение и применение

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210046047A KR20210046047A (ko) 2021-04-27
KR102729675B1 true KR102729675B1 (ko) 2024-11-14

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2233152C1 (ru) * 2002-12-30 2004-07-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Крем противовоспалительного и противозудного действия для лечения дерматологических заболеваний

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2233152C1 (ru) * 2002-12-30 2004-07-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Крем противовоспалительного и противозудного действия для лечения дерматологических заболеваний

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dermatology, Vol.2014, 709152, 2014*

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3407877B1 (fr) Inhibiteurs nlrp3 pour le traitement des pathologies cutanées inflammatoires
CA2824317C (en) Uses of certain f-series prostaglandin analogs for treating diabetes and dyslipidemia
KR20150088302A (ko) 피부염 치료법
KR20120047240A (ko) 주사 또는 홍안 관련 피부 질환의 치료를 위한, 베르베린 또는 그의 유사체를 함유하는 조성물
US20210284621A1 (en) Cannabinoids and uses thereof
EP3197460B1 (fr) Utilisation dermocosmetique ou pharmaceutique d&#39;une composition contenant au moins un inhibiteur de certaines chimiokines
KR102729675B1 (ko) 새로운 아연 복합체, 이의 제조 및 용도
EP2854784A1 (en) Method for treating skin inflammatory diseases
US12077551B2 (en) Zinc complex, preparation thereof and use thereof for trerapy of human and animal diseases
FR3050455B1 (fr) Derives amides des acides polycafeoylquiniques, procede de preparation et utilisations
US20200069750A1 (en) Extracts from arthrospira and uses thereof
EA043130B1 (ru) Цинковый комплекс, его получение и применение для терапии заболеваний человека и животных
US20220112152A1 (en) Triphenylphosphonium-tethered salicylamine derivatives
JP7487953B2 (ja) 血管拡張剤およびその用途
KR102323779B1 (ko) 신규한 화합물 및 이의 용도
WO2023230418A1 (en) Mutual prodrugs of cromoglicic acid
DE4238233A1 (de) N-Sulfonyl-aminophenole, ihre Verwendung als pharmazeutische Wirkstoffe und sie enthaltende Arzneimittel
EP3220903A1 (fr) Compositions comprenant un compose de la famille des avermectines et un compose agoniste d&#39;au moins un des recepteurs de l&#39;acide retinoique pour le traitement de l&#39;acne
WO2023050037A1 (zh) 一种胞外亲环素抑制剂及其应用
EP3544951B1 (fr) Derives d&#39;acides hexariques substitues et leurs utilisations
KR20240040049A (ko) 신규 화합물 및 이를 포함하는 염증성 질환과 암에 대한 진단 및 치료에 사용되는 mri 조영제
JP2021522338A (ja) 強力なチアゾール化合物の調製方法、医薬製剤およびその使用
FR3028763A1 (fr) Compositions comprenant un compose de la famille des avermectines et un compose antagoniste d&#39;au moins un des recepteurs rar pour le traitement de l&#39;acne
ITMI932680A1 (it) Derivati metallorganici degli acidi s-acil-2-(s)-(2-pirrolidon-5-(s)carbonilamido)-3-mercapto propionici con selenio, procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono.